【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、ビール製造時の産業廃棄物である麦根を水溶性溶媒で抽出して得られるアンジオテンシン変換酵素阻害剤およびその製造法、またそれを含有する健康食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アンジオテンシン変換酵素阻害活性を有する化合物（以下「アンジオテンシン変換酵素阻害剤」）は、血圧降下作用を有し、医薬品のみならず近年では健康食品、特定保健用食品等にも広く用いられている。アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、血圧降下剤、高血圧症の予防または治療剤として有用である。
アンジオテンシン変換酵素阻害剤のうち、健康食品、特定保健用食品に用いられるものは、食品由来の安全な化合物として各種のペプチドが知られている。例えば酸乳由来のラクトトリペプチド（特開平４−２８２４００）、魚肉由来プチド（特開２００１−１１２４７０）、小麦胚芽由来ペプチド（特開２０００−１９１６８９）等である。この他に植物由来のアンジオテンシン変換酵素阻害性化合物として、ニコチアナミンが知られている。ニコチアナミンはタバコ、イネ、クコ、ブナ等広く植物界に分布し、この植物の葉から取得できること（特開昭６３−８７９９０）、またいんげん豆や大豆にも存在し、これを水または熱水抽出した液から合成樹脂を用いてニコチアナミンを精製する方法が知られている（特開平５−２４６８６５）。
これまで、安定供給が可能で安価な原料である食品産業廃棄物、特に植物性廃棄物から、これらのアンジオテンシン変換酵素阻害物質を取得する実用的方法の検討は、十分に試みられてこなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害剤を、安価な原料から効率的に得ることにある。
【０００４】
【発明が解決しようとする手段】
本発明者らは、各種の食品産業関連廃棄物について検討を重ねた結果、ビール製造時に廃棄される麦根から抽出物を調製し、そこに強いアンジオテンシン変換酵素阻害活性が存することを見出した。一般に植物の胚芽、発芽根には様々な生理活性物質が含まれるが、その意味に於いてビール製造時の麦根は十分に有効利用されていると言い難い。
本発明は、上記知見に基づいて完成されたものであり、以下の剤およびその製造法に関する。
（１）イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とする、アンジオテンシン変換酵素阻害剤。
（２）イネ科植物が大麦及び小麦である上記（１）のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
（３）イネ科植物の根部を、水または水溶性有機溶媒により抽出することを特徴とする、アンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造法。
（４）イネ科植物が大麦及び小麦である、上記（３）記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造法。
（５）イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とする、血圧降下剤。
（６）イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とする、高血圧症の予防または治療剤。
（７）請求項１記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む、飲食品、医薬品。
【発明の実施の形態】
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤は、イネ科植物の根部または根部抽出物を原料とすることを特徴とする。イネ科植物とは、イネ、ムギ（例えば大麦、小麦）等である。
ムギの根部（以下「麦根」）は本発明の原料として有用である。特に、大麦や小麦等ビール製造時に使用される麦由来の麦根は、大量入手が可能であり、原料として好適である。ビール製造においては、大麦あるいは小麦は発芽処理の後、仕込みに際して麦根が除去されている。
