JP2005145981A - Method of preparing and purifying 9-nitro-20-camptothecin - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、９−ニトロ−２０−カンプトセシン（９ＮＣ）の調製および精製方法に関する。 The present invention relates to a process for the preparation and purification of 9-nitro-20-camptothecin (9NC).
９−ニトロ−２０（Ｓ）−カンプトセシンは、ある種の癌の治療において優れた有効性を示している。水不溶性である９−ニトロ−２０（Ｓ）−カンプトセシンは、インビボおよびインビトロのどちらにおいても研究されており、９−ニトロ−２０（Ｓ）−カンプトセシンはある種の癌に関して臨床試験中である。 9-nitro-20 (S) -camptothecin has shown excellent efficacy in the treatment of certain cancers. Water-insoluble 9-nitro-20 (S) -camptothecin has been studied both in vivo and in vitro, and 9-nitro-20 (S) -camptothecin is in clinical trials for certain cancers.
日本公開特許出願第５９−５１２８８号は、濃硫酸中でわずかに過剰な濃硝酸を用いてカンプトセシンを処理することによって、９−ニトロ−カンプトセシンを製造する１つの方法を提供している。しかしながら、この過程を行なった場合、医学的用途に用いることのできる９ＮＣ生成物の収率は、約３％から約７％である。さらに、この過程では、不活性異性体である１２−ニトロカンプトセシン（１２ＮＣ）のような不必要な副産物を９ＮＣ：１２ＮＣ＝約１：３の割合で生じる。以下の構造式は硝酸と硫酸の使用における反応を示している。 Japanese Published Patent Application No. 59-51288 provides one method for producing 9-nitro-camptothecin by treating camptothecin with a slight excess of concentrated nitric acid in concentrated sulfuric acid. However, when this process is performed, the yield of 9NC product that can be used for medical applications is about 3% to about 7%. Furthermore, this process produces unwanted by-products such as the inactive isomer 12-nitrocamptothecin (12NC) in a ratio of 9NC: 12NC = approximately 1: 3. The following structural formula shows the reaction in the use of nitric acid and sulfuric acid.
不所望な１２ＮＣは都合の悪いことに主要生成物であり、約６０％の収率にもなる。９ＮＣの収率が低く、副産物が非常に多いので、９ＮＣの分離および精製工程は時間がかかり、高価で、さらには９ＮＣの収率を減らすことにつながる。したがって、９ＮＣのより高い収率につながる工程、好ましくは従来の９ＮＣの製造方法に伴う非常に多くの副産物がない工程が必要とされている。 Undesirable 12NC is unfortunately the main product and yields about 60%. Since the yield of 9NC is low and there are many by-products, the 9NC separation and purification process is time consuming and expensive, and further reduces the yield of 9NC. Therefore, there is a need for processes that lead to higher yields of 9NC, preferably processes that are free of too many by-products associated with conventional 9NC manufacturing methods.
本発明の１つの特徴は、９−ニトロカンプトセシンの調製方法を提供し、好ましくは９−ニトロカンプトセシンの収率の向上を提供することである。 One feature of the present invention is to provide a process for the preparation of 9-nitrocamptothecin, preferably to provide an improved yield of 9-nitrocamptothecin.
本発明のさらなる特徴は、９−ニトロカンプトセシンの精製において、改良された精製過程を提供することである。 A further feature of the present invention is to provide an improved purification process in the purification of 9-nitrocamptothecin.
本発明のさらなる特徴および利点は、以下の説明で部分的に記載され、その説明からある程度明白になるか、本発明の実施によって分かり得る。本発明の目的および他の利点は、特に本説明および添付の特許請求の範囲で指摘されている構成要素および組合せを用いることによって、実現および達成されるであろう。 Additional features and advantages of the invention will be set forth in part in the description which follows, and in part will be apparent from the description, or may be learned by practice of the invention. The objectives and other advantages of the invention will be realized and attained by means of the elements and combinations particularly pointed out in the description and appended claims.
これらおよびその他の利点を達成するために、および本発明の目的にしたがって、本明細書中で具現化し広く記述されているように、本発明は９−ニトロカンプトセシンの調製方法に関する。本方法には２０−カンプトセシンと少なくとも１種の無機硝酸塩およびニトロニウムイオンの形成を触媒するのに効果的な酸とを反応させる工程が含まれる。本反応は９−ニトロカンプトセシンを形成するために、十分な温度と時間をかけて起こる。 To achieve these and other advantages, and in accordance with the purpose of the present invention, as embodied and broadly described herein, the present invention relates to a process for the preparation of 9-nitrocamptothecin. The method includes reacting 20-camptothecin with an acid effective to catalyze the formation of at least one inorganic nitrate and nitronium ion. This reaction takes place with sufficient temperature and time to form 9-nitrocamptothecin.
本発明はまた、好ましくはテトラハイドロフランおよびメチレンクロライドを含む溶離剤を用いるカラムクロマトグラフィーで９−ニトロカンプトセシンを精製する方法に関する。 The invention also relates to a method for purifying 9-nitrocamptothecin by column chromatography, preferably using an eluent comprising tetrahydrofuran and methylene chloride.
以上に述べた一般的な説明、および以下の詳細な説明はどちらも例示および説明のためのみであり、特許請求の範囲に記載された本発明のさらなる説明を提供することを意図していることが理解されるべきである。 Both the general description set forth above and the following detailed description are exemplary and explanatory only and are intended to provide further explanation of the invention as claimed. Should be understood.
一般的に、９−ニトロカンプトセシンを製造する方法には２０−カンプトセシンと少なくとも１つの無機硝酸塩および硝酸塩からニトロニウムイオンの形成を触媒するのに効果のある酸とを反応させることが含まれる。本反応は９−ニトロカンプトセシンを形成するために十分な温度と時間をかけて起こる。 In general, the process for producing 9-nitrocamptothecin involves reacting 20-camptothecin with at least one inorganic nitrate and an acid effective to catalyze the formation of nitronium ions from the nitrate. . This reaction takes place at a temperature and time sufficient to form 9-nitrocamptothecin.
出発材料としては、カンプトセシンは任意の２０−カンプトセシンであってもよい。好ましくは、２０−カンプトセシンはラセミ体２０−カンプトセシン（つまり２０（Ｒ，Ｓ）−カンプトセシン）または２０（Ｓ）−カンプトセシンである。より好ましくは、２０−カンプトセシンは２０（Ｓ）−カンプトセシンである。カンプトセシンはJingtao Science and Technology Development Co., Beijing, Chinaのような供給元によって市販されている。任意の純度のカンプトセシンを用いることができるが、好ましくは、該２０−カンプトセシンの純度は約８５％から約９９％であり、より好ましくは少なくとも９２％である。少なくとも無機硝酸塩およびニトロニウムイオンの形成を触媒するのに効果がある酸と反応する２０−カンプトセシンの量は、残存する成分が十分にあれば、いかなる量でも良い。 As a starting material, camptothecin may be any 20-camptothecin. Preferably, 20-camptothecin is racemic 20-camptothecin (ie 20 (R, S) -camptothecin) or 20 (S) -camptothecin. More preferably, 20-camptothecin is 20 (S) -camptothecin. Camptothecin is marketed by suppliers such as Jingtao Science and Technology Development Co., Beijing, China. Any purity of camptothecin can be used, but preferably the purity of the 20-camptothecin is from about 85% to about 99%, more preferably at least 92%. The amount of 20-camptothecin that reacts with an acid that is effective to catalyze the formation of at least inorganic nitrate and nitronium ions can be any amount, provided there are sufficient remaining components.
