【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、培養容器の底板の面積が１００ｃｍ２以上である容器入り培地を使用した食品の微生物検査法に関し、特に検出感度が良好な食品の微生物検査法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
食品の安全性確保のための衛生的品質チェックの他に、食品の品質・保存性向上のためには変敗微生物の汚染防止などの微生物管理が必要である。すなわち、原材料、中間製品、製品などの経時的試料についての微生物検査、食品製造に使用する装置、機械、器具類等の付着微生物、処理・加工・包装場などの空中微生物、あるいは、作業員の手指の検査等、微生物学的品質管理は食品の製造において重要な問題となっている。
【０００３】
一般に生菌数の測定には、標準寒天平板菌数測定法が用いられるが、ここで使用される平板（培養容器）は、直径９０ｍｍ、深さ１５ｍｍ程度のシャーレ（以下、このサイズのシャーレを通常のシャーレと記載する。）等が例示され、これに培地が添加されて検査に供される。この場合、培地に塗抹される検査試料の容量は、培養容器の底板の面積の大きさにより限定されるものであった。このため、わずかな微生物汚染を感度良く検出するために、培地に塗抹する検査試料の容量を増やそうとしても量的に限界があり、希薄な検査試料中のわずかな微生物を検出する目的で検査試料を増やす場合においては、前記通常のシャーレを使用した培地による微生物検査では精度の良い結果は得られなかった。このような状況から、通常の培地組成を有し、検査試料を大量（２ｍｌ以上）に添加できる吸水性の良好な大型培地による高感度な食品の微生物検査法が待望されていた。
【０００４】
従来から、シャーレの直径が１５０ｍｍである大型培地（日本ベクトンディッキンソン社製。例えば、製品番号２２１２３７：トリプチケースソイ寒天培地（１５０×１５ｍｍ）、又は製品番号２９２３０５：レシチン，ポリソルベート８０添加トリプチケースソイ寒天培地（１５０×１５ｍｍ）。以下、従来技術１と記載する。）が市販されていた。また、検査に使用する検査試料が５ｍｌまで添加することが可能な高吸収型の大腸菌群測定プレート（３Ｍ〔ミネソタ・マイニング・アンド・マニュファクチャリング・カンパニー〕社製。製品番号６４０５又は６４１５：Ｈｉｇｈ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｃｏｌｉｆｏｒｍ Ｃｏｕｎｔ Ｐｌａｔｅ。以下、従来技術２と記載する。）が市販されていた。しかしながら、前記従来技術には以下に記載する問題点が含まれていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
従来技術１の大型培地は、シャーレの直径が１５０ｍｍであり通常のシャーレに比して十分な大きさを有しているが、この大型培地の用途は空中の浮遊菌の測定などの環境測定用に使用されるものであった。また、培地の吸水性を考慮したものではなかったために、多量のサンプルの接種ができず、食品の微生物検査には適さず、本発明の課題を解決するには至らなかった。
【０００６】
また、従来技術２の大腸菌群測定プレートは、検査試料が５ｍｌまで添加することが可能な高吸収型の培地が採用されているが、粉体化された培地が培養容器の底板に接着した乾燥培地タイプである。このため、検査時に水を含む液状の検査試料を加えて培地を膨潤させて復元させる必要があり、検査試料の容量や成分の違いによって膨潤した培地の組成等の条件が変化するという問題が残されていた。また、迅速で正確な微生物数の測定試験には適さないことから、一定条件に基づく食品の微生物検査を行うには十分なものとは言い難いものであった。即ち、あらかじめ通常の培地組成を有し、吸水性を付与した培地を大型培養容器に入れたものは存在しなかった。
【０００７】
本発明は前記事情に鑑みてなされたものであり、通常の培地組成を有し、検査試料を大量（２ｍｌ以上）に添加できる吸水性の良好な大型生培地による高感度な食品の微生物検査法を提供することを目的としている。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
前記目的を達成するための本発明は、培地を培養容器に入れた容器入り培地を使用して食品に含有する微生物を検査する方法において、使用する容器入り培地が、底板の面積が１００ｃｍ２以上の大型培養容器に培地を入れたものであることを特徴とする食品の微生物検査法であって、大型培養容器の底板の形状が円形であることを好ましい態様としている。
【０００９】
【発明の実施の形態】
次に、本発明の好ましい実施態様について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施態様に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。
