JP2003505516A - Ｈｉｖ感染者における多薬物療法後のワクチンを用いた免疫療法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、レトロウイルス感染者における、高い活性のある抗レトロウイルス療法の後の、免疫防御応答を維持するための改良された方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （関連出願についてのクロス・リファレンス） 本出願は、各々参考文献として本文に取り入れられている米国仮出願、１９９
９年７月２８日出願の第６０／１４６，２４０号；２０００年１月２８日出願の
第６０／１７８，９８９号；２０００年４月２８日出願の第６０／２４４，４４
５号に対し優先権を主張する。

【０００２】 連邦後援の研究および開発の下に行なわれた発明に対する権利に関する供述書 ［ 適用不可 ］

【０００３】 （発明の分野） 本発明は、レトロウイルス感染者における高い活性のある抗レトロウイルス療
法（ＨＡＡＲＴ）の後の、免疫防御応答を維持するための改良された方法に関す
る。驚いたことに、このような患者はＨＡＡＲＴ処理の後、ＣＤ８^＋応答を示す
。

【０００４】 （発明の開示） 本発明は、ＨＩＶまたはＨＴＬＶ−１レトロウイルスに感染しており、血漿１
ｍｌあたり１０，０００ウイルスコピーより少なく、しばしば５，０００または
２，０００以下のウイルス負荷量と、しばしば５００細胞／ｍｌを越えるが、４
００細胞／ｍｌまたは３００細胞／ｍｌを越えていることもあるＣＤ４^＋細胞数
とを有しており；さらに一以上の抗ウイルス剤を用いて治療され、それが治療前
よりも低いウイルスコピー数とより高いＣＤ４^＋細胞数とに寄与しているヒトに
おいて、効率のよいＣＤ８^＋応答を刺激する方法に向けられている。当該方法は
、核酸を主成分とするワクチンであって、細胞内に侵入し、当該細胞のＭＨＣク
ラスＩ分子上での提示のために、ＨＩＶ−またはＨＴＬＶ−１特異ペプチドを、
防御性のＣＤ８^＋応答を刺激するのに充分な量で細胞内において産生するワクチ
ンを投与することを含む。

【０００５】 好ましい態様においては、ヒトは抗ウイルス剤を用いて処置されており、それ
は結果として血清１ｍｌあたり１，０００ウイルスコピーより少ないウイルス負
荷量と、５００細胞／ｍｌより多いＣＤ４^＋細胞数とを生ずる。当該抗ウイルス
剤は、好ましくはプロテアーゼ阻害剤と逆転写酵素阻害剤との組合せを含むこと
ができる。

【０００６】 この方法は、ＤＮＡを主成分とするか、または弱毒化された組換えウイルスで
あるワクチンを用いることができる。好ましいウイルスは、弱毒化ポックスウイ
ルスであり、特に、各々弱毒化されたワクシニアおよびカナリア痘ウイルスであ
るＮＹＶＡＣおよびＡＬＶＡＣである。ＭＶＡなどの他の弱毒化ポックスウイル
スも使用することができる。

【０００７】 当該ワクチンはさらにアジュバントを含むことができ、さらに２回目を投与し
てもよい。当該ワクチンはまたインターロイキン−２（ＩＬ−２）および／また
はＣＤ４０リガンドを、ＣＤ８^＋応答を増強するのに充分な量で含むことができ
る。

【０００８】 本発明の方法は、ＨＩＶの感染者にとり特に有用である可能性があり、ｇｐ１
２０外皮タンパク質か、またはｇｐ１２０外皮とｐ２４ｇａｇ抗原の双方に対す
る、反復および持続増殖性のＴ細胞応答を証明した。

【０００９】 ＨＩＶの感染者を、ｐ２４ｇａｇ抗原またはｇｐ１２０外皮抗原に対する過敏
性の応答について、皮膚テストによりさらに検査することが可能である。

【００１０】 定義 「弱毒化された組換えウイルス」は、最新の分子生物学的方法、たとえば、制
限エンドヌクレアーゼおよびリガーゼ処理により遺伝的に変えられ、さらに、典
型的には特異的な遺伝子の欠失によるか、または非天然の宿主細胞系内かまたは
冷温中での連続的な継代により、野性型よりも菌力を弱められたウイルスを指す
。

【００１１】 「効率的なＣＤ８^＋応答」は、細胞毒性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の、主要組織適合性複
合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子に関連した、外来性ペプチドを発現している細胞を
認識し殺す能力を指す。

