JP2003533206A - 単離ヒトトランスポータータンパク質、ヒトトランスポータータンパク質をコード化する核酸分子、及びそれらの使用 - Google Patents

単離ヒトトランスポータータンパク質、ヒトトランスポータータンパク質をコード化する核酸分子、及びそれらの使用

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JP2003533206A JP2001584518A JP2001584518A JP2003533206A JP 2003533206 A JP2003533206 A JP 2003533206A JP 2001584518 A JP2001584518 A JP 2001584518A JP 2001584518 A JP2001584518 A JP 2001584518A JP 2003533206 A JP2003533206 A JP 2003533206A
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アプレラ コーポレーション
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、ヒトゲノム中の遺伝子によりコード化されている、本発明のトランスポーターペプチドのアミノ酸配列を提供するものである。本発明は特に、単離ペプチド及び核酸分子、トランスポーターペプチドのオルトログ及びパラログの同定方法、及びトランスポーターペプチドのモジュレータの同定方法を提供するものである。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 技術分野 本発明は、トランスポータータンパク質の分野に属し、硫酸トランスポーター
サブファミリー、組み換えＤＮＡ分子、及びタンパク質生成に関連するものであ
る。本発明は特に、リガンドの輸送に影響する新規なペプチド及びタンパク質、
及びこのようなペプチド及びタンパク質分子をコード化する核酸分子を提供する
ものであり、これら全てはヒトの治療及び診断用の化合物、方法の開発において
有用である。
【０００２】 背景技術トランスポーター トランスポータータンパク質は、イオンや巨大分子のような分子の細胞内部及
び外部への流動を調節することによって、細胞増殖、細胞分化、信号プロセスと
いった多くの異なる細胞機能を調節している。トランスポーターは、真核生物の
ほぼ全ての細胞中の形質膜において見出される。トランスポーターは、膜電位、
吸収、細胞膜を通過する分子及びイオン分泌の調節といった種々の細胞機能を媒
介している。塩化物イオンチャンネルのようなトランスポーターが、ゴルジ体や
エンドサイトーシス小胞の細胞内膜に存在する場合には、小器官のｐＨも調節さ
れる。Greger, R. (1988) Annu. Rev. Physiol. 50:111-122を参照されたい。
【０００３】 トランスポーターは、一般的に構造及び作用様式のタイプによって分類される
。さらに、トランスポーターは、例えば、糖トランスポーター、塩素チャンネル
、カリウムチャンネル等のように、時には輸送される分子のタイプによって分類
される。単一のタイプの分子を輸送するチャンネルには、多くの種類が存在し得
る(チャンネルタイプの詳細については、Alexander, S.P.H. and J.A. Peters:
Receptor and transporter nomenclature supplement. Trends Pharmacol. Sci.
, Elsevier, pp. 65-68 (1997)、及び http://www.biology.ucsd.edu/~msaier/t
ransport/titlepage2.html に述べられている)。
【０００４】 下記の一般的な分類案が、当業者において公知であり、現在の発見において準
拠されている。
【０００５】 チャンネル型トランスポーター。このクラスの膜貫通チャンネルタンパク質は
、細菌から高度の真核生物までの全てのタイプの生体の膜において、至る所で見
出される。このタイプの輸送システムは、キャリヤー媒介機構の証拠無しに、膜
貫通水性孔、又はチャンネルの通過による（エネルギー独立プロセスによる）促
進拡散に触媒的作用を及ぼす。これらのチャンネルタンパク質には、βストラン
ドも存在し得るが、通常、主にα−へリックススパンから成っており、チャンネ
ルを含み得る。しかしながら、外膜ポーリン型チャンネルタンパク質は、このク
ラスからは除外され、クラス９に含まれる。
【０００６】 キャリヤー型トランスポーター。ユニポート（単一種が促進拡散により輸送さ
れる）、アンチポート（２以上の種が深く結びついたプロセスの反対方向に輸送
され、化学浸透圧性エネルギー以外のエネルギーの直接形態に結びつかない）、
及び／又はシンポート（２以上の種が深く結びついたプロセスの同一方向に共に
輸送され、化学浸透圧性エネルギー以外のエネルギーの直接形態に結びつかない
）に触媒的な作用を及ぼすキャリヤー媒介プロセスを用いる場合、輸送システム
はこのクラスに含まれる。
【０００７】 ピロリン酸結合加水分解−駆動性性能動性トランスポーター。能動的な溶質の
取り込み及び／又は押し出しを駆動するために、ＡＴＰにおけるピロリン酸又は
末端ピロリン酸結合、あるいは他のヌクレオシド三リン酸を加水分解する場合、
輸送システムはこのクラスに含まれる。この輸送タンパク質は、一時的にリン酸
化されてもされなくても良いが、基質はリン酸化されない。
【０００８】 ＰＥＰ依存性、ホスホリル転移−駆動性トランスロケーター。細菌性のホスホ
エノールピルビン酸：糖ホスホトランスフェラーゼの輸送システムはこのクラス
に含まれる。この反応の生成物は、細胞外の糖に由来する、糖−リン酸塩である
。
【０００９】 脱炭酸−駆動性能動性トランスポーター。細胞質基質の脱炭酸により、溶質（
例えば、イオン）の取り込み又は押し出しが駆動される輸送システムは、このク
ラスに含まれる。
【００１０】 酸化還元−駆動性能動性トランスポーター。酸化された基質から還元された基
質への電子の流れによってエネルギー化された溶質（例えば、イオン）の輸送を
駆動する輸送システムは、このクラスに含まれる。
【００１１】 光−駆動性能動性トランスポーター。溶質（例えば、イオン）輸送の駆動のた
めに光エネルギーを用いている輸送システムは、このクラスに含まれる。
【００１２】 機械−駆動性能動性トランスポーター。膜を通じ、電気化学的勾配に沿ったイ
オン（又は他の溶質）の流れを可能とすることにより、細胞又は小器官の運動を
駆動する場合、輸送システムはこのクラスに含まれる。
【００１３】 （β構造の）外膜ポーリン。これらのタンパク質は、膜貫通孔又はチャンネル
を形成し、通常、そのエネルギーは、膜を通じた溶質の移動に依存しない。これ
らのタンパク質の膜貫通部分は、β−バレルを形成するβ−ストランドのみから
なる。これらのポーリン型タンパク質は、グラム陰性細菌、ミトコンドリア、及
び真核性プラスチドの外膜において見出される。
【００１４】 メチルトランスフェラーゼ−駆動性トランスポーター。現在、１つのタンパク
質、Ｎａ＋輸送メチルテトラヒドロメタノプテリン：補酵素Ｍメチルトランスフ
ェラーゼがこのカテゴリーに分類するものとして特徴付けられている。
【００１５】 非リボソーム合成チャンネル形成ペプチド、又はペプチド様分子。これらの分
子は、通常、Ｌ−、及びＤ−アミノ酸鎖、及び乳酸塩のような小分子構成成分で
あり、オリゴマー状の膜貫通イオンチャンネルを形成する。電位は、膜貫通チャ
ンネルの構築を促進することによって、チャンネルの形成を誘導し得る。これら
のタンパク質はしばしば、細菌及び菌類により、生物戦における薬剤として生成
され得る。
【００１６】 非タンパク質様輸送複合体。タンパク質又はペプチドから成らない、又はこれ
に由来しない生物膜中のイオン伝導性物質は、このカテゴリーに分類される。
【００１７】 機能的に特徴付けられたトランスポーターであって、配列データの無いもの。
特に生理学的に重要なトランスポーターであるものの、ファミリーに割り当てる
ことができない場合には、このカテゴリーに含まれる。
【００１８】 トランスポーターであると推定され、確立したトランスポーターファミリーの
メンバーでないもの。トランスポータータンパク質と推定されるもののファミリ
ーはこの番号の下に分類され、メンバーの輸送機能が確立された場合には他へと
分類され、提案された輸送機能が反証された場合には、ＴＣ分類システムから除
外される。これらのファミリーには、輸送機能が示唆されているものの、この機
能の実証が未だ完全でないメンバーが含まれる。
【００１９】 補助トランスポータータンパク質。１以上の生物膜を通じた輸送を何らかの方
法で促進するものの、直接に輸送に関連していないタンパク質は、このクラスに
含まれる。このタンパク質は、常に１以上の輸送タンパク質と結びついて機能す
る。これらは、輸送のためのエネルギー結合に関連した機能を与えるか、複合体
形成のための構造的な役割を果たすか、又は調節機能を果たし得る。
【００２０】 分類未知のトランスポーター。分類未知のトランスポータータンパク質ファミ
リーは、この番号の下に分類され、輸送プロセス及びエネルギー結合機構が特徴
付けられた場合には他へと分類される。これらのファミリーには、輸送機能は確
立されているものの、輸送様式、又はエネルギー結合機構の知られていないメン
バーの少なくとも１つが含まれる。
【００２１】イオンチャンネル トランスポーターにおける重要なタイプの１つとしてイオンチャンネルがある
。イオンチャンネルは、イオンの細胞内部及び外部への流動を調節することによ
って、細胞増殖、細胞分化、信号プロセスといった、多くの異なる細胞機能を調
節している。イオンチャンネルは、真核生物のほぼ全ての細胞中の形質膜におい
て見出される。イオンチャンネルは、膜電位、吸収、上皮膜を通過するイオン分
泌の調節といった種々の細胞機能を媒介する。塩化物イオンチャンネルのような
イオンチャンネルが、ゴルジ体やエンドサイトーシス小胞の細胞内膜に存在する
場合には、小器官のｐＨも調節される。Greger, R. (1988) Annu. Rev. Physiol
. 50:111-122を参照されたい。
【００２２】 イオンチャンネルは、一般的に構造及び作用様式のタイプによって分類される
。例えば、細胞外リガンド依存性チャンネル（ＥＬＧｓ）は、それぞれ４つの膜
貫通ドメインを有する５つのポリペプチドサブユニットから成っており、細胞外
リガンドのチャンネルへの結合によって活性化される。さらに、イオンチャンネ
ルは、例えば、塩素チャンネル、カリウムチャンネル等のように、時には輸送さ
れるイオンのタイプによって分類される。単一のタイプのイオンを輸送するチャ
ンネルには、多くの種類が存在し得る（チャンネルタイプの詳細については、Al
exander, S.P.H. and J.A. Peters (1997). Receptor and ion channel nomencl
ature supplement. Trends Pharmacol. Sci., Elsevier, pp. 65-68 及び http:
//www-biology.ucsd.edu/~msaier/transport/toc.html に述べられている）。
【００２３】 構造に基づいたイオンチャンネルのタイプには多くのものがある。例えば、多
くのイオンチャンネルは、後述のグループの１つに分類される：細胞外リガンド
依存性チャンネル（ＥＬＧ）、細胞内リガンド依存性チャンネル（ＩＬＧ）、内
向整流チャンネル（ＩＮＲ）、細胞間（ギャップ接合）チャンネル、電位依存性
チャンネル（ＶＩＣ）。さらに、輸送されるイオンのタイプ、細胞位置、薬剤感
応性に基づいた他のチャンネルファミリーも認められている。これらの活性、リ
ガンドタイプ、イオンタイプ、疾患との関連、薬剤能のそれぞれについての詳細
な情報、及び本発明に関連する他の情報については、当該技術分野において周知
である。
【００２４】 細胞外リガンド依存性チャンネルＥＬＧは、一般的に５つのポリペプチドサブ
ユニットから成っている（Unwin, N. (1993), Cell 72: 31-41; Unwin, N. (199
5), Nature 373: 37-43; Hucho, F., et al., (1996) J. Neurochem. 66: 1781-
1792; Hucho, F., et al., (1996) Eur. J. Biochem. 239: 539-557; Alexander
, S.P.H. and J.A. Peters (1997), Trends Pharmacol. Sci., Elsevier, pp. 4
-6; 36-40; 42-44 及び Xue, H. (1998) J. Mol. Evol. 47: 323-333）。それぞ
れのサブユニットは４つの膜貫通ドメインを有しており、このことはタンパク質
がＥＬＧの他のメンバーであることを同定する方法に用いられている。ＥＬＧは
リガンドと結合し、これに応じてイオンの流れを変調する。ＥＬＧの例としては
、例えばＧＡＢＡＩ受容体のような、神経伝達物質受容体ファミリーのタンパク
質の殆どのメンバーが含まれる。このイオンチャンネルのファミリーの他のメン
バーとしては、グリシン受容体、リアノジン受容体、及びリガンド依存カルシウ
ムチャンネルが含まれる。
【００２５】電位依存性イオンチャンネル（ＶＩＣ）スーパーファミリー ＶＩＣファミリーのタンパク質は、細菌、古細菌、真核生物の広い範囲にわた
って見出されるイオン感応性チャンネルタンパク質である（Hille, B. (1992),
Chapter 9: Structure of channel proteins; Chapter 20: Evolution and dive
rsity. In: Ionic Channels of Excitable Membranes, 2nd Ed., Sinaur Assoc.
Inc., Pubs., Sunderland, Massachusetts; Sigworth, F.J. (1993), Quart. R
ev. Biophys. 27: 1-40; Salkoff, L. and T. Jegla (1995), Neuron 15: 489-4
92; Alexander, S.P.H. et al., (1997), Trends Pharmacol. Sci., Elsevier,
pp. 76-84; Jan, L.Y. et al., (1997), Annu. Rev. Neurosci. 20: 91-123; Do
yle, D.A, et al., (1998) Science 280: 69-77; Terlau, H. and W. Stuhmer (
1998), Naturwissenschaften 85: 437-444.）。これらはしばしば、ホモオリゴ
マー構造、又はいくつかの非類似サブニットのヘテロオリゴマー構造（例えば、
ａ１−ａ２−ｄ−ｂ Ｃａ２＋チャンネル、ａｂ１ｂ２ Ｎａ＋チャンネル、又は
(ａ)４−ｂ Ｋ＋チャンネル）をとっているものの、通常、チャンネル又は主な
受容体は、ａ（又はａ１）サブユニットに関連している。機能的に特徴付けられ
ているメンバーは、Ｋ＋、Ｎａ＋、又はＣａ２＋において明らかである。Ｋ＋チ
ャンネルは、通常、６つの膜貫通スパン（ＴＭＳ）を有するａサブユニットのホ
モ四量体構造からなっている。ａ１、及びＣａ２＋、Ｎａ＋チャンネルのサブユ
ニットのそれぞれは、約４倍の大きさであり、４つのサブユニットを有し、この
それぞれが疎水性ループにより分けられる６つのＴＭＳを有しており、合計で２
４個のＴＭＳを有している。これらの大きなチャンネルタンパク質は、ほとんど
のＫ＋チャンネルのホモ四量体構造と同等の、ヘテロ四量体ユニット構造を形成
している。Ｃａ２＋、及びＮａ＋チャンネルにおける全４つのユニットは、ホモ
四量体Ｋ＋チャンネルの単一のユニットに対して相同的である。真核性のチャン
ネルを経たイオンの流動は、通常、膜内外の電位により（電位感応性の指示によ
って）制御されるが、いくつかのものは、リガンド又は受容体の結合により制御
される。
【００２６】 ＶＩＣファミリーのＫ＋感応性チャンネルタンパク質と推定されるいくつかの
ものが、原核生物において確認されている。これらのうちの１つ、Streptomyces
lividansのＫＣＳＡＫ＋チャンネルの構造は、３．２Åの分解能で解明された
。このタンパク質は、４つの同一のサブユニットを有し、このそれぞれは２つの
膜貫通螺旋構造を有しており、逆円錐、又は円錐構造に配置されている。円錐は
、“選択性フィルター”Ｐドメインを、その外部末端の中に抱えている。この細
い選択性フィルターはわずか１２Åの長さであるのに対して、チャンネルの残部
は幅広く、親水性の残基が並んでいる。水に満たされた大きな空孔とへリックス
の２つの極は、孔の中でＫ＋を安定化する。選択性フィルターは、結合された２
つのＫ＋イオンを、それぞれが互いに７．５Å離れて有している。イオン伝導は
、静電的な引力と斥力とのバランスの結果生じていると提案されている。
【００２７】 真核生物において、それぞれのＶＩＣファミリーチャンネルタイプは、薬理学
的及び電気生理学的データに基づいたいくつかのサブタイプがある。このため、
Ｃａ２＋チャンネルには５つのタイプ（Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、及びＴ）がある。Ｋ＋ チャンネルには、少なくとも１０のタイプがあり、それぞれ異なる刺激に対して
、異なる方法で応答している：電位感応性（Ｋａ、Ｋｖ、Ｋｖｒ、及びＫｓｒ）
、Ｃａ２＋感応性（ＢＫＣａ、ＩＫＣａ、及びＳＫＣａ）、受容体結合（ＫＭ、
及びＫＡＣｈ）。Ｎａ＋チャンネルには、少なくとも６つのタイプ（I、II、III
、μ１、Ｈ１、及びＰＮ３）がある。原核生物及び真核生物の両者の四量体チャ
ンネルは、それぞれのａサブユニットがＴＭＳを６つよりはむしろ２つ有するも
のとして知られており、これらの２つのＴＭＳは、電位感応性チャンネルタンパ
ク質に見られる６つのＴＭＳユニットのうちの、ＴＭＳ５及び６に対して相同的
である。S. lividansのＫＣＳＡは、このような２ＴＭＳチャンネルタンパク質
の例である。これらのチャンネルには、ＫＮａ（Ｎａ＋活性化）、及びＫＶｏｌ （細胞容量感応性）Ｋ＋チャンネルと同様に、酵母のＴｏｋ１Ｋ＋チャンネル、
マウスのＴＷＩＫ-１内向き整流Ｋ＋チャンネル、及びマウスのＴＲＥＫ-１Ｋ＋ チャンネルのような、遠く関連しているチャンネルも含まれ得る。ＶＩＣファミ
リーのタンパク質との配列の類似が不十分なため、Ｐドメイン及び２つのフラン
キングＴＭＳを有している内向き整流Ｋ＋ＩＲＫチャンネル（ＡＴＰ調節、Ｇタ
ンパク質活性化）は、他のファミリーに分類される。しかしながら、Ｐ領域にお
いて実質的に配列が類似している場合、それらは相同的であることが示唆される
。ＶＩＣファミリーメンバーのｂ、ｇ、ｄサブユニットが存在している場合には
、しばしばチャンネル活性化／不活性化の調節の役割を果たす。
【００２８】上皮Ｎａ＋チャンネル（ＥＮａＣ）ファミリー ＥＮａＣファミリーは、２４以上の配列解析されたタンパク質からなっている
（Canessa, C.M., et al., (1994), Nature 367: 463-467, Le, T. and M.H. Sa
ier, Jr. (1996), Mol. Membr. Biol. 13: 149-157; Garty, H. and L.G. Palme
r (1997), Physiol. Rev. 77: 359-396; Waldmann, R., et al., (1997), Natur
e 386: 173-177; Darboux, I., et al., (1998), J. Biol. Chem. 273: 9424-94
29; Firsov, D., et al., (1998), EMBO J. 17: 344-352; Horisberger, J.-D.
