JP2003519138A - サイクリックａｍｐ特異性ホスホジエステラーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ＰＤＥ４の強力で選択的な阻害剤である新規化合物、およびその製造方法が開示される。炎症性疾患、およびサイトカインレベルの上昇を含む他の疾患の他、中枢神経疾患の治療への本明細書の化合物の使用も開示される。

Description

【発明の詳細な説明】

（技術分野） 本発明はサイクリックアデノシン３’、５’−モノホスフェート特異性ホスホ
ジエステラーゼ（ｃＡＭＰ特異性ＰＤＥ）の強力で選択的な阻害剤である一連の
化合物に関する。より詳しくは、本発明はｃＡＭＰ特異性ＰＤＥ、特にＰＤＥ４
の機能阻害剤に有用な一連の新規テトラゾール化合物とその製造方法およびそれ
を含む医薬組成物、および例えば炎症性疾患およびサイトカインおよび前炎症媒
介物質レベルの高いその他の疾患治療におけるその治療薬としての使用に関する
。 （従来技術） 慢性炎症は様々なタイプの炎症細胞、特にリンパ球系細胞（Ｔリンパ球を含む
）および骨髄系細胞（顆粒球、マクロファージおよび単球を含む）の活性化が特
徴である多様な因子による疾患の併発である。これらの活性化細胞は腫瘍壊死因
子（ＴＮＦ）およびインターロイキン−１（ＩＬ−１）等のサイトカインを含む
前炎症媒介物質を生成する。従って、これらの細胞の活性化、または前炎症媒介
物質の製造を抑制する試薬が、サイトカインレベルの上昇を含む炎症性疾患その
他の疾患の治療に有用であると思われる。

【０００１】 サイクリックアデノシン１燐酸（ｃＡＭＰ）は広範囲の細胞外刺激に対する細
胞の生物反応を仲介する第２のメッセンジャーである。特定の細胞表面リセプタ
ーに適当な作用物質が結合すると、アデニル酸サイクラーゼが活性化し、アデノ
シン３燐酸をｃＡＭＰに変換する。細胞内のｃＡＭＰの作用物質誘発作用がｃＡ
ＭＰ依存性プロテインキナーゼの作用で主として媒介されることが定説になって
いる。ｃＡＭＰの細胞間作用はヌクレオチドの細胞外経の輸送か、３’−ホスホ
ジエステル結合を加水分解し５’−アデノシン１燐酸（５’−ＡＭＰ）を生成す
るサイクリックヌクレオチドホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）による酵素分解で
終結する。５’−ＡＭＰは負活性名代謝生成物である。ｃＡＭＰと５’−ＡＭＰ
の構造を以下に示す。

【０００２】

【化１２】 ｃＡＭＰ

【０００３】

【化１３】 ５’−ＡＭＰ ヒト骨髄系およびリンパ系細胞レベルの上昇は細胞活性化の抑制と関連してい
る。従って、ＰＤＥの細胞内酵素ファミリーは細胞内のｃＡＭＰレベルを制御す
る。ＰＤＥ４はこれらの細胞内で優勢なＰＤＥアイソタイプであり、ｃＡＭＰ分
解の主な因子である。従って、ＰＤＥの機能を阻害すると不活性な代謝性生物で
ある５’−ＡＭＰへのｃＡＭＰの変換が阻止され、その結果高いｃＡＭＰレベル
が維持され、細胞の活性化が抑制される（ベアボ（Ｂｅａｖｏ）ら、「サイクリ
ックヌクレオチドホスホジエステラーゼ：構造、制御および薬剤作用」、ウィリ
ー・アンド・サンズ（Ｗｉｌｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）、キチェスター（Ｃｈｉｃ
ｈｅｓｔｅｒ）、３〜１４頁、１９９３年；ギエンビュツ（Ｇｉｅｍｂｙｃｚ）
ら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ、２２、３３７〜３４４頁、１９９２年
）。

【０００４】 例えば、ロリプラム（ｒｏｌｉｐｒａｍ）等のＰＤＥ４阻害剤がＴＮＦαの生
成を阻害し、単球によるＩＬ−１βの放出を部分的に阻害することが示されてい
る（セムラー（Ｓｅｍｍｌｅｒ）ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃ
ｏｌ．、１５、４０９〜４１３頁、１９９３年；モルナー−キンバー（Ｍｏｌｎ
ａｒ−Ｋｉｍｂｅｒ）ら、１９９２年）。ＰＤＥ４阻害剤がヒト多形核白血球か
らのスーパーオキサイドラディカルの生成を阻止すること（ベルグヘース（Ｖｅ
ｒｇｈｅｓｅ）ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．、２１（Ｓｕｐｐ
ｌ．２）、Ｓ６１、１９８９年；ニールソン（Ｎｉｅｌｓｏｎ）ら、Ｊ．Ａｌｌ
ｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、８６、８０１〜８０８、１９９０年）、ヒト好塩
基球からの血管作動性アミンおよびプロスタノイドの放出を阻害すること（ピー
チェル（Ｐｅａｃｈｅｌｌ）ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８、２５０３〜２
５１０頁、１９９２年）、好酸球の呼吸破壊を阻止すること（デント（Ｄｅｎｔ
）ら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１０３、１３３９〜１３４６頁、１９９１年
）、およびヒトＴ白血球の活性化をそがいすること（ロビセック（Ｒｏｂｉｃｓ
ｅｋ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、４２、８６９〜８７７頁、
１９９１年）も示されている。

【０００５】 炎症細胞の活性化およびサイトカイン（例えばＴＮＦαおよびＩＬ−１β）の
非統制生産はリューマチ性関節炎、骨関節炎、痛風関節炎、脊椎炎、甲状腺関連
眼障害、ベーチェット病、敗血症、敗血症性ショック、内毒素性ショック、グラ
ム陰性菌敗血症、グラム陽性菌敗血症、毒性ショック症候群、喘息、慢性気管支
炎、成人呼吸困難症候群、慢性閉塞性肺疾患等の慢性肺炎症、珪肺症、肺サルコ
イドーシス、心筋、脳および末梢血管の再潅流障害、繊維症、膵嚢胞性繊維症、
ケロイド形成、傷痕形成、アテローム性動脈硬化、グラフト対ホスト反応および
同種移植拒絶等の移植拒絶症、慢性糸球体腎炎、狼瘡、クローン病および潰瘍性
大腸炎等の炎症性腸炎、白血病等のリンパ球増殖疾患、およびアトピー性皮膚炎
、乾癬および蕁麻疹等の炎症性皮膚病等のアレルギー、自己免疫および炎症性疾
患および不全に関係している。

【０００６】 サイトカインレベル上昇が特徴である他の病状には軽度の外傷による脳障害（
ディロン（Ｄｈｉｌｌｏｎ）ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ、１２、１０３５
〜１０４３頁、１９９５年；ストープ（Ｓｕｔｏｒｐ）ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎ
ｖｅｓｔ．、９１、１４２１〜１４２８頁、１９９３年）、うっ血性心不全（ブ
リストウ（Ｂｒｉｓｔｏｗ）ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９７、１３４０〜１
３４１頁、１９９８年）、感染または悪性続発悪液質、後天性免疫欠損症候群（
ＡＩＤＳ）続発性悪液質、ＡＲＣ（ＡＩＤＳ関連合併症）、感染、マラリア脳炎
、骨粗鬆症および骨再吸収疾患、ケロイド形成、傷痕組織形成、および発熱が含
まれる。

【０００７】 特に、ＴＮＡαがヒト後天性免疫欠損症候群（ＡＩＤＳ）にある役割を有する
と同定されている。ＡＩＤＳはＴリンパ球がヒト免疫欠損ウイルス（ＨＩＶ）に
よる感染の結果である。ＨＩＶは骨髄形細胞にも感染し、その中に維持されるが
、ＴＦＮがＴリンパ球および単球におけるＨＩＶ感染を制御することが示されて
いる（ポーリ（Ｐｏｌｉ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
．、８７、７８２〜７８５頁。１９９０年）。

【０００８】 コラゲナーゼの刺激、生体内血管形成、骨再吸収刺激、および癌細胞の上皮へ
の付着能増加等のＴＦＮαのいくつかの性質は、ホスト内での癌の生長と転移拡
散におけるＴＮＦの役割と符合する。ＴＮＦαは最近、癌細胞の生長と転移に直
接関連付けられている（オロツ（Ｏｒｏｓｚ）ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７
７、１３９１〜１３９８頁、１９９３年）。

【０００９】 ＰＤＥ４は広く組織に分布している。ＰＤＥ４に対する遺伝子は少なくとも４
つあり、任意の遺伝子からの複数の転写により同じ触媒部位を共有する数個の異
なったタンパク質を生じる。４個の可能な触媒部位間のアミノ酸の同一性は８５
％以上である。それらに共通の阻害剤感受性と反応速度の類似性は、このレベル
のアミノ酸の同一性を反映している。これらの別個に発現したＰＤＥ４タンパク
質の役割により、細胞におけるこれらの酵素の局在が細胞間で異なり、および／
または翻訳後の修飾により触媒効率を制御することができることが定説となって
いる。ＰＤＥ４酵素を発現するいずれの細胞型も、これらのタンパク質をコード
する４個の可能な遺伝子の少なくとも一つを発現する。

【００１０】 研究者はＰＤＥ４阻害剤の抗炎症剤としての使用にかなりの関心を示してきた
。初期の事実は、ＰＤＥ４阻害が単球、マクロファージ、Ｔｈ−１系Ｔ細胞、お
よび顆粒球等の様々な炎症細胞に有益な効果を有することを示している。サイト
カイン、脂質調節物質、スーパーオキサイド、およびヒスタミン等の生体アミン
等の多くの前炎症媒介物質がＰＤＥ４阻害剤の作用によりこれらの細胞内で弱め
られている。ＰＤＥ４阻害剤はまた、Ｔ細胞増殖、化学毒性物質に反応する顆粒
球細胞間移動、および血管系内上皮細胞結合の均一性等の他の細胞機能に影響す
る 様々なＰＤＥ４阻害剤の設計、合成およびスクリーニングが報告されている。
カフェインおよびテオフィリン等のメチルキサンチンが最初に発見されたＰＤＥ
阻害剤であったが、これらの化合物はどのＰＤＥを阻害するかに関して選択性が
ない。抗うつ薬であるロリプラムが最初に報告されたＰＤＥ４阻害剤であった。
以下の構造式を有するロリプラムは組み換えヒトＰＤＥ４阻害剤に関して５０％
阻害剤濃度（ＩＣ₅₀）が２００ｎＭであると報告されている。

【００１１】

【化１４】 ロリプラム 研究者はロリプラムより低いＩＣ₅₀を有し、ロリプラム投与に伴う吐き気、嘔
吐おおよび鎮静等の望ましくない中枢神経系副作用を避け得るＰＤＥ４阻害剤の
検索を継続している。フェルドマン（Ｆｅｌｄｍａｎ）ら、ＵＳＰ５、６６５、
７５４にあるクラスの化合物が開示されている。そこに開示された化合物はロリ
プラムに類似した構造を有する置換ピロリジンである。一例として、構造式（Ｉ
）を有する化合物はヒト組み換えＰＤＥ４に対し約２ｎＭのＩＣ₅₀を有する。効
力から催吐性副作用を都合よく分離できたが、ＣＮＳの望ましくない効果の減少
を示さなかった。

【００１２】

【化１５】 （Ｉ） さらに、いくつかの企業が他のＰＤＥ４阻害剤の臨床試験を現在行っている。
しかしながら、効力と嘔吐や中枢神経系障害等の副作用に関する問題は未解決の
ままである。 （発明が解決しようとする課題） 従って、ＰＤＥ４を選択的に阻害し、従来技術のＰＤＥ４阻害剤に伴うＣＮＳ
副作用を減少させるか除去する化合物は、アレルギーおよび炎症性疾患、および
ＴＮＦ等のサイトカインの過剰または非制御生産に関連する他の疾患の治療に有
用であると思われる。さらに、ＰＤＥ４の選択的阻害剤は特定の標的細胞におけ
るｃＡＭＰレベルまたはＰＤＥ機能上昇に関連する疾患の治療に有用であると思
われる。 （課題を解決するための手段） 本発明は、ＰＤＥ４活性の阻害剤が有益であると考えられる疾患および／また
は病状の治療に有用な強力で選択性のあるＰＤＥ４阻害剤を目的とする。本発明
のＰＤＥ阻害剤は、従来技術のＰＤＥ４阻害剤に伴うＣＮＳの副作用を期待以上
に減少させるか除去する。

