【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、高血圧の発症・進展の予防等を目的とする医薬品、健康食品等として使用される血圧降下剤及びその製造方法、並びにプロポリス組成物及び食品製剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、虚血性心疾患、脳血管障害等の成人病は生命に重大な脅威を与えている。それらの増悪因子には高血圧症があり、高血圧症の治療及びその予防が大きな課題となっている。この高血圧症において、進展の予防及び発症の抑制を目的とする物質は、既に医薬品として利用されている。例えば、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）により生じるアンジオテンシンＩＩによって血圧が上昇することを抑制するために、ＡＣＥ阻害物質が抽出又は化学合成され利用されている。また、血圧の高めの人を対象とした特定保健用食品が開発されている。
【０００３】
一方、プロポリスは蜂ヤニともいわれ、セイヨウミツバチの巣の巣壁を構成する樹脂状又は蝋状の物質であり、このプロポリスはポリフェノール等の多種多様な成分を含有している。プロポリスはヨーロッパにおいて医薬品又は健康食品の素材として古くから用いられてきたが、近年では日本においても健康食品や化粧品の素材として多くの製品に使用されるようになった。プロポリスの主要な生理活性としては、抗酸化作用及び免疫賦活作用が知られており、健康食品の素材としての効能を裏付けている。
【０００４】
また、ポリフェノールはプロポリス以外に茶葉、ぶどう果実等に含有している。最近では、ポリフェノールが血圧降下作用を奏することが報告されている（例えば、非特許文献１参照）。
【０００５】
【非特許文献１】
Ｋｒｏｍｈｏｕｔ Ｄ，Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｈｅａｌｔｈ Ａｇｉｎｇ，２００１；５（３），ｐ．１４４−１４９
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
ポリフェノールは１００以上の種類があり、構造的にも類似している。また、一部のポリフェノールは安定性が悪く、溶液中では容易に分解されるという欠点がある。従って、ポリフェノールの中から特定の構造を有する成分が単離及び同定された例は少なく、ポリフェノールの特定成分を高血圧の発症・進展の予防等を目的に利用されることがなかった。
【０００７】
本発明は、上記のような従来技術に存在する問題点に着目してなされたものである。その目的とするところは、優れた血圧降下作用を発揮させることができる血圧降下剤及びその製造方法、並びにプロポリス組成物及び食品製剤を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
上記の目的を達成するために請求項１に記載の発明の血圧降下剤では、下記一般式（１）で示される化合物から選ばれる少なくとも一種を有効成分として含有するものである。
【０００９】
【化４】
（Ｘは、水素、アルコキシル基、水酸基、カフェオイロキシ基又はｐ−クマロキシ基である。ただし、アルコキシル基の炭素数は１〜３である。）
請求項２に記載の発明の血圧降下剤の製造方法では、請求項１に記載の血圧降下剤の製造方法であって、ポリフェノール含有素材からポリフェノールを抽出溶媒によって抽出する抽出工程と、ポリフェノールの成分を分離する分離工程と、紫外部領域の励起光に対する蛍光を指標として分取する分取工程とによって、前記一般式（１）で示される化合物から選ばれる少なくとも一種を採取することを特徴とする。
【００１０】
請求項３に記載の発明のプロポリス組成物では、プロポリス抽出物を含有するプロポリス組成物であって、前記プロポリス抽出物に加えて、下記一般式（１）で示される化合物から選ばれる少なくとも一種を配合したものである。
【００１１】
【化５】
（Ｘは、水素、アルコキシル基、水酸基、カフェオイロキシ基又はｐ−クマロキシ基である。ただし、アルコキシル基の炭素数は１〜３である。）
請求項４に記載の発明の食品製剤では、下記一般式（１）で示される化合物から選ばれる少なくとも一種を有効成分として含有するものである。
【００１２】
【化６】
（Ｘは、水素、アルコキシル基、水酸基、カフェオイロキシ基又はｐ−クマロキシ基である。ただし、アルコキシル基の炭素数は１〜３である。）
【００１３】
【発明の実施の形態】
（第１の実施形態）
以下、本発明を具体化した第１の実施形態の血圧降下剤について詳細に説明する。
【００１４】
本実施形態の血圧降下剤は、下記一般式（１）で示される化合物から選ばれる少なくとも一種を有効成分として含有するものである。
【００１５】
【化７】
（Ｘは、水素、アルコキシル基、水酸基、カフェオイロキシ基又はｐ−クマロキシ基である。ただし、アルコキシル基の炭素数は１〜３である。）
一般式（１）で示される化合物はフラボン類に属し、基本骨格は５，７−ジヒドロキシ−４’−メトキシ−フラボンである。この基本骨格の３位に上記置換基Ｘが導入されている化合物である。この一般式（１）で示される化合物は、天然界、特に植物界に存在するポリフェノール含有素材から得ることが可能である。
【００１６】
一般式（１）で示される化合物のうち、置換基Ｘが水素の場合、５，７−ジヒドロキシ−４’−メトキシ−フラボン（イソサクラネチン）である。また、置換基Ｘが炭素数１のアルコキシル基（メトキシ基）の場合、５，７−ジヒドロキシ−３，４’−ジメトキシ−フラボンである。さらに、置換基Ｘが炭素数２のアルコキシル基（エトキシ基）の場合、５，７−ジヒドロキシ−３−エトキシ−４’−メトキシ−フラボン、置換基Ｘが炭素数３のアルコキシル基（プロポキシ基）の場合、５，７−ジヒドロキシ−３−プロポキシ−４’−メトキシ−フラボンである。
【００１７】
置換基Ｘが水酸基の場合、３，５，７−トリヒドロキシ−４’−メトキシ−フラボン（ジハイドロケンフェライド）である。このジハイドロケンフェライドは、置換基Ｘがアルコキシル基、カフェオイロキシ基又はｐ−クマロキシ基の化合物にエステラーゼが作用して、置換基Ｘが脱エステル化されることにより、生成される。
【００１８】
置換基Ｘがカフェオイロキシ基（３，４−ジヒドロキシ−シンナモイロキシ基）の場合、５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボンである。置換基Ｘがｐ−クマロキシ基（ｐ−ヒドロキシ−シンナモイロキシ基）の場合、５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボンである。カフェオイロキシ基及びｐ−クマロキシ基は、それぞれカフェ酸及びｐ−クマル酸に由来する置換基であって、シス体及びトランス体が存在する。これらのカフェ酸及びｐ−クマル酸は、ポリフェノール含有素材に含まれる有機酸であって、抗炎症作用を有することが知られている。カフェ酸及びｐ−クマル酸は、ポリフェノール含有素材を有する植物において、同一の生合成経路によって生成される。一方、それらの生合成経路と類似した生合成経路によってフラボン類が生成されることから、カフェ酸及びｐ−クマル酸を由来とするカフェオイロキシ基及びｐ−クマロキシ基がエステル結合したフラボン類が得られると考えられている。
【００１９】
一般式（１）で示される化合物は、有効成分として単独で用いてもよく、複数の化合物を組み合わせて用いてもよい。複数の化合物を組み合わせて、共存させた場合、各化合物の抗酸化作用が高まり、有効成分としての安定性が向上するため、血圧降下作用を高めることができる。
【００２０】
一般式（１）で示される化合物の中でも、血圧降下作用により優れることから、置換基Ｘが水素又は炭素数が１〜３のアルコキシル基である化合物が好ましい。また、一般式（１）で示される化合物の中でも、血圧上昇の要因となるカルシウムが血管平滑筋細胞内へ取り込まれることを抑制することができる点から、イソサクラネチン及びジハイドロケンフェライドから選ばれる少なくとも一種を用いることが好ましい。さらに、一般式（１）で示される化合物の中でも、抗酸化作用に優れる点から少なくともジハイドロケンフェライドを用いることが好ましい。加えて、カフェ酸及びｐ−クマル酸に由来する抗炎症作用を有する点から、５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボン及び５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボンから選ばれる少なくとも一種を用いることが好ましい。また、５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボン及び５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボンがそれぞれ有するカフェオイロキシ基及びｐ−クマロキシ基は、構造的に安定である点から、トランス体であることが好ましい。
【００２１】
一般式（１）で示される化合物が得られるポリフェノール含有素材としては、プロポリス、赤ぶどう抽出物、赤ぶどう果皮抽出物、赤ぶどう葉、白ぶどう葉、赤ぶどう果実、白ぶどう果実、白ぶどう果皮、ぶどう種子、イチョウ葉、フランス西海岸松、大麦若葉、小麦若葉、稲若葉、大豆若葉、ブルーベリー果実、果皮とその種子、シソ葉、バラ葉、バラ花、ヤーコンとその葉、キクイモとその葉、ムラサキイモとその葉、キク科植物、ハーブ類（エキナセア、レモンバーム、ウコン、グァバ、レモングラス、ラベンダー等）、茶葉（緑茶、紅茶、ウーロン茶等）等が挙げられる。プロポリスの原塊は、ヨーロッパ産、ブラジル等の南米産、中国、日本等のアジア産、北米産、アフリカ産、オーストラリア等のオセアニア産等が挙げられる。
【００２２】
血圧降下剤中における一般式（１）で示される化合物の含有量は、好ましくは１０〜９０質量％、より好ましくは２０〜８０質量％、さらに好ましくは４０〜６０質量％である。この含有量が、１０質量％未満である場合、血圧降下作用が十分に得られないおそれがある。一方、９０質量％を超えると、有効成分の安定性が保持されないおそれがある。
【００２３】
この血圧降下剤には、安定剤としてプロポリス抽出物を含有させることが好ましい。プロポリス抽出物は、その強い抗酸化作用によって、種々の物質を安定に保つ性質がある。従って、安定剤としてプロポリス抽出物を含有させることにより、一般式（１）で示される化合物の酸化反応が抑制され、その化合物の安定性を向上させることができる。よって、血圧降下作用をさらに発揮させることができる。
【００２４】
プロポリス抽出物は、プロポリス中の成分を抽出用溶媒によって抽出したプロポリスの溶媒抽出物、その成分を炭酸ガスによって抽出したプロポリス超臨界抽出物等が挙げられる。プロポリスの抽出用溶媒としては、水、親水性溶媒、親油性溶媒等が単独又は混合されて使用される。親水性溶媒としては、水、低級アルコール（メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等）等が挙げられる。親油性溶媒としては、アセトン、酢酸エチル、ベンゼン、クロロホルム等が挙げられる。これらの抽出用溶媒の中でも、抽出される物質が一般式（１）で示される化合物の安定性を向上させる作用に優れることから、抽出用溶媒としてエタノールを用いることが好ましい。
【００２５】
一般式（１）で示される化合物に対するプロポリス抽出物の配合量は、一般式（１）で示される化合物の１質量部に対し、好ましくは０．０１〜１０質量部、より好ましくは０．０３〜５質量部、さらに好ましくは０．１〜３質量部である。この配合量が０．０１質量部未満であると、安定化作用が十分に得られないおそれがある。一方、１０質量部を超えて配合しても、安定化作用が向上しにくく、不経済である。なお、プロポリス抽出物の配合量は、抽出用溶媒で抽出した場合、残留する抽出用溶媒を差し引いた量を示す。
【００２６】
この血圧降下剤には、その他の成分として結合剤、賦形剤、膨化剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤等を含有させることができる。
この血圧降下剤は、医薬品及び医薬部外品における経口剤、並びに医薬品における注射剤として投与することができる。経口剤としての剤型は、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤等が挙げられる。注射剤としての剤型は、液剤、粉末剤及び凍結乾燥剤が挙げられ、粉末剤及び凍結乾燥剤は使用時に溶媒に溶解される。
【００２７】
次に、血圧降下剤の製造方法について説明する。この製造方法は、抽出工程と分離工程と分取工程とを備えている。抽出工程は、ポリフェノール含有素材と抽出用溶媒とを混合し、抽出用溶媒にポリフェノールを抽出する工程である。分離工程は、抽出されたポリフェノール抽出物を分離用担体に供するとともに分離用溶媒によりポリフェノールを分離する工程である。分取工程は、紫外部領域の励起光に対する蛍光を指標として、一般式（１）で示される化合物を分取する工程である。
【００２８】