【００１２】 「非構造性ウイルスタンパク質」は、ウイルス産生には必要だがウイルス粒子
の成分として必ずしも見つかっていないタンパク質である。それらは、ＤＮＡ結
合ウイルス遺伝子によりコードされているがウイルス粒子には存在しないタンパ
ク質および酵素を含む。タンパク質は、無傷のタンパク質と、免疫細胞により天
然のタンパク質のエピトープとして認識される当該タンパク質のフラグメントま
たはペプチドの双方を含むことが意図される。

【００１３】 「核酸を主成分とするワクチン」は、むき出しのＤＮＡおよびベクター化され
たＤＮＡ（ウイルスカプシド内）の双方を含み、当該核酸はＢ細胞およびＴ細胞
エピトープをコードしており、ワクチン接種されたヒトにおいて免疫防御応答を
提供する。

【００１４】 「血漿」は、ＥＤＴＡまたはヘパリン処理された血液の低速遠心分離の結果と
して生じる全血のうちの分画をさす。

【００１５】 「ポックスウイルス」は、共有結合により末端が閉鎖されている二本鎖ＤＮＡ
をもつ大型の、外皮に包まれたウイルスである。ポックスウイルスは細胞質中に
おいて完全に複製し、離散したウイルス合成の中心を確立する。ワクチンとして
のそれらの使用は１９８０年代の初頭から知られている（たとえば、Ｐａｎｉｃ
ａｌｉ，Ｄ．他、“Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｖｅ ｖａｃｃｉｎ
ｅｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｐ
ｏｘ ｖｉｒｕｓｅｓ：ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｒｅ
ｃｏｍｂｉｎａｔ ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｉ
ｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ”（「遺伝子工学
されたポックスウイルスの使用による生ワクチンの構築：インフルエンザウイル
スの赤血球凝集素」）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８０：
５３６４−５３６８，１９８３参照）。

【００１６】 「レトロウイルス」は、ＲＮＡゲノムと、逆トランスクリプターゼであって、
相補的ＤＮＡ鎖合成のための鋳型としてＲＮＡ分子を用いるＲＮＡ依存ＤＮＡポ
リメラーゼである酵素とを含んでいるウイルスである。ＤＮＡの形状のレトロウ
イルスは一般に、宿主細胞の染色体に組み込まれ、細胞の寿命の残りを宿主細胞
ゲノムの部分のままでいる。

【００１７】 「構造性ウイルスタンパク質」は、ウイルス中に物理的に存在しているタンパ
ク質である。それらはカプシドタンパク質と、遺伝物質とともに当該カプシド内
に入れられる酵素とを含む。これらのタンパク質は免疫系に対し、高濃度で暴露
されることから、それらは最も抗原性および免疫原性応答を与えそうなタンパク
質であると考えられる。タンパク質は無傷のタンパク質と、免疫細胞により天然
のタンパク質のエピトープとして認識される当該タンパク質のフラグメントまた
はペプチドの双方を含むことが意図される。

【００１８】 「ウイルス負荷量」は、患者の血液中に存在するウイルスの量である。ウイル
ス負荷量は、種々の標準的な方法において測定することが可能である。

【００１９】 （発明の詳細な説明） 序 本発明は、リンパ指向性または免疫破壊性レトロウイルスの感染者を治療する
ための新規な治療様式である。レトロウイルス感染によりその免疫系が傷つけら
れる患者を提示された医者は、ウイルスプロテアーゼおよび逆転写酵素の阻害剤
を含む多くの強力な抗ウイルス剤を用いて当該患者を治療することを選択するこ
とができる。これは、活性の高い抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）として知
られている。通常のＨＡＡＲＴプロトコールは複雑であり、患者にとって従うこ
とは難しい。当該薬剤にはまた多くの問題を含む副作用がある。さらに、このよ
うな高価で複雑な治療法はウイルスを除去することはなく、ウイルスを抑制する
にすぎない。もし患者に合併症がなければ、ウイルス数は元へ戻る。したがって
、大多数の患者には、薬剤の寿命が通知される。

