JP2005179190A - Wound healing promoter - Google Patents
Wound healing promoter Download PDFInfo
- Publication number
- JP2005179190A JP2005179190A JP2003417666A JP2003417666A JP2005179190A JP 2005179190 A JP2005179190 A JP 2005179190A JP 2003417666 A JP2003417666 A JP 2003417666A JP 2003417666 A JP2003417666 A JP 2003417666A JP 2005179190 A JP2005179190 A JP 2005179190A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- wound healing
- cis
- hexadecenoic acid
- healing promoter
- derivatives
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
Description
本発明は外科手術又は傷害等による創傷の治癒を促進させる創傷治癒促進剤に関する。 The present invention relates to a wound healing promoter that promotes healing of wounds by surgery or injury.
外科手術に伴う皮膚又は粘膜の切開や、火傷、裂傷等により生じる創傷については、これまで抗生物質の経口投与又は外傷への直接的な塗布による細菌感染症の予防、抗炎症剤の投与による炎症の低減、鎮痛剤投与による疼痛の軽減などの治療が行われてきた。 For wounds caused by skin or mucous membrane incisions, burns, lacerations, etc. associated with surgery, prevention of bacterial infections by oral administration of antibiotics or direct application to trauma, inflammation caused by administration of anti-inflammatory agents Treatment such as reduction of pain and relief of pain by administration of analgesics has been carried out.
しかしながら、これらの外科手術後の皮膚又は粘膜の創傷に対する治療は、細菌感染、炎症、疼痛などの２次的な障害を低減しようとする治療でしかなく、創傷の治癒は生体の皮膚再生能力に頼っているのが現状である。そのため、回復までに時間を要し、投薬による副作用のおそれが心配されていた。 However, these treatments for skin or mucosal wounds after surgery are only treatments aimed at reducing secondary disorders such as bacterial infections, inflammation, and pain, and wound healing is a vital part of the body's ability to regenerate skin. The current situation depends on it. Therefore, it took time to recover, and there was a concern about the side effects of medication.
そこで、生体に備わる創傷治癒能を促進する薬物の開発が進められているが、効果、安全性、製造コスト等の全てについて十分満足し得るものはなかった。 Therefore, development of a drug that promotes wound healing ability of a living body is underway, but none of the effects, safety, manufacturing cost, etc. can be fully satisfied.
一方、不飽和脂肪酸の一つであるシス−６−ヘキサデセン酸は、ヒト皮膚最外層のバリアーを構成する皮脂の主要成分であるが、最近、シス−６−ヘキサデセン酸を含む皮脂由来の脂肪酸誘導体が、多くのグラム陽性菌及びグラム陰性菌に対して抗菌活性を有することが報告されている（特許文献１参照）。しかしながら、シス−６−ヘキサデセン酸に創傷治癒促進作用があることは知られていない。
本発明は、創傷治癒に関わる生体の再生能を促進し、創傷完治までの時間の短縮を達成し、且つ、安全性が高く、長期に投与しても副作用を生じない創傷治癒促進剤を提供することを目的とする。 The present invention provides a wound healing promoter that promotes the regenerative ability of living bodies involved in wound healing, shortens the time to complete wound healing, is highly safe, and does not cause side effects even when administered over a long period of time. The purpose is to do.
本発明者らは、創傷治癒を促し、且つ安全性の高い天然物を探索したところ、シス−６−ヘキサデセン酸が創傷治癒に関わる生体の再生能を促進する作用を示し、創傷治癒促進剤として有用であることを見出した。 The present inventors searched for a natural product that promotes wound healing and has high safety, and as a result, cis-6-hexadecenoic acid has an action of promoting the regeneration ability of a living body involved in wound healing, and is used as a wound healing promoter. I found it useful.
すなわち本発明は、シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物を有効成分とする創傷治癒促進剤を提供するものである。 That is, the present invention provides a wound healing promoter comprising one or more compounds selected from cis-6-hexadecenoic acid, a derivative thereof, or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient.
