【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、チロシナーゼ類の分解促進剤及びそれを含有する皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
白く美しい肌は、女性であれば誰しも願うことであり、この様なニーズを反映して、多くの美白素材の開発が為されてきている。この様な美白素材の多くは、メラニン産生に関わる重要酵素である、チロシナーゼの活性を阻害するものであった。これ以外の美白のメカニズムとしては、メラノサイトのデンドライト伸長抑制効果によるもの、ピンクアイダイリュートジーンの発現を阻害するもの、α−ＭＳＨ（メラノサイト刺激ホルモン）の発現を阻害するものなどを散見するに留まっている。（例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３を参照）いわば、美白素材の多くはチロシナーゼ活性阻害に依存したものであるといえる。しかしながら、メラニンの生成機構は極めて複雑で、且つ、多段階に跨るものであり、その内の１ステップのみにメカニズムを依存することは、対応として不十分と言わざるを得ない部分がある。言い換えれば、チロシナーゼ活性阻害によらないメラニンの産生抑制手段が必要であるといえる。これは、この様な手段が存在すれば、従来の美白剤であるチロシナーゼ活性阻害剤の効果を相乗的に高めることができるからである。
【０００３】
一方、メラニン産生阻害において、メラニン産生の重要中間体であるチロシナーゼ、チロシナーゼ類似タンパク１、チロシナーゼ類似タンパク２等のチロシナーゼ類の分解促進を機序とするものはこれまで全く知られていない。従って、後記一般式（１）に表される化合物及び／又はその塩について、メラニン産生阻害作用を有することは知られているが（特許文献４を参照）、チロシナーゼ類の分解促進作用を有していることは全く知られていない。更に、一般式（１）に表される化合物を含有する、美白効果増強用の皮膚外用剤も、１）美白剤と一般式（１）表される化合物及び／又はその塩とを含有する皮膚外用剤も知られていない。
【０００４】
【化５】
一般式（１）
（但し、式中Ｒは水素原子、炭素数１〜４のアシル基又は糖残基を表し、Ｒ１〜Ｒ１３はそれぞれ独立に水素原子、水酸基、炭素数１〜４のアルキル基を表す。）
【０００５】
【特許文献１】
特開平１１−１０３８６４号公報
【特許文献２】
特開２００３−８１８０７号公報
【特許文献３】
特開２００２−２９９２０号公報
【特許文献４】
特表２００２−５０１９１４号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、この様な状況下為されたものであり、チロシナーゼ活性阻害によらないメラニンの産生抑制手段を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題の解決手段】
本発明者らは、この様な状況に鑑みて、チロシナーゼ活性阻害によらないメラニンの産生抑制手段を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、上記一般式（１）に表される化合物及び／又はその塩にチロシナーゼ、チロシナーゼ類似タンパク１、チロシナーゼ類似タンパク２等のチロシナーゼ類の分解作用を見出した。更に、研究を重ねた結果、これらを皮膚外用剤に含有させることにより、美白効果増強用の皮膚外用剤が得られることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は、以下に示す技術に関するものである。
（１）一般式（１）に表される化合物及び／又はその塩からなるチロシナーゼ類の分解促進剤。
（２）一般式（１）に表される化合物が、次に示す一般式（２）に表されるものであることを特徴とする、（１）に記載のチロシナーゼ類の分解促進剤。
（３）一般式（１）又は（２）に表される化合物が、２’−ヒドロキシ−２，４，４，７，４’−ペンタメチルフラバン（化合物１）又は２’−ヒドロキシ−７，４’−ジエチル−２，４，４−トリメチルフラバン（化合物２）であることを特徴とする、（１）又は（２）に記載のチロシナーゼ類の分解促進剤。
（４）システインプロテアーゼを介することを特徴とする、請求項１〜３何れか１項に記載のチロシナーゼ類の分解促進剤。
（５）（１）〜（４）何れか１項に記載のチロシナーゼ類の分解促進剤を有効成分とする、美白剤の美白効果増強剤。
（６）美白剤が、アスコルビン酸及びその誘導体、コウジ酸、トラネキサム酸、アルブチン並びにそれらの塩から選択される１種乃至は２種以上であることを特徴とする、（５）に記載の美白効果増強剤。
（７）（１）〜（４）何れか１項に記載のチロシナーゼ類の分解促進剤を美白剤の美白効果増強剤として含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
（８）一般式（１）に表される化合物及び／又はその塩を含有することを特徴とする、美白効果増強用の皮膚外用剤。
（９）一般式（１）に表される化合物が、一般式（２）表されるものであることを特徴とする、（８）に記載の美白効果増強用の皮膚外用剤。
（１０）一般式（１）に表される化合物が、２’−ヒドロキシ−２，４，４，７，４’−ペンタメチルフラバン（化合物１）又は２’−ヒドロキシ−７，４’−ジエチル−２，４，４−トリメチルフラバン（化合物２）であることを特徴とする、請求項８又は９に記載の美白効果増強用の皮膚外用剤。
（１１）１）美白剤と２）一般式（１）表される化合物及び／又はその塩とを含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
（１２）一般式（１）に表される化合物が、２’−ヒドロキシ−２，４，４，７，４’−ペンタメチルフラバン（化合物１）又は２’−ヒドロキシ−７，４’−ジエチル−２，４，４−トリメチルフラバン（化合物２）であることを特徴とする、請求項１１に記載の皮膚外用剤。