抽出工程で使用されるポリフェノール含有素材は、上記のものが挙げられる。ポリフェノール含有素材の中でも、ポリフェノールの含有量が高く、一般式（１）で示される化合物が収率よく得られることからプロポリス、赤ぶどう抽出物及び大麦若葉から選ばれる少なくとも一種が好ましい。ポリフェノール含有素材は、乾燥状態又は湿潤状態のいずれであってもよい。また、ポリフェノール含有素材は、一般式（１）で示される化合物の収率（抽出率）を向上させることができることから、粉末又は破砕物にすることが好ましい。ポリフェノール含有素材を粉末又は破砕物にするには、粉砕機、石臼等の粉砕装置、包丁、はさみ等の粉砕器具、手揉等を利用することができる。
【００２９】
抽出操作は、容器中でポリフェノール含有素材及び抽出用溶媒を混合することよって混合液とし、所定温度で所定時間静置することによって行われる。その容器としては、抽出される一般式（１）で示す化合物の光による分解を抑制することから、褐色容器等の遮光容器であることが好ましい。ポリフェノールの抽出用溶媒としては、親水性溶媒、親油性溶媒等が単独又は混合されて使用される。親水性溶媒としては、水、低級アルコール（メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等）等が挙げられる。親油性溶媒としては、アセトン、酢酸エチル、ベンゼン、クロロホルム等が挙げられる。これらの抽出用溶媒の中でも、食用として利用できる点から水又はエタノールが好ましい。
【００３０】
抽出用溶媒の量は、ポリフェノール含有素材の質量に対して、好ましくは１〜５０倍量、より好ましくは１〜２０倍量である。この量が１倍量未満及び５０倍量を超える場合、抽出率が低下し、製造コストが高まるおそれがある。この抽出用溶媒の量は、ポリフェノール含有素材が湿潤状態にある場合、内在する水分量を加味して配合される。また、抽出温度は１〜６０℃が好ましい。この温度が１℃未満であると、十分に抽出できないおそれがある。一方、６０℃を超えると、一般式（１）で示される化合物の安定性が損なわれるおそれがある。特に、抽出用溶媒として水を用いた場合２０〜６０℃が好ましく、アルコールを用いた場合１〜４０℃が好ましい。抽出時間は、良好な抽出率が得られることから、好ましくは１〜７２時間、より好ましくは３〜４８時間である。
【００３１】
続いて、この混合液を固液分離することにより、抽出用溶媒と上記（１）で示す化合物とを含有するポリフェノール抽出液が得られる。その固液分離には、自然濾過、吸引濾過、遠心分離等を適用することができる。自然濾過及び吸引濾過に用いる濾材としては、紙、珪藻土等が挙げられる。遠心分離には、通常の遠心分離機が使用することが可能である。この固液分離は、抽出率を向上させることができることから、濾過と遠心分離とを組み合わせることが好ましい。さらに、抽出率を向上させることができることから、濾過によって得られる残渣は、抽出用溶媒によって再抽出することが好ましく、この再抽出は２〜５回繰り返すことがさらに好ましい。
【００３２】
次に、このポリフェノール抽出液は、必要に応じて、濃縮又は乾燥することにより、ポリフェノール濃縮液又は固体状のポリフェノール抽出物にすることができる。この濃縮には減圧蒸留装置等が用いられ、乾燥には真空凍結乾燥機等が用いられる。
【００３３】
続いて、液状又は固体状のポリフェノール抽出物は、分離工程に供される。この分離工程は、一般式（１）で示す化合物を分離用担体によって分離する工程である。この分離工程では、まずポリフェノール抽出物を分離用溶媒に溶解させる。この分離用溶媒は、分離用担体を膨潤させるとともに移動層となるものであって、具体例としては上記の抽出用溶媒として記載のものが挙げられる。これらの分離用溶媒の中でも、食用として利用できる点からエタノールが好ましい。
【００３４】
分離用担体の材質としては、多孔性の多糖類、酸化ケイ素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン等が挙げられる。
分離用担体の種類としては逆相担体、イオン交換担体、アフィニティ担体、分配性担体、分子篩用担体、吸着性担体等が挙げられる。逆相担体は、その表面が疎水性化合物でコーティングされたもの等が挙げられ、疎水性化合物の疎水結合によって、疎水性の高い物質の分離に利用することができる。イオン交換担体としては、その表面がイオン性の物質でコーティングされたもの等が挙げられ、具体例としてはＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４（共に、ロームアンドハース社製）等が挙げられる。イオン交換担体の中でも、陽イオン物質でコーティングされたものは、陰イオン性物質の分離に適し、陰イオン物質でコーティングされたものは、陽イオン性物質の分離に適している。アフェニティ担体は、抗原抗体反応等の特異的な結合を利用して分離を行うものを示し、例えば抗体がコーティングされたものは、その抗原となる物質のみを分離することが可能である。分配性担体は、分離する物質と分離用溶媒との間の分配定数の差を利用して分離を行うものを示し、例えばシリカゲル等が挙げられる。分子篩用担体は、分子の大きさの差異を利用して分離を行うものを示し、例えばセファデックス（登録商標）ＬＨ−２０（アマシャムファルマシア製）等が挙げられる。吸着性担体は、分離する物質の吸着性を利用して分離を行うものを示し、例えばダイアイオン（登録商標）（三菱化学（株）製）等が挙げられる。
【００３５】
これらの分離用担体のうち、芳香族化合物の分離能が高く、一般式（１）で示される化合物の分離に適することから、逆相担体、イオン交換担体、分配性担体、分子篩用担体及び吸着性担体から選ばれる少なくとも一種を使用することが好ましい。また、ポリフェノール含有素材中には、疎水性を示すとともに分配係数の差異が大きい物質が多いことから、逆相担体及び分配性担体を用いることがより好ましい。
【００３６】
分離用溶媒としてエタノール等の有機溶媒を使用する場合には、有機溶媒に対して耐性を有する分離用担体を用いることが好ましい。このような分離用担体としては、吸着性担体であるダイアイオン、イオン交換担体であるＸＡＤ−２及びＸＡＤ−４、分子篩用担体であるセファデックスＬＨ−２０、分配用担体であるシリカゲル（メルク社製）、イオン交換担体であるＩＲＡ−４１０（ロームアンドハース社製）、逆相担体であるＤＭ１０２０Ｔ（富士シリシア化学（株）製）等が挙げられる。セファデックスＬＨ−２０を用いる場合、溶媒の留去が行い易い点から、分離用溶媒としてはクロロホルム、メタノール、酢酸又はこれらの混合液が好ましい。また、ダイアイオンを用いる場合、吸着性を変化させることができることから、分離用溶媒としては低級アルコール、又は水と低級アルコールとの混合液が好ましい。
【００３７】
分離の温度（分離用担体が充填されたカラムの温度）は、好ましくは４〜３０℃、より好ましくは１０〜２５℃である。この温度が４℃未満であると、カラムの操作性が悪化するおそれがある。一方、３０℃を超えると、一般式（１）で示される化合物の安定性が損なわれるおそれがある。
【００３８】
また、分離工程では、収率を向上させる点から、カラムによる分離操作を複数回繰り返すことが好ましい。また、この分離操作は、同一又は異なる分離用担体を用いてもよく、同一又は異なる分離用溶媒を用いてもよい。
【００３９】
分取工程では、分離された溶液に紫外線ランプ等の紫外線発光手段から発光される紫外部領域の励起光を照射し、その励起光に対する一般式（１）で示される化合物特有の蛍光を指標として分取する工程である。紫外線発光手段の光源としては、水銀ランプ、キセノンランプ、ブラックライト、発光ダイオード等を利用することができる。紫外部領域の励起光に対して、例えば、ジハイドロケンフェライドは緑黄色の蛍光を発し、イソサクラネチンは橙黄色の蛍光を発するため、これらの蛍光を指標として分取する。
【００４０】
分離工程及び分取工程は、それらの工程を簡便にすることができることから、低速クロマトグラムシステム、精製用クロマトグラムシステム、膜分離クロマトグラムシステム等のシステム化された装置を用いることが好ましい。また、製剤化を容易にするために、得られた一般式（１）で示される化合物は乾燥されることが好ましい。この乾燥には、減圧蒸留装置、真空乾燥機等を用いることができる。この乾燥温度は、好ましくは２０〜６０℃、より好ましくは２５〜５０℃、さらに好ましくは３０〜４０℃である。この温度が２０℃未満であると、乾燥時間が長くなるおそれがある。一方、６０℃を超えると、一般式（１）で示される化合物の安定性を維持することができないおそれがある。
【００４１】
血圧降下剤は、得られた一般式（１）で示される化合物から選ばれる少なくとも一種を有効成分として、常法に従って製剤することにより得ることができる。さて、この血圧降下剤が経口剤又は注射剤として投与されると、一般式（１）で示される化合物がアンジオテンシン変換酵素に結合することにより、アンジオテンシン変換酵素の作用を阻害し、アンジオテンシンＩＩの生成が抑制される。従って、アンジオテンシンＩＩによる血圧上昇を抑制することができる。
【００４２】
以上詳述した第１の実施形態によれば、次のような効果が発揮される。
・ 第１の実施形態の血圧降下剤は、一般式（１）で示される化合物を有効成分として含有している。この場合、優れた血圧降下作用を発揮させることができ、高血圧症の発症を予防することができるとともに高血圧症の進展を抑制することができる。
【００４３】
・ 第１の実施形態の血圧降下剤の製造方法によれば、ポリフェノール含有素材からポリフェノールを抽出溶媒によって抽出する抽出工程と、ポリフェノールの成分を分離する分離工程と、紫外部領域の励起光に対する蛍光を指標として分取する分取工程とを備えている。この製造方法によると、優れた血圧降下作用を発揮させることができる血圧降下剤を提供することができる。また、有効成分である一般式（１）で示される化合物を収率よく得ることができるため、血圧降下剤を収率よく得ることができる。さらに、紫外部領域の励起光に対する蛍光を指標として分取することにより、ポリフェノール含有素材から一般式（１）で示される化合物を容易に得ることができ、血圧降下剤を容易に製造することができる。
【００４４】
・ 第１の実施形態によれば、ポリフェノール含有素材を主原料として優れた血圧降下作用を発揮させることができる血圧降下剤を得ることができる。
（第２の実施形態）
以下、本発明を具体化した第２の実施形態のプロポリス組成物について、第１の実施形態の血圧降下剤と異なる点を中心に説明する。
【００４５】
本実施形態のプロポリス組成物は、プロポリスから抽出されたプロポリス抽出物を含有するものである。このプロポリス組成物には、プロポリス抽出物に加えて、第１の実施形態における一般式（１）で示される化合物から選ばれる少なくとも一種が配合されている。プロポリス抽出物及び一般式（１）で示される化合物は、第１の実施形態に記載のプロポリス抽出物及び一般式（１）で示される化合物と同じものが使用される。このプロポリス組成物は、健康食品、健康食品の原料、医薬品及び医薬部外品の原料等として利用される。
【００４６】
一般式（１）で示される化合物は、プロポリス組成物に血圧降下作用を付与するために配合される。プロポリス組成物に対する一般式（１）で示される化合物の配合量は、好ましくは０．０１〜２質量％、より好ましくは０．０３〜０．１２質量％、さらに好ましくは０．０５〜０．０７質量％である。この配合量が０．０１質量％未満の場合、血圧降下作用が十分に発揮されないおそれがある。一方、２質量％を超えると、一般式（１）で示される化合物の保存安定性が低下するおそれがある。
【００４７】
プロポリス抽出物は、その抗酸化作用によって一般式（１）で示される化合物の保存安定性を向上させることができる。プロポリス組成物中におけるプロポリス抽出物の含有量は、好ましくは５０〜９９．９質量％、より好ましくは７０〜９９．７質量％、さらに好ましくは８０〜９９．３質量％である。この含有量が５０質量％未満であると、このプロポリス組成物を健康食品、その原料等として利用する際、取扱い量が増大し、取扱い性が悪化するおそれがある。
【００４８】
プロポリス抽出物に対する一般式（１）で示される化合物の配合量は、プロポリス抽出物１００質量部に対し、好ましくは０．０１〜４質量部、より好ましくは０．１〜０．２４質量部、さらに好ましくは１〜０．１４質量部である。この配合量が０．０１質量部未満であると、血圧降下作用が十分に発揮されないおそれがある。一方、４質量部を超えると、プロポリス抽出物による安定化作用が十分に得られず、一般式（１）で示される化合物の安定性が保持されないおそれがある。
【００４９】
このプロポリス組成物には、その他の成分として第１の実施形態に記載のその他の成分を配合することが可能である。
このプロポリス組成物は、プロポリス抽出物、一般式（１）で示される化合物等を攪拌し、混和することによって製造することができる。攪拌温度及び攪拌時間は、好ましくは１〜３０℃、０．１〜２４時間、より好ましくは同温度で１〜６時間である。得られた混和物には、必要に応じて濃縮・乾燥操作を施してもよい。このプロポリス組成物は、液体状又は固体状とすることが可能である。
【００５０】
さて、このプロポリス組成物、それから得られる食品製剤等を摂取することにより、プロポリス抽出物の抗炎症・鎮痛作用を得ることができる。さらに、一般式（１）で示される化合物がアンジオテンシン変換酵素に結合することにより、アンジオテンシン変換酵素の作用を阻害し、アンジオテンシンＩＩによる血圧上昇を抑制することができる。
