【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はヨードアリール基を有するα−アミノ酸誘導体に関する。また、本発明は、この化合物を膜構成成分として含むリポソーム及び該リポソームを含むＸ線造影剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ヨード化合物を用いたＸ線血管造影の分野では、水溶性のヨード造影剤を投与することにより血液の流れを造影し、その流れが滞っている箇所を発見する診断技術がある。この方法は、ヨード造影剤が血流中にあり、血管内部の血流の変化を検出する方法であるところから、ヨード造影剤が病巣細胞に局在する場合に比べて正常組織との区別がつけにくい。このため、通常この方法では狭窄が５０％以上進んだ病巣しか検出することができず、虚血性疾患の発作が発症する前に病巣を検出することは困難である。
【０００３】
これとは別に、疎水性ヨード造影剤もしくは親水性造影剤を製剤化し、目的とする疾患部位に選択的に集積させる試みが報告されている（国際公開ＷＯ９５／１９１８６、同ＷＯ９５／２１６３１、同ＷＯ８９／００８１２、英国特許第８６７６５０号、国際公開ＷＯ９６／０００８９、同ＷＯ９４／１９０２５、同ＷＯ９６／４０６１５、同ＷＯ９５／２２９５、同 ＷＯ９８／４１２３９、同ＷＯ９８／２３２９７、同ＷＯ９９／０２１９３、同 ＷＯ９７／０６１３２、米国特許第４１９２８５９号明細書、同４５６７０３４号明細書、同４９２５６４９号明細書、 Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ．， ６（１２）， １０１１ （１９８９）， Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ．， １６（３）， ４２０ （１９９９）， Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ．， ７２（８）， ８９８ （１９８３）， Ｉｎｖｅｓｔ． Ｒａｄｉｏｌ．， １８（３）， ２７５ （１９８３））。例えばＰｈａｒｍ． Ｒｅｓ．， ６（１２）， １０１１ （１９８９）には、疎水性化合物であるＣｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ Ｉｏｐａｎｏａｔｅの油滴分散液を注射することにより、該ヨード化合物が実験動物の動脈硬化部位に集積することが開示されている。また、Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ．， １６（３）， ４２０ （１９９９）には、Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ ＩｏｐａｎｏａｔｅをアセチルＬＤＬに取り込ませて投与することによって該ヨード化合物が実験動物の動脈硬化部位に集積することが開示されている。
【０００４】
また、Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． ７２（８）， ８９８ （１９８３）には、Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ Ｉｏｐａｎｏａｔｅの油滴分散液を注射することによる肝臓や脾臓のＸ線造影の例が開示されている。米国特許第４５６７０３４号明細書には、ｄｉａｔｒｉｚｏｉｃ ａｃｉｄ のエステル体をリポソームに封入し、肝臓や脾臓の選択的造影を行う方法が報告されている。国際公開ＷＯ９６／２８４１４、同ＷＯ９６／０００８９には血管プールやリンパ系をイメージ化するための造影剤が開示されている。しかしながら、これらの製剤方法は、血管疾患を選択的に造影する目的のためには、効率および選択性ともに十分でなく、Ｘ線照射により血管疾患を画像化した例も報告されていない。
【０００５】
一方、２個の３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル基を含むアルキルカルボン酸と飽和／不飽和脂肪酸からなるトリグリセリド化合物を、油滴分散（Ｌｉｐｉｄ Ｅｍｕｌｓｉｏｎ）やＴｗｅｅｎ２０分散物として製剤化し、肝臓やＢｌｏｏｄ−ｐｏｏｌの造影を目的として用いる方法が報告されている（Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ ２１６（３）， ８６５ （２０００）； Ｉｎｖｅｓｔ． Ｒａｄｉｏｌ．， ３５（３）， １５８ （２０００）； 国際公開ＷＯ９８／４６２７５； Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ．， ８５（９）， ９０８ （１９９６）； Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ．， １３（６）， ８７５ （１９９６）； 国際公開ＷＯ９５／３１１８１； Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ３８（４）， ６３６ （１９９５）； Ｉｎｖｅｓｔ． Ｒａｄｉｏｌ．， ２９（ＳＵＰＰＬ． ２）， Ｓ２８４ （１９９４）； 国際公開ＷＯ９４／１９０２５； 米国特許第４８７３０７５号； Ａｐｐｌ． Ｒａｄｉｏｌ． Ｉｓｏｔ．， ３７（８）， ９０７ （１９８６）； Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２９（１２）， ２４５７ （１９８６））。
【０００６】
国際公開ＷＯ０１／９３９１８においては、疎水性、かつ加水分解抵抗性の放射性ヨード造影剤をマイクロエマルジョン製剤化、もしくはアセチルＬＤＬに取り込ませて実験動物に投与して、動脈硬化巣部位を放射性造影する例が開示されている。また、上述のＣｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ Ｉｏｐａｎｏａｔｅも生体内で分解されず、生体臓器、特に肝臓に蓄積することが報告されている［Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２５， １５００ （１９８２）］。このような化合物の性質は生体内に長期留まることを示しており、例えば、Ｘ線造影剤のような診断への用途を考えた場合には好ましい性質とはいえない。
【０００７】
化合物の観点からは、上記の米国特許第４８７３０７５号及びＪ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２９（１２）， ２４５７ （１９８６）に、２個の３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル基を含むアルキルカルボン酸からなるジアシル−１，３−グリセリド化合物およびその酸化物についての記載がある。しかし、合成中間体としての使用以外の用途は示されていない。
【特許文献１】米国特許第４８７３０７５号
【非特許文献１】Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２９（１２）， ２４５７ （１９８６）
【０００８】
【発明が解決しようとする課題及び課題を解決するための手段】
本発明の課題は、病巣を選択的に造影するためのリポソーム含有ヨード造影剤に適したヨード化合物を提供することである。本発明者等は上記の課題を解決すべく研究を行った結果、二個のヨードアリール基を有するα−アミノ酸誘導体がＸ線造影剤としてのリポソームの構成成分として優れた性質を有しており、この化合物を含むリポソームを用いてＸ線造影することにより血管疾患の病巣を選択的に造影できることを見出した。また同時に、この化合物は造影後に肝臓で代謝され、体内に蓄積しない性質を有することも見出した。本発明は上記の知見を基にして完成された。
【０００９】
すなわち、本発明により、下記の一般式（Ｉ）：
【化３】
（式中、Ａｒ１Ａ及びＡｒ２Ａはそれぞれ独立に少なくとも１個のヨウ素原子を置換基として有するアリール基を示し；Ｌ１Ａ及びＬ２Ａはそれぞれ独立に主鎖が７個以上の原子からなる２価の連結基を示し；ＸＡはα−アミノ酸残基を示すが、該α−アミノ酸残基においてα−炭素に結合する窒素原子が−ＣＯ−Ｌ１Ａ−Ａｒ１Ａで表される基の左端のカルボニル炭素とアミド結合する））で表される化合物又はその塩を提供するものである。この発明の好ましい態様によれば、Ａｒ１Ａ及びＡｒ２Ａがそれぞれ独立に少なくとも３個のヨウ素原子を置換基として有するフェニル基である上記の化合物又はその塩が提供される。
【００１０】
また、本発明により、下記の一般式（ＩＩ）：
【化４】
（式中、Ａｒ１Ｂ及びＡｒ２Ｂはそれぞれ独立に少なくとも１個のヨウ素原子を置換基として有するアリール基を示し；Ｌ１Ｂ及びＬ２Ｂはそれぞれ独立に主鎖が７個以上の原子からなる２価の連結基を示し；ＸＢはα−アミノ酸残基を示すが、該α−アミノ酸残基のα−炭素に結合するカルボニル基の炭素原子が−ＮＨ−Ｌ２Ｂ−Ａｒ２Ｂで表される基の左端の窒素原子にアミド結合する）で表される化合物又はその塩が提供される。この発明の好ましい態様によれば、Ａｒ１Ｂ及びＡｒ２Ｂがそれぞれ独立に少なくとも３個のヨウ素原子を置換基として有するフェニル基である上記の化合物又はその塩が提供される。
【００１１】
別の観点からは、上記一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソームが本発明により提供される。この発明の好ましい態様によれば、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンの組み合わせを膜構成成分として含む上記のリポソームが提供される。また、上記のリポソームの製造のための上記一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物の使用も本発明により提供される。
【００１２】
また、本発明により、上記のリポソームを含むＸ線造影剤が提供される。この発明の好ましい態様によれば、血管疾患の造影に用いる上記のＸ線造影剤；泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記のＸ線造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のＸ線造影剤；マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のＸ線造影剤；及びマクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる上記のＸ線造影剤が提供される。
【００１３】
さらに、上記Ｘ線造影剤の製造のための上記の化合物又はその塩の使用；Ｘ線造影法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後にＸ線を照射する工程を含む方法；血管疾患の病巣の造影方法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺類動物に投与した後にＸ線を照射する工程を含む方法が本発明により提供される。
【００１４】
さらに、少なくとも１つのヨード原子が放射性同位体である上記の化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソーム、及び該リポソームを含むシンチグラフィー造影剤が本発明により提供される。この発明の好ましい態様によれば、泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤；造影対象の組織が血管、肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のシンチグラフィー造影剤；腫瘍、動脈硬化巣、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる疾患部位の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤が提供される。
【００１５】
また、上記シンチグラフィー造影剤の製造のための上記の化合物又はその塩の使用シンチグラフィー造影法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後に該リポソームが発生する放射線を検出する工程を含む方法；血管疾患の病巣の造影方法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後に該リポソームが発生する放射線を検出する工程を含む方法が本発明により提供される
【００１６】
【発明の実施の形態】
Ａｒ１Ａ及びＡｒ２Ａが示す少なくとも１つのヨウ素原子で置換されたアリール基において、アリール環上のヨウ素原子の個数は２個以上であることが好ましく、３個以上である場合が特に好ましい。ヨウ素原子の個数の上限は特に限定されないが、通常は５個以下である。Ａｒ１Ａ及びＡｒ２Ａが示すアリール基の種類は特に限定されないが、アントラセン基、ナフタレン基、又はフェニル基などが好ましく、フェニル基が最も好ましい。Ａｒ１Ａ及びＡｒ２Ａがモノ又はジヨードフェニル基を表す場合、ベンゼン環上におけるヨウ素原子の置換位置は特に規定されない。Ａｒ１Ａ及びＡｒ２Ａがトリヨードフェニル基を表す場合、ベンゼン環上における３個のヨウ素原子の置換位置は特に規定されないが、例えば「２，４，６位」、「２，３，５位」、「３，４，５位」置換が好ましく、より好ましくは「２，４，６位」、「２，３，５位」置換であり、なかでも「２，４，６位」置換が最も好ましい。Ａｒ１Ｂ及びＡｒ２Ｂが示す少なくとも１つのヨウ素原子で置換されたアリール基は上記に説明したＡｒ１Ａ及びＡｒ２Ａが示すアリール基と同様である。
【００１７】
Ａｒ１Ａ及びＡｒ２Ａが示すアリール基は環上に置換基を有していてもよい。環上に存在する置換基の種類、個数、置換位置は特に限定されない。Ａｒ１Ａ及びＡｒ２Ａが示すアリール環がヨウ素原子以外の置換基を有しない場合も好ましい。Ａｒ１Ｂ及びＡｒ２Ｂが示すアリール基についても同様である。
【００１８】
本明細書において、ある官能基について「置換又は無置換」又は「置換基を有していてもよい」という場合には、その官能基が１又は２以上の置換基を有する場合があることを示しているが、特に言及しない場合には、結合する置換基の個数、置換位置、及び種類は特に限定されない。ある官能基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。本明細書において、ある官能基が置換基を有する場合、置換基の例としては、ハロゲン原子（本明細書において「ハロゲン原子」という場合にはフッ素、塩素、臭素、又はヨウ素のいずれでもよい）、アルキル基（本明細書において「アルキル基」という場合には、直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせのいずれでもよく、環状アルキル基にはビシクロアルキル基などの多環性アルキル基を含む。アルキル部分を含む他の置換基のアルキル部分についても同様である）、アルケニル基（シクロアルケニル基、ビシクロアルケニル基を含む）、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、シアノ基、ヒドロキシル基、ニトロ基、カルボキシル基、アルコキシ、アリールオキシ基、シリルオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アシルオキシ基、カルバモイルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、アリールオキシカルボニルオキシ基、アミノ基（アニリノ基を含む）、アシルアミノ基、アミノカルボニルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、アリールオキシカルボニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、アルキル及びアリールスルホニルアミノ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、スルファモイル基、スルホ基、アルキル及びアリールスルフィニル基、アルキル及びアリールスルホニル基、アシル基、アリールオキシカルボニル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、アリール及びヘテロ環アゾ基、イミド基、ホスフィノ基、ホスフィニル基、ホスフィニルオキシ基、ホスフィニルアミノ基、シリル基が挙げられる。