【００１０】
本発明の食品の微生物検査法（以下、本発明の検査法と略記することがある。）は、通常の一般生菌数の計測に用いられる標準寒天平板菌数測定法に基づき、混釈（希釈）平板法や塗抹平板法等に適用することが可能である。
【００１１】
本発明の検査法に使用する検査試料は、培養後の培養容器に３０〜３００個程度のコロニーが得られるように、検体中の推定菌数に応じて希釈を行うことが可能であるが、あらかじめ検査試料溶液中の菌数が少ないことがわかっている場合には、希釈等をしないで検査試料原液をそのまま検査に供することができる。培養容器１枚あたりに添加できる検査試料の容量は、０．１〜５．０ｍｌの範囲で適宜選択することができる。特に菌数が少ない検査試料の場合は、２．０ｍｌ以上を添加することが可能である。
【００１２】
図１は本発明の培養容器Ｓ（シャーレ）の第１実施形態を示す分解斜視図であり、この培養容器Ｓは、容器本体１０と、この容器本体１０に被せる蓋体２０とから構成され、容器本体１０に培地を収容して蓋体２０を被せた状態で恒温器等に収容して培養するために用いられる。容器本体１０は、可撓性のある合成樹脂製シートを成形した一体物であり、底板１１と、周囲壁１２とを有している。前記蓋体２０は、可撓性のある合成樹脂製シート、好ましくは前記容器本体１０と同じか又は類似の合成樹脂製シートを成形した一体物であり、天板２１と、立ち上げ壁２２と、折返部２３とを有している。前記天板２１は略円板状であり、この天板２１の外周部には、その全周にわたって該天板２１の上面（図１において上側の面）の側に立ち上げられた立ち上げ壁２２が周設されている。この立ち上げ壁２２の天板２１からの立ち上げ先端（上端）には、外側にフック状に折り返した形状の折返部２３が該立ち上げ壁２２の全周にわたって形成、周設されている。前記折返部２３は、立ち上げ壁２２の立ち上げ先端（上端）から外側にフランジ状に張り出されてリング状の平坦な上面２４を形成する張り出し部２５と、この張り出し部２５の外周部の全周にわたって前記上面２４に対する下面側に突出させて周設された返し部２６とを有している。なお、本発明において「フック状」とは、断面が台形状のものに限られる訳ではなく、断面逆Ｕ字状、断面逆Ｖ字状、断面凸字状等、折り返し形状を形成できるものであればいかなる形状であっても「フック状」の範囲に包含される。
【００１３】
図２は容器本体１０を示す図であり、図２（ａ）は容器本体１０の平面図、（ｂ）は側断面図である。図２（ａ）に示すように、本実施形態において、容器本体１０の底板１１は略円板状であり、この底板１１の外周部には、その全周にわたって立ち上げるようにして形成された周囲壁１２が周設されている。この周囲壁１２の底板１１からの立ち上げ先端（上端）には、図２（ｂ）に示すように、外側にフック状に折り返した形状の折返部１３が該周囲壁１２の全周にわたって形成、周設されている。前記折返部１３は、周囲壁１２の立ち上げ先端（上端）から外側にフランジ状に張り出されてリング状の平坦な上面１４を形成する張り出し部１５と、この張り出し部１５の外周部の全周にわたって前記上面１４に対する下面側に突出させて周設された返し部１６とを有している。
【００１４】
尚、容器本体１０及び蓋体２０の形状は、平面視円形に限定されず、容器本体１０の底板面積が１００ｃｍ２以上であれば、三角形、四角形、又は五角形以上の多角形、楕円形等のいずれの形状にすることが可能であり、１００〜１７０ｃｍ２の面積を有するものが好ましい。尚、容器本体１０に収容する培地の量は、１枚あたり３０ｇ以上、特に３０〜８０ｇが好ましい。すなわち面積が１００ｃｍ２以上、培地の量が３０ｇ以上であれば、あらかじめ菌数が少ないことがわかっている検査試料の生菌数を測定する際に、検査試料を２ｍｌ以上培地に添加することが可能であり、通常のシャーレを使用した培地で検査する場合に比して高感度で検査試料中の微生物を検出することが可能となる。
【００１５】
本発明の検査法に使用する培地は、培地成分として、微生物の生育に必要な成分である、グルコース、乳糖等の糖類、アミノ酸、ペプトン、硝酸塩、アンモニウム塩等の窒素源、カリウム、リン、マグネシウム等の無機塩類、ビタミン等の生育因子を含有させることが可能である。また、培地は、単に培地成分を溶解水に溶解させた液体培地と液体培地にゲル化剤を添加して固化させた固体培地に大別されるが、本発明の検査法では固体培地を選択することができ、本発明の固体培地とは前記定義したとおり、寒天等のゲル化剤で固化させた平板培地等の使用時に固体状の培地である。ゲル化剤としては、寒天、ゼラチン、ジェランガム、カラギーナン等を例示することができる。
【００１６】