【００５１】
以上詳述した第２の実施形態によれば、次のような効果が発揮される。
・ 第２の実施形態のプロポリス組成物は、プロポリス抽出物に加えて、一般式（１）で示される化合物から選ばれる少なくとも一種が配合されている。このように構成した場合、プロポリス抽出物が有する抗炎症・鎮痛作用等の多くの作用に加えて、一般式（１）で示される化合物の配合によって、優れた血圧降下作用を発揮させることができる。
【００５２】
・ 第２の実施形態のプロポリス組成物によれば、プロポリス抽出物の抗酸化作用によって、一般式（１）で示される化合物の保存安定性を向上させることができる。従って、製造後から健康食品等として使用されるまで、一般式（１）で示される化合物の血圧降下作用を十分に維持することができ、より優れた血圧降下作用を発揮させることができる。
【００５３】
・ ポリフェノール含有素材としてプロポリスを使用した場合、プロポリス抽出物及び一般式（１）で示される化合物の両方を同じ原料から得ることができる。従って、品質管理が容易であり、高品質のプロポリス組成物を得ることができる。
（第３の実施形態）
以下、本発明を具体化した第３の実施形態の食品製剤について、第１の実施形態の血圧降下剤と異なる点を中心に説明する。
【００５４】
本実施形態の食品製剤は、第１の実施形態に記載の一般式（１）で示される化合物から選ばれる少なくとも一種を有効成分として含有するものである。食品製剤中における一般式（１）で示される化合物の含有量は、好ましくは０．１〜３０質量％、より好ましくは０．３〜２０質量％、さらに好ましくは０．５〜１５質量％である。この含有量が０．１質量％未満であると、血圧降下作用が十分に発揮されないおそれがある。一方、３０質量％を超えて配合すると、食品製剤としての形態を維持することができないおそれがある。
【００５５】
この食品製剤には、一般式（１）で示される化合物の安定性を向上させることができることから、第１の実施形態に記載のプロポリス抽出物を含有させることが好ましい。
【００５６】
この食品製剤には、その他の成分として、基材、賦形剤、添加剤、副素材、増量剤等を適宜添加することができる。この食品製剤の形態は粉末状、錠剤状、液状（ドリンク剤等）、カプセル状等が挙げられ、さらに具体的には、飴、せんべい、クッキー、各種飲料等の形態を採用することができる。
【００５７】
この食品製剤は、１日数回に分けて経口摂取される。一日の摂取量は、好ましくは０．１〜１０ｇ、より好ましくは０．３〜５ｇ、さらに好ましくは０．５〜４ｇである。この摂取量が０．１ｇ未満であると、有効成分の必要量を摂取しにくくなり、十分な血圧降下作用が期待できなくなるおそれがある。一方、１０ｇを超えると、取扱い性が悪化し、コストが高くなるおそれがある。
【００５８】
第３の実施形態の食品製剤によれば、一般式（１）で示される化合物が有効成分として含有されることによって、優れた血圧降下作用を発揮させることができる。
【００５９】
【実施例】
次に、製造例、実施例及び比較例を挙げて前記実施形態をさらに具体的に説明する。
（製造例１Ａ、抽出工程及びプロポリス抽出物の製造）
ポリフェノール含有素材としてのブラジル産プロポリス原塊３００ｇを粉砕機（（株）石崎電機製作所製、こなどん）で粉砕することにより、プロポリス粉砕物を得た。このプロポリス粉砕物に、抽出用溶媒として１００容量％のエタノールを１．５リットル加え、２０℃で２４時間攪拌することにより、ポリフェノールを抽出した。次に、プロポリス粉砕物を含有する抽出液を濾紙（アドバンテック東洋（株）製、Ｎｏ．２）で濾過し、プロポリス粉砕物残渣を除去することにより、ポリフェノール抽出物としてのポリフェノール抽出液１．２２ｋｇ（固形分８．３質量％）を得た。なお、このポリフェノール抽出液は、プロポリス粉砕物を原料としているため、プロポリス抽出物であるプロポリスのエタノール抽出液としても使用することができる。
（製造例１Ｂ、分離工程及び分取工程）
製造例１Ａで得られたポリフェノール抽出液をカラム（セファデックス（登録商標）ＬＨ−２０を充填）に供し、分離用溶媒として１００容量％のエタノールを用いて分離した。さらに、この分離用溶媒を自然落下させるとともに、紫外線照射装置を用いて紫外部領域の励起光に対して蛍光を発する部分を分取した。カラム容積に対して１０倍量の分離用溶媒で分離された画分を得た。この画分を減圧濃縮装置に供し、３９℃で濃縮した。
【００６０】
この濃縮液をさらにシリカゲルカラムに供し、分離を行った。分離用溶媒には、クロロホルムとメタノールとの混合溶液（容量比９５：５）を用い、分離の流速は１．０ｍＬ／分とした。紫外線照射装置を用いて、紫外部領域の励起光に対して蛍光を発する部分を分取した。分取された溶液を減圧濃縮装置に供し、３９℃で濃縮した後、真空乾燥機を用いて４０℃で乾燥させることにより、一般式（１）で示される化合物の混合物を得た。
（製造例１Ｃ、分取工程）
製造例１Ｂで得られた混合物を分離用溶媒に溶解し、上記のシリカゲルカラムによる分離操作を３回繰り返すことにより、一般式（１）で示される化合物をさらに分取した。これにより、イソサクラネチン（抽出率０．５質量％）、ジハイドロケンフェライド（抽出率０．８質量％）、５，７−ジヒドロキシ−３，４’−ジメトキシ−フラボン（抽出率０．２質量％）、５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボン（抽出率０．２質量％）及び５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボン（抽出率０．１質量％）を得た。なお、抽出率は原料であるポリフェノール含有素材に対する割合である。
（製造例２Ａ、抽出工程）
製造例１Ａと同様にポリフェノール抽出液を得た。
（製造例２Ｂ、分離工程及び分取工程）
製造例２Ａで得られたポリフェノール抽出液をカラム（ダイアイオン（登録商標）を充填）に供し、分離用溶媒として１００容量％のエタノールを用いて分離した。さらに、この分離用溶媒を自然落下させるとともに、紫外線照射装置を用いて紫外部領域の励起光に対して蛍光を発する部分を分取した。カラム容積に対して１５倍量の分離用溶媒で分離された画分を得た。この画分を減圧濃縮装置に供し、３９℃で濃縮した。
【００６１】
この濃縮液をさらにシリカゲルカラムに供し、分離を行った。分離用溶媒には、クロロホルムとメタノールとの混合溶液（容量比６５：３５及び９５：５）を用い、分離の流速は１．０ｍＬ／分とした。紫外線照射装置を用いて、紫外部領域の励起光に対して蛍光を発する部分を分取した。分取された溶液を減圧濃縮装置に供し、３９℃で濃縮した後、真空乾燥機を用いて４０℃で乾燥させることにより、一般式（１）で示される化合物の混合物を得た。
（製造例２Ｃ、分取工程）
製造例２Ｂで得られた混合物を分離用溶媒に溶解し、上記のシリカゲルカラムによる分離操作を３回繰り返すことにより、一般式（１）で示される化合物をさらに分取した。これにより、イソサクラネチン（抽出率０．７質量％）、ジハイドロケンフェライド（抽出率０．５質量％）、５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボン（抽出率０．２質量％）、５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボン（抽出率０．２質量％）及び３，５，６，７−テトラヒドロキシ−４’−メトキシ−フラボン（抽出率０．７質量％）を得た。
（製造例３Ａ、ポリフェノール抽出物の製造）
ポリフェノール含有素材としての赤ぶどう抽出物１００ｇを粉砕機で粉砕した後、抽出用溶媒として１００容量％のエタノールを１リットル加え、２０℃で２４時間攪拌することにより、ポリフェノールを抽出した。次に、赤ぶどう抽出物の粉砕物を含む抽出液を濾紙（アドバンテック東洋（株）製、Ｎｏ．２）で濾過し、赤ぶどう抽出物の粉砕物を除去することにより、ポリフェノール抽出液０．７８ｋｇ（固形分６．７質量％）を得た。
（製造例３Ｂ、分離工程及び分取工程）
製造例３Ａで得られたポリフェノール抽出液を製造例１Ｂと同様にカラム（セファデックス（登録商標）ＬＨ−２０を充填）操作を行い、カラム容積に対して１１倍量の分離用溶媒で分離された画分を得た。この画分を減圧濃縮装置に供し、３７℃で濃縮した。
【００６２】
この濃縮液を製造例１Ｂと同様にシリカゲルカラムによる分離・分取操作を行った。分取された溶液を減圧濃縮装置に供し、３７℃で濃縮した後、真空乾燥機を用いて４０℃で乾燥させることにより、一般式（１）で示される化合物の混合物を得た。
（製造例３Ｃ、分取工程）
製造例３Ｂで得られた混合物を製造例１Ｃと同様にシリカゲルカラムによる分離操作を３回繰り返し、一般式（１）で示される化合物をさらに分取した。これにより、イソサクラネチン（抽出率０．７質量％）、ジハイドロケンフェライド（抽出率０．４質量％）、５，７−ジヒドロキシ−３，４’−ジメトキシ−フラボン（抽出率０．２質量％）、５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボン（抽出率０．２質量％）及び５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボン（抽出率０．２質量％）を得た。
（製造例４Ａ、ポリフェノール抽出物の製造）
ポリフェノール含有素材としての大麦若葉１００ｇを粉砕機で粉砕した後、抽出用溶媒として１００容量％のエタノールを１リットル加え、２０℃で２４時間攪拌することにより、ポリフェノールを抽出した。次に、大麦若葉の粉砕物を含む抽出液を濾紙（アドバンテック東洋（株）製、Ｎｏ．２）で濾過し、大麦若葉の粉砕物を除去することにより、ポリフェノール抽出液０．８１ｋｇ（固形分６．２質量％）を得た。
（製造例４Ｂ、分離工程及び分取工程）
製造例４Ａで得られたポリフェノール抽出液を製造例１Ｂと同様にカラム（セファデックス（登録商標）ＬＨ−２０を充填）操作を行い、カラム容積に対して１０倍量の分離用溶媒で分離された画分を得た。この画分を減圧濃縮装置に供し、３９℃で濃縮した。
【００６３】
この濃縮液を製造例１−２と同様にシリカゲルカラムによる分離・分取操作を行った。分取された溶液を減圧濃縮装置に供し、３９℃で濃縮した後、真空乾燥機を用いて４０℃で乾燥させることにより、一般式（１）で示される化合物の混合物を得た。
（製造例４Ｃ、分取工程）
製造例４Ｂで得られた混合物を製造例１Ａと同様にシリカゲルカラムによる分離操作を３回繰り返し、一般式（１）で示される化合物をさらに分取した。これにより、イソサクラネチン（抽出率０．９質量％）、ジハイドロケンフェライド（抽出率０．６質量％）、５，７−ジヒドロキシ−３，４’−ジメトキシ−フラボン（抽出率０．３質量％）、５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボン（抽出率０．３質量％）及び５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボン（抽出率０．１質量％）を得た。
＜化合物の同定＞
製造例１Ｃ、製造例３Ｃ及び製造例４Ｃで得られた各物質を高速液体クロマトグラフ装置（カラムとしてカプセルパック（登録商標）ＡＧ１２０、（株）資生堂製を装着）によって分析した。まず、固形分相当量で０．１質量％の試料を高速液体クロマトグラフ装置に供し、分析用溶媒として２０〜１００容量％のアセトニトリル水溶液を用いてグラジエント溶出させた。このときの２８０ｎｍの吸光度をモニターした。この分析の結果、それぞれの物質は単一ピークを呈した。
【００６４】
また、各物質をそれぞれ核磁気共鳴測定装置（ＮＭＲ、バリアン社製、３００ＭＨｚ）によって、同定した。その結果、下記一般式（２）に示すイソサクラネチン及び下記一般式（３）で示すジハイドロケンフェライドが同定された。
【００６５】
【化８】
【００６６】
【化９】
なお、イソサクラネチンのケミカルシフト値は、δ２．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０，３．０Ｈｚ，Ｈａ−３）、３．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０，１３．０Ｈｚ，Ｈｂ−３）、３．７７（３Ｈ，ｓ，Ｏ−Ｍｅ）、５．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−８，Ｊ＝１３．０，３．０Ｈｚ）、５．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，Ｈ−６）、６．９８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−３’５ ’）及び７．４４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５，Ｈ−３’，５’）であった。
【００６７】