【００１９】
Ａｒ１Ａ及びＡｒ２Ａが示すアリール基が置換基を有する場合、好ましい置換基の例としては、ハロゲン原子、アルキル基、シアノ基、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アシルアミノ基、アシル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基が挙げられる。また、Ａｒ１Ｂ及びＡｒ２Ｂが示すアリール基についても同様である。
【００２０】
Ｌ１Ａ及びＬ２Ａは主鎖中に少なくとも１個のヘテロ原子（本明細書において「ヘテロ原子」という場合には、窒素原子、酸素原子、硫黄原子などの炭素原子以外の任意の原子を意味する）を有し、主鎖が７個以上の原子で構成される二価の連結基を表す。本明細書において「主鎖」とはＸ−ＣＯ−とＡｒ１Ａで表される基の間、又はＸとＡｒ２Ａを最小個数で結ぶ原子群を意味する。該連結基は飽和の基であってもよいが、不飽和結合を含んでいてもよい。主鎖中のヘテロ原子の個数については特に規定されないが５個以下であることが好ましく、より好ましくは３個以下であり、１個であるときが最も好ましい。主鎖中のヘテロ原子の位置についても特に規定されないが、ヘテロ原子の個数が１個であるときは、Ａｒ基から５原子以内であることが好ましい。該連結基は、ヘテロ原子と隣接する炭素原子を含む官能基を部分構造として含んでいてもよい。連結基中に含まれる不飽和部分及び／又はヘテロ原子を含む官能基としては、例えば、アルケニル基、アルキニル基、エステル基（カルボン酸エステル、炭酸エステル、スルホン酸エステル、スルフィン酸エステルを含む）、アミド基（カルボン酸アミド、ウレタン、スルホン酸アミド、スルフィン酸アミドを含む）、エーテル基、チオエーテル基、ジスルフィド基、アミノ基、イミド基などがあげられる。上記の官能基はさらに置換基を有していてもよく、これらの置換基はＬ１Ａ及びＬ２Ａにそれぞれ複数個存在してもよい。複数個存在する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。
【００２１】
Ｌ１Ａ及びＬ２Ａで表される二価の連結基の部分構造として、好ましくはアルケニル基、エステル基、アミド基、エーテル基、チオエーテル基、ジスルフィド基又はアミノ基であり、さらに好ましくはアルケニル基、エステル基、エーテル基である。主鎖中に含まれるへテロ原子は酸素原子又は硫黄原子が好ましく、酸素原子がもっとも好ましい。Ｌ１Ａ及びＬ２Ａの炭素数は７〜３０が好ましく、１０〜２５がより好ましく、最も好ましくは１０〜２０である。Ｌ１Ａ及びＬ２Ａは置換基を有していてもよい。置換基を有する場合、ハロゲン原子又はアルキル基が好ましい。また、無置換の場合も好ましい。
【００２２】
Ｌ１Ａ及びＬ２Ａの好ましい態様を以下に具体的に例示するが、本発明の化合物における連結基はこれらに限定されることはない。なお、以下の例ではいずれも右側に示した結合でＡｒ１Ａ又はＡｒ２Ａ基と結合する。−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）ｍ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−（ＣＨ２）ｍ−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−、−（ＣＨ２）Ｓ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ２）２−Ｏ−、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｔ−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−［ｎは１０から２０の任意の整数を表し；ｍは９から１９の任意の整数を表し；ｓは８から１８の任意の整数を表し；ｔは７から１７の任意の整数を表す］ Ｌ１Ｂ及びＬ２Ｂで表される二価の連結基は、上記のＬ１Ａ及びＬ２Ａについて説明した連結基と同様であり、好ましい連結基も同様である。
【００２３】
本明細書において「α−アミノ酸残基」とは、アミノ基がカルボキシル基を結合している炭素に直接結合しているアミノ酸（α−アミノ酸）において、該アミノ基から１個の水素原子、及び該カルボキシル基から水酸基を除いた残りの２価の基を意味している。ＸＡが示すα−アミノ酸残基では、上記アミノ基から水素原子を除いた窒素原子が−ＣＯ−Ｌ１Ａ−Ａｒ１Ａで表される基の左端のカルボニル炭素にアミド結合しており、ＸＢが示すα−アミノ酸残基では、上記カルボキシル基から水酸基を除いた残りのカルボニル基（−ＣＯ）の炭素原子が−ＮＨ−Ｌ２Ｂ−Ａｒ２Ｂで表される基の左端の窒素原子にアミド結合している。
【００２４】
α−アミノ酸としてはＬ−アミノ酸又はＤ−アミノ酸のいずれでもよく、両者の混合物であってもよい。α−アミノ酸残基としては、例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、リジン、ヒドロキシリジン、アルギニン、ヒスチジンなどのα−アミノ酸の残基を挙げることができる。ＸＡ又はＸＢが示すα−アミノ酸残基としては、好ましくは、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、リジン、又はアルギニンの残基が好ましく、セリン、トレオニン、システイン、又はリジンの残基がさらに好ましい。これらのα−アミノ酸残基における側鎖は置換基を有していてもよく、その場合、置換基の種類、個数、又は置換位置は特に限定されない。
【００２５】
本発明の化合物は少なくとも１個の不斉炭素を有しており（ただしグリシン残基を有する場合を除く）、置換基の種類によってはさらに１以上の不斉炭素を有する場合があることから、不斉炭素に基づく光学活性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体が存在する場合がある。不斉炭素に基づく光学活性体及びラセミ体、純粋な形態の任意の立体異性体、任意の立体異性体の混合物、ラセミ体などは、いずれも本発明の範囲に包含される。また、本発明の化合物はオレフィン性の二重結合を有する場合があるが、その配置はＥ又はＺのいずれであってもよく、両者の混合物として存在していてもよい。本発明の化合物は互変異性体として存在する場合もあるが、任意の互変異性体、又はそれらの混合物は本発明の範囲に包含される。さらに本発明の化合物は置換基の種類によっては塩を形成する場合があり、遊離形態の化合物又は塩の形態の化合物が水和物又は溶媒和物を形成する場合もあるが、このような場合も本発明の範囲に包含される。
【００２６】
以下に本発明の化合物の好ましい例を示すが、本発明の化合物はこれらの例に限定されることはない。
【化５】
【００２７】
【化６】
【００２８】
【化７】
【００２９】
【化８】
【００３０】
【化９】
【００３１】
【化１０】
【００３２】
【化１１】
【００３３】
【化１２】
【００３４】
【化１３】
【００３５】
【化１４】
【００３６】
【化１５】
【００３７】
【化１６】
【００３８】
【化１７】
【００３９】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物の一般的な合成法について説明するが、本発明の化合物の合成法はこれらに限定されるものではない。本発明の化合物の部分構造であるヨードフェニル基、とりわけトリヨードフェニル基に関する合成原料としては、通常市販されているものを使用してもよく、あるいは用途に応じて適宜合成してもよい。市販品としては、例えば２，４，６−トリヨードフェノールや安息香酸誘導体（例えば、３−ａｍｉｎｏ−２，４，６−ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ， ａｃｅｔｒｉｚｏｉｃ ａｃｉｄ， ｉｏｐｉｐａｍｉｄｅ， ｄｉａｔｒｉｚｏｉｃ ａｃｉｄ， ｈｉｓｔｏｄｅｎｚ， ５−ａｍｉｎｏ−２，４，６−ｔｒｉｉｏｄｏｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｃ ａｃｉｄ， ２，３，５−ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ， ｔｅｔｒａｉｏｄｏ−２−ｓｕｌｆｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）、ヨードパン酸（ｉｏｐａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）、ｉｏｐｈｅｎｏｘｉｃ ａｃｉｄなどを用いることができる。合成により入手する場合には、例えばＲｉｃｈａｒｄ Ｃ． Ｌａｒｏｃｋ著、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｏｒｇａｎｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ（ＶＣＨ）に記載の方法により、芳香環上にヨード原子を導入し、原料として用いることができる。
【００４０】
上記のトリヨードフェニル誘導体は通常、部分構造として水酸基やアミノ基、チオール基、カルボキシル基等を含有する場合があるが、これらの官能基と二価カルボン酸、ハロゲン化脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸等をエーテル連結／エステル連結／アミノ連結／アミド連結等を介して縮合し、トリヨードフェニル基を有するカルボン酸として合成中間体として用いることもできる。これらの工程では、必要な場合には保護基を用いることもできるが、この場合の保護基とは、例えば、Ｔ． Ｗ． Ｇｒｅｅｎ ＆ Ｐ． Ｇ． Ｍ． Ｗｕｔｓ著、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ ｓｏｎｃ， ｉｎｃ．）に記載のものを適宜選択して用いることができる。二価カルボン酸としては、例えば、ドデカン二酸、テトラデカン二酸、ドコサンサン二酸、４，４’−ジチオジブタン酸が挙げられ、ハロゲン化脂肪酸としては、例えば、１２−ブロモドデカン酸、１６−ブロモヘキサデカン酸が挙げられ、ヒドロキシ脂肪酸としては、例えば、１０−ヒドロキシデカン酸、１２−ヒドロキシドデカン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸等が挙げられるが、二価カルボン酸はこれらに限定されるものではない。
【００４１】
本発明の化合物はＬ１Ａ及びＬ２Ａ、又はＬ１Ｂ及びＬ２Ｂが示す二価の連結基として任意の長さのアルキレン鎖を有することができるが、適当な合成原料が存在しない場合には、適宜の原料化合物を用いて合成的に調製することができる。その合成法は、例えば、Ｗｉｔｔｉｇ反応やＢａｒｂｉｅｒ−Ｗｉｅｌａｎｄ分解、Ａｒｎｄｔ−Ｅｉｓｔｅｒｔ合成、アセチリドを用いる方法（例えば、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． ３５， ９５０１ （１９９４）に記載の方法を参照することができる）、クロロ蟻酸エステルを用いる方法（例えば、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ４２７ （１９８６）に記載された方法など）、マロン酸ジエチルを用いる方法（例えば、Ａｒｃｈ． Ｐｈａｒｍ． （Ｗｅｉｎｈｅｉｍ） ３２８， ２７１ （１９９５）に記載された方法など）等が挙げられるが、これらの方法は１例であり、これらに限定されるものではない。
【００４２】
本発明の化合物はリポソームの膜構成成分として用いることができ、該リポソームはＸ線造影剤の有効成分として利用できる。本発明の化合物を含むリポソームにおいて、本発明の化合物の含有量は、膜構成成分の全質量に対して１０から９０質量％程度、好ましくは１０から８０質量％、さらに好ましくは２０から８０質量％である。本発明の化合物は膜構成成分として１種類を用いてもよいが、２種類以上を組み合わせて用いてもよい。
【００４３】
リポソーム膜を構成する他の成分としては、リポソームの製造に通常用いられている脂質化合物をいずれも用いることが可能である。例えば、Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ， １５０（４）， ４４ （１９８２）、Ａｄｖ． ｉｎ Ｌｉｐｉｄ． Ｒｅｓ．， １６（１） １ （１９７８）、”ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮ ＬＩＰＯＳＯＭＥＳ”（Ｐ． Ｍａｃｈｙ， Ｌ． Ｌｅｓｅｒｍａｎ著、Ｊｏｈｎ Ｌｉｂｂｅｙ ＥＵＲＯＴＥＸＴ社）、「リポソーム」（野島、砂本、井上編、南江堂）等に記載されている。脂質化合物としてはリン脂質が好ましく、特に好ましいのはホスファチルジルコリン（ＰＣ）類である。ホスファチジルコリン類の好ましい例としては、ｅｇｇＰＣ、ジミリストリルＰＣ（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルＰＣ（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルＰＣ（ＤＳＰＣ）、ジオレイルＰＣ（ＤＯＰＣ）等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００４４】
本発明の好ましい態様では、リポソームの膜構成成分として、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリン（ＰＳ）からなる群から選ばれるリン脂質を用いることができ、より好ましい態様では両者を組み合わせて用いることができる。ホスファチジルセリンとしては、ホスファチジルコリンの好ましい例として挙げたリン脂質と同様の脂質部位を有する化合物が挙げられる。ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンとを組み合わせて用いる場合、ＰＣとＰＳの好ましい使用モル比はＰＣ：ＰＳ＝９０：１０から１０：９０の間であり、さらに好ましくは、３０：７０から７０：３０の間である。
【００４５】
