JP2005022999A - Lignan compound and food or drink - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide new lignan compounds which can exhibit high anti-oxidizing actions, and to provide a food or drink. <P>SOLUTION: Sesaminol-6-catechol (natural type sesaminol catechol compound) represented by formula 1 or 2-episesaminol-6-catechol (epi type sesaminol catechol compound) represented by formula 2. These lignan compounds have the relation of optical isomers, and exhibit a high anti-oxidizing action. The lignan compounds are produced by subjecting sesamin or a sesaminol glycoside to a microorganism fermentation treatment using a microorganism belonging to the genus Aspergillus. <P>COPYRIGHT: (C)2005,JPO&NCIPI

Description

【０００７】
【化４】

請求項２に記載の発明のリグナン化合物は、請求項１に記載の発明において、アスペルギルス属微生物を用いて、セサミノール及びセサミノール配糖体から選ばれる少なくとも１種を含む発酵原料を微生物発酵処理することにより得られることを特徴とするものである。
【０００８】
請求項３に記載の発明の飲食品は、請求項１又は請求項２に記載のリグナン化合物を含有することを特徴とするものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下、この発明を具体化した実施形態を詳細に説明する。
実施形態のリグナン化合物は、下記化５又は化６に示される構造を有する有機化合物（セサミノールカテコール体）である。
【００１０】
【化５】

【００１１】
【化６】

前記化５に示されるリグナン化合物は、天然型セサミノールカテコール体（セサミノール−６−カテコール）である。前記化６に示されるリグナン化合物は、エピ型セサミノールカテコール体（２−エピセサミノール−６−カテコール）である。これらセサミノールカテコール体は、互いに光学異性体の関係にあり、いずれも高い抗酸化作用を有している。また、天然型セサミノールカテコール体の方がエピ型よりも抗酸化作用は高い。
【００１２】
これらセサミノールカテコール体は、いずれもアスペルギルス属微生物を用いてセサミノール及びセサミノール配糖体から選ばれる少なくとも１種を含む発酵原料、好ましくはセサミノール及びセサミノール配糖体から選ばれる少なくとも１種の発酵原料を微生物発酵処理することにより得られる。これらセサミノールカテコール体は、前記セサミノール配糖体よりも顕著に高い抗酸化作用を有しているうえ、前記セサミノールよりも高い抗酸化作用を有している。
【００１３】
セサミノール（ｓｅｓａｍｉｎｏｌ）は、互いに光学異性体の関係にある天然型又はエピ型セサミノールが存在し、いずれも高い抗酸化活性を有する有機化合物である。これらセサミノールは、２つのメチレンジオキシ基を有しているが、前記微生物発酵処理による微生物変換によって、フェノール性水酸基を有しない側の一方のメチレンジオキシ基のみが開裂してセサミノールカテコール体となる。下記化７に天然型セサミノールの分子構造を示す。
【００１４】
【化７】