また、本発明は、シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物からなる創傷治癒促進剤を提供するものである。 Moreover, this invention provides the wound healing promoter which consists of 1 or more compounds chosen from cis-6-hexadecenoic acid, its derivative (s), or those pharmacologically acceptable salts.
本発明の創傷治癒促進剤によれば、創傷治癒に関わる生体の再生能を促進することが可能となる。 According to the wound healing promoter of the present invention, it is possible to promote the regeneration ability of a living body involved in wound healing.
本発明のシス−６−ヘキサデセン酸は、公知のメタセシス反応や微生物を用いる方法（特開平１−１４４９８２号公報、特公平４−１２７１８号公報）、又は蔓性植物のやはずかずら（ツンベルギアアラータ）から抽出する方法により得ることができるが、特に、パルミチン酸イソプロピルからロドコッカス属微生物を用いて生産する方法（特公平４−１２７１８号公報）で、シス−６−ヘキサデセン酸を工業的に生産することが可能である。やはずかずらから抽出する場合は、やはずかずらの全草、茎、花、葉又は種子を適当な抽出溶剤と共に浸漬又は加熱還流した後、適宜濾過、濃縮、凍結乾燥等し、濃縮エキスや乾燥粉末等として得ることができる。抽出溶剤としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、エーテル、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、石油エーテル、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、酢酸エチル、アセトン、トルエン等の一般に用いられる有機溶媒、及び水等を挙げることができ、これらの１種以上を混合して使用することができる。抽出処理は、通常３〜１００℃程度の温度で数時間〜数週間、常法によって行うことができ、更に抽出物をゲル濾過、カラムクロマトグラフィー、精密蒸留等で精製して用いることもできる。 The cis-6-hexadecenoic acid of the present invention is a known metathesis reaction or a method using a microorganism (Japanese Patent Application Laid-Open No. 1-149482, Japanese Patent Publication No. 4-12718), or a vine-like plant (Tumbergia alata). In particular, industrially producing cis-6-hexadecenoic acid by a method (Japanese Patent Publication No. 4-12718) for producing from isopropyl palmitate using a microorganism belonging to the genus Rhodococcus. Is possible. When extracting from slightly irritated plants, immerse or heat reflux slightly whole plants, stems, flowers, leaves or seeds with an appropriate extraction solvent, and then filter, concentrate, freeze dry, etc. It can be obtained as a powder or the like. Extraction solvents include methanol, ethanol, propanol, butanol, ether, ethylene glycol, propylene glycol, butylene glycol, petroleum ether, hexane, heptane, cyclohexane, ethyl acetate, acetone, toluene, and other commonly used organic solvents, water, etc. One or more of these can be mixed and used. The extraction treatment can be performed by a conventional method usually at a temperature of about 3 to 100 ° C. for several hours to several weeks, and the extract can be further purified by gel filtration, column chromatography, precision distillation or the like.
本発明のシス−６−ヘキサデセン酸の誘導体としては、シス−６−ヘキサデセン酸のエステル誘導体、アミド誘導体、アジド誘導体、酸塩化物誘導体、酸無水物誘導体、ニトリル誘導体等のカルボン酸誘導体が挙げられ、常法により、シス−６−ヘキサデセン酸から合成により得ることができる。中でも、合成の容易で安定なエステル誘導体、アミド誘導体が好ましく、特にエステル誘導体が好ましい。エステル誘導体は、シス−６−ヘキサデセン酸とアルコールとの縮合反応により得ることができ、アルコールは置換基を有してもよい炭素数１−２０のアルコールが好ましく、好ましくは炭素数１−１０のアルコール、より好ましくは炭素数１−５のアルコール、特にエチルアルコール、イソプロピルアルコールがエステル誘導体としての効果の点から好ましい。 Examples of the derivatives of cis-6-hexadecenoic acid of the present invention include carboxylic acid derivatives such as ester derivatives of cis-6-hexadecenoic acid, amide derivatives, azide derivatives, acid chloride derivatives, acid anhydride derivatives, and nitrile derivatives. It can be obtained by synthesis from cis-6-hexadecenoic acid by a conventional method. Among them, ester derivatives and amide derivatives that are easy and stable to synthesize are preferable, and ester derivatives are particularly preferable. The ester derivative can be obtained by a condensation reaction between cis-6-hexadecenoic acid and an alcohol, and the alcohol is preferably an alcohol having 1 to 20 carbon atoms which may have a substituent, preferably 1 to 10 carbon atoms. Alcohols, more preferably alcohols having 1 to 5 carbon atoms, particularly ethyl alcohol and isopropyl alcohol are preferred from the viewpoint of the effect as an ester derivative.