【００１３】 例えば、本発明は以下の構造式（ＩＩ）を有する化合物を目的とする。

【００１４】

【化１６】 （ＩＩ） ここでＹはＯまたはＮＲ⁴であり； Ｒ¹は低級アルキル、架橋アルキル（例えばノルボルニル）、アラルキル（例
えばインダニル）、シクロアルキル、５−または６−員飽和ヘテロ環（例えば３
−テトラヒドロフリル）、Ｃ_1-3−アルキレンシクロアルキル（例えばシクロペ
ンチルメチル）、アリールまたはヘテロアリール置換プロパルギル（例えば−Ｃ
Ｈ₂ＣoＣ−Ｃ₆Ｈ₅）、アリールまたはヘテロアリール置換アリル（例えば−ＣＨ ₂ ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ₆Ｈ₅）、およびハロシクロアルキル（例えばフルオロシクロペ
ンチル）でなる群から選ばれ； Ｒ²は水素、メチルまたはハロ置換メチル、例えばＣＨＦ₂であり； Ｒ³はＣ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ⁷、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ⁸Ｒ⁹、Ｃ（Ｃ＝
Ｏ）ＮＲ⁸Ｒ⁹、低級アルキル、架橋アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、
ハロシクロアルキル、Ｃ_1-3アルキレンシクロアルキル、５−または６−員飽和
ヘテロ環、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールＳＯ₂、アラルキル、ア
ルカリール、ヘテロアラルキル、ヘテロアルカリール、Ｃ_1-3アルキレンＣ（＝
Ｏ）ＯＲ⁷，Ｃ（＝Ｏ）Ｃ_1-3アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ_1-3アルキレンヘテ
ロアリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_1-3アルキレンＣ（
Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ_1-3アルキレンＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（Ｃ
＝Ｏ）Ｃ_1-3アルキレンＮＨ₂、およびＮＨＣ（＝Ｏ）ＯＲ⁷でなる群から選ばれ
； Ｒ⁴は水素、低級アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリールまたは
ヘテロアリールであり； Ｒ⁷はシクロアルキル、分枝または非分枝低級アルキル、ヘテロアリール、ヘ
テロ環、アラルキルおよびアリールでなる群からえらばれ、Ｒ⁷は随意には少な
くとも１個のＯＲ⁸，ＮＲ⁸Ｒ⁹またはＳＲ⁸であり； 同じかまたは異なるＲ⁸とＲ⁹は水素、低級アルキル、シクロアルキル、アリー
ル、ヘテロアリール、アルカリール、ヘテロアラルキル、ヘテロアルカリール、
およびアラルキルでなる群から選ばれるか、またはＲ⁸とＲ⁹は共に４員環〜７員
環を形成し； Ｒ¹⁰は水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、Ｃ（＝Ｏ
）アルキル、Ｃ（＝Ｏ）シクロアルキル、Ｃ（＝Ｏ）アリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｏア
ルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏシクロアルキル、Ｃ（＝Ｏ）アリール、ＣＨ₂ＯＨ、ＣＨ₂ Ｏアルキル、ＣＨＯ、ＣＮ、ＮＯ₂、またはＳＯ₂Ｒ¹¹であり； Ｒ¹¹はアルキル、シクロアルキル、トリフルオロメチル、アリール、アラルキ
ルまたはＮＲ⁸Ｒ⁹である。

【００１５】 本発明の目的はまた、少なくとも１個の構造式（ＩＩ）の化合物を含む組成物
であり、その化合物またはその化合物を含む組成物を疾患または不全の治療に使
用すること、およびその化合物および構造式（ＩＩ）の化合物の合成に含まれる
中間体の調整方法である。

【００１６】 本発明の目的はまた、ＰＤＥ４の阻害が有益である病状を有する哺乳動物の治
療方法であり、哺乳動物に治療上有効量の構造式（ＩＩ）の化合物、または構造
式（ＩＩ）の化合物を含む組成物を投与することにより、ｃＡＭＰレベルを調節
し、ＴＮＦαレベルを減少させ、哺乳動物における炎症細胞活性化を抑制し、哺
乳動物におけるＰＤＥ４機能を阻害することである。 （発明の実施の形態） 本発明の目的は構造式（ＩＩ）を有する化合物である。

【００１７】

【化１７】 （ＩＩ） ここでＹはＯまたはＮＲ⁴であり； Ｒ¹は低級アルキル、架橋アルキル（例えばノルボルニル）、アラルキル（例
えばインダニル）、シクロアルキル、５−または６−員飽和ヘテロ環（例えば３
−テトラヒドロフリル）、Ｃ_1-3−アルキレンシクロアルキル（例えばシクロペ
ンチルメチル）、アリールまたはヘテロアリール置換プロパルギル（例えば−Ｃ
Ｈ₂ＣoＣ−Ｃ₆Ｈ₅）、アリールまたはヘテロアリール置換アリル（例えば−ＣＨ ₂ ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ₆Ｈ₅）、およびハロシクロアルキル（例えばフルオロシクロペ
ンチル）でなる群から選ばれ； Ｒ²は水素、メチルまたはハロ置換メチル、例えばＣＨＦ₂であり； Ｒ³はＣ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ⁷、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ⁸Ｒ⁹、Ｃ（Ｃ
＝Ｏ）ＮＲ⁸Ｒ⁹、低級アルキル、架橋アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル
、ハロシクロアルキル、Ｃ_1-3アルキレンシクロアルキル、５−または６−員飽
和ヘテロ環、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールＳＯ₂、アラルキル、
アルカリール、ヘテロアラルキル、ヘテロアルカリール、Ｃ_1-3アルキレンＣ（
＝Ｏ）ＯＲ⁷，Ｃ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_1-3アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ_1-3アルキレン
ヘテロアリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_1-3アルキレン
Ｃ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_1-3アルキレンＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（
Ｃ＝Ｏ）Ｃ_1-3アルキレンＮＨ₂、およびＮＨＣ（＝Ｏ）ＯＲ⁷でなる群から選ば
れ； Ｒ⁴は水素、低級アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリールまたは
ヘテロアリールであり； Ｒ⁷はシクロアルキル、分枝または非分枝低級アルキル、ヘテロアリール、ヘ
テロ環、アラルキルおよびアリールでなる群からえらばれ、Ｒ⁷は随意には少な
くとも１個のＯＲ⁸，ＮＲ⁸Ｒ⁹またはＳＲ⁸であり； 同じかまたは異なるＲ⁸とＲ⁹は水素、低級アルキル、シクロアルキル、アリー
ル、ヘテロアリール、アルカリール、ヘテロアラルキル、ヘテロアルカリール、
およびアラルキルでなる群から選ばれるか、またはＲ⁸とＲ⁹は共に４員環〜７員
環を形成し； Ｒ¹⁰は水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、Ｃ（＝Ｏ
）アルキル、Ｃ（＝Ｏ）シクロアルキル、Ｃ（＝Ｏ）アリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｏア
ルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏシクロアルキル、Ｃ（＝Ｏ）アリール、ＣＨ₂ＯＨ、ＣＨ₂ Ｏアルキル、ＣＨＯ、ＣＮ、ＮＯ₂、またはＳＯ₂Ｒ¹¹であり； Ｒ¹¹はアルキル、シクロアルキル、トリフルオロメチル、アリール、アラルキ
ルまたはＮＲ⁸Ｒ⁹である。

【００１８】 ここで用いる「アルキル」という用語は、単独または組み合わせで１〜１６炭
素原子を含む直鎖および分枝鎖飽和炭化水素基を含むと定義される。本明細書で
は「低級アルキル」と言う用語は１〜６個の炭素原子を有するアルキル基である
と定義される。低級アルキル基の例にはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプ
ロピル、ｎ−ブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル等が含まれるが、外れに限定
されない。「アルキニル」と言う用語は、炭素−炭素三重結合を含む不飽和アル
キル基を言う。

【００１９】 本明細書では、「架橋アルキル」と言う用語は、例えばノルボルニル、アダマ
ンチル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、
ビシクロ［３．２．１］オクチル、またはデカヒドロナフチル等のＣ₆−Ｃ₁₆二
環または多環炭化水素基と定義される。

【００２０】 本明細書では、「シクロアルキル」と言う用語は環式Ｃ₃−Ｃ₇炭化水素基を含
むと定義される。シクロアルキル基の例にはシクロプロピル、シクロブチル、シ
クロヘキシルおよびシクロペンチルが含まれるが、外れに限定されない。

【００２１】 「アルキレン」と言う用語は、置換基を有するアルキル基を言う。例えば、「
Ｃ_1-3アルケンシクロアルキル」と言う用語は、１〜３個の炭素原子を含み、シ
クロアルキル基で置換されたアルキル基を言う。

【００２２】 本明細書では、「ハロアルキル」と言う用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、
ヨードのいずれか、またはその組み合わせである、少なくとも１個のハロゲンで
ちかんされたアルキル基であると定義される。同様に、「ハロシクロアルキル」
とは少なくとも１個のハロゲンで置換されたシクロアルキルであると定義される
。

【００２３】 本明細書では、「アリール」と言う用語は単独または組み合わせで単環または
多環方向族基であると定義され、単環または２環が好ましい。例えば置換または
未置換フェニルまたはナフチルであり、例えばハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキ
シアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ニトロ、アミノ
、アルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニルおよび
アルキルスルフォニルから選ばれた少なくとも１個、特に１〜３個の置換基を有
する。アリール基の例にはフェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、２−ク
ロロフェニル、３−クロロフェニル、４−クロロフェニル、２−メチルフェニル
、４−メチルフェニル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−ニトロフェニル
等が含まれる。

【００２４】 本明細書では「ヘテロアリール」と言う用語は、１個または２個の芳香環を含
み、芳香環に少なくとも１個の窒素、酸素または硫黄原子を含む単環または２環
系であると定義される。芳香環は置換または未置換であり、置換基はハロゲン、
アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル
、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルチ
オ、アルキルスルフィニルおよびアルキルスルフォニル等の少なくとも１個、特
に１〜３個である。ヘテロアリール基の例にはチエニル、フリル、ピリジル、オ
キサゾリル、キノリル、イソキノリル、インドリル、トリアゾリル、イソチアゾ
リル、イソキサゾリル、イミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ピラジニル、ピリミ
ジニル、チアゾリルおよびチアジアゾリルが含まれる。

【００２５】 本明細書では、「アラルキル」と言う用語は先に定義したアルキル基であると
定義されるが、水素原子の一つが本明細書で定義するアリール基、例えば随意に
はハロゲン、アルキル、アルコキシ等の少なくとも１個の置換基を有するフェニ
ル基で置換されている。アラルキル基の一例はベンジル基である。

【００２６】 本明細書では、「アルカリール」と言う用語は先に定義したアリール基である
と定義されるが、水素原子の一つがアルキル、シクロアルキル、ハロアルキルま
たはハロシクロアルキル基で置換されている。

【００２７】 「ヘテロアラルキル」および「ヘテロアルカリール」と言う用語は「アラルキ
ル」および「アルカリール」と言う用語と同様に定義されるが、先に定義した様
にアリール基がヘテロアリール基で置き換えられている。

【００２８】 「ヘテロサイクル」と言う用語は、環内に酸素、窒素および硫黄を有する５ま
たは６員環非芳香族環であると定義される。非制限的な例にはテトラヒドロフラ
ン、ピペリジン、ピペラジン、スルフォラン、モルホリン、テトラヒドロピラン
、ジオキサン等が含まれる。

【００２９】 本明細書では「ハロゲン」または「ハロ」と言う用語はフッ素、塩素、臭素お
よび沃素を含むと定義される。

【００３０】 「アルコキシ」、「アリールオキシ」および「アラルコキシ」と言う用語は−
ＯＲであると定義され、Ｒはそれぞれアルキル、アリールおよびアラルキルであ
る。

【００３１】 「アルコキシアルキル」と言う用語はアルキル基に付加したアルコキシ基であ
ると定義される。「アリールオキシアルキル」および「アラルコキシアルキル」
と言う用語は、同様にアルキル基に付加したアリールオキシまたはアラルコキシ
基であると定義される。

【００３２】 「ヒドロキシ」と言う用語は−ＯＨであると定義される。

【００３３】 「ヒドロキシアルキル」と言う用語はアルキル基に付加したヒドロキシ基であ
ると定義される。

【００３４】 「アミノ」と言う用語は−ＮＨ₂であると定義される。

【００３５】 「アルキルアミノ」と言う用語は−ＮＲ₂と定義され、少なくとも１個のＲは
アルキルまたは水素である。

【００３６】 「アシルアミノ」と言う用語はＲＣ（＝Ｏ）Ｎであると定義され、Ｒはアルキ
ルまたはアリールである。

【００３７】 「ニトロ」と言う用語は−ＮＯ₂であると定義される。

【００３８】 「アルキルチオ」と言う用語は−ＳＲであると定義され、Ｒはアルキルである
。

【００３９】 「アルキルスルフィニル」と言う用語はＲ−ＳＯ₂と定義され、Ｒはアルキル
である。

【００４０】 「アルキルスルホニル」と言う用語はＲ−ＳＯ₃であると定義され、Ｒはアル
キルである。

【００４１】 好ましい実施態様では、ＹがＮＲ⁴であり、Ｒ⁷がメチルであり、Ｒ²がメチル
またはジフルオロメチルであり、Ｒ⁴が水素、メチル、トリフルオロメチル、シ
クロプロピルおよびフェニルでなる群より選ばれる。Ｒ¹は以下でなる群より選
ばれる：

【００４２】

【化１８】

【００４３】

【化１９】 Ｒ³は以下でなる群より選ばれる：

【００４４】

【化２０】

【００４５】

【化２１】

【００４６】

【化２２】 最も好ましい実施態様では、ＹはＮＨであり；Ｒ¹はシクロペンチル、テトラ
ヒドロフリル、インダニル、ノルボルニル、フェネチルおよびフェニルブチルで
なる群より選ばれ；Ｒ²はメチルおよびジフルオロメチルでなる群より選ばれ；
Ｒ³はベンジル、ＣＯ₂ＣＨ₃、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＣＨ₃）
ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ₃）₂ＯＨ、および

