JP2004123537A - Pyrazolopyridine compound and its pharmaceutical application - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain a novel pyrazolopyridine compound exhibiting sphingosine-1-phosphate receptor antagonism, and provide its pharmaceutical application. <P>SOLUTION: The pyrazolopyridine compound is represented by formula (1) (wherein R<SP>1</SP>, R<SP>2</SP>and R<SP>3</SP>are each a 1-6C alkyl group, or the like; R<SP>4</SP>is hydrogen atom, or the like; R<SP>5</SP>and R<SP>6</SP>are each hydrogen atom, a 1-6C alkyl group, a 1-6C alkoxyl group, a halogen atom, or the like; X is NH, O, CH<SB>2</SB>, or the like; Y is NH, or the like; Z is CO, or the like; W is NH, or the like; and A is an aryl group, a heteroaryl group, or the like). A pharmaceutically acceptable salt thereof is also provided. The compound (1) and its pharmaceutically acceptable salt specifically act on Edg(endoglycanase)-5 and therefore are useful as a therapeutic agent for fibrosis. <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO

Description

但し、その使用用途は除草剤である。
また、特開昭６１−１９７５８０号公報には、下記ピラゾロピリジン骨格を有する化合物が開示されている。
【化６】

但し、その使用用途は除草剤である。
このように、ピラゾロピリジン骨格を有する化合物が、本願のごときＳｐｈ−１−Ｐ受容体に対して特異的に拮抗作用を有することや、かつそれらが繊維症治療薬として有用であるとの記載は全く無いばかりか、それらを示唆するデータの開示も全くない。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は上記課題に鑑み、スフィンゴシン−１−リン酸受容体（Ｅｄｇ−５）を特異的に阻害することにより、本受容体が関連する疾患を治療することを目的とする。具体的には、スフィンゴシン−１−リン酸受容体（Ｅｄｇ−５）が関連して起こる肝繊維症、肺繊維症、腎繊維症および動脈硬化症等の治療薬を探索すべく鋭意検討を行った。その結果、下記一般式（１）で示されるピラゾロピリジン化合物がスフィンゴシン−１−リン酸受容体（Ｅｄｇ−５）を特異的に拮抗することにより、有用な繊維症治療薬及び動脈硬化症治療薬となることを見出し、本発明を完成するに至った。
より詳しくは、下記（１）〜（１６）に示す通りである。
【０００８】
（１）　　一般式（１）
【化７】

〔式中、
Ｒ^１はＣ_１−６アルキル基、水素原子又は−ＣＯＲ^７（ここで、Ｒ^７はＣ_１−６アルキル基、アリール基、アラルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、アリールオキシ基又はアラルキルオキシ基である）であり；
Ｒ^２はＣ_１−６アルキル基又はアリール基であり；
Ｒ^３は水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、Ｃ_１−６アルコキシカルボニル基、ハロアルキル基、Ｃ_３−７シクロアルキル基又はアリール基であり；
Ｒ^４は水素原子又はＣ_１−６アルキル基であり；
Ｒ^５及びＲ^６は同一又は異なって、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、Ｃ_１−６アルコキシカルボニル基、カルボキシル基、Ｃ_２−６アルキニル基、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、ハロアルキル基、Ｃ_１−６アルキルアミノ基、ジＣ_１−６アルキルアミノ基、アシル基、水酸基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基又は−ＣＯＮＨＲ^８（ここで、Ｒ^８はアリール基又はアラルキル基である）、であり；
Ｘは−ＮＲ^９−（ここで、Ｒ^９は水素原子、Ｃ_１−６アルキル基又は−ＮＨＲ^１０（ここで、Ｒ^１０はカルボキシル基又はＣ_１−６アルコキシカルボニル基である）である）、−Ｏ−、−Ｎ＝、−ＣＨ＝又は−ＣＨＲ^１１−（ここで、Ｒ^１１は水素原子又はＣ_１−６アルキル基である）であり；
Ｙは−ＮＲ^１２−（ここで、Ｒ^１２は水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、アラルキル基、Ｃ_１−６アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基、又は−ＣＯＮＨＲ^１３（ここで、Ｒ^１３はアリール基又はアラルキル基である）、＝Ｎ−、−Ｎ＝、−ＣＨ_２−、＝ＣＨ−、−Ｏ−、−ＣＯ−又は単結合であり；
Ｚは−ＣＯ−、−ＣＳ−、−ＣＨ_２−、−Ｏ−又は単結合であり；
Ｗは−ＮＲ^１４−（ここで、Ｒ^１４は水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、アラルキルオキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基又はヘテロアリールＣ_１−６アルキル基である）、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＨ_２−、−ＮＨＣＨ_２−又は単結合であり；
【化８】

は、二重結合又は一重結合であり；
Ａはアリール基、ヘテロアリール基又はシクロアルキル基である〕により示されるピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【０００９】
（２）Ｒ^３、Ｒ^４、
【化９】

のピリジン環上の置換位置が、Ｒ^３がｈ位、Ｒ^４がｉ位、
【化１０】

がｊ位である（１）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１０】
（３）Ｒ^１がＣ_１−６アルキル基であり、Ｒ^２がＣ_１−６アルキル基であり、Ｒ^４が水素原子である（２）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１１】
（４）Ｙが−ＮＨ−又は＝Ｎ−であり、Ｚが−ＣＯ−であり、Ｗが−ＮＨ−である（３）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１２】
（５）環Ａがアリール基である（４）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１３】
（６）アリール基がフェニル基である（５）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１４】
（７）環Ａがヘテロアリール基である（４）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１５】
（８）ヘテロアリール基がピリジル基である（７）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１６】
（９）Ｘが−ＮＨ−又は−Ｎ＝である（５）乃至（８）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１７】
（１０）Ｘが−ＣＨ_２−である（５）乃至（８）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１８】
（１１）Ｘが−Ｏ−である（５）乃至（８）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩。
【００１９】
（１２）（１）乃至（１１）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩と医薬的に許容される担体を含有してなる医薬組成物。
【００２０】
（１３）（１）乃至（１１）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有するスフィンゴシン−１−リン酸受容体拮抗剤。
【００２１】
（１４）（１）乃至（１１）記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する繊維症治療薬。
【００２２】
（１５）（１）乃至（１１）項記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する肝繊維症治療薬。
【００２３】
（１６）（１）乃至（１１）項記載のピラゾロピリジン化合物又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する肺繊維症治療薬。
【００２４】
本明細書において使用する各置換基の定義は次の通りである。
「ハロゲン原子」とは、塩素原子、臭素原子、フッ素原子等である。Ｒ^５及びＲ^６において好ましくは塩素原子又は臭素原子である。
【００２５】
「Ｃ_１−６アルキル基」とは、炭素数１乃至６個の直鎖又は分枝してもよいアルキル基であり、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基又はヘキシル基等であり、好ましくは炭素数１乃至４個の直鎖又は分枝してもよいアルキル基である。特に好ましくはメチル基、エチル基、又はイソプロピル基である。Ｒ^１において好ましくはメチル基であり、Ｒ^２において好ましくはメチル基であり、Ｒ^３において好ましくはメチル基、エチル基又はイソプロピル基であり、Ｒ^４において好ましくはメチル基であり、Ｒ^５及びＲ^６において好ましくはメチル基又はエチル基であり、Ｒ^７において好ましくはメチル基又はエチル基であり、Ｒ^９において好ましくはメチル基であり、Ｒ^１１において好ましくはメチル基であり、Ｒ^１２において好ましくはメチル基であり、Ｒ^１４において好ましくはメチル基である。
【００２６】
「Ｃ_１−６アルコキシ基」とは、炭素数１乃至６個の直鎖又は分枝鎖アルコキシ基を表し、例えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ペンチルオキシ基、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシ基又はヘキシルオキシ基であり、好ましくは炭素数１乃至４個のメトキシ基、エトキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基である。特に好ましくはメトキシ基又はエトキシ基である。Ｒ^３において好ましくはメトキシ基であり、Ｒ^５及びＲ^６において好ましくはメトキシ基又はエトキシ基であり、Ｒ^７において好ましくはメトキシ基である。
【００２７】
「Ｃ_１−６アルコキシカルボニル基」とは、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基又はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基等のアルキル部が炭素数１乃至５個であるアルコキシカルボニル基を表す。好ましくはメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基又はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である。Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^６において好ましくはメトキシカルボニル基であり、Ｒ^１０において好ましくはメトキシカルボニル基又はエトキシカルボニル基であり、Ｒ^１２において好ましくはメトキシカルボニル基又はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である。
【００２８】
「ハロアルキル基」とは、上記Ｃ_１−６アルキル基が上記ハロゲン原子で置換されたものであり、例えばクロロメチル基、ブロモメチル基、フルオロメチル基、トリフルオロメチル基、トリクロロメチル基、トリブロモメチル基、トリクロロエチル基、ペンタフルオロプロピル基又はクロロブチル基等であり、好ましくはクロロメチル基、ブロモメチル基、フルオロメチル基、トリフルオロメチル基又はトリクロロメチル基である。特に好ましくは、トリフルオロメチル基である。Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^６において好ましくは、トリフルオロメチル基である。
【００２９】
「Ｃ_２−６アルキニル基」とは、炭素数２乃至６個の直鎖又は分枝してもよい基であり、例えばエチニル基、プロピニル基、ブチニル基、２−ペンチニル、３−ペンチニル、２−ヘキシニル基、３−ヘキシニル基等であり、好ましくは炭素数２乃至４個の直鎖又は分枝してもよいアルキニル基である。Ｒ^５及びＲ^６において好ましくは、エチニル基である。
【００３０】
「Ｃ_１−６アルキルアミノ基」とは、炭素数１〜６個のアルキル基で一置換されたアミノ基を表し、例えばメチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ブチルアミノ基等である。好ましくはメチルアミノ基又はエチルアミノ基等である。Ｒ^５及びＲ^６において好ましくは、メチルアミノ基又はエチルアミノ基である。
【００３１】
「ジＣ_１−６アルキルアミノ基」とは、炭素数１〜６個のアルキル基で二置換されたアミノ基を表し、例えばジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基等であり、好ましくはジメチルアミノ基又はジエチルアミノ基等である。Ｒ^５及びＲ^６において好ましくは、ジメチルアミノ基又はジエチルアミノ基である。
【００３２】
「アシル基」とは、炭素数１のホルミル基；炭素数２乃至６個のアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基若しくはピバロイル基等のアルカノイル基；又はアリール基上に１乃至３個の置換基を有してもよいベンゾイル基等のアロイル基である。好ましくは、ホルミル基、アセチル基、ピバロイル基又はベンゾイル基である。Ｒ^５及びＲ^６において好ましくは、アセチル基である。
【００３３】
「アリール基」とは、フェニル基、ナフチル基、ビフェニル基等であり、好ましくはフェニル基である。ここで該アリール基は、１乃至３個の置換基により置換されてもよい。
ここで「１乃至３個の置換基により置換されてもよい」とは、該置換基は同一又は異なってもよく、また、置換基の位置は任意であって、特に制限されるものではない。具体的には、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等のＣ_１−６アルキル基；水酸基；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基等のＣ_１−６アルコキシ基；フッ素、塩素、臭素等のハロゲン原子；ニトロ基；シアノ基；ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基等のアシル基；ホルミルオキシ基、アセチルオキシ基、プロピオニルオキシ基等のアシルオキシ基；メルカプト基；メチルチオ基、エチルチオ基、プロピルチオ基、ブチルチオ基、イソブチルチオ基等のＣ_１−６アルキルチオ基；アミノ基；メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ブチルアミノ基等のＣ_１−６アルキルアミノ基；ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基等のジＣ_１−６アルキルアミノ基；カルボキシ基；メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基等のＣ_１−６アルコキシカルボニル基；アミド基；トリフルオロメチル基；メチルスルホニル基、エチルスルホニル基等のＣ_１−６アルキルスルホニル基；アミノスルホニル基；シクロペンチル基、シクロヘキシル基等のＣ_３−７シクロアルキル基；フェニル基；アセトアミド基、プロピオニルアミド基等のアシルアミド基等であり、好ましくは水酸基、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、メルカプト基、Ｃ_１−６アルキルチオ基、ハロゲン原子、トリフルオロメチル基、Ｃ_１−６アルキルカルボニル基、Ｃ_１−６アルコキシカルボニル基、アシルアミド基である。
Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３において好ましくは、フェニル基であり、Ｒ^８において好ましくは、フェニル基又はハロゲン原子で置換されたフェニル基であり、Ｒ^１３において好ましくは、フェニル基又はハロゲン原子で置換されたフェニル基であり、環Ａにおいて好ましくは、フェニル基である。
【００３４】
「アラルキル基」とは、アリール基がフェニル基（ここで該フェニル基は上記アリール基で述べた、１乃至３個の置換基により置換されてもよい）を意味し、かつアルキル部が炭素数１〜６個のアルキル基であるアリールアルキル基であって、ベンジル基、フェニルエチル基、フェニルプロピル基、フェニルブチル基又はフェニルヘキシル基等が挙げられ、好ましくはベンジル基又はフェニルエチル基である。Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^１２及びＲ^１４において好ましくは、ベンジル基である。
【００３５】
「アリールオキシ基」とは、フェノキシ基、ナフチルオキシ基等（ここで該フェニル基またはナフチル基は上記アリール基で述べた、１乃至３個の置換基により置換されてもよい）であり、好ましくは、フェノキシ基である。Ｒ^５、Ｒ^６及びＲ^７において好ましくは、フェノキシ基である。
【００３６】
「アラルキルオキシ基」とは、ベンジルオキシ基、フェネチルオキシ基、フェニルプロピルオキシ基、フェニルブチルオキシ基等（ここで該フェニル基は上記アリール基で述べた、１乃至３個の置換基により置換されてもよい）のアルコキシ部が炭素数１〜４個であるアラルキルオキシ基であり、好ましくは、ベンジルオキシ基である。Ｒ^５、Ｒ^６及びＲ^７において好ましくは、ベンジルオキシ基である。
【００３７】
「アリールオキシカルボニル基」とは、フェノキシカルボニル基、ナフチルオキシカルボニル基等（ここで該フェニル基またはナフチル基は上記アリール基で述べた、１乃至３個の置換基により置換されてもよい）であり、好ましくは、フェノキシカルボニル基である。Ｒ^１２及びＲ^１４において好ましくは、フェノキシカルボニル基である。
【００３８】
「アラルキルオキシカルボニル基」とは、ベンジルオキシカルボニル基、フェネチルオキシカルボニル基、フェニルプロピルオキシカルボニル基、フェニルブチルオキシカルボニル基等（ここで該フェニル基は上記アリール基で述べた、１乃至３個の置換基により置換されてもよい）のアルコキシ部が炭素数１〜４個であるアラルキルオキシカルボニル基であり、好ましくは、ベンジルオキシカルボニル基である。Ｒ^１２及びＲ^１４において好ましくは、ベンジルオキシカルボニル基である。
【００３９】
「Ｃ_３−７シクロアルキル基」とは炭素数３乃至７個のシクロアルキル基を意味し、具体的にはシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、１−メチルシクロヘキシル、シクロヘプチル基である。好ましくは炭素数３乃至６個のシクロアルキル基であり、具体的にはシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基である。特に好ましくはシクロプロピル基又はシクロヘキシル基である。
Ｒ^３において好ましくは、シクロプロピル基である。環Ａにおいて好ましくは、シクロヘキシル基である。
【００４０】
「ヘテロアリール基」とは、環を構成する原子として炭素原子以外に窒素原子、酸素原子、硫黄原子から選ばれる１乃至３個の複素原子を含む５乃至６員の芳香族複素環、飽和複素環、飽和複素環又はこれらの複素環とベンゼン環が縮合した縮合複素環を意味し、具体的には、チオフェン−２−イル基、チオフェン−３−イル基、フラン−２−イル基、フラン−３−イル基、ピロール−１−イル基、ピロール−２−イル基、ピロール−３−イル基、イミダゾール−１−イル基、イミダゾール−２−イル基、イミダゾール−４−イル基、ピラゾール−１−イル基、ピラゾール−３−イル基、ピラゾール−４−イル基、チアゾール−２−イル基、チアゾール−４−イル基、チアゾール−５−イル基、オキサゾール−２−イル基、オキサゾール−４−イル基、オキサゾール−５−イル基、イソオキサゾール−３−イル基、イソオキサゾール−４−イル基、イソオキサゾール−５−イル基、ピリミジン−２−イル基、ピリミジン−４−イル基、ピリミジン−５−イル基、ピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基、ピリジン−４−イル基、ベンゾチオフェン−２−イル基、ベンゾチオフェン−３−イル基、ベンゾフラン−２−イル基、ベンゾフラン−３−イル基、インドール−２−イル基、インドール−３−イル基、ベンゾイミダゾール−１−イル基、ベンゾイミダゾール−２−イル基、ベンゾチアゾール−２−イル基、ベンゾオキサゾールゾール−２−イル基、キノリン−２−イル基、キノリン−３−イル基、キノリン−４−イル基、イソキノリン−１−イル基、イソキノリン−３−イル基、イソキノリン−４−イル基、１，３，４−チアジアゾール−２−基、モルホリン−４−イル基等である。
環Ａにおいて好ましくはピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基、ピリジン−４−イル基、ベンゾオキサゾール−２−イル基、モルホリン−４−イル基等であり、特に好ましくは、ピリジン−３−イル基又はピリジン−４−イル基である。
【００４１】
「ヘテロアリールＣ_１−６アルキル基」とは、ヘテロアリール基が上記ヘテロアリール基を意味し、かつアルキル部が炭素数１〜６個のアルキル基であるヘテロアリールアルキル基であって、例えば、ピリジニルメチル基（２−ピリジニルメチル基、３−ピリジニルメチル基、４−ピリジニルメチル基）、キノリニルメチル基（２−キノリニルメチル基等）、インドリルメチル基（２−インドリルメチル基、３−インドリルメチル基等）、チオフェン−２−イルメチル基、チオフェン−３−イルメチル基、２−フラニルメチル基、３−フラニルメチル基、１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメチル基、ベンゾチアゾール−２−イルメチル基、、２−（チオフェン−２−イル）エチル基、２−（フラン−２−イル）エチル基等である。好ましくは、２−ピリジニルメチル基、３−ピリジニルメチル基、４−ピリジニルメチル基、３−ピリジニルエチル基、４−ピリジニルエチル基等である。Ｒ^１４において好ましくは、３−ピリジニルエチル基である。
【００４２】
「プロドラッグ」とは、薬物分子を化学的に修飾した誘導体でそれ自体は生理活性を示さず、投与後体内で、もとの薬物分子に復元薬効を示すものをいう。
【００４３】
「製薬上許容される塩」とは、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩又は硝酸塩等の各種無機酸付加塩；酢酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩又はアスコルビン酸塩等の各種有機酸付加塩；アスパラギン酸塩、又はグルタミン酸塩等の各種アミノ酸との塩が含まれるが、これらに限定されるものではない。また、場合によっては含水物、水和物あるいは溶媒和物であってもよい。
【００４４】
次に各種置換基又は置換位置についてより詳しく述べると以下の通りである。
Ｒ^１において好ましくは、Ｃ_１−６アルキル基であり、特に好ましくはメチル基である。
Ｒ^２において好ましくは、Ｃ_１−６アルキル基であり、特に好ましくはメチル基である。
Ｒ^３において好ましくは、Ｃ_１−６アルキル基、ハロアルキル基又はシクロアルキル基であり、特に好ましくはＣ_１−６アルキル基である。
Ｒ^４において好ましくは、水素原子である。
Ｒ^３、Ｒ^４、
【化１１】

