JP2003525569A

JP2003525569A - 貪食作用遺伝子およびその使用

Info

Publication number: JP2003525569A
Application number: JP2000528677A
Authority: JP
Inventors: リウ，チオン; ヘンガートナー，マイケル，オー．; ボガート，ティエリー，アンドレ，オリバー，エディー; クリーキンジェ，ウィム，マリア，レンバン
Original assignee: コールドスプリングハーバーラボラトリー; デヴゲンエヌ．ブイ．
Priority date: 1998-01-23
Filing date: 1999-01-21
Publication date: 2003-09-02
Also published as: CA2318935A1; EP1049776A1; AU2240899A; AU746409B2; PL342082A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路に関し、具体的には、線虫Ｃ．エレガンスにおけるＣＥＤ−６として知られるタンパク質、該タンパク質のヒト同等物およびそれらをコードする核酸に関する。また、本発明は、前記シグナル伝達経路を増強または阻害する化合物を検出するアッセイ方法における該タンパク質およびコードする核酸の使用ならびにタンパク質、核酸および同定されたエンハンサーまたはインヒビター化合物のヒトまたは動物疾患の処置方法における使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】関連出願本出願は、１９９８年９月２４日提出の英国特許出願第９８２０８１６．８号
明細書および１９９８年６月１１日提出の英国特許出願第９８１２６６０．０号
明細書の一部継続出願であり、それらに対する優先権を主張し、１９９８年６月
１１日提出の米国特許出願第０９／０９６，３４７号明細書および１９９８年６
月１１日出願の米国特許出願第０９／０９６，６３１号明細書の一部継続出願で
あり、それらに対する優先権を主張するものであり、かつ１９９８年１月２３日
提出の米国仮出願第６０／０７２，３２４号明細書の利益を享受するものである
。これらの参照される特許出願の教示はその全体が参照により本明細書中に取り
込まれる。

【０００２】政府の支援本発明は、国立衛生研究所の補助金ＧＭ５２５４０によってその全体または一
部が支援された。政府は本発明において一定の権利を有する。

【０００３】発明の背景貪食作用または取り込みは、真核生物が非常に大きな粒子または細胞全体さえ
も取り込むエンドサイトーシスの特殊な形態である。これは、アメーバ属などの
単細胞生物から哺乳動物まで保存されている基本的な生体プロセスである（Ｍｅ
ｔｃｈｎｉｋｏｆｆ，Ｅ．（１８９１）、炎症の比較病理学に関する講演；パス
ツール研究所において実施、１８９１、１９６８（ＮｅｗＹｏｒｋ：Ｄｏｖｅ
ｒＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ））。貪食作用は、最初は摂食および防御の二重の
目的に使用され、中胚葉の発生後、侵入する生物に対し宿主を防御し、かつ異物
粒子および細胞片を取り除くために使用される機構に進化した（Ｍｅｔｃｈｎｉ
ｋｏｆｆ、１８９１）。近年、貪食作用の重要性が、プログラム細胞死（アポト
ーシス）を受けている細胞を除くときのその役割のために広がっている。アポト
ーシスは多数のヒト疾患に関与しているために、この貪食作用の調節を解明する
ことは、これらの疾患における新たな治療的介入経路をもたらすであろうために
非常に望ましい。従って、貪食作用を調節する遺伝子およびタンパク質を単離す
る必要がある。さらに、アポトーシス細胞の貪食作用に関連する疾患の治療的処
置を必要とする。

【０００４】発明の要旨Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓにおける遺伝子研究により、プログラム細胞死に機能する
１２個を超える遺伝子が同定されている。本発明者らは、ポジショナル法を使用
して、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６遺伝子をクローニングし、機能的に特徴
付けを行った。ＣＥＤ−６タンパク質は、１つのホスホチロシン結合ドメインと
、ＳＨ３結合部位と考えられるいくつかのドメインとを含むことが示される。さ
らに、ＣＥＤ−６は、取り込み細胞内において作用し、初期の細胞残骸と永続性
（ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ）細胞残骸との両方の除去を促進するように機能してい
ることが示されている。ＣＥＤ−６の過剰発現は、ＣＥＤ−１とＣＥＤ−７との
両方の取り込み欠損が部分的に抑制することができ、ＣＥＤ−６がこれらの２つ
の遺伝子の下流で機能することを示唆する。ＣＥＤ−６は、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ
のアポトーシス細胞の取り込みを媒介するシグナル伝達経路におけるアダプター
分子として作用する。本発明者らはまた、哺乳動物細胞において類似プロセスに
関与していることが示されている、スプライシング変異体を含むヒトＣＥＤ−６
ホモログの同定、単離および特徴づけを行った。

【０００５】本発明は、単離された形態で、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６タンパク質で
あるタンパク質またはそれと同等な機能を有するタンパク質、および該タンパク
質のヒトホモログを提供し、以下、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６およびｈ３
ＣＥＤ−６という。

【０００６】さらに、本発明は、ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６およびｈ３
ＣＥＤ−６の機能的フラグメント、例えば、ホスホチロシン結合ドメインおよび
／またはプロリン／セリンリッチ領域に対応するフラグメントを提供する。

【０００７】さらに、本発明は、ＣＥＤ−６およびＣＥＤ−６のヒトホモログをコードする
単離された核酸、ならびに上記のＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６
およびｈ３ＣＥＤ−６の機能的フラグメントをコードする核酸を提供する。

【０００８】本発明はさらに、上記核酸のいずれかのアンチセンスである核酸または低スト
リンジェンシー、中ストリンジェンシーまたは高ストリンジェンシー条件下に上
記核酸のいずれかとハイブリダイズし得る核酸あるいはその一部もしくはフラグ
メントを提供する。

【０００９】さらに、本発明は、ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６、ｈ３ＣＥ
Ｄ−６をコードする核酸、または上記タンパク質の機能的フラグメントをコード
する核酸を含有した発現ベクターを提供する。

【００１０】さらに、本発明は、ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６および／ま
たはｈ３ＣＥＤ−６をコードする核酸の１以上によりトランスフェクトされた哺
乳動物細胞株を提供する。

【００１１】さらに、本発明は、上記のタンパク質、核酸およびトランスフェクト細胞を使
用して、ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６および／またはｈ３ＣＥ
Ｄ−６が関与するシグナル伝達経路を増強または阻害する化合物を同定するアッ
セイ方法を提供する。

【００１２】さらに、本発明は、上記のトランスフェクト細胞を使用して、ＣＥＤ−６遺伝
子、ｈ１ＣＥＤ−６遺伝子、ｈ２ＣＥＤ−６遺伝子またはｈ３ＣＥＤ−６遺伝子
の発現を増強または阻害する化合物を同定するアッセイ方法を提供する。

【００１３】さらに、本発明は、ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６および／ま
たはｈ３ＣＥＤ−６のエピトープと反応する抗体を提供する。

【００１４】本発明はさらに、炎症、自己免疫疾患またはガンなどの病因がアポトーシス細
胞もしくは他の疾患細胞の取り込みの機能不全に帰因するであろう疾患を、ＣＥ
Ｄ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６のエンハンサー
である上記のタンパク質または核酸または化合物の１以上を患者に投与すること
によって処置する方法を提供する。

【００１５】さらに、本発明は、神経変性疾患、卒中または鎌状赤血球貧血などのアポトー
シス細胞の取り込みを低下させることから恩恵をうけるであろう疾患を、ＣＥＤ
−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６のインヒビターで
ある上記のタンパク質または核酸または化合物の１以上を患者に投与することに
よって処置する方法を提供する。

【００１６】さらに、本発明は、ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３
ＣＥＤ−６をコードする核酸もしくはその相補体またはＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ
−６、ｈ２ＣＥＤ−６もしくはｈ３ＣＥＤ−６に対する抗体を使用して、遺伝子
的欠損を検出する、ヒトまたは動物の疾患の診断方法を提供する。

【００１７】さらに、本発明は、ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３
ＣＥＤ−のタンパク質が関連するシグナル伝達経路においてＣＥＤ−６、ｈ１Ｃ
ＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−のタンパク質と相互作用するタン
パク質の同定方法を提供する。

【００１８】さらに、本発明は、ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６もしくはｈ
３ＣＥＤ−６またはホスホチロシン結合ドメインまたはセリンプロリンリッチ領
域などのその機能的フラグメントがエピトープ標識またはレポーター遺伝子産物
などの別のタンパク質に融合した融合タンパク質を提供する。

【００１９】さらに、本発明は、化合物が、ＣＥＤ−６が関与するシグナル伝達経路のエン
ハンサーまたはインヒビターであるかどうかを、ＣＥＤ−６の発現を変化させた
Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ蠕虫における前記化合物の作用を観察することによって決定
する方法を提供する。

【００２０】発明の詳細な説明選択的にスプラシングされたｈ２ＣＥＤ−６をコードするｃＤＮＡ、およびｈ
２ＣＥＤ−６からｈ３ＣＥＤ−６を構成するために必要とされるさらなる配列を
コードするｃＤＮＡは、ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｕｍｖｏｏｒＭｏｌｅｃｕｌ
ａｒＢｉｏｌｏｇｉｅ−ｐｌａｓｍｉｄｅｎｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅ（ＬＭＢＰ
）のＢｅｌｇｉａｎＣｏｏｒｄｉｎａｔｅｄＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓｏｆ
Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ（ＢＣＣＭ）ゲント大学、Ｋ．Ｌ．Ｌｅｄｅ
ｇａｎｃｋｓｔｒａａｔ３５、Ｂ９０００、Ｇｅｎｔ、ベルギーにブダペスト条
約に従って１９９８年６月８日に寄託され、それぞれ、寄託番号ＬＭＢＰ３８６
８および同ＬＭＢＰ３８６９が割り当てられた。

【００２１】これらの寄託物から関連する挿入断片を得るために役に立つプライマーを実施
例４に示す。

【００２２】

【表１】

【００２３】Ｃ．ＥＬＥＧＡＮＳＣＥＤ−６プログラムされた細胞死は、従来的には、細胞殺傷および死細胞除去の２つの
異なる連続したプロセスに分けられている。しかし、これらの２つの事象はかな
り密接に連携している。生体内において、アポトーシス的形態学を示す細胞は、
通常、既に他の細胞によって包み込まれている（ＷｙｌｌｉｅＡ．Ｈ．他、１
９８０、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．６８、２５１〜３０６；Ｌｏｃｋｓｈｉ
ｎＲ．Ａ．（１９８１）、生物学および病理学における細胞死（ＣｅｌｌＤ
ｅａｔｈｉｎＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＰａｔｈｏｌｏｇｙ）、Ｒ．Ａ．Ｌ
ｏｃｋｓｈｉｎおよびＩ．Ｄ．Ｂｒｏｗｅｎ編（Ｌｏｎｄｏｎ：Ｃｌａｐｍａｎ
ａｎｄＨａｌｌ）、７９頁〜１２２頁；ＤｕｖａｌｌおよびＷｙｌｌｉｅ（
１９８６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、７、１１５頁〜１１９頁；Ｒｏｂｅｒ
ｔｓｏｎおよびＴｈｏｍｐｓｏｎ（１９８２）Ｊ．Ｅｍｂｒｙｏｌ．Ｅｘｐ．Ｍ
ｏｒｐｈ．６７、８９頁〜１００頁；Ｈｅｄｇｅｃｏｃｋ他（１９８３）Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ、２２２、１２７７〜１２７９；Ｅｌｌｉｓ他（１９９１）Ｇｅｎｅｔ
ｉｃｓ、１２９、７９頁〜９４頁）。取り込みはまた、線虫のＣａｅｎｏｒｈａ
ｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎｓにおける迅速で効率的なプロセスである：死にか
けている細胞は、１時間以内に、その近くの細胞によって包み込まれて完全に除
去される（ＳｕｌｓｔｏｎおよびＨｏｒｖｉｔｚ（１９７７）、Ｄｅｖ．Ｂｉｏ
ｌ．５６、１１０頁〜１５６頁；ＲｏｂｅｒｔｓｏｎおよびＴｈｏｍｓｏｎ、１
９８２）。取り込みは、必ずしも専門的な食細胞によるものではない。アポトー
シス細胞の迅速な取り込みは、死にかけている細胞がその溶解途中で潜在的に有
害な内容物を放出しないようにするために重要であり、そのような有害物は周り
の組織に損傷を及ぼして炎症性応答を生じさせ得る（Ｄｕｖａｌｌ他（１９８５
）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、５６、３５１頁〜３５８頁；Ｓａｖｉｌｌ他（１９８
９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８３、８６５頁〜８７５頁；Ｇｒｉｇｇ他（
１９９１）Ｌａｎｃｅｔ、３５８、７２０頁〜７２２頁；Ｓａｖｉｌｌ他（１９
９３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、１４、１３１頁〜１３６頁）。

【００２４】線虫Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓは、プログラムされた細胞死を研究するために広く使
用されている（総説：Ｈｅｎｇａｒｔｎｅｒ（１９９７）、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ
における細胞死ＩＩ（ＣｅｌｌＤｅａｔｈｉｎＣ．ｅｌｅｇａｎｓ II）
、ＰｌａｉｎＶｉｅｗ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｕｒＬａｂｏ
ｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、３８３頁〜４１５頁）。遺伝子研究により、Ｃ．ｅ
ｌｅｇａｎｓにおけるアポトーシスの調節および発現において機能している１２
個を超える遺伝子が同定されている。６個の遺伝子、ＣＥＤ−１、ＣＥＤ−２、
ＣＥＤ−５、ＣＥＤ−６、ＣＥＤ−７およびＣＥＤ−１０は、すべての死にかけ
ている細胞の取り込みにおいて機能している（Ｈｅｄｇｅｃｏｃｋ他、１９８３
；Ｅｌｌｉｓ他、１９９１；Ｈｏｒｖｉｔｚ他（１９９４）ＣｏｌｄＳｐｒｉ
ｎｇＨａｒｂｏｕｒＳｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．（１９９４）５９、
３７７頁〜３８５頁）。これらの遺伝子のいずれか１つが変異した動物において
、アポトーシス細胞の多くは包み込まれず、微分干渉位相（ＤＩＣ）光学装置で
容易に同定することができる高屈折性ディスクとして長時間にわたり消えずに残
っている（Ｈｅｄｇｅｃｏｃｋ他、１９８３；Ｅｌｌｉｓ他、１９９１）。これ
らの６個の取り込み遺伝子はいずれも、多くの死にかけている細胞がこれらの変
異体においてもやはり正しく除去されるので取り込みに絶対的に必須とされるも
のではない。様々な二重変異体の遺伝子分析によって、これらの６個の遺伝子は
２つの部分的に重複したグループを形成し得ることが示された：一方はＣＥＤ−
１、ＣＥＤ−６およびＣＥＤ−７からなり；もう一方はＣＥＤ−２、ＣＥＤ−５
およびＣＥＤ−１０からなる（Ｅｌｌｉｓ他、１９９１）。永続性細胞残骸の数
は、二重変異体を交配したグループでは劇的に増大し、同じグループ内での交配
では増大していない。これらの遺伝子が取り込みの調節においてどのように関与
しているかの理解には、その分子的性質を解明する必要がある。

【００２５】他の種において、いくつかの候補的なアポトーシスレセプターがこの数年間に
わたって同定されている；これらにはＡＴＰ結合性カセットトランスポーターＡ
ＢＣ１（ＬｕｃｉａｎｉおよびＣｈｉｍｉｎｉ（１９９６）ＥＭＢＯＪ．、１５、２２６頁〜２３５頁）、ビトロネクチンレセプター（Ｓａｖｉｌｌ他（１９
９０）Ｎａｔｕｒｅ、３４３、１７０頁〜１７３頁）、およびＣＤ３６（Ａｓｃ
ｈ他（１９８７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７９、１０５４頁〜１０６１頁
；Ｓａｖｉｌｌ他（１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０、１５１３頁
〜１５２２頁；Ｒｅｎ他（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８、１８５７頁〜
１８６２頁）などの接着分子、ショウジョウバエのクロケモルト（ｃｒｏｑｕｅ
ｍｏｒｔ）（Ｆｒａｎｃ他（１９９６）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、４、４３１頁〜４４
３頁）、Ａ型スカベンジャーレセプター（Ｐｌａｔｔ他（１９９６）Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３、１２４５６頁〜１２４６０頁）、
レクチン類（Ｄｕｖａｌｌ他（１９８５）、およびアポトーシス細胞の外側葉状
部（リーフレット）におけるホスファチジルセリンを認識し得る予想されるレセ
プター（Ｆａｄｏｋ他（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８、２２０７頁〜
２２１６頁；Ｆａｄｏｋ他（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９、４０２９
頁〜４０３５頁）が含まれる。現在、表面レセプターから細胞骨格にシグナルを
伝達するために取り込み中の細胞によって使用される分子についてはほとんど知
られていない。また、これらの分子が、貪食作用に必要とされる局所的な細胞質
再編および動的伸張をどのように調節しているかについてもほとんど知られてい
ない（Ｓａｖｉｌｌ他１９９３）。Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓにおける取り込みの遺伝
子分析によって、これらのプロセスに関与する遺伝子を同定することができた。
実際、ＷｕおよびＨｏｒｖｉｔｚ（１９９８）（Ｎａｔｕｒｅ、３９２、５０１
頁〜５０４頁）は、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−５はヒトのＤＯＣＫ１８０と
相同的であり、取り込みの時に細胞骨格の再編を調節し得ることを示した。

【００２６】アポトーシスのプロセスは、ガン、自己免疫疾患、様々な神経変性疾患（筋萎
縮性側索硬化症、ハンチントン病およびアルツハイマー病など）、卒中、心筋梗
塞、およびＡＩＤＳを含む広範囲の疾患の病因論に関係し、あるいはそのような
広範囲の疾患の病理学と関連している（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ（１９９５）Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ、２６７、１４５６頁〜１４６２頁）。従って、アポトーシスを引き起こ
す分子事象をより十分に理解することは新規な治療的介入につながり得る。現在
の関心の多くが死プロセスの殺傷段階を制御する遺伝子およびタンパク質に向け
られている一方で、アポトーシス細胞を除去することはまたアポトーシスプログ
ラムの適正な全体的な機能発現にとって重要であることも証明されること、そし
てその除去によって（本明細書に記載されているような）治療的介入に関する別
の介入点が提供されることが十分にありうる。

【００２７】死にかけている細胞の認識および取り込みのプロセスは著しく迅速で効率的で
ある。動物において、別の細胞においてすでにアポトーシス特徴を有する細胞を
見つけることは本質的に不可能である。アポトーシス細胞のそのような迅速な認
識および貪食作用は生体内でのプログラムされた細胞死の重要な局面である：包
み込まれていないアポトーシス体は、炎症に至る二次的なネクローシスを経るこ
とがある。また、アポトーシス体が除去されないことによって、身体は（例えば
、カスパーゼによって生成されるタンパク質フラグメントに由来する）新たなエ
ピトープに曝され、おそらく自己免疫疾患の発症が促される。永続性のアポトー
シス体は、多くの場合、（過度なアポトーシスを導く）化学療法的介入の後で観
察され、そして細胞残骸のクリアランスが遅いと考えられている充実性腫瘍にお
いて特に多い。

【００２８】アポトーシス細胞の認識および取り込みを行う能力に加えて、専門的な食細胞
は特異的な表面レセプターを有する：例えば、Ｆｃレセプター（Ｒａｖｅｔｃｈ
（１９９４）Ｃｅｌｌ、７８、５５３〜５６０；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ他（１９９
３）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１１７、５２９頁〜５３４頁）、およびＣ３レセプタ
ー（Ｂｉａｎｃｏ他（１９７５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１４１、１２７８頁〜１
２９０頁；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ他（１９９５）ＴｒｅｎｄｓｉｎＣｅｌｌ
Ｂｉｏｌ．５、９３頁〜９９頁）など。これらのレセプターは、抗原オプソニン
化粒子を認識して、その貪食作用を誘発する。インヒビターの研究により、Ｆｃ
レセプターによって媒介される貪食作用はチロシンのリン酸化が必要であること
が示された（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ他、１９９３；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ、１９９５
）。本発明者らの研究は、アポトーシス細胞の取り込みはまたチロシンキナーゼ
のシグナル伝達経路によって媒介され得ることを示唆している。これらの２つの
経路は細胞表面の別個のレセプターを明らかに使用しているが、レセプターは、
最終的には同じ下流の取り込み機構に収斂しなければならず、従って少なくとも
いくつかの共通したシグナル伝達分子を共有し得る。

【００２９】本発明は、アポトーシス細胞の貪食作用を調節するシグナル伝達経路のアダプ
ター分子である単離されたタンパク質に関する。

【００３０】特定の態様において、本発明は、線虫Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ由来の単離されたタ
ンパク質であって、アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路に
おいて作用するアダプター分子であるタンパク質に関連する。このタンパク質は
、Ｆｉｇｕｒｅ２Ａに示されるアミノ酸配列（配列番号：２）、または同類ア
ミノ酸変化においてのみＦｉｇｕｒｅ２Ａと異なるアミノ酸配列を含む。上記
のように、Ｆｉｇｕｒｅ２Ａに示されているアミノ酸配列は、Ｃ．ｅｌｅｇａ
ｎｓのＣＥＤ−６のアミノ酸配列であり、そのコードＤＮＡもまた示されている
。

【００３１】別の局面において、本発明は、Ｆｉｇｕｒｅ２Ａのアミノ酸配列（配列番号
：２）をコードするヌクレオチドの配列を含む核酸（例えば、Ｆｉｇｕｒｅ２
Ａの約２２位〜約１５００位のヌクレオチドの配列、またはＦｉｇｕｒｅ２Ａ
に示されているヌクレオチドの全配列）を含む。

【００３２】本発明のさらなる態様において、Ｆｉｇｕｒｅ２Ａのアミノ酸配列を有する
タンパク質のフラグメントまたは一部、または同類アミノ酸変化においてのみＦ
ｉｇｕｒｅ２Ａに示されたものと異なるアミノ酸配列を有するタンパク質のフ
ラグメントまたは一部である単離されたタンパク質が提供される。例えば、その
ような部分は、ホスホチロシン結合性ドメインに対応するアミノ酸配列（配列番
号：４）（Ｆｉｇｕｒｅ２Ａの約４６位〜約１９３位のアミノ酸）、またはプ
ロリン／セリンリッチ（ｒｉｃｈ）領域に対応するアミノ酸配列（配列番号：６
）（Ｆｉｇｕｒｅ２Ａの約２４２位〜約３３９位のアミノ酸）を含むことがで
きる。

【００３３】Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６タンパク質のＰＴＢドメインまたはプロリン
／セリンリッチ領域をコードする核酸（それぞれ、配列番号：３および配列番号
：５）は、請求項に記載される発明により包含される。

【００３４】本発明のなおさらなる局面において、配列番号：１、３、５、７、９、１１、
１３、１５のヌクレオチドの配列に、低度、中度または高度のストリンジェンシ
ー条件でハイブリダイゼーションすることができる単離された核酸が提供される
。低度のストリンジェンシーとは、およそ、０．２〜２ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤ
Ｓ／２５℃〜５０℃を意味していることを理解しなければならない。

【００３５】本発明のさらなる態様において、配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１
４または１６のアミノ酸配列を有するタンパク質、あるいは同類アミノ酸変化に
おいてのみ配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６に示される
アミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を有するタンパク質を融合体の一部として含
む融合タンパク質が提供される。このタンパク質は、例えば、エピトープタグま
たはレポーター遺伝子の発現産物に融合させることができる。

【００３６】なおさらなる局面において、本発明により、配列番号：１、３、５、７、９、
１１、１３、１５の核酸配列のいずれかを含む発現ベクターが提供される。好ま
しくは、このベクターには、そのような核酸の発現によってレポーター遺伝子の
発現が生じるように本発明の核酸に関して配置される緑色蛍光タンパク質などの
レポーター遺伝子が組み込まれている。好ましくは、ＣＥＤ−６およびレポータ
ー遺伝子の融合体が発現される。

【００３７】本明細書中で使用されている用語「核酸」は、ゲノムＤＮＡ、ＲＮＡおよびｃ
ＤＮＡを含み得ることを理解しなければならない。

【００３８】ポジショナルクローニング法を使用して、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６遺
伝子がクローニングされ、そのヌクレオチド配列が決定された。さらに、そのタ
ンパク質の機能的な特徴付けが行われた。公的に入手可能なタンパク質配列デー
タベースを検索することによって、ＣＥＤ−６タンパク質は、Ｎ端側の半分にお
いて推定ホスホチロシン結合性ドメインを有し、そしてＣ端側の半分においてＳ
Ｈ３結合ドメインと考えられるプロリン／セリンリッチ領域を有することが明ら
かにされた。

【００３９】遺伝子モザイク分析ならびにレスキュー実験および過剰発現実験によって、Ｃ
ＥＤ−６は、取り込み中の細胞において自律的に作用し、アポトーシス細胞の取
り込みを促進することが示された。さらなるデータベース検索によって、機能的
な領域は驚くべきほどに進化的に保存されていることが確認された。従って、本
発明者らは、今回、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６遺伝子の２つのヒトホモロ
グをクローニングし、それらが同等の機能を有していることを示した。

【００４０】Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６の分子クローニングＥｌｌｉｓおよび共同研究者による先の遺伝子マッピング実験（Ｅｌｌｉｓ他
（１９９１）Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１２９、７９頁〜９４頁）では、ＣＥＤ−６遺
伝子は第３染色体のｄａｆ−４座の近くに配置されている（Ｆｉｇｕｒｅ１Ａ
）。ｄａｆ−４付近の領域が、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓゲノム配列コンソーシアムに
よってほとんど配列決定された（Ｗｉｌｓｏｎ他（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ、３
６８、３２頁〜３８頁）。ＣＥＤ−６の正確な物理的位置を決定するために、本
発明者らは、ともに約０．３Ｍｂｐであるこの領域において１３個のオーバーラ
ップコスミドを集めた。生殖系形質転換法（ＭｅｌｌｏおよびＦｉｒｅ（１９９
５）、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ（ＳａｎＤｉｅｇｏ
、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ）４５２頁〜４８２頁）を使用し、トランスジ
ェニック動物が産生した３倍胚を永続性細胞残骸の存在について評価することに
よって、これらのコスミドを、ＣＥＤ−６（ｎ１８１３）の取り込み欠損をレス
キューする能力について調べた。３回畳まれる胚は、細胞残骸が非常に多く、こ
の発達段階で容易に見られるため、初期研究に選ばれた。２つのオーバーラップ
コスミドのＦ５６Ｄ２およびＦ４３Ｆ１２は、ＣＥＤ−６（ｎ１８１３）の取り
込み欠損をレスキューできることが見出された。Ｆ５６Ｄ２由来のＤＮＡフラグ
メントを使用するさらなるレスキュー実験によって、レスキュー活性を含むこと
が確認された。

【００４１】遺伝子予想プログラムのＧＥＮＥＦＩＮＤＥＲ^TMによって、この領域は２つの
遺伝子を含むことが示唆された：Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓゲノム配列コンソーシアム
は、これらの遺伝子をＦ５６Ｄ２．７およびＣ０５Ｄ２．６の名称でＧｅｎｂａ
ｎｋに寄託した。ＲＴ−ＰＣＲおよびｃＤＮＡライブラリー（下記参照）のスク
リーニングを組み合わせて使用することによって、Ｆ５６Ｄ２．７の存在および
その予想されるイントロン／エキソンパターンが確認された。しかし、本発明者
らは、Ｃ０５Ｄ２．６は、単一の遺伝子に対応するというよりもむしろ、実際に
は２つの遺伝子に対応していることを見い出し、その上流転写物の末端とその下
流転写物の開始点との短い距離（＞＞＞ｂｐ）により、Ｃ０５Ｄ２．６Ａ／Ｂは
２遺伝子のオペロンであり得ることが示唆された（Ｚｏｒｉｏ他（１９９４）Ｎ
ａｔｕｒｅ、３７２、２７０頁〜２７２頁）。Ｃ０５Ｄ２．６Ｂは「下流」のス
プライシングリーダーＳＬ２に対してトランススプライシングされるが、上流転
写物のＣ０５Ｄ２．６Ａはより一般的なＳＬ１スプライシングリーダーに対して
トランススプライシングされることが見出された（Ｆｉｇｕｒｅ１Ｅ）。