本発明では、イネ科植物の根部そのもの、根部の乾燥物、あるいは乾燥物を粉砕したものをアンジオテンシン変換酵素阻害剤としてもよい。ただし、アンジオテンシン変換酵素阻害活性成分（以下「活性成分」）の有効量を容易に摂取するためには、根部の抽出物を原料とすることが好ましい。
根部の抽出物は、根部を溶媒（例えば水や適当な濃度の水溶性有機溶媒）と接触させて活性成分を抽出し、抽出液を濃縮することにより得られる。例えば、麦根中の活性成分は水溶性なので、麦根をそのまま乾燥した後、熱水抽出し、得られた煎じ汁を本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤としてもよい。
より活性成分を高純度に含む根部の抽出物としては、例えば、根部の水抽出物に、水溶性有機溶媒を添加して不純物を沈殿除去した後、上清を濃縮したものが挙げられる。この場合、根部とは好ましくは麦根であり、水溶性有機溶媒とは、好ましくはメタノール、エタノール、アセトン等水に親和性のある溶媒である。
根部より活性成分を抽出、濃縮し、更には乾燥、粉末化することで、様々な形状の飲食品・医薬品への応用が容易になる。
〔本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造法〕
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造法は、イネ科植物の根部を水溶性溶媒により抽出することを特徴とする。具体的な方法を以下に例示する。
まず、イネ、ムギ等のイネ科植物の根部またはその乾燥物を、１〜２０重量倍の水または熱水を５分以上、好ましくは１〜２０時間接触させて活性成分を含む抽出液を得る。この抽出液をそのまま乾燥粉末化することも考えられるが、水抽出液には種々の物質が溶解しているため活性成分の純度が低くなること、粉末化しにくいこと、きれいな粉末が得られないこと等の不具合がある。そこでさらに活性成分を濃縮することが好ましい。
活性成分を濃縮する場合は抽出液に溶解している蛋白質等の高分子を除去することが好ましい。高分子の除去は、例えば抽出液のｐＨを調整して等電沈殿により行えば良い。或いは分画分子量１，０００程度の限外濾過またはサイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量１，０００以下の分画を回収すればよい。
この抽出液に更にイオン交換樹脂による吸脱着、活性炭ろ過等を適宜組み合わせた処理を行うことにより、不純物を低減する事が出来る。例えば麦根の活性成分は両性イオン化合物であるため、陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂の何れもが好適に使用できる。
また麦根由来の活性成分は極性が高く、活性炭との相互作用が弱いため、活性炭ろ過によっても不純物を除去することが出来る。比較的極性の低い有機物を除去する方法として、オクタデシルシリカや合成吸着剤（例：三菱化学製ダイヤイオンＨＰ−２０）等に通過させても良い。
以上のイオン交換樹脂処理、活性炭ろ過、吸着剤処理、分子量分画を適宜組み合わせることにより、高純度の活性成分を得ることが出来る。加えて電気透析等の手法により、脱塩操作を行っても良い。この様に必要に応じて、目的とする純度まで活性成分を濃縮することが出来る。
【０００５】
上記の抽出液またはその濃縮液は、水溶性有機溶媒による添加操作により更に濃縮できる。水溶性有機溶媒とはメタノール、エタノール、アセトン等水に親和性のある溶媒であり、とくにエタノールが好ましい。有機溶媒の添加量は水抽出液の濃縮の度合いによっても異なるが、水抽出液の有機溶媒濃度が好ましくは５０％以上、８０％未満となるように添加する。こうすることにより抽出液中に沈殿物が生ずるので、これを適宜の方法、例えば遠心分離等により除去する。麦根由来の活性成分は上清に存在するので、溶媒を留去、濃縮することで更に活性成分の純度を高めることが出来る。
【０００６】
この濃縮物を更に真空、あるいは凍結乾燥、スプレードライ等により乾燥粉末化してアンジオテンシン変換酵素阻害剤とする事ができる。