のピリジン環上の置換位置の好ましい例としては、Ｒ^３がｈ位、Ｒ^４がｉ位、
【化１２】

がｊ位である。
Ｒ^５及びＲ^６において好ましくは、水素原子、Ｃ_１−６アルキル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、Ｃ_２−６アルキニル基、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、ハロアルキル基、Ｃ_１−６アルキルアミノ基、ジＣ_１−６アルキルアミノ基、アシル基、アリールオキシ基又はアラルキルオキシ基ある。
Ｘにおいて好ましくは、−ＮＲ^９−（ここで、Ｒ^９の好ましい例としては、水素原子又はＣ_１−４アルキルであり、特に好ましくは水素原子である）、−Ｏ−、−Ｎ＝又は−ＣＨＲ^１１−（ここで、Ｒ^１１の好ましい例としては、水素原子又はＣ_１−４アルキル基であり、特に好ましくは水素原子である）であり、特に好ましくは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｎ＝又は−ＣＨ_２−である。
Ｙにおいて好ましくは、−ＮＲ^１２−（ここで、Ｒ^１２の好ましい例としては、水素原子又はＣ_１−６アルキル基であり、特に好ましくは水素原子である）、＝Ｎ−、−Ｎ＝、−ＣＨ_２−、＝ＣＨ−、−Ｏ−又は−ＣＯ−であり、特に好ましくは、−ＮＨ−又は＝Ｎ−である。
Ｚにおいて好ましくは、−ＣＯ−、−ＣＳ−、−ＣＨ_２−、−Ｏ−、＝ＣＲ^１４−（ここで、Ｒ^１４の好ましい例としては、水素原子である）であり、特に好ましくは、−ＣＯ−である。
Ｗにおいて好ましくは、−ＮＲ^１５−（ここで、Ｒ^１５の好ましい例としては、水素原子又はＣ_１−６アルキル基であり、特に好ましくは、水素原子である）又は単結合であり、特に好ましくは、−ＮＨ−である。
環Ａにおいて好ましくは、アリール基又はヘテロアリール基であり、特に好ましくは、フェニル基、ピリジル基（ピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基又はピリジン−４−イル基）である。
【００４５】
ここで本発明化合物は、場合によっては水和物又は溶媒和物であってもよく、またそのプロドラック化合物及び代謝物についても包含されるものである。
【００４６】
本発明を肝繊維症等の治療薬として用いる場合、全身的或いは局所的に、経口若しくは非経口で投与される。投与量は年齢、体重、症状、治療効果等により異なるが、通常成人一人当たり、１回に１０ｍｇ乃至１ｇの範囲で、１日１回乃至数回が投与される。
本発明化合物は、経口投与のための個体組成物及び液体組成物、若しくは非経口投与のための注射剤等の製剤とするために適当な希釈剤、分散剤、吸着剤、溶解剤等を混合することができる。
また、本発明化合物はヒトはもちろんのこと、ヒト以外の動物、特に哺乳類の治療及び予防にも用いることができる。
【００４７】
【発明の実施の形態】
次に、化合物（１）で表わされるピラゾロピリジン化合物の製造方法の一例を説明するが、本発明の製造方法はこれに限定されるものではない。
また、後述の反応を行う際に、当該部位以外の官能基については必要に応じてあらかじめ保護しておき、適当な段階においてこれを脱保護してもよい。
更に、各工程において、反応は通常行われる方法で行えばよく、単離精製は結晶化、再結晶化、カラムクロマトグラフィー、分取ＨＰＬＣ等の慣用される方法を適宜選択し、または組み合わせて行えばよい。
【００４８】
製造方法１乃至３
【化１３】

【００４９】
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６及びＡは前記と同じであり、Ｘ^１はハロゲン原子である）
【００５０】
製造方法１
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＮＨ−、−Ｎ＝；Ｙが−ＮＨ−；Ｚが−ＣＯ−；Ｗが−ＮＨ−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＨ_２−、−Ｏ−又は単結合等である場合について以下に例示する。
工程１−１
文献（Ｊ．　Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ．　Ｃｈｅｍ．　１１，　４２３（１９７４）と同様の方法で、一般式（２）で表される化合物と一般式（３）で表される化合物をメタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール系溶媒中で、加熱還流することにより、一般式（４）で表される化合物を得ることができる。
また、Ｈｅｌｖ．　Ｃｈｉｍ．　Ａｃｔａ　１６，　３０６（１９５８）、　Ａｎｇｅｗ．　Ｃｈｅｍ．　８６，　２３７（１９７４）、又は特開平５−１４０１１３号公報に開示された方法によっても同様に得ることができる。
なお、得られた化合物は単離することなく、次工程に用いることができる。
【００５１】
工程１−２
一般式（４）で表される化合物と一般式（５）で表される化合物を、硫酸、塩酸、蟻酸、酢酸、プロピオン酸、トシル酸又はメタンスルホン酸等の酸性触媒の存在下、加熱還流下で反応させることによって一般式（６）で表される化合物を得ることができる。
ここで、一般式（６）で表される化合物を一般式Ｘ^１ＣＨ_２ＣＯＯＭｅで表されるハロゲノ酢酸誘導体と反応させた後、更にメトキシ基を脱保護し、一般式（１８）
【化１４】

と反応させることにより、Ｘ＝−Ｏ−、Ｙ＝−ＣＨ_２−、Ｚ＝−ＣＯ−、Ｗ＝−ＮＨ−である化合物を得ることができる。
更に、
【化１５】

がｈ位の化合物を所望の場合は、一般式（６）で表される化合物に、一般式（５）で表される化合物（但し、Ｒ^３がアルコキシ基の場合）を反応させ、一般式
【化１６】

で表される化合物とし、更にこの化合物を還元することにより、一般式
【化１７】

で表される化合物を得ることができる。この化合物を後述の製造方法２−２乃至２−４と同様な反応に付すことにより、目的化合物を得ることができる。
【００５２】
工程１−３
一般式（６）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、アニソール、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒中で、ベンゼン、トルエン、アニソール等のラジカルスカベンジャーの存在下又は非存在下、オキシ塩化リン、オキシ臭化リン等のオキシハロゲン化リン又は三塩化リン、五臭化リン等のハロゲン化リンと反応させることによって、一般式（７）で表される化合物を得ることができる。
ここで、一般式（７）で表される化合物を後述の製造方法４−１と同様の反応（但し、ジアミン化合物の代わりにアクリル酸誘導体を反応させる）に付した後、脱保護反応を行い、更に一般式（１８）で表される化合物と反応させることにより、Ｘが−ＣＨ＝で、Ｙが＝ＣＨ−の化合物を得ることができる。またこの化合物を還元することにより、Ｘが−ＣＨ_２−で、Ｙが−ＣＨ_２−の化合物を得ることができる
【００５３】
工程１−４
一般式（７）で表される化合物をメタノール、エタノール、イソプロパノール、ジメチルスルホキシド等の極性溶媒中で、ヒドラジン等のヒドラジン化合物と、加熱還流下に反応させることにより、一般式（８）で表される化合物を得ることができる。
【００５４】
工程１−５
一般式（９）で表される化合物を酢酸エチル、クロロホルム、アセトニトリル等の非プロトン系溶媒中、トリエチルアミン、ピリジン等の塩基の存在下、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）、水素化ナトリウム等のアジド化剤と反応させることにより、一般式（１０）で表される化合物を得ることができる。
また、一般式（９）で表される化合物を酸無水物または酸ハライドに導いた後、アジド化剤を作用させることによっても得ることができる。更に、一般式（９）で表される化合物をヒドラジドに導いた後、ジアゾ化することによっても得ることができる。
【００５５】
工程１−６
一般式（１０）で表される化合物を酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼン、トルエン等の非プロトン性溶媒中、加熱し、クルチウス転位を起こすことにより、一般式（１１）で表される化合物を得ることができる。
なお、一般式（１１）で表される化合物は単離することなく、次工程に用いることができる。
また、一般式（１１）で表される化合物は、一般式（１８）で表される化合物に、ホスゲン、ジホスゲン等のホスゲン誘導体を作用させても得ることができる。
【００５６】
工程１−７
一般式（８）で表される化合物をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒中、一般式（１１）で表される化合物と反応させることにより、目的化合物の一つである一般式（１−１）で表される化合物を得ることができる。
また、一般式（１）におけるＷが単結合の化合物で環Ａがピリジル基の化合物を所望の場合は、一般式（８）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒中、一般式（１０）で表される化合物と反応させることにより、目的化合物を得ることができる。
また、一般式（１）におけるＷが単結合の化合物で環Ａがフェニル基の化合物を所望の場合は、一般式（８）で表される化合物をピリジン、トリエチルアミン等の塩基の存在下、テトラヒドロフラン、ベンゼン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒中、一般式
【化１８】

