JP2004300056A - Compound having insecticidal activity and nematicidal activity - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new physiologically active substance having an insecticidal activity and a nematicidal activity. <P>SOLUTION: This substance is a compound represented by the formula or its pharmaceutically acceptable salt. The substance has the insecticidal and nematicidal activities, and is useful as an insecticide and a nematicide. <P>COPYRIGHT: (C)2005,JPO&NCIPI

Description

で表される構造を有する化合物またはその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明の殺虫活性または線殺虫活性を有する化合物は、上記式（Ｉ）で表される構造を有する。また、これらの薬学的に許容しうる塩としては、本発明の目的を達成するものであれば、特に定めるものではない。例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、マグネシウム塩等の塩があげられる。
【０００９】
式（Ｉ）で表される化合物の製造方法は、特に定めるものではない。例えば、微生物を利用して製造してもよいし、合成手段を駆使して化学物質を人為的に反応させることによって製造してもよい。いかなる手段により製造されたものであっても、上記式（Ｉ）で表される構造を有する化合物とその薬学的に許容しうる塩は、本発明の範囲に包含される。
【００１０】
上記式（Ｉ）で表される化合物を製造する場合に、微生物を利用することができる。例えば、ピーシロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）の菌株を用いることができる。具体的には、本発明者らによって分離されたピーシロマイセス・エスピーＢＡＵＡ−３０５８株（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． ＢＡＵＡ−３０５８）（寄託番号：ＦＥＲＭＰ−１９１１６）（以下、３０５８株という）を挙げることができる。
【００１１】
尚、上記３０５８株は、形態学的特徴が、Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ： Ｔｒａｎｓ． Ｂｒｉｔ． Ｍｙｃｏｌ． Ｓｏｃ．， ４０， １７（１９５７）、Ｏｎｉｏｎｓ ａｎｄ Ｂａｒｒｏｎ： Ｍｙｃｏｌ． Ｐａｐ． ＣＭＩ， １０７（１９６７）に記載されたピーシロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）の種分類に関する特徴と一致することから、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ属に属する菌株であると認められた。すなわち、３０５８株は、ポテトデキストロース寒天培地で良好に生育した（２５℃、７日間、コロニー直径４０ｍｍ）。また、３０５８株のフィアライドは先が細く、分生子柄の分岐も密でない。分生子柄は、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ状に分岐するものから、全く分岐しない直鎖（ｍｏｎｏｐｈｉａｌｉｄｉｃ）のものまでを含み、互いに狭い角度で輪生体を形成し、緑色の大きなボール状無性胞子塊を形成する。表面は滑面である。
【００１２】
さらに、３０５８株のほか、その自然変異株あるいは人為的変異株であって、式（Ｉ）で表される化合物を生産する菌株を利用することができる。人的変異手段としては、例えば、通常行われている紫外線照射や変異誘発剤（例えば、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン及び２−アミノプリン剤）を用いる方法、さらには、遺伝子組替えも利用することができる。
【００１３】
