JP2004510762A - Inhibitors of prenyl-protein transferase - Google Patents

Abstract

The present invention relates to prenyl-protein transferases and fused bicyclic compounds that inhibit prenylation of the oncogene Ras. Furthermore, the present invention relates to chemotherapeutic compositions containing the compounds of the present invention, and methods for inhibiting the prenylation of prenyl-protein transferase and oncogene protein Ras.

Description

によって説明される。
【００１２】
（発明の詳細な説明）
本発明の化合物は、プレニル−蛋白質トランスフェラーゼの阻害および発癌遺伝子蛋白質Ｒａｓのプレニル化の阻害に有用である。第一の実施形態において、本発明の化合物またはそれらの医薬適合性の塩もしくは立体異性体は、下記式Ｉ：
【００１３】
【化１７】

（式中、
下記式：
【００１４】
【化１８】

は、下記：
【００１５】
【化１９】

から選択され、
Ｍは、ＣまたはＮであり；
Ｒ^１は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｄ）非置換または置換アリール、
ｅ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
ｆ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
ｇ）非置換または置換過フルオロアルキル；
ｈ）ハロ、
ｉ）ＯＲ^１０、
ｊ）Ｒ^１１Ｓ（Ｏ）_ｍ、
ｋ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
ｌ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０）_２、
ｍ）ＣＮ、
ｎ）ＮＯ_２、
ｏ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
ｐ）Ｒ^１０ＯＣ（Ｏ）−、
ｑ）Ｎ_３、
ｒ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、または
ｓ）Ｒ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−
から独自に選択され；
Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂは、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｄ）非置換または置換アリール、
ｅ）非置換または置換複素環、
ｆ）非置換または置換アラルキル、または
ｇ）−（ＣＨ_２）_ｎ複素環
から独自に選択され；
Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）オキソ、
ｅ）非置換または置換複素環、または
ｆ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ
から独自に選択され、この場合の置換されている基は、
１）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
２）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
３）ハロ、
４）非置換または置換アリール、
５）非置換または置換複素環、
６）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
７）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
８）非置換または置換過フルオロアルキル、
９）−ＯＲ^１０、
１０）Ｒ^１１Ｓ（Ｏ）_ｍ−、
１１）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
１２）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０）_２、
１３）ＣＮ、
１４）ＮＯ_２、
１５）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、
１６）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
１７）Ｒ^１０ＯＣ（Ｏ）−、
１８）Ｎ_３、または
１９）Ｒ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−
から選択された１個から３個の置換基で置換されており；
Ｒ^２ａとＲ^２ｂは、場合によっては環内で結合していてもよく；
Ｒ^３は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
ｄ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
ｅ）非置換または置換過フルオロアルキル；
ｆ）ハロ、
ｇ）−ＯＲ^１０、
ｈ）Ｒ^１１Ｓ（Ｏ）_ｍ−、
ｉ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
ｊ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０、
ｋ）ＣＮ、
ｌ）ＮＯ_２、
ｍ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
ｎ）Ｒ^１０ＯＣ（Ｏ）−、
ｏ）Ｎ_３、
ｐ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、または
ｑ）Ｒ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−
から独自に選択され；
Ｒ^８は、
ａ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｂ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、または
ｅ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル
から選択され、この場合の置換されている基は、
１）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
２）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
３）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
４）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
５）ＣＮ、
６）非置換または置換アリール、または
７）非置換または置換複素環
から選択され；
Ｒ^１０は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｄ）非置換または置換アリール、
ｅ）非置換または置換複素環、
ｆ）非置換または置換アラルキル、または
ｇ）非置換または置換ヘテロシクリルアルキル
から選択され；
Ｒ^１１は、
ａ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｂ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）非置換または置換複素環、
ｅ）非置換または置換アラルキル、または
ｆ）非置換または置換ヘテロシクリルアルキル
から選択され；
Ｙは、
ａ）複素環、
ｂ）Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
ｄ）Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
ｅ）Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｆ）ＣＮ、
ｇ）Ｃ（Ｏ）、
ｈ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１０、
ｉ）−ＯＲ^１０、
ｊ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、または
ｋ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＲ^１０
から選択され；
ｍは、０〜４であり；
ｎは、０〜４であり；
ｐは、１〜４であり；
ｓは、０〜４である）
によって説明される。
【００１６】
本発明のさらなる実施形態において、プレニル−蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤またはそれらの医薬適合性の塩もしくは立体異性体は、下記式Ａ：
【００１７】
【化２０】

（式中、
Ｍは、ＣまたはＮであり；
Ｒ^１は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｄ）非置換または置換アリール、
ｅ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
ｆ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
ｇ）非置換または置換過フルオロアルキル；
ｈ）ハロ、
ｉ）ＯＲ^１０、
ｊ）Ｒ^１１Ｓ（Ｏ）_ｍ、
ｋ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
ｌ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０）_２、
ｍ）ＣＮ、
ｎ）ＮＯ_２、
ｏ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
ｐ）Ｒ^１０ＯＣ（Ｏ）−、
ｑ）Ｎ_３、
ｒ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、または
ｓ）Ｒ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−
から独自に選択され；
Ｒ^１ａは、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｄ）非置換または置換アリール、または
ｅ）非置換または置換複素環
から独自に選択され；
Ｒ^１ｂは、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｄ）非置換または置換アリール、
ｅ）非置換または置換複素環、
ｆ）非置換または置換アラルキル、または
ｇ）−（ＣＨ_２）_ｎ複素環
から独自に選択され、
Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）オキソ、
ｅ）非置換または置換複素環、または
ｆ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ
から独自に選択され、この場合の置換されている基は、
１）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
２）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
３）ハロ、
４）非置換または置換アリール、
５）非置換または置換複素環、
６）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
７）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
８）非置換または置換過フルオロアルキル、
９）−ＯＲ^１０、
１０）Ｒ^１１Ｓ（Ｏ）_ｍ−、
１１）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
１２）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０）_２、
１３）ＣＮ、
１４）ＮＯ_２、
１５）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、
１６）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
１７）Ｒ^１０ＯＣ（Ｏ）−、
１８）Ｎ_３、または
１９）Ｒ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−
から選択された１個から３個の置換基で置換されており；
Ｒ^２ａとＲ^２ｂは、場合によっては環内で結合していてもよく；
Ｒ^３は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
ｄ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
ｅ）非置換または置換過フルオロアルキル；
ｆ）ハロ、
ｇ）−ＯＲ^１０、
ｈ）Ｒ^１１Ｓ（Ｏ）_ｍ−、
ｉ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
ｊ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０、
ｋ）ＣＮ、
ｌ）ＮＯ_２、
ｍ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
ｎ）Ｒ^１０ＯＣ（Ｏ）−、
ｏ）Ｎ_３、
ｐ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、または
ｑ）Ｒ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−
から独自に選択され；
Ｒ^８は、
ａ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｂ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、または
ｅ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル
から選択され、この場合の置換されている基は、
１）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
２）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
３）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
４）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
５）ＣＮ、
６）非置換または置換アリール、または
７）非置換または置換複素環
から選択され；
Ｒ^１０は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｄ）非置換または置換アリール、
ｅ）非置換または置換複素環、
ｆ）非置換または置換アラルキル、または
ｇ）非置換または置換ヘテロシクリルアルキル
から選択され；
Ｒ^１１は、
ａ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｂ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）非置換または置換複素環、
ｅ）非置換または置換アラルキル、または
ｆ）非置換または置換ヘテロシクリルアルキル
から選択され；
Ｙは、
ａ）複素環、
ｂ）Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
ｄ）Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
ｅ）Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｆ）ＣＮ、
ｇ）Ｃ（Ｏ）、
ｈ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１０、
ｉ）−ＯＲ^１０、
ｊ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、または
ｋ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＲ^１０
から選択され；
ｍは、０〜４であり；
ｎは、０または１であり；
ｐは、１〜４であり；
ｓは、０〜４である）
によって説明される。
【００１８】
本発明のもう一つの実施形態において、プレニル−蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤またはそれらの医薬適合性の塩もしくは立体異性体は、下記式Ａ：
【００１９】
【化２１】

（式中、
Ｍは、ＣまたはＮであり；
Ｒ^１は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｄ）非置換または置換アリール、
ｅ）非置換または置換過フルオロアルキル；
ｆ）ハロ、
ｇ）ＯＲ^１０、
ｈ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
ｉ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０）_２、
ｊ）ＣＮ、
ｋ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
ｌ）Ｒ^１０ＯＣ（Ｏ）−、
ｍ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、または
ｎ）Ｒ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−
から独自に選択され；
Ｒ^１ａは、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、または
ｃ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ
から独自に選択され；
Ｒ^１ｂは、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｄ）非置換または置換アリール、
ｅ）非置換または置換複素環、
ｆ）非置換または置換アラルキル、または
ｇ）−（ＣＨ_２）_ｎ複素環
から独自に選択され、
Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）オキソ、
ｅ）非置換または置換複素環、または
ｆ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ
から独自に選択され、この場合の置換されている基は、
１）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
２）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
３）ハロ、
４）非置換または置換アリール、
５）非置換または置換複素環、
６）非置換または置換過フルオロアルキル、
７）−ＯＲ^１０、
８）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
９）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０）_２、
１０）ＣＮ、
１１）ＮＯ_２、または
１２）−Ｎ（Ｒ^１０）_２
から選択された１個から３個の置換基で置換されており；
Ｒ^２ａとＲ^２ｂは、場合によっては環内で結合していてもよく；
Ｒ^３は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）ハロ、
ｄ）−ＯＲ^１０、
ｅ）Ｒ^１１Ｓ（Ｏ）_ｍ−、
ｆ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
ｇ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０、
ｈ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
ｉ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、または
ｊ）Ｒ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−
から独自に選択され；
Ｒ^８は、
ａ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｂ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、または
ｅ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル
から選択され、この場合の置換されている基は、
１）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
２）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
３）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
４）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
５）ＣＮ、
６）非置換または置換アリール、または
７）非置換または置換複素環
から選択され；
Ｒ^１０は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｄ）非置換または置換アリール、
ｅ）非置換または置換複素環、
ｆ）非置換または置換アラルキル、または
ｇ）非置換または置換ヘテロシクリルアルキル
から選択され；
Ｒ^１１は、
ａ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｂ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）非置換または置換複素環、
ｅ）非置換または置換アラルキル、または
ｆ）非置換または置換ヘテロシクリルアルキル
から選択され；
Ｙは、
ａ）複素環、
ｂ）Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
ｄ）Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
ｅ）Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｆ）ＣＮ、
ｇ）Ｃ（Ｏ）、
ｈ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１０、
ｉ）−ＯＲ^１０、
ｊ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、または
ｋ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＲ^１０
から選択され；
ｍは、０〜４であり；
ｎは、０または１であり；
ｐは、１〜４であり；
ｓは、０〜４である）
によって説明される。
【００２０】
本発明のもう一つの実施形態において、プレニル−蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤またはそれらの医薬適合性の塩もしくは立体異性体は、下記式Ｂ：
【００２１】
【化２２】

（式中、
Ｒ^１は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｄ）非置換または置換アリール、
ｅ）非置換または置換過フルオロアルキル；
ｆ）ハロ、
ｇ）ＯＲ^１０、
ｈ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
ｉ）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０）_２、
ｊ）ＣＮ、
ｋ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、または
ｌ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２
から独自に選択され；
Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）オキソ、
ｅ）非置換または置換複素環、または
ｆ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ
から独自に選択され、この場合の置換されている基は、
１）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
２）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
３）ハロ、
４）非置換または置換アリール、
５）非置換または置換複素環、
６）非置換または置換過フルオロアルキル、
７）−ＯＲ^１０、
８）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
９）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１０）_２、または
１０）−Ｎ（Ｒ^１０）_２
から選択された１個から３個の置換基で置換されており；
Ｒ^２ａとＲ^２ｂは、場合によっては環内で結合していてもよく；
Ｒ^３は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）ハロ、
ｄ）−ＯＲ^１０、
ｅ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、
ｆ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０、
ｇ）Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、または
ｈ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２
から独自に選択され；
Ｒ^８は、
ａ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｂ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、または
ｅ）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル
から選択され、この場合の置換されている基は、
１）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
２）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
３）非置換または置換Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
４）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
５）ＣＮ、
６）非置換または置換アリール、または
７）非置換または置換複素環
から選択され；
Ｒ^１０は、
ａ）Ｈ、
ｂ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｃ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｄ）非置換または置換アリール、
ｅ）非置換または置換複素環、
ｆ）非置換または置換アラルキル、または
ｇ）非置換または置換ヘテロシクリルアルキル
から選択され；
Ｒ^１１は、
ａ）非置換または置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、
ｂ）非置換または置換Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）非置換または置換アリール、
ｄ）非置換または置換複素環、
ｅ）非置換または置換アラルキル、または
ｆ）非置換または置換ヘテロシクリルアルキル
から選択され；
Ｙは、
ａ）ピリジニル、フラニル、ピラゾリル、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリルまたはチオフラニルから選択される複素環、
ｂ）Ｃ_３〜Ｃ_１０シクロアルキル、
ｃ）Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル、
ｄ）Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル、
ｅ）Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、
ｆ）ＣＮ、
ｇ）Ｃ（Ｏ）、
ｈ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１０、
ｉ）−ＯＲ^１０、
ｊ）−Ｎ（Ｒ^１０）_２、または
ｋ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＲ^１０
から選択され；
ｍは、０〜４であり；
ｎは、０または１であり；
ｐは、１〜４であり；
ｓは、０〜４である）
によって説明される。
【００２２】
本発明の化合物の例は、
Ｎ−イソプロピル−２−（１−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（１−メチル−２−ｏ−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチルアセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（７−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
２−［１−（２−ブロモベンジル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミド；
Ｎ−ベンジル−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−エチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
２−［１−（４−ブロモベンジル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
２−［１−（３−ブロモベンジル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−３−イルメチル）アセトアミド；
２−（１−ベンジル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
２−［２−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
２−（１−フェニル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１−プロピル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
２−（１−ベンジル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
１−ベンジル−４−｛［［（１−ベンジル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−３−イル）アセチル］（イソプロピル）アミノ］メチル｝ピリジニウム；
Ｎ−シクロブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−３−イルメチル−アセトアミド；
Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−３−イルメチル−アセトアミド；
２−［２−（２−クロロ−フェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ピリジン−３−イルメチル−アセトアミド；
Ｎ，Ｎ−ジアリル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−３−イルメチル−アセトアミド；
（Ｓ）−Ｎ−ｓｅｃ−ブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミド；
Ｎ−フラン−３−イルメチル−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド；
Ｎ−（２−シアノ−エチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド；
Ｎ−シクロブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミド；
Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミド；
２−［２−（３−クロロ−フェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミド；
Ｎ−（２−シアノ−エチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−（１−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリミジン−５−イルメチル−アセトアミド；
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド；
（＋）−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパンアミド；
Ｎ−（２−フリルメチル）−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−Ｎ−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）メチル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−イソブチル−Ｎ−メチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピラジン−２−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（３−フリルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−（２−シアノメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピラジン−２−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−Ｎ−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−Ｎ−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）メチル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−（２−シアノエチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−［２−（２−メチルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−イソペンチル−Ｎ−メチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−（２−シアノエチル）−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）メチル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−シクロブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（２−フリルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−［２−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−イソブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アセトアミド；
２−［２−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−（２−シアノエチル）−Ｎ−シクロプロピルアセトアミド；
Ｎ−（ｔ−ブチル）−Ｎ−（２−シアノエチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−イソブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−［（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセチル］−β−アラニン酸メチル；
Ｎ−イソプロピル−２−（６−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（４−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−イソブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−シクロペンチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−［（１Ｒ）−１−メチルプロピル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ，Ｎ−ビス（２−メトキシエチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（５−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−（２−シアノエチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−［２−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］アセトアミド；
Ｎ−シクロペンチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−シクロペンチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−Ｎ−フェニル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミド；
Ｎ−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−Ｎ’−エチルイミドカルバミン酸（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセチル；
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−［（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセチル］−β−アラニン；
Ｎ−イソプロピル−２−（２−ピリジン−３−イル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミド；
Ｎ−イソプロピル−２−（２−ピリジン−４−イル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−３−イルメチル−アセトアミド；
Ｎ−ベンジル−Ｎ−イソプロピル−２−（２−ピリジン−４−イル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド；
またはこれらの医薬適合性の塩もしくは立体異性体である。
【００２３】
本発明の化合物の特定の例は、下記式：
【００２４】
【化２３】

のＮ−イソプロピル−２−（１−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
下記式：
【００２５】
【化２４】

のＮ−イソプロピル−２−（１−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
下記式：
【００２６】
【化２５】

の２−［１−（２−ブロモベンジル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
下記式：
【００２７】
【化２６】

のＮ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド；
下記式：
【００２８】
【化２７】

のＮ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミド；
下記式：
【００２９】
【化２８】

のＮ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−３−イルメチル−アセトアミド；
下記式：
【００３０】
【化２９】

のＮ，Ｎ−ジアリル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド；
下記式：
【００３１】
【化３０】

のＮ−フラン−３−イルメチル−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド；
下記式：
【００３２】
【化３１】

のＮ−（２−シアノ−エチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド；
またはそれらの医薬適合性の塩もしくは立体異性体によって説明される。
【００３３】
本発明の化合物は、不斉中心、キラル軸およびキラル面を有し、ラセミ体、ラセミ混合物および個々のジアステレオマーとして生じることができ、光学異性体を含む可能なすべての異性体が本発明に含まれる（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ　ａｎｄ　Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ　Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｃａｒｂｏｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　ａｎｄ　Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　１９９４）の特に１１１９〜１１９０ページを参照のこと）。なんらかの可変項（例えば、アリール、複素環、Ｒ^１ａ、Ｒ^３など）が、いずれかの成分において１回以上出現する時、各出現におけるその定義は、その他すべての出現時のものとは無関係である。また、置換基／または可変項の組合せは、そうした組合せによって安定な化合物が生じる場合にのみ可能である。
【００３４】
本明細書中で用いられる「アルキル」は、別様に指示しない限り、炭素原子１個から６個を有する分枝鎖飽和脂肪族炭化水素基および直鎖飽和脂肪族炭化水素基の両方を包含するものとし、「アルコキシ」は、別様に指示しない限り、酸素架橋によって結合されている、炭素原子１個から６個を有するアルキル基を表す。本明細書中で用いられる「ハロゲン」または「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味する。
【００３５】
本明細書中で用いられる「シクロアルキル」は、別様に指示しない限り、炭素原子３個から１０個を有する非芳香族炭化水素基を包含するものとする。こうしたシクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、アダマンチルおよびこれらに類するものが挙げられるが、それらに限定されない。場合によっては、シクロアルキル中の炭素原子は、Ｏ、ＮまたはＳなどのへテロ原子で置換されていてもよい。
【００３６】
炭素原子数が特定されていない場合、用語「アルキニル」は、別様に指示しない限り２個から１０個の炭素原子と、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合とを有する直鎖、分枝鎖または環状の非芳香族炭化水素を指す。好ましくは一つの炭素−炭素二重結合が存在するが、４つ以下の非芳香族性炭素−炭素二重結合が存在しうる。従って、「Ｃ_２〜Ｃ_８アルケニル」は、炭素原子２から８個を有するアルケニルラジカルを意味する。こうしたアルケニル基の例には、エテニル、プロペニル、ブテニルおよびシクロヘキセニルが挙げられるが、それらに限定されない。アルキルに関して上で記載したように、アルケニル基の直鎖、分枝鎖または環状部分は、二重結合を含むことができ、置換アルケニル基と示されている場合には、置換されていてもよい。
【００３７】
用語「アルキニル」は、別様に指示しない限り２個から１０個の炭素原子と、少なくとも一つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖、分枝鎖または環状の炭化水素ラジカルを指す。三つ以下の三重結合が存在しうる。従って、「Ｃ_２〜Ｃ_８アルキニル」は、炭素原子２から８個を有するアルキニルラジカルを意味する。こうしたアルキニル基の例には、エチニル、プロピニルおよびブチニルが挙げられるが、それらに限定されない。アルキルに関して上で記載したように、アルキニル基の直鎖、分枝鎖または環状部分は、三重結合を含むことができ、置換アルキニル基と示されている場合には、置換されていてもよい。
【００３８】
本明細書中で用いられる「アリール」は、少なくとも一つの環が芳香族である各環７員以下のあらゆる安定な単環式または二環式炭素環を意味する。こうしたアリール要素の例には、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ビフェニル、フェナントリル、アントリル、アセナフチルおよびこれらに類するものが挙げられるが、それらに限定されない。
【００３９】
本明細書中で用いられる「アラルキル」は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルリンカー（この場合のアルキルは、上で定義されている）によって結合されている、上で定義したようなアリール部分を意味する。あるアルキルの例には、ベンジル、ナフチルメチル、フェニルブチルおよびこれらに類するものが挙げられるが、それらに限定されない。
【００４０】
本明細書中で用いられる「複素環」または「複素環の」という用語は、飽和されているかまたは不飽和であり、炭素原子とＮ、ＯおよびＳから成る群より選択されるヘテロ原子１から４個とから成る安定な５〜７員単環式複素環または安定な８〜１１員二環式複素環を表し、前で定義したいずれかの複素環が、ベンゼン環と縮合しているあらゆる二環式の基を包含する。複素環は、結果的安定な構造を生じるあらゆるヘテロ原子または炭素原子で結合されうる。「複素環」または「複素環の」という用語は、ヘテロアリール部分を包含する。こうした複素環要素の例には、アゼピニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾフラリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、クロマニル、シノリニル、ジヒドロベンゾフリル、ジヒドロベンゾチエニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、ジヒドロベンゾチオピラニルスルホン、１，３−ジオキソラニル、フリル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソクロマニル、イソインドリニル、イソキノリニル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキソアゼピニル、オキサゾリル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、ピリジル、２−ピリジノニル、２−ピリジノニルピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、キノキサリニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアゾリル、チアゾリニル、チエノフリル、チエノチエニル、チエニルおよびチアゾリルが挙げられるが、それらに限定されない。
【００４１】
本明細書中で用いられる用語「ヘテロアリール」は、少なくとも一つの環が芳香族であり、Ｎ、ＯおよびＳから成る群より選択されたヘテロ原子によって炭素原子１から４個が置換されている、各環７員以下のあらゆる安定な単環式または二環式炭素環を意味するものとする。こうした複素環要素の例には、ベンズイミダゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、クロマニル、シノリニル、ジヒドロベンゾフリル、ジヒドロベンゾチエニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、ジヒドロベンゾチオピラニルスルホン、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソクロマニル、イソインドリニル、イソキノリニル、イソチアゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、キノキサリニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、チエノフリル、チエノチエニル、チエニルおよびトリアゾリルが挙げられるが、それらに限定されない。
【００４２】
本明細書中で用いられる「ヘテロシクリルアルキル」は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルリンカー（この場合のアルキルは、上で定義されている）によって結合されている、上で定義したような複素環部分を意味するものとする。ヘテロシクリルアルキルの例には、２−ピリジルメチル、２−イミダゾリルエチル、２−キノリニルメチル、２−イミダゾリルメチル、１−ピペラジンエチルおよびこれらに類するものが挙げられるが、それらに限定されない。
【００４３】
本明細書中で用いられる用語「置換アルキル」、「置換アルケニル」、「置換アルキニル」および「置換アルコキシ」は、別様に定義されていない限り、炭素原子が、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＣＮ、Ｎ_３、ＮＯ_２、ＮＨ_２、Ｎ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）_２、オキソ、ＯＨ、−Ｏ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、Ｓ（Ｏ）_０〜２、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_０〜２−、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、−（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_０〜２（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、Ｃ_３〜Ｃ_２０シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、ＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、Ｈ_２ＮＣ（Ｏ）ＮＨ−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）ＣＦ_３、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）ＯＣ（Ｏ）−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｏ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）_２（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、アリール、複素環、アラルキル、ヘテロシクリルアルキル、ハロ−アリール、ハロ−アラルキル、ハロ−複素環、ハロ−ヘテロシクリルアルキル、シアノ−アリール、シアノ−アラルキル、シアノ−複素環およびシアノ−ヘテロシクリルアルキルで置換されていることが可能である、特定の炭素原子数の分枝鎖または直鎖アルキル基を包含するものとする。
【００４４】
本明細書中で用いられる用語「置換アリール」、「置換複素環」、「置換ヘテロアリール」、「置換シクロアルキル」、「置換ベンジル」、「置換アラルキル」および「置換ヘテロシクリルアルキル」は、別様に定義されていない限り、置換基１個から３個に加えてその化合物の残部に対する結合点を有する環状の基を包含するもとのとする。こうした置換基は、好ましくは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＮＨ_２、Ｎ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）_２、ＮＯ_２、ＣＮ、Ｎ_３、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキル、Ｃ_３〜Ｃ_２０シクロアルキル、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、Ｓ（Ｏ）_０〜２、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_０〜２−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_０〜２（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、ＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、Ｈ_２ＮＣ（Ｏ）ＮＨ−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）ＯＣ（Ｏ）−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｏ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）_２（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、アリール、アラルキル、複素環、ヘテロシクリルアルキル、ハロ−アリール、ハロ−アラルキル、ハロ複素環、ハロヘテロシクリルアルキル、シアノ−アリール、シアノ−アラルキル、シアノ−複素環およびシアノヘテロシクリルアルキルを含む（しかし、これらに限定されない）基から選択される。
【００４５】
置換基（Ｒ^１、Ｒ^２ａ、Ｒ^３などから）から環構造へと描かれている線は、示されている結合が置換可能な環炭素原子または窒素原子のいずれに結合されていてもよいことを示す。
【００４６】
好ましくは、Ｒ^１は、水素、ＯＲ^１０、−Ｎ（Ｒ^１０）_２、ハロまたは非置換もしくは置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルから独自に選択される。
【００４７】
好ましくは、Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂは、水素または非置換もしくは置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルから独自に選択される。
【００４８】
好ましくは、Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、水素、非置換もしくは置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、非置換もしくは置換アリール、オキソまたは非置換もしくは置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシから独自に選択される。最も好ましくは、Ｒ^２ａは、非置換もしくは置換アリールである。
【００４９】
好ましくは、Ｒ^３は、水素、非置換もしくは置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、非置換もしくは置換アリール、およびＲ^１０から独自に選択される。
【００５０】
好ましくは、Ｒ^８は、水素、非置換もしくは置換Ｃ_１〜６アルキル、非置換もしくは置換Ｃ_２〜８アルケニル、または非置換もしくは置換Ｃ_３〜１０シクロアルキルから選択される。
【００５１】
好ましくは、Ｙは、複素環、Ｃ_３〜１０シクロアルキル、Ｃ（Ｏ）、ＣＮ、または−ＯＲ^１０から選択される。Ｙが複素環である場合、好ましくは、その複素環は、ピリジニル、フラニル、ピラゾリル、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリルまたはチオフラニルから選択される。Ｙが複素環である場合、最も好ましくは、その複素環は、ピリジニル、フラニル、ピラゾリル、ピリミジニルまたはピラジニルから選択される。
【００５２】
好ましくは、ｍは、０または１である。
好ましくは、ｎは、０、１または２であり、最も好ましくは、ｎは、１である。
好ましくは、ｐは、０、１または２である。
好ましくは、ｓは、０または１である。
好ましくは、下記の部分：
【００５３】
【化３２】

は、下記：
【００５４】
【化３３】

から選択される。
さらに好ましくは、下記：
【００５５】
【化３４】

は、下記：
【００５６】
【化３５】

から選択される。
【００５７】
分子中の特定の位置におけるあらゆる置換基または可変項（例えば、Ｒ^１ａ、Ｒ^３、ｎなど）の定義は、その分子の中でのほかの場合におけるその定義とは無関係であるものとする。従って、−Ｎ（Ｒ^１０）_２は、−ＮＨＨ、―ＮＨＣＨ_３、−ＮＨＣ_２Ｈ_５などを表す。本発明の化合物に関する置換基および置換パターンは、化学的に安定であるとともに、容易に入手できる出発原料から当該技術において知られている技術ならびに下に記載する方法によって容易に合成することができる化合物を生じるように、通常の当業者が選択できるものと思われる。
【００５８】
本発明の化合物の医薬適合性の塩には、例えば、非毒性の無機または有機酸から生成されるような、本発明の化合物の通常の非毒性塩が挙げられる。例えば、こうした通常の非毒性塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸およびこれらに類するものなどの無機酸から誘導されたもの、ならびに酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ−安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、トリフルオロ酢酸およびこれらに類するものなどの有機酸から調製された塩が挙げられる。
【００５９】
本発明の化合物の医薬適合性の塩は、塩基性部分を有する本発明の化合物から通常の化学的方法によって合成することができる。一般に、本塩は、イオン交換樹脂によって調製されるか、または適する溶媒もしくは多様な組合せの溶媒の中で、遊離塩基を、所望の塩を形成する理論量のもしくは過剰の無機酸もしくは有機酸と反応させることによって調製される。
【００６０】
化学の記載においてまたは後続の実施例中で用いることができる略語には、次にものが挙げられる：
Ａｃ_２Ｏ　　　　　無水酢酸；
ＡＩＢＮ　　　　　２，２’−アゾビスイソブチロニトリル；
ＢＩＮＡＰ　　　　２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル；
Ｂｎ　　　　　　　ベンジル；
ＢＯＣ／Ｂｏｃ　　ｔ−ブトキシカルボニル；
ＣＢｚ　　　　　　カルボベンジルオキシ；
ＤＢＡＤ　　　　　アゾジカルボン酸ジ−ｔ−ブチル；
ＤＢＵ　　　　　　１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン；
ＤＣＥ　　　　　　１，２−ジクロロエタン；
ＤＩＥＡ　　　　　Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン；
ＤＭＡＰ　　　　　４−ジメチルアミノピリジン；
ＤＭＥ　　　　　　１，２−ジメトキシエタン；
ＤＭＦ　　　　　　Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；
ＤＭＳＯ　　　　　メチルスルホキシド；
ＤＰＰＡ　　　　　ジフェニルホスホリルアジド；
ＤＴＴ　　　　　　ジチオトレイトール；
ＥＤＣ　　　　　　１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチル−カルボジイミド・塩酸塩；
ＥＤＴＡ　　　　　エチレンジアミン四酢酸；
Ｅｔ_２　　　　　　ジエチルエーテル；
Ｅｔ_３Ｎ　　　　　トリエチルアミン；
ＥｔＯＡｃ　　　　酢酸エチル；
ＥｔＯＨ　　　　　エタノール；
ＦＡＢ　　　　　　高速原子衝撃；
ＨＥＰＥＳ　　　　４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸；
ＨＯＡｃ　　　　　酢酸；
ＨＯＢＴ　　　　　１−ヒドロキシベンゾトリザゾール水和物；
ＨＯＯＢＴ　　　　３−ヒドロキシ−１，２，２−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン；
ＨＰＬＣ　　　　　高速液体クロマトグラフィー；
ＫＯｔＢｕ　　　　カリウムｔ−ブトキシド；
ＬＡＨ　　　　　　水素化アルミニウムリチウム；
ＭＣＰＢＡ　　　　ｍ−クロロペルオキシ安息香酸；
Ｍｅ　　　　　　　メチル；
ＭｅＯＨ　　　　　メタノール；
Ｍｓ　　　　　　　メタンスルホニル；
ＭｓＣｌ　　　　　塩化メタンスルホニル；
ｎ−Ｂｕ　　　　　ｎ−ブチル；
ｎ−Ｂｕ_３Ｐ　　　トリ−ｎ−ブチルホスフィン；
ＮａＨＭＤＳ　　　ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド；
ＮＢＳ　　　　　　Ｎ−ブロモスクシンイミド；
Ｐｄ（Ｐｈ_３）_４　テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム；
Ｐｄ_２（ｄｂａ）_２　トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）；
Ｐｈ　　　　　　　フェニル；
ＰＭＳＦ　　　　　塩化ａ−トルエンスルホニル；
Ｐｙまたはｐｙｒ　ピリジン；
ＰＹＢＯＰ（またはＰｙＢＯＰ）　　ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリスピロリジノホスホニウム；
ｔ−Ｂｕ　　　　　ｔ−ブチル；
ＴＢＡＦ　　　　　フッ化テトラブチルアンモニウム；
ＲＰＬＣ　　　　　逆相液体クロマトグラフィー；
ＲＴ　　　　　　　室温；
ＴＢＳＣｌ　　　　塩化ｔ−ブチルジメチルシリル；
ＴＦＡ　　　　　　トリフルオロ酢酸；
ＴＨＦ　　　　　　テトラヒドロフラン；
ＴＩＰＳ　　　　　トリイソプロピルシリル；
ＴＭＳ　　　　　　テトラメチルシラン；および
Ｔｒ　　　　　　　トリチル。
【００６１】
これらの反応を直線的な順番で用いて本発明の化合物を生じてもよいし、またはこれらの反応を用いてフラグメントを合成し、その後、スキームに記載されているアルキル化反応によってそれらを結合してもよい。
【００６２】
スキーム１から６の概要
下のスキームに図示されている置換基および可変項（ｎ、Ｒ^２ａ、Ｒ^８、Ｙ、その他など）は、式Ｉにおいて定義されている。置換基Ｒは、式Ｉの置換基Ｒ^２ａまたはＲ^２ｂが置換されている時、利用できる可能性がある１個から３個の置換基を示す。
【００６３】
必要な中間体は、場合によっては市販されており、またはその大部分について文献手順に従って調製することができる。例えば、スキーム１には、２−フェニルインドール−３−アセトアミドの合成を記載する。０℃で、メタノール中のアルデヒド１とアミン２の溶液に、水素化ホウ素ナトリウムを添加する。その後、還元アミノ化生成物３を２−フェニルインドール−３−酢酸（４）とカップリングさせて、目的のアミド５を得る。カリウムｔ−ブトキシドおよびヨウ化アルキルで処理することによりアミド５のＮ−アルキル化を行って、化合物６を生じることもできる。
【００６４】
多様な置換基が位置２に結合しているインドール−３−アセトアミドの調製法をスキーム２に示す。インドール−３−アセトニトリル（７）を臭素化して、中間体８を得る。その後のスズキカップリングによって、２−置換化合物９を生じる。シアノ基を加水分解することによって酸１０を生じ、その後、これをアミン３とカップリングさせて、化合物１１を生じる。
【００６５】
スキーム３は、位置４、５、６および／または７で置換されているインドールの調製法を示している。アシル置換されている酸１２を標準的な条件下でアミン３とカップリングさせて、アミン１３を生じる。ヒドラジン１５の生成、その後のフィッシャーのインドール化によって、インドール１６を得る。２−アルキル位置で置換されているタイプ１２の酸を用いて、対応するα−置換インドールアセトアミドを生じる。
【００６６】
スキーム４は、Ｎ−アリールメチル置換インドールアセトアミドの合成を詳述している。インドール−３−酢酸（１７）をアミン３にカップリングさせて、アミド１８を生じる。臭化物１９でのその後のアルキル化によって、Ｎ−アルキル化生成物２０を生じる。
【００６７】
インドール異性体２４は、スキーム５に記載されているように調製することができる。湿潤ＤＭＳＯ中の水酸化カリウムおよびブロモ酢酸メチルで２−置換インドール２２を処理することによりアルキル化およびエステル分解を行って、酸２３を生じる。アミン３を用いるペプチドカップリングによって、化合物２４を得る。
【００６８】
２−置換アゾインドール−３−アセトアミドの合成をスキーム６に概説する。Ｈａｎｄｓらの方法（Ｈａｎｄ，Ｄ．；Ｂｉｓｈｏｐ，Ｂ．；Ｃａｍｅｒｏｎ，Ｍ．；Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｊ．Ｓ．；Ｃｏｔｔｒｅｌｌ，Ｉ．Ｆ．；Ｗｒｉｇｈｔ，Ｓ．Ｈ．Ｂ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　１９９６，８７７−８８２）を用いて、アミノピリジン２５およびワイナレブ（Ｗｅｉｎｒｅｂ）アミド２６からアザインドール２７を調製する。アミン成分としてのパラホルムアルデヒドとのマンニッヒ反応によって、アザグラミン２８を生じる。インシトゥでの四級化およびシアン化物置換によって、インドリルアセトニトリル２９を生じる。その後、上で説明したような塩基性加水分解およびペプチドカップリングによって、アセトアミド３１を生じる。
【００６９】
【化３６】