（１３）美白剤が、アスコルビン酸及びその誘導体、コウジ酸、トラネキサム酸、アルブチン並びにそれらの塩から選択される１種乃至は２種以上であることを特徴とする、（１１）又は（１２）に記載の皮膚外用剤。
（１４）化粧料であることを特徴とする、（７）〜（１３）何れか１項に記載の皮膚外用剤。
（１５）前記一般式（１）に表される化合物及び／又はその塩の、プロテアーゼによりチロシナーゼを分解させる為の皮膚外用剤製造の為の使用。
（１６）前記一般式（１）に表される化合物及び／又はその塩を皮膚外用で投与することを特徴とする、皮膚上に於けるプロテアーゼの活性化方法。
（１７）前記一般式（１）に表される化合物及び／又はその塩を皮膚外用で投与し、皮膚上のプロテアーゼを活性化させることを特徴とする、チロシナーゼの分解方法。
以下、本発明について更に詳細に説明を加える。
【０００８】
【化６】
一般式（２）
（但し、式中Ｒは水素原子、炭素数１〜４のアシル基又は糖残基を表し、Ｒ１〜Ｒ５はそれぞれ独立に水素原子、水酸基又は炭素数１〜４のアルキル基を表す。）
【０００９】
【化７】
化合物１
【００１０】
【化８】
化合物２
【００１１】
【発明の実施の形態】
（１）本発明のチロシナーゼ類の分解促進剤
本発明のチロシナーゼ類の分解促進剤は、上記一般式（１）に表される化合物及び／又はその塩からなる。一般式（１）において、式中Ｒは水素原子、炭素数１〜４のアシル基又は糖残基を表し、Ｒ１〜Ｒ１３はそれぞれ独立に水素原子、水酸基、炭素数１〜４のアルキル基を表す。Ｒにおける、炭素数１〜４のアシル基としては、アセチル基、プロピオノイル基などが好ましく例示でき、アシル基としてはアセチル基が特に好ましい。又、糖残基としては、グルコシル基、ラムノイル基、マルトシル基などが好ましく例示でき、グルコシル基が特に好ましい。Ｒ１〜Ｒ１３に表される基のうち、炭素数１〜４のアルキル基としてはメチル基、エチル基、プロピル基、１−メチルエチル基、ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基などが好ましく例示でき、中でもメチル基とエチル基が特に好ましい。かかる一般式（１）に表される化合物で特に好ましい化合物群は、一般式（２）で表される化合物群である。一般式（２）において、式中Ｒは水素原子、炭素数１〜４のアシル基又は糖残基を表し、Ｒ１〜Ｒ５はそれぞれ独立に水素原子、水酸基又は炭素数１〜４のアルキル基を表す。Ｒの好ましい例、Ｒ１〜Ｒ５の好ましい例は一般式（１）と同じである。又、具体的な好ましい化合物としては、２’−ヒドロキシ−２，４，４，７，４’−ペンタメチルフラバン（化合物１）又は２’−ヒドロキシ−７，４’−ジエチル−２，４，４−トリメチルフラバン（化合物２）が挙げられる。かかる化合物には不斉炭素を有するものがあり、光学異性体が存在する場合があるが、かかる化合物においては、その生理活性は光学異性によらないので、それぞれの光学活性体を使用することもできるし、ラセミ体を使用することもできる。
【００１２】
これらの化合物は、何れも既知の化合物であり、その製造法については既に知られている。例えば、ポリフェノールと対応するアルデヒドとを酸触媒の存在下縮合させる様なものが好ましく例示できる。（特開平０８−１２６６５号）勿論、一般式（１）の化合物の中には植物体中に多量に存在するものもあり、植物抽出物を精製して得ることもできる。かくして得られた一般式（１）に表される化合物は、線維芽細胞の増殖に対する作用やメラニン産生に対する作用など、化粧料などの皮膚外用剤に有用な作用を有する。本発明の乳化組成物に於いては、かかるフラバン誘導体の皮膚内貯留性を著しく改善するため、この様な作用を皮膚外用剤などにおいて、遺憾なく発揮させることができる。かかる一般式（１）に表される化合物は、塩の形でも使用できる。このような塩としては、Ｒで表される基が水素原子の場合に於いて、ナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、バリウム塩或いはマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩、トリエチルアミン塩やトリエタノールアミン塩などの有機アミン塩；リジン塩やアルギニン塩などの塩基性アミノ酸塩を好ましく例示できる。
【００１３】
かかる一般式（１）に表される化合物或いはその塩は、メラニン産生に於ける重要中間体であるチロシナーゼ類を分解する作用に優れる。ここで、チロシナーゼ類とは、チロシナーゼと類似の構造を持つものであって、チロシナーゼ同様にメラニン産生に深く関わっているタンパクを意味し、例えば、チロシナーゼそのもの、チロシナーゼ類似タンパク１（ＴＲＰ１）或いはチロシナーゼ類似タンパク２（ＴＲＰ２）が好ましく例示できる。本発明のチロシナーゼ類の分解促進剤のかかるチロシナーゼ類の分解については、後記実施例に示すごとく、システインプロテアーゼを介したものと推察される。又、本発明のチロシナーゼ類の分解促進剤の特徴としては、チロシナーゼ活性そのものは阻害せずにチロシナーゼ類を分解することにある。即ち、チロシナーゼ阻害を機序とする美白剤とともに用いると、メラニン産生阻害をチロシナーゼの働く部分を阻害するのと、その原料であるチロシナーゼ類の量を減らすのとで、相乗的に美白効果を発揮することができる。又、プロテアーゼを活性化して、タンパク分解にかかる時間は酵素の活性阻害に比べて非常に長いため、美白効果を長時間持続させることもできる。これらの意味において、本発明の皮膚外用剤に於けるかかるチロシナーゼ類の分解促進剤の好ましい含有量は、皮膚外用剤全量に対して、総量で０．０１〜１０重量％であり、更に好ましくは０．１〜５重量％である。これは少なすぎると効果を発揮しない場合があり、多すぎても効果が頭打ちになり、乳化性等の製剤特性に悪影響を及ぼす場合があるからである。
【００１４】
（２）本発明の皮膚外用剤