本発明のシス−６−ヘキサデセン酸は、常法によりその薬理学的に許容される塩とすることができる。このような塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アミンとのアンモニウム塩、又はアルギニン、リジン等とのアミノ酸塩を挙げることができる。効果の点からナトリウム塩、カリウム塩が好ましい。 The cis-6-hexadecenoic acid of the present invention can be converted into a pharmacologically acceptable salt thereof by a conventional method. Examples of such salts include salts with alkali metals such as sodium salts and potassium salts, salts with alkaline earth metals such as calcium and magnesium, ammonium salts with amines, or amino acid salts with arginine and lysine. be able to. Sodium salt and potassium salt are preferable from the viewpoint of effects.
斯くして得られたシス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物は、後記実施例に示すように、創傷の治癒を促進する効果を有することから創傷治癒促進剤となり得る。すなわち、シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物を有効成分とする創傷治癒促進剤は、創傷の治癒を促進する効果を発揮する医薬品、医薬部外品又は化粧料等として、また、シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物からなる創傷治癒促進剤は、種々の成分を配合することができ、同様の医薬品、医薬部外品又は化粧料等として創傷の治癒に利用できる。 One or more compounds selected from cis-6-hexadecenoic acid, a derivative thereof, or a pharmacologically acceptable salt thereof thus obtained promotes wound healing, as shown in Examples below. Since it has an effect, it can be a wound healing promoter. That is, a wound healing promoter comprising as an active ingredient at least one compound selected from cis-6-hexadecenoic acid, derivatives thereof, or pharmacologically acceptable salts thereof exhibits an effect of promoting wound healing. And a wound healing promoter comprising one or more compounds selected from cis-6-hexadecenoic acid, derivatives thereof, or pharmacologically acceptable salts thereof, Various ingredients can be blended, and it can be used for wound healing as a similar pharmaceutical, quasi-drug or cosmetic.
斯かる医薬品、医薬部外品又は化粧料は、外用、内用のいずれの方法でも投与することができるが、外用投与、特に皮膚外用剤の製剤形態とすることが好ましい。その剤型は、目的に応じて任意に選択でき、常法により固形、半固形又は液状の製剤、さらに具体的には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤、液剤、乳剤、懸濁剤、軟膏、浸液、スプレー剤、散剤等とすることができる。また、水を含む液状製剤のｐＨは効果の点からｐＨ４〜８が好ましく、ｐＨ４〜６がより好ましい。 Such pharmaceuticals, quasi-drugs, and cosmetics can be administered by either external or internal use methods, but are preferably used for external administration, particularly for external preparations for skin. The dosage form can be arbitrarily selected according to the purpose, and is a solid, semi-solid or liquid preparation by a conventional method. More specifically, tablets, pills, powders, granules, fine granules, capsules, liquids , Emulsions, suspensions, ointments, immersion liquids, sprays, powders and the like. Further, the pH of the liquid preparation containing water is preferably pH 4 to 8 and more preferably pH 4 to 6 from the viewpoint of the effect.