【００４７】

【化２３】 でなる群より選ばれ；Ｒ⁷はメチルであり；Ｒ¹⁰は水素である。

【００４８】 本発明は構造式（ＩＩ）の化合物の全ての可能な立体異性体および幾何異性体
を含み、ラセミ化合物のみならず光学活性化合物も含む。構造式（ＩＩ）の化合
物が単一の鏡像異性体であることが望ましい場合は、最終生成物を分割するか、
異性体として純粋な物質から出発するか、またはキラル標準試薬を使用すること
で得られる。例えばマ（Ｚ．Ｍａ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｒｄｏｎ：Ａｓｙｍｍｅ
ｔｒｙ、８（６）、８８３〜８８８頁、１９９７年参照。最終生成物、中間体ま
たは出発物質の分割は公知の任意の適当な方法で行われる。さらに、構造式（Ｉ
Ｉ）の化合物の互変異性体が可能な場合は、化合物の全ての互変異性体が本発明
に含まれ得る。本明細書に例示する様に、特定の立体異性体は、ＰＤＥ４阻害剤
に付随するＣＮＳの副作用を現さずにＰＤＥ４を阻害する特別の能力を示す。

【００４９】 特に、生物系が化合物の絶対立体性に対し極めて鋭敏な活性を示すことは一般
的に認識されている（アリエンス（Ｅ．Ｊ．Ａｒｉｅｎｓ）、Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｖｉｅｗｓ、６：４５１〜４６６頁、１９８６年；アリ
エンス、 Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｖｉｅｗｓ、７：３６７〜
３８７頁、１９８７年；ファウラー（Ｋ．Ｗ．Ｆｏｗｌｅｒ）、Ｈａｎｄｂｏｏ
ｋ ｏｆ Ｓｔｅｒｅｏｉｓｏｍｅｒｓ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇｓ
、ＣＲＣプレス、スミス（Ｄｏｎａｌｄ Ｐ Ｓｍｉｔｈ）編集、３５〜６３頁
、１９８９年；およびスチンソン（Ｓ．Ｃ．Ｓｔｉｎｓｏｎ）、Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｎｅｗｓ、７５：３８〜７０頁、１９９
７年）。

【００５０】 例えば、ロリプラムは１個のキラル中心を含む立体特異性ＰＤＥ４阻害剤であ
る。（ロリプラムの（−）鏡像異性体は（＋）鏡像異性体より高い医薬効果を有
し、その潜在的な抗うつ作用に関連させることができる。シュルツ（Ｓｃｈｕｋ
ｔｚ）ら、Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ Ａｒｃｈ Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌ．、３３３：２３〜３０頁、１９８６年。さらに、ロリプラムの代謝
は立体特異性であると思われ、（＋）鏡像異性体が（−）鏡像異性体より速い代
謝速度を示す。クローゼら、Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃｓ、１８：５６１〜５７１頁
、１９８８年。最後に、最近の観察から、ロリプラムの（−）鏡像異性体（Ｒ−
ロリプラム）が（＋）鏡像異性体（Ｓ−ロリプラム）より約１０倍嘔吐が強いこ
とが示されている。ロビチャウド（Ａ．Ｒｏｂｉｃｈａｕｄ）ら、Ｎｅｕｒｏｐ
ｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３８：２８９〜１９７頁、１９９９年。試験動物のロ
リプラム異性体に対する反応と、ロリプラムのＰＤＥ４酵素阻害能が異なるため
、この観察を追試することは容易でない。本発明の化合物は３個のキラル中心を
有し得る。特定の立体化学配位の化合物は類似したＰＤＥ４阻害活性と医薬活性
を示すが、ＣＮＳ毒性と嘔吐性は異なる。

【００５１】 従って、本発明の好ましい化合物は構造式（ＩＩＩ）を有する：

【００５２】

【化２４】 （ＩＩＩ） 構造式（ＩＩＩ）の化合物は強力で選択的なＰＤＥ４阻害剤であり、構造式（Ｉ
ＩＩ）の立体異性体が示すＣＮＳ副作用と嘔吐性を示さない。

【００５３】 酸性部分を含む構造式（ＩＩＩ）の化合物は適当な陽イオンと薬学的に許容し
得る塩を形成する。薬学的に許容し得る適当な塩にはアルカリ金属（例えばナト
リウムまたはカリウム）、およびアルカリ土類金属（例えばカルシウムまたはマ
グネシウム）が含まれる。塩基性中心を含む構造式（ＩＩＩ）の化合物の薬学的
に許容し得る塩は薬学的に許容し得るさんで生成する酸付加塩である。その例に
は塩酸塩、臭素酸塩、硫酸塩または亜硫酸塩、燐酸塩または燐酸水素塩、酢酸塩
、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グ
ルコン酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、およびｐ−トルエン
スルホン酸塩が含まれる。前記を参照して、本明細書に記載される本発明の化合
物の参考文献はいずれも、構造式（ＩＩＩ）の化合物の他に薬学的に許容し得る
塩、およびその溶液を含むものである。

【００５４】 本発明の化合物はそのままの薬品として投与し得るが、構造式（ＩＩ）の化合
物を医薬組成物または製剤として投与することが好ましい。従って、本発明はさ
らに構造式（ＩＩ）の化合物と共に少なくとも１種の薬学的に許容し得るキャリ
アと、随意には他の治療用および／または予防用成分でなる医薬調合物を提供す
る。キャリアは製剤の成分と両立し、その服用者に有害でないと言う意味でその
許容し得る。

【００５５】 特に、本発明の選択的阻害剤は単独、または例えばリューマチ性関節炎に有用
であるＥＮＢＲＥＬ（登録商標）またはＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）等のＴＮ
Ｆαを標的とする第２の抗炎症治療薬と組み合わせて有用である。同様に、ＩＬ
−１拮抗剤の治療上の有用性もリューマチ性関節炎に対する動物モデルで示され
ている。従って、ＴＮＦαを弱めるＰＤＥ４阻害と組み合わせたＩＬ−１拮抗剤
が有効であると思われる 本発明のＰＤＥ４阻害剤は様々なアレルギー性、自己免疫性および炎症性疾患
に有用である。

【００５６】 「処置」と言う用語は処置する病状または症状の重症度の進行を予防、低減、
停止または回復させることを含む。従って、「処置」と言う用語は治療および／
または予防的投与の双方を適宜に含む。

【００５７】 例えば、組織の損傷または破壊で誘発される炎症は局所的な防御反応であり、
障害性物質および損傷組織の双方を破壊、希釈または隔離する役割をする。本明
細書で用いる「炎症組織」と言う用語は、過剰または未制御炎症反応が過剰の炎
症症候、ホスト組織の損傷または組織機能の喪失をもたらす疾患を言う。さらに
、本明細書で用いる「自己免疫疾患」とは、組織の障害が体自身の構造に対する
体液性または細胞媒介反応と関連する一連の疾患を意味する。本明細書で用いる
「アレルギー性疾患」とは、アレルギーに由来する症候、組織の損傷、または組
織の機能喪失を意味する。本明細書で用いる「関節疾患」とは、様々な病因に帰
せられる関節の炎症性障害が特徴である疾患の大きな群を意味する。本明細書で
用いる「皮膚炎」という用語は、様々な病因に帰せられる皮膚の炎症が特徴であ
る皮膚病の大きな群を意味する。本明細書で用いる「移植拒絶」と言う用語は、
移植された組織およびその周囲の組織の機能喪失、痛み、膨潤、白血球増加症お
よび血小板減少症が特徴である移植組織に対する免疫反応を意味する。

【００５８】 本発明はまた、哺乳動物におけるｃＡＭＰレベルの調節方法と共に、サイトカ
インレベルの上昇が特徴である疾患の治療方法を提供する 本明細書で用いる「サイトカイン」と言う用語は、他の細胞の機能に影響し、
免疫または炎症反応における細胞間の相互作用を媒介する分泌ポリペプチドを意
味する。サイトカインにはどの細胞がそれらを生産するかに関わらず、モノカイ
ン、リンフォカインおよびケモカインが含まれるが、それに制限されない。例え
ば、モノカインは一般に単球で生産され分泌されると考えられるが、ナチュラル
キラー細胞、繊維芽細胞、好塩基球、好中球球、内皮細胞、脳星状細胞、骨髄間
質細胞、表皮ケラチン細胞およびＢリンパ球等の多くの他の細胞もモノカインを
生産する。サイトカインの例にはインターロイキン−１（ＩＬ−１）、インター
ロイキン−６（ＩＬ−６）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）および腫瘍壊死
因子ベータ（ＴＮＦβ）が含まれるが、それらに限定されない。

【００５９】 本発明はさらに、有効量の構造式（ＩＩ）の化合物を哺乳動物に投与すること
でなる哺乳動物におけるＴＮＦレベルの低減方法を提供する。本明細書で用いる
「ＴＮＦレベルを低減する」と言う用語は、以下のいずれかを意味する： ａ）哺乳動物における生体内過剰ＴＮＦレベルを、単球またはマクロファージ
を含むが外れに限定されない、あらゆる細胞での生体内放出を阻害することによ
り正常レベルまたは正常レベル以下に減少させる；または ｂ）翻訳または転写レベルで生体内過剰ＴＮＦレベルの正常レベルまたは正常
レベル以下への下方制御を誘発する；または ｃ）翻訳後の反応としてのＴＮＦの直接合成を阻害して下方制御を誘発する。

【００６０】 さらに、本発明の化合物は炎症細胞活性化の抑制に有用である。本明細書で用
いる「炎症細胞活性化」と言う用語は、増殖細胞の刺激（サイトカイン、抗原ま
たは自己抗原を含むがそれに限定されない）による誘導、可溶性媒介因子（サイ
トカイン、酸素ラディカル、酵素、プロスタノイドまたは血管活性アミンを含む
がそれに限定されない）の生産、または新しい、または数の増えた媒介物質（腫
瘍組織適合性抗原または細胞付着分子を含むが外れに限定されない）の炎症細胞
（単球、マクロファージ、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、顆粒球、多核白血球、肥満
細胞、好塩球、好酸球、星状細胞および上皮細胞を含むが外れに限定されない）
における細胞表面発現を意味する。これらの細胞の１種またはその組み合わせの
活性化が炎症症状の開始、持続または悪化に寄与し得ることは、当業者が理解し
得ると思われる。

【００６１】 本発明の化合物はまた、気道平滑筋鎮静、気道拡張、および気道収縮の予防に
有用である。

【００６２】 従って、本発明の化合物は関節性疾患（リューマチ性関節炎等）、骨関節炎、
痛風関節炎、脊椎炎、甲状腺関連眼障害、ベーチェット病、敗血症、敗血症ショ
ック、内毒素ショック、グラム陰性菌敗血症、グラム陽性菌敗血症、毒性ショッ
ク症候群、喘息、慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、思期
結膜炎、好酸球肉芽腫、成人性（急性）呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、慢性肺炎
症疾患（慢性閉塞性肺疾患等）、珪肺症、肺サルコイドーシス、心筋、脳または
末梢血管の再潅流障害、軽い障害による脳または脊髄損傷、膵臓嚢胞性繊維症、
ケロイド形成、障害組織形成、動脈硬化、全身性エリスマトーデス（ＳＬＥ）お
よび移植拒絶疾患（例えばグラフト体ホスト反応および同種移植拒絶）等の自己
免疾患、慢性糸球体腎炎、クローン病および潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患、白
血病（例えば慢性白血病；ＣＬＳ等）等の増殖性リンパ球疾患（メンツら、Ｂｌ
ｏｏｄ。８８、２１７２〜２１８２、１９９６年）、およびアトピー性皮膚炎、
乾癬または蕁麻疹等の炎症性皮膚病等の疾患の治療に有用である。

【００６３】 この様な疾患または関連する病状の例にはうっ血性心不全等の心筋症、発熱、
悪液質、感染または悪性続発悪液質、後天性免疫欠損症候群（ＡＩＤＳ）続発性
悪液質、ＡＲＣ（ＡＩＤＳ関連合併症）、マラリア脳炎、骨粗鬆症および骨再吸
収疾患、および感染による発熱および／または筋肉痛が含まれる。さらに、本発
明の化合物は尿崩症およびうつ病および多発性梗塞性痴呆等の中枢神経系疾患の
治療に有用である。

【００６４】 本発明の化合物はまた、典型的には治療用として知られているもの以外にも用
途がある。例えば、本発明の化合物は臓器移植保存剤としても機能し得る（リン
スキ（Ｒｉｎｓｋｙ）ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２、２９９４〜３０
０２頁、亜９９３年）。