本発明の皮膚外用剤は、美白効果を増強するためのものであって、前記一般式（１）に表される化合物を含有することを特徴とする。ここで、美白の増強は、美白用の皮膚外用剤を投与する前に予め投与し、美白剤の効果を増強することもできるし、美白剤を含む皮膚外用剤とともに、或いは、美白剤を本発明の皮膚外用剤に含有させて同時に投与し、美白剤の効果を増強することもできるし、美白用の皮膚外用剤を投与した後に、本発明の皮膚外用剤を投与し、美白剤の効果を増強することもできる。特に好ましい形態は、美白剤を本発明の皮膚外用剤に含有させて投与する形態である。この様な形態では、チロシナーゼ類の生体からの除去とチロシナーゼの阻害とを同時に行うために、メラニンの産生を二カ所で阻害することができるからである。更に、本発明の美白作用の増強剤の作用時間が、チロシナーゼ阻害をメカニズムとする美白剤の美白作用の持続時間に比べて著しく長いため、睡眠時等のように、長時間チロシナーゼ阻害をメカニズムとする美白剤が投与できないような条件下で、かかる作用を補完してメラニンの産生を阻害することができる。
【００１５】
本発明の外用剤において、増強することのできる美白剤としては、通常化粧料などの皮膚外用剤において美白剤として使用されているものであれば特段の限定無く使用でき、例えば、アスコルビン酸及びその誘導体、コウジ酸、トラネキサム酸、アルブチン並びにそれらの塩と言った化学物質類、クジンのエキス、ユキノシタのエキス、イブキジャコウソウのエキス、ベニウーロンチャのエキスと言った生薬のエキスなどが好ましく例示できる。ここで、アスコルビン酸の誘導体としては、リン酸エステル、グルコシドやマルトシドなどの配糖体乃至はアシル化配糖体などが例示できる。又、塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、トリエチルアミン塩やトリエタノールアミン塩などの有機アミン塩、アルギニン塩やリジン塩等の塩基性アミノ酸塩などが好ましく例示できる。これらを本発明の皮膚外用剤に含有させる場合には、皮膚外用剤全量に対して、０．０１〜１０重量％が好ましく、更に好ましくは０．０５〜５重量％である。
【００１６】
本発明の美白効果増強用の皮膚外用剤においては、前記の成分以外に、通常化粧料などの皮膚外用剤で使用される任意成分を含有することができる。この様な任意成分としては、例えば、ワセリンやマイクロクリスタリンワックス等のような炭化水素類、ホホバ油やセチルイソオクタネート等のエステル類、オリーブ油等のトリグリセライド類、オクタデシルアルコールやオレイルアルコール等の高級アルコール類、グリセリンや１，３−ブタンジオール、１，２−ペンタンジオール、イソプレングリコール、ジプロピレングリコール等の多価アルコール類、非イオン界面活性剤、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、エタノール、カーボポール等の増粘剤、防腐剤、紫外線吸収剤、抗酸化剤類等が例示できる。本発明の皮膚外用剤は、外用剤で知られている形態であれば、特段の限定無く適用することができ、例えば、医薬部外品を含む化粧料、皮膚外用医薬組成物などが好ましく例示できる。かかる本発明の皮膚外用剤は前記の成分を常法に従って処理することにより製造することができる。
【００１７】
【実施例】
以下に、実施例を挙げて本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明がこれら実施例にのみ限定されないことは言うまでもない。
【００１８】
＜実施例１＞
化合物１について、次に示す検討を通して、チロシナーゼ類の分解促進作用を確かめた。
【００１９】
（チロシナーゼ類に対する直接阻害作用）
以下に示す方法に従って、チロシナーゼ類への直接阻害作用を調べた。チロシナーゼ類としては、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２を用いた。結果は１０ｍＭ以下において何れに対しても阻害作用を示さなかった。
【００２０】
（チロシナーゼ類のｍＲＮＡに対する影響）
以下に示す方法に従って、化合物１の存在下インキューベションし、ノーザン・ブロッティングを行い、チロシナーゼ類のｍＲＮＡの産生量を調べた。結果を図１に示す。１５μＭ、１０μＭ、５μＭの何れに於いても産生量はコントロールと変わらず、ｍＲＮＡに対しては化合物１は影響していないことがわかった。
【００２１】
（チロシナーゼ類の産生量に対する影響）
以下に示す方法に従って、化合物１の存在下インキューベションし、ウエスタン・ブロッティング、イン・ゲル・ＤＯＰＡステインを行い、チロシナーゼ類の産生量を調べた。結果を図２、３に示す。１５μＭ、１０μＭ、５μＭの何れに於いても、チロシナーゼ及びＴＲＰ−１の産生量が低下していることがわかる。
【００２２】
（パルス・チェース法による検討）
３０分パルス・３時間チェースを行い、転写後、翻訳のステップを阻害しているのか、産生したチロシナーゼ類を分解して阻害するのかを調べた。結果を図４に示す。これより、３０分パルスでは化合物１の存在の有無にかかわらず産生量は変わらず、３０分パルス・３時間チェース後では、化合物１存在下のみ、チロシナーゼ類の存在量が低下していることがわかる。これより、本発明のチロシナーゼ類の分解促進剤である一般式（１）に表される化合物の作用が明確になった。
【００２３】
＜実施例２＞
化合物１のチロシナーゼ類の分解促進作用が、どの様なプロテアーゼを介して行われているのかを調べるため、各種のプロテアーゼ阻害剤の存在下で、ウエスタン・ブロッティング、イン・ゲル・ＤＯＰＡステインを行った。方法は実施例１に記述した方法に準じた。結果を表１に示す。この表より、チロシナーゼの分解促進作用はシステインプロテアーゼ阻害剤によって影響されることがわかり、チロシナーゼ類の分解促進作用がシステインプロテアーゼを介したものであることがわかった。
【００２４】
【表１】
【００２５】
＜実施例３＞