また、ジハイドロケンフェライドのケミカルシフト値は、δ３．７８（３Ｈ，ｓ，６−ＯＭｅ）、４．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，Ｈ−３）、５．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，Ｈ−２）、５．８６（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−６），５．９１（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−８）及び６．９７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−３’，５’）７．４４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−２’，６’）であった。
【００６８】
同様に、下記一般式（４）に示す５，７−ジヒドロキシ−３，４’−メトキシ−フラボン、下記一般式（５）に示す５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボン及び下記一般式（６）に示す５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボンが同定された。なお、カフェオイロキシ基及びｐ−クマロキシ基はいずれもトランス体であった。
【００６９】
【化１０】
【００７０】
【化１１】
【００７１】
【化１２】
（実施例１〜５）
製造例１Ｃで得られたイソサクラネチン、ジハイドロケンフェライド、５，７−ジヒドロキシ−３，４’−ジメトキシ−フラボン、５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボン及び５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボンを順に、実施例１〜５の血圧降下剤とした。
（実施例６）
製造例１Ｃで得られたイソサクラネチン及びジハイドロケンフェライドを併用して、投与するものを実施例６の血圧降下剤とした。
（実施例７）
製造例１Ｂで得られた一般式（１）で示される化合物の混合物を実施例７の血圧降下剤とした。なお、この混合物の組成は、イソサクラネチン３５質量％、ジハイドロケンフェライド３２質量％、５，７−ジヒドロキシ−３，４’−ジメトキシ−フラボン１１質量％、５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボン９質量％及び５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボン１３質量％である。
【００７２】
（実施例８）
製造例２Ｂで得られた一般式（１）で示される化合物の混合物を実施例８の血圧降下剤とした。なお、この混合物の組成は、イソサクラネチン４１質量％、ジハイドロケンフェライド２７質量％、５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボン１４質量％、５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボン１３質量％及び３，５，６，７−テトラヒドロキシ−４’−メトキシ−フラボン５質量％である。
（実施例９）
製造例１Ａで得られたプロポリスのエタノール抽出液１５０．３ｍｇに、製造例１Ｃで得られたイソサクラネチン０．５２ｍｇを添加した。次いで、２５℃で３時間、攪拌機を用いて混和することにより、プロポリス組成物１５１ｍｇを得た。
（実施例１０）
製造例１Ａで得られたプロポリスのエタノール抽出液１５０．３ｍｇに、製造例１Ｃで得られたジハイドロケンフェライド０．７ｍｇを添加した。次いで、２５℃で３時間、攪拌機を用いて混和することにより、プロポリス組成物１５１ｍｇを得た。
（実施例１１）
製造例１Ａで得られたプロポリスのエタノール抽出液３００．５ｍｇに、製造例１Ｃで得られた５，７−ジヒドロキシ−３，４’−ジメトキシ−フラボン１．５ｍｇを添加した。次いで、２５℃で３時間、攪拌機を用いて混和し、プロポリス組成物３０２ｍｇを得た。
【００７３】
（実施例１２）
製造例１Ａで得られたプロポリスのエタノール抽出液６２０ｍｇに、製造例１Ｃで得られた５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボン２ｍｇを添加した。次いで、２５℃で３時間、攪拌機を用いて混和し、プロポリス組成物６２２ｍｇを得た。
（実施例１３）
製造例１Ａで得られたプロポリスのエタノール抽出液１４４５ｍｇに、製造例２Ｃで得られた５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボン５ｍｇを添加した。次いで、２５℃で３時間、攪拌機を用いて混和し、プロポリス組成物１４５０ｍｇを得た。
（実施例１４）
製造例１Ａで得られたプロポリスのエタノール抽出液４９０ｍｇに、製造例１Ｂで得られた一般式（１）で示される化合物の混合物１０ｍｇを添加した。次いで、２５℃で３時間、攪拌機を用いて混和し、プロポリス組成物５００ｍｇを得た。
＜血圧降下剤及びプロポリス組成物の血圧降下作用に関する実験＞
星野実験動物（株）より購入した自然発症高血圧ラット（ＳＨＲラット、１４〜２０週齢）を１週間の予備飼育後、異常の認められない動物を実験に供した。このＳＨＲラットは、ヒトにおける本態性高血圧症のモデルであり、医薬品開発及び食品開発にあたり、高血圧症の実験モデルとして汎用され、その実験成績は豊富である。１検体当たり、３匹のＳＨＲラットを用い、検体の投与量は１０ｍｇ／ｋｇ／日とした。溶媒対照として、蒸留水を用いるとともに、陽性対照物質としてＶＹペプチド（シグマ社製、イワシペプチド由来）を用いた。このＶＹペプチドは、ＡＣＥ阻害作用を有し、特定保健用食品として利用されているものである。投与は、経口用胃ゾンデを用いて経口に午前と午後に分けて２８日間投与した。投与２８日目の収縮期血圧について、血圧測定装置（ソフトロン社製、ＢＰ−８０）を用い、非観血的に測定した。３匹の測定結果から平均値と標準偏差を算出した。また、溶媒対照に対する有意差検定をｔ検定により実施し、危険率５％未満を有意差ありと判定した。実施例１〜８の血圧降下剤及び実施例９〜１４のプロポリス組成物における血圧降下作用の実験結果を表１に示す。表中の＊印は、有意差ありと判定したものである。
【００７４】
【表１】
表１の結果から明らかなように、実施例１〜８の血圧降下剤及び実施例９〜１４のプロポリス組成物では、いずれも収縮期血圧の降下が確認された。また、実施例１及び実施例６〜１４では、陽性対照のＶＹペプチドよりも血圧降下作用に優れることがわかる。実施例１、実施例２及び実施例６の結果から、イソサクラネチン及びジハイドロケンフェライトから選ばれる少なくとも一種を用いると、より優れた血圧降下作用が発揮されることがわかる。
＜安定性の試験＞
実施例１の血圧降下剤を蒸留水及びエタノールに溶解した溶液を４０℃で３日間保存した。一方、実施例９及び実施例１４のプロポリス組成物をエタノールに溶解した溶液を４０℃で３日間保存した。溶解から１日後、２日後及び３日後の各溶液について、それらの安定性を高速液体クロマトグラフ装置（カラムとしてカプセルパック（登録商標）ＡＧ１２０、（株）資生堂製を装着）によって分析した。まず、０．１質量％固形分相当量の各溶液を高速液体クロマトグラフ装置に供し、分析用溶媒として２０〜１００容量％のアセトニトリル水溶液を用いてグラジエント溶出させた。このときの２８０ｎｍの吸光度をモニターすることにより、保存後に残留するイソサクラネチンを測定した。蒸留水又はエタノールに溶解した際のイソサクラネチンの含有量を１００％として、保存後に残留するイソサクラネチンの含有率（％）を算出した。なお、プロポリス組成物の場合、プロポリス抽出物中に含まれるイソサクラネチンの含有量を予め測定し、その値を差し引くことにより、プロポリス組成物に配合されたイソサクラネチンの安定性のみを評価した。実施例１の血圧降下剤、並びに実施例９及び実施例１４のプロポリス組成物について、イソサクラネチンの安定性を評価した結果を表２に示す。
【００７５】
【表２】
同様に、実施例２の血圧降下剤、並びに実施例１０及び実施例１４のプロポリス組成物について、ジハイドロケンフェライドの安定性を評価した結果を表３に示す。
【００７６】
【表３】
同様に、実施例３の血圧降下剤、並びに実施例１１及び実施例１４のプロポリス組成物について、５，７−ジヒドロキシ−３，４’−メトキシ−フラボンの安定性を評価した結果を表４に示す。
【００７７】
【表４】
同様に、実施例４の血圧降下剤、並びに実施例１２及び実施例１４のプロポリス組成物について、５，７−ジヒドロキシ−３−カフェオイロキシ−４’−メトキシ−フラボンの安定性を評価した結果を表５に示す。
【００７８】
【表５】
同様に、実施例５の血圧降下剤、並びに実施例１３及び実施例１４のプロポリス組成物について、５，７−ジヒドロキシ−３−ｐ−クマロキシ−４’−メトキシ−フラボンの安定性を評価した結果を表６に示す。
【００７９】
【表６】
表２〜表６の結果から明らかなように、実施例１〜５では、一般式（１）で示される化合物について、保存後の含有率が３日後には４５％以下となった。これに対して、実施例９〜１４では、一般式（１）で示される化合物について、保存後の含有率が３日後でも、９４％以上の高い値を示した。従って、一般式（１）で示される化合物は、プロポリス抽出物によって高い安定性が付与されることがわかり、一般式（１）で示される化合物による血圧降下作用を十分に発揮させることができることがわかる。
（実施例１５）
製造例１Ｃで得られたイソサクラネチン０．２ｇ、異性化糖３ｇ、食用セルロース１．８ｇ、アスコルビン酸０．０１ｇ及び食用香料０．１ｇを混合し、常法に従って粉末化することにより、顆粒状の食品製剤を得た。
＜食品製剤の血圧降下作用に関する試験＞
血圧が高めの方（収縮期血圧１４０〜１５０ｍｍＨｇ）６例を対象に、実施例１５の食品製剤３ｇを１日１回、７日間摂取後の血圧を測定した。その結果、６例中５例の方が正常血圧領域（収縮期血圧１２０ｍｍＨｇ以下）の血圧を示し、血圧の高めの人に適する食品製剤であることがわかった。なお、食品製剤の摂取期間及び摂取後１週間までの間、何らかの異常を感じる自覚症状はなく、その間の臨床検査値にも異常は認められなかった。
【００８０】
なお、前記実施形態を次のように変更して構成することもできる。
・ 前記第１の実施形態では、一般式（１）で示される化合物はポリフェノール含有素材から採取している。この他に、一般式（１）で示される化合物は、化学的に合成することにより、製造してもよい。
【００８１】
・ 前記第１の実施形態における血圧降下剤にカルシウムキレート剤を添加してもよい。この場合、血圧降下剤に不純物として含有するカルシウムを捕捉することにより、カルシウムを起因とする血圧上昇を抑制することができ、血圧降下作用をさらに向上させることができる。
【００８２】
・ 前記第１の実施形態におけるポリフェノール含有素材を糖分解酵素によって前処理を施してもよい。この前処理を行うことにより、一般式（１）で示される化合物の抽出量が増大し、その化合物の収率を向上させることができる。
【００８３】
次に、上記実施形態及び別例から把握できる技術的思想について以下に記載する。
（１） 前記一般式（１）で示される化合物におけるＸが水素又は炭素数１〜３のアルコキシル基である請求項１に記載の血圧降下剤。このように構成した場合、より優れた血圧降下作用を発揮させることができる。
【００８４】
（２） 前記一般式（１）で示される化合物が、イソサクラネチン及びジハイドロケンフェライドから選ばれる少なくとも一種である請求項１に記載の血圧降下剤。このように構成した場合、より優れた血圧降下作用を発揮させることができる。
【００８５】
（３） 前記ポリフェノール含有素材はプロポリス、赤ぶどう抽出物及び大麦若葉から選ばれる少なくとも一種である請求項２に記載の血圧降下剤の製造方法。この製造方法の場合、血圧降下剤を収率よく製造することができる。
【００８６】
（４） 前記ポリフェノール含有素材は糖分解酵素で前処理されたものである請求項２又は上記（３）に記載の血圧降下剤の製造方法。
（５） 上記一般式（１）で示される化合物を有効成分として含有し、動脈硬化抑制作用を有する医薬品製剤。この場合、動脈硬化抑制作用を有する医薬品製剤を提供することができる。
【００８７】
【発明の効果】
この発明は、以上のように構成されているため、次のような効果を奏する。
請求項１に記載の血圧降下剤、請求項３に記載のプロポリス組成物及び請求項４に記載の食品製剤によれば、優れた血圧降下作用を発揮させることができる。
【００８８】
請求項２に記載の血圧降下剤の製造方法によれば、優れた血圧降下作用を発揮させることができる血圧降下剤を提供することができる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
TECHNICAL FIELD The present invention relates to a medicine for the purpose of preventing the onset and progression of hypertension, a blood pressure lowering agent used as a health food and the like, a production method thereof, a propolis composition and a food preparation.