で表される化合物と反応させることにより、目的化合物を得ることができる。
更に、一般式（１）におけるＷが−ＣＯＮＨ−の化合物を所望の場合は、一般式（８）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、メタノール等の溶媒中、水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水素化ナトリウム、水素化リチウム、ナトリウムメチラート等の塩基の存在下、一般式
【化１９】

で表される化合物と反応させることにより、目的化合物の一つであるＷが−ＣＯＮＨ−の化合物を得ることができる。
また、一般式（１）におけるＷが−ＣＨ_２−の化合物を所望の場合は、一般式
【化２０】

を、Ｗが−Ｏ−の化合物を所望の場合は、一般式
【化２１】

を反応させることにより目的化合物を得ることができる。
また、Ｚ及びＷが単結合化合物を所望の場合は、反応性の高いヘテロアリールハライド（例えば２−ハロゲノベンズイミダゾール）を反応させることにより、目的化合物を得ることができる。
更に、Ｘが−Ｎ＝であり、Ｙが＝Ｎ−で表される化合物を所望の場合は、一般式（１−１）で表される化合物にピリジン、水酸化ナトリウム等の塩基の存在下、非水又は含水溶媒中でＮ−ブロモスクシンイミド、臭素等の酸化剤を作用させることにより得ることができる。
【００５７】
製造方法２
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＣＨ_２−；Ｙが−ＮＨ−；Ｚが−ＣＯ−；Ｚが−ＮＨ−等である場合について以下に例示する。
工程２−１
一般式（７）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ジエチルエーテル、ヘキサン等の非プロトン性溶媒中、ｎ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム、ｓｅｃ−ブチルリチウム等の強塩基、または、金属リチウム等のアルカリ金属を作用させ、ジメチルホルムアミド、ホルミルピペリジン、ヘキサメチレンテトラミン等のホルミル化剤によりホルミル化することにより、　一般式（１２）で表される化合物を得ることができる。
ここで更に、一般式（１２）で表される化合物をソジウム、ボロヒドリドのような還元剤で還元した後、一般式（１１）で表される化合物を反応させれば、Ｘが−ＣＨ_２−、Ｙが−Ｏ−、Ｚが−ＣＯ−、Ｗが−ＮＨ−である化合物を得ることができる。
【００５８】
工程２−２
一般式（１２）で表される化合物をメタノール、エタノール、イソプロパノール、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン等の極性溶媒中、又はこれらと水との混合溶媒中、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、ピリジン等の塩基の存在下に、ヒドロキシルアミン塩酸塩等のヒドロキシルアミン類化合物と反応させることにより、　一般式（１３）で表される化合物を得ることができる。
ここで更に、一般式（１３）で表される化合物にピリジン、トリエチルアミン等の塩基の存在下、アシルハライド又は一般式（１１）で表される化合物を反応させることにより、Ｘが−ＣＨ＝、Ｙが＝Ｎ−、Ｚが−Ｏ−、Ｗが−ＣＯ−或は−ＮＨＣＯ−である化合物を得ることができる。
【００５９】
工程２−３
一般式（１３）で表される化合物を酢酸等の酸溶媒中、亜鉛、鉄等の還元剤により還元、または、メタノール、エタノール等のアルコール性溶媒中、金属ナトリウム、酸化白金等で還元、或はアルコール性溶媒中、クロロホルムの存在下で酸化白金等で還元することにより、一般式（１４）で表される化合物を得ることができる。
【００６０】
工程２−４
工程１−７と同様にして、一般式（１４）で表される化合物と一般式（１１）で表される化合物を反応させることにより、目的化合物の一つである一般式（１−２）で表される化合物を得ることができる。
【００６１】
製造方法３
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−Ｏ−、Ｙが−ＮＨ−、Ｚが−ＣＯ−、Ｚが−ＮＨ−である場合について以下に例示する。
工程３−１
一般式（７）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、メタノール、ジメチルホルムアミド等の極性溶媒中、ｔｅｒｔ−ブトキシカリウム、ナトリウムメトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水素化ナトリウム、水素化リチウム、ｎ−ブチルリチウム等の強塩基の存在下、Ｎ−ヒドロキシアセチミデート等のＮ保護ヒドロキシアミン化合物と反応させることにより、　一般式（１５）で表される化合物を得ることができる。
【００６２】
工程３−２
一般式（１５）で表される化合物をメタノール、エタノール、テトラヒドロフラン等の極性溶媒、又は水との混合溶媒中、塩酸、硫酸、リン酸等の酸を用いて、加水分解することにより、　一般式（１６）で表される化合物を得ることができる。
【００６３】
工程３−３
工程１−７と同様にして、一般式（１６）で表される化合物と一般式（１１）で表される化合物を反応させることにより、目的化合物の一つである一般式（１−３）で表される化合物を得ることができる。
【００６４】
製造方法４乃至７
【化２２】

【００６５】
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ａ及びＸ^１は前記と同じであり、Ｐｈはフェニル基であり、Ｒ^１２’はＣ_１−６のアルコキシカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基又はアリールオキシカルボニル基であり、Ｒ^１４”はＣ_１−６のアラルキルオキシカルボニル基又はアリールオキシカルボニル基である）
【００６６】
製造方法４
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＮＨ−；Ｙが−ＣＨ_２−又は単結合；Ｚが−ＣＨ_２−又は単結合；Ｗが−ＮＨ−又は単結合である場合について以下に例示する。
工程４−１
文献（Ｊ．Ｏｒｇ．　Ｃｈｅｍ．　６１，　７２４０（１９９６））と同様の方法で一般式（７）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、ジメトキシエタン等の非プロトン性溶媒中、触媒として、パラジウム金属錯体及び２，２−ビス（ジフェニルフォスヒィノ）−１，１’−ビナフチル等の配位子及び過剰のｔｅｒｔ−ブトキシナトリウム等の強塩基の存在下、エチレンジアミン等のジアミン化合物と反応させることにより、　一般式（１７）で表される化合物を得ることができる。
【００６７】
工程４−２
一般式（１７）で表される化合物を工程４−１と同様の方法で一般式（１８）で表される化合物を反応することにより、目的化合物の一つである　一般式（１−４）で表される化合物を得ることができる。
【００６８】
製造方法５
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＣＨ_２−、Ｙが−ＮＨ−、Ｚが−ＣＯ−、Ｗが−ＮＲ^１４’−（ここで、Ｒ^１４’はＣ_１−６アルキル基である）で場合について以下に例示する。
工程５
一般式（１４）で表される化合物を文献（Ｓｙｎｔｈ．　Ｃｏｍｍｕｎ．　２６，　３３１（１９９６））と同様の方法で得られた一般式（１９）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の非プロトン性溶媒中で反応させることにより、目的化合物の一つである　一般式（１−５）で表される化合物を得ることができる。尚、この反応においては、一般式（１９）で表される化合物の代わりに、例えば一般式（２２）
【化２３】

（ここで、Ｒ^１４’はＣ_１−６アルキル基である）で表されるカルボニルハライド等価体を用いることもできる。
【００６９】
製造方法６
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＣＨ_２−、Ｙが−ＮＲ^１２’　（ここで、Ｒ^１２’はアルキルオキシカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基又はアリールオキシカルボニル基である）−、Ｚが−ＣＯ−、Ｗが−ＮＨ−である場合について以下に例示する。
工程６−１
一般式（１−２）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン等の非プロトン性溶媒中、ｎ−ブチルリチウム、ｓｅｃ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウム等の塩基と反応させた後、アシル化剤である一般式（２０）で表される化合物を反応させることにより、目的化合物の一つである一般式（１−６）で表される化合物を得ることができる。
【００７０】
製造方法７
一般式（１）で表される化合物が、Ｘが−ＣＨ_２−；Ｙが−ＮＲ^１４”−（ここで、Ｒ^１４”はアラルキルオキシカルボニル基又はアリールオキシカルボニル基である）または−ＮＨ−；Ｚが−ＣＯ−；Ｗが−ＮＲ^１４”−（ここで、Ｒ^{１ ４”}はアラルキルオキシカルボニル基又はアリールオキシカルボニル基である）である場合について以下に例示する。
工程７−１
一般式（１−２）で表される化合物をテトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ベンゼン、トルエン等の非プロトン性溶媒中、リチウムテトラメチルジシラジド等の強塩基と反応させ、アシル化剤である一般式（２１）で表される化合物と反応させることにより、　一般式（１−７）、（１−７’）で表される化合物を得ることができる。
【００７１】
【実施例】
実施例１
Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素
ａ）５−アミノ−１，３−ジメチルピラゾール
β―アミノクロトノニトリル（２５３．２８ｇ）及びメチルヒドラジン（１４２．１０ｇ）をイソプロパノール（０．９Ｌ）に溶解し、この溶液を４時間窒素気流下で穏やかに加熱還流した。反応溶液を濃縮し、さらにトルエンでイソプロパノールを共沸し粗精製物（３１０ｇ）を得た。これにトルエン（１Ｌ）を加え、加熱溶解した後、活性炭（３１．１ｇ）で処理することにより５−アミノ−１，３−ジメチルピラゾール（２６８．７４ｇ）を淡褐色結晶として得た。この結晶をさらに精製することなく、次の反応に用いた。
【００７２】
ｂ）１Ｈ−６−ヒドロキシ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン
エチルイソブチリルアセテート（３８２．５０ｇ）のプロピオン酸（３６２ｍＬ）溶液に実施例１のａ）で得られた５−アミノ−１，３−ジメチルピラゾール（２６８．７４ｇ）を溶解し、２３時間加熱還流した。放冷後、酢酸エチル（１．３Ｌ）を加え、１時間加熱還流した。徐冷後、析出した結晶を濾取し酢酸エチルで洗浄し、減圧乾燥することにより、１Ｈ−６−ヒドロキシ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（９１．３６ｇ）を白色結晶として得た。
【００７３】
ｃ）１Ｈ−６−ブロモ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン
オキシ臭化リン（１００ｇ）のアニソール（２５０ｍＬ）溶液に、実施例１のｂ）で得られた１Ｈ−６−ヒドロキシ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（４８．６７ｇ）を溶解し、１３０℃の油浴下で、３時間攪拌した。放冷後、トルエン（４００ｍＬ）を加え、氷冷下、水で過剰のオキシ臭化リンを反応させた。有機層を１Ｎ炭酸カリウム及び飽和食塩水で、洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮することにより、１Ｈ−６−ブロモ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１１８．６６ｇ）をオイルとして得た。この粗精製物を精製することなく、次の反応に用いた。
【００７４】
ｄ）１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン
ヒドラジン（１１３ｍＬ）のエタノール（２３０ｍＬ）溶液に実施例１のｃ）で得られた１Ｈ−６−ブロモ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの粗精製物（１１８．６６ｇ）を溶解し、１１０℃の油浴下で、２３時間加熱攪拌した。放冷後、氷浴下で４時間攪拌し、析出した１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンを濾取した。５０％エタノール水溶液で、洗浄後、６０℃で減圧乾燥することにより、１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（３９．４５ｇ）を白色結晶として得た。
【００７５】
ｅ）２，６−ジクロロピリジン−４−カルボニルアジド
２，６−ジクロロイソニコチン酸（４０．４５ｇ）とトリエチルアミン（３８ｍＬ）を酢酸エチル（４００ｍＬ）に溶解し、この溶液にＤＰＰＡ（５０ｍＬ）を氷冷下滴下し、室温で２０時間攪拌した。酢酸エチルを加え、希釈した後、水及び飽和食塩水で洗浄した。これを硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮し、２，６−ジクロロピリジン−４−カルボニルアジドの粗精製物（７０．８０ｇ）を得た。この粗結晶を酢酸エチルに溶解し、活性炭で処理することにより、２，６−ジクロロピリジン−４−カルボニルアジド（４５．６７ｇ）を結晶として得た。
【００７６】
ｆ）Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素
実施例１のｅ）で得られた２，６−ジクロロピリジン−４−カルボニルアジド（４２．４１ｇ）をトルエン（４１０ｍＬ）に溶解し、この溶液を１００℃で４時間攪拌した。放冷後、実施例１のｄ）で得られた１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（３９．４５ｇ）のＴＨＦ（４１０ｍＬ）溶液を加え、室温で１８時間攪拌した後、濃縮し、粗精製物（１２９．５９ｇ）を得た。これを酢酸エチル−ＴＨＦ（５：１）に溶解し、活性炭で処理後、酢酸エチルで再結晶することにより、Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素（４２．７４ｇ）を白色結晶として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，δｐｐｍ，ＣＤＣｌ_３）
１．３３（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．６２（３Ｈ，ｓ），３．５４（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．９１（３Ｈ，ｓ），６．４３（１Ｈ，ｓ），６．４５（１Ｈ，ｓ），６．５７（１Ｈ，ｓ），７．５０（２Ｈ，ｓ），８．１０（１Ｈ，ｓ）
ＦＡＢ（＋）ＭＳ（低分解能、ｍ／ｚ）　４０８
ｍ．ｐ．　２２２−２２５℃
【００７７】
実施例１−２〜１−９５
実施例１と同様にして実施例１−２〜１−９４の化合物を得た。得られた化合物を表１〜６に示した。
【００７８】
【表１】

【００７９】
【表２】

【００８０】
【表３】

【００８１】
【表４】

【００８２】
【表５】

【００８３】
【表６】

【００８４】
実施例２
Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素　メタンスルホン酸塩
実施例１で得られたＮ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素（３８６ｍｇ）をアセトン（２ｍＬ）に熱時溶解し室温まで冷却後、メタンスルホン酸（６５μＬ）を加え、室温で１日放置した。生じた結晶を濾取し、減圧乾燥することによって、Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）アミノ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素　メタンスルホン酸塩（３７６ｍｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，δｐｐｍ，ＤＭＳＯ）
１．２６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．３９（３Ｈ，ｓ），２．４９（３Ｈ，ｓ），２．５０（３Ｈ，ｓ），３．４４（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），６．３９（１Ｈ，ｓ），６．９６（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），　７．８１（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．８７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）
ｍ．ｐ．　１７８−１７９℃
【００８５】
実施例２−２〜２−７
実施例２と同様にして実施例２−２〜２−７の化合物を得た。得られた化合物を表７に示した。
【００８６】
【表７】

