JP3967554B2 - Flavonoid compounds and a method of manufacturing the same - Google Patents

Flavonoid compounds and a method of manufacturing the same Download PDF

Info

Publication number
JP3967554B2
JP3967554B2 JP2001073577A JP2001073577A JP3967554B2 JP 3967554 B2 JP3967554 B2 JP 3967554B2 JP 2001073577 A JP2001073577 A JP 2001073577A JP 2001073577 A JP2001073577 A JP 2001073577A JP 3967554 B2 JP3967554 B2 JP 3967554B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
hesperidin
medium
aspergillus saitoi
culture
flavonoid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2001073577A
Other languages
Japanese (ja)
Other versions
JP2002275175A (en
Inventor
義明 三宅
俊彦 大澤
健一郎 湊
Original Assignee
国立大学法人名古屋大学
株式会社ポッカコーポレーション
独立行政法人科学技術振興機構
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 国立大学法人名古屋大学, 株式会社ポッカコーポレーション, 独立行政法人科学技術振興機構 filed Critical 国立大学法人名古屋大学
Priority to JP2001073577A priority Critical patent/JP3967554B2/en
Priority claimed from IL15781102A external-priority patent/IL157811D0/en
Publication of JP2002275175A publication Critical patent/JP2002275175A/en
Application granted granted Critical
Publication of JP3967554B2 publication Critical patent/JP3967554B2/en
Application status is Active legal-status Critical
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Description