【００６５】 選択的ＰＤＥ４阻害剤はまた、勃起不全の治療、特に管脈形成性交不能症（ド
ヘルティ（Ｄｏｇｅｒｔｙ、Ｊｒ．）ら、ＵＳＰ Ｎｏ．６、１２７、３６３）
、尿崩症（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．、３７、３６２頁、１９９０年； Ｋｉｄｎ
ｅｙ Ｉｎｔ．、３５、４９４頁、１９８９年）、および多重梗塞痴呆症（ニコ
ルソン（Ｍｉｃｈｏｌｓｏｎ）、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１０
１、１４７頁、１９９０年）、うつ病（エックマン（Ｅｃｋｍａｎ）ら、Ｃｕｒ
ｒ．Ｔｈｅｒ．Ｒｅｓ．、４３、２９１頁、１９８８年）、心労および／または
ストレス反応（Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３８、１８３１頁、１９
９１年）、脳虚血（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２７２、１０７頁、１
９９５年）、晩期運動障害（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１６、３０
４頁、１９７６年）、パーキンソン病（Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、２５、７２２頁、
１９７５年；Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２６、４２１頁、１９
９９年）、および月経前症候群等の中枢神経系疾患に有用である。うつ病に関し
、ＰＤＥ４選択性阻害剤は「自暴自棄行動」またはポーソルト（Ｐｏｒｓｏｌｔ
）試験（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、４７、３７９、１９７８年； Ｅ
ｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、５７、４３１頁、１９７９年；抗うつ薬：神
経化学、行動および臨床展望、エンナ（Ｅｎｎａ）、マリック（Ｍａｌｉｃｋ）
およびリチャードソン（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ）編、ラベンプレス（Ｒａｖｅｎ
Ｐｒｅｓｓ）、１２１頁、１９８１年）、および「垂尾試験」（Ｐｓｙｃｈｏ
ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、８５、３６７頁、１９８５年）等の様々なうつ病の
動物モデルで効果がある。最近の研究成果では、様々な抗うつ病薬による持続な
生体内治療が脳由来のＰＤＥ４の発現を増加させることが示されている（Ｊ．Ｍ
ｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、１９、６１０頁、１９９９年）。従って、選択的ＰＤ
Ｅ４阻害剤を単独、または第２の治療薬−電気刺激方法、藻のアミンオキシダー
ゼ阻害剤、およびセレトニンまたはノルエピネフリンの選択性再吸収阻害剤−と
組み合わせて、４つの主なクラスの抗うつ薬治療で使用することができる。選択
的ＰＤＥ４阻害剤はまた、喘息の治療のための気管支平滑筋細胞に対する直接作
用を経由する気管支拡張活性を調節する用途に有用である。

【００６６】 本発明の使用に適した化合物および医薬組成物は、その意図する目的を達成す
るため、活性成分が哺乳動物に結う香料で投与されるものである。詳しくは、「
治療上有効量」とは治療すべき対照の発病、または既存の症状を軽減するに有効
な量を意味する。有効量の決定は、特に本明細書で提供する詳細な開示を参照し
て十分に当業者の能力の範囲内である。

【００６７】 本明細書で用いる「哺乳動物」という用語は雄および雌を含み、ヒト、飼育動
物（ネコ、イヌ等）、家畜（例えばウシ、ウマ、ブタ等）および野生動物（霊長
類、ヤマネコ、動物園の動物等）を包含する。

【００６８】 「治療上有効な投与量」とは、所定の効果が得られる化合物の量を言う。この
様な化合物の毒性と臨床効果を、例えばＬＤ₅₀（試験群の５０％致死投与率）お
よびＥＤ₅₀（試験群の５０％薬剤有効投与率）を決定するための細胞培養または
実験動物における標準の薬学的手法、で決定し得る。毒性と治療効果の投与率の
比は治療指数であり、ＬＤ₅₀とＥＤ₅₀の比率として現される。高い治療指数を示
す化合物が好ましい。この様なデータから得られるデータをヒトに使用するため
の投与量範囲を調合するために使用することができる。この様な化合物の投与率
は、毒性がわずか、または毒性のない循環濃度の範囲内にあることが好ましい。
用いた投与率と利用した投与経路によって、投与率をこの範囲で変えることがで
きる。

【００６９】 患者の状態の観点から、正確な調合、投与経路、および投与率を個々の医師が
選ぶことができる。投与量と間隔を個別に調節して、治療効果を維持するに十分
な活性種の結晶レベルを提供することができる。

【００７０】 当業者が理解し得る様に、治療の対照は予防ばかりでなく、既往の疾患および
症候に拡大し得る。治療に用いるに必要な本発明の化合物の量は、治療する病状
の性質、患者の年齢と状態で変わり、最終的には担当医師または獣医で決められ
ることも理解し得ると思われる。しかしながら一般的に、ヒト成人の治療に用い
られる投与量は例えば一日当たり０．００１ｍｇ／ｋｇ〜薬１００ｍｇ／ｋｇの
範囲である。所定の投与量は一回投与で与えられるか、１日当たり２回、３回、
４回またはそれ以上の分割投与の適当な間隔で与えられる複数投与であることが
都合がよい。実際には、医師は個々の患者に最も適した投薬療法を決定し、投与
率は年齢、体重および特定の患者の反応で変化する。前記投与量は平均的な症例
の経験であるが、より高いか低い投与率が有利である個々の場合があり、これら
は本発明の範囲内である。

【００７１】 本発明の製剤を指定された疾患の治療のために標準方法で投与することができ
るが、その方法は経口、非経口、経粘膜（例えば舌下または口腔投与）、局所、
経皮、直腸、吸入（例えば鼻または肺奥吸入）等である。非経口投与は静脈内、
動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、髄腔内、および眼球内である。非経口投与をＰ
ＯＷＳＥＲＪＥＴ（商標）等の高圧技術を用いて行うこともできる。

【００７２】 口腔内投与では、組成物は通常の方法で製剤された錠剤または糖錠の形である
。例えば、経口投与用の錠剤およびカプセルは結合剤（例えばシロップ、アカシ
ア、ゼラチン、ソルビトール、タラガカンガム、デンプンまたはポリビニルピロ
リドン糊）、充填剤（例えばラクトース、糖、微結晶セルロース、トウモロコシ
デンプン、燐酸カルシウムまたはソルビトール）、潤滑剤（例えばステアリン酸
マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ）
、崩壊剤（例えばポテトデンプンまたはナトリウムデンプングリコレート）、ま
たは湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）等の通常の賦形剤を含み得る。錠
剤を公知の方法で被覆することができる。

【００７３】 または、本発明の化合物を水性または油性懸濁液、溶液、エマルジョン、シロ
ップ、またはエリキシル等の経口液体調製物中に加えることができる。さらに、
これらの化合物を含む製剤を使用前に水または適当なビヒクルと調合するための
乾燥粉末として提供することもできる。この様な液体調製物は懸濁剤、ソルビト
ールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロ
キシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチ
ルセルロース、アルミニウムステアレートゲル、および水素化食用油脂等通常の
添加剤；レシチン、ソルビタンモノオレエート、またはアカシア等の乳化剤；ア
ーモンド油、分割やし油、油性エステル、プロピレングリコール、およびエチル
アルコール等の非水ビヒクル；およびメチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシベン
ゾエートおよびソルビン酸等の保存剤を含み得る。

【００７４】 この様な調合物を例えばココアバターまたは他のグリセリド等の通常の座薬ベ
ースを含む座薬として製剤することができる。吸入用組成物は例えば乾燥粉末の
形、またはジクロロジフルオロメタンまたはトリクロロフルオロメタン等の通常
の噴霧剤を用いる溶液、懸濁液または乳化液の形で提供される。典型的な局所ま
たは経皮製剤は目薬、クリーム、軟膏、ローションおよびペースト等の通常の水
性または非水性ビヒクルでなるか、または薬用膏薬、パッチまたは膜の形である
。

【００７５】 さらに、本発明の組成物は注射または連続点滴による非経口投与様に製剤し得
る。注射用の製剤は油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳化液の形
であり、懸濁、安定化および／または分散剤等の成形剤を含み得る。または、活
性成分は使用前に適当なビヒクル（例えば滅菌、無パイロゲン水）を構成するた
めの粉末の形でも良い。

【００７６】 本発明による組成物を補充用調製物として製剤することもできる。この様な長
期作用製剤を移植（例えば皮下または筋肉内）で投与するか、筋肉内注射で投与
することができる。従って、本発明の化合物を適当なポリマーまたは疎水性材料
（例えば許容し得るオイル中の乳化物）、イオン交換樹脂で製剤するか、難溶性
塩として製剤することができる。

【００７７】 家畜用の用途では、式（ＩＩ）の化合物、またはその無毒性塩を、通常の家畜
用法に従って適当に受容し得る製剤として投与する。獣医は特定の動物に最も適
した投与用量と投与経路を容易に決定し得る。

【００７８】 従って、本発明はまた別な態様で式（ＩＩ）の化合物と薬学的に許容し得る希
釈剤またはキャリアでなる医薬組成物を提供する。さらに本発明は式（ＩＩ）の
化合物でなる医薬組成物の調製方法を提供するが、その方法は式（ＩＩ）の化合
物を薬学的に受容し得る希釈剤またはキャリアと混合する工程を有する。

【００７９】 式（ＩＩ）の化合物の特定の非限定的実施例を以下に示すが、その合成を以下
に示す方法に従って行われた。

【００８０】 一般に、構造式（ＩＩ）の化合物を以下の合成スキームに従って調製すること
ができる。以下に記すスキームでは、必要な場合は合成化学の一般的原理に従っ
て保護基を用い得ることを当業者は理解し得る。これらの保護基は合成の最終段
階で、当業者には明白である塩基性、酸性または水素化条件下で除去される。任
意の官能基の適当な処理と保護を用いることにより、本明細書で特定せずに記載
される構造式（ＩＩ）の化合物の合成が、以下に示すスキームと類似の方法で行
われる。

【００８１】 特に断らない限り、全ての出発物質を試薬業者から入手し、それ以上精製せず
に使用した。全ての反応とクロマトグラフィー分画を２５０ｍｍシリカゲルプレ
ート上で分析し、ＵＶ（紫外）光またはＩ₂（沃素）染色で検出した。製品と中
間体をフラッシュクロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣで精製した。

【００８２】 例えば、一般構造式（ＩＩ）の化合物を以下の合成スキームに記す様に調製す
ることができる。他の合成ルートも当業者に公知である。以下の反応スキームは
構造式（ＩＩ）の化合物を提供するが、ここでＲ¹およびＲ²、すなわちＣＨ₃お
よびシクロペンチルは出発物質で決められる。他の出発物質を適当に選択する、
または中間体および実施例で変換反応を行うことにより、他のＲ₁〜Ｒ₁₁を有す
る一般式（ＩＩ）の化合物が得られる。

【００８３】 以下は様々な中間体および構造式（ＩＩ）の化合物の合成を示す。以下の実施
例は説明のためのものであり、制限するものと解釈してはならない。

【００８４】

【化２５】 中間体１ （Ｅ）−３−（３−シクロペントキシ−４−メトキシフェニル）−２−メチル
アクリル酸

【００８５】

【化２６】 まず、（Ｅ）−３−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）−
２−メチルアクリル酸エチルエステルを以下の様に合成した。

【００８６】 トリエチルホスホノプロピオネート（５０．６ｍＬ；２３６ｍｍｏｌ）の乾燥
テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）溶液を冷却（０℃）、攪拌し、リチウムヘキ
サメチルジシリルアミドのテトラヒドロフラン溶液（２４７ｍＬ、１．０Ｍ、１
．１当量）を窒素雰囲気下で注射器で加えた。得られた黄色い溶液を０℃で１．
５時間攪拌し、次いで３−シクロペントキシ−４−メトキシベンズアルデヒド（
４９．４ｇ、２２５ｍｍｏｌ）の乾燥テトラヒドロフラン溶液（１５０ｍＬ）を
滴下ローとで０．５時間で滴下した。得られたオレンジ色の溶液を０℃で２時間
攪拌し、ついで終夜攪拌して室温に戻した。水（４００ｍＬ）を加えて反応を停
止し、エーテルで抽出した（２×３００ｍＬ）。有機層を合わせ１Ｎ塩酸水溶液
（２５０ｍＬ）、飽和炭酸水素塩溶液（２５０ｍＬ）および食塩水（２５０ｍＬ
）で洗浄、ＭｇＳＯ₄上で乾燥し濾過、減圧で濃縮して不飽和エステルを褐色溶
液として得た（６８．４ｇ；１００％）¹ ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）δ：７．６４（ｓ、１Ｈ）、７．０１〜
６．９６（ｃ、２Ｈ）、６．８７（ｍ、１Ｈ）、４．７７（ｍ、１Ｈ）、４．２
６（ｑ、２Ｈ）：ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー、陽性）：Ｄａ／ｅ ３０５．
３（ｍ＋１） メタノール−水（４：１、１００ｍＬ）中の（Ｅ）−３−（３−シクロペント
キシ−４−メトキシフェニル）−２−メチルアクリル酸エチルエステル（３０ｇ
、９８．６ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（水酸化リチウム水和物：５，０
ｇ、１１９．２ｍｍｏｌ、１．２当量）懸濁液を室温で２時間攪拌した。メタノ
ールを減圧で除去し、得られた残査を水（１００ｍＬ）に溶解、酢酸エチル（１
００ｍＬ）で３かい洗浄し、１．０Ｎ ＨＣｌ（塩酸、１００ｍＬ）で中和、１
５０ｍＬの酢酸エチルで２回抽出した。抽出液を食塩水で洗浄、無水Ｎａ₂ＳＯ₄ （硫酸ナトリウム）上で乾燥、減圧下で濃縮して所定の化合物を淡黄色粉末とし
て得た（１８．２ｇ、収率６６％）。¹ ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）δ（ｐｐｍ）：１２．４（ｂｒ、ｓ、１
Ｈ、ＣＯＯＨ）、７．５６（ｓ、１Ｈ、オレフィン性）、７．０４（ｍ、３Ｈ，
芳香性）、４．８１（ｍ、１Ｈ）、３．７８（ｓ、３Ｈ，ＯＣＨ₃）、２．０６
（ｓ、３Ｈ， ＣＨ₃）、１，９１〜１．５７（ｍ、８Ｈ、シクロペンチル） 中間体１を以下の別方法で調製した。