本発明のシス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物を有効成分とする創傷治癒促進剤におけるシス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物の総含有量は、通常全組成の０ ．００１ 〜５０重量％、より好ましくは０．００５ 〜３０重量％、特に効果の点から０．０１〜１０重量％が好ましい。 Cis-6-hexadecenoic acid and its derivatives in wound healing promoters containing one or more compounds selected from cis-6-hexadecenoic acid, derivatives thereof, or pharmacologically acceptable salts thereof of the present invention as active ingredients Or the total content of one or more compounds selected from pharmacologically acceptable salts thereof is generally 0. 001 to 50% by weight, more preferably 0.005 to 30% by weight, and particularly preferably 0.01 to 10% by weight from the viewpoint of the effect.
また、本発明の創傷治癒促進剤には、他の薬効成分を配合することができる。該薬効成分としては例えばアクリノール、アルキルポリアミノエチルグリシン、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、オキシドール、過マンガン酸カリウム、グルクロン酸クロルヘキシジン、チメロサール、ブロノポール、ポビドンヨード、マーキュロクロム等の外用殺菌消毒剤；カラミン等の創傷保護剤；エリスロマイシン、塩化オキシテトラサイクリン、塩酸グラミシジンＳ、硫酸ストレプトマイシン、塩酸テトラサイクリン、塩酸デメチルクロル、硫酸カナマイシン等の化膿性疾患用剤；塩化亜鉛、ヘパリン、デキストラン硫酸ナトリウム、クロタミトン、吉草酸ベタメサゾン、トリアムシノロンアセトニド等の鎮痛収斂消炎剤；繊維芽細胞成長因子、上皮細胞成長因子等の生物学的製剤などが挙げられる。 In addition, other medicinal ingredients can be added to the wound healing promoter of the present invention. Examples of the medicinal ingredients include external disinfectants such as acrinol, alkylpolyaminoethylglycine, benzethonium chloride, benzalkonium chloride, oxidol, potassium permanganate, chlorhexidine glucuronate, thimerosal, bronopol, povidone iodine, and mercurochrome; wounds such as calamine Protective agent; Erythromycin, oxytetracycline chloride, gramicidin S hydrochloride, streptomycin sulfate, tetracycline hydrochloride, demethylchlor hydrochloride, kanamycin sulfate, etc. for purulent diseases; zinc chloride, heparin, dextran sodium sulfate, crotamiton, betamethasone valerate, triamcinolone acetonide Analgesic astringent and anti-inflammatory agents such as: biological preparations such as fibroblast growth factor, epidermal growth factor and the like.
本発明の創傷治癒促進剤の投与量は、用法、患者の年令、創傷の程度、剤形等により適宜選択することができるが、好ましくは、１日当たり０．１〜５０００ｍｇ、より好ましくは１〜２０００ｍｇ、特に好ましくは１０ｍｇ〜１０００ｍｇであり、これを１日１回ないし数回に分けて投与するのが適当である。 The dose of the wound healing promoter of the present invention can be appropriately selected depending on the usage, patient age, wound level, dosage form, etc., but preferably 0.1 to 5000 mg per day, more preferably 1 It is appropriate to administer this once a day or several times a day.
本発明の創傷治癒促進剤のヒトへの投与方法は、経口投与又は静脈内投与、筋肉内投与、皮下・皮内投与、外用投与、経粘膜投与、直腸投与等の非経口投与が挙げられる。創傷部位や創傷の程度に応じて各種の形態で投与できるが、例えば外用剤として使用する場合は、本剤を皮膚などの所要部位（患部）に直接塗布、噴霧または貼付することが好ましい。 Examples of the method for administering the wound healing promoter of the present invention to humans include oral administration, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous / intradermal administration, external administration, transmucosal administration, rectal administration and the like. Although it can be administered in various forms depending on the wound site and the degree of wound, for example, when used as an external preparation, it is preferable to directly apply, spray or paste this agent on a required site (affected site) such as the skin.