無機硝酸塩はニトロニウムイオンを形成できる塩であればどれでも良く、最終的に該ニトロニウムイオンは、カンプトセシンの９位でニトロ置換基になる。無機塩の例としては以下のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない；ＫＮＯ３；ＮＨ４ＮＯ３；ＬｉＮＯ３；ＡｇＮＯ３；ＴｉＮＯ３；ＢｉＯＮＯ３；Ｃｕ（ＮＯ３）２２．５・Ｈ２Ｏ；Ｈｇ（ＮＯ３）２Ｈ２Ｏ；Ｃａ（ＮＯ３）２４・Ｈ２Ｏ；Ｂａ（ＮＯ３）２；Ｚｎ（ＮＯ３）２６・Ｈ２Ｏ；Ｍｇ（ＮＯ３）２６・Ｈ２Ｏ；Ｃｏ（ＮＯ３）２６・Ｈ２Ｏ；Ｓｒ（ＮＯ３）２；Ｐｂ（ＮＯ３）２；Ａｌ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ；Ｆｅ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ；Ｃｒ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ；およびＬａ（ＮＯ３）３６Ｈ２Ｏ。 The inorganic nitrate can be any salt that can form a nitronium ion, and ultimately the nitronium ion becomes a nitro substituent at the 9-position of camptothecin. Examples of inorganic salts include, but are not limited to: KNO 3 ; NH 4 NO 3 ; LiNO 3 ; AgNO 3 ; TiNO 3 ; BiONO 3 ; Cu (NO 3 ) 2 2 .5 · H 2 O; Hg (NO 3 ) 2 H 2 O; Ca (NO 3 ) 2 4 · H 2 O; Ba (NO 3 ) 2 ; Zn (NO 3 ) 2 6 · H 2 O; Mg ( NO ( 3 ) 2 6 · H 2 O; Co (NO 3 ) 2 6 · H 2 O; Sr (NO 3 ) 2 ; Pb (NO 3 ) 2 ; Al (NO 3 ) 3 9 · H 2 O; Fe ( NO 3 ) 3 9 · H 2 O; Cr (NO 3 ) 3 9 · H 2 O; and La (NO 3 ) 3 6H 2 O.
本発明の方法によると、少なくとも１つの無機硝酸塩は反応中に用いられる。１種以上の無機硝酸塩を用いることが可能であるが、例えば、２つもしくは３つあるいはそれよりも多い異なる無機硝酸塩を同じ反応中で用いることも可能である。無機硝酸塩のある組合せにより、９−ニトロカンプトセシンの収率パーセント、および１２−ニトロカンプトセシンの収率パーセントに対する９−ニトロカンプトセシンの収率パーセントのより好ましい割合、さらには、より高い総ニトロ化パーセント、および／または反応から生じるより低いパーセントの副産物、についての結果が向上している。 According to the process of the invention, at least one inorganic nitrate is used during the reaction. One or more inorganic nitrates can be used, but, for example, two or three or more different inorganic nitrates can be used in the same reaction. Depending on the combination of inorganic nitrates, the percent yield of 9-nitrocamptothecin, and a more preferred ratio of the percent yield of 9-nitrocamptothecin to the percent yield of 12-nitrocamptothecin, and even higher The results for the total percent nitration and / or lower percent by-products resulting from the reaction are improved.
無機硝酸塩の組み合わせの具体例には以下のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない；ＫＮＯ３とＣｕ（ＮＯ３）２２．５・Ｈ２Ｏ；ＫＮＯ３とＴｉＮＯ３；ＫＮＯ３とＨｇ（ＮＯ３）２Ｈ２Ｏ；ＫＮＯ３とＣａ（ＮＯ３）２４・Ｈ２Ｏ；ＫＮＯ３とＢａ（ＮＯ３）２；ＫＮＯ３とＺｎ（ＮＯ３）２６・Ｈ２Ｏ；ＫＮＯ３とＳｒ（ＮＯ３）２；ＫＮＯ３とＰｂ（ＮＯ３）２；ＫＮＯ３とＡｌ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ；ＫＮＯ３とＦｅ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ；ＬｉＮＯ３とＨｇ（ＮＯ３）２・Ｈ２Ｏ；ＬｉＮＯ３とＣｕ（ＮＯ３）２２．５・Ｈ２Ｏ；ＬｉＮＯ３とＣｏ（ＮＯ３）２６・Ｈ２Ｏ；ＡｇＮＯ３とＣｒ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ；Ｃｕ（ＮＯ３）２２．５・Ｈ２ＯとＦｅ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ；Ｈｇ（ＮＯ３）２・Ｈ２ＯとＦｅ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ；ＮＨ４ＮＯ３とＣｕ（ＮＯ３）２２．５・Ｈ２Ｏ；ＫＮＯ３、ＴｉＮＯ３およびＣｕ（ＮＯ３）２２．５・Ｈ２Ｏ；ＫＮＯ３、ＴｉＮＯ３およびＺｎ（ＮＯ３）２６・Ｈ２Ｏ；ＫＮＯ３、ＴｉＮＯ３およびＰｂ（ＮＯ３）２；ＫＮＯ３、Ｃｕ（ＮＯ３）２２．５・Ｈ２ＯおよびＦｅ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ；ＫＮＯ３、ＬｉＮＯ３、Ｃｕ（ＮＯ３）２２．５・Ｈ２Ｏ、Ｈｇ（ＮＯ３）２Ｈ２ＯおよびＦｅ（ＮＯ３）３Ｈ２Ｏ；Ｚｎ（ＮＯ３）２６・Ｈ２Ｏ；ＫＮＯ３、ＬｉＮＯ３、ＡｇＮＯ３、Ｃｕ（ＮＯ３）２２．５・Ｈ２Ｏ、Ｈｇ（ＮＯ３）２Ｈ２ＯおよびＦｅ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ；ＫＮＯ３、ＬｉＮＯ３、Ｚｎ（ＮＯ３）２６・Ｈ２Ｏ、Ｃｕ（ＮＯ３）２２．５・Ｈ２Ｏ、Ｈｇ（ＮＯ３）２Ｈ２ＯおよびＦｅ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ；およびＫＮＯ３、Ｚｎ（ＮＯ３）２６・Ｈ２Ｏ、Ｃｕ（ＮＯ３）２２．５・Ｈ２Ｏ、Ｈｇ（ＮＯ３）２Ｈ２ＯおよびＦｅ（ＮＯ３）３９・Ｈ２Ｏ。 Specific examples of the combination of inorganic nitrates include, but are not limited to: KNO 3 and Cu (NO 3 ) 2 2.5 · H 2 O; KNO 3 and TiNO 3 ; KNO 3 and Hg (NO 3 ) 2 H 2 O; KNO 3 and Ca (NO 3 ) 2 4 · H 2 O; KNO 3 and Ba (NO 3 ) 2 ; KNO 3 and Zn (NO 3 ) 2 6 · H 2 O; KNO 3 and Sr (NO 3 ) 2 ; KNO 3 and Pb (NO 3 ) 2 ; KNO 3 and Al (NO 3 ) 3 9 · H 2 O; KNO 3 and Fe (NO 3 ) 3 9 · H 2 O; LiNO 3 and Hg (NO 3 ) 2 · H 2 O; LiNO 3 and Cu (NO 3 ) 2 2.5 · H 2 O; LiNO 3 and Co (NO 3 ) 2 6 · H 2 O; AgNO 3 And Cr (NO 3 ) 3 9 · H 2 O; Cu (NO 3 ) 2 2 .5 · H 2 O and Fe (NO 3 ) 3 9 · H 2 O; Hg (NO 3 ) 2 · H 2 O and Fe (NO 3 ) 3 9 · H 2 O; NH 4 NO 3 and Cu (NO 3 ) 2 2.5 · H 2 O; KNO 3 , TiNO 3 and Cu (NO 3 ) 2 2.5 · H 2 O; KNO 3 , TiNO 3 and Zn (NO 3 ) 2 6 · H 2 O; KNO 3 , TiNO 3 and Pb (NO 3 ) 2 ; KNO 3 , Cu (NO 3 ) 2 2.5 · H 2 O and Fe (NO 3 ) 3 9 · H 2 O; KNO 3 , LiNO 3 , Cu (NO 3 ) 2 2.5 · H 2 O, Hg (NO 3 ) 2 H 2 O and Fe (NO 3 ) 3 H 2 O; Zn (NO 3 ) 2 6 · H 2 O; KNO 3 , LiNO 3 , AgNO 3 , Cu (NO 3 ) 2 2.5 · H 2 O, Hg (NO 3 ) 2 H 2 O and Fe (NO 3 ) 3 9 · H 2 O; KNO 3 , LiNO 3 , Zn (NO 3 ) 2 6 · H 2 O, Cu (NO 3 ) 2 2.5 · H 2 O, Hg (NO 3 ) 2 H 2 O and Fe (NO 3 ) 3 9 · H 2 O; and KNO 3 , Zn (NO 3 ) 2 6 · H 2 O, Cu (NO 3 ) 2 2.5 · H 2 O, Hg ( NO 3) 2 H 2 O and Fe (NO 3) 3 9 · H 2 O.