【0001】 [0001]
【発明の属する技術分野】 BACKGROUND OF THE INVENTION
この発明は新規なフラボノイド化合物及びその製造方法に関するものである。 This invention relates to a novel flavonoid compound and a manufacturing method thereof.
【0002】 [0002]
【従来の技術】 BACKGROUND OF THE INVENTION
従来より、ヘスペレチンの配糖体であるヘスペリジンは、オレンジやレモン等の柑橘類、特に未熟果の果皮に多く含まれるフラボノイドであり、ビタミンPとして知られている。 Conventionally, hesperidin glycoside of hesperetin, citrus such as orange and lemon, a flavonoid abundant in pericarp particularly unripe, known as vitamin P. このヘスペリジンは、抗アレルギー作用、抗ウィルス作用、毛細血管強化作用等の生理活性を有することが知られており、健康食品等に添加して利用されている。 The hesperidin, antiallergic, antiviral activity, are known to have a physiological activity of the capillary reinforcing action, etc. are utilized in addition to health foods.
【0003】 [0003]
【発明が解決しようとする課題】 [Problems that the Invention is to Solve
天然に多く存在するヘスペリジンの有効利用の一環として、ヘスペリジンを物質変換することにより、その利用範囲のより一層の拡大を見込める可能性が高い。 As part of the effective utilization of hesperidin abundant in nature, by substances convert hesperidin, likely expected to further expand its application range. 特に、前記ヘスペリジンは体内への吸収性があまり高くないことから、物質変換によって栄養的な観点からの価値の向上が期待される。 In particular, the hesperidin since absorption into the body is not very high, improving the value of the nutritional point of view by material conversion is expected.
【0004】 [0004]
この発明は、前記ヘスペリジンのさらなる利用拡大を目指した鋭意研究の結果なされたものである。 This invention has been made result of intensive studies with the aim of further increasing use of the hesperidin. この発明の目的とするところは、ヘスペリジンの利用範囲の拡大を図ることができる新規なフラボノイド化合物及びその製造方法を提供することにある。 It is an object of the present invention is to provide a novel flavonoid compound and a manufacturing method thereof can be enlarged in the reach of hesperidin.
【0005】 [0005]
【課題を解決するための手段】 In order to solve the problems]
上記の目的を達成するために、請求項1に記載の発明のフラボノイド化合物は、下記化2で示される構造を有するものである。 To achieve the above object, flavonoid compounds of the first aspect of the present invention are those having a structure represented by the following Formula 2.
【0006】 [0006]
【化2】 ## STR2 ##
請求項2に記載の発明のフラボノイド化合物は、請求項1に記載の発明において、アスペルギルス・サイトイ(Aspergillus saitoi)を用いて、ヘスペリジンを微生物発酵処理することにより得られることを特徴とするものである。 Flavonoid compounds of the invention of claim 2 is the invention according to claim 1, using Aspergillus saitoi (Aspergillus saitoi), in which the hesperidin characterized in that it is obtained by microbial fermentation treatment .
【0007】 [0007]
請求項3に記載の発明のフラボノイド化合物の製造方法は、請求項1又は請求項2に記載のフラボノイド化合物を製造するフラボノイド化合物の製造方法であって、ヘスペリジンを請求項1に記載のフラボノイド化合物を製造する能力を有するアスペルギルス・サイトイ(Aspergillus saitoi)にて微生物発酵処理することにより、前記ヘスペリジンを微生物変換してフラボノイド化合物を生成させることを特徴とするものである。 Method for producing a flavonoid compound of the invention according to claim 3 is a method for producing a flavonoid compound for producing a flavonoid compound according to claim 1 or claim 2, a flavonoid compound according hesperidin in claim 1 by microbial fermentation treatment at Aspergillus saitoi (Aspergillus saitoi) having the ability to produce, the hesperidin is characterized in that to produce by bioconversion flavonoid compound.
【0008】 [0008]
請求項4に記載の発明のフラボノイド化合物の製造方法は、請求項3に記載の発明において実施され、前記微生物発酵処理は、ヘスペリジンと請求項1に記載のフラボノイド化合物を製造する能力を有するアスペルギルス・サイトイとを含む培地を振盪培養し、 前記アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸にヘスペリジンからヘスペレチンを微生物変換させる菌糸培養工程を行った後、 前記アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸から胞子形成を進行させつつ、前記培地中のヘスペレチンからフラボノイド化合物を微生物変換させる胞子形成工程を行うように構成したことを特徴とするものである。 Method for producing a flavonoid compound of the invention according to claim 4 is implemented in the invention described in claim 3, wherein the microbial fermentation process, Aspergillus having the ability to produce a flavonoid compound according hesperidin and in claim 1 shaking culture medium containing a saitoi, after hesperetin from hesperidin to vegetative mycelium of the Aspergillus saitoi was mycelium culture step of bioconversion, while advancing the sporulation of vegetative mycelia of the Aspergillus saitoi, the medium it is characterized in that configured to perform the sporulation step of bioconversion of flavonoid compounds from hesperetin in.
【0009】 [0009]
なお、前記菌糸培養工程後の胞子形成工程は、そのまま振盪培養しても、静置培養に切り替えてもどちらでもよい。 Incidentally, sporulation process after the mycelia culturing step, be directly shaking culture may be either be switched to static culture. 但し、静置培養する場合には、培地の深さを浅くして培地の体積に対する表面積の割合(比表面積)を大きくすることにより、培地全体を好気的条件に保ち、アスペルギルス・サイトイによる微生物変換効率を高めるように構成するのが好ましい。 However, in the case of static culture, by increasing the ratio of the surface area (specific surface area) to medium volume by reducing the depth of the medium, keeps the entire medium aerobic conditions, the microorganisms by Aspergillus saitoi preferably configured to increase the conversion efficiency.
【0010】 [0010]
【発明の実施の形態】 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
以下、この発明を具体化した実施形態を詳細に説明する。 It will now be described embodying embodiments of the present invention in detail.
実施形態のフラボノイド化合物は、下記化3で示される構造を有している。 Flavonoid compounds embodiment has a structure represented by the following Formula 3.
【0011】 [0011]
【化3】 [Formula 3]
このフラボノイド化合物は、化学式がC 16147で、分子量が約319のフラボノイド化合物(3',5,7,8-tetrahydroxy-4'-methoxyflavanone 又は 2,3-dihydro-5,7,8-trihydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one)である。 The flavonoid compound, the chemical formula C 16 H 14 O 7, molecular weight of about 319 flavonoid compound of (3 ', 5,7,8-tetrahydroxy- 4'-methoxyflavanone or 2,3-dihydro-5,7,8 -trihydroxy-2- a (3-hydroxy-4-methoxyphenyl) -4H-1-benzopyran-4-one). このフラボノイド化合物は、上記化3で示される構造より、ヘスペレチン(hesperetin;3',5,7-trihydroxy-4'-methoxyflavanone;C 16146 )の8位に水酸基を備えた有機化合物、いわゆる8−ヒドロキシヘスペレチン(8-hydroxyhesperetin)である。 The flavonoid compound, than the structure represented by the chemical formula 3, hesperetin (hesperetin; 3 ', 5,7- trihydroxy-4'-methoxyflavanone; C 16 H 14 O 6) an organic compound having a hydroxyl group at the 8-position of, a so-called 8-hydroxy f spare Retin (8-hydroxyhesperetin).
【0012】 [0012]
この8−ヒドロキシヘスペレチンは、メタノール、エタノール及びジメチルスルフォキシド(DMSO)に可溶で、若干溶解性が悪いが水にも可溶である。 The 8-hydroxy F spare Retin are methanol, soluble in ethanol and dimethyl sulfoxide (DMSO), but poor little solubility soluble in water. さらに、前記ヘスペレチンには抗酸化作用がほとんど見られないのに対し、この8−ヒドロキシヘスペレチンはα−トコフェロール(ビタミンE)と同等の極めて高い抗酸化作用を発揮することができる。 Furthermore, the hesperetin while antioxidant is rarely seen, this 8-hydroxy F space Retin can exhibit an extremely high antioxidant activity comparable with α- tocopherol (vitamin E). そして、この高い抗酸化作用を利用して、例えば食品や飲料等に添加して健康増進活性を有する健康食品や健康ドリンク等に利用することができる。 Then, it can be utilized by utilizing the high antioxidant activity, for example food and beverages such as health foods and health drinks such as having a health-promoting activity was added. このとき、8−ヒドロキシヘスペレチンは、生体内で活性酸素を消去して過酸化脂質の生成を抑制し、酸化ストレスに起因する癌、動脈硬化、糖尿病の合併症等の生活習慣病の予防に役立つ。 In this case, the 8-hydroxy f space retinoic erases the active oxygen in the living body to suppress the formation of lipid peroxides, cancer caused by oxidative stress, atherosclerosis, help prevent lifestyle diseases complications such diabetic .