以上のように、シス−６−ヘキサデセン酸は、ヒト皮膚最外層のバリアーを構成する皮脂の主要成分であり、長期投与しても安全性が高く、創傷治癒に関わる生体の再生能を促進する物質である。さらに、シス−６−ヘキサデセン酸の構造異性体であるシス−９−ヘキサデセン酸（パルミトレイン酸）には、抗精神疾患剤（特開平８−１５７３８２）、抗腫瘍剤（特開昭５９−６２５２３）、脳卒中予防剤（特開昭５９−１７５４２５）としての作用も知られていることから、構造的に極めて類似しているシス−６−ヘキサデセン酸も同様な作用を有すると考えられる。すなわち、シス−６−ヘキサデセン酸、その誘導体、又はそれらの薬理学的に許容される塩類から選ばれる１以上の化合物は、優れた創傷治癒促進効果だけではなく、抗精神疾患効果、抗腫瘍効果、脳卒中予防効果をも有し得る優れた医薬となり得るものである。 As described above, cis-6-hexadecenoic acid is a main component of sebum that constitutes the outermost barrier of human skin, and is highly safe even when administered for a long period of time, and promotes the regenerative ability of living bodies involved in wound healing. It is a substance. Furthermore, cis-9-hexadecenoic acid (palmitoleic acid), which is a structural isomer of cis-6-hexadecenoic acid, includes antipsychotic agents (Japanese Patent Laid-Open No. 8-157382) and antitumor agents (Japanese Patent Laid-Open No. 59-62523). Since the action as a stroke preventive agent (JP-A-59-175425) is also known, cis-6-hexadecenoic acid that is structurally very similar is considered to have the same action. That is, one or more compounds selected from cis-6-hexadecenoic acid, derivatives thereof, or pharmacologically acceptable salts thereof have not only excellent wound healing promoting effects but also antipsychotic effects and antitumor effects. It can be an excellent medicine that can also have a stroke prevention effect.
実施例１ 創傷治癒促進効果
エーテル麻酔下、正中線が対称軸となるように左右から摘み上げたヘアレスマウス（ICR，雌，２８週齢）の背部を、プラスチック板（1.0×1.5cm）２枚で挟み、文房具用クリップで１時間保持した後、プラスチック板を固定していた跡（３cm2）に、シス−６−ヘキサデセン酸０．１重量％スクワラン溶液５０μＬを塗布する事を１日１回、２週間続け、処置部位の厚みを左右から摘み上げた状態でノギスを用いて計測した。各々の試験群は３匹ずつ同時に評価し、厚みの平均値（mm）の経日変化を図１に示した。スクワランのみを塗布した対照群に比べ、０．１重量％のシス−６−ヘキサデセン酸塗布群では、皮膚の肥厚化を抑制した。この結果から、シス−６−ヘキサデセン酸は創傷治癒を促進することが示唆された。
Example 1 Wound healing promotion effect Under ether anesthesia, the back of a hairless mouse (ICR, female, 28 weeks old) picked from the left and right so that the midline is the axis of symmetry, two plastic plates (1.0 x 1.5 cm) After holding for 1 hour with a stationery clip, apply 50 μL of cis-6-hexadecenoic acid 0.1 wt% squalane solution to the trace (3 cm 2 ) of the plastic plate once a day. Continued for 2 weeks, the thickness of the treatment site was picked up from the left and right, and measured using a caliper. Each test group was evaluated at the same time for three animals at the same time, and the daily change in the average thickness (mm) is shown in FIG. Compared with the control group to which only squalane was applied, the 0.1 wt% cis-6-hexadecenoic acid application group suppressed skin thickening. This result suggested that cis-6-hexadecenoic acid promotes wound healing.