反応中の無機硝酸塩の存在量（反応に用いるカンプトセシン量と比較して）は、使用するカンプトセシン量より多く、より好ましくは２０−カンプトセシン存在量の約２倍から約３倍のモル量である。無機硝酸塩はAldrich Chemical Co., Milwaukee, WIなどの供給元から市販されている。 The amount of inorganic nitrate present during the reaction (compared to the amount of camptothecin used in the reaction) is greater than the amount of camptothecin used, more preferably about 2 to about 3 times the amount of 20-camptothecin present. Inorganic nitrates are commercially available from sources such as Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI.
本出願の方法で用いられる酸に関して、該酸はニトロニウムイオンを形成するのを触媒するのに効果がある。酸には濃硫酸、トリフルオロ酢酸、または無水トリフルオロ酢酸などが含まれるが、これらに限定されるものではない。「濃」という用語を用いることによって、硫酸は少なくとも約９５％、より好ましくは約９６％から約９８％濃度であるべきことを意味する。反応に用いる酸の量は、２０−ＣＰＴ１グラム当たり５０ｍｌから１２０ｍｌの範囲で、より好ましくは２０−ＣＰＴ１グラム当たり１００ｍｌの量で用いられなければならない。 With respect to the acid used in the method of the present application, the acid is effective in catalyzing the formation of nitronium ions. Acids include, but are not limited to, concentrated sulfuric acid, trifluoroacetic acid, or trifluoroacetic anhydride. By using the term “concentrated” it is meant that the sulfuric acid should be at least about 95%, more preferably about 96% to about 98% concentration. The amount of acid used in the reaction should be used in the range of 50 ml to 120 ml per gram of 20-CPT, more preferably 100 ml per gram of 20-CPT.
本明細書の方法を行う上で、一般的には、出発材料は９−ニトロカンプトセシンが形成されるまで、任意の順序で反応容器に加えて混合して良い。出発材料を反応容器に加える順序は決定的な要素ではないが、例えば磁気撹拌機に備えた反応容器中に最初に酸を加え、ついでカンプトセシンと無機硝酸塩を加えることが望ましい。好ましくはその混合物は室温で少なくとも約７２時間、より好ましくは約７２時間から約９６時間撹拌される。混合物は一旦十分な時間撹拌したら、過熱を避けるために撹拌している間ある一定量の氷水に加えることができる。その形成された懸濁液はその後、メチレンクロライドのような溶剤によって抽出することができ、抽出物は例えば、硫酸ナトリウムなどで数時間で乾燥することができる。 In carrying out the methods herein, in general, the starting materials may be added to the reaction vessel and mixed in any order until 9-nitrocamptothecin is formed. The order in which the starting materials are added to the reaction vessel is not critical, but it is desirable to add the acid first, for example in a reaction vessel equipped with a magnetic stirrer, and then add camptothecin and inorganic nitrate. Preferably, the mixture is stirred at room temperature for at least about 72 hours, more preferably from about 72 hours to about 96 hours. Once the mixture has been stirred for a sufficient amount of time, it can be added to a volume of ice water while stirring to avoid overheating. The formed suspension can then be extracted with a solvent such as methylene chloride, and the extract can be dried with, for example, sodium sulfate in a few hours.
表１に示すように、反応式はカンプトセシン１を無機硝酸塩でニトロ化することにより、９−ニトロカンプトセシン４、１２−ニトロカンプトセシン５、および他の副産物を生じることを示している。好ましいニトロ化反応は、より高い総ニトロ化収率および、より低い副産物パーセント収率だけでなく、９−ニトロカンプトセシン対１２−ニトロカンプトセシンの好ましい比率を達成する。 As shown in Table 1, the reaction formula shows that nitrification of camptothecin 1 with inorganic nitrate yields 9-nitrocamptothecin 4, 12-nitrocamptothecin 5, and other by-products. A preferred nitration reaction achieves a preferred ratio of 9-nitrocamptothecin to 12-nitrocamptothecin, as well as higher total nitration yield and lower percent by-product yield.
表２は濃硫酸中の、一般的な無機塩とカンプトセシンのニトロ化反応の概要を提供する。この結果から、９−ニトロカンプトセシンの収率、および／または得られた９−ニトロカンプトセシン対１２−ニトロカンプトセシンの比率を基にして、ＴｉＮＯ３とＫＮＯ３は好ましい無機硝酸塩であることが分かり得る。表３は９−ニトロカンプトセシンを形成するために反応中に用いる、２つの異なる無機硝酸塩のいくつかの組合せを示すデータである。表３から、ＫＮＯ３／ＴｉＮＯ３；ＫＮＯ３／Ｚｎ（ＮＯ３）２；およびＫＮＯ３／Ｓｒ（ＮＯ３）２のような組合せが好ましいことが、達成された結果から分かり得る。例えば、ＫＮＯ３／ＴｉＮＯ３の組合せは、硝酸カリウムまたは硝酸タリウムをニトロ化剤として別々に用いる反応から得られる結果と比較した場合、９−ニトロカンプトセシン：１２−ニトロカンプトセシン＝１：１．４の比率に向上させ、その上２９％というより高収率の９−ニトロカンプトセシンを提供した。また、ＫＮＯ３とＨｇ（ＮＯ３）２の組合せでは、９−ニトロカンプトセシン：１２−ニトロカンプトセシン＝１：１．２の比率の向上が見られた。表４はニトロ化剤として用いる３つ以上の無機硝酸塩を要約し、およびこのような組合せが可能であることを示している。 Table 2 provides an overview of the nitration reaction of common inorganic salts with camptothecin in concentrated sulfuric acid. From this result, based on the yield of 9-nitrocamptothecin and / or the resulting ratio of 9-nitrocamptothecin to 12-nitrocamptothecin, TiNO 3 and KNO 3 are preferred inorganic nitrates. You can see that there is. Table 3 is data showing several combinations of two different inorganic nitrates used during the reaction to form 9-nitrocamptothecin. From Table 3, it can be seen from the results achieved that combinations such as KNO 3 / TiNO 3 ; KNO 3 / Zn (NO 3 ) 2 ; and KNO 3 / Sr (NO 3 ) 2 are preferred. For example, the combination of KNO 3 / TiNO 3 is 9-nitrocamptothecin: 12-nitrocamptothecin = 1: 1 when compared to results obtained from reactions using potassium nitrate or thallium nitrate separately as nitrating agents. Increased to a ratio of .4 and provided a higher yield of 9-nitrocamptothecin of 29%. Moreover, in the combination of KNO 3 and Hg (NO 3 ) 2 , an improvement in the ratio of 9-nitrocamptothecin: 12-nitrocamptothecin = 1: 1.2 was observed. Table 4 summarizes three or more inorganic nitrates used as nitrating agents and shows that such combinations are possible.