[0002]
[Prior art]
Conventionally, adult diseases such as ischemic heart disease and cerebrovascular disorder pose a serious threat to life. One of these exacerbation factors is hypertension, and treatment and prevention of hypertension have become a major issue. In this hypertension, substances aimed at preventing progression and suppressing onset have already been used as pharmaceuticals. For example, in order to suppress an increase in blood pressure due to angiotensin II generated by angiotensin converting enzyme (ACE), an ACE inhibitor is extracted or chemically synthesized and used. In addition, foods for specified health use for people with high blood pressure have been developed.
[0003]
On the other hand, propolis is also referred to as a bee, and is a resinous or waxy substance that forms the nest wall of a honeybee's nest, and this propolis contains various components such as polyphenols. Propolis has long been used as a raw material for pharmaceuticals or health foods in Europe, but in recent years it has been used in many products in Japan as a raw material for health foods and cosmetics. As the main physiological activity of propolis, an antioxidant action and an immunostimulatory action are known, which supports the efficacy as a health food material.
[0004]
In addition to propolis, polyphenols are contained in tea leaves, grape fruits and the like. Recently, it has been reported that polyphenols exert a blood pressure lowering effect (see, for example, Non-Patent Document 1).
[0005]
[Non-Patent Document 1]
Kromhout D, J. et al. Nutr. Health Aging, 2001; 5 (3), p. 144-149
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
There are over 100 types of polyphenols, and they are structurally similar. Also, some polyphenols have poor stability and are easily decomposed in solution. Therefore, there have been few examples in which a component having a specific structure is isolated and identified from polyphenols, and the specific component of polyphenols has not been used for the purpose of preventing the onset and progression of hypertension.
[0007]
The present invention has been made paying attention to the problems existing in the prior art as described above. The object is to provide an antihypertensive agent capable of exhibiting an excellent antihypertensive action, a method for producing the antihypertensive agent, a propolis composition, and a food preparation.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
In order to achieve the above object, the antihypertensive agent of the invention described in claim 1 contains at least one selected from compounds represented by the following general formula (1) as an active ingredient.
[0009]
[Formula 4]
The method for producing an antihypertensive agent according to claim 2 is the method for producing an antihypertensive agent according to claim 1, wherein an extraction step of extracting polyphenol from a polyphenol-containing material with an extraction solvent, and a component of polyphenol And at least one selected from the compounds represented by the general formula (1) is collected by a separation step of separating the compound and a fractionation step of sorting using fluorescence with respect to excitation light in the ultraviolet region as an index. .
[0010]
The propolis composition of the invention according to claim 3 is a propolis composition containing a propolis extract, and in addition to the propolis extract, at least one selected from compounds represented by the following general formula (1): It is a blend.
[0011]
[Chemical formula 5]
The food preparation of the invention according to claim 4 contains at least one selected from the compounds represented by the following general formula (1) as an active ingredient.
[0012]
[Chemical 6]
[0013]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
(First embodiment)
Hereinafter, the blood pressure lowering agent of the first embodiment embodying the present invention will be described in detail.
[0014]
The antihypertensive agent of this embodiment contains at least one selected from the compounds represented by the following general formula (1) as an active ingredient.
[0015]
[Chemical 7]
The compound represented by the general formula (1) belongs to flavones, and the basic skeleton is 5,7-dihydroxy-4′-methoxy-flavone. In this compound, the substituent X is introduced at the 3-position of the basic skeleton. The compound represented by the general formula (1) can be obtained from a polyphenol-containing material existing in the natural world, particularly the plant world.
[0016]
Among the compounds represented by the general formula (1), when the substituent X is hydrogen, it is 5,7-dihydroxy-4′-methoxy-flavone (isosakuranetin). When the substituent X is an alkoxyl group having 1 carbon atom (methoxy group), it is 5,7-dihydroxy-3,4'-dimethoxy-flavone. Furthermore, when the substituent X is an alkoxyl group having 2 carbon atoms (ethoxy group), 5,7-dihydroxy-3-ethoxy-4'-methoxy-flavone, and the substituent X is an alkoxyl group having 3 carbon atoms (propoxy group) In this case, it is 5,7-dihydroxy-3-propoxy-4′-methoxy-flavone.
[0017]
When the substituent X is a hydroxyl group, it is 3,5,7-trihydroxy-4′-methoxy-flavone (dihydrokaempferide). This dihydrokaempferide is produced by deesterification of the substituent X by the action of esterase on a compound in which the substituent X is an alkoxyl group, a caffeoyloxy group or a p-coumaroxy group.
[0018]
When the substituent X is a caffeoyloxy group (3,4-dihydroxy-cinnamoyloxy group), it is 5,7-dihydroxy-3-caffeoyloxy-4′-methoxy-flavone. When the substituent X is a p-coumaroxy group (p-hydroxy-cinnamoyloxy group), it is 5,7-dihydroxy-3-p-coumaroxy-4′-methoxy-flavone. The caffeoyloxy group and p-coumaroxy group are substituents derived from caffeic acid and p-coumaric acid, respectively, and exist in cis and trans forms. These caffeic acid and p-coumaric acid are organic acids contained in the polyphenol-containing material, and are known to have an anti-inflammatory action. Caffeic acid and p-coumaric acid are produced by the same biosynthetic pathway in plants having polyphenol-containing materials. On the other hand, since flavones are produced by biosynthetic pathways similar to those biosynthetic pathways, flavones in which caffeoyloxy groups and p-coumarcoxy groups derived from caffeic acid and p-coumaric acid are ester-linked It is thought to be obtained.
[0019]
The compound represented by the general formula (1) may be used alone as an active ingredient, or a plurality of compounds may be used in combination. When a plurality of compounds are combined and coexisted, the antioxidant action of each compound is increased and the stability as an active ingredient is improved, so that the blood pressure lowering action can be enhanced.
[0020]
Among the compounds represented by the general formula (1), a compound in which the substituent X is hydrogen or an alkoxyl group having 1 to 3 carbon atoms is preferable because of excellent blood pressure lowering action. Further, among the compounds represented by the general formula (1), it is selected from isosakuranetin and dihydrokaempferide from the viewpoint that it is possible to prevent calcium that causes an increase in blood pressure from being taken into vascular smooth muscle cells. It is preferable to use at least one kind. Furthermore, among the compounds represented by the general formula (1), it is preferable to use at least dihydrokaempferide from the viewpoint of excellent antioxidant action. In addition, since it has an anti-inflammatory action derived from caffeic acid and p-coumaric acid, 5,7-dihydroxy-3-caffeoyloxy-4'-methoxy-flavone and 5,7-dihydroxy-3-p- It is preferable to use at least one selected from coumaroxy-4′-methoxy-flavone. In addition, caffeoyloxy group and p-coumaroxy which 5,7-dihydroxy-3-caffeoyloxy-4′-methoxy-flavone and 5,7-dihydroxy-3-p-coumaroxy-4′-methoxy-flavone respectively have The group is preferably a trans isomer from the viewpoint of structural stability.
[0021]
The polyphenol-containing material from which the compound represented by the general formula (1) is obtained includes propolis, red grape extract, red grape skin extract, red grape leaf, white grape leaf, red grape fruit, white grape fruit, white grape skin , Grape seed, ginkgo biloba, french west coast pine, barley young leaf, wheat young leaf, rice young leaf, soybean young leaf, blueberry fruit, pericarp and its seed, perilla leaf, rose leaf, rose flower, yacon and its leaf, cucumber and its leaf, Purple potato and its leaves, asteraceae plants, herbs (echinacea, lemon balm, turmeric, guava, lemongrass, lavender, etc.), tea leaves (green tea, black tea, oolong tea, etc.) and the like. Propolis masses are from Europe, South America such as Brazil, Asia such as China and Japan, North America, Africa and Oceania such as Australia.
[0022]
The content of the compound represented by the general formula (1) in the antihypertensive agent is preferably 10 to 90% by mass, more preferably 20 to 80% by mass, and further preferably 40 to 60% by mass. When this content is less than 10% by mass, the blood pressure lowering effect may not be sufficiently obtained. On the other hand, if it exceeds 90% by mass, the stability of the active ingredient may not be maintained.
[0023]
The antihypertensive agent preferably contains a propolis extract as a stabilizer. Propolis extract has the property of keeping various substances stable by its strong antioxidant action. Therefore, by containing a propolis extract as a stabilizer, the oxidation reaction of the compound represented by the general formula (1) is suppressed, and the stability of the compound can be improved. Therefore, the blood pressure lowering effect can be further exhibited.
[0024]
Examples of the propolis extract include a propolis solvent extract obtained by extracting components in propolis with an extraction solvent, a propolis supercritical extract obtained by extracting the components with carbon dioxide gas, and the like. As a propolis extraction solvent, water, a hydrophilic solvent, a lipophilic solvent, or the like is used alone or in combination. Examples of the hydrophilic solvent include water, lower alcohols (methanol, ethanol, propanol, butanol and the like). Examples of the lipophilic solvent include acetone, ethyl acetate, benzene, chloroform and the like. Among these extraction solvents, ethanol is preferably used as the extraction solvent because the substance to be extracted is excellent in improving the stability of the compound represented by the general formula (1).
[0025]
The compounding amount of the propolis extract with respect to the compound represented by the general formula (1) is preferably 0.01 to 10 parts by mass, more preferably 0.03 with respect to 1 part by mass of the compound represented by the general formula (1). -5 parts by mass, more preferably 0.1-3 parts by mass. If the blending amount is less than 0.01 parts by mass, the stabilizing effect may not be sufficiently obtained. On the other hand, even if it exceeds 10 parts by mass, the stabilizing effect is hardly improved, which is uneconomical. In addition, the compounding quantity of a propolis extract shows the quantity which deducted the residual solvent for extraction, when extracting with the solvent for extraction.