【００７０】
【化３７】

【００７１】
【化３８】

【００７２】
【化３９】

【００７３】
【化４０】

【００７４】
【化４１】

【００７５】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼの選択的阻害剤である。化合物は、例えば、そのインビトロでのファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害活性が、実施例６７に記載のアッセイにより評価分析して、実施例６８に記載のアッセイにおける同化合物のゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼＩ型に対するインビトロでの活性より少なくとも１００倍大きい時、ファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼの選択的阻害剤であると考えられる。好ましくは、選択的化合物は、ゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼＩ型の阻害とファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼの阻害とを比較した時、それらの酵素活性の一方に対して少なくとも１０００倍大きい活性を示す。
【００７６】
ファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼの選択的阻害剤が、
ａ）ｈＤＪ蛋白質のファルネシル化の阻害についてのＥＣ_５０より約１００倍を越えて高い、新しく合成されたＫ−Ｒａｓ蛋白質のプレニル化の阻害についてのＩＣ_５０によってさらに特徴づけられることも好ましい。こうしたＩＣ_５０およびＥＣ_５０を測定する時には、実施例７２に記載のアッセイを用いることができる。
【００７７】
ファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼの選択的阻害剤が、
ｂ）細胞内の蛋白質ｈＤＪのファルネシル化の阻害についてのＥＣ_５０より少なくとも１００倍大きい、細胞内のＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化の阻害についてのＩＣ_５０（インビトロでの阻害活性の測定値）
によってさらに特徴づけられることも好ましい。
【００７８】
ファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼの選択的阻害剤が、
ｃ）細胞内のＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ（配列番号１）依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ_５０）より少なくとも１０００倍低い、細胞内のＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対するＩＣ_５０（インビトロ阻害活性の測定値）によってさらに特徴づけられることも好ましい。細胞内のＭＡＰキナーゼのＲａｓ依存性活性化を測定する時には、実施例７１に記載のアッセイを用いることができる。
【００７９】
本発明のもう一つの好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼとゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼの二重阻害剤である。こうした二重阻害剤は、ＩＩ型プレニル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤と呼ぶことができ、用いられるアッセイのタイプに依存するインビトロアッセイにおいて評価検定した時、一定の特徴を示す。
【００８０】
実施例７１に記載のものなどのＳＥＡＰアッセイにおいて、二重阻害剤化合物は、細胞内のＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性に対して約１２μＭ未満のインビトロ阻害活性（ＩＣ_５０）を有することが好ましい。
【００８１】
ＩＩ型プレニル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤は、
ａ）細胞内で蛋白質ｈＤＪのファルネシル化を阻害するためのＩＣ_５０の０．１倍から１００倍の間である、細胞内でＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性を阻害するためのＩＣ_５０（インビトロ阻害活性の測定値）；および
ｂ）ＳＥＡＰ蛋白質を構成的に発現するｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドでトランスフェクトされた細胞内でのＳＥＡＰ蛋白質の発現に対する阻害活性（ＩＣ_５０）より５倍を越えて低い、細胞内のＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性を阻害するためのＩＣ_５０（インビトロ阻害活性の測定）によって特徴づけることもできる。
【００８２】
ＩＩ型プレニル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤は、
ａ）細胞内でのＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ（配列番号１）依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ_５０）より２倍を越えて低いが２０，０００倍までは低くない、細胞内でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対するＩＣ_５０（インビトロ阻害活性の測定値）；および
ｂ）ＳＥＡＰ蛋白質を構成的に発現するｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドでトランスフェクトされた細胞内でのＳＥＡＰ蛋白質の発現に対する阻害活性（ＩＣ_５０）より５倍を越えて低い、細胞内でのＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性に対するＩＣ_５０（インビトロ阻害活性の測定）によって特徴づけることもできる。
【００８３】
ＩＩ型プレニル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤は、
ａ）細胞内でのＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ（配列番号１）依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ_５０）より１０倍を越えて低いが２５００倍までは低くない、細胞内でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対するＩＣ_５０（インビトロ阻害活性の測定値）；および
ｂ）ＳＥＡＰ蛋白質を構成的に発現するｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドでトランスフェクトされた細胞内でのＳＥＡＰ蛋白質の発現に対する阻害活性（ＩＣ_５０）より５倍を越えて低い、細胞内でのＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性に対するＩＣ_５０（インビトロ阻害活性の測定）によって特徴づけることもできる。
細胞内でのＭＡＰキナーゼのＲａｓ依存性活性化に対して本方法で用いられるプレニル−蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤および混合型組成物の活性を測定する方法は、実施例７１に記載する。
【００８４】
さらにもう一つの実施形態において、本発明の化合物は、ファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤であるより大きい効力の、ゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼＩ型の阻害剤であることができる。
【００８５】
本発明の化合物は、哺乳動物、特にヒトのための薬剤として有用である。これらの化合物は、癌の治療に用いるために、患者に投与することができる。本発明の化合物で治療することができるタイプの癌の例には、結腸直腸癌、膵臓外分泌腺癌、骨髄性白血病および神経腫瘍が挙げられるが、それらに限定されない。こうした腫瘍は、ｒａｓ遺伝子それら自体における突然変異、Ｒａｓ活性を調節することができる蛋白質（すなわち、ニューロフィブロミン（ＮＦ−１）、ｎｅｕ、ｓｒｃ、ａｂ１、ｌｃｋ、ｆｙｎ）における突然変異または他のメカニズムによって発生しうる。
【００８６】
本発明の化合物は、ファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼおよび発癌遺伝子蛋白質Ｒａｓのファルネシル化を阻害する。本発明の化合物は、腫瘍脈管形成も阻害し、その結果、腫瘍の増殖に影響を及ぼす（Ｊ．Ｒａｋら，Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５５：４５７５−４５８０（１９９５））。本発明のこうした抗脈管形成特性は、網膜脈管形成に関連した一定の形態の視覚障害の治療にも有用でありうる。
【００８７】
本発明の化合物は、Ｒａｓ蛋白質が他の遺伝子における発癌性突然変異の結果として異常に活性される（すなわち、Ｒａｓ遺伝子それ自体は、突然変異によって発癌性形態に活性化されない）、良性、悪性、両方の他の増殖性障害を抑制するためにも有用であり、前記の抑制は、有効量の本発明の化合物をそうした治療が必要な哺乳動物に投与することによって達成される。例えば、本組成物は、良性増殖性障害である神経線維腫症の治療に有用である。
【００８８】
本化合物は、一定のウイルス感染症の治療、詳細には、デルタ肝炎ウイルスおよび肝炎関連ウイルス感染症の治療にも有用である（Ｊ．Ｓ．Ｇｌｅｎｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１３３１−１３３３（１９９２））。
【００８９】
本発明の化合物は、新内膜形成を阻害することにより、経皮的経管的冠動脈形成術後の再狭窄の予防にも有用である（Ｃ．Ｉｎｄｏｌｆｉら，Ｎａｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１：５４１−５４５（１９９５））。
【００９０】
本化合物は、腎嚢胞の治療および予防にも有用でありうる（Ｄ．Ｌ．Ｓｃｈａｆｆｎｅｒら　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１４２：１０５１−１０６０（１９９３）およびＢ．Ｃｏｗｌｅｙ，Ｊｒ．ら　ＦＡＳＥＢ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２：Ａ３１６０（１９８８））。
【００９１】
本化合物は、真菌感染症の治療にも有用でありうる。
【００９２】
本化合物は、血管平滑筋細胞の増殖の阻害剤としても有用であり、従って、動脈硬化および糖尿病性血管病理の予防および治療においても有用でありうる。
【００９３】
本発明の化合物は、子宮内膜症、子宮フィブロイド、不正子宮出血および内膜増殖症の予防および治療にも有用でありうる。
【００９４】
本明細書中に記載されているような予防法および治療法において、本発明のプレニル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤は、治療を受けている状態に対してそれらが特に有用であるため選択される他のよく知られている治療薬とともに共同投与することもできる。例えば、プレニル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤は、卵巣の活動を抑制することが知られている薬物とさらなに併用しても有用であり、子宮内膜組織の増殖を遅らせることができる。こうした薬物には、経口避妊薬、プロゲスチン、ダナゾールおよびＧｎＲＨ（ゴナドドロピン放出ホルモン）作動薬が挙げられるが、それらに限定されない。
【００９５】
プレニル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤の投与は、適切な場合には子宮内膜症の外科処置（誤った位置の子宮内膜組織の外科的除去など）と組合わせることもできる。
【００９６】
本化合物は、角膜炎の抑制剤としても有用でありうる。これらの化合物は、焼灼誘発角膜炎によって生じた角膜混濁の治療を改善することができる。本化合物は、角膜浮腫および血管新生を減少させることにも有用でありうる（Ｋ．Ｓｏｎｏｄａら，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，１９９８，ｖｏｌ．３９，ｐ２２４５−２２５１）。
【００９７】
本発明の化合物は、標準的な薬事行為に従って、医薬組成物中、単独で、または好ましくは医薬適合性の担体、賦形剤もしくは希釈剤と組合せた形で、哺乳動物、好ましくはヒトに投与することができる。本化合物は、経口投与または非経口投与（静脈経路、筋肉内経路、腹腔内経路、皮下経路、直腸経路および局所経路の投与を含む）することができる。
【００９８】
さらに、本発明の化合物は、その必要がある哺乳動物に、１９９９年７月２０日出願の米国特許出願第６０／１４４，６４３号に記載されているものなどのゲル押出機構（ＧＥＭ）装置を用いて投与することができる。本明細書は、この特許出願を参照として取り入れる。
【００９９】
本明細書中で用いられる用語「組成物」は、特定量の特定成分を含む製品、ならびに特定量の特定成分を組合せたものから直接または間接的に得られるあらゆる製品を包含するものとする。
【０１００】
有効成分を含有する医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性もしくは油性懸濁液、分散性粉末もしくは顆粒、乳剤、硬質もしくは軟質カプセル、またはシロップもしくはエリキシルのような、経口使用に適する形態であることができる。経口使用を目的とする組成物は、医薬組成物を製造するための当該技術において知られているあらゆる方法に従って調製することができ、こうした組成物は、医薬として上品で美味な製剤を提供するために、甘味剤、着香剤、着色剤および保存薬から成る群より選択される一つ以上の薬剤を含有することができる。錠剤は、錠剤の製造に適する非毒性で医薬適合性の賦形剤との混合物で有効成分を含有する。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；顆粒化剤および崩壊剤、例えば、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、トウモロコシデンプンまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン、ポリビニル−ピロリドンまたはアラビアゴム；および潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであることができる。錠剤は、コーチングされていなくてもよいし、または薬物の不快な味を隠すために、または胃腸管における崩壊および吸収を遅らせ、それによって長時間にわたる持続作用を提供するために、既知の技術によりコーチングされていてもよい。例えば、ヒドロキシプロピル−メチルセルロースまたはヒドロキシプロピル−セルロースなどの水溶性味隠蔽材料、またはエチルセルロース、酢酸セルロース酪酸塩などの時間遅延材料を用いることができる。
【０１０１】
経口使用のための調合薬は、有効成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合されている硬質ゼラチンカプセルとして、あるいは有効成分がポリエチレングリコールまたは油性媒体、例えば、ピーナッツ油、液体パラフィンもしくはオリーブ油と混合されている軟質ゼラチンカプセルとして、提供することができる。
【０１０２】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適する賦形剤との混合物で活性材料を含有する。こうした賦形剤は、懸濁化剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル−ピロリドン、トラガカントゴムおよびアラビアゴムであり、分散剤または湿潤剤は、天然ホスファチド、例えばレシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸の縮合生成物、例えばポリオキシエチレンステアレート、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはモノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビトールなどのエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合生成物、またはエチレンオキシドと脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合生成物、例えば、モノステアリン酸ポリエチレンソルビタンであることができる。水性懸濁液は、一つ以上の保存薬、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｐ−ヒドロキシ安息香酸ｎ−プロピル、一つ以上の着色剤、一つ以上の着香剤、およびスクロース、サッカリンまたはアスパルテームなどの一つ以上の甘味剤を含有することができる。
【０１０３】
油性懸濁液は、植物油、例えばラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油もしくはヤシ油、または液体パラフィンなどの鉱物油に有効成分を懸濁させることによって調合することができる。油性懸濁液は、増粘剤、例えば、蜜蝋、硬質パラフィンまたはセチルアルコールを含有することができる。上に記載したものなどの甘味剤、および着香剤を添加して、美味な経口製剤を生じることができる。これらの組成物は、ブチルヒドロキシアニソールまたはα−トコフェロールなどの酸化防止剤の添加によって保存することができる。
【０１０４】
水の添加による水性懸濁液の調製に適する分散性粉末および分散性顆粒は、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および一つ以上の保存薬との混合物で有効成分を提供する。適する分散剤または湿潤剤および懸濁化剤の例は、すでに上で言及したものである。さらなる賦形剤、例えば、甘味剤、着香剤および着色剤も存在しうる。これらの組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤の添加によって保存することができる。
【０１０５】
本発明の医薬組成物は、水中油型乳剤の形態であることもできる。その油性相は、植物油、例えばオリーブ油もしくはラッカセイ油、または鉱物油、例えば液体パラフィン、またはこれらの混合物であることができる。適する乳化剤は、天然ホスファチド、例えば大豆レシチン、および脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導されたエステルまたは部分エステル、例えばモノオレイン酸ソルビタン、および前記部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンであることができる。乳剤は、甘味剤、着香剤、保存薬および酸化防止剤も含有することができる。
【０１０６】
シロップおよびエリキシルは、甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースを用いて調合することができる。こうした調合薬は、粘滑薬、保存薬、着香剤、着色剤および酸化防止剤も含有することができる。
【０１０７】
本医薬組成物は、無菌注射用水溶液の形態であることができる。用いることができる許容されるビヒクルおよび溶媒は、水、リンガー溶液および等張食塩水などである。
【０１０８】
無菌注射用製剤は、有効成分が油性相に溶解している無菌注射用水中油型マイクロエマルジョンであることもできる。例えば、有効成分を、ダイズ油とレシチンの混合物に先ず溶解することができる。次に、その油性溶液を水とグリセロールの混合物に導入し、加工して、マイクロエマルジョンを生成する。
【０１０９】
注射用溶液またはマイクロエマルジョンは、局所大量注射によって患者の血流に導入することができる。あるいは、本化合物の一定循環濃度を維持するような方法で、注射用溶液またはマイクロエマルジョンを投与すると有利でありうる。こうした一定濃度を維持するために、継続性静脈内送達装置を用いることができる。こうした装置の例は、Ｄｅｌｔｅｃ　ＣＡＤＤ−ＰＬＵＳ（商標）モデル５４００静脈内ポンプである。
【０１１０】
本医薬組成物は、筋肉内投与および皮下投与のための無菌注射用水性または油性懸濁液の形態であることができる。この懸濁液は、上で言及した適する分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて、既知の技術に従って調合することができる。無菌注射用製剤は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液のような、非毒性で非経口投与適合性の希釈剤または溶媒中の無菌注射用溶液または懸濁液であることができる。加えて、固定油が、溶媒または懸濁媒体として通常用いられる。この目的には、合成モノまたはジグリセリドを含むあらゆる無刺激性固定油を用いることができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が、注射用薬物の調製に用いられる。
【０１１１】
式Ｉの化合物は、薬物を直腸内投するために坐薬の形態で投与することもできる。これらの組成物は、常温では固体であるが直腸温度では液体であり、そのため直腸内で溶融して薬物を放出することとなる適する無刺激性賦形剤と薬物を混合することによって調製することができる。こうした材料には、カカオ脂、グリセロゼラチン、硬化植物油、様々な分子量のポリエチレングリコールの混合物、およびポリエチレングリコールの脂肪酸エステルが挙げられる。
【０１１２】
局所使用には、式Ｉの化合物を含有するクリーム、軟膏、ゼリー、溶液または懸濁液などが用いられる。（この適用目的のために、局所適用は、含そう薬およびうがい薬を含む。）
本発明の化合物は、適する鼻腔内用ビヒクルおよび送達装置の局所使用によって鼻腔内形態で、または通常の当業者によく知られている経皮パッチの形を用いる経皮的経路によって、投与することができる。経皮送達系の形態で投与するための薬物投与は、勿論、薬物投与計画を通して断続的ではなく継続的である。本発明の化合物は、カカオ脂、グリセロゼタチン、硬化植物油、様々な分子量のポリエチレングリコールの混合物、およびポリエチレングリコールの脂肪酸エステルなどの基剤を用いて坐薬として送達することもできる。
【０１１３】
本発明の化合物をヒト被験者に投与する時、日用量は、処方する医師によって通常決定され、その用量は、個々の患者の年齢、体重、性別および応答、ならびにその患者の重症度に従って一般に変化するだろう。
【０１１４】
一つの模範的適用では、適量の化合物が、癌の治療を受ける哺乳動物に投与される。投与は、一日に約０．１ｇｍ／（体重１ｋｇ）〜約６０ｍｇ／（体重１ｋｇ）の間の量、好ましくは一日に０．５ｍｇ／（体重１ｋｇ）〜約４０ｍｇ／（体重１ｋｇ）の間の量で行われる。
【０１１５】
本発明の化合物は、治療を受けている状態に対してそれらが特に有用であるため選択される他のよく知られている治療薬とともに共同投与することもできる。例えば、本発明の化合物は、治療を受けている状態に対してそれらが特に有用であるため選択される他のよく知られている癌治療薬とともに共同投与することもできる。こうした治療薬の組合せには、本プレニル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤と抗腫瘍薬とを組合せたものも含まれる。言うまでもないが、抗腫瘍薬とプレニル−蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤のこうした組合せは、放射線療法および外科手術を含む癌および／または腫瘍を治療する他の方法とともに用いることもできる。さらに言うまでもないが、本明細書中に記載されているいずれの治療薬も本発明の化合物および抗腫瘍薬と併用することができる。
【０１１６】
抗腫瘍薬の例には、一般に、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）としても知られている）、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）としても知られている）、エピチロンＡ、エポチロンＢ、デゾキシエポチロンＡ、デゾキシエポチロンＢまたはそれらの誘導体などの微小管安定剤；微小管破壊剤；アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン化合物、アルキルスルホン酸塩、およびアルキル化作用のある他の化合物（ニトロソウレア、シスプラチンおよびダカルバジンなど）；代謝拮抗薬、例えば、葉酸、プリンまたはピリミジン拮抗薬；エピドフィロトキシン；抗腫瘍酵素；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカルバジン；ミトキサントロン；白金配位錯体；生物学的応答調節剤および増殖阻害物質；有糸分裂阻害剤、例えば、ビンカアルカロイド、およびポドフィロトキシンの誘導体；細胞毒性抗生物質；ホルモン／抗ホルモン治療薬、造血性増殖因子および抗生物質（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）としても知られているトラスツズマブなど）が挙げられる。
【０１１７】
抗腫瘍薬の種類の例には、例えば、アントラサイクリン系統の薬物、ビンカ類の薬物、マイトマイシン類、ブレオマイシン類、細胞毒性ヌクレオシド類、タキサン類、エポチロン類、ディスコデルモリド、プテリジン系統の薬物、ジイネンおよびポドフィロトキシンが類挙げられる。これらの種類の中で特に有用な構成員には、例えば、ドキソルビシン、カルミノマイシン、ダウノルビシン、アミノプテリン、メトトレキセート、メトプテリン、ジクロロ−メトトレキセート、マイトマイシンＣ、ポルフィロマイシン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド、ポドフィロトキシンまたはポド−フィロトキシン誘導体（エトポシド、リン酸エトポシドまたはテニポシドなど）、メルファラン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、リューロシジン、ビンデシン、リューロシン、パクリタキセルおよびこれらに類するものが挙げられる。他の有用な抗腫瘍薬には、エストラムスチン、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ブレオマイシン、タモキシフェン、イホサミド、メルファラン、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、シタラビン、イダトレキセート、トリメトレキセート、ダカルバジン、Ｌ−アスパラギナーゼ、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、プロカルバジン、マイトマイシン、シタラビン、エトポシド、メトトレキセート、ブレオマイシン、クロラムブシル、カムプトテシン、ＣＰＴ−１１、トポテカン、シトシンアラビノシド、ビカルタミド、フルタミド、ロイプロリド、ピリドベンゾインドール誘導体、インターフェロンおよびインターロイキンが挙げられる。抗腫瘍薬、すなわち化学療法薬の特定の例は、例えば、Ｄ．Ｊ．Ｓｔｅｗａｒｔによって、「悪心嘔吐：近年の研究および臨床上の進展（Ｎａｉｓｅａ　ａｎｄ　Ｖｏｍｉｔｉｎｇ：Ｒｅｃｅｎｔ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ａｄｖａｎｃｅｓ）」、編集　Ｊ．Ｋｕｃｈａｒｃｚｙｋら、ＣＲＣ　Ｐｒｅｓｓ　Ｉｎｃ．米国フロリダ州ボカラトン（１９９１）の１７７〜２０３頁、特に１８８頁に記載されている。Ｒ．Ｊ．Ｇｒａｌｌａら，Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　Ｒｅｐｏｒｔｓ，６８（１），１６３−１７２（１９８４）も参照のこと。
【０１１８】
抗腫瘍薬の好ましい種類は、タキサン類であり、好ましい抗腫瘍薬は、パクリタキセルである。
【０１１９】
本発明の化合物は、ヒトｒａｓ遺伝子由来のＲＮＡまたはＤＮＡで特異的にハイブリダイズ可能なアンチセンスオリゴヌクレオチドと共同投与することもできる。こうしたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、米国特許第５，５７６，２０８号およびＰＣＴ国際公開公報第９９／２２７７２号に記載されている。本化合物は、米国特許第５，５７６，２０８号の配列番号２のアミノ酸配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドと共同投与した時、特に有用である。
【０１２０】
本発明の一定の化合物は、その化合物の血漿中レベルに関して、非常に低い血漿中濃度および有意な個人間の変動を示すことがある。一定のプレニル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤を哺乳動物に投与した後に達成される非常に低い血漿中濃度および高い被験者間の可変性は、薬物が体循環に入る前のシトクロムＰ４５０による高い代謝に起因しうると考えられる。プレニル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤は、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９などのシトクロムＰ４５０酵素系、または他のシトクロムＰ４５０アイソフォームによって代謝されうる。本発明の化合物が、一つ以上のシトクロムＰ４５０酵素系に対して親和性を示す場合、代謝に関わるＰ４５０酵素（複数を含む）に対してより高い親和性を有する別の化合物を相伴って投与すべきである。ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９または他のＰ４５０アイソフォームに対して比較上非常に高い親和性を有する化合物の例には、ピペロニルブトキシド、トロレアンドマイシン、エリスロマイシン、プロアジフェン、イソニアジド、アリルイソプロピルアセトアミド、エチニルエストラジオール、クロラムフェニコール、２−エチニルナフタレンおよびこれらに類するものが挙げられるが、それらに限定されない。こうした高親和性化合物は、式Ｉの化合物と併用した時、式Ｉの化合物の代謝を阻害することによって、個人間の変動を低下させ、実質的な治療活性を有するレベルに式Ｉの化合物の血漿中濃度を上昇させることができる。加えて、本発明の化合物の代謝を阻害すると、化合物の薬物動態学的半減期が延長され、故に、薬力学的効果が延長される。
【０１２１】
本発明の化合物は、本発明の化合物を単独でまたは放射線療法とともに用いることによって生じうる、急性、遅延型、後期および期待悪心を含む悪心または嘔吐を治療するために、抗嘔吐薬と併用することができる。嘔吐の予防および治療のために、本発明の化合物は、他の抗嘔吐薬、特に、ニューロキニン−１受容体拮抗薬、５ＨＴ３受容体拮抗薬（オンダセトロン、グラニセトロン、トロピセトロンおよびザチセトロンなど）、ＧＡＢＡＢ受容体作動薬（バクロフェンなど）、または副腎皮質ホルモン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（デキサメタゾン）、Ｋｅｎａｌｏｇ、Ａｒｉｓｔｏｃｏｒｔ、Ｎａｓａｌｉｄｅ、Ｐｒｅｆｅｒｉｄ、Ｂｅｎｅｃｏｒｔｅｎなど）、またはその他（米国特許第２，７８９，１１８号、同第２，９９０，４０１号、同第３，０４８，５８１号、同第３，１２６，３７５号、同第３，９２９，７６８号、同第３，９９６，３５９号、同第３，９２８，３２６号および同第３，７４９，７１２号）と併用することができる。嘔吐の治療および予防には、ニューロキニン−１受容体拮抗薬、５ＨＴ３受容体拮抗薬および副腎皮質ホルモンとの併用療法が好ましい。
【０１２２】
本発明の化合物との併用されるニューロキニン−１受容体拮抗薬は、例えば、米国特許第５，１６２，３３９号、同第５，２３２，９２９号、同第５，２４２，９３０号、同第５，３７３，００３号、同第５，３８７，５９５号、同第５，４９５，２７０号、同第５，４９４，９２６号、同第５，４９６，８３３号、同第５，６３７，６６９号、同第５，７１９，１４７号；欧州特許公開第０　３６０　３９０号、同第０　３９４　９８９号、同第０　４２８　４３４号、同第０　４２９　３６６号、同第０　４３０　７７１号、同第０　４３６　３３４号、同第０　４４３　１３２号、同第０　４８２　５３９号、同第０　４９８　０６９号、同第０　４９９　３１３号、同第０　５１２　９０１号、同第０　５１２　９０２号、同第０　５１４　２７３号、同第０　５１４　２７４号、同第０　５１４　２７５号、同第０　５１４　２７６号、同第０　５１５　６８１号、同第０　５１７　５８９号、同第０　５２０　５５５号、同第０　５２２　８０８号、同第０　５２８　４９５号、同第０　５３２　４５６号、同第０　５３３　２８０号、同第０　５３６　８１７号、同第０　５４５　４７８号、同第０　５５８　１５６号、同第０　５７７　３９４号、同第０　５８５　９１３号、同第０　５９０　１５２号、同第０　５９９　５３８号、同第０　６１０　７９３号、同第０　６４３　４０２号、同第０　６８６　６２９号、同第０　６９３　４８９号、同第０　６９４　５３５号、同第０　６９９　６５５号、同第０　６９９　６７４号、同第０　７０７　００６号、同第０　７０８　１０１号、同第０　７０９　３７５号、同第０　７０９　３７６号、同第０　７１４　８９１号、同第０　７２３　９５９号、同第０　７３３　６３２号および同第０　７７６　８９３号；ＰＣＴ国際特許公開公報第９０／０５５２５号、同第９０／０５７２９号、同第９１／０９８４４号、同第９１／１８８９９号、同第９２／０１６８８号、同第９２／０６０７９号、同第９２／１２１５１号、同第９２／１５５８５号、同第９２／１７４４９号、同第９２／２０６６１号、同第９２／２０６７６号、同第９２／２１６７７号、同第９２／２２５６９号、同第９３／００３３０号、同第９３／００３３１号、同第９３／０１１５９号、同第９３／０１１６５号、同第９３／０１１６９号、同第９３／０１１７０号、同第９３／０６０９９号、同第９３／０９１１６号、同第９３／１００７３号、同第９３／１４０８４号、同第９３／１４１１３号、同第９３／１８０２３号、同第９３／１９０６４号、同第９３／２１１５５号、同第９３／２１１８１号、同第９３／２３３８０号、同第９３／２４４６５号、同第９４／００４４０号、同第９４／０１４０２号、同第９４／０２４６１号、同第９４／０２５９５号、同第９４／０３４２９号、同第９４／０３４４５号、同第９４／０４４９４号、同第９４／０４４９６号、同第９４／０５６２５号、同第９４／０７８４３号、同第９４／０８９９７号、同第９４／１０１６５号、同第９４／１０１６７号、同第９４／１０１６８号、同第９４／１０１７０号、同第９４／１１３６８号、同第９４／１３６３９号、同第９４／１３６６３号、同第９４／１４７６７号、同第９４／１５９０３号、同第９４／１９３２０号、同第９４／１９３２３号、同第９４／２０５００号、同第９４／２６７３５号、同第９４／２６７４０号、同第９４／２９３０９号、同第９５／０２５９５号、同第９５／０４０４０号、同第９５／０４０４２号、同第９５／０６６４５号、同第９５／０７８８６号、同第９５／０７９０８号、同第９５／０８５４９号、同第９５／１１８８０号、同第９５／１４０１７号、同第９５／１５３１１号、同第９５／１６６７９号、同第９５／１７３８２号、同第９５／１８１２４号、同第９５／１８１２９号、同第９５／１９３４４号、同第９５／２０５７５号、同第９５／２１８１９号、同第９５／２２５２５号、同第９５／２３７８９号、同第９５／２６３３８号、同第９５／２８４１８号、同第９５／３０６７４号、同第９５／３０６８７号、同第９５／３３７４４号、同第９６／０５１８１号、同第９６／０５１９３号、同第９６／０５２０３号、同第９６／０６０９４号、同第９６／０７６４９号、同第９６／１０５６２号、同第９６／１６９３９号、同第９６／１８６４３号、同第９６／２０１９７号、同第９６／２１６６１号、同第９６／２９３０４号、同第９６／２９３１７号、同第９６／２９３２６号、同第９６／２９３２８号、同第９６／３１２１４号、同第９６／３２３８５号、同第９６／３７４８９号、同第９７／０１５５３号、同第９７／０１５５４号、同第９７／０３０６６号、同第９７／０８１４４号、同第９７／１４６７１号、同第９７／１７３６２号、同第９７／１８２０６号、同第９７／１９０８４号、同第９７／１９９４２号および同第９７／２１７０２号；英国特許公開第２　２６６　５２９号、第２　２６８　９３１号、第２　２６９　１７０号、第２　２６９　５９０号、第２　２７１　７７４号、第２　２９２　１４４号、第２　２９３　１６８号、第２　２９３　１６９号および第２　３０２　６８９号に詳細に記載されている。こうした化合物の調製は、上記の特許および公報に詳細に記載されている。
【０１２３】
本発明の化合物との併用に特に好ましいニューロキニン−１受容体拮抗薬は、米国特許第５，７１９，１４７号に記載されている２−（Ｒ）−（１−（Ｒ）−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）エトキシ）−３−（Ｓ）−（４−フルオロフェニル）−４−（３−（５−オキソ−１Ｈ，４Ｈ−１，２，４−トリアゾロ）メチル）モルホリン、またはその医薬適合性の塩である。
【０１２４】
癌の治療のために、本発明の化合物を別の薬理学的に活性な薬剤（複数を含む）と併用することが望ましいことがある。本発明の化合物と他の薬理学的に活性な薬剤（複数を含む）は、同時に、逐次的に、または組合せて患者に投与することができる。例えば、本化合物は、他の活性薬剤（複数を含む）と直接組合せて用いてもよいし、または他の活性薬剤（複数を含む）の投与前、投与と同時または投与後に投与してもよい。一般に、こうした組合せた形態での使用には、現在利用可能な剤形の既知治療薬が適するだろう。
【０１２５】
例えば、本発明の化合物は、本発明の化合物および放射線療法の使用に随伴する嘔吐の軽減において、同時に、別々にまたは逐次的に使用するための抗嘔吐薬などの別の治療薬とともに、複合製剤で提供することができる。こうした複合製剤は、例えば、ツインパックの形態であることができる。好ましい複合薬は、本発明の化合物とともに上に記載したような抗嘔吐薬を含む。
【０１２６】
外部から照射されたビームから、または小さな放射線源の移植によって配給されるＸ線またはγ線を含む放射線療法をプレニル−蛋白質トランスフェラーゼの本阻害剤と併用して、癌を治療することもできる。
【０１２７】
加えて、本発明の化合物は、１９９７年１０月２３日発行の国際公開公報第９７／３８６９７号に記載されているような放射線増感剤として用いることもできる。この公報は、本明細書中に参照として取り入れる。
【０１２８】
本化合物は、細胞増殖を開始させる核シグナルに細胞表面増殖因子受容体を接続するシグナル伝達経路の一部である他の阻害剤と組合せた形であっても有用でありうる。従って、本化合物は、ファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼの活性のファルネシルピロリン酸競合的阻害剤と併用してもよいし、またはＲａｆ拮抗活性を有する化合物と併用してもよい。本化合物は、ゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼの選択的阻害剤である化合物と共同投与することもできる。
【０１２９】
詳細には、本発明の化合物がファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼの選択的阻害剤である場合、ゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼの選択的阻害剤である化合物（複数を含む）と共同投与することによって、向上した治療効果をもたらすことができる。
【０１３０】
詳細には、次の特許および公報に記載されている化合物は、本発明のファルネシルピロリン酸競合的阻害剤成分として有用でありうる：米国特許出願第０８／２５４，２２８号および同第０８／４３５，０４７号。これらの特許および公報は、本明細書中に参照として取り入れる。
【０１３１】
二つ以上の蛋白質基質競合的阻害剤およびファルネシルピロリン酸競合的阻害剤を同時にまたは逐次的にまたはいずれかの順番で投与することを含む本発明の実施方法において、こうした投与は、経口投与であってもよいし、または非経口投与（静脈内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、皮下経路、直腸経路および局所経路の投与を含む）であってもよい。そうした投与は経口投与であることが好ましい。こうした投与が経口的且つ同時的投与であることはさらに好ましい。蛋白質基質競合的阻害剤およびファルネシルピロリン酸競合的阻害剤を逐次的に投与する時、各投与は、同じ方法によるものであってもよいし、または異なる方法のものであってもよい。
【０１３２】
本化合物は、１９９８年４月６日出願の米国特許出願第０９／０５５，４８７号および１９９８年１０月１５日発行の国際公開公報第９８／４４７９７号（これらは、本明細書中に参照として取り入れる）に記載されているような、癌の治療法のインテグリン拮抗薬と組合せたものであっても有用である。
【０１３３】
本明細書中で用いられるインテグリン拮抗薬という用語は、脈管形成の調節または腫瘍細胞の増殖および侵襲性に関与するインテグリン（複数を含む）への生理学的配位子の結合を選択的に拮抗、阻害または阻止する化合物を指す。詳細には、この用語は、αｖβ３インテグリンへの生理学的配位子の結合を選択的に拮抗、阻害もしくは阻止する化合物、αｖβ５インテグリンへの生理学的配位子の結合を選択的に拮抗、阻害もしくは阻止する化合物、αｖβ３インテグリンとαｖβ５インテグリンの両方への生理学的配位子の結合を拮抗、阻害もしくは阻止する化合物、または毛細血管内皮細胞に発現された特定のインテグリン（複数を含む）の活性を拮抗、阻害もしくは阻止する化合物を指す。この用語は、α１β１、α２β１、α５β１、α６β１およびα６β４インテグリンの拮抗薬も指す。この用語は、あらゆる組合せのαｖβ３インテグリン、αｖβ５インテグリン、α１β１、α２β１、α５β１、α６β１およびα６β４インテグリンの拮抗薬も指す。本化合物は、脈管形成を阻害し、それによって腫瘍細胞の増殖および侵襲性を阻害する他の薬剤（アンジオスタチンおよびエンドスタチンが挙げられるが、それらに限定されない）とともであっても有用でありうる。
【０１３４】
本発明の化合物は、癌を治療するために、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ）の阻害剤と組合せても有用でありうる。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼに対して阻害活性を有する化合物は、当該技術で既知のアッセイを用いることによって容易に特定することができる。例えば、米国特許第４，２３１，９３８号のカラム６および国際公開公報第８４／０２１３１３号の３０〜３３頁に記載または引用されているアッセイを参照のこと。用語「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤」および「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの阻害剤」は、本明細書で用いられる時には同じ意味を有する。
【０１３５】
用いることができるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の例には、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）；米国特許第４，２３１，９３８号、同第４，２９４，９２６号および同第４，３１９，０３９号を参照のこと）、シムバスタチン（ＺＯＣＯＲ（登録商標）；米国特許第４，４４４，７８４号、同第４，８２０，８５０号および同第４，９１６，２３９号を参照のこと）、プラバスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）；米国特許第４，３４６，２２７号、同第４，５３７，８５９号、同第４，４１０，６２９号、同第５，０３０，４４７号および同第５，１８０，５８９号を参照のこと）、フルバスタチン（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標））；米国特許第５，３５４，７７２号、同第４，９１１，１６５号、同第４，９２９，４３７号、同第５，１８９，１６４号、同第５，１１８，８５３号、同第５，２９０，９４６号および同第５，３５６，８９６号を参照のこと）、アトルバスタチン（ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）、米国特許第５，２７３，９９５号、同第４，６８１，８９３号、同第５，４８９，６９１号および同第５，３４２，９５２号を参照のこと）、およびセリバスタチン（リバスタチンとしても知られており、ＢＡＹＣＨＯＬ（登録商標）；米国特許第５，１７７，０８０号を参照こと）が挙げられるが、それらに限定されない。本方法に用いることができるこれらおよびさらなるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の構造式は、Ｍ．Ｙａｌｐａｎｉの「コレステロール低下薬（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　Ｌｏｗｅｒｉｎｇ　Ｄｒｕｇｓ）」、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　＆　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、８５〜８９頁（１９９６年２月５日）の８７頁ならびに米国特許第４，７８２，０８４号および同第４，８８５，３１４号に記載されている。本明細書中で用いられるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤という用語は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害活性を有する化合物のすべての医薬適合性ラクトンおよび開環酸形態（すなわち、ラクトン環が、開環されて、遊離酸を形成している場合）ならびに塩およびエステル形態を包含し、従って、こうした塩、エステル、開環酸およびラクトン形態の使用は、本発明の範囲に包含される。ラクトン部分およびその対応する開環酸形の例を構造式ＩおよびＩＩとして下に示す。
【０１３６】
【化４２】

【０１３７】
開環酸形が存在しうるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤において、塩およびエステル形態は、好ましくは開環酸から生成することができ、こうした形態すべてが、本明細書中で用いられる用語「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤」の意味に包含される。好ましくは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、ラバスタチンおよびシムバスタチンから選択され、最も好ましくはシムバスタチンである。本明細書において、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤に関しての用語「医薬適合性の塩」は、遊離酸と、適する有機または無機塩基、詳細には、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、亜鉛およびテトラメチルアンモニウムなどのカチオンから形成されるもの、ならびにアンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、リシン、アルギニン、オルニチン、クロリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、１−ｐ−クロロベンジル−２−ピロリジン−１’−イル−メチル−ベンズイミダゾール、ジエチルアミン、ピペラジンおよびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンなどのアミンから形成される塩とを反応させることによって一般に調製される、本発明で用いられる化合物の非毒性塩を意味するものとする。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の塩形態のさらなる例には、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エディシレート、エストレート、エシレート、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアニサニレート、ヘキシルレソルシネート、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエート、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ムケート、ナプシル酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクレート、トシル酸塩、トリエチオダイドおよび吉草酸塩が挙げられるが、それらに限定されない。
【０１３８】
記載したＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤化合物のエステル誘導体は、温血動物の血流に吸収された時、薬物体を放出するように分解し、その薬物が向上した治療有効度をもたらすようにすることができるプロドラッグとしての役割を果たすことができる。
【０１３９】
同様に、本化合物は、ＮＦ−１、再狭窄、腎嚢胞、デルタ肝炎ウイルスおよび肝炎関連ウイルス感染症、ならびに真菌感染症の治療および予防に有効である薬剤と組合せると有用でありうる。
【０１４０】
固定剤形として調合される場合、こうした複合プロドラッグは、上に記載した用量範囲内の本発明と認可されている用量範囲内の他の医薬活性薬剤（複数を含む）とを併用する。あるいは、多重複合型の調合が不適当な時には、本発明の複合薬と既知の医薬適合性薬剤（複数を含む）とを逐次的に使用することができる。
【０１４１】
本化合物は、抗腫瘍薬のプロドラッグと組合せても有用である。詳細には、本化合物は、オリゴペプチド（すなわち、酵素活性前立腺特異抗原（ＰＳＡ））および抗腫瘍薬を含む抱合体（「ＰＳＡ抱合体」と呼ばれる）と、同時にまたは逐次的に共同投与することができる。こうした共同投与は、前立腺癌の治療に、または癌細胞によって分泌される、癌細胞を直接取巻く酵素活性ＰＳＡの存在によって特徴づけられる他の癌の治療に特に有用であろう。
【０１４２】
ＰＳＡ抱合体であり、従って、こうした共同投与に有用である化合物、およびその合成方法は、以下の特許、係属特許出願および公報（これらは、本明細書中に参照として取り入れる）において見出すことができる：
１９９７年２月４日交付の米国特許第５，５９９，６８６号；
国際公開公報第９６／００５０３号（１９９６年１月１１日）；１９９５年３月１５日出願の米国特許出願第０８／４０４，８３３号；１９９５年６月６日出願の米国特許出願第０８／４６８，１６１号；
１９９９年２月２日交付の米国特許第５，８６６，６７９号；
１９９９年１２月７日交付の米国特許第５，９９８，３６２号；
１９９９年９月７日交付の米国特許第５，９４８，７５０号；
国際公開公報第９９／０２１７５号（１９９９年１月２１日）；１９９８年７月９日出願の米国特許出願第０９／１１２，６５６号；および
国際公開公報第９９／２８３４３号（１９９９年６月１０日）；１９９８年１１月１７日出願の米国特許出願第０９／１９３，３６５号。
【０１４３】
活性治療薬が酵素活性ＰＳＡの作用によって放出され、そのためこうした共同投与に有用でありうるプロドラッグとして記載されている化合物、およびその合成方法は、次の特許、係属特許出願および公報（これらは、本明細書中に参照として取り入れる）において見出すことができる：国際公開公報第９８／５２９６６号（１９９８年１１月２６日）。
【０１４４】
特定したすべての特許、公報および係属特許出願は、本明細書中に参照として取り入れる。
【０１４５】
本発明の化合物は、組成物中のファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼ（ＦＰＴアーゼ）の存在および量を迅速に決定するためのアッセイにおける構成要素としても有用である。例えば、試験を受ける組成物を分割し、その二つ分を、ＦＰＴアーゼの既知の基質（例えば、アミノ末端にシステインを有するテトラペプチド）とファルネシルピロリン酸と本発明の化合物を含む複数の混合物（本発明の化合物は、そうした混合物のうちの一つに含まれる）と接触させてもよい。当該技術で既知の、ＦＰＴアーゼが基質をファルネシル化させるために充分な時間、アッセイ混合物をインキュベートした後、そのアッセイ混合物の化学的内容をよく知られている免疫論理法、放射線化学法またはクロマトグラフ法によって決定することができる。本発明の化合物は、ＦＰＴアーゼの選択的阻害剤であるため、本化合物を含有するアッセイ混合物中の不変の基質の存在に対する本発明の化合物を含まないアッセイ混合物中の基質量の欠如または量的減少は、試験を受ける組成物中のＦＰＴアーゼの存在を示す。
【０１４６】
上に記載したようなアッセイは、ファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼを含有する組織サンプルの特定および酵素の定量に有用であることは、通常の当業者には容易にわかるだろう。従って、本発明の強力な阻害剤化合物を活性部位滴定アッセイに用いて、サンプルの酵素の量を決定することができる。未知量のファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼ、過剰量のＦＰＴアーゼの既知基質（例えば、アミン末端にシステインを有するテトラペプチド）およびファルネシルピロリン酸を含有する一定量の組織抽出物から成る一連のサンプルを、多様な濃度の本発明の化合物の存在下で適切な時間、インキュベートする。サンプルの酵素活性を５０％に抑制するために必要な、充分に強力な阻害剤（すなわち、アッセイ容器内の酵素濃度より実質的に小さいＫｉを有するもの）の濃度は、特定のサンプル中の酵素の濃度のおよそ半分である。
【０１４７】
実施例
実施例は、本発明のさらなる理解を助長するためのものである。用いられる特定の材料、化学種および条件は、本発明のさらなる実例となるものであって、本発明の妥当な範囲を制限するためのものではない。
【０１４８】
実施例１
Ｎ−イソプロピル−２−（１−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０１４９】
【化４３】

段階Ａ：　Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの調製
ＭｅＯＨ　５ｍＬ中のピリジン−４−カルボキシアルデヒド（０．５３ｇ、４．９５ｍｍｏｌ）の溶液にイソプロピルアミン（０．４２１ｍＬ、４．９５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で２５分間攪拌し、その後、０℃に冷却した。固体水素化ホウ素ナトリウム（０．２０６ｇ、５．４４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で８０分間攪拌した。塩化アンモニウム飽和水溶液を反応混合物に添加し、得られた混合物をガスの発生が終わるまで攪拌した。その混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２と炭酸水素ナトリウム飽和水溶液の間で分配し、その水溶液をＣＨ_２Ｃｌ_２（７ｘ）で抽出した。混合有機溶液を乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、真空下で濃縮して、透明な油を生じた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　１５１（Ｍ＋１）。
【０１５０】
段階Ｂ：　Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
ＴＨＦ　１０ｍＬおよびＤＭＦ　５ｍＬ中のＮ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミン（０．６５０ｇ）および２−フェニルインドール−３−酢酸（１．０９ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。ＥＤＣ（０．９１３ｇ、４．７６ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合物を室温で６時間攪拌し、その後、ＥｔＯＡｃと１ＮのＮａＨＳＯ_４の間で分配した。その水溶液を炭酸ナトリウムの添加によって塩基性化し、その後、ＥｔＯＡｃ（４ｘ）で抽出した。混合有機溶液を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、真空下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（直線勾配、１０％から４０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）によって、表題化合物を白色の泡沫として生じた。Ｃ_２５Ｈ_２５Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３８４．２０７１；　実測値：３８４．２０７６（ＦＡＢ）。
【０１５１】
段階Ｃ：　Ｎ−イソプロピル−２−（１−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
上の段階Ｂに記載したインドール（０．５００ｇ、０２６１ｍｍｏｌ）を、Ｅｔ_２Ｏ　３ｍＬ中の１８−クラウン−６（０．００７ｇ、０．０３ｍｍｏｌ）およびＫＯｔＢｕ（０．０４４ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。得られた橙色の懸濁液を室温で１５分間攪拌した。ヨウ化メチル（０．０２４ｍＬ、０．３９ｍｍｏｌ）を注射器によって添加し、反応混合物を室温で３時間２０分攪拌した。その後、その混合物をＥｔＯＡｃと水の間で分配した。その水溶液をＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出した。混合有機溶液を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、真空下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（直線勾配、９９％ＣＨ_２Ｃｌ_２／０．９％ＭｅＯＨ／０．１％ＮＨ_４ＯＨ水溶液〜９７％ＣＨ_２Ｃｌ_２／３．６％ＭｅＯＨ／０．４％ＮＨ_４ＯＨ水溶液）によって、表題化合物を生じ、これをその塩酸塩として単離した。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３９８（Ｍ＋１）。
【０１５２】
実施例２
Ｎ−イソプロピル−２−（１−メチル−２−ｏ−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチルアセトアミドの調製
【０１５３】
【化４４】

段階Ａ：　（２−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトニトリルの調製
０℃で、乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２　１３０ｍＬ中のインドール−３−アセトニトリル（１３．０ｇ、８２．２３ｍｍｏｌ）およびシリカゲル（１３ｇ）の溶液にＮＢＳ（１４．８ｇ、８３．２３ｍｍｏｌ）を添加した。その後、氷浴を取外し、反応混合物を室温で１６時間攪拌した。その溶液を濾過し、濾液を５％メタ重亜硫酸ナトリウム（３ｘ）で洗浄し、その後、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濾過して、真空下で乾燥させた。フラッシュクロマトグラフィー（５％から３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって、表題生成物を生じた。
【０１５４】
段階Ｂ：　（２−ｏ−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトニトリルの調製
トルエン１２ｍＬおよびエタノール１２ｍＬ中の（２−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトニトリル（２００ｍｇ、．８５１ｍｍｏｌ）およびオルト−トリルボロン酸（１７４ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の溶液にＮａ_２ＣＯ_３の１Ｍ水溶液（２．１３ｍＬ、２．１３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（Ｐｈ_３）_４（４９．２ｍｇ、．０４ｍｍｏｌ）およびＬｉＣｌ（１０８．２ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を加熱して３時間還流させ、その後、室温に冷却し、１４時間攪拌した。完了し次第、反応混合物を真空下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（０％から２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製によって、表題生成物を生じた。
【０１５５】
段階Ｃ：　（２−ｏ−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の調製
ＭｅＯＨ　５ｍＬ中の２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトニトリル（０．１９６ｇ、０．７９６ｍｍｏｌ）の溶液に４０％ＮａＯＨ水溶液５ｍＬを添加した。反応混合物を加熱して１６時間還流させ、その後、室温に冷却した。その後、その溶液を３ＮのＨＣｌ水溶液で酸性化し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｘ）で洗浄した。その溶液を乾燥させて（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、真空下で濃縮して、表題生成物を生じた。
【０１５６】
段階Ｄ：　Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−２−（２−ｏ−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
ＤＭＦ　０．８００ｍＬ中の（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸（０．１００ｇ、０．３７７ｍｍｏｌ）の溶液にＮ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミン（０．０５６ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．２００ｍＬ、１．１３ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（０．２１６ｇ、０．４１０ｍｍｏｌ）を添加した。その溶液を室温で３日間攪拌した。反応が完了し次第、溶液を逆相クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物を生じた。
【０１５７】
段階Ｅ：　Ｎ−イソプロピル−２−（１−メチル−２−ｏ−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチルアセトアミドの調製
Ｅｔ_２Ｏ（１ｍＬ）中の１８−クラウン−６（０．００２ｇ、０．０１ｍｍｏｌ）およびＫＯｔＢｕ（０．０１０ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の懸濁液にＮ−イソプロピル−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−２−（２−ｏ−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドを一度に添加した。室温で１５分間攪拌した後、ヨードメタン（０．０１３ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２４時間攪拌し、その後、水で反応を停止させた。その混合物をＥｔＯＡｃに注入し、水で洗浄して、乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濾過して、真空下で濃縮した。逆相ＨＰＬＣによる精製によって、表題生成物を生じた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　４１２（Ｍ＋１）。
【０１５８】
実施例３
Ｎ−イソプロピル−２−（７−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０１５９】
【化４５】

段階Ａ：　Ｎ−イソプロピル−４−オキソ−４−フェニル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）ブタンアミドの調製
室温で、ＤＭＦ　３．５ｍＬ中の４−オキソ−４−フェニル酪酸（０．５００ｇ、２．８１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミン（０．４６４ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（０．５９１ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）を添加した。その溶液から白色の固体が沈殿した。反応混合物を７時間攪拌し、その後、ＥｔＯＡｃと炭酸水素ナトリウム飽和水溶液の間で分配した。その水溶液をＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出した。混合有機溶液を１：１の塩化ナトリウム飽和水溶液：水（１ｘ）および塩化ナトリウム飽和水溶液（１ｘ）で洗浄し、その後、硫酸ナトリウムで乾燥させて、濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（直線勾配、９９％ＣＨ_２Ｃｌ_２／０．９％ＭｅＯＨ／０．１％ＮＨ_４ＯＨ水溶液〜９７％ＣＨ_２Ｃｌ_２／２．７％ＭｅＯＨ／０．３％ＮＨ_４ＯＨ水溶液）によって、表題化合物を生じた。
【０１６０】
段階Ｂ：　Ｎ−イソプロピル−２−（７−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
段階Ａで調製したケトン（０．０５１ｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）をトルエン１ｍＬに溶解した。塩酸オルト−トリルヒドラジン（０．０２６ｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）を一度に添加し、得られた懸濁液を１００℃に加熱した。１時間後、反応混合物を室温に冷却し、真空下で濃縮した。未精製のヒドラゾンを塩化亜鉛（０．１１２ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）と混合し、その混合物を１７０℃に加熱した。５分後、その反応混合物を室温に冷却し、アセトンで希釈して、褐色の溶液を得た。その溶液をＥｔＯＡｃと水の間で分配した。その有機溶液を塩化ナトリウム飽和水溶液（１ｘ）で洗浄した。その水溶液をＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出して、混合有機溶液を塩化ナトリウム飽和水溶液（１ｘ）で洗浄し、その後、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して、真空下で濃縮した。逆相ＨＰＬＣによる精製によって、表題化合物をそのトリフルオロ酢酸塩として生じた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３９８（Ｍ＋１）。
【０１６１】
実施例４
２−［１−（２−ブロモベンジル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０１６２】
【化４６】