以下に示す処方に従って、美白剤であるアスコルビン酸リン酸２マグネシウムを含有する本発明の化粧料を作成した。即ち、イ、ロを７０℃に加温し、攪拌下イに徐々にロを加え乳化し、ホモジナイザーで粒子を均一化し、攪拌冷却し、本発明の皮膚外用剤である化粧料１を得た。このものと、このもののアスコルビン酸リン酸２マグネシウムを水に置換した比較化粧料１、化合物１を水に置換した比較化粧料２も作成し、色黒に悩むパネラー１群２０名、計６０名を用いて、使用テストにより、評価した。使用テストは朝晩１日２回連日３０日使用し、色黒の改善をスコア５：著しい改善、スコア４：明確な改善、スコア３：明らかな改善、スコア２：微弱な改善、スコア１：改善せずの基準で、使用テスト終了後に評価してもらった。結果を表２に示す。これより本発明の皮膚外用剤の美白増強効果が証明された。
イ
「シリコーンＫＳＧ−２１０」 ７ 重量部
架橋型ポリエーテル変性シリコーン １．７５重量部
ジメチコン ５．２５重量部
ジメチコン １０ 重量部
ジイソプロピルアジペート ２ 重量部
化合物１ １．５重量部
ロ
１，３−ブタンジオール ２ 重量部
メチルパラベン ０．２重量部
アスコルビン酸リン酸２マグネシウム １ 重量部
水 ７６．３重量部
【００２６】
【表２】
【００２７】
＜実施例４＞
以下に示す処方に従って、美白剤であるアスコルビン酸リン酸２マグネシウムを含有する本発明の化粧料を作成した。即ち、イ、ロを７０℃に加温し、攪拌下イに徐々にロを加え乳化し、ホモジナイザーで粒子を均一化し、攪拌冷却し、本発明の皮膚外用剤である化粧料２を得た。このものと、このもののアスコルビン酸リン酸２マグネシウムを水に置換した比較化粧料３、化合物２を水に置換した比較化粧料４も作成し、色黒に悩むパネラー１群２０名、計６０名を用いて、使用テストにより、評価した。使用テストは朝晩１日２回連日３０日使用し、色黒の改善をスコア５：著しい改善、スコア４：明確な改善、スコア３：明らかな改善、スコア２：微弱な改善、スコア１：改善せずの基準で、使用テスト終了後に評価してもらった。結果を表３に示す。これより本発明の皮膚外用剤の美白増強効果が証明された。
イ
「シリコーンＫＳＧ−２１０」 ７ 重量部
架橋型ポリエーテル変性シリコーン １．７５重量部
ジメチコン ５．２５重量部
ジメチコン １０ 重量部
ジイソプロピルアジペート ２ 重量部
化合物２ １．５重量部
ロ
１，３−ブタンジオール ２ 重量部
メチルパラベン ０．２重量部
アスコルビン酸リン酸２マグネシウム １ 重量部
水 ７６．３重量部
【００２８】
【表３】
【００２９】
＜実施例５＞
実施例３のアスコルビン酸リン酸２マグネシウムをコウジ酸に置換して同様に検討を行った。コウジ酸に対しても同様の効果が認められた。
イ
「シリコーンＫＳＧ−２１０」 ７ 重量部
架橋型ポリエーテル変性シリコーン １．７５重量部
ジメチコン ５．２５重量部
ジメチコン １０ 重量部
ジイソプロピルアジペート ２ 重量部
化合物１ １．５重量部
ロ
１，３−ブタンジオール ２ 重量部
メチルパラベン ０．２重量部
コウジ酸 １ 重量部
水 ７６．３重量部
【００３０】
【表４】
【００３１】
＜実施例６＞
実施例３のアスコルビン酸リン酸２マグネシウムをトラネキサム酸に置換して同様に検討を行った。トラネキサム酸に対しても同様の効果が認められた。
イ
「シリコーンＫＳＧ−２１０」 ７ 重量部
架橋型ポリエーテル変性シリコーン １．７５重量部
ジメチコン ５．２５重量部
ジメチコン １０ 重量部
ジイソプロピルアジペート ２ 重量部
化合物１ １．５重量部
ロ
１，３−ブタンジオール ２ 重量部
メチルパラベン ０．２重量部
トラネキサム酸 １ 重量部
水 ７６．３重量部
【００３２】
【表５】
【００３３】
＜実施例７＞
実施例３のアスコルビン酸リン酸２マグネシウムをアルブチンに置換して同様に検討を行った。アルブチンに対しても同様の効果が認められた。
イ
「シリコーンＫＳＧ−２１０」 ７ 重量部
架橋型ポリエーテル変性シリコーン １．７５重量部
ジメチコン ５．２５重量部
ジメチコン １０ 重量部
ジイソプロピルアジペート ２ 重量部
化合物１ １．５重量部
ロ
１，３−ブタンジオール ２ 重量部
メチルパラベン ０．２重量部
アルブチン １ 重量部
水 ７６．３重量部
【００３４】
【表６】
【００３５】
＜実施例８＞
上記と同様に、本発明の美白効果増強用の皮膚外用剤を美白剤と分けて、セパレートタイプの２剤併用型での使用形態で試してみた。同様に美白増強効果が確かめられた。
（美白効果増強用の化粧料））
イ
「シリコーンＫＳＧ−２１０」 ７ 重量部
架橋型ポリエーテル変性シリコーン １．７５重量部
ジメチコン ５．２５重量部
ジメチコン １０ 重量部
ジイソプロピルアジペート ２ 重量部
化合物１ １．５重量部
ロ
１，３−ブタンジオール ２ 重量部
メチルパラベン ０．２重量部
水 ７７．３重量部
（美白用の化粧料）
イ
「シリコーンＫＳＧ−２１０」 ７ 重量部
架橋型ポリエーテル変性シリコーン １．７５重量部
ジメチコン ５．２５重量部
ジメチコン １０ 重量部
ジイソプロピルアジペート ２ 重量部
ロ
１，３−ブタンジオール ２ 重量部
メチルパラベン ０．２重量部
アスコルビン酸リン酸２マグネシウム １ 重量部
水 ７７．８重量部
【００３６】
【表７】
【００３７】
【発明の効果】
本発明によれば、チロシナーゼ活性阻害によらないメラニンの産生抑制手段を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１のチロシナーゼ類のｍＲＮＡに対する影響を表す図である。
【図２】実施例１のチロシナーゼ類の産生量に対する影響を表す図である。
【図３】実施例１のチロシナーゼ類の産生量に対する影響を表す図である。
【図４】実施例１のパルス・チェース法による検討結果を表す図である。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a tyrosinase degradation promoter and an external preparation for skin containing the same.