【００４２】ＣＥＤ−６座ＸｈｏＩフラグメントに存在する３つの遺伝子のどれがＣＥＤ−６に対応する
かを決定するために、内部欠失または点変異を含有する多数の構築物を作製した
。Ｃ０５Ｄ２．６Ａ／Ｂオペロンの大部分の欠失は、ＣＥＤ−６レスキューにつ
いて何ら有害な作用を有していなかった。これに対して、Ｆ５６Ｄ２．７の第３
エキソンにフレームシフト変異を導入することによりフラグメントのレスキュー
活性はなくなった（Ｆｉｇｕｒｅ１Ｅ）。Ｆ５６Ｄ２．７がＣＥＤ−６の多コ
ピーサプレッサーであり得る可能性を除くために、そしてＦ５６Ｄ２．７がＣＥ
Ｄ−６座に対応し得るという疑いを確認するために、２つの既知のＣＥＤ−６対
立遺伝子（ｎ１８１３およびｎ２０９５）をこの領域内の何らかのヌクレオチド
変化について分析した。サザンブロット分析によって、ＣＥＤ−６（ｎ２０９５
）変異体においてＦ５６Ｄ２．７に影響する対立遺伝子特異的な制限断片長多型
性が明らかにされた（Ｆｉｇｕｒｅ２Ａ）。ｎ２０９５で認められたハイブリ
ダイゼーションパターンに基づいて、ＣＥＤ−６（ｎ１８１３）におけるＦ５６
Ｄ２．７の第４エキソン内での単一ヌクレオチドの欠失もまた同定された。この
変異は、リーディングフレームシフトをもたらし、短縮型タンパク質をもたらす
はずである（Ｆｉｇｕｒｅ２Ｂ）。まとめると、ゲノムレスキューおよび変異
のデータは、Ｆ５６Ｄ２．７がＣＥＤ−６に対応することを強く示唆した。

【００４３】ＣＥＤ−６転写物の同定ＣＥＤ−６の予想されるイントロン／エキソン構造を確認するために、本発明
者は、様々な段階が混合されている（ｍｉｘｅｄ−ｓｔａｇｅ）ｃＤＮＡライブ
ラリーをスクリーニングして、ＣＥＤ−６遺伝子に対応する１０個のクローンを
単離した。これらのクローンのいくつかは、スプライシングリーダーＳＬ２配列
を５’末端に含有していた。このことは、ＣＥＤ−６もまたオペロン内の下流遺
伝子であり得ることを示唆している。ＲＴ−ＰＣＲを、様々な段階が混合されて
いるＲＮＡについて、ＳＬ１およびＳＬ２の両方のトランススプライシングリー
ダーをＰＣＲ工程のプライマーとして使用して行った。興味深いことに、ＰＣＲ
増幅フラグメントの配列分析によって、ＳＬ１およびＳＬ２の両方のトランスス
プライシングリーダーがＣＥＤ−６転写物の５’末端に見出され得ることが明ら
かにされた（Ｆｉｇｕｒｅ２Ｂ）。ＣＥＤ−６オペロンにおける上流遺伝子は
、予想された遺伝子のＦ５６Ｄ２．１である。ＳＬ１によってトランススプライ
シングされるｍＲＮＡの存在は、ＣＥＤ−６もまた、第２の下流のプロモーター
から、上流遺伝子とは独立的に転写され得ることを示唆している。下流プロモー
ターの存在は、たとえＸｈｏＩフラグメントがＣＥＤ−６オペロン全体を含有し
ていない場合でも、なぜＸｈｏＩフラグメントがＣＥＤ−６変異体をレスキュー
し得るかを説明することができる。

【００４４】ＣＥＤ−６タンパク質はホスホチロシン結合性（ＰＴＢ）ドメインおよびプロリ
ン／セリンリッチ領域を含有する全長のＣＥＤ−６ｃＤＮＡは、４９２アミノ酸のタンパク質をコードすること
が予想される（Ｆｉｇｕｒｅ２Ｂ）。この予想されるＣＥＤ−６配列の公開さ
れている配列データベースを検索することによって、ＣＥＤ−６のＮ端側半分は
ホスホチロシン結合（ＰＴＢ）ドメインと予想されるドメインを含有することが
示された。ＰＴＢドメインは、適切な一次配列環境（ｃｏｎｔｅｘｔ）内に位置
するリン酸化されたチロシン残基への結合を促進する。ＰＴＢドメインは、ＳＨ
２ドメインと機能的には類似しているが、構造的には異なっている。本発明者ら
は、ＣＥＤ−６のＰＴＢドメインを、多数の他のタンパク質に見出されているＰ
ＴＢドメインと配列比較（ａｌｉｇｎ）した（Ｆｉｇｕｒｅ３Ａ）。二次構造
予想プログラムによって、大部分のこれらの構造エレメントもまたＣＥＤ−６の
ＰＴＢドメインに存在することが示唆される。

【００４５】知られているタンパク質に対するその類似性に加えて、ＣＥＤ−６のＰＴＢド
メインはまた、多数の発現配列タグ（ＥＳＴ、Ｆｉｇｕｒｅ３Ａ、Ｂ）の予想
される翻訳産物に対する著しい配列類似性を示した。実際、ＣＥＤ−６と多数の
これらのＥＳＴとの類似度は、ＣＥＤ−６と以前に特徴づけられたタンパク質の
いずれかとの類似度よりもずっと大きかった（Ｆｉｇｕｒｅ３Ａ、３Ｂ）。さ
らに、場合によっては、ＣＥＤ−６とＥＳＴとの配列類似性は、ＰＴＢドメイン
以外にも広がっていた（Ｆｉｇｕｒｅ３Ｂ）。ＣＥＤ−６はまた、２４個のア
ミノ酸領域（ｓｔｒｅｔｃｈ）に関して４２％がセリンであり、そしてプロリン
リッチ領域のクラスター群を伴うプロリン／セリンリッチ領域をそのＣ端側半分
に含有する（Ｆｉｇｕｒｅ２Ｂ、Ｆｉｇｕｒｅ３Ｂ）。これらのプロリンリ
ッチ領域は、ＰｘｘＰのいくつかの配列特徴によって特徴づけられた（Ｆｉｇｕ
ｒｅ２Ａ）。ＰｘｘＰは、ＳＨ３ドメインとの相互作用を促進することが明ら
かにされている（Ｒｅｎ他（１９９３）；Ｙｕ他（１９９４）Ｃｅｌｌ、７６、
９３３頁〜９４５頁；Ｇｒａｂｓ他（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７
２、１３４１９頁〜１３４２５頁）。ＰＴＢとプロリンリッチ領域との間には、
荷電残基が多い短い領域が存在する（４６アミノ酸に関して４１％が荷電アミノ
酸）。この非常に荷電した領域は、マウスのｐ９６、ＳｈｃおよびＣ．ｅｌｅｇ
ａｎｓのＭ１１０．５などのいくつかの他のＰＴＢドメイン含有タンパク質にも
見出されている（Ｆｉｇｕｒｅ３Ｂ）。

【００４６】種間のＣＥＤ−６の保存これらのＥＳＴクローンはまた、ＣＥＤ−６タンパク質と、ＰＴＢドメイン以
外の相同性領域を共有することが見出された。Ｃ．ＢｒｉｇｇｓａｅのＥＳＴク
ローンは、Ｎ端側の１３２アミノ酸についてＣＥＤ−６と７２％の同一性を有し
、Ｃ端側の１０３アミノ酸についてＣＥＤ−６と６４％の同一性を有している（
Ｆｉｇｕｒｅ３Ｂ）。３個の重複するヒトのＥＳＴクローンもまた得られ、１
つの配列に構築された。ヒトのＥＳＴ融合配列は、ＣＥＤ−６のＰＴＢドメイン
に対して約５４％の同一性を示した。このヒトＥＳＴ融合配列もまた、ＰＴＢド
メインの直ぐ後に非常に荷電した領域を含有している。ＰＴＢドメインの配列比
較に基づく進化樹により、ＣＥＤ−６は、ヒト、ショウジョウバエおよびＣ．Ｂ
ｒｉｇｇｓａｅ由来のＥＳＴクローンについてサブグループを構成することが示
された。このことは、これらのタンパク質は機能的に保存されていると考えられ
ることを示唆している。マウスのｐ９６、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＤｉｓａｂｌ
ｅｄ、およびＣ．ｅｌｅｇａｎｓＭ１１０．５は別のサブグループを構成した
（Ｆｉｇｕｒｅ３Ｃ）。進化樹により、Ｓｈｃサブグループは、ｐ９６サブグ
ループよりも、ＣＥＤ−６サブグループに類似していることもまた示された。

【００４７】ＣＥＤ−６は取り込み中の細胞内で細胞自律的に作用する遺伝子モザイク分析を、ＣＥＤ−６が取り込み中の細胞内または死にかけてい
る細胞内において作用しているかどうかを明らかにするために行った。便宜上、
成熟した生殖腺、生殖細胞および体細胞鞘細胞（Ｆｉｇｕｒｅ４Ａ）について
１対の細胞を使用した。卵子が形成される途中において、多くの卵母細胞はプロ
グラムされた細胞死を受け、通常、これらの死にかけている細胞は体細胞鞘細胞
によって包み込まれる（Ｈｅｎｇａｒｔｎｅｒ、１９９７）。この分析において
、生殖細胞および体細胞鞘細胞の間におけるＣＥＤ−６および野生型に関する遺
伝子背景のモザイクパターンが得られた。Ｎｃｌ−１変異体を使用して、モザイ
クパターンが１個の細胞の分解能（ｓｉｎｇｌｅ−ｃｅｌｌｒｅｓｏｌｕｔｉ
ｏｎ）で同定された。これは、動物のＮｃｌ−１変異体細胞は、ノルマスキー（
Ｎｏｒｍａｓｋｉ）光学装置で容易に同定することができる異常に拡大した核小
体を示すからである（Ｈｅｒｍａｎ、１９８４、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１０８、１
６５頁〜１８９頁；ＨｅｄｇｅｃｏｃｋおよびＨｅｒｍａｎ、１９９５、Ｇｅｎ
ｅｔｉｃｓ、１４１、９８９頁〜１００６頁）。ｄｐｙ−１７（ｅ１６４）ＣＥ
Ｄ−６（ｎ１８１３）ｍｅｃ−１４（ｕ５５）ｎｃｌ−１（ｅ１８６５）ｕｎｃ
−３６（ｅ２５１）ＩＩＩ；ｓＤｐ３の株を構築した。この蠕虫株は、ｓＤｐ３
（ＩＩＩ；ｆ）重複によりこれらの変異のすべてがカバーされるために野生型の
表現型を示した（Ｒｏｓｅｎｂｌｕｔｈ他（１９８５）Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１０
９、４９３頁〜５１１頁）。ＣＥＤ−６変異生殖細胞および野生型の体細胞鞘細
胞を有する動物を同定するために、Ｐ２、Ｐ３およびＰ４のいずれかの系統に由
来する重複喪失を有するが、ＥＭＳ、ＭＳ、または体細胞鞘細胞における重複を
喪失させるであろうＭＳよりも下流のいずれかの系統には重複喪失を有しない動
物を見つけなければならない（Ｆｉｇｕｒｅ４）。これらの動物は、構築され
た株の多くの動物を、ＤｐｙＵｎｃの子孫のみを産む動物について調べることに
よって得ることができる。Ｐ１系統における重複が喪失した動物もまたＤｐｙＵ
ｎｃの子孫のみを産むが、このような動物は、Ｐ１系統における重複の喪失は生
殖細胞および体細胞鞘細胞の両方においてＣＥＤ−６変異の背景をもたらすため
に今回の目的に合うモザイク動物ではない。１，０００匹のｄｐｙ−１７（ｅ１
６４）ＣＥＤ−６（ｎ１８１３）ｍｅｃ−１４（ｕ５５）ｎｃｌ−１（ｅ１８６
５）ｕｎｃ−３６（ｅ２５１）ＩＩＩ；ｓＤｐ３動物から、ＤｐｙＵｎｃの子孫
のみを産む６匹の動物が同定された。この６匹の動物をノルマスキー光学装置で
観察することによって、１匹の動物がＰ４において重複喪失を有し、１匹がＰ３
において重複喪失を有し、３匹がＰ２において重複喪失を有し、そして１匹がＰ
１において重複喪失を有していることが示された。Ｐ１における重複喪失を有す
る１匹を除く５匹の動物はすべて、生殖腺に細胞残骸を示さなかった。このこと
は、ＣＥＤ−６は取り込みのために生殖細胞系においては必要とされないことを
示唆している。すべての細胞分裂における重複喪失の可能性はほぼ同じである（
ＨｅｄｇｅｃｏｃｋおよびＨｅｒｍａｎ、１９９５）ために、ｓＤｐ３の喪失率
は細胞分裂あたり０．１５％である。次いで、ＣＥＤ−６変異の体細胞鞘細胞お
よび野生型生殖細胞を有する動物を探した。５００匹の動物から、生殖腺の一方
の腕での体細胞鞘細胞における拡大した核小体を有する４匹の動物が同定された
（Ｆｉｇｕｒｅ５Ｂ）：４匹の動物はすべて、生殖細胞を生成する系統におけ
る重複喪失を有していなかった（Ｆｉｇｕｒｅ４）。３匹の動物は、前腕の鞘
細胞における重複喪失を有するが、後腕では有していないようであった。さらに
、蓄積した細胞残骸が、これらの動物の前部生殖腺腕内に観察されるだけで、後
部生殖腺腕では認められなかった（Ｆｉｇｕｒｅ４、表）。１匹の動物は、後
部生殖腺腕を取り囲む鞘細胞における重複喪失を有していたが、前部生殖腺腕を
取り囲む鞘細胞における重複喪失を有していなかった。この動物は、後腕内に細
胞残骸が蓄積していたが、前腕内には蓄積していなかった（Ｆｉｇｕｒｅ４）
。これらの結果は、ＣＥＤ−６が、体細胞鞘細胞にとって、あるいは成熟した生
殖腺内の死にかけている細胞を除去するために取り込み中の細胞にとって必要で
あることを示唆している。

【００４８】ＣＥＤ−６は胚性細胞残骸および生殖細胞残骸の取り込みを促進するＦ５６Ｄ２．７ｃＤＮＡが実際にＣＥＤ−６に対応することを疑いなく明ら
かにするために、本発明者らは、全長のＦ５６Ｄ２．７ｃＤＮＡによってＣＥ
Ｄ−６変異体の取り込み欠損がレスキューし得るかどうかを調べ、そしてＣ．ｅ
ｌｅｇａｎｓの熱ショックプロモーター、ｈｓｐ−１６．２およびｈｓｐ−１６
．４８の制御下にＦ５６Ｄ２．７ｃＤＮＡを保持するトランスジェニック動物
を作製した（実施例を参照のこと）。これらの２つのプロモーターを共に用いた
場合、これらの２つのプロモーターは、プログラム細胞死を正常に受ける細胞と
死ぬ細胞を正常に取り込む細胞との両方を含むほとんどすべての体細胞において
発現を支配する。レスキューを調べるために、トランスジェニック雌性動物によ
り産生された胚を、最初の発生的細胞死が現れる直前に短い熱ショック処理に曝
し、孵化後の熱ショック処理動物に認められる永続性残骸の数をスコアした（Ｆ
ｉｇｕｒｅ４）。予想されるように、Ｆ５６Ｄ２．７ｃＤＮＡの過剰発現によ
り、ＣＥＤ−６変異体において認められる永続性細胞残骸の数は著しく特異的に
減少し、Ｆ５６Ｄ２．７がＣＥＤ−６（ｎ１８１３）変異体およびＣＥＤ−６（
ｎ２０９５）変異体において本発明者らが検出した変異によって影響を受ける関
連遺伝子であることが確認される。生殖系におけるＦ５６Ｄ２．７ｃＤＮＡの
レスキューをもまた調べた（Ｆｉｇｕｒｅ５Ｃ）。成熟した雌雄両性体を、生
殖細胞の細胞死が現れる直前に短い熱ショック処理パルスに曝し、熱ショックの
１２時間後およびその後における永続性細胞残骸の数を計数した。大部分の動物
の生殖腺において細胞残骸は見出されず、ＣＥＤ−６ｃＤＮＡもまた生殖細胞に
おけるＣＥＤ−６の取り込み欠損をレスキューし得ることを示唆する。

【００４９】アポトーシス細胞の認識および取り込みは、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのプログラム
細胞死におけるごく初期の事象である（ＲｏｂｅｒｔｓｏｎおよびＴｈｏｍｐｓ
ｏｎ（１９８２）Ｊ．Ｅｍｂｒｙｏｌ．Ｅｘ．Ｍｏｒｐｈ．６７、８９頁〜１０
０頁）。ＣＥＤ−６変異体において、細胞質の伸張（ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）はブ
ロックされ、細胞残骸の永続をもたらす（Ｅｌｌｉｓ他、１９９１）。しかし、
これらの細胞残骸は、最終的には動物から消失した。ＣＥＤ−６が細胞死の初期
段階における狭い時間枠でのみ作用しているかどうか、またはシグナル伝達経路
が、細胞死が生じた後、多くの時間をかけて形成される細胞残骸を包み込むため
に使用され得るかどうかを明らかにするために、本発明者らは、Ｆ５６Ｄ２．７
ｃＤＮＡが永続性細胞残骸の取り込みを促進するかどうかを調べた。ＣＥＤ−６
を、胚が孵化する３時間前に過剰発現され、そのとき、胚発生の間でプログラム
細胞死によって死ぬ細胞の大部分は約５時間の間で死に至り（Ｆｉｇｕｒｅ５
Ａ）、Ｌ１幼虫の頭部における熱ショックの３時間後の細胞残骸を調べられた。
多数の細胞残骸が著しく抑制されていることが見出された（Ｆｉｇｕｒｅ５Ｂ
）。熱処理なしかまたはｌａｃＺの過剰発現のいずれかを伴う対照実験により、
残骸発現における明確な作用は示されず、ＣＥＤ−６の過剰発現は、体細胞にお
ける細胞残骸の取り込みを促進し得ることを示唆する（Ｆｉｇｕｒｅ５Ｂ）。
また、本発明者らは、ＣＥＤ−６の過剰発現が、生殖系における細胞死の数時間
後に形成される細胞残骸の取り込みを促進し得るかどうかを調べた（Ｆｉｇｕｒ
ｅ５Ｄ）。熱ショックプロモーターにより支配されるＣＥＤ−６ｃＤＮＡを保
持する成熟トランスジェニック動物は、生殖腺において細胞残骸が蓄積した後の
いくつかの時点で熱により組織化され、熱ショックの１２時間後における細胞残
骸の数が調べられた。細胞残骸はすべての時点で十分に除去され得、ＣＥＤ−６
の過剰発現は、生殖系において蓄積した細胞残骸の取り込みが、数時間にわたっ
て、数日間にわたってさえ促進され得ることを示唆している（Ｆｉｇｕｒｅ５
Ｄ）。本発明者らは、ＣＥＤ−６が関与するシグナル伝達経路は細胞残骸を除去
する役割を担うことができ、そしてＣＥＤ−６がプログラム細胞死の過程の途中
で作用する特定の時間枠は存在しないということである。

【００５０】モザイクＣＥＤ−６タンパク質発現はＣＥＤ−６が取り込み中の細胞内で作用す
ることを支援する本発明は、ＣＥＤ−６が取り込み細胞内で作用するかどうかを迅速に検出する
方法を包含する。この方法は、死につつある細胞は、タンパク質発現のモザイク
パターンが生じるようにタンパク質を発現しないということに基づく。しかし、
生殖系において、すべての生殖細胞は１つのシンシチウム細胞質を有し（Ｈｉｒ
ｓｈ他（１９７６）ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ、４９、２０
０頁〜２１０頁）、従って、トランスジーンを保持するこれらの生殖細胞は、発
現タンパク質を、細胞質に、その後、すべての新しく生成した卵母細胞にもたら
し得るので、この考えは、体細胞に適用することができるだけであり、生殖細胞
には適用できないと考えられる。しかし、トランスジーンが生殖細胞において十
分に発現していないことが見出されているために、タンパク質発現のモザイクパ
ターンを生殖系において生成することができる。生殖腺における熱ショックプロ
モーターの発現パターンを調べた。熱ショックプロモーターにより支配されるｌ
ａｃＺトランスジーンを保持する成体動物を、Ｌ４脱皮の２４時間後に熱ショッ
クに供した。続いて、生殖細胞および鞘細胞の両方におけるβ−ｇａｌ染色を行
うことによってｌａｃＺ発現を調べた。体細胞鞘細胞は青く染色され、染色は熱
ショック後の６０時間持続し得るが、生殖細胞は熱ショック後のいかなる時点に
おいても染色されなかったことが見出され、類似する結果が以前の研究において
も観察されていた（Ｓｔｒｉｎｇｈａｍ他（１９９２）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢ
ｉｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅｃｅｌｌ、３、２２１〜２３３）。熱ショックに
対する生殖系におけるＣＥＤ−６の発現もまた、取り込み欠損のレスキュー活性
について熱処理トランスジェニック動物により産生された３倍胚について調べら
れた。大部分の胚はＣＥＤ−６変異の表現型を有していることが見出され、ＣＥ
Ｄ−６は生殖系では十分に発現していないことを示唆する。生殖腺におけるＣＥ
Ｄ−６トランスジーンがあまり十分に発現していないことは、ＣＥＤ−６が体細
胞鞘細胞内で作用するかどうかを調べるのに有用なツールを提供した。Ｆｉｇｕ
ｒｅ４および５に記載されるように、細胞残骸は、大部分の動物において、熱
処理を行った後の種々の時点での生殖腺で観察されず、この現象は熱処理の６０
時間以降も続いた（５Ｃ）。この結果に対照的に、熱処理を行わなかった場合、
これらのトランスジェニック動物は、ＣＥＤ−６（ｎ１８１３）変異体の結果と
同様に、細胞残骸を生殖腺に蓄積させた。ｌａｃＺの過剰発現もまた、ＣＥＤ−
６変異体の細胞残骸の発現に影響しなかった（５Ｃ）。これらの結果は、ＣＥＤ
−６は取り込み細胞である体細胞鞘細胞内で作用するであろうモザイク分析から
得られた結論を支持する。この方法は、遺伝子が取り込み細胞または死ぬ細胞に
おいて作用しているかどうかを検出するための簡便な方法を提供する。

【００５１】ＣＥＤ−１およびＣＥＤ−７に関連したＣＥＤ−６の活性部位ＣＥＤ−６が任意の他の取り込み遺伝子と遺伝子的に相互作用しているかどう
かを理解するために、ＣＥＤ−６を、ＣＥＤ−１、７、２、５および１０の遺伝
子バックグラウンドのもとで過剰発現（ｏｖｅｒ- ｅｓｐｒｅｓｓｅｄ）した。
熱ショックプロモーターにより支配されるＣＥＤ−６ｃＤＮＡを保持する染色体
外配列（ａｒｒａｙ）を、ＣＥＤ−６（ｎ１８１３）バックグラウンドから野生
型Ｎ２バックグラウンドに、引き続いてＣＥＤ−１、７、２、５および１０の変
異体バックグラウンドに移した。次いで、ＣＥＤ−６は、Ｆｉｇｕｒｅ５Ａに
記載されるように、ＣＥＤ−６ｃＤＮＡの過剰発現によってＣＥＤ−６の取り込
み欠損をレスキューするために使用される方法を行うことにより過剰曝露（ｏｖ
ｅｒｅｘｐｏｓｅｄ）された。ＣＥＤ−６の過剰発現は、ＣＥＤ−７（ｎ１９９
７）の取り込み欠損が部分的に抑制しうることが見出された。抑制が対立遺伝子
特異的であるかどうかを理解するために、ＣＥＤ−７（ｎ１９９６）およびＣＥ
Ｄ−７（ｎ１８９２）の２つのさらなる対立遺伝子を調べ、類似する結果にいた
り、該抑制が対立遺伝子特異的でないことを示唆している（Ｆｉｇｕｒｅ６）
。同じ目的のために、ＣＥＤ−１の３つの対立遺伝子、ｎ１５０６、ｎ１９９５
およびｎ１７３５もまた調べ、ＣＥＤ−６の過剰発現が、ＣＥＤ−１の３つの対
立遺伝子の取り込み欠損を部分的に抑制し得ることが見出された（Ｆｉｇｕｒｅ
６）。いくつかの対照実験を行って、これらのレスキューがＣＥＤ−６に特異
的であることを確認した。熱処理なしの、ＣＥＤ−６トランスジーンを有するト
ランスジェニック動物を調べた；ＣＥＤ−１またはＣＥＤ−７の取り込み変異の
バックグラウンドでのｌａｃＺの過剰発現も調べた。結果は、ＣＥＤ−１変異体
またはＣＥＤ−７変異体の場合と類似する数の細胞残骸が得られたことを示した
。熱処理は、ＣＥＤ−７（ｎ１９９７）の細胞残骸の発現を低下した。ＣＥＤ−
６の過剰発現は、さらに多くの細胞残骸の発現を低下した。これらのデータは、
ＣＥＤ−１およびＣＥＤ−７の両方の取り込み欠損の部分的な抑制はＣＥＤ−６
に特異的であることを示唆する。ＣＥＤ−６の過剰発現は、ＣＥＤ−２、５およ
び１０に関する細胞残骸の数に対して明らかな作用を有していないこともまた認
められた。これらの結果により、ＣＥＤ−６はＣＥＤ−１およびＣＥＤ−７の両
方の下流で作用し、そしてＣＥＤ−２、５および１０は、ＣＥＤ−１、６および
７の下流、または異なる経路のいずれかで作用していることが示唆される（Ｆｉ
ｇｕｒｅ６）。

【００５２】ＣＥＤ−６発現の調節ＳＬ２がＣＥＤ−６ｃＤＮＡの５’端で検出され、ＣＥＤ−６は、オペロンの
下流遺伝子であることを示唆している（ＨｕａｎｇおよびＨｉｒｓｈ（１９８９
）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＩ．ＵＳＡ、８６、８６４０頁〜８６４
４頁；Ｓｐｉｅｔｈ他（１９９３）Ｃｅｌｌ、７３、５２１頁〜５３２頁；Ｚｏ
ｒｉｏ他（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ、３７２、２７０頁〜２７２頁；Ｂｌｕｍｅ
ｎｔｈａｌ他（１９９５）ＴＩＧＩＩ、１３２頁〜１３６頁）。本発明者らは
、１０ｋｂのＸｈｏＩフラグメントがＣＥＤ−６変異体の取り込み欠損をレスキ
ューし得ることを以前に示している。しかし、このフラグメントは、ＣＥＤ−６
、オペロンの下流遺伝子のみを含有し、上流遺伝子を含有していない。ＣＥＤ−
６の発現は、ＣＥＤ−６遺伝子の１ｋｂ上流の領域、オペロンの遺伝子間領域に
よると考えられる。オペロンの遺伝子間領域は、下流遺伝子を発現させるプロモ
ーターとして使用され得る（ＢｌｅｍｅｎｔｈａｌおよびＳｔｅｗａｒｄ（１９
９７、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓＩＩ）（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ；
ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、
１１７頁〜１４５頁）。