本発明のリポソームの別の好ましい態様によると、膜構成成分として、ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンとを含み、さらにリン酸ジアルキルエステルを含むリポソームが挙げられる。リン酸ジアルキルエステルのジアルキルエステルを構成する２個のアルキル基は同一であることが好ましく、それぞれのアルキル基の炭素数は６以上であり、１０以上が好ましく、１２以上がさらに好ましい。アルキル基の炭素数の上限は特に限定されないが、一般的には２４個以下である。好ましいリン酸ジアルキルエステルの例としては、ジラウリルフォスフェート、ジミリスチルフォスフェート、ジセチルフォスフェート等が挙げられるが、これに限定されることはない。この態様において、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンの合計質量に対するリン酸ジアルキルエステルの好ましい使用量は１から５０質量％までであり、好ましくは１から３０質量％であり、さらに好ましくは１から２０質量％である。
【００４６】
ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、リン酸ジアルキルエステル、及び本発明の化合物を膜構成成分として含むリポソームにおいて、上記成分の好ましい質量比はＰＣ：ＰＳ：リン酸ジアルキルエステル：本発明の化合物が５〜４０質量％：５〜４０質量％：１〜１０質量％：１５〜８０質量％の間で選択することができる。
【００４７】
本発明のリポソームの構成成分は上記４者に限定されず、他の成分を加えることができる。その例としては、コレステロール、コレステロールエステル、スフィンゴミエリン、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ２２３， ４２ （１９８７）； Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ＵＳＡ， ８５， ６９４９ （１９８８）等に記載のモノシアルガングリオシドＧＭ１誘導体、Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．， ２１４５ （１９８９）； Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ， １１４８， ７７ （１９９２）等に記載のグルクロン酸誘導体、Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ， １０２９， ９１ （１９９０）； ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．， ２６８， ２３５ （１９９０）等に記載のポリエチレングリコール誘導体が挙げられるが、これに限られるものではない。
【００４８】
本発明のリポソームは、当該分野で公知のいかなる方法でもっても作成できる。作成法の例としては、先に挙げたリポソームの総説成書類の他、Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｂｉｏｅｎｇ．， ９， ４６７ （１９８０） 、”Ｌｉｏｐｓｏｍｅｓ”（Ｍ．Ｊ． Ｏｓｔｒｏ編， ＭＡＲＣＥＬＬ ＤＥＫＫＥＲ， ＩＮＣ．）等に記載されている。具体例としては、超音波処理法、エタノール注入法、フレンチプレス法、エーテル注入法、コール酸法、カルシウム融合法、凍結融解法、逆相蒸発法等が挙げられるが、これに限られるものではない。本発明のリポソームのサイズは、上記の方法で作成できるサイズのいずれであっても構わないが、通常は平均が４００ ｎｍ以下であり、２００ ｎｍ以下が好ましい。リポソームの構造は特に限定されず、ユニラメラ又はマルチラメラのいずれでもよい。また、リポソームの内部に適宜の薬物や他の造影剤の１種又は２種以上を配合することも可能である。
【００４９】
本発明のリポソームは造影剤、好ましくはＸ線造影剤として用いることができる。本発明の造影剤は、好ましくは非経口的に投与することができ、より好ましくは静脈内投与することができる。例えば、注射剤や点滴剤などの形態の製剤を凍結乾燥形態の粉末状組成物として提供し、用時に水又は他の適当な媒体（例えば生理食塩水、ブドウ糖輸液、緩衝液など）に溶解ないし再懸濁して用いることができる。本発明のリポソームをＸ線造影剤として用いる場合、投与量は該リポソームのヨード含有量が従来のＸ線造影剤のヨード含有量と同程度になるように適宜決定することが可能である。
【００５０】
いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、動脈硬化、もしくはＰＴＣＡ後の再狭窄等の血管疾患においては、血管の中膜を形成する血管平滑筋細胞が異常増殖をおこすと同時に内膜に遊走し、血流路を狭くすることが知られている。正常の血管平滑筋細胞が異常増殖を始めるトリガーはまだ完全に明らかにされていないが、マクロファージの内膜への遊走と泡沫化が重要な要因であることが知られており、その後に血管平滑細胞がフェノタイプ変換（収縮型から合成型）をおこすことが報告されている。
【００５１】
本発明のリポソームを用いると、泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞に対して本発明のヨード化合物を選択的に取りこませることができる。本発明のリポソームを用いると、公知技術であるサスペンジョン又はオイルエマルジョンを用いる場合と比べて、より多くのヨード化合物を血管平滑筋細胞に集積させることが可能である。この結果、本発明のリポソ−ムを用いると、病巣と非疾患部位の血管平滑筋細胞との間でコントラストの高いＸ線造影が可能である。従って、本発明の造影剤は、特に血管疾患の造影に好適に使用でき、例えば、動脈硬化巣やＰＴＣＡ後の再狭窄等の造影を行うことができる。
【００５２】
また、例えばＪ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２６５， ５２２６ （１９９０）に記載されているように、リン脂質よりなるリポソーム、特にＰＣとＰＳから形成されるリポソームが、スカベンジャーレセプターを介してマクロファージに集積しやすいことが知られている。従って本発明のリポソームを使用することにより、本発明のヨード化合物をマクロファージが局在化している組織又は疾患部位に集積させることができる。本発明のリポソームを用いると、公知技術であるサスペンジョン又はオイルエマルジョンを用いる場合に比べて、より多くのヨード化合物をマクロファージに集積させることが可能である。
【００５３】
マクロファージの局在化が認められ、本発明の方法で好適に造影可能な組織としては、例えば、血管、肝臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、腎臓上皮を挙げることができる。また、ある種の疾患においては、疾患部位にはマクロファージが集積していることが知られている。こうした疾患としては、腫瘍、動脈硬化、炎症、感染等を挙げることができる。従って、本発明のリポソームを用いることにより、これらの疾患部位を特定することができる。特に、アテローム性動脈硬化病変の初期過程において、スカベンジャーレセプターを介して変性ＬＤＬを大量に取り込んだ泡沫化マクロファージが集積していることが知られており（Ａｍ． Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ．， １０３， １８１（１９８１）、Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ５２， ２２３（１９８３））、このマクロファージに本発明のリポソームを集積化させてＸ線造影をすることにより、他の手段では困難な動脈硬化初期病変の位置を特定することが可能である。
【００５４】
本発明のリポソームを用いた造影方法は特に限定されない。例えば、通常のＸ線造影剤を用いた造影方法と同様にしてＸ線を照射することにより造影を行うことができる。また、ヨードの放射線同位体を含む本発明の化合物を用いてリポソームを形成し、該リポソームをシンチグラフィー用造影剤として用いることにより、核医学的方法による造影を行うことも可能である。ヨードの放射性同位体は特に限定されないが、好ましい例としては１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉおよび１３１Ｉが挙げられ、特に好ましい例としては１２３Ｉおよび１２５Ｉを挙げることができる。放射性ラベル化合物の合成は、対応する非ラベル化合物を合成した後に、Ａｐｐｌ． Ｒａｄｉａｔ． Ｉｓｏｔ．， ３７（８）， ９０７ （１９８６）等に記載されている既知の方法で実施することができる。疎水性化合物がトリヨードベンゼン誘導体である場合、同一ベンゼン環上の３個のヨード原子のうち少なくとも１個が放射線同位体化されていることが好ましい。好ましくは２個以上が放射線同位体化されていることであり、最も好ましいのは３個が同一の放射線同位体でラベル化されていることである。
【００５５】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。実施例中の化合物番号は、上記の好ましい化合物として示した化合物の番号に対応させてある。実施例中の化合物の構造はＮＭＲスペクトルにより確認した。
例１
ヘキサデカン二酸１０．０ｇと２，４，６−トリヨードフェノール８．３ｇ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン０．２ｇをジクロロメタン２００ｍＬに加え、さらにエチルジメチルアミノプロピルカルボジイミド４．０ｇを加えて、室温で１日攪拌した。不溶物を濾別した後、得られた濾液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。ヘキサデカン二酸モノ２，４，６−トリヨードフェニルを３．９ｇ（収率３０％）で得た。
ヘプタデカン二酸より、ヘキサデカン二酸モノ２，４，６−トリヨードフェニルと同様の手法でヘプタデカン二酸モノ２，４，６−トリヨードフェニルを得た。
【００５６】
１２−ブロモドデカン酸４．８ｇと２，４，６−トリヨードフェノール９．１ｇをエタノール７０ｍＬに加え、還流して溶解させた。水酸化カリウム２．２ｇを加えてさらに１２時間攪拌を続けた。得られた沈殿を濾別、エタノールで洗浄した後、クロロホルムと１規定塩酸を加えて、クロロホルムで２回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、除媒し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して１２−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ドデカン酸を７．０ｇ（収率６０％）得た。
１６−ブロモヘキサデカン酸より、１２−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ドデカン酸の合成法と同様に１６−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ヘキサデカン酸を合成した。
また１１−ブロモウンデカン酸より、１２−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ドデカンの合成法と同様に１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカン酸を合成した。
【００５７】
７−ブロモヘプタン酸エチル４．７ｇと２，４，６−トリヨードフェノール２．４ｇをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２０ｍＬに加え、炭酸カリウム２．１ｇを加えて室温で１日攪拌した。水を加えて酢酸エチルで２回抽出し、有機層を３回水洗し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、除媒した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して７−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ヘプタン酸エチルを６．０ｇ（収率９６％）得た。
【００５８】
７−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ヘプタン酸エチル４．０ｇを９５％エタノール３０ｍＬに加え、還流して溶解した後、水酸化ナトリウム０．５ｇを加えてさらに１．５時間還流を続けた。得られた結晶を濾別、エタノールで洗浄した後、ジクロロメタンと１規定塩酸を加えて、ジクロロメタンで２回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、除媒し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して７−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ヘプタン酸を３．４ｇ（収率９０％）得た。
【００５９】
９−ヒドロキシノナン酸メチル２．１ｇとピリジン１．８ｇをジクロロメタン２０ｍＬに加え、０℃で攪拌し、メタンスルホニルクロリド１．３ｍＬを加えて、徐々に室温まで昇温し、１日攪拌した。水を加えた後、ジクロロメタンで２回抽出し、得られた有機層を１規定塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、除媒し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して９−（メタンスルホニルオキシ）ノナン酸メチルを２．１ｇ（収率６８％）得た。
９−（メタンスルホニルオキシ）ノナン酸メチルを用いて、７−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ヘプタン酸と同様の手法で９−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ノナン酸を得た。
【００６０】
１５−ペンタデカラクトン２５．６ｇをメタノール１５０ｍＬに加え、さらに２８％ナトリウムメトキシド溶液を５０ｍＬ加えて３時間還流した。１規定塩酸を加えて酢酸エチルで３回抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、除媒した。１５−ヒドロキシペンタデカン酸メチルを２８．５ｇ（収率９８％）得た。１５−ヒドロキシペンタデカン酸メチルを用いて、９−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ノナン酸と同様の手法で１５−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ペンタデカン酸を得た。
【００６１】
トリデカン二酸を用いて、Ｓｙｎｔｈ． Ｃｏｍｍｕｎ．， １７， １３３９ （１９８７）に記載の方法に準拠して、トリデカン二酸モノメチルを得た。さらに、トリデカン二酸モノメチルを用いて、Ａｕｓｔ． Ｊ． Ｃｈｅｍ．， ４８， １８９３ （１９９５）に記載の方法に準拠して、１３−ヒドロキシトリデカン酸メチルを得た。
１３−ヒドロキシトリデカン酸メチルを用いて、９−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ノナン酸と同様の手法で１３−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）トリデカン酸を得た。
テトラデカン二酸を用いて、１３−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）トリデカン酸と同様の手法で１４−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）テトラデカン酸を得た。