セサミノール配糖体（ｓｅｓａｍｉｎｏｌ−ｔｒｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）は、前記セサミノールと糖とがグリコシド結合にて結合した配糖体であり、抗酸化作用をほとんど有しない有機化合物である。このセサミノール配糖体は、β−グリコシダーゼ処理等のアグリコン化処理によりアグリコンとしてのセサミノールを生成（遊離）させる。また、前記微生物発酵処理によってもセサミノールが生成される。
【００１５】
前記アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属微生物（発酵菌）としては、アスペルギルス・サイトイ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓａｉｔｏｉ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）等の黒麹菌、又はアスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、アスペルギルス・ソーイエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｏｊａｅ）、アスペルギルス・タマリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔａｍａｒｉｉ）等の黄麹菌が挙げられる。これらの発酵菌のうち微生物変換効率が良好であることから、アスペルギルス・サイトイ、アスペルギルス・ニガー又はアスペルギルス・アワモリが好適に用いられ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓａｉｔｏｉ（ＩＡＭ２２１０）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ （ＡＴＣＣ３８８５７）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｈｉｒｏｕｓａｍｉ（ＲＩＢ２５０３）が特に好適に用いられる。
【００１６】
前記発酵原料としては、ゴマ種子、ゴマ製品又はゴマ製品製造時の副産物が用いられ、好ましくはそれらからゴマリグナン類を抽出したゴマリグナン類抽出物が用いられ、さらに好ましくは該ゴマリグナン類抽出物よりセサミノール及びセサミノール配糖体から選ばれる少なくとも１種を精製した精製物が用いられる。前記ゴマ種子、ゴマ製品又はゴマ製品製造時の副産物としては、セサミノールを高含有する焙煎ゴマ種子、ゴマ油、ゴマ脱臭スカム、ゴマサラダ油等、或いはセサミノール配糖体を高含有するゴマ種子、ゴマ絞り粕、ゴマ油粕等が挙げられる。
【００１７】
微生物発酵処理は、前記発酵原料にアスペルギルス属微生物を接種し、該微生物を所定の発酵条件下で所定の発酵期間培養することにより行われる。この微生物発酵処理は、主として前記微生物の栄養菌糸が生産する酵素によりセサミノール分子内のメチレンジオキシフェニル基をカテコール基に変換する反応を行う。また、同栄養菌糸が生産するβ−グリコシダーゼ（β−グルコシダーゼ）によりセサミノール配糖体をアグリコン化してセサミノールを遊離させる反応も行う。
【００１８】
前記微生物を発酵原料に接種する方法としては、該微生物の胞子を発酵原料に直接振りかけることができる。また、予め前記微生物を含む培地を好気的条件で振盪培養する予備培養処理を行った後、その予備培養処理後の培地を発酵原料に振りかけたり、前記予備培養後の培地中に発酵原料を添加して接種することも可能である。これらの接種方法のうち、微生物発酵処理が比較的均一に進むことから、予備培養処理後の培地を発酵原料に振りかけるのが最も好ましい。
【００１９】
前記予備培養処理は、微生物発酵処理に用いられる微生物を予め十分に増殖させるとともに活性化させることによって、微生物発酵処理を迅速かつ円滑に進行させるために行われる。この予備培養処理は、２０〜４０℃の好気的条件下で最低５日以上行われ、好ましくは前記微生物の菌糸体が培地表面を３分の１程度覆う状態となるまで行われる。前記培地としては、ポテトデキストロース含有培地やツァペック培地等の糸状菌用培地又はオカラ等の有機物を含有する種々の液体培地が好適に使用される。さらに、この予備培養処理では、前記微生物の生育を良好にするために、培養開始時点における培地のｐＨを３〜７に調整するのが好ましい。また、前記振盪培養する際の振盪速度としては、好ましくは５０ｒｐｍ以上、より好ましくは５０〜２００ｒｐｍである。この振盪速度が５０ｒｐｍ未満の場合には、前記微生物を含有した培地全体が好気的でないため菌糸の増殖が十分にできない。また、振盪速度が２００ｒｐｍを越える場合には、培地の揺れが激しく前記微生物の菌体形成が抑制されるおそれがある。
【００２０】
微生物発酵処理条件としては、好気的条件で行うとよい。また、暗所で行うのが好ましい。また、発酵温度としては、好ましくは１０〜４０℃、より好ましくは２０〜４０℃、さらに好ましくは２５〜３０℃である。前記リグナン化合物を多量に得るための発酵期間としては、好ましくは３日から１ヶ月、より好ましくは１〜３週間、さらに好ましくは１０〜２０日間、特に好ましくは１２〜１８日間である。この発酵期間が３日未満の場合には、前記微生物による微生物発酵がほとんど進行していないことから十分な量のリグナン化合物が生成されていない。逆に１ヶ月を越える場合には、生成されたリグナン化合物の分解が進むおそれがあるうえ不経済である。
【００２１】
実施形態の飲食品としての健康食品は、前記リグナン化合物を含有するものであり、主として飲料品、食料品又は製剤（錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、等）の形態で経口摂取するように構成されている。この健康食品は、前記リグナン化合物を果汁、牛乳やヨーグルト等の乳製品、ゴマ製品、乳糖やデキストリン等の賦形剤等の健康食品用素材に添加することにより製造される。この健康食品は、前記リグナン化合物の高い抗酸化活性により、経口摂取した時に生体内での過剰な活性酸素など酸化ストレスを低減して、低密度コレステロール（ＬＤＬ）の抗酸化作用や、肝機能の増強作用、アセトアルデヒドの毒性の軽減、乳がん細胞の増殖抑制作用、免疫機能改善等の健康増進効果を発揮する。
【００２２】
健康食品としての飲料品中に含まれるリグナン化合物の濃度は、好ましくは０．０００１〜５０重量％、より好ましくは０．０１〜３０重量％、さらに好ましくは０．１〜１０重量％である。前記リグナン化合物の濃度が０．０００１重量％未満の場合には健康増進効果を効果的に発揮させることができず、逆に５０重量％を越える場合には不経済である。健康食品としての食料品又は製剤に含まれるリグナン化合物の含有量は、好ましくは０．００１〜８０重量％、より好ましくは０．０１〜７０重量％、さらに好ましくは０．１〜５０重量％である。前記リグナン化合物の含有量が０．０００１重量％未満の場合には健康増進効果を効果的に発揮させることができず、逆に５０重量％を越える場合には不経済である。
【００２３】
また、前記リグナン化合物の摂取量としては、成人１日当たり好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ、より好ましくは０．１〜７００ｍｇ、より一層好ましくは１〜５００ｍｇであるとよい。このリグナン化合物の１日当たりの摂取量が０．０１ｍｇ未満の場合には健康増進効果を効果的に発揮させることができず、逆に１０００ｍｇを越える場合には不経済である。さらに、この健康食品は、１日数回（２〜３回又はそれ以上）に分けて服用するのが好ましく、特に激しい運動の前後、日光による紫外線照射の前後、ストレス時、喫煙の前後等の酸化ストレスに晒されやすい状態のときに摂取するとよい。また、小人の場合は、主に体重に依存して摂取量が調整されるが、前記成人の摂取量の半量が目安となる。
【００２４】
上記実施形態によって発揮される効果について、以下に記載する。
・ 実施形態のリグナン化合物は、上記化５又は化６に示される構造を有する新規物質である。これらリグナン化合物はいずれも、高い抗酸化作用を有するカテコール基を備えていることから低密度コレステロール（ＬＤＬ）の抗酸化作用や、肝機能の増強作用、アセトアルデヒドの毒性の軽減、乳がん細胞の増殖抑制作用、免疫機能改善等の健康増進効果を発揮する健康食品に利用することができる。
【００２５】
・ 実施形態のリグナン化合物は、セサミノール又はセサミノール配糖体にアスペルギルス属微生物を接種して微生物発酵処理することにより製造される。このリグナン化合物は、セサミノールやセサミノール配糖体が高含有されているゴマ種子、ゴマ製品及びゴマ製品製造時の副産物中には存在していないことから、本実施形態の微生物発酵処理を行うことにより、極めて容易かつ安価に大量生産が可能となり入手容易なものとなった。さらに、このリグナン化合物の製造方法では、食品加工分野で古来より用いられてきた麹菌（アスペルギルス属微生物）を利用して製造されていることから、経口摂取における問題も少ないうえ、実際の製造コスト面からも極めて効率がよい。
【００２６】
・ 実施形態の飲食品（健康食品）は、前記リグナン化合物が含有されていることから、生体内に摂取することによって、活性酸素の消去等により高い健康増進効果を発揮することができる。さらに、前記リグナン化合物は、生体内に摂取される以前に予め微生物変換させることによって抗酸化活性を高めておいたものであることから、生体内で極めて迅速かつ効率的に抗酸化作用を発揮させることができる。このため、この健康食品では、生体吸収性の向上や新たな生理機能の付加も期待できることから、トータルとして生体内での健康増進機能をより一層増進させることが可能になる。
【００２７】
【実施例】
以下、前記実施形態を具体化した実施例について説明する。
＜実施例１：セサミノール配糖体の微生物発酵処理＞
（微生物発酵処理による抗酸化能の上昇確認）
発酵菌としては、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉｉ（ＲＩＢ２８０４）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ（ＡＴＣＣ３８８５７）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｈｉｒｏｕｓａｍｉ（ＲＩＢ２５０３）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓａｉｔｏｉ（ＩＡＭ２２１０）の４種類の菌株を用いた。これらの菌株は、予めポテトデキストロースブロス培地にて予備培養を行い菌糸体を増殖させておいた上で、同培地を５倍希釈した液体培地に菌糸体を移し、これに終濃度０．１％となるようにセサミノール配糖体（ゴマ粕より単離精製して調製）を添加して微生物発酵処理を実施した。上記の予備培養及び微生物発酵処理はいずれも、３０℃恒温条件で振盪速度１００ｒｐｍの好気的な条件下で培養を実施した。培養は１ヶ月間実施するとともに、経時的に液体培地を少量サンプリングして濾過したサンプリング液についてＤＰＰＨ（１，１−Ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙ）によるラジカル捕捉活性の測定を行った。即ち、ＤＰＰＨエタノール溶液（２０ｍｇ／１００ｍｌ）２０００μｌ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー１０００μｌ及びサンプリン液１００μｌを混合し、ＨＰＬＣを用い定法に従ってラジカル捕捉活性の測定を行った。結果を図１に示す。図１より、全ての発酵菌が抗酸化能を上昇させ得ることが確認された。特に、ＲＩＢ２５０３及びＩＡＭ２２１０では、微生物発酵処理開始１０日目ごろからラジカル捕捉活性の急激な上昇がみられ、抗酸化能の上昇が迅速かつ高かったことが確認された。
【００２８】
（抗酸化物質の精製）
０．５％セサミノール配糖体を添加した培地をＲＩＢ２５０３又はＩＡＭ２２１０により上記と同様の条件で８日間微生物発酵処理することにより発酵物を得た。得られた発酵物の濾過液について、下記ＨＰＬＣ条件１のＨＰＬＣグラジエント法（ＭｅＯＨはメタノールを表す）にて、分取用カラム（ＹＭＣ社製）が装着された島津製作所製のＬＣ−８Ａを用いてＡ〜Ｄの４つの区分（ｆｒａｃｔｉｏｎ）に分画した。
【００２９】
ＨＰＬＣ条件１