ピーシロマイセス・エスピーＢＡＵＡ−３０５８株（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． ＢＡＵＡ−３０５８）の菌学的性状は以下の通りである。
（形態）
３０５８株の分生子柄は、無色であり、直鎖または分岐し、隔膜を有する。そのフィアライドは、付け根部分が太く先端にいくに従って細くなり、先端部に分生子がフィアロ型で生じて連鎖状に着生する。分生子は密集すると暗緑色を呈し、薄い部分では灰色を呈したように見える。分生子は滑面の球形から亜球形で、その大きさは３〜４μｍである。
【００１４】
（各種培地上での性状）
以下に述べる各種培地を用いた場合の３０５８株の生育状況を検討した。尚、培養は、２５℃、７日間行った。
【００１５】
ポテトデキストロース寒天培地では、３０５８株の生育は良好であった。形成されたコロニーは、直径４０ｍｍ前後であった。コロニー表面は、ビロード状に気生菌糸が増殖し白色あるいは僅かに灰色がかった色を呈した。また、コロニーの裏面は肌色を呈した。分生子（無性胞子）は、気生菌糸先端部に僅かに形成された。
【００１６】
麦芽寒天培地では、３０５８株の生育は良好であった。形成されたコロニーは、直径２２ｍｍ前後であった。コロニー表面はビロード状で気生菌糸が増殖し白色を呈した。裏面は僅かに肌色をし、分生子は形成されなかった。
【００１７】
ツアペックドックス寒天培地では、３０５８株の生育は良好であった。コロニーは、直径２０ｍｍ前後であり、やや盛り上がったようなダマ状を示した。コロニーの表面は、ビロード状で白色を呈し、その裏面は赤茶色を呈した。分生子は、形成されなかった。
【００１８】
コーンミール寒天培地では、３０５８株の生育は、僅かに気生菌糸が見られ、基底菌糸が伸長したのが認められた。コロニーは、直径約３８ｍｍ前後に達したが、菌糸量は極めて少なかった。分生子は、気生菌糸先端部に形成されたが少なかった。
【００１９】
（生理学的性質）
３０５８株は、ポテトデキストロース液体培地で培養した場合、生育可能温度は、２０〜３０℃であり、最適生育温度は、２０〜２５℃であった。また、３０℃のときに最も分生子の形成が旺盛であり、このときのコロニー表面は暗緑色を呈した。
【００２０】
３０５８株を培養して上記式（Ｉ）で表される化合物を取得する場合、培養培地は、特に定めるものではなく、炭素源、窒素源、さらに必要に応じて無機塩などを程良く含有する培地を広く採用することができる。例えば、合成培地、半合成培地あるいは天然培地を採用することができる。また、炭素源としては、グルコース、フラクトース、グリセリン、シュクロース、デキストリン、ガラクトース、マルトース、マンニトール、キシロース、リボース、澱粉、糖蜜、有機酸等、またはその加水分解との炭水化物等を用いることができる。窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム尿素、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、ペプトン、肉エキス、ポテトエキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スティープ・リカー、大豆粉、綿実油カス、カザミノ酸、パクトソイトル、ソリュブルベジタブルプロテイン、オ−トミ−ル等を用いることができる。その他必要に応じて食塩、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩化マンガン、燐酸塩等の無機塩類を加えることができる。また、必要に応じて、有機酸、アミノ酸類、ビタミン類、核酸類や無機物を添加することができる。更に、発泡等を防ぐために消泡剤やシリコン、植物油等も添加することができる。
【００２１】
３０５８株の培養法としては、好気的条件での培養法、特に固体静置培養、液体静置培養、液体振盪培養等が好ましい。培養温度は、好ましくは２０〜３５℃、より好ましくは２０〜２５℃である。培養時間は、１〜１４日間程度であり、特に、４日間程度で、培養を止めることが好ましい。ここで、式（Ｉ）で表される化合物は、培養液中に生産蓄積される。培養液中の生産量が最大に達したときに培養を停止し、培養液中より式（Ｉ）で表される化合物を単離・精製することができる。前記の培地組成、培地の液性、培養温度、撹拌速度及び通気量等の培養条件は外部条件等に応じて、好ましい結果が得られるように適宜調節あるいは選抜する。また、他の微生物を利用して式（Ｉ）で表される化合物を生産させる場合は、当該微生物の性質等に応じて培養条件を適宜変更すべきことは、言うまでもない。
