JP2005213210A - ヒアルロナン結合性タンパク質とヒアルロナンとの複合体の形成促進剤 - Google Patents

Abstract

【課題】血中のヒアルロナン結合性タンパク質とヒアルロナンとの複合体（ＳＨＡＰ−ＨＡ複合体）の形成促進剤及び血中のヒアルロナン濃度の維持・持続剤等を提供すること。
【解決手段】経口投与用のヒアルロナン又はその薬学的に許容される塩を含有する、血中のヒアルロナン結合性タンパク質とヒアルロナンとの複合体の形成促進剤、及び経口投与用のヒアルロナン又はその薬学的に許容される塩を含有する、血中のヒアルロナン濃度の維持・持続剤。経口投与用のヒアルロナン又はその薬学的に許容される塩の重量平均分子量は１０００〜６００万程度のものが好ましい。また前記の維持・持続剤において濃度が維持される血中のヒアルロナンは、ヒアルロナン結合性タンパク質と複合体を形成しているものであることが好ましい。
【選択図】なし

Description

本発明は、血中のヒアルロナン結合性タンパク質とヒアルロナンとの複合体の形成促進剤及び血中のヒアルロナン濃度の維持・持続剤等に関する。

ヒアルロナン結合性タンパク質（本出願書類においては、血清由来ヒアルロナン結合タンパク質（serum-derived hyaluronan-associated protein）を意味する用語として用いる。以下、ＳＨＡＰと略記する。）は、ヒアルロナンに結合するタンパク質であって、その実体は、インター-α-トリプシンインヒビター（以下、ＩＴＩと略記する。）ファミリーの重鎖（ＨＣ１、ＨＣ２、ＨＣ３）であることが知られている（非特許文献１など。）。

一方、ヒアルロナン（ヒアルロン酸と同義；以下、ＨＡと略記する。）は、グリコサミノグリカン（以下、ＧＡＧと略記する。）の一種であって、種々の医薬用途や食品用途等が知られている（特許文献１、特許文献２など。）。ＨＡの血中における半減期は非常に短く、２〜３分であると考えられている。

ＳＨＡＰとＨＡとの複合体（以下、ＳＨＡＰ−ＨＡ複合体と略記する。）は、ＨＡが豊富に存在するゲル状の組織中や体液成分に多く存在していることが知られている（非特許文献２など。）。しかし、ＨＡを経口投与することによって血中のＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成が促進されることや、血中のＨＡ濃度が長時間に渡って高く維持・持続されることについては開示も示唆もない。

ツァオ Ｍ.（Zhao M.）ら、"Evidence for the covalent binding of SHAP, heavy chains of inter-alpha-trypsin inhibitor, to hyaluronan."、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Journal of Biological Chemistry）、１９９５年、第２７０巻、ｐ．２６６５７−２６６６３

マクドナルド ＪＡ（McDonald JA）ら、"Hyaluronan: genetic insights into the complex biology of a simple polysaccharide."、グライココンジュゲート・ジャーナル（Glycoconjugate Journal）、２００２年、第１９巻、ｐ．３３１−３３９ 特開昭６１−４７４１８号公報 特開平５−１１１３６７号公報

本発明は、血中のＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成促進剤及び血中のＨＡ濃度の維持・持続剤等を提供することを目的とする。

本発明者は上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ＨＡを経口投与することによって血中のＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成が促進され、血中のＨＡ濃度も長時間に渡って高く維持・持続されることを見出し、この知見に基づいて、血中のＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成促進剤及び血中のＨＡ濃度の維持・持続剤等を提供するに至った。

すなわち本発明は、経口投与用のＨＡ又はその薬学的に許容される塩を含有する、血中のＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成促進剤（以下、本発明促進剤という。）を提供する。この経口投与用のＨＡ又はその薬学的に許容される塩の重量平均分子量は、１０００〜６００万であるものが好ましい。
また本発明は、経口投与用のＨＡ又はその薬学的に許容される塩を含有する、血中のＨＡ濃度の維持・持続剤（以下、本発明維持・持続剤という。）を提供する。この経口投与用のＨＡ又はその薬学的に許容される塩の重量平均分子量も、１０００〜６００万であるものが好ましい。また血中のＨＡは、ＳＨＡＰと複合体を形成しているものが好ましい。