【００２０】 本発明は、ＨＩＶ感染の後、患者がＣＤ８^＋誘導性ワクチンを与えられた場合
、ＨＡＡＲＴ治療法がＣＤ８^＋応答を効率よく開始するのに充分に患者の免疫系
を回復させることができるということの発見である。この応答は、低いウイルス
力価を効果的に維持し、かつＣＤ８^＋誘導性ワクチンがＨＩＶワクチンである場
合、患者のＨＡＡＲＴに対する依存性を有意に減じることができる。かかるワク
チンのいくつかは血清陽性患者のために有用であると示唆されている（米国特許
第５，８６３，５４２号、１８段、６０〜６３行）が、それらはこの血清陽性患
者の亜集団に対しては驚くほど有効であり、他の血清陽性患者に対してはそうで
はない。

【００２１】 本発明におけるワクチンの使用 ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答の誘導に有効なワクチンは、核酸を主成分とするワクチン
（ウイルスベクターによるデリバリーによるか、またはＤＮＡワクチンとして直
接に）を含んでおり、それはＭＨＣクラスＩ分子に提示されるウイルス特異的ペ
プチドエピトープの細胞内産生を供給し、続いて免疫防御細胞毒性Ｔリンパ球（
ＣＴＬ）応答を誘導する。

【００２２】 本発明は、直接の指向性ＤＮＡワクチンまたは組換えウイルスワクチンとして
の、あるいは双方の、核酸を主成分とするワクチンの、単回または多数回の投与
を意図している。このワクチン接種用治療プログラムは、組換えタンパク質ワク
チン（以下に）の投与によって補足されてよく、あるいはさらなるワクチン媒体
とともに用いられてもよい。

【００２３】 弱毒化された組換えウイルスワクチン レトロウイルス特異的エピトープを発現する弱毒化された組換えウイルスは、
本発明において有用である。弱毒化されたウイルスはそれらの野性の毒性型から
、ヒトへの感染時に無症状化または弱体化されるように修飾される。中でも有用
な組換えウイルスはアデノウイルス、アデノ随伴性ウイルス、レトロウイルス、
およびポックスウイルスである。

【００２４】 本発明におけるワクチンとしての使用のための組換え弱毒化ウイルスは、感染
性ウイルスの効率的のよい産生に必須の、または産生に必須の、遺伝子に関して
欠陥がある。当該突然変異ウイルスは、外来ＤＮＡをコードしているウイルスの
力により、免疫原性のレトロウイルスタンパク質のためのベクターとしてふるま
う。このことが、細胞媒介性のＣＤ８^＋応答を誘発または刺激する。

【００２５】 次いでウイルスは、標準的な生ワクチンの接種法により、ワクチンを受けるヒ
トに対して導入される。本発明の生きたワクチンは、たとえば１０^４〜１０^８個
体／用量、または用量あたり１０^６〜１０^９ｐｆｕにて投与することができる。 かかるワクチンの実際の用量は、ワクチン技術の分野における普通の技術の者
によって容易に決定することが可能である。

【００２６】 ウイルスの選択は重大ではない。ウイルス発現ベクターの実例は、Ｍ．Ｅｌｏ
ｉｔ他、「Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ Ａｄｅ
ｎｏｖｉｒｕｓ Ｖｅｃｔｏｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｐｓｅｕｓｏ
ｒａｂｉｅｓ Ｖｉｒｕｓ Ｇｌｙｃｏｐｒｔｅｉｎ ｇｐ５０ ａｎｄ ｉｔ
ｓ Ｕｓｅ ａｓｅ ａ Ｌｉｖｅ Ｖａｃｃｉｎｅ（仮性狂犬病ウイルス糖タ
ンパク質ｇｐ５０を発現している欠損アデノウイルスベクターの構築とその生ワ
クチンとしての使用）」、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｏｌ．，７１（１０）：２４２５−
２４３１（１９９０年１０月）に記述されたアデノウイルス、アデノ随伴性ウイ
ルス（たとえば、Ｓａｍｕｌｓｋｉ他、Ｊ．Ｖｉｏｌ．６１：３０９６−３１０
１（１９８７）；Ｓａｍｕｌｓｋｉ他、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：３８２２−３８
２８（１９８９）参照）、乳頭腫ウイルス、ＥＶウイルス（ＥＢＶ）、およびラ
イノウイルス（たとえば、米国特許第５，７１４，３７４号参照）を含む。ヒト
のパラインフルエンザウイルス、特にＪＳ ＣＰ４５ ＨＰＩＶ−３株もまた有
用であることが報告されている。当該ウイルスベクターは、たとえば、糖タンパ
ク質Ｈ（ｇＨ）をコードしている遺伝子が不活性化または欠失されている、単純
ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に由来してもよい。他の適当なウイルスベクターは
、レトロウイルス（たとえば、Ｍｉｌｌｅｒ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ
．１：５−１４（１９９０）；Ａｕｓｕｂｅｌ他、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏ
ｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（分子生物学における現
在のプロトコール））を含む。