段階Ａ：　２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
ＴＨＦ　４８ｍＬおよびＤＭＦ　４８ｍＬ中のＮ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミン（４．９３ｇ、３２．８７ｍｍｏｌ）およびインドール−３−酢酸（５．７５ｇ、３２．８１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。ＥＤＣ（６．９２ｇ、３６．１０ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合物を室温で１５時間攪拌し、その後、ＥｔＯＡｃと炭酸水素ナトリウム飽和水溶液の間で分配した。その水溶液をＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出した。混合有機溶液を塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、真空下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（直線勾配、９８％ＣＨ_２Ｃｌ_２／１．８％ＭｅＯＨ／０．２％ＮＨ_４ＯＨ水溶液〜９５％ＣＨ_２Ｃｌ_２／４．５％ＭｅＯＨ／０．５％ＮＨ_４ＯＨ水溶液）によって、ピンク色の泡沫を生じた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３０８（Ｍ＋１）。
【０１６３】
段階Ｂ：　２−［１−（２−ブロモベンジル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製　２５ｍＬの丸底フラスコに鉱物油中の水素化ナトリウムの６０％分散液（０．０３３ｇ、０．８１ｍｍｏｌ）を充填した。その懸濁液をヘキサン（２ｍＬ）で洗浄し、フラスコにＤＭＦ　２．５ｍＬおよび段階Ａで調製したインドール０．２５０ｇを充填した。その懸濁液を室温で３０分間攪拌して、緑色の溶液を得た。その溶液を０℃に冷却し、臭化２−ブロモベンジル（０．２０３ｇ、０．８１ｍｍｏｌ）を一度に添加した。１時間後、塩化アンモニウム飽和水溶液で反応を停止させ、その後、ＥｔＯＡｃと炭酸水素ナトリウム飽和水溶液の間で分配した。その水溶液をＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出した。混合有機溶液を塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、真空下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（直線勾配、９９％ＣＨ_２Ｃｌ_２／０．９％ＭｅＯＨ／０．１％ＮＨ_４ＯＨ水溶液〜９７％ＣＨ_２Ｃｌ_２／２．７％ＭｅＯＨ／０．３％ＮＨ_４ＯＨ水溶液）によって、白色の泡沫を生じた。Ｃ_２６Ｈ_２６ＢｒＮ_３Ｏについて計算した正確な質量：４１６．１３３２；　実測値：４７６．１３２３（ＦＡＢ）。
【０１６４】
実施例５
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０１６５】
【化４７】

段階Ａ：　（２−フェニル−１Ｈ−インドール−１−イル）酢酸の調製
粉砕したばかりのＫＯＨ（２．６９ｇ、４８．０１ｍｍｏｌ）およびＤＭＳＯを混合し、室温で５分間攪拌した。２−フェニルインドール（２．００ｇ、１０．３５ｍｍｏｌ）を一度に添加し、得られた混合物を４５分間攪拌した。その反応混合物を０℃に冷却し、ブロモ酢酸メチル（１．９６ｍＬ、２０．７０ｍｍｏｌ）を注射器によって添加した。反応混合物を室温で８時間３０分攪拌し、その後、水に注入した。その混合物をＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出して、残留出発原料を除去した。その後、濃ＣＨｌの添加によってその水溶液のｐＨを４にし、溶液をＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出した。有機抽出物を乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、真空下で濃縮して、表題化合物を生じた。
【０１６６】
段階Ｂ：　Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
ＤＭＦ　１ｍＬ中の上の段階Ａからの酸（０．０５０ｇ、０．１９９ｍｍｏｌ）およびＮ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミン（０．０３３ｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（０．０６９ｍＬ、０．４００ｍｍｏｌ）およびＰＹＢＯＰ（０．１１４ｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１５時間攪拌し、その後、逆相ＨＰＬＣ（Ｃ_１８、アセトニトリル／水／ＴＦＡ）によって直接精製した。フラッシュクロマトグラフィー（直線勾配、９９％ＣＨ_２Ｃｌ_２／０．９％ＭｅＯＨ／０．１％ＮＨ_４ＯＨ水溶液〜９７％ＣＨ_２Ｃｌ_２／２．７％ＭｅＯＨ／０．３％ＮＨ_４ＯＨ水溶液）によってさらに精製して、表題化合物を白色の泡沫として生じた。Ｃ_２５Ｈ_２５Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３８４．２０７０；　実測値：３８４．２０５４（ＦＡＢ）。
【０１６７】
実施例６
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミドの調製
【０１６８】
【化４８】

段階Ａ：　２−フェニル−３−ピロリジン−１−イルメチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの調製
ＨＯＡｃ／ジオキサン（２ｍＬ／８ｍＬ）中の２−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン（１．０ｇ、５．１５ｍｍｏｌ、Ｈａｎｄｓ，Ｄ．；Ｂｉｓｈｏｐ，Ｂ．；Ｃａｍｅｒｏｎ，Ｍ．；Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｊ．Ｓ．；Ｃｏｔｔｒｅｌｌ，Ｉ．Ｆ．；Ｗｒｉｇｈｔ，Ｓ．Ｈ．Ｂ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　１９９６，８７７−８８２に従って調製したもの）、ピロリジン（２．２ｇ、３０．８９ｍｍｏｌ）およびホルムアルデヒド（３７重量％、２．５１ｇ、３０．８９ｍｍｏｌ）の溶液を室温で７２時間攪拌した。その溶液を３ＮのＨＣｌ　１ｍＬ／Ｈ_２Ｏ　１０ｍＬで酸性化し、エーテルで洗浄した。その後、水相を固体Ｋ_２ＣＯ_３で塩基性化し、白色の沈殿が生成した。その沈殿を水で、その後ＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄して、表題生成物を生じた。
【０１６９】
段階Ｂ：　２−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−アセトニトリルの調製
ＭｅＯＨ中の２−フェニル−３−ピロリジン−１−イルメチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジンの溶液（７ｍＬ）にヨードメタン（０．９５８ｇ、６．７５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。その後、ＭｅＯＨを真空下で除去した。残留物をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、水中のＫＣＮ（０．９１６ｇ、１４．０６ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を還流温度で１６時間攪拌した。追加のＫＣＮ（０．５４９ｇ、８．４４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を還流温度で７２時間攪拌し続けた。反応混合物を室温に冷却して、濾過し、水で洗浄して、表題生成物を生じた。
【０１７０】
段階Ｃ：　（２−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−酢酸の調製
ＭｅＯＨ　１５ｍＬ中の２−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−アセトニトリル（０．７０３ｇ、３．０１４ｍｍｏｌ）の溶液に４０％ＮａＯＨ水溶液１５ｍＬを添加した。反応混合物を加熱して２６時間還流させ、その後、室温に冷却した。その溶液を３ＮのＨＣｌで酸性化し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｘ）で洗浄した。その後、その水溶液をｎ−ブタノール（３ｘ）で洗浄した。ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液とｎ−ブタノール溶液の両者を混合し、真空下で濃縮して、表題生成物を生じた。
【０１７１】
段階Ｄ：　Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミドの調製
ＤＭＳＯ　１ｍＬ中の（２−フェニル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）−酢酸（０．２００ｇ、０．７９３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミン（０．１１９ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．４１ｍＬ、２．３８ｍｍｏｌ）およびＰＹＢＯＰ（０．４５４ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を添加した。その溶液を室温で３日間攪拌した。完了し次第、反応混合物を逆相ＨＰＬＣによって直接精製して、表題生成物を生じた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　４１２（Ｍ＋１）。
【０１７２】
実施例７
Ｎ−ベンジル−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
【０１７３】
【化４９】

上記表題化合物は、実施例１の段階Ｂの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにベンジルイソプロピルアミンを用いた。
【０１７４】
実施例８
Ｎ−エチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０１７５】
【化５０】

上記表題化合物は、実施例１の段階Ｂの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに４−（エチルアミノメチル）ピリジンを用いた。
【０１７６】
実施例９
２−［１−（４−ブロモベンジル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０１７７】
【化５１】

上記表題化合物は、実施例４の段階Ｂの手順に従って調製したが、臭化２−ブロモベンジルの代わりに臭化４−ブロモベンジルを用いた。Ｃ_２６Ｈ_２６ＢｒＮ_３Ｏについて計算した正確な質量：４７６．１３３２；　実測値：４７６．１３１２（ＦＡＢ）。
【０１７８】
実施例１０
２−［１−（３−ブロモベンジル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０１７９】
【化５２】

上記表題化合物は、実施例４の段階Ｂの手順に従って調製したが、臭化２−ブロモベンジルの代わりに臭化３−ブロモベンジルを用いた。Ｃ_２６Ｈ_２６ＢｒＮ_３Ｏについて計算した正確な質量：４７６．１３３２；　実測値：４７６．１３１２（ＦＡＢ）。
【０１８０】
実施例１１
【０１８１】
【化５３】

２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−３−イルメチル）アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ｂの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに３，３’−ジピコリルアミンを用いた。
【０１８２】
実施例１２
２−（１−ベンジル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０１８３】
【化５４】

上記表題化合物は、実施例４の段階Ｂの手順に従って調製したが、臭化２−ブロモベンジルの代わりに臭化ベンジルを用いた。Ｃ_２６Ｈ_２７Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３９８．２２２７；　実測値：３９８．２２０１（ＦＡＢ）。
【０１８４】
実施例１３
２−［２−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０１８５】
【化５５】

上記表題化合物は、実施例３の手順に従って調製したが、段階Ａにおいて４−オキソ−４−フェニル酪酸の代わりに３−（４−ブロモベンゾイル）プロピオン酸を用い、段階Ｂにおいて塩酸オルト−トリルヒドラジンの代わりに塩酸フェニルヒドラジンを用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　４６２（Ｍ＋１）。
【０１８６】
実施例１４
２−（１−エチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０１８７】
【化５６】

上記表題化合物は、実施例１の段階Ｃの手順に従って調製したが、ヨウ化メチルの代わりにヨウ化エチルを用いた。Ｃ_２７Ｈ_２９Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：４１２．２３８３；　実測値：４１２．２３６８（ＦＡＢ）。
【０１８８】
実施例１５
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１−プロピル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０１８９】
【化５７】

上記表題化合物は、実施例１の段階Ｃの手順に従って調製したが、ヨウ化メチルの代わりにヨウ化ｎ−プロピルを用いた。Ｃ_２８Ｈ_３１Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：４２６．２５４０；　実測値：４２６．２５３７（ＦＡＢ）。
【０１９０】
実施例１６
２−（１−ベンジル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドおよびトリフルオロ酢酸１−ベンジル−４−｛［［（１−ベンジル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−３−イル）アセチル］（イソプロピル）アミノ］メチル｝ピリジニウムの調製
【０１９１】
【化５８】

ＤＭＳＯ　２ｍＬの２−（１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド（０．０５０ｇ、０．１６３ｍｍｏｌ）の溶液に固体ＫＯＨを添加した。反応混合物を室温で１５分間攪拌し、その後、臭化ベンジル（０．０３１ｇ、０．１８０ｍｍｏｌ）を注射器によって添加した。室温で５時間攪拌した後、反応混合物を濃ＨＣＬで酸性化し、逆相ＨＰＬＣにより直接精製して、以下のものを得た：
（ａ）２−（１−ベンジル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミド（そのトリフルオロ酢酸塩として）。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　４１４（Ｍ＋１）。
【０１９２】
（ｂ）トリフルオロ酢酸１−ベンジル−４−｛［［（１−ベンジル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−３−イル）アセチル］（イソプロピル）アミノ］メチル｝ピリジニウム。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　４１４（Ｍ＋１）。
【０１９３】
実施例１７
Ｎ−シクロブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−３−イルメチル−アセトアミドの調製
【０１９４】
【化５９】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピリジン−３−カルボキシアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにシクロブチルアミンを用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３９６（Ｍ＋１）。
【０１９５】
実施例１８
Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−３−イルメチル−アセトアミドの調製
【０１９６】
【化６０】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピリジン−３−カルボキシアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにシクロプロピルアミンを用いた。Ｃ_２５Ｈ_２３Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３８１．１９１４；　実測値：３８２．１９０９（ＦＡＢ）。
【０１９７】
実施例１９
２−［２−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミドの調製
【０１９８】
【化６１】

上記表題化合物は、実施例２の段階ＢからＤの手順に従って調製したが、オルト−トリルボロン酸の代わりに２−クロロフェニルボロン酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　４１８（Ｍ＋１）。
【０１９９】
実施例２０
Ｎ，Ｎ−ジアリル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
【０２００】
【化６２】

上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにジアリルアミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３３１（Ｍ＋１）。
【０２０１】
実施例２１
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−３−イルメチル−アセトアミドの調製
【０２０２】
【化６３】

段階Ａ：　Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）プロパン−２−アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピリジン−３−カルボキシアルデヒドを用いた。
【０２０３】
段階Ｂ：　Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−３−イルメチル−アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−（ピリジン−３−イルメチル）プロパン−２−アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３８４（Ｍ＋１）。
実施例２２
（Ｓ）−Ｎ−ｓｅｃ−ブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミドの調製
【０２０４】
【化６４】

段階Ａ：　（Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）ｓｅｃ−ブチル−２−アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、イソプロピルアミンの代わりに（Ｓ）−Ｎ−ｓｅｃ−ブチルアミンを用いた。
【０２０５】
段階Ｂ：　（Ｓ）−Ｎ−ｓｅｃ−ブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに上の段階Ａに記載したような（Ｓ）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）ｓｅｃ−ブチル−２−アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３９８（Ｍ＋１）。
【０２０６】
実施例２３
Ｎ−フラン−３−イルメチル−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
【０２０７】
【化６５】

段階Ａ：　Ｎ−フラン−３−イルメチル−Ｎ−イソプロピルアミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりに３−フルアルデヒドを用いた。
【０２０８】
段階Ｂ：　Ｎ−フラン−３−イルメチル−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに上の段階Ａに記載したようなＮ−フラン−３−イルメチル−Ｎ−イソプロピルアミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。Ｃ_２４Ｈ_２４Ｎ_２Ｏ_２について計算した正確な質量：３７３．１９１１；　実測値：３７３．１９２８（ＦＡＢ）。
【０２０９】
実施例２４
Ｎ−（２−シアノ−エチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
【０２１０】
【化６６】

上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに１−（シクロプロピルアミノ）−プロピオニトリルを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３４４（Ｍ＋１）。
【０２１１】
実施例２５
Ｎ−シクロブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミドの調製
【０２１２】
【化６７】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って調製したが、イソプロピルアミンの代わりにシクロブチルアミンを用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３９６（Ｍ＋１）。
【０２１３】
実施例２６
Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミドの調製
【０２１４】
【化６８】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って調製したが、イソプロピルアミンの代わりにシクロプロピルアミンを用いた。Ｃ_２５Ｈ_２３Ｎ_３Ｏ_２について計算した正確な質量：３８２．１９１４；　実測値：３８２．１８９３（ＦＡＢ）。
【０２１５】
実施例２７
２−［２−（３−クロロ−フェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミドの調製
【０２１６】
【化６９】

上記表題化合物は、実施例２の段階ＢからＤの手順に従って調製したが、オルト−トリルボロン酸の代わりに３−クロロフェニルボロン酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　４１８（Ｍ＋１）。
【０２１７】
実施例２８
Ｎ−（２−シアノ−エチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−（１−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
【０２１８】
【化７０】

上記表題化合物は、実施例１の段階Ｃの手順に従って調製したが、Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの代わりにＮ−（２−シアノ−エチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド（実施例２４）を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３５８（Ｍ＋１）。
【０２１９】
実施例２９
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリミジン−５−イルメチル−アセトアミドの調製
【０２２０】
【化７１】

段階Ａ：　Ｎ−ピリジン−５−イルメチル−Ｎ−イソプロピルアミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピリミジン−５−カルボキシアルデヒドを用いた。
【０２２１】
段階Ｂ：　Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリミジン−５−イルメチル−アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−ピリミジン−５−イルメチル−Ｎ−イソプロピルアミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。Ｃ_２４Ｈ_２４Ｎ_４Ｏについて計算した正確な質量：３８５．２０２３；　実測値：３８５．２０４０（ＦＡＢ）。
【０２２２】
実施例３０
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
【０２２３】
【化７２】

段階Ａ：　Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりに１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキシアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにシクロプロピルアミンを用いた。
【０２２４】
段階Ｂ：　Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−シクロプロピル−Ｎ−（２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。Ｃ_２４Ｈ_２４Ｎ_４Ｏについて計算した正確な質量：３８５．２０２３；　実測値：３８５．２０２３（ＦＡＢ）。
【０２２５】
実施例３１
（＋）−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパンアミドの調製
【０２２６】
【化７３】

上記表題化合物は、実施例３の手順に従って調製したが、段階Ａにおいて４−オキソ−４−フェニル酪酸の代わりに２−メチル−４−オキソ−４−フェニル酪酸を用い、段階Ｂにおいて塩酸オルト−トリルヒドラジンの代わりに塩酸フェニルヒドラジンを用いた。キラルＨＰＬＣによって、（＋）−エナンチオマーを光学的に純粋な形態で得た。Ｃ_２６Ｈ_２７Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３９８．２２２７；　実測値：３９８．２２２８（ＦＡＢ）。
【０２２７】
実施例３２
Ｎ−（２−フリルメチル）−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
【０２２８】
【化７４】

段階Ａ：　Ｎ−フラン−２−イルメチル−Ｎ−イソプロピルアミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりに３−フルアルデヒドを用いた。
【０２２９】
段階Ｂ：　Ｎ−（２−フリルメチル）−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−フラン−２−イルメチル−Ｎ−イソプロピルアミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３７３（Ｍ＋１）。
【０２３０】
実施例３３
Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（２−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
【０２３１】
【化７５】

段階Ａ：　Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（２−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりに１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキシアルデヒドを用いた。
【０２３２】
段階Ｂ：　Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（２−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−イソプロピル−Ｎ−（２−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３８７（Ｍ＋１）。
【０２３３】
実施例３４
Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピラジン−２−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２３４】
【化７６】

段階Ａ：　Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（ピラジン−２−イルメチル）アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピラジン−２−カルボキシアルデヒドを用いた。
【０２３５】
段階Ｂ：　Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピラジン−２−イルメチル）アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−シクロプロピル−Ｎ−（ピラジン−２−イルメチル）アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。Ｃ_２４Ｈ_２２Ｎ_４Ｏについて計算した正確な質量：３８３．１８６９；　実測値：３８３．１８６６（ＦＡＢ）。
【０２３６】
実施例３５
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（３−フリルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
【０２３７】
【化７７】

段階Ａ：　Ｎ−フラン−３−イルメチル−Ｎ−シクロプロピルアミン
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりに３−フラアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにシクロプロピルアミンを用いた。
【０２３８】
段階Ｂ：　Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（３−フリルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−フラン−３−イルメチル−Ｎ−シクロプロピルアミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。Ｃ_２４Ｈ_２２Ｎ_２Ｏ_２について計算した正確な質量：３７１．１７４４；　実測値：３７１．１７５４（ＦＡＢ）。
【０２３９】
実施例３６
Ｎ−（２−シアノエチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２４０】
【化７８】

上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−（２−シアノエチル）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３９５（Ｍ＋１）。
【０２４１】
実施例３７
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピラジン−２−イルメチル）アセトアミド調製
【０２４２】
【化７９】

実施例Ａ：　Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（ピラジン−２−イルメチル）アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピラジン−２−カルボキシアルデヒドを用いた。
【０２４３】
実施例Ｂ：　Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピラジン−２−イルメチル）アセトアミド調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−イソプロピル−Ｎ−（ピラジン−２−イルメチル）アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。Ｃ_２４Ｈ_２４Ｎ_４Ｏについて計算した正確な質量：３８５．２０３５；　実測値：３８５．２０２３（ＦＡＢ）。
【０２４４】
実施例３８
Ｎ−イソプロピル−Ｎ−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
【０２４５】
【化８０】

段階Ａ：　Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりに１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシアルデヒドを用いた。
【０２４６】
段階Ｂ：　Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−イソプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。Ｃ_２４Ｈ_２６Ｎ_４Ｏについて計算した正確な質量：３８７．２１７４；　実測値：３８７．２１７９（ＦＡＢ）。
【０２４７】
実施例３９
Ｎ−イソプロピル−Ｎ−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）メチル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
【０２４８】
【化８１】

段階Ａ：　Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりに１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシアルデヒドを用いた。
【０２４９】
段階Ｂ：　Ｎ−イソプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−イソプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。Ｃ_２４Ｈ_２６Ｎ_４Ｏについて計算した正確な質量：３８７．２１５６；　実測値：３８７．２１７９（ＦＡＢ）。
【０２５０】
実施例４０
Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２５１】
【化８２】

段階Ａ：　Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）プロパン−２−アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピリジン−２−カルボキシアルデヒドを用いた。
【０２５２】
段階Ｂ：　Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−（ピリジン−２−イルメチル）プロパン−２−アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３８４（Ｍ＋１）。
【０２５３】
実施例４１
Ｎ−（２−シアノエチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−［２−（２−メチルフェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］アセトアミドの調製
【０２５４】
【化８３】

上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに１−（シクロプロピルアミノ）−プロピオニトリルを用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３４４（Ｍ＋１）。
【０２５５】
実施例４２
Ｎ−（２−シアノエチル）−Ｎ−イソプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
【０２５６】
【化８４】

上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに１−（イソプロピルアミノ）−プロピオニトリルを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３４６（Ｍ＋１）。
【０２５７】
実施例４３
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
【０２５８】
【化８５】

段階Ａ：　Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりに１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにシクロプロピルアミンを用いた。
【０２５９】
段階Ｂ：　Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−シクロプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルメチル）アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。Ｃ_２４Ｈ_２４Ｎ_４Ｏについて計算した正確な質量：３８５．２０３１；　実測値：３８５．２０２３（ＦＡＢ）。
【０２６０】
実施例４４
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）メチル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
【０２６１】
【化８６】

段階Ａ：　Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりに１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにシクロプロピルアミンを用いた。
【０２６２】
段階Ｂ：　Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−シクロプロピル−Ｎ−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルメチル）アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。Ｃ_２４Ｈ_２４Ｎ_４Ｏについて計算した正確な質量：３８５．２０２８；　実測値：３８５．２０２３（ＦＡＢ）。
【０２６３】
実施例４５
Ｎ−シクロブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２６４】
【化８７】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピリジン−２−カルボキシアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにシクロブチルアミンを用いた。Ｃ_２６Ｈ_２５Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３９６．２０６６；　実測値：３９６．２０７０（ＦＡＢ）。
【０２６５】
実施例４６
Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２６６】
【化８８】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って、しかし、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピリジン−２−カルボキシアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにシクロプロピルアミンを用いた。Ｃ_２５Ｈ_２３Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３８２．１９０３；　実測値：３８２．１９１４（ＦＡＢ）。
【０２６７】
実施例４７
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（２−フリルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
【０２６８】
【化８９】

段階Ａ：　Ｎ−フラン−２−イルメチル−Ｎ−シクロプロピルアミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりに２−フラアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにシクロプロピルアミンを用いた。
【０２６９】
段階Ｂ：　Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（２−フリルメチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−フラン−２−イルメチル−Ｎ−シクロプロピルアミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３１７（Ｍ＋１）。
【０２７０】
実施例４８
Ｎ−イソプロピル−２−［２−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２７１】
【化９０】

上記表題化合物は、実施例２の段階ＢからＤに従って調製したが、オルト−トリルボロン酸の代わりに２−メトキシフェニルボロン酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　４１４（Ｍ＋１）。
【０２７２】
実施例４９
Ｎ−イソブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２７３】
【化９１】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピリジン−２−カルボキシアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにイソブチルアミンを用いた。Ｃ_２６Ｈ_２７Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３９８．２２１８；　実測値：３９８．２２２７（ＦＡＢ）。
【０２７４】
実施例５０
２−［２−（２−クロロフェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−Ｎ−（２−シアノエチル）−Ｎ−シクロプロピルアセトアミドの調製
【０２７５】
【化９２】

上記表題化合物は、実施例２の段階ＢからＤに従って調製したが、オルト−トリルボロン酸の代わりに２−クロロフェニルボロン酸を用い、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに１−（シクロプロピルアミン）−プロピオニトリルを用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３７８（Ｍ＋１）。
【０２７６】
実施例５１
Ｎ−（ｔ−ブチル）−Ｎ−（２−シアノエチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
【０２７７】
【化９３】

上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに１−（ｔ−ブチルアミノ）−プロピオニトリルを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３６０（Ｍ＋１）。
【０２７８】
実施例５２
Ｎ−イソブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２７９】
【化９４】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピリジン−３−カルボキシアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにイソブチルアミンを用いた。Ｃ_２６Ｈ_２７Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３９８．２２４２；　実測値：３９８．２２２７（ＦＡＢ）。
【０２８０】
実施例５３
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−［（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセチル］−β−アラニン酸メチルの調製
【０２８１】
【化９５】

ＭｅＯＨ：濃ＨＣｌ（５：１）中のＮ−（２−シアノ−エチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド（０．１００ｇ、０．２９１ｍｍｏｌ）の溶液を加熱して、１６時間還流させた。反応混合物を室温に冷却し、ＣＨ_２Ｃｌ_２に注入して、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液および水で洗浄し、その後、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過して、真空下で濃縮した。その後、その材料を逆相ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物を生じた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３７７（Ｍ＋１）。
【０２８２】
実施例５４
Ｎ−イソプロピル−２−（６−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドおよび　Ｎ−イソプロピル−２−（４−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２８３】
【化９６】

上記表題化合物は、実施例３の段階Ｂに従って調製したが、塩酸オルト−トリルヒドラジンの代わりに塩酸メタ−トリルヒドラジンを用いた。表題化合物は、位置異性体の不可分混合物として単離された。Ｃ_２６Ｈ_２７Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３９８．２２２７；　実測値：３９８．２２１３（ＦＡＢ）。
【０２８４】
実施例５５
Ｎ−イソブチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２８５】
【化９７】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って調製したが、イソプロピルアミンの代わりにイソブチルアミンを用いた。Ｃ_２６Ｈ_２７Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３９８．２２４７；　実測値：３９８．２２２７（ＦＡＢ）。
【０２８６】
実施例５６
Ｎ−シクロペンチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２８７】
【化９８】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って調製したが、イソプロピルアミンの代わりにイソペンチルアミンを用いた。Ｃ_２７Ｈ_２７Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：４１０．２２５８；　実測値：４１０．２２２７（ＦＡＢ）。
【０２８８】
実施例５７
Ｎ−［（１Ｒ）−１−メチルプロピル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２８９】
【化９９】

段階Ａ：　（Ｒ）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）ｓｅｃ−ブチル−２−アミンの調製
上記表題化合物は、実施例１の段階Ａの手順に従って調製したが、イソプロピルアミンの代わりに（Ｒ）−Ｎ−ｓｅｃ−ブチルアミンを用いた。
【０２９０】
段階Ｂ：　Ｎ−［（１Ｒ）−１−メチルプロピル］−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに（Ｒ）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）ｓｅｃ−ブチル−２−アミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３９８（Ｍ＋１）。
【０２９１】
実施例５８
Ｎ，Ｎ−ビス（２−メトキシエチル）−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセトアミドの調製
【０２９２】
【化１００】

上記表題化合物は、実施例２の段階Ｄの手順に従って調製したが、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに２−メトキシ−Ｎ−（２−メトキシエチル）エタンアミンを用い、（２−オルト−トリル−１Ｈ−インドール−３−イル）−酢酸の代わりに２−フェニルインドール−３−酢酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３６７（Ｍ＋１）。
【０２９３】
実施例５９
Ｎ−イソプロピル−２−（５−メチル−２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２９４】
【化１０１】

上記表題化合物は、実施例３の段階Ｂに従って調製したが、塩酸オルト−トリルヒドラジンの代わりに塩酸パラ−トリルヒドラジンを用いた。Ｃ_２６Ｈ_２７Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：３９８．２２２７；　実測値：３９８．２２１８（ＦＡＢ）。
【０２９５】
実施例６０
Ｎ−（２−シアノエチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−［２−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−インドール−３−イル］アセトアミドの調製
【０２９６】
【化１０２】

上記表題化合物は、実施例２の段階ＢからＤに従って調製したが、オルト−トリルボロン酸の代わりに２−メトキシフェニルボロン酸を用い、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりに１−（シクロプロピルアミン）−プロピオニトリルを用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３７４（Ｍ＋１）。
【０２９７】
実施例６１
Ｎ−シクロペンチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アセトアミドの調製
【０２９８】
【化１０３】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピリジン−２−カルボキシアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにシクロペンチルアミンを用いた。Ｃ_２７Ｈ_２７Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：４１０．２２３８；　実測値：４１０．２２２７（ＦＡＢ）。
【０２９９】
実施例６２
Ｎ−シクロペンチル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）アセトアミドの調製
【０３００】
【化１０４】

上記表題化合物は、実施例１の段階ＡおよびＢの手順に従って調製したが、ピリジン−４−カルボキシアルデヒドの代わりにピリジン−３−カルボキシアルデヒドを用い、イソプロピルアミンの代わりにシクロペンチルアミンを用いた。Ｃ_２７Ｈ_２７Ｎ_３Ｏについて計算した正確な質量：４１０．２２５４；　実測値：４１０．２２２７（ＦＡＢ）。
【０３０１】
実施例６３
Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−［（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）アセチル］−β−アラニンの調製
【０３０２】
【化１０５】

４０％ＮａＯＨ水溶液（１ｍＬ）中のＮ−（シアノ−エチル）−Ｎ−シクロプロピル−２−（２−フェニル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミド（０．０５０ｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）の溶液を加熱して、５時間還流させ、その後、室温に冷却した。反応混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２に注入し、３ＮのＨＣｌで洗浄した。その後、その水溶液をＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｘ）で洗浄した。有機溶液を混合し、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、真空下で濃縮した。逆相ＨＰＬＣによる精製によって、表題生成物を生じた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３６３（Ｍ＋１）。
【０３０３】
実施例６４
Ｎ−イソプロピル−２−（２−ピリジン−３−イル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−４−イルメチル−アセトアミドの調製
【０３０４】
【化１０６】

上記表題化合物は、実施例２の段階ＢからＤに従って調製したが、オルト−トリルボロン酸の代わりに３−ピリジンボロン酸を用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３８５（Ｍ＋１）。
【０３０５】
実施例６５
Ｎ−イソプロピル−２−（２−ピリジン−４−イル−１Ｈ−インドール−３−イル）−Ｎ−ピリジン−３−イルメチル−アセトアミドの調製
【０３０６】
【化１０７】

上記表題化合物は、実施例２の段階ＢからＤに従って調製したが、オルト−トリルボロン酸の代わりに４−ピリジンボロン酸を用い、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにＮ−（ピリジン−３−イルメチル）プロパン−２−アミンを用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３８５（Ｍ＋１）。
【０３０７】
実施例６６
Ｎ−ベンジル−Ｎ−イソプロピル−２−（２−ピリジン−４−イル−１Ｈ−インドール−３−イル）−アセトアミドの調製
【０３０８】
【化１０８】