[0026]
This blood pressure lowering agent can contain a binder, an excipient, a swelling agent, a lubricant, a sweetener, a flavoring agent, and the like as other components.
This antihypertensive agent can be administered as an oral preparation in pharmaceuticals and quasi drugs, and as an injection in pharmaceuticals. Examples of the dosage form as an oral preparation include tablets, capsules, powders, and syrups. Examples of the dosage form as an injection include liquids, powders and freeze-dried agents, and powders and freeze-dried agents are dissolved in a solvent at the time of use.
[0027]
Next, a method for producing a blood pressure lowering agent will be described. This manufacturing method includes an extraction process, a separation process, and a sorting process. The extraction step is a step of mixing the polyphenol-containing material and the extraction solvent and extracting the polyphenol into the extraction solvent. The separation step is a step of supplying the extracted polyphenol extract to a separation carrier and separating the polyphenol with a separation solvent. The fractionation step is a step of fractionating the compound represented by the general formula (1) using fluorescence with respect to excitation light in the ultraviolet region as an index.
[0028]
Examples of the polyphenol-containing material used in the extraction step include those described above. Among the polyphenol-containing materials, at least one selected from propolis, red grape extract and barley young leaves is preferable because the content of polyphenol is high and the compound represented by the general formula (1) is obtained in high yield. The polyphenol-containing material may be in a dry state or a wet state. Moreover, since a polyphenol containing raw material can improve the yield (extraction rate) of the compound shown by General formula (1), it is preferable to make it a powder or a crushed material. In order to turn the polyphenol-containing material into a powder or crushed material, a pulverizer, a pulverizer such as a stone mortar, a knives such as a knife or scissors, a hand ruler, etc. can be used.
[0029]
The extraction operation is performed by mixing the polyphenol-containing material and the extraction solvent in a container to obtain a mixed solution and allowing to stand at a predetermined temperature for a predetermined time. The container is preferably a light-shielding container such as a brown container because it suppresses decomposition of the compound represented by the general formula (1) to be extracted by light. As the polyphenol extraction solvent, a hydrophilic solvent, a lipophilic solvent, or the like is used alone or in combination. Examples of the hydrophilic solvent include water, lower alcohols (methanol, ethanol, propanol, butanol and the like). Examples of the lipophilic solvent include acetone, ethyl acetate, benzene, chloroform and the like. Among these extraction solvents, water or ethanol is preferable because it can be used for food.
[0030]
The amount of the extraction solvent is preferably 1 to 50 times, more preferably 1 to 20 times the mass of the polyphenol-containing material. When this amount is less than 1 time and more than 50 times, the extraction rate may decrease and the production cost may increase. When the polyphenol-containing material is in a wet state, the amount of this extraction solvent is blended taking into account the amount of water present. Moreover, 1-60 degreeC is preferable for extraction temperature. If this temperature is less than 1 ° C., there is a possibility that sufficient extraction cannot be performed. On the other hand, when it exceeds 60 degreeC, there exists a possibility that stability of the compound shown by General formula (1) may be impaired. In particular, when water is used as the extraction solvent, 20 to 60 ° C. is preferable, and when alcohol is used, 1 to 40 ° C. is preferable. The extraction time is preferably 1 to 72 hours, more preferably 3 to 48 hours, since a good extraction rate can be obtained.
[0031]
Subsequently, a polyphenol extract containing the solvent for extraction and the compound shown in (1) above is obtained by solid-liquid separation of the mixed solution. Natural filtration, suction filtration, centrifugation, etc. can be applied to the solid-liquid separation. Examples of filter media used for natural filtration and suction filtration include paper and diatomaceous earth. A normal centrifuge can be used for centrifugation. Since this solid-liquid separation can improve the extraction rate, it is preferable to combine filtration and centrifugation. Further, since the extraction rate can be improved, the residue obtained by filtration is preferably re-extracted with an extraction solvent, and this re-extraction is more preferably repeated 2 to 5 times.
[0032]
Next, this polyphenol extract can be made into a polyphenol concentrate or a solid polyphenol extract by concentrating or drying as necessary. A vacuum distillation apparatus or the like is used for this concentration, and a vacuum freeze dryer or the like is used for drying.
[0033]
Subsequently, the liquid or solid polyphenol extract is subjected to a separation step. This separation step is a step of separating the compound represented by the general formula (1) with a separation carrier. In this separation step, the polyphenol extract is first dissolved in a separation solvent. The separation solvent swells the separation carrier and becomes a moving layer, and specific examples include those described as the extraction solvent. Among these separation solvents, ethanol is preferable because it can be used for food.
[0034]
Examples of the material for the separation carrier include porous polysaccharides, silicon oxide compounds, polyacrylamide, polystyrene, and polypropylene.
Examples of the carrier for separation include a reverse phase carrier, an ion exchange carrier, an affinity carrier, a dispersible carrier, a molecular sieve carrier, and an adsorbent carrier. Examples of the reverse phase carrier include those whose surface is coated with a hydrophobic compound, and can be used for separation of a highly hydrophobic substance by the hydrophobic bond of the hydrophobic compound. Examples of the ion exchange carrier include those whose surface is coated with an ionic substance, and specific examples include XAD-2, XAD-4 (both manufactured by Rohm and Haas). Among the ion exchange carriers, those coated with a cationic substance are suitable for separation of an anionic substance, and those coated with an anionic substance are suitable for separation of a cationic substance. The affinity carrier indicates a substance that performs separation using specific binding such as an antigen-antibody reaction. For example, a substance coated with an antibody can separate only a substance that becomes an antigen. The distributable carrier indicates a material that performs separation using a difference in distribution constant between a substance to be separated and a separation solvent, and examples thereof include silica gel. The molecular sieve carrier is one that performs separation utilizing the difference in molecular size, and examples thereof include Sephadex (registered trademark) LH-20 (manufactured by Amersham Pharmacia). The adsorptive carrier indicates a material that is separated by utilizing the adsorptivity of the substance to be separated, and examples thereof include Diaion (registered trademark) (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation).
[0035]
Among these separation carriers, the separation ability of aromatic compounds is high and suitable for the separation of the compound represented by the general formula (1). Therefore, reverse phase carriers, ion exchange carriers, distributable carriers, molecular sieve carriers and adsorption It is preferable to use at least one selected from sex carriers. In addition, since many polyphenol-containing materials have hydrophobicity and a large difference in distribution coefficient, it is more preferable to use a reverse phase carrier and a dispersible carrier.
[0036]
When an organic solvent such as ethanol is used as the separation solvent, it is preferable to use a separation carrier that is resistant to the organic solvent. Examples of such a carrier for separation include diaion as an adsorptive carrier, XAD-2 and XAD-4 as ion exchange carriers, Sephadex LH-20 as a carrier for molecular sieves, silica gel as a carrier for distribution (Merck) Manufactured), IRA-410 (produced by Rohm and Haas) which is an ion exchange carrier, DM1020T (produced by Fuji Silysia Chemical Co., Ltd.) which is a reverse phase carrier, and the like. When Sephadex LH-20 is used, the solvent for separation is preferably chloroform, methanol, acetic acid, or a mixture thereof because the solvent can be easily distilled off. Moreover, when using a diaion, since absorptivity can be changed, as a solvent for a separation, the mixed liquid of a lower alcohol or water and a lower alcohol is preferable.
[0037]
The separation temperature (the temperature of the column packed with the separation carrier) is preferably 4 to 30 ° C, more preferably 10 to 25 ° C. If this temperature is lower than 4 ° C., the operability of the column may be deteriorated. On the other hand, when it exceeds 30 degreeC, there exists a possibility that the stability of the compound shown by General formula (1) may be impaired.
[0038]
Further, in the separation step, it is preferable to repeat the separation operation by the column a plurality of times from the viewpoint of improving the yield. In this separation operation, the same or different separation carriers may be used, or the same or different separation solvents may be used.
[0039]
In the fractionation step, the separated solution is irradiated with excitation light in the ultraviolet region emitted from ultraviolet light emitting means such as an ultraviolet lamp, and the fluorescence specific to the compound represented by the general formula (1) for the excitation light is used as an index. This is a process of sorting. As a light source of the ultraviolet light emitting means, a mercury lamp, a xenon lamp, a black light, a light emitting diode, or the like can be used. For example, dihydrokaempferide emits green-yellow fluorescence and isosakuranetine emits orange-yellow fluorescence with respect to the excitation light in the ultraviolet region. Therefore, these fluorescences are fractionated as an index.
[0040]
Since the separation step and the fractionation step can simplify the steps, it is preferable to use a systemized apparatus such as a low-speed chromatogram system, a purification chromatogram system, or a membrane separation chromatogram system. In order to facilitate formulation, the obtained compound represented by the general formula (1) is preferably dried. For this drying, a vacuum distillation apparatus, a vacuum dryer or the like can be used. This drying temperature is preferably 20 to 60 ° C, more preferably 25 to 50 ° C, and further preferably 30 to 40 ° C. If this temperature is less than 20 ° C, the drying time may be prolonged. On the other hand, when it exceeds 60 ° C., the stability of the compound represented by the general formula (1) may not be maintained.
[0041]
The antihypertensive agent can be obtained by formulating according to a conventional method using at least one compound selected from the obtained compound represented by the general formula (1) as an active ingredient. When this antihypertensive agent is administered as an oral agent or an injection, the compound represented by the general formula (1) binds to an angiotensin converting enzyme, thereby inhibiting the action of the angiotensin converting enzyme and producing angiotensin II. Is suppressed. Therefore, an increase in blood pressure due to angiotensin II can be suppressed.
[0042]
According to the first embodiment described in detail above, the following effects are exhibited.
-The antihypertensive agent of 1st Embodiment contains the compound shown by General formula (1) as an active ingredient. In this case, an excellent blood pressure lowering effect can be exhibited, the onset of hypertension can be prevented, and the progress of hypertension can be suppressed.
[0043]
-According to the method for producing an antihypertensive agent of the first embodiment, an extraction step of extracting polyphenol from a polyphenol-containing material with an extraction solvent, a separation step of separating the components of polyphenol, and fluorescence for excitation light in the ultraviolet region And a sorting process for sorting using as an index. According to this production method, a blood pressure lowering agent capable of exhibiting an excellent blood pressure lowering action can be provided. Moreover, since the compound shown by General formula (1) which is an active ingredient can be obtained with a sufficient yield, a blood pressure lowering agent can be obtained with a sufficient yield. Furthermore, by separating fluorescence with respect to excitation light in the ultraviolet region as an index, the compound represented by the general formula (1) can be easily obtained from the polyphenol-containing material, and an antihypertensive agent can be easily produced. it can.
[0044]
-According to 1st Embodiment, the antihypertensive agent which can make the blood pressure lowering effect outstanding which used the polyphenol containing raw material as the main raw material can be obtained.
(Second Embodiment)
Hereinafter, the propolis composition of the second embodiment that embodies the present invention will be described focusing on differences from the antihypertensive agent of the first embodiment.
[0045]
The propolis composition of this embodiment contains a propolis extract extracted from propolis. In addition to the propolis extract, at least one selected from the compounds represented by the general formula (1) in the first embodiment is blended in the propolis composition. The propolis extract and the compound represented by the general formula (1) are the same as the propolis extract and the compound represented by the general formula (1) described in the first embodiment. This propolis composition is used as a health food, a raw material for health food, a pharmaceutical and a raw material for quasi-drugs.
[0046]
The compound represented by the general formula (1) is blended to impart a blood pressure lowering action to the propolis composition. The compounding amount of the compound represented by the general formula (1) with respect to the propolis composition is preferably 0.01 to 2% by mass, more preferably 0.03 to 0.12% by mass, and still more preferably 0.05 to 0. 07% by mass. When the amount is less than 0.01% by mass, the blood pressure lowering effect may not be sufficiently exhibited. On the other hand, when it exceeds 2 mass%, the storage stability of the compound represented by the general formula (1) may be lowered.