本発明の培地の組成を具体的に例示するならば、以下に示す組成が挙げられる。例えば、日本食品衛生法、日本薬局方、国際酪農連盟の規格基準（ＩＤＦ ＳＴＡＮＤＡＲＤ）等の微生物試験法等に規定されている普通寒天培地、標準寒天培地、デオキシコレート寒天培地、ＥＭＢ培地、遠藤培地、ＢＣＰ加プレートカウント寒天培地、卵黄加マンニット食塩寒天培地、ポテトデキストロース寒天培地、バイオレットレッド胆汁酸塩乳糖（ＶＲＢＬ）寒天培地、酵母エキス−ブドウ糖−クロラムフェニコール寒天培地、酸性ＭＲＳ培地、Ｍ１７培地、Ｂａｉｒｄ−Ｐａｒｋｅｒ寒天培地（ＥＴＧＰ寒天培地）等〔［日本薬学会編、「乳製品試験法・注解」、金原出版株式会社、平成２年４月１０日、ｐ．１１１−１２５］、［「ＩＤＦ ＳＴＡＮＤＡＲＤ（１９９１年改訂版）」、社団法人日本国際酪農連盟発行、平成３年１２月２５日、ｐ．３０６、ｐ．４７０、ｐ．６４５−６４７］、［坂崎利一監修、「新細菌培地学講座・下ＩＩ（第二版）」、株式会社近代出版、１９９６年８月１５日、ｐ．６２−６３］〕である。
【００１７】
前記の培地は、検査試料を添加した際の吸水性を向上させる目的で、固体培地組成中の溶解水の５〜３０％程度を減圧乾燥法により乾燥した部分乾燥固体培地として、本発明の検査法において使用することが可能である。具体的には滅菌処理済の培地を無菌的に培養容器（シャーレ）に分注し、冷却固化した後、固化した培地を乾燥機を使用して１ｋＰａの圧力で減圧乾燥し、固体培地から部分的に溶解水を除去する。このようにして製造された固体培地は、乾燥に起因する微生物の生育阻害が認められず、吸水性に優れ、短時間で大量の検査試料を塗抹することが可能で、迅速で正確な微生物数の測定試験に最適な固体培地である。
【００１８】
本発明の検査法における微生物の培養温度は特に限定されず、検査する食品の対象となる微生物の性質に応じて適宜設定することが可能である。
【００１９】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２０】
【実施例】
実施例１
（生乳中の大腸菌群の検出）
基礎培地として次の組成の各原料を均一に分散又は溶解し、冷却固化した後の最終的な培地のｐＨが７．２になるように０．１ｍｏｌ／ｌの水酸化ナトリウム水溶液又は０．１ｍｏｌ／ｌの塩酸水溶液を添加して調整した。このｐＨを調整した基礎培地をオートクレーブ（岩楯医療機器製作所社製）を使用して１００℃で１０分間加熱殺菌し、その後５０℃に冷却して、図１と同型の直径１２ｃｍのプラスチック製シャーレ（底板面積：１１３ｃｍ２）に１枚あたり４４ｇを分注し、冷却固化した。固化した培地を乾燥機（ＬＡＢＣＯＮＣＯ社製）を使用して１．５ｋＰａの圧力で減圧乾燥法により乾燥し、水分１４ｍｌを除去して、培地量３０ｇの固体平板培地（大腸菌群の検出用固体培地）約２５枚を製造した。
【００２１】
原材料 配合量
カゼインペプトン（ディフコ社製） １０ｇ
乳糖（メルク社製） １０ｇ
デスオキシコール酸ナトリウム（メルク社製） １ｇ
塩化ナトリウム（和光純薬工業社製） ５ｇ
リン酸水素二カリウム（和光純薬工業社製） ２ｇ
クエン酸鉄アンモニウム（和光純薬工業社製） ２ｇ
ニュートラルレッド（和光純薬工業社製） ０．０３３ｇ
寒天（伊那食品工業社製） １５ｇ
精製水 １４９０ｍｌ
【００２２】
検体として搾乳後より１週間経過した、未殺菌の牛の乳（生乳）を使用して前記平板培地により大腸菌群の検出を行った。すなわち、該生乳を２ｍｌ前記固体平板培地に接種し、恒温乾燥機を用いて３７℃で２０時間培養し、集落の発現を観察し、その陽性陰性を判定した。
【００２３】
その結果、固体平板培地上に赤く変色した２０個の集落と、この色調とは異なる７つの集落が観察された。赤く変色した集落について常法（厚生省生活衛生局監修、「食品衛生検査指針 微生物編」、日本食品衛生協会発行、１９９０年１２月２５日、ｐ．７９−９１）に基づき細菌の同定を行った結果、赤色に変色した集落は全て大腸菌群に属する菌であることが確認された。また赤く変色しなかった集落についても、上記の方法にて大腸菌群の確認を行ったが、全て大腸菌群とは確認されなかった。即ち、この大腸菌群検出用培地を用いた本発明の微生物検査法により、生乳中の大腸菌群を確実かつ高感度に検出できることが判明した。
【００２４】
【発明の効果】
以上詳記したとおり、本発明は培養容器本体の底板の面積が１００ｃｍ２以上である容器入り培地を使用した食品の微生物検査法に関するものであり、通常の培地組成を有していることから様々な検査培地に適用して幅広い微生物の検査を行うことができる。また、培地の吸水性が良好であることから、検査試料を大量に添加でき、微生物を高感度に検出することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の食品の微生物試験法に使用する培養容器（シャーレ）の分解斜視図である。
【図２】図１に示す培養容器に用いられる容器本体を示し、（ａ）は容器本体の平面図、（ｂ）は側断面図である。
【符号の説明】