実施例に示す通り、イネ科植物の根部または根部抽出物は、アンジオテンシン変換酵素を阻害するので、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、血圧降下剤、高血圧症の予防または治療剤として有用である。
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤は人および人以外の動物（ペット、家畜）用として使用できる。 ヒトが本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤を摂取する場合、その摂取量は、性別・体重、予防あるいは治療しようとする疾患の種類や症状により適宜設定する。例えば、成人一人あたり一日に０．１〜１０００ ｍｇ 程度摂取できるよう服用すればよい。なお、イネ科植物の根部または根部抽出物を、血圧降下剤、高血圧症の予防または治療剤として摂取する場合も同様である。
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤を飲食品または医薬品に添加することにより、これらに生理活性（例えば、血圧降下作用、高血圧症の予防または治療作用）を付与することができる。
食品に添加する場合は、アンジオテンシン変換酵素阻害剤を通常の賦形剤と混合、打錠して健康食品錠剤としたり、各種の飲食品、例えばパン、ケーキ、ビスケット、クッキー等のパン、菓子類や、そば、うどん、中華麺等の麺類や、天ぷら、フライ等の惣菜類や、豆腐、納豆等の大豆加工食品や、ジュース、コーヒー、ココア、ウーロン茶、緑茶、健康飲料等の飲料類等に添加することにより血圧降下作用等を有する機能性飲食品とすることができる。
医薬品とする場合は、通常の賦形剤を用いてカプセル剤、錠剤、顆粒剤、液剤等に製剤化すればよい。
【実施例】
実施例では、大麦由来の麦根よりアンジオテンシン変換酵素阻害剤を抽出した。
〔アンジオテンシン変換酵素阻害活性の測定法〕
本発明測定法は、日胸疾会誌１８（５）， １９８０， ２９７−３０２記載の方法に従った。
（１）試薬
基質溶液：１Ｍ ＮａＣｌ含有１００ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ ８．３）に、合成基質ヒプリルヒスチジルロイシン（Ｈｉｐ−Ｈｕｓ−Ｌｅｕ、シグマ社製）を１２．５ｍＭとなるよう溶解し、基質溶液とした。
酵素溶液：ウサギ肺由来アンジオテンシン変換酵素（シグマ社製）を５０ｍＭ ホウ酸緩衝液（ｐＨ ８．３）に３３３ｍＵ／ｍｌとなるよう溶解し、酵素溶液とした。
（２）実験法
試験管中で上記基質溶液１００μｌに試料溶液１４０μｌを混合し、３７℃で５分間プレインキュベートする。次に酵素溶液１０μｌを添加し、３７℃で３０分反応させる。１ＮＨＣｌ ２５０μｌを添加し反応を停止後、予め氷冷しておいた酢酸エチル１．５ｍＬ を添加し、１５秒間良く攪拌する。遠心分離（４℃、３０００回転５分）に供したのち、上層１ｍｌを別の試験管に移す。これを遠心濃縮乾燥機に供して、酢酸エチルを蒸発させる。１ｍｌの超純水に再溶解し、２２８ｎｍの吸光度を測定する。コントロール（サンプルの代わりに超純水）に対するサンプル添加時の吸光度の減少率を以てアンジオテンシン変換酵素阻害活性とした。
【０００７】
〔実施例１〕
粉砕した乾燥麦根４００グラムに水５リットルを添加し、ｐＨ９に調製した後、２５℃で９０分間浸漬した後麦根を除去し、水抽出液４．７リットルを得た。ついで、上清のｐＨを４．５に調製し、遠心分離（７５００Ｇ、３０分）し、生じた沈殿を分離除去し、４．５リットルの上清を得た。この水抽出液に、エタノールを添加してエタノール濃度８０％の溶液とし、これを４℃で遠心分離（ ７５００Ｇ、３０分）して得られた上清を濃縮乾固してアンジオテンシン変換酵素阻害性組成物の粗精製粉末６０ｇを得た。この粉末のアンジオテンシン変換酵素阻害活性のＩＣ５０ は、８００μｇ／ｍｌであった。
【０００８】
〔実施例２〕
実施例１と同様に調製した麦根抽出液４．５リットルに対し、活性炭（武田薬品工業製精製白鷺）１５０ｇを添加し、室温で３時間攪拌し、不純物を吸着させた。これに珪藻土ろ過助剤（ラジオライト５００）１５０ｇを混和し、Ｎｏ．２ろ紙上で吸引ろ過し、ろ液を得た。このろ液を分画分子量１，０００の中空糸型限外濾過モジュールで処理し、透過液を凍結乾燥して白色の粉末２０ｇを得た。この粉末のアンジオテンシン変換酵素阻害活性のＩＣ５０ は、２５０μｇ／ｍｌであった。