【００８７】
実施例３
Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）メチル−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素
ａ）１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルデヒド
１Ｈ−６−ブロモ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１０．９１ｇ）をＴＨＦ（１６０ｍＬ）に溶解し、この溶液にドライアイス−エタノ−ル浴下で、ｎ−ブチルリチウムのｎヘキサン溶液（３２．５ｍＬ）を滴下した。滴下５分後、ジメチルホルムアミド（４．７ｍＬ）を加え、ドライアイス−エタノ−ル浴下で２．５時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、室温で攪拌した。得られた有機層を、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。これを硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して濃褐色のオイル（８．８５ｇ）を得た。さらにシリカゲルカラム精製することにより、１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルデヒド（３．６５ｇ）を得た。
【００８８】
ｂ）１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルドキシム
実施例３のａ）で得られた１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルデヒド（３．６５ｇ）とヒドロキシルアミン塩酸塩（２．４１ｇ）及び炭酸カリウム（２．４４ｇ）をエタノール（７０ｍＬ）、水（３５ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、これを室温で３日間攪拌した。これに酢酸エチルを加え、水、飽和食塩水で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮して得られた粗結晶をイソプロピルエーテルで再結晶することにより、１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルドキシム（２．４７ｇ）を得た。
【００８９】
ｃ）１Ｈ−６−アミノメチル−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン
実施例３のｂ）で得られた１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イルアルドキシム（２．４８ｇ）を亜鉛（６．９８ｇ）の存在下に、酢酸（８５ｍＬ）に溶解し、このけん濁液を水浴下で１時間攪拌した。亜鉛をハイフロスーパーセルを用いて濾去し、濾液を濃縮した。濃縮液を酢酸エチルで希釈し、１Ｎ炭酸カリウム及び飽和重曹水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮することにより、１Ｈ−６−アミノメチル−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（０．７９ｇ）を淡黄色オイルとして得た。
【００９０】
ｄ）Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）メチル−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素
１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの代わりに、実施例３のｃ）で得られた１Ｈ−６−アミノメチル−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンを用い、実施例１のｆ）と同様の方法でＮ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）メチル−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，δｐｐｍ，ＣＤＣｌ_３）
１．３６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．６８（３Ｈ，ｓ），３．６０（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），３．９４（３Ｈ，ｓ），４．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），６．３０（１Ｈ，ｓ），６．８９（１Ｈ，ｓ），　７．４２（２Ｈ，ｓ），８．１０（１Ｈ，ｓ）
ＦＡＢ（＋）ＭＳ（低分解能、ｍ／ｚ）　４０７
ｍ．ｐ．　２３３−２３６℃
【００９１】
実施例３−２〜３−３３
実施例３と同様にして実施例３−２〜３−３３の化合物を得た。得られた化合物を表８、９に示した。
【００９２】
【表８】

【００９３】
【表９】

【００９４】
実施例４
Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシ−Ｎ’−３，５−ジクロロフェニル　尿素
ａ）エチル　Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシアセチミデート
エチル　Ｎ−ヒドロキシアセチミデート（１．２６ｇ）をジメチルホルムアミド（３５ｍＬ）に溶解し、氷冷下、ｔｅｒｔ−ブトキシカリウム（１．３６ｇ）を加え、２．５時間氷冷で攪拌した。この溶液に１Ｈ−６−ブロモ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン（１．２０ｇ）のジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）溶液を氷冷下加え、室温で１９時間攪拌した。これに水を加えた後、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮することにより、エチル　Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシアセチミデート（１．２７ｇ）を得た。
【００９５】
ｂ）Ｏ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）ヒドロキシルアミン
実施例４のａ）で得られたエチル　Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシアセチミデート（１．０６ｇ）をメタノール（９ｍＬ）に溶解し、この溶液に２０．５Ｎ硫酸（０．９ｍＬ）を加え、室温で２．５時間攪拌した。１Ｎ炭酸ナトリウムで中和後、酢酸エチルで抽出した。有機層を重曹水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮することにより、Ｏ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）ヒドロキシルアミン（７８１ｍｇ）を得た。
【００９６】
ｃ）Ｎ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素
１Ｈ−６−ヒドラジノ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジンの代わりに、実施例４のｂ）で得られたＯ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）ヒドロキシルアミンを用い、実施例１のｆ）と同様の方法でＮ−（１Ｈ−４−イソプロピル−１，３−ジメチルピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジ−６−イル）オキシ−Ｎ’−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）尿素を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，δｐｐｍ，ＣＤＣｌ_３）
１．３６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．６４（３Ｈ，ｓ），３．５７（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．９５（３Ｈ，ｓ），６．６２（１Ｈ，ｓ），７．５１（２Ｈ，ｓ），７．８２（１Ｈ，ｓ），８．８５（１Ｈ，ｓ）
ＦＡＢ（＋）ＭＳ（低分解能、ｍ／ｚ）　４０９
アモルファス
【００９７】
実施例４−２〜４−２２
実施例４と同様にして実施例４−２〜４−２２の化合物を得た。得られた化合物を表１０、１１に示した。
【００９８】
【表１０】

【００９９】
【表１１】

【０１００】
薬理試験
試験例（１）
ｈＡＧＲ１６発現ＣＨＯ膜に対する^３Ｈ−Ｓｈｐ−１−Ｐ結合抑制試験
ｈＡＧＲ１６発現ＣＨＯ細胞をダルベッコ改変イーグルＭＥＭ（低グルコース、　１０％　ウシ胎児血清、　１０μｇ／ｍｌ　ピューロマイシン）培地中で培養し、細胞が密になった時に無血清培地（０．３％　牛血清アルブミン、　ダルベッコ改変イーグルＭＥＭ、低グルコース）に交換し、一晩培養した。その後細胞をはがし、テフロンホモジナイザーで破砕した後、１００，０００Ｇで１時間×２回超遠心を行った。得られた膜画分を凍結保存し、以下の実験に用いた。
被検物質（最終ＤＭＳＯ（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）濃度は１．０％）１２５μｌを２４穴プレートに添加した後、^３Ｈ標識Ｓｈｐ−１−Ｐ　（最終濃度２ｎＭ）を１２５μｌ添加した。最後に、ｈＡＧＲ１６膜（最終濃度１００μｇ／ｗｅｌｌ）を２５０μｌ添加した。２時間４℃で攪拌後、ハーベスター（ＰＡＣＫＡＲＤ）でＧＦ／Ｂ　フィルターにトラップした。これを乾燥後、マイクロシンチを添加し、Ｔｏｐ　Ｃｏｕｎｔ（ＰＡＣＫＡＲＤ）で放射活性を測定した。化合物無添加（Ｔｏｔａｌ　ｂｉｎｄｉｎｇ）および化合物の代わりに最終濃度１０μＭの非標識　Ｓｈｐ−１−Ｐ添加（Ｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｂｉｎｄｉｎｇ）との差を１００％とし、被検物質の活性は、放射活性の抑制率からＩＣ_５０を求めた。
【０１０１】
試験例（２）
ｒＡＧＲ１６およびｈＥｄｇ３発現ＣＨＯ膜に対する^３Ｈ−Ｓ１Ｐ結合抑制試験
膜画分の調製、被検物質の評価方法は（１）と同じとした。
【０１０２】
試験例（３）
Ｓｈｐ−１−Ｐ刺激ヒト正常肺線維芽細胞（ＨＬＦ）増殖抑制試験
ＨＬＦ（２０００ｃｅｌｌｓ／２００μｌ／ｗｅｌｌ）を９６穴プレートに捲き込み、ＲＰＭＩ１６４０　１０％ウシ胎児血清培地を用い　２日間３７℃で培養した。その後ＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒｄ　Ｓａｌｉｎｅ）で細胞を洗浄後、ウシ胎児血清を含まないＲＰＭＩ培地に交換し、１日培養した。さらに、被検物質（最終濃度１０^−３Ｍ〜１０^−５Ｍ，最終ＤＭＳＯ濃度は０．１％）８μｌを添加した後、Ｓｈｐ−１−Ｐ　（最終濃度１μＭ）を５０μｌ添加した。１８時間後に^３Ｈ標識チミジンを添加し、さらに６時間後、ハーベスター（ＰＡＣＫＡＲＤ）でＧＦ／Ｂ　フィルターにトラップした。これを乾燥後、マイクロシンチを５０μｌ添加し、Ｔｏｐ　Ｃｏｕｎｔ（ＰＡＣＫＡＲＤ）で放射活性を測定した。被検物質の活性は、化合物非添加群に対して５０％の放射活性を示す値をＩＣ_５０として評価した。
上記試験例（１）〜（３）の試験結果を表１２に示した。
【０１０３】
【表１２】

【０１０４】
試験例（４）
ＤＭＮ肝炎試験
ＳＤラット（ＳＬＣ　雄６Ｗ）に、ＤＭＮ（Ｎ−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｎｉｔｒｏｓｏａｍｉｎｅ）を１２μｌ／ｍｌとなるように生食で希釈したものを０、１、２、７、８、９日目に腹腔内投与（１ｍｌ／ｋｇ）した。被検化合物は３、１０、３０　ｍｇ／ｋｇで１日２回経口投与、またポジティブコントロールとして抗ＴＧＦ−β抗体５ｍｇ／ｋｇを０、３、７、１０日目に静脈内投与し、１４日目に解剖した。肝臓を摘出してＯＨ−Ｐｒｏｌｉｎｅ定量用に約１００ｍｇの切片を切り分け、残りをホルマリン中に保存した。
ＯＨ−Ｐｒｏｌｉｎｅ量測定は以下のようにして行った。アセトン中で２日間以上脱脂・脱水を行い、真空デシケーター内で乾燥させて乾重量を測定した肝切片を、テフロンライナーキャップ付ガラス試験管に入れ、５ｍｌの６ＮＨＣｌを添加して１１８℃で２４時間加水分解した。６５℃で加温しながら窒素ガスを吹き付けてＨＣｌを蒸発・乾固した後、１ｍＬの純水に溶解してＯＨ−Ｐｒｏｌｉｎｅ定量用サンプルとした。０．５ｍｌのサンプル溶液に３ｍｌのクエン酸−リン酸緩衝溶液、０．５ｍｌの過ヨウ素酸溶液を加えて混和し、さらに１．７５ｍｌのトルエン抽出液を加えて室温で１時間振盪した後、１５００　ｒｐｍ、１０分間遠心した。有機層０．６ｍｌを試験管に分取してエールリッヒ試薬０．１５ｍｌを添加し、室温で４５分間放置した後、５６５　ｎｍの吸光度を測定した。ＯＨ−Ｐｒｏｌｉｎｅ量は、組織サンプルの乾燥重量で補正した値で示した。
上記試験例（４）の試験結果を表１３に示した。
【０１０５】
【表１３】

【０１０６】
【発明の効果】
上記試験から明らかなとおり、本発明の新規化合物及びその製薬上許容される塩は、Ｅｄｇ５レセプターに対して選択的に作用する。また、Ｓｐｈ−１−Ｐ刺激ヒト正常肺繊維芽細胞の増殖を有意に抑制した。さらに、ＤＭＮ肝炎モデルにおいても、コラーゲン（繊維症の主な原因）に含有されるヒドロキシプロリン（ＯＨ−Ｐｒｏｌｉｎｅ）の量を有意に抑制した。よって本願発明化合物は、Ｅｄｇ−５レセプターが特異的に存在する血管平滑筋、腎臓、肺、肝臓組織に関する治療薬、特にこれらの組織の繊維化を防ぐ優れた治療薬として有用である。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel pyrazolopyridine compound having a sphingosine-1-phosphate (hereinafter, referred to as “Sph-1-P”) receptor antagonistic activity and a pharmaceutical use thereof. More specifically, the present invention relates to a novel compound having a therapeutic effect on arteriosclerosis due to fibrosis of liver, kidney and lung and hypertrophy of vascular smooth muscle, and a pharmaceutical use thereof.
[0002]
[Prior art]
The lipid constituting the cell membrane is classified into glycerophospholipid, cholesterol, and sphingolipid. Further, sphingolipids therein are mainly composed of two types. It is a sphingomyelin which is one of the major phospholipids, and various glycolipids in which sugar chains such as gangliosides are bonded to a ceramide skeleton. When these sphingolipids are stimulated from the outside, they are degraded in cell membranes or lysosomes by the enzyme action of sphingomyelinase or endoglycanase to be converted to ceramide, and further metabolized to sphingosine by the action of ceramidase. Under the action of sphingosine kinase, sphingosine is phosphorylated at the hydroxyl group of C1 to form Sph-1-P. This Sph-1-P also does not normally accumulate in cells, but is immediately degraded by lyase and converted to phosphoethanolamine and palmitoaldehyde. In recent years, attention has been paid to such substances generated in the metabolic degradation pathway of cell membrane sphingolipids as factors that regulate various functions.
[0003]
The functions of these sphingolipids, which have sphingosine in the basic skeleton, are mainly involved in intracellular signal transduction.In particular, ceramide and sphingosine are important second messengers involved in cell functions such as cell proliferation, differentiation and apoptosis. It has been known for a long time.
On the other hand, it has been found that Sph-1-P accumulates in platelets that do not contain lyase, a degrading enzyme, and is released upon activation. The released Sph-1-P has a function as a cell motility regulator that strongly inhibits PDGF-dependent cell motility of cancer cells such as melanoma cells and vascular smooth muscle cells, or has a growth promoting effect on fibroblasts. It was elucidated. Furthermore, it triggers various complex cellular reactions, and Ca from intracellular stores⁺It has been elucidated to regulate MAP kinase release, regulate actin polymerization, block cell death, and regulate the MAP kinase signaling pathway.
[0004]
Furthermore, the function of so-called intercellular messenger, in which Sph-1-P acts from outside the cell via a cell surface receptor, is being elucidated. For example, Sph-1-P is an intracellular IP₃Recruitment of calcium from a different site and the presence of cellular mechanisms both dependent and independent of the pertussis @ toxin-sensitive G protein, through which they activate MAP kinase and promote DNA synthesis. It was found that the site of action was mediated not by intracellular but by cell surface receptors. In recent years, Edg-1, Edg-3, Edg-5 (AGR16 / H218), Edg-6, and Edg-8 genes have been cloned as their receptors, and these are specific Sph-1-P receptors. Was reported. Subsequent studies have revealed that Edg-5 is specifically distributed in vascular smooth muscle, heart, kidney, lung, liver and the like. In addition, we have found that in pathological models for these organs, the level of Edg-5 mRNA increases as the pathological state progresses. This suggested that Edg-5 was involved in the development of disease in each organ.
[0005]
By specifically acting on Edg-5 in this way, the possibility of developing an excellent therapeutic agent for preventing arteriosclerosis, fibrosis of kidney, lung, and liver tissues is considered and desired.
[0006]
By the way, as the compound having a pyrazolopyridine skeleton as in the present invention, for example, the following compound is disclosed in International Publication No. WO00 / 06549.
Embedded image