１０…容器本体、１１…底板、１２…周囲壁、１３…折返部、１４…上面、１５…張り出し部、１６…返し部、２０…蓋体、２１…天板、２２…立ち上げ壁、２３…折返部、２４…上面、２５…張り出し部、２６…返し部、Ｓ…培養容器。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for testing microorganisms in foods using a container-containing medium in which the area of a bottom plate of a culture vessel is 100 cm 2 or more, and particularly to a method for testing microorganisms in foods having good detection sensitivity.
[0002]
[Prior art]
In addition to hygienic quality checks to ensure food safety, microbial control, such as prevention of the contamination of degrading microorganisms, is required to improve the quality and preservability of food. In other words, microbial tests on time-lapse samples of raw materials, intermediate products, products, etc., attached microorganisms on equipment, machinery, instruments, etc. used in food production, airborne microorganisms on processing, processing, packaging sites, etc. Microbiological quality control, such as finger inspection, has become an important issue in food production.
[0003]
Generally, a standard agar plate count method is used for measuring the viable cell count. The plate (culture vessel) used here is a Petri dish having a diameter of 90 mm and a depth of about 15 mm (hereinafter, a Petri dish of this size is used). This is described as an ordinary petri dish.) And the like, and a medium is added to the medium for inspection. In this case, the volume of the test sample smeared on the medium was limited by the size of the area of the bottom plate of the culture vessel. For this reason, in order to detect slight microbial contamination with high sensitivity, there is a limit to the amount of test sample that can be spread on the culture medium, and there is a limit in quantity. In the case of increasing the number of samples, an accurate result was not obtained in a microorganism test using a medium using the ordinary petri dish. Under such circumstances, there has been a long-awaited demand for a highly sensitive food microbial testing method using a large medium having a normal medium composition and having good water absorbability and capable of adding a large amount (2 ml or more) of test samples.