表５は濃硫酸中の異なった比率の硝酸カリウムと硝酸タリウムの組合せにおけるカンプトセシンのニトロ化の結果を要約している。表５から、好ましくは、ＫＮＯ３／ＴｉＮＯ３が１．４／１．０から１．０／１．５の比率の範囲での無機硝酸塩の組合せの時、９−ニトロカンプトセシン対１２−ニトロカンプトセシンの比率が向上するのと同様、より高収率の９−ニトロカンプトセシンが見られる。より好ましくは、１．３／１．０から１．０／１．０のＫＮＯ３／ＴｉＮＯ３が用いられる。このような比率の範囲によって、従来の方法であれば最高でも５±２パーセントであったところを、常に２０±１パーセントの収率の精製９−ニトロカンプトセシンが得られ得る。 Table 5 summarizes the results of nitration of camptothecin in different ratios of potassium nitrate and thallium nitrate combinations in concentrated sulfuric acid. From Table 5, preferably 9-nitrocamptothecin versus 12- when KNO 3 / TiNO 3 is a combination of inorganic nitrates in the ratio range of 1.4 / 1.0 to 1.0 / 1.5. Higher yields of 9-nitrocamptothecin are seen as well as an increased nitrocamptothecin ratio. More preferably, 1.3 / 1.0 to 1.0 / 1.0 KNO 3 / TiNO 3 is used. Such a range of ratios can always yield 20 ± 1 percent yield of purified 9-nitrocamptothecin, compared to 5 ± 2 percent at most with conventional methods.
本発明はさらに、以下の実施例によって明らかにされるが、これらは本発明の単に具体例を示している。 The invention will be further clarified by the following examples, which are merely illustrative of the invention.
以下の実施例において、すべてのガラス製品は使用前に最低でも２時間は７０±１０℃で焼成した。融点は、ＭＥＬ−ＴＥＭＰ融点装置を用いて得ており、無訂正である。約１０％（w/v）ＣＤＣｌ３溶液中の１Ｈ ＮＭＲスペクトラムはＪＥＯＬ ＧＸ−２７０ ＷＢ ＮＭＲスペクトロメーターを用いて、２７０．０５ＭＨｚで得た。化学シフトはｐｐｍ単位（δスケール）で記録し、内部標準としてテトラメチルシランを用いた。ＮＭＲデータの記録においては、以下の略字を用いる：結合定数はヘルツ（Ｊ）、一重項（ｓ）、二重項（ｄ）、三重項（ｔ）、ブロードシングル（ｂｓ）、多重項（ｍ）等。質量スペクトルは、１０，０００の分解能で、ＶＧ ＺＡＢ−ＳＥＱ質量分析計(VG Analytical Co., England)を用いて記録された。クロロホルムやメチレンクロライドのような日常的に用いる溶剤は、乾燥して新たに蒸留した。カラムクロマトグラフィーに用いるシリカゲル(230-400メッシュ、Aldrich)は、すべての生成物分離に用いた。イーストマンクロマグラム(Eastman Chromagram)（ポリエチレン上の蛍光指示薬を含むシリカゲル）のシートは薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で用いる。ＮＭＲデータの記録で用いる番号システムは、表１の構造１に示す。 In the following examples, all glassware was fired at 70 ± 10 ° C. for a minimum of 2 hours before use. Melting points are obtained using a MEL-TEMP melting point apparatus and are uncorrected. 1 H NMR spectrum in about 10% (w / v) CDCl 3 solution was obtained at 270.05 MHz using a JEOL GX-270 WB NMR spectrometer. Chemical shifts were recorded in ppm (δ scale) and tetramethylsilane was used as an internal standard. In recording NMR data, the following abbreviations are used: coupling constants are Hertz (J), singlet (s), doublet (d), triplet (t), broad single (bs), multiplet (m )etc. Mass spectra were recorded using a VG ZAB-SEQ mass spectrometer (VG Analytical Co., England) with a resolution of 10,000. Routinely used solvents such as chloroform and methylene chloride were dried and freshly distilled. Silica gel (230-400 mesh, Aldrich) used for column chromatography was used for all product separations. Eastman chroma grams of (Eastman Chromagram) (silica gel containing a fluorescent indicator on polyethylene) sheets used in thin layer chromatography (TLC). The numbering system used for recording NMR data is shown in Structure 1 of Table 1.
２０（Ｓ）―カンプトセシンはJingtao Science and Technology Development Co., Beijing,The People’s Republic of China で購入し、購入物として用いた。その他の無機硝酸塩は Aldrich Chemical Co., (Milwaukee, WI)で購入し、同様に購入物として用いた。 20 (S) -camptothecin was purchased from Jingtao Science and Technology Development Co., Beijing, The People ’s Republic of China and used as a purchase. Other inorganic nitrates were purchased from Aldrich Chemical Co., (Milwaukee, WI) and used as purchased items as well.
濃硫酸は９６％のもので、Ｆｉｓｈｅｒから得て、入手物として用いた。 Concentrated sulfuric acid was 96% and was obtained from Fisher and used as obtained.
酢酸中でのカンプトセシンとＫＮＯ３の反応
磁気撹拌機に備えた１００ｍｌ丸底フラスコ中の酢酸３０ｍｌに０．５０ｇ（０．００１４ｍｏｌ）の２０（Ｓ）−カンプトセシンと０．５０ｇのＫＮＯ３（０．００５０ｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌し、撹拌しながら何度かに分けて５００ｍｌの氷水に注いだ。懸濁液を１回につき２００ｍｌのメチレンクロライドで３回にわたって抽出した（２００ｍｌ×３）。組合せた抽出物を２０ｇの無水硫酸ナトリウムで６時間乾燥した。回転蒸発機でメチレンクロライドを除いた後、残留物を石油エーテルで４時間還流した。濾過および４時間の自然乾燥の後、生成物を灰白色の粉末として得た。ＨＰＬＣ分析では、酢酸中でのＫＮＯ３によるカンプトセシンのニトロ化の表示は見られなかった。出発カンプトセシンは１００％回収された（表１）。
Reaction of camptothecin and KNO 3 in acetic acid 0.50 g (0.0014 mol) 20 (S) -camptothecin and 0.50 g KNO 3 (0. 30 ml) in 30 ml acetic acid in a 100 ml round bottom flask equipped with a magnetic stirrer. 0050 mol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 24 hours and poured into 500 ml ice water in several portions with stirring. The suspension was extracted three times with 200 ml of methylene chloride each time (200 ml × 3). The combined extracts were dried with 20 g anhydrous sodium sulfate for 6 hours. After removing the methylene chloride on a rotary evaporator, the residue was refluxed with petroleum ether for 4 hours. After filtration and 4 hours of natural drying, the product was obtained as an off-white powder. HPLC analysis showed no indication of nitration of camptothecin by KNO 3 in acetic acid. The starting camptothecin was 100% recovered (Table 1).