[0047]
The propolis extract can improve the storage stability of the compound represented by the general formula (1) by its antioxidant action. The content of the propolis extract in the propolis composition is preferably 50 to 99.9% by mass, more preferably 70 to 99.7% by mass, and still more preferably 80 to 99.3% by mass. When this content is less than 50% by mass, when this propolis composition is used as a health food, its raw material, etc., the handling amount increases and the handling property may be deteriorated.
[0048]
The compounding amount of the compound represented by the general formula (1) with respect to the propolis extract is preferably 0.01 to 4 parts by mass, more preferably 0.1 to 0.24 parts by mass with respect to 100 parts by mass of the propolis extract. More preferably, it is 1-0.14 mass part. If this amount is less than 0.01 parts by mass, the blood pressure lowering effect may not be sufficiently exhibited. On the other hand, when the amount exceeds 4 parts by mass, the stabilizing effect of the propolis extract cannot be sufficiently obtained, and the stability of the compound represented by the general formula (1) may not be maintained.
[0049]
It is possible to mix | blend the other component as described in 1st Embodiment with this propolis composition as another component.
This propolis composition can be produced by stirring and mixing the propolis extract, the compound represented by the general formula (1), and the like. The stirring temperature and stirring time are preferably 1 to 30 ° C. and 0.1 to 24 hours, more preferably 1 to 6 hours at the same temperature. The obtained mixture may be subjected to a concentration / drying operation as necessary. The propolis composition can be liquid or solid.
[0050]
Now, the anti-inflammatory and analgesic action of the propolis extract can be obtained by ingesting the propolis composition and the food preparation obtained therefrom. Furthermore, when the compound represented by the general formula (1) binds to an angiotensin converting enzyme, the action of the angiotensin converting enzyme can be inhibited, and an increase in blood pressure due to angiotensin II can be suppressed.
[0051]
According to the second embodiment described in detail above, the following effects are exhibited.
-The propolis composition of 2nd Embodiment is mix | blended with at least 1 type chosen from the compound shown by General formula (1) in addition to a propolis extract. When constituted in this way, in addition to many actions such as anti-inflammatory and analgesic action of the propolis extract, an excellent blood pressure lowering action can be exhibited by blending the compound represented by the general formula (1). .
[0052]
-According to the propolis composition of the second embodiment, the storage stability of the compound represented by the general formula (1) can be improved by the antioxidant action of the propolis extract. Therefore, the blood pressure-lowering action of the compound represented by the general formula (1) can be sufficiently maintained until it is used as a health food after the production, and a more excellent blood pressure-lowering action can be exhibited.
[0053]
When propolis is used as the polyphenol-containing material, both the propolis extract and the compound represented by the general formula (1) can be obtained from the same raw material. Therefore, quality control is easy and a high-quality propolis composition can be obtained.
(Third embodiment)
Hereinafter, the food preparation of the third embodiment that embodies the present invention will be described focusing on differences from the antihypertensive agent of the first embodiment.
[0054]
The food formulation of this embodiment contains at least 1 type chosen from the compound shown by General formula (1) as described in 1st Embodiment as an active ingredient. The content of the compound represented by the general formula (1) in the food preparation is preferably 0.1 to 30% by mass, more preferably 0.3 to 20% by mass, and still more preferably 0.5 to 15% by mass. is there. If this content is less than 0.1% by mass, the blood pressure lowering effect may not be sufficiently exhibited. On the other hand, when it mixes exceeding 30 mass%, there exists a possibility that the form as a foodstuff formulation cannot be maintained.
[0055]
Since this food preparation can improve the stability of the compound represented by the general formula (1), it is preferable to contain the propolis extract described in the first embodiment.
[0056]
To this food preparation, as other components, a base material, an excipient, an additive, a secondary material, a bulking agent, and the like can be appropriately added. Examples of the form of the food preparation include powders, tablets, liquids (drinks, etc.), capsules, and the like. More specifically, forms such as rice cakes, rice crackers, cookies, and various beverages can be employed.
[0057]
This food preparation is taken orally in several divided doses a day. The daily intake is preferably 0.1 to 10 g, more preferably 0.3 to 5 g, and still more preferably 0.5 to 4 g. If this intake is less than 0.1 g, it becomes difficult to take the necessary amount of the active ingredient, and a sufficient blood pressure lowering effect may not be expected. On the other hand, when it exceeds 10 g, the handleability is deteriorated and the cost may be increased.
[0058]
According to the food formulation of 3rd Embodiment, the compound shown by General formula (1) can be made to exhibit the outstanding blood pressure lowering effect by containing as an active ingredient.
[0059]
【Example】
Next, the embodiment will be described more specifically with reference to production examples, examples, and comparative examples.
(Production Example 1A, extraction process and production of propolis extract)
By pulverizing 300 g of Brazilian propolis bulk as a polyphenol-containing material with a pulverizer (manufactured by Ishizaki Electric Co., Ltd., Koton), a propolis pulverized product was obtained. Polyphenol was extracted by adding 1.5 liters of 100 volume% ethanol as an extraction solvent to the pulverized propolis and stirring at 20 ° C. for 24 hours. Next, the extract containing the propolis pulverized product is filtered with a filter paper (No. 2 manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd.), and the propolis pulverized product residue is removed to obtain 1.22 kg of the polyphenol extract as the polyphenol extract. (The solid content was 8.3% by mass). In addition, since this polyphenol extract uses propolis pulverized material as a raw material, it can also be used as an ethanol extract of propolis, which is a propolis extract.
(Production Example 1B, separation step and fractionation step)
The polyphenol extract obtained in Production Example 1A was applied to a column (packed with Sephadex (registered trademark) LH-20) and separated using 100% by volume of ethanol as a solvent for separation. Further, the separation solvent was allowed to fall naturally, and a portion emitting fluorescence with respect to excitation light in the ultraviolet region was collected using an ultraviolet irradiation device. A fraction separated by 10 times the amount of the separation solvent was obtained with respect to the column volume. This fraction was subjected to a vacuum concentrator and concentrated at 39 ° C.
[0060]
This concentrated solution was further applied to a silica gel column for separation. As the separation solvent, a mixed solution of chloroform and methanol (volume ratio 95: 5) was used, and the separation flow rate was 1.0 mL / min. Using an ultraviolet irradiation device, a portion emitting fluorescence with respect to excitation light in the ultraviolet region was collected. The separated solution was subjected to a vacuum concentrator, concentrated at 39 ° C., and then dried at 40 ° C. using a vacuum dryer to obtain a mixture of compounds represented by the general formula (1).
(Production Example 1C, preparative process)
The mixture obtained in Production Example 1B was dissolved in a separation solvent, and the separation operation using the silica gel column was repeated three times to further fractionate the compound represented by the general formula (1). Thereby, isosakuranetin (extraction rate 0.5% by mass), dihydrokaempferide (extraction rate 0.8% by mass), 5,7-dihydroxy-3,4'-dimethoxy-flavone (extraction rate 0.2 mass) %), 5,7-dihydroxy-3-caffeoyloxy-4′-methoxy-flavone (extraction rate 0.2% by mass) and 5,7-dihydroxy-3-p-coumaroxy-4′-methoxy-flavone ( Extraction rate 0.1% by mass) was obtained. In addition, an extraction rate is a ratio with respect to the polyphenol containing raw material which is a raw material.
(Production Example 2A, extraction process)
A polyphenol extract was obtained in the same manner as in Production Example 1A.
(Production Example 2B, separation step and fractionation step)
The polyphenol extract obtained in Production Example 2A was applied to a column (packed with Diaion (registered trademark)) and separated using 100% by volume of ethanol as a solvent for separation. Further, the separation solvent was allowed to fall naturally, and a portion emitting fluorescence with respect to excitation light in the ultraviolet region was collected using an ultraviolet irradiation device. A fraction separated by 15 times the amount of the solvent for separation was obtained with respect to the column volume. This fraction was subjected to a vacuum concentrator and concentrated at 39 ° C.
[0061]
This concentrated solution was further applied to a silica gel column for separation. As the separation solvent, a mixed solution of chloroform and methanol (volume ratios 65:35 and 95: 5) was used, and the separation flow rate was 1.0 mL / min. Using an ultraviolet irradiation device, a portion emitting fluorescence with respect to excitation light in the ultraviolet region was collected. The separated solution was subjected to a vacuum concentrator, concentrated at 39 ° C., and then dried at 40 ° C. using a vacuum dryer to obtain a mixture of compounds represented by the general formula (1).
(Production Example 2C, preparative process)
The mixture obtained in Production Example 2B was dissolved in a separation solvent, and the separation operation using the silica gel column was repeated three times to further fractionate the compound represented by the general formula (1). As a result, isosakuranetin (extraction rate 0.7 mass%), dihydrokaempferide (extraction rate 0.5 mass%), 5,7-dihydroxy-3-caffeoyloxy-4′-methoxy-flavone (extraction rate) 0.2% by mass), 5,7-dihydroxy-3-p-coumaroxy-4′-methoxy-flavone (extraction rate 0.2% by mass) and 3,5,6,7-tetrahydroxy-4′-methoxy -A flavone (extraction rate 0.7% by weight) was obtained.
(Production Example 3A, production of polyphenol extract)
After 100 g of red grape extract as a polyphenol-containing material was pulverized with a pulverizer, 1 liter of 100 vol% ethanol was added as an extraction solvent, and the mixture was stirred at 20 ° C. for 24 hours to extract polyphenol. Next, the extract containing the pulverized product of the red grape extract was filtered with a filter paper (manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd., No. 2) to remove the pulverized product of the red grape extract. 78 kg (solid content: 6.7% by mass) was obtained.
(Production Example 3B, separation step and fractionation step)
The polyphenol extract obtained in Production Example 3A is subjected to a column operation (packed with Sephadex (registered trademark) LH-20) in the same manner as in Production Example 1B, and is separated with a 11-fold amount of a separation solvent with respect to the column volume. Fractions were obtained. This fraction was subjected to a vacuum concentrator and concentrated at 37 ° C.
[0062]
This concentrated solution was subjected to separation / sorting operation using a silica gel column in the same manner as in Production Example 1B. The separated solution was subjected to a vacuum concentrator, concentrated at 37 ° C., and then dried at 40 ° C. using a vacuum dryer to obtain a mixture of compounds represented by the general formula (1).
(Production Example 3C, preparative process)
In the same manner as in Production Example 1C, the mixture obtained in Production Example 3B was separated by a silica gel column three times to further fractionate the compound represented by General Formula (1). Thereby, isosakuranetin (extraction rate 0.7% by mass), dihydrokaempferide (extraction rate 0.4% by mass), 5,7-dihydroxy-3,4'-dimethoxy-flavone (extraction rate 0.2 mass) %), 5,7-dihydroxy-3-caffeoyloxy-4′-methoxy-flavone (extraction rate 0.2% by mass) and 5,7-dihydroxy-3-p-coumaroxy-4′-methoxy-flavone ( The extraction rate was 0.2% by mass).
(Production Example 4A, production of polyphenol extract)
After pulverizing 100 g of barley young leaves as a polyphenol-containing material with a pulverizer, 1 liter of 100 volume% ethanol was added as an extraction solvent, and the mixture was stirred at 20 ° C. for 24 hours to extract polyphenol. Next, the extract containing the pulverized barley leaves was filtered with a filter paper (No. 2 manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd.), and the pulverized barley leaves were removed to obtain 0.81 kg of a polyphenol extract (solid content). 6.2% by mass) was obtained.
(Production Example 4B, separation step and fractionation step)
The polyphenol extract obtained in Production Example 4A is subjected to a column operation (packed with Sephadex (registered trademark) LH-20) in the same manner as in Production Example 1B, and is separated with a solvent for separation 10 times the column volume. Fractions were obtained. This fraction was subjected to a vacuum concentrator and concentrated at 39 ° C.