以下、本発明促進剤及び本発明維持・持続剤をまとめて「本発明の剤」という。

本発明促進剤によって血中のＨＡを安定に保持できるＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成を促進することができ、また本発明維持・持続剤によって血中のＨＡ濃度を通常のレベルよりも高く維持・持続させることができ、いずれも極めて有用である。

本発明促進剤は、経口投与用のＨＡ又はその薬学的に許容される塩を含有する、血中のＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成促進剤である。また本発明維持・持続剤は、経口投与用のＨＡ又はその薬学的に許容される塩を含有する、血中のＨＡ濃度の維持・持続剤である。
＜１＞ＨＡ又はその薬学的に許容される塩
本発明の剤の有効成分として用いる経口投与用のＨＡ又はその薬学的に許容される塩は、経口投与のために用いることが可能なＨＡ又はその薬学的に許容される塩である限りにおいて特に限定されない。
このようなＨＡ又はその薬学的に許容される塩の由来も特に限定されず、鶏冠、臍帯、ＨＡを産生する微生物等から分離、精製されたＨＡを用いることができる。

ＨＡの薬学的に許容される塩としては、例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、リチウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩等の無機塩基との塩、又はジエタノールアミン塩、シクロヘキシルアミン塩、アミノ酸塩等の有機塩基との塩のうち、薬学的に許容される塩を用いることができる。

また、ＨＡ又はその薬学的に許容される塩の重量平均分子量も特に限定されないが、１０００〜６００万であるものが好ましく、１０００〜３００万であるものがより好ましく、１０００〜１５０万であるものがより好ましく、１０００〜８０万であるものがより好ましく、１０００〜５０万であるものがより好ましく、１０００〜２５万であるものがより好ましく、１０００〜１０万であるものがより好ましく、５０００〜１０万であるものがより好ましく、１万〜１０万であるものがより好ましく、１万〜５万であるものがより好ましく、２万程度のものが特に好ましい。なお、本発明に使用されるＨＡ又はその薬学的に許容される塩の重量平均分子量は、第十三改正日本薬局方：一般試験法・第３６項粘度測定法に従って極限粘度を測定し、Laurentらの式（Biochim. Biophys. Acta, 42, 476(1960)）によって算出できる。

このようなＨＡ又はその薬学的に許容される塩を用いることにより、極めて優れた薬理作用を有する本発明の剤とすることができる。
＜２＞本発明の剤の形態等
本発明の剤は、これらの剤による血中のＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成促進効果や、血中のＨＡ濃度の維持・持続効果を発揮させるために経口投与される。本発明の剤の商品形態は、ＨＡ又はその薬学的に許容される塩が経口的に摂取される限りにおいて特に限定されず、医薬、食品、飲料その他の商品形態を採用することができる。本発明の剤の具体的な形態も特に限定されず、溶液、固体、ゲルその他の形態を採用することができる。例えば溶液形態の場合には、飲料、シロップ等として、固体状態の場合には、錠剤、カプセル、顆粒、粉末、凍結物（例えば氷菓等）等として、ゲル状態の場合にはゼリー等として提供することができる。固体状のものは、もちろん必要に応じて溶媒に溶解して経口投与しても良い。

本発明の剤中のＨＡ又はその薬学的に許容される塩の濃度も特に限定されない。例えば溶液形態とする場合には０．０５〜１％(w/v)程度の濃度を例示することができる。

本発明の剤の製剤化や食品・飲料化等は、公知の方法を用いることができる。製剤化や食品・飲料化等にあたり、ＨＡ又はその薬学的に許容される塩に悪影響を与えず、かつ本発明の効果に影響を与えない限りにおいて、他の医薬活性成分や、慣用の安定化剤、乳化剤、浸透圧調整剤、緩衝剤、等張化剤、保存剤、無痛化剤、着色剤、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、甘味料、香料等、医薬や食品・飲料等に用いられる他の成分を使用できる。
＜３＞本発明の剤の投与対象等
本発明の剤が投与される動物は、脊椎動物、特に哺乳動物が好ましく、とりわけヒトが好ましい。