【００５３】ＣＥＤ−６は取り込みのシグナル伝達経路において作用するアダプター分子であ
るタンパク質のリン酸化は、細胞がシグナルをあるタンパク質から別のタンパク
質に伝達するためのよく解明された「スイッチ」機構である。タンパク質のリン
酸化は、細胞外シグナルを細胞内に伝達するのに必須である。ＰＴＢドメインは
、ＳＨ２ドメインの他、リン酸化チロシン残基と相互作用することができる別の
ドメインである（ＫａｖａｎａｕｇｈおよびＷｉｌｌｉａｍｓ（１９９４）Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ、２６６；Ｂｌａｉｋｉｅ他（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２６９、３２０３１〜３２０３４）。ＰＴＢドメインを含むいくつかのタンパク
質は、シグナル伝達経路におけるアダプター分子として作用することが見出され
ている。これらは、Ｓｈｃ、Ｓｃｋ、Ｎｕｍｂ、ＦＥ６５、無機能（ｄｉｓａｂ
ｌｅｄ）、ＤＯＣ−２、Ｐ９６およびＩＲＳ−１が含まれる（ＢｏｒｋおよびＭ
ａｒｇｏｌｉｓ（１９９５）Ｃｅｌｌ、８０、６９３頁〜６９４頁；Ｇｅｅｒお
よびＰａｗｓｏｎ（１９９５）ＴＩＢＳ、２０、２７７頁〜２８０頁）。多くの
タンパク質由来のプロリンリッチ領域は、多プロリンヘリックスを形成し、ＳＨ
３ドメインと相互作用することが示されている（Ｒｅｎ他、１９９３；Ｇｏｕｔ
他（１９９３）Ｃｅｌｌ、７５、２５頁〜３６頁；Ｙｕ他、１９９４）。ＳＨ３
結合ドメインの生物学的分析および結晶構造解析の両方により、ＰｘｘＰの配列
特徴がＳＨ３ドメインとのその相互作用に必須であることが示唆された（Ｒｅｎ
他、１９９３；Ｙｕ他、１９９４；Ｇｒａｂｓ他、１９９７）。ＣＥＤ−６は、
ＰｘｘＰの配列特徴を含むプロリンリッチ領域の部分を含み、ＳＨ３ドメインと
相互作用するその潜在性を示唆する。ＣＥＤ−６は、取り込みプロセスを開始さ
せるために、シグナルをレセプターからエフェクター分子または細胞骨格分子に
直接的または間接的に伝達するアダプター分子である。

【００５４】ＣＥＤ−６の相互作用パートナーＰＴＢドメインは、ＮＰＸＹ（ｐ）モチーフと特異的に相互作用することが示
されている（ＫａｖａｎａｕｇｈおよびＷｉｌｌｉａｍｓ、１９９４；Ｚｈｏｕ
他（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ、３７８、５８４頁〜５９２頁；ＧｅｅｒおよびＰ
ａｗｓｏｎ、１９９５）。ＥＧＦレセプター、ＴｒｋＡ、インスリンレセプター
、ＩＧＦ−１レセプターなどの多くのレセプターは、このモチーフをカルボキシ
ル末端に含む（ＧｅｅｒおよびＰａｗｓｏｎ、１９９５）。これらのレセプター
からのシグナルは、このモチーフのホスホチロシン残基とアダプター分子（Ｓｈ
ｃおよびインスリンレセプター基質１など）のＰＴＢドメインとの相互作用を介
して伝達されることが示されている。本発明者らは、ＣＥＤ−７の細胞内領域に
おいて、ＮＰＸＹ（ｐ）モチーフが存在することを見出した。ＣＥＤ−７は、同
じ遺伝子経路でＣＥＤ−６と作用することが示唆されている（Ｅｌｌｉｓ他、１
９９１）。本発明者らは、ＣＥＤ−７がＣＥＤ−６の上流で作用するであろうこ
とを示している（Ｆｉｇｕｒｅ７）。ＣＥＤ−７は、ＡＢＣトランスポーター
をコードし、その哺乳動物ホモログであるＡＢＣ１は、マクロファージが死ぬ細
胞を包み込むために必要とすることが見出され（ＬｕｃｉａｎｉおよびＣｈｉｍ
ｉｎｉ、１９９６）、ＣＥＤ−７は、取り込み中の細胞内で作用するであろうこ
とが示唆する。ＣＥＤ−６が、ＣＥＤ−７のＮＰＸＹ（ｐ）モチーフを有するＰ
ＴＢドメインを介してＣＥＤ−７と物理的に相互作用して、取り込みプロセスの
シグナル伝達を調節することは可能である。

【００５５】ＣＥＤ−６は、ＳＨ３ドメインとのその相互作用を媒介するであろう数個の配
列特徴ＰｘｘＰを有するプロリン／セリンリッチ領域を含む。ＳＨ３ドメインは
、膜結合型レセプターの下流でシグナル伝達分子間のタンパク質−タンパク質の
相互作用を媒介することが示唆されている（Ｋｏｃｈ他（１９９１）Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ、２５２、２５２頁〜６７３頁；ＰａｗｓｏｎおよびＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇ
ｅｒ（１９９３）ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｌｏｇｙ、３、４３４頁〜４４２頁。
ＳＨ３ドメインを含むタンパク質は、おそらくＣＥＤ−６と相互作用して、取り
込みのシグナル伝達経路を調節するのであろう。いくつかのタンパク質は、ＣＥ
Ｄ−６タンパク質と直接的または間接的に相互作用することができる。ＣＥＤ−
１はＣＥＤ−６の上流で作用することができる（Ｆｉｇｕｒｅ６および７Ａ）
。ＣＥＤ−１とＣＥＤ−６との間の関係は、遺伝子のクローニングに依存するで
あろう。リン酸化チロシン残基を有するタンパク質は、ＣＥＤ−６のＰＴＢドメ
インと相互作用するために存在するはずである。このリン酸化タンパク質は、チ
ロシンキナーゼまたはチロシンキナーゼ基質のいずれかであり、チロシンホスフ
ァターゼもまた、リン酸化タンパク質の活性をダウンレギュレーションするため
に、取り込みのシグナル伝達経路に関与しているはずである。哺乳動物系におけ
る貪食作用に関するいくつかの研究により、チロシンキナーゼのシグナル伝達経
路が、オプソニン媒介の貪食作用プロセスにおいて必須的な役割を果たし得るこ
とが明らかにされている（ＲｏｓｈｅｎｓｈｉｎｅおよびＦｉｎｌａｙ（１９９
３）ＢｉｏＥｓｓａｙｓ、１５、１７頁〜２４頁；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ（１９９
５）ＴｒｅｎｄｓｉｎＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ、５、９３頁〜９９頁）。
本結果は、ＰＣＤによって引き起こされる取り込みと同じケースであるのであろ
うことを示唆する。これらの２種類の貪食作用は末端においてはいくらかの類似
性を有し得る。

【００５６】ＣＥＤ−６は取り込み細胞内で作用する遺伝子モザイク分析を行い、ＣＥＤ−６が取り込み中の細胞内で作用している
ことを明らかにした。この結論は、生殖細胞および体細胞鞘細胞の１対の細胞を
観察したことに基づいて導き出された。本発明者らは、ＣＥＤ−６の過剰発現に
よって、細胞残骸の取り込みを促進し得ることを以前に示している。何時間も前
から死んでいる細胞は、タンパク質発現に関するその能力を維持していることは
ほとんど考えられない（Ｅｓｔｕｓ、１９９４；Ｆｒｅｅｍａｎ、１９９４）た
めに、細胞残骸のレスキューは、取り込み細胞内におけるＣＥＤ−６の発現によ
るのであろう。この結果は、ＣＥＤ−６も体細胞における取り込み細胞内でも作
用していることを示唆する。以前には、ＣＥＤ−６の過剰発現によって、体細胞
と生殖細胞との両方においてＣＥＤ−６の取り込み欠損がレスキューし得ること
が示され（Ｆｉｇｕｒｅ５）、ＣＥＤ−６が両方の場所で類似する機構におい
て作用することを示唆する。

【００５７】ＣＥＤ−６は細胞残骸の取り込みを促進し得るＣＥＤ−６の過剰発現は、細胞死のごく初期段階にある死ぬ細胞、および細胞
死の数時間後に形成される細胞残骸の取り込みを促進する。細胞残骸は、アポト
ーシス細胞の典型的な形態学、例えば、膜のくびれ（ｂｌｅｂｉｎｇ）を有して
いることが示される。細胞残骸の膜表面に取り込み細胞によるその認識のために
呈示される抗原は、初期の死細胞の膜表面に呈示される抗原と少し異なるであろ
う。死ぬ細胞表面でのリガンドおよび取り込み中の細胞上のレセプターが両方の
状況で同じであろうが、異なっていても関係なく、ＣＥＤ−６は取り込みに必要
とされる。生殖腺における少数の細胞残骸が、熱ショックを行ったときに、熱シ
ョック後のいくつかの動物の場合に除去されなかった。これらの細胞残骸は、卵
母細胞の間で、貯精嚢の近くに位置する傾向がある。これらの細胞残骸が包み込
まれないのは、それらが鞘細胞と接触していないためと考えられる。ＰＣＤの初
期段階におけるちょうど死ぬ細胞のような細胞残骸は、貪食作用を引き起こしう
ると結論される。ｍｅｃ−４変異体動物において、６つの接触感覚ニューロンが
、これらの細胞において正常に機能しない浸透圧を導くチャンネル欠損によるネ
クローシス死で死ぬ（ＤｒｉｓｃｏｌｌおよびＣｈａｌｆｉｅ（１９９１）Ｎａ
ｔｕｒｅ、３４９、５８８頁〜５９３頁）。ＣｈｕｎｇおよびＤｒｉｓｃｏｌｌ
は、膨張した死細胞の除去がＣＥＤ−６バックグラウンドで著しく遅れることを
示し、ＣＥＤ−６はネクローシス性の死ぬ細胞の除去にも関与することを示して
いる。従って、死の様式に関わりなく、死細胞が取り込み細胞によって認識され
得る死細胞の表面に呈示される類似するシグナルが存在するであろう；ＣＥＤ−
６が関与するシグナル伝達経路は、取り込みを生じさせるこれらのシグナルに応
答するために使用され得る。取り込みが非常に早く開始され、そして非常に速や
かに完了するという事実は、自然界の優れた仕組みである。これは、大量の細胞
死を伴う組織には特に重要である。

【００５８】取り込みプログラムの保存アライメントにおいて、Ｃ．Ｂｒｉｇｇｓａｅ由来のＥＳＴクローンは、ＣＥ
Ｄ−６と、Ｎ端領域およびＣ端領域の両方で高度に保存され、このＥＳＴクロー
ンが本物のＣＥＤ−６ホモログであり得ることを示唆している（Ｆｉｇｕｒｅ
３Ｂ）。ショウジョウバエおよびヒトに由来するＥＳＴクローンもまた、ＣＥＤ
−６に高度に保存されているが、主としてＰＴＢドメインの領域において高度に
保存されている（Ｆｉｇｕｒｅ３Ａおよび３Ｂ）。この結果は、これらのＰＴ
Ｂドメインタンパク質がこれらの生検において機能的なホモログである可能性を
示唆した。結果として、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６遺伝子の２つのヒトホ
モログがクローニングされ、その特徴付けが行われた。

【００５９】ＣＥＤ−６を発現する発現ベクターおよびトランスフェクト哺乳動物細胞Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６ＤＮＡのフラグメントを、レポーター遺伝子
の緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を有するベクターなどの市販のベクターに挿入
し、そのようなベクターを下記の表１に示す。

【００６０】

【表２】

【００６１】ＭＣＦ７細胞におけるＧＦＰ蛍光の可視化ヒト乳ガン細胞のＭＣＦ７（ＡＴＣＣ：ＨＴＢ−２２）をＬａｂＴｅｋチャ
ンバー型カバーガラス（ＮａｌｇｅＮｕｎｃＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）
に播種し、ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）を使用してトラン
スフェクトした。１８時間後、倒立型顕微鏡に置いたチャンバー型カバーガラス
及びＧＦＰの蛍光を可視化することができる。

【００６２】ＧＦＰ−ＣＥＤ−６の発現蠕虫ＣＥＤ−６の細胞内での局在化を、ＧＦＰ融合タンパク質を使用してアッ
セイした。種々のフラグメントを使用することによって、本発明者らは、ＣＥＤ
−６が細胞質に明らかに局在していることを示した。この局在は、ＣＥＤ−６の
ＰＴＢのみが使用されたときに損なわれ、Ｃ端部分が正しいターゲティングに関
与するであろうことを示している。実際の発現レベルは、細胞毎に変化している
ので、アポトーシス表現型は高発現細胞で観察することができ、そして上昇した
レベルの貪食作用は強く発現している細胞で観察することができる。さらに、ラ
メラへの局在化が、取り込み中が行われるいくつかの細胞で観察された。

【００６３】上記のトランスフェクトされたＭＣＦ７細胞は、下記に議論されているように
、ＣＥＤ−６を阻害および増強する化合物またはＣＥＤ−６を同定するアッセイ
を行うのに有用である。

【００６４】Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６のヒトホモログ本発明により、アポトーシス細胞の貪食作用を調節するタンパク質であって、
シグナル伝達経路のアダプター分子である単離されたタンパク質が提供される。

【００６５】本発明の別の態様により、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６のヒトホモログで
あるタンパク質であって、Ｆｉｇｕｒｅ２０またはＦｉｇｕｒｅ２２に示さ
れるアミノ酸配列（配列番号：８）、または保存的なアミノ酸変化においてのみ
Ｆｉｇｕｒｅ２０に示されるアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列（ｈ１ＣＥ
Ｄ−６）を含有した単離タンパク質が提供される。

【００６６】ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６（配列番号：８、１４
、１６）またはその機能的同等物をコードする核酸配列（ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤ
ＮＡまたはゲノムＤＮＡ；配列番号：７、１３、１５）も提供される。例えば、
本発明は、Ｆｉｇｕｒｅ１８、Ｆｉｇｕｒｅ１９またはＦｉｇｕｒｅ２２
に示される約４３０ヌクレオチド位〜約１３４４ヌクレオチド位のヌクレオチド
の配列を含有した核酸配列またはこれらのＦｉｇｕｒｅに示されるヌクレオチド
の完全な配列を含有した核酸配列を包含する。本発明は、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓの
ＣＥＤ−６、ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６をコードする核
酸配列のオープンリーディングフレームを含む。

【００６７】本発明はまた、Ｆｉｇｕｒｅ２０、Ｆｉｇｕｒｅ２２またはＦｉｇｕｒｅ
２９に示されるアミノ酸配列（配列番号：８、１４、１６）を有するタンパク
質のフラグメントであるタンパク質を提供する。該フラグメントは、配列番号：
８、１４、１６のホスホチロシン結合ドメインに対応するアミノ酸の配列を含有
してもよい。例えば、配列番号：８または１６のＰＴＢドメインは、アミノ酸１
５〜１５７に由来する。本発明はまた、ｈ１ＣＥＤ−６および／またはｈ３ＣＥ
Ｄ−６のプロリン／セリンリッチドメイン（例えば、Ｆｉｇｕｒｅ２０、２２
または２９におけるアミノ酸２０１〜２７６）の核酸配列およびアミノ酸配列に
関連する。同様に、配列番号：８または１６の非常に荷電した領域は本発明によ
り包含される（例えば、Ｆｉｇｕｒｅ２０、２２または２９におけるアミノ酸
１６１〜１９５）。本発明は、これらのフラグメントをコードする核酸配列を含
む。

【００６８】ｈ３ＣＥＤ−６のスプライシング変異体（本明細書中でｈ２ＣＥＤ−６と呼ば
れる）もまた本明細書中で同定され、そのような変異体は、Ｆｉｇｕｒｅ２１
に示されるアミノ酸配列（配列番号：１４）または保存的なアミノ酸変化におい
てのみＦｉｇｕｒｅ２１に示されるアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含
有する。ｈ２ＣＥＤ−６（配列番号：１３）またはその機能的同等物をコードす
る核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、例えば、Ｆｉｇｕｒ
ｅ１９の約４３０ヌクレオチド位〜約１２０６ヌクレオチド位を含有した核酸
またはＦｉｇｕｒｅ１９の全ヌクレオチド配列（配列番号：１３）を含む核酸
もまた提供される。

【００６９】ヒトＣＥＤ−６のアミノ酸配列（配列番号：１６）もまたＦｉｇｕｒｅ２６
に示されている。アミノ酸配列配列番号：１６（ヒトＣＥＤ−６）および配列番
号：８（ｈ１ＣＥＤ−６）は１５０番目のアミノ酸が異なる。ヒトＣＥＤ−６を
コードする核酸配列（配列番号：１５）は、Ｆｉｇｕｒｅ３０Ａ〜３０Ｂに示
されている。請求項に記載される発明には、配列番号：１５および／または１６
、配列番号：１５のオープンリーディングフレーム、ならびに本明細書に記載さ
れる機能的フラグメント（例えば、セリン／プロリンリッチ領域、ＰＴＢドメイ
ンまたは高度荷電ドメイン）をコードする核酸配列およびアミノ酸配列が含まれ
る。

【００７０】本発明はまた、融合体の一部が、配列番号：８、１４もしくは１６のいずれか
に示されるアミノ酸配列または保存的なアミノ酸変化においてのみアミノ酸配列
とは異なる配列を有するタンパク質である融合タンパク質を提供する。このタン
パク質は、例えば、エピトープタグまたはレポーター遺伝子の発現産物と融合さ
れてもよい。

【００７１】本発明は、ＣＥＤ−６タンパク質（例えば、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６
、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６および／またはｈ３ＣＥＤ−６）およびＣＥ
Ｄ−６のアミノ酸配列に類似するアミノ酸配列を有するポリペプチドを包含する
ものとする。そのようなポリペプチドは、ＣＥＤ−６アナログ（例えば、ホモロ
グ）、オルソログもしくは変異体または誘導体として本明細書中に規定される。
類似アミノ酸配列は、ＣＥＤ−６の生理活性を有するの十分な同一性のＣＥＤ−
６（例えば、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−
６またはｈ３ＣＥＤ−６）のアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を意味すると本
明細書中に定義される。例えば、１個またはそれ以上のアミノ酸残基がＣＥＤ−
６のアミノ酸残基と異なるが、依然としてＣＥＤ−６の生理活性を有するアミノ
酸配列における「サイレント」変化を有するアナログポリペプチドを作製するこ
とができる。そのような差異の例には、ＣＥＤ−６のアミノ酸配列の残基の付加
、欠失または置換が含まれる。本発明のＣＥＤ−６タンパク質よりも大きな生理
活性または小さな生理活性を示すアナログポリペプチドもまた本発明により包含
される。

【００７２】請求項に記載されるＣＥＤ−６タンパク質および核酸配列には、本明細書中で
規定されているホモログが含まれる。相同的なタンパク質および核酸配列は、当
業者に知られている方法を使用して決定することができる。最初のホモロジー検
索は、ＮＣＢＩにおいて、ＢＬＡＳＴネットワークサービスおよび他のＥＳＴデ
ータベースを使用してＧｅｎＢａｎｋ（リリース８７．０）、ＥＭＢＬ（リリー
ス３９．０）、ｄｂＥＳＴＳｗｉｓｓＰｒｏｔ（リリース３０．０）のデータ
ベースに対して、行うことができる。Ａｌｔｓｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．他、基本的な局所的アラインメント検索ツール、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５、４０３（１９
９０）：この教示は参照により本明細書中に取り込まれる。ヌクレオチド配列の
コンピューター分析は、ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｉｎｇＧｒｏｕｐ（
ＧＣＣ、バージョン８．０）ソフトウエアのＭＯＴＩＦＳサブルーチンおよびＦ
ｉｎｄＰａｔｔｅｒｎｓサブルーチンを使用して行うことができる。タンパク質
比較および／またはヌクレオチド比較もまたＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐに
従って行うことができる（Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＰ．Ｍ．Ｓｈａｒｐ
、「ＣＬＵＳＴＡＬにおいて使用される方法の説明」、Ｇｅｎｅ、７３：２３７
〜２４４（１９８８））。ＣＥＤ−６タンパク質および／またはＣＥＤ−６タン
パク質をコードする核酸配列に対して相同的なタンパク質および／または核酸配
列は、７０％を超える配列同一性および／または類似性（例えば、７５％、８０
％、８５％、９０％または９５％の相同性）を有するそのような分子として定義
される。

【００７３】本明細書中において、ＣＥＤ−６タンパク質の「生理活性」は、アポトーシス
細胞の貪食作用を調節または影響を与える能力を意味していることが定義される
。

【００７４】請求項に記載されるＣＥＤ−６タンパク質はまた、本明細書中に記載されるＣ
ＥＤ−６タンパク質の生物学的に活性なポリペプチドフラグメントを包含する。
そのようなフラグメントは、ＣＥＤ−６の全長アミノ酸配列の一部のみを含むこ
とができるが、アポトーシス細胞の貪食作用を調整または調節する能力を有し得
る。例えば、ＣＥＤ−６タンパク質の欠失変異体を含有したポリペプチドフラグ
メントはよく知られている実験室的方法で設計および発現することができる。そ
のようなポリペプチドフラグメントは、本明細書中に記載されているように、生
理活性について評価することができる。

【００７５】抗体は、当業者に知られている方法を使用してＣＥＤ−６タンパク質またはそ
のアナログに対して惹起させることができる。これらの抗体、ポリクローナル、
モノクローナル、キメラ、またはそれらのフラグメントを使用して、タンパク質
の混合物に含まれたＣＥＤ−６タンパク質を、当業者によく知られている技術を
使用して免疫アフィニティー精製または同定することができる。これらの抗体ま
たは抗体フラグメントはまた、標準的な免疫化学的方法を使用して他の組織にお
けるＣＥＤ−６タンパク質およびホモログの存在を検出するために使用すること
ができる。

【００７６】特に、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６ま
たはｈ３ＣＥＤ−６に由来するフラグメントおよび機能的ドメインを含む上記の
タンパク質の生理活性誘導体またはアナログは、本明細書中ではペプチド模倣物
と呼ばれ、当業者に知られている技術により設計および製造することができる（
例えば、米国特許第４，６１２，１３２号明細書、同第５，６４３，８７３号明
細書および同第５，６５４，２７６号明細書を参照のこと：これらの教示は参照
により本明細書中に取り込まれる）。これらの模倣物は、例えば、特定のＣＥＤ
−６、ｈ１ＣＥＤ−６またはｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６のアミノ酸配
列に基づくことができ、対応するアミノ酸配列の立体的な相対的位置を維持し得
る。これらのペプチド模倣物は、対応するペプチド化合物の生理活性に類似する
生理活性を有し、１またはそれ以上の下記特性：溶解性、安定性、ならびに加水
分解およびタンパク質分解に対する感受性、に関して、対応するＣＥＤ−６アミ
ノ酸配列を上回る「生理活性」を有する。

【００７７】ペプチド模倣物の調製方法には、Ｎ末端アミノ基、Ｃ末端カルボキシル基を改
変すること、および／またはペプチドにおける１またはそれ以上のアミノ結合を
非アミノ結合に変化させることが含まれる。２つ以上のそのような改変を、１つ
のペプチド模倣物分子において一緒に組み合わせることができる。ペプチド模倣
物を作製するためのペプチドの改変は、米国特許第５，６４３，８７３号および
同第５，６５４，２７６号明細書に記載され、それらの教示は参照により本明細
書中に取り込まれる。請求項に記載される発明に包含されるｈ１、ｈ２またはｈ
３ＣＥＤ−６タンパク質の他の形態には、「機能的同等物」であるものが含まれ
る。この用語は、本明細書中で使用されるように、任意の核酸配列、およびその
コードされたアミノ酸であって、ｈ１、ｈ２またはｈ３ＣＥＤ−６タンパク質お
よび／またはその機能的ドメインの生理活性を模倣するアミノ酸を示す。生理活
性は、アポトーシス細胞の貪食作用を調節し得るタンパク質を記載するために使
用されている。

【００７８】ポリペプチドは、公知の方法によりともに作製することができる結合体または
融合タンパク質の形態であり得る。融合タンパク質は、組換えＤＮＡ技術の公知
の方法に従って製造することができる。例えば、融合タンパク質は、タンパク質
の生理活性部分とその融合パートナー、例えば、免疫グロブリン分子の一部とを
コードする配列を含有した核酸分子から発現させることができる。例えば、ある
態様は、免疫ブロブリンの配列をコードする核酸を適切な発現ベクター、ファー
ジベクターまたは他の市販ベクターに組み入れることによって作製することがで
きる。得られる構築物は、発現に適する宿主細胞に導入することができる。発現
の際、融合タンパク質は、アフィニティーマトリックスによって細胞から単離ま
たは精製することができる。

【００７９】配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示されるものを含む
上記核酸のいずれかを、必要に応じて上記レポーター遺伝子とともに組み込んだ
発現ベクターもまた本発明により提供される。

【００８０】また本発明は、本明細書中に記載されるＣＥＤ−６（例えば、Ｃ．ｅｌｅｇａ
ｎｓのＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６）タ
ンパク質をコードする単離核酸配列、および生理活性を有するＣＥＤ−６タンパ
ク質をコードする核酸配列のフラグメントをも包含する。本明細書中に記載され
る核酸配列のフラグメントはプローブとして有用である。本発明においては、Ｃ
ＥＤ−６タンパク質をコードするＤＮＡ／ＲＮＡ配列、これらの配列の完全な相
補鎖、およびその対立遺伝子変異体が特に提供される。ＣＥＤ−６をコードする
ＤＮＡ配列に実質的に相補的である核酸配列、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ
またはそれらの組み合わせ、実質的な核酸同一性を有するＤＮＡ配列を同定する
のに十分な当業者に公知のストリンジェンシー条件でＣＥＤ−６のＤＮＡ配列と
特異的にハイブリダイズする核酸配列、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡまたは
それらの組み合わせもまた本発明により包含される。本明細書中に規定されてい
るように、実質的な相補性は、配列が、ＣＥＤ−６（例えば、Ｃ．ｅｌｅｇａｎ
ｓのＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６）ＤＮ
Ａの正確な配列を表す必要はないが、ストリンジェントな条件下にＣＥＤ−６
ＤＮＡとハイブリダイズするのに十分に配列同一性が類似していなければならな
いことを意味する。ストリンジェンシー条件は、例えば、Ａｕｓｅｂｅｌ，Ｆ．
Ｍ．他のＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢ
ｉｏｌｏｇｙ（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓ、１９９４）に記載されて
いる。例えば、配列が、ＣＥＤ−６とハイブリダイズするためにＣＥＤ−６と相
補的な十分な数の塩基を有する場合、相補的でない塩基を配列内に点在させるこ
とができ、あるいは配列はＣＥＤ−６ＤＮＡよりも長くすることができ、または
短くすることができる。例示的なハイブリダイゼーション条件は本明細書中に記
載されている。

【００８１】ヒトＣＥＤ−６のクローニングＣ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６遺伝子をクローニングして、そのオープンリ
ーディングフレームの全配列決定後、公開されているヒトデータベースに対する
広範囲な検索が行われた。このような検索によって、タンパク質のカルボキシ端
領域において多数のＥＳＴに対する統計学的に有意なホモロジーが明らかにされ
、１つのＥＳＴが、ＰＴＢドメインのカルボキシ端に対し、そして荷電領域の開
始部分においてホモロジーを示した。これらのＥＳＴを使用して、Ｃｌｏｎｔｅ
ｃｈのＭａｒａｔｈｏｎ−ｒｅａｄｙ結腸直腸腺ガンｃＤＮＡライブラリーを使
用する５'ＲＡＣＥのプライマーを構築した。その後のさらなる配列分析および
数回のデータベース検索により、ｈ３ＣＥＤ−６に関して約２４００ｂｐのコン
センサス配列の構築を可能にするさらなるＥＳＴがいくつか明らかにされた（Ｆ
ｉｇｕｒｅ６）。さらなる配列分析により、Ｆｉｇｕｒｅ１８に示される配
列のスプライシングバリアント（ｈ２ＣＥＤ−６）を明らかにし（選択的スプラ
イシングされた部分に下線を付す）。ｈ２ＣＥＤ−６のＤＮＡはＦｉｇｕｒｅ
１９に示され、そのアミノ酸配列はＦｉｇｕｒｅ２１に示されている。ｈ２Ｃ
ＥＤ−６のアミノ酸配列は、ｈ１ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６の活性に拮抗
するｈ１ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６のドミナント優性ネガティブ体と一致
している。