【００２２】
培養液中からの式（Ｉ）で表される化合物を単離・精製する場合、一般的な微生物代謝産物をその培養液中から単離・精製する分離精製の方法を用いることができる。例えば、抽出ろ過、遠心分離、透析、濃縮、乾燥、凍結、吸着、脱着、各種溶媒に対する溶解度の差を利用する沈澱、結晶化、再結晶、転溶、向流分配法、クロマトグラフィー等の手段が挙げられる。さらに、これらの方法は、単独あるいは組み合わせて、または反復して用いることができる。
【００２３】
例えば、３０５８株培養物中から式（Ｉ）で表される化合物を採取するには、以下の方法が採用できる。すなわち、培養物にアセトンまたは酢酸エチルを加えよく撹拌した後、ろ過して減圧濃縮する。そして、酢酸エチル、ブタノール等の水と混じらない溶媒で抽出した後、減圧濃縮して本物質を含む粗抽出物を得ることができる。用途によっては、前記方法で得られた粗抽出物をそのまま、用いることもできる。また、粗抽出物をさらに精製に通常用いられる公知の方法、例えば、シリカゲル、アルミナ、多孔性合成高分子、イオン交換樹脂等の担体を用いたカラムクロマトグラフィーあるいはＯＤＳ担体を用いた逆相クロマトグラフィーにより精製することができる。
【００２４】
式（Ｉ）で表される化合物は、当該化合物を有効成分として含む農薬用および医薬用組成物として利用することができる。
【００２５】
さらに、式（Ｉ）で表される化合物は、殺虫剤や殺線虫薬として利用することができる。対象とする虫類や線虫類は、式（Ｉ）で表される化合物の効果が及ぶ限り、特に限るものではない。例えば、動物寄生性線虫であるラブディティス シューロエロンガタ（Ｒａｈａｂｄｉｔｉｓ ｐｓｅｕｄｏｅｌｏｎｇａｔａ）の生育の抑制、衛生害虫であるアカイエカの幼虫（Ｃｕｌｅｘ ｐｉｐｉｅｎｓ ｐａｌｌｅｎｓ）の生育の抑制、農業害虫であるコナガ幼虫（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）の生育の抑制、などに採用することができる。
【００２６】
本発明の化合物は、ヒト、豚、羊、馬および牛の様な哺乳類の線虫の寄生や感染の予防または治療に用いることができる。投与の方法は特に定めるものではなく、経口または非経口のいずれの経路も採用できる。また、動物の飼料と共に投与することができ、濃縮した飼料添加物または予備配合飼料を、通常の動物の飼料に配合するために調製することができる。
【００２７】
本発明の化合物を農薬および医薬組成物として用いる場合、常法に従って薬理学的に許容される塩、賦形剤、希釈剤と混合し、錠剤、顆粒剤、粉剤、カプセル剤、シロップ剤、軟膏剤、クリーム剤、注射剤等にすることができる。農薬および医薬を調製するときは、本発明化合物もしくはその塩を有効成分として使用してもよいし、本発明以外の有効成分と併用することもできる。
【００２８】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。以下の具体例に示す材料、使用量、割合、操作等は、本発明の趣旨から逸脱しない限り適宜変更することができる。したがって、本発明の範囲は以下に示す具体例に制限されるものではない。特に実施例の製造手段は勿論、本明細書によって明らかにされた本発明の化合物の性状に基づいて、公知の手段を用いて生産、濃縮、抽出、精製した本発明の化合物、及び該化合物を含む殺虫・殺線虫剤はすべて本発明に包含される。
【００２９】
直径２４ｍｍの試験管に、可溶性澱粉２．０％、大豆粉１．５％、グルコース１．２％、麦芽エキス０．５％、硫酸マグネシウム七水和物０．０５％、Ｖ８ジュース１００ｍｌ／Ｌ、ポテト抽出液１００ｍｌ／Ｌ、を含む液体培地を１０ｍｌ分注し、１２１℃、２０分間蒸気滅菌した。これにポテトデキストロ−ス寒天培地に育成させたＰａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ＢＡＵＡ−３０５８菌体を接種し、２５℃、７２時間、２００ｒｐｍで往復振盪培養し、種菌培養液を得た。
さらに、１００ｍｌ容の三角フラスコ１６０本に、それぞれ、グルコース５．０％、大豆粉０．５％、コーンスティープリカー０．５％、酵母エキス０．３％、尿素０．０８％、硫酸鉄七水和物０．００１％、硫酸銅五水和物０．００１％、硫酸亜鉛七水和物０．００１％、塩化マンガン四水和物０．００１％、塩化コバルト０．００１％、を含む液体培地を各１０ｍｌずつ分注し、１２１℃、２０分間蒸気滅菌した。これに上記種菌培養液を各０．５ｍｌずつ接種し、２５℃、９６時間、２１０ｒｐｍで回転振盪培養し、培養液１．６Ｌを得た。