(1998). Curr. Opin. Struc. Biol. 10: 443-449）。この全ては動物由来であり
、他の真核生物又は細菌には相同体が認められない。脊椎動物の上皮細胞からの
ＥＮａＣタンパク質は、系統樹において共にきっちりと群を成している：電位非
感応性ＥＮａＣ相同体は、脳においても見出される。degenerinを含む、１１の
配列解析されたC. elegansタンパク質は、それぞれがお互いに関連しているのと
同様に、脊椎動物のタンパク質とも遠く関連している。少なくともこれらのタン
パク質のうちのいくつかは、接触感応性のための機械伝達性複合体を部分的に形
成する。相同性のHelix aspersa（ＦＭＲＦ-アミド）-活性化Ｎａ＋チャンネル
は、最初に配列解析された神経伝達物質依存性イオンチャンネル型受容体ペプチ
ドである。
【００２９】 このファミリーのタンパク質は、全て同一の外見上の形態を示し、それぞれ細
胞の内側にＮ、及びＣ末端、２つの両親媒性膜貫通スパンセグメント、及び大き
な細胞外ループを示す。細胞外ドメインは、多くの高度に保持されたシステイン
残基を含んでいる。これらは受容体機能を果たすと提案されている。
【００３０】 哺乳類のＥＮａＣは、Ｎａ＋のバランスの維持、及び血圧の調節において重要
である。３つの相同性ＥＮａＣサブユニット、α、β、γは、高度のＮａ選択性
チャンネルを形成するために集合することが示された。３つのサブユニットの化
学量論は、ヘテロ四量体構成におけるα２、β１、γ１である。
【００３１】神経伝達物質受容体のグルタミン酸依存性イオンチャンネル(ＧＩＣ)ファミリー ＧＩＣファミリーのメンバーは、ヘテロ五量体複合体であり、５つのサブユニ
ットのそれぞれは８００〜１０００のアミノアシル残基の長さである(Nakanishi
, N., et al, (1990), Neuron 5: 569-581; Unwin, N. (1993), Cell 72: 31-41
; Alexander, S.P.H and J.A. Peters (1997) Trends Pharmacol. Sci., Elsevi
er, pp. 36-40)。これらのサブユニットは、細胞外に局在するＮ末端（グルタミ
ン酸結合ドメイン）、及び細胞質に局在するＣ末端とともに、αへリックス構造
と推定される部分として３回又は５回膜を貫通している。これらはリガンド依存
性イオンチャンネルと遠く関連しているかもしれず、もしそうであれば、それら
は膜貫通領域に堅固なβ構造を有している。しかしながら、単独での配列比較に
基づいて、これら２つのファミリー間の相同性を実証することはできない。この
サブユニットは、ａ、ｂ、ｇ、ｄ、ｅ、及びｚの６つのサブファミリーに分類さ
れる。
【００３２】 ＧＩＣチャンネルは、（１）α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−
イソキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡ）−、（２）カイニン酸−、（３）Ｎ−
メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）−選択性グルタミン酸受容体の３つの
タイプに分類される。ＡＭＰＡとカイニン酸のサブユニットはお互いに３５〜４
０％の同一性を示すが、ＮＭＤＡ受容体サブユニットの前者のサブユニットに対
する同一性は２２〜２４％である。これらは、大きなＮ末端を細胞外グルタミン
酸結合ドメインとして有しており、これはグラム陰性細菌のＡＢＣ型取り込みパ
ーミアーゼの周辺質グルタミン及びグルタミン酸受容体と相同的である。公知の
ＧＩＣファミリーメンバーは、全て動物由来である。異なるチャンネル（受容体
）タイプでは、異なるイオン選択性及び伝導特性を示す。ＮＭＤＡ選択性高伝導
チャンネルは、１価のカチオン及びＣａ２＋に対して、高い透過性を持つ。ＡＭ
ＰＡ、及びカイニン酸選択性イオンチャンネルは、主に１価のカチオンを透過し
、Ｃａ２＋に対してはわずかな透過性を有するのみである。
【００３３】塩化物チャンネル（ＣＩＣ）ファミリー ＣＩＣファミリーは、グラム陰性、及びグラム陽性細菌、シアノ細菌、古細菌
、酵母、植物、動物由来の配列解析されたタンパク質１２種からなる大きなファ
ミリーである（Steinmeyer, K., et al., (1991), Nature 354: 301-304; Uchid
a, S., et al., (1993), J. Biol. Chem. 268: 3821-3824; Huang, M.-E., et a
l., (1994), J. Mol. Biol. 242: 595-598; Kawasaki, M., et al, (1994), Neu
ron 12: 597-604; Fisher, W.E., et al., (1995), Genomics. 29:598-606; and
Foskett, J.K. (1998), Annu. Rev. Physiol. 60: 689-717）。これらのタンパ
ク質は、本質的に至る所に存在しているが、Haemophilus influenzae, Mycoplas
ma genitalium、及びMycoplasma pneumoniaeのゲノム中にはコード化されていな
い。配列解析されたタンパク質は、３９５（M. jannaschii）から９８８（ヒト
）までの大きさで様々である。いくつかの生物には、多数のＣＩＣファミリーパ
ラログが含まれている。例えば、Synechocystisは２つのパラログを有し、一方
は４５１残基、他方は８９９残基を有している。Arabidopsis thalianaは、少な
くとも４つの配列解析されたパラログ（７７５〜７９２残基）を有し、ヒトも少
なくとも５つのパラログ（８２０〜９８８残基）を有し、また、C. elegansもま
た、少なくとも５つのパラログ（８１０〜９５０残基）を有している。哺乳類に
おいては、９つの公知のメンバーがあり、対応する遺伝子のうちの３つの変異に
よって、ヒトの疾病が引き起こされる。E. coli, Methanococcus jannaschii、
及びSaccharomyces cerevisiaeは、それぞれ、わずか１つのＣＩＣファミリーの
メンバーを有している。大きなSynechocystisパラログを除いて、全ての細菌性
タンパク質は小さい（３９５〜４９２残基）が、全ての真核生物タンパク質はよ
り大きい（６８７〜９８８残基）。これらのタンパク質は、１０〜１２の推定膜
貫通α−螺旋スパン（ＴＭＳ）を示し、ホモ二量体として膜中に存在すると考え
られる。このファミリーのメンバーの１つ、Torpedo ＣｌＣ-Ｏでは、２つのチ
ャンネルを、サブユニットにつき１つ有していることが報告されており、この他
のものは、ただ１つだけ有するものと考えられている。
【００３４】 ＣＩＣファミリーとして機能的に特徴付けられる全てのメンバーは塩化物を輸
送し、いくつかのものは電位調節プロセスにおいて塩化物を輸送する。これらの
チャンネルは、種々の生理学的機能（細胞容積調節、膜電位安定化、信号伝達、
経上皮輸送等）に作用する。ヒトにおける異なる相同体は、異なる選択性を示す
。すなわち、ＣｌＣ４及びＣｌＣ５は、ＮＯ３−＞Ｃｌ−＞Ｂｒ−＞Ｉ−の伝導
性配列を共有しているのに対して、ＣｌＣ３は、Ｉ−＞Ｃｌ−の選択性を有する
。ＣｌＣ４、及びＣｌＣ５チャンネル、及び他のものは、電位が＋２０ｍＶ以上
の場合にのみ、外向きの整流を示す。
【００３５】動物の内向き整流Ｋ＋チャンネル（ＩＲＫ−Ｃ）ファミリー ＩＲＫチャンネルは、“最小限のチャンネル形成構造”として、ＶＩＣファミ
リーのチャンネルタンパク質に特有のＰドメインのみ、及び２つのフランキング
膜貫通スパンを有する（Shuck, M.E., et al., (1994), J. Biol. Chem. 269: 2
4261-24270; Ashen, M.D., et al., (1995), Am. J. Physiol. 268: H506-H511;
Salkoff, L. and T. Jegla (1995), Neuron 15: 489-492; Aguilar-Bryan, L.,
et al., (1998), Physiol. Rev. 78: 227-245; Ruknudin, A., et al., (1998)
, J. Biol. Chem. 273: 14165-14171）。これらは、膜中にホモ、又はヘテロオ
リゴマーとして存在し得る。これらは、Ｋ＋を細胞の外部へとよりも内部へと流
す大きな傾向を持っている。電位依存性は、外部Ｋ＋、内部Ｍｇ２＋、内部ＡＴ
Ｐ、及び／又はＧタンパク質により調節され得る。ＩＲＫチャンネルのＰドメイ
ンは、ＶＩＣファミリーのそれと類似した限定配列を示すが、この配列の類似は
相同性を確立するには不十分である。内向き整流器は、細胞膜電位を調整する役
割を果たし、脱分極の際にこれらのチャンネルが閉じることで、プラトー相での
長期間の活動電位の保持が可能となる。内向き整流器は、ＶＩＣファミリーチャ
ンネルに見出される、固有の電位を感知する螺旋構造を持たない。ごくまれには
、例えば、Ｋｉｒ１．１ａ、Ｋｉｒ６．２のそれらは、ＡＢＣスーパーファミリ
ーのメンバーとの直接の相互作用によって、ＡＴＰ感応性のような、ヘテロマー
複合体に対して特異な機能、及び調節特性を与えることが提案されている。ＳＵ
Ｒ１スルホニル尿素受容体（ｓｐＱ０９４２８）は、ＡＴＰに応答してＫｉｒ６
．２チャンネルを調節するＡＢＣタンパク質であり、またＣＦＴＲはＫｉｒ１．
１ａを調節し得る。ＳＵＲ１の変異は、膵臓でのインシュリン分泌が調節されな
いことにより特徴付けられる常染色体劣性障害である、遺伝性の持続性幼少時高
インシュリン低血糖症（ＰＨＨＩ）の原因となる。
【００３６】ＡＴＰ依存性カチオンチャンネル（ＡＣＣ）ファミリー ＡＣＣファミリー（Ｐ２Ｘ受容体とも呼ばれる）は、ＡＴＰに応答し、多種の
神経細胞からのエキソサイトーシスにより、機能性神経伝達物質が放出される（
North, R.A. (1996), Curr. Opin. Cell Biol. 8: 474-483; Soto, F., M. Garc
ia-Guzman and W. Stuhmer (1997), J. Membr. Biol. 160: 91-100）。これらは
、薬理学的性質に基づいて、７つのグループ（Ｐ２Ｘ１〜Ｐ２Ｘ７）に分けられ
る。神経細胞−神経細胞、及び神経細胞−平滑筋接合部において機能するこれら
のチャンネルは、血圧及び痛覚を制御する役割を果たしている。これらはまた、
リンパ球及び血小板おいても生理的に機能し得る。これらは動物においてのみ見
出される。
【００３７】 ＡＣＣファミリーのタンパク質は、配列は完全に類似している（＞３５％同一
性）ものの、主にＣ末端ドメインに局在している、サブユニット当たり３８０〜
１０００の変異性のアミノアシル残基を有している。これらは２つの膜貫通スパ
ンを有しており、一方はＮ末端から３０〜５０残基辺り、他方は３２０〜３４０
残基の近辺である。これら２つのスパンの間（約２０残基）の細胞外受容体ドメ
インは、グリシル及びシステイル残基が多数保持されており、高度に保持されて
いる。親水性のＣ末端は２５〜２４０残基の長さで様々である。これらは、（ａ
）細胞内に局在しているＮ、及びＣ末端、（ｂ）２つの推定膜貫通スパン、（ｃ
）大きな細胞外ループドメイン、及び（ｄ）多数の保持された細胞外システイル
残基において、形態の類似した上皮Ｎａ＋チャンネル（ＥＮａＣ）タンパク質と
類似している。しかしながら、ＡＣＣファミリーのメンバーは、これらと明らか
に相同的ではない。ＡＣＣチャンネルはおそらくヘテロ−、又はホモマルチマー
であり、小さな１価のカチオン（Ｍｅ＋）を輸送する。また、いくつかのものは
Ｃａ２＋も輸送し、ごくわずかのものは小さな代謝産物も輸送する。
【００３８】リアノジン−イノシトール１，４，５三リン酸受容体Ｃａ２＋チャンネル（ＲＩ Ｒ−ＣａＣ）ファミリー リアノジン（Ｒｙ）感応性、及びイノシトール１，４，５三リン酸（ＩＰ３）
感応性Ｃａ２＋放出チャンネルは、動物細胞の細胞内貯蔵部位からＣａ２＋を放
出し、これにより種々のＣａ２＋依存性生理プロセスを調節する（Hasan, G. et
al., (1992) Development 116: 967-975; Michikawa, T., et al., (1994), J.
Biol. Chem. 269: 9184-9189; Tunwell, R.E.A., (1996), Biochem. J. 318: 4
77-487; Lee, A.G. (1996) Biomembranes, Vol. 6, Transmembrane Receptors a
nd Channels (A.G. Lee, ed.), JAI Press, Denver, CO., pp 291-326; Mikoshi
ba, K., et al., (1996) J. Biochem. Biomem. 6: 273-289）。Ｒｙ受容体は主
に筋細胞筋小胞体（ＳＲ）膜に、ＩＰ３受容体は主に脳細胞小胞体（ＥＲ）膜に
存在し、ここでチャンネルの活性化（開く）によるＣａ２＋の細胞質への放出を
行う。
【００３９】 Ｒｙ受容体は、ジヒドロピリジン感応性Ｃａ２＋チャンネルの活性の結果とし
て活性化される。後者は、電位感応性イオンチャンネル（ＶＩＣ）ファミリーの
メンバーである。ジヒドロピリジン感応性チャンネルは、筋組織のＴ管系に存在
している。
【００４０】 Ｒｙ受容体は、それぞれのサブユニットの分子量サイズが５００，０００ダル
トン（約５，０００アミノアシル残基）以上のホモ四量体複合体である。これは
、６つの推定膜貫通α−螺旋スパン（ＴＭＳ）を有している。ＶＩＣファミリー
のメンバーであると推定されるように、推定孔形成配列は５つ目と６つ目のＴＭ
Ｓの間に存在している。大きなＮ末端親水性ドメイン、及び小さなＣ末端親水性
ドメインは細胞質に局在している。低分解能の３次元構造データを得ることがで
きる。哺乳動物は、おそらく哺乳動物の種の分岐以前の遺伝子の重複、分岐によ
り発生した、少なくとも３つのイソ型を有している。ヒトとCaenorabditis eleg
ansには、相同体が存在する。
【００４１】 ＩＰ３受容体は、Ｒｙ受容体と多くの点で類似している。（１）これらは、そ
れぞれのサブユニットの分子量サイズが３００，０００ダルトン（約２，７００
アミノアシル残基）以上のホモ四量体複合体である。（２）これらは、Ｒｙ受容
体のそれと相同的なＣ末端チャンネルドメインを有している。（３）チャンネル
ドメインは６つの推定ＴＭＳを有し、５つめと６つめのＴＭＳの間に推定チャン
ネル内層領域を有している。（４）大きなＮ末端ドメインと小さなＣ末端尾部の
両者が細胞質に面している。（５）これらは、チャンネルドメインの細胞質外ル
ープ共有結合した炭水化物を有している。（６）これらは、哺乳動物において３
つのイソ型（タイプ１，２，３）が一般的に認められており、これらは異なる調
節に従い、また異なる組織分布を持っている。
【００４２】 ＩＰ３受容体は、３つのドメイン；Ｎ末端のＩＰ３結合ドメイン、中央部の結
合、又は調節ドメイン、及びＣ末端のチャンネルドメイン、を有する。チャンネ
ルはＩＰ３結合により活性化され、Ｒｙ受容体と同様に、ＩＰ３受容体チャンネ
ルの活性は調節ドメインのリン酸化により調節され、種々のタンパク質キナーゼ
により触媒される。これらは、脳の種々の細胞タイプの小胞体膜において多く見
られるが、種々の組織に由来するいくつかの神経細胞の形質膜においても見出さ
れる。
【００４３】 Ｒｙ受容体及びＩＰ３受容体のチャンネルドメインは、一貫したファミリーか
らなっており、明確な構造の類似性を持っているにも関わらず、ＶＩＣファミリ
ーのタンパク質の明確な配列の類似性を示さない。Ｒｙ受容体とＩＰ３受容体は
、ＲＩＲ−ＣａＣ系統樹とは別のところで群を成している。これらの両者は、シ
ョウジョウバエにおいて相同体を有している。ファミリーの系統樹に基づくと、
このファミリーは、おそらく以下の連続によって進化している。（１）遺伝子の
重複により、無脊椎動物においてＲｙ及びＩＰ３受容体が生じた。（２）無脊椎
動物から脊椎動物へと進化した。（３）それぞれの受容体の３つのイソ型が、２
つの個別の遺伝子重複の結果として生じた。（４）これらのイソ型が、哺乳動物
の種の分岐以前に哺乳動物へと遺伝された。
【００４４】小器官塩化物チャンネル（Ｏ−ＣＩＣ）ファミリー Ｏ−ＣＩＣファミリーのタンパク質は、電位感応性の塩化物チャンネルであり
、細胞内膜において見出されるものの、動物細胞の形質膜においては見出されな
い（Landry, D, et al., (1993), J. Biol. Chem. 268: 14948-14955; Valenzue
la, Set al., (1997), J. Biol. Chem. 272: 12575-12582; and Duncan, R.R.,
et al., (1997), J. Biol. Chem. 272: 23880-23886）。
【００４５】 これらは、ヒトの核膜、ミクロソームに対するウシタンパク質ターゲットにお
いて見出されるが、アフリカツメガエルの卵母細胞において発現される場合、形
質膜には見出されない。これらのタンパク質は、膜電位の調節、腎臓における上
皮透過イオン吸着及び分泌において機能していると考えられている。これらは、
２つの推定膜貫通α螺旋スパン（ＴＭＳ）を、細胞質Ｎ−及びＣ−末端、及びグ
リコシル化されているであろう大きな管腔ループとともに有している。ウシタン
パク質は、４３７アミノアシル残基の長さであり、２つのＴＭＳを２２３〜２３
９、３６７〜３８５の位置に持っている。ヒトの核タンパク質は、非常に小さい
（２４１残基）。C. elegansの相同体は２６０残基の長さである。
【００４６】硫酸トランスポーター 本発明により提供される新規なヒトタンパク質、及びコード化しているゲノム
は、一般的な無機アニオントランスポーター、特に硫酸トランスポーターに関連
している。このファミリーのメンバーの１種であるペンドリンは、ペンドレッド
症候群として知られる遺伝的な聴力喪失に関連している。ペンドリンは硫酸トラ
ンスポーターに対して相同的であり、甲状腺に豊富に存在する。他の硫酸トラン
スポーターであるＤＴＤＳＴは、捻曲性骨異形成症に関連しており、これは硫酸
プロテオグリカンと相互作用して軟骨細胞の成長を刺激する。ＤＴＤＳＴは骨芽
細胞において発現し、軟骨内性骨の形成において不可欠な役割を果たしている。
【００４７】 多くの硫酸トランスポーターが、ショウジョウバエゲノム中で発見された。こ
のうちのいくつかは、ヒトの対応物質に対して深く関連している。ショウジョウ
バエ硫酸トランスポーターの遺伝学的解析により、これらのタンパク質の生化学
活性についての理解を深めることができるかもしれない。
【００４８】 本発明により提供された配列は、アフィニティークロマトグラフィー、及び酵
母２−ハイブリッドシステムを用いて、特異的な相互作用物質を検索するのに用
いることができる。合成ペプチド及び硫酸化合物は、これらのトランスポーター
の阻害剤として設計し、用いることができる。硫酸トランスポーターは、生物流
体中の無機硫酸塩の測定に適用することもできる。
【００４９】 現在では、尿中の硫酸塩濃度は、バリウム塩沈殿後の比濁分析によって、比較
的容易に決定することができる。しかしながら、リンパ液中の硫酸塩の測定につ
いては、確立された方法はない。本発明の硫酸トランスポーターは、固定化され
たミセルの膜中に埋め込むことができる。テストされる流体は、一定時間ミセル
に加えられることができる。流体が除去された後、硫酸塩の濃度は分離されたミ
セル中で決定されることができる。
【００５０】 硫酸トランスポーターの更なる情報については、Bissig et al., J Biol Chem
1994 Jan 28;269(4):3017-21; Coyle et al., Nat Genet 1996 Apr;12(4):421-
3; Everett et al., Nat Genet 1997 Dec;17(4):411-22; Satoh et al., J Biol
Chem 1998 May 15;273(20):12307-15; Hastbacka et al., Cell 1994 Sep 23;7
8(6):1073-87; and Cole et al., Crit Rev Clin Lab Sci 2000 Aug;37(4):299-
344を参照されたい。
【００５１】 トランスポータータンパク質、特に硫酸トランスポーターのメンバーは、薬剤
の作用、及び開発における重要なターゲットである。したがって、従来未知のト
ランスポータータンパク質を同定し、特徴付けることは、製薬開発の分野におい
て非常に有用である。本発明は、従来未確認のヒトトランスポータータンパク質
を提供することによって、これらの技術の進展に寄与するものである。
【００５２】 発明の要約 本発明は、ヒトトランスポーターペプチド及びタンパク質のアミノ酸配列の同
定に部分的に基づいているものであり、硫酸トランスポーターサブファミリー、
及びそれらの対立変異体、他の哺乳類のオルトログに関連するものである。これ
らの特異なペプチド配列、及びこのペプチドをコード化している核酸配列は、ヒ
ト治療ターゲットの開発に用いることができ、治療タンパク質の同定に有用であ
り、トランスポーターを発現している細胞及び組織におけるトランスポーターの
活性を変調するヒト治療薬剤の開発のターゲットとなり得る。図１に示す実験デ
ータは、ヒトの肺、リンパ液、腎臓、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎
児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、脾臓、及び
ヒーラー細胞での発現を示した。
【００５３】 発明の詳細な説明概論 本発明は、ヒトゲノムの配列解析に基づいている。ヒトゲノムの配列解析及び
構築に際して、配列情報を解析することによって、当該分野において、トランス
ポータータンパク質又はその一部であると同定及び特徴付けられ、硫酸トランス
ポーターサブファミリーに関連付けられるタンパク質／ペプチド／ドメインに対
して、構造及び／又は配列の相同性を有するペプチドをコード化している、ヒト
ゲノムの従来未確認のフラグメントが明らかとなった。これらの配列を用いて、
付加的なゲノム配列を構築し、転写及び／又はｃＤＮＡ配列を単離し、特徴付け
た。この解析に基づいて、本発明は、硫酸トランスポーターサブファミリーに関
連するヒトトランスポーターペプチド及びタンパク質のアミノ酸配列、これらの
トランスポーターペプチド及びタンパク質をコード化する転写形態の核酸配列、
ｃＤＮＡ配列及び／又はゲノム配列、核酸変異（対立遺伝子情報）、発現の組織