【００８７】 前記エチルエステル（６８．４ｇ、２２５ｍｍｏｌ）のジオキサン（４００ｍ
Ｌ）溶液を攪拌し、水酸化リチウム水和物（１４．０ｇ、３３２ｍｍｏｌ、１．
５当量）水溶液（２００ｍＬ）を室温で窒素雰囲気下に添加した。若干の発熱が
見られた。得られた濁った黄色溶液を８０℃（油浴）で１．５時間加熱した。０
．５時間加熱後、反応液は透明になったが、ＴＬＣで評価すると反応の終結には
さらに１．５時間を要した。得られた溶液を室温に放冷しエーテル（５００ｍＬ
）で希釈、１Ｍ燐酸（Ｈ₃ＰＯ₄）水溶液で洗浄した。この水層を酢酸エチル（２
×２００ｍＬ）で抽出し、酢酸エチルおよびエーテル層を合わせて食塩水（２５
０ｍＬ）で洗浄、ＭｇＳＯ₄上で乾燥、濾過し減圧で濃縮して中間体１をオレン
ジ色の固体で得た（５５ｇ、８８％）。¹ ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）δ：７．７６（ｓ、１Ｈ）、７．０６〜
７．００（ｃ、２Ｈ）、６．８９（ｍ、１Ｈ）、４．７８（ｍ、１Ｈ）、３．８
８（ｓ、３Ｈ）、２．１７（ｓ、３Ｈ）、１．９７〜１．８３（ｃ、６Ｈ）、１
．６４〜１．６１（ｃ、２Ｈ）：ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー、陰性）：Ｄａ
／ｅ ２７５．３（Ｍ−１） 中間体２ ３−［（２Ｅ）−３−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）
−２−メチルプロプ−２−エノイル］−（４Ｒ）−４−フェニル−１、３−オキ
サゾリジン−２−オンの調製

【００８８】

【化２７】 無水ジクロロメタン（４００ｍＬ）中の中間体１（５５ｇ、１９９ｍｏｌ）を
冷却（０℃）、攪拌し、塩化オキサリルのジクロロメタン溶液（１０９ｍＬ、２
．０Ｍ、２１８ｍｍｏｌ、１．１当量）を塩化カルシウム乾燥雰囲気下に注射器
で１０分間で加えた。激しい泡立ちが見られた。得られた暗色溶液を０℃で１５
分間攪拌し、触媒量のジメチルホルムアミド（０．３ｍＬ）をシリンジで添加し
た。得られた溶液を０℃で０．５時間攪拌を続け、放置して室温に上昇させ終夜
攪拌した（１７時間）。反応液を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、水で注意
深く反応を止めた。この混合液を激しく１時間攪拌後、層分離し、有機層をさら
に水（４００ｍＬ）と食塩水（４００ｍＬ）で洗浄、ＭｇＳＯ₄上で乾燥し濾過
、真空で濃縮して酸クロライドを褐色固体として得た（５７．５ｇ、９８％）。
¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）δ：７．９８（ｓ、１Ｈ）、７．１１〜
７．０２（ｃ、２Ｈ）、６．９２（ｍ、１Ｈ）、４．７９（ｍ、１Ｈ）、３．９
０（ｓ、３Ｈ）、２．２２（ｓ、３Ｈ）、２．０１〜１．８２（ｃ、６Ｈ）、１
．６８〜１．６２（ｃ、２Ｈ） Ｒ−フェニルオキサゾリジノン（１０．０ｇ、６１．３ｍｍｏｌ）の乾燥テト
ラヒドロフラン溶液（４００ｍＬ）を冷却（−７８℃）、機械的に攪拌し、ｎ−
ブチルリチウムのヘキサン溶液（２７ｍＬ，２．５Ｍ，１．１当量）を窒素雰囲
気下に注射器で加えた。得られた溶液を−７８℃で０．８時間攪拌し、テトラヒ
ドロフラン（１００ｍＬ）中の酸クロライド（１９．９ｇ、５７．４ｍｍｏｌ、
１．１当量）溶液を管を通して加えた。−７８℃で１５分間攪拌後、反応混合物
を０℃へ４０分間で徐々に暖めたが、その間、反応液は粘いスラリーとなった。
０℃で２．５時間攪拌後、反応を飽和塩化アンモニウム水溶液（３００ｍＬ）で
停止し、テトラヒドロフランを減圧で除去した。残査をクロロホルムで抽出し（
３×７００ｍＬ）、有機層を合わせて水（３００ｍＬ）および食塩水（３００ｍ
Ｌ）で洗浄、ＭｇＳＯ₄上で乾燥し濾過、減圧で濃縮して約３３ｇの淡いオレン
ジ色の固体を得た。この物質をヘキサン（１．２Ｌ）中１０％酢酸エチル溶液中
に懸濁し、終夜激しく攪拌した。得られた細かい粉末状固体をブフナー漏斗上に
吸引して集め、真空で乾燥して中間体２を黄褐色粉末として得た（２１．８ｇ、
８８％）。¹ ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）δ：７．４１〜７．３７（ｃ、５Ｈ）、
７．０６（ｓ、１Ｈ）、７．０１〜６．９７（ｃ、２Ｈ）、６．８６（ｍ、１Ｈ
）、５．５４（ｔ、１Ｈ）、４．７７〜４．７３（ｃ、２Ｈ）、４．２９（ｔ、
１Ｈ）、３．８７（ｓ、３Ｈ）、２．１７（ｓ、３Ｈ）、１．９７〜１．８２（
ｃ、６Ｈ）、１．６２〜１．５６（ｃ、２Ｈ） 同様に、中間体２の鏡像体をＳ−（−）−４−フェニルオキサゾリジノンを用
いて調製できる。 中間体３ （４Ｒ）−３−｛［（３Ｓ，４Ｓ）−４−（３−シクロペンチルオキシ−４−
メトキシフェニル）−３−メチル−１−ベンジルピロリドン−３−イル］カルボ
ニル｝−４−フェニル−１、３−オキサゾリジン−２−オンの調製

【００８９】

【化２８】 クロロホルム（６５ｍＬ）中の中間体２（９．３０ｇ、２２．８ｍｍｏｌ）お
よびＮ−（メトキシメチル）−Ｎ−（トリメチルシリルメチル）ベンジルアミン
（１１．７ｍＬ，４５．６ｍｍｏｌ、２当量）のスラリーを冷却（−４℃）攪拌
し、トリフルオロ酢酸のクロロホルム溶液（４．６ｍＬ、１．０Ｍ、４．６ｍｍ
ｏｌ、０．２当量）を窒素雰囲気下で注射器で加えた。得られたスラリーを約０
℃で４時間攪拌し、次いで約１５℃（水槽）で終夜攪拌した。得られた不透明溶
液を−４℃に再度冷却し、注射器でさらにＮ−（メトキシメチル）−Ｎ−（トリ
メチルシリルメチル）ベンジルアミン（５．９ｍＬ、２２．８ｍｍｏｌ、１当量
）で処理し、５時間攪拌した。その間に反応液は透明になり、ＴＬＣ（ＣＨ₂Ｃ
ｌ₂中５％Ｅｔ₂Ｏ）で反応が終了したことが示された。クロロホルムを減圧で除
去し、残査を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈、１Ｎ塩酸水溶液（２×５０ｍＬ
）、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）および食塩水（５０ｍＬ）で順次
洗浄し濾過、真空で濃縮してオレンジ色の固体（１３．９ｇ）を得た。シリカゲ
ル上のフラッシュクロマトグラフィーによる精製（ジクロロメタン中２％エーテ
ル）による精製で主要なジアステレオマーであるピロリドンを白色泡状固体とし
て得た（８．２５ｇ、６５％）。ジアステレオマーの選択性は約１０：１であっ
た（ＨＰＬＣ）。¹ ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）δ：７．４２〜７．２１（ｃ、１０Ｈ）
、６．９５（ｓ、１Ｈ）、６．８１（ｓ、２Ｈ）、５．５５（ｄｄ、１Ｈ）、４
．７４（ｔ、１Ｈ）、４．６８（ｍ、１Ｈ）、４．１０（ｄｄ、１Ｈ）、３．９
３（ｔ、１Ｈ）、３．７０（ｄ、１Ｈ）、３．６８（ｓ、３Ｈ）、３．５６（ｄ
、１Ｈ）、３．４２（ｄ、１Ｈ）、２．７２（ｍ、２Ｈ）、２．６４（ｄ、１Ｈ
）、２．４８（ｍ、１Ｈ）、１．８５〜１．７８（ｃ、２Ｈ）、１．７５〜１．
６１（ｃ、４Ｈ）、１．５７〜１．５３（ｃ、２Ｈ）、０．９６（ｓ、３Ｈ）： ＬＲＭＳ（エレクトロスプレー、陽性）：Ｄａ／ｅ ５５５．２（ｍ＋１） 中間体４ （３Ｓ、４Ｓ）−４−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）
−３−メチル−１−ベンジルピロリドン−３−カルバルアルデヒド 還元／酸化方法： トルエン（２５０ｍＬ）中のアシルオキサゾリジノンピロリジン（１５．０９
ｇ、２７．２ｍｍｏｌ）溶液を冷却（−７８℃）攪拌し、水素下リチウムアルミ
ニウムのテトラヒドロフラン溶液（１６．３ｍＬ、１．０Ｍ、１６．３ｍｍｏｌ
、０．６当量）を窒素雰囲気下に注射器で加えた。激しい発泡が見られた。得ら
れた溶液を−７８℃で２時間攪拌し、冷却浴を外して水（０．６２ｍＬ）、１５
％水酸化ナトリウム溶液（０．６２ｍＬ）およびさらに水（１．９ｍＬ）を順次
加えて反応を停止した。得られた混合物を放置して室温に暖め、３０分間攪拌、
エーテル（５００ｍＬ）で希釈してＭｇＳＯ₄上で乾燥した。濾過と減圧濃縮に
よりアルコール（少量のアルデヒドが混在）を半固体として得た（１４．８ｇ）
。この物質をこれ以上精製せずただちに使用した。

【００９０】 塩化オキサリルのジクロロメタン溶液（１０．９ｍＬ、２．０Ｍ、２１．８ｍ
ｍｏｌ、００．８当量）にさらにジクロロメタン（７５ｍＬ）を加えた溶液を冷
却（−７８℃）攪拌し、ジメチルスルホキシド（３．１ｍＬ、４３．５ｍｍｏｌ
、１，６当量）を窒素雰囲気下で注射器で加えた。激しい発泡が見られた。−７
８℃で２０分間攪拌後、ジクロロメタン（７５ｍＬ）中の粗アルコールを管を通
して加えた。得られた黄色溶液を−７８℃で２０分間攪拌し、トリエチルアミン
（１５．２ｍＬ、１０９ｍｍｏｌ）を注射器で加えた。反応溶液を−７８℃で２
０分間攪拌し室温へ暖め、さらに１時間攪拌した。反応を食塩水（１５０ｍＬ）
を添加して停止し、ジクロロメタンで抽出した（２×１００ｍＬ）。有機溶液分
画を合わせＭｇＳＯ₄上で乾燥、濾過、真空で濃縮して粗アルデヒドを得た。フ
ラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１５％酢酸エチル）でアル
デヒドを透明な無色オイルとして得た（９．８ｇ、９２％）。¹ ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）δ：９．６４（ｓ、１Ｈ）、７．３７〜
７．２６（ｃ、５Ｈ）、７．７８−６．７６（ｃ、２Ｈ）、６．７０（ｍ、１Ｈ
）、４．７４（ｍ、１Ｈ）、３．８２（ｓ、３Ｈ）、３．７０（ｍ、１Ｈ）、３
．６４〜３．６２（ｃ、２Ｈ）、３．１８〜３．１３（ｃ、２Ｈ）、２．８４（
ｔ、１Ｈ）、２．４１（ｄ、１Ｈ）、１．９４〜１．８３（ｃ、６Ｈ）、１．６
３〜１．５９（ｃ、２Ｈ）、０．７４（ｓ、３Ｈ）：ＬＲＭＳ（エレクトロスプ
レー、陽性）：Ｄａ／ｅ ３９４．３（ｍ＋１） 中間体５

【００９１】

【化２９】 エタノール（２．０ｍＬ）中の中間体４（２３０ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）溶液
に水（０．５ｍＬ）中のヒドロキシアミン塩酸塩（２０３ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ
）を加えた。懸濁液をスチーム浴上で１時間攪拌した。反応混合液を減圧下に濃
縮し、無水酢酸（２．３５ｍＬ、２４．９ｍｍｏｌ）を加え得られた混合物を１
１０℃に加熱し終夜環流した。次いで反応混合物を真空で濃縮し、Ｃ１８カラム
（ルーマ（Ｌｕｍａ）１０μ、Ｃ１８、２５０×１０ｍｍ）によるＨＰＬＣ精製
のためにアセトニトリル−水（ＣＨ₃ＣＮ−Ｈ₂Ｏ、１ｍＬ）に溶解した。５０〜
１００％のアセトニトリル−水（０．０５％ＴＦＡ）グラディエント溶出により
、凍結乾燥後に前記精製物を白色粉末として得た（９０ｍｇ、３９％）。¹ ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）δ：７．４８〜７．４６（ｍ、５Ｈ、芳
香性）、６．８３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、芳香性）、６．８２（ｓ、１Ｈ
、芳香性）、６．７３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、芳香性）、４．８０〜４．
７７（ｂｒ、ｍ、１Ｈ）、４．４２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１２．８Ｈｚ）、４．３６
（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１２．８Ｈｚ）、３．９９〜３．９４（ｍ、２Ｈ、ＣＨ₂）、
３．８４（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ₃）、３．８０〜３．６５（ｍ、３Ｈ）、１．９５
〜１．５９（ｍ、８Ｈ、シクロペンチル）、１．１８（ｓ、３Ｈ、ＣＨ₃） 実施例１