【０００９】
実施例３〔実施例〕
実施例２で得られた粉末を蒸留水２００ｍｌで再溶解し、ここにエタノールを添加しエタノール濃度８０％の溶液とした。これを４℃で遠心分離（ ７５００Ｇ、３０分）して得られた上清を、溶媒留去後凍結乾燥して白色粉末１０ｇを得た。この粉末のアンジオテンシン変換酵素阻害活性のＩＣ５０は、１２０μｇ／ｍｌであった。
【００１０】
実施例４〔実施例〕
実施例２で得られる限外濾過液を、陰イオン交換樹脂（三菱化学製ダイヤイオンＰＡ３１８）カラム（容積１リットル。ＯＨ型）に供し、蒸留水２リットルで洗浄、更に０．５規定塩酸２リットルで溶出した。続いてこれを陽イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０Ｗ ×２）カラム（容積１リットル。Ｈ型）に供し、蒸留水２リットルで洗浄、更に０．５％アンモニア水溶液で溶出した。２リットル目から３リットル目までを分取し、ロータリーエバポレーターを用いて１００ミリリットルまで濃縮した。最終的にこれを凍結乾燥し白色粉末０．４ｇを得た。この粉末のアンジオテンシン変換酵素阻害活性のＩＣ５０は５μｇ／ｍｌであった。
【００１１】
実施例５〔実施例〕
実施例４で得られた粉末を少量の水に溶解し、予め１００％エタノールで平衡化したポリアミドＣ−２００（和光純薬製）カラム（容積０．５リットル）に供し、１００％エタノール、９０％エタノール、８０％エタノール、７０％エタノール、６０％エタノール、５０％エタノールをそれぞれ１リットルずつ用いて、順次溶出させた。７０％エタノール、６０％エタノール、５０％エタノールの溶出画分を濃縮後、ろ過して凍結乾燥したところ、白色粉末５０ｍｇを得た。この粉末のアンジオテンシン変換酵素阻害活性のＩＣ５０は０．７μｇ／ｍｌであった。
【００１２】
実施例６〔実施例〕
実施例１で得られた粉末と乳糖、結晶セルロース、タルク、及びカルボキシメチルセルロース（結合剤）を下記の組成で均一に混合し、顆粒状とした後、常法により打錠し、５００ｍｇ／錠の錠剤を製造した。
実施例１で得られた粉末 ３００ｇ
乳糖 １００ｇ
結晶セルロース ９３ｇ
タルク ５ｇ
カルボキシメチルセルロース ２ｇ
【００１３】
〔実施例７〕
実施例１で得られた粉末を下記配合でケーキ原料に配合し、常法によりケーキを製造した。得られたケーキは、通常品に比べて、内相、外観とも差がなく、食感、風味も良好であった。
小麦粉 １００重量部
卵 １００重量部
砂糖 １００重量部
実施例１で得られた粗精製粉末 ３重量部
水 ４０重量部
【００１４】
〔実施例８〕
実施例１で得られた粗精製粉末を、市販の炭酸飲料に１％添加したところ、速やかに溶解し、得られた飲料は風味が全く変わらず良好であった。
【００１５】
【本発明の効果】
イネ科植物の根部または根部抽出物は、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、血圧降下剤、高血圧症の予防または治療剤として使用可能である。活性成分は、イネ科植物の根部、特にビール製造時の副産物である麦根から、効率よく製造することができる。上記の剤をそのまま、もしくは各種食品に添加した場合、血圧降下作用等を有する健康食品が得られ、これらを摂取することにより、高血圧症の症状の改善及び予防が出来る。[0001]
[Industrial applications]
The present invention relates to an angiotensin converting enzyme inhibitor obtained by extracting wheat root, which is industrial waste during beer production, with a water-soluble solvent, a method for producing the same, and a health food containing the same.