【００２７】 ポックスウイルスは、本発明において好んで使用される。ＨＩＶに対するワク
チンとしての使用に利用可能な、種々の弱毒化されたポックスウイルスがある。
これらは、弱毒化されたワクシニアウイルス、牛痘ウイルス、およびカナリア痘
ウイルスを含む。手短にいえば、外来遺伝子を生きた感染性のポックスウイルス
に挿入する基本的な技術は、Ｐｉｃｃｉｎｉ他、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ」 １５３，５４５−５６３（１９８７）に記述されたように
、ドナープラスミド中の外来遺伝子エレメントにフランクしているポックスＤＮ
Ａ配列と、レスキューポックスウイルス中に存在する相同な配列との間の組換え
を含む。さらに明確には、当該組換えウイルスは、当該技術において周知の、か
つ参考文献としてそれらの開示が本文にとりこまれている米国特許第４，７６９
，３３０号、第４，７２２，８４８号、第４，６０３，１１２号、第５，１１０
，５８７号、および第５，１７４，９９３号に記述されたワクシニアウイルスお
よびアビポックスウイルスなどのポックスウイルスの合成組換え体の作成法に類
似した、２つの段階において構築される。

【００２８】 第１に、既知のＴ細胞エピトープなどの抗原配列をコードしているＤＮＡ遺伝
子配列を、ウイルスに挿入するために選択される。当該配列は大腸菌プラスミド
構築物内に置かれ、そこへポックスウイルスの一部分と相同性のあるＤＮＡが挿
入される。別に、挿入されるべきＤＮＡ遺伝子配列はプロモーターへ連結される
。当該プロモーター−遺伝子結合体は当該プラスミド構築物内に置かれ、非本質
的な遺伝子座を含んでいるポックスＤＮＡの一領域をフランクしているＤＮＡ配
列に対して相同のＤＮＡにより、当該プロモーター−遺伝子結合体が両端にフラ
ンクされるようにする。結果として得られるプラスミド構築物は、増殖により大
腸菌内で増幅される。

【００２９】 第２に、挿入されるべきＤＮＡ遺伝子配列を含んでいる単離されたプラスミド
は、細胞培養、たとえば、ニワトリ胚線維芽細胞内に、ポックスウイルスととも
にトランスフェクトされる。当該プラスミドにある相同なポックスＤＮＡとウイ
ルスゲノムとの間それぞれの組換えは、その本質的ではないゲノム領域にある外
来性ＤＮＡ配列の存在によって修飾されたポックスウイルスを生ずる。

【００３０】 弱毒化された組換えポックスウイルスは、好ましいワクチンである。この技術
の詳細な総説は、参考文献として本文に取り入れられている米国特許第５，８６
３，５４２号に見出される。組換えポックスウイルスの代表的な実例は、ＡＬＶ
ＡＣ、ＴＲＯＶＡＣ、ＮＹＶＡＣ、およびｖＣＰ２０５（ＡＬＶＡＣ−ＭＮ１２
０ＴＭＧ）を含む。これらのウイルスは、ブタペスト条約のもとにアメリカン・
タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）、米国、メリーランド州、２０
８５２、ロックビル、１２３０１パークローン・ドライブに；ＮＹＶＡＣはＡＴ
ＣＣ受託番号ＶＲ−２５５９にて１９９７年３月６日に；ｖＣＰ２０５（ＡＬＶ
ＡＣ−ＭＮ１２０ＴＭＧ）はＡＴＣＣ受託番号ＶＲ−２５５７にて１９９７年３
月６日に；ＴＲＯＶＡＣはＡＴＣＣ受託番号ＶＲ−２５５３にて１９９７年２月
６日に、さらにＡＬＶＣはＡＴＣＣ受託番号ＶＲ−２５４７にて１９９６年１１
月１４日に寄託された。

【００３１】 ＮＹＶＡＣは、毒性および宿主範囲に関連した遺伝子産物をコードしているオ
ープンリーディングフレームについての１８個の特異的な欠失によって生成され
、遺伝的に工作されたワクシニアウイルスである。ＮＹＶＡＣは：ｉ）新生児マ
ウスの脳内接種後の低下した毒性、ｉｉ）遺伝的に（ｎｕ^＋／ｎｕ^＋）または化
学的に（シクロフォスファミド）免疫無防備化されたマウスにおける無害性、ｉ
ｉｉ）免疫無防備化マウスにおける汎発性感染の誘因の失敗、ｉｖ）ウサギ皮膚
での有意な硬結および潰瘍の欠如、ｖ）接種部位からの迅速な排除、およびｖｉ
）ヒト起源のものも含めた多くの組織培養細胞系についての大いに低下した複製
適合性、を含む多くの基準により、高度に弱毒化されている。