【００６２】
エイコサン二酸を用いて、１３−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）トリデカン酸と同様の手法で２０−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）エイコサン酸を得た。
１５−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ペンタデカン酸とマロン酸ジエチルを用いて、Ａｒｃｈ． Ｐｈａｒｍ． （Ｗｅｉｎｈｅｉｍ） ３２８， ２７１ （１９９５）の手法に準拠して２炭素増炭し、１７−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ヘプタデカン酸を得た。
１７−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ヘプタデカン酸を用いて、１７−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ヘプタデカン酸と同様の手法で、１９−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ナノデカン酸を得た。
１９−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ナノデカン酸を用いて、１７−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ヘプタデカン酸と同様の手法で、２１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ヘンエイコサン酸を得た。
【００６３】
２，４，６−トリヨードフェノール４７．１０ｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）５００ｍｌ中、炭酸カリウム１３．９８ｇを加えて１時間室温で撹拌した後に１１−ブロモウンデカノール２５．００ｇを加えた。反応液を５０℃に加温してさらに５時間攪拌した後に室温まで放冷した。反応液を水２０００ｍｌに注ぎ、生じた白色結晶をろ過した。得られた結晶をメタノールで洗浄し、再度濾過し乾燥することで１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカノール５７．５１ｇ（収率９０％）の白色結晶を得た。
【００６４】
１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカノール１０．０８ｇを塩化メチレン１００ｍｌに溶解し、トリエチルアミン２．１８ｍｌ、メタンスルホニルクロリド１．８２ｍｌを順次加え室温で攪拌した。反応の進行を薄層クロマトグラフィーで確認しながら、原料が消失するまで適宜メタンスルホニルクロリドを添加した。原料の消失を確認した後、反応液を水で洗浄し（５０ｍｌ×２）、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過、減圧濃縮して得られる結晶を酢酸エチル／ヘキサンで再結晶し、ろ過・乾燥することで１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカニルメタンスルホネート９．４０ｇ（収率８３％）の白色結晶を得た。
【００６５】
１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカニルメタンスルホネート９．０５ｇおよびフタルイミドカリウム２．８０ｇをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１００ｍｌに加え、反応液を６０℃に加温して３時間攪拌した。室温まで放冷した後に反応液を酢酸エチルで希釈し、水および食塩水で洗浄して硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過・減圧濃縮して得られる生成物を酢酸エチル／ヘキサンで再結晶し、ろ過・乾燥することで１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカニルフタルイミド６．６７ｇ（収率６９％）の白色結晶を得た。
【００６６】
１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカニルフタルイミド１．５２ｇをメタノール：ジメチルスルキシド（２：１）の混合溶媒４５ｍｌに加え１００℃に加温する。反応の進行を薄層クロマトグラフィーで確認しながら、原料が消失するまで適宜ヒドラジン１水和物を添加した。原料の消失を確認した後、反応液を水１５０ｍｌに注ぎ、クロロホルムで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄して硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過・減圧濃縮して減圧乾燥し１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカニルアミンの白色固体を得た。この白色固体とＺ−Ｌ−セリン５００ｍｇをジメチルスルホキシド（５００ｍｌ）に溶解し、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート８６０ｍｇを加え、さらにトリエチルアミン０．２７ｍｌを加えて室温で１時間攪拌した。反応液を水１００ｍｌに注ぎ、生じた白色結晶をろ過・乾燥してＺ−Ｌ−セリン １１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカニルアミド１．５２ｇ（収率８８％、２段階）の白色結晶を得た。
【００６７】
Ｚ−Ｌ−セリン １１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカニルアミド５００ｍｇをアセトニトリル２０ｍｌおよび塩化メチレン５ｍｌの混合溶媒に溶解し、ヨウ化トリメチルシラン０．３３ｍｌを加えて室温で約３時間攪拌した。反応液を飽和重曹水約２０ｍｌに注ぎ、クロロホルムで抽出して水層を飽和食塩水で洗浄して硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過・減圧濃縮して得られる粗結晶を酢酸エチルで洗浄し、ろ過・乾燥することでＬ−セリン １１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカニルアミド１５３．７ｍｇ（収率３６％）の白色結晶を得た。
【００６８】
化合物２−９−１１：
Ｌ−セリン １１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカニルアミド１５３．７ｍｇをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１０ｍｌに溶解し、１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカン酸１４５．７ｍｇ、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート９４．５ｍｇ、トリエチルアミン０．０３ｍｌを順次加えて室温で１時間攪拌した。反応液を水に注ぎ、クロロホルムで抽出して有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過・減圧濃縮して得られる粗結晶を酢酸エチル／ヘキサンで再結晶することで目的化合物の白色結晶を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ：８．０４（ｓ， ４Ｈ）， ６．８１（ｔ， １Ｈ， ＮＨ）， ６．６０（ｄ， １Ｈ， ＮＨ）， ４．３５（ｍ，１Ｈ）， ４．１６（ｄ， １Ｈ）， ３．９３（ｔ， ４Ｈ）， ３．６０（ｍ， １Ｈ）， ３．４８（ｍ， １Ｈ）， ３．２３（ｑ， ２Ｈ）， ２．２５（ｔ， ２Ｈ）， １．８９−１．２５（ｍ， ３４Ｈ）
【００６９】
化合物３−１−１：
テトラヒドロフラン３−カルボン酸２７．１ｍｇとＮ−［１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカンカルボニル］−セリン １１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカニルアミド３０１．３ｍｇを塩化メチレン１５ｍｌに溶解し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩５０．７ｍｇおよび４−ジメチルアミノピリジン２．７ｍｇを加え室温で２４時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで生成することにより目的化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ：８．０４（ｓ， ４Ｈ）， ６．３１（ｍ， １Ｈ）， ６．１５（ｍ， １Ｈ）， ４．６５（ｑ， １Ｈ）， ４．４１（ｍ， １Ｈ）， ４．３０（ｍ， １Ｈ）， ３．９３（ｔ， ４Ｈ）， ３．８２（ｍ， ２Ｈ）， ３．２４（ｍ， ２Ｈ）， ３．１１（ｍ， １Ｈ）， ２．２３（ｔ， ２Ｈ）， ２．１８（ｍ， ２Ｈ）， １．８９−１．２５（ｍ， ３４Ｈ）
【００７０】
化合物３−７−１：
１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカン酸１５０．７ｍｇおよびＮ−［１１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカンカルボニル］−セリン １１−（２，４，６−トリヨードフェノキシ）ウンデカニルアミド２９５．８ｍｇを塩化メチレン１５ｍｌに溶解し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩５０．０ｍｇおよび４−ジメチルアミノピリジン２．５ｍｇを加え室温で２４時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで生成することにより目的化合物を得た。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｐｏｓｉ）： ２００５
【００７１】
試験例１：血管平滑筋細胞におけるヨード原子の取り込み量
下記に示した割合でジ・パルミトイル ＰＣ（フナコシ社製、Ｎｏ．１２０１−４１−０２２５）、ジ・パルミトイル ＰＳ（フナコシ社製、Ｎｏ．１２０１−４２−０２３７）をＪ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２５（１２）， １５００ （１９８２）記載の方法で、本発明のヨード化合物とナス型フラスコ内でクロロホルムに溶解して均一溶液とした後、溶媒を減圧で留去してフラスコ底面に薄膜を形成した。この薄膜を真空で乾燥後、０．９％生理食塩水（光製薬社製、Ｎｏ５１２）を適当量加え、超音波照射（Ｂｒａｎｓｏｎ社製、Ｎｏ．３５４２プローブ型発振器、０．１ｍＷ）を氷冷下５分実施することにより、均一なリポソーム分散液を得た。得られた分散液の粒径をＷＢＣアナライザー（日本光電社製、Ａ−１０４２）で測定した結果、粒子径は４０から６５ｎｍであった。この方法により調製した下記リポソーム製剤をＷＯ ０１／８２９７７に記載の血管平滑筋細胞とマクロファージとの混合培養系に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間培養した後、血管平滑筋細胞に取り込まれたヨード化合物を定量した。このように本発明の化合物は効率よく血管平滑筋細胞に取り込まれ、Ｘ線造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有することが明らかである。
【００７２】
【表１】
【００７３】
試験例２：マウス３日間連続投与毒性試験
ＩＣＲマウス雄６週齢（日本チャールスリバー）を購入し、１週間の検疫期間の後、クリーン動物舎内（空調：へパフィルター クラス１０００、室温：２０〜２４℃ 湿度：３５％〜６０％）で１週間馴化した。その後、ＭＴＤ値を求めるため、尾静脈よりリポソーム製剤を投与した。リポソーム製剤は、生理食塩水（光製薬社製）又はグルコース溶液（大塚製薬社製）のいずれかを溶媒として投与した。次に求められたＭＴＤ値をもとに、その１／２量を３日間、尾静脈より３日間連続で投与した（ｎ＝３匹とする）。症状観察は各投与後６時間までとし、投与終了後剖検を行ない、主要臓器について所見を取ったところ、異常は認められなかった。
化合物：ＭＴＤ（ｍｇ／ｋｇ） ２−９−１１：４００ ｍｇ／ｋｇ、３−１−１：２００ ｍｇ／ｋｇ、３−７−１：２００ ｍｇ／ｋｇ
【００７４】
試験例３：Ｓ９の作製及び分解試験
ＳＤラット雄６週齢（日本チャールスリバー社製）を購入し１週間馴化した。１週間馴化後、体重を測定し、断頭放血した。肝臓を摘出し、冷却した０．１５Ｍ ＫＣｌで３回洗浄した。洗浄後、肝臓の湿重量を測定し、その重量の３倍の冷却した０．１５Ｍ ＫＣｌを加え、ホモジナイザーに移した。氷冷中でホモジネイトし、その後、ホモジネイトを９０００ｇで１０分間冷却遠心した。この上清をＳ９と呼び、−８０℃以下で保存した。
【００７５】
保存してあるＳ９を流水中で溶解した。溶解したＳ９ ０．１ｍｌに、０．４Ｍ ＭｇＣｌ２ ０．０２ｍｌ、１．６５Ｍ ＫＣｌ ０．０２ｍｌ、０．２Ｍ Ｎａりん酸緩衝液（ｐＨ ７．４） ０．５ｍｌを加え、グルコース６りん酸（オリエンタル酵母社製）、ＮＡＤＰＨ（オリエンタル酵母社製）、ＮＡＤＨ（オリエンタル酵母社製）を４μＭになる様に添加し蒸留水を加え、全量を１ｍｌとした（これをＳ９Ｍｉｘと呼ぶ）。Ｓ９Ｍｉｘ １ｍｌに被験物質を５μｇ／ｍｌになる様添加し、３７℃で往復振盪した。Ｓ９Ｍｉｘ中の被験物質量（未変化体）を経時でＨＰＬＣを用い測定した。被験物質はＤＭＳＯ（和光純薬社製）にて予め溶解した。下記に示す結果は、Ｓ９Ｍｉｘに添加直後の未変化体量を１００とし、３０分後の未変化体量をその百分率に直して表記した。２−９−１１：６０ ｍｇ／ｋｇ、３−１−１：５０ ｍｇ／ｋｇ、３−７−１：８０ ｍｇ／ｋｇ
本発明の化合物はＳ９分解試験において効率的に分解されることが明らかであり、Ｘ線造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有することが明らかである。
【００７６】
【発明の効果】
本発明の化合物は、Ｘ線造影剤及びシンチグラフィー造影剤のためのリポソームの膜構成分として優れた性質を有しており、この化合物を含むリポソームを用いてＸ線造影することにより血管疾患の病巣などを選択的に造影できる。また、本発明の化合物は造影後に肝臓で代謝され、体内に蓄積しないという優れた性質を有する。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an α-amino acid derivative having an iodoaryl group. The present invention also relates to a liposome containing this compound as a membrane constituent and an X-ray contrast medium containing the liposome.