次に、分画後の各区分についてＤＰＰＨラジカル捕捉活性の測定を実施した。即ち、ＤＰＰＨエタノール溶液（２０ｍｇ／１００ｍｌ）２５００μｌ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー１０００μｌ及びサンプリング液１００μｌを混合し、上記と同様にＨＰＬＣを用いてラジカル捕捉活性の測定を行った。各区分のラジカル捕捉活性（％）を表１に示す。また、前記ＲＩＢ２５０３を用いた発酵物を以下ＨＰＬＣ条件２の条件で分析した結果を図２に示す。
【００３０】
ＨＰＬＣ条件２

【００３１】
【表１】

表１より、ＢとＣの区分、特にＣの区分において強いラジカル捕捉活性が認められた。次に、前記クロマトグラムのピークを細かく分離し、Ｂ区分については１１個（Ｂ１〜Ｂ１１）、Ｃ区分については７個（Ｃ１〜Ｃ７）に分画したもののそれぞれについて、ＤＰＰＨラジカル捕捉活性を測定した。結果を表２に示す。なお、前記Ｂ１〜Ｂ１１及びＣ１〜Ｃ７のピークのうちの幾つか（Ｆｒｃ−Ｂ５，Ｆｒｃ−Ｂ９，Ｆｒｃ−Ｃ３，Ｆｒｃ−Ｃ４，Ｆｒｃ−Ｃ７）を図２に示されるクロマトグラムに記入した。
【００３２】
【表２】

（抗酸化物質の同定）
セサミノール配糖体及びセサミノール（本発明者らが単離精製して調製）を上記ＨＰＬＣ条件２に準じてＨＰＬＣ分析した結果、Ｃ２に含まれるピークはセサミノール配糖体、Ｃ５に含まれるピークはセサミノールであることが確認された。次に、強いラジカル捕捉活性が認められたＣ３及びＣ４の各区分について構造決定を行った。即ち、上記ＨＰＬＣ条件２にてＵＶ２８０ｎｍの吸光度を指標として、ピークＣ３及びＣ４をそれぞれ個別に分取し単離、精製した。これらの分取サンプルを用いて、下記ＬＣ−ＭＳ条件１にて分子量を測定した。ピークＣ３についてのＬＣ−ＭＳの結果を図３に示す。なお、ＣＨ_３ＣＮはアセトニトリルを示す。
【００３３】
ＬＣ−ＭＳ条件１