【0013】 [0013]
この8−ヒドロキシヘスペレチンは、ヘスペリジン(hesperidin)をアスペルギルス・サイトイ(Aspergillus saitoi)にて微生物発酵処理することによって得られる。 The 8-hydroxy F spare Retin is obtained by microbial fermentation treatment at hesperidin (hesperidin) Aspergillus saitoi (Aspergillus saitoi). すなわち、この8−ヒドロキシヘスペレチンは、ヘスペレチンとルチノース(L−ラムノシル−D−グルコース)との配糖体であるヘスペリジン(ビタミンP)を含有する培地中でアスペルギルス・サイトイを培養し、そのアスペルギルス・サイトイにヘスペリジンを微生物変換させることにより、その培養上澄み液中に生成される。 That is, the 8-hydroxy F spare Retin were cultured hesperetin and rutinose (L- rhamnosyl -D- glucose) is a glycoside with hesperidin Aspergillus saitoi in medium containing (vitamin P), the Aspergillus saitoi hesperidin by microbial conversion, is generated during the culture supernatants. なお、このときの培養条件としては、アスペルギルス・サイトイの生育及び前記微生物変換を良好に行うために、20〜40℃の培養温度、好気的条件であるのが好ましい。 As the culture conditions in this case, in order to perform good growth and the microbial conversion of Aspergillus saitoi, 20 to 40 ° C. the culture temperature is preferably at aerobic conditions.
【0014】 [0014]
前記培地としては、ポテトデキストロース含有培地やツァペック培地等の糸状菌用培地又はオカラ等の有機物を含有する種々の液体培地が好適に使用される。 As the medium, various liquid media containing potato dextrose-containing medium and Czapek medium fungal medium or organic such as Ocala like are suitably used. さらに、ヘスペリジンから8−ヒドロキシヘスペレチンを微生物変換させる目的以外の発酵を阻害するように、必要最小限の栄養素を含有する最小培地であるのが好ましく、例えばアルコール発酵しないように単糖類及び二糖類が培地中に含まれないようにするのが好ましい。 Furthermore, the 8-hydroxy f space retinoic from hesperidin to inhibit fermentation other than purpose of bioconversion is preferably from minimal medium containing minimum nutrients, monosaccharides and disaccharides not to e.g. alcohol fermentation preferably it does not contain in the medium. また、前記培地は、培養開始時点では、アスペルギルス・サイトイの生育を良好にするために、pH3〜7の範囲内であるのが好ましい。 Moreover, the medium in the culture beginning, in order to improve the growth of Aspergillus saitoi is preferably in the range of pH 3-7.
【0015】 [0015]
さらに、この培養開始時の培地中には、ヘスペリジンの溶解性を高める目的で、低濃度の有機溶媒が含有されるのが好ましい。 Furthermore, in the medium at the time of the start of culture, for the purpose of enhancing the solubility of hesperidin, the low concentration of the organic solvent is contained preferably. 前記有機溶媒としては、メタノール、エタノール、DMSO等が挙げられるが、ヘスペリジンの溶解性を高めることができるため、DMSOが最も好適に使用される。 As the organic solvent, methanol, ethanol, DMSO, and the like, it is possible to increase the solubility of hesperidin, DMSO is most preferably used. なお、この培地中のDMSOの含有量としては、好ましくは0.01〜5容量%、より好ましくは0.01〜1容量%である。 Incidentally, the content of DMSO in the medium, preferably from 0.01 to 5% by volume, more preferably 0.01 to 1% by volume. この培地中のDMSOの含有量が0.01容量%未満の場合には、培地中に充分な量のヘスペリジンを溶解させることができない。 The content of DMSO in the medium in the case of less than 0.01% by volume, can not be dissolved a sufficient amount of hesperidin in the medium. 逆に5容量%を越える場合には、アスペルギルス・サイトイの生育が著しく阻害される。 If exceeding 5% by volume Conversely, growth of Aspergillus saitoi is significantly inhibited.
【0016】 [0016]
一方、培養開始時に培地中に添加されるヘスペリジンの含有量としては、多量の8−ヒドロキシヘスペレチンを効率よく得るために、その溶解限界としての飽和濃度まで含有させるのが好ましい。 On the other hand, the content of hesperidin added to the culture medium at the initiation of the culture, in order to efficiently obtain a large amount of 8-f space retinoic, preferably contained up to the saturation concentration as the solubility limit. なお、前記飽和濃度は、前記DMSO等の有機溶媒の含有量と深く関連しているが、およそ0.3重量%以下である。 Incidentally, the saturated concentration is related deeply with the content of the organic solvent in the DMSO and the like, is approximately 0.3% by weight or less. また、培養開始時に培地中に添加されるアスペルギルス・サイトイの濃度としては、多量の8−ヒドロキシヘスペレチンを短期間で効率よく得るために、2×10 6個/mL(cfu/mL)以上であるのが好ましい。 The concentration of the Aspergillus saitoi to be added to the medium at the initiation of the culture, in order to efficiently obtain in a short period of time a large amount of 8-f space Retin, is 2 × 10 6 cells / mL (cfu / mL) or preference is.
【0017】 [0017]
さらに、このアスペルギルス・サイトイによる微生物変換効率を高めるために、前記培地中でアスペルギルス・サイトイの栄養菌糸を振盪培養する菌糸培養工程を行った後、その栄養菌糸から胞子形成を進行させる胞子形成工程を行うように構成するのが好ましい。 Furthermore, in order to increase the microbial conversion efficiency by the Aspergillus saitoi, after the mycelia culturing step of shake culturing the vegetative mycelia of Aspergillus saitoi in the medium, the spore formation step of advancing the sporulation of the vegetative mycelium preferably configured to perform.
【0018】 [0018]
菌糸培養工程は、ヘスペリジンを含有する培地中でアスペルギルス・サイトイを振盪培養することによって、好気的条件を保ちつつ栄養菌糸による微生物変換を行わせる工程である。 Hyphae culturing step, by shaking culturing Aspergillus saitoi in medium containing hesperidin is a step to perform the bioconversion by vegetative mycelium while maintaining aerobic conditions. この工程において、アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸は、ヘスペリジンを構成するヘスペレチンとルチノースとの結合を切断してヘスペレチンを生成するグリコシダーゼ反応を極めて効率的に行う。 In this step, vegetative mycelia of Aspergillus saitoi is performed very efficiently glycosidase reaction producing hesperetin by cutting the coupling between hesperetin and rutinose constituting hesperidin. 前記振盪培養における振盪速度としては、50〜200rpm/分の範囲内であるのが好ましい。 As the shaking speed in shake culture is preferably in the range of 50~200Rpm / min. この振盪速度が50rpm/分未満の場合には、アスペルギルス・サイトイを含有した培地全体が好気的でないため、菌糸の増殖が充分にできない。 If the shaking rate is less than 50 rpm / min, since the entire medium containing Aspergillus saitoi is not aerobic growth of hyphae can not be sufficiently. 逆に振盪速度が200rpm/分を越える場合には、培地の揺れが激しく、菌糸形成が充分にできない。 When the shaking speed conversely exceeds 200 rpm / minute, shaking of the culture medium is intense, hyphae formation can not be sufficiently.
【0019】 [0019]
なおこのとき、培地中に添加されるヘスペリジンの含有量は、前記溶解限界を超えて添加されても構わない。 At this time, the content of hesperidin added to the culture medium is may be added beyond the solubility limit. このとき、培養開始時点では溶解されずに培養容器の底部に沈澱していたヘスペリジンが振盪による撹拌作用により適宜培地中に溶解されて微生物発酵に利用され得る。 At this time, it may be utilized are dissolved in the appropriate medium microbial fermentation by stirring action by hesperidin had precipitated to the bottom of the culture vessel without being dissolved shaking the culture beginning. さらに、培地中に溶解限界を超えてヘスペリジンを含有させた場合には、培養容器底部のヘスペリジンの沈澱を防ぐ目的で、50rpm/分程度で沈澱が消失するまで振盪培養するように構成するのが好ましく、その結果としてより多くのヘスペレチンを生成させることができる。 Further, when it is contained hesperidin beyond solubility limit in the medium, for the purpose of preventing the precipitation of hesperidin of the culture container bottom, that configured to shake culture at 50 rpm / min extent precipitate disappeared preferably, it is possible to generate more hesperetin as a result.