実施例２ ＤＮＡアレイ
（１） 細胞毒性の検討
ケラチノサイト（NHEK6509 Normal human epidermal keratinocytes (Cat. NO. cc-2503)）を９６穴プレートに１×１０４／cm2で播き、３７℃、５％CO2で一晩培養した。この培地にシス−６−ヘキサデセン酸を１，１０，１００ｎＭ，１，１０，５０，１００，２５０μＭで添加し、２４時間培養した（培地量２００μl／well）。１８時間培養した時点でAlamar Blue（BIO SOURCE）を２０μl添加し、さらに６時間培養後のAlamar Blue活性を測定し、細胞毒性の指標とした。シス−６−ヘキサデセン酸は添加後２４時間で１μＭより高い濃度で毒性が確認された。これらの結果から、作用させる剤の濃度は、シス−６−ヘキサデセン酸 １μＭとした。
（２） 細胞の調製
ケラチノサイトをSupplement (+)培地で一晩培養した。その後Supplement (-)培地に交換し、さらに６〜８時間培養した。シス−６−ヘキサデセン酸を１μＭで添加し、０、２４、４８時間後の細胞を採取した。なお、培地にシス−６−ヘキサデセン酸を添加する場合は１％ ＢＳＡに懸濁し、２０〜３０秒間ソニケーションしたものを添加した。
（３）RNAの抽出
培養したケラチノサイトをＰＢＳ (-)で洗浄後、１ml／１０cm dish のISOGEN（ニッポンジーン）で回収した。以下の操作はRNase free で行った。室温で５分間放置した後、２００μｌのクロロホルムを加え攪拌した。遠心機で１５０００ｇ、１５分間分離し、上清５００μｌを等量のイソプロパノールと混合した。室温で５〜１０分間放置し、１５０００ｇ、１０分間分離した。上清を除去し、残ったペレットを７０％エタノールで洗浄した後、蒸留水（RNase free）に溶解させＤＮＡアレイに用いた。
（４）ＤＮＡアレイ
Atlas TM Nylon cDNA Expression Arrays 1.2 Array (Cat. NO.7850-1) (CLONTECH)を用いて、Total RNAを用いたＤＮＡアレイを行った。方法は添付のプロトコールに従った。ハイブリダイゼーション、洗浄を終えたメンブレンはイメージングプレート（富士フィルム）に暴露し、BAS2500（富士フィルム）で解析した。なお、各スポットの定量は、Image guage（富士フィルム）を用いた。
ＤＮＡアレイの結果、コントロールに対して発現量が２倍以上に変化した遺伝子が４８、０．５倍以下に変化した遺伝子が９存在した。
この内２．８倍の発現上昇が認められたIntegrin αｖ（ＴＧＦβ２）はビトロネクチン受容体であり、表皮基底層においてαｖβ５複合体を形成し細胞間接着を担っている。創傷治癒時の表皮においては、基底層におけるIntegrin αｖの発現上昇が認められ、またこの上昇はＴＧＦβによる誘導であることが報告されている。以上のことから、シス−６−ヘキサデセン酸は創傷治癒促進効果を有するものと考えられる。
またInterferon gamma receptor 2は2.0倍、Interferon alpha, beta, omega receptor 2は2.0倍の発現上昇が認められた。インターフェロンは免疫システムが作り出す物質に似ており、ウィルス及びガン細胞を抑制する一方で、免疫システムを活性化する機能をもつ。したがって、インターフェロンレセプターの発現上昇はこれらの機能を活性化する可能性が示唆された。
Caspase-8には3.45倍の発現上昇が認められた。これらは細胞死（アポトーシス）に関連する因子であり、これらの分子の発現上昇により活性が上昇すると、アポトーシスが促進される。つまり、なんらかの異常により増殖異常となった細胞のアポトーシスを促進することにより、癌を抑制する可能性が示唆された。
Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A(melanoma, p16)には4.45倍の発現上昇が認められた。Cdk inhibitorの１つであるp16は細胞周期を正に制御するサイクリン/Cdk複合体を結合しその活性を抑制することにより、細胞周期を負に制御する因子である。Cdk inhibitor の中でもp16INK4a遺伝子のみが多くのヒトの癌において失活しており、癌抑制遺伝子として機能している。また、Melanomaではこの分子に異常があることが知られている。つまり、この因子の発現が上昇することにより、癌を抑制する可能性が示唆された。
Example 2 DNA Array (1) Examination of Cytotoxicity Keratinocytes (NHEK6509 Normal human epidermal keratinocytes (Cat. NO. Cc-2503)) were seeded in a 96-well plate at 1 × 10 4 / cm 2 , 37 ° C., 5% CO Incubated overnight at 2 . To this medium, cis-6-hexadecenoic acid was added at 1,10,100 nM, 1,10, 50, 100, 250 μM and cultured for 24 hours (medium amount 200 μl / well). At the time of culturing for 18 hours, 20 μl of Alamar Blue (BIO SOURCE) was added, and the Alamar Blue activity after further culturing for 6 hours was measured and used as an index of cytotoxicity. The toxicity of cis-6-hexadecenoic acid was confirmed at a concentration higher than 1 μM 24 hours after the addition. From these results, the concentration of the agent to be acted was 1 μM cis-6-hexadecenoic acid.