上記表題化合物は、実施例２の段階ＢからＤに従って調製したが、オルト−トリルボロン酸の代わりに４−ピリジンボロン酸を用い、Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）プロパン−２−アミンの代わりにベンジルイソプロピルアミンを用いた。ＥＳ質量スペクトル　ｍ／ｅ　３８４（Ｍ＋１）。
【０３０９】
実施例６７
ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼのインビトロ阻害
トランスフェラーゼアッセイ。イソプレニル−蛋白質トランスフェラーゼ活性のアッセイは、特に別様に言及しない限り３０℃で行う。典型的な反応混合物は、［^３Ｈ］ファルネシル二リン酸、Ｒａｓ蛋白質、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、調節用アニオン（例えば、５ｍＭのＡＴＰ）、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、５ｍＭのジチオトレイトール、１０μＭのＺｎＣｌ_２、０．１％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（分子量１５，０００〜２０，０００）およびイソプレニル−蛋白質トランスフェラーゼを含有する（最終量５０μＬ）。アッセイに用いられるＦＰＴアーゼは、Ｏｍｅｒ，Ｃ．Ａ．，Ｋｒａｌ，Ａ．Ｍ．，Ｄｉｅｈｌ，Ｒ．Ｅ．，Ｐｒｅｎｄｅｒｇａｓｔ，Ｇ．Ｃ．，Ｐｏｗｅｒｓ，Ｓ．，Ａｌｌｅｎ，Ｃ．Ｍ．，Ｇｉｂｂｓ，Ｊ．Ｂ．ａｎｄ　Ｋｏｈｌ，Ｎ．Ｅ．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　３２：５１６７−５１７６に記載されているような組換え発現によって調製する。酵素不在のアッセイ混合物を熱によりあらかじめ平衡させた後、イソプレニル−蛋白質トランスフェラーゼの添加によって反応を開始させ、エタノール（１ｍＬ）中１ＭのＨＣｌの添加によって一定間隔（典型的には１５分）で反応を停止させる。反応停止させた反応混合物を１５分間放置する（沈殿過程を完了させるため）。１００％エタノール２ｍＬを添加した後、反応混合物をＷｈａｔｍａｎ　ＧＦ／Ｃフィルタにより真空濾過する。フィルタをシンチレーション液（１０ｍＬ）と混合した１００％エタノール２ｍＬ分で４回洗浄し、その後、Ｂｅｃｋｍａｎ　ＬＳ３８０１シンチレーションカウンターで計測する。
【０３１０】
阻害研究については、阻害剤を１００％ジメチルスルホキシド中の濃縮溶液として調製し、その後、２０倍希釈して酵素アッセイ用混合物にすること以外は、上記のとおりアッセイを行う。阻害剤ＩＣ_５０を決定するための基質濃度は、次のとおりである：ＦＴアーゼ、６５０ｎＭのＲａｓ−ＣＶＬＳ（配列番号２）、１００ｎＭのファルネシル二リン酸。
【０３１１】
上記のアッセイによって、本発明の化合物をヒトＦＰＴアーゼに対する阻害活性について試験する。
【０３１２】
実施例６８
修正インビトロＧＧＴアーゼ阻害アッセイ
修正ゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害アッセイは、室温で行う。典型的な反応混合物は、［^３Ｈ］ゲラニルゲラニル二リン酸、ビオチニル化Ｒａｓ蛋白質、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、調節用アニオン（例えば、１０ｍＭのグリセロリン酸塩または５ｍＭのＡＴＰ）、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、１０μＭのＺｎＣｌ_２、０．１％ＰＥＧ（分子量１５，０００〜２０，０００）、２ｍＭのジチオトレイトールおよびゲラニルゲラニル−蛋白質トランスフェラーゼＩ型（ＧＧＴアーゼ）を含有する（最終量５０μＬ）。アッセイに用いられるＧＧＴアーゼＩ型酵素は、米国特許第５，４７０，８３２号に記載されているように調製する。この特許は、参照として取り入れる。Ｒａｓペプチドは、Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ蛋白質から誘導されたものであり、次の配列を有する：ビオチニル−ＧＫＫＫＫＫＫＳＫＴＫＣＶＩＭ（シングルアミノ酸コード）（配列番号２）。反応は、ＧＧＴアーゼの添加によって開始させ、５０ｍＭのＥＤＴＡを含有する０．２Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ４）および０．５％ＢＳＡ中のストレプタビジンＳＰＡビーズ（Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ　Ａｓｓａｙビース、Ａｍｅｒｓｈａｍ）３ｍｇ／Ｌの懸濁液２００ｍＬの添加によって一定間隔（典型的には１５分）で反応を停止させる。反応停止させた反応混合物を２時間放置し、その後、Ｐａｃｋａｒｄ　ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンターを用いて分析する。
【０３１３】
阻害研究については、阻害剤を１００％ジメチルスルホキシド中の濃縮溶液として調製し、その後、２５倍希釈して酵素アッセイ用混合物にすること以外は、上記のとおりアッセイを行う。ＩＣ_５０値は、Ｋ_Ｍ濃度付近のＲａｓペプチドで決定する。阻害剤ＩＣ_５０を決定するための酵素および基質濃度は、次のとおりである：７５ｐＭのＧＧＴアーゼ−Ｉ、１．６μＭのＲａｓペプチド、１００ｎＭのゲラニルゲラニル二リン酸。
【０３１４】
上記のアッセイによって、本発明の化合物をヒトＧＧＴアーゼＩ型に対する阻害活性について試験する。
【０３１５】
実施例６９
細胞ベースのインビトロｒａｓファルネシル化アッセイ
このアッセイに用いた細胞系列は、Ｈａ−ｒａｓ　ｐ２１を発現した、Ｒａｔ１細胞またはＮＩＨ３Ｔ３細胞のいずれかから誘導されたｖ−ｒａｓ系列である。このアッセイは、本質的にはＤｅＣｌｕｅ，Ｊ．Ｅ．ら，Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５１：７１２−７１７，（１９９１）に記載されているように行う。１０ｃｍ皿内の集密度５０〜７５％の細胞を試験化合物（溶媒、メタノールまたはジメチルスルホキシドの最終濃度は、０．１％である）で処理する。３７℃で４時間後、１０％正則ＤＭＥＮ、２％ウシ胎仔血清および４００μＣｉ［^３５Ｓ］メチオニン（１０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を補充した無メチオニンＤＭＥＭ３ｍＬ中で細胞を標識する。さらに２０時間後、細胞を溶解バッファ（１％ＮＰ４０／２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５／５ｍＭのＭｇＣｌ_２／１ｍＭのＤＤＴ／１０ｍｇ／ｍＬのアプロチネン／２ｍｇ／ｍＬのロイペプチン／２ｍｇ／ｍＬのアンチパイン／０．５ｍＭのＰＭＳＦ）１ｍＬに溶解し、溶解産物を１００，０００ｘｇでの４５分間の遠心分離によって透明にする。同じ数の酸可降数を有する一定量の溶解産物をＩＰバッファ（ＤＴＴ欠如溶解バッファ）で１ｍＬにし、ｒａｓ特異的モノクローナル抗体Ｙ１３−２５９（Ｆｕｒｔｈ，Ｍ．Ｅ．ら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４３：２９４−３０４，（１９８２））で免疫沈降させる。抗体を４℃で２時間インキュベートした後、ウサギ抗ラットＩｇＧをコーチングしたプロテインＡ−セファロースの２５％懸濁液２００μＬを４５分間で添加する。免疫沈降物をＩＰバッファ（２０ｎＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５／１ｍＭのＥＤＴＡ／１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００．０．５％デオキシコール酸塩／０．１％のＳＤＳ／０．１ＭのＮａＣｌ）で４回洗浄し、ＤＳＤ−ＰＡＧＥサンプルバッファ中で沸騰させて、１３％アクリルアミドゲルに担持させる。染料面が底に達したら、ゲルを固定し、Ｅｎｌｉｇｈｔｅｎｉｎｇに浸漬し、乾燥させて、オートラジオグラフィーに付す。ファルネシル化したｒａｓ蛋白質およびファルネシル化していないｒａｓ蛋白質に対応するバンドの強度を比較して、蛋白質へのファルネシルの移行の阻害率を決定する。
【０３１６】
実施例７０
細胞ベースのインビトロ増殖阻害アッセイ
ＦＰＴアーゼ阻害の生物学的帰結を決定するために、ｖ−ｒａｓ、ｖ−ｒａｆまたはｖ−ｍｏｓいずれかの発癌遺伝子で形質転換されたＲａｔ１細胞の足場非依存性増殖に対する本発明の化合物の効果を試験する。ｖ−Ｒａｆおよびｖ−Ｍｏｓによって形質転換された細胞を分析に含めて、Ｒａｓ誘導細胞形質転換に対する本化合物の特異性を評価してもよい。
【０３１７】
ｖ−ｒａｓ、ｖ−ｒａｆまたはｖ−ｍｏｓのいずれかで形質転換されたＲａｔ１細胞は、アガロース底層（０．６％）の上の培地Ａ（１０％ウシ胎仔血清を補充したＤｕｌｂｅｃｃｏの変性Ｅａｇｌｅ培地）中０．３％のアガロース上層に、プレート（直径３５ｍｍ）あたり細胞１×１０^４個の密度で播種する。両方の層が、０．１％のメタノールまたは適切な濃度の本発明の化合物（アッセイに用いられる最終濃度の１０００倍でメタノールに溶解したもの）を含有する。０．１％のメタノールまたはその濃度の本化合物を含有する培地Ａ０．５ｍＬを週に２回、細胞に供給する。培養１６日後に顕微鏡写真を撮り、比較する。
【０３１８】
実施例７１
ＳＥＡＰレポータープラスミドｐＤＳＥ１００の作成
ＳＥＡＰレポータープラスミド、ｐＤＳＥ１００は、ＳＥＡＰコード配列を有する制限フラグメントをプラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩにライゲーションすることによって構成した。ＳＥＡＴ遺伝子は、プラスミドｐＳＥＡＰ２−Ｂａｓｉｃ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ　Ａｌｔｏ，ＣＡ）から誘導する。プラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩは、Ｄｅｂｏｒａｈ　Ｊｏｎｅｓ（Ｍｅｒｃｋ）によって作成されたものであり、サイトメガロウイルス即時初期プロモーター由来の「ＣＡＴ−ＴＡＴＡ」配列の上流にクローンされた「二分染色体対称応答要素」の５つの配列コピーを有する。このプラスミドはウシ成長ホルモンポリＡ配列も有する。
【０３１９】
プラスミド、ｐＤＳＥ１００は、次のように作成した。制限酵素ＥｃｏＲ_１およびＨｐａＩを用いて、ＳＥＡＰコード配列をコードしている制限フラグメントをプラスミドｐＳＥＡＰ２−Ｂａｓｉｃから切り取った。線形ＤＮＡフラグメントに、Ｅ．ｃｏｌｉ　ＤＮＡポリメラーゼＩのクレノウフラグメントを補充した。アガロースゲル中でその消化物を電気泳動し、１６９４塩基対フラグメントを切り取ることによって、ＳＥＡＰ遺伝子有する「平滑末端」ＤＮＡを単離した。ベクタープラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩを制限酵素Ｂｇｌ−ＩＩで線形にし、末端にクレノウＤＮＡポリメラーゼＩを補充した。ＳＥＡＰ　ＤＮＡフラグメントをｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩベクターに平滑末端ライゲーションし、そのライゲーション産物をＤＨ５−アルファＥ．ｃｏｌｉ細胞（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）に形質転換した。形質転換体を適正な挿入についてスクリーニングし、その後、制限フラグメントの位置づけについてマッピングした。正しく位置づけられた組換え作成体を、クローニング接合点を渡って配列して、正しい配列を検証した。得られたプラスミドは、ＤＳＥおよびＣＡＴ−ＴＡＴＡプロモーター要素の下流、ＢＧＨポリＡ配列の上流にＳＥＡＰコード配列を有する。
【０３２０】
ＳＥＡＰレポータープラスミド、ｐＤＳＥ１０１の代替作成
ＳＥＡＰレポータープラスミド、ｐＤＳＥ１０１も、ＳＥＡＰコード配列有する制限フラグメントをプラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩにライゲーションすることによって作成する。ＳＥＡＰ遺伝子は、プラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＡＰから誘導する。
【０３２１】
プラスミドｐＤＳＥ１０１は、次のように作成した：制限酵素Ａｐａ　ＩおよびＫｐｎＩを用いて、ＳＥＡＰ遺伝子コード配列の一部を有する制限フラグメントをプラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＥＳＡＰから切り取った。線形ＤＮＡフラグメントの末端をＥ．ｃｏｌｉ　ＤＮＡポリメラーゼＩのクレノウフラグメントでぐにゃぐにゃに戻した。その消化物をアガロースゲル中で電気泳動し、１９１０塩基対フラグメントを切り取ることによって、トランケートされたＳＥＡＰ遺伝子を有する「平滑末端」ＤＮＡを単離した。Ｂｇｌ−ＩＩで切断し、Ｅ．ｃｏｌｉクレノウフラグメントＤＮＡポリメラーゼを補充したプラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩに、この１９１０塩基対フラグメントをライゲーションした。組換えプラスミドを挿入の位置づけについてスクリーニングし、ライゲーション接合点を通って配列した。プラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩは、ＤＨＲＦマーカーおよびネオマイシンマーカーを有するＥｃｏＲＩフラグメントを除去することによって、プラスミドｐＣＭＶＩＥ−ＡＫＩ−ＤＨＦＲ（Ｗｈａｎｇ，Ｙ．，Ｓｉｌｂｅｒｋｌａｎｇ，Ｍ．，Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｓ．，Ｌｅｎｎｙ，Ａ．Ｂ．，Ｅｌｌｉｓ，Ｒ．Ｗ．ａｎｄ　Ｋｉｅｆｆ，Ｅ．（１９８７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６１，１７９６−１８０７）から誘導する。ｆｏｓプロモーター血清応答要素のコピー５つを以前に記載されている（Ｊｏｎｅｓ，Ｒ．Ｅ．，Ｄｅｆｅｏ−Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．，ＭｃＡｖｏｙ，Ｅ．Ｍ．，Ｖｕｏｃｏｌｏ，Ｇ．Ａ．，Ｗｅｇｒｚｙｎ，Ｒ．Ｊ．，Ｈａｓｋｅｌｌ，Ｋ．Ｍ．ａｎｄ　Ｏｌｉｆｆ，Ａ．（１９９１）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，６，７４５−７５１）ように挿入して、プラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩを生じた。
【０３２２】
プラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＰＡは、次のように作成した。ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）からの二つのセグメントにおいて、以下のオリゴを用いて、ＳＥＡＰ遺伝子をＰＣＲした。
【０３２３】
センス鎖Ｎ−末端ＳＥＡＰ：　５’ＧＡＧＡＧＧＧＡＡＴＴＣＧＧＧＣＣＣＴＴＣＣＴＧＣＡＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣ３’（配列番号４）
アンチセンス鎖Ｎ−末端ＳＥＡＰ：　５’ＧＡＧＡＧＡＧＣＴＣＧＡＧＧＴＴＡＡＣＣＣＧＧＧＴＧＣＧＣＧＧＣＧＴＣＧＧＴＧＧＴ３’（配列番号５）
センス鎖Ｃ−末端ＳＥＡＰ：　５’ＧＡＧＡＧＡＧＴＣＴＡＧＡＧＴＴＡＡＣＣＣＧＴＧＧＴＣＣＣＣＧＣＧＴＴＧＣＴＴＣＣＴ３’（配列番号６）
アンチセンス鎖Ｃ−末端ＳＥＡＰ：　５’ＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＣＴＴＧＧＴＡＣＣＧＣＣＡＣＴＧＧＧＣＴＧＴＡＧＧＴＧＧＴＧＧＣＴ３’（配列番号７）
【０３２４】
Ｎ−末端オリゴ（配列番号４および配列番号５）を用いて、末端にＥｃｏＲＩ制限部位およびＨｐａＩ制限部位を有する１５６０ｂｐＮ−末端ＰＣＲ産物を生じた。アンチセンスＮ−末端オリゴ（配列番号５）は、ＨｐａＩ部位とともに内部翻訳ＳＴＯＰコドンをＳＥＡＰ遺伝子内に誘導する。Ｃ−末端オリゴ（配列番号６および配列番号７）を用いて、ＨｐａＩ制限部位およびＨｉｎｄＩＩＩ制限部位を有する４１２ｂｐＣ−末端ＰＣＲ産物を増幅した。センス鎖Ｃ−末端オリゴ（配列番号６）は、内部ＳＴＯＰコドンならびにＨｐａＩ部位を誘導する。次に、Ｎ−末端アンプリコンをＥｃｏＲＩおよびＨｐａＩで消化し、一方、Ｃ−末端アンプリコンをＨｐａＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化した。その消化物をアガロースゲル中で電気泳動し、１５６０および４１２塩基対フラグメントを単離することによって、各々のＳＥＡＰ遺伝子末端を有する二つのフラグメントを単離した。その後、ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで制限部位を消化し、アガロースゲルを用いて単離したベクターｐＧＥＭ７ｚｆ（−）（Ｐｒｏｍｅｇａ）に、これら二つのフラグメントを共同ライゲーションした。得られたクローン、ｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＡＰは、アミノ酸からのＳＥＡＰ遺伝子についてのコード配列を有する。
【０３２５】
ＳＥＡＰプラスミドを構成的に発現するｐＣＭＶ−ＳＥＡＰ−Ａの構成
トランケートされたＳＥＡＰ遺伝子をコードしている配列をサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ＩＥ−１プロモーターの下流に配置することによって、ＳＥＡＰ蛋白質を構成的に発現する発現プラスミドを生じた。この発現プラスミドは、ＳＥＡＰ遺伝子に対して５’のＣＭＶイントロンＡ領域、ならびにＳＥＡＰ遺伝子に対して３’のウシ成長ホルモン遺伝子の３’非翻訳領域も有する。
【０３２６】
ＣＭＶ即時初期プロモータを有するプラスミドｐＣＭＶＩＥ−ＡＫＩ−ＤＨＦＲ（Ｗｈａｎｇ，Ｙ．，Ｓｉｌｂｅｒｋｌａｎｇ，Ｍ．，Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｓ．，Ｌｅｎｎｙ，Ａ．Ｂ．Ｅｌｌｉｓ，Ｒ．Ｗ．，ａｎｄ　Ｋｉｅｆｆ，Ｅ．（１９８７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６１：１７９６−１８０７）をＥｃｏＲＩで切断して、二つのフラグメントを生じた。ベクターフラグメントを、アガロース電気泳動によって単離し、ライゲーションした。得られたプラスミドをｐＣＭＶ−ＡＫＩと名づける。次に、サイトメガロウイルスイントロンＡヌクレオチド配列をｐＣＭＶ−ＡＫＩ中のＣＭＶ　ＩＥ１プロモーターの下流に挿入する。イントロンＡ配列をゲノムのクローンバンクから単離し、ｐＢＲ３３２にサブクローニングして、プラスミドｐ１６Ｔ−２８６を生じた。特定部位の突然変異誘発を用いて、そのイントロンＡ配列をヌクレオチド１８５６（Ｃｈａｐｍａｎ，Ｂ．Ｓ．，Ｔｈａｙｅｒ，Ｒ．Ｍ．，Ｖｉｎｃｅｎｔ，Ｋ．Ａ　ａｎｄ　Ｈａｉｇｗｏｏｄ，Ｎ．Ｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．１９，３９３７−３９８６におけるとおりのヌクレオチド番号付け）で突然変異させて、ＳａｃＩ制限部位を除去した。以下のオリゴを用いて、突然変異イントロンＡ配列をプラスミドｐ１６Ｔ−２８７からＰＣＲした。
【０３２７】
センス鎖：　５’ＧＧＣＡＧＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＴＣＡＧ３’（配列番号８）
アンチセンス鎖：　５’ＧＡＧＡＧＡＴＣＴＣＡＡＧＧＡＣＧＧＴＧＡＣＴＧＣＡＧ３’（配列番号９）
【０３２８】
これら二つのオリゴは、センスオリゴによって組み込まれたＳａｃＩ部位をおよびアンチセンスオリゴによって組み込まれたＢｇｌ−ＩＩフラグメントを有する９９１塩基対フラグメント生じる。ＰＣＲフラグメントをＳａｃＩおよびＢｇｌ−ＩＩでトリミングし、アガロースゲルを用いて単離する。ベクターｐＣＭＶ−ＡＫＩをＳａｃＩおよびＢｇｌ−ＩＩで切断し、大きいほうのベクターフラグメントをアガロースゲル電気泳動によって単離する。ゲルによって単離された二つのフラグメントをそれらのそれぞれＳａｃＩおよびＢｇｌ−ＩＩ部位でライゲーションして、プラスミドｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡを生じる。
【０３２９】
トランケートされたＳＥＡＰ遺伝子をコードしているＤＮＡ配列を、ｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡプラスミド、そのベクターのＢｇｌ−ＩＩ部に挿入する。ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩを用いて、ＳＥＡＰ遺伝子をプラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＡＰ（上記）から切り取る。そのフラグメントにクレノウＤＮＡポリメラーゼを補充し、アガロースゲル電気泳動によって１９７０塩基対フラグメントをそのベクターフラグメントから単離する。このｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡベクターは、Ｂｇｌ−ＩＩで消化し、末端にクレノウＤＮＡポリメラーゼを補充することによって調製する。ＳＥＡＰフラグメントをｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡベクターに平滑末端ライゲーションすることによって最終的な作成体を生じる。形質転換体を適正な挿入についてスクリーングし、その後、制限フラグメントの位置づけについてマッピングした。正しく位置づけられた組換え作成体を、クローニング接合点を渡って配列して、正しい配列を検証した。ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰ−Ａという名（ブダペスト条約のもと、１９９８年１月２７日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣに指定されたもの）の得られたプラスミドは、サイトメガロウイルス即時初期プロモーターＩＥ−１およびイントロンＡ配列の下流、ウシ成長ホルモンポリＡ配列の上流に、修飾ＳＥＡＰコード配列を有する。このプラスミドは、哺乳動物細胞にトランスフェクトされた時、構成的にＳＥＡＰを発現する。
【０３３０】
ＳＥＡＰプラスミドを構成的に発現するｐＣＭＶ−ＳＥＡＰ−Ｂの代替作成
ＳＥＡＰ蛋白質を構成的に発現する発現プラスミドは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ＩＥ−１プロモーターの下流、ウシ成長ホルモン遺伝子３’非翻訳領域の上流に、トランケートされたＳＥＡＰ遺伝子をコードしている配列を配置することによって生じることができる。
【０３３１】
ＣＭＶ即時初期プロモータおよびウシ成長ホルモンポリＡ配列を有するプラスミドｐＣＭＶＩＥ−ＡＫＩ−ＤＨＦＲ（Ｗｈａｎｇ，Ｙ．，Ｓｉｌｂｅｒｋｌａｎｇ，Ｍ．，Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．，Ｍｕｎｓｈｉ，Ｓ．，Ｌｅｎｎｙ，Ａ．Ｂ．Ｅｌｌｉｓ，Ｒ．Ｗ．，ａｎｄ　Ｋｉｅｆｆ，Ｅ．（１９８７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６１：１７９６−１８０７）をＥｃｏＲＩで切断して、二つのフラグメントを生じることができる。ベクターフラグメントは、アガロース電気泳動によって単離し、ライゲーションすることができる。得られたプラスミドをｐＣＭＶ−ＡＫＩと名づける。トランケートされたＳＥＡＰ遺伝子をコードしているＤＮＡ配列を、ｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡプラスミド、そのベクター中唯一のＢｇｌ−ＩＩ部に挿入する。ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩを用いて、ＳＥＡＰ遺伝子をプラスミドｐＧＥＭｚｆ（−）／ＳＥＡＰ（上記）から切り取る。フラグメントにクレノウＤＮＡポリメラーゼを補充し、アガロースゲル電気泳動によって１９７０塩基対フラグメントをそのベクターフラグメントから単離する。このｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡベクターは、Ｂｇｌ−ＩＩで消化し、末端にクレノウＤＮＡポリメラーゼを補充することによって調製する。ＳＥＡＰフラグメントをそのベクターに平滑末端ライゲーションし、そのライゲーション反応物をＥ．ｃｏｌｉ　ＤＨ５α細胞に形質転換することによって、最終的な作成体を生じる。その後、形質転換体を適正な挿入についてスクリーングし、その後、制限フラグメントの位置づけについてマッピングすることができる。正しく位置づけられた組換え作成体を、クローニング接合点を渡って配列して、正しい配列を検証することとなる。ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰ−Ｂという名の得られたプラスミドは、サイトメガロウイルス即時初期プロモーターＩＥ−１の下流、ウシ成長ホルモンポリＡ配列の上流に、修飾ＳＥＡＰコード配列を有する。このプラスミドは、哺乳動物細胞にトランスフェクトされた時、構成的にＳＥＡＰを発現するだろう。
【０３３２】
ミリスチル化ウイルス−Ｈ−ｒａｓ発現プラスミドｐＳＭ６００のクローニング
ウイルス−Ｈ−ｒａｓを有するＤＮＡフラグメントは、以下のオリゴを用いて「ＨＢ−１１」（ブダペスト条約のもと、１９９７年８月２７日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ２０９，２１８に指定されたもの）からＰＣＲすることができる。
【０３３３】
センス鎖：
５’ＴＣＴＣＣＴＣＧＡＧＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＧＡＧＴＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＣＣＣＡＧＣＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＴＧＡＣＡＧＡＡＴＡＣＡＡＧＣＴＴＧＴＧＧＴＧＧ３’（配列番号１０）
アンチセンス：
５’ＣＡＣＡＴＣＴＡＧＡＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＡＧＡＣＴＴＧＣＡＧＣ３’（配列番号１１）。
【０３３４】
ｖ−ｓｅｃ遺伝子の初めの１５個のアミノ酸をコードしており、ミリスチル化部位を有する配列を、このセンス鎖オリゴに組み込む。このセンス鎖オリゴは、ＡＴＧ開始部位に対して５’に隣接する「Ｋｏｚａｋ」翻訳開始配列を最適化しもする。ウイスルｒａｓのＣ末端におけるプレニル化を防止するために、Ｃ末端アンチセンスオリゴ中のＣ残基をＧ残基に置換することによって、システイン１８６を突然変異させてセリンにする。ＰＣＲプライマーオリゴは、５’末端にＸｈｏＩ部位をおよび３’末端にＸｂａＩ部位を導入する。ＸｈｏＩ−ＸｂａＩフラグメントは、ＸｈｏＩおよびＸｂａＩで切断された哺乳動物発現プラスミドｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ）にライゲーションすることができる。その結果、組換えｍｙｒ−ウイルス−Ｈ−ｒａｓ遺伝子がｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターから構成的に転写されているプラスミド、ｐＳＭ６００が生じることとなる。
【０３３５】
ウイルス−Ｈ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ発現プラスミドｐＳＭＳ６０１のクローニング
以下のオリゴを用いるＰＣＲによって、アミノ酸ＣＶＬＬをコードしているＣ−末端配列を有するウイスル−Ｈ−ｒａｓクローンをプラスミド「ＨＢ−１１」からクローニングすることができる。
【０３３６】
センス鎖：
５’ＴＣＴＣＣＴＣＧＡＧＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＣＡＧＡＡＴＡＣＡＡＧＣＴＴＧＴＧＧＴＧＧ−３’（配列番号１２）
アンチセンス鎖：
５’ＣＡＣＴＣＴＡＧＡＣＴＧＧＴＧＴＣＡＧＡＧＣＡＧＣＡＣＡＣＡＣＴＴＧＣＡＧＣ−３’（配列番号１３）
【０３３７】
このセンス鎖は、「ＫＯＺＡＫ」配列を最適化し、ＸｈｏＩ部位を追加する。このアンチセンス鎖は、セリン１８９を突然変異させてロイシンにし、ＸｂａＩ部位を追加する。ＰＣＲフラグメントは、ＸｈｏＩおよびＸｂａＩでトリミングし、ベクターｐＣＩを切断したＸｈｏＩ−ＸｂａＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ）にライゲーションすることができる。その結果、突然変異ウイルス−Ｈ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ遺伝子がｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターから構成的に転写されているプラスミド、ｐＳＭＳ６０１が生じることとなる。
【０３３８】
細胞−Ｈ−ｒａｓ−Ｌｅｕ６１発現プラスミドｐＳＭＳ６２０のクローニング　ヒト細胞−Ｈ−ｒａｓ−遺伝子は、以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、ヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブラリ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）からＰＣＲすることができる。
【０３３９】
センス鎖：
５’−ＧＡＧＡＧＡＡＴＴＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＣＧＧＡＡＴＡＴＡＡＧＣＴＧＧＴＧＧ−３’（配列番号１４）
アンチセンス鎖：
５’−ＧＡＧＡＧＴＣＧＡＣＧＣＧＴＣＡＧＧＡＧＡＧＣＡＣＡＣＡＣＴＴＧＣ−３’（配列番号１５）
【０３４０】
これらのプライマーは、ｃ−Ｈ−ＲａｓをコードしているＤＮＡフラグメントを増幅し、これらのプライマーによって、最適化された「Ｋｏｚａｋ」翻訳開始配列、Ｎ−末端におｋるＥｃｏＲＩ部位およびＣ−末端におけるＳａｌ　Ｉ部位が生じることとなる。ＥｃｏＲＩおよびＳａｌ　ＩでＰＣＲ産物の末端をトリミングした後、ｃ−Ｈ−ｒａｓフラグメントを、突然変異誘発ベクターｐＡｌｔｅｒ−１を切断したＥｃｏＲＩ−Ｓａｌ　Ｉ（Ｐｒｏｍｅｇａ）にライゲーションすることができる。ロイシンへのグルタミン−６１の突然変異は、その製造業者のプロトコルおよび以下のオリゴヌクレオチドを用いて果たすことができる：
５’−ＣＣＧＣＣＧＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＡＣＡＧ−３’（配列番号１６）
【０３４１】
正しいヌクレオチド置換を選択して配列した後、ＥｃｏＲＩおよびＳａｌ　Ｉを用いてｐＡｌｔｅｒ−１ベクターから突然変異ｃ−Ｈ−ｒａｓ−Ｌｅｕ６１を切り取って、ＥｃｏＲＩおよびＳａｌ　Ｉで消化されたベクターｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ）に直接ライゲーションすることができる。この新しい組換えプラスミド、ｐＳＭＳ６２０は、ｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターからｃ−Ｈ−ｒａｓ−Ｌｅｕ６１を構成的に転写するだろう。
【０３４２】
ｃ−Ｎ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２発現プラスミドｐＳＭＳ６３０のクローニング　ヒトｃ−Ｎ−ｒａｓ遺伝子は、以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用いてヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブラリ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）からＰＣＲすることができる。
【０３４３】
センス鎖：
５’−ＧＡＧＡＧＡＡＴＴＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＣＴＧＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＧＧＴＧＧ−３’（配列番号１７）
アンチセンス鎖：
５’−ＧＡＧＡＧＴＣＧＡＣＴＴＧＴＴＡＣＡＴＣＡＣＣＡＣＡＣＡＴＧＧＣ−３’（配列番号１８）
【０３４４】
これらのプライマーは、ｃ−Ｎ−ＲａｓをコードしているＤＮＡフラグメントを増幅し、これらのプライマーによって、最適化された「Ｋｏｚａｋ」翻訳開始配列、Ｎ−末端におけるＥｃｏＲＩ部位およびＣ−末端におけるＳａｌ　Ｉ部位が生じることとなる。ＥｃｏＲＩおよびＳａｌ　ＩでＰＣＲ産物の末端をトリミングした後、突然変異誘発ベクターｐＡｌｔｅｒ−１を切断したＥｃｏＲＩ−Ｓａｌ　Ｉ（Ｐｒｏｍｅｇａ）にｃ−Ｎ−ｒａｓフラグメントをライゲーションすることができる。バリンへのグリシン−１２の突然変異は、製造業者のプロトコルおよび以下のオリゴヌクレオチドを用いて果たすことができる：
５’−ＧＴＴＧＧＡＧＣＡＧＴＴＧＧＴＧＴＴＧＧＧ−３’（配列番号１９）
【０３４５】
正しいヌクレオチド配列置換を選択して配列した後、ＥｃｏＲＩおよびＳａｌ　Ｉを用いて、ｐＡｌｔｅｒ−１ベクターから突然変異ｃ−Ｎ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を切り取って、ＥｃｏＲＩおよびＳａｌ　Ｉで消化されたベクターｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ）に直接ライゲーションすることができる。この新しい組換えプラスミド、ｐＳＭＳ６３０は、ｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターからｃ−Ｎ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を構成的に転写するだろう。
【０３４６】
ｃ−Ｋ４Ｂ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２発現プラスミドｐＳＭＳ６４０のクローニング
ヒトｃ−Ｋ４Ｂ−ｒａｓ遺伝子は、以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用いてヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブラリ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）からＰＣＲすることができる。
【０３４７】
センス鎖：
５’−ＧＡＧＡＧＧＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＴＡＴＡＡＡＣＴＴＧＴＧＧ−３’（配列番号２０）
アンチセンス鎖：
５’−ＣＴＣＴＧＴＣＧＡＣＧＴＡＴＴＴＡＣＡＴＡＡＴＴＡＣＡＣＡＣＴＴＴＧＴＣ−３’（配列番号２１）
【０３４８】
これらのプライマーは、ｃ−Ｋ４Ｂ−ＲａｓをコードしているＤＮＡフラグメントを増幅し、これらのプライマーによって、最適化された「Ｋｏｚａｋ」翻訳開始配列、Ｎ−末端におけるＫｐｎＩ部位およびＣ−末端におけるＳａｌ　Ｉ部位が生じることとなる。ＫｐｎＩおよびＳａｌ　ＩでＰＣＲ産物の末端をトリミングした後、突然変異誘発ベクターｐＡｌｔｅｒ−１を切断したＫｐｎＩ−Ｓａｌ　Ｉ（Ｐｒｏｍｅｇａ）にｃ−Ｋ４Ｂ−ｒａｓフラグメントをライゲーションすることができる。バリンへのシステイン−１２の突然変異は、製造業者のプロトコルおよび以下のオリゴヌクレオチドを用いて果たすことができる：
５’−ＧＴＡＧＴＴＧＧＡＧＣＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＧＧＣ−３’（配列番号２２）
正しいヌクレオチド配列置換を選択して配列した後、ＫｐｎＩおよびＳａｌ　Ｉを用いて、ｐＡｌｔｅｒ−１ベクターから突然変異ｃ−Ｋ４Ｂ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を切り取って、ＫｐｎＩおよびＳａｌ　Ｉで消化されたベクターｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ）に直接ライゲーションすることができる。この新しい組換えプラスミドは、ｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターからｃ−Ｋ４Ｂ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を構成的に転写するだろう。
【０３４９】
ｃ−Ｋ−ｒａｓ４Ａ−Ｖａｌ−１２発現プラスミドｐＳＭＳ６５０のクローニング
ヒトｃ−Ｋ４Ａ−ｒａｓ遺伝子は、以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用いてヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブラリ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）からＰＣＲすることができる。
【０３５０】
センス鎖：
５’−ＧＡＧＡＧＧＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＴＡＴＡＡＡＣＴＴＧＴＧＧ−３’（配列番号２３）
アンチセンス鎖：
５’−ＣＴＣＴＧＴＣＧＡＣＡＧＡＴＴＡＣＡＴＴＡＴＡＡＴＧＣＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＴＴＣＡＣＡＣ−３’（配列番号２４）
【０３５１】
これらのプライマーは、ｃ−Ｋ４Ａ−ＲａｓをコードしているＤＮＡフラグメントを増幅し、これらのプライマーによって、最適化された「Ｋｏｚａｋ」翻訳開始配列、Ｎ−末端におけるＫｐｎＩ部位およびＣ−末端におけるＳａｌ　Ｉ部位が生じることとなる。ＫｐｎＩおよびＳａｌ　ＩでＰＣＲ産物の末端をトリミングした後、突然変異誘発ベクターｐＡｌｔｅｒ−１を切断したＫｐｎＩ−Ｓａｌ　Ｉ（Ｐｒｏｍｅｇａ）にｃ−Ｋ−ｒａｓＡ４フラグメントをライゲーションすることができる。バリンへのシステイン−１２の突然変異は、製造業者のプロトコルおよび以下のオリゴヌクレオチドを用いて果たすことができる：
５’−ＧＴＡＧＴＴＧＧＡＧＣＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＧＧＣ−３’（配列番号２５）
【０３５２】
正しいヌクレオチド配列置換を選択して配列した後、ＫｐｎＩおよびＳａｌ　Ｉを用いて、ｐＡｌｔｅｒ−１ベクターから突然変異ｃ−Ｋ４Ａ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を切り取って、ＫｐｎＩおよびＳａｌ　Ｉで消化されたベクターｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ）に直接ライゲーションすることができる。この新しい組換えプラスミド、ｐＳＭＳ６５０は、ｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターからｃ−Ｋ４Ａ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を構成的に転写するだろう。
【０３５３】
ＳＥＡＰアッセイ
ヒトＣ３３Ａ細胞（ヒト上皮癌−ＡＴＣＣ収集）を１０ｃｍ組織培養プレート内でＤＭＥＭ＋１０％ウシ胎仔血清＋１Ｘ　Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ＋１Ｘ　グルタミン＋１Ｘ　ＮＥＡＡ中に播種する。細胞は、５０％から８０％の集密度に達するまで、５％ＣＯ_２雰囲気下、３７℃で増殖させる。
【０３５４】
ＣａＰＯ_４法（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）によって、一時的トランスフェクションを行う。これにより、Ｈ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、Ｋ−ｒａｓ、Ｍｙｒ−ｒａｓまたはＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬについての発現プラスミドをＤＳＥ−ＳＥＡＰレポーター作成体とともに共沈させる。（細胞がｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドでトランスフェクションされている時のｒａｓ発現プラスミドは含まない）。１０ｃｍプレートについては、ＣａＣｌ_２−ＤＮＡ溶液６００μＬを２Ｘ　ＨＢＳバッファ６００μＬに渦攪拌しながら一滴ずつ添加して、沈降溶液（配合は、下記参照）１．２ｍＬを得る。これを室温で２０分から３０分間放置する。沈降物を生成している間に、Ｃ３３Ａ細胞上の培地をＤＭＥＭ（マイナスフェノールレッド；Ｇｉｂｃｏ　ｃａｔ．ＮＯ．３１０５３−０２８）＋０．５％　チャコールストリップドウシ血清＋１Ｘ（Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、グルタミンおよび非必須アミノ酸）で置換する。ＣａＰＯ_４−ＤＮＡ沈降物を細胞に一滴ずつ添加し、プレートを穏やかに揺動して、分散させる。５％ＣＯ_２下、３７℃で５時間から６時間、ＤＮＡの取込みを進行させる。
【０３５５】
ＤＮＡインキュベーション時間の後、細胞をＰＢＳで洗浄し、０．０５％トリプシン１ｍＬでトリプシン化する。トリプシン化した細胞を、無フェノールレッドＤＭＥＭ＋０．２％チャコールストリップドウシ血清＋１Ｘ（Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、グルタミンおよびＮＥＡＡ）１０ｍＬ中に添加し手希釈する。トランスフェクトされた細胞を９６ウエルマイクロタイタープレートに入れる（１００μＬ／ウエル）。１００μＬの中には、倍地中で希釈された薬物をすでに添加してあった。各薬物濃縮を半対数段階の範囲にわたって３回繰り返して、ウエルあたりの最終量は、２００μＬである。
【０３５６】
細胞および薬物のインキュベーションは、ＣＯ_２下、３７℃で３６時間である。インキュベーション時間の終了時、細胞疲労の証明のために、細胞を顕微鏡検査をする。次に、分泌アルカリホスファターゼを含有する培地１００μＬを各ウエルから取り出し、６５℃で１時間、熱処理用微小管アレイに移送して、内在性アルカリホスファターゼ（しかし、耐熱性分泌ホスホターゼではない）を不活性化する。
【０３５７】
発光試薬ＣＳＰＤ（登録商標）（Ｔｒｏｐｉｘ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍａｓｓ．）を用いる発光アッセイによって、この熱処理培地をアルカリホスファターゼについて評価分析する。５０μＬ量の培地をＣＳＰＤカクテル　１００μＬと混合し、６０分間、室温でインキュベートする。ＭＬ２２００マイクロプレート照度計（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）を用いて発光をモニターする。発光は、一時的に発現された蛋白質によって刺激されたｆｏｓレポーター作成体の活性化レベルを反映する。
【０３５８】
細胞の１０ｃｍプレートについてのＤＮＡ−ＣａＰＯ_４沈降物
Ｒａｓ発現プラスミド（１μｇ／μＬ）　　　　　１０μＬ
ＤＳＥ−ＳＥＡＰプラスミド（１μｇ／μＬ）　　　２μＬ
剪断ウシ胸腺ＤＮＡ（１μｇ／μＬ）　　　　　　　８μＬ
２Ｍ　ＣａＣｌ_２　　　　　　　　　　　　　　　　７４μＬ
ｄＨ_２Ｏ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５０６μＬ
【０３５９】
２Ｘ　ＨＢＳ　バッファ
２８０ｍＭ　ＮａＣｌ
１０ｍＭ　ＫＣｌ
１．５ｍＭ　Ｎａ_２ＨＰＯ_４２Ｈ_２Ｏ
１２ｍＭ　デキストロース
５０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ
最終ｐＨ＝７．０５
【０３６０】
発光バッファ（２６ｍＬ）
アッセイバッファ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０ｍＬ
Ｅｍｅｒａｌｄ　Ｒｅａｇｅｎｔ（商標）（Ｔｒｏｐｉｘ）　　２．５ｍＬ
１００ｍＭ　ホモアルギニン　　　　　　　　　　　　　　　　２．５ｍＬ
ＣＳＰＤ　Ｒｅａｇｅｎｔ（商標）（Ｔｒｏｐｉｘ）　　　　　１．０ｍＬ
【０３６１】
アッセイバッファ
０．０５ＭのＮａ_２ＣＯ_３を０．０５ＭのＮａＨＣＯ_３に添加して、ｐＨ９．５にする。
ＭｇＣｌ_２中、１ｍＭにする。
【０３６２】
実施例７２
用いたプロセッシングアッセイは、ＤｅＣｌｕｅら［Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５１，７１２−７１７，１９９１］によって記載されたものの変形である。
【０３６３】
Ｋ４Ｂ−Ｒａｓプロセッシング阻害アッセイ
ＰＳＮ−１（ヒト膵臓癌）またはウイルス−Ｋ４Ｂ−ｒａｓによって形質転換されたＲａｔ１細胞を蛋白質プロセッシングのアッセイに用いる。１００ｍｍ皿内の半集密細胞に、所望の濃度の試験化合物、ロバスタチンまたは溶媒のみを含有する３．５ｍＬの培地（２％ウシ胎仔血清を補充した無メチオニンＲＰＭＩ、または２００ｍＭのグルタミン（Ｇｉｂｃｏ）０．０３５ｍＬ、２％ウシ胎仔血清をそれぞれ補充した無システイン／無メチオニンＤＭＥＭ））を供給する。ロバスタイン（５μＭから１０μＭ）、イソプレノイド生合成経路における律速段階を阻害することにより細胞におけるＲａｓプロセッシングを阻止する化合物、で処理した細胞は、陽性対照としての役割を果たす。試験化合物は、最終溶媒濃度０．１％になるように、ＤＭＳＯ中の１０００ｘ濃縮溶液として調製する。３７℃で２時間インキュベートした後、２０４μＣｉ／ｍＬの［^３５Ｓ］Ｐｒｏ−Ｍｉｘ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、細胞標識グレード）を添加する。
【０３６４】
標識アミノ酸混合物を導入した後、細胞を３７℃でさらに（典型的には、６時間から２４時間）インキュベートする。その後、培地を除去し、細胞を冷ＰＢＳで１回洗浄する。それらの細胞を冷ＰＢＳ１ｍＬ中にこそぎ落とし、遠心分離（１０分間、室温で、１０，０００ｘｇ）により回収して、１ｍＬの溶解バッファ（１％Ｎｏｎｉｄｅｔ　Ｐ−４０、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．５％デオキシコール酸塩、０．１％ＳＤＳ、１ｍＭのＤＴＴ、１０μｇ／ｍＬのＡＥＢＳＦ、１０μｇ／ｍＬのアプロチニン、２μｇ／ｍＬのロイペプチンおよび２μｇ／ｍＬのアンチパイン）中で渦攪拌することによって溶解する。その後、溶解産物を４℃で１０分間、１５，０００ｘｇで遠心分離し、その上清を保管する。
【０３６５】
Ｋｉ４Ｂ−Ｒａｓの免疫沈降には、等量の蛋白質を含有する溶解産物上清のサンプルを用いる。蛋白質濃度は、標準物質としてウシ血清アルブミンを用いるブラッドフォード法によって決定する。適切な量の溶解産物をＤＴＴ欠如溶解バッファで１ｍＬにし、８μｇの汎Ｒａｓモノクローナル抗体、Ｙ１３−２５９を添加する。氷上で、４℃で２４時間その蛋白質／抗体混合物をインキュベートする。４℃で４５時間タンブリングすることによって、ラットＩｇＧに対するウサギ抗血清（Ｃａｐｐｅｌ）をコーチングしたパンソルビン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を用いて、この免疫複合体を回収する。ＤＴＴおよびプロテアーゼ阻害剤を欠く溶解バッファ１ｍＬで、そのペレットを３回洗浄し、１００μＬの溶離バッファ（１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．４）、１％ＳＤＳ）に再び浮遊させる。９５℃で５分間加熱することによって、Ｒａｓをビーズから溶離し、その後、ビーズを短時間の遠心分離（３０秒間、室温で、１５，０００ｘｇ）によりペレット化する。
【０３６６】
その上清を、Ｋｉｒｓｔｅｎ−ｒａｓ特異的モノクローナル抗体、ｃ−Ｋ−ｒａｓ　ＡＢ−１（Ｃａｒｂｉｏｃｈｅｍ）２μｇを含有する１ｍＬの希釈バッファ（０．１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００、５ｍＭのＥＤＴＡ、５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．４））に添加する。第二の蛋白質／抗体混合物を、氷上で、４℃で１時間から２時間インキュベートする。４℃で４５時間タンブリングすることにより、ラットＩｇＧに対するウサギ抗血清（Ｃａｐｐｅｌ）をコーチングしたパンソルビン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）でその免疫複合体を回収する。ＤＴＴおよびプロテアーゼ阻害剤を欠く溶解バッファ１ｍＬで、そのペレットを３回洗浄し、Ｌａｅｍｍｌｉサンプルバッファに再び浮遊させる。９５℃で５分間加熱することによって、Ｒａｓをビーズから溶離し、その後、ビーズを短時間の遠心分離によりペレット化する。この上清を、１２％アクリルアミドゲル（ビス−アクリルアミド：アクリルアミド　１：１００）を用いるＳＤＳ−ＰＡＧＥに付し、蛍光間接撮影法によってＲａｓを視覚化する。
【０３６７】
ｈＤＪプロセッシング阻害アッセイ
ＰＳＮ−１細胞を２４ウエルアッセイプレートに播種する。試験を受ける各化合物のために、細胞を半対数段階中、最低７つの濃度で処理する。最終溶媒（ＤＭＳＯ）濃度は、０．１％である。ビヒクルのみの対照を各アッセイプレートに含める。細胞を２４時間、３７℃、５％ＣＯ_２下で処理する。
【０３６８】
その後、増殖培地を吸引して、サンプルをＰＢＳで洗浄する。２−メルカプトエタノールを５％含有するＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプルバッファで細胞を溶解し、５分間、９５℃に加熱する。氷を用いて１０分間冷却した後、ヌクレアーゼの混合物を添加して、サンプルの粘度を低下させる。
【０３６９】
氷上で、さらに１０分間プレートをインキュベートする。サンプルをプレキャスト８％アクリルアミドゲルに担持させ、３時間から４時間、１５ｍＡ／ゲルで電気泳動する。その後、ウエスタンブロット法によって、サンプルをゲルからＰＶＤＦ膜に移行させる。
【０３７０】
それらの膜を２％脱脂粉乳を含有するバッファ中で少なくとも１時間ブロッキングする。その後、膜をｈＤＪ−２に対するモノクローナル抗体（Ｎｅｏｍａｒｋｅｒｓ　Ｃａｔ．＃　ＭＳ−２２５）で処理して、洗浄し、アルカリホスファターゼ抱合第二抗体で処理する。その後、膜を蛍光検出試薬で処理し、リン光分析器を用いてスキャンする。
【０３７１】
各サンプルについて、ｈＤＪの非プレニル化種（より移動が遅い種）に対応する全シグナルの割合をデンシトメトリーによって計算する。ＳｉｇｍａＰｌｏｔソフトウエアにおける４パラメータ曲線フィットを用いて用量応答曲線およびＥＣ_５０値を生じる。
【０３７２】
実施例７３
Ｒａｐ１プロセッシング阻害アッセイ
プロトコルＡ
実施例７２に記載したように、細胞を標識し、インキュベートして溶解する。
【０３７３】
Ｒａｐ１の免疫沈降には、等量の蛋白質を含有する溶解産物上清のサンプルを用いる。蛋白質濃度は、標準物質としてウシ血清アルブミンを用いるブラッドフォード法によって決定する。適切な量の溶解産物をＤＴＴ欠如溶解バッファで１ｍＬにし、２μｇのＲａｐ１抗体、Ｒａｐ／Ｋｒｅｖ１（１２１）（Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｔｅｃｈ）を添加する。氷上で、４℃で１時間その蛋白質／抗体混合物をインキュベートする。４℃で４５時間タンブリングすることにより、パンソルビン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）でこの免疫複合体を回収する。ＤＴＴおよびプロテアーゼ阻害剤を欠く溶解バッファ１ｍＬで、そのペレットを３回洗浄し、１００μＬの溶離バッファ（１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．４）、１％ＳＤＳ）に再び浮遊させる。９５℃で５分間加熱することによって、Ｒａｐ１をビーズから溶離し、その後、ビーズを短時間の遠心分離（３０秒間、室温で、１５，０００ｘｇ）によりペレット化する。
【０３７４】
その上清を、Ｒａｐ１抗体、Ｒａｐ１／Ｋｒｅｖ１（１２１）（Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｔｅｃｈ）２μｇを含有する１ｍＬの希釈バッファ（０．１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００、５ｍＭのＥＤＴＡ、５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．４））に添加する。第二の蛋白質／抗体混合物を、氷上で、４℃で１時間から２時間インキュベートする。４℃で４５時間タンブリングすることにより、パンソルビン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）でその免疫複合体を回収する。ＤＴＴおよびプロテアーゼ阻害剤を欠く溶解バッファ１ｍＬで、そのペレットを３回洗浄し、Ｌａｅｍｍｌｉサンプルバッファに再び浮遊させる。９５℃で５分間加熱することによって、Ｒａｐ１をビーズから溶離し、その後、ビーズを短時間の遠心分離によりペレット化する。この上清を、１２％アクリルアミドゲル（ビス−アクリルアミド：アクリルアミド　１：１００）を用いるＳＤＳ−ＰＡＧＥに付し、蛍光間接撮影法によってＲａｓを視覚化する。
【０３７５】
プロトコルＢ：
ＰＮＳ−１細胞を１０ｃｍプレート内に３日から４日ごとに通過させて、近集密度のプレートを１：２０と１：４０に分ける。アッセイを始める前日、細胞５×１０^６個を１５ｃｍプレートに配置して、各アッセイにおいて同程度の集密度を確保する。これらの細胞のための培地は、１５％ウシ胎仔血清および１ｘＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ抗生物質混合物を含有するＲＰＭ１　１６４０（Ｇｉｂｃｏ）である。アッセイ当日、細胞をトリプシン処理によって回収し、培地中、細胞４００，０００個／ｍＬに希釈する。これらの希釈細胞０．５ｍＬを２４ウエルプレートの各ウエルに添加して、１ウエルあたりの最終細胞数を２００，０００にする。その後、細胞を３７℃で一晩増殖させる。
【０３７６】
アッセイを受ける化合物は、ＤＭＳＯ中、１／２対数希釈で希釈する。アッセイを受けるための最終濃度範囲は、一般に、０．１μＭから１００μＭである。一つの化合物につき４つの濃度が典型的である。化合物は、各濃度が最終濃度の１０００ｘになるように希釈する（すなわち、１０μＭのデータ点には、化合物の１０ｍＭのストックが必要である）。
【０３７７】
各々１０００ｘ化合物ストック２μＬを希釈して１ｍＬの培地にして、化合物の２Ｘストックを生じる。ビヒクル対照溶液（２μＬのＤＭＳＯを１ｍＬの培地にしたもの）を用いる。化合物の２Ｘストック０．５ｍＬを細胞に添加する。
【０３７８】
２４時間後、培地をアッセイプレートから吸引する。各ウエルをＰＢＳ　１ｍＬですすぎ、そのＰＢＳを吸引する。２−メルカプト−エタノールを５％含有する１８μＬのＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプルバッファ（Ｎｏｖｅｘ）を各ウエルに添加する。アッセイプレート用のアダプターを備える加熱ブロックを用いて、プレートを５分間、１００℃に加熱する。それらのプレートを氷上に配置する。１０分後、２０μＬのＲＮアーゼ／ＤＮアーゼ混合物を各ウエルに添加する。この混合物は、ＤＮアーゼＩ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ　Ｅｎｚｙｍｅｓ）１ｍｇ／ｍＬ、ＲＮアーゼ　Ａ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ　Ｅｎｚｙｍｅｓ）０．２５ｍｇ／ｍＬ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）　０．５ＭおよびＭｇＣｌ_２　０．５Ｍである。プレートを氷上に１０分間放置する。その後、サンプルをゲルに担持させるか、または使用するまで−７０℃で保管する。
【０３７９】
各アッセイプレート（各４点力価測定において、通常、３つの化合物、加えて、対照）は、１５ウエルの１４％Ｎｏｖｅｘゲルを一つ必要とする。各サンプル２５μＬをそのゲルに担持させる。そのゲルを１５ｍＡで約３．５時間走行させる。２１ｋｄ（Ｒａｐ１）と２９ｋｄ（Ｒａｂ６）の間に適切な分離が存在するように充分ゲルを走行させることが大切である。
【０３８０】
その後、ゲルを３０Ｖ（一定電圧）で１．５時間、ＮｏｖｅｘプレカットＰＶＤＦ膜に移送する。移送後直ちに、膜を２０ｍＬのウエスタンブロッキングバッファ（ウエスタン洗浄バッファ（ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０）中２％の脱脂粉乳）中で一晩ブロッキングする。週末にかけてブロッキングする場合は、０．０２％アジ化ナトリウムを添加する。膜は、ゆっくりと揺動しながら４℃でブロッキングする。
【０３８１】
ブロッキング溶液を廃棄し、抗Ｒａｐ１ａ抗体（Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ＳＣ１４８２）を１：１０００で（ウエスタンブロッキングバッファ中で希釈）、および抗Ｒａｂ６抗体（Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ＳＣ３１０）を１：５０００で（ウエスタンブロッキングバッファ中で希釈）含有する新しいブロッキング溶液２０ｍＬを添加する。それらの膜を室温で１時間、穏やかに揺動しながらインキュベートする。その後、ブロッキング溶液を廃棄し、膜をウエスタン洗浄バッファで３回、１回の洗浄あたり１５分間、洗浄する。その後、１：１０００（ウエスタンブロッキングバッファ中で希釈）の二つのアルカリホスファターゼ抱合抗体（アルカリホスファターゼ抱合抗ヤギＩｇＧおよびアルカリホスファターゼ抱合抗ウサギＩｇＧ［Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ］）を各々含有するブロッキング溶液２０ｍＬを添加する。それらの膜を１時間インキュベートし、上記のように３回洗浄する。
【０３８２】
１つのゲルにつき約２ｍＬのＡｍｅｒｓｈａｍ　ＥＣＦ検出試薬をＯＨＰフィルム（ＥＣＦ）の上に置き、検出試薬の上にＰＶＣＦ膜を下向きに置く。これを１分間インキュベートし、その後、膜を新しいＯＨＰフィルムシートの上に置く。
【０３８３】
現像したＯＨＰフィルムシートをリン光分析器を用いてスキャンし、検出可能なＲａｐ１ａウエスタンシグナルを生じる化合物の最低濃度からＲａｐ１ａ最小阻害濃度を決定する。用いられるＲａｐ１ａ抗体は、非プレニル化／非プロセッシングＲａｐ１ａのみを認識するため、検出可能なＲａｐ１ａウエスタンシグナルの存在は、Ｒａｐ１ａプレニル化の阻害を示す。
【０３８４】
プロトコルＣ：
このプロトコルによって、Ｒａｐ１ａのプロセッシングを阻害するためのＥＣ_５０値を決定することができる。以下の修正を伴うが、プロトコルＢに記載したとおり、アッセイを行う。サンプル２０μＬを、プレキャスト１０％から１２％勾配アクリルアミドミニゲル（Ｎｏｖｅｘ　Ｉｎｃ．）を用いて、１５ｍＡ／ゲルで２．５時間から３時間走行させる。Ｒａｐ１ａのプレニル化形態および非プレニル化形態は、ポリクローナル抗体（Ｒａｐ１／Ｋｒｅｖ−１　Ａｂ＃１２１；Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　＃ｓｃ−６５）でブロッティングし、続いてアルカリホスファターゼ抱合抗ウサギＩｇＧ抗体でブロッティングすることによって検出する。Ｉｍａｇｅｑｕａｎｔ（商標）ソフトウエア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｙｎａｍｉｃｓ）を用いてピーク積分によりＲａｐ１ａの全量に対する非プレニル化Ｒａｐ１ａのパーセンテージを決定する。プレニル化蛋白質の見掛け分子量のほうが大きいことで、非プレニル化Ｒａｐ１ａをプレニル化蛋白質と区別する。ＳｉｇｍａＰｌｏｔソフトウエアにおける４パラメータ曲線フィットを用いて用量応答曲線およびＥＣ_５０値を生じる。
【０３８５】
実施例７５
インビボ腫瘍増殖阻害アッセイ（ヌードマウス）
癌細胞増殖阻害剤としてのインビボ有効度は、当該技術で既知のいくつかのプロトコルによって確認することができる。こうしたインビボ有効度の研究例は、Ｎ．Ｅ．Ｋｏｈｌら（Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１：７９２−７９７（１９９５））およびＮ．Ｅ．Ｋｏｈｌら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９１：９１４１−９１４５（１９９４））によって記載されている。
【０３８６】
０日、発癌により突然変異したヒトＨａ−ｒａｓまたはＫｉ−ｒａｓで形質転換した齧歯動物繊維芽細胞（ＤＭＥＭ塩１ｍＬ中、細胞１０^６個／動物）を週齢８から１２の雌ヌードマウス（Ｈａｒｌａｎ）の左側腹部に皮下注射する。各発癌遺伝子グループにおけるマウスをビヒクルまたは化合物治療グループにランダムに割り当てる。１日目、動物に皮下投薬を開始し、実験継続期間にわたって毎日皮下投薬する。あるいは、ファルネシル−蛋白質トランスフェラーゼ阻害剤を持続注入ポンプによって投与してもよい。化合物またはビヒクルは、全量０．１ｍＬで送達する。ビヒクル治療動物のすべてが直径０．５ｃｍから１．０ｃｍの病変を示した時、典型的には細胞を注射した１１日から１５日後、腫瘍を切除し、重量を測定する。各細胞系列について、各治療グループにおける腫瘍の平均重量を計算する。[0001]
(Background of the Invention)
Ras proteins (Ha-Ras, Ki4a-Ras, Ki4b-Ras and N-Ras) are part of a signaling pathway that binds to the cell surface growth factor receptor, a nuclear signal that initiates cell growth. Biological and biochemical studies of Ras action indicate that Ras function favors G-regulatory proteins. In the inactive state, Ras is bound to GDP, but upon activation of the growth factor receptor, Ras exchanges GDP for GTP and undergoes a conformational change. The GTP-bound form of Ras propagates the growth-stimulating signal until its proliferative and stimulatory signal is stopped by the intrinsic GTPase activity of Ras, which returns the Ras protein to its inactive GDP-bound form (DR Lowy and And). DM Willumsen, Ann. Rev. Biochem. 62: 851-891 (1993)). Mutant ras genes (Ha-ras, Ki4a-ras, Ki4-ras and N-ras) are found in a number of human cancers, including colorectal cancer, pancreatic exocrine adenocarcinoma and myeloid leukemia. The protein products of these genes are defective in GTPase activity and constitutively transmit growth stimulating signals.
[0002]
Ras must be localized in the cell membrane for both normal and oncogenic functions. At least three post-translational modifications are involved in the membrane localization of Ras, and all three modifications occur at the C-terminus of Ras. The C-terminus of Ras is “CAAX” or “Cys-Aaaa”.¹-Aaaa²-Xaa "box (Cys is cysteine, Aaa is an aliphatic amino acid, and Xaa is any amino acid) (Willumsen et al., Nature 310: 583-586 (1984) ). Depending on the specific sequence, this motif may be an enzyme, farnesyl-protein transferase or geranylgeranyl-protein transferase type I (each of_FifteenOr C₂₀Serves as a signal sequence for isoprenoids, which catalyze the alkylation of cysteine residues in CAAX (S. Clarke., Ann. Rev. Biochem. 61: 355-386 (1992); WR Schaffer). and {J. Rine, Ann. Rev. Genetics @ 30: 209-237 (1992)). The term prenyl-protein transferase can be used generally to refer to farnesyl-protein transferase and geranylgeranyl-protein transferase type I. Ras protein is one of several proteins known to undergo post-translational farnesylation. Other farnesylated proteins include Ras-related GTP-binding proteins such as Rho (fungal mating factor), nuclear lamin, and the γ-subunit of transducin. James et al. Biol. Chem. 269, 14182 (1994) specify a peroxome-associated protein Pxf that is also farnesylated. James et al. Also suggest that there are farnesylated proteins of unknown structure and function in addition to those listed above.
[0003]
Inhibition of farnesyl-protein transferase is known to inhibit the growth of Ras-transformed cells in soft agar and to modify other aspects of their transformed phenotype. Certain inhibitors of farnesyl-protein transferase have also been demonstrated to selectively inhibit Ras oncoprotein processing in cells (KE Kohl et al., Science, 260: 1934-1937 (1993) and GL James, et al., Science, 260: 1937- 1942 (1993)). Recently, inhibitors of farnesyl-protein transferase inhibit the growth of ras-dependent tumors in nude mice (NE Kohl et al., Proc. Natl. Acad. Sci @ USA, 91: 9141-). 9145 (1994)) and regression of breast and salivary gland carcinomas in ras transgenic mice (NE Kohl et al., Nature Medicine, 1: 792-797 (1995)).
[0004]
Indirect inhibition of farnesyl-protein transferase in vivo has been demonstrated with sovastatin (Merck @ & @ Co., Rahway, NJ) and compactin (Hancock et al., Ibid .; Casey et al., Ibid .; Schaffer et al., Science @ 245: 379 (1989)). Have been. These drugs inhibit HMG-CoA reductase, the rate-limiting enzyme for the production of polyisoprenoids, including farnesyl pyrophosphate. Farnesyl-protein transferase utilizes farnesyl pyrophosphate to covalently modify the Cys thiol group of the Ras CAAX box with a farnesyl group (Reiss et al., Cell, 62: 81-88 (1990); Schaber et al., J. Am. Biol. Chem., 265: 14701-14704 (1990); Schaffer et al., Science, 249: 1133-1139 (1990); Manne et al., Proc. Natl. Acad. Sci @ USA, 87: 7541-7545 (1990)). Inhibition of farnesyl pyrophosphate biosynthesis by HMG-CoA reductase inhibits Ras membrane localization in cultured cells. However, direct inhibition of farnesyl-protein transferase is more specific and the side effects associated therewith are less than those which occur at the doses required for general inhibition of isoprene biosynthesis.
[0005]
Inhibitors of farnesyl-protein transferase (FPTase) have been described in two general classes. The first are analogs of farnesyl diphosphate (FPP), while the second class of inhibitors involves a protein substrate (eg, Ras) for the enzyme. The peptide-derived inhibitors described are generally cysteines containing molecules involved in the CAAX motif, which is a signal for protein prenylation (Schaber et al., Ibid .; Reiss et al., Ibid .; Reiss et al., PNAS, 88: 732). -736 (1991)). Such inhibitors can inhibit protein prenylation while simultaneously acting as a modifier to the farnesyl-protein transferase enzyme, or may be purely competitive inhibitors (US Pat. No. 5,141). , 851, University of Texas; NE Kohl et al., Science, 260: 1943-1937 (1993); Graham et al., J. Med. Chem., 37, 725 (1994)). In general, it has been determined that thiol deletion from a CAAX derivative dramatically reduces its ability to inhibit the compound. However, thiol groups limit the therapeutic application of FPTase inhibitors in terms of pharmacokinetics, pharmacodynamics and toxicity. Therefore, it is desirable to substitute the thiol with a functional group.
[0006]
It has recently been reported that farnesyl-protein transferase inhibitors inhibit the proliferation of vascular smooth muscle cells and are therefore useful for the prevention and treatment of arteriosclerosis and diabetic disorders of blood vessels (Japanese Patent Application Laid-Open No. 7-112930). ).
[0007]
Certain tricyclic compounds, optionally incorporating a piperidine moiety, have recently been disclosed to be inhibitors of FPTase (WO 95/10514, WO 95/10515 and WO 95/10515 and No. 95/10516). Also disclosed are imidazole-containing inhibitors of farnesyl-protein transferase (WO 95/09001 and EP 0 675 112 A1).
[0008]
Accordingly, it is an object of the present invention to develop compounds that do not have a thiol moiety and that will inhibit prenyl-protein transferase and thus will inhibit post-translational prenylation of proteins. A further object of the present invention is the development of chemotherapeutic compositions containing the compounds of the invention and methods for producing the compounds of the invention.
[0009]
(Disclosure of the Invention)
The invention includes fused bicyclic compounds that inhibit prenyl-protein transferase. Further, chemotherapeutic compositions containing these prenyl-protein transferase inhibitors and methods for producing them are included in the present invention.
[0010]
The compounds of the present invention have the following formula I:
[0011]
Embedded image