その結果、ピークＣ３の測定分子量（Ｍ＋Ｈ^＋）は３５９であることが確認された。このピークＣ３の抗酸化物質の分子量３５８はセサミノールの分子量３７０よりも１２小さいことから、構造的にセサミンの両端にある２つのメチレンジオキシ基のうちいずれかがそれぞれ水酸基に開裂したカテコール体ではないかと予想された。また、Ｃ４についても同様の結果が得られた。
【００３４】
次に、前記ピークＣ３、Ｃ４のそれぞれの分取サンプルを用いて各種ＮＭＲ（^１Ｈ，^１３Ｃ，ＨＭＢＣ，ＨＭＱＣ）による分析を行った。本分析では、まず、セサミノールの標準品及び立体異性体の文献値と比較検討することにより構造の特徴を推定した。^１Ｈ−ＮＭＲの結果、変換物Ｃ３，Ｃ４にセサミノールに見られるテトラヒドロフルフラン環由来のシグナルが見られた。測定溶媒の影響よりこれらのシグナルのケミカルシフトは微妙に異なったが、出現パターンや結合定数はほぼ同じであったことからＣ３，Ｃ４のテトラフルフラン環は代謝過程で保持されていることが示唆された。しかしながら、セサミノール及びその異性体に見られるメチレンジオキシ基由来シグナル強度が半減し、新たな水酸基シグナルが８．７８ｐｐｍ（溶媒：重ＤＭＳＯ）に観察され、このシグナルはプロトン交換可能なＤ_２Ｏ処理では観察されなかったことから水酸基によるものと考えられた。
【００３５】
また、二次元ＮＭＲ解析により、各^１Ｈ及び^１３Ｃシグナルを図４及び図５に示す様に帰属できた。Ｃ３は、１）１，５位の^１Ｈシグナルが２．８７ｐｐｍに同一な値を示したこと、２）４，８位の^１Ｈシグナルの出現パターン、結合定数がセサミノールと酷似していたことから、立体構造は天然型のセサミノールと同一であることが強く示唆された。一方、Ｃ４は１）１，５位の^１Ｈシグナルが３．３７ｐｐｍ、２．７５ｐｐｍと異なった値を示したこと、２）１位の^１Ｈシグナルが３．３７ｐｐｍと大きく低磁場シフトしていること、３）天然型では２位ベンゼン環と立体的に近傍に存在する８位の^１Ｈシグナルがそれぞれ３．０７ｐｐｍ、３．６４ｐｐｍと大きく高磁場シフトしていることなどから、セサミノール立体異性体の文献値との対応性と併せて、エピ体の２−エピセサミノールと同一の立体構造であると推察された。
【００３６】
以上から、抗酸化物質Ｃ３、Ｃ４はセサミノール及び２−エピセサミノールのテトラヒドロフルフラン環を持ち、２’位水酸基を有するベンゼン環のメチレンジオキシ基は変化せず、反対側のベンゼン環に存在するメチレンジオキシ基が開裂したカテコール構造を持つものであるとの結論を得た。即ち、Ｃ３はセサミノールのＡ環のメチレンジオキシ基が開裂した天然体のセサミノール−６−カテコールであり、Ｃ４はエピ体の２−エピセサミノール−６−カテコールであることが示された。また、表２の結果を参照すると、これらセサミノールカテコール体は、セサミノールよりも顕著に高い抗酸化活性を有していることと、エピ型よりも天然型セサミノールカテコール体の方が抗酸化活性が高いこととが明らかになった。
【００３７】
（抗酸化物質の変換率の確認）
上記ＲＩＢ２５０３又はＩＡＭ２２１０を用いて微生物発酵処理した各発酵物について、抗酸化物質の変換率を求めた。即ち、まず、上記微生物発酵処理によって生成されたセサミノールカテコール体の量をクロマトグラム（ＲＩＢ２５０３については図２）より求めた後、該セサミノールカテコール体の量を、出発原料として用いたセサミノール配糖体の量で除算することによって変換率を求めた。その結果、ＲＩＢ２５０３を用いた微生物発酵処理における変換率は７．６％（天然型は４．６％、エピ型は３．０％）、ＩＡＭ２２１０を用いた微生物発酵処理における変換率は７．１４％（天然型は４．３５％、エピ型は２．８０％）であったことが示された。また、前記出発原料としてのセサミノール配糖体に含まれる天然型とエピ型との割合は１：１であることから、この微生物発酵処理では天然型への変換効率に優れていることも示された。
【００３８】
なお、上記実施形態は、次のように変更して具体化することも可能である。
・ 微生物発酵処理の代わりに、アスペルギルス属微生物が産生する酵素を用いた酵素処理により上記リグナン化合物を生成させてもよい。このように構成した場合でも高い抗酸化作用を発揮することができる。
【００３９】
・ 特許文献１に記載の方法（超臨界水と反応させること）により、セサミノール又はセサミノール配糖体からセサミノールカテコール体を製造してもよい。本発明を応用した技術として、セサミノールカテコール体をジアゾメタンによる完全メチル化反応を行うことにより生成されたリグナン化合物を医薬品又は医薬部外品中に含有させてもよい。
【００４０】
さらに、前記実施形態より把握できる技術的思想について以下に記載する。
・ アスペルギルス属微生物を用いて、セサミノール又はセサミノール配糖体を微生物発酵処理することにより得られることを特徴とする請求項１に記載のリグナン化合物。
【００４１】
・ 前記微生物発酵処理に先立って、アスペルギルス属微生物を含む培地を好気的条件下で振盪培養する予備培養処理を行った後、その予備培養処理後の培地を前記発酵原料に付着させて微生物発酵処理を行うようにしたことを特徴とする請求項２に記載のリグナン化合物。
【００４２】
・ 請求項１に記載のリグナン化合物を製造するリグナン化合物の製造方法であって、アスペルギルス属微生物を用いて、セサミノール及びセサミノール配糖体から選ばれる少なくとも１種を含む発酵原料を微生物発酵処理することを特徴とするリグナン化合物の製造方法。このように構成した場合、高い抗酸化作用を発揮するリグナン化合物を容易に製造することができる。
【００４３】
・ 請求項１又は請求項２に記載のリグナン化合物を含有する化粧品。請求項１又は請求項２に記載のリグナン化合物を含有する医薬部外品。請求項１又は請求項２に記載のリグナン化合物を含有する医薬品。これらのように構成した場合、高い抗酸化作用を様々な用途に利用することができる。請求項１又は請求項２に記載のリグナン化合物を含有する劣化防止剤。このように構成した場合、香料、色素、油脂等の酸化劣化を容易に防止することができる。
【００４４】
【発明の効果】
以上詳述したように、この発明によれば、次のような効果を奏する。
請求項１及び請求項２に記載の発明のリグナン化合物によれば、高い抗酸化作用を発揮することができる。請求項３に記載の発明の飲食品によれば、高い抗酸化作用を発揮することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例の微生物発酵処理による抗酸化能の確認結果を示すグラフ
【図２】実施例の抗酸化物質の精製を行った際のクロマトグラム。
【図３】実施例のピークＣ３のＬＣ−ＭＳ分析結果を示す。
【図４】実施例のピークＣ３、Ｃ４の構造と^１Ｈ−ＮＭＲの結果とを示す
【図５】実施例のピークＣ３、Ｃ４の^１３Ｃ−ＮＭＲの分析結果を示す。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel lignan compound comprising a sesaminol catechol body and a food or drink containing the lignan compound. More specifically, the present invention relates to a lignan compound and a food and drink having a structure in which a methylenedioxyphenyl group present in the molecule of sesaminol is converted to a catechol group and exhibiting a high antioxidant effect.
[0002]
[Prior art]
Conventionally, as this type of lignan compound, for example, various lignan compounds disclosed in Patent Document 1 are known.
[0003]
[Patent Document 1]
JP-A-2001-139579 [0004]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention has been made by discovering a novel lignan compound as a result of diligent research by the present inventors and finding that the lignan compound has a high antioxidant action. The object is to provide a novel lignan compound and food and drink that can exhibit a high antioxidant effect.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
In order to achieve the above object, the lignan compound of the invention described in claim 1 has a structure represented by the following chemical formula 3 or chemical formula 4.
[0006]
[Chemical 3]