(2) Preparation of cells Keratinocytes were cultured overnight in Supplement (+) medium. Thereafter, the medium was replaced with Supplement (-) medium, and further cultured for 6 to 8 hours. Cis-6-hexadecenoic acid was added at 1 μM, and cells after 0, 24 and 48 hours were collected. In addition, when adding cis-6-hexadecenoic acid to a culture medium, what was suspended in 1% BSA and sonicated for 20 to 30 seconds was added.
(3) Extraction of RNA The cultured keratinocytes were washed with PBS (−) and then collected with 1 ml / 10 cm dish ISOGEN (Nippon Gene). The following operations were performed with RNase free. After leaving at room temperature for 5 minutes, 200 μl of chloroform was added and stirred. The mixture was separated at 15000 g for 15 minutes using a centrifuge, and 500 μl of the supernatant was mixed with an equal amount of isopropanol. The mixture was left at room temperature for 5 to 10 minutes and separated at 15000 g for 10 minutes. The supernatant was removed, the remaining pellet was washed with 70% ethanol, dissolved in distilled water (RNase free), and used for the DNA array.
(4) DNA array
A DNA array using total RNA was performed using Atlas ™ Nylon cDNA Expression Arrays 1.2 Array (Cat. NO. 7850-1) (CLONTECH). The method followed the attached protocol. The membrane after hybridization and washing was exposed to an imaging plate (Fuji Film) and analyzed with BAS2500 (Fuji Film). In addition, Image guage (Fuji Film) was used for quantification of each spot.
As a result of the DNA array, there were 48 genes whose expression level was changed by 2 times or more than that of the control, and 9 genes which were changed by 0.5 times or less.
Of these, Integrin αv (TGFβ2), whose expression was increased by a factor of 2.8, is a vitronectin receptor and forms an αvβ5 complex in the epidermal basal layer and is responsible for cell-cell adhesion. In the epidermis during wound healing, an increase in the expression of Integrin αv in the basal layer was observed, and this increase was reported to be induced by TGFβ. From the above, cis-6-hexadecenoic acid is considered to have a wound healing promoting effect.
Interferon gamma receptor 2 increased 2.0-fold, and Interferon alpha, beta, and omega receptor 2 increased 2.0-fold. Interferon is similar to a substance produced by the immune system and functions to activate the immune system while suppressing viruses and cancer cells. Therefore, it was suggested that increased expression of interferon receptor may activate these functions.
Caspase-8 was found to have a 3.45-fold increase in expression. These are factors related to cell death (apoptosis), and apoptosis is promoted when activity increases due to increased expression of these molecules. In other words, it was suggested that cancer may be suppressed by promoting apoptosis of cells that have grown abnormally due to some abnormality.
Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A (melanoma, p16) showed a 4.45-fold increase in expression. P16, one of Cdk inhibitors, is a factor that negatively regulates the cell cycle by binding the cyclin / Cdk complex that positively regulates the cell cycle and suppressing its activity. Among the Cdk inhibitors, only the p16INK4a gene is inactivated in many human cancers and functions as a tumor suppressor gene. Melanoma is known to have an abnormality in this molecule. In other words, it was suggested that the expression of this factor could increase the suppression of cancer.