分布、及び本発明のトランスポーターに対して構造又は配列の相同性を有する、
最も関連性の高い既知のタンパク質／ペプチド／ドメインに関する情報を提供す
るものである。
【００５４】 本発明において提供されるペプチドは、従来未知であることに加えて、商業的
に重要な製品及びサービスの開発において有用であるという点に基づいて選択さ
れ得るものである。特に、本発明のペプチドは、硫酸トランスポーターサブファ
ミリーにおける既知のトランスポータータンパク質、及びその発現パターンに対
して相同性及び／又は構造上の相関性を有していることに基づいて選択される。
図１に示す実験データは、ヒトの肺、リンパ液、腎臓、心臓、白血球、甲状腺、
脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨
格筋、脾臓、及びヒーラー細胞での発現を示した。この技術は、本発明の遺伝子
と類似した発現パターンを有するこのファミリーのタンパク質及びペプチドにお
ける商業的重要性を確立するものである。本発明のペプチドのより具体的な性質
及びその使用に関しては、本明細書、特に背景技術、図面の注釈に記載され、及
び／又は既知の硫酸トランスポーターファミリー又はトランスポータータンパク
質サブファミリーのそれぞれにおいて周知である。
【００５５】
【実施例の詳細】ペプチド分子 本発明は、トランスポーターファミリーのタンパク質のメンバーであると同定
されるタンパク質分子をコード化する核酸配列を提供するものであり、これらは
硫酸トランスポーターサブファミリーに関連付けられる（図２にタンパク質配列
、図１に転写／ｃＤＮＡ配列、図３にゲノム配列を示す）。図２に示されるペプ
チド配列、同様に本明細書に記載される対立変異体、特に本明細書及び図３の情
報を用いて同定される対立変異体のような明らかな変異体は、ここでは本発明の
トランスポーターペプチド、トランスポーターペプチド、又は本発明のペプチド
／タンパク質と呼ばれる。
【００５６】 本発明は、図２に示されるトランスポーターペプチドのアミノ酸配列から成る
、あるいは実質的に成る、あるいはこれを含む単離ペプチド及びタンパク質分子
を提供する（図１に示される核酸分子である転写／ｃＤＮＡ、又は図３に示され
るゲノム配列によりコード化される）とともに、本技術により調製、使用される
これらのペプチドの明らかな変異体を提供するものである。これらの変異体につ
いては以下で詳述する。
【００５７】 ここで用いられる場合、ペプチドが細胞物質を実質的に含まない、又は化学前
駆物質あるいは他の化学物質を含まない場合に、ペプチドは「単離」又は「精製
」されたという。本発明のペプチドは、同質又は他の純度になるまで精製するこ
とができる。精製のレベルは使用目的に基づく。重要な性質としては、調製物中
に他の成分が多量に存在していたとしても、要求されるペプチドの機能を発揮で
きるということである（単離核酸分子の性質については後述する）。
【００５８】 いくつかの使用では、「実質的に細胞物質を含まない」とは、他のタンパク質
（すなわち汚染タンパク質）を約３０％（乾燥重量）未満、他のタンパク質を約
２０％未満、他のタンパク質を約１０％未満、又は、他のタンパク質を約５％未
満有するペプチド調製物を含む。ペプチドが組み換えにより製造される場合、培
地がタンパク質調製物の容量に対して２０％未満のときには、実質的に培地は存
在しないとすることもできる。
【００５９】 「実質的に化学前駆物質又は他の化学物質を含まない」という用語は、合成に
関与した化学前駆物質又は他の化学物質から分離されたペプチド調製物をいう。
ある例においては、「実質的に化学前駆物質又は他の化学物質を含まない」とは
、化学前駆物質又は他の化学物質を約３０％（乾燥重量）未満、化学前駆物質又
は他の化学物質を約２０％未満、化学前駆物質又は他の化学物質を約１０％未満
、又は、化学前駆物質又は他の化学物質を約５％未満有するトランスポーターペ
プチド調製物を含む。
【００６０】 単離トランスポーターペプチドは、自然に発現する細胞、発現のために変形さ
れた（組み換え）細胞から精製するか、又は、既知のタンパク質合成方法を用い
て合成することができる。図１に示す実験データは、ヒトの肺、リンパ液、腎臓
、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小
腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞での発現を示した。例
えば、トランスポーターペプチドをコード化している核酸分子は、発現ベクター
中にクローニングされ、さらにこの発現ベクターは宿主細胞に導入されて、タン
パク質が宿主細胞内で発現する。そして、タンパク質は標準のタンパク質精製技
術を用いた適当な精製スキームによって、細胞から単離することができる。これ
ら多くの技術については、以下で詳述する。
【００６１】 したがって、本発明は、図２に示されるアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２
）から成るタンパク質、例えば、図１に示される転写／ｃＤＮＡ核酸配列（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ．１）、及び図３に示されるゲノム配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３）
によりコード化されるタンパク質を提供するものである。このようなタンパク質
のアミノ酸配列を図２に示す。このアミノ酸配列がタンパク質の最終的なアミノ
酸配列であるとき、タンパク質はアミノ酸配列から成る。
【００６２】 本発明はさらに、図２に示されるアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２）から
実質的に成るタンパク質、例えば、図１に示される転写／ｃＤＮＡ核酸配列（Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ．１）、及び図３に示されるゲノム配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３
）によりコード化されるタンパク質を提供するものである。このようなアミノ酸
配列に微量の付加アミノ酸残基、例えば、最終的にタンパク質中に約１〜１００
程度の付加残基、典型的には１〜２０の付加残基が存在する場合、タンパク質は
アミノ酸配列から実質的に成る。
【００６３】 本発明はさらに、図２に示されるアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２）を含
むタンパク質、例えば図１に示される転写／ｃＤＮＡ核酸配列（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ．１）、及び図３に示されるゲノム配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３）によりコー
ド化されるタンパク質を提供するものである。このアミノ酸配列が、タンパク質
の最終的なアミノ酸配列の少なくとも一部である場合、タンパク質はアミノ酸配
列を含む。このような場合、タンパク質はペプチドのみであるか、又はタンパク
質と自然に結びついているアミノ酸残基、あるいはアミノ酸残基／ペプチド配列
に非相同のアミノ酸残基のような、付加的なアミノ酸分子（コード化された配列
と隣接する）を有することができる。このようなタンパク質は、少量の付加的ア
ミノ酸残基を有するか、又は数百あるいはそれ以上の付加的アミノ酸を含むこと
ができる。本発明のトランスポーターペプチドが含まれるタンパク質の好適な種
として、天然の成熟タンパク質がある。これらの各種タンパク質を調製／単離す
る方法については、以下に簡単に述べる。
【００６４】 本発明のトランスポーターペプチドは、キメラ又は融合タンパク質を形成する
ために、非相同性の配列に結合することができる。このようなキメラ及び融合タ
ンパク質は、トランスポーターペプチドに対して実質的に相同性のないアミノ酸
配列を有する非相同タンパク質に、有効に結合されるトランスポーターペプチド
を含む。「有効に結合される」とは、トランスポーターペプチドと非相同タンパ
ク質がフレーム中で融合していることを示す。非相同タンパク質は、トランスポ
ーターペプチドのＮ末端又はＣ末端に融合されることができる。
【００６５】 いくつかの使用では、融合タンパク質は、トランスポーターペプチド自体の活
性に影響を及ぼさない。融合タンパク質には、例えば、βガラクトシダーゼ融合
、イースト２−ハイブリッドＧＡＬ融合、ポリＨｉｓ融合、ＭＹＣ標識、ＨＩ標
識及びＩｇ融合といった酵素融合タンパク質が含まれるが、これに限られるもの
ではない。このような融合タンパク質、特にポリＨｉｓ融合は、組み換えトラン
スポーターペプチドの精製に有用である。ある種の宿主細胞（例えば哺乳類の宿
主細胞）においては、タンパク質の発現及び／又は分泌は、非相同信号配列を用
いることにより増加させることができる。
【００６６】 キメラ又は融合タンパク質は、標準の組み換えＤＮＡ技術により製造すること
ができる。例えば、異なるタンパク質配列をコードしているＤＮＡフラグメント
は、従来技術に従ってフレーム中に共に配置される。他の例では、融合遺伝子は
、自動ＤＮＡ合成機を含む従来技術により合成することが可能である。あるいは
、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅にアンカープライマーを用い、２つの連続的
な遺伝子フラグメント間に相補的な突出部を形成し、その後、アニールすること
により、キメラ遺伝子配列を再増幅することができる（Ausubel et al., Curren
t Protocols in Molecular Biology, 1992参照）。さらに、発現ベクターとして
は、既に融合部分（例えばＧＳＴタンパク質）をコード化した多くのものを、商
業的に入手することができる。トランスポーターペプチドをコード化した核酸は
、融合部がフレーム中でトランスポーターペプチドに結合するようにして、この
ような発現ベクター中にクローニングされることができる。
【００６７】 以上説明したように、本発明はまた、天然のペプチド成熟形態、ペプチドの対
立遺伝子／配列変異体、非天然の組換え誘導変異体、ペプチドのオルトログ及び
パラログなど、本発明のタンパク質のアミノ酸配列における明らかな変異体を提
供、及び実施可能にするものである。このような変異体は、核酸組み換え技術や
タンパク質生化学の分野で公知の技術を用いることにより、容易に生成すること
ができる。しかしながら、この変異体には、本発明以前に公開されている何れの
アミノ酸配列も含まれないものであると理解される。
【００６８】 このような変異体は、ここに示される分子技術や配列情報を用いることにより
、容易に同定／製造することが可能である。さらに、このような変異体は、本発
明のトランスポーターペプチドに対する配列及び／又は構造上の相同性に基づい
て、他のペプチドと容易に区別することができる。相同性／同一性の程度は、主
に、ペプチドが機能的変異体であるか又は非機能的変異体であるか、パラログフ
ァミリー中に存在する分化量、オルトログ間の進化的相違に基づいている。
【００６９】 ２つのアミノ酸配列、又は２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するため
に、最適な比較を行う目的で、配列はアラインされる（例えば、最適なアライン
メントのために、ギャップが第一及び第二アミノ酸又は核酸配列の一方又は両方
に導入されることができ、非相同性配列は比較を行うために無視することができ
る）。好適な例としては、対象配列の長さの少なくとも３０％、４０％、５０％
、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれ以上が、比較目的に応じてアライン
される。そして、対応するアミノ酸配置又はヌクレオチド配置上の、アミノ酸残
基又はヌクレオチドが比較される。第一配列での配置が、第二配列において対応
する配置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占められているとき、分
子はその配置上で同一である（ここで用いられているアミノ酸又は核酸の「同一
性」は、アミノ酸又は核酸の「相同性」と同意義である）。２つの配列間の同一
性パーセントは、配列において共有される同一配置数の関数であり、ギャップ数
及び各ギャップ長さを考慮し、２つの配列の最適なアラインメントのために導入
される必要がある。
【００７０】 配列の比較、及び２つの配列間における同一性、類似性パーセントの決定は、
数学的アルゴリズムを用いて行うことができる（Computational Molecular Biol
ogy, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomput
ing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press,
New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A.M
., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Ana
lysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; and Se
quence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton
Press, New York, 1991）。好適な例としては、２つのアミノ酸配列間の同一性
パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（http://www.gcg.comで入手可能
）のＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ・Ｗｕｎｓｃｈアルゴ
リズム（J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970)）を用い、Ｂｌｏｓｓｏｍ６２マ
トリックス、又はＰＡＭ２５０マトリックス、及びギャップ重量１６、１４、１
２、１０、８、６、４、長さ重量１、２、３、４、５、６を用いて決定される。
他の好適な例としては、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣ
Ｇソフトウェアパッケージ（http://www.gcg.comで入手可能）のＧＡＰプログラ
ム（Devereux, J., et al., Nucleic Acids Res. 12(1)：387（1984））を用い
、ＮＷＳｇａｐｄｎａ.ＣＭＰマトリックス、ギャップ重量４０、５０、６０、
７０、８０、長さ重量１、２、３、４、５、６を用いて決定される。さらに他の
一例としては、２つのアミノ酸又はヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、
ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．Ｍｙｅｒｓ・Ｗ
. Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム(CABIOS, 4:11-17 (1989))を用い、ＰＡＭ１２０
重量残基表、ギャップ長ペナルティ１２、ギャップペナルティ４を用いて決定さ
れる。
【００７１】 本発明の核酸及びタンパク質配列は、例えば他のファミリー又は関連した配列
を発見するために、配列データベースに対して検索を行う「クエリー配列」とし
て用いられることができる。このような検索は、ＡｌｔｓｃｈｕｌらのＮＢＬＡ
ＳＴ、及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）(J. Mol. Biol. 215:4
03-１０ (1990)) を用いて行うことができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、
本発明の核酸分子に相同性のあるヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴ
プログラムを用い、ｓｃｏｒｅ＝１００、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝１２で行うこ
とができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明のタンパク質に相同性のある
アミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラムを用い、ｓｃｏｒｅ＝５０
、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３で行うことができる。比較目的のギャップアライン
メントを得るために、ＡｌｔｓｃｈｕｌらのＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ(Nucleic
Acids Res. 25(17):3389-3402 (1997))を用いることができる。ＢＬＡＳＴ及び
ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴプログラムを用いる際には、各プログラム（例えば、Ｘ
ＢＬＡＳＴやＮＢＬＡＳＴ）の既定のパラメータを用いることができる。
【００７２】 本発明のペプチドのうちの一つを含むタンパク質において、プロセシングを受
ける前の全長形態と同様に、成熟プロセス形態は、本発明のトランスポーターペ
プチドのうちの１つに対して完全な配列同一性を有していることはもちろん、本
発明のトランスポーターペプチドと同じ遺伝子位置によりコード化されているも
のとして、容易に同定することができる。本発明の新規なトランスポータータン
パク質をコード化している遺伝子は、（図３に示されているように）ヒト染色体
４上にマップされているゲノム成分に位置し、このことはＳＴＳ及びＢＡＣマッ
プデータのような、多くの証拠によって支持されている。
【００７３】 トランスポーターペプチドの対立遺伝子変異体は、トランスポーターペプチド
の少なくとも一部に対して高度の（著しい）配列相同性／同一性を有するヒトタ
ンパク質であることはもちろん、同様に本発明のトランスポーターペプチドと同
じ遺伝子位置においてコード化されているものとして、容易に同定することがで
きる。遺伝子位置は、対象となるヒトに対してマッピングされたゲノム配列のよ
うな、図３に示されるゲノム情報に基づいて容易に決定することができる。本発
明の新規なトランスポータータンパク質をコード化している遺伝子は、（図３に
示されているように）ヒト染色体４上にマップされているゲノム成分に位置し、
このことはＳＴＳ及びＢＡＣマップデータのような、多くの証拠によって支持さ
れている。ここで用いられる場合、アミノ酸配列において、典型的には少なくと
も約７０〜８０％、８０〜９０％、さらに典型的には少なくとも約９０〜９５％
、又はそれ以上の相同性を有する場合には、２つのタンパク質（又はタンパク質
の一領域）は著しい相同性を有している。本発明によれば、著しい相同性を有す
るアミノ酸配列は、より詳細には以下に述べられるようなストリンジェントな条
件の下で、トランスポーターペプチドをコード化する核酸分子とハイブリダイズ
する核酸配列によりコード化される。
【００７４】 図３には、本発明のトランスポータータンパク質をコード化している遺伝子に
おいて見出された、多形性／対立変異体情報を示す。具体的には、Ｃ１３６３Ｇ
のＳＮＰ、及びタンパク質位置６９９におけるＶ／Ａのアミノ酸多形が確認され
た。
【００７５】 トランスポーターペプチドのパラログは、トランスポーターペプチドの少なく
とも一部に対して、ある程度の著しい配列相同性／同一性を有し、ヒトの遺伝子
によってコード化され、また同様の活性又は機能を有しているものとして、容易
に同定することができる。アミノ酸配列が、与えられた領域又はドメインを通じ
て、典型的には少なくとも約６０％以上、さらに典型的には約７０％以上の相同
性を有する場合、２つのタンパク質は典型的なパラログであると考えられる。こ
のようなパラログは、より詳細には以下に述べられるような、モデレートからス
トリンジェントな条件の下で、トランスポーターペプチドをコード化する核酸分
子とハイブリダイズする核酸配列によりコード化される。
【００７６】 トランスポーターペプチドのオルトログは、トランスポーターペプチドの少な
くとも一部に対してある程度の著しい配列相同性／同一性を有し、他の生体の遺
伝子によってコード化されているものとして、容易に同定することができる。オ
ルトログは、好適には、哺乳類、さらに好適には霊長類から単離され、ヒトの治
療ターゲット及び治療薬剤の開発のために用いられる。このようなオルトログは
、より詳細には以下に述べられるような、モデレートからストリンジェントな条
件の下で、トランスポーターペプチドをコード化する核酸分子とハイブリダイズ
するような核酸配列によりコード化され、これはタンパク質を生成する２つの生
体の関連性に依存している。
【００７７】 本発明のトランスポーターペプチドの非天然の変異体は、組み換え技術を用い
て容易に生成することができる。このような変異体には、トランスポーターペプ
チドのアミノ酸配列中における欠失、付加、置換によるものが含まれるが、これ
に限定されるものではない。例えば、置換の１種として、保存的アミノ酸置換が
挙げられる。この置換は、トランスポーターペプチドにおける特定のアミノ酸が
、同様の特徴をもつ他のアミノ酸によって置換されるものである。保存的置換に
おいては、脂肪族のアミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅの中の一つが他の
一つに置換、ヒドロキシル残基ＳｅｒとＴｈｒとの交換、酸性残基ＡｓｐとＧｌ
ｕとの交換、アミド残基ＡｓｎとＧｌｎ間の置換、塩基性残基ＬｙｓとＡｒｇと
の交換、芳香族残基ＰｈｅとＴｙｌとの置換がある。表現型に現れないアミノ酸
置換に関する指針については、Bowie et al., Science 247:1306-1310 (1990)に
述べられている。
【００７８】 変異トランスポーターペプチドは、完全に機能しているか、又は、例えばリガ
ンド結合能、リガンド輸送能、信号伝達媒介能等のような活性の一つ以上におい
て機能が欠落していることがある。完全機能的な変異体には、典型的には、保存
的な変異、又は致命的でない残基あるいは領域内での変異体のみが含まれる。図
２には、タンパク質解析の結果が示されており、致命的なドメイン／領域を特定