[0004]
Conventionally, a large medium having a Petri dish with a diameter of 150 mm (manufactured by Nippon Becton Dickinson Co., Ltd., for example, Product No. 221237: Trypticase Soy Agar Medium (150 × 15 mm), or Product No. 292305: Trypticase with lecithin and polysorbate 80 added A soy agar medium (150 × 15 mm, hereinafter referred to as Conventional Technique 1) was commercially available. In addition, a high absorption type coliform bacteria measurement plate (manufactured by 3M [Minnesota Mining and Manufacturing Company], which can add up to 5 ml of a test sample used for the test. Product numbers 6405 or 6415: High Sensitivity Collaborate Count Plate (hereinafter referred to as prior art 2) has been commercially available. However, the conventional technique has the following problems.
[0005]
[Problems to be solved by the invention]
The large-sized medium of the prior art 1 has a diameter of 150 mm, which is sufficiently large compared to a normal dish, but the large-sized medium is used for environmental measurement such as measurement of airborne bacteria. Was used. In addition, since the method was not designed to take into account the water absorption of the culture medium, a large amount of sample could not be inoculated, and was not suitable for testing microorganisms of food, and thus did not solve the problems of the present invention.
[0006]
Further, the coliform group measurement plate of the prior art 2 employs a high-absorption type medium to which a test sample can be added up to 5 ml. However, the dried medium in which the powdered medium adheres to the bottom plate of the culture vessel is used. Medium type. Therefore, it is necessary to swell the medium by adding a liquid test sample containing water at the time of the test, thereby restoring the medium, and there remains a problem that conditions such as the composition of the swollen medium change depending on the test sample volume and components. It had been. In addition, since it is not suitable for a rapid and accurate test for measuring the number of microorganisms, it is hardly sufficient to conduct a microorganism test on food under certain conditions. That is, there was no medium in which a medium having a normal medium composition in advance and imparting water absorption was placed in a large culture vessel.
[0007]
The present invention has been made in view of the above circumstances, and has a normal medium composition and a highly sensitive microbial testing method for foods using a large fresh medium having good water absorbability and capable of adding a large amount (2 ml or more) of test samples. It is intended to provide.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
The present invention for achieving the above object provides a method for testing microorganisms contained in food using a container-containing medium in which a medium is placed in a culture container, wherein the container-containing medium used has an area of a bottom plate of 100 cm 2 or more. In a preferred embodiment, the medium is placed in a large-sized culture vessel, and the medium is placed in a microorganism, and the bottom plate of the large-sized culture vessel has a circular shape.
[0009]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Next, preferred embodiments of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to the following preferred embodiments, and can be freely modified within the scope of the present invention.
[0010]
The microorganism testing method for food of the present invention (hereinafter, may be abbreviated as the testing method of the present invention) is based on a standard agar plate enumeration method used for measuring the number of general viable bacteria, and pour ( Dilution) It can be applied to the plate method, the smear plate method, and the like.
[0011]
The test sample used in the test method of the present invention can be diluted according to the estimated number of bacteria in the sample so that about 30 to 300 colonies can be obtained in the culture vessel after culture. When it is known in advance that the number of bacteria in the test sample solution is small, the test sample stock solution can be directly used for the test without dilution or the like. The volume of the test sample that can be added per culture vessel can be appropriately selected in the range of 0.1 to 5.0 ml. Particularly, in the case of a test sample having a small number of bacteria, 2.0 ml or more can be added.
[0012]
FIG. 1 is an exploded perspective view showing a first embodiment of a culture vessel S (a Petri dish) of the present invention. The culture vessel S is composed of a container body 10 and a lid 20 that covers the vessel body 10. The container body 10 is used for culturing by storing the medium in a thermostat or the like with the lid 20 covered. The container body 10 is an integral body formed by molding a flexible synthetic resin sheet, and has a bottom plate 11 and a peripheral wall 12. The lid 20 is a one-piece unit formed by molding a flexible synthetic resin sheet, preferably the same or similar synthetic resin sheet as the container body 10, and includes a top plate 21, a rising wall 22, , A turn-back portion 23. The top plate 21 is substantially disk-shaped, and a rising wall is provided on the outer peripheral portion of the top plate 21 on the upper surface side (the upper surface in FIG. 1) of the top plate 21 over the entire circumference. 22 are provided around. At the rising end (upper end) of the rising wall 22 from the top plate 21, a folded portion 23 having a shape that is folded outward in a hook shape is formed and provided around the entire circumference of the rising wall 22. The folded portion 23 projects outwardly from the rising end (upper end) of the rising wall 22 in a flange shape to form a ring-shaped flat upper surface 24, and an outer peripheral portion of the projecting portion 25. And a return portion 26 provided to protrude from the upper surface 24 to the lower surface side over the entire circumference. In the present invention, the “hook shape” is not limited to a cross section having a trapezoidal shape, but may be a folded shape such as an inverted U-shaped cross section, an inverted V-shaped cross section, or a convex cross section. Any shape is included in the range of the "hook shape".