【００８２】ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６のインヒビ
ターおよびエンハンサーを同定するためのアッセイＣ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６およびその２つのヒトホモログをクローニン
グしてその機能的な特徴付けは、ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６
またはｈ３ＣＥＤ−６の活性を阻害または増強し得る化合物、あるいはこれらの
タンパク質の転写を阻害または増強し得る化合物の同定を可能にするアッセイ方
法の開発が可能になる。これらのアッセイは、アポトーシス粒子の貪食作用レベ
ルの検出、アクチン−細胞骨格の再配列レベルの測定、またはＧＦＰなどのレポ
ーター遺伝子を介したＣＥＤ−６タンパク質の転写レベルの検出を含むことがで
きる。

【００８３】貪食作用のインヒビターおよび／またはエンハンサーを同定するためのアッセ
イは、ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６ある
いはＣＥＤ−６シグナル伝達経路の任意の他のメンバーにより安定的または一過
的にトランスフェクトされた細胞株からなり得る。細胞株は、精製タンパク質ま
たはアンチセンスＲＮＡを発現するベクターをマイクロインジェクトしてもよい
。発現産物は、ＧＦＰとの融合タンパク質であり得る。非トランスフェクト細胞
もまたアッセイで使用することができる。細胞株は、ＣＯＳ１、ＢＨＫ２１、Ｌ
９２９、ＣＶ１、Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３、ＨＴ１４４、ＩＭＲ３２などの繊維芽細
胞株または別の繊維芽細胞株であってもよい。細胞株は、ＨＥＰＧ２、ＭＤＣＫ
、ＭＣＦ７、２９３、Ｈｅｌａ、Ａ５４９、ＳＷ４８、Ｇ３６１などの上皮細胞
株または任意の他の上皮細胞株であってもよい。細胞株は、ヒトの内皮ＦＩＢ、
皮膚ケラチノサイト、白血球、単球、マクロファージなどの初代株、あるいは任
意の他の初代細胞株であってもよい。細胞は、脊椎動物（ヒト、魚類、マウス）
または非脊椎動物起源（Ｃ．エレガンス）から得られた他の遺伝子（レクチン、
ＣＤ１４、ＳＲＡ、ＣＤ３６、ＡＢＣ１、ＣＥＤ５、ＤＯＣＫ１８０）で二重に
トランスフェクトすることができる。

【００８４】貪食作用アッセイは、粒子および／またはアポトーシス細胞の添加およびこれ
らの細胞株による取り込みからなる。該粒子は、様々なサイズ、形状および天然
の抗原性を有するオプソニン化された熱または化学的に殺された細菌および酵母
であってもよい。このような粒子または細胞は、様々なサイズ、形状および天然
の抗原性を有する、オプソニン化された、蛍光標識、熱または化学的に殺された
細菌および酵母であってもよい。細胞は、アポトーシス好中球、アポトーシスリ
ンパ球、アポトーシス赤血球または任意の他のアポトーシス細胞であり得る。こ
れらのアポトーシス細胞はオプソニン化および／または色素または蛍光色素で標
識してもよい。殺された細菌細胞または酵母細胞およびアポトーシス細胞は、本
明細書中ではアポトーシス粒子と呼ばれる。

【００８５】アッセイ１ＣＥＤ−６または本明細書中に記載される任意の他の遺伝子、例えば、配列番
号：１、３、７、９、１１、１３または１５の核酸でトランスフェクトされた細
胞は単層状態または懸濁状態で増殖させることができる。アポトーシス粒子をト
ランスフェクト細胞に加える。貪食作用は、アポトーシス粒子の取り込み速度に
より追跡することができる。これは、顕微鏡、蛍光顕微鏡、定量的分光蛍光測定
およびフローサイトメトリーにより測定することができる。細胞および／または
粒子は、色素、蛍光色素、抗体、ならびに抗体に結合させた色素または蛍光色素
（ｄｙｅｓｏｆｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｄｙｅ）で、検出および測定を行
う前に標識してもよい。アポトーシス粒子の取り込みの増大または減少が、トラ
ンスフェクトされた１または複数の遺伝子の貪食作用における影響に関して測定
される。

【００８６】アッセイ２化合物は、貪食作用経路に関与する遺伝子における影響を調べるためにアッセ
イ１に加えることができる。一過的または安定的にトランスフェクトされた細胞
を懸濁状態または単層状態で増殖される。一連の化合物は、アポトーシス粒子を
加える前に細胞に加えられる。化合物の影響は、化合物を加えたときのアポトー
シス粒子の取り込み速度と、化合物を加えなかったときのアポトーシス粒子の取
り込み速度とを比較することによって測定することができる。測定はアッセイ１
に記載されている。

【００８７】アッセイ３細胞は、粒子の取り込みによりアポトーシス粒子を貪食することができる。こ
れには、アクチン細胞骨格の再組織化が含まれる。哺乳動物細胞は、ＣＥＤ−６
あるいはＣＥＤ−６の貪食作用シグナル伝達経路に関与する任意の遺伝子、例え
ば、配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５のいずれかに示され
るヌクレオチドの配列を有する核酸で一過的または安定的にトランスフェクトし
てもよい。細胞は、アッセイ１に記載されているいずれかの細胞であり得る。遺
伝子は、ＧＰＦ融合産物として発現されてもよい。細胞は二重にトランスフェク
トしてもよい（アッセイ１を参照のこと）。アクチン細胞骨格の再組織化は、Ｆ
−アクチンと相互作用するファロイジンに結合させた蛍光色素で可視化すること
ができる。細胞骨格の再組織化が、トランスフェクトされた１または複数の遺伝
子による取り込み誘導に関して測定される。トランスフェクトされた細胞は、ア
ッセイ１に記載されている粒子またはアポトーシス粒子で処理することができる
。細胞骨格の再組織化は顕微鏡または蛍光顕微鏡で可視化される。

【００８８】アッセイ４化合物は、貪食作用経路および取り込みに関連する細胞骨格の再組織化に関与
している遺伝子におけるその影響を調べるためにアッセイ３に加えてもよい。こ
れらの化合物は、導入された遺伝子により誘導される取り込みまたは細胞骨格の
再組織化を増強または阻害することができる。一過的または安定的にトランスフ
ェクトされた細胞を懸濁状態または単層状態で増殖させる。一連の化合物が細胞
に加えられる。化合物の影響は、化合物を加えたときのアクチン細胞骨格の再組
織化と、化合物を加えなかったときのアクチン細胞骨格の再組織化とを比較する
ことによって測定することができる。測定は、アッセイ１、アッセイ２およびア
ッセイ３に記載されているように行われる。アポトーシス粒子は、この試験では
、アッセイ２に記載されているように、貪食作用を誘導するために加えてもよい
。

【００８９】アッセイ５上記に記載されている細胞株などの非トランスフェクト細胞株またはトランス
フェクト細胞株は、精製ＣＥＤ−６タンパク質、例えば、配列番号：２、４、６
、８、１０、１２、１４もしくは１６に示されるアミノ酸配列を有するタンパク
質、またはＣＥＤ−６経路の任意のタンパク質、あるいは該タンパク質のいずれ
かを含有した融合タンパク質をマイクロインジェクトすることができる。マイク
ロインジェクションは、初代細胞株または繊維芽細胞株または他の上皮細胞株に
対して行うことができる。これらの細胞株は、マイクロインジェクションを行う
前に別の遺伝子でトランスフェクトすることができる。アッセイ１からアッセイ
４を、これらのマイクロインジェクト入された細胞に対して行うことができる。

【００９０】アッセイ６上記のトランスフェクト細胞株または非トランスフェクト細胞株は、上記タン
パク質のいずれかに関するアンチセンスＲＮＡ、あるいはＣＥＤ−６経路に関与
している遺伝子の任意のＲＮＡを含むＣＥＤ−６アンチセンスＲＮＡを発現する
ベクターをマイクロインジェクトしてもよい。マイクロインジェクションは、初
代細胞株または繊維芽細胞株または他の上皮細胞株に対して行うことができる。
これらの細胞株は、マイクロインジェクションを行う前に別の遺伝子でトランス
フェクトすることができる。アッセイ１からアッセイ５を、このようなマイクロ
インジェクトされた細胞に対して行うことができる。

【００９１】アッセイ７アッセイ６に記載されている細胞株は、ＣＥＤ−６のアンチセンスＲＮＡまた
はＣＥＤ−６経路に関与している遺伝子の任意のＲＮＡを発現するベクターをマ
イクロインジェクトしてもよい。マイクロインジェクションはマクロファージに
対して行うことができる。ＣＥＤ−６経路に関与している１または複数のＣＥＤ
−６遺伝子を阻害することによるアンチセンスＲＮＡの阻害作用は、アッセイ１
からアッセイ６に記載されているように追跡および検出することができる。陰性
の表現型をレスキューする化合物を単離することができる。

【００９２】Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓにおけるＣＥＤ−６のインヒビター／エンハンサーをスクリ
ーニングするための貪食作用アッセイＣ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６遺伝子は、死ぬ胚細胞および生殖細胞ならび
に永続性細胞残骸の取り込みを促進する。Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓは、貪食作用およ
び取り込みに対する増強作用または阻害作用を有する化合物の検出および単離の
ために使用してもよい。特に、ＣＥＤ−６活性を失った変異体蠕虫、またはそう
でなければ、ＣＥＤ−６活性を変化させた変異体蠕虫を使用することができる。
あるいは、ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６
のＤＮＡによるトランスフェクトまたはそれらの移入が行われたトランスジェニ
ック蠕虫を使用してもよい。

【００９３】アッセイ８一連の化合物をＣＥＤ−６の変異体蠕虫に投与してもよく、あるいはＣＥＤ−
６経路における変異を有する蠕虫に投与してもよい。Ｌ１幼虫の頭部領域および
蠕虫の生殖腺に残留する細胞残骸を計数することによって化合物により誘導され
る取り込みの回復を、ノマルスキー顕微鏡を使用して可視化することができる。

【００９４】アッセイ９一連の化合物は、ヒト化ＣＥＤ−６変異体蠕虫に投与してもよい。ヒト化蠕虫
は、ヒトＣＥＤ−６遺伝子を発現する蠕虫であり、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ遺伝子が
変異している。ヒトＣＥＤ−６により、変異した表現型がレスキューされる。Ｃ
ＥＤ−６表現型を阻害または増強する化合物は、ノマルスキー顕微鏡を使用して
取り込み表現型を可視化し、上記の細胞残骸を探すことによって選択することが
できる。

【００９５】医学的応用アポトーシスのプロセスは、ガン、自己免疫疾患、筋萎縮性側索硬化症、ハン
チントン病およびアルツハイマー病などの様々な神経変性疾患、卒中、心筋梗塞
、およびＡＩＤＳを含む広範囲の疾患の病因と考えられ、あるいはそのような疾
患の病理学と関連している（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ、１９９５）。従って、アポトー
シスに潜む分子的事象をより十分に理解することは新規な治療的介入につながり
得る。現在の関心の多くが死プロセスの殺傷段階を制御する遺伝子およびタンパ
ク質に向けられている一方で、アポトーシス細胞の除去はアポトーシスプログラ
ムの適正な全体的な機能発現にとって重要であることもまた明らかにされ、そし
てその除去によって治療的介入に関する別の介入点が提供されることが十分に考
えられている。

【００９６】死ぬ細胞の認識および取り込みのプロセスは著しく迅速で効率的である。動物
において、別の細胞においてまだ現れていないアポトーシス特徴を有する細胞を
見つけることは本質的に不可能である。アポトーシス細胞のそのような迅速な認
識および貪食作用はインビボでのプログラム細胞死の重要な局面である：包み込
まれていないアポトーシス体は、炎症に至る二次的なネクローシスを経ることに
なる。アポトーシス体が除去されないことによって、身体はまた、（例えば、カ
スパーゼによって生成されるタンパク質フラグメントに由来する）新たなエピト
ープに曝され、このようなエピトープは自己免疫疾患の発症を促すことが考えら
れる。永続性のアポトーシス体は、多くの場合、（過度なアポトーシスを導く）
化学療法的介入の後で認めることができ、そして細胞残骸のクリアランスが遅く
なると考えられている充実性腫瘍において特に多い。

【００９７】アポトーシス細胞が正しく取り除かれないことは、ヒトを病気に至らしめると
考えられている。従って、貪食作用に関与している遺伝子は、現在まだクローン
化されていないヒトの遺伝病の遺伝子に対応し得る。適正な貪食作用を回復させ
ることは、特定のタイプの炎症および自己免疫疾患に対する有効な治療になる。
逆に、特定の場合には、維持されなければならない細胞が、取り込み機構によっ
て不適切に認識されて身体から除かれる。そのような細胞の取り込みを防止する
ことは治療的に非常に有効であり得る。そのような疾患の例には、神経変性疾患
、卒中ならびに鎌状赤血球貧血があげられるであろう。

【００９８】さらに、取り込みの活性化は、アポトーシスの活性化を使用することが提案さ
れている同じ場合（例えば、ガン）に使用することができる。実際、取り込み前
シグナルのガン細胞内での特異的な活性化は、アポトーシス機構の残り部分を活
性化する必要はなく、細胞除去（すなわち、死）をもたらす。これは、中心的な
アポトーシス機構の重要な部分が既に不活性化されている非常に抵抗性の腫瘍に
は特に有用であり得る。

【００９９】従って、別のその局面により、本発明は、アポトーシス細胞の貪食作用を増強
する物質、特に、ｈ１−ＣＥＤ−６またはｈ３−ＣＥＤ−６またはそれらが関与
するシグナル伝達経路の活性を増強する物質の有効量を患者に投与することによ
って、例えば、炎症、自己免疫疾患およびガンを処置する方法を提供する。その
ような物質には、ｈ１−ＣＥＤ６自身もしくはｈ３−ＣＥＤ−６自身、ｈ１−Ｃ
ＥＤ６もしくはｈ３−ＣＥＤ−６をコードする核酸、ｈ１もしくはｈ２もしくは
ｈ３−ＣＥＤ−６に対するアンチセンス核酸、またはＣＥＤ−６、ｈ１−ＣＥＤ
−６、ｈ２−ＣＥＤ−６もしくはｈ３−ＣＥＤ−６あるいはそれらの転写物のエ
ンハンサーとして上記アッセイのいずれかで同定された化合物が含まれる。

【０１００】さらに、本発明は、アポトーシス細胞の貪食作用を阻害する物質、特に、ｈ１
−ＣＥＤ６またはｈ３−ＣＥＤ６またはそれらが関与するシグナル伝達経路の活
性を阻害する物質の有効量を患者に投与することによって、例えば、神経変性疾
患、卒中および鎌状赤血球貧血を処置する方法が可能になる。そのような物質に
は、ｈ２ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６をコードする核酸、ｈ１ＣＥＤ−６または
ｈ３ＣＥＤ−６に対するアンチセンス核酸、あるいはＣＥＤ−６またはｈ１ＣＥ
Ｄ−６またはｈ３−ＣＥＤ−６またはそれらの転写物のインヒビターとして上記
アッセイのいずれかで同定された化合物が含まれる。

【０１０１】上記治療物質のいずれかと、製薬上許容されうる担体とを含む医薬組成物もま
た本発明により包含される。

【０１０２】本明細書中に記載される様々な治療処置を行うために、ｈ１、ｈ２もしくはｈ
３ＣＥＤ−６またはその機能的な部分もしくはドメインをコードする核酸は、
哺乳動物細胞（例えば、哺乳動物の体細胞、哺乳動物の生殖細胞（精子細胞およ
び卵細胞））に導入しなければならない。これは、本明細書中に記載される全長
のタンパク質またはドメインもしくはその機能的同等物のいずれかをコードする
単離された核酸を、１コピーまたは多コピーで存在し得る核酸ベクター、例えば
、プラスミドなどのＤＮＡベクター、ウイルスまたは他の適切なレプリコン（例
えば、ウイルスベクター）に挿入することによって行うことができる。核酸は、
エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、インフェクション、およ
びリポフェクション、ならびに直接的な取り込みなどの当該分野で知られている
適切な方法を使用して細胞にトランスフェクトまたは形質転換することができる
。そのような方法は、より詳しくは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ他、「Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ」、第
２版（１９８９）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．他、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏ
ｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ、１９９４）；およびＳａｍｂｒｏｏｋ他、「Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ」、第２版（１
９８９）に記載されている。

【０１０３】ｈ１、ｈ２またはｈ３ＣＥＤ−６は、これらのタンパク質をコードする１以
上の核酸配列を含有したウイルスベクターを使用することによって細胞に送達す
ることができる。一般に、核酸配列は、ウイルスベクターのゲノムに組み込まれ
る。インビトロにおいて、本明細書中に記載されるｈ１、ｈ２またはｈ３ＣＥＤ
−６のタンパク質を含むウイルスベクター、あるいはそのタンパク質をコードす
る核酸配列は細胞と接触され、感染させることができる。次いで、細胞は、アポ
トーシス細胞の貪食作用を研究するためまたは上記アッセイを行うために実験的
に使用することができ、あるいは治療的使用のために患者に移植することができ
る。細胞は、造血系細胞などの移動性または充実性腫瘍もしくは繊維芽細胞など
の非移動性であり得る。細胞は、患者から採取されて疾患の処置において使用さ
れる生物学的サンプル（例えば、血液、骨髄）に存在し得、細胞培養物から得る
ことができる。

【０１０４】ｈ１、ｈ２またはｈ３ＣＥＤ−６のタンパク質あるいはそれらをコードする核
酸配列を含有したウイルスベクターと接触させた後、サンプルは、当業者に知ら
れている方法に従って細胞培養物または患者に戻すことができ、あるいは再投与
することができる。患者または実験動物モデル（例えば、ラット、マウス、サル
、チンパンジー）に送達される場合、そのような処置手順は、エクスビボ処置ま
たはエクスビボ治療と呼ばれることがある。しばしば、患者または動物から得ら
れた細胞が標的化され、そして本発明の活性化された変異体を含むウイルスベク
ターと接触させて患者または動物に戻される。エクスビボ遺伝子治療は、例えば
、Ｋａｓｉｄ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８７：４７
３（１９９０）；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ他、ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２
５：５７０（１９９０）；Ｗｉｌｌｉａｍｓ他、Ｎａｔｕｒｅ、３１０、４７６
（１９８４）；Ｄｉｃｋ他、Ｃｅｌｌ、４２：７１（１９８５）；Ｋｅｌｌｅｒ
他、Ｎａｔｕｒｅ、３１８：１４９（１９８５）；およびＡｎｄｅｒｓｏｎ他、
米国特許第５，３９９，３４６号明細書（１９９４）に記載されている。

【０１０５】細胞がインビトロで接触させられた場合、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−
６またはｈ３ＣＥＤ−６の核酸配列を含むウイルスベクターが取り込まれてい
る細胞は、送達するために患者または実験動物モデルに移植することができ、あ
るいはｈ１、ｈ２またはｈ３ＣＥＤ−６によって媒介される細胞事象を研究する
ためにインビトロ実験において使用することができる。

【０１０６】様々なウイルスベクターを使用して、核酸を哺乳動物細胞に導入することがで
きる。そのようなウイルスベクターには、レトロウイルス；アデノウイルス、パ
ルボウイルス（例えば、アデノ関連ウイルス）；コロナウイルス；オルトミクソ
ウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬
病ウイルスおよび水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹
ウイルスおよびセンダイウイルス）などのマイナス鎖ＲＮＡウイルス；ピコルナ
ウイルスおよびアルファウイルスなどのプラス鎖ウイルスＲＮＡウイルス；およ
びアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、１型および２型の単純ヘルペス
ウイルス、エプスタイン−バールウイルス、サイトメガロウイルス）、およびポ
ックスウイルス（例えば、ワクシニア、鶏痘ウイルスおよびカナリアポックスウ
イルス）を含む二本鎖ＤＮＡウイルスが含まれる。他のウイルスには、例えば、
ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポバ
ウイルス、ヘパドナウイルス、および肝炎ウイルスが含まれる。レトロウイルス
の例には下記が含まれる：ニワトリ白血病−肉腫ウイルス、哺乳動物のＣ型ウイ
ルス、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ群、レンチウイルス、ス
プーマウイルス（Ｃｏｆｆｉｎ，Ｊ．Ｍ．、レトロウイルス科：ウイルスおよび
その複製、ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＶｉｒｏｌｏｇｙ、第３版、Ｂ．Ｎ．Ｆｉ
ｅｌｄｓ他編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｐ
ｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、１９９６）。他の例には、ネズミ白血病ウイルス、ネ
ズミ肉腫ウイルス、マウス乳がんウイルス、ウシ白血病ウイルス、ネコ白血病ウ
イルス、ネコ肉腫ウイルス、ニワトリ白血病ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイル
ス、ヒヒ内在性ウイルス、テナガサル（Ｇｉｂｂｏｎａｐｅ）白血病ウイルス
、マソンファイザー（ＭａｓｏｎＰｆｉｚｅｒ）サルウイルス、サル免疫不
全症ウイルス、サル肉腫ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、レンチウイルス、およ
びバキュロウイルスが含まれる。

【０１０７】ｈ１、ｈ２またはｈ３ＣＥＤ−６をコードする核酸を細胞に導入するために
好ましい方法は、操作されたウイルスベクターを使用することによる。これらの
ベクターは、細胞周期中または休止中の細胞に核酸を導入するための手段が提供
され、細胞傷害性を低下および遺伝子安定性を改善させるために改変されている
。操作された１型ヘルペス単純ウイルスベクター（Ｄ．Ｍ．Ｋｒｉｓｋｙ他、Ｇ
ｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ、４（１０）：１１２０〜１１２５（１９９７））、ア
デノウイルスベクター（Ａ．Ａｍａｌｆｉｔａｎｌ他、Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ
Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、７２（２）：９２６〜９３３（１９９８））、弱毒化レンチ
ウイルスベクター（Ｒ．Ｚｕｆｆｅｒｅｙ他、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ、１５（９）：８７１〜８７５（１９９７））およびアデノウイルス
／レトロウイルスのキメラベクター（Ｍ．Ｆｅｎｇ他、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１５（９）：８６６〜８７０（１９９７））の調製および
使用が当業者には知られている。

【０１０８】従って、請求項に記載される発明は、ｈ１、ｈ２またはｈ３ＣＥＤ−６のタン
パク質または核酸の上記のような様々な治療的使用を包含する。

【０１０９】タンパク質は、当該分野で知られている方法を使用して投与することができる
。例えば、投与様式は、好ましくは標的細胞の位置におけるものである。従って
、投与は、（ＡＤＡを発現するベクターを投与する場合には）鼻内であり得るし
、あるいは（自殺遺伝子腫瘍を発現するベクターを投与する場合には）注射であ
りうる。他の投与様式（非経口的、粘膜的、全身的、埋め込み、腹腔内など）が
当該分野では一般に知られている。薬剤は、好ましくは、生理食塩水、滅菌水、
リンゲル液および等張塩化ナトリウム液などの薬学的に受容可能なキャリアで投
与することができる。

【０１１０】本発明はまた、アポトーシス細胞の貪食作用における欠損に関連する疾患の診
断において使用することができる診断試薬を提供する。例えば、配列番号：２、
４、６、８、１０、１２、１４または１６に示されるアミノ酸配列を有するタン
パク質のいずれかのエピトープに対する抗体は、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥ
Ｄ−６またはｈ３ＣＥＤ−６における欠損、あるいはその発現における欠損を
患者が有するかどうかを明らかにするための診断試薬として使用することができ
る。さらに、遺伝子レベルでの欠損を、配列番号：１、３、５、７、９、１１、
１３または１５に示される配列あるいはその一部を有する核酸をプローブとして
使用することによって検出することができる。

【０１１１】ＣＥＤ−６シグナル伝達経路において活性な他のタンパク質の同定ＣＥＤ−６、ｈ１ＣＥＤ−６、ｈ２ＣＥＤ−６またはｈ３ＣＥＤ−６は、アポ
トーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路の他のメンバーを同定する
ために使用することができる。多数の方法によってこのような同定を行うことが
できるが、好ましい方法は、Ｃｈｉｅｎら（１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８８、９５７８頁〜９５８２頁）によって酵母で開発
されたいわゆる「ツーハイブリッド」システムである。これにより、目的とする
特定のタンパク質に結合するタンパク質の同定が可能になる。

【０１１２】この技術は、レポーター遺伝子を活性化する転写因子の機能的なインビボ再構
築に基づいている。より詳細に記載すると、この技術は、適切な宿主細胞、好ま
しくは、酵母に、ＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインを有する転写因子に
よって調節されるプロモーターの制御下にあるレポーター遺伝子を含むＤＮＡ構
築物を供給するステップ、本発明の核酸配列のフラグメントまたはそのすべてと
、転写因子の前記ＤＮＡ結合ドメインまたは活性ドメインのいずれかとの第１の
融合体をコードする第１のハイブリッドＤＮＡ配列を宿主細胞において発現させ
るステップ、第１の融合体に取り込まれていない転写因子のＤＮＡ結合ドメイン
または活性化ドメインとともに、調べようとする予想される結合タンパク質をコ
ードする少なくとも１つの第２のハイブリッドＤＮＡ配列を宿主細胞において発
現させるステップ；調べられるタンパク質と本発明によるタンパク質との何らか
の結合を、宿主細胞内における何らかのレポーター遺伝子産物の産生を検出する
ことによって検出するステップ；必要に応じて、結合タンパク質をコードする第
２のハイブリッドＤＮＡ配列を単離するステップを含む。

【０１１３】実施例Ｎ２ブリストル（Ｂｒｉｓｔｏｌ）株をこの研究の参照用野生株として使用し
た。すべての株は、蠕虫をＮＧＭ−ｌｉｔｅ寒天培地で飼育したことを除いて、
Ｂｒｅｎｎｅｒ（Ｂｒｅｎｎｅｒ、１９７４）の記載に従って維持した。株は、
別に記されていない限り、２０℃で維持および飼育を行った。下記の変異体をこ
の研究で使用した：ＬＧＩ：ｃｅｄ−１（ｅ１７３５）、ｃｅｄ−１（ｎ１９
９５）およびｃｅｄ−１（ｎ１５０６）（Ｅｌｌｉｓ他、１９９１）；ＬＧＩ
ＩＩ：ｄｐｙ−１７（ｅ１６４）、ｃｅｄ−６（ｎ１８１３、ｎ２０９５）、ｍ
ｅｃ−１４（ｕ５５）、ｎｃｌ−１（ｅ１８６５）、ｃｅｄ−７（ｎ１９９７）
、ｃｅｄ−７（ｎ１８９２）、ｃｅｄ−７（ｎ１９９６）（Ｅｌｌｉｓ他、１９
９１）、ｕｎｃ−３６（ｅ２５１）（Ｂｒｅｎｎｅｒ、１９７４）、およびｓＤ
ｐ３（ＩＩＩ，ｆ）（Ｒｏｓｅｎｂｌｕｔｈ他、１９８５）；ＬＧＩＶについ
て：ｃｅｄ−２（ｅ１７５２）（Ｈｅｄｇｅｃｏｃｋ他、１９８３）、ｃｅｄ−
５（ｎ１８１２）およびｃｅｄ−１０（ｎ１９９３）（Ｅｌｌｉｓ他、１９９１
）。すべての変異体はＨｏｄｇｋｉｎ（１９９７）に記載されている。