【0020】 [0020]
胞子形成工程は、培地中に充分な量のヘスペレチンが生成された後に行われ、前記菌糸培養工程後の培地をそのまま培地交換せずに静置培養又は振盪培養することによって、アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸に胞子形成を進行させながら微生物変換を行わせる工程である。 Spore formation step is carried out after a sufficient amount of hesperetin has been generated in the medium by static culture or shaking culture medium after the mycelia culturing step without it medium change, nutrition Aspergillus saitoi a step of performing the bioconversion while advancing the sporulation hyphae. なお、菌糸培養工程から胞子形成工程に移行するタイミングとしては、菌糸培養工程の終了時期に、培地の表面(液面)にアスペルギルス・サイトイの栄養菌糸が密に存在するのが目視にて確認可能となることから、それを指標にして容易に把握することができる。 As the timing of transition to sporulation process hyphae culture step, the end time of the hyphae culturing step, can confirm the vegetative hyphae of Aspergillus saitoi in the medium surface (liquid surface) is present in densely visually since the, it can be easily grasped by it as an index.
【0021】 [0021]
この工程において、アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸は、胞子形成を進行させながら、ヘスペレチンの8位に水酸基を付加させるヒドロキシラーゼ反応を行って8−ヒドロキシヘスペレチンを極めて効率的に生成させる。 In this step, vegetative mycelia of Aspergillus saitoi, while allowed to proceed sporulation is very efficiently generate 8-position by performing the hydroxylase reaction for adding a hydroxyl group to the 8-hydroxy f space retinoic hesperetin. この8−ヒドロキシヘスペレチンの生成反応は、培養容器内における胞子形成過程の中期から後期にかけて最も効率的に行われ、胞子形成が完了した段階における生成効率はさほど高くはない。 Formation reaction of the 8-hydroxy F spare Retin the most is efficiently conducted toward late from mid sporulation process in the culture vessel, the production efficiency in the stage wherein sporulation is completed is not so high. このため、無駄に浪費される時間を減らすために、培養容器の液面全体が胞子で完全に被覆される直前に培養を停止し、生成された8−ヒドロキシヘスペレチンを抽出するとよい。 Therefore, in order to reduce the time that is wasting, may entire liquid surface of the culture vessel to stop the culture just before it is completely covered with spores, and extracts the generated 8-hydroxy F space retinoic.
【0022】 [0022]
また、この胞子形成工程において静置培養を行う場合には、振盪時の物理的刺激による胞子形成の抑制効果を容易に解消することができる。 Further, when the stationary culture in the sporulation process, can be easily eliminated the inhibitory effect of the spore formation by shaking when physical stimuli. なお、この静置培養時には、培地の深さを浅くして培地の体積に対する表面積の割合(比表面積)を大きくすることにより、培地全体を好気的条件に保ち、アスペルギルス・サイトイの活動を活発化させてその微生物変換効率を高めるように構成するのが好ましい。 At the time of this stationary culture, by increasing the ratio (specific surface area) of the surface area to medium volume by reducing the depth of the medium, keeps the entire medium aerobic conditions, vigorous activity of Aspergillus saitoi preferably configured to increase the microbial conversion efficiency by reduction. 一方、胞子形成工程において振盪培養を行う場合には、培地の深さを適度に深くしても好気的条件を保つことが容易であることから、一度の培養操作により多量の8−ヒドロキシヘスペレチンを生成させることが可能となる。 On the other hand, when performing shaking culture in spore formation step, since even moderately depth of the medium is easy to maintain the aerobic conditions, a large amount by a single culture operation 8-hydroxy F space Retin it is possible to generate.
【0023】 [0023]
最後に、上記培養上澄み液又は前記胞子形成工程後の培地から8−ヒドロキシヘスペレチンを抽出して精製する。 Finally, purify by extracting 8-hydroxy f space Retin from the medium after the culture supernatant or the sporulation step. このとき、前記培地をアスペルギルス・サイトイの細胞膜が破壊されない程度に遠心分離(3000rpm程度)して上澄み画分を得、その上澄み画分を疎水性カラムによる逆相液体クロマトグラフィーにより精製するとよい。 At this time, the medium was centrifuged (about 3000 rpm) to the extent that the cell membranes of Aspergillus saitoi is not broken to obtain a supernatant fraction, the supernatant fraction may be purified by reverse-phase liquid chromatography with hydrophobic column. なお、前記遠心分離後の沈澱画分にも比較的多量の8−ヒドロキシヘスペレチンが含まれていることから、その沈澱画分にメタノールやエタノール等の有機溶媒を加えて充分に洗浄しながら抽出した後、その抽出液を逆相液体クロマトグラフィーにて精製するように構成するとよい。 Incidentally, since it contains a relatively large amount of 8-hydroxyquinoline f space retinoic also precipitated fraction after the centrifugation, and extracted with sufficiently washed by adding an organic solvent such as methanol or ethanol in the precipitated fraction after, the extract may be configured to purified by reverse-phase liquid chromatography.
【0024】 [0024]
上記実施形態によって発揮される効果について、以下に記載する。 The effects exerted by the embodiment will be described below.
・ 実施形態のフラボノイド化合物は、上記化3で示される構造を有する8−ヒドロキシヘスペレチンである。 Flavonoids compounds embodiment is 8-hydroxy-f space retinoic having the structure represented by the chemical formula 3. この8−ヒドロキシヘスペレチンは、ヘスペレチンの8位に水酸基が付加された新規な構造を有することから、ヘスペリジンの利用範囲の拡大を図ることが可能である。 The 8-hydroxy F spare Retin, since it has a novel structure in which a hydroxyl group is added to the 8-position of hesperetin, it is possible to expand the reach of hesperidin. さらに、この8−ヒドロキシヘスペレチンは、ヘスペリジン及びヘスペレチンと比べて著しく高い抗酸化作用を発揮することができることから、生体内で活性酸素を消去して過酸化脂質の生成を抑制し、酸化ストレスに起因する癌、動脈硬化、糖尿病の合併症等の生活習慣病の予防に役立てることができる。 Furthermore, the 8-hydroxy F spare Retin is, since it is possible to exhibit a significantly high antioxidant activity as compared with hesperidin and hesperetin, to erase the active oxygen in the living body to suppress the formation of lipid peroxides, resulting from the oxidative stress cancer, arteriosclerosis, can be useful in preventing lifestyle-related diseases complications such diabetic. また、原料として柑橘類に含有されている天然成分であるヘスペリジンを用いるとともに、焼酎等の酒類の醸造に利用されるアスペルギルス・サイトイが用いられていることから、人体への摂取においてもほとんど問題がない。 Further, the use of hesperidin is a natural ingredient contained in citrus as a raw material, since it is Aspergillus saitoi is used to be utilized for brewing liquor shochu, is hardly a problem even in the uptake of the human body .
【0025】 [0025]
・ 実施形態のフラボノイド化合物(8−ヒドロキシヘスペレチン)の製造方法は、ヘスペリジンをアスペルギルス・サイトイにて微生物発酵処理することにより、前記ヘスペリジンを微生物変換して得られるものである。 And manufacturing method of the flavonoid compound of Embodiment (8-hydroxy-f spare Retin), by microbial fermentation treatment hesperidin by Aspergillus saitoi, the hesperidin is obtained by microbial conversion. このため、ヘスペリジンの利用範囲の拡大を図ることができる新規なフラボノイド化合物を極めて容易に製造することができる。 Therefore, it is possible to extremely easily manufacture the novel flavonoid compound that can be enlarged in the reach of hesperidin. さらに、前記微生物発酵処理において、ヘスペリジンとアスペルギルス・サイトイとを含む培地を振盪培養する菌糸培養工程を行った後に胞子形成工程を行うように構成することによって、非常に簡単な作業工程で、8−ヒドロキシヘスペレチンを極めて効率的に製造することが可能となる。 Furthermore, in the microbial fermentation process, by configuring to perform the sporulation process after the mycelia culturing step of shake culturing medium containing hesperidin and Aspergillus saitoi, a very simple working process, 8- it is possible to produce very efficiently hydroxy f space retinoic.