【００３０】
上記培養液に酢酸エチル１．６Ｌを加え、一晩振盪撹拌した後、酢酸エチル層を回収した。酢酸エチル抽出液を減圧濃縮して酢酸エチルを留去した結果、本願発明の粗抽出物３．２７ｇを得た。
【００３１】
上記粗抽出物をシリカゲルクロマトグラフィー（Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００，２５ｍｍ×４００ｍｍ）を用い、１Ｌの酢酸エチル−ヘキサン混合液（７０：３０）で活性物質を溶出させた。その溶出物を減圧濃縮乾固したところ、得られた粗精製物は、４４４．９ｍｇであった。
【００３２】
さらに、上記粗精製物１００ｍｇを、逆相系のＯＤＳ（Ｃａｐｃｅｌｌ Ｐａｋ Ｃ１８ ＵＧ―１２０ ５μｍ、１０×２５０ｍｍ）を担体とした高速液体クロマトグラフィーを用い、アセトニトリル−蒸留水混合液（５０：５０）で溶出した。溶出液を減圧濃縮乾固したところ、８５．８ｍｇの白色粉末が得られた。得られた物質のマススペクトル、融点、紫外部吸収スペクトル、溶解性及び^１Ｈ−ＮＭＲ、^１３Ｃ−ＮＭＲは次のとおりであった。
ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５２７［Ｍ＋Ｈ］^＋、５４９［Ｍ＋Ｎａ］^＋
融点：１５８℃
紫外部吸収スペクトル：メタノ−ル中で測定した紫外部吸収スペクトルは、２４８ｎｍ及び２８５ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を示した。
溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル、ジメチルスルフォキシド及びクロロホルムに可溶、水に不溶。
核磁気共鳴スペクトル：５００ＭＨｚＮＭＲを用いて重クロロホルム中で測定した。^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル及び^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、それぞれ以下の表１に示した。
【００３３】
【化３】

【００３４】
【表１】

【００３５】
次に本発明の化合物の生理活性について検討した。
（試験例１）＜抗線虫活性評価＞
動物寄生性線虫であるラブディティス シューロエロンガタ（Ｒａｈａｂｄｉｔｉｓ ｐｓｅｕｄｏｅｌｏｎｇａｔａ Ｍｉｃｏｌｅｔｚｋｙ，１９１３）をＮＩＰＳＦ培地で約２００〜３００頭／ｍＬになるように希釈した。そして、式（Ｉ）で表される化合物を上記ＮＩＰＳＦ培地に添加し、２５℃、暗黒化で４日間培養した。培養後、顕微鏡で線虫の生育を観察した。その結果、式（Ｉ）で表される化合物を５０μｇ／ｍＬ以上添加したとき、線虫の生育の抑制が認められた。尚、式（Ｉ）で表される化合物を無添加の場合、線虫の生育の抑制は認められなかった。
【００３６】
（試験例２）＜殺虫活性評価＞
アカイエカの２令幼虫（Ｃｕｌｅｘ ｐｉｐｉｅｎｓ ｐａｌｌｅｎｓ）を、５０〜１００頭／ｍＬになるように蒸留水で希釈した。そして、式（Ｉ）で表される化合物を添加し、２５℃で２４時間培養後の幼虫の動きを観察した。式（Ｉ）で表される化合物を２５μｇ／ｍＬ以上添加した場合、はほとんどの幼虫は動かず、生育を抑制することが認められた。尚、式（Ｉ）で表される化合物を無添加の場合、ほとんどの幼虫は、活発に動いていた。
【００３７】
（試験例３）＜コナガに対する評価＞
キャベツ葉片を、予め式（Ｉ）で表される化合物の薬液（ＤＭＳＯ１％、乳化剤５％、ネオエステリン０．０２％）に浸漬させた。キャベツを風乾した後、コナガの３令幼虫（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）を１０頭置き、幼虫の生死を観察した。 その結果、２日経過したキャベツの葉片幼虫は、式（Ｉ）で表される化合物薬液を、それぞれ、５００、２５０、１２５μｇ／ｍＬ浸漬させた場合に、１００、５０、３０％の殺虫率を示した。
【００３８】
【発明の効果】
本発明の化合物は、殺虫及び殺線虫活性を有し、殺虫剤及び殺線虫剤として有用である。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to compounds having novel insecticidal activity or nematicidal properties.