[0002]
[Prior art]
In the field of X-ray angiography using an iodine compound, there is a diagnostic technique in which a blood flow is imaged by administering a water-soluble iodine contrast agent, and a portion where the flow is stagnant is found. This method is a method in which the iodinated contrast medium is in the blood stream and detects changes in the blood flow inside the blood vessel, so that it can be distinguished from normal tissue compared to the case where the iodinated contrast medium is localized in the focal cells. Hard to put on. For this reason, this method can usually detect only a lesion in which stenosis has progressed by 50% or more, and it is difficult to detect the lesion before the onset of an ischemic disease.
[0003]
Separately, attempts have been reported to formulate a hydrophobic iodine contrast agent or a hydrophilic contrast agent and selectively accumulate it at a target disease site (International Publication WO95 / 19186, WO95 / 21631, WO89). / 00812, British Patent No. 867650, International Publication WO96 / 00089, WO94 / 19025, WO96 / 40615, WO95 / 2295, WO98 / 41239, WO98 / 23297, WO99 / 02193, WO97 / 06132, U.S. Pat. Nos. 4,192,859, 4,567,034, 4,925,649, Pharm. Res., 6 (12), 1011 (1989), Pharm. Res., 16 (3), 420 (1999), J. Pharm.Sci., 72 (8) , 898 (1983), Invest. Radiol., 18 (3), 275 (1983)). For example, Pharm. Res. , 6 (12), 1011 (1989) discloses that the iodine compound accumulates at the arteriosclerosis site of an experimental animal by injecting an oil droplet dispersion of Cholesteryl Iopanoate, which is a hydrophobic compound. . Pharm. Res. , 16 (3), 420 (1999) discloses that the iodo compound accumulates at an arteriosclerosis site of an experimental animal by administering Cholesteryl Iopanoate into acetyl LDL and administering it.
[0004]
In addition, J.H. Pharm. Sci. 72 (8), 898 (1983) discloses an example of X-ray imaging of the liver and spleen by injecting a Cholesteryl Iopanoate oil droplet dispersion. U.S. Pat. No. 4,567,034 discloses a method for encapsulating a diatrotic acid ester in a liposome and selectively imaging the liver and spleen. International publications WO96 / 28414 and WO96 / 00089 disclose contrast agents for imaging vascular pools and lymphatic systems. However, these preparation methods are not sufficient in efficiency and selectivity for the purpose of selectively imaging vascular diseases, and no examples of imaging vascular diseases by X-ray irradiation have been reported.
[0005]
On the other hand, a triglyceride compound composed of an alkyl carboxylic acid containing two 3-amino-2,4,6-triiodophenyl groups and a saturated / unsaturated fatty acid is formulated as an oil droplet dispersion or a Tween 20 dispersion. , A method of using for the imaging of liver and Blood-pool has been reported (Radiology 216 (3), 865 (2000); Invest. Radiol., 35 (3), 158 (2000); International Publication WO 98/46275 J. Pharm.Sci., 85 (9), 908 (1996); Pharm.Res., 13 (6), 875 (1996); International Publication WO95 / 31181; J. Med.Chem., 38 (4) , 636 (1995); Invest. Radio. , 29 (SUPPL. 2), S284 (1994); International Publication WO 94/19025; U.S. Pat. No. 4,873,075; Appl. Radiol. Isot., 37 (8), 907 (1986), J. Med. 29 (12), 2457 (1986)).
[0006]
In International Publication WO01 / 93918, an example of performing radiographic imaging of a site of arteriosclerotic lesion by administering a hydrophobic and hydrolysis-resistant radioiodide contrast agent into a microemulsion formulation or incorporating it into acetyl LDL to an experimental animal Is disclosed. In addition, it is reported that the above-mentioned Cholesteryl Iopanoate is not decomposed in vivo and accumulates in living organs, particularly in the liver [J. Med. Chem. , 25, 1500 (1982)]. The property of such a compound indicates that it stays in the living body for a long time. For example, it is not a preferable property when considering the use for diagnosis such as an X-ray contrast agent.
[0007]
From the compound point of view, the above-mentioned U.S. Pat. Med. Chem. 29 (12), 2457 (1986), a diacyl-1,3-glyceride compound comprising an alkylcarboxylic acid containing two 3-amino-2,4,6-triiodophenyl groups and an oxide thereof. There is a description. However, uses other than the use as a synthetic intermediate are not shown.
[Patent Document 1] US Pat. No. 4,873,075 [Non-Patent Document 1] Med. Chem. , 29 (12), 2457 (1986)
[0008]
SUMMARY OF THE INVENTION Problems to be Solved by the Invention and Means for Solving the Problems
An object of the present invention is to provide an iodine compound suitable for a liposome-containing iodine contrast agent for selectively imaging a lesion. As a result of studies conducted by the present inventors to solve the above problems, α-amino acid derivatives having two iodoaryl groups have excellent properties as constituents of liposomes as X-ray contrast agents. The present inventors have found that a lesion of a vascular disease can be selectively imaged by X-ray imaging using a liposome containing this compound. At the same time, it was found that this compound is metabolized in the liver after imaging and does not accumulate in the body. The present invention has been completed based on the above findings.
[0009]
That is, according to the present invention, the following general formula (I):
[Chemical 3]
[0010]
Further, according to the present invention, the following general formula (II):
[Formula 4]
(In the formula, Ar 1B and Ar 2B each independently represent an aryl group having at least one iodine atom as a substituent; L 1B and L 2B each independently represent a divalent group consisting of 7 or more atoms in the main chain. X B represents an α-amino acid residue, but the carbon atom of the carbonyl group bonded to the α-carbon of the α-amino acid residue is represented by —NH—L 2B —Ar 2B Or a salt thereof is provided. According to a preferred embodiment of the present invention, there is provided the above compound or a salt thereof, wherein Ar 1B and Ar 2B are each independently a phenyl group having at least three iodine atoms as substituents.
[0011]
From another point of view, the present invention provides a liposome comprising the compound represented by the above general formula (I) or (II) or a salt thereof as a membrane constituent. According to the preferable aspect of this invention, said liposome containing the combination of a phosphatidylcholine and a phosphatidylserine as a membrane component is provided. The present invention also provides use of the compound represented by the general formula (I) or (II) for the production of the liposome.
[0012]
The present invention also provides an X-ray contrast medium comprising the above-described liposome. According to a preferred embodiment of the present invention, the above X-ray contrast medium used for imaging of vascular diseases; the above-mentioned X-ray contrast medium used for imaging of vascular smooth muscle cells abnormally proliferated under the influence of foamed macrophages; The above X-ray contrast agent used for imaging a tissue or a diseased site; the tissue where macrophages are localized is selected from the group consisting of liver, spleen, alveoli, lymph nodes, lymphatic vessels, and kidney epithelium An X-ray contrast agent is provided, wherein the disease site where the macrophages are localized is selected from the group consisting of a tumor, an inflammatory site, and an infected site.
[0013]
Furthermore, the use of the above-mentioned compound or a salt thereof for the production of the above-mentioned X-ray contrast agent; an X-ray contrast method, wherein a liposome containing the above-mentioned compound as a membrane constituent is administered to mammals including humans after X A method comprising the step of irradiating a ray; a method for imaging a lesion of a vascular disease, comprising the step of irradiating a mammal including a human with a liposome comprising the above compound as a membrane constituent and then irradiating with X-rays Is provided by the present invention.
[0014]
Furthermore, the present invention provides a liposome containing as a membrane component the above compound or salt thereof in which at least one iodo atom is a radioisotope, and a scintigraphic contrast agent containing the liposome. According to a preferred embodiment of the present invention, the scintigraphic contrast agent used for imaging of vascular smooth muscle cells abnormally proliferated under the influence of foamed macrophages; the scintillation used for imaging tissue or a diseased site where macrophages are localized The above-mentioned scintigraphic contrast agent selected from the group consisting of blood vessels, liver, spleen, alveoli, lymph nodes, lymph vessels, and kidney epithelium; tumor, arteriosclerotic lesion, inflammatory site, and The above scintigraphic contrast agent for use in imaging a diseased site selected from the group consisting of infected sites is provided.
[0015]
A scintigraphic imaging method using the above-mentioned compound or a salt thereof for the production of the above-mentioned scintigraphic contrast agent, wherein the liposome containing the above-mentioned compound as a membrane constituent is administered to mammals including humans, and then the liposome A method comprising the step of detecting radiation generated from a vascular disease; a method for imaging a lesion of a vascular disease, wherein the liposome is administered to a mammal including a human after the liposome containing the compound as a membrane constituent is administered. A method comprising the step of detecting is provided by the present invention.
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
In the aryl group substituted with at least one iodine atom represented by Ar 1A and Ar 2A, the number of iodine atoms on the aryl ring is preferably 2 or more, and particularly preferably 3 or more. The upper limit of the number of iodine atoms is not particularly limited, but is usually 5 or less. The kind of aryl group represented by Ar 1A and Ar 2A is not particularly limited, but is preferably an anthracene group, a naphthalene group, or a phenyl group, and most preferably a phenyl group. When Ar 1A and Ar 2A represent a mono- or diiodophenyl group, the substitution position of the iodine atom on the benzene ring is not particularly defined. In the case where Ar 1A and Ar 2A represent a triiodophenyl group, the substitution positions of three iodine atoms on the benzene ring are not particularly defined. For example, “positions 2, 4, 6”, “position 2, 3, 5” , “3,4,5-position” substitution is preferred, more preferably “2,4,6-position” substitution, “2,3,4-position” substitution, among which “2,4,6-position” substitution is the most preferable. The aryl group substituted with at least one iodine atom represented by Ar 1B and Ar 2B is the same as the aryl group represented by Ar 1A and Ar 2A described above.
[0017]
The aryl group represented by Ar 1A and Ar 2A may have a substituent on the ring. There are no particular limitations on the type, number, and position of substituents present on the ring. It is also preferred when the aryl ring represented by Ar 1A and Ar 2A does not have a substituent other than an iodine atom. The same applies to the aryl group represented by Ar 1B and Ar 2B .