【００９２】

【化３０】 無水ＤＭＦ（４ｍＬ）中の中間体５（２７０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）溶液を
攪拌し、ナトリウムアジド（４９．５ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）と細かく砕いた
ＮＨ₄Ｃｌ粉末（８３ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液を１３５℃に
加熱し、２日間環流した。溶液を水中（２０ｍＬ）へ注ぎ酢酸エチルで抽出（２
×５０ｍＬ）、食塩水で洗浄し無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥、次いで真空で濃縮して前
記精製物を得た。Ｃ１８カラム（ルーナ１０μ、Ｃ１８、２５０×１０ｍｍ）に
よる逆相ＨＰＬＣで精製した。５０〜１００％アセトニトリル−水グラディエン
ト溶出（０．０５％ＴＦＡ）により、凍結乾燥後に精製物を白色粉末として得た
（５９．８ｍｇ、収率２０％）。¹ ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、４００ＭＨｚ）δ：７．６〜７．３５（ｍ、５Ｈ、芳香
性）、６．７２〜６．７０（ｍ、１Ｈ）、６．５４〜６．２５（ｍ、２Ｈ）、６
．０６（ｂｒ、ｓ、１Ｈ）、４．５１〜４．４６（ｍ、２Ｈ）、４．３７〜４．
３３（ｍ、１Ｈ）、４．２２〜４．０（ｍ、１Ｈ）、３．９４〜３．８２（ｍ、
１Ｈ）、３．７７（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ₃）、３．７〜３．５（ｍ、１Ｈ）、３．
４０〜３．２５（ｍ、１Ｈ）、１．９〜１．４２（ｍ、８Ｈ、シクロペンチル）
、１．３８（ｂｒ、ｓ、３Ｈ、ＣＨ₃） 構造式（ＩＩ）の化合物のＰＤＥ４阻害能を試験した。化合物のＰＤＥ４阻害
剤能は化合物のＩＣ₅₀値、すなわち酵素活性の５０％阻害剤に必要な阻害剤濃度
と関係がある。構造式（ＩＩ）の化合物のＩＣ₅₀値を組み換えひとＰＤＥ４を用
いて測定した。

【００９３】 本発明の化合物は組み換えヒトＰＤＥ４に対し約１００μＭ以下、好ましくは
５０μＭ、より好ましくは２５μＭ以下のＩＣ₅₀値を示す。本発明の化合物は組
み換えヒトＰＤＥ４に対し約１０μＭ以下、しばしば１μＭ以下のＩＣ₅₀値を示
す。本発明の利点を完全に達成するためには、本発明のＰＤＥ４阻害剤は約０．
１μＭ〜約２５μＭのＩＣ₅₀を有する。

【００９４】 本化合物のＩＣ₅₀値は、例えば０．１ｐＭ〜５００μＭの範囲の濃度を用いて
濃度−反応曲線から決定される。ラウグネイ（Ｌｏｕｇｈｎｅｙ）ら、Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７１、７９６〜８０６頁、１９９６年に報告される様な標
準方法を用いる他のＰＤＥ酵素に対する試験でも、本発明の化合物がｃＡＭＰ特
異性酵素に対し高度に選択性であることが示された。

【００９５】 組み換えヒトＰＤＥの生産、およびＩＣ₅₀の測定を公知の方法で行うことがで
きる。その方法の例は以下に記される： ヒトＰＤＥの発現 バキュロウイルス感染Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｕｑｉｐｅｒｄａ（Ｓｆ９）細
胞中での発現 バキュロウイルス移入プラスミドをｐＢｌｕｅＢａｃＩＩ（インビトロゲン）
またはｐＦａｓｔＢａｃ（ＢＲＬ−Ｇｉｂｃｏ）のいずれかを用いて構築した。
全てのプラスミドの構造を、ベクタージャンクションを横切る配列決定と、ＰＣ
Ｒで生成する全ての領域の完全配列決定で証明した。プラスミドｐＢＢ−ＰＤＥ
１ＡはｐＢｌｕｅＢａｘＩＩＩ中にＰＤＥ１Ａ３（ラウグネイら、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．、２７１、７９６〜８０６頁、１９９６年）の完全な開放読み枠を
含んでいた。プラスミドＨｃａｍ３ａＢＢはｐＢｌｕｅＢａｃＩＩＩ中にＰＤＥ
１Ｃ３（ラウグネイら、１９９６年）の完全な開放読み枠を含んでいた。プラス
ミドｐＢＢ−ＰＤＥ３ＡはｐＢｌｕｅＢａｃＩＩＩ中にＰＤＥ３Ａ（メアシ（Ｍ
ｅａｃｃｉ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ、８９、３
７１〜３７２５頁、１９９２年）の完全な開放読み枠を含んでいた。

【００９６】 組み換えウイルスストックを、製造業者のプロトコールに従ってＭａｘＢａｃ
システム（インビトロゲン）またはＦａｓｔＢａｃシステム（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲ
Ｌ）を用いて作成した。双方の場合で、得られたウイルス中の組み換えヒトＰＤ
Ｅの発現はウイルスポリヘドロンプロモーターで進行した。ＭａｘＢａｃ（登録
商標）システムを使用する場合、調製物が野生型ウイルス（ｏｃｃ＋）で汚染し
ていないことを確認するため、ウイルスを２回、プラークで精製した。タンパク
質に発現を以下のように行った。Ｓｆ９細胞を１０％ウシ胎児血清、０．３３％
ＴＣイーストレート、０．３３％ラクトアルブミン加水分解物、４．２ｍＭ Ｎ
ａＨＣＯ₃、１０μｇ／ｍＬゲンタマイシン、１００ユニット／ｍＬペニシリン
を添加したグレース（Ｇｒａｃｅ）の昆虫培養培地（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）中、
２７℃で生育させた。対数増殖細胞を細胞当たり２〜３ウイルスで複数回感染さ
せ、４８時間インキュベートした。細胞を遠心で集め、急速凍結して保存した。 Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（酵母）での発現 ヒトＰＤＥ１Ｂ、ＰＤＥ２、ＰＤＥ２、ＰＤＥ４Ａ、ＰＤＥ４Ｂ、ＰＤＥ４Ｃ
、ＰＤＥ４Ｄ、ＰＤＥ５およびＰＤＥ７の組み換え生産を、本明細書に参考文献
として含まれるＵＳＰ５、７０２、９３６の実施例７の記載と同様に行ったが、
使用した酵母形質転換ベクター（プライス（Ｐｒｉｃｅ）ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８５、３０８〜３１８頁、１９９０年に記載の
基本ＡＤＨ２プラスミド由来）は酵母ＡＤＨ２プロモーター、およびターミネー
ター配列を含み、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅホストは
プロテアーゼ欠失株ＢＪ２−５４（バージニア州マナサスのアメリカンタイプカ
ルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌ
ｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ）に１９９８年８月３１
日寄託、受け付け番号ＡＴＣＣ７４４６５）であった。形質転換ホスト細胞を微
量の金属およびビタミンを含む２Ｘ ＳＣ−ｌｅｕ培地（ｐＨ２）で生育させた
。２４時間後、グリセロールを含むＹＥＰ培地を最終濃度２Ｘ ＹＥＴ／３％グ
リセロールで添加した。約２４時間後、細胞を収穫し洗浄、−７０℃で保存した
。 ヒトホスホジエステラーゼの調製 ホスホジエステラーゼ活性の測定 調製物のホスホジエステラーゼ活性を以下の様に測定した。活性炭分離技術を
用いるＰＤＥ分析を基本的にラウグネイら（１９９６年）に記載通りに行った。
この分析では、存在するＰＤＥ活性に比例してＰＤＥ活性により［³²Ｐ］ｃＡＭ
Ｐまたは［³²Ｐ］ｃＧＭＰが対応する［³²Ｐ］５’−ＡＭＰまたは［³²Ｐ］５’
−ＧＭＰに変換される。次いで［³²Ｐ］５’−ＡＭＰまたは［³²Ｐ］５’−ＧＭ
Ｐがヘビ毒５’−ヌクレオティダーゼの作用で定量的に遊離［³²Ｐ］燐酸と無標
識アデノシンまたはグアノシンに変換される。従って、遊離した［³²Ｐ］燐酸の
量は酵素活性に比例する。反応を最終濃度で４０ｍＭトリスＨＣｌ（ｐＨ８．０
）、１μＭ ＺｎＳＯ₄、５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、および０．１ｍｇ／ｍＬウシ血清
アルブミン（ＢＳＡ）を含む１００μＬの反応混合物中、３０℃で行った。また
は、ＰＤＥ１特異性活性を評価する分析では、インキュベーション混合物にはさ
らに０．１ｍＭＣａＣｌ２および１０μｇ／ｍＬのカルモジュリンが用いられた
。酵素は基質の全加水分解量が３０％以下になる濃度（直線分析条件）で含まれ
ていた。基質（１ｍＭ［³²Ｐ］ｃＡＭＰまたはｃＧＭＰ）を加えて分析を開始し
、混合物を１２分間インキュベートし、次いで７５μｇのＣｒｏｔａｕｓヘビ毒
を添加、インキュベーションを３分間続けた（合計１５分間）。２００μＬの活
性炭（０．１Ｍ ＮａＨ₂ＰＯ₄、ｐＨ４中１５ｍｇ／ｍＬ）を加えて反応を停止
した。遠心分離（７５０×ｇ、３分）で活性炭を沈降後、シンチレーションカウ
ンターでの放射線測定のために上澄試料を採取し、ＰＤＥ活性を求めた。

【００９７】 ラウグネイら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７１、７９６〜８０６、１９９
６年に記載と同様な方法で阻害剤の分析を行ったが、本発明ではｃＧＭＰとｃＡ
ＭＰの双方を使用し、基質濃度を試験したＰＥＤのＫｍよりはるかに低い３２ｎ
Ｍ以下に保った。 ヒトＰＤＥ４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄの調製 Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅからのＰＤＥ４Ａの調製 酵母細胞（ ＨＤＵＨ １．４６を含む酵母ＹＩ２６ ５０ｇ）を５０ｍＬの
溶菌緩衝液（５０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、１０μＭ ＺｎＳＯ₄、２ｍＭ
ＭｇＣｌ₂、１４．２ｍＭ ２−メルカプトエタノール、各５μｇ／ｍＬのペ
プスタチン、ロイペプチンおよびアプロチニン、各２０μｇ／ｍＬのカルパイン
阻害剤ＩおよびＩＩ、および２ｍＭベンズアミジンＨＣｌ）と混合して溶菌した
。細胞をフレンチ（Ｆｒｅｎｃｈ（登録商標））プレス（ＳＬＭ−アミンコ（Ａ
ｍｉｎｃｏ（登録商標））、スペクトロニックインストゥルメント（Ｓｐｅｃｔ
ｒｏｎｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ））を用いて１０℃で溶菌した。抽出物を
ベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）ＪＡ−１０ローター中４℃で、９０００ｒｐｍで
２２分間遠心分離した。上澄を取り出し、ベックマンＴＩ４５ローター中、４℃
、３６０００ｒｐｍで４５分間遠心分離した。

【００９８】 氷浴中で攪拌し、ｐＨを７．０〜７．５の間に保ちながら固体硫酸アンモニウ
ム（０．２６ｇ／ｍＬ上澄）を添加してＥＤＰ４Ａを高速遠心上澄から沈殿させ
た。ＰＤＥ４Ａを含む沈殿タンパク質をベックマンＪＡ−１０ローター中で９０
００ｒｐｍ、２２分間の遠心により集めた。沈殿物を５０ｍＬの緩衝液Ｇ（５０
ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、１０μＭ ＺｎＳＯ₄、５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１０
０ｍＭ ＮａＣｌ、１４，２ｍＭ２−メルカプトエタノール、２ｍＭベンズアミ
ジンＨＣｌ、各５μｇ／ｍＬのロイペプチン、ペプスタチンおよびアプロチニン
、および各２０μｇ／ｍＬのカルパイン阻害剤ＩおよびＩＩ）に再懸濁し、０．
４５μｍフィルターを通した。

【００９９】 再懸濁試料（５０〜１００ｍＬ）を緩衝液Ｇ中に平衡した５×１００ｃｍのフ
ァルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標）Ｓ−３００
カラムに負荷した。流速２ｍＬ／ｍｉｎで酵素活性を溶出し、その後の分画用に
プールした。