するのに使用することができる。機能性変異体には、機能が変化しない、又は著
しい機能変化の無い類似アミノ酸の置換も含まれる。他方、このような置換は、
機能に対してある程度プラス又はマイナスの影響を及ぼすことがある。
【００７９】 非機能性変異体には、典型的には、一つ以上の非保存的なアミノ酸の置換、欠
失、導入、反転、切断、又は致命的な残基あるいは領域での置換、欠失、導入、
反転が含まれる。
【００８０】 機能において必須のアミノ酸は、例えば、特定部位の突然変異誘発、又はアラ
ニンスキャニング突然変異誘発(Cunningham et al., Science 244:1081-1085 (1
989))等の当該分野において既知の方法により、特に図２に示す結果を用いて確
認することができる。後者の手順では、分子内の全ての残基において、単独のア
ラニン突然変異を導入する。この結果生じた変異体分子は、その後、トランスポ
ーター活性のような生物活性、又はin vitro増殖活性分析のようなアッセイのた
めに試験される。結合対象／基質結合にとって重要な部位は、結晶化、核磁気共
鳴、光学親和性ラベル等の構造解析によって決定される（Smith et al., J. Mol
. Biol. 224:899-904 (1992); de Vos et al. Science 255:306-312(1992)）。
【００８１】 本発明はトランスポーターペプチドのフラグメントを提供し、さらにこれに加
えて、該フラグメント、特に図２に特定された残基を含むフラグメントを含む、
及びから成るタンパク質及びペプチドを提供するものである。しかしながら、本
発明に関連するフラグメントは、本発明より以前に公開されているフラグメント
を含むものとは見なされない。
【００８２】 フラグメントは、ここで用いられる場合、トランスポーターペプチドに隣接す
るアミノ酸残基を、少なくとも８、１０、１２、１４、１６又はそれ以上含んで
いる。このようなフラグメントは、１以上のトランスポーターペプチドの生物活
性を保持する能力によって選択されるか、あるいは例えば、基質との結合又は抗
原としての作用等の機能を果たす能力によって選択され得る。特に重要なフラグ
メントは生物活性フラグメントであり、これは例えば、８又はそれ以上のアミノ
酸のペプチドである。このようなフラグメントは、典型的には、例えば活性部位
、膜貫通ドメイン、又は基質結合ドメインのような、トランスポーターペプチド
のドメイン又はモチーフを含んでいる。さらに、可能なフラグメントとしては、
ドメイン又はモチーフ含有フラグメント、溶解性ペプチドフラグメント、抗原性
構造含有フラグメントを含むが、これに限定されるものではない。予想されるド
メイン及び機能性部位は、当業者にとって容易に入手可能な公知のコンピュータ
プログラム（例えばＰＲＯＳＩＴＥ分析）により、容易に確認することができる
。このような分析結果の１つを図２に示す。
【００８３】 ポリペプチドは、一般に２０天然アミノ酸と呼ばれている２０種のアミノ酸以
外のアミノ酸をしばしば含むことがある。さらに、末端アミノ酸を含む多くのア
ミノ酸は、プロセシング及び翻訳後修飾等の自然の過程、又は当該分野において
公知の化学修飾技術によって修飾され得る。トランスポーターペプチドにおいて
自然に生じる一般的な修飾については、基本的なテキスト、詳細な研究論文及び
文献に記述されており、これは当業者においては周知である（これらの特性のい
くつかは図２において確認される）。
【００８４】 既知の修飾としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、
フラビンの共有結合付加、ヘム部分の共有結合付加、ヌクレオチド又はヌクレオ
チド誘導体の共有結合付加、脂質又は脂質誘導体の共有結合付加、ホスファチジ
ルイノシトールの共有結合付加、架橋結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メ
チル化、共有結合架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸塩の形成、ホ
ルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキ
シル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセシ
ング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化
などのタンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化を含むが、
修飾はこれに限定されるものではない。
【００８５】 このような修飾は当業者には周知であり、科学文献において非常に詳細に記述
されてきた。グリコシル化、脂質付加、硫酸化、グルタミン酸残基のγ−カルボ
キシル化、ヒドロキシル化、ＡＤＰリボシル化など、特に一般的な修飾は、Prot
eins - Structure and Molecular Properties, 2nd Ed., T.E. Creighton, W. H
. Freeman and Company, New York (1993)のような、殆どの基本テキストにおい
て記述されている。この点に関する詳細な文献としては、Wold, F., Posttransl
ational Covalent Modification of Proteins, B.C. Johnson, Ed., Academic P
ress, New York 1-12 (1983); Seifter et al. (Meth. Enzymol. 182: 626-646
(1990)) and Rattan et al. (Ann. N.Y. Acad. Sci. 663:48-62 (1992) のよう
な多くの文献を利用することができる。
【００８６】 したがって、本発明のトランスポーターペプチドは、置換されたアミノ酸残基
が遺伝子コードによってコード化されていない、置換基が含まれている、成熟ト
ランスポーターペプチドが、例えばトランスポーターペプチドの半減期を長くす
る化合物のような他の化合物（例えば、ポリエチレングリコール）と融合してい
るか、又は付加アミノ酸が、例えば成熟トランスポーターペプチドの主、副配列
、又は精製配列、あるいは前タンパク質配列のような、成熟トランスポーターペ
プチドと融合しているといった、誘導体又は類似体をも包含するものである。
【００８７】タンパク質／ペプチドの使用 本発明のタンパク質は、図面及び背景技術に示される機能情報に関連した、実
質的及び特異的なアッセイにおいて、例えば、抗体を高める、又は他の免疫反応
を誘発させるため、生物液中でのタンパク質（又はその結合対象、又はリガンド
）レベルの定量のためのアッセイに用いる試薬（ラベル化試薬を含む）として、
あるいは、対応するタンパク質を選択的に発現する組織のマーカー（組織の分化
又は発達のある特定段階、あるいは疾患の状態）として使用することができる。
タンパク質が、他のタンパク質と結合しているか又は結合し得る場合（例えば、
トランスポーター−効果器タンパク質相互作用、トランスポーター−リガンド間
相互作用）、このタンパク質を用いて結合相手を同定し、結合相互作用の阻害剤
を同定するシステムを開発することができる。これらの一部又は全てを使用する
ことにより、試薬グレード、又は商業製品としてのキットフォーマットへの開発
が可能となる。
【００８８】 上に列記した使用を実際に行う方法は、当業者にとって周知のことである。こ
のような方法を開示している参考文献としては、“Molecular Cloning: A Labor
atory Manual”2d ed、Cold Spring Harbor Laboratory Press, Sambrook, J.,
E. F. Fritsch and T. Maniatis eds., (1989) “Methods in Enzymology: Guid
e to Molecular Cloning Techniques”、Academic Press, Berger, S. L. and A
. R. Kimmel eds., (1987)がある。
【００８９】 本発明のペプチドの潜在的な用途は、主にタンパク質の起源に基づいており、
同様にタンパク質の分類／作用に基づいている。例えば、ヒトから単離したトラ
ンスポーター、及びそれらのヒト／哺乳類オルトログは、哺乳類の治療用医薬、
例えば、ヒト用の医薬、特に、トランスポーターを発現する細胞又は組織中での
生物反応又は病理学的反応の変調に用いられる医薬を発見するためのターゲット
として有用である。図１に示す実験データでは、本発明のトランスポータータン
パク質が、ヒトの心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、
睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、肺、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞で
発現することが、ＰＣＲベース組織スクリーニングパネルにより示された。さら
に、仮想ノーザンブロットでは、肺、リンパ液、腎臓での発現を示した。医薬製
剤のうちの多くの割合のものが、トランスポータータンパク質、特に硫酸トラン
スポーターサブファミリーメンバーの活性を変調するものとして開発されている
（背景技術参照）。背景技術及び図面に記載されている構造情報及び機能情報、
特に図１の発現情報と組み合わせることによって、本発明の分子の特異的及び本
質的な使用が提供される。図１に示す実験データは、ヒトの肺、リンパ液、腎臓
、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小
腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞での発現を示した。こ
のような使用は、ここに示されている情報と、当業者において既知の情報、及び
ルーチン実験を用いて、容易に決定することができる。
【００９０】 本発明のタンパク質（本発明以前に開示されている変異体及びフラグメントを
含む）は、硫酸トランスポーターサブファミリーに関連付けられるトランスポー
ターに関連する生物学的アッセイに有用である。このようなアッセイは、特にこ
のトランスポーターを発現する細胞及び組織において、本発明の一つが属するト
ランスポーターサブファミリーに特異的なトランスポーター関連症状の診断及び
治療に有用な、公知のトランスポーターの機能、活性、あるいは性質の何れかに
関係している。図１に示す実験データでは、本発明のトランスポータータンパク
質が、ヒトの心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸
、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、肺、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞で発現
することが、ＰＣＲベース組織スクリーニングパネルにより示された。さらに、
仮想ノーザンブロットでは、肺、リンパ液、腎臓での発現を示した。本発明のタ
ンパク質は、細胞系、又は無細胞系における薬剤スクリーニングアッセイにおい
ても有用である(Hodgson, Bio/technology, 1992, Sept 10(9);973-80)。細胞系
では、天然型、すなわちトランスポーターを正常に発現する細胞であり、生体組
織検査、又は細胞培地中で増殖することができる。図１に示す実験データは、ヒ
トの肺、リンパ液、腎臓、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）
、副腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細
胞での発現を示した。他の例では、細胞系アッセイは、トランスポータータンパ
ク質を発現する組み換え宿主細胞に関係している。
【００９１】 ポリペプチドは、自然状態又は変異型でトランスポーターに関連する特定の疾
患又は症状を引き起こすタンパク質のトランスポーター活性を変調する化合物を
同定するために用いることができる。本発明のトランスポーターと、適切な変異
体及びフラグメントの両者は、トランスポーターへの結合能力を持つ候補化合物
をアッセイするための高効率スクリーンにおいて使用することができる。これら
の化合物は、さらにこれらのトランスポーター活性に対する影響を判定するため
に、機能性トランスポーターに対してスクリーニングを行うことができる。さら
にこれらの化合物は、動物又は無脊椎動物系における、活性／効果を判定するた
めに試験することができる。化合物は、トランスポーターを望ましい程度までに
活性化（アゴニスト）又は不活性化（アンタゴニスト）するかどうか判定される
。
【００９２】 さらに、本発明のタンパク質は、トランスポータータンパク質と、トランスポ
ータータンパク質と通常相互作用する分子、例えば、トランスポータータンパク
質が通常相互作用する信号経路の基質又は構成成分との間での相互作用を促進又
は阻害する能力を持つ化合物（例えば、他のトランスポーター）をスクリーニン
グするのに用いることができる。このようなアッセイでは、一般的には、トラン
スポータータンパク質又はフラグメントが、ターゲット分子と相互作用し、タン
パク質とターゲットとの複合物を検出するか、又は膜電位の変化、タンパク質の
リン酸化、ｃＡＭＰ代謝回転、アデニル酸シクラーゼ活性化などの信号伝達に関
連した効果のような、トランスポータータンパク質とターゲットとの間の相互作
用の生化学的結果を検出することのできる条件で、トランスポータータンパク質
と候補化合物とが結合される工程が含まれる。
【００９３】 候補化合物としては、例えば、１）最後部がＩｇの融合ペプチド、及びランダ
ムペプチドライブラリを含む可溶性ペプチド（例えば、Lam et al., Nature 354
:82-84 (1991); Houghten et al., Nature 354:84-86 (1991)参照）、及びＤ−
及び／又はＬ−型アミノ酸からできている組み合わせ化学誘導分子ライブラリを
含むペプチド、２）ホスホペプチド（例えば、ランダム、又は部分的に変質した
ホスホペプチドライブラリ。例えば、Songyang et al., Cell 72:767-778 (1993
)参照）、３）抗体（例えば、ポリクローン抗体、モノクローン抗体、ヒト化抗
体、抗イディオタイプ抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆ(ａｂ’)２、Ｆａｂ発現ラ
イブラリフラグメントを含む単鎖抗体、及び抗体のエピトープ結合フラグメント
）、４）小さな有機及び無機分子（例えば、組み合わせ及び天然生成物ライブラ
リから得られる分子）が含まれる。
【００９４】 ある候補化合物は、リガンド結合と競合する受容体の可溶性フラグメントであ
る。他の候補化合物には、変異トランスポーター、又はトランスポーター機能に
影響を及ぼす変異体を含む適切なフラグメントがあり、このためにリガンドとの
競合が起こる。したがって、例えば、高い親和性を有するか、又はフラグメント
がリガンドと結合し解離しないような、リガンドと競合するフラグメントが本発
明に含まれる。
【００９５】 本発明はさらに、トランスポーター活性を変調（促進又は阻害）する化合物を
同定するための、他のエンドポイントアッセイを含む。このアッセイは、一般的
に、トランスポーター活性を示す信号伝達経路における挙動のアッセイに関連し
ている。このため、リガンドの輸送、細胞膜電位の変化、タンパク質の活性化、
トランスポータータンパク質に依存して信号カスケードに対する応答が上方又は
下方調節される遺伝子発現の変化についてのアッセイを行うことができる。
【００９６】 トランスポーターにより媒介される、生物学的又は生化学的な機能は、何れも
エンドポイントアッセイとして用いることができる。これらは、ここに記載され
ている全ての生化学的又は生化学的／生物学的挙動を含み、ここに引用される文
献にはこれらのエンドポイントアッセイのターゲットが折り込まれており、また
、他の機能については、当業者において公知であるか、又は図面、特に図２の情
報を用いて、容易に確認することができる。特に、トランスポーターを発現する
細胞又は組織の生物学的機能についてのアッセイを行うことができる。図１に示
す実験データでは、本発明のトランスポータータンパク質が、ヒトの心臓、白血
球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝
臓、肺、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞で発現することが、ＰＣＲベー
ス組織スクリーニングパネルにより示された。さらに、仮想ノーザンブロットで
は、肺、リンパ液、腎臓での発現を示した。
【００９７】 結合及び／又は活性化化合物は、キメラトランスポータータンパク質を用いる
ことによりスクリーニングを行うこともでき、アミノ末端細胞外ドメイン又はそ
の一部、あるいは、７つの膜貫通セグメントの何れか又は細胞内又は細胞外ルー
プの何れか、及びカルボキシ末端細胞内ドメインのような膜貫通ドメイン全体あ
るいはサブリジョン又はその一部は、異種ドメイン又はサブリジョンにより置換
され得る。例えば、リガンド結合領域は、異なるリガンドと相互作用するものと
して用いられることができ、この場合、天然のトランスポーターによって認識さ
れる。したがって、異なる一組の信号伝達成分を、活性化のエンドポイントアッ
セイとして利用することができる。これにより、トランスポーターの由来する特
定の宿主細胞以外のものにおいてアッセイを行うことが可能となる。
【００９８】 本発明のタンパク質はまた、トランスポーターと相互作用する化合物（例えば
、結合相手及び／又はリガンド）を発見するため設計される方法である競争結合
アッセイにも有用である。このために、化合物がポリペプチドと結合又は相互作
用できる条件下で、化合物をトランスポーターポリペプチドと接触させる。可溶
性トランスポーターポリペプチドもまた混合物中に加えられる。テスト化合物が
可溶性トランスポーターポリペプチドと相互作用する場合、トランスポータータ
ーゲットから形成される複合体の量、又は活性は減少する。このタイプのアッセ
イは、特にトランスポーターの特定領域と相互作用する化合物を模索する場合に
有用である。このため、ターゲットとなるトランスポーター領域と競合する可溶
性ポリペプチドは、対象となる領域に対応したペプチド配列を含むように設計さ
れている。
【００９９】 無細胞系薬剤のスクリーニングアッセイを行うためには、タンパク質の一方又
は両方の非複合化形態からの複合化形態の分離を効率化し、アッセイを自動化す
るために、トランスポータータンパク質又はフラグメント、そのターゲット分子
の何れかを固定化するのが望ましい場合がある。
【０１００】 薬剤スクリーニングアッセイにおいては、マトリックスにタンパク質を固定化
する技術を使用することができる。ある例では、タンパク質にマトリックスに結
合することのできるドメインを付加した融合タンパク質を得ることができる。例
えば、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ融合タンパク質は、グルタチオンセ
ファローズビーズ（Sigma Chemical, St． Louis， MO）又はグルタチオン誘導
マイクロタイタープレート上に吸着され、細胞溶解物（例えば、３５Ｓ−ｌａｂ
ｅｌｅｄ）と候補化合物とが結合され、複合体形成条件（例えば、塩及びｐＨの
生理学的条件）の下で混合物がインキュベートされる。インキュベートの後、非
結合ラベルの除去のためにビーズは洗浄され、マトリックスを固定化して、放射
性ラベルを直接、又は複合体を分離した後の上澄みを測定することにより定量さ
れる。あるいは、複合体はＳＤＳ−ＰＡＧＥによりマトリックスから分離するこ
とができ、標準の電気泳動技術を用いることによって、ゲルからビーズフラクシ
ョン中のトランスポーター結合タンパク質のレベルを定量することができる。例
えば、ポリペプチド又はそのターゲット分子のどちらかが、当業者に周知の技術
を利用して、ビオチン及びストレプトアビジンの結合を用いて固定化される。あ
るいは、タンパク質と反応し、タンパク質とターゲット分子との結合を妨げない
抗体は、プレートのウェルに誘導化され、このタンパク質は抗体との結合により
そのウェルの中に捕らえられる。トランスポーター結合タンパク質の組成物と候
補化合物は、トランスポータータンパク質存在ウェル中でインキュベートされ、
ウェルに捕らえられた複合体の量を測定する。このような複合体を検出する方法
としては、ＧＳＴ固定複合体による前述の方法に加えて、トランスポータータン
パク質ターゲット分子に反応性のある抗体、又は、トランスポータータンパク質
に反応性がありターゲット分子と競合する抗体を用いた複合体の免疫検出法、及
びターゲット分子と関連する酵素活性の検出に基づく酵素結合アッセイが含まれ
る。
【０１０１】 本発明のトランスポーターのうちの１つを変調する薬剤は、上述の分析方法を
単独あるいは組み合わせて用いることにより同定することができる。一般的には
、最初と最後に細胞系又は無細胞系のシステムを用いて、動物又は他のモデルシ
ステムにおける活性を確認することが好ましい。このようなモデルシステムは、
当業者に周知であり、本記載において容易に用いることができる。
【０１０２】 これらの薬剤スクリーニングアッセイによって同定されるトランスポータータ
ンパク質活性のモジュレータは、トランスポーターを発現する細胞又は組織に処
置することにより、トランスポーター経路により媒介される疾患を患う患者の治
療に用いることができる。図１に示す実験データは、ヒトの肺、リンパ液、腎臓
、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小
腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞での発現を示した。こ
れらの治療方法には、薬剤組成物中のトランスポーター活性のモジュレータを患
者の治療に必要な量投与する工程が含まれており、このモジュレータはここに記
載されるようにして同定される。
【０１０３】 本発明の他の観点では、トランスポーターと結合又は相互作用する、又はトラ
ンスポーター活性に関連している他のタンパク質を同定するために、２−ハイブ
リッドアッセイ又は３−ハイブリッドアッセイ（U.S. Patent No. 5,283,317; Z
ervos et al. (1993) Cell 72:223-232; Madura et al. (1993) J. Biol. Chem.