[0007]
[Formula 4]

A lignan compound according to a second aspect of the present invention is the lignan compound according to the first aspect of the present invention, wherein a fermentation raw material containing at least one selected from sesaminol and sesaminol glycosides is used as a microorganism fermentation treatment using the Aspergillus microorganism. It is obtained by doing.
[0008]
The food / beverage products of the invention of Claim 3 contain the lignan compound of Claim 1 or Claim 2, It is characterized by the above-mentioned.
[0009]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hereinafter, embodiments embodying the present invention will be described in detail.
The lignan compound of the embodiment is an organic compound (sesaminol catechol body) having a structure represented by the following chemical formula 5 or chemical formula 6.
[0010]
[Chemical formula 5]

[0011]
[Chemical 6]

The lignan compound represented by Chemical Formula 5 is a natural sesaminol catechol body (sesaminol-6-catechol). The lignan compound represented by Chemical Formula 6 is an epi-type sesaminol catechol body (2-episesaminol-6-catechol). These sesaminol catechol bodies are in an optical isomer relationship with each other, and all have a high antioxidant effect. In addition, natural sesaminol catechol body has higher antioxidant effect than epi type.
[0012]
These sesaminol catechol bodies are fermentation raw materials containing at least one selected from sesaminol and sesaminol glycosides using Aspergillus microorganisms, preferably at least one selected from sesaminol and sesaminol glycosides It is obtained by subjecting the fermentation raw material to microbial fermentation. These sesaminol catechol bodies have a significantly higher antioxidant action than the sesaminol glycoside, and also have a higher antioxidant action than the sesaminol.
[0013]
Sesaminol is an organic compound in which natural or epi-type sesaminol exists in an optical isomer relationship with each other and both have high antioxidant activity. These sesaminols have two methylenedioxy groups, but only one methylenedioxy group on the side having no phenolic hydroxyl group is cleaved by microbial conversion by the microbial fermentation treatment, so that the sesaminol catechol body is obtained. It becomes. Chemical formula 7 below shows the molecular structure of natural sesaminol.
[0014]
[Chemical 7]