[0002]
[Prior art]
Every woman wants white and beautiful skin, and many whitening materials have been developed to reflect such needs. Many of such whitening materials inhibit the activity of tyrosinase, an important enzyme involved in melanin production. Other mechanisms of whitening include only the mechanism of melanocyte dendrite elongation inhibitory effect, the inhibition of pink eye dilute gene expression, and the inhibition of α-MSH (melanocyte stimulating hormone) expression. ing. (See, for example, Patent Literature 1, Patent Literature 2, and Patent Literature 3) It can be said that, as it were, many whitening materials depend on tyrosinase activity inhibition. However, the mechanism of melanin production is extremely complicated and spans multiple stages, and depending on only one of the steps, the mechanism cannot be said to be insufficient as a response. In other words, it can be said that a means for suppressing the production of melanin without relying on tyrosinase activity inhibition is required. This is because such a means can synergistically enhance the effect of a tyrosinase activity inhibitor, which is a conventional whitening agent.
[0003]
On the other hand, in melanin production inhibition, there is no known mechanism that promotes the decomposition of tyrosinases such as tyrosinase, tyrosinase-like protein 1, and tyrosinase-like protein 2, which are important intermediates for melanin production. Therefore, it is known that the compound represented by the following general formula (1) and / or a salt thereof has a melanin production inhibitory action (see Patent Document 4), but has a tyrosinase decomposition promoting action. Is not known at all. Further, a skin external preparation for enhancing a whitening effect, which contains the compound represented by the general formula (1), also includes 1) skin containing a whitening agent, a compound represented by the general formula (1) and / or a salt thereof. No external preparations are known.
[0004]
Embedded image
General formula (1)
(However, in the formula, R represents a hydrogen atom, an acyl group having 1 to 4 carbon atoms or a sugar residue, and R1 to R13 each independently represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms.)
[0005]
[Patent Document 1]
JP-A-11-103864 [Patent Document 2]
JP 2003-81807 A [Patent Document 3]
Japanese Patent Application Laid-Open No. 2002-29920 [Patent Document 4]
JP 2002-501914 A
[Problems to be solved by the invention]
The present invention has been made under such circumstances, and it is an object of the present invention to provide a means for suppressing the production of melanin without inhibiting tyrosinase activity.
[0007]
[Means for solving the problem]
In view of such circumstances, the present inventors have sought to find a means for suppressing melanin production without inhibiting tyrosinase activity, and as a result of intensive research efforts, as a result, the compounds represented by the above general formula (1) and / or Alternatively, the present inventors have found that salts thereof degrade tyrosinase, tyrosinase-like protein 1, and tyrosinase-like protein 2 and the like. Furthermore, as a result of repeated studies, they have found that a skin external preparation for enhancing the whitening effect can be obtained by including these in a skin external preparation, and have completed the invention. That is, the present invention relates to the following technology.
(1) A tyrosinase-decomposition accelerator comprising the compound represented by the general formula (1) and / or a salt thereof.
(2) The tyrosinase degradation promoter according to (1), wherein the compound represented by the general formula (1) is a compound represented by the following general formula (2).
(3) When the compound represented by the general formula (1) or (2) is 2′-hydroxy-2,4,4,7,4′-pentamethylflavan (compound 1) or 2′-hydroxy-7, The tyrosinase degradation promoter according to (1) or (2), which is 4'-diethyl-2,4,4-trimethylflavan (compound 2).
(4) The tyrosinase degradation promoter according to any one of claims 1 to 3, which is mediated by a cysteine protease.
(5) A whitening effect enhancer for a whitening agent, comprising the tyrosinase degradation promoter according to any one of (1) to (4) as an active ingredient.
(6) The whitening agent according to (5), wherein the whitening agent is at least one selected from ascorbic acid and derivatives thereof, kojic acid, tranexamic acid, arbutin, and salts thereof. Effect enhancer.
(7) An external preparation for skin, comprising the tyrosinase degradation promoter according to any one of (1) to (4) as a whitening effect enhancer for a whitening agent.
(8) A skin external preparation for enhancing a whitening effect, comprising the compound represented by the general formula (1) and / or a salt thereof.
(9) The skin external preparation for enhancing a whitening effect according to (8), wherein the compound represented by the general formula (1) is a compound represented by the general formula (2).
(10) When the compound represented by the general formula (1) is 2′-hydroxy-2,4,4,7,4′-pentamethylflavan (compound 1) or 2′-hydroxy-7,4′-diethyl The skin whitening agent for enhancing a whitening effect according to claim 8 or 9, which is -2,4,4-trimethylflavan (compound 2).