However, its use is as a herbicide.
Further, JP-A-61-197580 discloses a compound having the following pyrazolopyridine skeleton.
Embedded image

However, its use is as a herbicide.
As described above, it is described that the compound having a pyrazolopyridine skeleton specifically has an antagonistic effect on the Sph-1-P receptor as described in the present application and that they are useful as a therapeutic drug for fibrosis. Not only are there no disclosures of any data suggesting them.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
In view of the above problems, an object of the present invention is to specifically treat sphingosine-1-phosphate receptor (Edg-5) to treat a disease associated with the receptor. Specifically, intensive studies are conducted to search for therapeutic agents for hepatic fibrosis, pulmonary fibrosis, renal fibrosis, arteriosclerosis, etc., which occur in association with sphingosine-1-phosphate receptor (Edg-5). Was. As a result, the pyrazolopyridine compound represented by the following general formula (1) specifically antagonizes the sphingosine-1-phosphate receptor (Edg-5), thereby providing a useful therapeutic agent for fibrosis and treating arteriosclerosis. They have found that they can be used as medicines, and have completed the present invention.
More specifically, it is as shown in the following (1) to (16).
[0008]
(1) General formula (1)
Embedded image

(In the formula,
R¹Is C_1-6Alkyl group, hydrogen atom or -COR⁷(Where R⁷Is C_1-6Alkyl group, aryl group, aralkyl group, C_1-6An alkoxy group, an aryloxy group or an aralkyloxy group);
R²Is C_1-6An alkyl group or an aryl group;
R³Is a hydrogen atom, C_1-6Alkyl group, C_1-6Alkoxy group, C_1-6Alkoxycarbonyl group, haloalkyl group, C_3-7A cycloalkyl group or an aryl group;
R⁴Is a hydrogen atom or C_1-6An alkyl group;
R⁵And R⁶Are the same or different and each represents a hydrogen atom, C_1-6Alkyl group, C_1-6Alkoxy group, C_1-6Alkoxycarbonyl group, carboxyl group, C_2-6Alkynyl group, halogen atom, cyano group, nitro group, haloalkyl group, C_1-6Alkylamino group, di C_1-6Alkylamino group, acyl group, hydroxyl group, aryloxy group, aralkyloxy group or -CONHR⁸(Where R⁸Is an aryl group or an aralkyl group);
X is -NR⁹-(Where R⁹Is a hydrogen atom, C_1-6Alkyl group or -NHR¹⁰(Where R¹⁰Is a carboxyl group or C_1-6Which is an alkoxycarbonyl group)), -O-, -N =, -CH = or -CHR.¹¹-(Where R¹¹Is a hydrogen atom or C_1-6An alkyl group);
Y is -NR¹²-(Where R¹²Is a hydrogen atom, C_1-6Alkyl group, aralkyl group, C_1-6An alkoxycarbonyl group, an aryloxycarbonyl group, an aralkyloxycarbonyl group, or -CONHR^Thirteen(Where R^ThirteenIs an aryl group or an aralkyl group), = N-, -N =, -CH₂—, ＣＨCH—, —O—, —CO— or a single bond;
Z is -CO-, -CS-, -CH₂-, -O- or a single bond;
W is -NR¹⁴-(Where R¹⁴Is a hydrogen atom, C_1-6Alkyl group, aralkyloxycarbonyl group, aryloxycarbonyl group or heteroaryl C_1-6Alkyl-), -O-, -CO-, -CONH-, -CH₂-, -NHCH₂-Or a single bond;
Embedded image

Is a double or single bond;
A is an aryl group, a heteroaryl group or a cycloalkyl group], or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[0009]
(2) R³, R⁴,
Embedded image

Is substituted on the pyridine ring by R³Is the h position, R⁴Is i-th,
Embedded image

Is the j-position, or the pharmaceutically acceptable salt thereof.
[0010]
(3) R¹Is C_1-6An alkyl group;²Is C_1-6An alkyl group;⁴Is a hydrogen atom, or the pharmaceutically acceptable salt thereof.
[0011]
(4) The pyrazolopyridine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to (3), wherein Y is -NH- or = N-, Z is -CO-, and W is -NH-.
[0012]
(5) The pyrazolopyridine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to (4), wherein ring A is an aryl group.
[0013]
(6) The pyrazolopyridine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to (5), wherein the aryl group is a phenyl group.
[0014]
(7) The pyrazolopyridine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to (4), wherein ring A is a heteroaryl group.
[0015]
(8) The pyrazolopyridine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to (7), wherein the heteroaryl group is a pyridyl group.
[0016]
(9) The pyrazolopyridine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to (5), wherein X is -NH- or -N =.
[0017]
(10) X is -CH₂The pyrazolopyridine compound according to (5) to (8), or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[0018]
(11) The pyrazolopyridine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to (5), wherein X is -O-.
[0019]
(12) A pharmaceutical composition comprising the pyrazolopyridine compound according to (1) to (11) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier.
[0020]
(13) A sphingosine-1-phosphate receptor antagonist comprising, as an active ingredient, the pyrazolopyridine compound or the pharmaceutically acceptable salt thereof according to (1) to (11).
[0021]
(14) A therapeutic drug for fibrosis, comprising the pyrazolopyridine compound according to (1) to (11) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
[0022]
(15) A therapeutic agent for liver fibrosis, comprising the pyrazolopyridine compound or the pharmaceutically acceptable salt thereof according to any one of (1) to (11) as an active ingredient.
[0023]
(16) A therapeutic agent for pulmonary fibrosis, comprising the pyrazolopyridine compound or the pharmaceutically acceptable salt thereof according to any one of (1) to (11) as an active ingredient.
[0024]
The definition of each substituent used in this specification is as follows.
"Halogen atom" means chlorine atom, bromine atom, fluorine atom and the like. R⁵And R⁶Is preferably a chlorine atom or a bromine atom.
[0025]
"C_1-6The "alkyl group" is a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, such as a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a butyl group, an isobutyl group, and a sec-butyl group. Tert-butyl group, pentyl group, isopentyl group, neopentyl group, tert-pentyl group, hexyl group, etc., and preferably a straight-chain or branched alkyl group having 1 to 4 carbon atoms. Particularly preferred are a methyl group, an ethyl group and an isopropyl group. R¹Is preferably a methyl group;²Is preferably a methyl group;³Is preferably a methyl group, an ethyl group or an isopropyl group;⁴Is preferably a methyl group;⁵And R⁶Is preferably a methyl group or an ethyl group;⁷Is preferably a methyl group or an ethyl group;⁹Is preferably a methyl group;¹¹Is preferably a methyl group;¹²Is preferably a methyl group;¹⁴Is preferably a methyl group.
[0026]
"C_1-6"Alkoxy group" refers to a linear or branched alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, such as methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, tert-butoxy, pentyloxy, A tert-pentyloxy group or a hexyloxy group, preferably a methoxy group, an ethoxy group, an isopropoxy group, a butoxy group or a tert-butoxy group having 1 to 4 carbon atoms. Particularly preferred is a methoxy group or an ethoxy group. R³Is preferably a methoxy group, and R⁵And R⁶Is preferably a methoxy group or an ethoxy group;⁷Is preferably a methoxy group.
[0027]
"C_1-6"Alkoxycarbonyl group" means a methoxycarbonyl group, an ethoxycarbonyl group, a propoxycarbonyl group, an isopropoxycarbonyl group, a butoxycarbonyl group, an isobutoxycarbonyl group or an tert-butoxycarbonyl group having 1 to 5 carbon atoms. Represents an alkoxycarbonyl group. Preferred are a methoxycarbonyl group, an ethoxycarbonyl group and a tert-butoxycarbonyl group. R³, R⁵And R⁶Is preferably a methoxycarbonyl group, and R¹⁰Is preferably a methoxycarbonyl group or an ethoxycarbonyl group;¹²Is preferably a methoxycarbonyl group or a tert-butoxycarbonyl group.
[0028]
“Haloalkyl group” refers to the above C_1-6Alkyl groups are those substituted with the above halogen atoms, for example, chloromethyl group, bromomethyl group, fluoromethyl group, trifluoromethyl group, trichloromethyl group, tribromomethyl group, trichloroethyl group, pentafluoropropyl group or chlorobutyl And a chloromethyl group, a bromomethyl group, a fluoromethyl group, a trifluoromethyl group or a trichloromethyl group. Particularly preferred is a trifluoromethyl group. R³, R⁵And R⁶Is preferably a trifluoromethyl group.
[0029]
"C_2-6An "alkynyl group" is a straight-chain or branched group having 2 to 6 carbon atoms, such as ethynyl, propynyl, butynyl, 2-pentynyl, 3-pentynyl, 2-hexynyl, 3 -Hexynyl group and the like, preferably a straight-chain or branched alkynyl group having 2 to 4 carbon atoms. R⁵And R⁶Is preferably an ethynyl group.
[0030]
"C_1-6The “alkylamino group” refers to an amino group mono-substituted by an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, such as a methylamino group, an ethylamino group, a propylamino group, and a butylamino group. Preferred are a methylamino group and an ethylamino group. R⁵And R⁶Is preferably a methylamino group or an ethylamino group.
[0031]
"Ji C_1-6The “alkylamino group” refers to an amino group disubstituted with an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, such as a dimethylamino group, a diethylamino group, a dipropylamino group, a dibutylamino group, and the like. Group or diethylamino group. R⁵And R⁶Is preferably a dimethylamino group or a diethylamino group.
[0032]
An “acyl group” is a formyl group having 1 carbon atom; an alkanoyl group having 2 to 6 carbon atoms such as an acetyl group, a propionyl group, a butyryl group or a pivaloyl group; or 1 to 3 substituents on an aryl group. An aroyl group such as a benzoyl group which may be possessed. Preferably, they are a formyl group, an acetyl group, a pivaloyl group or a benzoyl group. R⁵And R⁶Is preferably an acetyl group.
[0033]
The “aryl group” is a phenyl group, a naphthyl group, a biphenyl group, or the like, and is preferably a phenyl group. Here, the aryl group may be substituted by 1 to 3 substituents.
Here, “may be substituted by 1 to 3 substituents” means that the substituents may be the same or different, and the position of the substituent is arbitrary and is not particularly limited. . Specifically, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, tert-butyl, etc._1-6Alkyl group; hydroxyl group; C such as methoxy group, ethoxy group, propoxy group, butoxy group_1-6Alkoxy group; halogen atom such as fluorine, chlorine and bromine; nitro group; cyano group; acyl group such as formyl group, acetyl group, propionyl group; acyloxy group such as formyloxy group, acetyloxy group, propionyloxy group; mercapto group A C such as methylthio, ethylthio, propylthio, butylthio, isobutylthio;_1-6Alkylthio group; amino group; C such as methylamino group, ethylamino group, propylamino group, butylamino group, etc._1-6Alkylamino group; dimethylamino group, diethylamino group, dipropylamino group, dibutylamino group, etc._1-6Alkylamino group; carboxy group; methoxycarbonyl group, ethoxycarbonyl group, propoxycarbonyl group, etc._1-6Alkoxycarbonyl group; amide group; trifluoromethyl group; C such as methylsulfonyl group, ethylsulfonyl group and the like_1-6Alkylsulfonyl group; aminosulfonyl group; cyclopentyl group, cyclohexyl group, etc._3-7A cycloalkyl group; a phenyl group; an acylamide group such as an acetamido group or a propionylamido group;_1-6Alkyl group, C_1-6Alkoxy group, mercapto group, C_1-6Alkylthio group, halogen atom, trifluoromethyl group, C_1-6Alkylcarbonyl group, C_1-6An alkoxycarbonyl group and an acylamide group.
R¹, R²And R³Is preferably a phenyl group, and R⁸Is preferably a phenyl group or a phenyl group substituted with a halogen atom,^ThirteenIs preferably a phenyl group or a phenyl group substituted with a halogen atom, and the ring A is preferably a phenyl group.
[0034]
The “aralkyl group” means that the aryl group is a phenyl group (here, the phenyl group may be substituted by one to three substituents described in the above aryl group), and the alkyl part has a carbon number of 1 to 3. An arylalkyl group having 1 to 6 alkyl groups, such as a benzyl group, a phenylethyl group, a phenylpropyl group, a phenylbutyl group, or a phenylhexyl group, and preferably a benzyl group or a phenylethyl group. R⁷, R⁸, R¹²And R¹⁴Is preferably a benzyl group.
[0035]
The “aryloxy group” is a phenoxy group, a naphthyloxy group, or the like (here, the phenyl group or the naphthyl group may be substituted by one to three substituents described for the aryl group), and is preferable. Is a phenoxy group. R⁵, R⁶And R⁷Is preferably a phenoxy group.
[0036]
“Aralkyloxy group” refers to a benzyloxy group, a phenethyloxy group, a phenylpropyloxy group, a phenylbutyloxy group or the like (where the phenyl group is substituted by one to three substituents described in the above aryl group). May be an aralkyloxy group having 1 to 4 carbon atoms, preferably a benzyloxy group. R⁵, R⁶And R⁷Is preferably a benzyloxy group.
[0037]
The “aryloxycarbonyl group” is a phenoxycarbonyl group, a naphthyloxycarbonyl group or the like (where the phenyl group or naphthyl group may be substituted by one to three substituents described for the aryl group). And preferably a phenoxycarbonyl group. R¹²And R¹⁴Is preferably a phenoxycarbonyl group.
[0038]
“Aralkyloxycarbonyl group” refers to a benzyloxycarbonyl group, a phenethyloxycarbonyl group, a phenylpropyloxycarbonyl group, a phenylbutyloxycarbonyl group or the like (where the phenyl group is one to three of the above-described aryl groups). The alkoxy moiety of the (optionally substituted by a substituent) is an aralkyloxycarbonyl group having 1 to 4 carbon atoms, and is preferably a benzyloxycarbonyl group. R¹²And R¹⁴Is preferably a benzyloxycarbonyl group.
[0039]
"C_3-7The “cycloalkyl group” means a cycloalkyl group having 3 to 7 carbon atoms, specifically, a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, a 1-methylcyclohexyl, and a cycloheptyl group. Preferable is a cycloalkyl group having 3 to 6 carbon atoms, specifically, a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, and a cyclohexyl group. Particularly preferred is a cyclopropyl group or a cyclohexyl group.
R³Is preferably a cyclopropyl group. Ring A is preferably a cyclohexyl group.
[0040]
“Heteroaryl group” refers to a 5- or 6-membered aromatic heterocyclic ring containing 1 to 3 heteroatoms selected from nitrogen, oxygen and sulfur atoms in addition to carbon as a ring-constituting atom; Ring, a saturated heterocyclic ring or a condensed heterocyclic ring obtained by condensing these heterocyclic rings with a benzene ring, specifically, a thiophen-2-yl group, a thiophen-3-yl group, a furan-2-yl group, a furan -3-yl group, pyrrol-1-yl group, pyrrol-2-yl group, pyrrol-3-yl group, imidazol-1-yl group, imidazol-2-yl group, imidazol-4-yl group, pyrazole- 1-yl group, pyrazol-3-yl group, pyrazol-4-yl group, thiazol-2-yl group, thiazol-4-yl group, thiazol-5-yl group, oxazol-2-yl group, oxazol-4 Yl group, oxazol-5-yl group, isoxazol-3-yl group, isoxazol-4-yl group, isoxazol-5-yl group, pyrimidin-2-yl group, pyrimidin-4-yl group, pyrimidine- 5-yl group, pyridin-2-yl group, pyridin-3-yl group, pyridin-4-yl group, benzothiophen-2-yl group, benzothiophen-3-yl group, benzofuran-2-yl group, benzofuran -3-yl group, indol-2-yl group, indol-3-yl group, benzimidazol-1-yl group, benzimidazol-2-yl group, benzothiazol-2-yl group, benzoxazol-2-yl Yl group, quinolin-2-yl group, quinolin-3-yl group, quinolin-4-yl group, isoquinolin-1-yl group, isoquinolin-3- Group, isoquinolin-4-yl group, 1,3,4-thiadiazol-2-group, a morpholin-4-yl group.
In ring A, a pyridin-2-yl group, a pyridin-3-yl group, a pyridin-4-yl group, a benzoxazol-2-yl group, a morpholin-4-yl group and the like are preferable, and a pyridine-yl group is particularly preferable. It is a 3-yl group or a pyridin-4-yl group.
[0041]
"Heteroaryl C_1-6The “alkyl group” is a heteroaryl group in which the heteroaryl group means the above heteroaryl group and the alkyl portion is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, such as a pyridinylmethyl group (2-pyridinylmethyl group) , 3-pyridinylmethyl group, 4-pyridinylmethyl group), quinolinylmethyl group (2-quinolinylmethyl group, etc.), indolylmethyl group (2-indolylmethyl group, 3-indolylmethyl group, etc.), thiophen-2-ylmethyl group, Thiophen-3-ylmethyl group, 2-furanylmethyl group, 3-furanylmethyl group, 1H-benzimidazol-2-ylmethyl group, benzothiazol-2-ylmethyl group, 2- (thiophen-2-yl) ethyl group, 2- (Furan-2-yl) ethyl group and the like. Preferred are a 2-pyridinylmethyl group, a 3-pyridinylmethyl group, a 4-pyridinylmethyl group, a 3-pyridinylethyl group, a 4-pyridinylethyl group, and the like. R¹⁴Is preferably a 3-pyridinylethyl group.
[0042]
The “prodrug” refers to a derivative obtained by chemically modifying a drug molecule, which itself does not show physiological activity, and shows a reversible drug effect on the original drug molecule in the body after administration.
[0043]
“Pharmaceutically acceptable salts” include, for example, various inorganic acid addition salts such as hydrochloride, hydrobromide, sulfate, phosphate or nitrate; acetate, propionate, succinate, glycolic acid Salt, lactate, malate, oxalate, tartrate, citrate, maleate, fumarate, methanesulfonate, benzenesulfonate, p-toluenesulfonate or ascorbate, etc. Various organic acid addition salts include, but are not limited to, salts with various amino acids such as aspartate or glutamate. In some cases, it may be a hydrate, hydrate or solvate.
[0044]
Next, various substituents or substitution positions will be described in more detail as follows.
R¹Is preferably C_1-6An alkyl group, particularly preferably a methyl group.
R²Is preferably C_1-6An alkyl group, particularly preferably a methyl group.
R³Is preferably C_1-6An alkyl group, a haloalkyl group or a cycloalkyl group, particularly preferably_1-6It is an alkyl group.
R⁴Is preferably a hydrogen atom.
R³, R⁴,
Embedded image