本発明促進剤は、これらの動物の血中のＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成促進を目的として投与することができる。また本発明維持・持続剤は、これらの動物の血中のＨＡ濃度の維持・持続を目的として投与することができ、特にＳＨＡＰと複合体を形成している血中ＨＡの濃度の維持・持続を目的として投与されるものが好ましい。本出願書類において「血中のＨＡ濃度の維持・持続」という用語は、血中のＨＡ濃度を、通常の状態よりも高いレベルで維持・持続させることを意味する。

本発明の剤におけるＨＡ又はその薬学的に許容される塩の配合量、１回あたりの投与量、投与間隔等は、本発明の剤の投与方法、投与形態、投与目的等、投与対象となる動物の年齢、性別、体重、具体的な臨床症状等に応じて個別に決定されるべき事項であり特に限定されないが、例えばＨＡ又はその薬学的に許容される塩として、成人１人１日当り０．５〜２０ｇ程度の投与量が例示される。本発明の剤の投与間隔は、１日１回程度でもよく、１日２〜３回に分けて投与することもできる。また１日〜３日に１回程度投与してもよい。

以下に、本発明の実施例を具体的に説明する。しかしながら、これらにより本発明の技術的範囲が限定されるものではない。
＜１＞材料・方法等
まず、本実施例において用いた被験物質・分析方法等を説明する。
(1) 被験物質
・ＨＡ（ナトリウム塩）（重量平均分子量２万；株式会社紀文フードケミファ製）
被験物質は、濃度が10〜50 mg/mLとなるように水に溶解して投与に用いた。
(2) 実験動物
６週齢のddY雄性マウス（日本チャールス・リバー株式会社）を用い、１週間以上予備飼育した後に実験に供した。動物は、予備飼育から実験中を通じて23 ± 2℃、湿度55 ± 5 ％に維持されたチップゲージで飼育し、食餌（CRF-1（商品名）、オリエンタル酵母工業株式会社及び飲水は全て自由摂取とした。

(3) 眼底から採取した血中ＨＡの簡易微量分析
血中ＨＡの分析はAnalytical Biochemistry 302, 169-174 (2002)に準じて行った。概要は以下の通りである。
採取した血液の血漿から、限外濾過膜を装着した遠心チューブを用いてＧＡＧを精製した。具体的には、まず１％アクチナーゼを含有する0.05 Ｍ トリス−酢酸緩衝液(pH 8.0) 20μLに血漿25μLを懸濁させて45℃で３時間インキュベートすることによってタンパク質を十分に消化・分解した。これに10％ NaClを含有する0.015M 酢酸 200μLを加えて５分間煮沸した後、冷却して2,300 ｘ ｇで１５分間遠心分離し、遠心分離後の上清を取得することによって除タンパクした。この上清180μLを分子量5000 カットの遠心フィルター（Biomax-5；Millipore社製）にアプライし、0.2M NaOHを20μL添加することによって中和させた後、2,300 ｘ ｇで１５分間遠心して濾過した。その後、フィルター上の残存物に300μLの0.2M トリス−塩酸緩衝液(pH 8.0)を添加して同様に遠心し、次いで100μLの10％エタノールを添加して同様に遠心することによって洗浄し、フィルター上にＧＡＧの混合物を取得した。このフィルター上に30μLの0.2M トリス−塩酸緩衝液(pH 8.0)及び10μLの１ユニット(U) コンドロイチナーゼＡＢＣ（生化学工業株式会社製）及び内部標準として10μLのDDi-UA2S（2-acetamido-2-deoxy-3-O-(2-O-sulfo-β-D-gluco-4-enopyranosyluronic acid)-D-galactose；生化学工業株式会社製）を加えて３７℃で３時間インキュベートし、2,300 ｘ ｇで１５分間遠心して濾過して、この濾液を取得した。この濾液には、不飽和二糖となったＧＡＧが含有されている。これに含まれる不飽和二糖となったＨＡ（2-acetamido-2-deoxy-3-O-(β-D-gluco-4-enopyranosyluronic acid)-D-glucose；以下、ΔDi-HAと略記する。）を、後述する高感度ポストカラムＨＰＬＣ法を用いて分離し定量した。