【0026】 [0026]
【実施例】 【Example】
以下、前記実施形態を具体化した実施例及び比較例について説明する。 Hereinafter, the embodiments of the embodying examples and comparative examples will be described.
<ヘスペリジン変換物の製造> <Production of hesperidin conversion product>
ポテトデキストロース−ブロス培地(DIFCO社製)を複数個の三角フラスコ(容積500mL)に100mLずつ分取し、オートクレーブ滅菌(121℃、15分間)を行った。 Potato dextrose - was fractionated by 100mL broth medium (DIFCO Inc.) into a plurality of conical flask (volume 500 mL), autoclaved (121 ° C., 15 minutes) was performed. 冷却した後に、2×10 8個/mL以上の濃度に調製したアスペルギルス・サイトイの胞子懸濁液を1.0mLずつ各フラスコに接種し、30℃の恒温室(大気と同じ成分の好気的条件)内において100rpm/分で振盪培養を行いながら栄養菌糸を育成させた。 After cooling, a spore suspension of 2 × 10 8 cells / mL or more of Aspergillus saitoi prepared in concentration increments 1.0mL was inoculated into each flask, 30 ° C. of the temperature-controlled room (aerobic the same components as the atmospheric the vegetative mycelium was grown while shaking culture at 100rpm / min in the conditions). なお、前記アスペルギルス・サイトイは、(財)応用微生物学研究奨励会(通称IAM)より分譲を受けたアスペルギルス・サイトイ菌株(IAM No.2210)が用いられた。 It is to be noted that the Aspergillus saitoi is, was used Research Foundation (Foundation) Applied Microbiology (commonly known as IAM) than the response to the sale was Aspergillus saitoi strain (IAM No.2210).
【0027】 [0027]
10日間振盪培養を行って栄養菌糸を充分に生育させた後、オートクレーブ滅菌(105℃、5分間)した10重量%のヘスペリジン(SIGMA社製)DMSO希釈液を5mLずつ加え、引続き同好気的条件下で振盪培養を行なって、栄養菌糸からの胞子形成を進行させた。 After sufficiently grown vegetative mycelium performing shaking culture for 10 days, added autoclaved (105 ° C., 5 min) (manufactured by SIGMA Co.) was 10% by weight of hesperidin DMSO dilutions by 5 mL, subsequently club air conditions perform the shaking culture under, it was allowed to proceed for spore formation from vegetative hyphae. なお、このときの胞子形成の様子を経時的にモニタリングしたところ、ヘスペリジンを投入しておよそ1週間経過後から胞子の形成が始まり、3週間後には培地の液面全体で胞子の形成が認められたことが分かった。 Incidentally, it was monitored over time the state of sporulation in this case, the formation of spores begins approximately one week after it was charged hesperidin, formation of spores was observed across the liquid surface of the culture medium after 3 weeks and it was found.
【0028】 [0028]
本実験では、胞子形成が完全に終了する前でヘスペリジン投入後から2週間経過した時点、すなわち胞子形成の中期から後期と思われる時期のサンプルを採取した。 In this experiment, sporulation was completely after the lapse 2 weeks after hesperidin turned before ending, i.e. taken timing of sample suspected of late mid- sporulation. そして、この採取されたサンプルを遠心分離(3000rpm、15分間)して不純物を沈澱除去した後、その上澄み液を分析用高速液体クロマトグラフィー(HPLC)(島津製作所製のLC10A、カラムはYMC社製のA303)にて分析し、フラボノイド組成の変化を調べた。 Then, the collected sample centrifuged (3000 rpm, 15 minutes) after precipitation remove impurities, the supernatant the analytical high performance liquid chromatography (HPLC) (Shimadzu LC10A, column manufactured by YMC Co. analyzed by the A303), we examined the changes in the flavonoid composition. その結果、フラボノイド組成物全体に占めるヘスペリジン変換物のピークの割合はおよそ8.3%であることが分かった。 As a result, it was found that the ratio of the peak of hesperidin conversion product in the total flavonoid composition is approximately 8.3%.
【0029】 [0029]
最後に、前記ヘスペリジン変換物を含有することが確認されたHPLC用サンプルの残りをエバポレーターにて濃縮した後、分取用HPLC(島津製作所製のLC8A、カラムはYMC社製のR353−151A、SH343−5)にて分画し、ヘスペリジン変換物の単離精製を行った。 Finally, after concentration of the remaining HPLC for samples confirmed to contain the hesperidin conversion product by an evaporator, prep HPLC (manufactured by Shimadzu Corporation LC8A, column manufactured by YMC Co. R353-151A, SH343 fractionated at -5) were isolated and purified hesperidin conversion product.
【0030】 [0030]
<構造決定> <Structure determination>
上記<ヘスペリジン変換物の製造>で得られたヘスペリジン変換物の構造決定を行った。 It was subjected to structural determination of the obtained hesperidin conversion product in the above <preparation of hesperidin conversion product>. 1 H NMR及び13 C NMRスペクトルは、内部標準としてDMSO−d6に溶解させたテトラメチルシラン(Tetramethylsilane;TMS)を用いてJEOL JNM−EX−400 NMR装置( 1 H NMRは400MHz、 13 C NMRは100MHz)で分析した。 1 H NMR and 13 C NMR spectra, tetramethylsilane was dissolved in DMSO-d6 as an internal standard; JEOL JNM-EX-400 NMR apparatus (1 H NMR using (tetramethylsilane TMS) is 400 MHz, 13 C NMR is It was analyzed by 100MHz). また、質量スペクトル(FAB-MS)は、JEOL JMS−DX−705Lで測定した。 The mass spectrum (FAB-MS) was measured by JEOL JMS-DX-705L. 結果を表1及び表2に示す。 The results are shown in Tables 1 and 2.
【0031】 [0031]
【表1】 [Table 1]
【0032】 [0032]
【表2】 [Table 2]
その結果、前記ヘスペリジン変換物は、上記化3で示される構造を有する8−ヒドロキシヘスペレチンであることが確認された。 As a result, the hesperidin conversion product is, it was confirmed that the 8-hydroxyquinoline f space retinoic having the structure represented by the chemical formula 3.
【0033】 [0033]
さらに、前記実施形態より把握できる技術的思想について以下に記載する。 Furthermore, described below technical idea understood from the embodiment.
・ 前記微生物発酵処理を0.01〜5容量%のジメチルスルフォキシドを含有する培地中で行うことを特徴とする請求項3又は請求項4に記載のフラボノイド化合物の製造方法。 And manufacturing method of the flavonoid compound according to claim 3 or claim 4, characterized in that the microbial fermentation processes in medium containing 0.01 to 5% by volume of dimethyl sulfoxide. このように構成した場合、アスペルギルス・サイトイの生育阻害を低減させつつ、比較的多量のヘスペリジンを培地中に溶解させて、その微生物変換効率を容易に高めることができる。 In such a configuration, while reducing the growth inhibition of Aspergillus saitoi, relatively to dissolve a large amount of hesperidin in the medium, it is possible to enhance the microbial conversion efficiency easily.
【0034】 [0034]
・ さらに前記微生物発酵処理後の培養上澄み液を、疎水性カラムを用いた逆相液体クロマトグラフィーにより精製することを特徴とする請求項3又は請求項4に記載のフラボノイド化合物の製造方法。 · Furthermore the culture supernatant after the microbial fermentation processes, the production method of the flavonoid compound according to claim 3 or claim 4, characterized in that purified by reverse-phase liquid chromatography using a hydrophobic column. このように構成した場合、極めて容易にフラボノイド化合物を単離することができる。 In such a configuration, it is possible to isolate very easily flavonoid compound.
【0035】 [0035]
【発明の効果】 【Effect of the invention】
以上詳述したように、この発明によれば、次のような効果を奏する。 As described above in detail, according to the present invention, the following effects.
請求項1及び請求項2に記載の発明のフラボノイド化合物によれば、ヘスペリジンの利用範囲の拡大を図ることができる。 According to flavonoid compounds of the invention according to claims 1 and 2, it is possible to increase the reach of hesperidin.
【0036】 [0036]
請求項3及び請求項4に記載の発明のフラボノイド化合物の製造方法によれば、ヘスペリジンの利用範囲の拡大を図ることができるフラボノイド化合物を容易に製造することができる。 According to the manufacturing method of the flavonoid compounds of the invention according to claim 3 and claim 4, it is possible to easily produce a flavonoid compound that can be enlarged in the reach of hesperidin.