【０１１４】実施例１取り込みの分析および定量動物を３０ｍＭのＮａＮ３で麻酔し、ノルマスキー光学顕微鏡を使用して観察
するために寒天パッド上にのせた（ＳｕｌｓｔｏｎおよびＨｏｒｖｉｔｚ、１９
７７；ＡｖｅｒｙおよびＨｏｒｖｉｔｚ、１９８７）。胚発生の途中に生じた細
胞残骸の取り込みを定量するために、依然として４個の細胞のみが生殖腺に存在
する（すなわち、４時間前に孵化した）若いＬ１幼虫の頭部領域で認められる永
続性細胞残骸の数を数えた。生殖細胞系の取り込み欠損を定量するために、遠腕
（生殖細胞翅が生じる部分）および近腕（永続性の生殖細胞残骸が、卵母細胞の
発達によってそれらが一緒に除かれるときに時々観察することができる部分）の
両方において認められる細胞残骸を計数した。

【０１１５】実施例２生殖細胞系の形質転換およびｃｅｄ−６のゲノムレスキュートランスジェニック動物を、Ｍｅｌｌｏらによって開発された生殖細胞系マイ
クロインジェクション手順を使用して作製した。Ｗ０３Ａ５、Ｆ２０Ｆ１０、Ｆ
４８Ｅ８、Ｒ０２Ｆ２、Ｗ０２Ｇ１２、Ｔ０６Ｈ６、Ｃ４８Ｅ６、Ｃ４４Ｄ７、
Ｆ５６Ｄ２、Ｆ４３Ｆ１２、Ｃ０５Ｄ２、Ｔ０６Ｃ９、Ｃ０５Ｈ８のコスミドを
、単独であるいはグループ（最終濃度：各コスミドについて２０ｎｇ／ｕｌ）で
ｃｅｄ−６（ｎ１８１３）動物に注入した。プラスミドｐＲＦ４（最終濃度：５
０〜８０ｎｇ／ｕｌ）を優性同時注入マーカーとして使用した（Ｍｅｌｌｏ他、
１９９１）；ｐＲＦ４は、変異したコラーゲン遺伝子ｒｏｌ−６（ｓｕ１００６
ｇｆ）を有し、優性ローラー（ｒｏｌｌｅｒ）（Ｒｏｌ）表現型をもたらす。染
色体外配列（ａｒｒａｙ）を安定的に伝達するトランスジェニック株をさらなる
分析のために飼育した。レスキューをアッセイするために、トランスジェニック
動物が産んだ３倍胚をノルマスキー光学装置で細胞残骸について調べた。残骸を
ほとんど有しないまたは全く有しない胚を生成するトランスジェニック株はレス
キューされていると見なした。Ｆ５６Ｄ２におけるｃｅｄ−６の位置をさらに明
らかにするために、多数の欠失構築物を作製し、他のフラグメントをｐＢｌｕｅ
ｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）ＩＩにサブクローニングした。５０〜９０ｎｇ／ｕｌの
これらのクローンを、ｃｅｄ−６（ｎ１８１３）蠕虫に、８０〜１００ｎｇ／ｕ
ｌのｐＲＦ４注入マーカーとともに同時注入して、そのレスキュー能を上記のよ
うに調べた。

【０１１６】実施例３ｃｅｄ−６ｃＤＮＡの単離全長のｃｅｄ−６ｃＤＮＡを単離するために、様々な段階が混合されているＣ
．ｅｌｅｇａｎｓのλＺａｐのｃＤＮＡライブラリー〔Ｒ．Ｂａｒｓｔｅａｄか
らの贈与、オクラホマ医学研究基金（ＯｋｌａｈｏｍａＭｅｄｉｃａｌＲｅ
ｓｅａｒｃｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ）、ＯｋｕｌａｈｏｍａＣｉｔｙ、ＯＫ
〕を、確立されたプロトコル（Ｓａｍｂｒｏｏｋ他、１９８９）を使用してスク
リーニングした。³²Ｐ標識したプローブを、レスキュー１０ｋｂのＸｈｏＩゲ
ノムフラグメントをテンプレートとして使用して作製した。陽性のファージを、
インビボ切り出しプロトコルを使用してプラスミドクローンに変換した。単離し
たプラスミドクローンに由来するＦ５６Ｄ２．７遺伝子を表すクローンをサザン
ブロットで同定した。この目的のために、³²Ｐ標識したプローブを、予想される
Ｆ５６Ｄ２．７の３つのエキソンを表すＲＴ−ＰＣＲ産物から作製した。ＲＴ−
ＰＣＲに使用したプライマー：ＧＡＡＴＧＴＴＣＴＣＡＴＴＴＡＴＴＧ（配列番
号：２９）およびＧＧＡＴＴＣＡＡＡＣＧＡＴＣＣＧＡＴＧ（配列番号：１７）
。

【０１１７】約３００，０００個のプラークから、Ｆ５６Ｄ２．７のｃＤＮＡに対応する１
０個のプラスミドクローンを単離した。これらのクローンを、隣接Ｔ３プライマ
ーおよびＴ７プライマーを使用してインサートの両端について配列決定した。５
' 端における部分的なＳＬ２配列および完全なポリ（Ａ）テールを有する２個の
クローンが全長のＦ５６Ｄ２．７ｃＤＮＡとして同定された。これらの配列結果
およびＳａｕ３ＡＩによる制限消化パターンの分析により、これらのクローンが
１つの転写物を示すこともまた示唆された。

【０１１８】実施例４逆転写ＰＣＲ逆転写（ＲＴ）−ＰＣＲ実験を行って、レスキューＸｈｏＩゲノムフラグメ
ント内において検出または予想される転写物の５' 端を決定した。逆転写を下記
のプライマーで行った：Ｃ０５Ｄ２．６ａ：ＧＡＡＴＣＴＧＴＣＣＡＴＣＧＣＡ
ＴＴＧＣ（配列番号：１８）、ＧＡＡＴＴＴＣＴＴＴＧＧＧＴＡＧＡＣＡ（配列
番号：１９）；Ｃ０５Ｄ２．６ｂ：ＧＣＴＣＴＧＡＡＧＡＡＣＴＧＴＧＡ（配列
番号：２０）、ＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＧＡＴＴＧＴＧ（配列番号：２１）
；Ｆ５６Ｄ２．７：ＧＧＧＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＴＣＡＴＣ（配列番号：２２）
。次いで、これらのプライマーをＳＬ１プライマー（ＧＴＴＴＡＡＴＴＡＣＣＣ
ＡＡＧＴＴＴＧＡＧ（配列番号：２３））またはＳＬ２プライマー（ＧＧＴＴＴ
ＴＡＡＣＣＣＡＧＴＴＡＣＴＣＡＡＧ（配列番号：２４））と組み合わせてその
後のＰＣＲ増幅に使用した。Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓの様々な段階が混合されている
全ＲＮＡを前記のように単離した。ＲＴ−ＰＣＲを、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ
ＰｒｅａｍｐｌｉｃａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）を使用し
て行った。

【０１１９】実施例５ｃｅｄ−６変異体の同定ｃｅｄ−６対立遺伝子のいずれかが大きな物理的に検出可能な多型をもたらし
たかどうかを明らかにするために、本発明者らは、様々な制限酵素で消化したＮ
２、ｃｅｄ−６（ｎ１８１３）およびｃｅｄ−６（ｎ２０９５）のゲノムＤＮＡ
のサザンブロットを作製した。レスキューされているＸｈｏＩゲノムフラグメ
ントから作製されたプローブによって、４つの異なる制限酵素を使用して、ｃｅ
ｄ−６（ｎ２０９５）において新規な対立遺伝子特異的なバンドが検出された。
ｃｅｄ−６（ｎ２０９５）における新規な制限パターンの分析によって、この対
立遺伝子は、Ｆ５６Ｄ２．７の少なくとも一部を含むが、隣接するＣ０５Ｄ２．
６ｂ転写物に影響を及ぼさないこの領域での複雑な再編成を有することが示され
る。

【０１２０】Ｆ５６Ｄ２．７における点変異を同定するために、Ｎ２、ｃｅｄ−６（ｎ１８
１３）およびｃｅｄ−６（ｎ２０９５）の変異体に由来するＦ５６Ｄ２．７座の
重複するフラグメントをＰＣＲ増幅し、ＰＣＲ産物配列決定キット（ＰＣＲＰ
ｒｏｄｕｃｔＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇＫｉｔ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用し
て直接配列決定した。これらの重複するＰＣＲフラグメントは、全Ｆ５６Ｄ２．
７転写ユニットおよび約１ｋｂの上流ゲノム配列を含んでいた。ＰＣＲ増幅およ
び配列決定に使用したプライマーの配列は求めに応じて得ることができる。

【０１２１】実施例６熱ショック実験ｃｅｄ−６のｃＤＮＡによって取り込み欠損がレスキューされ得るかどうかを
調べるために、全長のＦ５６Ｄ２．７ｃＤＮＡのＫｐｎＩ／ＳａｌＩフラグメ
ントを、ｈｓｐ１６−２プロモーターおよびｈｓｐ１６−４１プロモーターを有
するｐＰＤ４９．７８およびｐＰＤ４９．８３の両ベクターのＭＣＳＩＩのＫｐ
ｎＩ／ＳａｃＩ部位に挿入して、ｐＬＱｈｓ１およびｐＬＱｈｓ２の構築物を
作製した。この２つの構築物を、８０ｎｇ／ｕｌのｐＲＦ４とともにそれぞれ５
０ｎｇ／ｕｌで、作製された安定的に伝達する染色体外配列に同時注入した。本
発明者らは、対照実験のために、ｐＰＤ５０．２１およびｐＰＤ５０．１５を使
用した：これらはｐＰＤ４９．７８およびｐＰＤ４９．８３の２つの誘導体であ
り、ｌａｃＺのオープンリーディングフレームが熱ショックプロモーターの支配
下に置かれている。これらの構築物を有するトランスジェニック株を上記のよう
に作製した。

【０１２２】細胞死が胚発生の途中で生じる前にｃｅｄ−６を過剰発現させるために、成熟
した動物を、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を播種したプレートに置き、１時間にわた
って産生させた。続いてプレートをパラフィルムでシールして、３３℃の水浴に
４５分間移すことによって熱ショックを与えた。２０℃で７５分間回復させた後
、成熟した動物をプレートから取り出した。熱ショックの１２時間後〜１４時間
後、孵化したＬ１幼虫を頭部領域における残骸について計数した。

【０１２３】胚発生の途中での細胞残骸の形成後にｃｅｄ−６を過剰発現させるために、す
べての発達段階にある胚を含有するが、幼虫を含有しない蠕虫プレートをパラフ
ィルムでシールして、３３℃の水浴にて４５分間の熱ショックを与えた。熱ショ
ックの３時間後、新たに孵化したＬ１幼虫を頭部領域における残骸について計数
した。

【０１２４】死ぬ生殖細胞の取り込みに対する細胞死が生じる前におけるｃｅｄ−６の過剰
発現の影響を明らかにするために、Ｌ４段階のトランスジェニック動物を新しい
プレートに移して、２０℃で保存した。Ｌ４脱皮の最初の２４時間後に、蠕虫プ
レートをパラフィルムでシールして、上記のように３３℃で４５分間の熱ショッ
クを与えた。動物を、熱ショックの１２時間後における生殖細胞の残骸について
調べ、さらに熱ショックの１８時間後、２４時間後、３６時間後および６０時間
後も調べた。

【０１２５】生殖細胞の残骸が形成された後でｃｅｄ−６を過剰発現させるために、Ｌ４段
階のトランスジェニック動物を集め、各プレートに数匹ずつ、数枚のプレートに
入れた。Ｌ４脱皮の２４時間後、１枚のプレートの蠕虫を上記のように４５分間
の熱ショックを与えた。同様に、Ｌ４脱皮の３６時間後、４２時間後、４８時間
後および６０時間後、それぞれの時点での各プレートの蠕虫を熱処理した。動物
を熱ショックの１２時間後における生殖細胞の残骸について調べた。

【０１２６】他の取り込み変異体のバックグラウンドにおいてｃｅｄ−６を過剰発現させる
ために、ｃｅｄ−６またはｌａｃＺ発現の染色体外配列をｃｅｄ−６（ｎ１８１
３）から野生型背景に移し、続いて、ｃｅｄ−１（ｅ１７３５）、ｃｅｄ−１（
ｎ１５０６）、ｃｅｄ−１（ｎ１９９５）、ｃｅｄ−７（ｎ１８９２）、ｃｅｄ
−７（ｎ１９９６）、ｃｅｄ−７（ｎ１９９７）、ｃｅｄ−２（ｎ１７５２）、
ｃｅｄ−５（ｎ１８１２）、またはｃｅｄ−１０（ｎ１９９３）と交配して、対
応するトランスジェニック変異株を作製した。熱ショック実験を上記のように行
った。

【０１２７】実施例７ゲノムモザイク分析１０００匹のｄｐｙ−１７（ｅ１６４）ｃｅｄ−６（ｎ１８１３）ｍｅｃ−１
４（ｕ５５）ｎｃｌ−１（ｅ１８６５）ｕｎｃ−３６（ｅ２５）ＩＩＩ；ｓＤｐ
３（ＩＩＩ、ｆ）を個々に蠕虫プレートに入れた。これらの動物の子孫を、ＤＰ
ＹＵＮＣの子孫のみを産む動物を解剖顕微鏡で同定するために調べた。成熟し
た動物を同定直後にノルマスキー光学装置で調べた。最初に、体細胞鞘細胞を調
べ、次いでＤ系統およびＣ系統に由来する体壁筋肉を調べた。すべての体壁筋肉
細胞が野生型を示したとき、重複はＰ４系統において失われている。Ｄ系統に由
来するすべての体壁筋肉細胞が野生型であるとき、Ｃ系統に由来する体壁筋肉細
胞はｎｃｌ表現型を示しているが、重複はＰ３系統から失われているに違いない
。Ｄ系統およびＣ系統の両方に由来する体壁筋肉細胞が野生型であるとき、複製
はＰ２系統から失われているに違いない。生殖腺の両方の腕における細胞残骸も
また取り込み表現型について調べた。体細胞鞘細胞において失われているが、生
殖細胞では失われていない重複を有する動物を見つけるために、ｄｐｙ−１７（
ｅ１６４）ｃｅｄ−６（ｎ１８１３）ｍｅｃ−１４（ｕ５５）ｎｃｌ−１（ｅ１
８６５）ｕｎｃ−３６（ｅ２５）ＩＩＩ；ｓＤｐ３（ＩＩＩ、ｆ）動物を、ノル
マスキー光学装置で、体細胞鞘細胞における重複の喪失について調べた。同時に
、生殖腺における細胞残骸もまた取り込み表現型について調べた。

【０１２８】実施例８ＣＥＤ−６のヒトホモログの同定公開されているドメインデータベース（ＥＳＴ、ＧｅｎＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、
ＳｗｉｓｓｐｒｏｔおよびＰＩＲ）に対するｃｅｄ−６配列（Ｆｉｇｕｒｅ１
８、ｈＣＥＤ−６のコンセンサスＤＮＡ配列）に関する広範囲な検索（ｔｂｌａ
ｓｔｎ）によって、いくつかのＥＳＴに対する統計学的に有意な相同性がタンパ
ク質のカルボキシ末端領域において明らかにされた（ＡＡ４４３３６８、ＡＡ４
３１９９５、Ｒ３３３８９、Ｒ５３８８１）。１つのＥＳＴ（Ｔ４８５１３）が
、ＰＴＢドメインのカルボキシル末端および荷電領域の開始部に対する相同性を
示していた。５' ＲＡＣＥ分析を行うために、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから得られるＭ
ａｒａｔｈｏｎ−ｒｅａｄｙ結腸直腸腺ガンｃＤＮＡライブラリーを使用した。
ＲＡＣＥおよび配列決定のために使用されるプライマーの位置はＦｉｇｕｒｅ
１８に示されている。その後のクローニングおよび配列分析により、さらなる配
列情報が得られた。このさらなる配列情報を使用して、引き続き数回のデータベ
ース検索（ｂｌａｓｔｎ）を行うことによって、我々が約２４００ｈｐのコンセ
ンサスを構築することができるさらなるＥＳＴが明らかにされた。この配列をさ
らに伸張し、そしてコロニーハイブリダイゼーションおよびさらなるＲＡＣＥ産
物の配列決定を行うことによって確認した。

【０１２９】実施例９ＲＮＡブロット（Ｆｉｇｕｒｅ２５を参照のこと、ノーザンブロットによる正
常なヒト組織およびガン細胞株におけるｈＣＥＤ−６の発現パターン：Ａ）ヒト
多組織ノーザン（ＭＴＮ）ブロット、Ｂ）ヒト多組織ノーザン（ＭＴＮ）ブロッ
トＩＩ、Ｃ）ヒトガン細胞株多組織ノーザン（ＭＴＮ^TM）ブロット）８個の異なるヒト組織（心臓、脳、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓および膵臓
）由来の２ｍｇのポリＡ＋ＲＮＡを各レーンに含有するヒト多重組織ノーザン（
ＭＴＮ−１、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、ならびに脾臓、胸腺、前立腺、精巣、卵巣、
小腸、結腸および末梢白血球由来の２ｍｇのポリＡ＋ＲＮＡを各レーンに含有す
るＭＴＮ−ＩＩヒト多重組織ノーザンを、製造者の説明書に従ってハイブリダイ
ゼーションして、０．１ｘＳＳＣ、０．２％ＳＤＳにおいて５５℃で洗浄した。
同様に、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから得られる、ヒトガン細胞株（メラノーマＧ３６１
、肺ガンＡ５４９、結腸直腸腺ガンＳＷ４８０、バーキットリンパ腫Ｒａｊｉ白
血病Ｍｏｌｔ４、白血病Ｍｏｌｔ４、リンパ芽球性白血病Ｋ５６２、ＨｅＬａＳ
３および前骨髄性白血病ＨＬ６０）から得られたポリＡ＋ＲＮＡのブロットを調
べた。

【０１３０】実施例１０全長のヒトｃｅｄ−６ｃＤＮＡの単離ｈｂｃ３１２３を含むいくつかのヒトＥＳＴクローンを、様々なデータベース
を検索することによって同定した。このｈｂｃ３１２３ＥＳＴクローンを完全に
配列決定した。プライマーＰ（ＡＣＡＡＴＴＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＴＡＧ；配列
番号：３０）およびＱ（ＣＴＧＴＴＴＴＣＴＴＧＴＴＴＣＡＡＣＡＴＣ；配列番
号：３１）の１組をＰＴＢドメインの領域について設計し、続いてヒトゲノムＤ
ＮＡをテンプレートとして使用してその特異性について調べた。この結果は、こ
れらのプライマーは特異的であることを示していた。脳、心臓、腎臓、肝臓、肺
、膵臓、胎盤、骨格筋の組織を含む１組のλｇｔ１０ｃＤＮＡライブラリー（Ｃ
ｌｏｎｔｅｃｈから購入）を、ｃｅｄ−６がこれらの組織のいずれかで発現され
るかどうかを検出するためにプライマーＰおよびプライマーＱを使用して調べた
。

【０１３１】プライマーＱおよびλｇｔ１０ベクターに対するプライマーを使用して、いく
つかのＰＣＲフラグメントが、脳および膵臓のｃＤＮＡライブラリーを使用して
単離された。これらのＰＣＲフラグメントを、同じプライマー組を使用して再度
増幅して、配列決定した。配列分析は、これらのＰＣＲフラグメントにより、ｃ
ＤＮＡの伸張がヒトｃｅｄ−６のコード領域の開始コドンの１３０ｂｐ上流まで
可能になることを示唆していた。次いで、最長のＰＣＲフラグメントをヒトＥＳ
Ｔデータベースに呈示して、単離したＰＣＲフラグメントと重複するが、ｈｂｃ
３１２３ＥＳＴクローンと重複しないさらに多くのＥＳＴクローンを検索した。
これらの３つのＥＳＴクローンのＧｅｎＢａｎｋでの名称は、それぞれ、Ｒ６５
９８２、Ｒ６５９８３およびＡＡ１５９３９４である。これらの３つのＥＳＴは
、ＰＣＲフラグメントおよびｈｂｃ３１２３とともに、ヒトＣＥＤ−６の全長の
コード配列および約４５０ｂｐの５' ＵＴＲを構成する。配列決定されたヒトｃ
ｅｄ−６ｃＤＮＡは、ｈｂｃ３１２３ＥＳＴクローンの配列決定データ、単離さ
れたＰＣＲフラグメントの配列決定データ、およびヒトＥＳＴプロジェクトのヒ
トｃＤＮＡ領域における多くのＥＳＴクローンの配列結果によって正しく確認さ
れた。これらのヒトｃｅｄ−６ｃＤＮＡデータによって、実施例８および実施例
９の両方に示されているすべての実験が示唆され、そして導かれた。Ｆｉｇｕｒ
ｅ３２を参照のこと。

【０１３２】実施例１１ヒトＣＥＤ−６のヒト組織における分布本実施例は、ヒト組織分布のさらなる例である。ＰＴＢドメインに対する２つ
のプライマーを、ｃＤＮＡライブラリーがヒトｃｅｄ−６を含むかどうかを検出
するために使用した。２つのプライマーを、テンプレートとしてヒトゲノムＤＮ
Ａを使用して調べた。これらのプライマーは、バックグラウンド増幅が検出され
なかったために特異的である。この組織分布研究の結果は以下の通りである

【０１３３】Ｉ．ｃＤＮＡライブラリーから得られた情報組織ヒトｃｅｄ−６ｃＤＮＡ脳＋＋心臓＋＋腎臓＋＋肝臓＋肺＋＋膵臓＋＋胎盤＋＋骨格筋＋＋

【０１３４】ＩＩ．ヒトＥＳＴプロジェクトから得られた情報組織ヒトＥＳＴプロジェクト由来ＥＳＴクローン脳２精巣３膵臓４ＨＣＣ細胞株１大動脈１胎盤１３胎児１保存試料２

【０１３５】実施例１２ＦＩＳＨとして知られている技術を行った。ヒトｃｅｄ−６遺伝子は、染色体
上の位置が２ｑ３２．３−ｑ３３に局在した。

【０１３６】実施例１３Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓおよびヒトのｃｅｄ−６ホモログ間の機能的保存；ｈＣＥＤ
の過剰発現によってｃ．ｅｌｅｇａｎｓにおけるＣＥＤ−６変異体の取り込み欠
損がレスキューされるシグナル伝達経路が進化を通して通常的に保存されているとすれば、ヒトのｃ
ｅｄ−６ホモログ（以下、ｈ１ＣＥＤ−６および／またはｈ３ＣＥＤ−６を包含
するｈｃｅｄ−６という）もまた、哺乳動物におけるアポトーシス細胞の貪食作
用による除去を促進することに関与し得ると考えられる。この疑問を解決するた
めに、本発明者らは、ヒトおよび蠕虫のｃｅｄ−６遺伝子を、ｈｃｅｄ−６をＣ
．ｅｌｅｇａｎｓにおいて過剰発現させること、およびｈｃｅｄ−６が内因性ｃ
ｅｄ−６遺伝子に関して機能的に代替し得るかどうかを明らかにすることによっ
て機能的保存について調べた。

【０１３７】熱ショックプロモーター、ｈｓｐ１６−２およびｈｓｐ１６−４１の制御下に
あるＣ．ｅｌｅｇａｎｓのｃｅｄ−６ｃＤＮＡを過剰発現させることにより、ト
ランスジェニックｃｅｄ−６変異体の胚における取り込み欠損が効率的にレスキ
ューされることが本明細書中に示されている。同じアッセイを使用して、Ｃ．ｅ
ｌｅｇａｎｓにおける生理活性についてｈｃｅｄ−６を調べた。ｈｓｐ１６−２
およびｈｓｐ１６−４１の制御下にあるｈｃｅｄ−６オープンリーディングフレ
ームを有する構築物を作製し、両方の構築物に関してトランスジェニックｃｅｄ
−６（ｎ１８１３）変異体動物を後期の胚および若い幼虫における取り込み欠損
のレスキューについて調べた。トランスジェニック雌が産生した熱ショック処理
した胚は、熱ショック処理を行っていない胚と異なり、細胞残骸をほとんど含有
していないことが見出された（Ｆｉｇｕｒｅ３１Ａ）。これらの観察は、ｈｃ
ｅｄ−６は、現在のアッセイでは弱いにも関わらず、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのｃｅ
ｄ−６の代わりになり得ることを示唆している。このことは、Ｃ．ｅｌｅｇａｎ
ｓおよびヒトのｃｅｄ−６は機能的に保存されているという考えを支持している
。さらに、実施例１３に示される評価により、レスキューがうまく行われている
ことが示された。

【０１３８】いくつかのアッセイにおいて部分的なレスキュー、あるいはレスキューが行わ
れないことさえもが、機能的な保存が確立されている場合においてさえ以前に認
められている。例えば、ＷｕおよびＨｏｒｖｉｔｚ（１９９８ａ）（Ｎａｔｕｒ
ｅ、１９９８ａ、３９２、５０１〜５０４）は、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−
５の哺乳動物ホモログであるＤＯＣＫ１８０によって、取り込み欠損ではなく、
ＣＥＤ−５変異体の遠位端細胞遊走欠損が効率的にレスキューされたことを見出
している。

【０１３９】実験プロトコールｈｃｅｄ−６のオープンリーディングフレームを、開始コドンおよび停止コド
ンに隣接するオリゴヌクレオチドを使用してＰＣＲ増幅して、ＫｐｎＩおよび
ＳａｃＩで前もって消化した熱ショックベクターのｐＤＰ４９．７８およびｐ
ＤＰ４９．８３にサブクローニングした（前記参照）。次いで、この２つの構築
物を、上記に記載されているようにｃｅｄ−６（ｎ１８１３）動物に注入して、
安定的に伝達するトランスジェニック株を樹立した。

【０１４０】胚および成熟した生殖細胞系における取り込み欠損のレスキューをスコアする
ために、本明細書中の上記のように、トランスジェニック動物を熱ショックに曝
し、細胞残骸の数を定量した。

【０１４１】

【表３】

【０１４２】単離されたＰＣＲフラグメントの１つをｈｂｃ３１２３ＥＳＴクローンに融合
した。ｐＬＱｈｃｅｄ−６．１（融合ｃＤＮＡ）は、開始コドンＡＴＧの上流に
１３０ヌクレオチドを有する。２つのプライマー、Ｈｈｓ１（ＧＧＧＧＴＡＣＣ
ＧＡＡＴＴＣＴＧＡＴＧＧＣＡＡＣ；配列番号：２７）およびＨｈｓ３（ＣＧＡ
ＧＣＴＣＧＡＴＣＡＡＴＡＧＴＧＡＡＧＧＴＧＡＧＧ；配列番号：２８）を使用
して、ヒトｃｅｄ−６ｃＤＮＡのオープンリーディングフレームを増幅した。続
いて、ＰＣＲフラグメントをＫｐｎＩおよびＳａｃＩで消化して、両方の熱
ショックベクターｐｐＤ４９．７８およびｐｐＤ４９．８３のＫｐｎＩ部位およ
びＳａｃＩ部位に挿入した。次いで、熱ショック構築物ｐＬＱｈｓ１およびｐ
ＬＱｈｓ２を、それぞれ５０ｎｇ／μｌで、マーカーｐＲＦ４（８０ｎｇ／μｌ
）とともに、成熟したｃｅｄ−６（ｈ１８１３）雌雄両性体の生殖細胞系に同時
注入した。ｎｃｅｄ−６を、本明細書中に記載されているように、確立された手
順に従って、ｃｅｄ−６（ｎ１８１３）トランスジェニック動物の胚子孫におけ
る取り込み欠損をレスキューするその能力について調べた。