Sesaminol-triglycosides are glycosides in which the sesaminol and sugar are linked by a glycosidic bond, and are organic compounds having almost no antioxidant action. This sesaminol glycoside produces (releases) sesaminol as an aglycon by aglyconization treatment such as β-glycosidase treatment. Sesaminol is also produced by the microbial fermentation treatment.
[0015]
Examples of the Aspergillus genus microorganism (fermenting bacterium) include Aspergillus saitoi, Aspergillus niger, Aspergillus awagi, Aspergillus awagi, and And Aspergillus sojae, Aspergillus tamarii and the like. Among these fermenting bacteria, since the microorganism conversion efficiency is good, Aspergillus Saito, Aspergillus niger or Aspergillus awamori is preferably used. Aspergillus saitoi (IAM2210), Aspergillus niger (ATCC38857), Aspergillus 250 Is particularly preferably used.
[0016]
As the fermentation raw material, sesame seeds, sesame products, or by-products during the production of sesame products are used, preferably sesame lignan extracts obtained by extracting sesame lignans from them, more preferably sesaminol from the sesame lignan extracts. And a purified product obtained by purifying at least one selected from sesaminol glycosides. Sesame seeds, sesame products or by-products at the time of sesame product production include roasted sesame seeds containing a high content of sesaminol, sesame oil, sesame deodorized scum, sesame salad oil, etc., or sesame seeds containing a high content of sesaminol glycosides, Examples include sesame squeezed rice cake and sesame oil candy.
[0017]
The microorganism fermentation treatment is performed by inoculating the fermentation raw material with an Aspergillus microorganism and culturing the microorganism under a predetermined fermentation condition for a predetermined fermentation period. In this microbial fermentation treatment, a reaction for converting a methylenedioxyphenyl group in a sesaminol molecule into a catechol group is mainly performed by an enzyme produced by the vegetative mycelium of the microorganism. In addition, a reaction is also performed in which sesaminol glycosides are aglyconated by β-glycosidase (β-glucosidase) produced by the vegetative mycelium to release sesaminol.
[0018]
As a method for inoculating the fermentation raw material with the microorganism, spores of the microorganism can be sprinkled directly on the fermentation raw material. In addition, after preliminarily culturing a culture medium containing the microorganisms under aerobic conditions, the precultured medium is sprinkled on the fermentation raw material, or the fermentation raw material is added to the precultured medium. It is also possible to add and inoculate. Among these inoculation methods, since the microbial fermentation treatment proceeds relatively uniformly, it is most preferable to sprinkle the culture medium after the preculture treatment on the fermentation raw material.
[0019]
The pre-culture treatment is performed in order to advance the microorganism fermentation treatment quickly and smoothly by sufficiently proliferating and activating microorganisms used in the microorganism fermentation treatment in advance. This pre-culture treatment is carried out under an aerobic condition of 20 to 40 ° C. for at least 5 days, preferably until the mycelium of the microorganism is in a state of covering about 1/3 of the medium surface. As said culture medium, various liquid culture media containing organic substances, such as culture media for filamentous fungi, such as a potato dextrose containing culture medium and a Czapec culture medium, or okara, are used suitably. Furthermore, in this preliminary culture treatment, it is preferable to adjust the pH of the medium at the start of the culture to 3 to 7 in order to improve the growth of the microorganism. Further, the shaking speed at the time of the shaking culture is preferably 50 rpm or more, more preferably 50 to 200 rpm. When the shaking speed is less than 50 rpm, the whole medium containing the microorganisms is not aerobic, so that the mycelium cannot sufficiently grow. On the other hand, when the shaking speed exceeds 200 rpm, the medium is vigorously shaken and the formation of the microorganisms may be suppressed.
[0020]
The microbial fermentation treatment conditions may be aerobic conditions. Moreover, it is preferable to carry out in a dark place. Moreover, as fermentation temperature, Preferably it is 10-40 degreeC, More preferably, it is 20-40 degreeC, More preferably, it is 25-30 degreeC. The fermentation period for obtaining a large amount of the lignan compound is preferably 3 days to 1 month, more preferably 1 to 3 weeks, still more preferably 10 to 20 days, and particularly preferably 12 to 18 days. When this fermentation period is less than 3 days, a sufficient amount of lignan compound is not produced because microbial fermentation by the microorganisms hardly proceeds. On the other hand, if it exceeds 1 month, the produced lignan compound may be decomposed, which is uneconomical.
[0021]
The health food as the food or drink according to the embodiment contains the lignan compound, and is orally ingested mainly in the form of beverages, foods, or preparations (tablets, powders, granules, capsules, etc.). It is configured. This health food is produced by adding the lignan compound to health food materials such as fruit juice, milk products such as milk and yogurt, sesame products, and excipients such as lactose and dextrin. Due to the high antioxidant activity of the lignan compound, this health food reduces oxidative stress such as excessive active oxygen in the living body when ingested, and has the antioxidant effect of low density cholesterol (LDL) and liver function. It enhances health, reduces acetaldehyde toxicity, suppresses the growth of breast cancer cells, and improves health functions such as improving immune function.
[0022]
The concentration of the lignan compound contained in the beverage as a health food is preferably 0.0001 to 50% by weight, more preferably 0.01 to 30% by weight, and still more preferably 0.1 to 10% by weight. When the concentration of the lignan compound is less than 0.0001% by weight, the health promoting effect cannot be effectively exerted, and when it exceeds 50% by weight, it is uneconomical. The content of the lignan compound contained in the food product or preparation as a health food is preferably 0.001 to 80% by weight, more preferably 0.01 to 70% by weight, still more preferably 0.1 to 50% by weight. is there. When the content of the lignan compound is less than 0.0001% by weight, the health promoting effect cannot be exhibited effectively, and when it exceeds 50% by weight, it is uneconomical.
[0023]
The intake amount of the lignan compound is preferably 0.01 to 1000 mg, more preferably 0.1 to 700 mg, and still more preferably 1 to 500 mg per day for an adult. If the daily intake of this lignan compound is less than 0.01 mg, the health promoting effect cannot be exhibited effectively, and conversely if it exceeds 1000 mg, it is uneconomical. Furthermore, it is preferable to take this health food several times a day (2 to 3 times or more), especially before and after intense exercise, before and after UV irradiation with sunlight, during stress, before and after smoking, etc. It is good to take when you are easily exposed to stress. In the case of a dwarf, the intake is adjusted mainly depending on the body weight, but half of the adult intake is a standard.
[0024]
The effects exhibited by the above embodiment will be described below.
-The lignan compound of embodiment is a novel substance which has a structure shown by the said Chemical formula 5 or Chemical formula 6. Since all of these lignan compounds have a catechol group having a high antioxidant action, the antioxidant action of low density cholesterol (LDL), the enhancement of liver function, the reduction of acetaldehyde toxicity, and the suppression of breast cancer cell growth It can be used for health foods that exert health promoting effects such as action and immune function improvement.
[0025]
-The lignan compound of embodiment is manufactured by inoculating an Aspergillus microorganism to sesaminol or sesaminol glycoside, and carrying out a microbial fermentation process. Since this lignan compound is not present in sesame seeds, sesame products, and by-products produced during the production of sesame products that contain high amounts of sesaminol or sesaminol glycosides, the microbial fermentation treatment of this embodiment is performed. As a result, mass production can be performed very easily and at low cost, making it easy to obtain. Furthermore, since this lignan compound is produced using the koji mold (Aspergillus spp.) That has been used in the food processing field for a long time, there are few problems in oral intake and the actual production cost is reduced. Is extremely efficient.
[0026]
-Since the food / beverage products (health food) of embodiment contain the said lignan compound, it can exhibit a high health promotion effect by elimination of active oxygen etc. by ingesting in the living body. Furthermore, since the lignan compound has been improved in antioxidant activity by microbiological conversion before being taken into the living body, it exerts an antioxidant action very quickly and efficiently in the living body. be able to. For this reason, since this health food can be expected to improve bioabsorbability and add a new physiological function, the health promotion function in vivo can be further enhanced as a whole.
[0027]
【Example】
Hereinafter, examples embodying the embodiment will be described.
<Example 1: Microbial fermentation treatment of sesaminol glycoside>
(Confirmation of increase in antioxidant capacity by microbial fermentation treatment)
As the fermenting bacteria, four types of strains were used: Aspergillus awamorii (RIB2804), Aspergillus niger (ATCC 38857), Aspergillus shirousami (RIB2503), and Aspergillus saiitoi (IAM2210). These strains were preliminarily cultured in a potato dextrose broth medium to grow the mycelium, and the mycelium was transferred to a liquid medium in which the medium was diluted 5 times, to a final concentration of 0.1%. Sesaminol glycoside (prepared by isolation and purification from sesame meal) was added so that microbial fermentation treatment was performed. Both the above pre-culture and microbial fermentation treatment were performed under aerobic conditions with a shaking speed of 100 rpm under a constant temperature condition of 30 ° C. The culture was carried out for 1 month, and the radical scavenging activity was measured by DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazy) for a sampling solution obtained by sampling a small amount of liquid medium over time and filtering. That is, 2000 μl of DPPH ethanol solution (20 mg / 100 ml), 1000 μl of Tris-HCl buffer and 100 μl of sample solution were mixed, and radical scavenging activity was measured according to a conventional method using HPLC. The results are shown in FIG. From FIG. 1, it was confirmed that all fermenting bacteria can increase the antioxidant ability. In particular, in RIB2503 and IAM2210, a rapid increase in radical scavenging activity was observed around day 10 from the start of the microbial fermentation treatment, and it was confirmed that the increase in antioxidant capacity was rapid and high.
[0028]
(Purification of antioxidants)
A medium supplemented with 0.5% sesaminol glycoside was subjected to microbial fermentation for 8 days with RIB2503 or IAM2210 under the same conditions as above to obtain a fermented product. About the filtrate of the obtained fermented product, LC-8A manufactured by Shimadzu Corporation equipped with a preparative column (manufactured by YMC) was used in the HPLC gradient method (MeOH represents methanol) of the following HPLC condition 1. And fractionated into 4 fractions A to D.
[0029]
HPLC condition 1