【００３２】 ＴＲＯＶＡＣは、ニワトリ１日胚のワクチン接種についてはライセンスされて
いる鶏痘ウイルスのＦＰ−１ワクチン株に由来する、プラーククローン化された
分離菌であった弱毒化鶏痘ウイルスを指す。

【００３３】 ＡＬＶＡＣは、ライセンスされたカナリア痘ワクチン、カナポックス（Ｋａｎ
ａｐｏｘ）（Ｔａｒｔａｇｌｉａ他、ＡＩＤＳ Ｒｅｓ Ｈｕｍ Ｒｅｔｒｏｖ
ｉｒｕｓｅｓ ８：１４４５−７（１９９２））のプラーククローン化された派
生物であった、弱毒化カナリア痘ウイルスを主成分とするベクターである。ＡＬ
ＶＡＣは、カナポックスの一般的な特性のいくつかと同様のいくつかの一般的な
特性を有する。外因性の免疫原を発現している、ＡＬＶＡＣを主成分とする組換
えウイルスもまた、ワクチンベクターとして有効であることが証明されている。
このアビポックスベクターは、増殖性の複製については鳥類に限定されている。
ヒトの細胞培養においては、カナリア痘ウイルスの複製は、ウイルスＤＮＡの合
成に先立つウイルス複製サイクルの初期において中止される。それにもかかわら
ず、外因性の免疫原を発現するように工作された場合には、哺乳類細胞において
真の発現およびプロセッシングがインビトロにて観察され、多数の哺乳類種への
接種は当該免疫原に対する抗体および細胞性免疫応答を誘導し、かつ同種の病原
体を用いた攻撃に対して防御を提供する。

【００３４】 また、ＮＹＶＡＣ、ＡＬＶＡＣおよびＴＲＯＶＡＣは、ウイルスおよびベクタ
ーなどの遺伝物質の物理的封じ込めについてのガイドライン、すなわち特定のウ
イルスまたはベクターの病原性に基礎を置いた、かかるウイルスおよびベクター
の使用に関する安全な方法についてのガイドライン、を発行している、ナショナ
ル・インスチチュート・オブ・ヘルス（「ＮＩＨ」）（合衆国公衆衛生局）、組
換えＤＮＡ諮問委員会（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ Ａｄｖｉｓｏｒｙ
Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）が、物理的封じ込めのレベルの、ＢＳＬ２からＢＳＬ１へ
の格下げを承認した点で、すべてのポックスウイルスの中で独特であるとみなさ
れている。他のポックスウイルスには、いずれもＢＳＬ１の物理的封じ込めレベ
ルはない。ワクシニアウイルスのコペンハーゲン株−ありふれた天然痘ワクチン
−でさえも、より高い物理的封じ込めレベル、すなわちＢＳＬ２を有する。した
がって、この技法はＮＹＶＡＣ、ＡＬＶＡＣおよびＴＲＯＶＡＣが、他のポック
スウイルスよりも低い病原性を有すると認識している。

【００３５】 本発明への使用が好ましいもう一つの弱毒化ポックスウイルスは、修飾された
ワクシニアウイルス、アンカラ（Ａｎｋａｒａ）（ＭＶＡ）であって、それはニ
ワトリ線維芽細胞における５００より多い連続した継代培養の後に、ヒトならび
にほとんどの哺乳類細胞におけるその複製能の欠陥を獲得した（たとえば、Ｍａ
ｙｅｒ他、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ３：６−１４（１９７５）；Ｃａｒｒｏｌ，Ｍ．
およびＭｏｓｓ，Ｂ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３８：１９８−２１１（１９９７）
参照）。ＭＶＡはその本来の免疫原性および天然痘防御効果を保持しており、か
つ動物およびヒトに対するいかなる毒性および接触伝染性はもはや有していない
。ＮＹＶＡＣまたはＡＬＶＡＣの場合には、組換えタンパク質の発現はヒト細胞
の不稔感染の間に起こるため、したがって安全な、さらに効果的な、外来抗原の
ためのデリバリー系が提供される。