【０１４３】成熟した生殖腺におけるｃｅｄ−６（ｎ１８１３）の取り込み欠損に関するｈ
ＣＥＤ−６のレスキュー能もまた調べた。Ｌ４／成体脱皮のトランスジェニック
動物を選び、新しいプレートに置いた。３６時間後、これらの動物を３３℃での
４５分間の熱ショックにより処理した。熱ショックの１２時間後、生殖腺の一方
の腕における細胞残骸を計数した。熱処理なしのトランスジェニック動物、熱シ
ョックの有無のもとでの同じ発達段階のｃｅｄ−６（ｎ１８１３）動物などの対
照実験もまた使用した。これらの実験は、ｈｃｅｄ−６の過剰発現によって、生
殖細胞におけるＣ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６変異体の取り込み欠損がレスキ
ューされたことを示している。これらの実験によって、ヒトのｃｅｄ−６（例え
ば、ｈ３ＣＥＤ−６）の機能はアポトーシス細胞の貪食作用を誘導することが確
認される。Ｆｉｇｕｒｅ３１Ａおよび３１Ｂ。

【０１４４】実施例１４Ｔ３プライマーまたはＴ７プライマー（いずれか一方または両方を使用するこ
とができ、これらは実際の挿入物の異なる位置に存在する）を使用して、両方の
寄託物における配列を得ることができる。両プライマーはＣｌｏｎｔｅｃｈから
市販されている（＃１２２７および＃１２２８）。配列を以下に示す：Ｔ７プライマー：５' （ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＡＧＡ）３
' （配列番号：２５）Ｔ３プライマー：５' （ＡＴＴＡＡＣＣＣＴＣＡＣＴＡＡＡＧＧＧＡ）３' （配
列番号：２６）

【０１４５】参考文献：Ａｖｒｅｙ，Ｌ．，ａｎｄＨｏｒｖｉｔｚ，Ｈ．（１９８７）．野生
型Ｃ．エレガンスの発生中に死に至る細胞は、ｃｅｄ−３変異体においてニュー
ロンとして機能しうる。Ｃｅｌｌ５１，１０７１−１０７８．

【０１４６】Ｂｌａｉｋｉｅ，Ｐ．，Ｉｍｍａｎｕｅｌ，Ｄ．，Ｗｕ，Ｊ．，Ｌ
ｉ，Ｎ．，Ｙａｊｎｉｋ，Ｖ．，ａｎｄＭａｒｇｏｌｉｓ，ｂ．
（１９９４）．ＳＨ２ドメインとは異なるＳｈｃ中の領域は、チロシンリン酸化
された成長因子に結合しうる。ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２６９，３２０３１−３２０３４．Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ，Ｔ．（１９９５）．カエノルバディティス・エレガ
ンスにおけるトランス−スプライシングおよびポリシストロニックな転写。Ｔ
ＩＧ１１，１３２−１３６．

【０１４７】Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ，Ｔ．，ａｎｄＳｔｅｗａｒｄ，Ｋ．（１９９
７）．ＲＮＡプロセッシングおよび遺伝子構造。ＩｎＣ．ＥＬＥＧＡＮＳ
ＩＩ，Ｄ．Ｌ．Ｒｉｄｄｌｅ，Ｔ．Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ，Ｂ．
Ｊ．ＭｅｙｅｒａｎｄＪ．Ｒ．Ｐｒｉｅｓｓ，ｅｄｓ．（Ｃｏｌ
ｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ：ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ
ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ），ｐｐ．１１７−１４５．

【０１４８】Ｂｏｒｋ，Ｐ．，ａｎｄＭａｒｇｏｌｉｓ，Ｂ．（１９９５）．ホス
ホチロシン相互作用ドメイン。Ｃｅｌｌ８０，６９３−６９４．

【０１４９】Ｂｒｅｎｎａｒ，Ｓ．（１９７４）カエノラブディティスエレガンスの遺
伝学。Ｇｅｎｅｔｉｃｓ７７，７１−９４．

【０１５０】Ｄｒｉｓｃｏｌｌ，Ｍ．，ａｎｄＣｈａｌｆｉｅ，Ｍ．（１９９１）
．ｍｅｃ‐４遺伝子は、変異して神経変性を導くカエノラブディティスエレガ
ンス遺伝子のファミリーのメンバーである。Ｎａｔｕｒｅ３４９，５８８−
５９３．

【０１５１】Ｄｒｉｓｃｏｌｌ，Ｍ．（１９９２）．線虫カエノラブディティスエレガ
ンスにおける細胞死の分子遺伝学。ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｕｒｏ
ｂｉｏｌｏｇｙ２３，１３２７−１３５１．

【０１５２】Ｄｕｖａｌｌ，Ｅ．，Ｗｙｌｌｉｅ，Ａ．Ｈ．，ａｎｄＭｏｒｒｉ
ｓ，Ｒ．Ｇ．（１９８５）．プログラム細胞死（アポトーシス）をうける細
胞のマクロファージ認識。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ５６，３５１−３５８．

【０１５３】Ｅｌｌｉｓ，Ｒ．Ｅ．，Ｊａｃｏｂｓｏｎ，Ｄ．Ｍ．，ａｎｄＨ
ｏｒｖｉｔｚ，Ｈ．Ｒ．（１９９１）．カエノラブディティスエレガンス
におけるプログラム細胞死の間の細胞残骸の貪食作用に必要な遺伝子。Ｇｅｎｅ
ｔｉｃｓ１２９，７９−９４．

【０１５４】Ｆａｄｏｋ，Ｖ．Ａ．，Ｓａｖｉｌｌ，Ｊ．Ｓ．，Ｈａｎｓｌｅｔｔ
，Ｃ．，Ｂｒａｔｔｏｎ，Ｄ．Ｌ．，Ｄｏｈｅｒｔｙ，Ｄ．Ｅ．，
Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｐ．Ａ．，ａｎｄＨｅｎｓｏｎ，Ｐ．Ｍ．
（１９９２）．マクロファージの異なる集団は、アポトーシス細胞を認識および
除去するためのビトロネクチンレセプターまたはホスファチジルセリンレセプタ
ーのいずれかを使用する。ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ１４９，４０２９−４０３５．

【０１５５】Ｆａｄｏｋ，Ｖ．Ａ．，Ｖｏｅｌｋｅｒ，Ｄ．Ｒ．，Ｃａｍｐｂｅ
ｌｌ，Ｐ．Ａ．，Ｃｏｈｅｎ，Ｊ．Ｊ．，Ｂｒａｔｔｏｎ，Ｄ．
Ｌ．，ａｎｄＨｅｎｓｏｎ，Ｐ．Ｍ．（１９９２）．ホスファチジ
ルセリンのアポトーシスリンパ球の表面における曝露は、マクロファージによる
特異的な認識および除去を引き起こす。ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ１４８，２２０７−２２１６．

【０１５６】Ｆｉｎａｎ，Ｐ．，Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｙ．，Ｇｏｕｔ，Ｉ．，Ｈｓ
ｕａｎ，Ｊ．，Ｔｒｕｏｎｇ，Ｏ．，Ｂｕｔｃｈｅｒ，Ｃ．，Ｂｅ
ｎｎｅｔｔ，Ｐ．，Ｗａｔｅｒｆｉｅｌｄ，Ｍ．Ｄ．，ａｎｄＫｅ
ｌｌｉｅ，Ｓ．（１９９４）．ＳＨドメインおよびプロリン−リッチ配列は
、食細胞ＮＡＤＰＨオキシダーゼ複合体の２つの成分間の相互作用を媒介する。
ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ
２６９，１３７５２−１３７５５．

【０１５７】Ｆｒａｎｃ，Ｎ．Ｃ．，Ｄｉｍａｒｃｑ，Ｊ．−Ｌ．，Ｌａｇｕｅｕ
ｘ，Ｍ．，Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｊ．，ａｎｄＥｚｅｋｏｗｉｔｚ，
Ｒ．Ａ．Ｂ．（１９９６）．Ｃｒｏｑｕｅｍｏｒｔ，アポトーシス細胞を
認識する新規ショウジョウバエ血球／マクロファージレセプター。Ｉｍｍｕｎｉ
ｔｙ４，４３１−４４３．

【０１５８】Ｆｒｉｓｅ，Ｅ．，Ｋｎｏｂｌｉｃｈ，Ｊ．，Ｙｏｕｎｇｅｒ−Ｓｔｅ
ｐｈｅｒｄ，Ｓ．，Ｊａｎ，Ｌ．，ａｎｄＪａｎ，Ｙ．ショウジョ
ウバエＮｕｍｂタンパク質は、感覚器官系統の細胞間相互作用のノッチレセプタ
ーのシグナル伝達を阻害する。（１９９６）．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄ
ＳｃｉＵＳＡ９３（１５），１１９２５−１１９３２．

【０１５９】Ｇｅｅｒ，Ｐ．ｖ．ｄ．，ａｎｄＰａｗｓｏｎ，Ｔ．（１９９５
）．ＰＴＢドメイン：シグナル伝達に関与する新規タンパク質モジュール。ＴＩ
ＢＳ２０，２７７−２８０．

【０１６０】Ｇｏｕｔ，Ｉ．，Ｄｈａｎｄ，Ｒ．，Ｈｉｌｅｓ，Ｉ．Ｄ．，Ｔ
ｒｕｏｎｇ，Ｏ．，Ｔｏｔｔｙ，Ｎ．Ｆ．，Ｈｓｕａｎ，Ｊ．，
Ｂｏｏｋｅｒ，Ｇ．Ｗ．，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｌ．Ｄ．，ａｎｄ
Ｗａｔｅｒｆｉｅｌｄ，Ｍ．Ｄ．（１９９３）．ＧＴＰアーゼダイナミン
は、ＳＨ3 度メインのサブセットに結合し、活性化される。Ｃｅｌｌ７５，
２５−３６．

【０１６１】Ｇｒａｂｓ，Ｄ．，Ｓｌｅｐｎｅｖ，Ｖ．Ｉ．，Ｓｏｎｇｙａｎｇ，
Ｚ．，Ｄａｖｉｄ，Ｃ．，Ｌｙｎｃｈ，Ｍ．，Ｃａｎｔｌｅｙ，
Ｌ．Ｃ．，ａｎｄＣａｍｉｌｌｉ，Ｐ．Ｄ．（１９９７）．アンフ
ィフィシンのＳＨ３ドメインは、新規なＳＨ３結合コンセンサス配列を決める１
つの部位におけるダイナミンのプロリン- リッチドメインを結合する。Ｔｈｅ
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２７２，
１３４１９−１３４２５．

【０１６２】Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．，Ｃｈａｎｇ，Ｐ．，ａｎｄＳｉｌｖｅｒ
ｓｔｅｉｎ，Ｓ．（１９９３）．チロシンリン酸化は、マウスマクロファー
ジにおけるＦｃレセプター媒介貪食作用に必要とされる。ＪＭｅｄＭｅｄ
１７７，５２９−５３４．

【０１６３】Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．，Ｃｈａｎｇ，Ｐ．，ａｎｄＳｉｌｖｅｒ
ｓｔｅｉｎ，Ｓ．（１９９４）．Ｆｃガンマレセプターｐ７２ｓｙｋのガン
マサブユニットおよマクロファージのＦｃレセプター媒介貪食作用中のパキシリ
ンのチロシンリン酸化。ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２６９，３８９７−３９０
２．

【０１６４】Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．（１９９５）．新生児肺の好中球アポトーシス及
びクリアランス。ＴｒｅｎｄｓｉｎＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ５，９３
−９９．

【０１６５】Ｇｒｉｇｇ，Ｊ．，Ｓａｖｉｌｌ，Ｊ．，Ｓａｒｒａｆ，Ｃ．，Ｈ
ａｎｓｌｅｔｔ，Ｃ．，ａｎｄＳｉｌｖｅｒｍａｎ，Ｍ．（１９９１）
．Ｌａｎｃｅｔ３３８，７２０−７２２．

【０１６６】Ｈｅｄｇｅｃｏｃｋ，Ｅ．Ｍ．，Ｓｕｌｓｔｏｎ，Ｊ．Ｅ．，ａｎ
ｄＴｈｏｍｓｏｎ，Ｊ．Ｎ．（１９８３）．線虫カエノラブディティス
エレガンスにおけるプログラム細胞死に影響する変異。Ｓｃｉｅｎｃｅ２２
０，１２７７−１２７９．

【０１６７】Ｈｅｄｇｅｃｏｃｋ，Ｅ．Ｍ．，ａｎｄＨｅｒｍａｎ，Ｒ．Ｋ．
（１９９５）．カエノラブディティスエレガンスのｎｕｃ−１遺伝子および遺
伝子モザイク。Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１４１，９８９−１００６．

【０１６８】Ｈｅｎｇａｒｔｎｅｒ，Ｍ．Ｏ．，ａｎｄＨｏｒｖｉｔｚ，Ｈ．Ｒ
．（１９９４）．Ｃ．エレガンス細胞生存遺伝子ｃｅｄ- ９は、哺乳動物プロト
オンコジーンｂｃｌ- ２の機能的ホモログをコードする。Ｃｅｌｌ７６，６
６５−６７６．

【０１６９】Ｈｅｎｇａｒｔｎｅｒ，Ｍ．Ｏ．（１９９７）．細胞死。ＩｎＣ．Ｅ
ＬＥＧＡＮＳＩＩ，Ｄ．Ｌ．Ｒｉｄｄｌｅ，Ｔ．Ｂｌｕｍｅｎｔｈ
ａｌ，Ｂ．Ｊ．ＭｅｙｅｒａｎｄＪ．Ｒ．Ｐｒｉｅｓｓ，ｅｄ
ｓ．（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ：ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ），ｐｐ．３８３−４１５．

【０１７０】Ｈｅｒｍａｎ，Ｒ．Ｋ．（１９８４）．線虫カエノラブディティスエレ
ガンスの遺伝子モザイクの解析。Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１０８，１６５−１８０
．

【０１７１】Ｈｉｒｓｈ，Ｄ．，Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，Ｄ．，ａｎｄＫｌａｓｓ，
Ｍ．（１９７６）．カエノラブディティスエレガンスの生殖系の発生。Ｄ
ｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ４９，２００−２１９．

【０１７２】Ｈｏｒｖｉｔｚ，Ｊ．Ｅ．Ｓ．ａ．Ｈ．Ｒ．（１９７７）．線虫
カエノラブディティスエレガンスの後胚性細胞系統。Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ａｌＢｉｏｌｏｇｙ５６，１１０−１５６．

【０１７３】Ｈｕａｎｇ，Ｘ．−Ｙ．，ａｎｄＨｉｒｓｈ，Ｄ．（１９８９）．戦
中カエノラブディティスエレガンスの第２トランススプライスＲＮＡリーダー
配列。Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６，８６
４０−８６４４．

【０１７４】Ｋａｖａｎａｕｇｈ，Ｗ．Ｍ．，ａｎｄＷｉｌｌｉａｍｓ，Ｌ．Ｔ
．（１９９４）．チロシンリン酸化タンパク質を結合するためのＳＨドメインに
対するオルタナティブ。Ｓｃｉｅｎｃｅ２６６．

【０１７５】Ｋａｖａｎａｕｇｈ，Ｗ．Ｍ．，Ｔｕｒｃｋ，Ｃ．Ｗ．，ａｎｄ
Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｌ．Ｔ．（１９９５）．ホスホチロシンを含む配列モ
チーフを介するシグナリ伝達タンパク質へのＰＴＢドメイン結合。Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ２６８，１１７７−１１７９．

【０１７６】Ｋｉｍｂｌｅ，Ｊ．，ａｎｄＨｉｒｓｈ，Ｄ．（１９７９）．カエノ
ラブディティスエレガンスの雌雄同体および雄生殖腺の後胚性細胞系統。Ｄｅ
ｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ７０，３９６−４１７．

【０１７７】Ｋｏｃｈ，Ｃ．Ａ．，Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｄ．，Ｍｏｒａｎ，Ｍ．
Ｆ．，Ｅｌｌｉｓ，Ｃ．，ａｎｄＰａｗｓｏｎ，Ｔ．（１９９１
）．ＳＨ２およびＳＨ３ドメイン：細胞質シグナル伝達タンパク質の相互作用を
制御するエレメント。Ｓｃｉｅｎｃｅ２５２，２５２−６７３．

【０１７８】Ｋｒａｍｅｒ，Ｊ．Ｍ．，Ｆｒｅｎｃｈ，Ｒ．Ｐ．，Ｐａｒｋ，
Ｅ．，ａｎｄＪｏｈｎｓｏｎ，Ｊ．Ｊ．（１９９０）．ｓｑｔ−１コ
ラーゲン遺伝子と相互作用して、生体形態を決定し、コラーゲンをコードするカ
エノラブディティスエレガンスｒｏｌ−６遺伝子。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎ
ｄｃｅｌｌｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ１０，２０８１−２０８９．

【０１７９】Ｌｏｃｋｓｈｉｎ，Ｒ．Ａ．（１９８１）．変態における細胞死。Ｉｎ
Ｃｅｌｌｄｅａｔｈｉｎｂｉｏｌｏｇｙａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｙ，
Ｒ．Ａ．ＬｏｃｋｓｈｉｎａｎｄＩ．Ｄ．Ｂｒｏｗｅｎ，ｅｄ
ｓ．（Ｌｏｎｄｏｎ：Ｃｈａｐｍａｎ＆Ｈａｌｌ），ｐｐ．７９−１
２２．

【０１８０】Ｌｕｃｉａｎｉ，Ｍ．−Ｆ．，ａｎｄＣｈｉｍｉｌｉ，Ｇ．（１９９
６）．ＡＴＰ結合カセットトランスポーターＡＢＣ１は、アポトーシス性の細胞
死により生じた残骸の取り込みに必要とされる。ＴｈｅＥＭＢＯＪｏｕｒｎ
ａｌ１５，２２６−２３５．

【０１８１】Ｍｅｌｌｏ，Ｃ．，ａｎｄＦｉｒｅ，Ａ．（１９９５）．ＤＮＡ形質
転換。ＩｎＭｅｔｈｏｄｓｉｎＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，Ｈ．Ｆ．
ＥｐｓｔｅｉｎａｎｄＤ．Ｃ．Ｓｈａｋｅｓ，ｅｄｓ．（Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ：ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ），ｐｐ．４５２−４８２．

【０１８２】Ｍｏｒｒｉｓ，Ｒ．Ｇ．，Ｄｕｖａｌｌ，Ｅ．，Ｈａｎｇｒｅａｖｅ
ｓ，Ａ．Ｄ．，ａｎｄＷｙｌｌｉｅ，Ａ．Ｈ．（１９８４）．ホ
ルモン誘導された細胞死. ２．アポトーシスをうける胸腺細胞における表面変化
。ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ１１５，
４２６−４３６．

【０１８３】Ｍｏｒｒｉｓ，Ｒ．Ｇ．，Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ，Ａ．Ｄ．，Ｄｕｖ
ａｌｌ，Ｅ．，ａｎｄＷｙｌｌｉｅ，Ａ．Ｈ．（１９８４）．ホル
モン誘導された細胞死。

【０１８４】Ｐａｗｓｏｎ，Ｔ．，ａｎｄＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ，Ｊ．（１９
９３）．ＳＨ２およびＳＨ３ドメイン。ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｌｏｇｙ３，
４３４−４４２．

【０１８５】Ｐｌａｔｔ，Ｓ．，Ｓｕｚｕｋｉ，Ｈ．，Ｋｕｒｉｈａｒａ，Ｙ．，
Ｋｏｄａｍａ，Ｔ．，ａｎｄＧｏｒｄｏｎ，Ｓ．（１９９６）．イ
ンビトロにおけるアポトーシス胸腺細胞の貪食作用におけるクラスＡマクロファ
ージスカベンジャーレセプターの役割。Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３，１２４５６−１２４６０．

【０１８６】Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｊ．Ｖ．（１９９４）．ＦｃＲｅｃｅｐｔｏｒ：
ＲｕｂｏｒＲｅｄｕｘ．Ｃｅｌｌ７８，５５３−５６０．

【０１８７】Ｒｅｎ，Ｙ．，Ｓｉｌｖｅｒｓｔｅｉｎ，Ｒ．Ｌ．，Ａｌｌｅｎ，
Ｊ．，ａｎｄＳａｖｉｌｌ，Ｊ．（１９９５）．ＣＤ３６遺伝子移動は
、アポトーシスをうける細胞の貪食作用能を付与する。Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ
．１８，１８５７−１８６２．

【０１８８】Ｒｏｂｅｒｓｏｎ，Ａ．，ａｎｄＴｈｏｍｓｏｎ，Ｎ．（１９８２）
．カエノラブディティスエレガンス幼生の腹側神経索におけるプログラム細胞
死の形態。Ｊ．Ｅｍｂｒｙｏｌ．Ｅｘｐ．Ｍｏｒｐｈ６７，８９−１
００．

【０１８９】Ｒｏｓｅｎｂｌｕｔｈ，Ｒ．Ｅ．，Ｃｕｄｄｅｆｏｒｄ，Ｃ．，ａｎ
ｄＢａｉｌｌｉｅ，Ｄ．Ｌ．（１９８５）．カエノラブディティスエ
レガンスにおける変異導入．ＩＩ．ｒ照射の１５００Ｒで誘導された変異事象の
スペクトル。Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１０９，４９３−５１１．

【０１９０】Ｒｏｓｅｎｓｈｉｎｅ，Ｉ．，ａｎｄＦｉｎｌａｙ，Ｂ．Ｂ．（１
９９３）．侵入細菌による宿主シグナル伝達経路および細胞骨格機能の搾取取り
込み作用（Ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ）。ＢｉｏＥｓｓａｙｓ１５，１
７−２４．

【０１９１】Ｒｏｔｅｌｌｏ，Ｒ．Ｊ．，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ，Ｐ．−Ａ．，ａｎ
ｄＹｕａｎ，Ｊ．（１９９４）．モノクローナル抗体は、抗アポゲンおよ
び抗エンガルフェン：ニワトリ胚発生中のアポトーシス性取り込み細胞の特異的
抗原を示す。Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１２０，１４２１−１４３１．

【０１９２】Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．，ａｎｄＭａ
ｎｉａｔｉｓ，Ｔ．（１９８９）．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇ
：ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕａｌ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨ
ａｒｂｏｒ，ＮＹ：ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａ
ｔｏｒｙＰｒｅｓｓ）

【０１９３】Ｓａｖｉｌｌ，Ｊ．，Ｗｙｌｌｉｅ，Ａ．，Ｈｅｎｓｏｎ，Ｊ．，
Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｈｅｎｓｏｎ，Ｐ．，ａｎｄＨａｎｓｌｅｔ
ｔ，Ｃ．（１９８９）．炎症における廊下好中球のマクロファージ貪食作用
。好中球におけるプログラム細胞死は、マクロファージによるそのにんしきをも
たらす。ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ８３，８６５−８７５．

【０１９４】Ｓａｖｉｌｌ，Ｊ．，Ｄｒａｎｓｆｉｅｌｄ，Ｉ．，Ｈｏｇｇ，Ｎ．
，ａｎｄＨａｎｓｌｅｔｔ，Ｃ．（１９９０）．アポトーシスをうける
細胞のビトロネクチンレセプター媒介貪食作用。Ｎａｔｕｒｅ３４３，１７
０−１７３．

【０１９５】Ｓａｖｉｌｌ，Ｊ．，Ｈｏｇｇ，Ｎ．，Ｒｅｎ，Ｙ．，ａｎｄＨ
ａｎｓｌｅｔｔ，Ｃ．（１９９２）．トロンボスポンジンは、ＣＤ３６およ
びアポトーシスをうける好中球のマクロファージ認識におけるビトロネクチンレ
セプターと協同する。ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ９０，１５１３−１５２
２．

【０１９６】Ｓａｖｉｌｌ，Ｊ．，Ｆａｄｏｋ，Ｖ．，Ｈｅｎｓｏｎ，Ｐ．，ａ
ｎｄＨａｎｓｌｅｔｔ，Ｃ．（１９９３）．アポトーシスをうける細胞の食
細胞認識。

【０１９７】Ｓｏｎｇｙａｎｇ，Ｚ．，ａｎｄＣａｎｔｌｅｙ，Ｌ．Ｃ．（１９
９５）．プロテインチロシンキナーゼ媒介シグナル伝達における認識および特異
性。ＴＩＢＳ２０，４７０−４７５．

【０１９８】Ｓｏｎｇｙａｎｇ，Ｚ．，Ｍａｒｇｏｌｉｓ，Ｂ．，Ｃｈａｕｄｈｕｒ
ｉ，Ｍ．，Ｓｈｏｅｌｓｏｎ，Ｓ．Ｅ．，ａｎｄＣａｎｔｌｅｙ，
Ｌ．Ｃ．（１９９５）．ＳＨＣのホスホチロシン相互作用ドメインは、チ
ロシンリン酸化ＮＰＸＹモチーフを認識する。ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆ
ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２７０，１４８６３−１４８６
６．

【０１９９】Ｓｐｉｅｔｈ，Ｊ．，Ｂｒｏｏｋｅ，Ｇ．，Ｋｕｅｒｓｔｅｎ，Ｓ．
，Ｌｅａ，Ｋ．，ａｎｄＢｌｕｍｅｎｔｈａｌ，Ｔ．（１９９３）
．Ｃ．エレガンスにおけるオペロン：ポリシストロニックｍＲＮＡ前駆体は、Ｓ
Ｌ２の下流コード領域へのトランススプライシングにより処理される。Ｃｅｌｌ
７３，５２１−５３２．

【０２００】Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ，Ｄ．Ｔ．，Ｓｈａｗ，Ｊ．Ｅ．，Ｃａｒｒ
，Ｓ．Ｈ．，ａｎｄＨｉｒｓｈ，Ｄ．（１９８５）．カエノラブデ
ィティスエレガンスの染色体外ＤＮＡ形質転換。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄ
Ｃｅｌｌｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙ５，３４８４−３４９６．

【０２０１】Ｓｔｒｉｎｇｈａｍ，Ｅ．Ｇ．，Ｄｉｘｏｎ，Ｄ．Ｋ．，Ｊｏｎｅ
ｓ，Ｄ．，ａｎｄＣａｎｄｉｄｏ，Ｅ．Ｐ．Ｍ．（１９９２）．
トランスジェニックカエノラブディティスエレガンスにおける小熱ショック (
ｈｓｐ１６）遺伝子の側頭部空間発現パターン。ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏ
ｌｏｇｙｏｆｔｈｅＣｅｌｌ３，２２１−２３３．

【０２０２】Ｓｕｌｓｔｏｎ，Ｊ．（１９７６）．カエノラブディティスエレガンスの
腹側索における後胚発生。ＰｈｉｌｏｓＴｒａｎｓＲＳｏｃＬｏｎｄ
ＢＢｉｏｌＳｃｉ２７５，２８７−２９７．

【０２０３】Ｓｕｌｓｔｏｎ，Ｊ．Ｅ．，ａｎｄＨｏｒｖｉｔｚ，Ｈ．Ｒ．（
１９７７）．線虫カエノラブディティスエレガンスの後胚細胞系統。Ｄｅｖｅ
ｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ５６，１１０−１５６．

【０２０４】Ｓｕｌｓｔｏｎ，Ｊ．Ｅ．，Ｓｃｈｉｅｒｅｎｂｅｒｇ，Ｅ．，Ｗｈ
ｉｔｅ，Ｊ．Ｇ．，ａｎｄＴｈｏｍｓｏｎ，Ｊ．Ｎ．（１９８３
）．線虫カエノラブディティスエレガンスの胚細胞系統。Ｄｅｖｅｌｏｐｍ
ｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ１００，６４−１１９．