[0002]
[Prior art]
BACKGROUND ART Compounds having angiotensin converting enzyme inhibitory activity (hereinafter referred to as "angiotensin converting enzyme inhibitors") have a blood pressure lowering effect and are widely used not only as pharmaceuticals but also as health foods and foods for specified health use in recent years. Angiotensin converting enzyme inhibitors are useful as antihypertensives and agents for preventing or treating hypertension.
Among the angiotensin converting enzyme inhibitors, those used in health foods and foods for specified health use include various peptides known as food-derived safe compounds. For example, lactotripeptide derived from sour milk (JP-A-4-282400), peptide derived from fish meat (JP-A-2001-112470), peptide derived from wheat germ (JP-A-2000-191689) and the like. In addition, nicotianamine is known as a plant-derived angiotensin converting enzyme inhibitory compound. Nicotianamine is widely distributed in the plant kingdom, such as tobacco, rice, wolfberry, and beech, and can be obtained from the leaves of this plant (Japanese Unexamined Patent Publication No. 63-87990). It is also present in beans and soybeans and is extracted with water or hot water. A method for purifying nicotianamine from a liquid using a synthetic resin is known (JP-A-5-246865).
Until now, there has been no sufficient attempt to study a practical method for obtaining these angiotensin converting enzyme inhibitors from food industry waste, particularly plant waste, which can be supplied stably and at low cost.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to efficiently obtain a novel angiotensin converting enzyme inhibitor from inexpensive raw materials.
[0004]
Means to be Solved by the Invention
The present inventors have repeatedly studied various food industry-related wastes, and as a result, prepared an extract from wheat root discarded during beer production, and found that the extract has strong angiotensin converting enzyme inhibitory activity. Generally, various physiologically active substances are contained in embryos and germinated roots of plants, but in that sense, it is hard to say that wheat roots in beer production are sufficiently utilized effectively.
The present invention has been completed based on the above findings, and relates to the following agents and a method for producing the same.
(1) An angiotensin converting enzyme inhibitor using a root or a root extract of a gramineous plant as a raw material.
(2) The angiotensin converting enzyme inhibitor according to (1), wherein the gramineous plant is barley or wheat.
(3) A method for producing an angiotensin converting enzyme inhibitor, comprising extracting a root of a gramineous plant with water or a water-soluble organic solvent.
(4) The method for producing an angiotensin converting enzyme inhibitor according to the above (3), wherein the gramineous plant is barley or wheat.
(5) A hypotensive agent using a root or a root extract of a gramineous plant as a raw material.
(6) A preventive or therapeutic agent for hypertension, using a root or a root extract of a gramineous plant as a raw material.
(7) A food, drink, or pharmaceutical product comprising the angiotensin converting enzyme inhibitor according to claim 1.
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The angiotensin converting enzyme inhibitor of the present invention is characterized by using a root or a root extract of a gramineous plant as a raw material. Gramineae include rice, wheat (eg, barley, wheat) and the like.
Wheat roots (hereinafter referred to as "wheat roots") are useful as a raw material in the present invention. In particular, wheat-derived wheat roots used in the production of beer such as barley and wheat are available in large quantities and are suitable as raw materials. In beer production, barley or wheat is germinated, and after cultivation, the roots are removed.
In the present invention, the root itself of a gramineous plant, a dried product of the root, or a crushed product of the dried product may be used as an angiotensin converting enzyme inhibitor. However, in order to easily ingest an effective amount of an angiotensin converting enzyme inhibitory active ingredient (hereinafter, “active ingredient”), it is preferable to use a root extract as a raw material.
The root extract is obtained by contacting the root with a solvent (for example, water or a water-soluble organic solvent at an appropriate concentration) to extract the active ingredient, and concentrating the extract. For example, since the active ingredient in the wheat root is water-soluble, the wheat root may be dried as it is, then extracted with hot water, and the obtained decoction may be used as the angiotensin converting enzyme inhibitor of the present invention.