【００３６】 これらのベクターへの挿入のためのＤＮＡをコードしているＨＩＶ抗原は、レ
トロウイルスに対する防御のために有効な抗原であることが知られているものの
いずれかである。これらはＨＩＶ用としては、ＨＩＶ１ｇａｇ（＋ｐｒｏ）（Ｉ
ＩＩＢ）、ｇｐ１２０（ＭＮ）（＋トランスメンブラン）、ｎｅｆ（ＢＲＵ）Ｃ
ＴＬ、ｐｏｌ（ＩＩＩＢ）ＣＴＬ、ＥＬＤＫＷＡまたはＬＤＫＷエピトープ、好
ましくはＨＩＶ１ｇａｇ（＋ｐｒｏ）（ＩＩＩＢ）、ｇｐ１２０（ＭＮ）（＋ト
ランスメンブラン）、二つの（２）ｎｅｆ（ＢＲＵ）ＣＴＬおよび三つの（３）
ｐｏｌ（ＩＩＩＢ）ＣＴＬエピトープのうちの少なくとも一つか；または、ｇｐ
１２０Ｖ３あるいは別の領域か、またはｇｐ１６０における二つのＥＬＤＫＷＡ
、をコードすることが可能な核酸を含むであろう。当該二つの（２）ｎｅｆ（Ｂ
ＲＵ）ＣＴＬ、および三つの（３）ｐｏｌ（ＩＩＩＢ）ＣＴＬエピトープは、好
ましくはＣＴＬ１、ＣＴＬ−２、ｐｏｌ１、ｐｏｌ２およびｐｏｌ３である。上
記の一覧表では、抗原がそこから由来しているウイルス株は括弧により示されて
いる。

【００３７】 直接的なＤＮＡデリバリーワクチン ウイルスワクチンに対する別法として、核酸もまた患者の細胞内へ直接導入す
ることが可能である。このアプローチは、たとえばＷｏｌｆ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４７：１４６５（１９９０）ならびに米国特許第５，５８０，８５９号；第
５，５８９，４６６号；第５，８０４，５６６号；第５，７３９，１１８号；第
５，７３６，５２４号；第５，６７９，６４７号；およびＷＯ９８／０４７２０
に記述されている。ＤＮＡを主成分とするデリバリー技術は、「むき出しのＤＮ
Ａ」、促進された（ブピビカイン（Ｂｕｐｉｖｉｃａｉｎｅ）、ポリマー、ペプ
チド媒介性）デリバリー、および陽イオン脂質複合体またはリポソームを含む。
当該核酸は、たとえばＦｙｎｅｎ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ．９０：１１４７８−８２（１９９３）および米国特許第５，２０４，２
５３号に記述されたような弾道デリバリーか、または圧力（たとえば米国特許第
５，９２２，６８７号参照）を用いて投与することが可能である。このような技
術を用いて、ＤＮＡのみを含む粒子を投与するか、または別の態様においては、
当該ＤＮＡの投与のため金粒子などの粒子に結合させることが可能である。

【００３８】 この技術において周知のように、数多くの因子が、抗原遺伝子および／または
ＤＮＡワクチンの免疫原性の発現の効率に影響することが可能である。かかる因
子の実例は、接種の再現性、プラスミドベクターの構築、抗原遺伝子発現を駆動
するためのプロモーターの選択およびプラスミドに挿入された遺伝子の安定性を
含む。

【００３９】 真核細胞における発現のために用いられた通常のベクターはどれも、組織内へ
のＤＮＡの直接導入のために用いられてよい。真核性のウイルスからの調節エレ
メントを含んでいる発現ベクターは、典型的には真核性の発現ベクター、たとえ
ばＳＶ４０ベクターにおいて用いられる。他の代表的な真核性ベクターは、ｐＭ
ＳＧ、ｐＡＶ００９／Ａ＋、ｐＭＴＯ１０／Ａ＋、ｐＭＡＭｎｅｏ−５、バキュ
ロウイルスｐＤＳＶＥ、およびＳＶ４０初期プロモーター、ＳＶ４０後期プロモ
ーター、メタロチオネインプロモーター、ヒトサイトメガロウイルスプロモータ
ー、マウス乳癌ウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリ
ヘドリンプロモーター、または真核細胞における発現について有効であることが
示された他のプロモーター、などのプロモーターの管理下にあるタンパク質の発
現を可能にする他のいかなるベクターも含む。