(11) A skin external preparation comprising 1) a whitening agent and 2) a compound represented by the general formula (1) and / or a salt thereof.
(12) The compound represented by the general formula (1) is 2′-hydroxy-2,4,4,7,4′-pentamethylflavan (compound 1) or 2′-hydroxy-7,4′-diethyl The external preparation for skin according to claim 11, which is -2,4,4-trimethylflavan (compound 2).
(13) The whitening agent is one or more selected from ascorbic acid and derivatives thereof, kojic acid, tranexamic acid, arbutin and salts thereof, (11) or (12). 2. The external preparation for skin according to item 1.
(14) The skin external preparation according to any one of (7) to (13), which is a cosmetic.
(15) Use of the compound represented by the general formula (1) and / or a salt thereof for producing an external preparation for skin for decomposing tyrosinase with a protease.
(16) A method for activating a protease on skin, which comprises administering the compound represented by the general formula (1) and / or a salt thereof for external use on the skin.
(17) A method for degrading tyrosinase, comprising administering the compound represented by the general formula (1) and / or a salt thereof for external use on the skin to activate a protease on the skin.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
[0008]
Embedded image
General formula (2)
(Wherein, R represents a hydrogen atom, an acyl group having 1 to 4 carbon atoms or a sugar residue, and R1 to R5 each independently represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms.)
[0009]
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Compound 1
[0010]
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Compound 2
[0011]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
(1) Tyrosinase Degradation Promoter of the Present Invention The tyrosinase degradation promoter of the present invention comprises the compound represented by the above general formula (1) and / or a salt thereof. In the general formula (1), R represents a hydrogen atom, an acyl group having 1 to 4 carbon atoms or a sugar residue, and R1 to R13 each independently represent a hydrogen atom, a hydroxyl group, or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms. Represent. As an acyl group having 1 to 4 carbon atoms in R, an acetyl group, a propionoyl group and the like can be preferably exemplified, and an acetyl group is particularly preferable as the acyl group. Further, as the sugar residue, a glucosyl group, a rhamnoyl group, a maltosyl group and the like can be preferably exemplified, and a glucosyl group is particularly preferred. Among the groups represented by R1 to R13, examples of the alkyl group having 1 to 4 carbon atoms include a methyl group, an ethyl group, a propyl group, a 1-methylethyl group, a butyl group, a 1-methylpropyl group, and a 2-methylpropyl group. , 1,1-dimethylethyl group and the like, and a methyl group and an ethyl group are particularly preferable. A particularly preferred group of compounds represented by the general formula (1) is a group of compounds represented by the general formula (2). In the general formula (2), R represents a hydrogen atom, an acyl group having 1 to 4 carbon atoms or a sugar residue, and R1 to R5 each independently represent a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms. Represent. Preferred examples of R and preferred examples of R1 to R5 are the same as those in formula (1). Specific preferred compounds include 2'-hydroxy-2,4,4,7,4'-pentamethylflavan (compound 1) and 2'-hydroxy-7,4'-diethyl-2,4,4. 4-trimethylflavan (compound 2). Some of these compounds have an asymmetric carbon, and optical isomers may be present.In such a compound, the physiological activity is not dependent on optical isomerism. Yes, and racemic forms can be used.
[0012]
These compounds are all known compounds, and their production methods are already known. For example, a preferable example is one in which polyphenol and the corresponding aldehyde are condensed in the presence of an acid catalyst. (Japanese Unexamined Patent Publication (Kokai) No. 08-12665) Of course, some of the compounds of the general formula (1) are present in a large amount in a plant, and can be obtained by purifying a plant extract. The compound represented by the general formula (1) thus obtained has a useful effect on an external preparation for skin such as cosmetics, such as an effect on proliferation of fibroblasts and an effect on melanin production. In the emulsified composition of the present invention, since such a flavan derivative is remarkably improved in the ability to be retained in the skin, such an effect can be satisfactorily exhibited in an external preparation for skin and the like. The compound represented by the general formula (1) can be used in the form of a salt. Examples of such a salt include, when the group represented by R is a hydrogen atom, an alkali metal salt such as a sodium salt or a potassium salt; an alkaline earth metal salt such as a calcium salt, a barium salt or a magnesium salt; Preferred examples include salts, organic amine salts such as triethylamine salt and triethanolamine salt; and basic amino acid salts such as lysine salt and arginine salt.
[0013]
The compound represented by the general formula (1) or a salt thereof is excellent in the action of decomposing tyrosinase which is an important intermediate in melanin production. Here, the tyrosinase has a structure similar to that of tyrosinase and means a protein which is deeply involved in melanin production like tyrosinase. For example, tyrosinase itself, tyrosinase-like protein 1 (TRP1) or tyrosinase-like A preferred example is protein 2 (TRP2). It is presumed that the degradation of the tyrosinase by the tyrosinase degradation promoter of the present invention is mediated by cysteine protease, as described in Examples below. The tyrosinase degradation promoter of the present invention is characterized in that it degrades tyrosinase without inhibiting tyrosinase activity itself. That is, when used together with a whitening agent having tyrosinase inhibition as a mechanism, the inhibition of melanin production inhibits the portion where tyrosinase works, and the amount of tyrosinase, which is a raw material thereof, is reduced. can do. In addition, since the time required for activating the protease and decomposing the protein is much longer than the inhibition of the activity of the enzyme, the whitening effect can be maintained for a long time. In this sense, the preferable content of the tyrosinase-degrading agent in the skin external preparation of the present invention is 0.01 to 10% by weight in total with respect to the total amount of the skin external preparation, more preferably 0.1 to 5% by weight. This is because if the amount is too small, the effect may not be exhibited, and if the amount is too large, the effect may reach a plateau and adversely affect formulation properties such as emulsifiability.