Next, DPPH radical scavenging activity was measured for each section after fractionation. Specifically, 2500 μl of DPPH ethanol solution (20 mg / 100 ml), 1000 μl of Tris-HCl buffer and 100 μl of sampling solution were mixed, and radical scavenging activity was measured using HPLC in the same manner as described above. Table 1 shows the radical scavenging activity (%) for each category. Moreover, the result of having analyzed the fermented material using said RIB2503 on the conditions of HPLC conditions 2 below is shown in FIG.
[0030]
HPLC condition 2

[0031]
[Table 1]

From Table 1, strong radical scavenging activity was observed in the B and C classification, particularly in the C classification. Next, the chromatogram peaks were finely separated, and the DPPH radical scavenging activity was measured for each of the fractions divided into 11 (B1 to B11) for the B section and 7 (C1 to C7) for the C section. did. The results are shown in Table 2. Some of the peaks of B1 to B11 and C1 to C7 (Frc-B5, Frc-B9, Frc-C3, Frc-C4, Frc-C7) were entered in the chromatogram shown in FIG.
[0032]
[Table 2]

(Identification of antioxidants)
As a result of HPLC analysis of sesaminol glycoside and sesaminol (prepared by isolation and purification by the present inventors) according to the above-mentioned HPLC condition 2, the peak contained in C2 is contained in sesaminol glycoside, C5 The peak was confirmed to be sesaminol. Next, the structure was determined for each of C3 and C4 sections where strong radical scavenging activity was observed. That is, peaks C3 and C4 were individually separated, isolated and purified under the above HPLC condition 2 with the absorbance at UV 280 nm as an index. Using these preparative samples, the molecular weight was measured under the following LC-MS condition 1. The LC-MS result for peak C3 is shown in FIG. Note that CH ₃ CN represents acetonitrile.
[0033]
LC-MS condition 1