[0002]
[Prior art]
Conventionally, various insecticides and nematicides have been used in the agricultural field and the medical field. These drugs have various structures and actions, but have various problems such as toxicity, side effects, and resistance. Therefore, there is a need for the development of new drugs that exhibit sufficient control effects even at low doses against various pests that have acquired resistance to conventional general-purpose insecticides and nematocides, and that have little adverse effect on the environment and side effects. Wanted.
[0003]
Compounds having a pyrrolobenzoxazine skeleton that have been reported as antiparasitic agents include compounds UK-88,051 produced from the genus Chrysosporium (see Patent Document 1) and Aspergillus ( Compounds CJ-12,662 and CJ-12,663 produced from Aspergillus sp. (See Patent Document 2) are known.
[0004]
[Patent Document 1]
UK Patent Application Publication No. 2240100 [Patent Document 2]
Japanese Patent No. 2767161
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a novel compound having excellent insecticidal / nematicidal activity under such circumstances.
[0006]
[Means for Solving the Problems]
In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have searched for substances having insecticidal and nematicidal activities as microbial metabolites. As a result, one strain belonging to the genus Piscillomyces produced a novel physiologically active substance, and found that the substance had insecticidal and nematicidal activities, thereby completing the present invention.
[0007]
That is, the present invention provides a compound of the formula (I):
Embedded image

Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[0008]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The compound having insecticidal activity or linear insecticidal activity of the present invention has a structure represented by the above formula (I). In addition, these pharmaceutically acceptable salts are not particularly limited as long as the objects of the present invention are achieved. For example, salts such as sodium salt, potassium salt, ammonium salt, magnesium salt and the like can be mentioned.
[0009]
The method for producing the compound represented by the formula (I) is not particularly limited. For example, it may be produced using a microorganism, or may be produced by artificially reacting a chemical substance using a synthetic means. Compounds having the structure represented by the above formula (I) and pharmaceutically acceptable salts thereof which are produced by any means are included in the scope of the present invention.
[0010]
When producing the compound represented by the above formula (I), a microorganism can be used. For example, a strain of the genus Paecilomyces sp. Can be used. Specific examples include Paecilomyces sp. BAUA-3058 strain (Deposit No .: FERMP-19116) (hereinafter referred to as 3058 strain) isolated by the present inventors.
[0011]
The 3058 strain has a morphological characteristic of Brown and Smith: Trans. Brit. Mycol. Soc. , 40, 17 (1957), Onions and Barron: Mycol. Pap. It was confirmed to be a strain belonging to the genus Paecilomyces because it matches the characteristics of the species genus of Paecilomyces sp. Described in CMI, 107 (1967). That is, the 3058 strain grew well on a potato dextrose agar medium (25 ° C., 7 days, colony diameter 40 mm). The 3058 strain phialide is tapered, and conidia are not densely branched. The conidiophores range from Penicillium-branched to non-branched monophyllidic, and form circles at narrow angles to each other, forming large green ball-shaped asexual spores. The surface is smooth.
[0012]
Furthermore, in addition to 3058 strains, natural or artificial mutants thereof that produce the compound represented by the formula (I) can be used. As the human mutation means, for example, a method using ultraviolet irradiation or a mutagenic agent (for example, N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine and a 2-aminopurine agent) which is usually performed, Genetic modification can also be used.
[0013]
The microbiological properties of Paecilomyces sp. BAUA-3058 (Paecilomyces sp. BAUA-3058) are as follows.