Explained by
[0012]
(Detailed description of the invention)
The compounds of the present invention are useful for inhibiting prenyl-protein transferase and inhibiting prenylation of the oncogene protein Ras. In a first embodiment, the compounds of the present invention or their pharmaceutically acceptable salts or stereoisomers have the formula I:
[0013]
Embedded image

(Where
The following formula:
[0014]
Embedded image

The following:
[0015]
Embedded image

Selected from
M is C or N;
R¹Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl,
f) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl,
g) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
h) halo,
i) OR¹⁰,
j) R¹¹S (O)_m,
k) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
l) -C (O) N (R¹⁰)₂,
m) CN,
n) NO₂,
o) R¹⁰C (O)-,
p) R¹⁰OC (O)-,
q) N₃,
r) -N (R¹⁰)₂Or
s) R¹¹OC (O) NR¹⁰−
Independently selected from;
R^1aAnd R^1bIs
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
f) unsubstituted or substituted aralkyl, or
g)-(CH₂)_nHeterocycle
Independently selected from;
R^2aAnd R^2bIs
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) oxo,
e) unsubstituted or substituted heterocycle, or
f) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy
Is independently selected from, and the substituted group in this case is
1) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
2) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
3) halo,
4) unsubstituted or substituted aryl,
5) unsubstituted or substituted heterocycles,
6) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl,
7) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl,
8) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl,
9) -OR¹⁰,
10) R¹¹S (O)_m−,
11) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
12) -C (O) N (R¹⁰)₂,
13) CN,
14) NO₂,
15) -N (R¹⁰)₂,
16) R¹⁰C (O)-,
17) R¹⁰OC (O)-,
18) N₃Or
19) R¹¹OC (O) NR¹⁰−
Substituted with one to three substituents selected from:
R^2aAnd R^2bMay be optionally connected in a ring;
R³Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl,
d) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl,
e) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
f) halo,
g) -OR¹⁰,
h) R¹¹S (O)_m−,
i) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
j) -C (O) NR¹⁰,
k) CN,
l) NO₂,
m) R¹⁰C (O)-,
n) R¹⁰OC (O)-,
o) N₃,
p) -N (R¹⁰)₂Or
q) R¹¹OC (O) NR¹⁰−
Independently selected from;
R⁸Is
a) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
b) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl, or
e) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl
Wherein the substituted group is selected from
1) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
2) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl,
3) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl,
4) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
5) CN,
6) unsubstituted or substituted aryl, or
7) Unsubstituted or substituted heterocycle
Selected from;
R¹⁰Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
f) unsubstituted or substituted aralkyl, or
g) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl
Selected from;
R¹¹Is
a) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
b) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted heterocycle,
e) unsubstituted or substituted aralkyl, or
f) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl
Selected from;
Y is
a) heterocycle,
b) C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) C₂~ C₈Alkenyl,
d) C₂~ C₈Alkynyl,
e) C₁~ C₆Alkoxy,
f) CN,
g) C (O),
h) C (O) OR¹⁰,
i) -OR¹⁰,
j) -N (R¹⁰)₂Or
k) C (= NH) NHR¹⁰
Selected from;
m is 0-4;
n is 0-4;
p is 1-4;
s is 0 to 4)
Explained by
[0016]
In a further embodiment of the invention, the inhibitor of prenyl-protein transferase, or a pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer thereof, has the formula A:
[0017]
Embedded image

(Where
M is C or N;
R¹Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl,
f) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl,
g) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
h) halo,
i) OR¹⁰,
j) R¹¹S (O)_m,
k) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
l) -C (O) N (R¹⁰)₂,
m) CN,
n) NO₂,
o) R¹⁰C (O)-,
p) R¹⁰OC (O)-,
q) N₃,
r) -N (R¹⁰)₂Or
s) R¹¹OC (O) NR¹⁰−
Independently selected from;
R^1aIs
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl, or
e) unsubstituted or substituted heterocycle
Independently selected from;
R^1bIs
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
f) unsubstituted or substituted aralkyl, or
g)-(CH₂)_nHeterocycle
Independently selected from
R^2aAnd R^2bIs
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) oxo,
e) unsubstituted or substituted heterocycle, or
f) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy
Is independently selected from, and the substituted group in this case is
1) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
2) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
3) halo,
4) unsubstituted or substituted aryl,
5) unsubstituted or substituted heterocycles,
6) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl,
7) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl,
8) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl,
9) -OR¹⁰,
10) R¹¹S (O)_m−,
11) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
12) -C (O) N (R¹⁰)₂,
13) CN,
14) NO₂,
15) -N (R¹⁰)₂,
16) R¹⁰C (O)-,
17) R¹⁰OC (O)-,
18) N₃Or
19) R¹¹OC (O) NR¹⁰−
Substituted with one to three substituents selected from:
R^2aAnd R^2bMay be optionally connected in a ring;
R³Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl,
d) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl,
e) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
f) halo,
g) -OR¹⁰,
h) R¹¹S (O)_m−,
i) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
j) -C (O) NR¹⁰,
k) CN,
l) NO₂,
m) R¹⁰C (O)-,
n) R¹⁰OC (O)-,
o) N₃,
p) -N (R¹⁰)₂Or
q) R¹¹OC (O) NR¹⁰−
Independently selected from;
R⁸Is
a) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
b) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl, or
e) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl
Wherein the substituted group is selected from
1) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
2) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl,
3) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl,
4) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
5) CN,
6) unsubstituted or substituted aryl, or
7) Unsubstituted or substituted heterocycle
Selected from;
R¹⁰Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
f) unsubstituted or substituted aralkyl, or
g) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl
Selected from;
R¹¹Is
a) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
b) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted heterocycle,
e) unsubstituted or substituted aralkyl, or
f) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl
Selected from;
Y is
a) heterocycle,
b) C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) C₂~ C₈Alkenyl,
d) C₂~ C₈Alkynyl,
e) C₁~ C₆Alkoxy,
f) CN,
g) C (O),
h) C (O) OR¹⁰,
i) -OR¹⁰,
j) -N (R¹⁰)₂Or
k) C (= NH) NHR¹⁰
Selected from;
m is 0-4;
n is 0 or 1;
p is 1-4;
s is 0 to 4)
Explained by
[0018]
In another embodiment of the invention, the inhibitor of prenyl-protein transferase or a pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer thereof has the formula A:
[0019]
Embedded image

(Where
M is C or N;
R¹Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
f) halo,
g) OR¹⁰,
h) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
i) -C (O) N (R¹⁰)₂,
j) CN,
k) R¹⁰C (O)-,
l) R¹⁰OC (O)-,
m) -N (R¹⁰)₂Or
n) R¹¹OC (O) NR¹⁰−
Independently selected from;
R^1aIs
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl, or
c) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy
Independently selected from;
R^1bIs
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
f) unsubstituted or substituted aralkyl, or
g)-(CH₂)_nHeterocycle
Independently selected from
R^2aAnd R^2bIs
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) oxo,
e) unsubstituted or substituted heterocycle, or
f) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy
Is independently selected from, and the substituted group in this case is
1) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
2) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
3) halo,
4) unsubstituted or substituted aryl,
5) unsubstituted or substituted heterocycles,
6) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl,
7) -OR¹⁰,
8) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
9) -C (O) N (R¹⁰)₂,
10) CN,
11) NO₂Or
12) -N (R¹⁰)₂
Substituted with one to three substituents selected from:
R^2aAnd R^2bMay be optionally connected in a ring;
R³Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) halo,
d) -OR¹⁰,
e) R¹¹S (O)_m−,
f) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
g) -C (O) NR¹⁰,
h) R¹⁰C (O)-,
i) -N (R¹⁰)₂Or
j) R¹¹OC (O) NR¹⁰−
Independently selected from;
R⁸Is
a) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
b) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl, or
e) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl
Wherein the substituted group is selected from
1) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
2) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl,
3) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl,
4) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
5) CN,
6) unsubstituted or substituted aryl, or
7) Unsubstituted or substituted heterocycle
Selected from;
R¹⁰Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
f) unsubstituted or substituted aralkyl, or
g) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl
Selected from;
R¹¹Is
a) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
b) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted heterocycle,
e) unsubstituted or substituted aralkyl, or
f) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl
Selected from;
Y is
a) heterocycle,
b) C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) C₂~ C₈Alkenyl,
d) C₂~ C₈Alkynyl,
e) C₁~ C₆Alkoxy,
f) CN,
g) C (O),
h) C (O) OR¹⁰,
i) -OR¹⁰,
j) -N (R¹⁰)₂Or
k) C (= NH) NHR¹⁰
Selected from;
m is 0-4;
n is 0 or 1;
p is 1-4;
s is 0 to 4)
Explained by
[0020]
In another embodiment of the present invention, the inhibitor of prenyl-protein transferase or a pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer thereof has the formula B:
[0021]
Embedded image

(Where
R¹Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
f) halo,
g) OR¹⁰,
h) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
i) -C (O) N (R¹⁰)₂,
j) CN,
k) R¹⁰C (O)-, or
l) -N (R¹⁰)₂
Independently selected from;
R^2aAnd R^2bIs
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) oxo,
e) unsubstituted or substituted heterocycle, or
f) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy
Is independently selected from, and the substituted group in this case is
1) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
2) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
3) halo,
4) unsubstituted or substituted aryl,
5) unsubstituted or substituted heterocycles,
6) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl,
7) -OR¹⁰,
8) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
9) -C (O) N (R¹⁰)₂Or
10) -N (R¹⁰)₂
Substituted with one to three substituents selected from:
R^2aAnd R^2bMay be optionally connected in a ring;
R³Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) halo,
d) -OR¹⁰,
e) R¹⁰C (O) NR¹⁰−,
f) -C (O) NR¹⁰,
g) R¹⁰C (O)-, or
h) -N (R¹⁰)₂
Independently selected from;
R⁸Is
a) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
b) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl, or
e) unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl
Wherein the substituted group is selected from
1) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
2) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkenyl,
3) Unsubstituted or substituted C₂~ C₈Alkynyl,
4) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkoxy,
5) CN,
6) unsubstituted or substituted aryl, or
7) Unsubstituted or substituted heterocycle
Selected from;
R¹⁰Is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
c) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
f) unsubstituted or substituted aralkyl, or
g) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl
Selected from;
R¹¹Is
a) Unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl,
b) unsubstituted or substituted C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted heterocycle,
e) unsubstituted or substituted aralkyl, or
f) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl
Selected from;
Y is
a) a heterocycle selected from pyridinyl, furanyl, pyrazolyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, imidazolyl, oxazolyl, thiazolyl, triazolyl, tetrazolyl or thiofuranyl;
b) C₃~ C₁₀Cycloalkyl,
c) C₂~ C₈Alkenyl,
d) C₂~ C₈Alkynyl,
e) C₁~ C₆Alkoxy,
f) CN,
g) C (O),
h) C (O) OR¹⁰,
i) -OR¹⁰,
j) -N (R¹⁰)₂Or
k) C (= NH) NHR¹⁰
Selected from;
m is 0-4;
n is 0 or 1;
p is 1-4;
s is 0 to 4)
Explained by
[0022]
Examples of compounds of the present invention include:
N-isopropyl-2- (1-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (1-methyl-2-o-tolyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethylacetamide;
N-isopropyl-2- (7-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- [1- (2-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-1-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridin-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
N-benzyl-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-ethyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- [1- (4-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- [1- (3-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N, N-bis (pyridin-3-ylmethyl) acetamide;
2- (1-benzyl-1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- [2- (4-bromophenyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- (1-phenyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1-propyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- (1-benzyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
1-benzyl-4-{[[(1-benzyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-3-yl) acetyl] (isopropyl) amino] methyl} pyridinium;
N-cyclobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide;
N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide;
2- [2- (2-chloro-phenyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide;
N, N-diallyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide;
(S) -N-sec-butyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
N-furan-3-ylmethyl-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
N- (2-cyano-ethyl) -N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
N-cyclobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
2- [2- (3-chloro-phenyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
N- (2-cyano-ethyl) -N-cyclopropyl-2- (1-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyrimidin-5-ylmethyl-acetamide;
N-cyclopropyl-N- (2-methyl-2H-pyrazol-3-ylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
(+)-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) propanamide;
N- (2-furylmethyl) -N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
N-isopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-5-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isobutyl-N-methyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyrazin-2-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopropyl-N- (3-furylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N- (2-cyanomethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-3-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyrazin-2-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-3-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide;
N- (2-cyanoethyl) -N-cyclopropyl-2- [2- (2-methylphenyl) -1H-indol-3-yl] acetamide;
N-isopentyl-N-methyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N- (2-cyanoethyl) -N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-cyclopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-cyclopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-3-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-cyclobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopropyl-N- (2-furylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isopropyl-2- [2- (2-methoxyphenyl) -1H-indol-3-yl] -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide;
2- [2- (2-chlorophenyl) -1H-indol-3-yl] -N- (2-cyanoethyl) -N-cyclopropylacetamide;
N- (t-butyl) -N- (2-cyanoethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-3-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopropyl-N-[(2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetyl]-[beta] -alaninate methyl;
N-isopropyl-2- (6-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (4-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopentyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-[(1R) -1-methylpropyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N, N-bis (2-methoxyethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isopropyl-2- (5-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N- (2-cyanoethyl) -N-cyclopropyl-2- [2- (2-methoxyphenyl) -1H-indol-3-yl] acetamide;
N-cyclopentyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopentyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-3-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-N-phenyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N- [3- (dimethylamino) propyl] -N'-ethylimidocarbamic acid (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetyl;
N-cyclopropyl-N-[(2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetyl] -β-alanine;
N-isopropyl-2- (2-pyridin-3-yl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
N-isopropyl-2- (2-pyridin-4-yl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide;
N-benzyl-N-isopropyl-2- (2-pyridin-4-yl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
Or their pharmaceutically acceptable salts or stereoisomers.
[0023]
Particular examples of compounds of the present invention have the formula:
[0024]
Embedded image

N-isopropyl-2- (1-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
The following formula:
[0025]
Embedded image

N-isopropyl-2- (1-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
The following formula:
[0026]
Embedded image

2- [1- (2-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
The following formula:
[0027]
Embedded image

N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-1-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
The following formula:
[0028]
Embedded image

N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridin-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
The following formula:
[0029]
Embedded image

N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide;
The following formula:
[0030]
Embedded image

N, N-diallyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
The following formula:
[0031]
Embedded image

N-furan-3-ylmethyl-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
The following formula:
[0032]
Embedded image

N- (2-cyano-ethyl) -N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
Or their pharmaceutically acceptable salts or stereoisomers.
[0033]
The compounds of the present invention have asymmetric centers, chiral axes and chiral planes and can occur as racemates, racemic mixtures and individual diastereomers, and all possible isomers, including optical isomers, are subject to the present invention. (See, in particular, pages 1119 to 1190 of EL Eliel and SH Wilen and Stereochemistry of Carbon Compound (John Wiley and Sons, New York 1994)). Any variable (eg, aryl, heterocycle, R^1a, R³) Occurs more than one time in any constituent, its definition on each occurrence is independent of that at every other occurrence. Also, combinations of substituents / variables are possible only if such combinations result in stable compounds.
[0034]
“Alkyl” as used herein, unless otherwise indicated, includes both branched and straight-chain saturated aliphatic hydrocarbon groups having 1 to 6 carbon atoms. "Alkoxy," unless otherwise indicated, represents an alkyl group having from 1 to 6 carbon atoms attached through an oxygen bridge. "Halogen" or "halo" as used herein refers to fluoro, chloro, bromo, and iodo.
[0035]
"Cycloalkyl," as used herein, unless otherwise indicated, is intended to include non-aromatic hydrocarbon groups having 3 to 10 carbon atoms. Examples of such cycloalkyl groups include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, adamantyl and the like. In some cases, carbon atoms in the cycloalkyl may be substituted with a heteroatom such as O, N or S.
[0036]
Unless the number of carbon atoms is specified, the term "alkynyl" refers to a straight, branched chain having from 2 to 10 carbon atoms and at least one carbon-carbon double bond, unless otherwise indicated. Or a cyclic non-aromatic hydrocarbon. Preferably there is one carbon-carbon double bond, but there may be up to four non-aromatic carbon-carbon double bonds. Therefore, "C₂~ C₈"Alkenyl" means an alkenyl radical having 2 to 8 carbon atoms. Examples of such alkenyl groups include, but are not limited to, ethenyl, propenyl, butenyl and cyclohexenyl. As described above for alkyl, the straight, branched or cyclic portion of the alkenyl group may contain double bonds and may be substituted if indicated as a substituted alkenyl group. .
[0037]
The term "alkynyl," unless otherwise indicated, refers to a straight, branched or cyclic hydrocarbon radical having from 2 to 10 carbon atoms and at least one carbon-carbon triple bond. There can be up to three triple bonds. Therefore, "C₂~ C₈"Alkynyl" means an alkynyl radical having 2 to 8 carbon atoms. Examples of such alkynyl groups include, but are not limited to, ethynyl, propynyl and butynyl. As described above for alkyl, the straight, branched or cyclic portion of the alkynyl group may contain triple bonds and may be substituted if indicated as a substituted alkynyl group.
[0038]
As used herein, "aryl" means any stable monocyclic or bicyclic carbocyclic ring of up to seven members in each ring where at least one ring is aromatic. Examples of such aryl elements include, but are not limited to, phenyl, naphthyl, tetrahydronaphthyl, indanyl, biphenyl, phenanthryl, anthryl, acenaphthyl, and the like.
[0039]
“Aralkyl” as used herein refers to C₁~ C₆An aryl moiety as defined above which is connected by an alkyl linker (where alkyl is defined above) is meant. Examples of certain alkyls include, but are not limited to, benzyl, naphthylmethyl, phenylbutyl, and the like.
[0040]
As used herein, the term "heterocycle" or "heterocyclic" refers to a saturated or unsaturated heteroatom 1 selected from the group consisting of carbon atoms and N, O and S. A stable 5- to 7-membered monocyclic heterocyclic ring or a stable 8- to 11-membered bicyclic heterocyclic ring, wherein any heterocycle as defined above is fused to a benzene ring. Includes bicyclic groups. The heterocycle can be attached at any heteroatom or carbon atom that results in a stable structure. The term "heterocycle" or "heterocyclic" embraces heteroaryl moieties. Examples of such heterocyclic elements include azepinyl, benzimidazolyl, benzisoxazolyl, benzofurazanyl, benzopyranyl, benzothiopyranyl, benzofuralyl, benzothiazolyl, benzothienyl, benzoxazolyl, chromanyl, sinolinyl, dihydrobenzofuryl, dihydrobenzofuryl. Benzothienyl, dihydrobenzothiopyranyl, dihydrobenzothiopyranyl sulfone, 1,3-dioxolanyl, furyl, imidazolidinyl, imidazolinyl, imidazolyl, indolinyl, indolyl, isochromanyl, isoindolinyl, isoquinolinyl, isothiazolidinyl, isothiazolyl, isothiazolidinyl , Morpholinyl, naphthyridinyl, oxadiazolyl, 2-oxoazepinyl, oxazolyl, 2-oxopiperazinyl, 2- Oxopiperidinyl, 2-oxopyrrolidinyl, piperidyl, piperazinyl, pyridyl, 2-pyridinonyl, 2-pyridinonylpyrazinyl, pyrazolidinyl, pyrazolyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrrolidinyl, pyrrolyl, quinazolinyl, quinolinyl, quinoxalinyl, tetrahydrofuryl, tetrahydrofuryl Examples include, but are not limited to, isoquinolinyl, tetrahydroquinolinyl, thiamorpholinyl, thiamorpholinyl sulfoxide, thiazolyl, thiazolinyl, thienofuryl, thienothienyl, thienyl and thiazolyl.
[0041]
As used herein, the term "heteroaryl" means that at least one ring is aromatic and has 1 to 4 carbon atoms substituted by a heteroatom selected from the group consisting of N, O and S. And any stable monocyclic or bicyclic carbocyclic ring having 7 members or less in each ring. Examples of such heterocyclic elements include benzimidazolyl, benzisoxazolyl, benzofurazanyl, benzopyranyl, benzothiopyranyl, benzofuryl, benzothiazolyl, benzothienyl, benzoxazolyl, chromanyl, sinolinyl, dihydrobenzofuryl, dihydrobenzothienyl. , Dihydrobenzothiopyranyl, dihydrobenzothiopyranyl sulfone, furyl, imidazolyl, indolinyl, indolyl, isochromanyl, isoindolinyl, isoquinolinyl, isothiazolyl, naphthyridinyl, oxadiazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrazolyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrrolyl, quinazolinyl, quinazolinyl Quinoxalinyl, tetrahydroisoquinolinyl, tetrahydroquinolinyl, thiazolyl, thienofuryl Thienothienyl, thienyl and triazolyl but not limited to.
[0042]
“Heterocyclylalkyl” as used herein refers to C₁~ C₆It is intended to mean a heterocyclic moiety as defined above, which is connected by an alkyl linker (where alkyl is defined above). Examples of heterocyclylalkyl include, but are not limited to, 2-pyridylmethyl, 2-imidazolylethyl, 2-quinolinylmethyl, 2-imidazolylmethyl, 1-piperazineethyl and the like.
[0043]
The terms "substituted alkyl", "substituted alkenyl", "substituted alkynyl" and "substituted alkoxy" as used herein, unless otherwise defined, have carbon atoms of F, Cl, Br, I, CF₃, OCF₃, CN, N₃, NO₂, NH₂, N (C₁~ C₆Alkyl)₂, Oxo, OH, -O (C₁~ C₆Alkyl), -C (O) H, S (O)_0-2, (C₁~ C₆Alkyl) S (O)_0-2-, C₂~ C₆Alkenyl, C₂~ C₆Alkynyl,-(C₁~ C₆Alkyl) S (O)_0-2(C₁~ C₆Alkyl), C₃~ C₂₀Cycloalkyl, -C (O) NH₂, HC (O) NH-, (C₁~ C₆Alkyl) C (O) NH—, H₂NC (O) NH-, (C₁~ C₆Alkyl) C (O)-, -O (C₁~ C₆Alkyl) CF₃, (C₁~ C₆Alkyl) OC (O)-, (C₁~ C₆Alkyl) O (C₁~ C₆Alkyl)-, (C₁~ C₆Alkyl) C (O)₂(C₁~ C₆Alkyl)-, (C₁~ C₆Alkyl) OC (O) NH-, aryl, heterocycle, aralkyl, heterocyclylalkyl, halo-aryl, halo-aralkyl, halo-heterocycle, halo-heterocyclylalkyl, cyano-aryl, cyano-aralkyl, cyano-heterocycle and It is intended to include branched or straight-chain alkyl groups of a specific number of carbon atoms, which can be substituted with cyano-heterocyclylalkyl.
[0044]
As used herein, the terms "substituted aryl," "substituted heterocycle," "substituted heteroaryl," "substituted cycloalkyl," "substituted benzyl," "substituted aralkyl," and "substituted heterocyclylalkyl" are defined differently. Unless defined otherwise, it is intended to include from 1 to 3 substituents and a cyclic group having a point of attachment to the remainder of the compound. Such substituents are preferably F, Cl, Br, I, CF₃, OCF₃, NH₂, N (C₁~ C₆Alkyl)₂, NO₂, CN, N₃, C₁~ C₂₀Alkyl, C₃~ C₂₀Cycloalkyl, -OH, -O (C₁~ C₆Alkyl), S (O)_0-2, (C₁~ C₆Alkyl) S (O)_0-2−, (C₁~ C₆Alkyl) S (O)_0-2(C₁~ C₆Alkyl)-, -C (O) NH₂, HC (O) NH-, (C₁~ C₆Alkyl) C (O) NH—, H₂NC (O) NH-, (C₁~ C₆Alkyl) C (O)-, (C₁~ C₆Alkyl) OC (O)-, (C₁~ C₆Alkyl) O (C₁~ C₆Alkyl)-, (C₁~ C₆Alkyl) C (O)₂(C₁~ C₆Alkyl)-, (C₁~ C₆Alkyl) OC (O) NH-, aryl, aralkyl, heterocycle, heterocyclylalkyl, halo-aryl, halo-aralkyl, haloheterocycle, haloheterocyclylalkyl, cyano-aryl, cyano-aralkyl, cyano-heterocycle and cyanoheterocyclyl It is selected from groups including, but not limited to, alkyl.
[0045]
Substituent (R¹, R^2a, R³Lines drawn from (such as from) to the ring structure indicate that the indicated bond may be attached to any of the substitutable ring carbon or nitrogen atoms.
[0046]
Preferably, R¹Is hydrogen, OR¹⁰, -N (R¹⁰)₂, Halo or unsubstituted or substituted C₁~ C₆Independently selected from alkyl.
[0047]
Preferably, R^1aAnd R^1bIs hydrogen or unsubstituted or substituted C₁~ C₆Independently selected from alkyl.
[0048]
Preferably, R^2aAnd R^2bIs hydrogen, unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl, unsubstituted or substituted aryl, oxo or unsubstituted or substituted C₁~ C₆Independently selected from alkoxy. Most preferably, R^2aIs unsubstituted or substituted aryl.
[0049]
Preferably, R³Is hydrogen, unsubstituted or substituted C₁~ C₆Alkyl, unsubstituted or substituted aryl, and R¹⁰To be independently selected.
[0050]
Preferably, R⁸Is hydrogen, unsubstituted or substituted C_1-6Alkyl, unsubstituted or substituted C_2-8Alkenyl, or unsubstituted or substituted C_3-10Selected from cycloalkyl.
[0051]
Preferably, Y is a heterocycle, C_3-10Cycloalkyl, C (O), CN, or -OR¹⁰Is selected from When Y is a heterocycle, preferably the heterocycle is selected from pyridinyl, furanyl, pyrazolyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, imidazolyl, oxazolyl, thiazolyl, triazolyl, tetrazolyl or thiofuranyl. When Y is a heterocycle, most preferably the heterocycle is selected from pyridinyl, furanyl, pyrazolyl, pyrimidinyl or pyrazinyl.
[0052]
Preferably, m is 0 or 1.
Preferably, n is 0, 1 or 2, most preferably n is 1.
Preferably, p is 0, 1 or 2.
Preferably, s is 0 or 1.
Preferably, the following parts:
[0053]
Embedded image