【００４０】 プラスミドＤＮＡの治療用の量は、たとえば、精製の後の大腸菌における発酵
により産生させることが可能である。作用している細胞のバンクからのアリコー
トを増殖培地に接種するために用い、振盪フラスコまたは周知の技術によるバイ
オリアクター内において飽和に至るまで増殖される。プラスミドＤＮＡは、固相
陰イオン交換樹脂などの標準的な生物分離技術を用いて精製することが可能であ
る。もし必要であれば、高次コイルＤＮＡは、ゲル電気泳動または他の方法を用
いて開環状または直鎖の形状から単離することができる。

【００４１】 精製されたプラスミドＤＮＡは、種々の製剤を用いて注射用に調製することが
可能である。これらのうち最も簡単なものは、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ
）中にて凍結乾燥されたＤＮＡの再形成である。この製剤は「むき出しのＤＮＡ
」と呼ばれ、特に筋肉内（ＩＭ）または皮内（ＩＤ）投与用に適している。

【００４２】 プラスミドＤＮＡワクチンの免疫療法の効果を最大化するためには、精製され
たプラスミドＤＮＡについての別の製剤法が望ましいかもしれない。種々の方法
が記述されており、新規な技術もまた利用可能になるかもしれない。陽イオン脂
質もまた製剤に用いることが可能である（たとえば、ＷＯ９３／２４６４０号；
ＭａｎｎｉｎｏおよびＣｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅ、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕ
ｅｓ６（７）：６８２（１９８８）；米国特許第５，２７９，８３３号；ＷＯ９
１／０６３０９；およびＦｅｌｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：７４１３（１９８７）によって記述されたような）。さら
に、糖脂質、フソジェニックなリポソーム、ペプチド、および防御性、相互作用
性、非濃縮性化合物（ＰＩＮＣ）として集合的に呼ばれる化合物もまた精製され
たプラスミドＤＮＡに対して複合されて、安定性、筋内分散、または特異的な臓
器または細胞型への転送といった変数に影響を及ぼすようにすることができる。

【００４３】 ＨＩＶ特異的エピトープの選択 特異的なレトロウイルス性病原体に対して選択的な免疫応答を引き起こすため
の抗原性の高いエピトープは、周知である。当該レトロウイルス、ＨＩＶは米国
における、また世界における重要な問題である。わずかな例外を除いて、ＨＩＶ
エピトープについての以下の議論は、個々のウイルスタンパク質のサイズの違い
を除けば、他のレトロウイルスに適用可能である。ＨＩＶ特異的エピトープは二
つの主要なカテゴリー、構造および非構造タンパク質、に入る。エピトープはい
ずれかの、または双方のタンパク質群から選択することが可能である。

【００４４】 構造タンパク質は、ウイルス粒子の物理的部分である。非構造タンパク質は調
節タンパク質である。外皮はエピトープの好ましい供給源であり、ｇｐ１６０、
１２０、および４１は免疫防御タンパク質の供給源である。ＢおよびＴ細胞双方
のエピトープは文献に記述されており、用いることが可能である。ＨＩＶ外皮タ
ンパク質のＶ３ループから選ばれたペプチドの使用は好ましい。さらに、ｐ４１
、ｐ１７、およびｇａｇタンパク質を含めた他の構造タンパク質は、免疫防御性
であることが報告されている。非構造性遺伝子は、ｒｅｖ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｖ
ｉｆおよびｖｐｒ遺伝子を含む。

【００４５】 患者 レトロウイルスに感染されたヒトの好ましい患者集団は、エピトープ、たとえ
ばＨＩＶｇｐ１２０に対する反復および持続増殖性のＴ細胞応答を示すものであ
る。さらに好ましいのは、ｇａｇエピトープ、たとえばＨＩＶｐ２４にも応答す
る患者のものである。典型的にはこれらの患者は、それらのリンパ球の、高度に
精製された抗原に応答して増殖する能力を測定することにより同定される。手短
にいえば、末梢血単球（ＰＢＭＣ）は収集され、ＩＬ−２の不在下に、１０μｇ
の高度に精製された抗原の存在下に培養される。４日後、培養物は収集され、放
射性チミジンの取り込みにより増殖が測定される。