[0014]
(2) External preparation for skin of the present invention The external preparation for skin of the present invention is for enhancing the whitening effect, and is characterized by containing the compound represented by the general formula (1). Here, the skin whitening can be enhanced by administering the skin whitening agent in advance before administering the skin whitening agent to enhance the effect of the skin whitening agent. It can be added to the skin external preparation of the present invention and administered simultaneously to enhance the effect of the whitening agent, or after administering the skin external preparation for whitening, administer the skin external preparation of the present invention to obtain the effect of the whitening agent. Can also be increased. A particularly preferred form is a form in which a whitening agent is contained in the external preparation for skin of the present invention and administered. This is because, in such a form, production of melanin can be inhibited in two places because tyrosinase is simultaneously removed from the living body and tyrosinase is inhibited. Furthermore, since the action time of the whitening action enhancer of the present invention is significantly longer than the duration of the whitening action of a whitening agent having tyrosinase inhibition as a mechanism, such as during sleep, a long-term tyrosinase inhibition as a mechanism. Under such conditions that no whitening agent can be administered, such action can be complemented to inhibit melanin production.
[0015]
In the external preparation of the present invention, the whitening agent that can be enhanced can be used without any particular limitation as long as it is usually used as a whitening agent in skin external preparations such as cosmetics, for example, ascorbic acid and its Chemical substances such as derivatives, kojic acid, tranexamic acid, arbutin and salts thereof, extracts of crude drugs, extracts of saxifrage, extracts of Saxifrage, extracts of crude drugs such as extracts of Beniourencha, and the like can be preferably exemplified. Here, as the derivative of ascorbic acid, a glycoside such as a phosphate ester, glucoside or maltoside or an acylated glycoside can be exemplified. Salts include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt; alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt; ammonium salts; organic amine salts such as triethylamine salt and triethanolamine salt; arginine salts and lysine. Preferred examples include basic amino acid salts such as salts. When these are contained in the external preparation for skin of the present invention, the content is preferably 0.01 to 10% by weight, more preferably 0.05 to 5% by weight, based on the total amount of the external preparation for skin.
[0016]
The skin external preparation for enhancing the whitening effect of the present invention may contain, in addition to the above-mentioned components, optional components usually used in skin external preparations such as cosmetics. Such optional components include, for example, hydrocarbons such as petrolatum and microcrystalline wax, esters such as jojoba oil and cetyl isooctanoate, triglycerides such as olive oil, and higher alcohols such as octadecyl alcohol and oleyl alcohol. , Polyhydric alcohols such as glycerin, 1,3-butanediol, 1,2-pentanediol, isoprene glycol, dipropylene glycol, nonionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, amphoteric surfactants Agents, thickeners such as ethanol and carbopol, preservatives, ultraviolet absorbers, antioxidants and the like. The external preparation for skin of the present invention can be applied without any particular limitation as long as it is in a form known as an external preparation, and examples thereof include cosmetics including quasi-drugs, and pharmaceutical compositions for external use on the skin. it can. Such an external preparation for skin of the present invention can be produced by treating the above components according to a conventional method.
[0017]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, but it goes without saying that the present invention is not limited to these Examples.
[0018]
<Example 1>
Compound 1 was tested for its ability to promote the degradation of tyrosinase through the following studies.
[0019]
(Direct inhibition of tyrosinase)
According to the method shown below, the direct inhibitory effect on tyrosinase was examined. Tyrosinase, TRP-1, and TRP-2 were used as tyrosinases. The results showed no inhibitory effect on any of them at 10 mM or less.
[0020]
(Effect of tyrosinases on mRNA)
Incubation was carried out in the presence of Compound 1 according to the method described below, and Northern blotting was performed to examine the amount of tyrosinase mRNA production. The results are shown in FIG. At any of 15 μM, 10 μM, and 5 μM, the amount of production was not different from that of the control, and it was found that Compound 1 had no effect on mRNA.
[0021]
(Effect on tyrosinase production)
Incubation was carried out in the presence of Compound 1 according to the method described below, and Western blotting and in-gel / DOPA stain were performed to examine the amount of tyrosinase produced. The results are shown in FIGS. It can be seen that the production amounts of tyrosinase and TRP-1 decreased at any of 15 μM, 10 μM, and 5 μM.
[0022]
(Examination by pulse-chase method)
A 30-minute pulse and a 3-hour chase were performed, and after transcription, it was examined whether the translation step was inhibited or the produced tyrosinase was degraded and inhibited. FIG. 4 shows the results. From this, it can be seen that the amount of production does not change with the 30-minute pulse irrespective of the presence or absence of compound 1, and that the amount of tyrosinase decreases only in the presence of compound 1 after the 30-minute pulse and 3 hours chase. Understand. This has clarified the action of the compound represented by the general formula (1), which is a tyrosinase-decomposition accelerator of the present invention.
[0023]
<Example 2>
Western blotting and in-gel / DOPA stain were performed in the presence of various protease inhibitors in order to examine what kind of protease is involved in promoting the degradation of compound 1 by tyrosinase. . The method followed the method described in Example 1. Table 1 shows the results. From this table, it was found that the tyrosinase degradation promoting effect was affected by the cysteine protease inhibitor, and that the tyrosinase degradation promoting activity was mediated by cysteine protease.