268:12046-12054; Bartel et al. (1993) Biotechniques 14:920-924; Iwabuc
hi et al. (1993) Oncogene 8:1693-1696; and Brent WO94/10300参照）におい
て、トランスポータータンパク質を「ｂａｉｔタンパク質」として使用すること
ができる。このようなトランスポーター結合タンパク質は、例えば、下流因子と
してのトランスポータータンパク質、又はトランスポーターターゲットによる信
号伝達に関与している。あるいは、このようなトランスポーター結合タンパク質
は、トランスポーター阻害剤であることがある。
【０１０４】 ２−ハイブリッドシステムは、分離可能なＤＮＡ結合ドメイン及び活性化ドメ
インから成る、大部分の転写調節因子のモジュラー性に基づいている。簡単に言
うと、このアッセイでは２つの異なるＤＮＡ構造を利用する。一方の構造におい
ては、トランスポータータンパク質をコードしている遺伝子は、既知の転写調節
因子（例えばＧＡＬ−４）のＤＮＡ結合ドメインをコード化している遺伝子に融
合される。他方の構造においては、ＤＮＡ配列ライブラリから得られ、未確認の
タンパク質（「ｐｒｅｙ」又は「ｓａｍｐｌｅ」）をコード化しているＤＮＡ配
列が、既知の転写調節因子の活性化ドメインをコード化している遺伝子に融合さ
れる。「ｂａｉｔタンパク質」及び「ｐｒｅｙタンパク質」が生体内で相互作用
することができ、トランスポーター依存複合体を形成する場合、転写調節因子の
ＤＮＡ結合ドメイン及び活性化ドメインは近接する。この近接により、転写調節
因子に反応する転写調節部位に結合可能なリポーター遺伝子（例えばＬａｃＺ）
の転写を行うことができる。リポーター遺伝子の発現は検出することが可能であ
り、機能的転写調節因子を含んでいる細胞コロニーを単離及び使用して、トラン
スポータータンパク質と相互作用するタンパク質をコード化するクローン遺伝子
を得ることができる。
【０１０５】 本発明はさらに、前述のスクリーニングアッセイによって同定される新規な薬
剤に関する。したがって、ここに記載されるようにして同定された薬剤を適当な
動物のモデルに使用することも本発明の範囲内である。例えば、本発明で同定さ
れた薬剤（例えばトランスポーター変調薬剤、アンチセンストランスポーター核
酸分子、トランスポーター特異抗体、又はトランスポーター結合対象）は、これ
らの薬剤の処方における有効性、毒性、副作用を判定するために、動物、又は他
のモデルで用いることができる。あるいは、本発明で同定された薬剤は、このよ
うな薬剤の作用のメカニズムを決定するために、動物又は昆虫のモデルで使われ
ることができる。さらに、本発明は、ここに記載される治療のためのスクリーニ
ングアッセイにより同定された新規な薬剤の使用に関する。
【０１０６】 本発明のトランスポータータンパク質は、ペプチドにより媒介される疾患又は
疾患素質の診断のためのターゲットを提供するのに有用である。したがって、本
発明は、細胞、組織、又は生体中におけるタンパク質（又はコード化したｍＲＮ
Ａ）の存在、あるいはそのレベルを検出する方法を提供するものである。図１に
示す実験データは、ヒトの肺、リンパ液、腎臓、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂
体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、
脾臓、及びヒーラー細胞での発現を示した。この方法は、生物サンプルと、トラ
ンスポータータンパク質との相互作用能力を有する化合物との接触に関係してお
り、ここでは相互作用について検出することができる。このようなアッセイは、
単検出形態、又は抗体チップアレイのような多検出形態で与えられる。
【０１０７】 サンプル中のタンパク質を検出する１つの薬剤は、タンパク質に選択的に結合
することのできる抗体である。生物サンプルには、被験者から単離されるか、又
は被験者の内部に存在する組織、細胞、生物液体が含まれる。
【０１０８】 本発明のペプチドは、ペプチド変異体を持つ患者のタンパク質の活性、疾患又
は疾患素質の診断に用いるためのターゲット、特に現存するタンパク質ファミリ
ー以外のものとして知られる活性、及び症状のターゲットを提供するものである
。したがって、ペプチドは生物学的サンプルから単離されることができ、また、
異常ペプチドを生じる遺伝子突然変異の存在についてアッセイを行うことができ
る。これは、アミノ酸置換、欠失、挿入、再配置（異常なスプライシング挙動の
結果生じる）、及び不適当な翻訳後の修飾を含む。分析方法としては、変容電気
泳動移動度、変容トリプシンペプチド消化、細胞系又は無細胞系アッセイによる
変容トランスポーター活性、リガンド又は抗体の変容結合パターン、変容等電点
、直接アミノ酸配列、及びタンパク質の変異の検出に有用な他の公知のアッセイ
技術を含む。このようなアッセイは、単検出形態、又は抗体チップアレイのよう
な多検出形態で与えられる。
【０１０９】 ペプチドのIn vitro検出技術としては、酵素結合免疫吸着剤アッセイ（ＥＬＩ
ＳＡｓ）、ウェスタンブロット、抗体、又はタンパク質結合剤のような検出試薬
を用いた免疫沈降、免疫蛍光検査法を含む。あるいは、ラベルされた抗ペプチド
抗体、又は他のタイプの検出試薬を被験者に導入することにより、被験者のin v
ivo検出を行うことができる。例えば、被験者中のこのマーカーの存在及び位置
を標準のイメージング技術によって検出することができる放射性マーカーを、抗
体にラベルすることができる。被験者において発現されたペプチドの対立変異体
を検出する方法、及びサンプル中のペプチドのフラグメントを検出する方法は、
特に有用である。
【０１１０】 ペプチドはまた、ゲノム薬理学分析においても有用である。ゲノム薬理学では
、薬剤の変化の傾向と、影響を受けたヒトの異常挙動に従って、薬剤に対しての
応答における著しい遺伝的変異について臨床的に取り扱う。例えば、Eichelbaum
, M. (Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 23(10-11): 983-985 (1996))、及びLin
der, M.W. (Clin. Chem. 43(2):254-266 (1997))を参照されたい。これらの変異
の臨床的な結果、個人の代謝変異の結果として、ある個人に対しては治療薬剤が
重い毒性となり、又はある個人に対しては治療の失敗に終わる。このように、個
人の遺伝子型は、体内で治療化合物を作用させる方法、又は体が化合物を代謝す
る方法を決定することができる。さらに、酵素を代謝させる薬剤の活性は、薬剤
の作用の強度と期間に影響する。このように、個人のゲノム薬理学は、個人の遺
伝子型に基づいた予防、又は治療的な処置において、効果的な化合物、又はこの
ような化合物の効果的な投与量の選択を可能とする。遺伝子多形性の発見により
、酵素代謝性の薬剤において、患者が期待される薬効を得られない、不自然な薬
効を示す、又は標準の投薬量から重大な毒性を被るといったことの理由を説明す
ることができる。多形性は、強い代謝系の表現型と弱い代謝系の表現型で表され
ることができる。したがって、遺伝子の多形性は、ある集団のトランスポーター
機能の１つ以上が他の集団のそれと異なるような、トランスポータータンパク質
の対立タンパク質変異に至るかもしれない。このように、ペプチドは治療法に影
響する遺伝子の素因を確認するためのターゲットとなり得る。このため、リガン
ドベースの治療において、多形性は、末端アミノ基の細胞外ドメイン及び／又は
他のリガンド結合領域におけるリガンド結合活性及びトランスポーター活性が、
より高い、又はより低いことを引き起こし得る。したがって、多形性を含む集団
においては、治療効果を最大にするように、リガンド投薬量は必然的に修正され
る。遺伝子型に代わるものとしては、特定の多形性のペプチドを同定することが
できる。
【０１１１】 ペプチドはまた、タンパク質の発現がない、発現が不適当、又は発現が不必要
であることによって特徴づけられる障害の治療に有用である。図１に示す実験デ
ータは、ヒトの肺、リンパ液、腎臓、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎
児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、脾臓、及び
ヒーラー細胞での発現を示した。したがって、治療方法としては、トランスポー
タータンパク質又はフラグメントの使用が含まれる。
【０１１２】抗体 本発明は、本発明のペプチド、このようなペプチドを含むタンパク質、それら
の変異体及びフラグメントの１つに選択的に結合する抗体を提供するものである
。ここで用いられている場合、抗体がターゲットペプチドと結合し、無関係なタ
ンパク質と強く結合しないような場合、抗体は選択的にターゲットペプチドと結
合している。抗体がターゲットペプチドと実質的に相同性の無い他のタンパク質
と結合していても、そのペプチドが抗体のターゲットとなるペプチドに対してフ
ラグメント又はドメインにおける相同性を有している限り、抗体は選択的にペプ
チドを結びつけると考えられる。この場合、ペプチドに結合している抗体は、あ
る程度の交差反応性を持つにも関わらず、選択的であると理解される。
【０１１３】 ここで用いられる場合、抗体は当該分野で認められているものと同じ用語で定
義され、これらは、哺乳類生体により生成され、抗原の攻撃に対して応答するマ
ルチサブユニットタンパク質である。本発明の抗体には、ポリクローナル抗体、
モノクローナル抗体、及びＦａｂ又はＦ（ａｂ’）２、及びＦｖのような抗体の
フラグメントが含まれるが、これに限定されるものではない。
【０１１４】 ターゲットペプチドを得るための、抗体の生成及び／又は同定について、多く
の方法が知られている。このような方法のいくつかは、Harlow, Antibodies, Co
ld Spring Harbor Press,(1989)に記載されている。
【０１１５】 一般に、抗体を生成するためには、単離ペプチドを免疫原として用い、例えば
ラット、ウサギ又はマウスのような哺乳類生体に投与される。全長タンパク質、
抗原性ペプチドフラグメント又は融合タンパク質が用いられる。特に重要なフラ
グメントは、図２に特定されているような機能性ドメインをカバーするものであ
り、また、タンパク質アラインメント法を使用し、図面に示されているようにし
て、容易に確認することができるファミリーと配列相同性又は相違性を持つドメ
インである。
【０１１６】 抗体は、トランスポータータンパク質の領域、又は単離されたフラグメントか
ら好適に調製される。抗体は、ここに記載されるペプチドの何れの領域からも調
製することができる。しかしながら、好適な領域としては、機能／活性及び／又
はトランスポーター結合対象相互作用に関係している領域が含まれる。図２は特
に重要な領域を特定するのに用いることができ、配列アラインメントは保持され
た特異な配列フラグメントを特定するのに用いることができる
【０１１７】 抗原性フラグメントは、一般的に、少なくとも８つの隣接するアミノ酸残基を
含んでいる。しかしながら、抗原性ペプチドは、少なくとも１０、１２、１４、
１６以上のアミノ酸残基を含むことができる。このようなフラグメントは、例え
ば、タンパク質の表面上に位置する領域、例えば、親水性領域に対応するフラグ
メントのような物理的な性質、あるいは配列の特異性（図２参照）に基づいて選
択することができる。
【０１１８】 本発明の抗体の検出は、検出可能物質と抗体とのカップリング（すなわち、物
理的な結合）によって容易にすることができる。検出可能物質の例としては、例
えば、種々の酵素、補欠分子族、蛍光性物質、発光性物質、生物発光性物質、及
び放射性物質が含まれる。好適な酵素の例としては、セイヨウワサビペルオキシ
ダーゼ、アルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリン
エステラーゼが含まれ、好適な補欠分子族の例としては、ストレプトアビジン／
ビオチン、アビジン／ビオチンが含まれ、好適な蛍光性物質の例としては、ウン
ベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセイン・イソチオシアン酸塩、ローダ
ミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライド、又は
フィコエリトリンが含まれ、発光性物質の例としては、ルミノールが含まれ、生
物発光性物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びエクオリンが含
まれ、そして、適切な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、
又は３Ｈが含まれる。
【０１１９】抗体の使用 抗体は、アフィニティクロマトグラフィ、又は免疫沈降のような標準の技術に
よって、本発明のタンパク質の１つを単離するために用いることができる。抗体
は、細胞からの天然タンパク質、及び宿主細胞に表現される組換えによって生成
されたタンパク質の精製を容易にすることができる。さらに、このような抗体は
、組織や生体内のタンパク質の発現パターンを決定するため、細胞や組織内にお
ける本発明のタンパク質の存在の検出に、通常の開発段階を経ずに用いることが
できる。図１に示す実験データでは、本発明のトランスポータータンパク質が、
ヒトの心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓
、小腸、膵臓、肝臓、肺、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞で発現するこ
とが、ＰＣＲベース組織スクリーニングパネルにより示された。さらに、仮想ノ
ーザンブロットでは、肺、リンパ液、腎臓での発現を示した。さらに、このよう
な抗体は、発現の量及びパターンを評価することによって、in situ、in vitro
、細胞溶解物中、及び上澄み中でのタンパク質の検出に用いることができる。ま
た、このような抗体は、生物学的症状の発展又は進行間における、異常な組織分
布、又は異常な発現を評価するのに用いることができる。全長タンパク質の循環
フラグメントにおける抗体検出は、代謝回転を確認するのに用いることができる
。
【０１２０】 さらに、抗体は、タンパク質機能に関連した疾患の活発な段階、又は該疾患素
因を持つ個人といった、疾患の症状発現を評価するのに用いることができる。障
害が不適当な組織分布、発展性の発現、タンパク質の発現レベル、又は発現／進
行状態に起因する場合、抗体を通常のタンパク質に対して調製することができる
。図１に示す実験データでは、本発明のトランスポータータンパク質が、ヒトの
心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸
、膵臓、肝臓、肺、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞で発現することが、
ＰＣＲベース組織スクリーニングパネルにより示された。さらに、仮想ノーザン
ブロットでは、肺、リンパ液、腎臓での発現を示した。障害がタンパク質の特定
の変異により特徴づけられる場合、この変異タンパク質に特異的な抗体を、特定
の変異タンパク質の存在のアッセイを行うために用いることができる。
【０１２１】 抗体はまた、生体内の各種組織における、細胞の正常又は異常な細胞小器官の
位置を評価するのに用いることができる。図１に示す実験データは、ヒトの肺、
リンパ液、腎臓、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、
睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞での発
現を示した。診断としての使用は、遺伝子のテストだけでなく、治療法をモニタ
ーすることにも適用することができる。したがって、治療が最終的に、発現レベ
ル、又は異常配列及び異常組織配布の存在、又は発展性の発現を修正することを
目指すものである場合、タンパク質又は関連するフラグメントに直接的に対する
抗体を、治療の有効性をモニターするために用いることができる。
【０１２２】 さらに、抗体はゲノム薬理学分析において有用である。したがって、多形タン
パク質に対して調製される抗体は、治療法の修正を必要とする個人を特定するた
めに用いることができる。抗体はまた、電気泳動、等電点、トリプシンペプチド
消化、当該分野において周知な他の物理的なアッセイによって分析される、異常
タンパク質の免疫学的マーカーのような診断上のツールとしても有用である。
【０１２３】 抗体はまた、組織型の分類にも有用である。図１に示す実験データは、ヒトの
肺、リンパ液、腎臓、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副
腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞で
の発現を示した。このように、特定のタンパク質が特定の組織中の発現と相関し
ていた場合、このタンパク質に特異な抗体を、組織型を同定するために用いるこ
とができる。
【０１２４】 抗体はまた、タンパク質機能を阻害するのに有用であり、例えば、リガンドや
タンパク質結合相手のような結合対象へのトランスポーターペプチドの結合をブ
ロックする。これらの使用は、タンパク質の機能阻害に関連する治療法における
、治療環境において適用されることができる。抗体は、例えば、結合をブロック
することにより、ペプチド活性の変調（アゴナイズ又はアンタゴナイズ）を阻害
することに用いることができる。抗体は、機能のために必要な部位を含む特定の
フラグメントに対して、又は細胞又は細胞膜と関係している完全タンパク質に対
して調製される。図２に、本発明のタンパク質に関する構造情報を示す。
【０１２５】 本発明は、生物学的サンプル中のタンパク質の存在を検出するために抗体を用
いたキットを包含する。キットには、ラベル化された、又はラベル化可能な抗体
と、生物学的サンプル中でタンパク質を検出するための化合物又は試薬を含み、
；サンプル中のタンパク質量を決定する手段；標準サンプルのタンパク質量と比
較する手段；及び使用の説明、とを含む。このようなキットは、単一のタンパク
質、又はエピトープを検出するために提供されるか、又は抗体検出アレイのよう
に、多数のエピトープのうちの１つを検出するように設定されることができる。
アレイとしては、核酸アレイが後述され、また抗体アレイのための同様の方法も
開発されている。
【０１２６】核酸分子 本発明は、さらに本発明のトランスポーターペプチド又はタンパク質をコード
化する単離核酸分子（ｃＤＮＡ、転写及びゲノム配列）を提供するものである。
このような核酸分子は、本発明のトランスポーターペプチドの１つ、又はこれら
の対立変異体、又はこれらのオルトログ又はパラログをコード化する核酸分子か
ら成る、実質的に成る、又は含んでいる。
【０１２７】 ここで用いられる場合、「単離」核酸分子とは、核酸の天然起源における他の
核酸の存在から分離されたものである。好ましくは、「単離」核酸は、その核酸
の由来となる生物のゲノムＤＮＡにおいて、核酸のフランキング配列（すなわち
、５’、及び３’末端に位置する配列）は含まない。しかしながら、例えば、約
５ＫＢ、４ＫＢ、３ＫＢ、２ＫＢ又は特に１ＫＢ以上又はこれ以下、特に配列に
よりコード化された隣接ペプチドのように、いくつかのフランキングヌクレオチ
ド配列があるが、同一の遺伝子の配列によりコード化されたペプチドは、ゲノム
配列中のイントロンにより分離されている。重要な点は、核酸が、ここに記載さ
れているような特定の操作、例えば、組み換え発現、プローブやプライマーの調
製、核酸配列のための他の使用等に取り扱うことができるように、遠くの重要で
ないフランキング配列から分離されているということである。
【０１２８】 さらに、例えば、転写／ｃＤＮＡ分子のような「単離」核酸分子は、組み換え
技術により製造される場合には、他の細胞物質、又は培地、また化学的に合成さ
れる場合には前駆体又は他の化学物質を実質的に含まない。しかしながら、この
核酸分子は、他のコード化又は調整配列に融合されることができるが、これは単
離されたものとして考えられる。
【０１２９】 例えば、ベクターに含まれる組み換えＤＮＡ分子は、単離されたものとして考
えられる。さらに、単離したＤＮＡ分子の例としては、非相同的な宿主細胞に保
持された組み換えＤＮＡ分子、又は溶液中で精製（部分的又は実質的に）された
ＤＮＡ分子が含まれる。単離されたＲＮＡ分子としては、本発明の単離したＤＮ
Ａ分子の、in vivo又はin vitroＲＮＡ転写物が含まれる。本発明により単離さ
れた核酸分子としてはさらに、合成的に製造された分子が含まれる。
【０１３０】 したがって、本発明は、図１又は３ [ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１（転写配列）、及
びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３（ゲノム配列）]において示されるヌクレオチド配列か
ら成る核酸分子、又は図２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２）に示されるタンパク質をコ
ード化する核酸分子を提供するものである。ヌクレオチド配列がこの核酸分子の
完全なヌクレオチド配列であるとき、核酸分子はヌクレオチド配列から成る。
【０１３１】 本発明はさらに、図１又は３[ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１（転写配列）、及びＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ．３（ゲノム配列）]において示されるヌクレオチド配列から実質
的に成る核酸分子、又は図２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２）に示されるタンパク質を
コード化する核酸分子を提供するものである。核酸分子において、最終的にこの
ようなヌクレオチド配列がごくわずかの付加核酸残基とともに存在するとき、核
酸分子はヌクレオチド配列から実質的に成る。
【０１３２】 本発明はさらに、図１又は３ [ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１（転写配列）及びＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ．３（ゲノム配列）]において示されるヌクレオチド配列を含む核酸
分子、又は図２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２）に示されるタンパク質をコード化する
核酸分子を提供するものである。核酸分子の最終的な核酸配列の少なくとも一部
がこの核酸配列である場合、核酸分子はヌクレオチド配列を含む。これによると
、核酸分子は、そのヌクレオチド配列だけであるか、又は付加的な核酸残基、例
えば、自然に関する核酸配列、又は非相同的な核酸配列を有することもできる。
このような核酸分子は、ごくわずかの付加的なヌクレオチドを有するか、又は数
百又はそれ以上の付加的なヌクレオチドを含むこともできる。これらの種々のタ
イプの核酸分子を容易に生成／単離する方法については、以下に簡単に述べる。
【０１３３】 図１及び３には、コード及び非コードの配列の両者が提供される。本発明のヒ
トゲノム配列（図３）、及びｃＤＮＡ／転写配列（図１）より、図中の核酸分子
は、ゲノムイントロン配列、５’と３’の非コード配列、遺伝子調節領域、及び
非コード遺伝子間配列を含んでいる。一般に、図１と図３の両者に記載されてい
るこのような配列の特徴は、当該分野において公知の計算ツールを用いて容易に
特定することができる。以下で議論されるように、いくつかの非コーディング部
位、特にプロモーターのような遺伝子の調節因子は、例えば、非相同的な遺伝子
発現の制御、遺伝子活性を変調する化合物同定のターゲット等の種々の目的にと
って有用であり、ここに提供されるゲノム配列のフラグメントとして特別にクレ
ームされている。
【０１３４】 単離した核酸分子は、成熟したタンパク質に加えて付加的アミノ末端あるいは
カルボキシ末端アミノ酸、又は成熟ペプチド内のアミノ酸（例えば、成熟形態が
１以上のペプチド鎖を有する場合）をコード化することができる。このような配
列は、前駆体から成熟した形態へのタンパク質のプロセシングにおいて、タンパ
ク質搬送の促進、タンパク質半減期の延長あるいは短縮、又はタンパク質のアッ
セイ又は製造の際の操作の効率化、又は他の事象における役割を果たし得る。一
般に、in situの場合、付加アミノ酸は細胞酵素によって成熟したタンパク質へ
とプロセシングされる。
【０１３５】 上述したように、単離した核酸分子は、単独でトランスポーターペプチドをコ
ード化している配列、成熟したペプチドをコード化している配列、そして、主、
又は副配列（例えば、pre-pro、pro-protein配列）のような付加的なコード配列
を含むが、これに限定されるものではなく、付加的なコード配列に加えて、付加
的な非コード配列、例えば、イントロンと非コード５´及び３´配列のような、
転写されるものの翻訳はされずに、転写、ｍＲＮＡプロセシング（スプライシン
グ及びポリアデニル化を含む）、リボソームの結合、及びｍＲＮＡの安定性の役
割を果たすものを、含んでも含まなくても良い。加えて、核酸分子は、例えば、
精製を容易にするようなペプチドをコード化した配列のマーカーと融合されるこ
ともできる。
【０１３６】 単離した核酸分子は、ｍＲＮＡのようなＲＮＡの形態、あるいはクローニング
、化学合成技術又はその組み合わせによって生成するｃＤＮＡ及びゲノムＤＮＡ