As a result, it was confirmed that the measured molecular weight (M + H ⁺ ) of peak C3 was 359. Since the molecular weight 358 of the antioxidant substance of peak C3 is 12 smaller than the molecular weight 370 of sesaminol, in the catechol body in which one of the two methylenedioxy groups structurally at both ends of sesamin is cleaved to a hydroxyl group, respectively. I was expected. Similar results were obtained for C4.
[0034]
Next, analysis by various NMR ( ¹ H, ¹³ C, HMBC, HMQC) was performed using each sample of the peaks C3 and C4. In this analysis, first, structural features were estimated by comparing with the standard values of sesaminol and the literature of stereoisomers. As a result of ¹ H-NMR, signals derived from the tetrahydrofurfuran ring found in sesaminol were observed in the conversion products C3 and C4. Although the chemical shifts of these signals differed slightly due to the influence of the measurement solvent, the appearance pattern and binding constant were almost the same, suggesting that the tetrafurfuran ring of C3 and C4 is retained in the metabolic process. It was done. However, the signal intensity derived from the methylenedioxy group found in sesaminol and its isomer was halved, and a new hydroxyl signal was observed at 8.78 ppm (solvent: heavy DMSO). This signal was proton exchangeable D ₂ O. Since it was not observed in the treatment, it was considered to be due to the hydroxyl group.
[0035]
Further, by 1D NMR analysis, ¹ H and ¹³ C signals could be assigned as shown in FIGS. C3 is 1) 1,5-position of the ¹ H signals that indicate the same value in 2.87Ppm, 2) appearance pattern of 4,8-position of the ¹ H signal, coupling constants are very similar to sesaminol This strongly suggests that the three-dimensional structure is the same as that of natural sesaminol. Meanwhile, C4 is 1) 1,5-position of the ¹ H signals 3.37Ppm, it showed different values and 2.75 ppm, 2) and ¹ H signals at the 1-position is large downfield shift 3.37Ppm 3) In the natural type, the ^1- H signal at the 8-position that is sterically close to the 2-position benzene ring is greatly shifted to 3.07 ppm and 3.64 ppm, respectively. Together with the correspondence with the literature values of the isomers, it was speculated that it was the same steric structure as the epimeric 2-episesaminol.
[0036]
From the above, the antioxidant substances C3 and C4 have the tetrahydrofurfuran ring of sesaminol and 2-episesaminol, and the methylenedioxy group of the benzene ring having the 2′-position hydroxyl group does not change, and the opposite benzene ring It was concluded that the existing methylenedioxy group has a cleaved catechol structure. That is, it was shown that C3 is natural sesaminol-6-catechol cleaved from the methylenedioxy group of ring A of sesaminol, and C4 is epimeric 2-episesaminol-6-catechol. . Further, referring to the results in Table 2, these sesaminol catechol bodies have significantly higher antioxidant activity than sesaminol, and natural sesaminol catechol bodies are more antioxidant than epi forms. It became clear that the activity was high.
[0037]
(Confirmation of antioxidant conversion rate)
The conversion rate of the antioxidant was determined for each fermented product that had been subjected to microbial fermentation using RIB2503 or IAM2210. That is, first, the amount of sesaminol catechol produced by the above-described microbial fermentation treatment was determined from a chromatogram (FIG. 2 for RIB2503), and then the amount of sesaminol catechol was used as the starting material. The conversion was determined by dividing by the amount of saccharide. As a result, the conversion rate in the microbial fermentation process using RIB2503 was 7.6% (4.6% for the natural type and 3.0% for the epi type), and the conversion rate in the microbial fermentation process using IAM2210 was 7.14. % (Natural type 4.35%, epitype 2.80%). In addition, since the ratio of the natural type and epi type contained in the sesaminol glycoside as the starting material is 1: 1, it is also shown that the conversion efficiency to the natural type is excellent in this microbial fermentation treatment. It was done.
[0038]
In addition, the said embodiment can also be changed and actualized as follows.
-Instead of the microbial fermentation treatment, the lignan compound may be produced by an enzyme treatment using an enzyme produced by an Aspergillus microorganism. Even when configured in this manner, a high antioxidant effect can be exhibited.
[0039]
-You may manufacture a sesaminol catechol body from sesaminol or a sesaminol glycoside by the method of patent document 1 (it makes it react with supercritical water). As a technique to which the present invention is applied, a lignan compound produced by subjecting a sesaminol catechol body to a complete methylation reaction with diazomethane may be contained in a pharmaceutical or quasi drug.
[0040]
Further, the technical idea that can be grasped from the embodiment will be described below.
The lignan compound according to claim 1, which is obtained by subjecting sesaminol or sesaminol glycoside to microbial fermentation using an Aspergillus microorganism.
[0041]
-Prior to the microorganism fermentation treatment, after performing a preculture treatment in which a culture medium containing Aspergillus microorganisms is shake-cultured under aerobic conditions, the medium after the preculture treatment is attached to the fermentation raw material to perform microorganism fermentation The lignan compound according to claim 2, wherein the lignan compound is treated.
[0042]
A method for producing a lignan compound for producing the lignan compound according to claim 1, wherein a fermentation raw material containing at least one selected from sesaminol and sesaminol glycoside is used for microbial fermentation using an Aspergillus microorganism A process for producing a lignan compound. When comprised in this way, the lignan compound which exhibits a high antioxidant effect | action can be manufactured easily.
[0043]
-Cosmetics containing the lignan compound of Claim 1 or Claim 2. A quasi-drug containing the lignan compound according to claim 1 or 2. A pharmaceutical comprising the lignan compound according to claim 1 or 2. When configured as described above, a high antioxidant effect can be used for various purposes. A deterioration inhibitor containing the lignan compound according to claim 1 or 2. When comprised in this way, oxidative degradation of a fragrance | flavor, a pigment | dye, fats and oils, etc. can be prevented easily.
[0044]
【The invention's effect】
As described in detail above, the present invention has the following effects.
According to the lignan compound of the invention described in claims 1 and 2, a high antioxidant action can be exhibited. According to the food / beverage products of invention of Claim 3, a high antioxidant effect | action can be exhibited.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a graph showing the results of confirmation of antioxidant ability by microbial fermentation treatment in the examples. FIG. 2 is a chromatogram obtained by purifying the antioxidant substances in the examples.
FIG. 3 shows the LC-MS analysis result of peak C3 in the example.
FIG. 4 shows the structures of peaks C3 and C4 in Examples and the results of ¹ H-NMR. FIG. 5 shows the results of ¹³ C-NMR analysis of peaks C3 and C4 in Examples.

Claims (3)

A lignan compound having a structure represented by the following chemical formula 1 or chemical formula 2.

The lignan compound according to claim 1, wherein the lignan compound is obtained by subjecting a fermentation raw material containing at least one selected from sesaminol and sesaminol glycosides to microbial fermentation using an Aspergillus microorganism. A food or drink comprising the lignan compound according to claim 1 or 2.

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