(4) 全採血により取得した血液中のＨＡの分析（ゲル濾過クロマトグラフィー）
全採血により取得した血液中のＨＡの分析は以下の通り行った。
採取した血液の血漿400μLをゲル濾過カラムにアプライしてタンパク質の溶出パターンを分析し、溶出された液を分画した。分析・分画条件を以下に示す。
カラム：セファデックスG-150 スーパーファイン（Sephadex G-150 super fine（商品名）；ファルマシア； 2.2cm i.d. x 50cm）
溶離液：0.2Ｍ NaCl
流速：１滴/10秒
検出：波長280nmの吸光度
画分の容量：５０滴／バイアル。分画後、各画分を凍結乾燥させた。
各画分の凍結乾燥物にそれぞれ200μLの水を加え、これを分子量30000 カットの遠心フィルター（YM-30（商品名）；Millipore社製）にアプライし、2,300 ｘ ｇで１５分間遠心して濾過した。その後、フィルター上の残存物に1mLの水を添加して同様に遠心し、フィルター上のＧＡＧの混合物を前記と同様にコンドロイチナーゼＡＢＣで処理して不飽和二糖となったＧＡＧを取得した。これに含まれるΔDi-HAを、後述する高感度ポストカラムＨＰＬＣ法を用いて分離し定量した。
(5) ポストカラムＨＰＬＣ法
溶離液送液ポンプは日本分光工業株式会社(JASCO)製のIntelligent HPLC pump PU-980（商品名）を、反応試薬送液ポンプは有限会社シマムラテック製のダブルプランジャーポンプ SPU-2.5 NP 型（商品名）を、カラム恒温層はタイタック株式会社製のTHERMO MINDER Mini-80（商品名）を、検出器は日本分光工業株式会社（JASCO）製のIntelligent Fluorescence Detector FP-920S（商品名）を、反応層は有限会社シマムラテック製のDry Reaction Bath DB-5（商品名）を、記録計は株式会社日立製作所製のChromato Integrator D-2500（商品名）を使用した。分析条件を以下に示す。
カラム：Carbonex (Biotech Research社製；4.6 mm i.d. x 100 mm)
カラム温度：４０℃
溶離液：60mMリン酸緩衝液（溶媒；4.0％ CH₃CN）（pH 11.0）
流速：0.75 ml/分
反応試薬１：0.5％ 2-cyanoacetamide (0.25 ml/min)
反応試薬２：1.0% NaOH (0.25 ml/min)
反応温度：１１０℃
検出：蛍光（励起波長346 nm、発光波長410 nm）
このＨＰＬＣ分析のフローダイアグラムを図１に示す。図１中の「Eluent」は「溶離液」を、「Pump」は「送液ポンプ」を、「Reagent 1」は「反応試薬１」を、「Reagent 2」は「反応試薬２」を、「Sampler」は「サンプラー」を、「Column」は「カラム」を、「Reaction coil」は「反応層」を、「Cooling coil」は「冷却層」を、「Recorder」は「記録計」を、「Detector」は「検出器」をそれぞれ示す。

(6)ＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の検出（ウエスタンブロッティング）
ＳＨＡＰ−ＨＡ複合体は、ウエスタンブロット法によって検出した。
前記(4)で得られたゲル濾過画分を還元条件下におけるドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミド電気泳動（ゲル濃度6.0％；以下、ＳＤＳ−ＰＡＧＥと略記する。）に付し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離されたタンパク質をウエスタンブロッティングの常法に従ってニトロセルロース膜に転写した。転写後の膜を、10％スキムミルク及び0.1％ Tween20を含有するリン酸緩衝生理食塩水（以下、ＰＢＳと略記する。）とともに室温で２時間インキュベートすることでブロッキングを行った。ブロッキングの後、0.1％ Tween20を含有するＰＢＳ（以下、PBS-Tween20と略記する。）で膜を洗浄した。
膜を、PBS-Tween20で2,000倍希釈したウサギ抗ヒトＩＴＩ抗体とともに室温で１時間振とうしながらインキュベートし、その後膜をPBS-Tween20で洗浄した。
次いで、膜を、PBS-Tween20で3,000倍希釈したホースラディッシュペルオキシダーゼ結合プロテインＡ（HRP-conjugated protein A）とともに室温で１時間振とうしながらインキュベートし、その後膜をPBS-Tween20で洗浄した。