Preferred examples of the substitution position on the pyridine ring of³Is the h position, R⁴Is i-th,
Embedded image

Is the j-th place.
R⁵And R⁶Is preferably a hydrogen atom, C_1-6Alkyl group, C_1-6Alkoxy group, C_2-6Alkynyl group, halogen atom, cyano group, nitro group, haloalkyl group, C_1-6Alkylamino group, di C_1-6There are an alkylamino group, an acyl group, an aryloxy group and an aralkyloxy group.
X is preferably -NR⁹-(Where R⁹Are preferably a hydrogen atom or C_1-4Alkyl, particularly preferably a hydrogen atom), -O-, -N = or -CHR.¹¹-(Where R¹¹Are preferably a hydrogen atom or C_1-4Alkyl group, particularly preferably a hydrogen atom), and particularly preferably -NH-, -O-, -N = or -CH₂-.
Y is preferably -NR¹²-(Where R¹²Are preferably a hydrogen atom or C_1-6Alkyl group, particularly preferably a hydrogen atom), = N-, -N =, -CH₂—, ＣＨCH—, —O— or —CO—, particularly preferably —NH— or ＮN—.
Z is preferably -CO-, -CS-, -CH₂-, -O-, = CR¹⁴-(Where R¹⁴Is a hydrogen atom), and particularly preferably -CO-.
W is preferably -NR^Fifteen-(Where R^FifteenAre preferably a hydrogen atom or C_1-6An alkyl group, particularly preferably a hydrogen atom) or a single bond, particularly preferably -NH-.
In Ring A, an aryl group or a heteroaryl group is preferable, and a phenyl group and a pyridyl group (pyridin-2-yl group, pyridin-3-yl group or pyridin-4-yl group) are particularly preferable.
[0045]
Here, the compound of the present invention may be a hydrate or a solvate in some cases, and also includes a prodrug compound and a metabolite thereof.
[0046]
When the present invention is used as a therapeutic drug for liver fibrosis or the like, it is administered systemically or locally, orally or parenterally. The dose varies depending on the age, body weight, symptoms, therapeutic effect, etc., but it is usually in the range of 10 mg to 1 g at a time, and once to several times a day per adult.
The compound of the present invention is prepared by mixing an appropriate diluent, dispersant, adsorbent, dissolving agent and the like for preparing a solid composition and a liquid composition for oral administration, or a preparation such as an injection for parenteral administration. can do.
Further, the compound of the present invention can be used for treatment and prevention of not only humans but also animals other than humans, particularly mammals.
[0047]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Next, an example of a method for producing the pyrazolopyridine compound represented by the compound (1) will be described, but the production method of the present invention is not limited thereto.
In performing the reaction described below, the functional group other than the site may be protected in advance if necessary, and may be deprotected at an appropriate stage.
Further, in each step, the reaction may be carried out by a usual method, and the isolation and purification may be carried out by appropriately selecting or combining conventional methods such as crystallization, recrystallization, column chromatography, and preparative HPLC. Just do it.
[0048]
Manufacturing methods 1 to 3
Embedded image

[0049]
(Where R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶And A are the same as above, and X¹Is a halogen atom)
[0050]
Manufacturing method 1
X is -NH-, -N =; Y is -NH-; Z is -CO-; W is -NH-, -CONH-, -CH.₂Examples of the case of —, —O—, a single bond, and the like are given below.
Step 1-1
References (J. {Heterocycll.} Chem.}11423 (1974) by heating and refluxing the compound represented by the general formula (2) and the compound represented by the general formula (3) in an alcoholic solvent such as methanol, ethanol and isopropanol. As a result, a compound represented by the general formula (4) can be obtained.
Also, Helv. {Chim. Acta 16, 306 (1958), Angew. {Chem. No. 86, 237 (1974) or the method disclosed in JP-A-5-140113 can be obtained in the same manner.
In addition, the obtained compound can be used for the next step without isolation.
[0051]
Step 1-2
The compound represented by the general formula (4) and the compound represented by the general formula (5) are heated under reflux in the presence of an acidic catalyst such as sulfuric acid, hydrochloric acid, formic acid, acetic acid, propionic acid, tosylic acid or methanesulfonic acid. By reacting under the following conditions, the compound represented by the general formula (6) can be obtained.
Here, the compound represented by the general formula (6) is represented by the general formula X¹CH₂After reacting with a halogenoacetic acid derivative represented by COOMe, the methoxy group is further deprotected to obtain a compound of the general formula (18)
Embedded image

X = -O-, Y = -CH₂-, Z = -CO- and W = -NH- can be obtained.
Furthermore,
Embedded image

Is a compound at the h-position, a compound represented by the general formula (6) is replaced with a compound represented by the general formula (5) (provided that R³Is an alkoxy group), the general formula
Embedded image

By further reducing this compound to a compound represented by the general formula
Embedded image

Can be obtained. The target compound can be obtained by subjecting this compound to a reaction similar to Production Methods 2-2 to 2-4 described below.
[0052]
Step 1-3
A compound represented by the general formula (6) is reacted with a radical such as benzene, toluene, and anisole in an aprotic solvent such as tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, benzene, toluene, anisole, acetonitrile, and N, N-dimethylformamide. By reacting with a phosphorus oxyhalide such as phosphorus oxychloride and phosphorus oxybromide or a phosphorus halide such as phosphorus trichloride and phosphorus pentabromide in the presence or absence of a scavenger, a compound represented by the general formula (7) is obtained. Is obtained.
Here, after subjecting the compound represented by the general formula (7) to the same reaction as in Production method 4-1 described below (however, an acrylic acid derivative is reacted instead of the diamine compound), a deprotection reaction is performed. Further, by reacting with a compound represented by the general formula (18), a compound in which X is -CH = and Y is = CH- can be obtained. Further, by reducing this compound, X becomes -CH₂-, And Y is -CH₂-Compound can be obtained
[0053]
Step 1-4
By reacting the compound represented by the general formula (7) with a hydrazine compound such as hydrazine in a polar solvent such as methanol, ethanol, isopropanol or dimethyl sulfoxide under heating to reflux, the compound represented by the general formula (8) is obtained. Compound can be obtained.
[0054]
Step 1-5
An azide agent such as diphenylphosphoryl azide (DPPA) or sodium hydride in a non-protic solvent such as ethyl acetate, chloroform or acetonitrile in the presence of a base such as triethylamine or pyridine in a compound represented by the general formula (9) By reacting with, a compound represented by the general formula (10) can be obtained.
Alternatively, the compound can be obtained by introducing the compound represented by the general formula (9) into an acid anhydride or an acid halide and then reacting the compound with an azidating agent. Furthermore, it can be obtained by introducing the compound represented by the general formula (9) to hydrazide and then diazotizing the compound.
[0055]
Step 1-6
A compound represented by the general formula (11) is obtained by heating a compound represented by the general formula (10) in an aprotic solvent such as ethyl acetate, chloroform, benzene or toluene to cause Curtius rearrangement. Can be.
The compound represented by the general formula (11) can be used in the next step without isolation.
The compound represented by the general formula (11) can also be obtained by reacting a phosgene derivative such as phosgene or diphosgene on the compound represented by the general formula (18).
[0056]
Step 1-7
The compound represented by the general formula (8) is represented by the general formula (11) in an aprotic solvent such as tetrahydrofuran (THF), 1,4-dioxane, benzene, toluene, acetonitrile and N, N-dimethylformamide. By reacting with the compound, a compound represented by the general formula (1-1), which is one of the target compounds, can be obtained.
Further, when a compound in which W is a single bond and ring A is a pyridyl group in the general formula (1) is desired, the compound represented by the general formula (8) is converted into tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, benzene, toluene The target compound can be obtained by reacting the compound represented by the general formula (10) with an aprotic solvent such as acetonitrile, N, N-dimethylformamide or the like.
When W in the general formula (1) is a compound having a single bond and ring A is a phenyl group, the compound represented by the general formula (8) is treated with tetrahydrofuran in the presence of a base such as pyridine or triethylamine. In an aprotic solvent such as benzene, chloroform, N, N-dimethylformamide, etc.
Embedded image

By reacting with the compound represented by the formula, the target compound can be obtained.
Further, when a compound in which W in the general formula (1) is -CONH- is desired, the compound represented by the general formula (8) is dissolved in a solvent such as tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, benzene, toluene, or methanol. In the presence of a base such as sodium hydroxide, lithium hydroxide, sodium hydride, lithium hydride, sodium methylate, the general formula
Embedded image