Examples of the root extract containing a higher purity of the active ingredient include those obtained by adding a water-soluble organic solvent to an aqueous extract of the root to precipitate and remove impurities, and then concentrating the supernatant. In this case, the root is preferably a wheat root, and the water-soluble organic solvent is preferably a solvent having an affinity for water, such as methanol, ethanol, and acetone.
By extracting and concentrating the active ingredient from the root, and then drying and pulverizing the active ingredient, application to various forms of foods and beverages / medicines becomes easy.
(Method for producing angiotensin converting enzyme inhibitor of the present invention)
The method for producing an angiotensin converting enzyme inhibitor of the present invention is characterized in that a root of a grass plant is extracted with a water-soluble solvent. A specific method will be exemplified below.
First, an extract containing an active ingredient is obtained by contacting a root of a rice plant such as rice or wheat or a dried product thereof with 1 to 20 times by weight of water or hot water for 5 minutes or more, preferably 1 to 20 hours. . It is conceivable that the extract is dried and powdered as it is.However, since various substances are dissolved in the water extract, the purity of the active ingredient is low, it is difficult to powder, and a clean powder cannot be obtained. And so on. Therefore, it is preferable to further concentrate the active ingredient.
When the active ingredient is concentrated, it is preferable to remove polymers and other polymers dissolved in the extract. The removal of the polymer may be performed by, for example, adjusting the pH of the extract and performing isoelectric precipitation. Alternatively, a fraction having a molecular weight of 1,000 or less may be collected by ultrafiltration or size exclusion chromatography having a molecular weight cut off of about 1,000.
Impurities can be reduced by subjecting this extract to a treatment in which adsorption and desorption with an ion exchange resin, filtration with activated carbon and the like are appropriately combined. For example, since the active ingredient of wheat root is a zwitterionic compound, both a cation exchange resin and an anion exchange resin can be suitably used.
In addition, since the active ingredient derived from wheat root has high polarity and weak interaction with activated carbon, impurities can be removed by activated carbon filtration. As a method for removing organic substances having relatively low polarity, the organic substances may be passed through octadecyl silica or a synthetic adsorbent (eg, Diaion HP-20 manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation).
A high-purity active ingredient can be obtained by appropriately combining the above-mentioned ion exchange resin treatment, activated carbon filtration, adsorbent treatment, and molecular weight fractionation. In addition, a desalting operation may be performed by a method such as electrodialysis. Thus, if necessary, the active ingredient can be concentrated to the target purity.
[0005]
The above-mentioned extract or its concentrated solution can be further concentrated by an addition operation using a water-soluble organic solvent. The water-soluble organic solvent is a solvent having an affinity for water such as methanol, ethanol and acetone, and ethanol is particularly preferable. The amount of the organic solvent to be added varies depending on the degree of concentration of the aqueous extract, but the organic solvent is preferably added so that the organic solvent concentration of the aqueous extract is 50% or more and less than 80%. As a result, a precipitate is formed in the extract, which is removed by an appropriate method, for example, centrifugation. Since the active ingredient derived from wheat root is present in the supernatant, the purity of the active ingredient can be further increased by distilling off and concentrating the solvent.
[0006]
This concentrate can be further dried and powdered by vacuum drying, freeze drying, spray drying or the like to obtain an angiotensin converting enzyme inhibitor.
As shown in the Examples, roots or root extracts of Poaceae plants inhibit angiotensin converting enzyme, and thus are useful as angiotensin converting enzyme inhibitors, antihypertensives, or agents for preventing or treating hypertension.