無水酢酸中でのカンプトセシンとＫＮＯ３の反応
カンプトセシンを実施例１の反応と同様の方法でニトロ化し作成した。反応生成物のＨＰＬＣ分析において、出発カンプトセシンは１００％回収されたことがわかった（表１）。
Reaction of camptothecin and KNO 3 in acetic anhydride Camptothecin was nitrated and prepared in the same manner as in the reaction of Example 1. HPLC analysis of the reaction product showed that 100% of the starting camptothecin was recovered (Table 1).
無水トリフルオロ酢酸中でのカンプトセシンとＫＮＯ３の反応
カンプトセシンを実施例１の反応と同様の方法でニトロ化し作成した。反応混合物のＨＰＬＣ分析データを表１に示す。
Reaction of camptothecin and KNO 3 in trifluoroacetic anhydride Camptothecin was nitrated and prepared in the same manner as the reaction of Example 1. The HPLC analysis data of the reaction mixture is shown in Table 1.
濃硫酸中でのＫＮＯ３を用いるカンプトセシンのニトロ化
カンプトセシン（０．５０ｇ、０．００１４ｍｏｌ）と硝酸カリウム（０．５０ｇ、０．００５０ｍｏｌ）を磁気撹拌機に備えた１００ｍｌ丸底フラスコ中の濃硫酸３０ｍｌに同時に加えた。混合物を室温で１日撹拌し、その後、撹拌しながらゆっくりと５００ｍｌの氷水に注いだ。黄色の懸濁液を１回につき２００ｍｌのメチレンクロライドで３回抽出した（２００ｍｌ×３）。組合せた抽出物を無水硫酸ナトリウムで１日乾燥した。回転蒸発機でメチレンクロライドを除き、残留物を石油エーテルで４時間還流した。室温まで冷却した後、混合物を濾過し、得られた黄色の粉末を１日自然乾燥した。反応混合物（黄色の粉末）のＨＰＬＣ分析データを表１に示す。
Nitration of camptothecin with KNO 3 in concentrated sulfuric acid 30 ml of concentrated sulfuric acid in a 100 ml round bottom flask equipped with a magnetic stirrer camptothecin (0.50 g, 0.0014 mol) and potassium nitrate (0.50 g, 0.0050 mol) At the same time. The mixture was stirred at room temperature for 1 day and then slowly poured into 500 ml ice water with stirring. The yellow suspension was extracted 3 times with 200 ml of methylene chloride (200 ml × 3). The combined extracts were dried with anhydrous sodium sulfate for 1 day. The methylene chloride was removed on a rotary evaporator and the residue was refluxed with petroleum ether for 4 hours. After cooling to room temperature, the mixture was filtered and the resulting yellow powder was air dried for one day. The HPLC analysis data of the reaction mixture (yellow powder) is shown in Table 1.
硫酸中での様々な硝酸塩を用いるカンプトセシンのニトロ化
カンプトセシン（０．５０ｇ、０．００１４ｍｏｌ）と硝酸アンモニウム（０．５６ｇ、０．００７０ｍｏｌ）を磁気撹拌機に備えた１００ｍｌ丸底フラスコ中の濃硫酸２０ｍｌに加えた。混合物を室温で７２時間撹拌し、その後、撹拌しながら５００ｍｌの氷水に注ぎ、１回につき２００ｍｌのメチレンクロライドで３回抽出した（２００ｍｌ×３）。組合せた抽出物を１回につき１００ｍｌの水で２回洗浄した（１００ｍｌ×２）。この２回の洗浄物を合せ、１回につき１００ｍｌのメチレンクロライドで２回抽出した（１００ｍｌ×２）。すべての抽出物（〜６００ｍｌ＋〜２００ｍｌ）を合せ、４時間乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４、２０ｇ）、その後、９ＮＣ（１９％）、１２ＮＣ（４１％）、未反応カンプトセシン（２５％）および他の副産物（１５％）を含む、黄色の粉末としての反応粗生成物を得るために蒸発した。これらすべての反応のＨＰＬＣ分析の結果を表２に示す。
Nitration of camptothecin with various nitrates in sulfuric acid 20 ml of concentrated sulfuric acid in a 100 ml round bottom flask equipped with a magnetic stirrer camptothecin (0.50 g, 0.0014 mol) and ammonium nitrate (0.56 g, 0.0070 mol) Added to. The mixture was stirred at room temperature for 72 hours, then poured into 500 ml ice water with stirring and extracted three times with 200 ml methylene chloride each time (200 ml × 3). The combined extracts were washed twice with 100 ml water at a time (100 ml × 2). The two washings were combined and extracted twice with 100 ml of methylene chloride each time (100 ml × 2). All extracts (˜600 ml + ˜200 ml) were combined and dried for 4 hours (Na 2 SO 4 , 20 g), then 9NC (19%), 12NC (41%), unreacted camptothecin (25%) and other Evaporated to obtain the crude reaction product as a yellow powder containing by-products (15%). The results of HPLC analysis of all these reactions are shown in Table 2.
硫酸中での２つの異なる硝酸塩の組合せを用いるカンプトセシンのニトロ化
カンプトセシン（４．０ｇ、０．０１１５ｍｏｌ）を２５０ｍｌの３口フラスコ中の濃硫酸１００ｍｌに加えた。懸濁液をほとんどのカンプトセシンが液体中に溶けるまで、機械式撹拌機で撹拌した（〜１５分から３０分）。この溶液にＫＮＯ３（２．３２ｇ、０．０２３０ｍｏｌ）およびＣｕ（ＮＯ３）２・２．５Ｈ２Ｏ（２．６７ｇ、０．０１１５ｍｏｌ）を同時に加えた。混合物を室温で７２時間撹拌し、撹拌しながら１５００ｍｌの氷水に注いだ。氷水中の黄色の懸濁液を１回につき５００ｍｌのメチレンクロライドで４回抽出した（５００ｍｌ×４）。合せた抽出物を無水硫酸ナトリウムで８時間乾燥した。硫酸ナトリウムを濾過により取り除いた。回転蒸発機でメチレンクロライドを除いた後、反応粗生成物を、９ＮＣ（２４％）、１２ＮＣ（５０％）、未反応カンプトセシン（６％）および他の副産物（２０％）を含む黄色の粉末として得た。これらすべてのニトロ化反応のＨＰＬＣ分析の結果を表３に示す。
Nitration of camptothecin using a combination of two different nitrates in sulfuric acid Camptothecin (4.0 g, 0.0115 mol) was added to 100 ml of concentrated sulfuric acid in a 250 ml 3-neck flask. The suspension was stirred with a mechanical stirrer (˜15 to 30 minutes) until most of the camptothecin was dissolved in the liquid. To this solution were added KNO 3 (2.32 g, 0.0230 mol) and Cu (NO 3 ) 2 .2.5H 2 O (2.67 g, 0.0115 mol) simultaneously. The mixture was stirred at room temperature for 72 hours and poured into 1500 ml ice water with stirring. The yellow suspension in ice water was extracted 4 times with 500 ml methylene chloride (500 ml × 4). The combined extracts were dried over anhydrous sodium sulfate for 8 hours. Sodium sulfate was removed by filtration. After removing the methylene chloride on a rotary evaporator, the reaction crude product as a yellow powder containing 9NC (24%), 12NC (50%), unreacted camptothecin (6%) and other by-products (20%). Obtained. The results of HPLC analysis of all these nitration reactions are shown in Table 3.