(Form)
The conidiophores of strain 3058 are colorless, linear or branched and have a septum. The phialide becomes thicker at the base and becomes thinner toward the tip, and conidia are formed in a phialo type at the tip, and grow in a chain. Conidia appear dark green when dense and appear gray in thin areas. Conidia are spherical to subspherical on the smooth surface, and their size is 3-4 μm.
[0014]
(Properties on various media)
The growth status of the 3058 strain when various media described below were used was examined. The culture was performed at 25 ° C. for 7 days.
[0015]
On the potato dextrose agar medium, the growth of 3058 strain was good. The formed colony was about 40 mm in diameter. On the colony surface, aerial mycelia grew in a velvety state and exhibited a white or slightly grayish color. In addition, the back surface of the colony exhibited flesh color. Conidia (asexual spores) were slightly formed at the tip of the aerial mycelium.
[0016]
On the malt agar medium, growth of 3058 strain was good. The formed colony was about 22 mm in diameter. The colony surface was velvety and aerial mycelium grew and turned white. The back surface was slightly flesh-colored and no conidia were formed.
[0017]
The growth of 3058 strain was favorable on the Tupec Dox agar medium. The colony was about 20 mm in diameter, and showed a slightly raised lumpy shape. The front surface of the colony was velvety and white, and the back surface was reddish brown. No conidium was formed.
[0018]
In the cornmeal agar medium, the growth of the 3058 strain showed slight aerial mycelia and extension of the basal hyphae. The colony reached about 38 mm in diameter, but the amount of mycelium was extremely small. Conidia were formed at the tip of the aerial hypha, but were few.
[0019]
(Physiological properties)
When the 3058 strain was cultured in the potato dextrose liquid medium, the growth temperature was 20 to 30 ° C, and the optimum growth temperature was 20 to 25 ° C. At 30 ° C., the formation of conidia was strongest, and the surface of the colony at this time exhibited dark green.
[0020]
When the compound represented by the above formula (I) is obtained by culturing the 3058 strain, the culture medium is not particularly limited, and appropriately contains a carbon source, a nitrogen source, and, if necessary, an inorganic salt. Medium can be widely adopted. For example, a synthetic medium, a semi-synthetic medium, or a natural medium can be used. In addition, as the carbon source, glucose, fructose, glycerin, sucrose, dextrin, galactose, maltose, mannitol, xylose, ribose, starch, molasses, organic acids, and the like, or carbohydrates obtained by hydrolysis thereof can be used. Nitrogen sources include ammonium chloride, ammonium sulphate urea, ammonium nitrate, sodium nitrate, peptone, meat extract, potato extract, yeast extract, dried yeast, corn steep liquor, soy flour, cottonseed oil scum, casamino acid, pact soyitol, soluble vegetable protein , Automill, etc. can be used. In addition, if necessary, inorganic salts such as salt, calcium carbonate, calcium sulfate, magnesium sulfate, copper sulfate, iron sulfate, zinc sulfate, manganese chloride and phosphate can be added. Further, if necessary, organic acids, amino acids, vitamins, nucleic acids, and inorganic substances can be added. Further, an antifoaming agent, silicone, vegetable oil, or the like can be added to prevent foaming or the like.
[0021]
As a culture method of the 3058 strain, a culture method under aerobic conditions, particularly a solid stationary culture, a liquid stationary culture, a liquid shaking culture and the like are preferable. The culturing temperature is preferably 20 to 35 ° C, more preferably 20 to 25 ° C. The culture time is about 1 to 14 days, and it is particularly preferable to stop the culture after about 4 days. Here, the compound represented by the formula (I) is produced and accumulated in the culture solution. When the production amount in the culture reaches the maximum, the culture is stopped, and the compound represented by the formula (I) can be isolated and purified from the culture. Culture conditions such as the above-mentioned medium composition, medium liquidity, culture temperature, agitation speed and aeration rate are appropriately adjusted or selected according to external conditions and the like so as to obtain preferable results. Further, when the compound represented by the formula (I) is produced using another microorganism, it is needless to say that the culture conditions should be appropriately changed according to the properties of the microorganism.