The angiotensin converting enzyme inhibitor of the present invention can be used for humans and non-human animals (pets, livestock). When a human takes the angiotensin-converting enzyme inhibitor of the present invention, the amount to be taken is appropriately set depending on the sex and body weight, and the type and symptoms of the disease to be prevented or treated. For example, the dose may be taken so that about 0.1 to 1000 mg per adult per day can be taken. The same applies to the case where the root or root extract of a grass plant is ingested as an antihypertensive or an agent for preventing or treating hypertension.
By adding the angiotensin converting enzyme inhibitor of the present invention to foods and drinks or pharmaceuticals, a physiological activity (for example, an antihypertensive action, a preventive or therapeutic action for hypertension) can be imparted to them.
When added to food, angiotensin converting enzyme inhibitor is mixed with ordinary excipients and tableted to produce health food tablets, or various foods and drinks such as bread, cakes, biscuits, breads such as cookies, confectionery and the like. Noodles such as yam, soba, udon, Chinese noodles, prepared foods such as tempura and fried food, processed soybean foods such as tofu and natto, and beverages such as juice, coffee, cocoa, oolong tea, green tea, health drinks, etc. By adding it, a functional food or drink having a blood pressure lowering effect or the like can be obtained.
In the case of pharmaceuticals, capsules, tablets, granules, liquids and the like may be formulated using ordinary excipients.
【Example】
In Examples, an angiotensin converting enzyme inhibitor was extracted from barley-derived wheat roots.
(Method for measuring angiotensin converting enzyme inhibitory activity)
The measurement method of the present invention followed the method described in Journal of the Japanese Society of Chest Disease 18 (5), 1980, 297-302.
(1) Reagent substrate solution: Dissolve the synthetic substrate hypopril-histidylleucine (Hip-Hus-Leu, Sigma) in a 100 mM borate buffer (pH 8.3) containing 1 M NaCl to a concentration of 12.5 mM. Thus, a substrate solution was obtained.
Enzyme solution: Rabbit lung-derived angiotensin converting enzyme (manufactured by Sigma) was dissolved in 50 mM borate buffer (pH 8.3) to a concentration of 333 mU / ml to obtain an enzyme solution.
(2) Experimental method In a test tube, 140 µl of the sample solution is mixed with 100 µl of the substrate solution, and pre-incubated at 37 ° C for 5 minutes. Next, 10 μl of an enzyme solution is added and reacted at 37 ° C. for 30 minutes. After adding 250 μl of 1N HCl to stop the reaction, add 1.5 mL of ethyl acetate which has been ice-cooled in advance, and stir well for 15 seconds. After subjecting to centrifugation (3000 rpm for 5 minutes at 4 ° C), 1 ml of the upper layer is transferred to another test tube. This is subjected to a centrifugal concentrating dryer to evaporate the ethyl acetate. Redissolve in 1 ml of ultrapure water and measure the absorbance at 228 nm. The angiotensin converting enzyme inhibitory activity was defined as the rate of decrease in absorbance when a sample was added to a control (ultra pure water instead of the sample).
[0007]
[Example 1]
5 liters of water was added to 400 grams of the pulverized dry wheat root to adjust the pH to 9, and then immersed at 25 ° C for 90 minutes, and then the wheat root was removed to obtain 4.7 liters of a water extract. Subsequently, the pH of the supernatant was adjusted to 4.5, centrifuged (7500 G, 30 minutes), and the formed precipitate was separated and removed to obtain 4.5 liter of supernatant. Ethanol was added to this aqueous extract to make a solution having an ethanol concentration of 80%. The resulting solution was centrifuged at 4 ° C. (7500 G, 30 minutes), and the resulting supernatant was concentrated to dryness to inhibit angiotensin converting enzyme inhibitory activity. 60 g of a roughly purified powder of the composition was obtained. The powder had an IC50 of angiotensin converting enzyme inhibitory activity of 800 μg / ml.