Claims (4)

  1. 下記化1で示される構造を有するフラボノイド化合物。 Flavonoid compound having a structure represented by Formula 1.
  2. アスペルギルス・サイトイ(Aspergillus saitoi)を用いて、ヘスペリジンを微生物発酵処理することにより得られることを特徴とする請求項1に記載のフラボノイド化合物。 Using Aspergillus saitoi (Aspergillus saitoi), hesperidin flavonoid compound according to claim 1, characterized in that it is obtained by microbial fermentation treatment.
  3. 請求項1又は請求項2に記載のフラボノイド化合物を製造するフラボノイド化合物の製造方法であって、 A method according to claim 1 or flavonoid compounds to produce a flavonoid compound according to claim 2,
    ヘスペリジンを請求項1に記載のフラボノイド化合物を製造する能力を有するアスペルギルス・サイトイ(Aspergillus saitoi)にて微生物発酵処理することにより、前記ヘスペリジンを微生物変換してフラボノイド化合物を生成させることを特徴とするフラボノイド化合物の製造方法。 By microbial fermentation treatment at Aspergillus saitoi (Aspergillus saitoi) having the ability to produce a flavonoid compound according hesperidin to claim 1, flavonoid, characterized in that to produce a flavonoid compound the hesperidin by microbial conversion process for the preparation of a compound.
  4. 前記微生物発酵処理は、 The microbial fermentation process,
    ヘスペリジンと請求項1に記載のフラボノイド化合物を製造する能力を有するアスペルギルス・サイトイとを含む培地を振盪培養し、 前記アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸にヘスペリジンからヘスペレチンを微生物変換させる菌糸培養工程を行った後、 Shaking culture medium containing the Aspergillus saitoi with the ability to produce a flavonoid compound according hesperidin and in claim 1, after the hesperetin from hesperidin to vegetative mycelium of the Aspergillus saitoi was mycelium culture step of bioconversion ,
    前記アスペルギルス・サイトイの栄養菌糸から胞子形成を進行させつつ、前記培地中のヘスペレチンからフラボノイド化合物を微生物変換させる胞子形成工程を行うように構成したことを特徴とする請求項3に記載のフラボノイド化合物の製造方法。 While advancing sporulation of vegetative mycelia of the Aspergillus saitoi, flavonoid compound according to claim 3 in which the flavonoid compound from the hesperetin in the medium, characterized by being configured to perform a sporulation step of bioconversion Production method.
JP2001073577A 2001-03-15 2001-03-15 Flavonoid compounds and a method of manufacturing the same Active JP3967554B2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2001073577A JP3967554B2 (en) 2001-03-15 2001-03-15 Flavonoid compounds and a method of manufacturing the same