[0063]
This concentrated solution was subjected to separation / sorting operation using a silica gel column in the same manner as in Production Example 1-2. The separated solution was subjected to a vacuum concentrator, concentrated at 39 ° C., and then dried at 40 ° C. using a vacuum dryer to obtain a mixture of compounds represented by the general formula (1).
(Production Example 4C, preparative process)
In the same manner as in Production Example 1A, the mixture obtained in Production Example 4B was separated by a silica gel column three times to further fractionate the compound represented by General Formula (1). Thereby, isosakuranetin (extraction rate 0.9 mass%), dihydrokaenferide (extraction rate 0.6 mass%), 5,7-dihydroxy-3,4'-dimethoxy-flavone (extraction rate 0.3 mass) %), 5,7-dihydroxy-3-caffeoyloxy-4′-methoxy-flavone (extraction rate 0.3% by mass) and 5,7-dihydroxy-3-p-coumaroxy-4′-methoxy-flavone ( Extraction rate 0.1% by mass) was obtained.
<Identification of compound>
Each substance obtained in Production Example 1C, Production Example 3C and Production Example 4C was analyzed by a high performance liquid chromatograph apparatus (Capsule Pack (registered trademark) AG120, manufactured by Shiseido Co., Ltd. was installed as a column). First, a sample corresponding to a solid content of 0.1% by mass was subjected to a high performance liquid chromatograph, and gradient elution was performed using 20 to 100% by volume of acetonitrile aqueous solution as an analysis solvent. At this time, the absorbance at 280 nm was monitored. As a result of this analysis, each substance exhibited a single peak.
[0064]
Each substance was identified by a nuclear magnetic resonance measuring apparatus (NMR, manufactured by Varian, 300 MHz). As a result, isosakuranetin represented by the following general formula (2) and dihydrokaempferide represented by the following general formula (3) were identified.
[0065]
[Chemical 8]
[Chemical 9]
[0067]
The chemical shift value of dihydrokaempferide is δ3.78 (3H, s, 6-OMe), 4.60 (1H, d, J = 11.5 Hz, H-3), 5.11 (1H , D, J = 11.5 Hz, H-2), 5.86 (1H, brs, H-6), 5.91 (1H, brs, H-8) and 6.97 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3 ′, 5 ′) 7.44 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2 ′, 6 ′).
[0068]
Similarly, 5,7-dihydroxy-3,4′-methoxy-flavone represented by the following general formula (4), 5,7-dihydroxy-3-caffeoyloxy-4′-methoxy represented by the following general formula (5) -Flavone and 5,7-dihydroxy-3-p-coumaroxy-4'-methoxy-flavone represented by the following general formula (6) were identified. The caffeoyloxy group and p-coumaroxy group were both trans.
[0069]
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Isosakuranetin, dihydrokaempferide, 5,7-dihydroxy-3,4'-dimethoxy-flavone, 5,7-dihydroxy-3-caffeoyloxy-4'-methoxy-flavone and 5 obtained in Production Example 1C , 7-dihydroxy-3-p-coumaroxy-4′-methoxy-flavone was used as an antihypertensive agent in Examples 1 to 5 in order.
(Example 6)
The antihypertensive agent of Example 6 was administered in combination with isosakuranetin and dihydrokaenferide obtained in Production Example 1C.
(Example 7)
The mixture of compounds represented by the general formula (1) obtained in Production Example 1B was used as the blood pressure lowering agent of Example 7. The composition of this mixture was 35% by mass of isosakuranetin, 32% by mass of dihydrokaempferide, 11% by mass of 5,7-dihydroxy-3,4'-dimethoxy-flavone, 5,7-dihydroxy-3-caffeine. Roxy-4′-methoxy-flavone 9% by mass and 5,7-dihydroxy-3-p-coumaroxy-4′-methoxy-flavone 13% by mass.
[0072]
(Example 8)
The mixture of the compounds represented by the general formula (1) obtained in Production Example 2B was used as the antihypertensive agent of Example 8. The composition of the mixture was as follows: isosakuranetin 41% by mass, dihydrokaempferide 27% by mass, 5,7-dihydroxy-3-caffeoyloxy-4′-methoxy-flavone 14% by mass, 5,7-dihydroxy- 13% by mass of 3-p-coumaroxy-4′-methoxy-flavone and 5% by mass of 3,5,6,7-tetrahydroxy-4′-methoxy-flavone.
Example 9
To 150.3 mg of the propolis ethanol extract obtained in Production Example 1A, 0.52 mg of isosakuranetin obtained in Production Example 1C was added. Subsequently, 151 mg of propolis compositions were obtained by mixing with a stirrer at 25 ° C. for 3 hours.
(Example 10)
To 150.3 mg of the propolis ethanol extract obtained in Production Example 1A, 0.7 mg of dihydrokaempferide obtained in Production Example 1C was added. Subsequently, 151 mg of propolis compositions were obtained by mixing with a stirrer at 25 ° C. for 3 hours.
(Example 11)
To 300.5 mg of the propolis ethanol extract obtained in Production Example 1A, 1.5 mg of 5,7-dihydroxy-3,4'-dimethoxy-flavone obtained in Production Example 1C was added. Subsequently, it mixed using the stirrer at 25 degreeC for 3 hours, and obtained 302 mg of propolis compositions.
[0073]
(Example 12)
To 620 mg of the propolis ethanol extract obtained in Production Example 1A, 2 mg of 5,7-dihydroxy-3-p-coumaroxy-4′-methoxy-flavone obtained in Production Example 1C was added. Subsequently, it mixed using the stirrer at 25 degreeC for 3 hours, and obtained 622 mg of propolis compositions.
(Example 13)
5 mg of 5,7-dihydroxy-3-p-coumaroxy-4′-methoxy-flavone obtained in Production Example 2C was added to 1445 mg of the propolis ethanol extract obtained in Production Example 1A. Subsequently, it mixed using the stirrer at 25 degreeC for 3 hours, and obtained 1450 mg of propolis compositions.
(Example 14)
To 490 mg of the propolis ethanol extract obtained in Production Example 1A, 10 mg of the mixture of the compound represented by the general formula (1) obtained in Production Example 1B was added. Subsequently, it mixed using the stirrer at 25 degreeC for 3 hours, and obtained 500 mg of propolis compositions.
<Experiment on blood pressure lowering action of blood pressure lowering agent and propolis composition>
Spontaneously hypertensive rats (SHR rats, 14 to 20 weeks old) purchased from Hoshino Experimental Animals Co., Ltd. were subjected to preliminary breeding for 1 week, and then animals with no abnormalities were subjected to the experiment. This SHR rat is a model of essential hypertension in humans, and is widely used as an experimental model of hypertension in drug development and food development, and its experimental results are abundant. Three SHR rats were used per specimen, and the dosage of the specimen was 10 mg / kg / day. Distilled water was used as a solvent control, and VY peptide (manufactured by Sigma, derived from sardine peptide) was used as a positive control substance. This VY peptide has an ACE inhibitory action and is used as a food for specified health use. The administration was orally divided into morning and afternoon using an oral gastric sonde for 28 days. The systolic blood pressure on the 28th day after administration was measured non-invasively using a blood pressure measurement device (Softron Co., BP-80). The average value and standard deviation were calculated from the measurement results of three animals. Further, a significant difference test with respect to the solvent control was performed by a t-test, and a risk rate of less than 5% was determined to be significant. Table 1 shows the experimental results of blood pressure lowering effects of the blood pressure lowering agents of Examples 1 to 8 and the propolis compositions of Examples 9 to 14. * Mark in the table indicates that there is a significant difference.
[0074]
[Table 1]
<Stability test>
A solution prepared by dissolving the blood pressure lowering agent of Example 1 in distilled water and ethanol was stored at 40 ° C. for 3 days. On the other hand, solutions of the propolis compositions of Example 9 and Example 14 dissolved in ethanol were stored at 40 ° C. for 3 days. The stability of each solution after 1 day, 2 days and 3 days after dissolution was analyzed by a high performance liquid chromatograph apparatus (Capsule Pack (registered trademark) AG120, manufactured by Shiseido Co., Ltd. as a column). First, each solution corresponding to 0.1% by mass solid content was subjected to a high performance liquid chromatograph, and gradient elution was performed using 20 to 100% by volume acetonitrile aqueous solution as an analysis solvent. By monitoring the absorbance at 280 nm at this time, the remaining isosakuranetin after storage was measured. The content (%) of isosakuranetin remaining after storage was calculated with the content of isosakuranetin dissolved in distilled water or ethanol as 100%. In the case of the propolis composition, the content of isosakuranetin contained in the propolis extract was measured in advance, and the value was subtracted to evaluate only the stability of isosakuranetin blended in the propolis composition. Table 2 shows the results of evaluating the stability of isosakuranetin for the antihypertensive agent of Example 1 and the propolis compositions of Examples 9 and 14.
[0075]
[Table 2]
[0076]
[Table 3]
[0077]
[Table 4]
[0078]
[Table 5]
[0079]
[Table 6]
(Example 15)
By mixing 0.2 g of isosakuranetin obtained in Production Example 1C, 3 g of isomerized sugar, 1.8 g of edible cellulose, 0.01 g of ascorbic acid and 0.1 g of edible fragrance, A food formulation was obtained.
<Test on blood pressure lowering effect of food preparation>
For 6 patients with higher blood pressure (systolic blood pressure 140-150 mmHg), blood pressure after taking 3 g of the food preparation of Example 15 once a day for 7 days was measured. As a result, 5 out of 6 cases showed a blood pressure in the normal blood pressure region (systolic blood pressure of 120 mmHg or less), which was found to be a food preparation suitable for people with high blood pressure. In addition, there was no subjective symptom that felt any abnormality during the intake period of the food preparation and up to 1 week after the intake, and no abnormalities were observed in clinical laboratory values during that period.
[0080]
In addition, the said embodiment can also be changed and comprised as follows.
-In the said 1st Embodiment, the compound shown by General formula (1) is extract | collected from the polyphenol containing raw material. In addition, the compound represented by the general formula (1) may be produced by chemical synthesis.
[0081]
-You may add a calcium chelating agent to the blood pressure lowering agent in the said 1st Embodiment. In this case, by capturing calcium contained as an impurity in the blood pressure lowering agent, an increase in blood pressure due to calcium can be suppressed, and the blood pressure lowering effect can be further improved.
[0082]
-The polyphenol-containing material in the first embodiment may be pretreated with a glycolytic enzyme. By performing this pretreatment, the extraction amount of the compound represented by the general formula (1) increases, and the yield of the compound can be improved.
[0083]
Next, the technical idea that can be grasped from the above embodiment and other examples will be described below.
(1) The blood pressure lowering agent according to claim 1, wherein X in the compound represented by the general formula (1) is hydrogen or an alkoxyl group having 1 to 3 carbon atoms. When comprised in this way, the more superior blood pressure lowering effect can be exhibited.
[0084]
(2) The antihypertensive agent according to claim 1, wherein the compound represented by the general formula (1) is at least one selected from isosakuranetin and dihydrokaempferide. When comprised in this way, the more superior blood pressure lowering effect can be exhibited.
[0085]
(3) The method for producing an antihypertensive agent according to claim 2, wherein the polyphenol-containing material is at least one selected from propolis, red grape extract and barley young leaves. In the case of this production method, the antihypertensive agent can be produced with high yield.
[0086]
(4) The method for producing a blood pressure lowering agent according to (2) or (3), wherein the polyphenol-containing material is pretreated with a glycolytic enzyme.
(5) A pharmaceutical preparation containing the compound represented by the general formula (1) as an active ingredient and having an arteriosclerosis inhibitory action. In this case, a pharmaceutical preparation having an arteriosclerosis inhibitory action can be provided.
[0087]
【The invention's effect】
Since this invention is comprised as mentioned above, there exist the following effects.
According to the antihypertensive agent according to claim 1, the propolis composition according to claim 3, and the food preparation according to claim 4, an excellent blood pressure lowering effect can be exhibited.
[0088]
According to the method for producing a blood pressure lowering agent according to claim 2, it is possible to provide a blood pressure lowering agent capable of exerting an excellent blood pressure lowering action.