[0008]
[Example 2]
150 g of activated carbon (purified Shirasagi, manufactured by Takeda Pharmaceutical Co., Ltd.) was added to 4.5 liters of the wheat root extract prepared in the same manner as in Example 1, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours to adsorb impurities. To this, 150 g of a diatomaceous earth filter aid (Radiolite 500) was mixed. (2) Suction filtration was performed on filter paper to obtain a filtrate. This filtrate was treated with a hollow fiber type ultrafiltration module having a molecular weight cutoff of 1,000, and the permeate was freeze-dried to obtain 20 g of a white powder. The powder had an IC50 of angiotensin converting enzyme inhibitory activity of 250 μg / ml.
[0009]
Example 3 [Example]
The powder obtained in Example 2 was redissolved in 200 ml of distilled water, and ethanol was added thereto to obtain a solution having an ethanol concentration of 80%. This was centrifuged at 4 ° C. (7500 G, 30 minutes), and the resulting supernatant was lyophilized after distilling off the solvent to obtain 10 g of a white powder. The powder had an IC50 of angiotensin converting enzyme inhibitory activity of 120 μg / ml.
[0010]
Example 4 [Example]
The ultrafiltrate obtained in Example 2 was applied to an anion exchange resin (Diaion PA318, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) column (volume: 1 liter, OH type), washed with 2 liters of distilled water, and further added with 0.5N hydrochloric acid. Eluted in liters. Subsequently, this was applied to a cation exchange resin (Dowex 50W × 2) column (volume: 1 liter, H type), washed with 2 liters of distilled water, and further eluted with a 0.5% aqueous ammonia solution. The second to third liters were collected and concentrated to 100 ml using a rotary evaporator. Finally, this was freeze-dried to obtain 0.4 g of a white powder. This powder had an angiotensin converting enzyme inhibitory activity IC50 of 5 μg / ml.
[0011]
Example 5 [Example]
The powder obtained in Example 4 was dissolved in a small amount of water, and applied to a polyamide C-200 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) column (volume: 0.5 liter) preliminarily equilibrated with 100% ethanol. Elution was carried out sequentially using 1 liter of each of% ethanol, 80% ethanol, 70% ethanol, 60% ethanol, and 50% ethanol. The eluted fractions of 70% ethanol, 60% ethanol and 50% ethanol were concentrated, filtered and freeze-dried to obtain 50 mg of a white powder. The powder had an IC50 of angiotensin converting enzyme inhibitory activity of 0.7 μg / ml.
[0012]
Example 6 [Example]
The powder obtained in Example 1 and lactose, crystalline cellulose, talc, and carboxymethylcellulose (binder) were uniformly mixed with the following composition to obtain granules, and the mixture was tableted by a conventional method to give 500 mg / tablet. Tablets were manufactured.
300 g of the powder obtained in Example 1
Lactose 100g
93 g of crystalline cellulose
5g talc
Carboxymethyl cellulose 2g
[0013]
[Example 7]
The powder obtained in Example 1 was blended into a cake raw material in the following composition, and a cake was produced by a conventional method. The obtained cake had no difference in the internal phase and appearance as compared with the normal product, and had a good texture and flavor.
100 parts by weight of flour 100 parts by weight of eggs 100 parts by weight of sugar 3 parts by weight of crude powder obtained in Example 1 3 parts by weight 40 parts by weight of water
Example 8
When 1% of the roughly purified powder obtained in Example 1 was added to a commercially available carbonated beverage, the powder was quickly dissolved, and the resulting beverage was good without any change in flavor.
[0015]
[Effects of the present invention]
The root or root extract of a grass plant can be used as an angiotensin converting enzyme inhibitor, a hypotensive agent, or an agent for preventing or treating hypertension. The active ingredient can be efficiently produced from the roots of grasses, particularly from wheat roots which are by-products during beer production. When the above agent is used as it is or when added to various foods, health foods having a blood pressure lowering action and the like are obtained, and by ingesting them, the symptoms of hypertension can be improved and prevented.