【０１００】 ゲル濾過クロマトグラフィーで単離したＰＤＥ４Ａを緩衝液Ａ（５０ｍＭ Ｍ
ＯＰＳ、ｐＨ７．５、１０μＭ ＺｎＳＯ₄、５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１４．２ｍＭ
２−メルカプトエタノール、および１００ｍＭベンズアミジンＨＣｌ）で平衡
した１．６×２０ｃｍのシグマシバクロンブルー（Ｓｉｇｍａ Ｃｉｂａｃｒｏ
ｎ Ｂｌｕｅ）アガロース型カラム（Ｓｉｇｍａ）に負荷した。カラムを２０ｍ
Ｍ ５’−ＡＭＰを含む５０〜１００ｍＬの緩衝液Ａ、１．５Ｍ ＮａＣｌを含
む５０〜１００ｍＬの緩衝液Ａ、および１０〜２０ｍＬの緩衝液Ｃ（５０ｍＭ
トリスＨＣｌ、ｐＨ８、１０μＭ ＺｎＳＯ₄、１４．２ｍＭ ２−メルカプト
エタノール、および２ｍＭベンズアミジンＨＣｌ）で順次洗浄した。酵素を２０
ｍＭ ｃＡＭＰを含む２０〜３０ｍＬの緩衝液Ｃで溶出した。

【０１０１】 ＰＥＤ活性ピークをプールし、硫酸アンモニウム（０．３３ｇ／ｍＬ酵素プー
ル）で沈殿させて過剰のサイクリックヌクレオチドを除去した。沈殿タンパク質
を緩衝液Ｘ（２５ｍＭ ＭＰＯＳ、ｐＨ７．５、５μＭ ＺｎＳＯ₄、５０ｍＭ
ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、および１ｍＭベンズアミジンＨＣｌ）に再懸濁し
、製造業者の指針に従ってファルマシアＰＤ−１０（登録商標）カラムによるゲ
ル濾過で脱塩した。酵素をドライアイス／エタノール浴中で急速冷凍し、−７０
℃で保存した。

【０１０２】 得られた沈殿はＳＤＳ−ＰＡＧＥで約８０％以上の純度であった。これらの調
製物の比活性は加水分解ｃＡＭＰ約１０〜４０μｍｏｌ／ｍｉｎ．ｍｇタンパク
質であった。 Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅからＰＤＥ４Ｂの調製 酵母細胞（ＨＤＵＮ２を含む酵母ＹＩ２３株１５０ｇ）を１００ｍＬのガラス
ビーズ（０．５ｍＭ酸洗浄）および１５０ｍＬの溶菌緩衝液（５０ｍＭ ＭＯＰ
Ｓ、ｐＨ７．２、２ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ、２ｍ
Ｍ ベンズチアジンＨＣｌ、各５μｇ／ｍＬのペプスタチン、ロイペプチンおよ
びアプロチン、およびカルパイン阻害剤ＩおよびＩＩ）と室温で混合して溶菌し
た。混合物を４℃に冷却、ビーズビーター（Ｂｅａｄ−Ｂｅａｔｅｒ（登録商標
））に移し、各３０秒で６サイクルの高速混合で細胞を溶菌した。ホモジェネー
トをＪＡ−１０ローターを用い、ベックマンＪ２−２１Ｍ遠心機中、９０００ｒ
ｐｍ、４℃で２２分間遠心分離した。上澄を回収し、ＴＩ４５ローターを用いる
ベックマンＸＬ−８０超遠心機で３６０００ｒｐｍ、４℃で遠心分離した。上澄
液を回収し、氷浴中で攪拌し、７．０〜７．５のｐＨを維持しながら固体硫酸ア
ンモニウム（０．２６ｇ／ｍＬ上澄）を加えて沈殿させた。次いでＪＡ−１０ロ
ーターを用い９０００ｒｐｍ（１２０００×ｇ）でこの混合物を２２分間遠心し
た。上澄液を捨て、ペレットを２００ｍＬの緩衝液Ａ（５０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐ
Ｈ７．５、５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭベンズアミジンＨＣｌ
、および各５μｇ／ｍＬのロイペプチン、ペプスタチンおよびアプロチニン）に
溶解した。ｐＨと伝導度をそれぞれ７．５および１５〜２０ｍＳに補正した。

【０１０３】 再懸濁試料を緩衝液Ａで平衡したシグマシバクロンブルーアガロースタイプ３
００の１．６×２００ｃｍカラム（２５ｍＬ）に負荷した。試料を１２時間でカ
ラムを４〜６回サイクルさせた。カラムを１２５〜２５０ｍＬの緩衝液Ａ、１．
５Ｍ ＮａＣｌを含む１２５〜２５０ｍＬの緩衝液Ａ、および２５〜５０ｍＬの
緩衝液Ａで順次洗浄した。酵素を５０〜７５ｍＬの緩衝液Ｅ（５０ｍＭトリスＨ
Ｃｌ、ｐＨ８、２ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ＥＧＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ、２ｍＭ
ベンズアミジンＨＣｌ、および２０ｍＭｃＡＭＰ）、および１Ｍ ＮａＣｌを含
む緩衝液Ｅで溶出した。活性ピークをプールし、過剰のサイクリックヌクレオチ
ドを除去するため硫酸アンモニウム（０．４ｇ／ｍＬ酵素プール）を再懸濁した
。沈殿したタンパク質を緩衝液Ｘ（２５ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、５μＭ
ＺｎＳＯ₄、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、および１ｍＭベンズアミジ
ンＨＣｌ）に再懸濁し、製造業者の指針にしたがってファルマシアＰＤ−１０（
登録商標）ゲル濾過で脱塩した。酵素プールを５０％グリセロールを含む緩衝液
Ｘに対し終夜透析した。酵素をドライアイス／エタノール浴中で急速凍結し、−
７０℃で保存した。

【０１０４】 得られた調製物はＳＤＳ−ＰＡＧＥで約９０％以上の純度があった。これらの
沈殿物の比活性は約１０〜５０μモル加水分解ｃＡＭＰ／分・タンパク質ｍｇで
あった。 Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅからＰＤＥ４Ｃの調製 酵母細胞（ＨＤＵＮ３．４８を含むＹＩ３０酵母株１５０ｇ）を１００ｍＬの
ガラスビーズ（０．５ｍＭ酸洗浄）および１５０ｍＬの溶菌緩衝液（５０ｍＭ
ＭＯＰＳ、ｐＨ７．２、２ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ
、２ｍＭ ベンズチアジンＨＣｌ、各５μｇ／ｍＬのペプスタチン、ロイペプチ
ンおよびアプロチン、およびカルパイン阻害剤ＩおよびＩＩ）と室温で混合して
溶菌した。混合物を４℃に冷却、ビーズビーター（Ｂｅａｄ−Ｂｅａｔｅｒ（登
録商標））に移し、各３０秒で６サイクルの高速混合で細胞を溶菌した。ホモジ
ェネートをＪＡ−１０ローターを用いベックマンＪ２−２１Ｍ遠心機中、９００
０ｒｐｍ、４℃で２２分間遠心分離した。上澄を回収し、ＴＩ４５ローターを用
いるベックマンＸＬ−８０超遠心機で３６０００ｒｐｍ、４℃で遠心分離した。
上澄液を回収し、ＴＩ４５ローターを用いてベックマンＸＬ−８０超遠心機で３
６０００ｒｐｍ、４℃で４５分間遠心分離した。

【０１０５】 上澄液を回収し、氷浴中で７．０〜７．５の間のｐＨを保ちながら攪拌してｐ
Ｈ固体硫酸アンモニウム（０．２６ｇ／ｍＬ上澄）を加えてＰＤＥ４Ｃを沈殿し
た。３０分後、ＪＡ−１０ローターを用いベックマンＪ２遠心機で９０００ｒｐ
ｍ（１２０００×ｇ）でこの混合物を２２分間遠心した。上澄液を捨て、ペレッ
トを２００ｍＬの緩衝液Ａ（５０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、５ｍＭ ＭｇＣ
ｌ₂、１ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭベンズアミジンＨＣｌ、および各５μｇ／ｍＬの
ロイペプチン、ペプスタチンおよびアプロチニン）に溶解した。ｐＨと伝導度を
それぞれ７．５および１５〜２０ｍＳに補正した。

【０１０６】 再懸濁した試料を緩衝液Ａ出平衡したシグマチバクロンブルーアガロースタイ
プ３００の１．６×１０ｃｍカラム（２５ｍＬ）に負荷した。試料を１２時間で
カラムに４〜６回サイクルした。カラムを１２５〜２５０ｍＬの緩衝液Ａ、１．
５Ｍ ＮａＣｌを含む１２５〜２５０ｍＬの緩衝液Ａ、および２５〜５０ｍＬの
緩衝液Ａで順次洗浄した。酵素を５０〜７５ｍＬの緩衝液Ｅ（５０ｍＭトリスＨ
Ｃｌ、ｐＨ８、２ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ＥＧＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ、２ｍＭ
ベンズアミジンＨＣｌおよび２０ｍＭ ｃＡＭＰ）、および１Ｍ ＮａＣｌを含
む５０〜７５ｍＬの緩衝液Ｅ溶出した。ＰＤＥ４Ｃ活性ピークをプールし、過剰
のサイクリックヌクレオチドを除去するため硫酸アンモニウム（０．４ｇ／ｍＬ
酵素プール）で沈殿させた。沈殿タンパク質を緩衝液Ｘ（２５ｍＭ ＭＰＯＳ、
ｐＨ７．５、５μＭ ＺｎＳＯ₄、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、およ
び１ｍＭベンズアミジンＨＣｌ）に再懸濁し、製造業者の指針に従ってファルマ
シアＰＤ−１０（登録商標）カラムによるゲル濾過で脱塩した。酵素プールを５
０％グリセロールを含む緩衝液Ｘに対し終夜透析した。この酵素をドライアイス
／エタノール浴中で急速凍結し、−７０℃で保存した。

【０１０７】 えられた調製物はＳＤＳ−ＰＡＧＥで約８０％以上の純度があった。これらの
沈殿物の比活性は約１０〜２０μモル加水分解ｃＡＭＰ／分・タンパク質ｍｇで
あった。 Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅからＰＤＥ４Ｄの調製 酵母細胞（ＨＤＵＮ４．１１を含むＹＩ２９酵母株１００ｇ）を１５０ｍＬの
ガラスビーズ（０．５ｍＭ酸洗浄）および１５０ｍＬの溶菌緩衝液（５０ｍＭ
ＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、１０μＭ ＺｎＳＯ₄、２ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１４．２ｍ
Ｍ ２−メルカプトエタノール、各５μｇ／ｍＬのペプスタチン、ロイペプチン
およびアプロチニン、各２０μｇ／ｍＬのカルパイン阻害剤ＩおよびＩＩ、およ
び２ｍＭベンズアミジンＨＣｌ ）と室温で混合して溶菌した。混合物を４℃に
冷却、ビーズビーター（登録商標）に移し、各３０秒で６サイクル、急速混合で
溶菌した。ＪＡ−１０ローターを用い、ベックマンＪ２−２１Ｍ遠心機でホモジ
ェネートを９０００ｒｐｍ、４℃で２２分間遠心した。上澄液を回収し、ＴＩ４
５ローターを用いベックマンＸＬ−８０超遠心機で３６０００ｒｐｍ、４℃で４
５分間遠心した。上澄液を回収し、氷浴中で７．０〜７．５のｐＨを保って攪拌
しながら固体硫酸アンモニウム（０．３３ｇ／ｍＬ上澄液）を加えてＰＤＥ４Ｄ
を沈殿させた。３０分後、ＪＡ−１０ローターを用い９０００ｒｐｍ（１２００
０×ｇ）でベックマンＪ２遠心機でこの混合物を２２分間遠心分離した。上澄液
を捨て、ぺれっとを１００ｍＬの緩衝液Ａ（５０ｍＭ ＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、
５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭベンズアミジンＨＣｌ、および各
５μｇ／ｍＬのロイペプチン、ペプスタチンおよびアプロチニン）に溶解した。
ｐＨと伝導度をそれぞれ７．５および１５〜２０ｍＳに補正した。

【０１０８】 流速０．６７ｍＬ／分で再懸濁試料を緩衝液Ａで平衡したシグマチバクロンブ
ルーアガロースタイプ３００の１．６×２０ｃｍカラム（１０ｍＬ）に負荷した
。カラムを５０〜１００ｍＬの緩衝液Ａ、２０ｍＭの５’−ＡＭＰを含む２０〜
３０ｍＬの緩衝液Ａ、５０〜１００ｍＬの１．５Ｍ ＮａＣｌを含む緩衝液Ａ、
および１０〜２０ｍＬの緩衝液Ｃ（５０ｍＭ トリスＨＣｌ、ｐＨ８、１０μＭ
ＺｎＳＯ₄、１４．２ｍＭ ２−メルカプトエタノール、および２ｍＭベンズ
アミジンＨＣｌ ）で順次洗浄した。酵素を２０ｍＭｃＡＭＰを含む２０〜３０
ｍＬの緩衝液Ｃで溶出した。

【０１０９】 ＰＤＥ４Ｄ活性ピークをプールし、過剰のサイクリックヌクレオチドを除去す
るため硫酸アンモニウム（０．４ｇ／ｍＬ酵素プール）で沈殿させた。沈殿した
タンパク質を緩衝液Ｘ（２５ｍＭ ＭＰＯＳ、ｐＨ７．５、５μＭ ＺｎＳＯ₄
、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、および１ｍＭベンズアミジンＨＣｌ）
に再懸濁し、製造業者の指針に従い、ファルマシアＰＤ−１０（登録商標）カラ
ムによるゲル濾過で脱塩した。酵素プールを５０％グリセロールを含む緩衝液Ｘ
に対して透析した。酵素調製物をドライアイス／エタノール浴中で急速凍結し、
−７０℃で保存した。