[0018]
In this specification, when “substituted or unsubstituted” or “may have a substituent” for a certain functional group, the functional group may have one or more substituents. Although shown, the number of substituents to be bonded, the position of substitution, and the type are not particularly limited unless otherwise specified. When a certain functional group has two or more substituents, they may be the same or different. In this specification, when a certain functional group has a substituent, examples of the substituent include a halogen atom (in the present specification, “halogen atom” may be any of fluorine, chlorine, bromine, or iodine). An alkyl group (in this specification, the term “alkyl group” may be linear, branched, cyclic, or a combination thereof, and the cyclic alkyl group may be a polycyclic alkyl such as a bicycloalkyl group. The same applies to the alkyl moiety of other substituents including an alkyl moiety), alkenyl groups (including cycloalkenyl groups and bicycloalkenyl groups), alkynyl groups, aryl groups, heterocyclic groups, cyano groups, hydroxyl groups Group, nitro group, carboxyl group, alkoxy, aryloxy group, silyloxy group, heterocyclic oxy group, acyloxy group Carbamoyloxy group, alkoxycarbonyloxy group, aryloxycarbonyloxy group, amino group (including anilino group), acylamino group, aminocarbonylamino group, alkoxycarbonylamino group, aryloxycarbonylamino group, sulfamoylamino group, alkyl And arylsulfonylamino group, mercapto group, alkylthio group, arylthio group, heterocyclic thio group, sulfamoyl group, sulfo group, alkyl and arylsulfinyl group, alkyl and arylsulfonyl group, acyl group, aryloxycarbonyl group, alkoxycarbonyl group, Examples thereof include carbamoyl group, aryl and heterocyclic azo group, imide group, phosphino group, phosphinyl group, phosphinyloxy group, phosphinylamino group and silyl group.
[0019]
When the aryl group represented by Ar 1A and Ar 2A has a substituent, examples of the preferred substituent include a halogen atom, an alkyl group, a cyano group, a hydroxyl group, an alkoxy group, an amino group, an acylamino group, an acyl group, and a carboxyl group. , An alkoxycarbonyl group, and a carbamoyl group. The same applies to the aryl groups represented by Ar 1B and Ar 2B .
[0020]
L 1A and L 2A are at least one hetero atom in the main chain (in the present specification, the term “hetero atom” means any atom other than a carbon atom such as a nitrogen atom, an oxygen atom, or a sulfur atom) And a divalent linking group having a main chain composed of 7 or more atoms. In this specification, the “main chain” means a group of atoms connecting a group represented by X—CO— and Ar 1A , or connecting X and Ar 2A in a minimum number. The linking group may be a saturated group, but may contain an unsaturated bond. The number of heteroatoms in the main chain is not particularly limited, but is preferably 5 or less, more preferably 3 or less, and most preferably 1. The position of the hetero atom in the main chain is also not particularly defined, but when the number of hetero atoms is 1, it is preferably within 5 atoms from the Ar group. The linking group may contain a functional group containing a carbon atom adjacent to a hetero atom as a partial structure. Examples of the functional group containing an unsaturated moiety and / or a hetero atom contained in the linking group include an alkenyl group, an alkynyl group, and an ester group (including carboxylic acid ester, carbonate ester, sulfonate ester, and sulfinate ester), Examples include amide groups (including carboxylic acid amides, urethanes, sulfonic acid amides, and sulfinic acid amides), ether groups, thioether groups, disulfide groups, amino groups, and imide groups. The functional group may further have a substituent, and a plurality of these substituents may be present in each of L 1A and L 2A . When two or more exist, they may be the same or different.
[0021]
The partial structure of the divalent linking group represented by L 1A and L 2A is preferably an alkenyl group, ester group, amide group, ether group, thioether group, disulfide group or amino group, more preferably an alkenyl group, An ester group and an ether group. The hetero atom contained in the main chain is preferably an oxygen atom or a sulfur atom, and most preferably an oxygen atom. The number of carbon atoms of L 1A and L 2A is preferably 7 to 30, more preferably from 10 to 25, and most preferably 10 to 20. L 1A and L 2A may have a substituent. When it has a substituent, a halogen atom or an alkyl group is preferable. Moreover, the case of no substitution is also preferable.
[0022]
Although the preferable aspect of L1A and L2A is specifically illustrated below, the coupling group in the compound of this invention is not limited to these. In the following examples, all are bonded to the Ar 1A or Ar 2A group by the bond shown on the right side. — (CH 2 ) n —O—, — (CH 2 ) m —S—CH 2 —, — (CH 2 ) m — (C═O) O—, — (CH 2 ) m — (C═O) NH—, — (CH 2 ) m —O (C═O) —, — (CH 2 ) m —NH (C═O) —, — (CH 2 ) S —NH (C═O) — (CH 2 ) 2 —O—, —CH 2 —CH═CH— (CH 2 ) t —O—, — (CH 2 ) m —CH (CH 3 ) —O— [n represents an arbitrary integer of 10 to 20. M represents any integer from 9 to 19; s represents any integer from 8 to 18; t represents any integer from 7 to 17] A divalent linkage represented by L 1B and L 2B ; The group is the same as the linking group described for L 1A and L 2A above, and the preferred linking group is also the same.
[0023]
In the present specification, the “α-amino acid residue” means an amino acid (α-amino acid) in which an amino group is directly bonded to a carbon to which a carboxyl group is bonded, one hydrogen atom from the amino group, and It means the remaining divalent group obtained by removing the hydroxyl group from the carboxyl group. The X A represents α- amino acid residue, and then amide bond at the left end of the carbonyl carbon of the group in which the nitrogen atoms other than hydrogen atom from the amino group is represented by -CO-L 1A -Ar 1A, X B In the α-amino acid residue represented by the above formula, the carbon atom of the remaining carbonyl group (—CO) obtained by removing the hydroxyl group from the carboxyl group is bonded to the nitrogen atom at the left end of the group represented by —NH—L 2B —Ar 2B doing.
[0024]
The α-amino acid may be either an L-amino acid or a D-amino acid, or a mixture of both. Examples of α-amino acid residues include glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, phenylalanine, tryptophan, methionine, serine, threonine, cysteine, tyrosine, asparagine, aspartic acid, glutamine, glutamic acid, lysine, hydroxylysine, arginine, Mention may be made of α-amino acid residues such as histidine. The α-amino acid residue represented by X A or X B is preferably a serine, threonine, cysteine, tyrosine, asparagine, aspartic acid, glutamine, glutamic acid, lysine or arginine residue, and serine, threonine, cysteine Or a residue of lysine is more preferred. The side chain in these α-amino acid residues may have a substituent, and in that case, the type, number, or substitution position of the substituent is not particularly limited.
[0025]
Since the compound of the present invention has at least one asymmetric carbon (except when it has a glycine residue), depending on the type of substituent, it may further have one or more asymmetric carbons. There may be stereoisomers such as optically active or diastereoisomers based on asymmetric carbons. Optically active forms and racemates based on asymmetric carbons, any stereoisomers in pure form, mixtures of any stereoisomers, racemates and the like are all included in the scope of the present invention. Moreover, although the compound of this invention may have an olefinic double bond, the arrangement | positioning may be either E or Z and may exist as a mixture of both. The compounds of the invention may exist as tautomers, but any tautomer, or mixture thereof, is included within the scope of the invention. Furthermore, the compound of the present invention may form a salt depending on the type of substituent, and the free form compound or the salt form compound may form a hydrate or solvate. Are also included within the scope of the present invention.
[0026]
Although the preferable example of the compound of this invention is shown below, the compound of this invention is not limited to these examples.
[Chemical formula 5]
[0027]
[Chemical 6]
[0028]
[Chemical 7]
[0029]
[Chemical 8]
[0030]
[Chemical 9]
[0031]
[Chemical Formula 10]
[0032]
Embedded image
[0033]
Embedded image
[0034]
Embedded image
[0035]
Embedded image
[0036]
Embedded image
[0037]
Embedded image
[0038]
Embedded image
[0039]
The general synthesis method of the compound represented by the general formula (I) of the present invention will be described, but the synthesis method of the compound of the present invention is not limited thereto. As a raw material for the synthesis of the iodophenyl group, particularly the triiodophenyl group, which is a partial structure of the compound of the present invention, commercially available materials may be used, or they may be appropriately synthesized depending on the application. Examples of commercially available products include 2,4,6-triiodophenol and benzoic acid derivatives (eg, 3-amino-2,4,6-triiobenzoic acid, aceticoacid, iopamamide, diatrotic acid, histodenz, 5-amino-2). 4,6-triiodophthalic acid, 2,3,5-triiodobenzoic acid, tetrado-2-sulfobenzoic acid, iodopanic acid, iophenic acid, and the like can be used. When obtained by synthesis, for example, Richard C. et al. An iodo atom can be introduced onto an aromatic ring and used as a raw material by the method described by Larock, Comprehensive organic transformations (VCH).
[0040]
The above triiodophenyl derivatives usually contain a hydroxyl group, amino group, thiol group, carboxyl group or the like as a partial structure, but these functional groups and divalent carboxylic acids, halogenated fatty acids, hydroxy fatty acids, etc. are etherified. It can also be condensed as a linkage / ester linkage / amino linkage / amide linkage, etc. and used as a synthetic intermediate as a carboxylic acid having a triiodophenyl group. In these steps, if necessary, a protecting group can be used. In this case, examples of the protecting group include T.P. W. Green & P. G. M.M. Those described in Wuts, Protecting groups in organic synthesis (John Wiley & sonic, Inc.) can be appropriately selected and used. Examples of the divalent carboxylic acid include dodecanedioic acid, tetradecanedioic acid, docosansandioic acid, and 4,4′-dithiodibutanoic acid. Examples of the halogenated fatty acid include 12-bromododecanoic acid and 16-bromohexadecane. Examples of the hydroxy fatty acid include 10-hydroxydecanoic acid, 12-hydroxydodecanoic acid, and 12-hydroxystearic acid, but the divalent carboxylic acid is not limited thereto.
[0041]
The compound of the present invention can have an alkylene chain of any length as a divalent linking group represented by L 1A and L 2A , or L 1B and L 2B . It can be prepared synthetically using appropriate raw material compounds. Examples of the synthesis method include Wittig reaction, Barbier-Wieland decomposition, Arndt-Eister synthesis, and a method using acetylide (for example, the method described in Tetrahedron Lett. 35, 9501 (1994) can be referred to), chloroformate A method using an ester (for example, a method described in Synthesis 427 (1986)), a method using diethyl malonate (for example, a method described in Arch. Pharm. (Weinheim) 328, 271 (1995)), etc. However, these methods are only examples, and are not limited thereto.
[0042]
The compound of the present invention can be used as a membrane constituent of a liposome, and the liposome can be used as an active ingredient of an X-ray contrast agent. In the liposome containing the compound of the present invention, the content of the compound of the present invention is about 10 to 90% by mass, preferably 10 to 80% by mass, more preferably 20 to 80% by mass, based on the total mass of the membrane constituent components. It is. Although the compound of this invention may use 1 type as a film | membrane structural component, you may use it in combination of 2 or more types.
[0043]
As other components constituting the liposome membrane, any lipid compound usually used in the production of liposomes can be used. For example, Biochim. Biophys. Acta, 150 (4), 44 (1982), Adv. in Lipid. Res. , 16 (1) 1 (1978), “RESEARCH IN LIPOSOMES” (by P. Machy, L. Leserman, John Libey EUROEXT), “Liposome” (Nojima, Sunamoto, Inoue, Nankodo), etc. Yes. As the lipid compound, phospholipid is preferable, and phosphatidylcholine (PC) is particularly preferable. Preferred examples of phosphatidylcholines include, but are not limited to, eggPC, dimyristol PC (DMPC), dipalmitoyl PC (DPPC), distearoyl PC (DSPC), dioleyl PC (DOPC), and the like.