By reacting with the compound represented by the formula, a compound in which W, which is one of the target compounds, is -CONH- can be obtained.
W in the general formula (1) is -CH₂When a compound of the formula-is desired,
Embedded image

And when W is a compound of the formula -O-,
Embedded image

To give the desired compound.
When Z and W each desire a single bond compound, the target compound can be obtained by reacting a highly reactive heteroaryl halide (for example, 2-halogenobenzimidazole).
Further, when a compound in which X is -N = and Y is = N- is desired, the compound represented by the general formula (1-1) is added to a compound represented by the general formula (1-1) in the presence of a base such as pyridine and sodium hydroxide. , An oxidizing agent such as N-bromosuccinimide or bromine in a non-aqueous or aqueous solvent.
[0057]
Manufacturing method 2
When the compound represented by the general formula (1) is such that X is -CH₂-; Y is -NH-; Z is -CO-; Z is -NH- and the like.
Step 2-1
A compound represented by the general formula (7) in an aprotic solvent such as tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, diethyl ether, or hexane, a strong base such as n-butyllithium, tert-butyllithium, or sec-butyllithium; Alternatively, the compound represented by the general formula (12) can be obtained by reacting with an alkali metal such as metallic lithium and formylating with a formylating agent such as dimethylformamide, formylpiperidine, hexamethylenetetramine or the like.
Here, after further reducing the compound represented by the general formula (12) with a reducing agent such as sodium or borohydride, and reacting the compound represented by the general formula (11), X becomes —CH₂-, A compound in which Y is -O-, Z is -CO-, and W is -NH- can be obtained.
[0058]
Step 2-2
Potassium carbonate, sodium carbonate, potassium hydroxide, in a polar solvent such as methanol, ethanol, isopropanol, 1,4-dioxane, tetrahydrofuran, or a mixed solvent thereof with a compound represented by the general formula (12), By reacting with a hydroxylamine compound such as hydroxylamine hydrochloride in the presence of a base such as sodium hydroxide or pyridine, the compound represented by the general formula (13) can be obtained.
Here, X is -CH =, by further reacting the compound represented by the general formula (13) with an acyl halide or a compound represented by the general formula (11) in the presence of a base such as pyridine and triethylamine. A compound in which Y is = N-, Z is -O-, and W is -CO- or -NHCO- can be obtained.
[0059]
Step 2-3
The compound represented by the general formula (13) is reduced with a reducing agent such as zinc or iron in an acid solvent such as acetic acid, or reduced with sodium metal, platinum oxide or the like in an alcoholic solvent such as methanol or ethanol, or Can be reduced with platinum oxide or the like in an alcoholic solvent in the presence of chloroform to obtain a compound represented by the general formula (14).
[0060]
Step 2-4
By reacting the compound represented by the general formula (14) with the compound represented by the general formula (11) in the same manner as in Step 1-7, the compound represented by the general formula (1-2) Can be obtained.
[0061]
Manufacturing method 3
The compound represented by the general formula (1) is exemplified below when X is -O-, Y is -NH-, Z is -CO-, and Z is -NH-.
Step 3-1
In a polar solvent such as tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, benzene, toluene, methanol, and dimethylformamide, the compound represented by the general formula (7) is added to potassium tert-butoxide, sodium methoxide, sodium hydroxide, lithium hydroxide, By reacting with an N-protected hydroxyamine compound such as N-hydroxyacetylimidate in the presence of a strong base such as sodium hydride, lithium hydride or n-butyllithium, the compound represented by the general formula (15) Obtainable.
[0062]
Step 3-2
By hydrolyzing a compound represented by the general formula (15) in a polar solvent such as methanol, ethanol, or tetrahydrofuran, or a mixed solvent with water using an acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, or phosphoric acid, The compound represented by (16) can be obtained.
[0063]
Step 3-3
By reacting the compound represented by the general formula (16) with the compound represented by the general formula (11) in the same manner as in Step 1-7, the compound represented by the general formula (1-3) which is one of the target compounds is obtained. Can be obtained.
[0064]
Manufacturing methods 4 to 7
Embedded image

[0065]
(Where R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, A and X¹Is the same as above, Ph is a phenyl group, and R is^{12 '}Is C_1-6Is an alkoxycarbonyl group, an aralkyloxycarbonyl group or an aryloxycarbonyl group of R^{14 "}Is C_1-6Is an aralkyloxycarbonyl group or an aryloxycarbonyl group)
[0066]
Manufacturing method 4
When the compound represented by the general formula (1) is such that X is -NH-; Y is -CH₂-Or a single bond; Z is -CH₂-Or a single bond; the case where W is -NH- or a single bond is exemplified below.
Step 4-1
Literature (J. Org. {Chem.})61, {7240 (1996)), using a compound represented by the general formula (7) as a catalyst in an aprotic solvent such as tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, benzene, toluene or dimethoxyethane as a catalyst. And a diamine compound such as ethylenediamine in the presence of a ligand such as 2,2-bis (diphenylphosphino) -1,1′-binaphthyl and an excess of a strong base such as sodium tert-butoxy. The compound represented by the general formula (17) can be obtained.
[0067]
Step 4-2
The compound represented by the general formula (17) is reacted with the compound represented by the general formula (18) in the same manner as in the step 4-1 to give one of the target compounds {general formula (1-4) Can be obtained.
[0068]
Manufacturing method 5
When the compound represented by the general formula (1) is such that X is -CH₂-, Y is -NH-, Z is -CO-, W is -NR.^{14 '}-(Where R^{14 '}Is C_1-6This is exemplified below.
Step 5
A compound represented by the general formula (14) was prepared according to the literature (Synth. {Commun.26, {331 (1996)), and a compound represented by the general formula (19) obtained by aprotic method such as tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, benzene, toluene, acetonitrile, N, N-dimethylformamide and the like. By reacting in a solvent, a compound represented by the general formula (1-5), which is one of the target compounds, can be obtained. In this reaction, instead of the compound represented by the general formula (19), for example, a compound represented by the general formula (22)
Embedded image

(Where R^{14 '}Is C_1-6Which is an alkyl group) can also be used.
[0069]
Manufacturing method 6
When the compound represented by the general formula (1) is such that X is -CH₂-, Y is -NR^{12 '}(Where R^{12 '}Is an alkyloxycarbonyl group, an aralkyloxycarbonyl group or an aryloxycarbonyl group),-, Z is -CO-, and W is -NH-.
Step 6-1
A compound represented by the general formula (1-2) is mixed with a base such as n-butyllithium, sec-butyllithium, and tert-butyllithium in an aprotic solvent such as tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, benzene, and toluene. After the reaction, the compound represented by the general formula (1-6), which is one of the target compounds, can be obtained by reacting the compound represented by the general formula (20) which is an acylating agent. .
[0070]
Manufacturing method 7
When the compound represented by the general formula (1) is such that X is -CH₂-; Y is -NR^{14 "}-(Where R^{14 "}Is an aralkyloxycarbonyl group or an aryloxycarbonyl group) or -NH-; Z is -CO-; W is -NR^{14 "}-(Where R^{1 4 "}Is an aralkyloxycarbonyl group or an aryloxycarbonyl group).
Step 7-1
The compound represented by the general formula (1-2) is reacted with a strong base such as lithium tetramethyldisilazide in an aprotic solvent such as tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, benzene or toluene, and is reacted with an acylating agent. By reacting with a compound represented by a certain general formula (21), {compounds represented by general formulas (1-7) and (1-7 ′) can be obtained.
[0071]
【Example】
Example 1
N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-yl) amino-N '-(2,6-dichloropyridin-4-yl) urea
a) 5-Amino-1,3-dimethylpyrazole
β-Aminocrotononitrile (253.28 g) and methylhydrazine (142.10 g) were dissolved in isopropanol (0.9 L), and the solution was gently heated to reflux under a nitrogen stream for 4 hours. The reaction solution was concentrated, and isopropanol was azeotropically distilled with toluene to obtain a crude product (310 g). Toluene (1 L) was added thereto, dissolved by heating, and then treated with activated carbon (31.1 g) to give 5-amino-1,3-dimethylpyrazole (268.74 g) as pale brown crystals. The crystals were used for the next reaction without further purification.
[0072]
b) 1H-6-hydroxy-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine
5-Amino-1,3-dimethylpyrazole (268.74 g) obtained in a) of Example 1 was dissolved in a solution of ethyl isobutyryl acetate (382.50 g) in propionic acid (362 mL) and heated for 23 hours. Refluxed. After cooling, ethyl acetate (1.3 L) was added, and the mixture was heated under reflux for 1 hour. After slow cooling, the precipitated crystals were collected by filtration, washed with ethyl acetate, and dried under reduced pressure to give 1H-6-hydroxy-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine (91 .36 g) as white crystals.
[0073]
c) 1H-6-bromo-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine
To a solution of phosphorus oxybromide (100 g) in anisole (250 mL) was added 1H-6-hydroxy-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine obtained in b) of Example 1. (48.67 g) was dissolved, and the mixture was stirred in an oil bath at 130 ° C. for 3 hours. After cooling, toluene (400 mL) was added, and excess phosphorus oxybromide was reacted with water under ice cooling. The organic layer was washed with 1N potassium carbonate and saturated saline, dried over magnesium sulfate, and concentrated to give 1H-6-bromo-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b]. Pyridine (118.66 g) was obtained as an oil. This crude product was used for the next reaction without purification.
[0074]
d) 1H-6-hydrazino-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine
A crude product of 1H-6-bromo-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine obtained in c) of Example 1 in a solution of hydrazine (113 mL) in ethanol (230 mL). (118.66 g) was dissolved and heated and stirred in an oil bath at 110 ° C. for 23 hours. After allowing to cool, the mixture was stirred in an ice bath for 4 hours, and the precipitated 1H-6-hydrazino-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine was collected by filtration. After washing with a 50% aqueous ethanol solution and drying under reduced pressure at 60 ° C., 1H-6-hydrazino-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine (39.45 g) was white. Obtained as crystals.
[0075]
e) 2,6-dichloropyridine-4-carbonylazide
2,6-Dichloroisonicotinic acid (40.45 g) and triethylamine (38 mL) were dissolved in ethyl acetate (400 mL), and DPPA (50 mL) was added dropwise to this solution under ice-cooling, followed by stirring at room temperature for 20 hours. After adding and diluting ethyl acetate, the mixture was washed with water and saturated saline. This was dried over magnesium sulfate and concentrated to obtain a crude product of 2,6-dichloropyridine-4-carbonylazide (70.80 g). The crude crystals were dissolved in ethyl acetate and treated with activated carbon to give 2,6-dichloropyridine-4-carbonylazide (45.67 g) as crystals.
[0076]
f) N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyrid-6-yl) amino-N '-(2,6-dichloropyridin-4-yl) urea
2,6-Dichloropyridine-4-carbonylazide (42.41 g) obtained in e) of Example 1 was dissolved in toluene (410 mL), and the solution was stirred at 100 ° C. for 4 hours. After allowing to cool, a solution of 1H-6-hydrazino-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine (39.45 g) obtained in d) of Example 1 in THF (410 mL). After stirring at room temperature for 18 hours, the mixture was concentrated to give a crude product (129.59 g). This was dissolved in ethyl acetate-THF (5: 1), treated with activated carbon, and recrystallized from ethyl acetate to give N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4- b] Pyrid-6-yl) amino-N '-(2,6-dichloropyridin-4-yl) urea (42.74 g) was obtained as white crystals.
1H-NMR (300 MHz, δ ppm, CDCl₃)
1.33 (6H, d, J = 6.8 Hz), 2.62 (3H, s), 3.54 (1H, septet, J = 6.8 Hz), 3.91 (3H, s), 6. 43 (1H, s), 6.45 (1H, s), 6.57 (1H, s), 7.50 (2H, s), 8.10 (1H, s)
FAB (+) MS (low resolution, m / z) 408
m. p. 222-225 ° C
[0077]
Examples 1-2 to 1-95
The compounds of Examples 1-2 to 1-94 were obtained in the same manner as in Example 1. The obtained compounds are shown in Tables 1 to 6.
[0078]
[Table 1]

[0079]
[Table 2]

[0080]
[Table 3]

[0081]
[Table 4]

[0082]
[Table 5]

[0083]
[Table 6]

[0084]
Example 2
N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-yl) amino-N ′-(2,6-dichloropyridin-4-yl) urea} methanesulfonic acid salt
N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyrid-6-yl) amino-N ′-(2,6-dichloropyridine-4) obtained in Example 1 -Yl) urea (386 mg) was dissolved in acetone (2 mL) with heating, cooled to room temperature, methanesulfonic acid (65 μL) was added, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 1 day. The resulting crystals are collected by filtration and dried under reduced pressure to give N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-yl) amino-N ′-(2 , 6-Dichloropyridin-4-yl) urea methanesulfonate (376 mg) was obtained.
1H-NMR (300 MHz, δ ppm, DMSO)
1.26 (6H, d, J = 6.8 Hz), 2.39 (3H, s), 2.49 (3H, s), 2.50 (3H, s), 3.44 (1H, septet, J = 6.8 Hz), 6.39 (1H, s), 6.96 (2H, br.s), $ 7.81 (2H, br.s), 8.87 (1H, br.s)
m. p. 178-179 ° C
[0085]
Examples 2-2 to 2-7
The compounds of Examples 2-2 to 2-7 were obtained in the same manner as in Example 2. Table 7 shows the obtained compounds.
[0086]
[Table 7]