次いで、ＥＣＬ検出キット（アマシャムバイオサイエンス株式会社）を用いて前記抗体に反応したタンパク質を検出した。

(7)ＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の定量（サンドイッチＥＬＩＳＡ法）
ウシ鼻軟骨由来のヒアルロン酸結合性タンパク質（以下、ＨＡＢＰと略記する。；生化学工業株式会社製）が固相化されたＥＬＩＳＡプレートと、ウサギ抗ヒトＩＴＩ抗体（一次抗体）及びホースラディッシュペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギ免疫グロブリン抗体（二次抗体）を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法によって、前記(6)と同様にＳＨＡＰ−ＨＡ複合体を検出し定量した。
＜２＞薬効薬理試験
(1) ＨＡの経口投与による効果
正常の血漿中にはごく少量（0.5μg/mL程度）のＨＡが存在する。前述の実験動物に対してＨＡを250 mg/kg(体重)となるように単回経口投与し、投与後０分（投与前）、５分、１５分、３０分、２時間、４時間、８時間、１２時間及び２４時間目にそれぞれ眼底より採血し（100〜200μL）、前記＜１＞の(3)及び(5)の方法でＨＡを分析した。結果を図２に示す。図２の縦軸はΔDi-HAの量(ppm)を、横軸は時間（分）をそれぞれ示す。
その結果、経口投与後から徐々に血中のＨＡ濃度が上昇し始めた。このことから、経口投与されたＨＡの血中への移行が示された。さらに、ＨＡ投与後２時間目にＨＡの血中濃度が最大となり、少なくとも投与後約４時間まで血中のＨＡの濃度が高く維持・持続された。投与した量から換算すると、投与量の２〜３％のＨＡが消化管から吸収されたことになり、この結果はコンドロイチン硫酸（１％以下）に比べて高い吸収効率を有することが明らかになった。
(2) ＨＡを静脈投与した場合
前述の実験動物に対してＨＡを0.5 mg/kg(体重)となるように静脈注射し、投与後５分、１５分、３０分及び６０分目に同様に眼底より採血し分析した。結果を図３に示す。図３の縦軸はΔDi-HAの量(ppm)を、横軸は時間（分）をそれぞれ示す。
その結果、ＨＡを経口投与した場合とは対照的に静脈投与後約３０分以内に血中のＨＡは消失した。このことから、静脈投与されたＨＡは血中に長時間留まらず、その消失速度が極めて速いことが確認された。

(3)経口投与されたＨＡの血中における存在
前記(1)と同様に実験動物にＨＡを経口投与し、全採血後血漿を単離して、前記＜１＞の(4)の方法でゲル濾過クロマトグラフィーを行った。タンパク質の溶出パターンを図４に示す。図４の縦軸は波長280nmの吸光度を、横軸は分画の番号を示す。また、図４中の「peak」は波長280nmの吸収ピークを示す。
また同時に、前記＜１＞の(4)及び(5)の方法でＨＡを分析した。結果を図５に示す。図５の縦軸はΔDi-HAの量(μg)を、横軸は分画の番号をそれぞれ示す。
図４及び図５から、ピーク番号１（４４番目の分画がピーク頂点）にＨＡが検出された。投与に用いたＨＡ（重量平均分子量２万）を同条件でゲル濾過クロマトグラフィーに付すと５１番目の分画がピーク頂点となることからみて、経口投与されたＨＡは高分子化して血液中に存在することが示された。