【０１１０】 得られた調製物はＳＤＳ−ＰＡＧＥで約８０％以上の純度があった。これらの
沈殿物の比活性は約２０〜５０μモル加水分解ｃＡＭＰ／分・タンパク質ｍｇで
あった。

【０１１１】 実施例１ではヒト組み換えＰＤＥ４のＩＣ₅₀値が７．９μＭであった。このデ
ータは、本発明の化合物がＰＤＥ４の強力な阻害剤であること、例えばヒト組み
換えＰＤＥ４のＩＣ₅₀値が約０．１μＭ〜約２５μＭであることを示す。好まし
い化合物は約１００μＭ以下のＩＣ₅₀を有し、特に好ましい化合物は約５０μＭ
以下のＩＣ₅₀を有する。

【０１１２】 本発明の化合物は、従来技術のＰＤＥ４阻害剤に付随するＣＮＳ副作用と嘔吐
作用を示さず、動物におけるＰＤＥ４活性を選択的に阻害するために有用である
。

【０１１３】 明らかに、本発明の精神と範囲から逸脱せず、本明細書に示された発明の多く
の変更や変法を行うことができ、従って、本発明は付属するクレームで示される
以外の制約を受けないものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/00 Ａ６１Ｐ 9/00 9/04 9/04 9/10 １０１ 9/10 １０１ 11/00 11/00 11/02 11/02 11/06 11/06 13/00 13/00 13/12 13/12 15/00 15/00 15/10 15/10 17/00 17/00 17/02 17/02 17/06 17/06 19/02 19/02 19/06 19/06 19/10 19/10 21/00 21/00 25/00 25/00 25/16 25/16 25/22 25/22 25/24 25/24 25/28 25/28 27/02 27/02 29/00 １０１ 29/00 １０１ 29/02 29/02 31/00 31/00 31/04 31/04 35/00 35/00 35/02 35/02 37/00 37/00 37/02 37/02 37/06 37/06 37/08 37/08 43/00 １１１ 43/00 １１１ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C063 AA01 BB01 CC47 DD03 EE01 4C084 AA19 AA27 MA02 NA14 ZA021 ZA022 ZA121 ZA122 ZA151 ZA152 ZA331 ZA332 ZA341 ZA342 ZA361 ZA362 ZA451 ZA452 ZA511 ZA512 ZA591 ZA592 ZA681 ZA682 ZA811 ZA812 ZA891 ZA892 ZA941 ZA942 ZA961 ZA962 ZA971 ZA972 ZB011 ZB012 ZB071 ZB072 ZB081 ZB082 ZB111 ZB112 ZB131 ZB132 ZB151 ZB152 ZB261 ZB262 ZB271 ZB272 ZB311 ZB312 ZB351 ZB352 ZC061 ZC062 ZC201 ZC202 ZC611 ZC612 4C086 AA02 AA03 BC62 GA07 MA03 MA05 NA14 ZA03 ZA12 ZA15 ZA22 ZA33 ZA34 ZA36 ZA45 ZA51 ZA59 ZA66 ZA68 ZA81 ZA89 ZA94 ZA96 ZA97 ZB01 ZB07 ZB08 ZB11 ZB13 ZB15 ZB26 ZB27 ZB31 ZB35 ZC06 ZC20 ZC61

Claims (37)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の構造式を有することを特徴とする化合物： 【化１】 但し、 ＹはＯまたはＮＲ⁴であり； Ｒ¹は低級アルキル、架橋アルキル、アラルキル、シクロアルキル、５−また
   は６−員環飽和ヘテロ環、Ｃ_1-3−アルキレンシクロアルキル、アリールまたは
   ヘテロアリール−置換プロパルギル、アリールまたはヘテロアリール置換アリル
   、およびハロシクロアルキルでなる群から選ばれ； Ｒ²は水素、メチルまたはハロ置換メチルであり； Ｒ³はＣ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ⁷、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ⁸Ｒ⁹、Ｃ（Ｃ
   ＝Ｏ）ＮＲ⁸Ｒ⁹、低級アルキル、架橋アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル
   、ハロシクロアルキル、Ｃ_1-3アルキレンシクロアルキル、５−または６−員飽
   和ヘテロ環、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールＳＯ₂、アラルキル、
   アルカリール、ヘテロアラルキル、ヘテロアルカリール、Ｃ_1-3アルキレンＣ（
   ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（Ｃ＝Ｏ）Ｃ_1-3アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ_1-3アルキレン
   ヘテロアリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ_1-3アルキレンＣ
   （Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣ_1-3アルキレンＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ⁷、Ｃ（
   ＝Ｏ）Ｃ_1-3アルキレンＮＨ₂、およびＮＨＣ（＝Ｏ）ＯＲ⁷でなる群から選ばれ
   ； Ｒ⁴は水素、低級アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリールまたは
   ヘテロアリールであり； Ｒ⁷はシクロアルキル、分枝または非分枝低級アルキル、ヘテロアリール、ヘ
   テロ環、アラルキルおよびアリールでなる群からえらばれ、Ｒ⁷は随意にＯＲ⁸，
   ＮＲ⁸Ｒ⁹またはＳＲ⁸の一又はそれ以上で置換され得； 同じかまたは異なるＲ⁸とＲ⁹は水素、低級アルキル、シクロアルキル、アリー
   ル、ヘテロアリール、アルカリール、ヘテロアラルキル、ヘテロアルカリール、
   およびアラルキルでなる群から選ばれるか、またはＲ⁸とＲ⁹は共に４員環〜７員
   環を形成し； Ｒ¹⁰は水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、Ｃ（＝Ｏ
   ）アルキル、Ｃ（＝Ｏ）シクロアルキル、Ｃ（＝Ｏ）アリール、Ｃ（＝Ｏ）Ｏア
   ルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｏシクロアルキル、Ｃ（＝Ｏ）アリール、ＣＨ₂ＯＨ、ＣＨ₂ Ｏアルキル、ＣＨＯ、ＣＮ、ＮＯ₂、またはＳＯ₂Ｒ¹¹であり； Ｒ¹¹はアルキル、シクロアルキル、トリフルオロメチル、アリール、アラルキ
   ルまたはＮＲ⁸Ｒ⁹である。
2. 【請求項２】 以下の構造を有することを特徴とする請求項１に記載の化合
   物： 【化２】
3. 【請求項３】 Ｒ¹が以下なる群より選ばれることを特徴とする請求項１に
   記載の化合物： 【化３】 【化４】 【化５】 【化６】
4. 【請求項４】 Ｒ²がメチルまたはジフルオロメチルであることを特徴とす
   る請求項１に記載の化合物。
5. 【請求項５】 Ｒ³がアラルキル、アルカリール、ヘテロアラルキル、ヘテ
   ロアルカリール、低級アルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロ環お
   よびアリールでなる群より選ばれることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
6. 【請求項６】 Ｒ³が以下でなる群より選ばれることを特徴とする請求項１
   に記載の化合物： 【化７】 【化８】 【化９】
7. 【請求項７】 Ｒ⁴が水素、メチル、トリフルオロメチル、シクロプロピル
   およびフェニルでなる群より選ばれることを特徴とする請求項１に記載の化合物
   。
8. 【請求項８】 Ｒ⁷が低級アルキルであることを特徴とする請求項１に記載
   の化合物。
9. 【請求項９】 Ｒ⁸およびＲ⁹が独立的に水素または低級アルキルであるか、
   または５員環または６員環を共に形成することを特徴とする請求項１に記載の化
   合物。
10. 【請求項１０】 ＹはＮＨであり；Ｒ¹はシクロペンチル、テトラヒドロフ
    リル、インダニル、ノルボルニル、フェネチルおよびフェニルブチルでなる群よ
    り選ばれ； Ｒ²はメチルおよびジフルオロメチルでなる群より選ばれ；Ｒ³はベ
    ンジル、ＣＯ₂ＣＨ₃、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ₂ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＣＨ₃）ＯＨ、Ｃ
    （＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ₃）₂ＯＨ、および 【化１０】 でなる群より選ばれ；Ｒ⁷はメチルであり；Ｒ¹⁰は水素であることを特徴とする
    請求項１に記載の化合物。
11. 【請求項１１】 以下の式を有することを特徴とする請求項１に記載の化合
    物： 【化１１】
12. 【請求項１２】 ヒト組み換えＰＤＥ４に対するＩＣ₅₀が約０．１μＭ〜約
    ２５μＭのであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
13. 【請求項１３】 ヒト組み換えＰＤＥ４に対するＩＣ₅₀が約１００×１０^-6 Ｍ以下であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
14. 【請求項１４】 ヒト組み換えＰＤＥ４に対するＩＣ₅₀が約５０×１０^-6Ｍ
    以下であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
15. 【請求項１５】 薬学的に許容し得るキャリア、および随意には第２の抗炎
    症性治療薬でなる化合物を有することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物
    。
16. 【請求項１６】 第２の抗炎症性治療薬がＴＮＦαを標的とし得ることを特
    徴とする請求項１５に記載の医薬組成物。
17. 【請求項１７】 ｃＡＭＰ特異性ＰＤＥの阻害が治療上の恩恵がある病状を
    有する哺乳動物の治療方法であって、前記方法が前記動物に治療上有効量の請求
    項１記載の化合物を投与することでなることを特徴とする哺乳動物の治療方法。
18. 【請求項１８】 前記哺乳動物に治療上有効量の請求項１記載の化合物を投
    与することでなる哺乳動物におけるｃＡＭＰレベルの調節方法。
19. 【請求項１９】 ｃＡＭＰ特異性ＰＤＥの阻害が治療上の恩恵がある病状を
    有する哺乳動物の治療方法であって、前記方法が前記動物に治療上有効量の請求
    項１記載の化合物と、薬学的に許容し得るキャリアを投与することでなることを
    特徴とする哺乳動物の治療方法。
20. 【請求項２０】 病状がアレルギー性疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、関
    節炎または皮膚炎であることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
21. 【請求項２１】 病状がリューマチ性関節炎、骨関節炎、痛風関節炎または
    脊椎炎であることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
22. 【請求項２２】 病状が甲状腺関連眼障害、ベーチェット病、敗血症、敗血
    症性ショック、内毒素性ショック、グラム陰性菌敗血症、グラム陽性菌敗血症、
    毒性ショック症候群、アレルギー性結膜炎、春季結膜炎、または好酸球肉芽腫で
    あることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
23. 【請求項２３】 病状が喘息、慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎、成人性呼
    吸困難症候群、慢性肺炎症疾患、慢性閉塞性肺疾患、珪肺症、または肺サルコイ
    ドーシスであることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
24. 【請求項２４】 病状が外傷による脳または脊髄障害としての心筋、脳また
    は末梢血管の再潅流障害であることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
25. 【請求項２５】 病状が繊維症、ケロイド形成または傷組織形成であること
    を特徴とする請求項１９に記載の方法。
26. 【請求項２６】 病状が全身性エリスマトーデス、移植拒絶症、グラフト対
    ホスト反応または同種移植拒絶であることを特徴とする請求項１９に記載の方法
    。
27. 【請求項２７】 病状が慢性腎糸球体炎、炎症性大腸疾患、クローン病、ま
    たは潰瘍性大腸炎であることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
28. 【請求項２８】 病状が増殖性リンパ球疾患または白血病であることを特徴
    とする請求項１９に記載の方法。
29. 【請求項２９】 病状が炎症性皮膚病、アトピー性皮膚病、乾癬またはまた
    は蕁麻疹であることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
30. 【請求項３０】 病状が心筋症、うっ血性心不全、アテローム性動脈硬化、
    発熱、悪液質、感染または悪性続発悪液質、後天性免疫欠損症候群続発性悪液質
    、ＡＲＣ、マラリア脳炎、骨粗鬆症、骨再吸収疾患、感染による発熱および筋肉
    痛、勃起不全、尿崩症、中枢神経系疾患、うつ病、多発性梗塞性痴呆、不安また
    はストレス反応、脳虚血、晩期運動障害、パーキンソン病および月経前症候群で
    あることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
31. 【請求項３１】 哺乳動物が最小限の嘔吐反応を示すことを特徴とする請求
    項１９に記載の方法。
32. 【請求項３２】 哺乳動物に嘔吐反応がないことを特徴とする請求項１９に
    記載の方法。
33. 【請求項３３】 哺乳動物が最小限の中枢神経系副作用を示すことを特徴と
    する請求項１９に記載の方法。
34. 【請求項３４】 哺乳動物に中枢神経系副作用がないことを特徴とする請求
    項１９に記載の方法。
35. 【請求項３５】 動物のＴＮＦレベルを減少させる方法であって、前記動物
    に治療上有効量の請求項１記載の化合物を投与する方法。
36. 【請求項３６】 動物の炎症細胞活性化を抑制する方法であって、前記動物
    に治療上有効量の請求項１記載の化合物を投与する方法。
37. 【請求項３７】 動物のＰＤＥ４活性を阻害するする方法であって、前記動
    物に治療上有効量の請求項１記載の化合物を投与する方法。