[0044]
In a preferred embodiment of the present invention, a phospholipid selected from the group consisting of phosphatidylcholine and phosphatidylserine (PS) can be used as the membrane constituent of the liposome, and in a more preferred embodiment, both can be used in combination. Examples of phosphatidylserine include compounds having the same lipid moiety as the phospholipids listed as preferred examples of phosphatidylcholine. When phosphatidylcholine and phosphatidylserine are used in combination, the preferred molar ratio of PC to PS is between PC: PS = 90: 10 to 10:90, more preferably between 30:70 to 70:30. is there.
[0045]
According to another preferred embodiment of the liposome of the present invention, there is a liposome containing phosphatidylcholine and phosphatidylserine as membrane constituents, and further containing a dialkyl phosphate. The two alkyl groups constituting the dialkyl ester of the phosphoric acid dialkyl ester are preferably the same, and the carbon number of each alkyl group is 6 or more, preferably 10 or more, and more preferably 12 or more. The upper limit of the carbon number of the alkyl group is not particularly limited, but is generally 24 or less. Examples of preferred dialkyl phosphates include, but are not limited to, dilauryl phosphate, dimyristyl phosphate, dicetyl phosphate, and the like. In this embodiment, the preferred amount of dialkyl phosphate used relative to the total weight of phosphatidylcholine and phosphatidylserine is 1 to 50% by weight, preferably 1 to 30% by weight, more preferably 1 to 20% by weight. .
[0046]
In the liposome containing phosphatidylcholine, phosphatidylserine, phosphate dialkyl ester, and the compound of the present invention as membrane constituents, the preferred mass ratio of the above components is PC: PS: phosphate dialkyl ester: 5-40% by mass of the compound of the present invention. : 5-40 mass%: 1-10 mass%: It can select between 15-80 mass%.
[0047]
The constituent components of the liposome of the present invention are not limited to the above four, and other components can be added. Examples include cholesterol, cholesterol esters, sphingomyelin, FEBS Lett. 223, 42 (1987); Proc. Natl. Acad. Sci. , USA, 85, 6949 (1988), etc., monosial ganglioside GM1 derivatives, Chem. Lett. , 2145 (1989); Biochim. Biophys. Acta, 1148, 77 (1992) and the like, glucuronic acid derivatives described in Biochim. Biophys. Acta, 1029, 91 (1990); FEBS Lett. , 268, 235 (1990) and the like, but are not limited thereto.
[0048]
The liposome of the present invention can be prepared by any method known in the art. Examples of the preparation method include Ann. Rev. Biophys. Bioeng. , 9, 467 (1980), “Liopsomes” (edited by MJ Ostro, MARCELL DEKER, INC.) And the like. Specific examples include sonication, ethanol injection, French press method, ether injection method, cholic acid method, calcium fusion method, freeze-thaw method, reverse phase evaporation method, etc. Absent. The size of the liposome of the present invention may be any size that can be prepared by the above method, but the average is usually 400 nm or less, preferably 200 nm or less. The structure of the liposome is not particularly limited, and may be either unilamellar or multilamellar. Moreover, it is also possible to mix | blend the 1 type (s) or 2 or more types of a suitable drug and another contrast agent in the inside of a liposome.
[0049]
The liposome of the present invention can be used as a contrast agent, preferably an X-ray contrast agent. The contrast agent of the present invention can be preferably administered parenterally, more preferably intravenously administered. For example, a preparation in the form of an injection or infusion is provided as a powdered composition in a lyophilized form and is not dissolved in water or other appropriate medium (eg, physiological saline, glucose infusion, buffer, etc.) at the time of use. It can be resuspended and used. When the liposome of the present invention is used as an X-ray contrast agent, the dose can be appropriately determined so that the iodine content of the liposome is comparable to the iodine content of a conventional X-ray contrast agent.
[0050]
Without being bound to any particular theory, in vascular diseases such as arteriosclerosis or restenosis after PTCA, vascular smooth muscle cells that form the vascular media grow abnormally and migrate to the intima at the same time However, it is known to narrow the blood flow path. Although the triggers for normal vascular smooth muscle cells to begin to grow abnormally have not yet been fully clarified, macrophage migration and foaming are known to be important factors, followed by vascular smoothness. It has been reported that cells undergo phenotype conversion (contracted to synthetic).
[0051]
When the liposome of the present invention is used, the iodo compound of the present invention can be selectively incorporated into vascular smooth muscle cells abnormally proliferated by the influence of foamed macrophages. When the liposome of the present invention is used, it is possible to accumulate more iodine compound in vascular smooth muscle cells as compared with the case of using a suspension or oil emulsion which is a known technique. As a result, when the liposome of the present invention is used, X-ray imaging with high contrast is possible between a lesion and a vascular smooth muscle cell at a non-disease site. Therefore, the contrast agent of the present invention can be suitably used particularly for imaging of vascular diseases. For example, imaging of arteriosclerotic lesions and restenosis after PTCA can be performed.
[0052]
Also, for example, J. Org. Biol. Chem. , 265, 5226 (1990), it is known that liposomes composed of phospholipids, particularly liposomes formed from PC and PS, tend to accumulate in macrophages via scavenger receptors. Therefore, by using the liposome of the present invention, the iodine compound of the present invention can be accumulated in a tissue or a disease site where macrophages are localized. When the liposome of the present invention is used, it is possible to accumulate more iodine compound in macrophages than in the case of using a suspension or oil emulsion which is a known technique.
[0053]
Examples of the tissue in which macrophage localization is recognized and which can be suitably imaged by the method of the present invention include blood vessels, liver, alveoli, lymph nodes, lymph vessels, and kidney epithelium. Further, in certain diseases, it is known that macrophages are accumulated at the disease site. Examples of such diseases include tumors, arteriosclerosis, inflammation, infection and the like. Therefore, these disease sites can be identified by using the liposome of the present invention. In particular, it is known that foamed macrophages incorporating a large amount of denatured LDL via a scavenger receptor accumulate in the initial stage of atherosclerotic lesions (Am. J. Pathol., 103, 181 ( 1981), Annu. Rev. Biochem., 52, 223 (1983)), and by integrating X-ray imaging of the liposomes of the present invention in the macrophages, the position of the early stage of arteriosclerosis difficult by other means is difficult. Can be specified.
[0054]
The imaging method using the liposome of the present invention is not particularly limited. For example, contrast can be performed by irradiating X-rays in the same manner as a contrast method using a normal X-ray contrast agent. Further, it is also possible to perform imaging by a nuclear medicine method by forming a liposome using the compound of the present invention containing a radioisotope of iodine and using the liposome as a contrast agent for scintigraphy. The radioisotope of iodo is not particularly limited, but preferred examples include 122 I, 123 I, 125 I and 131 I, and particularly preferred examples include 123 I and 125 I. Radiolabeled compounds were synthesized after the corresponding non-labeled compound was synthesized, then Appl. Radiat. Isot. 37 (8), 907 (1986) and the like. When the hydrophobic compound is a triiodobenzene derivative, it is preferable that at least one of the three iodo atoms on the same benzene ring is radioisotope. Preferably two or more are radioisotopes, most preferably three are labeled with the same radioisotope.
[0055]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further more concretely, the scope of the present invention is not limited to the following Example. The compound numbers in the examples correspond to the compound numbers shown as the preferred compounds described above. The structures of the compounds in the examples were confirmed by NMR spectrum.
Example 1
Add 10.0 g of hexadecanedioic acid, 8.3 g of 2,4,6-triiodophenol and 0.2 g of N, N-dimethylaminopyridine to 200 mL of dichloromethane, and then add 4.0 g of ethyldimethylaminopropylcarbodiimide to room temperature. For 1 day. The insoluble material was filtered off, and the obtained filtrate was concentrated and purified by silica gel column chromatography. 3.9 g (yield 30%) of hexadecanedioic acid mono 2,4,6-triiodophenyl was obtained.
From heptadecanedioic acid, heptadecanedioic acid mono-2,4,6-triiodophenyl was obtained in the same manner as hexadecanedioic acid mono-2,4,6-triiodophenyl.
[0056]
4.8 g of 12-bromododecanoic acid and 9.1 g of 2,4,6-triiodophenol were added to 70 mL of ethanol and dissolved by refluxing. Potassium hydroxide 2.2g was added and stirring was continued for another 12 hours. The resulting precipitate was separated by filtration and washed with ethanol, chloroform and 1N hydrochloric acid were added, and the mixture was extracted twice with chloroform. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was removed, and the resulting residue was purified by silica gel column chromatography to obtain 7.0 g of 12- (2,4,6-triiodophenoxy) dodecanoic acid (yield 60 %)Obtained.
16- (2,4,6-triiodophenoxy) hexadecanoic acid was synthesized from 16-bromohexadecanoic acid in the same manner as 12- (2,4,6-triiodophenoxy) dodecanoic acid.
Further, 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanoic acid was synthesized from 11-bromoundecanoic acid in the same manner as 12- (2,4,6-triiodophenoxy) dodecane.
[0057]
4.7 g of ethyl 7-bromoheptanoate and 2.4 g of 2,4,6-triiodophenol were added to 20 mL of dimethylformamide (DMF), 2.1 g of potassium carbonate was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 day. Water was added and the mixture was extracted twice with ethyl acetate. The organic layer was washed three times with water, dried over anhydrous magnesium sulfate, and then the solvent was removed. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography to obtain 6.0 g (yield 96%) of ethyl 7- (2,4,6-triiodophenoxy) heptanoate.
[0058]
After adding 4.0 g of ethyl 7- (2,4,6-triiodophenoxy) heptanoate to 30 mL of 95% ethanol and dissolving by refluxing, 0.5 g of sodium hydroxide was added and the mixture was further refluxed for 1.5 hours. Continued. The obtained crystals were separated by filtration, washed with ethanol, dichloromethane and 1N hydrochloric acid were added, and the mixture was extracted twice with dichloromethane. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was removed, and the resulting residue was purified by silica gel column chromatography to obtain 3.4 g (yield 90) of 7- (2,4,6-triiodophenoxy) heptanoic acid. %)Obtained.
[0059]
2.1 g of methyl 9-hydroxynonanoate and 1.8 g of pyridine were added to 20 mL of dichloromethane and stirred at 0 ° C., 1.3 mL of methanesulfonyl chloride was added, the temperature was gradually raised to room temperature, and the mixture was stirred for 1 day. After adding water, the mixture was extracted twice with dichloromethane, and the obtained organic layer was washed with 1N hydrochloric acid and saturated sodium hydrogen carbonate solution. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, the solvent was removed, and the resulting residue was purified by silica gel column chromatography to obtain 2.1 g (yield 68%) of methyl 9- (methanesulfonyloxy) nonanoate.
9- (2,4,6-triiodophenoxy) nonanoic acid was prepared in the same manner as 7- (2,4,6-triiodophenoxy) heptanoic acid using methyl 9- (methanesulfonyloxy) nonanoate. Obtained.
[0060]
25.6 g of 15-pentadecalactone was added to 150 mL of methanol, and 50 mL of a 28% sodium methoxide solution was further added, followed by refluxing for 3 hours. 1N Hydrochloric acid was added, and the mixture was extracted 3 times with ethyl acetate. The organic phase was washed with saturated brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was removed. 28.5 g (yield 98%) of methyl 15-hydroxypentadecanoate was obtained. 15- (2,4,6-triiodophenoxy) pentadecanoic acid was obtained in the same manner as 9- (2,4,6-triiodophenoxy) nonanoic acid using methyl 15-hydroxypentadecanoate.