[0087]
Example 3
N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-yl) methyl-N '-(2,6-dichloropyridin-4-yl) urea
a) 1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-ylaldehyde
1H-6-Bromo-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine (10.91 g) was dissolved in THF (160 mL), and the solution was added under a dry ice-ethanol bath. Then, an n-butyllithium n-hexane solution (32.5 mL) was added dropwise. Five minutes after the dropwise addition, dimethylformamide (4.7 mL) was added, and the mixture was stirred under a dry ice-ethanol bath for 2.5 hours. A saturated aqueous ammonium chloride solution was added, and the mixture was stirred at room temperature. The obtained organic layer was washed with a saturated aqueous solution of ammonium chloride and a saturated saline solution. This was dried over magnesium sulfate and concentrated to give a dark brown oil (8.85 g). Further purification by silica gel column gave 1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-ylaldehyde (3.65 g).
[0088]
b) 1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyrid-6-ylaldoxime
1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-ylaldehyde (3.65 g) obtained in Example 3a) and hydroxylamine hydrochloride (2.41 g) ) And potassium carbonate (2.44 g) were dissolved in a mixed solvent of ethanol (70 mL) and water (35 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 3 days. Ethyl acetate was added thereto, and the mixture was washed with water and saturated saline. After drying over magnesium sulfate and concentration, the crude crystals obtained by recrystallization are recrystallized from isopropyl ether to give 1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-ylaldoxide. Kisime (2.47 g) was obtained.
[0089]
c) 1H-6-aminomethyl-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine
The 1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-ylaldoxime (2.48 g) obtained in b) of Example 3 was treated with zinc (6.98 g). In the presence, it was dissolved in acetic acid (85 mL) and the suspension was stirred in a water bath for 1 hour. The zinc was removed by filtration using Hyflo Super Cell, and the filtrate was concentrated. The concentrate is diluted with ethyl acetate, washed with 1N potassium carbonate and saturated aqueous sodium hydrogen carbonate, dried over magnesium sulfate, and concentrated to give 1H-6-aminomethyl-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [ 3,4-b] pyridine (0.79 g) was obtained as a pale yellow oil.
[0090]
d) N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-yl) methyl-N '-(2,6-dichloropyridin-4-yl) urea
Instead of 1H-6-hydrazino-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine, 1H-6-aminomethyl-4-isopropyl- obtained in Example 3c). Using 1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine, N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] was prepared in the same manner as in f) of Example 1. b] Pyridin-6-yl) methyl-N '-(2,6-dichloropyridin-4-yl) urea was obtained.
1H-NMR (300 MHz, δ ppm, CDCl₃)
1.36 (6H, d, J = 6.9 Hz), 2.68 (3H, s), 3.60 (1H, septet, J = 6.9 Hz), 3.94 (3H, s), 4. 65 (2H, d, J = 4.8 Hz), 6.30 (1H, s), 6.89 (1H, s), 7.42 (2H, s), 8.10 (1H, s)
FAB (+) MS (low resolution, m / z) 407
m. p. ３３233-236 ° C
[0091]
Examples 3-1 to 3-33
The compounds of Examples 3-2 to 3-33 were obtained in the same manner as in Example 3. The compounds obtained are shown in Tables 8 and 9.
[0092]
[Table 8]

[0093]
[Table 9]

[0094]
Example 4
N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyrid-6-yl) oxy-N'-3,5-dichlorophenyl} urea
a) Ethyl N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyrid-6-yl) oxyacetylimidate
Ethyl @ N-hydroxyacetylimidate (1.26 g) was dissolved in dimethylformamide (35 mL), and tert-butoxypotassium (1.36 g) was added under ice-cooling, followed by stirring with ice-cooling for 2.5 hours. To this solution was added a solution of 1H-6-bromo-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine (1.20 g) in dimethylformamide (25 mL) under ice-cooling, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 19 hours. Stirred. After water was added thereto, the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with water and saturated saline, dried over magnesium sulfate, and concentrated to give ethyl @ N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridi-6. -Yl) oxyacetylimidate (1.27 g) was obtained.
[0095]
b) O- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyrid-6-yl) hydroxylamine
The ethyl {N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyrid-6-yl) oxyacetimidate (1.06 g) obtained in a) of Example 4 was added. It was dissolved in methanol (9 mL), 20.5 N sulfuric acid (0.9 mL) was added to the solution, and the mixture was stirred at room temperature for 2.5 hours. After neutralization with 1N sodium carbonate, the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with aqueous sodium hydrogen carbonate, dried over magnesium sulfate, and concentrated to give O- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-yl) hydroxyl. The amine (781 mg) was obtained.
[0096]
c) N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyrid-6-yl) oxy-N '-(2,6-dichloropyridin-4-yl) urea
Instead of 1H-6-hydrazino-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridine, the O- (1H-4-isopropyl-1,2) obtained in b) of Example 4 was used. Using 3-dimethylpyrazolo [3,4-b] pyridin-6-yl) hydroxylamine, N- (1H-4-isopropyl-1,3-dimethylpyrazolo) was obtained in the same manner as in Example 1, f). [3,4-b] pyridin-6-yl) oxy-N ′-(2,6-dichloropyridin-4-yl) urea was obtained.
1H-NMR (300 MHz, δ ppm, CDCl₃)
1.36 (6H, d, J = 6.8 Hz), 2.64 (3H, s), 3.57 (1H, septet, J = 6.8 Hz), 3.95 (3H, s), 6. 62 (1H, s), 7.51 (2H, s), 7.82 (1H, s), 8.85 (1H, s)
FAB (+) MS (low resolution, m / z) 409
amorphous
[0097]
Examples 4-2 to 4-22
The compounds of Examples 4-2 to 4-22 were obtained in the same manner as in Example 4. The obtained compounds are shown in Tables 10 and 11.
[0098]
[Table 10]

[0099]
[Table 11]

[0100]
Pharmacological test
Test example (1)
For hAGR16 expressing CHO membrane³H-Shp-1-P binding inhibition test
hAGR16-expressing CHO cells were cultured in Dulbecco's modified Eagle MEM (low glucose, {10%} fetal bovine serum, {10 μg / ml} puromycin) medium, and serum-free medium (0.3% 無 bovine serum albumin, (Dulbecco's modified Eagle MEM, low glucose) and cultured overnight. Thereafter, the cells were detached, crushed with a Teflon homogenizer, and then ultracentrifuged twice at 100,000 G for 1 hour. The obtained membrane fraction was cryopreserved and used for the following experiments.
After adding 125 μl of a test substance (final DMSO (Dimethyl @ sulfoxide) concentration is 1.0%) to a 24-well plate,³125 μl of H-labeled Shp-1-P (final concentration 2 nM) was added. Finally, 250 μl of the hAGR16 membrane (final concentration 100 μg / well) was added. After stirring at 4 ° C. for 2 hours, the mixture was trapped on a GF / B filter with a harvester (PACKARD). After drying, micro scintillation was added, and the radioactivity was measured by Top @ Count (PACKARD). The difference between the absence of compound (Total binding) and the addition of unlabeled @ Shp-1-P at a final concentration of 10 μM instead of compound (Nonspecific binding) was defined as 100%.₅₀I asked.
[0101]
Test example (2)
For rAGR16 and hEdg3 expressing CHO membrane³H-S1P binding inhibition test
The method for preparing the membrane fraction and the method for evaluating the test substance were the same as those in (1).
[0102]
Test example (3)
Shp-1-P stimulated human normal lung fibroblast (HLF) proliferation inhibition test
HLF (2000 cells / 200 μl / well) was rolled up into a 96-well plate, and cultured at 37 ° C. for 2 days using RPMI1640 10% fetal bovine serum medium. Thereafter, the cells were washed with PBS (Phosphate Buffered Saline), replaced with RPMI medium not containing fetal calf serum, and cultured for 1 day. In addition, the test substance (final concentration 10^-3M-10^-5M, final DMSO concentration was 0.1%), and then 8 μl of Shp-1-P (final concentration of 1 μM) was added. 18 hours later³H-labeled thymidine was added, and after an additional 6 hours, the cells were trapped on a GF / B filter using a harvester (PACKARD). After drying, 50 μl of micro scintillator was added, and the radioactivity was measured by Top @ Count (PACKARD). The activity of the test substance is determined by a value indicating 50% of the radioactivity relative to the group without the compound.₅₀Was evaluated.
Table 12 shows the test results of the above Test Examples (1) to (3).
[0103]
[Table 12]

[0104]
Test example (4)
DMN hepatitis test
To SD rats (SLC @ male 6W), DMN (N-dimethyl @ nitrosamine) diluted with saline to 12 μl / ml was administered intraperitoneally on day 0, 1, 2, 7, 8 and 9 (1 ml / ml). kg). The test compound was orally administered at 3, 10, and 30 mg / kg twice a day, and 5 mg / kg of an anti-TGF-β antibody was intravenously administered on days 0, 3, 7, and 10 as a positive control, and 14 days Dissected into eyes. The liver was excised, cut into approximately 100 mg sections for OH-Proline quantification, and the rest was stored in formalin.
OH-Proline amount measurement was performed as follows. The liver slices were degreased and dehydrated in acetone for 2 days or more, dried in a vacuum desiccator, and the dry weight was measured. The liver slices were placed in a glass test tube with a Teflon liner cap, and 5 ml of 6N HCl was added thereto. Hydrolyzed. HCl was evaporated and dried by blowing nitrogen gas while heating at 65 ° C., and then dissolved in 1 mL of pure water to obtain a sample for OH-Proline determination. 0.5 ml of the sample solution was mixed with 3 ml of a citrate-phosphate buffer solution and 0.5 ml of a periodic acid solution, and further mixed with 1.75 ml of a toluene extract, followed by shaking at room temperature for 1 hour. Centrifugation was performed at 1500 rpm for 10 minutes. 0.6 ml of the organic layer was placed in a test tube, 0.15 ml of Ehrlich's reagent was added, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 45 minutes. Then, the absorbance at 565 nm was measured. The OH-Proline amount was indicated by a value corrected by the dry weight of the tissue sample.
Table 13 shows the test results of Test Example (4).
[0105]
[Table 13]

[0106]
【The invention's effect】
As apparent from the above test, the novel compound of the present invention and a pharmaceutically acceptable salt thereof selectively act on the Edg5 receptor. In addition, the proliferation of Sph-1-P-stimulated human normal lung fibroblasts was significantly suppressed. Furthermore, also in the DMN hepatitis model, the amount of hydroxyproline (OH-Proline) contained in collagen (main cause of fibrosis) was significantly suppressed. Therefore, the compound of the present invention is useful as a therapeutic agent for vascular smooth muscle, kidney, lung, and liver tissues where Edg-5 receptor is specifically present, and particularly as an excellent therapeutic agent for preventing fibrosis of these tissues.

Claims (16)

General formula (1)

(In the formula,
R ¹ is a C _1-6 alkyl group, a hydrogen atom or —COR ⁷ (where R ⁷ is a C _1-6 alkyl group, an aryl group, an aralkyl group, a C _1-6 alkoxy group, an aryloxy group or an aralkyloxy group Is));
R ² is a C _1-6 alkyl or aryl group;
R ³ is a hydrogen atom, a C _1-6 alkyl group, a C _1-6 alkoxy group, a C _1-6 alkoxycarbonyl group, a haloalkyl group, a C _3-7 cycloalkyl group or an aryl group;
R ⁴ is a hydrogen atom or a C _1-6 alkyl group;
R ⁵ and R ⁶ are the same or different and are a hydrogen atom, a C _1-6 alkyl group, a C _1-6 alkoxy group, a C _1-6 alkoxycarbonyl group, a carboxyl group, a C _2-6 alkynyl group, a halogen atom, a cyano atom, Group, nitro group, haloalkyl group, C _1-6 alkylamino group, di C _1-6 alkylamino group, acyl group, hydroxyl group, aryloxy group, aralkyloxy group or —CONHR ⁸ (where R ⁸ is an aryl group Or an aralkyl group);
X is —NR ⁹ — (where R ⁹ is a hydrogen atom, a C _1-6 alkyl group or —NHR ¹⁰ (where R ¹⁰ is a carboxyl group or a C _1-6 alkoxycarbonyl group)), —O—, —N ＝, —CH ＝ or —CHR ¹¹ —, wherein R ¹¹ is a hydrogen atom or a C _1-6 alkyl group;
Y is ^{-NR 12} - ^{(wherein, R 12} is a hydrogen _{atom, C 1-6} alkyl group, an aralkyl _{group, C 1-6} alkoxycarbonyl group, an aryloxycarbonyl group, an aralkyloxycarbonyl group, or -CONHR ¹³ (wherein Wherein R ¹³ is an aryl group or an aralkyl group), ＝ N—, —N ＝, —CH ₂ —, ＣＨCH—, —O—, —CO— or a single bond;
Z is -CO -, - CS -, - CH 2 -, - be O- or a single bond;
W is ^{-NR 14} - ^{(wherein, R 14} is a hydrogen _atom, a _{C 1-6} alkyl group, an aralkyloxycarbonyl group, an aryloxycarbonyl group or a heteroaryl _{C 1-6} alkyl group), - O -, - _{CO -, - CONH -, -} CH 2 -, - be or a single bond - NHCH _2;

Is a double or single bond;
A represents an aryl group, a heteroaryl group or a cycloalkyl group] or a pharmaceutically acceptable salt thereof. R ³ , R ⁴ ,

R ³ is h-position, R ⁴ is i-position,

Is the j-position, or the pharmaceutically acceptable salt thereof. The pyrazolopyridine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to claim 2, wherein R ¹ is a C _1-6 alkyl group, R ² is a C _1-6 alkyl group, and R ⁴ is a hydrogen atom. The pyrazolopyridine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to claim 3, wherein Y is -NH- or = N-, Z is -CO-, and W is -NH-. The pyrazolopyridine compound according to claim 4, wherein ring A is an aryl group, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. The pyrazolopyridine compound according to claim 5, wherein the aryl group is a phenyl group, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. The pyrazolopyridine compound according to claim 4, wherein ring A is a heteroaryl group, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. The pyrazolopyridine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to claim 7, wherein the heteroaryl group is a pyridyl group. 9. The pyrazolopyridine compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to claim 5, wherein X is -NH- or -N =. The pyrazolopyridine compound according to claim 5, wherein X is —CH ₂ —, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 9. The pyrazolopyridine compound according to claim 5, wherein X is -O-, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. A pharmaceutical composition comprising the pyrazolopyridine compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a pharmaceutically acceptable carrier. A sphingosine-1-phosphate receptor antagonist comprising the pyrazolopyridine compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. A therapeutic agent for fibrosis, comprising the pyrazolopyridine compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. A therapeutic agent for hepatic fibrosis, comprising the pyrazolopyridine compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. A remedy for pulmonary fibrosis, comprising the pyrazolopyridine compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.