を含むＤＮＡの形態をとり得る。核酸、特にＤＮＡは、二重鎖、又は単鎖であり
得る。単鎖の核酸は、コード鎖（センス鎖）、又は非コード鎖（アンチセンス鎖
）であり得る。
【０１３７】 本発明はさらに、本発明のペプチドのフラグメントをコード化する核酸分子と
同様に、上記したような本発明のトランスポータータンパク質の明らかな変異体
をコード化する核酸分子を提供するものである。このような核酸分子は、対立変
異体（同一位置）、パラログ（異なる位置）とオルトログ（異なる生体）のよう
に自然に発生するか、あるいは組み換えＤＮＡ法又は化学合成によって生成され
得る。このような非自然に発生する変異体は、核酸分子、細胞又は生体に適用さ
れるものを含む突然変異生成技術によって生成され得る。したがって、上述した
ように、変異体にはヌクレオチドの置換、欠失、倒置、挿入が含まれる。変異は
、コード、非コード領域のどちらか、又は両方で起こることができる。変異は、
保持及び非保持アミノ酸置換の両方で生じることができる。
【０１３８】 本発明はさらに、図１及び３に示される核酸分子の非コードのフラグメントを
提供するものである。好適な非コードのフラグメントとしては、プロモーター配
列、エンハンサ配列、遺伝子変調配列、遺伝子終止配列が含まれるが、これに限
定されるものではない。このようなフラグメントは、非相同的な遺伝子発現の制
御、及び遺伝子変調薬剤の同定を行うためのスクリーニングの開発において有用
である。プロモーターは、図３のゲノム配列における５’からＡＴＧ開始部位に
おいて容易に確認される。
【０１３９】 フラグメントは、１２又はそれ以上の隣接するヌクレオチド配列を含む。さら
に、フラグメントは少なくとも３０、４０、５０、１００、２５０、又は５００
のヌクレオチド長であり得る。フラグメントの長さは使用目的に基づく。例えば
、フラグメントは、ペプチドのエピトープ結果領域をコード化することができる
か、又はＤＮＡプローブ及びＤＮＡプライマーとして有用である。このようなフ
ラグメントは、オリゴヌクレオチドプローブを合成するための既知のヌクレオチ
ド配列を用いて単離することができる。ラベル化されたプローブは、コード化領
域と対応する核酸を単離するため、ｃＤＮＡライブラリ、ゲノムＤＮＡライブラ
リ、又はｍＲＮＡのスクリーニングに用いることができる。さらに、プライマー
は、遺伝子の特定領域をクローンするためのＰＣＲ反応に用いることができる。
【０１４０】 プローブ／プライマーは、典型的には、実質的に精製されたオリゴヌクレオチ
ド又はオリゴヌクレオチドペアを含む。オリゴヌクレオチドは、典型的には、少
なくとも１２、２０、２５、４０、５０又はそれ以上の連続的ヌクレオチドに、
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズされたヌクレオチド配列領域を含む
。
【０１４１】 オルトログ、ホモログ、及び対立変異体は、当該技術分野において周知の方法
を用いて同定することができる。ペプチドの項で述べたように、これらの変異体
は、ペプチドをコード化するヌクレオチド配列を含み、図面に示されるヌクレオ
チド配列、又はこの配列のフラグメントに対して、典型的には、６０−７０％、
７０−８０％、８０−９０％、より典型的には、少なくとも９０−９５％以上の
相同性を有するものである。このような核酸分子は、図面に示されるヌクレオチ
ド配列、又はこの配列のフラグメントに対して、モデレートな条件からストリン
ジェントな条件の下でハイブリダイズが可能なものとして、容易に同定すること
ができる。対立変異体は、コード化している遺伝子の遺伝子位置により、容易に
決定されることができる。本発明の新規なトランスポータータンパク質をコード
化している遺伝子は、（図３に示されているように）ヒト染色体４上にマップさ
れているゲノム成分に位置し、このことはＳＴＳ及びＢＡＣマップデータのよう
な、多くの証拠によって支持されている。
【０１４２】 図３には、本発明のトランスポータータンパク質をコード化している遺伝子に
おいて見出された、多形性／対立変異体情報を示す。具体的には、Ｃ１３６３Ｇ
のＳＮＰ、及びタンパク質位置６９９におけるＶ／Ａのアミノ酸多形が確認され
た。
【０１４３】 「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」という用語は、ここで用
いられる場合、互いにハイブリダイズして残存する、ペプチドをコード化してい
るヌクレオチド配列が、互いに少なくとも６０−７０％の相同性を有する程度に
ハイブリダイズ、及び洗浄が行われる条件を意味している。この条件では、ハイ
ブリダイズして残る配列が、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なく
とも約８０％、又はそれ以上となる。このようなストリンジェントな条件は、当
業者においては周知であり、Current Protocols in Molecular Biology, John W
iley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6に記載されている。ストリンジェント
なハイブリダイズ条件の１つの例では、６Ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウ
ム（ＳＳＣ）中、約４５℃でハイブリダイズし、その後、０．２ＸＳＳＣ０．１
％ＳＤＳ中、５０〜６５℃で洗浄する。低ストリンジェンシーのモデレートなハ
イブリダイズ条件の例は、当業者において周知である。
【０１４４】核酸分子の使用 本発明の核酸分子は、プローブ、プライマー、化学合成中間体、及び生物学ア
ッセイにおいて有用である。核酸分子は、図２に示されているペプチドをコード
化する全長ｃＤＮＡ及びゲノムクローンを単離するため、及び図２に示すペプチ
ドと同一又は関連したペプチドを生成する変異体（対立遺伝子、オルトログ等）
に対応するゲノムクローンを単離するための、メッセンジャーＲＮＡ、転写／ｃ
ＤＮＡ、及びゲノムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブとして有用である
。図３に示されるように、Ｃ１３６３ＧのＳＮＰ、及びタンパク質位置６９９に
おけるＶ／Ａのアミノ酸多形が確認された。
【０１４５】 プローブは、図に示されている核酸分子の全長における、何れの配列とも対応
することができる。したがって、それは５’非コード領域、コード領域、及び３
’非コード領域から誘導することができる。しかしながら、すでに述べたたよう
に、フラグメントは本発明以前に公開されたフラグメントを含まないものと見な
される。
【０１４６】 核酸分子はまた、核酸分子の何れかの領域を増幅するＰＣＲのプライマーとし
ても有用であり、必要な長さ及び配列のアンチセンス分子の合成においても有用
である。
【０１４７】 核酸分子はまた、組み換えベクターの製造にも有用である。このようなベクタ
ーとしては、ペプチド配列の一部、又は全部を発現する発現ベクターが含まれる
。ベクターはまた、挿入ベクターも含み、これは他の核酸分子中に統合され、例
えば、細胞ゲノム中で遺伝子及び／又は遺伝子生成物のin situ発現を変化させ
るために用いられる。例えば、内生コード配列では、１つ以上の特異的に導入さ
れた変異を含むコード領域の一部、又は全部との相同的な組み換えを経て置換さ
れ得る。
【０１４８】 核酸分子はまた、タンパク質の抗原部分を発現することにも有用である。
【０１４９】 核酸分子はまた、in situハイブリダイゼーション法により、核酸分子の染色
体の位置を決定するためのプローブとしても有用である。本発明の新規なトラン
スポータータンパク質をコード化している遺伝子は、（図３に示されているよう
に）ヒト染色体４上にマップされているゲノム成分に位置し、このことはＳＴＳ
及びＢＡＣマップデータのような、多くの証拠によって支持されている。
【０１５０】 核酸分子はまた、本発明の核酸分子の遺伝子調節領域を含むベクターの製造に
も有用である。
【０１５１】 核酸分子はまた、ここに記載される核酸分子から生成されるｍＲＮＡの一部又
は全部と対応しているリボザイムの設計にも有用である。
【０１５２】 核酸分子はまた、ペプチドの一部又は全部を発現しているベクターの製造にも
有用である。
【０１５３】 核酸分子はまた、核酸分子及びペプチドの一部又は全部を発現している宿主細
胞の製造にも有用である。
【０１５４】 核酸分子はまた、核酸分子及びペプチドの一部又は全部を発現している遺伝子
組み換え動物の製造にも有用である。
【０１５５】 核酸分子はまた、核酸発現の存在、レベル、形態、分布を決定するためのハイ
ブリダイゼーションプローブとしても有用である。図１に示す実験データでは、
本発明のトランスポータータンパク質が、ヒトの心臓、白血球、甲状腺、脳下垂
体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、肺、胎盤、骨格
筋、脾臓、及びヒーラー細胞で発現することが、ＰＣＲベース組織スクリーニン
グパネルにより示された。さらに、仮想ノーザンブロットでは、肺、リンパ液、
腎臓での発現を示した。
【０１５６】 したがって、プローブは、細胞、組織、生体中での核酸分子の存在の検出、又
はレベルの決定に用いることができる。レベルを決定される核酸はＤＮＡ又はＲ
ＮＡであり得る。したがって、ここに記載されるペプチドに対応するプローブは
、与えられた細胞、組織、生体中での発現及び／又は遺伝子コピー数の評価に用
いることができる。これらの使用は、正常の場合と比較して、トランスポーター
タンパク質が増加又は減少していることに関係する障害の診断に適している。
【０１５７】 ｍＲＮＡのin vitro検出技術には、ノーザンハイブリダイゼーション、及びin
situハイブリダイゼーションが含まれる。ＤＮＡのin vitro検出技術には、サ
ザンハイブリダイゼーション、及びin situハイブリダイゼーションが含まれる
。
【０１５８】 プローブは、トランスポータータンパク質を発現する細胞又は組織の判定を行
う診断テストキットの一部として用いることができる。これは、例えば、被験者
の細胞サンプル中の、トランスポーターをコード化した核酸分子、例えば、ｍＲ
ＮＡ、又はゲノムＤＮＡのレベルを測定するか、又はトランスポーター遺伝子が
変異していないか判定するものである。図１に示す実験データでは、本発明のト
ランスポータータンパク質が、ヒトの心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎
児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、肺、胎盤、骨格筋、脾臓、
及びヒーラー細胞で発現することが、ＰＣＲベース組織スクリーニングパネルに
より示された。さらに、仮想ノーザンブロットでは、肺、リンパ液、腎臓での発
現を示した。
【０１５９】 核酸発現アッセイは、トランスポーター核酸発現を変調する化合物を同定する
ための薬剤スクリーニングにおいて有用である。
【０１６０】 したがって、本発明は、トランスポーター遺伝子の核酸発現、特に、細胞及び
組織においてトランスポーターを媒介する生物学的、病理学的プロセスに関連し
た障害の治療に用いる化合物を同定する方法を提供するものである。図１に示す
実験データは、ヒトの肺、リンパ液、腎臓、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、
脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、脾臓
、及びヒーラー細胞での発現を示した。この方法には、典型的には、トランスポ
ーター核酸の発現を変調する化合物の能力についてアッセイを行うこと、及びそ
の後、不必要なトランスポーター核酸発現により特徴づけられる障害を治療する
のに用いることができる化合物を同定することが含まれる。このアッセイは、細
胞系及び無細胞系において行われることができる。細胞系のアッセイには、天然
にトランスポーター核酸を発現している細胞、又は特定の核酸配列を表現するた
めに設計された組み換え細胞が含まれる。
【０１６１】 トランスポーター核酸発現のアッセイは、例えばｍＲＮＡレベルのような核酸
レベル、又は信号経路に関連する副次化合物の直接的なアッセイと関連している
。さらに、トランスポータータンパク質信号経路における応答性を向上、又は低
下させる遺伝子の発現についてもアッセイすることができる。この例として、こ
れらの遺伝子の調節領域は、ルシフェラーゼのようなリポーター遺伝子に有効に
結合されることができる。
【０１６２】 したがって、トランスポーター遺伝子発現のモジュレータは、細胞と候補化合
物とを接触させ、ｍＲＮＡの発現を判定する方法により同定することができる。
候補化合物の存在下でのトランスポーターｍＲＮＡの発現レベルは、候補化合物
非存在下でのトランスポーターｍＲＮＡの発現レベルと比較される。この比較に
基づいて、候補化合物は核酸発現のモジュレータとして同定され、例えば、異常
核酸発現により特徴付けられる障害の治療に用いることができる。候補化合物存
在下でのｍＲＮＡの発現が、非存在下のものと比較して統計的に著しく大きい場
合、候補化合物は核酸発現の促進剤として同定される。候補化合物存在下でのｍ
ＲＮＡの発現が、非存在下のものと比較して統計的に著しく小さい場合、候補化
合物は核酸発現の阻害剤として同定される。
【０１６３】 本発明はさらに、トランスポーターを発現する細胞及び組織におけるトランス
ポーター核酸発現を変調する遺伝子モジュレータとしての薬剤スクリーニングを
経て同定された化合物をターゲットとして用いる治療方法を提供するものである
。図１に示す実験データでは、本発明のトランスポータータンパク質が、ヒトの
心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸
、膵臓、肝臓、肺、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞で発現することが、
ＰＣＲベース組織スクリーニングパネルにより示された。さらに、仮想ノーザン
ブロットでは、肺、リンパ液、腎臓での発現を示した。変調には、上方調整（例
えば、活性化又はアゴニゼーション）、下方調整（抑制又はアンタゴニゼーショ
ン）の両者、又は核酸発現が含まれる。
【０１６４】 あるいは、薬剤又は小分子がタンパク質を発現している細胞又は組織中でトラ
ンスポーター発現を阻害するものである限りは、トランスポーター核酸発現のモ
ジュレータは、ここに記載されるスクリーニングアッセイを用いて同定される薬
剤又は小分子であり得る。図１に示す実験データは、ヒトの肺、リンパ液、腎臓
、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含む）、副腎、睾丸、腎臓、小
腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラー細胞での発現を示した。
【０１６５】 核酸分子はまた、臨床試験又は治療方法において、トランスポーター遺伝子の
発現及び活性に対する変調化合物の効果をモニターするのに有用である。したが
って、遺伝子発現パターンは、化合物、特に患者の耐性を向上させる化合物を用
いた治療における、継続的効果のバロメータとなり得る。遺伝子発現パターンは
また、化合物に対する細胞の生理的反応を示すマーカーとなり得る。したがって
、このようなモニタリングにより、化合物の投与量の増加、又は患者が耐性を示
さない代替化合物の投与を行うことができる。同様に、核酸発現のレベルが望ま
しいレベルまで低下したならば、化合物の投与をこれに比例して減少することが
できる。
【０１６６】 核酸分子はまた、トランスポーター核酸発現の質的変化、特に疾患に至る質的
変化の診断アッセイにも有用である。核酸分子は、ｍＲＮＡのようなトランスポ
ーター遺伝子、及び遺伝子発現生成物における突然変異の検出に用いることがで
きる。核酸分子は、トランスポーター遺伝子において自然発生した遺伝子突然変
異を検出し、その変異を持つ被験者が変異により生じる障害の危険性を有してい
るかどうかを判定するためのハイブリダイゼーションプローブとして用いること
ができる。突然変異には、欠失、付加、又は遺伝子中の１以上のヌクレオチドの
置換、倒置又は転移のような染色体の組み換え、異常メチル化パターンのような
ゲノムＤＮＡの修飾、又は増幅のような遺伝子コピー数の変化が含まれる。機能
障害に関連するトランスポーター遺伝子の変異体の検出は、疾患がトランスポー
タータンパク質の過剰発現、過小発現、変異発現の結果生じる場合に、活性又は
感受性の診断ツールを提供するものである。
【０１６７】 トランスポーター遺伝子における突然変異をもたらしている個体は、種々の技
術によって核酸レベルにおいて検出されることができる。図３には、本発明のト
ランスポータータンパク質をコード化している遺伝子において見出された、多形
性／対立変異体情報を示す。具体的には、Ｃ１３６３ＧのＳＮＰ、及びタンパク
質位置６９９におけるＶ／Ａのアミノ酸多形が確認された。本発明の新規なトラ
ンスポータータンパク質をコード化している遺伝子は、（図３に示されているよ
うに）ヒト染色体４上にマップされているゲノム成分に位置し、このことはＳＴ
Ｓ及びＢＡＣマップデータのような、多くの証拠によって支持されている。ゲノ
ムＤＮＡは、直接又は予めＰＣＲを用いて増幅した後で分析されることができる
。ＲＮＡ又はｃＤＮＡも、同様にして用いることができる。ある使用においては
、突然変異の検出は、例えば、アンカーＰＣＲ、ＲＡＣＥＰＣＲのような、ポリ
メラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）(例えば、U.S. Patent No. 4,683,195, 及び 4,683
,202参照)、又は他のものとして、リゲーション連鎖反応（ＬＣＲ）(例えば、La
ndegran et al., Science 241:1077-1080 (1988); 及び Nakazawa et al., PNAS
91:360-364 (1994)参照)において、プローブ／プライマーの使用に関連し、特
に後者は遺伝子中の変異位置の同定に有用である（Abravaya et al., Nucleic A
cids Res. 23:675-682 (1995)参照）。この方法には、患者から細胞サンプルを
収集する工程と、サンプルの細胞から核酸（例えば、ゲノム、ｍＲＮＡ又はその
両方）を単離する工程と、遺伝子（もし存在すれば）のハイブリダイズ及び増幅
が起こりうる条件下で遺伝子に特異的にハイブリダイズする１以上のプライマー
と核酸とを接触させる工程と、増幅生成物の存在又は非存在を検出するか、又は
増幅生成物のサイズを検出し、コントロールサンプルの長さと比較する工程を含
む。欠失及び挿入は、増幅生成物のサイズの変化を、正常な遺伝子型と比較する
ことにより検出することができる。点突然変異は、増幅ＤＮＡと正常なＲＮＡ、
又はアンチセンスのＤＮＡ配列とハイブリダイズすることによって確認すること
ができる。
【０１６８】 あるいは、トランスポーター遺伝子の突然変異は、例えば、ゲル電気泳動によ
り決定される制限酵素消化パターンの変更により、直接的に確認することができ
る。
【０１６９】 さらに、配列特定リボザイム(U.S. Patent No. 5,498,531)は、リボザイム開
裂部位の成長又は減少により、特定の変異の存在の評点のために用いることがで
きる。完全に一致する配列は、ヌクレアーゼ開裂消化分析評価、又は融点の違い
によって、不一致の配列から分離することができる。
【０１７０】 特定位置での配列変化は、ＲＮａｓｅ及びＳ１保護、又は化学開裂法のような
ヌクレアーゼ保護アッセイによって評価することができる。さらに、変異体トラ
ンスポーター遺伝子と野生型遺伝子との配列の相違は、直接ＤＮＡ配列解析によ
って決定することができる。種々の自動化された配列解析手段は、診断アッセイ
（Naeve, C.W., (1995) Biotechniques 19:448）の実行において有用であり、こ
れらには、マススペクトルによる配列解析（例えば、PCT International Public
ation No. WO 94/16101; Cohen et al., Adv. Chromatogr. 36:127-162 (1996),
and Griffin et al., Appl. Biochem. Biotechnol. 38:147-159 (1993)参照）
も含まれる。
【０１７１】 遺伝子中の突然変異を検出する他の技術の例としては、ＲＮＡ／ＲＮＡ、又は
ＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖から、不一致の塩基を検出するために、開裂試薬から保護
する方法（Myers et al., Science 230:1242 (1985), Cotton et al., PNAS 85:
4397 (1988), Saleeba et al., Meth. Enzymol. 217:286-295 (1992)）、変異体
と野生型の核酸の電気泳動移動度を比較する方法（Orita et al., PNAS 86:2766
(1989); Cotton et al., Mutat. Res. 285:125-144 (1993); and Hayashi et a
l., Genet. Anal. Tech. Appl. 9:73-79 (1992)）、及び変性剤の勾配を含んだ
ポリアクリルアミドゲル中での変異体又は野生型のフラグメントの動きを、勾配
ゲル電気泳動を用いてアッセイする方法（Myers et al., Nature 313:495 (1985
)）が含まれる。点突然変異を検出する他の技術の例としては、選択的オリゴヌ
クレオチドハイブリダイゼーション、選択的増幅、及び選択的プライマー伸長が
含まれる。
【０１７２】 核酸分子は、治療方法としての効果を持つにも関わらず、必ずしも疾患を引き
起こすわけではない遺伝子型のための、個人テストにおいても有用である。この
ため、核酸分子は、個人の遺伝子型と、治療に用いられる化合物に対する個人の
応答との相関（薬理ゲノム相関）についての研究に用いることができる。したが
って、ここに記載されている核酸分子は、治療のための適切な化合物及び投与量
を選択するために、個人のトランスポーター遺伝子の変異についての評価に用い
ることができる。図３には、本発明のトランスポータータンパク質をコード化し
ている遺伝子において見出された、多形性／対立変異体情報を示す。具体的には
、Ｃ１３６３ＧのＳＮＰ、及びタンパク質位置６９９におけるＶ／Ａのアミノ酸
多形が確認された。
【０１７３】 このように、治療に影響する遺伝子変異を示す核酸分子は、個人におけるテイ
ラー治療に用いることのできる診断ターゲットを提供するものである。したがっ
て、これらの多形性を含んだ組み換え細胞及び組み換え動物の製造は、治療化合
物及び薬剤投与についての効果的な臨床設計を可能とする。
【０１７４】 核酸分子は、細胞、組織、及び生体におけるトランスポーター遺伝子発現を制
御するためのアンチセンス構成物として有用である。ＤＮＡアンチセンスの核酸
分子は、転写に関連する遺伝子の部位に対して相補的になるよう設計され、それ
故に、トランスポータータンパク質の生成と転写が防がれる。アンチセンスのＲ
ＮＡ又はＤＮＡ核酸分子はｍＲＮＡへとハイブリダイズされ、これによりトラン
スポータータンパク質中でのｍＲＮＡの翻訳がブロックされる。
【０１７５】 あるいは、ある種のアンチセンス分子は、トランスポーター核酸の発現を減少
させる不活性化ｍＲＮＡに用いることができる。したがって、これらの分子は、
異常、又は不必要なトランスポーター核酸の発現により特徴づけられる障害の治
療に用いることができる。この技術は、翻訳されるｍＲＮＡの能力が減少したｍ
ＲＮＡの１以上の領域に相補的なヌクレオチド配列を含んだリボザイムによる開
裂に関連している。可能な領域としては、コード領域、特に、リガンド結合のよ
うな、トランスポータータンパク質の触媒活性及び他の機能活性に対応したコー
ド領域が含まれる。
【０１７６】 核酸分子はまた、トランスポーター遺伝子発現において異常な細胞を持つ患者
の遺伝子治療のためのベクターを提供するものである。このため、組み換え細胞
には、ex vivoで調製され患者に戻される細胞が含まれ、個人の体内に導入され
てそこで個人の治療のために必要とされるトランスポータータンパク質を生成す
る。
【０１７７】 本発明は、生物学的サンプル中のトランスポーター核酸の存在を検出するため
に抗体を用いたキットも包含する。図１に示す実験データでは、本発明のトラン
スポータータンパク質が、ヒトの心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を
含む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、肺、胎盤、骨格筋、脾臓、及び
ヒーラー細胞で発現することが、ＰＣＲベース組織スクリーニングパネルにより
示された。さらに、仮想ノーザンブロットでは、肺、リンパ液、腎臓での発現を
示した。例えば、キットは、ラベル化された、又はラベル化可能な核酸、又は生
物学的サンプル中でトランスポーター核酸を検出することのできる試薬を含み、
；サンプル中のトランスポーター核酸量を決定する手段；標準サンプルのトラン
スポーター核酸量と比較する手段、とを含むことができる。この化合物又は試薬
は適当な容器に封入することができる。このキットは、さらにトランスポーター
タンパク質ｍＲＮＡ又はＤＮＡの検出キットとして使用するための説明を含むこ
とができる。
【０１７８】核酸アレイ 本発明はさらに、核酸検出キットを提供するものであり、これらは、例えば、
図１及び３(ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１及び３)に示される配列情報に基づいた核酸分