Claims (2)
A wound healing promoter comprising one or more compounds selected from cis-6-hexadecenoic acid, a derivative thereof, or a pharmacologically acceptable salt thereof.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003417666A JP2005179190A (en) | 2003-12-16 | 2003-12-16 | Wound healing promoter |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003417666A JP2005179190A (en) | 2003-12-16 | 2003-12-16 | Wound healing promoter |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2005179190A true JP2005179190A (en) | 2005-07-07 |
Family
ID=34780096
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003417666A Pending JP2005179190A (en) | 2003-12-16 | 2003-12-16 | Wound healing promoter |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2005179190A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009298711A (en) * | 2008-06-11 | 2009-12-24 | Maruzen Pharmaceut Co Ltd | Skin-lightening agent, and skin care preparation for external use and food and drink |
| US11413321B2 (en) | 2017-12-26 | 2022-08-16 | Hirotaro FUKUOKA | Pharmaceutical composition for use in increasing hair, modifying scalp or skin, healing a wound, promoting osteogenesis, or modifying hair |
-
2003
- 2003-12-16 JP JP2003417666A patent/JP2005179190A/en active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009298711A (en) * | 2008-06-11 | 2009-12-24 | Maruzen Pharmaceut Co Ltd | Skin-lightening agent, and skin care preparation for external use and food and drink |
| US11413321B2 (en) | 2017-12-26 | 2022-08-16 | Hirotaro FUKUOKA | Pharmaceutical composition for use in increasing hair, modifying scalp or skin, healing a wound, promoting osteogenesis, or modifying hair |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8871716B2 (en) | Use of antimicrobial peptides in regeneration of skin cells | |
| KR20210108942A (en) | therapeutic composition | |
| EP3052104A1 (en) | Treating inflammation using llp2a-bisphosphonate conjugates and mesenchymal stem cells | |
| JP4831711B1 (en) | Anti-Candida fungi and prophylactic and / or therapeutic agents for candidiasis comprising Tamogitake extract as an active ingredient | |
| JP6162341B2 (en) | Antifungal composition containing antifungal peptide and terpene alcohol | |
| JP4601936B2 (en) | Pharmaceutical composition for inhibiting MCP-1 production | |
| JP2005179190A (en) | Wound healing promoter | |
| AU2014209162B2 (en) | Therapeutic compounds | |
| EP2624853B1 (en) | Novel use of antimicrobial peptides in regeneration of skin cells | |
| US20180353440A1 (en) | Pimarane Diterpenoids for Use in Wound Healing and Angiogenesis | |
| US20120322751A1 (en) | use of rhamnolipids as a drug of choice in the case of nuclear disasters in the treatment of the combination radiation injuries and illnesses in humans and animals | |
| CA3060365A1 (en) | Amide derivatives of polycaffeoylquinic acids, process for producing same and uses thereof | |
| US20210393546A1 (en) | Compositions for preventing and treating viral infections | |
| JP7436471B2 (en) | How to treat basal cell carcinoma and glioblastoma | |
| CA2489705A1 (en) | Use of amide derivative of ge 2270 factor a3 for the treatment of acne | |
| JP4781624B2 (en) | RANTES inducer | |
| KR20070097291A (en) | Antibacterial drug for propionibacterium acnes | |
| WO2011156900A2 (en) | Compounds, compositions and methods for treatment of multiple sclerosis | |
| JP4778723B2 (en) | Anti-inflammatory agent | |
| CN113197887B (en) | Application of 5-hydroxymethylfurfural in preparation of antiviral drugs | |
| CN113855670B (en) | Application of A205804 in preparation of medicines for treating sepsis | |
| RU2228742C2 (en) | Method for treating relapsing equine iridocyclochorioiditis | |
| WO2019141280A1 (en) | New use of isoquinoline derivatives for wound healing | |
| KR20230051238A (en) | autophagy activator | |
| RU2223755C1 (en) | Method for treating equine relapsing iridocyclochorioiditis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20051208 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090616 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20091027 |