硫酸中での３つ以上の無機硝酸塩の組合せを用いるカンプトセシンのニトロ化
カンプトセシン（４．０ｇ、０．０１１５ｍｏｌ）を機械式撹拌機に備えた２５０ｍｌの丸底フラスコ中の濃硫酸１００ｍｌに懸濁した。〜３０分の撹拌の後（カンプトセシンがほぼ溶解するまで）、ＫＮＯ３（１．１６ｇ、０．０１１５ｍｏｌ）、ＴｉＮＯ３（３．１０ｇ、０．０１１６ｍｏｌ）およびＣｕ（ＮＯ３）２・２．５Ｈ２Ｏ（２．６７ｇ、０．０１１５ｍｏｌ）の組合せを同時に加えた。混合物を室温で７２時間撹拌し、撹拌しながら１５００ｍｌの氷水に注いだ。黄色の懸濁液を１回につき５００ｍｌのメチレンクロライドで４回抽出した（５００ｍｌ×４）。合せた抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発した。反応粗生成物を９ＮＣ（２５％）、１２ＮＣ（４４％）、未反応カンプトセシン（１０％）および他の副産物（２１％）を含む黄色の粉末として得た。これらすべてのニトロ化反応のＨＰＬＣ分析の結果を表４に示す。
Nitration of camptothecin using a combination of three or more inorganic nitrates in sulfuric acid Camptothecin (4.0 g, 0.0115 mol) was suspended in 100 ml of concentrated sulfuric acid in a 250 ml round bottom flask equipped with a mechanical stirrer. . After stirring for ˜30 minutes (until camptothecin is almost dissolved), KNO 3 (1.16 g, 0.0115 mol), TiNO 3 (3.10 g, 0.0116 mol) and Cu (NO 3 ) 2 .2.5H A combination of 2 O (2.67 g, 0.0115 mol) was added simultaneously. The mixture was stirred at room temperature for 72 hours and poured into 1500 ml ice water with stirring. The yellow suspension was extracted 4 times with 500 ml methylene chloride (500 ml × 4). The combined extracts were dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and evaporated. The crude reaction product was obtained as a yellow powder containing 9NC (25%), 12NC (44%), unreacted camptothecin (10%) and other by-products (21%). The results of HPLC analysis of all these nitration reactions are shown in Table 4.
硫酸中での異なった比率のＫＮＯ３およびＴｉＮＯ３の組合せにおけるカンプトセシンのニトロ化
カンプトセシン（６．０ｇ、０．０１７２ｍｏｌ）を機械式撹拌機に備えた２５０ｍｌの３口フラスコ中の濃硫酸１００ｍｌに加えた。室温で〜３０分の撹拌の後、ＫＮＯ３（１．７４ｇ、０．０１７２ｍｏｌ）およびＴｉＮＯ３（４．５８ｇ、０．０１７２ｍｏｌ）の組合せを同時に加えた。混合物を室温で７２時間撹拌し、撹拌しながら１５００ｍｌの氷水に注いだ。黄色の懸濁液を１回につき５００ｍｌのメチレンクロライドで４回抽出した（５００ｍｌ×４）。合せた抽出物を無水硫酸ナトリウムで８時間乾燥した。回転蒸発機でメチレンクロライドを除いた後、反応粗生成物を、９ＮＣ（２６％）、１２ＮＣ（４９％）、未反応カンプトセシン（１１％）および他の副産物（１４％）を含む黄色の粉末として得た。これらすべての反応のＨＰＬＣ分析の結果を表５に示す。
Nitration of camptothecin in combinations of different ratios of KNO 3 and TiNO 3 in sulfuric acid. Camptothecin (6.0 g, 0.0172 mol) was added to 100 ml of concentrated sulfuric acid in a 250 ml 3-neck flask equipped with a mechanical stirrer. It was. After ˜30 minutes of stirring at room temperature, a combination of KNO 3 (1.74 g, 0.0172 mol) and TiNO 3 (4.58 g, 0.0172 mol) was added simultaneously. The mixture was stirred at room temperature for 72 hours and poured into 1500 ml ice water with stirring. The yellow suspension was extracted 4 times with 500 ml methylene chloride (500 ml × 4). The combined extracts were dried over anhydrous sodium sulfate for 8 hours. After removing the methylene chloride on a rotary evaporator, the reaction crude product as a yellow powder containing 9NC (26%), 12NC (49%), unreacted camptothecin (11%) and other by-products (14%) Obtained. The results of HPLC analysis of all these reactions are shown in Table 5.
様々な容量の硫酸中でのＫＮＯ３とＴｉＮＯ３の組合せ（比率：１．０／１．３）を用いるカンプトセシンのニトロ化
表６に示されるように、ＫＮＯ３とＴｉＮＯ３が様々な容量の硫酸で用いられること以外は実施例８の一般的過程に従った。結果もまた表６に示す。
Nitration of camptothecin using a combination of KNO 3 and TiNO 3 (ratio: 1.0 / 1.3) in various volumes of sulfuric acid. As shown in Table 6, KNO 3 and TiNO 3 The general procedure of Example 8 was followed except that it was used with sulfuric acid. The results are also shown in Table 6.