[0013]
FIG. 2 is a view showing the container body 10, FIG. 2 (a) is a plan view of the container body 10, and FIG. 2 (b) is a side sectional view. As shown in FIG. 2A, in the present embodiment, the bottom plate 11 of the container main body 10 has a substantially disk shape, and is formed on the outer peripheral portion of the bottom plate 11 so as to stand up all around. A peripheral wall 12 is provided around. As shown in FIG. 2 (b), a folded portion 13 having a hook-shaped outward shape is formed over the entire periphery of the peripheral wall 12 at the rising end (upper end) of the peripheral wall 12 from the bottom plate 11. , Is installed around. The folded portion 13 projects outward from the rising end (upper end) of the peripheral wall 12 in a flange shape to form a ring-shaped flat upper surface 14, and the entire outer peripheral portion of the extended portion 15. A return portion 16 is provided so as to protrude to the lower surface side with respect to the upper surface 14 over the circumference.
[0014]
The shapes of the container body 10 and the lid 20 are not limited to a circular shape in a plan view, and if the bottom plate area of the container body 10 is 100 cm 2 or more, a polygon such as a triangle, a quadrangle, or a pentagon, or an oval may be used. Any shape can be used, and one having an area of 100 to 170 cm 2 is preferable. In addition, the amount of the culture medium accommodated in the container body 10 is preferably 30 g or more per sheet, particularly preferably 30 to 80 g. That is, if the area is 100 cm 2 or more and the amount of the medium is 30 g or more, when measuring the viable cell count of a test sample that is known to have a low bacterial count in advance, it is possible to add 2 ml or more of the test sample to the medium. It is possible, and it is possible to detect microorganisms in a test sample with higher sensitivity than when a test is performed using a medium using a normal petri dish.
[0015]
The culture medium used in the test method of the present invention is a medium component that is necessary for the growth of microorganisms, such as glucose, lactose, and other sugars, amino acids, peptones, nitrates, and nitrogen sources such as ammonium salts, potassium, phosphorus, and magnesium. And growth factors such as inorganic salts and vitamins. In addition, the medium is roughly classified into a liquid medium in which the medium components are simply dissolved in dissolving water and a solid medium in which the gelling agent is added to the liquid medium and solidified.In the test method of the present invention, the solid medium is selected. As described above, the solid medium of the present invention is a solid medium at the time of use such as a plate medium solidified with a gelling agent such as agar. Examples of the gelling agent include agar, gelatin, gellan gum, carrageenan, and the like.
[0016]
Specific examples of the composition of the medium of the present invention include the following compositions. For example, a normal agar medium, a standard agar medium, a deoxycholate agar medium, an EMB medium, and an Endo medium defined in microbial test methods such as the Japanese Food Sanitation Law, the Japanese Pharmacopoeia, and the International Dairy Federation's standard standards (IDF STANDARD). , BCP-supplemented plate agar medium, yolk-added mannitol salt agar medium, potato dextrose agar medium, violet red bile salt lactose (VRBL) agar medium, yeast extract-glucose-chloramphenicol agar medium, acidic MRS medium, M17 Medium, Baird-Parker agar medium (ETGP agar medium), etc. [[Japan Pharmaceutical Association, “Daily Product Test Methods and Comments”, Kanehara Publishing Co., Ltd., April 10, 1990, p. 111-125], [“IDF STANDARD (revised 1991)”, published by the Japan International Dairy Federation, December 25, 1991, p. 306, p. 470, p. 645-647], [Supervised by Toshikazu Sakazaki, "New Bacterial Culture Studies Course, Shimo II (Second Edition)", Kindai Shuppan Co., Ltd., August 15, 1996, p. 62-63]].