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2001073577A JP3967554B2 (en) 2001-03-15 2001-03-15 Flavonoid compounds and a method of manufacturing the same
IL15781102A IL157811D0 (en) 2001-03-15 2002-03-14 Flavonoid compound and process for producing the same
EP02705208A EP1369489B1 (en) 2001-03-15 2002-03-14 Flavonoid compound and process for producing the same
US10/471,438 US7138429B2 (en) 2001-03-15 2002-03-14 Flavonoid compound and process for producing the same
DE60214142T DE60214142T2 (en) 2001-03-15 2002-03-14 Flavonoid and manufacturing processes for
CN 02806186 CN100381436C (en) 2001-03-15 2002-03-14 Flavonoid compound and process for producing the same
ES02705208T ES2271219T3 (en) 2001-03-15 2002-03-14 Flavonoid compound and method of producing said compound.
PCT/JP2002/002445 WO2002074971A1 (en) 2001-03-15 2002-03-14 Flavonoid compound and process for producing the same
IL157811A IL157811A (en) 2001-03-15 2003-09-08 8-hydroxyhesperetin and a microbial process for its preparation
US11/462,437 US7582675B2 (en) 2001-03-15 2006-08-04 Flavonoid compound and process for producing the same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2002275175A JP2002275175A (en) 2002-09-25
JP3967554B2 true JP3967554B2 (en) 2007-08-29