(4)ＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の検出（ウエスタンブロッティング）
経口投与されたＨＡが、血中でＳＨＡＰ−ＨＡ複合体のかたちで高分子化されている可能性が考えられたので、前記(3)におけるピーク番号１（４４番目の分画がピーク頂点）及び２（６６番目の分画がピーク頂点）の画分について、前記＜１＞の(6)の方法を用いてＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の検出を試みた。サンプルは、それぞれの画分についてＮａＯＨ処理したものとしないものを用意した。ＨＡ−ＳＨＡＰ複合体中の両者の結合はエステル結合であることから、アルカリ処理するとその結合が切れ、ＳＨＡＰ−ＨＡ複合体が検出できなくなることになる。
その結果、アルカリ処理しなかったピーク番号１のサンプルにおいて、高分子量領域にバンドが検出された。このバンドは、アルカリ処理によって消失した。一方、ピーク番号２のサンプルにおいては、アルカリ処理しなかった場合には高分子量領域にごくわずかにバンドが検出され、アルカリ処理によってこのバンドは完全に消失した。これらの結果から、高分子量領域に出現したバンドはＳＨＡＰ−ＨＡ複合体であり、大部分がピーク番号１に含まれていることが示された。

(5)ＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の検出（サンドイッチＥＬＩＳＡ法）
経口投与されたＨＡが、血中でＳＨＡＰ−ＨＡ複合体のかたちで存在することをさらに確認するために、前記＜１＞の(7)の方法でＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の検出・定量を試みた。その結果、前記(4)と同様に、アルカリ処理しなかったピーク番号１のサンプルにおいて強いレベルで検出され、アルカリ処理によって消失した。一方、ピーク番号２のサンプルにおいては、アルカリ処理しなかった場合にはピーク番号１のサンプルに比して弱いレベルで検出されたが、アルカリ処理によって消失した。これらの結果からも、経口投与されたＨＡが血中においてＳＨＡＰ−ＨＡ複合体のかたちで存在すること、このＳＨＡＰ−ＨＡ複合体は、主にピーク番号１に含まれていることが示された。

以上の結果から、ＨＡを経口投与することによって血中のＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成が促進され、血中のＨＡ濃度も長時間に渡って高く維持・持続されることが明らかになった。これにより、経口投与用のＨＡ又はその薬学的に許容される塩を、血中のＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成促進剤や血中のＨＡ濃度の維持・持続剤として利用できることが確認された。

ＨＡは種々の医薬や健康食品用途等に用いられており、摂取されたＨＡの効果が有効に発揮されるためには、血中において安定な形で、通常のレベルよりも高い濃度で長時間維持・持続されることが望まれる。本発明促進剤は、血中のＨＡを安定に保持できるＳＨＡＰ−ＨＡ複合体の形成を促進させるための剤として利用することができる。また本発明維持・持続剤は、血中のＨＡ濃度を通常のレベルよりも高く維持・持続させるための剤として利用することができる。

ＨＰＬＣ分析のフローダイアグラムを示す図である。 ＨＡの経口投与による、血中のＨＡ濃度の維持・持続効果を示す図である。 ＨＡの静脈投与による、血中のＨＡ濃度の経時変化を示す図である。 ＨＡの経口投与後の、血中タンパク質のゲル濾過クロマトグラムを示す図である。 図４においてＨＡが存在するゲル濾過クロマトグラフィー画分を示す図である。

Claims (5)

1. 経口投与用のヒアルロナン又はその薬学的に許容される塩を含有する、血中のヒアルロナン結合性タンパク質とヒアルロナンとの複合体の形成促進剤。
2. 経口投与用のヒアルロナン又はその薬学的に許容される塩の重量平均分子量が、１０００〜６００万であることを特徴とする、請求項１に記載の剤。
3. 経口投与用のヒアルロナン又はその薬学的に許容される塩を含有する、血中のヒアルロナン濃度の維持・持続剤。
4. 経口投与用のヒアルロナン又はその薬学的に許容される塩の重量平均分子量が、１０００〜６００万であることを特徴とする、請求項３に記載の剤。
5. 血中のヒアルロナンが、ヒアルロナン結合性タンパク質と複合体を形成しているものであることを特徴とする、請求項３又は４に記載の剤。
   

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