[0022]
In the case of isolating and purifying the compound represented by the formula (I) from the culture solution, a separation and purification method for isolating and purifying general microbial metabolites from the culture solution can be used. For example, means such as extraction filtration, centrifugation, dialysis, concentration, drying, freezing, adsorption, desorption, precipitation utilizing differences in solubility in various solvents, crystallization, recrystallization, phase transfer, countercurrent distribution, and chromatography. Is mentioned. Moreover, these methods can be used alone, in combination, or repeatedly.
[0023]
For example, the following method can be employed to collect the compound represented by the formula (I) from the culture of the 3058 strain. That is, acetone or ethyl acetate is added to the culture, stirred well, filtered, and concentrated under reduced pressure. After extraction with a solvent that does not mix with water, such as ethyl acetate or butanol, the mixture is concentrated under reduced pressure to obtain a crude extract containing the substance. Depending on the use, the crude extract obtained by the above method can be used as it is. Further, known methods usually used for further purification of the crude extract, for example, column chromatography using a carrier such as silica gel, alumina, porous synthetic polymer, ion exchange resin or reverse phase chromatography using an ODS carrier. Can be purified.
[0024]
The compound represented by the formula (I) can be used as an agricultural or pharmaceutical composition containing the compound as an active ingredient.
[0025]
Further, the compound represented by the formula (I) can be used as an insecticide or a nematicide. The target worms and nematodes are not particularly limited as long as the effects of the compound represented by the formula (I) can be obtained. For example, the suppression of the growth of the animal parasitic nematode Rahbditis pseudoelongata, the suppression of the growth of the hygienic insect pest Culex pipiens pallens, and the occurrence of the insect pest Laxantella larva (Plutila). ), Growth suppression, etc.
[0026]
The compounds of the present invention can be used for preventing or treating infestation and infection of nematodes in mammals such as humans, pigs, sheep, horses and cattle. The method of administration is not particularly limited, and either oral or parenteral route can be adopted. It can also be administered with animal feed, and concentrated feed additives or pre-mixed feeds can be prepared for incorporation into normal animal feed.
[0027]
When the compound of the present invention is used as a pesticide or a pharmaceutical composition, it is mixed with pharmacologically acceptable salts, excipients, and diluents according to a conventional method, and tablets, granules, powders, capsules, syrups, and ointments are used. Preparations, creams, injections and the like. When preparing agricultural chemicals and medicaments, the compound of the present invention or a salt thereof may be used as an active ingredient, or may be used in combination with an active ingredient other than the present invention.
[0028]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples. The materials, usage amounts, ratios, operations, and the like shown in the following specific examples can be appropriately changed without departing from the spirit of the present invention. Therefore, the scope of the present invention is not limited to the specific examples described below. In particular, the compound of the present invention produced, concentrated, extracted, and purified using known means, based on the properties of the compound of the present invention revealed by the present specification, as well as the production means of the present specification, and the compound All insecticides and nematicides contained in the present invention are included in the present invention.
[0029]
In a test tube with a diameter of 24 mm, soluble starch 2.0%, soybean flour 1.5%, glucose 1.2%, malt extract 0.5%, magnesium sulfate heptahydrate 0.05%, V8 juice 100ml / L And 10 ml of a liquid medium containing 100 ml / L of potato extract and steam sterilized at 121 ° C. for 20 minutes. Paecilomyces BAUA-3058 cells grown on a potato dextrose agar medium were inoculated into this, and cultured at 25 ° C. for 72 hours with reciprocal shaking at 200 rpm to obtain a seed culture.
In addition, glucose 5.0%, soybean powder 0.5%, corn steep liquor 0.5%, yeast extract 0.3%, urea 0.08%, iron sulfate 7 Hydrate 0.001%, copper sulfate pentahydrate 0.001%, zinc sulfate heptahydrate 0.001%, manganese chloride tetrahydrate 0.001%, cobalt chloride 0.001% Each 10 ml of the liquid medium was dispensed and steam sterilized at 121 ° C. for 20 minutes. 0.5 ml of each of the inoculum cultures was inoculated into each of them, and cultured at 25 ° C. for 96 hours by rotating and shaking at 210 rpm to obtain 1.6 L of culture.