[0024]
[Table 1]
[0025]
<Example 3>
According to the following formulation, a cosmetic of the present invention containing whitening agent, dimagnesium ascorbate, was prepared. That is, (a) and (b) were heated to 70 ° C., and (b) was gradually added to and emulsified under stirring to homogenize the particles with a homogenizer, followed by stirring and cooling to obtain Cosmetic 1, a skin external preparation of the present invention. . This and a comparative cosmetic 1 in which dimagnesium ascorbate phosphate was replaced with water and a comparative cosmetic 2 in which compound 1 was replaced with water were also prepared. Was evaluated by a use test. The use test was performed twice a day in the morning and evening twice a day for 30 days, and the improvement in color and black was scored 5: marked improvement, score 4: clear improvement, score 3: clear improvement, score 2: slight improvement, score 1: improved After the end of the use test, they were evaluated based on the criteria without using. Table 2 shows the results. This proved the whitening enhancing effect of the external preparation for skin of the present invention.
A "Silicone KSG-210" 7 parts by weight Crosslinked polyether-modified silicone 1.75 parts by weight dimethicone 5.25 parts by weight dimethicone 10 parts by weight diisopropyladipate 2 parts by weight Compound 1 1.5 parts by weight 1,3-butanediol 2 parts by weight methyl paraben 0.2 parts by weight 2 magnesium magnesium ascorbate 1 part by weight 76.3 parts by weight of water
[Table 2]
[0027]
<Example 4>
According to the following formulation, a cosmetic of the present invention containing whitening agent, dimagnesium ascorbate, was prepared. That is, (a) and (b) were heated to 70 ° C., and (b) was gradually added to and emulsified under stirring to homogenize the particles with a homogenizer, followed by stirring and cooling to obtain Cosmetic 2, a skin external preparation of the present invention. . This and a comparative cosmetic 3 in which dimagnesium ascorbate was replaced with water and a comparative cosmetic 4 in which compound 2 was replaced with water were also prepared. Was evaluated by a use test. The use test was performed twice a day in the morning and evening twice a day for 30 days, and the improvement in color and black was scored 5: marked improvement, score 4: clear improvement, score 3: clear improvement, score 2: slight improvement, score 1: improved After the end of the use test, they were evaluated based on the criteria without using. Table 3 shows the results. This proved the whitening enhancing effect of the external preparation for skin of the present invention.
A "Silicone KSG-210" 7 parts by weight Crosslinked polyether-modified silicone 1.75 parts by weight dimethicone 5.25 parts by weight dimethicone 10 parts by weight diisopropyl adipate 2 parts by weight Compound 2 1.5 parts by weight 1,3-butanediol 2 parts by weight methyl paraben 0.2 parts by weight dimagnesium phosphate ascorbate 1 part by weight 76.3 parts by weight of water
[Table 3]
[0029]
<Example 5>
The same examination was performed by replacing dimagnesium ascorbate phosphate of Example 3 with kojic acid. A similar effect was observed for kojic acid.
A "Silicone KSG-210" 7 parts by weight Crosslinked polyether-modified silicone 1.75 parts by weight dimethicone 5.25 parts by weight dimethicone 10 parts by weight diisopropyladipate 2 parts by weight Compound 1 1.5 parts by weight 1,3-butanediol 2 parts by weight methyl paraben 0.2 parts by weight kojic acid 1 part by weight 76.3 parts by weight of water
[Table 4]
[0031]
<Example 6>
The same examination was performed by substituting tranexamic acid for dimagnesium ascorbate phosphate of Example 3. Similar effects were observed for tranexamic acid.
A "Silicone KSG-210" 7 parts by weight Crosslinked polyether-modified silicone 1.75 parts by weight dimethicone 5.25 parts by weight dimethicone 10 parts by weight diisopropyladipate 2 parts by weight Compound 1 1.5 parts by weight 1,3-butanediol 2 parts by weight methyl paraben 0.2 parts by weight tranexamic acid 1 part by weight water 76.3 parts by weight
[Table 5]
[0033]
<Example 7>
The same examination was conducted by substituting dimagnesium ascorbate phosphate of Example 3 with arbutin. A similar effect was observed for arbutin.
A "Silicone KSG-210" 7 parts by weight Crosslinked polyether-modified silicone 1.75 parts by weight dimethicone 5.25 parts by weight dimethicone 10 parts by weight diisopropyladipate 2 parts by weight Compound 1 1.5 parts by weight 1,3-butanediol 2 parts by weight methyl paraben 0.2 parts by weight arbutin 1 part by weight water 76.3 parts by weight
[Table 6]
[0035]
Example 8
In the same manner as described above, the skin external preparation for enhancing the whitening effect of the present invention was separated from the whitening agent and used in a two-part separate type. Similarly, the whitening enhancing effect was confirmed.
(Cosmetics for enhancing whitening effect))
A "Silicone KSG-210" 7 parts by weight Crosslinked polyether-modified silicone 1.75 parts by weight dimethicone 5.25 parts by weight dimethicone 10 parts by weight diisopropyladipate 2 parts by weight Compound 1 1.5 parts by weight 1,3-butanediol 2 parts by weight methyl paraben 0.2 parts by weight water 77.3 parts by weight (cosmetic for whitening)
A "Silicone KSG-210" 7 parts by weight Cross-linked polyether-modified silicone 1.75 parts by weight dimethicone 5.25 parts by weight dimethicone 10 parts by weight diisopropyl adipate 2 parts by weight ro 1,3-butanediol 2 parts by weight methylparaben 0.2 Parts by weight dimagnesium ascorbate 1 part by weight water 77.8 parts by weight
[Table 7]
[0037]
【The invention's effect】
According to the present invention, it is possible to provide a means for suppressing melanin production without inhibiting tyrosinase activity.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a diagram showing the effect of tyrosinases of Example 1 on mRNA.
FIG. 2 is a graph showing the influence on the production amount of tyrosinase in Example 1.
FIG. 3 is a graph showing the effect of Example 1 on the production amount of tyrosinases.
FIG. 4 is a diagram illustrating a result of a study by a pulse chase method according to the first embodiment.