[0061]
Using tridecanedioic acid, Synth. Commun. , 17, 1339 (1987), monomethyl tridecanedioate was obtained. Further, using monomethyl tridecanedioate, Aust. J. et al. Chem. 48, 1893 (1995), methyl 13-hydroxytridecanoate was obtained.
13- (2,4,6-triiodophenoxy) tridecanoic acid was obtained in the same manner as 9- (2,4,6-triiodophenoxy) nonanoic acid using methyl 13-hydroxytridecanoate.
Using tetradecanedioic acid, 14- (2,4,6-triiodophenoxy) tetradecanoic acid was obtained in the same manner as 13- (2,4,6-triiodophenoxy) tridecanoic acid.
[0062]
Using eicosandioic acid, 20- (2,4,6-triiodophenoxy) eicosanoic acid was obtained in the same manner as 13- (2,4,6-triiodophenoxy) tridecanoic acid.
Using 15- (2,4,6-triiodophenoxy) pentadecanoic acid and diethyl malonate, Arch. Pharm. (Weinheim) 328, 271 (1995) was used to increase the number of carbons by 2 to obtain 17- (2,4,6-triiodophenoxy) heptadecanoic acid.
19- (2,4,6-triiodophenoxy) heptadecanoic acid was used in the same manner as 17- (2,4,6-triiodophenoxy) heptadecanoic acid. Iodophenoxy) nanodecanoic acid was obtained.
19- (2,4,6-triiodophenoxy) nanodecanoic acid was used in the same manner as 17- (2,4,6-triiodophenoxy) heptadecanoic acid, and 21- (2,4,6-trioic acid). Iodophenoxy) heneicosanoic acid was obtained.
[0063]
To 47.10 g of 2,4,6-triiodophenol was added 13.98 g of potassium carbonate in 500 ml of dimethyl sulfoxide (DMSO), and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour, and then 25.00 g of 11-bromoundecanol was added. The reaction solution was heated to 50 ° C. and stirred for further 5 hours, and then allowed to cool to room temperature. The reaction solution was poured into 2000 ml of water, and the resulting white crystals were filtered. The obtained crystals were washed with methanol, filtered again and dried to obtain 57.51 g (yield 90%) of white crystals of 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanol.
[0064]
11.08 g of 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanol was dissolved in 100 ml of methylene chloride, 2.18 ml of triethylamine and 1.82 ml of methanesulfonyl chloride were successively added and stirred at room temperature. While confirming the progress of the reaction by thin layer chromatography, methanesulfonyl chloride was appropriately added until the raw material disappeared. After confirming disappearance of the raw materials, the reaction solution was washed with water (50 ml × 2) and dried over magnesium sulfate. The crystals obtained by filtration and concentration under reduced pressure were recrystallized from ethyl acetate / hexane, filtered and dried to obtain 9.40 g of 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanylmethanesulfonate (yield 83). %) Of white crystals.
[0065]
11.05 g of 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanylmethanesulfonate and 2.80 g of potassium phthalimide are added to 100 ml of dimethylformamide (DMF), and the reaction solution is heated to 60 ° C. and stirred for 3 hours. did. After cooling to room temperature, the reaction mixture was diluted with ethyl acetate, washed with water and brine, and dried over magnesium sulfate. The product obtained by filtration and concentration under reduced pressure was recrystallized from ethyl acetate / hexane, filtered and dried to give 6.67 g of 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanylphthalimide (yield 69). %) Of white crystals.
[0066]
Add 1.52 g of 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanylphthalimide to 45 ml of a mixed solvent of methanol: dimethylsulfoxide (2: 1) and warm to 100 ° C. While confirming the progress of the reaction by thin layer chromatography, hydrazine monohydrate was appropriately added until the raw material disappeared. After confirming disappearance of the raw materials, the reaction solution was poured into 150 ml of water and extracted with chloroform, and the organic layer was washed with saturated brine and dried over magnesium sulfate. Filtration, concentration under reduced pressure, and drying under reduced pressure gave a white solid of 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanylamine. Dissolve 500 mg of this white solid and ZL-serine in dimethyl sulfoxide (500 ml), add 860 mg of benzotriazol-1-yloxytris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate, and then add 0.27 ml of triethylamine at room temperature. Stir for 1 hour. The reaction solution was poured into 100 ml of water, and the resulting white crystals were filtered and dried to give 1.52 g of ZL-serine 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanylamide (yield 88%, 2% Stage) white crystals were obtained.
[0067]
Z-L-serine 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanylamide 500 mg was dissolved in a mixed solvent of 20 ml of acetonitrile and 5 ml of methylene chloride, and 0.33 ml of trimethylsilane iodide was added thereto at about room temperature. Stir for 3 hours. The reaction mixture was poured into about 20 ml of saturated aqueous sodium bicarbonate, extracted with chloroform, the aqueous layer was washed with saturated brine, and dried over magnesium sulfate. The crude crystals obtained by filtration and concentration under reduced pressure were washed with ethyl acetate, filtered and dried to give L-serine 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanylamide 153.7 mg (yield 36). %) Of white crystals.
[0068]
Compound 2-9-11:
L-serine 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanylamide 153.7 mg was dissolved in 10 ml of dimethyl sulfoxide (DMSO), and 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanoic acid 145 0.7 mg, 94.5 mg of benzotriazol-1-yloxytris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate, and 0.03 ml of triethylamine were sequentially added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The reaction solution was poured into water, extracted with chloroform, and the organic layer was washed with saturated brine and dried over magnesium sulfate. The crude crystals obtained by filtration and concentration under reduced pressure were recrystallized with ethyl acetate / hexane to obtain white crystals of the target compound.
1 H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 8.04 (s, 4H), 6.81 (t, 1H, NH), 6.60 (d, 1H, NH), 4.35 (m, 1H) ), 4.16 (d, 1H), 3.93 (t, 4H), 3.60 (m, 1H), 3.48 (m, 1H), 3.23 (q, 2H), 2.25 (T, 2H), 1.89-1.25 (m, 34H)
[0069]
Compound 3-1-1:
Tetrahydrofuran 3-carboxylic acid 27.1 mg and N- [11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanecarbonyl] -serine 11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanylamide 301.3 mg Was dissolved in 15 ml of methylene chloride, 50.7 mg of 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride and 2.7 mg of 4-dimethylaminopyridine were added, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was produced by silica gel column chromatography to obtain the target compound.
1 H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 8.04 (s, 4H), 6.31 (m, 1H), 6.15 (m, 1H), 4.65 (q, 1H), 4. 41 (m, 1H), 4.30 (m, 1H), 3.93 (t, 4H), 3.82 (m, 2H), 3.24 (m, 2H), 3.11 (m, 1H) ), 2.23 (t, 2H), 2.18 (m, 2H), 1.89-1.25 (m, 34H)
[0070]
Compound 3-7-1:
11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanoic acid 150.7 mg and N- [11- (2,4,6-triiodophenoxy) undecanecarbonyl] -serine 11- (2,4,6-tri 295.8 mg of iodophenoxy) undecanylamide was dissolved in 15 ml of methylene chloride, and 50.0 mg of 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride and 2.5 mg of 4-dimethylaminopyridine were added at room temperature. Stir for 24 hours. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was produced by silica gel column chromatography to obtain the target compound.
FAB-MS (Posi): 2005
[0071]
Test Example 1: Iodo atom uptake in vascular smooth muscle cells Di-palmitoyl PC (Funakoshi, No. 1201-41-0225), Di-palmitoyl PS (Funakoshi, No. 1201) at the following ratios -42-0237) in J. Med. Chem. 25 (12), 1500 (1982), the iodine compound of the present invention and an eggplant-shaped flask were dissolved in chloroform to form a homogeneous solution, and then the solvent was distilled off under reduced pressure to form a thin film on the bottom of the flask. Formed. The thin film was dried in vacuum, 0.9% physiological saline (manufactured by Hikari Pharmaceutical Co., Ltd., No. 512) was added in an appropriate amount, and ultrasonic irradiation (Branson Co., Ltd., No. 3542 probe type oscillator, 0.1 mW) was ice-cooled. By carrying out for 5 minutes, a uniform liposome dispersion was obtained. As a result of measuring the particle size of the obtained dispersion with a WBC analyzer (manufactured by Nihon Kohden Co., Ltd., A-1042), the particle size was 40 to 65 nm. The following liposome preparation prepared by this method was added to the mixed culture system of vascular smooth muscle cells and macrophages described in WO 01/82777, and cultured at 37 ° C. and 5% CO 2 for 24 hours. The incorporated iodine compound was quantified. Thus, it is clear that the compound of the present invention is efficiently taken up by vascular smooth muscle cells and has excellent properties as a constituent lipid of liposomes for X-ray contrast agents.
[0072]
[Table 1]
[0073]
Test Example 2: Mice 3-day continuous administration toxicity test ICR mouse male 6 weeks old (Nippon Charles River) was purchased, and after a quarantine period of 1 week, in a clean animal house (air conditioning: Hepafilter class 1000, room temperature: 20 ˜24 ° C., humidity: 35% to 60%) for one week. Thereafter, in order to determine the MTD value, a liposome preparation was administered from the tail vein. The liposome preparation was administered using either physiological saline (manufactured by Hikari Pharmaceutical Co., Ltd.) or glucose solution (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) as a solvent. Next, based on the determined MTD value, 1/2 of that amount was administered for 3 days from the tail vein for 3 consecutive days (n = 3). Symptoms were observed for up to 6 hours after each administration. After completion of administration, autopsy was performed and findings were observed for major organs. No abnormalities were observed.
Compound: MTD (mg / kg) 2-9-11: 400 mg / kg, 3-1-1: 200 mg / kg, 3-7-1: 200 mg / kg
[0074]
Test Example 3: Production of S9 and degradation test SD rat male 6 weeks old (manufactured by Charles River Japan) was purchased and acclimated for 1 week. After acclimatization for 1 week, the body weight was measured and the blood was decapitated. The liver was removed and washed 3 times with chilled 0.15M KCl. After washing, the wet weight of the liver was measured, and 0.15 M KCl cooled to 3 times its weight was added and transferred to a homogenizer. Homogenization was performed in ice-cooling, and then the homogenate was cooled and centrifuged at 9000 g for 10 minutes. This supernatant was called S9 and stored at -80 ° C or lower.
[0075]
The stored S9 was dissolved in running water. To 0.1 ml of dissolved S9, add 0.02 ml of 0.4 M MgCl 2, 0.02 ml of 1.65 M KCl, 0.5 ml of 0.2 M Na phosphate buffer (pH 7.4), and add glucose 6 phosphate ( Oriental Yeast Co., Ltd.), NADPH (Oriental Yeast Co., Ltd.), NADH (Oriental Yeast Co., Ltd.) were added to 4 μM, and distilled water was added to make the total volume 1 ml (this is called S9Mix). The test substance was added to 1 ml of S9Mix so as to have a concentration of 5 μg / ml and shaken at 37 ° C. The amount of the test substance (unmodified) in S9Mix was measured over time using HPLC. The test substance was previously dissolved in DMSO (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). In the results shown below, the amount of unchanged substance immediately after addition to S9Mix was taken as 100, and the amount of unchanged substance after 30 minutes was expressed as a percentage. 2-9-11: 60 mg / kg, 3-1-1: 50 mg / kg, 3-7-1: 80 mg / kg
It is clear that the compound of the present invention is efficiently degraded in the S9 degradation test, and it is clear that it has excellent properties as a constituent lipid of liposomes for X-ray contrast agents.
[0076]
【The invention's effect】
The compound of the present invention has an excellent property as a membrane component of a liposome for an X-ray contrast medium and a scintigraphic contrast medium. X-ray imaging using a liposome containing this compound causes vascular disease. Can selectively contrast lesions. Further, the compound of the present invention has an excellent property that it is metabolized in the liver after imaging and does not accumulate in the body.