[0017]
The above-mentioned medium is a partially dried solid medium obtained by drying about 5 to 30% of dissolved water in a solid medium composition by a reduced-pressure drying method in order to improve water absorption when a test sample is added. It can be used in law. Specifically, the sterilized medium is aseptically dispensed into a culture vessel (a Petri dish), cooled and solidified, and the solidified medium is dried under reduced pressure at 1 kPa using a drier, and partially dried from the solid medium. The dissolved water is removed. The solid medium produced in this manner has no inhibition of microbial growth due to drying, is excellent in water absorption, is capable of smearing a large amount of test samples in a short time, and has a quick and accurate microbial count. It is the most suitable solid medium for the measurement test.
[0018]
The culture temperature of the microorganism in the test method of the present invention is not particularly limited, and can be appropriately set according to the properties of the microorganism to be tested for the food.
[0019]
Next, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited to the following examples.
[0020]
【Example】
Example 1
(Detection of coliform bacteria in raw milk)
A 0.1 mol / l sodium hydroxide aqueous solution or 0.1 mol so as to uniformly disperse or dissolve each raw material having the following composition as a basal medium and to cool and solidify the final medium to a pH of 7.2. / L hydrochloric acid aqueous solution. The pH-adjusted basal medium was sterilized by heating at 100 ° C. for 10 minutes using an autoclave (manufactured by Iwashield Medical Device Manufacturing Co., Ltd.), and then cooled to 50 ° C. to form a plastic petri dish of the same type as FIG. (Bottom plate area: 113 cm 2 ), 44 g per sheet was dispensed and cooled and solidified. The solidified medium was dried using a dryer (manufactured by LABCONCO) at a pressure of 1.5 kPa by a reduced pressure drying method to remove 14 ml of water, and a 30 g medium solid plate medium (solid medium for detecting Escherichia coli group) was used. ) About 25 sheets were manufactured.
[0021]
Ingredients Casein Peptone (Difco) 10g
Lactose (Merck) 10g
Sodium desoxycholate (Merck) 1g
Sodium chloride (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 5g
Dipotassium hydrogen phosphate (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 2g
Ammonium iron citrate (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 2g
Neutral Red (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 0.033 g
Agar (made by Ina Food Industry Co., Ltd.) 15g
Purified water 1490ml
[0022]
Escherichia coli groups were detected on the plate medium using unsterilized cow's milk (raw milk) one week after milking as a specimen. That is, 2 ml of the raw milk was inoculated on the solid plate medium, and cultured at 37 ° C. for 20 hours using a thermostat dryer, and the expression of colonies was observed to determine whether the colonies were positive or negative.
[0023]
As a result, 20 colonies discolored red and 7 colonies different from this color tone were observed on the solid plate medium. Bacteria were identified for the red-discolored villages based on the common law (supervised by the Ministry of Health and Welfare, Ministry of Health and Welfare, "Guidelines for Examination of Food Sanitation, Microorganisms", published by the Japan Food Sanitation Association, December 25, 1990, p. 79-91). As a result, it was confirmed that all the colonies that turned red were bacteria belonging to the coliform group. Escherichia coli groups were also confirmed by the above method for colonies that did not turn red, but none of them were confirmed to be Escherichia coli groups. That is, it was found that the microorganism test method of the present invention using the medium for detecting coliform bacteria can reliably and highly sensitively detect the coliform bacteria in raw milk.
[0024]
【The invention's effect】
As described in detail above, the present invention relates to a method for testing microorganisms in foods using a medium in a container in which the area of the bottom plate of the culture vessel body is 100 cm 2 or more, and since the medium has a normal medium composition, A wide variety of microorganisms can be tested by applying to various test media. In addition, since the medium has good water absorption, a large amount of test samples can be added, and microorganisms can be detected with high sensitivity.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is an exploded perspective view of a culture vessel (a Petri dish) used in a method for testing microorganisms of food according to the present invention.
FIGS. 2A and 2B show a container main body used for the culture container shown in FIG. 1, wherein FIG. 2A is a plan view of the container main body, and FIG.
[Explanation of symbols]
DESCRIPTION OF SYMBOLS 10 ... Container main body, 11 ... Bottom plate, 12 ... Peripheral wall, 13 ... Folding part, 14 ... Top surface, 15 ... Overhang part, 16 ... Returning part, 20 ... Lid, 21 ... Top plate, 22 ... Standing wall, 23 ... Folded part, 24... Upper surface, 25.