The following:
[0054]
Embedded image

Is selected from
More preferably,
[0055]
Embedded image

The following:
[0056]
Embedded image

Is selected from
[0057]
Any substituent or variable at a particular position in the molecule (eg, R^1a, R³, N, etc.) shall be independent of its definition elsewhere in the molecule. Therefore, -N (R¹⁰)₂Is -NHH, -NHCH₃, -NHC₂H₅And so on. The substituents and substitution patterns for the compounds of the present invention are chemically stable and can be readily synthesized from readily available starting materials by techniques known in the art and by the methods described below. Would be selectable by one of ordinary skill in the art to produce
[0058]
Pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present invention include the conventional non-toxic salts of the compounds of the present invention, for example, as generated from non-toxic inorganic or organic acids. For example, these common non-toxic salts include those derived from inorganic acids such as hydrochloric, hydrobromic, sulfuric, sulfamic, phosphoric, nitric and the like, and acetic, propionic, succinic, and the like. , Glycolic acid, stearic acid, lactic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, ascorbic acid, pamoic acid, maleic acid, hydroxymaleic acid, phenylacetic acid, glutamic acid, benzoic acid, salicylic acid, sulfanilic acid, 2-acetoxy-benzoic acid, Salts prepared from organic acids such as fumaric acid, toluenesulfonic acid, methanesulfonic acid, ethanedisulfonic acid, oxalic acid, isethionic acid, trifluoroacetic acid and the like.
[0059]
Pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present invention can be synthesized from compounds of the present invention that have a basic moiety by conventional chemical methods. Generally, the salts are prepared with an ion exchange resin or, in a suitable solvent or various combinations of solvents, combine the free base with a stoichiometric or excess of an inorganic or organic acid to form the desired salt. It is prepared by reacting.
[0060]
Abbreviations that can be used in the description of chemistry or in the examples that follow include:
Ac₂O acetic anhydride;
AIBN '2,2'-azobisisobutyronitrile;
BINAP {2,2'-bis (diphenylphosphino) -1,1'-binaphthyl;
Bn @ benzyl;
BOC / Boc @ t-butoxycarbonyl;
CBz @ carbobenzyloxy;
DBAD di-tert-butyl azodicarboxylate;
DBU @ 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene;
DCE @ 1,2-dichloroethane;
DIEA @ N, N-diisopropylethylamine;
DMAP @ 4-dimethylaminopyridine;
DME @ 1,2-dimethoxyethane;
DMF @ N, N-dimethylformamide;
DMSO @ methyl sulfoxide;
DPPA diphenylphosphoryl azide;
DTT @ dithiothreitol;
EDC @ 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethyl-carbodiimide hydrochloride;
EDTA @ ethylenediaminetetraacetic acid;
Et₂Diethyl ether;
Et₃N @ triethylamine;
EtOAc ethyl acetate;
EtOH ethanol;
FAB @ fast atom bombardment;
HEPES @ 4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazineethanesulfonic acid;
HOAc acetic acid;
HOBT @ 1-hydroxybenzotrizazole hydrate;
HOOBT {3-hydroxy-1,2,2-benzotriazin-4 (3H) -one;
HPLC high performance liquid chromatography;
KOtBu @ potassium t-butoxide;
LAH @ lithium aluminum hydride;
MCPBA @ m-chloroperoxybenzoic acid;
Me @ methyl;
MeOH methanol;
Ms @ methanesulfonyl;
MsCl @ methanesulfonyl chloride;
n-Bu @ n-butyl;
n-Bu₃P @ tri-n-butylphosphine;
NaHMDS @ sodium bis (trimethylsilyl) amide;
NBS @ N-bromosuccinimide;
Pd (Ph₃)₄Tetrakis (triphenylphosphine) palladium;
Pd₂(Dba)₂@Tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0);
Ph @ phenyl;
PMSF {a-toluenesulfonyl chloride;
Py or pyr @ pyridine;
PYBOP (or PyBOP) benzotriazol-1-yl-oxy-trispirolidinophosphonium hexafluorophosphate;
t-Bu @ t-butyl;
TBAF tetrabutylammonium fluoride;
RPLC reverse phase liquid chromatography;
RT @ room temperature;
TBSCl @ t-butyldimethylsilyl chloride;
TFA @ trifluoroacetic acid;
THF @ tetrahydrofuran;
TIPS @ triisopropylsilyl;
TMS @ tetramethylsilane; and
Tr @ trityl.
[0061]
These reactions may be used in a linear order to produce the compounds of the present invention, or these reactions may be used to synthesize fragments and then combined by the alkylation reactions described in the scheme. You may.
[0062]
Overview of Schemes 1 to 6
The substituents and variables (n, R^2a, R⁸, Y, etc.) are defined in Formula I. The substituent R is a substituent R of the formula I^2aOr R^2bIndicates one to three substituents that may be available when is substituted.
[0063]
The requisite intermediates are in some cases commercially available or can be prepared for the majority according to literature procedures. For example, Scheme 1 describes the synthesis of 2-phenylindole-3-acetamide. At 0 ° C., to a solution of aldehyde 1 and amine 2 in methanol is added sodium borohydride. Thereafter, the reductive amination product 3 is coupled with 2-phenylindole-3-acetic acid (4) to obtain the desired amide 5. N-alkylation of amide 5 can also be accomplished by treatment with potassium t-butoxide and alkyl iodide to give compound 6.
[0064]
Scheme 2 illustrates the preparation of indole-3-acetamide with various substituents attached at position 2. Bromination of indole-3-acetonitrile (7) gives intermediate 8. Subsequent Suzuki coupling yields the 2-substituted compound 9. Hydrolysis of the cyano group gives acid 10, which is then coupled with amine 3 to give compound 11.
[0065]
Scheme 3 illustrates the preparation of indole substituted at positions 4, 5, 6, and / or 7. The acyl-substituted acid 12 is coupled with amine 3 under standard conditions to give amine 13. Indole 16 is obtained by formation of hydrazine 15 followed by Fisher indolization. Using a Type 12 acid substituted at the 2-alkyl position gives the corresponding α-substituted indole acetamide.
[0066]
Scheme 4 details the synthesis of N-arylmethyl-substituted indoleacetamides. Indole-3-acetic acid (17) is coupled to amine 3 to give amide 18. Subsequent alkylation with bromide 19 yields N-alkylated product 20.
[0067]
Indole isomer 24 can be prepared as described in Scheme 5. Alkylation and esterification is performed by treating the 2-substituted indole 22 with potassium hydroxide and methyl bromoacetate in wet DMSO to yield the acid 23. Compound 24 is obtained by peptide coupling using amine 3.
[0068]
The synthesis of 2-substituted azoindole-3-acetamides is outlined in Scheme 6. Hands et al. (Hand, D .; Bishop, B .; Cameron, M .; Edwards, JS; Cottrell, IF; Wright, SHB Synthesis @ 1996, 877-882). An azaindole 27 is prepared from an aminopyridine 25 and a Weinreb amide 26. Mannich reaction with paraformaldehyde as the amine component gives azagramin 28. Quaternization and cyanide displacement in situ yields indolyl acetonitrile 29. Thereafter, basic hydrolysis and peptide coupling as described above yield acetamide 31.
[0069]
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[0070]
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[0071]
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[0072]
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[0073]
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[0074]
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[0075]
In a preferred embodiment of the invention, the compounds of the invention are selective inhibitors of farnesyl-protein transferase. The compound may, for example, be assayed for its in vitro farnesyl-protein transferase inhibitory activity by the assay described in Example 67 and assayed for the compound's geranylgeranyl-protein transferase type I in vitro assay in Example 68. It is considered to be a selective inhibitor of farnesyl-protein transferase when it is at least 100 times greater than its activity. Preferably, the selective compounds exhibit at least a 1000-fold greater activity on one of their enzymatic activities when comparing inhibition of geranylgeranyl-protein transferase type I with inhibition of farnesyl-protein transferase.
[0076]
A selective inhibitor of farnesyl-protein transferase is
a) EC for inhibition of farnesylation of hDJ protein₅₀IC for inhibition of prenylation of newly synthesized K-Ras protein about 100-fold higher than₅₀It is also preferred that they be further characterized by: Such IC₅₀And EC₅₀When measuring, the assay described in Example 72 can be used.
[0077]
A selective inhibitor of farnesyl-protein transferase is
b) EC for inhibition of farnesylation of intracellular protein hDJ₅₀IC for inhibition of K4B-Ras-dependent activation of MAP kinase in cells at least 100 times greater₅₀(Measured value of inhibitory activity in vitro)
It is also preferred that they be further characterized by:
[0078]
A selective inhibitor of farnesyl-protein transferase is
c) Inhibitory activity against H-ras-CVLL (SEQ ID NO: 1) dependent activation of MAP kinase in cells (IC₅₀IC) for H-Ras-dependent activation of MAP kinase in cells at least 1000-fold lower than₅₀It is also preferred that they are further characterized by (measured value of in vitro inhibitory activity). When measuring Ras-dependent activation of MAP kinase in cells, the assay described in Example 71 can be used.
[0079]
In another preferred embodiment of the invention, the compounds of the invention are dual inhibitors of farnesyl-protein transferase and geranylgeranyl-protein transferase. Such dual inhibitors can be referred to as type II prenyl-protein transferase inhibitors and exhibit certain characteristics when evaluated in in vitro assays depending on the type of assay used.
[0080]
In a SEAP assay such as that described in Example 71, the dual inhibitor compound has an in vitro inhibitory activity (IC) of less than about 12 μM on the K4B-Ras dependent activity of MAP kinase in cells.₅₀) Is preferable.
[0081]
Type II prenyl-protein transferase inhibitors include:
a) IC for inhibiting farnesylation of protein hDJ in cells₅₀IC for inhibiting K4B-Ras dependent activity of MAP kinase in cells, between 0.1 and 100 times₅₀(Measured value of in vitro inhibitory activity); and
b) Inhibitory activity on expression of SEAP protein in cells transfected with pCMV-SEAP plasmid constitutively expressing SEAP protein (IC₅₀) IC for inhibiting the K4B-Ras-dependent activity of MAP kinase in cells that is more than 5 times lower₅₀(Measurement of in vitro inhibitory activity).
[0082]
Type II prenyl-protein transferase inhibitors include:
a) Inhibitory activity (IC) on H-ras-CVLL (SEQ ID NO: 1) dependent activation of MAP kinase in cells₅₀IC) for H-Ras-dependent activation of MAP kinase in cells, which is more than 2-fold lower but not lower than 20,000-fold₅₀(Measured value of in vitro inhibitory activity); and
b) Inhibitory activity on expression of SEAP protein in cells transfected with pCMV-SEAP plasmid constitutively expressing SEAP protein (IC₅₀) IC for H-ras-CVLL-dependent activity of MAP kinase in cells that is more than 5 times lower than₅₀(Measurement of in vitro inhibitory activity).
[0083]
Type II prenyl-protein transferase inhibitors include:
a) Inhibitory activity (IC) on H-ras-CVLL (SEQ ID NO: 1) dependent activation of MAP kinase in cells₅₀IC) for H-Ras-dependent activation of MAP kinase in cells that is more than 10-fold lower but not less than 2500-fold lower₅₀(Measured value of in vitro inhibitory activity); and
b) Inhibitory activity on expression of SEAP protein in cells transfected with pCMV-SEAP plasmid constitutively expressing SEAP protein (IC₅₀) IC for H-ras-CVLL-dependent activity of MAP kinase in cells that is more than 5 times lower than₅₀(Measurement of in vitro inhibitory activity).
A method for measuring the activity of prenyl-protein transferase inhibitors and mixed compositions used in this method for Ras-dependent activation of MAP kinase in cells is described in Example 71.
[0084]
In yet another embodiment, the compounds of the invention can be geranylgeranyl-protein transferase type I inhibitors, which are more potent inhibitors of farnesyl-protein transferase.
[0085]
The compounds of the present invention are useful as drugs for mammals, especially humans. These compounds can be administered to a patient for use in treating cancer. Examples of the types of cancer that can be treated with the compounds of the present invention include, but are not limited to, colorectal cancer, exocrine pancreatic adenocarcinoma, myeloid leukemia and neuronal tumors. Such tumors may have mutations in the ras genes themselves, mutations in proteins capable of regulating Ras activity (ie, neurofibromin (NF-1), neu, src, abl, lck, fyn) or other mechanisms. Can occur.
[0086]
The compounds of the present invention inhibit farnesyl-protein transferase and the farnesylation of the oncogene protein Ras. The compounds of the present invention also inhibit tumor angiogenesis, and thus affect tumor growth (J. Rak et al., Cancer Research, 55: 4575-4580 (1995)). Such anti-angiogenic properties of the present invention may also be useful in treating certain forms of visual impairment associated with retinal angiogenesis.
[0087]
The compounds of the present invention may be characterized as having Ras protein abnormally activated as a result of an oncogenic mutation in another gene (ie, the Ras gene itself is not activated to an oncogenic form by mutation), benign, malignant, It is also useful for inhibiting both other proliferative disorders, said inhibition being achieved by administering an effective amount of a compound of the invention to a mammal in need of such treatment. For example, the compositions are useful for treating neurofibromatosis, a benign proliferative disorder.
[0088]
The compounds are also useful for the treatment of certain viral infections, in particular for the treatment of hepatitis delta virus and hepatitis-associated virus infections (JS Glenn et al., Science, 256: 1331-1333 (1992)). ).
[0089]
The compounds of the present invention are also useful for preventing restenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty by inhibiting neointimal formation (C. Indolfi et al., Nature Medicine, 1: 541-545). (1995)).
[0090]
The compounds may also be useful for the treatment and prevention of renal cysts (DL Schaffner et al. American Journal of Pathology, 142: 1051-1060 (1993) and B. Cowley, Jr. et al. FASEB Journal, 2: A3160. (1988)).
[0091]
The compounds may also be useful for treating fungal infections.
[0092]
The compounds are also useful as inhibitors of vascular smooth muscle cell proliferation and, therefore, may be useful in preventing and treating arteriosclerosis and diabetic vascular pathology.
[0093]
The compounds of the present invention may also be useful in the prevention and treatment of endometriosis, uterine fibroids, irregular uterine bleeding and endometriosis.
[0094]
In prophylactic and therapeutic methods as described herein, the prenyl-protein transferase inhibitors of the present invention may be selected from other agents that are particularly useful for the condition being treated. It can also be co-administered with well-known therapeutic agents. For example, prenyl-protein transferase inhibitors can be useful in additional combination with drugs known to suppress ovarian activity and can slow the growth of endometrial tissue. Such drugs include, but are not limited to, oral contraceptives, progestins, danazol, and GnRH (gonadodropin releasing hormone) agonists.
[0095]
Administration of a prenyl-protein transferase inhibitor can also be combined, where appropriate, with a surgical treatment for endometriosis, such as surgical removal of misplaced endometrial tissue.
[0096]
The compounds may also be useful as keratitis inhibitors. These compounds can improve the treatment of corneal opacity caused by ablation-induced keratitis. The compounds may also be useful in reducing corneal edema and angiogenesis (K. Sonoda et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 1998, vol. 39, p2245-2251).
[0097]
The compounds of the present invention are administered to a mammal, preferably a human, in a pharmaceutical composition, alone or preferably in combination with a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent, according to standard pharmaceutical practice. can do. The compounds can be administered orally or parenterally, including intravenous, intramuscular, intraperitoneal, subcutaneous, rectal and topical administration.
[0098]
In addition, the compounds of the present invention may be used in mammals in need thereof with a gel extrusion mechanism (GEM) device such as that described in U.S. Patent Application No. 60 / 144,643, filed July 20, 1999. Can be used for administration. This specification incorporates this patent application by reference.
[0099]
As used herein, the term "composition" is intended to include a product that contains a specified amount of a specified component, as well as any product that is obtained directly or indirectly from a combination of a specified amount of the specified component.
[0100]
Pharmaceutical compositions containing the active ingredient are suitable for oral use, for example, as tablets, troches, lozenges, aqueous or oily suspensions, dispersible powders or granules, emulsions, hard or soft capsules, or syrups or elixirs. It can be in the form. Compositions intended for oral use can be prepared according to any method known in the art for preparing pharmaceutical compositions, which compositions provide pharmaceutically elegant and delicious formulations. In addition, the composition may contain one or more drugs selected from the group consisting of sweeteners, flavoring agents, coloring agents and preservatives. Tablets contain the active ingredient in admixture with non-toxic pharmaceutically acceptable excipients which are suitable for the manufacture of tablets. These excipients are, for example, inert diluents such as calcium carbonate, sodium carbonate, lactose, calcium phosphate or sodium phosphate; granulating and disintegrating agents, for example microcrystalline cellulose, croscarmellose sodium, corn starch. Or alginic acid; a binder such as starch, gelatin, polyvinyl-pyrrolidone or acacia; and a lubricant such as magnesium stearate, stearic acid or talc. The tablets may be uncoated or they may be coated by known techniques to mask the unpleasant taste of the drug or to delay disintegration and absorption in the gastrointestinal tract and thereby provide a sustained action over a longer period of time. May be coached. For example, a water soluble taste masking material such as hydroxypropyl-methyl cellulose or hydroxypropyl-cellulose, or a time delay material such as ethyl cellulose, cellulose acetate butyrate can be used.
[0101]
Formulations for oral use may be as hard gelatin capsules wherein the active ingredient is mixed with an inert solid diluent, for example, calcium carbonate, calcium phosphate or kaolin, or the active ingredient may be polyethylene glycol or an oily medium such as peanut oil , Can be provided as soft gelatin capsules mixed with liquid paraffin or olive oil.
[0102]
Aqueous suspensions contain the active materials in a mixture with excipients suitable for the manufacture of aqueous suspensions. Such excipients are suspending agents, for example, sodium carboxymethylcellulose, methylcellulose, hydroxypropylmethyl-cellulose, sodium alginate, polyvinyl-pyrrolidone, gum tragacanth and acacia, and the dispersing or wetting agent is a natural phosphatide, such as Lecithin, or the condensation product of an alkylene oxide and a fatty acid, such as polyoxyethylene stearate, or the condensation product of ethylene oxide and a long-chain aliphatic alcohol, such as ethylene oxide such as heptadecaethyleneoxycetanol, or polyoxyethylene sorbitol monostearate Products of fatty acids and hexitol-derived partial esters, or ethylene oxide derived from fatty acids and anhydrous hexitol Condensation products of partial esters, for example, be a polyethylene sorbitan monostearate. Aqueous suspensions may contain one or more preservatives, for example, ethyl or n-propyl p-hydroxybenzoate, one or more coloring agents, one or more flavoring agents, and sucrose, saccharin. Alternatively, one or more sweeteners, such as aspartame, can be included.
[0103]
Oily suspensions may be formulated by suspending the active ingredient in a vegetable oil, for example arachis oil, olive oil, sesame oil or coconut oil, or in a mineral oil such as liquid paraffin. The oily suspensions may contain a thickening agent, for example beeswax, hard paraffin or cetyl alcohol. Sweetening agents such as those set forth above, and flavoring agents may be added to produce a palatable oral preparation. These compositions may be preserved by the addition of an anti-oxidant such as butylhydroxyanisole or α-tocopherol.
[0104]
Dispersible powders and granules suitable for preparation of an aqueous suspension by the addition of water provide the active ingredient in admixture with a dispersing or wetting agent, suspending agent and one or more preservatives. Examples of suitable dispersing or wetting agents and suspending agents have already been mentioned above. Additional excipients, for example sweetening, flavoring and coloring agents, may also be present. These compositions may be preserved by the addition of an anti-oxidant such as ascorbic acid.
[0105]
The pharmaceutical composition of the present invention may be in the form of an oil-in-water emulsion. The oily phase can be a vegetable oil, such as olive oil or peanut oil, or a mineral oil, such as liquid paraffin, or a mixture thereof. Suitable emulsifiers are natural phosphatides, such as soy lecithin, and esters or partial esters derived from fatty acids and anhydrous hexitol, such as sorbitan monooleate, and condensation products of said partial esters with ethylene oxide, such as polyoxyethylene sorbitan monooleate Can be. Emulsions may also contain sweetening, flavoring, preservative and antioxidant agents.
[0106]
Syrups and elixirs can be formulated with sweetening agents, for example glycerol, propylene glycol, sorbitol or sucrose. Such preparations may also contain a demulcent, a preservative, a flavoring agent, a coloring agent and an antioxidant.
[0107]
The pharmaceutical compositions can be in the form of a sterile injectable aqueous solution. Acceptable vehicles and solvents that can be used include water, Ringer's solution and isotonic saline.
[0108]
The sterile injectable preparation may also be a sterile injectable oil-in-water microemulsion where the active ingredient is dissolved in the oily phase. For example, the active ingredient can be first dissolved in a mixture of soybean oil and lecithin. Next, the oily solution is introduced into a mixture of water and glycerol and processed to form a microemulsion.
[0109]
Injectable solutions or microemulsions can be introduced into a patient's blood stream by local bolus injection. Alternatively, it may be advantageous to administer the injectable solutions or microemulsions in such a way as to maintain a constant circulating concentration of the compound. To maintain such a constant concentration, a continuous intravenous delivery device can be used. An example of such a device is the Deltec @ CADD-PLUS ™ model 5400 intravenous pump.
[0110]
The pharmaceutical compositions may be in the form of a sterile injectable aqueous or oleaginous suspension for intramuscular and subcutaneous administration. This suspension may be formulated according to the known art using those suitable dispersing or wetting agents and suspending agents which have been mentioned above. The sterile injectable preparation may be a sterile injectable solution or suspension in a non-toxic parenterally-acceptable diluent or solvent, for example, as a solution in 1,3-butanediol. In addition, fixed oils are conventionally employed as a solvent or suspending medium. For this purpose any bland fixed oil may be employed including synthetic mono- or diglycerides. In addition, fatty acids such as oleic acid find use in the preparation of injectables.
[0111]
The compounds of formula I may also be administered in the form of suppositories for rectal administration of the drug. These compositions are prepared by mixing the drug with a suitable non-irritating excipient that is solid at room temperature but liquid at rectal temperature, and thus will melt and release the drug in the rectum. Can be. Such materials include cocoa butter, glycerogelatin, hydrogenated vegetable oils, mixtures of polyethylene glycols of various molecular weights, and fatty acid esters of polyethylene glycol.
[0112]
For topical use, creams, ointments, jellies, solutions or suspensions, etc., containing the compound of formula I are employed. (For this purpose of application, topical application includes mouthwashes and gargles.)
The compounds of the present invention may be administered in intranasal form by topical use of suitable intranasal vehicles and delivery devices, or by the transdermal route using transdermal patches in the form well known to those of ordinary skill in the art. Can be. Drug administration for administration in the form of a transdermal delivery system is, of course, continuous rather than intermittent throughout the dosage regimen. The compounds of the present invention can also be delivered as a suppository, using bases such as cocoa butter, glycerozetatin, hydrogenated vegetable oils, mixtures of polyethylene glycols of various molecular weights, and fatty acid esters of polyethylene glycol.
[0113]
When administering the compounds of the present invention to a human subject, the daily dose is usually determined by the prescribing physician, and the dose generally varies according to the age, weight, sex and response of the individual patient, and the severity of the patient. right.
[0114]
In one exemplary application, an appropriate amount of a compound is administered to a mammal undergoing treatment for cancer. Administration may be in an amount between about 0.1 gm / (kg body weight) to about 60 mg / (kg body weight) daily, preferably between 0.5 mg / (kg body weight) to about 40 mg / kg body weight / day. Done in the amount between.
[0115]
The compounds of the present invention may also be co-administered with other well-known therapeutic agents selected for their particular utility against the condition being treated. For example, the compounds of the present invention can also be co-administered with other well-known cancer therapeutics selected for their particular utility against the condition being treated. Such therapeutic combinations also include combinations of the present prenyl-protein transferase inhibitors with antineoplastic agents. Of course, such combinations of antineoplastic agents and inhibitors of prenyl-protein transferase can also be used with other methods of treating cancer and / or tumors, including radiation therapy and surgery. Of course, any of the therapeutic agents described herein can be used in combination with a compound of the present invention and an anti-tumor agent.
[0116]
Examples of anti-neoplastic agents generally include paclitaxel (also known as Taxol®), docetaxel (also known as Taxotere®), epitilone A, epothilone B, desoxyepothilone A. Microtubule-stabilizing agents such as, for example, desoxyepothilone B or derivatives thereof; microtubule-disrupting agents; alkylating agents such as nitrogen mustards, ethyleneimine compounds, alkylsulfonates, and other compounds with alkylating action ( Antimetabolites such as folate, purine or pyrimidine antagonists; epidophyllotoxins; antitumor enzymes; topoisomerase inhibitors; procarbazine; mitoxantrone; platinum coordination complexes; Response modifiers and growth inhibitors; Thread Cleavage inhibitors, such as vinca alkaloids and derivatives of podophyllotoxin; cytotoxic antibiotics; hormone / antihormone therapeutics, hematopoietic growth factors and antibiotics (such as trastuzumab, also known as Herceptin ™) Is mentioned.
[0117]
Examples of types of antitumor drugs include, for example, anthracycline drugs, vinca drugs, mitomycins, bleomycins, cytotoxic nucleosides, taxanes, epothilones, discodelmolide, pteridine drugs, diinene And podophyllotoxins. Particularly useful members of these classes include, for example, doxorubicin, carminomycin, daunorubicin, aminopterin, methotrexate, methopterin, dichloro-methotrexate, mitomycin C, porphyromycin, 5-fluorouracil, 6-mercaptopurine, Gemcitabine, cytosine arabinoside, podophyllotoxin or podophyllotoxin derivatives (such as etoposide, etoposide phosphate or teniposide), melphalan, vinblastine, vincristine, leucrosidine, vindesine, leurosin, paclitaxel and the like. Can be Other useful antineoplastic agents include estramustine, cisplatin, carboplatin, cyclophosphamide, bleomycin, tamoxifen, ifosamide, melphalan, hexamethylmelamine, thiotepa, cytarabine, idatrexate, trimetrexate, dacarbazine, L- Asparaginase, dactinomycin, mechlorethamine (nitrogen mustard), streptozocin, cyclophosphamide, carmustine (BCNU), lomustine (CCNU), procarbazine, mitomycin, cytarabine, etoposide, methotrexate, bleomycin, chlorambucil, camptothecin, CPT-CP- , Topotecan, cytosine arabinoside, bicalutamide, flutamide, leuprolide, pyridobenzoindole derivative, Eron and interleukins can be mentioned. Specific examples of antineoplastic, ie, chemotherapeutic, agents are described in J. Stewart, “Nausea and Vomiting: Recent Research and Clinical Advances (Recent, Research, and Clinical Advances),” edited by J.M. Kucharczyk et al., CRC Press Inc. It is described in Boca Raton, Florida, USA (1991), pages 177-203, especially page 188. R. J. See also, Gralla et al., Cancer Treatment Reports, 68 (1), 163-172 (1984).
[0118]
A preferred class of antineoplastic agents is taxanes, and a preferred antineoplastic agent is paclitaxel.
[0119]
The compounds of the present invention can also be co-administered with antisense oligonucleotides that can specifically hybridize with RNA or DNA from the human ras gene. Such antisense oligonucleotides are described in U.S. Patent No. 5,576,208 and WO 99/22772. The compounds are particularly useful when co-administered with an antisense oligonucleotide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 of US Pat. No. 5,576,208.
[0120]
Certain compounds of the present invention may exhibit very low plasma concentrations and significant interindividual variability with respect to plasma levels of the compound. The very low plasma concentrations and high intersubject variability achieved after administration of certain prenyl-protein transferase inhibitors to mammals may be due to high metabolism by cytochrome P450 before the drug enters the systemic circulation. it is conceivable that. Prenyl-protein transferase inhibitors can be metabolized by cytochrome P450 enzyme systems such as CYP3A4, CYP2D6, CYP2C9, CYP2C19, or other cytochrome P450 isoforms. If a compound of the present invention exhibits an affinity for one or more cytochrome P450 enzyme systems, another compound having a higher affinity for the P450 enzyme (s) involved in metabolism may be co-administered. Should. Examples of compounds having relatively high affinity for CYP3A4, CYP2D6, CYP2C9, CYP2C19 or other P450 isoforms include piperonyl butoxide, trolleandomycin, erythromycin, proazifen, isoniazid, allyl isopropylacetamide, ethinyl estradiol, Examples include, but are not limited to, chloramphenicol, 2-ethynylnaphthalene and the like. Such high affinity compounds, when used in combination with a compound of formula I, reduce inter-individual variability by inhibiting the metabolism of the compound of formula I and bring the compound of formula I to a level having substantial therapeutic activity. Plasma concentrations can be increased. In addition, inhibiting the metabolism of the compounds of the present invention prolongs the pharmacokinetic half-life of the compound, and thus prolongs the pharmacodynamic effect.
[0121]
A compound of the present invention may be used in combination with an antiemetic to treat nausea or vomiting, including acute, delayed, late and expected nausea, which may result from using the compound of the present invention alone or with radiation therapy. Can be. For the prevention and treatment of emesis, the compounds of the present invention may be used in combination with other antiemetic drugs, in particular, neurokinin-1 receptor antagonists, 5HT3 receptor antagonists (such as ondasetron, granisetron, tropisetron and zatissetron), GABAB Receptor agonists (such as baclofen), or corticosteroids (Decadron (dexamethasone), Kenalog, Aristocort, Nasalide, Preferred, Benecorten, etc.), or others (US Pat. Nos. 2,789,118, 2,990, No. 401, No. 3,048,581, No. 3,126,375, No. 3,929,768, No. 3,996,359, No. 3,928,326 and No. No. 3,749,712). For treatment and prevention of vomiting, combination therapy with a neurokinin-1 receptor antagonist, a 5HT3 receptor antagonist and adrenocortical hormone is preferred.
[0122]
Neurokinin-1 receptor antagonists used in combination with the compounds of the present invention include, for example, U.S. Patent Nos. 5,162,339, 5,232,929, 5,242,930, Nos. 5,373,003, 5,387,595, 5,495,270, 5,494,926, 5,496,833, 5,637, No. 669, No. 5,719,147; European Patent Publication Nos. 0-360-390, 0-394-989, 0-428-434, 0-429-366, 0-430-771, 0 436 334, 0 443 132, 0 482 539, 0 498 69, 0 499 313, 0 第 512 901, 0 512 902, 0 第 482 539 0 14-273, 0-514-274, 0-514-275, 0-514-276, 0-515-681, 0-517-589, 0-520-555, 0-522 808, 0-528-495, 0-532-456, 0-533-280, 0-536-817, 0-545-478, 0-558-156, 0-577-394 Nos. 0-585-913, 0-590-152, 0-599-538, 0-610-793, 0-643-402, 0-686-629, and 0-693-489 No. 0-694-535, No. 0-699-655, No. 0-699-674, No. 0-707-006 Nos. 0-708-101, 0-709-375, 0-709-376, 0-714-891, 0-723-959, 0-733-632, and 0-776-893; PCT International Patent Publication Nos. 90/05525, 90/05729, 91/09844, 91/18899, 92/01688, 92/06079, and 92/12151. No. 92/15585, No. 92/17449, No. 92/20661, No. 92/20676, No. 92/21677, No. 92/22569, No. 93/00330 Nos. 93/00331, 93/01159, 93/01165, 93/01169, 93/01170, 93/01170 and 93/01170 No. 93/06099, No. 93/09116, No. 93/10073, No. 93/14084, No. 93/14113, No. 93/18023, No. 93/19064, No. 93 Nos. / 21155, 93/2181, 93/23380, 93/24465, 94/00440, 94/01402, 94/02461, 94/94. No. 02595, No. 94/03429, No. 94/03445, No. 94/04494, No. 94/04496, No. 94/05625, No. 94/07845, No. 94/08997 No. 94/10165, No. 94/10167, No. 94/10168, No. 94/10170, No. 94/11368, No. 94/13639 No. 94/13663, No. 94/14767, No. 94/15903, No. 94/19320, No. 94/19323, No. 94/20500, No. 94/26735, No. Nos. 94/26740, 94/29309, 95/02595, 95/04040, 95/04042, 95/06645, 95/07886, and 95/02886 No. 95/07908, No. 95/08549, No. 95/11880, No. 95/14017, No. 95/15311, No. 95/16679, No. 95/17382, No. 95 Nos. / 18124, 95/18129, 95/19344, 95/20575, 95/21819, 95/22525, and 95/237 No. 9, No. 95/26338, No. 95/28418, No. 95/30674, No. 95/30687, No. 95/33744, No. 96/05181, No. 96/05193. No. 96/05203, No. 96/06094, No. 96/07649, No. 96/10562, No. 96/16939, No. 96/18643, No. 96/20197 No. 96/21661, No. 96/29304, No. 96/29317, No. 96/29326, No. 96/29328, No. 96/31214, No. 96/32385, Nos. 96/37489, 97/01553, 97/01554, 97/03066, 97/08144, 97/14671, and 97/1 Nos. 7362, 97/18206, 97/19084, 97/19942 and 97/21702; British Patent Publication Nos. 2 266 529, 2 268 931, and 269 170 Nos. 2,269,590, 2,271,774,292,144,293,168,293,169 and 302,689. The preparation of such compounds is described in detail in the above patents and publications.
[0123]
Particularly preferred neurokinin-1 receptor antagonists for use in combination with the compounds of the present invention are 2- (R)-(1- (R)-(3,7) described in U.S. Patent No. 5,719,147. 5-bis (trifluoromethyl) phenyl) ethoxy) -3- (S)-(4-fluorophenyl) -4- (3- (5-oxo-1H, 4H-1,2,4-triazolo) methyl) Morpholine, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[0124]
It may be desirable to use a compound of the invention in combination with another pharmacologically active agent (s) for the treatment of cancer. The compound of the invention and the other pharmacologically active agent (s) can be administered to the patient simultaneously, sequentially or in combination. For example, the compounds may be used in direct combination with the other active agent (s), or may be administered before, concurrently with, or after the administration of the other active agent (s). . Generally, currently available dosage forms of known therapeutic agents will be suitable for use in such combined forms.
[0125]
For example, a compound of the present invention may be administered in combination with another therapeutic agent, such as an anti-emetic, for simultaneous, separate or sequential use in the reduction of emesis associated with the use of a compound of the present invention and radiation therapy. Can be provided. Such a composite preparation can be, for example, in the form of a twin pack. Preferred combination drugs include an anti-emetic drug as described above with the compound of the present invention.
[0126]
Radiation therapy, including x-rays or gamma rays, delivered from an externally irradiated beam or by implantation of a small radiation source, can also be used to treat cancer in combination with the present inhibitors of prenyl-protein transferase.
[0127]
In addition, the compounds of the present invention can be used as radiosensitizers as described in WO 97/38697 published October 23, 1997. This publication is incorporated herein by reference.
[0128]
The compounds may also be useful in combination with other inhibitors that are part of a signaling pathway that connects the cell surface growth factor receptor to a nuclear signal that initiates cell growth. Therefore, the present compound may be used in combination with a farnesyl pyrophosphate competitive inhibitor of the activity of farnesyl-protein transferase, or in combination with a compound having Raf antagonistic activity. The compounds can also be co-administered with compounds that are selective inhibitors of geranylgeranyl-protein transferase.
[0129]
In particular, when the compound of the present invention is a selective inhibitor of farnesyl-protein transferase, an improved therapeutic effect is obtained by co-administration with a compound (s) which is a selective inhibitor of geranylgeranyl-protein transferase. Can be brought.
[0130]
In particular, the compounds described in the following patents and publications may be useful as farnesyl pyrophosphate competitive inhibitor components of the present invention: U.S. patent applications Ser. Nos. 08 / 254,228 and 08/435. , 047. These patents and publications are incorporated herein by reference.
[0131]
In the practice of the present invention comprising administering two or more protein substrate competitive inhibitors and a farnesyl pyrophosphate competitive inhibitor simultaneously or sequentially or in any order, such administration is oral. It can be parenteral or parenteral (including intravenous, intramuscular, intraperitoneal, subcutaneous, rectal and topical). Preferably such administration is oral. It is further preferred that such administration is oral and simultaneous. When administering the protein substrate competitive inhibitor and the farnesyl pyrophosphate competitive inhibitor sequentially, each administration may be by the same method or by different methods.
[0132]
The present compounds are disclosed in U.S. Patent Application Serial No. 09 / 055,487, filed April 6, 1998 and WO 98/44797, issued October 15, 1998, which are incorporated herein by reference. It is also useful in combination with integrin antagonists for the treatment of cancer, as described in US Pat.
[0133]
As used herein, the term integrin antagonist is used to selectively antagonize the binding of a physiological ligand to the integrin (s) involved in regulating angiogenesis or in tumor cell growth and invasiveness. , Inhibiting or blocking compounds. In particular, the term refers to a compound that selectively antagonizes, inhibits or blocks the binding of a physiological ligand to αvβ3 integrin, a compound that selectively antagonizes, inhibits or inhibits the binding of a physiological ligand to αvβ5 integrin. Compounds that antagonize, inhibit or block the binding of physiological ligands to both αvβ3 and αvβ5 integrins, or antagonize the activity of certain integrin (s) expressed on capillary endothelial cells , Inhibiting or blocking compounds. The term also refers to antagonists of α1β1, α2β1, α5β1, α6β1, and α6β4 integrins. The term also refers to antagonists of the αvβ3 integrin, αvβ5 integrin, α1β1, α2β1, α5β1, α6β1 and α6β4 integrin in any combination. The compounds are useful in conjunction with other agents that inhibit angiogenesis, thereby inhibiting tumor cell growth and invasiveness, including but not limited to angiostatin and endostatin. It is possible.
[0134]
The compounds of the present invention may also be useful in combination with inhibitors of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase (HMG-CoA reductase) for treating cancer. Compounds having inhibitory activity on HMG-CoA reductase can be readily identified by using assays known in the art. See, for example, the assay described or cited in column 6 of U.S. Pat. No. 4,231,938 and WO 84/021313 at pages 30-33. The terms “HMG-CoA reductase inhibitor” and “inhibitor of HMG-CoA reductase” have the same meaning as used herein.
[0135]
Examples of HMG-CoA reductase inhibitors that can be used include lovastatin (MEVACOR®; US Pat. Nos. 4,231,938, 4,294,926 and 4,319,039). Simvastatin (ZOCOR®; see US Pat. Nos. 4,444,784, 4,820,850 and 4,916,239); pravastatin (PRAVACHOL). (Registered trademark); U.S. Pat. Nos. 4,346,227, 4,537,859, 4,410,629, 5,030,447 and 5,180,589. Fluvastatin (LESCOL®); U.S. Pat. Nos. 5,354,772, 4,911,165, 4,929, 37, 5,189,164, 5,118,853, 5,290,946 and 5,356,896), atorvastatin (LIPITOR (registered trademark)). ), U.S. Patent Nos. 5,273,995, 4,681,893, 5,489,691 and 5,342,952), and cerivastatin (also known as rivastatin). Known, BAYCHOL®; see US Pat. No. 5,177,080). The structural formulas of these and additional HMG-CoA reductase inhibitors that can be used in the present method are described in Yalpani, "Cholesterol Lowering Drugs", Chemistry & Industry, pages 85-89 (February 5, 1996), and U.S. Patent Nos. 4,782,084 and 4,885,314. No. As used herein, the term HMG-CoA reductase inhibitor refers to all pharmaceutically acceptable lactone and open acid forms of a compound having HMG-CoA reductase inhibitory activity (ie, the lactone ring is opened, And the use of such salts, esters, ring-opening acid and lactone forms are within the scope of the present invention. Examples of the lactone moiety and its corresponding ring-opened acid form are shown below as structural formulas I and II.
[0136]
Embedded image

[0137]
In HMG-CoA reductase inhibitors where a ring-opened acid form may be present, the salt and ester forms may preferably be formed from the ring-opened acid, and all such forms are referred to herein as the term "HMG- CoA reductase inhibitors "are included in the meaning. Preferably, the HMG-CoA reductase inhibitor is selected from lavastatin and simvastatin, most preferably simvastatin. As used herein, the term "pharmaceutically acceptable salt" in reference to an HMG-CoA reductase inhibitor refers to the free acid and a suitable organic or inorganic base, in particular, sodium, potassium, aluminum, calcium, lithium, magnesium, zinc. And those formed from cations such as tetramethylammonium, and ammonia, ethylenediamine, N-methylglucamine, lysine, arginine, ornithine, chlorin, N, N'-dibenzylethylenediamine, chloroprocaine, diethanolamine, procaine, N- Formed from amines such as benzylphenethylamine, 1-p-chlorobenzyl-2-pyrrolidin-1′-yl-methyl-benzimidazole, diethylamine, piperazine and tris (hydroxymethyl) aminomethane Generally prepared by reacting the salt shall mean non-toxic salts of the compounds employed in the present invention. Further examples of salt forms of the HMG-CoA reductase inhibitors include acetate, benzenesulfonate, benzoate, bicarbonate, bisulfate, bitartrate, borate, bromide, calcium edetate, campyl Acid salts, carbonates, chlorides, clavulanates, citrates, dihydrochlorides, edetates, edysylates, estrates, esylates, fumarates, gluceptates, gluconates, glutamates, Glycolylanisanilate, hexyl resorcinate, hydravamin, hydrobromide, hydrochloride, hydroxynaphthoate, iodide, isothionate, lactate, lactobionate, laurate, malate, mandelic acid Salt, mesylate, methyl sulfate, mucate, napsylate, nitrate, oleate, oxalate, pamoate, palmitate, Tothenate, phosphate / diphosphate, polygalacturonate, salicylate, stearate, basic acetate, succinate, tannate, tartrate, theocrate, tosylate, triethidide, and citrate Include but are not limited to folate.
[0138]
The described ester derivative of the HMG-CoA reductase inhibitor compound degrades to release a drug form when absorbed into the bloodstream of a warm-blooded animal, such that the drug results in enhanced therapeutic efficacy. Can serve as a prodrug.
[0139]
Similarly, the compounds may be useful in combination with agents that are effective in treating and preventing NF-1, restenosis, renal cysts, hepatitis delta virus and hepatitis-associated virus infections, and fungal infections.
[0140]
When formulated as a fixed dosage form, such conjugated prodrugs combine the invention with the dosage ranges described above with other pharmaceutically active agent (s) within the approved dosage range. Alternatively, if multiple compounding is inappropriate, the combination of the invention and the known pharmaceutically acceptable agent (s) can be used sequentially.
[0141]
The compounds are also useful in combination with prodrugs of antitumor agents. In particular, the compound may be co-administered, simultaneously or sequentially, with a conjugate comprising an oligopeptide (ie, enzyme-activated prostate-specific antigen (PSA)) and an anti-tumor agent (referred to as a “PSA conjugate”). Can be. Such co-administration would be particularly useful for treating prostate cancer or for treating other cancers that are secreted by the cancer cells and are characterized by the presence of enzymatically active PSA directly surrounding the cancer cells.
[0142]
Compounds that are PSA conjugates, and thus useful for such co-administration, and methods for their synthesis, can be found in the following patents, pending patent applications and publications, which are incorporated herein by reference. :
U.S. Patent No. 5,599,686, issued February 4, 1997;
WO 96/00503 (January 11, 1996); U.S. patent application Ser. No. 08 / 404,833 filed on Mar. 15, 1995; U.S. patent application Ser. No. 08/404, filed on Jun. 6, 1995 468, 161;
U.S. Patent No. 5,866,679, issued February 2, 1999;
U.S. Patent No. 5,998,362, issued December 7, 1999;
U.S. Patent No. 5,948,750, issued September 7, 1999;
WO 99/02175 (January 21, 1999); U.S. Patent Application Serial No. 09 / 112,656, filed July 9, 1998;
WO 99/28343 (June 10, 1999); U.S. patent application Ser. No. 09 / 193,365, filed Nov. 17, 1998.
[0143]
Compounds described as prodrugs, in which active therapeutic agents are released by the action of enzymatically active PSA, and thus may be useful for such co-administration, and methods for their synthesis, are described in the following patents, pending patent applications and publications, And WO 98/52966 (November 26, 1998).
[0144]
All patents, publications and pending patent applications identified are hereby incorporated by reference.
[0145]
The compounds of the present invention are also useful as components in assays to rapidly determine the presence and amount of farnesyl-protein transferase (FPTase) in a composition. For example, the composition to be tested is divided and the two portions are split into a plurality of mixtures comprising a known substrate of FPTase (eg, a tetrapeptide having a cysteine at the amino terminus), farnesyl pyrophosphate and a compound of the present invention ( The compounds of the present invention may be included in one of such mixtures). After incubating the assay mixture for a time sufficient for the FPTase to farnesylate the substrate, as known in the art, the chemical content of the assay mixture is determined by well-known immunological, radiochemical or chromatographic methods. Can be determined by law. Since the compounds of the present invention are selective inhibitors of FPTase, the lack or quantitative lack of substrate mass in an assay mixture without the compounds of the present invention relative to the presence of an invariant substrate in the assay mixture containing the compound. A decrease indicates the presence of FPTase in the composition under test.
[0146]
Those of ordinary skill in the art will readily appreciate that assays such as those described above are useful for identifying tissue samples containing farnesyl-protein transferase and for quantifying the enzyme. Thus, the potent inhibitor compounds of the present invention can be used in an active site titration assay to determine the amount of enzyme in a sample. A series of samples consisting of an unknown amount of farnesyl-protein transferase, an excess of a known substrate of FPTase (eg, a tetrapeptide having a cysteine at the amine terminus), and a fixed amount of tissue extract containing farnesyl pyrophosphate was prepared using a variety of samples. Incubate for an appropriate period of time in the presence of a concentration of a compound of the invention. The concentration of a sufficiently strong inhibitor (i.e., one having a Ki substantially less than the enzyme concentration in the assay container) required to reduce the enzyme activity of the sample to 50% is determined by the amount of enzyme in the particular sample. About half the concentration of
[0147]
Example
The examples serve to promote a further understanding of the invention. The specific materials, species, and conditions used are further illustrative of the invention and are not intended to limit the reasonable scope of the invention.
[0148]
Example 1
Preparation of N-isopropyl-2- (1-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0149]
Embedded image

Step A: Preparation of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine
To a solution of pyridine-4-carboxaldehyde (0.53 g, 4.95 mmol) in 5 mL of MeOH was added isopropylamine (0.421 mL, 4.95 mmol). The resulting solution was stirred at room temperature for 25 minutes and then cooled to 0 ° C. Solid sodium borohydride (0.206 g, 5.44 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at room temperature for 80 minutes. A saturated aqueous ammonium chloride solution was added to the reaction mixture and the resulting mixture was stirred until gas evolution ceased. The mixture is CH₂Cl₂And saturated aqueous sodium bicarbonate solution and the aqueous solution is₂Cl₂(7x). Dry the combined organic solution (Na₂SO₄), Filtered and concentrated under vacuum to yield a clear oil. ES mass spectrum {m / e} 151 (M + 1).
[0150]
Step B: Preparation of {N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
A solution of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine (0.650 g) and 2-phenylindole-3-acetic acid (1.09 g, 4.33 mmol) in 10 mL of THF and 5 mL of DMF was brought to 0 ° C. Cool. EDC (0.913 g, 4.76 mmol) was added in one portion. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 hours, after which EtOAc and 1 N NaHSO₄Was distributed between The aqueous solution was basified by the addition of sodium carbonate and then extracted with EtOAc (4x). Dry the combined organic solution (Na₂SO₄), Filtered and concentrated in vacuo. Flash chromatography (linear gradient, 10% to 40% MeOH / EtOAc) provided the title compound as a white foam. C₂₅H₂₅N₃Exact mass calculated for O: 384.2071; Found: 384.2076 (FAB).
[0151]
Step C: Preparation of {N-isopropyl-2- (1-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
The indole described in Step B above (0.500 g, 0261 mmol) was treated with Et₂O Added to a suspension of 18-crown-6 (0.007 g, 0.03 mmol) and KOtBu (0.044 g, 0.39 mmol) in 3 mL. The resulting orange suspension was stirred at room temperature for 15 minutes. Methyl iodide (0.024 mL, 0.39 mmol) was added via syringe and the reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours 20 minutes. Afterwards, the mixture was partitioned between EtOAc and water. The aqueous solution was extracted with EtOAc (2x). Dry the combined organic solution (Na₂SO₄), Filtered and concentrated in vacuo. Flash chromatography (linear gradient, 99% CH₂Cl₂/0.9%MeOH/0.1%NH₄OH aqueous solution to 97% CH₂Cl₂/3.6%MeOH/0.4%NH₄Aqueous OH) yielded the title compound, which was isolated as its hydrochloride salt. ES mass spectrum {m / e} 398 (M + 1).
[0152]
Example 2
Preparation of N-isopropyl-2- (1-methyl-2-o-tolyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethylacetamide
[0153]
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Step A: Preparation of {(2-bromo-1H-indol-3-yl) -acetonitrile
Dry CH at 0 ° C₂Cl₂To a solution of indole-3-acetonitrile (13.0 g, 82.23 mmol) and silica gel (13 g) in 130 mL was added NBS (14.8 g, 83.23 mmol). Thereafter, the ice bath was removed and the reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours. The solution was filtered and the filtrate was washed with 5% sodium metabisulfite (3x) and then dried (MgSO₄), Filtered and dried under vacuum. Flash chromatography (5-30% EtOAc / hexanes) provided the title product.
[0154]
Step B: Preparation of {(2-o-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetonitrile
A solution of (2-bromo-1H-indol-3-yl) -acetonitrile (200 mg, 0.851 mmol) and ortho-tolylboronic acid (174 mg, 1.28 mmol) in 12 mL of toluene and 12 mL of ethanol was treated with Na.₂CO₃1M aqueous solution (2.13 mL, 2.13 mmol), Pd (Ph₃)₄(49.2 mg, 0.04 mmol) and LiCl (108.2 mg, 2.55 mmol) were added. The reaction mixture was heated to reflux for 3 hours, then cooled to room temperature and stirred for 14 hours. Upon completion, the reaction mixture was concentrated under vacuum. Purification by silica gel chromatography (0-20% EtOAc / hexanes) provided the title product.
[0155]
Step C: Preparation of {(2-o-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid
To a solution of 2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetonitrile (0.196 g, 0.796 mmol) in 5 mL of MeOH was added 5 mL of a 40% aqueous NaOH solution. The reaction mixture was heated to reflux for 16 hours before cooling to room temperature. The solution was then acidified with a 3N aqueous HCl solution and CH₂Cl₂Washed with (3x). The solution is dried (MgSO 4₄), Filtered and concentrated in vacuo to yield the title product.
[0156]
Step D: Preparation of {N-isopropyl-N-pyridin-4-ylmethyl-2- (2-o-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
To a solution of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid (0.100 g, 0.377 mmol) in 0.800 mL of DMF was added N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine ( 0.056 g, 0.38 mmol), DIEA (0.200 mL, 1.13 mmol) and PyBOP (0.216 g, 0.410 mmol) were added. The solution was stirred at room temperature for 3 days. Upon completion of the reaction, the solution was purified by reverse phase chromatography to yield the title product.
[0157]
Step E: Preparation of {N-isopropyl-2- (1-methyl-2-o-tolyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethylacetamide
Et₂To a suspension of 18-crown-6 (0.002 g, 0.01 mmol) and KOtBu (0.010 g, 0.09 mmol) in O (1 mL) was added N-isopropyl-N-pyridin-4-ylmethyl-2-. (2-o-Tolyl-1H-indol-3-yl) -acetamide was added in one portion. After stirring at room temperature for 15 minutes, iodomethane (0.013 g, 0.090 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 24 hours, after which the reaction was quenched with water. The mixture was poured into EtOAc, washed with water, dried (MgSO₄), Filtered and concentrated in vacuo. Purification by reverse phase HPLC yielded the title product. ES mass spectrum {m / e} 412 (M + 1).
[0158]
Example 3
Preparation of N-isopropyl-2- (7-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0159]
Embedded image

Step A: Preparation of {N-isopropyl-4-oxo-4-phenyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) butanamide
At room temperature, a solution of 4-oxo-4-phenylbutyric acid (0.500 g, 2.81 mmol) in 3.5 mL of DMF was added to N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine (0.464 g, .09 mmol) and EDC (0.591 g, 3.09 mmol) were added. A white solid precipitated from the solution. The reaction mixture was stirred for 7 hours before partitioning between EtOAc and saturated aqueous sodium bicarbonate. The aqueous solution was extracted with EtOAc (2x). The combined organic solution was washed with 1: 1 saturated aqueous sodium chloride: water (1 ×) and saturated aqueous sodium chloride (1 ×), then dried over sodium sulfate, filtered and concentrated. Flash chromatography (linear gradient, 99% CH₂Cl₂/0.9%MeOH/0.1%NH₄OH aqueous solution to 97% CH₂Cl₂/2.7%MeOH/0.3%NH₄OH in water) yielded the title compound.
[0160]
Step B: Preparation of {N-isopropyl-2- (7-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
The ketone prepared in Step A (0.051 g, 0.164 mmol) was dissolved in 1 mL of toluene. Ortho-tolylhydrazine hydrochloride (0.026 g, 0.164 mmol) was added in one portion and the resulting suspension was heated to 100 ° C. After 1 hour, the reaction mixture was cooled to room temperature and concentrated under vacuum. The crude hydrazone was mixed with zinc chloride (0.112 g, 0.82 mmol) and the mixture was heated to 170 ° C. After 5 minutes, the reaction mixture was cooled to room temperature and diluted with acetone to give a brown solution. The solution was partitioned between EtOAc and water. The organic solution was washed with a saturated aqueous solution of sodium chloride (1x). The aqueous solution was extracted with EtOAc (2x) and the combined organic solution was washed with saturated aqueous sodium chloride solution (1x), then dried over sodium sulfate, filtered, and concentrated in vacuo. Purification by reverse phase HPLC yielded the title compound as its trifluoroacetate salt. ES mass spectrum {m / e} 398 (M + 1).
[0161]
Example 4
Preparation of 2- [1- (2-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0162]
Embedded image