【０２０５】Ｗｉｌｓｏｎ，Ｒ．，Ａｉｎｓｃｏｕｇｈ，Ｒ．，Ａｎｄｅｒｓｏｎ，
Ｋ．，Ｂａｙｎｅｓ，Ｃ．，Ｂｅｒｋｓ，Ｍ．，Ｂｏｎｆｉｅｌｄ
，Ｊ．，Ｂｕｒｔｏｎ，Ｊ．，Ｃｏｎｎｅｌｌ，Ｍ．，Ｃｏｐｓｅ
ｙ，Ｔ．，Ｃｏｏｐｅｒ，Ｊ．，Ｃｏｕｌｓｏｎ，Ａ．，Ｃｒａｘ
ｔｏｎ，Ｍ．，Ｄｅａｒ，Ｓ．，Ｄｕ，Ｚ．，Ｄｕｒｂｉｎ，Ｒ
．，Ｆａｖｅｌｌｏ，Ａ．，Ｆｒａｓｅｒ，Ａ．，Ｆｕｌｔｏｎ，
Ｌ．，Ｇａｒｄｎｅｒ，Ａ．，Ｇｒｅｅｎ，Ｐ．，Ｈａｗｋｉｎｓ，
Ｔ．，Ｈｉｌｌｅｒ，Ｌ．，Ｊｉｅｒ，Ｍ．，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，
Ｌ．，Ｊｏｎｅｓ，Ｍ．，Ｋｅｒｓｈａｗ，Ｊ．，Ｋｉｒｓｔｅｎ
，Ｊ．，Ｌａｉｓｓｔｅｒ，Ｎ．，Ｌａｔｒｅｌｌｉｅ，Ｐ．，Ｌ
ｉｇｈｔｎｉｎｇ，Ｊ．，Ｌｌｏｙｄ，Ｃ．，Ｍｏｒｔｉｍｏｒｅ，
Ｂ．，Ｏ’Ｃａｌｌａｇｈａｎ，Ｍ．，Ｐａｒｓｏｎｓ，Ｊ．，Ｐｅ
ｒｃｙ，Ｃ．，Ｒｉｆｋｅｎ，Ｌ．，Ｒｏｏｐｒａ，Ａ．，Ｓａｕ
ｎｄｅｒｓ，Ｄ．，Ｓｈｏｗｎｋｅｅｎ，Ｒ．，Ｓｉｍｓ，Ｍ．，
Ｓｍａｌｄｏｎ，Ｎ．，Ｓｍｉｔｈ，Ａ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．，Ｓ
ｏｎｎｈａｍｍｅｒ，Ｅ．，Ｓｔａｄｅｎ，Ｒ．，Ｓｕｌｓｔｏｎ，
Ｊ．，Ｔｈｉｅｒｒｙ−Ｍｉｅｇ，Ｊ．，Ｔｈｏｍａｓ，Ｋ．，Ｖａ
ｕｄｉｎ，Ｍ．，Ｖａｕｇｈａｎ，Ｋ．，Ｗａｔｅｒｓｔｏｎ，Ｒ．
，Ｗａｔｓｏｎ，Ａ．，Ｗｅｌｎｓｔｏｃｋ，Ｌ．，ＷＩｌｋｉｎｓ
ｏｎ−Ｓｐｒｏａｔ，Ｊ．，ａｎｄＷｏｈｌｄｍａｎ，Ｐ．（１９９
４）．Ｃ．エレガンスの第ＩＩＩ染色体由来の２．２Ｍｂの連続ヌクレオチド配
列。Ｎａｔｕｒｅ３６８，３２−３８．

【０２０６】Ｗｏｌｆ，Ｇ．，Ｔｒｕｂ，Ｔ．，Ｏｔｔｉｎｇｅｒ，Ｅ．，Ｇｒ
ｏｎｉｎｇａ，Ｌ．，Ｌｙｎｃｈ，Ａ．，Ｗｈｉｔｅ，Ｍ．Ｆ．，
Ｍｉｙａｚａｋｉ，Ｍ．，Ｌｅｅ，Ｊ．，ａｎｄＳｈｏｅｌｓｏｎ
，Ｓ．Ｅ．（１９９５）．ＩＲＳ−１およびＳｈｃのＰＴＢドメインは、
異なるが、オーバーラップする結合特異性を有する。ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ
ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２７０，２７４０７−２
７４１０．

【０２０７】Ｗｙｌｌｉｅ，Ａ．Ｈ．，Ｋｅｒｒ，Ｊ．Ｆ．Ｒ．，ａｎｄＣ
ｕｒｒｉｅ，Ａ．Ｒ．（１９８０）．細胞死：アポトーシスの特徴。Ｉｎ
ｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＣｙｔｏｌｏｇｙ６８，２
５１−３０６．

【０２０８】Ｘｕ，Ｘ．−Ｘ．，Ｙａｎｇ，Ｗ．，Ｊａｃｋｏｗｓｋｉ，Ｓ．，
ａｎｄＲｏｃｋ，Ｃ．Ｏ．（１９９５）．ショウジョウバエ無機能遺伝
子産物を有するコロニー刺激因子１により調節された新規ホスホプロテインのク
ローニング。ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ２７０，１４１８４−１４１９１．

【０２０９】Ｙｅｎｕｓｈ，Ｌ．，ａｎｄＷｈｉｔｅ，Ｍ．Ｆ．（１９９７）．
インシュリンおよびサイトカイン作用におけるＩＲＳシグナル伝達系。Ｂｉｏ
Ｅｓｓａｙ１９，４９１−５００．

【０２１０】Ｙｕ，Ｈ．，Ｃｈｅｎ，Ｊ．Ｋ．，Ｆｅｎｇ，Ｓ．，Ｄａｌｇａ
ｒｎｏ，Ｄ．Ｃ．，Ｂｒａｕｅｒ，Ａ．Ｗ．，ａｎｄＳｃｈｒｅ
ｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．（１９９４）．プロリンリッチペプチドのＳＨ３ドメ
インへの結合の構造的基礎。Ｃｅｌｌ７６，９３３−９４５．

【０２１１】Ｚｈｏｕ，Ｍ．−Ｍ．，Ｒａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ，Ｋ．Ｓ．，Ｏｌ
ｅｊｎｉｃｚａｋ，Ｅ．Ｔ．，Ｐｅｔｒｏｓ，Ａ．Ｍ．，Ｍｅａｄ
ｏｗｓ，Ｒ．Ｐ．，Ｓａｔｔｌｅｒ，Ｍ．，Ｈａｒｌａｎ，Ｊ．
Ｅ．，Ｗａｄｅ，Ｗ．Ｓ．，ａｎｄＦｅｓｉｋ，Ｓ．Ｊ．Ｂ．
Ｓ．Ｗ．（１９９５）．Ｓｈｃのホスホチロシン結合ドメインの構造およ
びリガンド認識。Ｎａｔｕｒｅ３７８，５８４−５９２．

【０２１２】Ｚｏｒｉｏ，Ｄ．Ａ．Ｒ．，Ｃｈｅｎｇ，Ｎ．Ｎ．，Ｂｌｕｍｅ
ｎｔｈａｌ，Ｔ．，ａｎｄＳｐｉｅｔｈ，Ｊ．（１９９４）．Ｃ．エ
レガンスにおける染色体組織化の共通の形態としてのオペロン。Ｎａｔｕｒｅ
３７２，２７０−２７２．

【０２１３】本発明は、その好ましい態様への参照により具体的に示され、説明されている
が、添付された請求項により定義された本発明の精神および範囲から逸脱するこ
となく、形態および詳細に様々な変化をなしてもよいことは、当業者により理解
されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【図１】Ｆｉｇｕｒｅ１Ａ〜１Ｅは、ＣＥＤ−６座の概略図である。Ｆｉｇｕｒｅ
１Ａは、ＣＥＤ−６の遺伝地図である。ＣＥＤ−６、ならびにＣＥＤ−６の近く
に位置する遺伝子で、そのマッピングのためにも使用されたいくつかの遺伝子が
示されている。Ｆｉｇｕｒｅ１Ｂは、コスミドレスキューを示す。コスミドま
たはサブクローニングされたＤＮＡフラグメント（Ｃ、Ｄ参照）を有するトラン
スジェニック動物を、３回畳まれた胚における細胞残骸について調べた。部分的
な細胞残骸または細胞残骸を有しない胚をもたらすものをレスキューするトラン
スジェニック株として計数した。試験した１３個のコスミドの内の４個を示す。
レスキューされるフラグメントを太く示す。数字は、レスキュー株の数／試験株
の数を表す。Ｆｉｇｕｒｅ１Ｃは、Ｆ５６Ｄ２コスミドのサブクローニングお
よびレスキューを示す。ＣＥＤ−６領域の制限マップを上部に示す。中段におい
て、いくつかの制限フラグメントを、ＣＥＤ−６（ｎ１８１３）によって生じる
取り込み欠損のそのレスキュー能について試験した。Ｆｉｇｕｒｅ１Ｄは、１
０ｋｂのＸｈｏＩフラグメントのサブクローニングおよびレスキューを示す。Ｘ
ｈｏＩフラグメントの制限マップを上部に示す。中段において、ＸｈｏＩフラグ
メントにおいてなされた変異およびそのレスキュー能を示す。Ｘはフレームシフ
ト変異を示す（詳細については実験手順を参照のこと）。Ｆｉｇｕｒｅ１Ｅは
、ＸｈｏＩフラグメントでの転写物を示す。ＸｈｏＩフラグメント領域での転写
物のイントロン／エキソン構造において、ボックスはエキソンであり、Ｖ記号は
イントロンであり、ＡＡＡはポリ（Ａ）テールである。Ｆ５６Ｄ２．７の５' 末
端のＲＴ−ＰＣＲ産物は、ＳＬ１およびＳＬ２の両方を含有する。

【図２】Ｆｉｇｕｒｅ２Ａ、２Ｂは、Ｆ５６Ｄ２．７がＣＥＤ−６をコードしている
ことを示す。Ｆｉｇｕｒｅ２Ａは、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６の全長の
ｃＤＮＡ（配列番号：１）およびアミノ酸（配列番号：２）を示す。二重下線は
、ホスホチロシン結合（ＰＴＢ）ドメインの核酸配列（配列番号：３）およびア
ミノ酸配列（配列番号：４）を示す。一重下線は、プロリン／セリンリッチ領域
の核酸配列（配列番号：６）およびアミノ酸配列（配列番号：７）を示す。ダッ
シュ（−）下線は荷電領域を示す。星印は、ＰｘｘＰの特徴的な配列におけるプ
ロリンを示す。白三角は、ダッシュを付けた領域における荷電残基を示す。陰影
ボックスはポリアデニル化シグナルを示す。ＳＬ１およびＳＬ２はともにトラン
ススプラシングアクセプター部位に加えることができる。ＣＥＤ−６（ｎ１８１
３）において同定された一塩基対の欠失が示されている。Ｆｉｇｕｒｅ２Ｂは
、ＣＥＤ−６（ｎ２０９５）から得られた４．１ｋｂフラグメントでのＲＦＬＰ
が明らかにされたサザンブロットである。ＸｈｏＩプローブによって、Ｆ５６Ｄ
２．７を含有する４．１ｋｂのＨｉｎｄＩＩＩフラグメントに影響するＣＥＤ−
６（ｎ２０９５）における対立遺伝子特異的ＲＦＬＰが同定される。右下段には
、ＸｈｏＩフラグメント領域でのＨｉｎｄＩＩＩによって消化されたゲノムフラ
グメントが示されている。右上段には、ＸｈｏＩフラグメントおよびこの領域で
覆われる３つの遺伝子が示されている。サザンブロットにより明らかにされ得る
３つのＨｉｎｄＩＩＩフラグメント（４．１ｋｂ、０．４ｋｂおよび９．９ｋｂ
）が示されている。左側には、野生株のＮ２、ＣＥＤ−６（ｎ１８１３）および
ＣＥＤ−６（ｎ２０９５）から独立的に単離されたゲノムＤＮＡが、32Ｐ標識さ
れたＸｈｏＩフラグメントをプローブとして調べられた。ｎ２０９５対立遺伝子
は、４．１ｋｂフラグメントの欠失およびさらなる２．１ｋｂフラグメントの存
在が明らかにされた。０．４ｋｂフラグメントは、両方の対立遺伝子において影
響を受けていなかった（別のゲルでのデータ、ここでは示さず）。

【図３】Ｆｉｇｕｒｅ３Ａ〜３Ｃは、ＣＥＤ−６がホスホチロシン結合ドメインを含
有することを示す。Ｆｉｇｕｒｅ３Ａは、ＣＥＤ−６のＰＴＢ（配列番号：４
）と他のＰＴＢドメインとの配列比較を示す。ＰＴＢドメインの配列比較は、Ｓ
ｈｃタンパク質のＮＭＲ構造に基づいた。黒四角は、配列の５０％よりも多くが
同一であるアミノ酸を示している。灰色の四角は、配列の５０％よりも多くが類
似しているアミノ酸を示している。この目的のために、下記の組のアミノ酸が類
似していると見なされている：Ｇ、Ａ、Ｃ、Ｓ、Ｔ；Ｅ、Ｄ、Ｑ、Ｎ；Ｒ、Ｋ、
Ｈ；Ｖ、Ｍ、Ｌ、Ｉ；Ｆ、Ｙ、Ｗ。αは、ＳｈｃのＮＭＲ構造により示唆される
ヘリックスを示し、βはβシートを示している。（示されたすべての配列に見出
される）変化していない残基は星印「＊」によって強調されている。Ｆｉｇｕｒ
ｅ３Ｂは、ＣＥＤ−６と他のＰＴＢドメイン含有タンパク質との比較を示す。
プロリンリッチ領域、およびＰＴＢドメインに隣接する荷電領域、および他の領
域を示す。ＰＴＢドメインは同一性の割合で比較された。Ｆｉｇｕｒｅ３Ｃは
、ＰＴＢドメインの進化樹を示す。（Ａ）からの配列比較が、ＧＣＣプログラム
のＳｅｑｌａｂパッケージを使用して示された。進化樹は図式的に描かれた。

【図４】Ｆｉｇｕｒｅ４は、ＣＥＤ−６（下部の表）およびＣ．ｅｌｅｇａｎｓの細
胞系統（上部）に関する遺伝子モザイク分析の結果を示す。生殖細胞および体細
胞鞘細胞の両方の子孫が例示されている。重複喪失を決定するために使用された
体壁筋肉細胞もまた例示されている。黒四角は生殖細胞での重複喪失を示し、黒
四角は体細胞鞘細胞での重複喪失を示している。黒矢は、前部生殖腺の遠腕にお
いて拡張した核小体を有する体細胞鞘細胞を示している。白矢は、前部生殖腺の
近腕において蓄積した細胞残骸を示している。

【図５】Ｆｉｇｕｒｅ５Ａ〜５Ｄは、ＣＥＤ−６ｃＤＮＡの熱ショックによる過剰発
現によって体細胞および生殖細胞の両方における取り込み欠損がレスキューされ
たという結果を示している。Ｆｉｇｕｒｅ５Ａは、胚発生の途中における細胞
死を示す。陰影ボックスは、胚発生の途中における５０分毎の死細胞数を示す棒
グラフである。矢は、熱ショックの時期および取り込み表現型が認められる時期
を示している。Ｆｉｇｕｒｅ５Ｂは、ＣＥＤ−６ｃＤＮＡの過剰発現によって
細胞死の初期段階および後期段階の両方で取り込みが促進されることを示してい
る。トランスジーン（熱ショックプロモーターによって機能するＣＥＤ−６ｃＤ
ＮＡ）を有するトランスジェニック動物は、示されている時間で細胞死が生じる
前に熱処理された。若いＬ１幼虫の頭部における細胞残骸を調べた。熱処理しな
かった動物もまた調べた。他の対照実験には、熱処理したＮ２、ＣＥＤ−６（ｎ
１８１３）、熱処理しなかったＮ２、ＣＥＤ−６（ｎ１８１３）、ならびにｌａ
ｃＺトランスジーンを有する熱処理したＣＥＤ−６（ｎ１８１３）が含まれた。
黒丸は、細胞残骸が形成された後での熱ショックを伴う実験を示し、白丸は、細
胞死が生じる前での熱ショックを伴う実験および熱ショックを伴わない実験を示
す。Ｆｉｇｕｒｅ５Ｃは、ＣＥＤ−６ｃＤＮＡの過剰発現によって生殖細胞に
おける取り込み欠損がレスキューされることを示している。矢は、トランスジェ
ニック動物がＬ４脱皮の２４時間後の発達段階にある時での熱ショックの時期を
示している。細胞残骸を、熱ショック時から熱ショックの６０時間後までの間で
のいくつかの時間で調べた。Ｆｉｇｕｒｅ５Ｄは、ＣＥＤ−６ｃＤＮＡの過剰
発現によって、取り込みが、生殖細胞において細胞残骸が形成された後の長時間
にわたって促進されることを示している。成熟したトランスジェニック動物を、
示されているように熱処理した。細胞残骸を、熱ショックの１２時間後に１つの
生殖腺腕で調べた。Ｎ２およびＣＥＤ−６（ｎ１８１３）を含む対照実験を（Ｃ
）に示す。

【図６】Ｆｉｇｕｒｅ６は、ＣＥＤ−６の過剰発現によって、ＣＥＤ−６がＣＥＤ−
１およびＣＥＤ−７の両方の３つの対立遺伝子の遺伝子背景で過剰発現している
胚発生の途中において、ＣＥＤ−１およびＣＥＤ−７の両方の取り込み欠損が部
分的に抑制されることを示す結果である。熱ショックの時期および細胞残骸の試
験時期をＦｉｇｕｒｅ５Ａに例示する。各遺伝子背景を有する動物は、細胞死
が生じる前に熱処理され、あるいは熱処理されなかった。細胞残骸を若いＬ１幼
虫の頭部で調べた。ｌａｃＺもまた、各遺伝子背景において発現させた。各変異
体もまた熱ショックで処理して、細胞残骸の発現に対する熱の作用を調べた。

【図７】Ｆｉｇｕｒｅ７は、ＣＥＤ−６の過剰発現がＣＥＤ−２、５および１０に対
する細胞残骸発現に対する明らかな作用を有していないが、ＣＥＤ−１およびＣ
ＥＤ−７には明らかな作用を有している取り込み遺伝子発現の上位経路のモデル
である。本発明者らにより、ＣＥＤ−６はＣＥＤ−１およびＣＥＤ−７の両方の
下流で作用し得ることが提案される。ＣＥＤ−２、５および１０は、それぞれが
異なる経路で作用し、あるいはＣＥＤ−６の下流で作用している。

【図８】Ｆｉｇｕｒｅ８は、Ｆ５６コスミドから得られたＸｈｏＩフラグメントによ
ってＣＥＤ−６取り込み欠損がレスキューされることを示すフロー図である。

【図９】Ｆｉｇｕｒｅ９Ａ〜９Ｂは、Ｃ０５Ｄ２．７構築物がＣＥＤ−６であること
を示す概略である。Ｆｉｇｕｒｅ９Ａは、ＸｈｏＩフラグメントの制限マップ
およびレスキューを示す。Ｆｉｇｕｒｅ９Ｂは転写物を示す。

【図１０】Ｆｉｇｕｒｅ１０は、ＣＥＤ−６の過剰発現によって、ＣＥＤ−６変異体の
取り込み欠損がレスキューされることを示す棒グラフである。

【図１１】Ｆｉｇｕｒｅ１１は、ＣＥＤ−６の過剰発現によって、ＣＥＤ−６変異体の
取り込み欠損が胚発生の途中でレスキューされることを示すグラフを含む。

【図１２】Ｆｉｇｕｒｅ１２は、ＣＥＤ−６によってもまた永続性残骸の取り込みが促
進されることを示す棒グラフである。

【図１３】Ｆｉｇｕｒｅ１３は、ＣＥＤ−６が永続性細胞残骸の取り込みを促進し、そ
しておそらくは取り込み中の細胞内で作用していることを示している。

【図１４】Ｆｉｇｕｒｅ１４は、ＣＥＤ−６がシグナル伝達経路で作用するアダプター
タンパク質であり得ることを示す概略である。

【図１５】Ｆｉｇｕｒｅ１５は、ＣＥＤ−６の過剰発現によって、成熟した生殖腺にお
ける取り込み欠損がレスキューされ、ＣＥＤ−６が体細胞鞘細胞において作用し
得ることを示すグラフを示している。

【図１６】Ｆｉｇｕｒｅ１６は、ＣＥＤ−６の過剰発現によって、ＣＥＤ−１変異体の
取り込み欠損が部分的に抑制されることを示している。

【図１７】Ｆｉｇｕｒｅ１７は、ＣＥＤ−６ｃＤＮＡの過剰発現によって、ＣＥＤ−７
変異体の取り込み欠損が部分的に抑制されることを示している。

【図１８】Ｆｉｇｕｒｅ１８は、ｈ１ＣＥＤ−６のコンセンサスＤＮＡ配列（配列番号
：７）（２４１６ｂｐ）を示す。開始コドンおよび停止コドンを太字で示し、選
択的スプライシング配列に下線を付す。

【図１９】Ｆｉｇｕｒｅ１９、ｈ２ＣＥＤ−６（選択的スプライシング体）のＤＮＡ配
列（配列番号：１３）を示す。開始コドンおよび停止コドンを太字で示す。

【図２０】Ｆｉｇｕｒｅ２０は、ｈ１ＣＥＤ−６のアミノ酸配列（配列番号：８）を示
す。選択的スプライシング領域に下線を付す。

【図２１】Ｆｉｇｕｒｅ２１は、ｈ２ＣＥＤ−６（選択的スプライシング体）のアミノ
酸配列（配列番号：１４）を示す。

【図２２】Ｆｉｇｕｒｅ２２は、ｈ１ＣＥＤ−６ｃＤＮＡ（配列番号：７）およびｈ１
ＣＥＤ−６（配列番号：８）のアミノ酸配列を示す。ＰＴＢドメインの核酸配列
（配列番号：９）およびアミノ酸配列（配列番号：１０）、荷電領域、ならびに
プロリン／セリンリッチ領域の核酸配列（配列番号：１１）およびアミノ酸配列
（配列番号：１２）を示す。

【図２３】Ｆｉｇｕｒｅ２３は、ＣＥＤ−６およびｈ１ＣＥＤ−６の配列比較を示す。

【図２４】Ｆｉｇｕｒｅ２４は、領域の配列比較により、それぞれ、同一性が４７．５
％および３１．６％であることを示す。

【図２５】Ｆｉｇｕｒｅ２５Ａは、ヒトの多重組織ノーザンブロット（ＭＴＮ）である
。Ｆｉｇｕｒｅ２５Ｂは、ヒトの多重組織ノーザンブロット（ＭＴＮ）ＩＩを
示す。Ｆｉｇｕｒｅ２５Ｃは、ヒトガン細胞株の多重組織ノーザン（ＭＴＮTM
）ブロットを示す。ノーザンブロッティングによる正常なヒト組織およびガン細
胞株におけるｈ１ＣＥＤ−６の発現パターンが示されている。

【図２６】Ｆｉｇｕｒｅ２６は、ＣＥＤ−６フラグメントがＧＦＰに対するＣ端融合体
としてクローニングされるプラスミドｐＧＡ３０１５のマップである。

【図２７】Ｆｉｇｕｒｅ２７は、ＣＥＤ−６がＧＦＰのＣ端融合体としてクローニング
されるプラスミドｐＧＡ３０６４のマップである。

【図２８】Ｆｉｇｕｒｅ２８Ａ〜２８Ｆは、配列決定されたｈｂｃ３１２３ＥＳＴク
ローン（ｃＤＮＡライブラリーから単離されたＰＣＲフラグメントＩ）と、その
ＰＣＲフラグメントを使用して同定された３個のＥＳＴ配列とのＤＮＡ配列比較
（Ｇｅｎｅｗｏｒｋ）である。ｈｂｃ３１２３ＥＳＴクローンを配列決定して分
析した。３個のＥＳＴクローンは、単離されたＰＣＲフラグメントを使用してＧ
ｅｎｂａｎｋを検索することによって同定された。

【図２９】Ｆｉｇｕｒｅ２９は、ｈ１ＣＥＤ−６（配列番号：８）と比較されるヒトｈ
３ＣＥＤ−６のアミノ酸配列（配列番号：１６）を示す。

【図３０】Ｆｉｇｕｒｅ３０Ａ〜３０Ｂは、ｈ１ＣＥＤ−６（配列番号：７）と比較さ
れるヒトｈ３ＣＥＤ−６をコードする核酸配列（配列番号：１５）を示す。

【図３１】Ｆｉｇｕｒｅ３１Ａ〜３１Ｂは、ｈ３ＣＥＤ−６の過剰発現によって取り込
み欠損がレスキューされることを示す。Ｆｉｇｕｒｅ３１Ａは、ｈＣＥＤ−６
の過剰発現によってＣＥＤ−６（ｎ１８１３）胚の取り込み欠損がレスキューさ
れたことを示す。トランスジェニック雌が産生した胚を、胚の細胞死が始まる前
に熱ショック処理し、Ｌ１幼虫の頭部における永続性細胞残骸の数を計数した。
各点は１匹の動物を表す。Ｆｉｇｕｒｅ３１Ｂは、ｈＣＥＤ−６の過剰発現に
よってＣＥＤ−６（ｎ１８１３）動物の生殖細胞の取り込み欠損がレスキューさ
れたことを示す。トランスジェニック動物をＬ４／成体脱皮の３６時間後に熱シ
ョック処理した。生殖細胞の残骸を熱ショックの１２時間後に計数した。計数し
た動物の数を各バーの上部に示す。

【図３２】Ｆｉｇｕｒｅ３２Ａ〜３２Ｊは、ＥＳＴ、ＣＥＤ−６、ｈＣＥＤ−６におけ
る核酸配列比較を示す。２４１６ｂｐのコンセンサス配列のコンセンサス構築物
を、ＥＳＴＲＡＣＥおよびコロニーハイブリダイゼーションから得られた配列
情報を使用して構築した。Ｓｅｑは、テンプレートとしてのａａ１５９９３９４
および多重配列比較で示されるプライマーを使用してまとめられた。Ｒｃｃは逆
相補体の略である。ＣＥＤ−６およびｈＣＥＤ−６はともに多重比較配列の上部
に示され、ｐＧＡ１０１はコロニーハイブリダイゼーションによって選択された
。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年４月１３日（２０００．４．１３）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】図面の簡単な説明

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図面の簡単な説明】

【図２】Ｆｉｇｕｒｅ２Ａ、２Ｂは、Ｆ５６Ｄ２．７がＣＥＤ−６をコードしている
ことを示す。Ｆｉｇｕｒｅ２Ａは、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのＣＥＤ−６の全長の
ｃＤＮＡ（配列番号：１）およびアミノ酸（配列番号：２）を示す。二重下線は
、ホスホチロシン結合（ＰＴＢ）ドメインの核酸配列（配列番号：３）およびア
ミノ酸配列（配列番号：４）を示す。一重下線は、プロリン／セリンリッチ領域
の核酸配列（配列番号：５）およびアミノ酸配列（配列番号：６）を示す。ダッ
シュ（−）下線は荷電領域を示す。星印は、ＰｘｘＰの特徴的な配列におけるプ
ロリンを示す。白三角は、ダッシュを付けた領域における荷電残基を示す。陰影
ボックスはポリアデニル化シグナルを示す。ＳＬ１およびＳＬ２はともにトラン
ススプラシングアクセプター部位に加えることができる。ＣＥＤ−６（ｎ１８１
３）において同定された一塩基対の欠失が示されている。Ｆｉｇｕｒｅ２Ｂは
、ＣＥＤ−６（ｎ２０９５）から得られた４．１ｋｂフラグメントでのＲＦＬＰ
が明らかにされたサザンブロットである。ＸｈｏＩプローブによって、Ｆ５６Ｄ
２．７を含有する４．１ｋｂのＨｉｎｄＩＩＩフラグメントに影響するＣＥＤ−
６（ｎ２０９５）における対立遺伝子特異的ＲＦＬＰが同定される。右下段には
、ＸｈｏＩフラグメント領域でのＨｉｎｄＩＩＩによって消化されたゲノムフラ
グメントが示されている。右上段には、ＸｈｏＩフラグメントおよびこの領域で
覆われる３つの遺伝子が示されている。サザンブロットにより明らかにされ得る
３つのＨｉｎｄＩＩＩフラグメント（４．１ｋｂ、０．４ｋｂおよび９．９ｋｂ
）が示されている。左側には、野生株のＮ２、ＣＥＤ−６（ｎ１８１３）および
ＣＥＤ−６（ｎ２０９５）から独立的に単離されたゲノムＤＮＡが、32Ｐ標識さ
れたＸｈｏＩフラグメントをプローブとして調べられた。ｎ２０９５対立遺伝子
は、４．１ｋｂフラグメントの欠失およびさらなる２．１ｋｂフラグメントの存
在が明らかにされた。０．４ｋｂフラグメントは、両方の対立遺伝子において影
響を受けていなかった（別のゲルでのデータ、ここでは示さず）。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２２