９−ニトロカンプトセシンの精製過程
カンプトセシン（４．０ｇ、０．０１１５ｍｏｌ）を１０００ｍｌの３口フラスコ中の濃硫酸３００ｍｌに加えた。〜１５分の撹拌の後、ＫＮＯ３（２．０ｇ、０．０１９８ｍｏｌ）およびＴｉＮＯ３（５．０ｇ、０．０１８８ｍｏｌ）を同時に加えた。混合物を室温で７２時間撹拌し、撹拌しながら３５００ｍｌの氷水に注いだ。黄色の懸濁液を総量３３００ｍｌのメチレンクロライドで３回にわたって抽出した（１５００ｍｌ×１、および９００ｍｌ×２）。合せた抽出物を無水硫酸ナトリウムで８時間乾燥させた。濾過後、溶剤を回転蒸発機で除いた。残留物をクロマトグラフをして分離した。粗９−ニトロカンプトセシンを純エタノール内で２〜４時間還流した。エタノールで再沈殿することによって得られる純生成物（９ＮＣ）は輝黄色粉末（融点２６８℃、収率２０％）であった。１ＨＮＭＲ：１．０５（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４０Ｈｚ、Ｃ１９−メチルプロトン）、１．９２（２Ｈ、ｍ、Ｃ１８−メチレンプロトン）、３．８２（１Ｈ、ｓ、Ｃ２０−ＯＨ）、５．４０（２Ｈ、ｓ、Ｃ５−メチレンプロトン）、５．５５（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１４．２１Ｈｚ、１４．２１Ｈｚ、Ｃ１７−メチレンプロトン）、７．７０（１Ｈ、ｓ、Ｃ１４−Ｈ）、７．９２（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝８．４０Ｈｚ、Ｃ１１−Ｈ）、８．４８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．３５Ｈｚ、Ｃ１０−Ｈ）、８．５５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．３５Ｈｚ、Ｃ１２−Ｈ）、９．３６（１Ｈ、ｓ、Ｃ７−Ｈ）、質量 ｍ／ｅ（相対的強度）：３９３（Ｍ＋，１００％）、３６４（Ｍ−Ｃ２Ｈ５、３５％）、３４９（４８％）、３３４（２５％）、３２０（２５％）、２９３（３５％）、２７４（８％）、２６２（８％）、２４６（１５％）、２３４（６％）、２１８（２０％）、２０５（８％）、１９０（９％）、１７７（５％）、１６４（３％）、１５１（３％）、１３７（５％）、１２３（４％）、１０９（５％）、９５（５％）、７５（３％）、６０（２３％）；正質量：３９３．０９６（実測）、３９３．０９６（Ｃ２０Ｈ１５Ｎ３Ｏ６に必要）
Purification process of 9-nitrocamptothecin Camptothecin (4.0 g, 0.0115 mol) was added to 300 ml of concentrated sulfuric acid in a 1000 ml 3-neck flask. After ˜15 minutes of stirring, KNO 3 (2.0 g, 0.0198 mol) and TiNO 3 (5.0 g, 0.0188 mol) were added simultaneously. The mixture was stirred at room temperature for 72 hours and poured into 3500 ml ice water with stirring. The yellow suspension was extracted three times with a total of 3300 ml of methylene chloride (1500 ml × 1, and 900 ml × 2). The combined extracts were dried over anhydrous sodium sulfate for 8 hours. After filtration, the solvent was removed on a rotary evaporator. The residue was chromatographed and separated. Crude 9-nitrocamptothecin was refluxed in pure ethanol for 2-4 hours. The pure product (9NC) obtained by reprecipitation with ethanol was a bright yellow powder (melting point: 268 ° C., yield: 20%). 1 HNMR: 1.05 (3H, t, J = 7.40 Hz, C19-methyl proton), 1.92 (2H, m, C18-methylene proton), 3.82 (1H, s, C20-OH), 5.40 (2H, s, C5-methylene proton), 5.55 (2H, dd, J = 14.21 Hz, 14.21 Hz, C17-methylene proton), 7.70 (1H, s, C14-H) 7.92 (1H, t, J = 8.40 Hz, C11-H), 8.48 (1H, d, J = 8.35 Hz, C10-H), 8.55 (1H, d, J = 8) .35 Hz, C12-H), 9.36 (1H, s, C7-H), mass m / e (relative strength): 393 (M + , 100%), 364 (M-C 2 H 5 , 35 %), 349 (48%), 334 (25%), 320 (25%), 293 ( 5%), 274 (8%), 262 (8%), 246 (15%), 234 (6%), 218 (20%), 205 (8%), 190 (9%), 177 (5%) ), 164 (3%), 151 (3%), 137 (5%), 123 (4%), 109 (5%), 95 (5%), 75 (3%), 60 (23%); Positive mass: 393.096 (actual measurement), 393.096 (necessary for C 20 H 15 N 3 O 6 )
９−ニトロカンプトセシンのＨＰＬＣ純度分析
器具使用：ＨＰＬＣシステムは２つの１１０Ａポンプおよび２ｍｌの注入ループを備えたベックマン４２１制御器からなっている。ＵＶ検出器はＳＰＤ−１１０ＡＶモデル(Shimadzu、Kyoto、Japan)である。ＨＰＬＣ検出器は２２０ｎｍでのＵＶ吸光度を監視するために設置した。分析に用いる集積ソフトウェアはＥＺＣｈｒｏｍｅ(Shimadzu、Kyoto、Japan)およびＦＬＯ−ＯＮｅ／ｂｅｔａ(Radiomatic Instruments、 Meridian、 CT)である。Ｃ−８ＭｉｃｒｏｓｏｒｂはRainin Instruments(Woburn、Ma)のものである。ＨＰＬＣ分析：試料の逆相ＨＰＬＣ分析をアセトニトリル−酢酸−水移動相系を用いて行う。分析は室温で、流量は１ｍｌ／分で行った。アセトニトリル中の９ＮＣの約０．１ｍｇ／ｍｌ濃縮溶液は、溶剤中に溶解することにより調製した。この溶液を３００μｌ分取し、０．１％酢酸水溶液７００μｌに加えた。〜１０秒振った後、この溶液１００μｌをカラムにつながる２ｍｌループに注入し、最初の５分間は移動相として０．１％酢酸および３０％アセトニトリルで７０％にした水でクロマトグラフした。その後、移動相の勾配をプログラムにしたがって、４分間にわたって１００％までアセトニトリルを増加させた。完全なＨＰＬＣスペクトルは１５分で得られる。９ＮＣの純度は２５４ｎｍでのＵＶピーク域を測定し、９ＮＣピークと関連するパーセントを計算することで決定された。９ＮＣの純度は少なくとも９６％であった。このような状態での９−ニトロカンプトセシンの保持時間は、約６．５分である。
HPLC purity analysis instrument use of 9-nitrocamptothecin: The HPLC system consists of a Beckman 421 controller with two 110A pumps and a 2 ml injection loop. The UV detector is the SPD-110AV model (Shimadzu, Kyoto, Japan). An HPLC detector was installed to monitor UV absorbance at 220 nm. The integration software used for the analysis is EZChrome (Shimadzu, Kyoto, Japan) and FLO-ONE / beta (Radiomatic Instruments, Meridian, CT). C-8 Microsorb is from Rainin Instruments (Woburn, Ma). HPLC analysis: Reverse phase HPLC analysis of the sample is performed using an acetonitrile-acetic acid-water mobile phase system. The analysis was performed at room temperature and a flow rate of 1 ml / min. An approximately 0.1 mg / ml concentrated solution of 9NC in acetonitrile was prepared by dissolving in a solvent. 300 μl of this solution was collected and added to 700 μl of 0.1% acetic acid aqueous solution. After shaking for -10 seconds, 100 μl of this solution was injected into a 2 ml loop leading to the column and chromatographed with 70% water with 0.1% acetic acid and 30% acetonitrile as the mobile phase for the first 5 minutes. Thereafter, the mobile phase gradient was increased to 100% over 4 minutes according to the program. A complete HPLC spectrum is obtained in 15 minutes. The purity of 9NC was determined by measuring the UV peak area at 254 nm and calculating the percent associated with the 9NC peak. The purity of 9NC was at least 96%. The retention time of 9-nitrocamptothecin in such a state is about 6.5 minutes.
異なる溶剤ａにおけるＫＮＯ３を用いるカンプトセシンのニトロ化 Nitration of camptothecin with KNO 3 in different solvents a
ａ．カンプトセシン：０．５ｇ、硝酸カリウム：０．５ｇ、溶剤：３０ｍｌ、反応時間：２４時間、反応温度：室温。
ｂ．ＴＦＡＡはトリフルオロ酢酸を表す。
ｃ．％ＣＰＴはカンプトセシンの回収率％を表し、ＣＰＴはカンプトセシンを表す。
ｄ．９ＮＣは９−ニトロカンプトセシンを表し、１２ＮＣは１２−ニトロカンプトセシンを表す。
a. Camptothecin: 0.5 g, potassium nitrate: 0.5 g, solvent: 30 ml, reaction time: 24 hours, reaction temperature: room temperature.
b. TFAA represents trifluoroacetic acid.
c. % CPT represents% recovery of camptothecin, and CPT represents camptothecin.
d. 9NC represents 9-nitrocamptothecin and 12NC represents 12-nitrocamptothecin.