[0030]
1.6 L of ethyl acetate was added to the above culture solution, and the mixture was shaken and stirred overnight, and then the ethyl acetate layer was recovered. The ethyl acetate extract was concentrated under reduced pressure to remove ethyl acetate, thereby obtaining 3.27 g of a crude extract of the present invention.
[0031]
The active substance was eluted from the above crude extract with silica gel chromatography (Wakogel C-200, 25 mm × 400 mm) with 1 L of an ethyl acetate-hexane mixed solution (70:30). The eluate was concentrated under reduced pressure to dryness, and the resulting crude product was 444.9 mg.
[0032]
Further, 100 mg of the above crude product was subjected to high-performance liquid chromatography using a reverse-phase ODS (Capcell Pak C18 UG-120 5 μm, 10 × 250 mm) as a carrier, and mixed with an acetonitrile-distilled water mixture (50:50). Eluted. The eluate was concentrated under reduced pressure to dryness to obtain 85.8 mg of a white powder. The mass spectrum, melting point, ultraviolet absorption spectrum, solubility, ¹ H-NMR, and ¹³ C-NMR of the obtained substance were as follows.
ESI-MS (m / z): 527 [M + H] ⁺ , 549 [M + Na] ⁺
Melting point: 158 ° C
Ultraviolet absorption spectrum: An ultraviolet absorption spectrum measured in methanol showed a characteristic absorption maximum around 248 nm and 285 nm.
Solubility: Soluble in methanol, ethanol, acetone, ethyl acetate, dimethyl sulfoxide and chloroform, insoluble in water.
Nuclear magnetic resonance spectrum: Measured in deuterated chloroform using 500 MHz NMR. ^{The 1} H-NMR spectrum and ¹³ C-NMR spectrum are shown in Table 1 below, respectively.
[0033]
Embedded image

[0034]
[Table 1]

[0035]
Next, the physiological activity of the compound of the present invention was examined.
(Test Example 1) <Evaluation of anti-nematode activity>
An animal-parasitic nematode, Rhabditis pseudoelongata Micoletzky, 1913, was diluted with NIPSF medium to about 200-300 heads / mL. Then, the compound represented by the formula (I) was added to the NIPSF medium, and the cells were cultured at 25 ° C. in the dark for 4 days. After the culture, the growth of the nematodes was observed under a microscope. As a result, when 50 μg / mL or more of the compound represented by the formula (I) was added, suppression of nematode growth was observed. In the case where the compound represented by the formula (I) was not added, growth of nematodes was not inhibited.
[0036]
(Test Example 2) <Evaluation of insecticidal activity>
Culex pipens larvae of Culex pipiens were diluted with distilled water to a concentration of 50-100 heads / mL. Then, the compound represented by the formula (I) was added, and the movement of the larva after culturing at 25 ° C. for 24 hours was observed. When the compound represented by the formula (I) was added in an amount of 25 μg / mL or more, most larvae did not move and were found to inhibit growth. In the case where the compound represented by the formula (I) was not added, most of the larvae were moving actively.
[0037]
(Test Example 3) <Evaluation for Conaga>
Cabbage leaf pieces were previously immersed in a chemical solution of the compound represented by the formula (I) (DMSO 1%, emulsifier 5%, neoesterin 0.02%). After the cabbage was air-dried, ten third-instar larvae of the Japanese moth (Plutella xylostella) were placed and the larvae were observed for life and death. As a result, the cabbage leaf larvae after 2 days had an insecticidal rate of 100, 50, and 30% when the compound solution represented by the formula (I) was immersed in 500, 250, and 125 μg / mL, respectively. Indicated.
[0038]
【The invention's effect】
The compounds of the present invention have insecticidal and nematicidal activity and are useful as insecticides and nematicides.

Claims (1)

Formula (I):

Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.