Family

ID=18930981

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001073577A Active JP3967554B2 (en) 2001-03-15 2001-03-15 Flavonoid compounds and a method of manufacturing the same

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP3967554B2 (en)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2271219T3 (en) 2001-03-15 2007-04-16 Japan Science And Technology Corporation Flavonoid compound and method of producing said compound.
US7776314B2 (en) 2002-06-17 2010-08-17 Grunenthal Gmbh Abuse-proofed dosage system
US20070048228A1 (en) 2003-08-06 2007-03-01 Elisabeth Arkenau-Maric Abuse-proofed dosage form
DE10336400A1 (en) 2003-08-06 2005-03-24 Grünenthal GmbH Abuse-proofed dosage form
DE102004032051A1 (en) 2004-07-01 2006-01-19 Grünenthal GmbH A process for preparing a secured against misuse, solid dosage form
DE102005005446A1 (en) 2005-02-04 2006-08-10 Grünenthal GmbH Unbreakable dosage forms with delayed release
TWI454288B (en) 2008-01-25 2014-10-01 Gruenenthal Chemie Pharmaceutical dosage form
CA2723438C (en) 2008-05-09 2016-10-11 Gruenenthal Gmbh Process for the preparation of an intermediate powder formulation and a final solid dosage form under usage of a spray congealing step
PE10672012A1 (en) 2009-07-22 2012-09-05 Gruenenthal Chemie Form of controlled release dosage extruded by hot melt
EP2456424B1 (en) 2009-07-22 2013-08-28 Grünenthal GmbH Oxidation-stabilized tamper-resistant dosage form
JP5933553B2 (en) 2010-09-02 2016-06-15 グリュネンタール・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング Abuse-resistant dosage form comprising an anionic polymer
KR20130097202A (en) 2010-09-02 2013-09-02 그뤼넨탈 게엠베하 Tamper resistant dosage form comprising inorganic salt
HUE034711T2 (en) 2011-07-29 2018-02-28 Gruenenthal Gmbh Tamper-resistant tablet providing immediate drug release
US20130225697A1 (en) 2012-02-28 2013-08-29 Grunenthal Gmbh Tamper-resistant dosage form comprising pharmacologically active compound and anionic polymer
DK2838512T3 (en) 2012-04-18 2018-11-19 Gruenenthal Gmbh Tamper-proof and dose dumping secured pharmaceutical dosage form
US10064945B2 (en) 2012-05-11 2018-09-04 Gruenenthal Gmbh Thermoformed, tamper-resistant pharmaceutical dosage form containing zinc
JP6445537B2 (en) 2013-05-29 2018-12-26 グリュネンタール・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング Modified anti containing one or more particles (tamper-resistant) dosage forms
CA2913209A1 (en) 2013-05-29 2014-12-04 Grunenthal Gmbh Tamper resistant dosage form with bimodal release profile
JP2017518980A (en) 2014-05-12 2017-07-13 グリュネンタール・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング Containing tapentadol, modified prevent immediate release capsule formulation
MX2016015417A (en) 2014-05-26 2017-02-22 Grünenthal GmbH Multiparticles safeguarded against ethanolic dose-dumping.
KR20170139158A (en) 2015-04-24 2017-12-18 그뤼넨탈 게엠베하 Immediately released and prevent the tamper-resistant dosage form extraction solvent

Also Published As

Publication number Publication date
JP2002275175A (en) 2002-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE60114151T2 (en) Extraction of flavonoids
CA2618271C (en) Novel cyclohexenone compounds from antrodia camphorata and application thereof
US6146668A (en) Preparation of isoflavones from legumes
FI70925B (en) Foerfarande Foer framstaellning of 3-hydroxy-ML-236B derivater
DE3051175C2 (en)
WO1997037549A1 (en) Substance containing health-promoting component and process for the production thereof
KR20060101205A (en) Fresh tea leaf powder and processed product, extract, oil and aroma obtained from fresh tea leaf powder
BG62852B1 (en) Method for lovastatin isolation
US7507423B2 (en) Extraction of flavonoids
JPH11507204A (en) Reduction of the ketone group
US5858738A (en) Ermophilane sesquiterpenoids as HIV intergrase inhibitors
Miyake et al. New potent antioxidative hydroxyflavanones produced with Aspergillus saitoi from flavanone glycoside in citrus fruit
Otoguro et al. Arisugacins C and D, novel acetylcholinesterase inhibitors and their related novel metabolites produced by Penicillium sp. FO-4259-11
Weignerová et al. Preparatory production of quercetin-3-β-D-glucopyranoside using alkali-tolerant thermostable α-L-rhamnosidase from Aspergillus terreus
CA1335367C (en) Ks-506 compounds and process for the production thereof
AU617391B2 (en) Manumycin derivatives, a process for the preparation thereof, and the use thereof
Wang et al. Influences of processing and NaCl supplementation on isoflavone contents and composition during douchi manufacturing
CA2288321C (en) Preparation of isoflavones from legumes
CN1212320C (en) Resin process of extracting proanthocyanidin from grape seed
JP4268896B2 (en) Flavanone compounds, its preparation and antioxidants
KR101415995B1 (en) Method for preparing green tea saponin, 21-O-angeloyltheasapogenol E3
CA1081636A (en) Method for the cultivation of basidiomycetes belonging to the genus coriolus of polyporaceae
JP2003507021A (en) Manufacturing method of lycopene
EP1306444A1 (en) Method for the production of beta-carotene
JP4030251B2 (en) Monascus containing preparation and isoflavone aglycone of isoflavone aglycone

Legal Events

Date Code Title Description
A711 Notification of change in applicant

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712

Effective date: 20031031

RD03 Notification of appointment of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423

Effective date: 20040129

A711 Notification of change in applicant

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712

Effective date: 20040520

RD03 Notification of appointment of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423

Effective date: 20050310

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20050324

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20051006

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20070206

A521 Written amendment

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20070409

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20070501

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20070531

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100608

Year of fee payment: 3

S111 Request for change of ownership or part of ownership

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313115

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100608

Year of fee payment: 3

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100608

Year of fee payment: 3

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130608

Year of fee payment: 6

S111 Request for change of ownership or part of ownership

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313115

S533 Written request for registration of change of name

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

S111 Request for change of ownership or part of ownership

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313117

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350