硫酸ａ中での様々な硝酸塩を用いるカンプトセシンのニトロ化 Nitration of camptothecin with various nitrates in sulfuric acid a
ａ．各反応について：カンプトセシン：０．５ｇ（０．００１４ｍｏｌ）、Ｈ２ＳＯ４：２０ｍｌ、硝酸塩：０．００７０ｍｏｌ、７２時間および室温。 a. For each reaction: camptothecin: 0.5 g (0.0014 mol), H 2 SO 4 : 20 ml, nitrate: 0.0070 mol, 72 hours and room temperature.
硫酸ａ中での２つの異なる硝酸塩の組合せを用いるカンプトセシンのニトロ化 Nitration of camptothecin using a combination of two different nitrates in sulfate a
ａ．各反応について：カンプトセシン：４．０ｇ（０．０１１５ｍｏｌ）、硫酸：１００ｍｌ、７２時間および室温。
ｂ．Ａ（ＮＯ３）ｍ対Ｂ（ＮＯ３）ｎのモル分率：２．０：１．０
ｃ．Ｋ／ＣｕはＫＮＯ３／Ｃｕ（ＮＯ３）２２．５Ｈ２Ｏへの対応を表し、他の組合せにも同様に適応する。
a. For each reaction: camptothecin: 4.0 g (0.0115 mol), sulfuric acid: 100 ml, 72 hours and room temperature.
b. M (A (NO 3 ) m to B (NO 3 ) n molar fraction: 2.0: 1.0
c. K / Cu represents the correspondence to KNO 3 / Cu (NO 3 ) 2 2.5H 2 O and applies to other combinations as well.
硫酸ａ中での３つ以上の硝酸塩の組合せを用いるカンプトセシンのニトロ化 Nitration of camptothecin using a combination of three or more nitrates in sulfuric acid a
ａ．各反応について：カンプトセシン：４．０ｇ（０．０１１５ｍｏｌ）、硫酸：１００ｍｌ、７２時間および室温。
ｂ．試薬中の１つの組合せにおける全硝酸のモル分率は１：１：１．．．である。
ｃ．Ｋ／Ｔｉ／ＣｕはＫＮＯ３／ＴｉＮＯ３／Ｃｕ（ＮＯ３）２２．５Ｈ２Ｏへの対応を表し、他の試薬にも同様に適用される。
a. For each reaction: camptothecin: 4.0 g (0.0115 mol), sulfuric acid: 100 ml, 72 hours and room temperature.
b. The molar fraction of total nitric acid in one combination in the reagent is 1: 1: 1. . . It is.
c. K / Ti / Cu represents the correspondence to KNO 3 / TiNO 3 / Cu (NO 3 ) 2 2.5H 2 O and applies to other reagents as well.
硫酸ａ中での異なる比率のＫＮＯ３とＴｉＮＯ３の組合せを用いるカンプトセシンのニトロ化 Nitration of camptothecin using combinations of different ratios of KNO 3 and TiNO 3 in sulfuric acid a
ａ．各反応について：カンプトセシン：６．０ｇ（０．０１７２ｍｏｌ）、硫酸：１００ｍｌ、７２時間および室温。 a. For each reaction: camptothecin: 6.0 g (0.0172 mol), sulfuric acid: 100 ml, 72 hours and room temperature.
ＫＮＯ３とＴｉＮＯ３ ａの組合せを用いるカンプトセシンのニトロ化における濃硫酸の容量が及ぼす効果 Effect of concentrated sulfuric acid capacity on nitration of camptothecin using a combination of KNO 3 and TiNO 3 a
ａ．カンプトセシン：４．０ｇ、硝酸カリウム：２．０ｇ、硝酸タリウム：４．０ｇ、反応時間：７２時間、反応温度：室温。 a. Camptothecin: 4.0 g, potassium nitrate: 2.0 g, thallium nitrate: 4.0 g, reaction time: 72 hours, reaction temperature: room temperature.
以上に述べた一般的な説明、および以下の詳細な説明はどちらも例示および説明のためのみであり、特許請求の範囲に記載された本発明のさらなる説明を提供することを意図していることが理解されるべきである。 Both the general description set forth above and the following detailed description are exemplary and explanatory only and are intended to provide further explanation of the invention as claimed. Should be understood.
Claims (8)
１）１ＨＮＭＲ：１．０５（３Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４０Ｈｚ、Ｃ１９−メチルプロトン）、１．９２（２Ｈ、ｍ、Ｃ１８−メチレンプロトン）、３．８２（１Ｈ、ｓ、Ｃ２０−ＯＨ）、５．４０（２Ｈ、ｓ、Ｃ５−メチレンプロトン）、５．５５（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１４．２１Ｈｚ、１４．２１Ｈｚ、Ｃ１７−メチレンプロトン）、７．７０（１Ｈ、ｓ、Ｃ１４−Ｈ）、７．９２（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝８．４０Ｈｚ、Ｃ１１−Ｈ）、８．４８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．３５Ｈｚ、Ｃ１０−Ｈ）、８．５５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．３５Ｈｚ、Ｃ１２−Ｈ）、９．３６（１Ｈ、ｓ、Ｃ７−Ｈ）、
２）質量 ｍ／ｅ（相対的強度）：３９３（Ｍ＋，１００％）、３６４（Ｍ−Ｃ２Ｈ５、３５％）、３４９（４８％）、３３４（２５％）、３２０（２５％）、２９３（３５％）、２７４（８％）、２６２（８％）、２４６（１５％）、２３４（６％）、２１８（２０％）、２０５（８％）、１９０（９％）、１７７（５％）、１６４（３％）、１５１（３％）、１３７（５％）、１２３（４％）、１０９（５％）、９５（５％）、７５（３％）、６０（２３％）；正質量：３９３．０９６（実測）、３９３．０９６（Ｃ２０Ｈ１５Ｎ３Ｏ６に必要） The 9-nitrocamptothecin having a melting point of 268 ° C according to any one of claims 1 to 4, which has the following physical properties.
1) 1 HNMR: 1.05 (3H, t, J = 7.40 Hz, C19-methyl proton), 1.92 (2H, m, C18-methylene proton), 3.82 (1H, s, C20-OH) ), 5.40 (2H, s, C5-methylene proton), 5.55 (2H, dd, J = 14.21 Hz, 14.21 Hz, C17-methylene proton), 7.70 (1H, s, C14- H), 7.92 (1H, t, J = 8.40 Hz, C11-H), 8.48 (1H, d, J = 8.35 Hz, C10-H), 8.55 (1H, d, J = 8.35 Hz, C12-H), 9.36 (1H, s, C7-H),
2) Mass m / e (relative strength): 393 (M + , 100%), 364 (M-C 2 H 5 , 35%), 349 (48%), 334 (25%), 320 (25% ) 293 (35%), 274 (8%), 262 (8%), 246 (15%), 234 (6%), 218 (20%), 205 (8%), 190 (9%), 177 (5%), 164 (3%), 151 (3%), 137 (5%), 123 (4%), 109 (5%), 95 (5%), 75 (3%), 60 ( 23%); Positive mass: 393.096 (actual measurement), 393.096 (necessary for C 20 H 15 N 3 O 6 )
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