【補正方法】変更

【補正の内容】

【００２２】

【表１】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 7/06 Ａ６１Ｐ 25/00 ４Ｃ０８６ 9/10 29/00 ４Ｈ０４５ 25/00 35/00 29/00 37/08 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 37/08 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｐ 21/08 16/18 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｎ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＧ０１Ｎ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 //(Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＣ１２Ｒ 1:91） (31)優先権主張番号０９／０９６，３４７ (32)優先日平成10年６月11日(1998．6．11) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号９８１２６６０．０ (32)優先日平成10年６月11日(1998．6．11) (33)優先権主張国イギリス（ＧＢ） (31)優先権主張番号９８２０８１６．８ (32)優先日平成10年９月24日(1998．9．24) (33)優先権主張国イギリス（ＧＢ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者リウ，チオンアメリカ合衆国ニューヨーク 11788 ハウポージェ，タウンハウスビレッジ 1111 (72)発明者ヘンガートナー，マイケル，オー．アメリカ合衆国ニューヨーク 11724 コールドスプリングハーバー，バングタウンロード１，コールドスプリングハーバーラボラトリー (72)発明者ボガート，ティエリー，アンドレ，オリバー，エディーベルギー国コートリークビー−8500 ウォルベンドリード 26ジー (72)発明者バンクリーキンジェ，ウィム，マリア，レンベルギー国コンティックビー−2500 パストリースタート 17 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA12 BA80 CA01 DA02 DA03 FA06 HA11 HA15 4B063 QA08 QQ02 QQ05 QQ79 QR48 QR56 QR66 QS24 QS33 QX01 4B064 AG01 AG27 CA09 CA10 CA19 CC24 DA05 DA14 4B065 AA90X AA90Y AA93X AB01 AC14 BA01 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 AA13 BA01 BA08 BA21 BA22 BA23 MA01 NA14 ZA012 ZA392 ZA512 ZB072 ZB112 ZB212 ZB262 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 EA16 MA01 MA04 NA14 ZA01 ZA39 ZA51 ZB07 ZB11 ZB21 ZB26 4H045 AA10 AA11 BA10 CA20 CA40 EA22 EA28 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ａ）配列番号：２に示されるアミノ酸配列を含有したタンパ
ク質、ｂ）配列番号：４に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｃ）配列番号：６に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｄ）配列番号：８に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｅ）配列番号：１０に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｆ）配列番号：１２に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｇ）配列番号：１４に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｈ）配列番号：１６に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｉ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列に
少なくとも４０％同一であるアミノ酸配列を含有したタンパク質、およびｊ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示される核酸配列
によりコードされたアミノ酸配列を含有したタンパク質、からなる群より選択されてなる単離タンパク質。
【請求項２】ａ）配列番号：１に示されるヌクレオチドの配列を含有した
核酸、ｂ）配列番号：３に示されるヌクレオチドの配列を含有した核酸、ｃ）配列番号：７に示されるヌクレオチドの配列を含有した核酸、ｄ）配列番号：９に示されるヌクレオチドの配列を含有した核酸、ｅ）配列番号：１１に示されるヌクレオチドの配列を含有した核酸、ｆ）配列番号：１３に示されるヌクレオチドの配列を含有した核酸、ｇ）配列番号：１５に示されるヌクレオチドの配列を含有した核酸、ｈ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示されるヌクレオ
チドの配列の相補体を含有した核酸、ｉ）低ストリンジェンシーの条件下に、（ｈ）記載の核酸にハイブリダイズしう
る核酸、ｊ）配列番号：２、４２、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列
に少なくとも４０％同一であるアミノ酸配列をコードした核酸、およびｋ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５の核酸配列に少なく
とも４０％同一である核酸、からなる群より選択されてなる単離核酸。
【請求項３】ａ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５
に示されるヌクレオチドの配列を含有した核酸、ｂ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示されるヌクレオ
チドの配列の相補体を含有した核酸、ｃ）低ストリンジェンシーの条件下に、（ｂ）記載の核酸にハイブリダイズしう
る核酸、ｄ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列に
少なくとも４０％同一であるアミノ酸配列をコードした核酸、およびｅ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列を
コードした核酸、からなる群より選択された核酸を含有してなる発現ベクター。
【請求項４】該核酸の発現がレポーター遺伝子の発現をもたらすように、
該ベクターに配置されたレポーター遺伝子をコードするＤＮＡを含有してなる、
請求項３記載の発現ベクター。
【請求項５】該レポーター遺伝子が緑色蛍光タンパク質をコードするもの
である、請求項４記載の発現ベクター。
【請求項６】ａ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５
に示されるヌクレオチドの配列を含有した核酸、ｂ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示されるヌクレオ
チドの配列の相補体を含有した核酸、ｃ）低ストリンジェンシーの条件下に、（ｂ）記載の核酸にハイブリダイズしう
る核酸、ｄ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列に
少なくとも４０％同一であるアミノ酸配列をコードした核酸、およびｅ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列を
コードした核酸、からなる群より選択された核酸でトランスフェクトされてなる哺乳動物細胞株。
【請求項７】該核酸とレポーター遺伝子とを含有してなる発現ベクターで
あって、該核酸の発現がレポーター遺伝子の発現をもたらすように該レポーター
遺伝子が該ベクター中に配置されたものである発現ベクターによりトランスフェ
クトされてなる、請求項６記載の哺乳動物細胞株。
【請求項８】該レポーター遺伝子が、緑色蛍光タンパク質をコードするも
のである、請求項７記載の哺乳動物細胞株。
【請求項９】該細胞株が、線維芽細胞株および上皮細胞株からなる群より
選択されたものである、請求項６記載の哺乳動物細胞株。
【請求項１０】該細胞株が、ＣＯＳ１、ＢＨＫ２１、Ｌ９２９、ＣＶ１、
ＳＷＩＳＳ３Ｔ３、ＨＴ１４４、ＩＭＲ３２、ＨＥＰＧ２、ＭＤＣＫ、ＭＣＦ
７、２９３、Ｈｅｌａ、Ａ５４９、ＳＷ４８およびＧ３６１からなる群より選択
されたものである、請求項６記載の哺乳動物細胞株。
【請求項１１】ＭＣＦ７細胞株である、請求項１０記載の哺乳動物細胞株
。
【請求項１２】ＭＣＦ７細胞株である、請求項７記載の哺乳動物細胞株。
【請求項１３】該細胞株が初代細胞株である、請求項６記載の哺乳動物細
胞株。
【請求項１４】該細胞株が、ヒト真皮ＦＩＢ、真皮ケラチノサイト、白血
球、単球およびマクロファージからなる群より選択されたものである、請求項１
３記載の哺乳動物細胞株。
【請求項１５】ａ）配列番号：２に示されるアミノ酸配列を含有したタン
パク質、ｂ）配列番号：４に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｃ）配列番号：６に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｄ）配列番号：８に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｅ）配列番号：１０に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｆ）配列番号：１２に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｇ）配列番号：１４に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｈ）配列番号：１６に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｉ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列に
少なくとも４０％同一であるアミノ酸配列を含有したタンパク質、およびｊ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示される核酸配列
によりコードされるアミノ酸配列を含有したタンパク質からなる群より選択されたタンパク質をコードする遺伝子を含有してなる非ヒト
トランスジェニック動物。
【請求項１６】ａ）配列番号：７、９、１１、１３または１５に示される
ヌクレオチドの配列を含有した核酸、ｂ）配列番号：７、９、１１、１３または１５に示されるヌクレオチドの配列の
相補体を含有した核酸、ｃ）低ストリンジェンシーの条件下に、（ｂ）記載の核酸にハイブリダイズしう
る核酸、ｄ）配列番号：８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列に少なくとも４
０％同一であるアミノ配列をコードした核酸、およびｅ）配列番号：８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列をコードした核
酸、からなる群より選択された核酸でトランスフェクトまたは形質転換された、その本来のＣＥＤ−６遺伝子の機能の全部または実質的に全部を欠損してなるト
ランスジェニック線形動物線虫。
【請求項１７】Ｃ．エレガンス（ｅｌｅｇａｎｓ）である、請求項１６記
載のトランスジェニック線形動物線虫。
【請求項１８】ａ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１
５に示されるヌクレオチドの配列を含有した核酸、ｂ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示されるヌクレオ
チドの配列の相補体を含有した核酸、ｃ）低ストリンジェンシーの条件下に、（ｂ）記載の核酸にハイブリダイズしう
る核酸、ｄ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列に
少なくとも４０％同一であるアミノ酸配列をコードした核酸、およびｅ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列を
コードした核酸、からなる群より選択された核酸によりトランスフェクトされたトランスジェニッ
ク哺乳動物細胞を、アポトーシス粒子に曝露するステップ、ならびに化合物の存
在下および非存在下におけるトランスジェニック細胞による該粒子の貪食作用性
の取り込みの割合を測定するステップを含む方法であって、ここで、貪食作用の
割合の増加がエンハンサーを示し、貪食作用の割合の減少がインヒビターを示す
ものである、化合物が、アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路のインヒビ
ターまたはエンハンサーであるかどうかを決定する方法。
【請求項１９】該アポトーシス粒子が、オプソニン化アポトーシス好中球
、オプソニン化アポトーシスリンパ球、オプソニン化アポトーシス赤血球、オプ
ソニン化殺細菌およびオプソニン化殺酵母からなる群より選択されたものである
、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】該アポトーシス粒子が標識されたものである、請求項１９
記載の方法。
【請求項２１】該標識が、非蛍光色素、蛍光色素、抗体に結合した非蛍光
色素および抗体に結合した蛍光色素からなる群より選択されたものである、請求
項２０記載の方法。
【請求項２２】トランスジェニック哺乳動物細胞が線維芽細胞または上皮
細胞である、請求項１８記載の方法。
【請求項２３】トランスジェニック哺乳動物細胞が、ＣＯＳ１、ＢＨＫ２
１、Ｌ９２９、ＣＶ１、ＳＷＩＳＳ３Ｔ３、ＨＴ１４４、ＩＭＲ３２、ＨＥＰ
Ｇ２、ＭＤＣＫ、ＭＣＦ７、２９３、Ｈｅｌａ、Ａ５４９、ＳＷ４８およびＧ３
６１からなる群より選択されたものである、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】該トランスジェニック哺乳動物細胞が初代細胞である、請
求項１８記載の方法。
【請求項２５】ヒト真皮ＦＩＢ、真皮ケラチノサイト、白血球、単球およ
びマクロファージからなる群より選択されたものである、請求項２４記載の方法
。
【請求項２６】貪食されたアポトーシス粒子を、光学顕微鏡、蛍光顕微鏡
、定量蛍光分光分析およびフローサイトメトリーからなる群より選択された方法
により検出する、請求項２１記載の方法。
【請求項２７】アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路
のインヒビターまたはエンハンサーとして、請求項１８記載の方法により同定さ
れてなる化合物。
【請求項２８】（１）哺乳動物細胞に、ａ）配列番号：２、４、６、８、
１０、１２、１４もしくは１６に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｂ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４もしくは１６に少なくとも
４０％同一であるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｃ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３もしくは１５に示されるヌク
レオチドの配列によりコードされたアミノ酸配列を含有したタンパク質からなる群より選択されたタンパク質を導入するか、または哺乳動物細胞に前記
ａ）〜ｃ）の群の１つにおいてタンパク質の転写を阻害するＲＮＡアンチセンス
を発現するベクターを導入するステップ、および（２）哺乳動物細胞をアポトーシス粒子に曝露し、化合物の存在下または非存在
下に、細胞による該粒子の貪食作用性の取り込みの割合を測定するステップ、こ
こで、貪食作用の割合の増加がエンハンサーを示し、貪食作用の割合の減少がイ
ンヒビターを示すものである、を含む、化合物が、アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路のインヒビ
ターまたはエンハンサーであるかどうかを決定する方法。
【請求項２９】該アポトーシス粒子が、オプソニン化アポトーシス好中球
、オプソニン化アポトーシスリンパ球、オプソニン化アポトーシス赤血球、オプ
ソニン化殺細菌およびオプソニン化殺酵母からなる群より選択されたものである
、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】該アポトーシス粒子が標識されたものである、請求項２８
記載の方法。
【請求項３１】該標識が、非蛍光色素、蛍光色素、抗体に結合した非蛍光
色素および抗体に結合した蛍光色素からなる群より選択されたものである、請求
項３０記載の方法。
【請求項３２】哺乳動物細胞が、線維芽細胞または上皮細胞である、請求
項２８記載の方法。
【請求項３３】哺乳動物細胞が、ＣＯＳ１、ＢＨＫ２１、Ｌ９２９、ＣＶ
１、ＳＷＩＳＳ３Ｔ３、ＨＴ１４４、ＩＭＲ３２、ＨＥＰＧ２、ＭＤＣＫ、Ｍ
ＣＦ７、２９３、Ｈｅｌａ、Ａ５４９、ＳＷ４８およびＧ３６１からなる群より
選択されたものである、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】該哺乳動物細胞が初代細胞である、請求項２８記載の方法
。
【請求項３５】該哺乳動物細胞が、ヒト真皮ＦＩＢ、真皮ケラチノサイト
、白血球、単球およびマクロファージからなる群より選択されたものである、請
求項３４記載の方法。
【請求項３６】貪食されたアポトーシス粒子が、光学顕微鏡、蛍光顕微鏡
、定量蛍光分光分析およびフローサイトメトリーからなる群より選択された方法
により検出されるものである、請求項３０記載の方法。
【請求項３７】アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路
のインヒビターまたはエンハンサーとして、請求項２８記載の方法により同定さ
れてなる化合物。
【請求項３８】（１）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または
１５に示される核酸配列を含有するものから選択された核酸によりトンスフェク
トされたトランスジェニック哺乳動物細胞と、（２）ａ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６に示される
アミノ酸配列を含有したタンパク質、ｂ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６に少なくとも４０
％同一であるアミノ酸配列を含有したタンパク質；およびｃ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示されるヌクレオ
チドの配列によりコードされたアミノ酸配列を含有したタンパク質、からなる群より選択されたタンパク質を発現する哺乳動物細胞と（３）ａ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２または１６に示されるアミノ
酸配列を含有したタンパク質、ｂ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６に少なくとも４０
％同一であるアミノ酸配列を含有したタンパク質；およびｃ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示されるヌクレオ
チドの配列によりコードされたアミノ酸配列を含有したタンパク質からなる群より選択されたタンパク質に対するＲＮＡアンチセンスを発現するベ
クターを含有した哺乳動物細胞とからなる群より選択された哺乳動物細胞を試験
対象の化合物に曝露するステップ、ならびにアクチン細胞骨格の組織化において
いかなる変化があるかどうかを決定するステップを含み、ここで、アクチン細胞
骨格の再配列の増加がエンハンサーを示し、アクチン細胞骨格の再配列の減少が
インヒビターを示すものである、化合物が、アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路のインヒビ
ターまたはエンハンサーであるかどうかを決定する方法。
【請求項３９】アクチン細胞骨格が、Ｆ−アクチンと相互作用する化合物
に連結される蛍光色素により可視化される、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】該リンカー化合物がファロイジンである、請求項３９記載
の方法。
【請求項４１】トランスジェニック哺乳動物細胞が、線維芽細胞または上
皮細胞である、請求項３９記載の方法。
【請求項４２】トランスジェニック哺乳動物細胞が、ＣＯＳ１、ＢＨＫ２
１、Ｌ９２９、ＣＶ１、ＳＷＩＳＳ３Ｔ３、ＨＴ１４４、ＩＭＲ３２、ＨＥＰ
Ｇ２、ＭＤＣＫ、ＭＣＦ７、Ｕ２９３、Ｈｅｌａ、Ａ５４９、ＳＷ４８およびＧ
３６１からなる群より選択されたものである、請求項４１記載の方法。
【請求項４３】該トランスジェニック哺乳動物細胞が初代細胞である、請
求項３８記載の方法。
【請求項４４】トランスジェニック哺乳動物細胞が、ヒト真皮ＦＩＢ、真
皮ケラチノサイト、白血球、単球およびマクロファージからなる群より選択され
たものである、請求項４３記載の方法。
【請求項４５】アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路
のインヒビターまたはエンハンサーとして、請求項３８記載の方法により同定さ
れてなる化合物。
【請求項４６】（１）請求項７記載のトランスジェニック哺乳動物細胞を
化合物に曝露するステップ、（２）レポーター遺伝子の発現のレベルを測定するステップ、および（３）該発現と、該化合物の非存在下における該レポーター遺伝子の発現のレベ
ルとを比較するステップ、ここで、貪食作用の割合の増加がエンハンサーを示し
、貪食作用の割合の減少がインヒビターを示すものである、を含む、化合物が、アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路に関係する
タンパク質をコードする遺伝子の発現のインヒビターまたはエンハンサーである
かどうかを決定する方法。
【請求項４７】アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路
に関連するタンパク質をコードする遺伝子の発現のインヒビターまたはエンハン
サーとして、請求項４５記載の方法により同定されてなる化合物。
【請求項４８】ａ）配列番号：２に示されるアミノ酸配列を含有したタン
パク質、ｂ）配列番号：４に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｃ）配列番号：６に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｄ）配列番号：８に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｅ）配列番号：１０に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｆ）配列番号：１２に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｇ）配列番号：１４に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｈ）配列番号：１６に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｉ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列に
少なくとも４０％同一であるアミノ酸配列を含有したタンパク質、およびｊ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示される核酸配列
によりコードされるアミノ酸配列を含有したタンパク質からなる群より選択されたタンパク質のエピトープに対する抗体。
【請求項４９】モノクローナル抗体である、請求項４８記載の抗体。
【請求項５０】ａ）配列番号：８のアミノ酸配列を含有したタンパク質、
ｂ）配列番号：８のアミノ酸配列に少なくとも４０％同一であるアミノ酸配列を
含有したタンパク質、ならびにｃ）配列番号：７のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含有し
たタンパク質、からなる群より選択されたタンパク質の有効量を含有した薬物を患者に投与する
ステップを含む、炎症、自己免疫疾患およびガンからなる群より選択された疾患を罹患した個体に
おける治療方法。
【請求項５１】アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路
のエンハンサーである化合物の有効量を患者に投与するステップを含む、炎症、自己免疫疾患およびガンからなる群より選択された疾患を罹患した個体の
治療方法。
【請求項５２】アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路
に関連するタンパク質をコードする遺伝子の発現のエンハンサーである化合物の
有効量を患者に投与するステップを含む、炎症、自己免疫疾患およびガンからなる群より選択された疾患を罹患した個体の
治療方法。
【請求項５３】配列番号：７、１３および１５からなる群より選択された
核酸の有効量を患者に投与するステップを含む、炎症、自己免疫疾患およびガンからなる群より選択された疾患を罹患した個体の
治療方法。
【請求項５４】ａ）配列番号：８、１４、１６のアミノ酸の配列を含有し
たタンパク質、ｂ）配列番号：８、１４または１６のアミノ酸配列に少なくとも４０％同一であ
るアミノ酸の配列を含有したタンパク質、およびｃ）配列番号：７、１３または１５のヌクレオチド配列によりコードされたアミ
ノ酸配列を含有したタンパク質からなる群より選択されたタンパク質の有効量を患者に投与するステップを含む
、神経変性疾患、卒中および鎌状赤血球貧血からなる群より選択された疾患を罹
患した個体の治療方法。
【請求項５５】アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路
のインヒビターとして同定された化合物の有効量を患者に投与するステップを含
む、神経変性疾患、卒中、鎌状赤血球貧血からなる群より選択された疾患を罹患した
個体の治療方法。
【請求項５６】アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路
に関連するタンパク質をコードする遺伝子の発現のインヒビターとして、同定さ
れた化合物の有効量を患者に投与するステップを含む、神経変性疾患、卒中および鎌状赤血球貧血からなる群より選択された疾患を罹患
した個体の治療方法。
【請求項５７】ａ）配列番号：７、１３または１５のヌクレオチドの配列
を含有した核酸、ｂ）配列番号：７、１３または１５のヌクレオチドの配列にハイブリダイズする
核酸、およびｃ）配列番号：８、１４または１６をコードした核酸からなる群より選択された核酸の有効量を患者に投与するステップを含む、神経変性疾患、卒中および鎌状赤血球貧血からなる群より選択された疾患を罹患
した個体の治療方法。
【請求項５８】ａ）配列番号８、１４または１６のアミノ酸配列を含有し
たタンパク質、ｂ）配列番号：８、１４または１６のアミノ酸配列に少なくとも４０％同一であ
るアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｃ）配列番号：７、１３または１５記載のヌクレオチド配列によりコードされた
アミノ酸配列を含有したタンパク質からなる群より選択されたタンパク質と製薬上許容されうる担体とを含有してな
る医薬組成物。
【請求項５９】請求項２７記載の化合物と製薬上許容されうる担体とを含
有してなる医薬組成物。
【請求項６０】請求項３７記載の化合物と製薬上許容されうる担体とを含
有してなる医薬組成物。
【請求項６１】請求項４５記載の化合物と製薬上許容されうる担体とを含
有してなる医薬組成物。
【請求項６２】請求項４７記載の化合物と製薬上許容されうる担体とを含
有してなる医薬組成物。
【請求項６３】ａ）配列番号：７、１３または１５のヌクレオチドの配列
を含有した核酸、ｂ）配列番号：７、１３または１５のヌクレオチドの配列にハイブリダイズする
核酸、およびｃ）配列番号：８、１４または１６をコードした核酸からなる群より選択された核酸を含有してなる医薬組成物。
【請求項６４】（ａ）ＤＮＡ結合ドメインおよび活性ドメインを有する転
写因子により調節されたプロモーターの制御下のレポーター遺伝子を含有したＤ
ＮＡ構築物を有する宿主細胞を供給するステップ、（ｂ）請求項２の核酸の断片または全部と該転写因子のＤＮＡ結合ドメインまた
は活性ドメインのいずれかとの第１の融合体をコードする第１のハイブリッドＤ
ＮＡ配列を該宿主細胞において発現させるステップ、（ｃ）第１の融合体に取り込まれない転写因子のＤＮＡ結合ドメインまたは活性
ドメインと共にピュラティブ（ｐｕｌａｔｉｖｅ）相互作用するタンパク質をコ
ードする少なくとも１つの第２のハイブリッドＤＮＡ配列を該宿主細胞において
発現するステップ、および（ｄ）該宿主細胞におけるレポーター遺伝子産物のいかなる生産をも検出するこ
とにより、請求項１、１０または１６いずれか記載のタンパク質を用いて調べら
れるタンパク質のいかなる結合をも決定するステップ、を含む、アポトーシス細胞の取り込みを促進するシグナル伝達経路において、請求項１記
載のタンパク質と相互作用するタンパク質の同定方法。
【請求項６５】線形動物線虫Ｃ．エレガンス由来の単離タンパク質であっ
て、Ｆｉｇｕｒｅ２Ａ中のアミノ酸残基約２４２〜アミノ酸残基約３３８のア
ミノ酸配列を含有してなるタンパク質または保存的アミノ酸変化でのみ該タンパ
ク質とは異なるアミノ酸配列を含有してなるタンパク質。
【請求項６６】Ｆｉｇｕｒｅ２０中のアミノ酸約１１〜アミノ酸約１９
０であるアミノ酸配列を含有してなる単離タンパク質または保存的アミノ酸変化
でのみ該タンパク質とは異なるアミノ酸配列を含有してなる単離タンパク質。
【請求項６７】ａ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１
５に示されるヌクレオチドの配列を含有した核酸、ｂ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示されるヌクレオ
チドの配列の相補体を含有した核酸、ｃ）低ストリンジェンシーの条件下に（ｂ）記載の核酸にハイブリダイズしうる
核酸、ｄ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列に
少なくとも４０％同一であるアミノ酸配列をコードした核酸、ｅ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列を
コードした核酸からなる群より選択された核酸を患者の核酸試料に曝露するステップ、およびハ
イブリダイゼーションを検出するステップを含む、アポトーシス細胞の貪食作用の欠損に関連する患者における疾患の診断
方法。
【請求項６８】ａ）配列番号：８のアミノ酸配列を含有したタンパク質、
ｂ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｃ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｄ）配列番号：８、１４もしくは１６のアミノ酸配列に少なくとも４０％同一で
あるアミノ酸配列を有するタンパク質配列または配列番号：７、１３または１５
の核酸配列によりコードされたタンパク質配列、からなる群より選択されたタンパク質を、前記タンパク質の１つについてのエピ
トープに対する抗体を用いて患者由来の試料において検出するステップ、を含む、アポトーシス細胞の貪食作用の欠損に関連する患者における疾患の診断
方法。
【請求項６９】ａ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または
１６に示されるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｂ）配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４または１６のアミノ酸配列に
少なくとも４０％同一であるアミノ酸配列を含有したタンパク質、ｃ）配列番号：１、３、５、７、９、１１、１３または１５に示される核酸配列
によりコードされたアミノ酸配列を含有したタンパク質、からなる群より選択されたタンパク質を含有してなるタンパク質であって、かつ
他のタンパク質に融合されてなるタンパク質。
【請求項７０】該他のタンパク質がエピトープタグまたはレポーター遺伝
子の産物である、請求項６９記載のタンパク質。
【請求項７１】（１）ＣＥＤ−６の発現が欠損しているかあるいは抑制さ
れているＣ．エレガンスを試験対象の化合物に曝露するステップ、および（２）野生型表現型への復帰をスコアするステップを含む、化合物が、アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路のエンハン
サーであるかどうかを同定する方法。
【請求項７２】（１）請求項１７に記載のトランスジェニックＣ．エレガ
ンスを試験対象の化合物に曝露するステップ、および（２）Ｌ１幼生の頭部および／または生殖腺におけるアポトーシス死体をスコア
することにより貪食作用活性のレベルを測定するステップを含む、化合物が、アポトーシス細胞の貪食作用を促進するシグナル伝達経路のエンハン
サーまたはインヒビターであるかどうかを決定する方法。
【請求項７３】アポトーシス細胞の貪食作用を調節するシグナル伝達経路
におけるアダプター分子である、単離タンパク質。
【請求項７４】配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４もしくは１
６のアミノ酸配列を含有したタンパク質、配列番号：２、４、６、８、１０、１
２、１４もしくは１６をコードした核酸、配列番号：１、３、５、７、９、１１
、１３もしくは１５によりコードされたアミノ酸配列、または配列番号：１、３
、５、７、９、１１、１３もしくは１５の核酸配列を含有した、例えば、炎症、自己免疫疾患またはガンの治療における使用のためのタンパク質
または核酸の使用。
【請求項７５】配列番号：２、４、６、８、１０、１２、１４もしくは１
６のアミノ酸配列を含有したタンパク質、配列番号：２、４、６、８、１０、１
２、１４もしくは１６をコードした核酸、配列番号：１、３、５、７、９、１１
、１３もしくは１５によりコードされたアミノ酸配列、または配列番号：１、３
、５、７、９、１１、１３もしくは１５の核酸配列を含有した、例えば、神経変性疾患、卒中または鎌状赤血球貧血の治療における使用のための
タンパク質または核酸の使用。