Step A: Preparation of {2- (1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
A solution of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine (4.93 g, 32.87 mmol) and indole-3-acetic acid (5.75 g, 32.81 mmol) in 48 mL THF and 48 mL DMF at 0 ° C. And cooled. EDC (6.92 g, 36.10 mmol) was added in one portion. The reaction mixture was stirred at room temperature for 15 hours before partitioning between EtOAc and saturated aqueous sodium bicarbonate. The aqueous solution was extracted with EtOAc (2x). The combined organic solution is washed with a saturated aqueous solution of sodium chloride, dried (Na₂SO₄), Filtered and concentrated in vacuo. Flash chromatography (linear gradient, 98% CH₂Cl₂/1.8%MeOH/0.2%NH₄OH aqueous solution to 95% CH₂Cl₂/4.5%MeOH/0.5%NH₄OH aqueous solution) produced a pink foam. ES mass spectrum {m / e} 308 (M + 1).
[0163]
Step B: {Preparation of 2- [1- (2-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide} In a 25 mL round bottom flask, add mineral oil A 60% dispersion of sodium hydride (0.033 g, 0.81 mmol) was charged. The suspension was washed with hexane (2 mL) and the flask was charged with 2.5 mL of DMF and 0.250 g of the indole prepared in Step A. The suspension was stirred at room temperature for 30 minutes to give a green solution. The solution was cooled to 0 ° C. and 2-bromobenzyl bromide (0.203 g, 0.81 mmol) was added in one portion. After 1 hour, the reaction was quenched with saturated aqueous ammonium chloride and then partitioned between EtOAc and saturated aqueous sodium bicarbonate. The aqueous solution was extracted with EtOAc (2x). The combined organic solution is washed with a saturated aqueous solution of sodium chloride, dried (Na₂SO₄), Filtered and concentrated in vacuo. Flash chromatography (linear gradient, 99% CH₂Cl₂/0.9%MeOH/0.1%NH₄OH aqueous solution to 97% CH₂Cl₂/2.7%MeOH/0.3%NH₄Aqueous OH) produced a white foam. C₂₆H₂₆BrN₃Exact mass calculated for O: 416.1332; Found: 476.1323 (FAB).
[0164]
Example 5
Preparation of N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-1-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0165]
Embedded image

Step A: Preparation of {(2-phenyl-1H-indol-1-yl) acetic acid
Freshly ground KOH (2.69 g, 48.01 mmol) and DMSO were mixed and stirred at room temperature for 5 minutes. 2-Phenylindole (2.00 g, 10.35 mmol) was added in one portion and the resulting mixture was stirred for 45 minutes. The reaction mixture was cooled to 0 ° C. and methyl bromoacetate (1.96 mL, 20.70 mmol) was added via syringe. The reaction mixture was stirred at room temperature for 8 hours 30 minutes and then poured into water. The mixture was extracted with EtOAc (2x) to remove residual starting material. Thereafter, the pH of the aqueous solution was brought to 4 by the addition of concentrated CHl and the solution was extracted with EtOAc (2x). Dry the organic extract (Na₂SO₄), Filtered and concentrated in vacuo to yield the title compound.
[0166]
Step B: Preparation of {N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-1-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
To a solution of the acid from Step A above (0.050 g, 0.199 mmol) and N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine (0.033 g, 0.220 mmol) in 1 mL of DMF was added diisopropylethylamine (0.069 mL, 0.400 mmol) and PYBOP (0.114 g, 0.220 mmol) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 15 hours before reverse phase HPLC (C₁₈, Acetonitrile / water / TFA). Flash chromatography (linear gradient, 99% CH₂Cl₂/0.9%MeOH/0.1%NH₄OH aqueous solution to 97% CH₂Cl₂/2.7%MeOH/0.3%NH₄Further purification by aqueous OH) afforded the title compound as a white foam. C₂₅H₂₅N₃Exact mass calculated for O: 384.2707; Found: 384.2054 (FAB).
[0167]
Example 6
Preparation of N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridin-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide
[0168]
Embedded image

Step A: Preparation of {2-phenyl-3-pyrrolidin-1-ylmethyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridine
2-phenyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridine (1.0 g, 5.15 mmol, Hands, D .; Bishop, B .; Cameron, M .; Edwards) in HOAc / dioxane (2 mL / 8 mL). Cottrell, IF; Wright, prepared according to SHB Synthesis {1996, 877-882), pyrrolidine (2.2 g, 30.89 mmol) and formaldehyde (37% by weight, (2.51 g, 30.89 mmol) was stirred at room temperature for 72 hours. The solution is added with 3N HCl 1 mL / H₂Acidify with O 10 mL and wash with ether. Then, the aqueous phase is changed to solid K₂CO₃And a white precipitate formed. The precipitate is washed with water and then CH₂Cl₂Washed to afford the title product.
[0169]
Step B: Preparation of {2-phenyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridin-3-yl) -acetonitrile
To a solution of 2-phenyl-3-pyrrolidin-1-ylmethyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridine (7 mL) in MeOH was added iodomethane (0.958 g, 6.75 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours. Thereafter, the MeOH was removed under vacuum. The residue was dissolved in THF (10 mL) and treated with KCN (0.916 g, 14.06 mmol) in water. The reaction mixture was stirred at reflux for 16 hours. Additional KCN (0.549 g, 8.44 mmol) was added and the reaction mixture was kept stirring at reflux for 72 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature, filtered and washed with water to yield the title product.
[0170]
Step C: Preparation of {(2-phenyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridin-3-yl) -acetic acid
To a solution of 2-phenyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridin-3-yl) -acetonitrile (0.703 g, 3.014 mmol) in 15 mL of MeOH was added 15 mL of a 40% aqueous NaOH solution. The reaction mixture was heated to reflux for 26 hours before cooling to room temperature. The solution was acidified with 3N HCl and CH₂Cl₂Washed with (3x). Thereafter, the aqueous solution was washed with n-butanol (3x). CH₂Cl₂Both the solution and the n-butanol solution were mixed and concentrated under vacuum to yield the title product.
[0171]
Step D: Preparation of {N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridin-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide
To a solution of (2-phenyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridin-3-yl) -acetic acid (0.200 g, 0.793 mmol) in 1 mL of DMSO was added N- (pyridin-4-ylmethyl) propane. -2-Amine (0.119 g, 0.79 mmol), DIEA (0.41 mL, 2.38 mmol) and PYBOP (0.454 mg, 0.87 mmol) were added. The solution was stirred at room temperature for 3 days. Upon completion, the reaction mixture was directly purified by reverse phase HPLC to yield the title product. ES mass spectrum {m / e} 412 (M + 1).
[0172]
Example 7
Preparation of N-benzyl-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
[0173]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Example 1, Step B, but using benzylisopropylamine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine.
[0174]
Example 8
Preparation of N-ethyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0175]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of Example 1, Step B, but using 4- (ethylaminomethyl) pyridine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine.
[0176]
Example 9
Preparation of 2- [1- (4-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0177]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of Step B of Example 4, but using 4-bromobenzyl bromide instead of 2-bromobenzyl bromide. C₂₆H₂₆BrN₃Exact mass calculated for O: 476.1332; Found: 476.1321 (FAB).
[0178]
Example 10
Preparation of 2- [1- (3-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0179]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of Step B of Example 4, but using 3-bromobenzyl bromide instead of 2-bromobenzyl bromide. C₂₆H₂₆BrN₃Exact mass calculated for O: 476.1332; Found: 476.1321 (FAB).
[0180]
Example 11
[0181]
Embedded image

Preparation of 2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N, N-bis (pyridin-3-ylmethyl) acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Example 1, Step B, but using 3,3'-dipicolylamine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine.
[0182]
Example 12
Preparation of 2- (1-benzyl-1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0183]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Example 4, Step B, but using benzyl bromide instead of 2-bromobenzyl bromide. C₂₆H₂₇N₃Exact mass calculated for O: 398.2227; Found: 398.2221 (FAB).
[0184]
Example 13
Preparation of 2- [2- (4-bromophenyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0185]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Example 3, but using 3- (4-bromobenzoyl) propionic acid in step A instead of 4-oxo-4-phenylbutyric acid and in step B ortho-tolylhydrazine hydrochloride Was replaced by phenylhydrazine hydrochloride. ES mass spectrum {m / e} 462 (M + 1).
[0186]
Example 14
Preparation of 2- (1-ethyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0187]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Example 1, Step C, but using ethyl iodide instead of methyl iodide. C₂₇H₂₉N₃Exact mass calculated for O: 412.2383; Found: 412.2368 (FAB).
[0188]
Example 15
Preparation of N-isopropyl-2- (2-phenyl-1-propyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0189]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Example 1, Step C, but using n-propyl iodide instead of methyl iodide. C₂₈H₃₁N₃Exact mass calculated for O: 426.2540; Found: 426.2537 (FAB).
[0190]
Example 16
2- (1-benzyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide and 1-benzyl-4-trifluoroacetic acid Preparation of {[[(1-benzyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-3-yl) acetyl] (isopropyl) amino] methyl} pyridinium
[0191]
Embedded image

DMSOＯＨ2 mL of solid KOH was added to a solution of 2- (1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide (0.050 g, 0.163 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 15 minutes after which benzyl bromide (0.031 g, 0.180 mmol) was added via syringe. After stirring at room temperature for 5 hours, the reaction mixture was acidified with concentrated HCL and purified directly by reverse-phase HPLC to give:
(A) 2- (1-benzyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide (as its trifluoroacetate salt) ). ES mass spectrum {m / e} 414 (M + 1).
[0192]
(B) 1-benzyl-4-{[[(1-benzyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-3-yl) acetyl] (isopropyl) amino] methyl} pyridinium trifluoroacetate. ES mass spectrum {m / e} 414 (M + 1).
[0193]
Example 17
Preparation of N-cyclobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide
[0194]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of steps A and B of Example 1, but using pyridine-3-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and cyclobutylamine instead of isopropylamine. ES mass spectrum {m / e} 396 (M + 1).
[0195]
Example 18
Preparation of N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide
[0196]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Steps A and B of Example 1, but using pyridine-3-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and cyclopropylamine instead of isopropylamine. C₂₅H₂₃N₃Exact mass calculated for O: 381.1914; Found: 382.1909 (FAB).
[0197]
Example 19
Preparation of 2- [2- (2-chlorophenyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide
[0198]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of Steps B to D of Example 2, but using 2-chlorophenylboronic acid instead of ortho-tolylboronic acid. ES mass spectrum {m / e} 418 (M + 1).
[0199]
Example 20
Preparation of N, N-diallyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
[0200]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but using diallylamine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine, using (2-ortho-tolyl-1H-indole- 2-Phenylindole-3-acetic acid was used instead of 3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum m / e 331 (M + 1).
[0201]
Example 21
Preparation of N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide
[0202]
Embedded image

Step A: Preparation of N- (pyridin-3-ylmethyl) propan-2-amine
The above title compound was prepared according to the procedure of Example 1, Step A, but using pyridine-3-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde.
[0203]
Step B: Preparation of {N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but substituting N- (pyridin-3-ylmethyl) propan-2-amine for N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. And 2-phenylindole-3-acetic acid was used in place of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum {m / e} 384 (M + 1).
Example 22
Preparation of (S) -N-sec-butyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide
[0204]
Embedded image

Step A: Preparation of {(S) -N- (pyridin-3-ylmethyl) sec-butyl-2-amine
The title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using (S) -N-sec-butylamine instead of isopropylamine.
[0205]
Step B: Preparation of {(S) -N-sec-butyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide
The title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2 but replacing (N)-(pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine with (S) -N- as described in Step A above. (Pyridin-3-ylmethyl) sec-butyl-2-amine was used, and 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum {m / e} 398 (M + 1).
[0206]
Example 23
Preparation of N-furan-3-ylmethyl-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
[0207]
Embedded image

Step A: Preparation of N-furan-3-ylmethyl-N-isopropylamine
The title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using 3-furaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde.
[0208]
Step B: Preparation of {N-furan-3-ylmethyl-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Example 2, Step D, but replacing N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine with N-furan-3- as described in Step A above. Using ylmethyl-N-isopropylamine, 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. C₂₄H₂₄N₂O₂Exact mass calculated for: 373.1911; Found: 373.1928 (FAB).
[0209]
Example 24
Preparation of N- (2-cyano-ethyl) -N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
[0210]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but using 1- (cyclopropylamino) -propionitrile instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine, ( 2-Phenylindole-3-acetic acid was used instead of 2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum {m / e} 344 (M + 1).
[0211]
Example 25
Preparation of N-cyclobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide
[0212]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of steps A and B of Example 1, but using cyclobutylamine instead of isopropylamine. ES mass spectrum {m / e} 396 (M + 1).
[0213]
Example 26
Preparation of N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide
[0214]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of steps A and B of Example 1, but using cyclopropylamine instead of isopropylamine. C₂₅H₂₃N₃O₂Exact mass calculated for: 382.1914; Found: 382.1893 (FAB).
[0215]
Example 27
Preparation of 2- [2- (3-chloro-phenyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide
[0216]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of Example 2, steps B to D, but using 3-chlorophenylboronic acid instead of ortho-tolylboronic acid. ES mass spectrum {m / e} 418 (M + 1).
[0217]
Example 28
Preparation of N- (2-cyano-ethyl) -N-cyclopropyl-2- (1-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
[0218]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Step C of Example 1, but replacing N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide. N- (2-cyano-ethyl) -N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide (Example 24) was used. ES mass spectrum {m / e} 358 (M + 1).
[0219]
Example 29
Preparation of N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyrimidin-5-ylmethyl-acetamide
[0220]
Embedded image

Step A: Preparation of N-pyridin-5-ylmethyl-N-isopropylamine
The above title compound was prepared according to the procedure of Example 1, Step A, but using pyrimidine-5-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde.
[0221]
Step B: Preparation of {N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyrimidin-5-ylmethyl-acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but using N-pyrimidin-5-ylmethyl-N-isopropylamine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine, 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. C₂₄H₂₄N₄Exact mass calculated for O: 385.2020; Found: 385.2040 (FAB).
[0222]
Example 30
Preparation of N-cyclopropyl-N- (2-methyl-2H-pyrazol-3-ylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
[0223]
Embedded image

Step A: Preparation of {N-cyclopropyl-N- (2-methyl-2H-pyrazol-3-ylmethyl) amine
The above title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using 1-methyl-1H-pyrazole-5-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and cyclopropylamine instead of isopropylamine. Was used.
[0224]
Step B: Preparation of {N-cyclopropyl-N- (2-methyl-2H-pyrazol-3-ylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2 but using N-cyclopropyl-N- (2-methyl-2H-pyrazole instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. -2-ylmethyl) amine and 2-phenylindole-3-acetic acid in place of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. C₂₄H₂₄N₄Exact mass calculated for O: 385.2023; Found: 385.2023 (FAB).
[0225]
Example 31
Preparation of (+)-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) propanamide
[0226]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Example 3, but using 2-methyl-4-oxo-4-phenylbutyric acid instead of 4-oxo-4-phenylbutyric acid in Step A and ortho-hydrochloric acid in Step B Phenylhydrazine hydrochloride was used instead of tolylhydrazine. The (+)-enantiomer was obtained in optically pure form by chiral HPLC. C₂₆H₂₇N₃Exact mass calculated for O: 398.2227; Found: 398.2228 (FAB).
[0227]
Example 32
Preparation of N- (2-furylmethyl) -N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
[0228]
Embedded image

Step A: Preparation of ΔN-furan-2-ylmethyl-N-isopropylamine
The title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using 3-furaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde.
[0229]
Step B: Preparation of {N- (2-furylmethyl) -N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but using N-furan-2-ylmethyl-N-isopropylamine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine, 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum @ m / e @ 373 (M + 1).
[0230]
Example 33
Preparation of N-isopropyl-N- (2-methyl-1H-pyrazol-3-ylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
[0231]
Embedded image

Step A: Preparation of N-isopropyl-N- (2-methyl-1H-pyrazol-3-ylmethyl) amine
The above title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using 1-methyl-1H-pyrazole-5-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde.
[0232]
Step B: Preparation of {N-isopropyl-N- (2-methyl-1H-pyrazol-3-ylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2 but using N-isopropyl-N- (2-methyl-2H-pyrazole- instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. (3-ylmethyl) amine was used and 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum m / e 387 (M + 1).
[0233]
Example 34
Preparation of N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyrazin-2-ylmethyl) acetamide
[0234]
Embedded image

Step A: Preparation of N-cyclopropyl-N- (pyrazin-2-ylmethyl) amine
The above title compound was prepared according to the procedure of Example 1, Step A, but using pyrazine-2-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde.
[0235]
Step B: Preparation of {N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyrazin-2-ylmethyl) acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but using N-cyclopropyl-N- (pyrazin-2-ylmethyl) amine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine And 2-phenylindole-3-acetic acid was used in place of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. C₂₄H₂₂N₄Exact mass calculated for O: 383.1869; Found: 383.1866 (FAB).
[0236]
Example 35
Preparation of N-cyclopropyl-N- (3-furylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
[0237]
Embedded image

Step A: {N-furan-3-ylmethyl-N-cyclopropylamine
The above title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using 3-furaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and cyclopropylamine instead of isopropylamine.
[0238]
Step B: Preparation of {N-cyclopropyl-N- (3-furylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
The title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but using N-furan-3-ylmethyl-N-cyclopropylamine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. C₂₄H₂₂N₂O₂Exact mass calculated for: 371.1744; Found: 371.1754 (FAB).
[0239]
Example 36
Preparation of N- (2-cyanoethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-3-ylmethyl) acetamide
[0240]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2 but using N- (2-cyanoethyl) -N- (pyridine-3-instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. (Ylmethyl) amine and 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum {m / e} 395 (M + 1).
[0241]
Example 37
Preparation of N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyrazin-2-ylmethyl) acetamide
[0242]
Embedded image

Example A: Preparation of N-isopropyl-N- (pyrazin-2-ylmethyl) amine
The above title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using pyrazine-2-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde.
[0243]
Example B: Preparation of {N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyrazin-2-ylmethyl) acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but using N-isopropyl-N- (pyrazin-2-ylmethyl) amine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. And 2-phenylindole-3-acetic acid was used in place of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. C₂₄H₂₄N₄Exact mass calculated for O: 385.2035; Found: 385.2023 (FAB).
[0244]
Example 38
Preparation of N-isopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
[0245]
Embedded image

Step A: Preparation of N-isopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazol-4-ylmethyl) amine
The above title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using 1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde.
[0246]
Step B: Preparation of {N-isopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazol-4-ylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2 but using N-isopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazole- instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. (4-ylmethyl) amine and 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. C₂₄H₂₆N₄Exact mass calculated for O: 387.2174; Found: 387.2179 (FAB).
[0247]
Example 39
Preparation of N-isopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-3-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
[0248]
Embedded image

Step A: Preparation of N-isopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazol-3-ylmethyl) amine
The above title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using 1-methyl-1H-pyrazole-3-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde.
[0249]
Step B: Preparation of {N-isopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazol-3-ylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2 but using N-isopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazole- instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. (3-ylmethyl) amine was used and 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. C₂₄H₂₆N₄Exact mass calculated for O: 387.2156; Found: 387.2179 (FAB).
[0250]
Example 40
Preparation of N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide
[0251]
Embedded image

Step A: Preparation of N- (pyridin-2-ylmethyl) propan-2-amine
The above title compound was prepared according to the procedure of Example 1, Step A, but using pyridine-2-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde.
[0252]
Step B: Preparation of {N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but substituting N- (pyridin-2-ylmethyl) propan-2-amine for N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. And 2-phenylindole-3-acetic acid was used in place of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum {m / e} 384 (M + 1).
[0253]
Example 41
Preparation of N- (2-cyanoethyl) -N-cyclopropyl-2- [2- (2-methylphenyl) -1H-indol-3-yl] acetamide
[0254]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but using 1- (cyclopropylamino) -propionitrile instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. ES mass spectrum {m / e} 344 (M + 1).
[0255]
Example 42
Preparation of N- (2-cyanoethyl) -N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
[0256]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but using 1- (isopropylamino) -propionitrile instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine, (2 -Ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid was replaced by 2-phenylindole-3-acetic acid. ES mass spectrum {m / e} 346 (M + 1).
[0257]
Example 43
Preparation of N-cyclopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
[0258]
Embedded image

Step A: Preparation of {N-cyclopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazol-4-ylmethyl) amine
The title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using 1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and cyclopropylamine instead of isopropylamine. Was used.
[0259]
Step B: Preparation of {N-cyclopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazol-4-ylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2 but using N-cyclopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazole instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. -2-ylmethyl) amine and 2-phenylindole-3-acetic acid in place of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. C₂₄H₂₄N₄Exact mass calculated for O: 385.2030; Found: 385.2203 (FAB).
[0260]
Example 44
Preparation of N-cyclopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-3-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
[0261]
Embedded image

Step A: Preparation of N-cyclopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazol-3-ylmethyl) amine
The title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1 but using 1-methyl-1H-pyrazole-3-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and cyclopropylamine instead of isopropylamine. Was used.
[0262]
Step B: Preparation of {N-cyclopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazol-3-ylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2 but using N-cyclopropyl-N- (1-methyl-1H-pyrazole instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. -2-ylmethyl) amine and 2-phenylindole-3-acetic acid in place of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. C₂₄H₂₄N₄Exact mass calculated for O: 385.2028; Found: 385.2023 (FAB).
[0263]
Example 45
Preparation of N-cyclobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide
[0264]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Steps A and B of Example 1, but using pyridine-2-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and cyclobutylamine instead of isopropylamine. C₂₆H₂₅N₃Exact mass calculated for O: 396.2066; Found: 396.2070 (FAB).
[0265]
Example 46
Preparation of N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide
[0266]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of steps A and B of Example 1, but using pyridine-2-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and cyclopropylamine instead of isopropylamine. C₂₅H₂₃N₃Exact mass calculated for O: 382.1903; Found: 382.1914 (FAB).
[0267]
Example 47
Preparation of N-cyclopropyl-N- (2-furylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
[0268]
Embedded image

Step A: Preparation of N-furan-2-ylmethyl-N-cyclopropylamine
The above title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using 2-furaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and cyclopropylamine instead of isopropylamine.
[0269]
Step B: Preparation of {N-cyclopropyl-N- (2-furylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
The title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but using N-furan-2-ylmethyl-N-cyclopropylamine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum {m / e} 317 (M + 1).
[0270]
Example 48
Preparation of N-isopropyl-2- [2- (2-methoxyphenyl) -1H-indol-3-yl] -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0271]
Embedded image

The title compound was prepared according to Example 2, steps B to D, but using 2-methoxyphenylboronic acid instead of ortho-tolylboronic acid. ES mass spectrum {m / e} 414 (M + 1).
[0272]
Example 49
Preparation of N-isobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide
[0273]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of steps A and B of Example 1, but using pyridine-2-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and isobutylamine instead of isopropylamine. C₂₆H₂₇N₃Exact mass calculated for O: 398.2218; Found: 398.2227 (FAB).
[0274]
Example 50
Preparation of 2- [2- (2-chlorophenyl) -1H-indol-3-yl] -N- (2-cyanoethyl) -N-cyclopropylacetamide
[0275]
Embedded image

The above title compound was prepared according to Steps B through D of Example 2, but using 2-chlorophenylboronic acid instead of ortho-tolylboronic acid and replacing N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. 1- (cyclopropylamine) -propionitrile was used. ES mass spectrum {m / e} 378 (M + 1).
[0276]
Example 51
Preparation of N- (t-butyl) -N- (2-cyanoethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
[0277]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2, but using 1- (t-butylamino) -propionitrile instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine, 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum {m / e} 360 (M + 1).
[0278]
Example 52
Preparation of N-isobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-3-ylmethyl) acetamide
[0279]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of steps A and B of Example 1, but using pyridine-3-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and isobutylamine instead of isopropylamine. C₂₆H₂₇N₃Exact mass calculated for O: 398.2242; Found: 398.2227 (FAB).
[0280]
Example 53
Preparation of methyl N-cyclopropyl-N-[(2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetyl] -β-alaninate
[0281]
Embedded image

N- (2-Cyano-ethyl) -N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide (0.100 g, 0.1 in MeOH: concentrated HCl (5: 1)). (291 mmol) was heated to reflux for 16 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and CH₂Cl₂Into NaHCO₃Wash with saturated aqueous solution and water, then dry (Na₂SO₄), Filtered and concentrated in vacuo. Thereafter, the material was purified by reverse phase HPLC to yield the title compound. ES mass spectrum {m / e} 377 (M + 1).
[0282]
Example 54
N-isopropyl-2- (6-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide and {N-isopropyl-2- (4-methyl-2-phenyl-) Preparation of 1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0283]
Embedded image

The above title compound was prepared according to Step B of Example 3, but using meta-tolyl hydrazine hydrochloride instead of ortho-tolyl hydrazine hydrochloride. The title compound was isolated as an inseparable mixture of regioisomers. C₂₆H₂₇N₃Exact mass calculated for O: 398.2227; Found: 398.2213 (FAB).
[0284]
Example 55
Preparation of N-isobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0285]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of steps A and B of Example 1, but using isobutylamine instead of isopropylamine. C₂₆H₂₇N₃Exact mass calculated for O: 398.2247; Found: 398.2227 (FAB).
[0286]
Example 56
Preparation of N-cyclopentyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0287]
Embedded image

The title compound was prepared according to the procedure of steps A and B of Example 1, but using isopentylamine instead of isopropylamine. C₂₇H₂₇N₃Exact mass calculated for O: 410.2258; Found: 410.2227 (FAB).
[0288]
Example 57
Preparation of N-[(1R) -1-methylpropyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0289]
Embedded image

Step A: Preparation of {(R) -N- (pyridin-3-ylmethyl) sec-butyl-2-amine
The above title compound was prepared according to the procedure of Step A of Example 1, but using (R) -N-sec-butylamine instead of isopropylamine.
[0290]
Step B: Preparation of {N-[(1R) -1-methylpropyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2 but using (R) -N- (pyridin-3-ylmethyl) sec- instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. Butyl-2-amine was used and 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum {m / e} 398 (M + 1).
[0291]
Example 58
Preparation of N, N-bis (2-methoxyethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide
[0292]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedure of Step D of Example 2 but using 2-methoxy-N- (2-methoxyethyl) ethanamine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. 2-phenylindole-3-acetic acid was used instead of (2-ortho-tolyl-1H-indol-3-yl) -acetic acid. ES mass spectrum m / e 367 (M + 1).
[0293]
Example 59
Preparation of N-isopropyl-2- (5-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide
[0294]
Embedded image

The above title compound was prepared according to Step B of Example 3, but using para-tolyl hydrazine hydrochloride instead of ortho-tolyl hydrazine hydrochloride. C₂₆H₂₇N₃Exact mass calculated for O: 398.2227; Found: 398.2218 (FAB).
[0295]
Example 60
Preparation of N- (2-cyanoethyl) -N-cyclopropyl-2- [2- (2-methoxyphenyl) -1H-indol-3-yl] acetamide
[0296]
Embedded image

The above title compound was prepared according to steps B to D of Example 2, but using 2-methoxyphenylboronic acid instead of ortho-tolylboronic acid and replacing N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. For this, 1- (cyclopropylamine) -propionitrile was used. ES mass spectrum {m / e} 374 (M + 1).
[0297]
Example 61
Preparation of N-cyclopentyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide
[0298]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedures of steps A and B of Example 1, but using pyridine-2-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and cyclopentylamine instead of isopropylamine. C₂₇H₂₇N₃Exact mass calculated for O: 410.2238; Found: 410.2227 (FAB).
[0299]
Example 62
Preparation of N-cyclopentyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-3-ylmethyl) acetamide
[0300]
Embedded image

The above title compound was prepared according to the procedures of steps A and B of Example 1, but using pyridine-3-carboxaldehyde instead of pyridine-4-carboxaldehyde and cyclopentylamine instead of isopropylamine. C₂₇H₂₇N₃Exact mass calculated for O: 410.2254; Found: 410.2227 (FAB).
[0301]
Example 63
Preparation of N-cyclopropyl-N-[(2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetyl] -β-alanine
[0302]
Embedded image

Solution of N- (cyano-ethyl) -N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide (0.050 g, 0.146 mmol) in 40% aqueous NaOH (1 mL) Was heated to reflux for 5 hours and then cooled to room temperature. The reaction mixture is CH₂Cl₂And washed with 3N HCl. Then, the aqueous solution was added to CH₂Cl₂Washed with (3x). The organic solution is mixed, dried (Na₂SO₄), Filtered and concentrated in vacuo. Purification by reverse phase HPLC yielded the title product. ES mass spectrum {m / e} 363 (M + 1).
[0303]
Example 64
Preparation of N-isopropyl-2- (2-pyridin-3-yl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide
[0304]
Embedded image

The above title compound was prepared according to steps B to D of Example 2, but using 3-pyridineboronic acid instead of ortho-tolylboronic acid. ES mass spectrum m / e 385 (M + 1).
[0305]
Example 65
Preparation of N-isopropyl-2- (2-pyridin-4-yl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide
[0306]
Embedded image

The above title compound was prepared according to Example 2, steps B to D, using 4-pyridineboronic acid instead of ortho-tolylboronic acid and N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. N- (pyridin-3-ylmethyl) propan-2-amine was used. ES mass spectrum m / e 385 (M + 1).
[0307]
Example 66
Preparation of N-benzyl-N-isopropyl-2- (2-pyridin-4-yl-1H-indol-3-yl) -acetamide
[0308]
Embedded image