子のアレイ又はマイクロアレイである。
【０１７９】 ここで用いられている、「アレイ」又は「マイクロアレイ」は、紙、ナイロン
又は他の膜、フィルタ、チップ、ガラススライド、又は他の適当な固形支持体の
ような基盤の上に合成された、別個のポリヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチ
ドのアレイのことである。１つの例として、マイクロアレイは、US Patent 5,83
7,832, Chee et al., PCT application W095/11995 (Chee et al.), Lockhart,
D. J. et al. (1996; Nat. Biotech. 14: 1675-1680) 及び Schena, M. et al.
(1996; Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 10614-10619)に記載される方法にしたがっ
て調製、使用され、これらの全ては参考としてここに折り込まれる。あるいは、
このようなアレイは、Brown et al., US Patent No. 5,807,522.に記載される方
法により製造される。
【０１８０】 マイクロアレイ又は検出キットは、好適には、多数の特異的な単鎖の核酸配列
を構成し、通常は合成アンチセンスのオリゴヌクレオチドか、又はｃＤＮＡのフ
ラグメントのどちらかが固体支持体上に固定される。オリゴヌクレオチドは、好
適には約６〜６０のヌクレオチド長、より好適には１５〜３０のヌクレオチド長
、最も好適には２０〜２５のヌクレオチド長である。あるタイプのマイクロアレ
イ又は検出キットには、７〜２０のヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドのみを
使うことが好適であり得る。マイクロアレイ又は検出キットは、既知の５’又は
３’配列を含んだオリゴヌクレオチド、全長配列を含んだオリゴヌクレオチド、
又は配列長さの特定領域から選択された特異なオリゴヌクレオチドを含むもので
あり得る。マイクロアレイ又は検出キットにおいて用いられるポリヌクレオチド
は、遺伝子又は対象となる遺伝子において特異的なオリゴヌクレオチドであり得
る。
【０１８１】 マイクロアレイ又は検出キットにおいて、既知の配列のオリゴヌクレオチドを
製造するために、対象となる遺伝子（又は、本発明により確認されたＯＲＦ）は
、典型的には、核酸配列の５’から開始、又は３’で終了するコンピュータアル
ゴリズムを用いて試験される。典型的なアルゴリズムでは、遺伝子に特異的な長
さに規定されたオリゴマーが同定され、ハイブリダイゼーションに好適な範囲に
ＧＣ成分を持ち、ハイブリダイゼーションの妨害となると予測される二次構造を
持たない。ある条件では、マイクロアレイ又は検出キットにおいて、オリゴヌク
レオチドのペアを用いることが好適であり得る。オリゴヌクレオチドの「ペア」
は、好適には配列の中央に位置している１つのヌクレオチドを除いては、同一で
ある。ペアの２つ目のオリゴヌクレオチド（一方とは不一致）はコントロールと
して用いられる。オリゴヌクレオチドペアの数は、２から１００万の間である。
オリゴマーは、光誘導化学プロセスを用いて、基盤上の指定領域で合成される。
基盤は、紙、ナイロン又は他の膜、フィルタ、チップ、ガラススライド、又は他
の適当な固形支持体である。
【０１８２】 他方、オリゴヌクレオチドは、PCT application W095/251116 (Baldeschweile
r et al.)に記載されているように、化学カップリング手段、及びインクジェッ
トアプリケーション装置を用いて基盤の表面上で合成され、これらの全ては参考
としてここに折り込まれる。他の観点では、ドット（又はスロット）ブロットに
似た「格子」アレイでは、真空システム、加熱、ＵＶ、機械的又は化学的結合工
程を用いて、ｃＤＮＡ、又はオリゴヌクレオチドを基板の表面上に配置、結合さ
せることができる。上記のようなアレイは、手工、又は利用可能な装置（スロッ
トブロット、又はドットブロット装置）、材料（適当な固形支持体）、及び機械
（ロボット装置を含む）を用いて製造され、また、８、２４、９６、３８４、１
５３６、６１４４又はこれ以上、又は商業的に用いられる装置に効果的に使用さ
れる２から１００万の間の他の数のオリゴヌクレオチドを含んでもいても良い。
【０１８３】 マイクロアレイ又は検出キットを用いてサンプルの分析を行うために、生物サ
ンプルから得られたＲＮＡ又はＤＮＡは、ハイブリダイゼーションプローブ中に
調製される。ｍＲＮＡが単離され、そしてｃＤＮＡが調製され、アンチセンスの
ＲＮＡ(ａＲＮＡ)を調製するためのテンプレートとして用いられる。ａＲＮＡは
蛍光性ヌクレオチドの存在化で増幅し、ラベル化されたプローブがマイクロアレ
イ又は検出キットにおいてインキュベートされ、そして、プローブの配列がマイ
クロアレイ又は検出キット中の相補的なオリゴヌクレオチドとハイブリダイズさ
れる。インキュベート条件は、正確に相補的に一致しているか、又は各種程度の
相補性でハイブリダイゼーションが起こるように調節される。ハイブリダイズし
ていないプローブを除去した後、蛍光のレベルとパターンを判定するためにスキ
ャナが用いられる。スキャンされたイメージは、マイクロアレイ又は検出キット
上の、相補性の程度、及び各々のオリゴヌクレオチド配列の相対的な量を決定す
るために試験される。生物学的サンプルは、体液（例えば血、尿、唾液、痰、胃
液、その他）、培養細胞、生体組織検査、又は他の組織調製品から得られる。検
出システムでは、全ての異なる配列において、ハイブリダイゼーションの存在、
非存在、及び量を、同時に計測するのに用いられる。このデータは、サンプル中
での、配列、発現パターン、変異、変異体、又は多形性といった、大規模な相関
性の研究に用いられる。
【０１８４】 本発明は、このようなアレイを用いて、本発明のトランスポータータンパク質
／ペプチドの発現を同定するための方法を提供するものである。詳細には、この
ような方法は、テストサンプルと一つ以上の核酸分子とのインキュベートと、テ
ストサンプル中の成分と核酸分子との結合についてのアッセイとが含まれる。こ
のようなアッセイは、少なくとも遺伝子の一つが本発明の遺伝子及び／又は本発
明のトランスポーター遺伝子の対立変異体である、多くの遺伝子を含むアレイに
関連している。図３には、本発明のトランスポータータンパク質をコード化して
いる遺伝子において見出された、多形性／対立変異体情報を示す。具体的には、
Ｃ１３６３ＧのＳＮＰ、及びタンパク質位置６９９におけるＶ／Ａのアミノ酸多
形が確認された。
【０１８５】 テストサンプルと核酸分子のインキュベートの条件は様々である。インキュベ
ーション条件は、使用されるアッセイの形式、使用される検出方法、及びアッセ
イに用いられる核酸分子のタイプ及び性質に依存する。一般的に入手可能なハイ
ブリダイゼーション、増幅、又はアレイアッセイの形式の何れかを認識している
当業者は、ここに記載されるヒトゲノムの新規フラグメントを用いるに当って、
容易に適用を行うことができる。このようなアッセイの例は、Chard, T, An Int
roduction to Radioimmunoassay and Related Techniques, Elsevier Science P
ublishers, Amsterdam, The Netherlands (1986); Bullock, G. R. et al., Tec
hniques in Immunocytochemistry, Academic Press, Orlando, FL Vol. 1 (1 98
2), Vol. 2 (1983), Vol. 3 (1985); Tijssen, P., Practice and Theory of En
zyme Immunoassays: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular B
iology, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, The Netherlands (1985)に
記載されている。
【０１８６】 本発明のテストサンプルには、細胞、タンパク質、細胞からの膜抽出物が含ま
れる。上記の方法に用いられるテストサンプルは、アッセイの形式、検出方法の
性質、及びアッセイのサンプルとして用いられる組織、細胞、又はその抽出物に
基づいて変化する。核酸抽出物又は細胞抽出物の調製は、当業者において周知で
あり、用いられるシステムと調和するサンプルを得ることにより、容易に適用す
ることができる。
【０１８７】 本発明の他の例としては、本発明のアッセイを行うために必要な試薬を含むキ
ットが提供される。
【０１８８】 特に本発明は、（ａ）ここに記載されるヒトゲノムのフラグメントと結合する
ことのできる１以上の核酸分子を含む第一の容器、（ｂ）１以上の洗浄試薬、結
合核酸を検出することのできる試薬を含む他の１以上の容器、とを含む１以上の
容器に区分され、封入されたキットを提供するものである。
【０１８９】 詳細には、区分されたキットとしては、試薬が別々の容器に含まれているキッ
トが含まれる。このような容器としては、小さいガラスの容器、プラスチック容
器、帯状のプラスチック、ガラス又は紙、又はシリカのようなアレイ材料が含ま
れる。このような容器は、サンプルと試薬が混合して汚染しないように、１つの
区分から他の区分へと試薬を効率的に移動することができ、またそれぞれの容器
の試薬又は溶液は他の容器へと定量的に添加することができる。このような容器
には、テストサンプルを入れる容器、核酸プローブを含む容器、洗浄試薬（例え
ば、リン酸塩緩衝液、Ｔｒｉｓ−緩衝液等）を含む容器、及び結合プローブを検
出に用いられる試薬を含む容器を含む。当業者は、本発明にかかる従来未知のト
ランスポーター遺伝子を認識し、ここに開示されている配列情報を用いて定型的
に確認することができ、さらにこれを当業者において周知の確立されたキット形
態、特に発現アレイに組み込むことができる。
【０１９０】ベクター／宿主細胞 本発明はまた、ここに記載される核酸分子を含んだベクターを提供するもので
ある。「ベクター」という用語は、ビヒクルのことを指し、好適には核酸分子で
あり、核酸分子の輸送をすることができるもののことである。ベクターが核酸分
子である場合、核酸分子はベクターの核酸と共有結合している。本発明のこの観
点では、ベクターには、プラスミド、単鎖又は二重鎖のファージ、単鎖又は二重
鎖のＲＮＡ又はＤＮＡのウイルス性ベクター、又はＢＡＣ、ＰＡＣ、ＹＡＣ、Ｏ
ＲＭＡＣのような人工染色体が含まれる。
【０１９１】 ベクターは宿主細胞中に染色体外の成分として保持され、そこで核酸分子の付
加的なコピーを複製及び生成する。あるいは、ベクターは宿主細胞のゲノム中に
組み込まれ、宿主細胞の複製の際に核酸分子の付加的なコピーを生成する。
【０１９２】 本発明は、核酸分子の保持のためのベクター（クローニングベクター）、又は
核酸分子の発現のためのベクター（発現ベクター）を提供するものである。この
ベクターは、原核生物細胞又は真核生物細胞、又はその両方で機能することがで
きる（シャトルベクター）。
【０１９３】 発現ベクターは、ベクター中で核酸分子と有効に結合したｃｉｓ作用性調節領
域を含み、これにより宿主細胞中での核酸分子の転写が可能となる。この核酸分
子は、転写に影響を及ぼす核酸分子と分離されて、宿主細胞に導入されることが
できる。したがって、第二の核酸分子は、ベクターからの核酸分子の転写を行う
ｃｉｓ調節制御領域と相互作用するトランス作用性因子を提供し得る。あるいは
、トランス作用性因子は宿主細胞により提供され得る。最終的に、トランス作用
性因子は、ベクター自身から作り出すことができる。しかしながら、いくつかの
例では、核酸分子の転写及び／又は翻訳は無細胞系でも起こり得る。
【０１９４】 ここに記載される核酸分子の調整配列は、目的のｍＲＮＡ転写のためのプロモ
ーターを含んで有効に結合されることができる。これらには、バクテリオファー
ジλからの左部プロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉからのｌａｃ、ＴＲＰ及びＴＡＣプ
ロモーター、ＳＶ４０からの初期及び後期のプロモーター、ＣＭＶの極初期のプ
ロモーター、アデノウイルスの初期及び後期のプロモーター、及びレトロウイル
スのＬＴＲが含まれるが、これに限定されるものではない。
【０１９５】 転写を促進する制御領域に加えて、発現ベクターはまた、リプレッサー結合部
位やエンハンサのような転写を調整する領域を含むものであり得る。この例とし
ては、ＳＶ４０エンハンサ、サイトメガロウイルスの極初期のエンハンサ、ポリ
オーマエンハンサ、アデノウイルスエンハンサー、レトロウイルスＬＴＲエンハ
ンサが含まれる。
【０１９６】 転写の開始及び制御領域を含む場合に加えて、発現ベクターはまた、転写のた
めのリボソーム結合部位である転写領域における、転写終了のために必要な配列
を含むことができる。他の発現調整制御成分としては、ポリアデニル化信号と同
様に、開始及び終止コドンが含まれる。当業者は、発現ベクターに有用な多数の
調整配列を知り得る。このような調整配列は、例えば、Sambrook et al., Molec
ular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd. ed., Cold Spring Harbor Laborato
ry Press, Cold Spring Harbor, NY, (1989)に記載されている。
【０１９７】 各種の発現ベクターは、核酸分子の発現に用いることができる。このようなベ
クターには、染色体、エピソーム、ウイルス由来のベクター、例えば、バクテリ
アプラスミド、バクテリオファージ、酵母エピソーム、人工酵母染色体のような
酵母染色体成分、バクロウイルス、ＳＶ４０のようなパポバウイルス、バクシニ
アウイルス、アデノウイルス、ポクスウイルス、シュードラビスウイルス、及び
レトロウイルスのようなウイルス由来のベクターが含まれる。ベクターはまた、
これらの起源の組み合わせから誘導することができ、例えば、コスミド及びファ
ージミドのようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝子成分から誘導するこ
とができる。原核及び真核生物の宿主細胞のための適切なクローニングベクター
及び発現ベクターは、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Man
ual. 2nd. ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor,
NY, (1989)に記載されている。
【０１９８】 調整配列では、１以上の宿主細胞の構成的な発現（すなわち組織特異性）、又
は、温度、養分添加、又はホルモンや他のリガンドのような外生の要因による１
以上の細胞タイプでの指示的な発現を提供するものである。原核及び真核生物の
宿主細胞において構成的、及び指示的に発現する種々のベクターは、当業者にお
いて周知である。
【０１９９】 核酸分子は、周知の方法によってベクター核酸内に導入されることができる。
通常、最終的に発現するＤＮＡ配列は、ＤＮＡ配列と発現ベクターが１以上の限
定酵素により開裂し、その後フラグメントが共に結合することによって、発現ベ
クターと結合される。制限酵素の消化及び結合の手順は、当業者において周知で
ある。
【０２００】 適切な核酸分子を含んでいるベクターは、公知の技術を用いて、増殖又は発現
のために適切な宿主細胞内へ導入することができる。バクテリア細胞には、Ｅ．
ｃｏｌｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、及び Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ
ｍｕｒｉｕｍが含まれるがこれに限定されるものではない。真核生物細胞には、
酵母、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａのような昆虫細胞、ＣＯＳ及びＣＨＯ細胞のような
動物細胞、及び植物細胞が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２０１】 ここに記載されているように、融合タンパク質としてのペプチドの発現が望ま
しい。したがって、本発明はペプチドの生成が可能な融合ベクターを提供するも
のである。融合ベクターは組み換えタンパク質の発現及び溶解性を向上すること
ができ、また、例えば、アフィニティー精製のためのリガンドの作用によって、
タンパク質精製を向上することができる。タンパク質分解性開裂部位は融合部分
との結合位置に導入され、このために、目的となるペプチドは最終的に融合部分
から分離される。タンパク質分解酵素としては、ファクターＸａ、スロンビン、
エンテロトランスポーターが含まれるが、これに限定されるものではない。典型
的な融合発現ベクターとしては、グルタチオンＳ−転移酵素（ＧＳＴ）、マルト
ースＥ結合タンパク質、又はタンパク質Ａのそれぞれをターゲット組み換えタン
パク質に融合した、ｐＧＥＸ（Smith et al., Gene 67:31-40 (1988)）、ｐＭＡ
Ｌ（New England Biolabs, Beverly, MA）、ｐＲＩＴ５（Pharmacia、Piscatawa
y、NJ）が含まれるが、これに限定されるものではない。好適な指示的非融合Ｅ
．ｃｏｌｉ発現ベクターの例としては、ｐＴｒｃ（Amann et al., Gene 69:301-
315 (1988)、ｐＥＴ１１ｄ（Studier et al., Gene Expression Technology: Me
thods in Enzymology 185:60-89 (1990)）が含まれる。
【０２０２】 組み換えタンパク質の発現は、遺伝子背景を与えることによって、宿主バクテ
リアにおいて最大化することができ、宿主細胞は組み換えタンパク質のタンパク
質分解性の開裂欠損能力を有する（Gottesman, S., Gene Expression Technolog
y: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, California (199
0) 119-128）。あるいは、対象となる核酸分子の配列は、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ
のような特定の宿主細胞のために優先的に使用されるコドンとなるように変更さ
れることができる（Wada et al., Nucleic Acids Res. 20:2111-2118 (1992)）
。
【０２０３】 核酸分子はまた、酵母において作用する発現ベクターにより発現されることも
できる。Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのような酵母中で発現するベクターの例とし
ては、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Baldari, et al., EMBO J. 6:229-234 (1987)）、ｐ
ＭＦａ（Kurjan et al., Cell 30:933-943(1982)）、ｐＪＲＹ８８（Schultz et
al., Gene 54:113-123 (1987)）、ｐＹＥＳ２（Invitrogen Corporation, San
Diego, CA）が含まれる。
【０２０４】 核酸分子はまた、例えば、バクロウイルス発現ベクターを用いて、昆虫細胞内
で発現されることもできる。培養昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９細胞）中のタンパク
質の発現に利用されるベクターには、ｐＡｃシリーズ（Smith et al., Mol. Cel
l Biol. 3:2156-2165 (1983)）、及びｐＶＬシリーズ（Lucklow et al., Virolo
gy 170:31-39 (1989)）が含まれる。
【０２０５】 本発明のある例においては、ここに記載されている核酸分子は、哺乳類発現ベ
クターを用いて哺乳類の細胞内で発現される。哺乳類発現ベクターの例としては
、ｐＣＤＭ８（Seed, B. Nature 329:840(1987)）、及びｐＭＴ２ＰＣ（Kaufman et al., EMBO J. 6:187-195 (1987)）が含まれる。
【０２０６】 ここに列記されている発現ベクターとしては、核酸分子を発現するために有用
であり、当業者が利用可能なベクターとして周知のもののみが示されている。こ
こに記載されている核酸分子の維持増殖、又は発現に好適な他のベクターは、当
業者において周知である。これらは、例えば、Sambrook, J., Fritsh, E. F., a
nd Maniatis, T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd, ed., Cold S
pring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Sprin
g Harbor, NY, 1989に記載されている。
【０２０７】 ここに記載されている核酸配列がベクター中に逆方向にクローンされたベクタ
ーは、アンチセンスＲＮＡの転写を許す調整配列に結合可能であるが、本発明は
、また、このようなベクターも包含するものである。このように、アンチセンス
転写は、ここに記載され、コード、非コード領域の両方が含まれている核酸分子
配列の、全部又は一部を生成することができる。そして、このアンチセンスのＲ
ＮＡの発現は、センスＲＮＡの発現（調整配列、構成的、又は指示的発現、組織
特異発現）に関して、前記した各パラメータに対応する。
【０２０８】 本発明はまた、ここに記載されるベクターを含む組み換え宿主細胞に関連する
ものである。したがって、宿主細胞には、原核生物細胞、酵母のような低真核生
物細胞、昆虫細胞のような他の真核生物細胞、及び哺乳類の細胞のような高真核
生物細胞が含まれる。
【０２０９】 組み換え宿主細胞は、当業者が容易に利用可能な技術により、ここに記載され
るように構成されるベクターを細胞中に導入することにより、調製することがで
きる。これらには、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキス
トラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、
エレクトロポレーション、トランスダクション、インフェクション、リポフェク
ション、及びSambrook, et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2n
d, ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Pre
ss, Cold Spring Harbor, NY, 1989)に記載されているような他の技術が含まれ
るが、これらに限定されるものではない。
【０２１０】 宿主細胞は、１以上のベクターを含むことができる。このため、異なるヌクレ
オチド配列が、同じ細胞の異なるベクター中に導入されることができる。同様に
、核酸分子は、単独で、又は発現ベクターのトランス作用因子を与えているよう
な、関連のない他の核酸分子と共に導入されることができる。１以上のベクター
が細胞内に導入される場合、ベクターは単独で導入されるか、共に導入されるか
、又は核酸分子ベクターに結合されることができる。
【０２１１】 バクテリオファージ及びウィルスベクターの場合、これらは標準的なインフェ
クション及びトランスダクションの操作により、封入又はカプセル化されたウイ
ルスとして細胞内に導入されることができる。ウィルスベクターは、複製可能、
又は複製欠陥であり得る。ウイルスの複製に欠陥がある場合、複製は欠陥を補完
する機能が提供される宿主細胞内で起こり得る。
【０２１２】 ベクターは一般に、組み換えベクターの構成物を含む細胞の部分母集団の選択
を可能とする選択性マーカーを含む。このマーカーは、ここに記載される核酸分
子を含む同一のベクター内か、又は別のベクター中に含まれることができる。マ
ーカーには、原核生物宿主細胞のためのテトラサイクリン又はアンピシリン−抵
抗遺伝子、及び真核生物宿主細胞のためのジヒドロフォレート還元酵素又はネオ
マイシン耐性が含まれる。しかしながら、表現型特性の選択性を提供するマーカ
ーは何れの場合にも有効である。
【０２１３】 成熟タンパク質は、バクテリア、酵母、哺乳類の細胞、及び他の細胞において
、適切な調整配列の制御下で生成されることができるが、無細胞系転写及び翻訳
システムもまた、ここに記載されるＤＮＡ構成物から誘導されるＲＮＡを用い、
これらのタンパク質を生成するために用いることができる。
【０２１４】 ペプチドの分泌が必要とされる場合、これがトランスポーターのようなタンパ
ク質を含むマルチ膜貫通ドメイン内で達成されることは難しく、適切な分泌信号
がベクター中に組み込まれる。信号配列は、これらのペプチドに内生であるか、
又はペプチドに非相同であり得る。
【０２１５】 ペプチドが媒体内で分泌されない場合、典型的にはトランスポーターの場合、
タンパク質は、凍結融解、超音波処理、機械的破壊、分解試薬等の標準的な破壊
操作によって、宿主細胞から単離されることができる。ペプチドは、硫酸アンモ
ニウム沈降、酸抽出、又はアニオン又はカチオン交換クロマトグラフィ、ホスホ
セルロースクロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、アフィニティ
クロマトグラフィ、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、レクチンクロマ
トグラフィ、又は高速液体クロマトグラフィを含む、公知の精製方法によって、
回収、精製されることができる。
【０２１６】 また、ここに記載されているペプチドの組み換え製造における宿主細胞に依存
して、ペプチドは種々のグリコシル化パターンを持ち、細胞に依存してバクテリ
ア内で製造される際にグリコシル化されないかもしれないことが理解される。さ
らにペプチドは、ホストを媒介する過程の結果として、いくつかの場合で最初に
修飾されたメチオニンを含むものであり得る。
【０２１７】ベクター及び宿主細胞の使用 ここに記載されているペプチドを発現している組み換え宿主細胞には、種々の
使用用途がある。まず、この細胞はトランスポータータンパク、又はペプチドの
生成に有用であり、トランスポータータンパク質又はフラグメントを必要量生成
するために、さらに精製を行うことができる。このため、発現ベクターを含む宿
主細胞は、ペプチドの生成に有用である。
【０２１８】 宿主細胞は、トランスポータータンパク質、又はトランスポータータンパク質
フラグメントに関連している細胞系のアッセイ、例えば上記したもの、同様に当
業者において周知の他の形態のものの実行において有用である。このため、天然
のトランスポータータンパク質を発現している組み換え宿主細胞は、トランスポ
ータータンパク質機能を促進又は阻害する化合物のアッセイに有用である。
【０２１９】 宿主細胞はまた、機能的な影響を受けるトランスポータータンパク質変異体を
同定するために有用である。変異が自然に生じて病理を引き起こすような場合、
突然変異を含む宿主細胞は、天然のトランスポータータンパク質の効果を示さず
に、トランスポータータンパク質変異体に要求される効果（例えば、機能を促進
、又は阻害）を持つ化合物のアッセイに有用である。
【０２２０】 遺伝子的に工作された宿主細胞は、さらにヒト以外の遺伝子組み換え動物を生
産するために用いることができる。遺伝子組み換え動物は、好適には哺乳類であ
り、例えば、１以上の細胞が組み換え遺伝子を含んだ、ラット又はマウスのよう
な齧歯動物である。組み換え遺伝子は、成長中の遺伝子組み換え動物の細胞のゲ
ノムに組み込まれ、１以上の細胞型又は組織において、成熟した動物のゲノム中
に残存する外生のＤＮＡである。これらの動物は、トランスポータータンパク質
の機能の研究、及びトランスポータータンパク質活性のモジュレータの同定及び
評価に有用である。遺伝子組み換え動物の他の例としては、ヒト以外の霊長類、
羊、犬、牛、ヤギ、鶏、及び両生類が含まれる。
【０２２１】 遺伝子組み換え動物は、例えば、マイクロインジェクション、レトロウイルス
感染によって、受精卵母細胞の雄性前核細胞内に核酸分子を導入し、卵母細胞が
偽妊娠性の雌性育成動物中で育成されることにより作製される。何れのトランス
ポータータンパク質ヌクレオチド配列も、マウスのようなヒト以外の動物のゲノ
ム中に組み換え遺伝子として導入されることができる。
【０２２２】 発現ベクターに有用な調整配列、又は他の配列は、何れも組み換え遺伝子配列
の一部分を形成することができる。イントロン配列及びポリアデニル化信号が、
すでに含まれていない場合には、これも含まれる。組織特異性調整配列は、特定
の細胞に対しトランスポータータンパク質が直接発現するために、組み換え遺伝
子に有効に結合されることができる。
【０２２３】 受胎操作及びマイクロインジェクションを通して、遺伝子組み換え動物を生産
する方法、特にマウスのような動物を用いる方法は、当業界において一般化され
ており、例えば、U.S. Patent Nos. 4,736,866、及び 4,870,009, by Leder et
al., U.S. Patent No. 4,873,191 by Wagner et al. and in Hogan, B., Manipu
lating the Mouse Embryo, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spri
ng Harbor, N.Y., 1986) に記載されている。また、同様の方法が、他の遺伝子
組み換え動物の生産のために用いられている。最初の遺伝子組み換え動物は、ゲ
ノム中の組み換え遺伝子の存在及び／又は動物の組織や細胞内での遺伝子組み換
えｍＲＮＡの発現に基づいて確認されることができる。最初の遺伝子組み換え動
物は、その後、さらに組み換え遺伝子を有する動物を繁殖するために用いられる
ことができる。その上、組み換え遺伝子を有している遺伝子組み換え動物は、さ
らに他の組み換え遺伝子を有する他の遺伝子組み換え動物へと生育されることが
できる。遺伝子組み換え動物はまた、ここに記載されている相同的な組み換え宿
主細胞を用いて製造された、全ての動物又は動物の組織が含まれる。
【０２２４】 他の例では、ヒト以外の遺伝子組み換え動物は、組み換え遺伝子の調節された
発現を行う選択システムを含むものとして生産されることができる。このような
システムの１つの例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナ
ーゼシステムである。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼシステムについての記載
は、例えば、Lakso et al. PNAS 89:6232-6236 (1992)参照。リコンビナーゼシ
ステムのもう一つの例は、Ｓ. ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコンビナーゼシ
ステムである (O'Gorman et al. Science 251:1351-1355 (1991)。ｃｒｅ／ｌｏ
ｘＰリコンビナーゼシステムが組み換え遺伝子の発現の調節に用いられる場合は
、動物において、Ｃｒｅリコンビナーゼ及び選択されたタンパク質の両方をコー
ド化している組み換え遺伝子が含まれていることが必要である。このような動物
は、例えば、一方は選択されたタンパク質をコード化した組み換え遺伝子を持ち
、他方はリコンビナーゼをコード化した組み換え遺伝子を持った２つの組み換え
遺伝子動物を交配させることにより、「二重」遺伝子組み換え動物を構成するこ
とによって提供される。
【０２２５】 ここに記載されるヒト以外の遺伝子組み換え動物のクローンは、また、Wilmut
, I. et al. Nature 385:810-813 (1997)及び、PCT International Publication
Nos. WO 97/07668 and WO 97/07669に記載されている方法に従って生産される
ことができる。簡単に述べると、遺伝子組み換え動物からの細胞、例えば体細胞
は、単離されて、成長サイクルから出てＧ０相に入れられるように誘導すること
ができる。静止細胞は、例えば、電気パルスの使用によって、単離された静止細
胞と同種の動物の細胞核を取り除かれた卵母細胞に融合されることができる。再
構成された卵母細胞は、桑実胚又は芽細胞に発達するように培養され、その後、
偽妊娠性の雌性育成動物中に移される。この雌性育成動物から誕生する子孫は、
細胞、例えば体細胞を単離した動物のクローンとなる。
【０２２６】 ここに記載されているペプチドを発現する組み換え細胞を含んだ遺伝子組み換
え動物は、in vivoの環境で、ここに記載したようなアッセイを行うために有用
である。したがって、生体内に存在し、リガンド結合、トランスポータータンパ
ク質活性化、信号伝達に影響を与えている各種の生理学的ファクターは、in vit
roの無細胞系又は細胞系のアッセイでは明らかにならないかもしれない。このた
め、これらは、リガンド相互作用、トランスポータータンパク質機能及びリガン
ド相互作用に対する特定の変異体トランスポータータンパク質の影響、及びキメ
ラトランスポータータンパク質の影響を含むトランスポータータンパク質機能を
、in vivoでアッセイするための、ヒト以外の遺伝子組み換え動物を提供するた
めに有用である。また、実質的に又は完全に一つ以上のトランスポータータンパ
ク質機能を除去する突然変異である、ｎｕｌｌ変異の影響を評価することも可能
である。
【０２２７】 本明細書において、上に記載された全ての刊行物及び特許は、ここに参考とし
て折り込まれている。本発明に記載された方法及びシステムの各種修正及び変形
は、本発明の範囲及び精神から外れない限り、当業者において明らかなものであ
る。本発明は、特定の好適な具体例に関連して記述されているが、特許請求の範
囲に記載された発明は、このような特定の実施例に不当に限定されないと理解さ
れるべきである。実際に、本発明を実施するための上記方法の各種変形は、分子
生物学又は関連分野の当業者において明らかであり、このようなものも特許請求
の範囲に含まれるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、本発明のトランスポータータンパク質をコード化するｃＤＮＡ分子の
ヌクレオチド配列を示す（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１）。さらに、ここにはＡＴＧ開
始、終止、及び組織分布のような構造及び機能情報が示され、この分子配列に基
づいた発明の特定用途を容易に決定することができる。図１に示す実験データは
、ヒトの肺、リンパ液、腎臓、心臓、白血球、甲状腺、脳下垂体、脳（胎児を含
む）、副腎、睾丸、腎臓、小腸、膵臓、肝臓、胎盤、骨格筋、脾臓、及びヒーラ
ー細胞での発現を示した。
【図２】 図２は、本発明のトランスポータータンパク質の予測アミノ酸配列を示す（Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ．２）。さらに、ここにはタンパク質ファミリー、機能、変更部
位のような構造及び機能情報が示され、この分子配列に基づいた発明の特定用途
を容易に決定することができる。
【図３】 図３は、本発明のトランスポータータンパク質をコード化している遺伝子領域
のゲノム配列を示す（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３）。さらに、ここにはイントロン／
エクソン構造、プロモーター位置のような構造及び機能情報が示され、この分子
配列に基づいた発明の特定用途を容易に決定することができる。図３に示される
ように、Ｃ１３６３ＧのＳＮＰ、及びタンパク質位置６９９におけるＶ／Ａのア
ミノ酸多形が確認された。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 45/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 ４Ｂ０６５ Ａ６１Ｐ 43/00 １０１ 16/18 ４Ｃ０８４ Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｍ 1/00 Ａ ４Ｃ０８５ 16/18 Ｃ１２Ｎ 1/15 ４Ｈ０４５ Ｃ１２Ｍ 1/00 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 5/10 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/02 33/50 Ｚ 1/68 33/53 Ｍ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/566 33/50 37/00 １０２ 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/566 5/00 Ａ 37/00 １０２ 15/00 Ｆ (31)優先権主張番号 ０９／８０３，６７０ (32)優先日 平成13年３月12日(2001．3．12) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 レイ，インディン アメリカ合衆国 メリーランド州 20850 ロックビル，ウェスト グーデ ドライ ブ 45，セレーラ内 (72)発明者 ケチャム，カレン，エー アメリカ合衆国 メリーランド州 20850 ロックビル，ウェスト グーデ ドライ ブ 45，セレーラ内 (72)発明者 ディ フランセスコ，バレンティナ アメリカ合衆国 メリーランド州 20850 ロックビル，ウェスト グーデ ドライ ブ 45，セレーラ内 (72)発明者 ビーズリー，エレン，エム アメリカ合衆国 メリーランド州 20850 ロックビル，ウェスト グーデ ドライ ブ 45，セレーラ内 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA40 BB03 BB20 CB01 CB17 CB21 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 FB02 4B024 AA01 AA11 AA19 BA80 CA02 CA09 CA12 DA01 DA02 DA05 DA11 DA12 GA11 HA11 HA14 4B029 AA07 AA21 AA23 BB20 CC01 CC02 CC03 CC08 FA12 FA15 4B063 QA01 QA05 QQ21 QQ41 QQ43 QQ53 QQ61 QQ79 QQ89 QR08 QR32 QR35 QR40 QR42 QR55 QR62 QR77 QR80 QR84 QS16 QS25 QS34 QS36 QX01 QX02 QX10 4B064 AG01 CA01 CA19 CC01 CC24 DA01 DA13 4B065 AA01X AA58X AA72X AA87X AA93Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA44 CA46 4C084 AA19 NA14 ZA312 4C085 AA14 CC03 EE01 EE05 4H045 AA10 AA20 AA30 BA10 CA40 EA20 EA50 FA74

Claims (23)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 下記グループから選択されるアミノ酸配列から成る単離ペプ
    チド。 （ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列; （ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列の対立変異体のアミノ酸配
    列であって、該対立変異体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１又は３に示される核酸分子
    の対向鎖に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によって
    コード化されていることを特徴とするアミノ酸配列; （ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列のオルトログのアミノ酸配
    列であって、該オルトログは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１、又は３に示される核酸分
    子の対向鎖に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によっ
    てコード化されていることを特徴とするアミノ酸配列;及び （ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列のフラグメントであって、
    該フラグメントは、少なくとも１０の隣接するアミノ酸を含むことを特徴とする
    アミノ酸配列。
  2. 【請求項２】 下記グループから選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチ
    ド。 （ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列; （ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列の対立変異体のアミノ酸配
    列であって、該対立変異体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１又は３に示される核酸分子
    の対向鎖に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によって
    コード化されていることを特徴とするアミノ酸配列; （ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列のオルトログのアミノ酸配
    列であって、該オルトログは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１又は３に示される核酸分子
    の対向鎖に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によって
    コード化されていることを特徴とするアミノ酸配列;及び （ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列のフラグメントであって、
    該フラグメントは、少なくとも１０の隣接するアミノ酸を含むことを特徴とする
    アミノ酸配列。
  3. 【請求項３】 請求項２記載のペプチドに選択的に結合する単離抗体。
  4. 【請求項４】 下記グループから選択されるヌクレオチド配列から成る単離
    核酸分子。 （ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列をコード化するヌクレオチ
    ド配列; （ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列の対立変異体をコード化す
    るヌクレオチド配列であって、該ヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１又
    は３に示される核酸分子の対向鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズ
    することを特徴とするヌクレオチド配列; （ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列のオルトログをコード化す
    るヌクレオチド配列であって、該ヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１又
    は３に示される核酸分子の対向鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズ
    することを特徴とするヌクレオチド配列;及び （ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列のフラグメントをコード化
    するヌクレオチド配列であって、該フラグメントは、少なくとも１０の隣接する
    アミノ酸を含むことを特徴とするヌクレオチド配列。 （ｅ）（ａ）〜（ｄ）のヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列。
  5. 【請求項５】 下記グループから選択されるヌクレオチド配列を含む単離核
    酸分子。 （ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列をコード化するヌクレオチ
    ド配列; （ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列の対立変異体をコード化す
    るヌクレオチド配列であって、該ヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１又
    は３に示される核酸分子の対向鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズ
    することを特徴とするヌクレオチド配列; （ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列のオルトログをコード化す
    るヌクレオチド配列であって、該ヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１又
    は３に示される核酸分子の対向鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズ
    することを特徴とするヌクレオチド配列;及び （ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列のフラグメントをコード化
    するヌクレオチド配列であって、該フラグメントは、少なくとも１０の隣接する
    アミノ酸を含むことを特徴とするヌクレオチド配列。 （ｅ）（ａ）〜（ｄ）のヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列。
  6. 【請求項６】 請求項５記載の核酸分子を含む遺伝子チップ。
  7. 【請求項７】 請求項５記載の核酸分子を含むヒト以外の遺伝子組み換え動
    物。
  8. 【請求項８】 請求項５記載の核酸分子を含む核酸ベクター。
  9. 【請求項９】 請求項８記載のベクターを含む宿主細胞。
  10. 【請求項１０】 請求項１記載の何れかのペプチドを製造する方法であって
    、（ａ）〜（ｄ）の何れかのアミノ酸配列をコード化するヌクレオチド配列を宿
    主細胞内に導入し、ペプチドがヌクレオチド配列から発現される条件下で宿主細
    胞を培養する方法。
  11. 【請求項１１】 請求項２記載の何れかのペプチドを製造する方法であって
    、（ａ）〜（ｄ）の何れかのアミノ酸配列をコード化するヌクレオチド配列を宿
    主細胞内に導入し、ペプチドがヌクレオチド配列から発現される条件下で宿主細
    胞を培養する方法。
  12. 【請求項１２】 サンプル中における請求項２記載の何れかのペプチドの存
    在を検出する方法であって、サンプル中の該ペプチドの存在を特異的に検出する
    試薬とサンプルとを接触させ、該ペプチドの存在を検出する方法。
  13. 【請求項１３】 サンプル中における請求項５記載の核酸分子の存在を検出
    する方法であって、ストリンジェントな条件下で該核酸分子にハイブリダイズす
    るオリゴヌクレオチドとサンプルとを接触させ、サンプル中の該核酸分子とオリ
    ゴヌクレオチドが結合するかどうかを判定する方法。
  14. 【請求項１４】 請求項２記載のペプチドのモジュレータを同定する方法で
    あって、該ペプチドと試薬とを接触させ、該試薬が該ペプチドの機能又は活性を
    変調したかどうかを判定する方法。
  15. 【請求項１５】 請求項１４記載の方法において、前記試薬は前記ペプチド
    を発現する発現ベクターを含む宿主細胞に対して与えられる方法。
  16. 【請求項１６】 請求項２に記載の何れかのペプチドに結合する試薬を同定
    する方法であって、ペプチドと試薬とを接触させ、接触混合物中にペプチドと試
    薬とが結合した複合体が形成されるかどうかをアッセイする方法。
  17. 【請求項１７】 請求項１６記載の方法により同定された試薬と、薬学的に
    許容可能なそれらの担体とを含む薬剤組成物。
  18. 【請求項１８】 ヒトトランスポータータンパク質により媒介される疾患又
    は症状を治療する方法であって、請求項１６記載の方法で同定された試薬を薬学
    的に有効な量、患者に投与する方法。
  19. 【請求項１９】 請求項２に記載のペプチドの発現のモジュレータを同定す
    る方法であって、該ペプチドを発現する細胞と試薬とを接触させ、該試薬が該ペ
    プチドの発現を変調したかどうかを測定する方法。
  20. 【請求項２０】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示されるアミノ酸配列と少なくと
    も７０％の相同性を持つアミノ酸配列を有する単離ヒトトランスポーターペプチ
    ド。
  21. 【請求項２１】 請求項２０のペプチドにおいて、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に
    示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の相同性を持つアミノ酸配列を有する
    ペプチド。
  22. 【請求項２２】 ヒトトランスポーターペプチドをコード化している単離核
    酸分子であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１又は３に示される核酸分子と少なくとも
    ８０％の相同性を有している核酸分子。
  23. 【請求項２３】 請求項２２の核酸分子において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１又
    は３に示される核酸分子と少なくとも９０％の相同性を有している核酸分子。
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