The above title compound was prepared according to Example 2, steps B to D, using 4-pyridineboronic acid instead of ortho-tolylboronic acid and N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine instead of N- (pyridin-4-ylmethyl) propan-2-amine. Benzyl isopropylamine was used. ES mass spectrum {m / e} 384 (M + 1).
[0309]
Example 67
In vitro inhibition of ras farnesyltransferase
Transferase assay. Assays for isoprenyl-protein transferase activity are performed at 30 ° C unless otherwise stated. A typical reaction mixture is [³H] Farnesyl diphosphate, Ras protein, 50 mM HEPES (pH 7.5), regulatory anion (eg, 5 mM ATP), 5 mM MgCl₂5 mM dithiothreitol, 10 μM ZnCl₂, 0.1% polyethylene glycol (PEG) (molecular weight 15,000-20,000) and isoprenyl-protein transferase (final volume 50 μL). The FPTase used in the assay is described by Omer, C .; A. , Kral, A .; M. Diehl, R .; E. FIG. , Prendergast, G .; C. Powers, S .; , Allen, C .; M. Gibbs, J. et al. B. and @Kohl, N.M. E. FIG. (1993) Biochemistry # 32: 5167-5176, prepared by recombinant expression. After the enzyme-free assay mixture has been pre-equilibrated by heat, the reaction is initiated by the addition of isoprenyl-protein transferase and at regular intervals (typically 15 minutes) by the addition of 1 M HCl in ethanol (1 mL). Stop. The quenched reaction mixture is left for 15 minutes (to complete the precipitation process). After addition of 2 mL of 100% ethanol, the reaction mixture is vacuum filtered through a Whatman # GF / C filter. The filters are washed four times with 2 mL of 100% ethanol mixed with scintillation fluid (10 mL) and then counted on a Beckman LS3801 scintillation counter.
[0310]
For inhibition studies, the assay is performed as described above, except that the inhibitor is prepared as a concentrated solution in 100% dimethyl sulfoxide and then diluted 20-fold into a mixture for the enzyme assay. Inhibitor IC₅₀The substrate concentrations to determine are as follows: FTase, 650 nM Ras-CVLS (SEQ ID NO: 2), 100 nM farnesyl diphosphate.
[0311]
The compounds of the invention are tested for inhibitory activity on human FPTase by the assays described above.
[0312]
Example 68
Modified in vitro GGTase inhibition assay
The modified geranylgeranyl-protein transferase inhibition assay is performed at room temperature. A typical reaction mixture is [³H] geranylgeranyl diphosphate, biotinylated Ras protein, 50 mM HEPES (pH 7.5), regulatory anion (eg, 10 mM glycerophosphate or 5 mM ATP), 5 mM MgCl₂, 10 μM ZnCl₂0.1% PEG (molecular weight 15,000-20,000), 2 mM dithiothreitol and geranylgeranyl-protein transferase type I (GGTase) (final volume 50 μL). The GGTase type I enzyme used in the assay is prepared as described in US Pat. No. 5,470,832. This patent is incorporated by reference. The Ras peptide is derived from the K4B-Ras protein and has the following sequence: biotinyl-GKKKKKKSKTKCVIM (single amino acid code) (SEQ ID NO: 2). The reaction was started by the addition of GGTase and a 3 mg / L suspension of streptavidin SPA beads (Scintillation Proximity Assay beads, Amersham) in 0.2 M sodium phosphate (pH 4) containing 50 mM EDTA and 0.5% BSA. The reaction is stopped at regular intervals (typically 15 minutes) by the addition of 200 mL of suspension. The quenched reaction mixture is allowed to stand for 2 hours before analysis using a Packard @ TopCount scintillation counter.
[0313]
For inhibition studies, the assay is performed as described above, except that the inhibitor is prepared as a concentrated solution in 100% dimethyl sulfoxide and then diluted 25-fold into a mixture for the enzyme assay. IC₅₀The value is K_MDetermine with Ras peptide near concentration. Inhibitor IC₅₀The enzyme and substrate concentrations to determine are as follows: 75 pM GGTase-I, 1.6 μM Ras peptide, 100 nM geranylgeranyl diphosphate.
[0314]
Compounds of the present invention are tested for inhibitory activity against human GGTase type I by the assays described above.
[0315]
Example 69
Cell-based in vitro ras farnesylation assay
The cell line used in this assay was the v-ras line that expressed Ha-ras @ p21 and was derived from either Rat1 cells or NIH3T3 cells. This assay is essentially a method described by DeClue, J .; E. FIG. Et al., Cancer Research 51: 712-717, (1991). 50-75% confluent cells in a 10 cm dish are treated with the test compound (final concentration of solvent, methanol or dimethylsulfoxide is 0.1%). After 4 hours at 37 ° C., 10% regular DMEM, 2% fetal calf serum and 400 μCi [³⁵[S] Label cells in 3 mL methionine-free DMEM supplemented with methionine (1000 Ci / mmol). After an additional 20 hours, cells were lysed in lysis buffer (1% NP40 / 20 mM HEPES, pH 7.5 / 5 mM MgCl2).₂/ 1 mM DDT / 10 mg / mL aprotinene / 2 mg / mL leupeptin / 2 mg / mL antipain / 0.5 mM PMSF) and the lysate is cleared by centrifugation at 100,000 × g for 45 minutes. To An aliquot of the lysate with the same number of acid drops is made up to 1 mL with IP buffer (lysis buffer lacking DTT) and the ras-specific monoclonal antibody Y13-259 (Furth, ME et al., J. Virol. 43: 294-304, (1982)). After incubating the antibody at 4 ° C. for 2 hours, 200 μL of a 25% suspension of Protein A-Sepharose coated with rabbit anti-rat IgG is added over 45 minutes. The immunoprecipitates were washed with IP buffer (20 nM HEPES, pH 7.5 / 1 mM EDTA / 1% Triton@X-100.0.5% deoxycholate / 0.1% SDS / 0.1 M NaCl). Wash twice, boil in DSD-PAGE sample buffer and load on a 13% acrylamide gel. When the dye surface reaches the bottom, the gel is fixed, dipped in Enlightening, dried and subjected to autoradiography. The intensity of the bands corresponding to the farnesylated and non-farnesylated ras proteins is compared to determine the rate of inhibition of the transfer of farnesyl to the protein.
[0316]
Example 70
Cell-based in vitro growth inhibition assay
Effect of compounds of the invention on anchorage-independent growth of Rat1 cells transformed with any of the v-ras, v-raf or v-mos oncogenes to determine the biological consequences of FPTase inhibition To test. Cells transformed with v-Raf and v-Mos may be included in the analysis to assess the specificity of the compounds for Ras-induced cell transformation.
[0317]
Rat1 cells transformed with either v-ras, v-raf or v-mos were cultured on Medium A (Dulbecco's modified Eagle's medium supplemented with 10% fetal bovine serum) on agarose bottom layer (0.6%). )) On 1% of cells per plate (35 mm diameter)⁴Seed at an individual density. Both layers contain 0.1% methanol or an appropriate concentration of a compound of the invention (dissolved in methanol at 1000 times the final concentration used in the assay). The cells are fed twice a week with 0.5 mL of medium A containing 0.1% methanol or its concentration of the compound. Photomicrographs are taken after 16 days of culture and compared.
[0318]
Example 71
Construction of SEAP reporter plasmid pDSE100
The SEAP reporter plasmid, pDSE100, was constructed by ligating a restriction fragment having the SEAP coding sequence to plasmid pCMV-RE-AKI. The SEAT gene is derived from the plasmid pSEAP2-Basic (Clontech, Palo Alto, CA). Plasmid pCMV-RE-AKI was created by Deborah @ Jones (Merck) and contains 5 'of the "dyad symmetric response element" cloned upstream of the "CAT-TATA" sequence from the cytomegalovirus immediate early promoter. Has two sequence copies. This plasmid also has a bovine growth hormone poly A sequence.
[0319]
The plasmid, pDSE100, was constructed as follows. Restriction enzyme EcoR₁The restriction fragment encoding the SEAP coding sequence was excised from the plasmid pSEAP2-Basic using HpaI. The linear DNA fragment contains E. coli. The Klenow fragment of E. coli DNA polymerase I was supplemented. The "blunt-ended" DNA carrying the SEAP gene was isolated by electrophoresis of the digest in an agarose gel and cutting out the 1694 base pair fragment. The vector plasmid pCMV-RE-AKI was linearized with the restriction enzyme Bgl-II and the ends were supplemented with Klenow DNA polymerase I. The SEAPΔ DNA fragment was blunt-end ligated into the pCMV-RE-AKI vector and the ligation product was transferred to DH5-alphaE. E. coli cells (Gibco-BRL) were transformed. Transformants were screened for proper insertion and then mapped for restriction fragment location. Correctly positioned recombinant constructs were sequenced across the cloning junction to verify correct sequence. The resulting plasmid has a SEAP coding sequence downstream of the DSE and CAT-TATA promoter elements and upstream of the BGH polyA sequence.
[0320]
Alternative creation of SEAP reporter plasmid, pDSE101
The SEAP reporter plasmid, pDSE101, is also made by ligating a restriction fragment having the SEAP coding sequence to plasmid pCMV-RE-AKI. The SEAP gene is derived from the plasmid pGEM7zf (-) / SEAP.
[0321]
Plasmid pDSE101 was constructed as follows: a restriction fragment having a portion of the SEAP gene coding sequence was excised from plasmid pGEM7zf (-) / ESAP using the restriction enzymes ApaII and KpnI. The ends of the linear DNA fragment are The DNA was returned to the original state with the Klenow fragment of DNA polymerase I. The “blunt-ended” DNA with the truncated SEAP gene was isolated by electrophoresis of the digest in an agarose gel and cutting out the 1910 base pair fragment. Cleavage with Bgl-II. The 1910 base pair fragment was ligated to plasmid pCMV-RE-AKI supplemented with E. coli Klenow fragment DNA polymerase. Recombinant plasmids were screened for insertion placement and sequenced through the ligation junction. Plasmid pCMV-RE-AKI was removed from plasmid pCMVIE-AKI-DHFR (Whang, Y., Silverberg, M., Morgan, A., Munshi, S., by removing the EcoRI fragment with the DHRF and neomycin markers. Lenny, AB, Ellis, RW and {Kieff, E. (1987) J. Virol., 61, 1796-1807). Five copies of the fos promoter serum response element have been described previously (Jones, RE, Defeo-Jones, D., McAvoy, EM, Vucololo, GA, Wegrzyn, RJ. , Haskell, KM and @Orif, A. (1991) Oncogene, 6, 745-751), resulting in the plasmid pCMV-RE-AKI.
[0322]
Plasmid pGEM7zf (-) / SEPA was prepared as follows. In two segments from a human placenta cDNA library (Clontech), the following oligos were used to PCR the SEAP gene.
[0323]
Sense strand N-terminal SEAP: '5' GAGAGGGAATTCGGGCCCTTCCTGCATTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGGGC3 '(SEQ ID NO: 4)
Antisense strand N-terminal SEAP: '5' GAGAGAGCTCGAGGTTAACCCGGGTGGCGCGGCGTCGGTGGT3 '(SEQ ID NO: 5)
Sense strand C-terminal SEAP: '5' GAGAGAGTCTAGAGTTTAACCCGTGGTCCCCGCGTTGCTTCCT3 '(SEQ ID NO: 6)
Antisense strand C-terminal SEAP: '5' GAAGAGGAAGCTTGGTACCGCCACTGGGCTGTAGGTGGTGGGCT3 '(SEQ ID NO: 7)
[0324]
The N-terminal oligo (SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO: 5) was used to generate a 1560 bp N-terminal PCR product with EcoRI and HpaI restriction sites at the ends. The antisense N-terminal oligo (SEQ ID NO: 5) induces an internally translated STOP codon into the SEAP gene with an HpaI site. A C-terminal oligo (SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 7) was used to amplify a 412 bp C-terminal PCR product with HpaI and HindIII restriction sites. The sense strand C-terminal oligo (SEQ ID NO: 6) induces an internal STOP codon as well as an HpaI site. Next, the N-terminal amplicon was digested with EcoRI and HpaI, while the C-terminal amplicon was digested with HpaI and HindIII. The digest was electrophoresed in an agarose gel and the two fragments with each SEAP gene end were isolated by isolating the 1560 and 412 base pair fragments. The restriction sites were then digested with EcoRI and HindIII, and the two fragments were co-ligated into the vector pGEM7zf (-) (Promega) isolated using agarose gel. The resulting clone, pGEM7zf (-) / SEAP, has the coding sequence for the SEAP gene from amino acids.
[0325]
Construction of pCMV-SEAP-A constitutively expressing SEAP plasmid
Placing the sequence encoding the truncated SEAP gene downstream of the cytomegalovirus (CMV) IE-1 promoter resulted in an expression plasmid that constitutively expresses the SEAP protein. This expression plasmid also has a CMV intron A region 5 'to the SEAP gene, and a 3' untranslated region of the bovine growth hormone gene 3 'to the SEAP gene.
[0326]
Plasmid pCMVIE-AKI-DHFR with CMV immediate early promoter (Whang, Y., Silverklang, M., Morgan, A., Munshi, S., Lenny, AB Ellis, RW, and @Kieff, E (1987) J. Virol., 61: 1796-1807) was cut with EcoRI to yield two fragments. Vector fragments were isolated by agarose electrophoresis and ligated. The resulting plasmid is named pCMV-AKI. Next, the cytomegalovirus intron A nucleotide sequence is inserted downstream of the CMVΔIE1 promoter in pCMV-AKI. The intron A sequence was isolated from a genomic clone bank and subcloned into pBR332, resulting in plasmid p16T-286. Using site-directed mutagenesis, the intron A sequence was converted to nucleotide 1856 (Chapman, BS, Thayer, RM, Vincent, KA and Haigwood, NL, Nuc. Acids Res. 19, 3937-3986) to remove the SacI restriction site. The mutated intron A sequence was PCR from plasmid p16T-287 using the following oligos.
[0327]
Sense strand: '5'GGCAGAGCTCGTTTTAGGAACCGTGCAG3' (SEQ ID NO: 8)
Antisense strand: '5'GAGAGATCTCAAGGACGGTGACTGCAG3' (SEQ ID NO: 9)
[0328]
These two oligos yield a 991 base pair fragment with a SacI site incorporated by the sense oligo and a Bgl-II fragment incorporated by the antisense oligo. The PCR fragment is trimmed with SacI and Bgl-II and isolated using an agarose gel. The vector pCMV-AKI is cut with SacI and Bgl-II and the larger vector fragment is isolated by agarose gel electrophoresis. The two fragments isolated by the gel are ligated at their respective SacI and Bgl-II sites, resulting in plasmid pCMV-AKI-InA.
[0329]
The DNA sequence encoding the truncated SEAP gene is inserted into the pCMV-AKI-InA plasmid, the Bgl-II part of the vector. The SEAP gene is excised from plasmid pGEM7zf (-) / SEAP (above) using EcoRI and HindIII. The fragment is supplemented with Klenow DNA polymerase and the 1970 base pair fragment is isolated from the vector fragment by agarose gel electrophoresis. This pCMV-AKI-InA vector is prepared by digesting with Bgl-II and supplementing the ends with Klenow DNA polymerase. Blunt end ligation of the SEAP fragment into the pCMV-AKI-InA vector yields the final construct. Transformants were screened for proper insertion and then mapped for restriction fragment location. Correctly positioned recombinant constructs were sequenced across the cloning junction to verify correct sequence. The resulting plasmid, named pCMV-SEAP-A (deposited with the ATCC on January 27, 1998 under the Budapest Treaty and designated as ATCC), contains the cytomegalovirus immediate-early promoter IE-1 and It has a modified SEAP coding sequence downstream of the intron A sequence and upstream of the bovine growth hormone poly A sequence. This plasmid constitutively expresses SEAP when transfected into mammalian cells.
[0330]
Alternative construction of pCMV-SEAP-B constitutively expressing SEAP plasmid
An expression plasmid that constitutively expresses the SEAP protein contains a sequence encoding the truncated SEAP gene downstream of the cytomegalovirus (CMV) IE-1 promoter and upstream of the 3 'untranslated region of the bovine growth hormone gene. This can be caused by placing.
[0331]
Plasmid pCMVIE-AKI-DHFR with the CMV immediate early promoter and bovine growth hormone poly A sequence (Whang, Y., Silverklang, M., Morgan, A., Munshi, S., Lenny, AB Ellis, R. et al. W., and @Kieff, E. (1987) J. Virol., 61: 1796-1807) can be cut with EcoRI to yield two fragments. Vector fragments can be isolated and ligated by agarose electrophoresis. The resulting plasmid is named pCMV-AKI. The DNA sequence encoding the truncated SEAP gene is inserted into the pCMV-AKI-InA plasmid, the unique Bgl-II site in the vector. The SEAP gene is excised from plasmid pGEMzf (-) / SEAP (above) using EcoRI and HindIII. The fragment is supplemented with Klenow DNA polymerase and the 1970 base pair fragment is isolated from the vector fragment by agarose gel electrophoresis. This pCMV-AKI-InA vector is prepared by digesting with Bgl-II and supplementing the ends with Klenow DNA polymerase. The SEAP fragment was blunt-end ligated into the vector and the ligation reaction was performed using E. coli. Transformation into E. coli DH5α cells yields the final construct. Transformants can then be screened for proper insertion and then mapped for restriction fragment location. Correctly located recombinant constructs will be sequenced across the cloning junction to verify the correct sequence. The resulting plasmid, named pCMV-SEAP-B, has a modified SEAP coding sequence downstream of the cytomegalovirus immediate early promoter IE-1 and upstream of the bovine growth hormone polyA sequence. This plasmid will constitutively express SEAP when transfected into mammalian cells.
[0332]
Cloning of myristylated virus-H-ras expression plasmid pSM600
The DNA fragment containing the virus-H-ras was "HB-11" (deposited with the ATCC on August 27, 1997 under the Budapest Treaty and designated ATCC 209, 218) using the following oligos: Can be used for PCR.
[0333]
Sense strand:
5 'TCTCCTCGAGCCACCATGGGGAGTAGCAAGAGCAAGCCTAAGGACCCCAGCCAGCGCCGGATGACAGAATACAAGCTTGTGGTGG3' (SEQ ID NO: 10)
Antisense:
5 'CACATCTAGATCAGGACAGCACAGACTTGCAGC3' (SEQ ID NO: 11).
[0334]
A sequence encoding the first 15 amino acids of the v-sec gene and having a myristylation site is incorporated into this sense strand oligo. This sense strand oligo also optimizes the "Kozak" translation initiation sequence 5 'flanking the ATG start site. To prevent prenylation at the C-terminus of virus ras, cysteine 186 is mutated to serine by replacing the C residue with a G residue in the C-terminal antisense oligo. The PCR primer oligo introduces an XhoI site at the 5 'end and an XbaI site at the 3' end. The Xhol-Xbal fragment can be ligated to the mammalian expression plasmid pCI (Promega) cut with Xhol and Xbal. The result is pSM600, a plasmid in which the recombinant myr-virus-H-ras gene is constitutively transcribed from the CMV promoter of the pCI vector.
[0335]
Cloning of virus-H-ras-CVLL expression plasmid pSMS601
A virus-H-ras clone having a C-terminal sequence encoding amino acid CVLL can be cloned from plasmid "HB-11" by PCR using the following oligos.
[0336]
Sense strand:
5 'TCCCTCGAGGCCACCATGACAGAATACAAGCTTGTGGTGG-3' (SEQ ID NO: 12)
Antisense strand:
5'CACTCTTAGACTGGTGTCAGAGCAGCACAACTTGCAGC-3 '(SEQ ID NO: 13)
[0337]
This sense strand optimizes the "KOZAK" sequence and adds an XhoI site. This antisense strand mutates serine 189 to leucine, adding an XbaI site. The PCR fragment can be trimmed with XhoI and XbaI and ligated into XhoI-XbaI (Promega) that has cut the vector pCI. As a result, a plasmid, pSMS601, in which the mutated virus-H-ras-CVLL gene is constitutively transcribed from the CMV promoter of the pCI vector is generated.
[0338]
Cloning of cell-H-ras-Leu61 expression plasmid pSMS620ＳThe human cell-H-ras-gene can be subjected to PCR from a human cerebral cortex cDNA library (Clontech) using the following oligonucleotide primers.
[0339]
Sense strand:
5'-GAGAGAATTCGCCACCATGACGGAATATAAGCTGGTGGG-3 '(SEQ ID NO: 14)
Antisense strand:
5'-GAGAGTCGACGCGTCAGGAGAGCACACACTTGC-3 '(SEQ ID NO: 15)
[0340]
These primers amplify the DNA fragment encoding cH-Ras, and these primers provide an optimized "Kozak" translation initiation sequence, an EcoRI site at the N-terminus and a C-terminus. At the Sal @ I site. After trimming the ends of the PCR product with EcoRI and SalII, the cH-ras fragment can be ligated into EcoRI-SalII (Promega) which has been cut from the mutagenesis vector pAlter-1. Mutation of glutamine-61 to leucine can be accomplished using the manufacturer's protocol and the following oligonucleotides:
5'-CCGCCGGCCTGGAGGGAGTACG-3 '(SEQ ID NO: 16)
[0341]
After selecting and sequencing the correct nucleotide substitutions, the mutated c-H-ras-Leu61 was excised from the pAlter-1 vector using EcoRI and SalII, into the EcoRI and SalII digested vector pCI (Promega). Can be ligated directly. This new recombinant plasmid, pSMS620, will constitutively transcribe cH-ras-Leu61 from the CMV promoter of the pCI vector.
[0342]
Cloning of cN-ras-Val-12 Expression Plasmid pSMS630 The human cN-ras gene can be subjected to PCR from a human cerebral cortex cDNA library (Clontech) using the following oligonucleotide primers.
[0343]
Sense strand:
5'-GAGAGAATTCGCCACCATGAACTGAGTACAAACTGGTGGG-3 '(SEQ ID NO: 17)
Antisense strand:
5'-GAGAGTCGACTTGTTACATCACCACACATGGC-3 '(SEQ ID NO: 18)
[0344]
These primers amplify a DNA fragment encoding cN-Ras, which allows the optimized "Kozak" translation initiation sequence, an EcoRI site at the N-terminus and a SalII site at the C-terminus. Sites will be created. After trimming the ends of the PCR product with EcoRI and SalII, the cN-ras fragment can be ligated to EcoRI-SalII (Promega), which has been cut from the mutagenesis vector pAlter-1. Mutation of glycine-12 to valine can be accomplished using the manufacturer's protocol and the following oligonucleotides:
5'-GTTGGAGCAGTTGGGTGTTGGG-3 '(SEQ ID NO: 19)
[0345]
After selecting and sequencing the correct nucleotide sequence substitutions, the mutated cN-ras-Val-12 was excised from the pAlter-1 vector using EcoRI and SalII and the vector pCI digested with EcoRI and SalII. (Promega) can be directly ligated. This new recombinant plasmid, pSMS630, will constitutively transcribe cN-ras-Val-12 from the CMV promoter of the pCI vector.
[0346]
Cloning of c-K4B-ras-Val-12 expression plasmid pSMS640
The human c-K4B-ras gene can be subjected to PCR from a human cerebral cortex cDNA library (Clontech) using the following oligonucleotide primers.
[0347]
Sense strand:
5'-GAGAGGTACCCGCCACATGAACTGAATATAAACTTGTGGG-3 '(SEQ ID NO: 20)
Antisense strand:
5'-CTCTGTCGACGTATTTACATAATTACACACTTTGTC-3 '(SEQ ID NO: 21)
[0348]
These primers amplify a DNA fragment encoding c-K4B-Ras, which allows the optimized "Kozak" translation initiation sequence, a KpnI site at the N-terminus and a Sal @ I site at the C-terminus. Sites will be created. After trimming the ends of the PCR product with KpnI and SalII, the c-K4B-ras fragment can be ligated to KpnI-SalII (Promega), which has been cut with the mutagenesis vector pAlter-1. Mutation of cysteine-12 to valine can be accomplished using the manufacturer's protocol and the following oligonucleotides:
5'-GTAGTTTGGAGCTGTTGGCGTAGGC-3 '(SEQ ID NO: 22)
After selecting and sequencing the correct nucleotide sequence substitutions, the mutant c-K4B-ras-Val-12 was excised from the pAlter-1 vector using KpnI and SalII and the vector pCI digested with KpnI and SalII. (Promega) can be directly ligated. This new recombinant plasmid will constitutively transcribe c-K4B-ras-Val-12 from the CMV promoter of the pCI vector.
[0349]
Cloning of cK-ras4A-Val-12 expression plasmid pSMS650
The human c-K4A-ras gene can be subjected to PCR from a human cerebral cortex cDNA library (Clontech) using the following oligonucleotide primers.
[0350]
Sense strand:
5'-GAGAGGTACCCGCCACCATGAACTGAATATAACTGTGTGG-3 '(SEQ ID NO: 23)
Antisense strand:
5'-CTCTGTCGACAGATTACATTATAATGCATTTTTTAATTTTCACAC-3 '(SEQ ID NO: 24)
[0351]
These primers amplify the DNA fragment encoding c-K4A-Ras, which optimizes the "Kozak" translation initiation sequence, a KpnI site at the N-terminus and a Sal @ I site at the C-terminus. Sites will be created. After trimming the ends of the PCR product with KpnI and Sal I, the c-K-rasA4 fragment can be ligated to KpnI-Sal I (Promega), which has been cut with the mutagenesis vector pAlter-1. Mutation of cysteine-12 to valine can be accomplished using the manufacturer's protocol and the following oligonucleotides:
5'-GTAGTTTGGAGCTGTTGGCGTAGGC-3 '(SEQ ID NO: 25)
[0352]
After selecting and sequencing the correct nucleotide sequence substitution, the mutant c-K4A-ras-Val-12 was excised from the pAlter-1 vector using KpnI and SalII and the vector pCI digested with KpnI and SalII. (Promega) can be directly ligated. This new recombinant plasmid, pSMS650, will constitutively transcribe c-K4A-ras-Val-12 from the CMV promoter of the pCI vector.
[0353]
SEAP assay
Human C33A cells (human epithelial carcinoma-ATCC collection) are seeded in 10 cm tissue culture plates in DMEM + 10% fetal calf serum + 1X @ Pen / Strep + 1X @ glutamine + 1X @ NEAA. Cells are maintained in 5% CO 2 until they reach 50-80% confluency.₂Grow at 37 ° C. in an atmosphere.
[0354]
CaPO₄Transient transfection is performed by the method (Sambrook et al., 1989). This causes the expression plasmid for H-ras, N-ras, K-ras, Myr-ras or H-ras-CVLL to co-precipitate with the DSE-SEAP reporter construct. (Not including ras expression plasmid when cells are transfected with pCMV-SEAP plasmid). For a 10 cm plate, CaCl₂-Add 600 μL of DNA solution dropwise to 600 μL of 2X @ HBS buffer with vortexing to obtain 1.2 mL of precipitation solution (see below for formulation). This is left at room temperature for 20 to 30 minutes. While generating sediment, the medium on C33A cells was treated with DMEM (minus phenol red; Gibco {cat. NO. 31053-028) + 0.5%} charcoal stripped bovine serum + 1X (Pen / Strep, glutamine and non-essential amino acids) ). CaPO₄-Add the DNA precipitate drop by drop to the cells and gently rock the plate to disperse. 5% CO₂The DNA uptake is allowed to proceed at 37 ° C. for 5 to 6 hours.
[0355]
After the DNA incubation time, the cells are washed with PBS and trypsinized with 1 mL of 0.05% trypsin. Trypsinized cells are added and manually diluted in 10 mL of phenol-free DMEM + 0.2% charcoal-stripped bovine serum + 1X (Pen / Strep, Glutamine and NEAA). Place the transfected cells in a 96-well microtiter plate (100 μL / well). In 100 μL, the drug diluted in the medium was already added. Each drug concentration is repeated three times over a range of half-log steps, with a final volume of 200 μL per well.
[0356]
Incubation of cells and drug requires CO 2₂Below at 37 ° C. for 36 hours. At the end of the incubation period, cells are examined microscopically to demonstrate cell fatigue. Next, 100 μL of medium containing secreted alkaline phosphatase was removed from each well and transferred to a microtubule array for heat treatment at 65 ° C. for 1 hour to inactivate endogenous alkaline phosphatase (but not thermostable secreted phosphotase). Become
[0357]
The heat-treated medium is evaluated for alkaline phosphatase by a luminescence assay using the luminescence reagent CSPD® (Tropix, Bedford, Mass.). Mix 50 μL of medium with 100 μL of CSPD cocktail and incubate for 60 minutes at room temperature. The luminescence is monitored using a ML2200 microplate luminometer (Dynatech). The luminescence reflects the level of activation of the fos reporter construct stimulated by the transiently expressed protein.
[0358]
DNA-CaPO for 10 cm plate of cells₄Sediment
Ras expression plasmid (1 μg / μL) 10 μL
DSE-SEAP plasmid (1 μg / μL) 2 μL
Sheared bovine thymus DNA (1 μg / μL) 8 μL
2M @ CaCl₂74μL
dH₂O 506μL
[0359]
2X HBS buffer
280 mM NaCl
10 mM @ KCl
1.5 mM Na₂HPO₄2H₂O
12mM dextrose
50mM HEPES
Final pH = 7.05
[0360]
Light emission buffer (26mL)
Assay buffer 20mL
Emerald Reagent ™ (Tropix) 2.5 mL
100 mM Homoarginine 2.5 mL
CSPD Reagent ™ (Tropix) 1.0 mL
[0361]
Assay buffer
0.05M Na₂CO₃With 0.05M NaHCO₃To pH 9.5.
MgCl₂Medium to 1 mM.
[0362]
Example 72
The processing assay used is a variation of that described by DeClue et al. [Cancer Research 51, 712-717, 1991].
[0363]
K4B-Ras processing inhibition assay
Rat1 cells transformed with PSN-1 (human pancreatic carcinoma) or virus-K4B-ras are used for protein processing assays. The semi-confluent cells in a 100 mm dish are filled with 3.5 mL of medium (methionine-free RPMI supplemented with 2% fetal calf serum, or 200 mM glutamine (Gibco)) containing the desired concentration of test compound, lovastatin or solvent only. Cysteine-free / methionine-free DMEM) supplemented with 0.035 mL and 2% fetal calf serum, respectively. Cells treated with lovastine (5 μM to 10 μM), a compound that blocks Ras processing in cells by inhibiting the rate-limiting step in the isoprenoid biosynthetic pathway, serve as a positive control. Test compounds are prepared as 1000 × concentrated solutions in DMSO to a final solvent concentration of 0.1%. After 2 hours incubation at 37 ° C., 204 μCi / mL [³⁵S] Pro-Mix (Amersham, cell labeling grade) is added.
[0364]
After introducing the labeled amino acid mixture, the cells are further incubated at 37 ° C. (typically 6 to 24 hours). Thereafter, the medium is removed and the cells are washed once with cold PBS. The cells are scraped into 1 mL of cold PBS, collected by centrifugation (10,000 × g at room temperature for 10 minutes), and 1 mL of lysis buffer (1% Nonidet @ P-40, 20 mM HEPES (pH 7.5)). , 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS, 1 mM DTT, 10 μg / mL AEBSF, 10 μg / mL aprotinin, 2 μg / mL leupeptin and 2 μg / mL Dissolve by vortexing in (antipine). The lysate is then centrifuged at 15,000 xg for 10 minutes at 4 ° C and the supernatant is saved.
[0365]
For immunoprecipitation of Ki4B-Ras, a sample of lysate supernatant containing an equal amount of protein is used. Protein concentration is determined by the Bradford method using bovine serum albumin as a standard. The appropriate amount of lysate is made up to 1 mL with DTT-free lysis buffer and 8 μg of pan-Ras monoclonal antibody, Y13-259, is added. Incubate the protein / antibody mixture on ice at 4 ° C. for 24 hours. The immune complex is recovered using pansorbin (Calbiochem) coated with rabbit antiserum to rat IgG (Cappel) by tumbling at 4 ° C. for 45 hours. The pellet is washed three times with 1 mL of lysis buffer lacking DTT and protease inhibitors and resuspended in 100 μL of elution buffer (10 mM Tris (pH 7.4), 1% SDS). Ras is eluted from the beads by heating at 95 ° C. for 5 minutes, after which the beads are pelleted by brief centrifugation (15,000 × g at room temperature for 30 seconds).
[0366]
The supernatant was combined with 1 mL of dilution buffer (0.1% Triton @ X-100, 5 mM EDTA, 50 mM NaCl, containing 2 μg Kirsten-ras specific monoclonal antibody, cK-ras @ AB-1 (Carbiochem), 10 mM Tris (pH 7.4). The second protein / antibody mixture is incubated on ice at 4 ° C. for 1 to 2 hours. The immune complexes are recovered by pan sorbin (Calbiochem) coated with rabbit antiserum against rat IgG (Cappel) by tumbling at 4 ° C. for 45 hours. The pellet is washed three times with 1 mL of lysis buffer lacking DTT and protease inhibitors and resuspended in Laemmli sample buffer. Ras is eluted from the beads by heating at 95 ° C. for 5 minutes, after which the beads are pelleted by brief centrifugation. The supernatant is subjected to SDS-PAGE using a 12% acrylamide gel (bis-acrylamide: acrylamide 1: 100), and Ras is visualized by fluorography.
[0367]
hDJ processing inhibition assay
The PSN-1 cells are seeded in a 24-well assay plate. For each compound to be tested, cells are treated at a minimum of seven concentrations during a half-log phase. Final solvent (DMSO) concentration is 0.1%. A vehicle only control is included in each assay plate. Cells are incubated for 24 hours at 37 ° C, 5% CO₂Process below.
[0368]
Thereafter, the growth medium is aspirated and the sample is washed with PBS. Lyse cells with SDS-PAGE sample buffer containing 5% 2-mercaptoethanol and heat to 95 ° C. for 5 minutes. After cooling on ice for 10 minutes, a mixture of nucleases is added to reduce the viscosity of the sample.
[0369]
Incubate the plate on ice for another 10 minutes. The sample is loaded on a precast 8% acrylamide gel and electrophoresed at 15 mA / gel for 3-4 hours. Thereafter, the sample is transferred from the gel to a PVDF membrane by Western blotting.
[0370]
The membranes are blocked for at least 1 hour in a buffer containing 2% non-fat dry milk. The membrane is then treated with a monoclonal antibody to hDJ-2 (Neomarkers @ Cat. # @ MS-225), washed and treated with an alkaline phosphatase-conjugated secondary antibody. Thereafter, the membrane is treated with a fluorescence detection reagent and scanned using a phosphorescent analyzer.
[0371]
For each sample, the percentage of total signal corresponding to the non-prenylated species of hDJ (the slower migrating species) is calculated by densitometry. Dose response curves and EC using 4-parameter curve fit in SigmaPlot software₅₀Yields a value.
[0372]
Example 73
Rap1 processing inhibition assay
Protocol A
Cells are labeled, incubated and lysed as described in Example 72.
[0373]
For immunoprecipitation of Rap1, a sample of lysate supernatant containing an equal amount of protein is used. Protein concentration is determined by the Bradford method using bovine serum albumin as a standard. The appropriate amount of lysate is brought to 1 mL with lysis buffer lacking DTT and 2 μg of the Rap1 antibody, Rap / Krev1 (121) (Santa Cruz Biotech) is added. Incubate the protein / antibody mixture on ice for 1 hour at 4 ° C. The immune complex is recovered with Pansorbin (Calbiochem) by tumbling at 4 ° C. for 45 hours. The pellet is washed three times with 1 mL of lysis buffer lacking DTT and protease inhibitors and resuspended in 100 μL of elution buffer (10 mM Tris (pH 7.4), 1% SDS). Rap1 is eluted from the beads by heating at 95 ° C. for 5 minutes, after which the beads are pelleted by brief centrifugation (15,000 × g for 30 seconds at room temperature).
[0374]
The supernatant was washed with 1 mL of dilution buffer (0.1% Triton X-100, 5 mM EDTA, 50 mM NaCl, 10 mM Tris (pH 7) containing 2 μg of Rap1 antibody, Rap1 / Krev1 (121) (Santa Cruz Biotech). .4)). The second protein / antibody mixture is incubated on ice at 4 ° C. for 1 to 2 hours. The immune complex is recovered with Pansorbin (Calbiochem) by tumbling at 4 ° C. for 45 hours. The pellet is washed three times with 1 mL of lysis buffer lacking DTT and protease inhibitors and resuspended in Laemmli sample buffer. Rap1 is eluted from the beads by heating at 95 ° C. for 5 minutes, after which the beads are pelleted by brief centrifugation. The supernatant is subjected to SDS-PAGE using a 12% acrylamide gel (bis-acrylamide: acrylamide 1: 100), and Ras is visualized by fluorography.
[0375]
Protocol B:
The PNS-1 cells are passed through a 10 cm plate every 3-4 days, and the confluent plates are split 1:20 and 1:40. The day before starting the assay, 5 x 10 cells⁶Individuals are placed on a 15 cm plate to ensure similar confluency in each assay. The medium for these cells is RPM1 1640 (Gibco) containing 15% fetal calf serum and 1 × Pen / Strep antibiotic mixture. On the day of the assay, cells are harvested by trypsinization and diluted to 400,000 cells / mL in media. Add 0.5 mL of these diluted cells to each well of a 24-well plate to bring the final number of cells per well to 200,000. The cells are then grown overnight at 37 ° C.
[0376]
Compounds undergoing the assay are diluted in DMSO at 1/2 log dilution. The final concentration range to undergo the assay is generally from 0.1 μM to 100 μM. Four concentrations per compound are typical. Compounds are diluted so that each concentration is at a final concentration of 1000 × (ie, 10 μM data points require a 10 mM stock of compound).
[0377]
Dilute 2 μL of each 1000 × compound stock to 1 mL media to give a 2 × stock of compound. Use vehicle control solution (2 μL of DMSO in 1 mL of medium). Add 0.5 mL of 2X stock of compound to cells.
[0378]
After 24 hours, the medium is aspirated from the assay plate. Rinse each well with 1 mL of PBS and aspirate the PBS. Add 18 μL SDS-PAGE sample buffer (Novex) containing 5% 2-mercapto-ethanol to each well. The plate is heated to 100 ° C. for 5 minutes using a heating block with an adapter for the assay plate. Place the plates on ice. After 10 minutes, 20 μL of RNase / DNase mixture is added to each well. This mixture contains DNase I (Worthington Enzymes) 1 mg / mL, RNase A (Worthington Enzymes) 0.25 mg / mL, Tris-HCl (pH 8.0) 0.5 M and MgCl 2₂0.5M. Leave the plate on ice for 10 minutes. The sample is then loaded on a gel or stored at -70 ° C until use.
[0379]
Each assay plate (usually three compounds in each 4-point titration plus control) requires one 15-well 14% Novex gel. Load 25 μL of each sample on the gel. The gel is run at 15 mA for about 3.5 hours. It is important to run the gel sufficiently that there is adequate separation between 21 kd (Rap1) and 29 kd (Rab6).
[0380]
Thereafter, the gel is transferred to a Novex precut PVDF membrane at 30 V (constant voltage) for 1.5 hours. Immediately after transfer, the membrane is blocked overnight in 20 mL of Western Blocking Buffer (2% nonfat dry milk in Western Wash Buffer (PBS + 0.1% Tween-20)). If blocking over the weekend, add 0.02% sodium azide. The membrane blocks at 4 ° C. with gentle rocking.
[0381]
The blocking solution was discarded and the anti-Rap1a antibody (Santa Cruz Biochemical SC1482) diluted 1: 1000 (diluted in western blocking buffer) and the anti-Rab6 antibody (Santa Cruz Biochemical SC310) 1: 5000 (in Western blocking buffer). Add 20 mL of fresh blocking solution containing (dilution). The membranes are incubated for 1 hour at room temperature with gentle rocking. Thereafter, the blocking solution is discarded and the membrane is washed three times with Western Wash Buffer for 15 minutes per wash. Thereafter, 20 mL of a blocking solution containing 1: 1000 (diluted in a Western blocking buffer) of two alkaline phosphatase-conjugated antibodies (alkaline phosphatase-conjugated anti-goat IgG and alkaline phosphatase-conjugated anti-rabbit IgG [Santa \ Cruz \ Biochemical]) are added. . The membranes are incubated for one hour and washed three times as described above.
[0382]
Approximately 2 mL of Amersham @ ECF detection reagent per gel is placed on OHP film (ECF), with the PVCF membrane facing down on the detection reagent. This is incubated for 1 minute, after which the membrane is placed on a new OHP film sheet.
[0383]
The developed OHP film sheet is scanned using a phosphorescence analyzer to determine the minimum Rap1a inhibitory concentration from the lowest concentration of compound that produces a detectable Rap1a Western signal. Since the Rap1a antibody used only recognizes non-prenylated / non-processed Rap1a, the presence of a detectable Rap1a western signal indicates inhibition of Rap1a prenylation.
[0384]
Protocol C:
This protocol allows ECs to inhibit Rap1a processing.₅₀The value can be determined. The assay is performed as described in Protocol B, with the following modifications. A 20 μL sample is run on a precast 10% to 12% gradient acrylamide minigel (Novex Inc.) at 15 mA / gel for 2.5 to 3 hours. Prenylated and non-prenylated forms of Rap1a should be blotted with a polyclonal antibody (Rap1 / Krev-1 Ab # 121; Santa Cruz Research Products # sc-65) followed by alkaline phosphatase-conjugated anti-rabbit IgG antibody. To detect. The percentage of non-prenylated Rap1a relative to the total amount of Rap1a is determined by peak integration using Imagequant ™ software (Molecular @ Dynamics). Non-prenylated Rap1a is distinguished from prenylated protein by the higher apparent molecular weight of the prenylated protein. Dose response curves and EC using 4-parameter curve fit in SigmaPlot software₅₀Yields a value.
[0385]
Example 75
In vivo tumor growth inhibition assay (nude mouse)
In vivo efficacy as a cancer cell growth inhibitor can be confirmed by several protocols known in the art. Examples of such in vivo efficacy studies are described in N.W. E. FIG. Kohl et al. (Nature @ Medicine, 1: 792-797 (1995)); E. FIG. (Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 91: 9141-9145 (1994)).
[0386]
On day 0, rodent fibroblasts transformed with carcinogenically mutated human Ha-ras or Ki-ras (cells 10 ml in 1 mL DMEM salt)⁶Per animal) is injected subcutaneously into the left flank of 8-12 week old female nude mice (Harlan). Mice in each oncogene group are randomly assigned to vehicle or compound treatment groups. On day 1, animals begin subcutaneous dosing and are dosed subcutaneously daily for the duration of the experiment. Alternatively, the farnesyl-protein transferase inhibitor may be administered by a continuous infusion pump. The compound or vehicle is delivered in a total volume of 0.1 mL. When all of the vehicle-treated animals show lesions 0.5 to 1.0 cm in diameter, tumors are excised and weighed, typically 11 to 15 days after cell injection. For each cell line, the average weight of the tumor in each treatment group is calculated.

Claims (33)

Formula I below:

(Where
The following formula:

The following:

Selected from
M is C or N;
R ¹ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl,
f) unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl,
g) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
h) halo,
i) OR ¹⁰ ,
j) R ¹¹ S (O) _m ,
^{k) R 10 C (O)} NR 10 -,
1) —C (O) N (R ¹⁰ ) ₂ ,
m) CN,
n) NO ₂ ,
^{o) R 10 C (O)} -,
^{p) R 10 OC (O)} -,
q) N ₃ ,
r) —N (R ¹⁰ ) ₂ or s) R ¹¹ OC (O) NR ¹⁰ −
Independently selected from;
R ^1a and R ^1b are
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
f) unsubstituted or substituted aralkyl or _g), - _(CH 2) independently selected from _n heterocycle;
R ^2a and R ^2b are
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) oxo,
e) an unsubstituted or substituted heterocycle, or f) an unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy, wherein the substituted group is
1) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
2) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
3) halo,
4) unsubstituted or substituted aryl,
5) unsubstituted or substituted heterocycles,
6) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl,
7) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl,
8) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl,
9) ^{-OR 10,
_{10) R 11 S (O)}} m -,
^{11) R 10 C (O)} NR 10 -,
^{12) -C (O) N (} R 10) 2,
13) CN,
14) NO ₂ ,
_{^{15) -N (R 10) 2}} ,
^{16) R 10 C (O)} -,
^{17) R 10 OC (O)} -,
18) _{N 3} or ^{19) R 11 OC (O)} NR 10, -
Substituted with one to three substituents selected from:
R ^2a and R ^2b may be optionally connected in a ring;
R ³ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl,
d) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl,
e) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
f) halo,
g) ^{-OR 10,
_{h) R 11 S (O)}} m -,
^{i) R 10 C (O)} NR 10 -,
^{j) -C (O) NR 10} ,
k) CN,
l) NO ₂ ,
^{m) R 10 C (O)} -,
^{n) R 10 OC (O)} -,
o) N ₃ ,
_p) ^{-N (R} 10) ₂ or ^{q) R 11 OC (O)} NR 10, -
Independently selected from;
R ⁸ is
a) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
b) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl, or e) is selected from unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl, substituted with that group in this case,
1) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
2) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl,
3) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl,
4) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
5) CN,
6) selected from unsubstituted or substituted aryl, or 7) unsubstituted or substituted heterocycle;
R ¹⁰ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
selected from f) unsubstituted or substituted aralkyl, or g) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl;
R ¹¹ is
a) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
b) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted heterocycle,
e) selected from unsubstituted or substituted aralkyl, or f) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl;
Y is
a) heterocycle,
_{b) C} 3 ~C ₁₀ cycloalkyl,
_c) C 2 ~C ₈ alkenyl,
_d) C 2 ~C ₈ alkynyl,
_e) C 1 ~C ₆ alkoxy,
f) CN,
g) C (O),
h) C (O) OR ¹⁰ ,
i) ^{-OR 10,}
j) —N (R ¹⁰ ) ₂ or k) C (＝ NH) NHR ¹⁰
Selected from;
m is 0-4;
n is 0-4;
p is 1-4;
s is 0 to 4)
Or a pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer thereof. Formula A below:

(Where
M is C or N;
R ¹ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl,
f) unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl,
g) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
h) halo,
i) OR ¹⁰ ,
j) R ¹¹ S (O) _m ,
^{k) R 10 C (O)} NR 10 -,
1) —C (O) N (R ¹⁰ ) ₂ ,
m) CN,
n) NO ₂ ,
^{o) R 10 C (O)} -,
^{p) R 10 OC (O)} -,
q) N ₃ ,
r) —N (R ¹⁰ ) ₂ or s) R ¹¹ OC (O) NR ¹⁰ −
Independently selected from;
R ^1a is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
independently selected from d) unsubstituted or substituted aryl, or e) unsubstituted or substituted heterocycle;
R ^1b is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
f) unsubstituted or substituted aralkyl or _g), - _(CH 2) independently selected from _n heterocycle,
R ^2a and R ^2b are
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) oxo,
e) an unsubstituted or substituted heterocycle, or f) an unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy, wherein the substituted group is
1) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
2) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
3) halo,
4) unsubstituted or substituted aryl,
5) unsubstituted or substituted heterocycles,
6) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl,
7) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl,
8) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl,
9) ^{-OR 10,
_{10) R 11 S (O)}} m -,
^{11) R 10 C (O)} NR 10 -,
^{12) -C (O) N (} R 10) 2,
13) CN,
14) NO ₂ ,
_{^{15) -N (R 10) 2}} ,
^{16) R 10 C (O)} -,
^{17) R 10 OC (O)} -,
18) _{N 3} or ^{19) R 11 OC (O)} NR 10, -
Substituted with one to three substituents selected from:
R ^2a and R ^2b may be optionally connected in a ring;
R ³ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl,
d) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl,
e) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
f) halo,
g) ^{-OR 10,
_{h) R 11 S (O)}} m -,
^{i) R 10 C (O)} NR 10 -,
^{j) -C (O) NR 10} ,
k) CN,
l) NO ₂ ,
^{m) R 10 C (O)} -,
^{n) R 10 OC (O)} -,
o) N ₃ ,
_p) ^{-N (R} 10) ₂ or ^{q) R 11 OC (O)} NR 10, -
Independently selected from;
R ⁸ is
a) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
b) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl, or e) is selected from unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl, substituted with that group in this case,
1) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
2) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl,
3) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl,
4) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
5) CN,
6) selected from unsubstituted or substituted aryl, or 7) unsubstituted or substituted heterocycle;
R ¹⁰ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
selected from f) unsubstituted or substituted aralkyl, or g) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl;
R ¹¹ is
a) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
b) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted heterocycle,
e) selected from unsubstituted or substituted aralkyl, or f) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl;
Y is
a) heterocycle,
_{b) C} 3 ~C ₁₀ cycloalkyl,
_c) C 2 ~C ₈ alkenyl,
_d) C 2 ~C ₈ alkynyl,
_e) C 1 ~C ₆ alkoxy,
f) CN,
g) C (O),
h) C (O) OR ¹⁰ ,
i) ^{-OR 10,}
j) —N (R ¹⁰ ) ₂ or k) C (＝ NH) NHR ¹⁰
Selected from;
m is 0-4;
n is 0 or 1;
p is 1-4;
s is 0 to 4)
A compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer thereof. Formula A below:

(Where
M is C or N;
R ¹ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
f) halo,
g) OR ¹⁰ ,
^{h) R 10 C (O)} NR 10 -,
^{i) -C (O) N (} R 10) 2,
j) CN,
^{k) R 10 C (O)} -,
^{l) R 10 OC (O)} -,
m) —N (R ¹⁰ ) ₂ or n) R ¹¹ OC (O) NR ¹⁰ −
Independently selected from;
R ^1a is
a) H,
b) independently selected from unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl, or c) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy;
R ^1b is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
f) unsubstituted or substituted aralkyl or _g), - _(CH 2) independently selected from _n heterocycle,
R ^2a and R ^2b are
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) oxo,
e) an unsubstituted or substituted heterocycle, or f) an unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy, wherein the substituted group is
1) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
2) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
3) halo,
4) unsubstituted or substituted aryl,
5) unsubstituted or substituted heterocycles,
6) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl,
7) ^{-OR 10,
8) R 10 C (O)} NR 10 -,
^{9) -C (O) N (} R 10) 2,
10) CN,
11) NO _2, or _{^{12) -N, (R 10)}} 2
Substituted with one to three substituents selected from:
R ^2a and R ^2b may be optionally connected in a ring;
R ³ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) halo,
d) ^{-OR 10,
_{e) R 11 S (O)}} m -,
^{f) R 10 C (O)} NR 10 -,
^{g) -C (O) NR 10} ,
^{h) R 10 C (O)} -,
i) —N (R ¹⁰ ) ₂ or j) R ¹¹ OC (O) NR ¹⁰ −
Independently selected from;
R ⁸ is
a) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
b) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl, or e) is selected from unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl, substituted with that group in this case,
1) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
2) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl,
3) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl,
4) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
5) CN,
6) selected from unsubstituted or substituted aryl, or 7) unsubstituted or substituted heterocycle;
R ¹⁰ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
selected from f) unsubstituted or substituted aralkyl, or g) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl;
R ¹¹ is
a) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
b) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted heterocycle,
e) selected from unsubstituted or substituted aralkyl, or f) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl;
Y is
a) heterocycle,
_{b) C} 3 ~C ₁₀ cycloalkyl,
_c) C 2 ~C ₈ alkenyl,
_d) C 2 ~C ₈ alkynyl,
_e) C 1 ~C ₆ alkoxy,
f) CN,
g) C (O),
h) C (O) OR ¹⁰ ,
i) ^{-OR 10,}
j) —N (R ¹⁰ ) ₂ or k) C (＝ NH) NHR ¹⁰
Selected from;
m is 0-4;
n is 0 or 1;
p is 1-4;
s is 0 to 4)
A compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer thereof. Formula B below:

(Where
R ¹ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl;
f) halo,
g) OR ¹⁰ ,
^{h) R 10 C (O)} NR 10 -,
^{i) -C (O) N (} R 10) 2,
j) CN,
^{k) R 10 C (O)} - or _{^{l) -N (R 10) 2}} ,
Independently selected from;
R ^2a and R ^2b are
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) oxo,
e) an unsubstituted or substituted heterocycle, or f) an unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy, wherein the substituted group is
1) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
2) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
3) halo,
4) unsubstituted or substituted aryl,
5) unsubstituted or substituted heterocycles,
6) unsubstituted or substituted perfluoroalkyl,
7) ^{-OR 10,
8) R 10 C (O)} NR 10 -,
^{9) -C (O) N (} R 10) 2 , or _{^{10,) -N (R 10)}} 2
Substituted with one to three substituents selected from:
R ^2a and R ^2b may be optionally connected in a ring;
R ³ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) halo,
d) ^{-OR 10,
e) R 10 C (O)} NR 10 -,
^{f) -C (O) NR 10} ,
^{g) R 10 C (O)} - or _{^{h) -N (R 10) 2}} ,
Independently selected from;
R ⁸ is
a) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
b) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl, or e) is selected from unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl, substituted with that group in this case,
1) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
2) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkenyl,
3) an unsubstituted or substituted _C 2 -C ₈ alkynyl,
4) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkoxy,
5) CN,
6) selected from unsubstituted or substituted aryl, or 7) unsubstituted or substituted heterocycle;
R ¹⁰ is
a) H,
b) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
c) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
d) unsubstituted or substituted aryl,
e) unsubstituted or substituted heterocycle,
selected from f) unsubstituted or substituted aralkyl, or g) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl;
R ¹¹ is
a) unsubstituted or substituted C ₁ -C ₆ alkyl,
b) unsubstituted or substituted _C 3 _{-C 10} cycloalkyl,
c) unsubstituted or substituted aryl,
d) unsubstituted or substituted heterocycle,
e) selected from unsubstituted or substituted aralkyl, or f) unsubstituted or substituted heterocyclylalkyl;
Y is
a) a heterocycle selected from pyridinyl, furanyl, pyrazolyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, imidazolyl, oxazolyl, thiazolyl, triazolyl, tetrazolyl or thiofuranyl;
_{b) C} 3 ~C ₁₀ cycloalkyl,
_c) C 2 ~C ₈ alkenyl,
_d) C 2 ~C ₈ alkynyl,
_e) C 1 ~C ₆ alkoxy,
f) CN,
g) C (O),
h) C (O) OR ¹⁰ ,
i) ^{-OR 10,}
j) —N (R ¹⁰ ) ₂ or k) C (＝ NH) NHR ¹⁰
Selected from;
m is 0-4;
n is 0 or 1;
p is 1-4;
s is 0 to 4)
A compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer thereof. N-isopropyl-2- (1-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (1-methyl-2-o-tolyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethylacetamide;
N-isopropyl-2- (7-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- [1- (2-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-1-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridin-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
N-benzyl-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-ethyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- [1- (4-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- [1- (3-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N, N-bis (pyridin-3-ylmethyl) acetamide;
2- (1-benzyl-1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- [2- (4-bromophenyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- (1-ethyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1-propyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
2- (1-benzyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-3-yl) -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
1-benzyl-4-{[[(1-benzyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-indol-3-yl) acetyl] (isopropyl) amino] methyl} pyridinium;
N-cyclobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide;
N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide;
2- [2- (2-chloro-phenyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
N, N-diallyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide;
(S) -N-sec-butyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
N-furan-3-ylmethyl-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
N- (2-cyano-ethyl) -N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
N-cyclobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
2- [2- (3-chloro-phenyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
N- (2-cyano-ethyl) -N-cyclopropyl-2- (1-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyrimidin-5-ylmethyl-acetamide;
N-cyclopropyl-N- (2-methyl-2H-pyrazol-3-ylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide;
(+)-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) propanamide;
N- (2-furylmethyl) -N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-5-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isobutyl-N-methyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyrazin-2-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopropyl-N- (3-furylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N- (2-cyanoethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-3-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyrazin-2-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-3-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide;
N- (2-cyanoethyl) -N-cyclopropyl-2- [2- (2-methylphenyl) -1H-indol-3-yl] acetamide;
N-isopentyl-N-methyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N- (2-cyanoethyl) -N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-cyclopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-cyclopropyl-N-[(1-methyl-1H-pyrazol-3-yl) methyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-cyclobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopropyl-N- (2-furylmethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isopropyl-2- [2- (2-methoxyphenyl) -1H-indol-3-yl] -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide;
2- [2- (2-chlorophenyl) -1H-indol-3-yl] -N- (2-cyanoethyl) -N-cyclopropylacetamide;
N- (t-butyl) -N- (2-cyanoethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-3-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopropyl-N-[(2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetyl]-[beta] -alaninate methyl;
N-isopropyl-2- (6-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-2- (4-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-isobutyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopentyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N-[(1R) -1-methylpropyl] -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N, N-bis (2-methoxyethyl) -2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N-isopropyl-2- (5-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide;
N- (2-cyanoethyl) -N-cyclopropyl-2- [2- (2-methoxyphenyl) -1H-indol-3-yl] acetamide;
N-cyclopentyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-2-ylmethyl) acetamide;
N-cyclopentyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-3-ylmethyl) acetamide;
N-isopropyl-N-phenyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetamide;
N- [3- (dimethylamino) propyl] -N'-ethylimidocarbamic acid (2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetyl;
N-cyclopropyl-N-[(2-phenyl-1H-indol-3-yl) acetyl] -β-alanine;
N-isopropyl-2- (2-pyridin-3-yl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide;
N-isopropyl-2- (2-pyridin-4-yl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide;
A compound selected from N-benzyl-N-isopropyl-2- (2-pyridin-4-yl-1H-indol-3-yl) -acetamide or a pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer thereof. The following formula:

The compound according to claim 5, which is N-isopropyl-2- (1-methyl-2-o-tolyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide. Salt or stereoisomer. The following formula:

The compound according to claim 5, which is N-isopropyl-2- (1-methyl-2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide. Salts or stereoisomers of The following formula:

6. The compound according to claim 5, which is 2- [1- (2-bromobenzyl) -1H-indol-3-yl] -N-isopropyl-N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide. Salt or stereoisomer. The following formula:

Or a pharmaceutically acceptable salt or steric acid thereof, wherein the compound is N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-1-yl) -N- (pyridin-4-ylmethyl) acetamide. Isomer. The following formula:

The compound according to claim 5, which is N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-pyrrolo [2,3-b] pyridin-3-yl) -N-pyridin-4-ylmethyl-acetamide. Pharmaceutically acceptable salts or stereoisomers. The following formula:

Or a pharmaceutically acceptable salt or steric acid thereof, wherein the compound is N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -N-pyridin-3-ylmethyl-acetamide. Isomer. The following formula:

Or a pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer thereof, wherein the compound is N, N-diallyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide. The following formula:

Or a pharmaceutically acceptable salt or stereoisomer thereof, wherein the compound is N-furan-3-ylmethyl-N-isopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide. body. The following formula:

Or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is N- (2-cyano-ethyl) -N-cyclopropyl-2- (2-phenyl-1H-indol-3-yl) -acetamide. Or a stereoisomer. A pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier and a therapeutically effective amount of a compound of claim 1 dispersed therein. A pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier and a therapeutically effective amount of a compound of claim 3 dispersed therein. A pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier and a therapeutically effective amount of a compound of claim 5 dispersed therein. A method for inhibiting prenyl-protein transferase, comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound according to claim 1. 5. A method for inhibiting prenyl-protein transferase, comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound according to claim 3. A method for inhibiting prenyl-protein transferase, comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound according to claim 5. A method for treating cancer, comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound of claim 1. A method for treating cancer, comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound of claim 3. A method for treating cancer, comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound according to claim 5. A method for treating a neurofibromin benign proliferative disorder, comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound of claim 1. A method for treating blindness associated with retinal neovascularization, comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound according to claim 1. A method for treating an infection caused by hepatitis delta virus and hepatitis-associated virus, comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound according to claim 1. A method for preventing restenosis, comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound according to claim 1. A method for treating a renal cyst, comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound of claim 1. A method of conferring radiosensitivity on tumor cells by using a therapeutically effective amount of a compound of claim 1 in combination with radiation therapy. A method for treating cancer using a therapeutically effective amount of the compound of claim 1 in combination with an antitumor agent. 23. The method according to claim 22, wherein the antitumor agent is paclitaxel. A pharmaceutical composition produced by using the compound according to claim 1 together with a pharmaceutically acceptable carrier. A method for producing a pharmaceutical composition, comprising using the compound according to claim 1 together with a pharmaceutically acceptable carrier.