【００４６】 これらの患者の同定についての代替手段は、皮膚テストの使用である。皮膚テ
ストは、皮膚の表面下への抗原の注射または掻爬による遅延型過敏性応答（ＤＴ
Ｈ）の検出を含む。この反応は、ｇｐ１２０またはｐ２４抗原の水溶液に対し、
患者が過敏性応答を示すことができるかできないかによって測定される。およそ
１〜２０μｇが適用される。試料の投与の約２４時間〜約７２時間後に、さらに
好ましくは投与の約４８時間〜約７２時間後に、膨疹のサイズを測定することに
より反応を測定する。動物の過敏症の評価のための好ましい膨疹のサイズは、直
径約１６ｍｍ〜約８ｍｍまで、さらに好ましくは約１５ｍｍ〜９ｍｍまで、なお
好ましくは約１４ｍｍ〜約１０ｍｍの範囲である。

【００４７】 高活性抗レトロウイルス治療（ＨＡＡＲＴ） 抗ウイルスレトロウイルス治療には、２つの広範囲のカテゴリーの治療が含ま
れる。これらは逆転写酵素阻害剤とプロテアーゼ阻害剤である。２つの型の逆転
写酵素阻害剤、ヌクレオシド類似体逆転写酵素阻害剤および非ヌクレオシド逆転
写酵素阻害剤が存在する。両方の型の阻害剤は、ＨＩＶ逆転写酵素、ＨＩＶ Ｒ
ＮＡをその後宿主細胞クロモソーム内に組み込むことができるＤＮＡに翻訳する
ウイルス酵素の活性を阻害することによって感染を阻害する。

【００４８】 ヌクレオシドおよびヌクレオチド類似体は、天然のヌクレオチドを模倣し、Ｄ
ＮＡおよびＲＮＡの合成阻害剤として働く分子である。両ヌクレオシドおよびヌ
クレオチド類似物は、細胞内酵素によるリン酸化を受け、活性化するが、しかし
ながらあるヌクレオチド類似体は既に部分的にリン酸化されており、細胞に入っ
たときに活性化に対して１段階近くにいる。リン酸化の後、化合物はＨＩＶの逆
転写酵素による新規合成ウイルスＤＮＡ鎖の取り込みに対して、天然のヌクレオ
チドと競合し、結果として鎖終結となる。

【００４９】 抗レトロウイルスヌクレオシド類似体の例は、ＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、ｄ４
Ｔ、およびＡＺＴおよびコンビビル（Ｃｏｍｂｉｖｉｒ）との組合せでの３ＴＣ
である。

【００５０】 非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）は、抗レトロウイルス化合物
の構造的および化学的に似ていない群である。これらはＨＩＶ−１逆転写酵素の
高い選択的阻害剤である。現在、これらの化合物は、肝炎ウイルス、ヘルペスウ
イルス、ＨＩＶ−２および哺乳動物酵素系のような他のレトロウイルス逆転写酵
素阻害剤に影響を与えない。これらは、三重治療養生法において効果的に使用さ
れる。ＮＮＲＴＩの例は、臨床的または免疫学的悪化を患っているＨＩＶ−感染
成人の治療に対して、ヌクレオシド類似体との組合せで臨床的使用に許可された
デラビリジン（Ｄｅｌａｖｉｒｄｉｎ）およびネビラピン（Ｎｅｖｉｒａｐｉｎ
ｅ）である。詳細な概論が、「非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（Ｎｏｎｎｕｃ
ｌｅｏｓｉｄｅ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉ
ｔｏｒｓ）」ＡＩＤＳ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｒｅ（１０／９７）Ｖｏｌ．９
，Ｎｏ．１０，ｐ．７５で見られる。

【００５１】 プロテアーゼ阻害剤は、ＨＩＶプロテアーゼを阻害する組成物であり、ウイル
ス性にコードされており、進行するために感染工程として必要である。米国の臨
床医は、ＨＩＶ感染患者の治療のために使用するための多くの臨床的に効果的な
プロテアーゼを持っている。これらには、ＳＡＱＵＩＮＡＶＩＲ（Ｉｎｖｉｒａ
ｓｅ）、ＩＮＤＩＮＡＶＩＲ（Ｃｒｉｘｉｖａｎ）およびＲＩＴＯＮＡＶＩＲ（
Ｎｏｒｖｉｒ）が含まれる。

【００５２】 ＣＤ４^＋Ｔ細胞数 抗ウイルス治療前、および治療後での患者の免疫系を査定するために、ならび
に請求したワクチン養生法が働いているかどうかを決定するために、ＣＤ４^＋Ｔ
細胞数を測定することが重要である。本手順の詳述した記述は、Ｊａｎｅｔ Ｋ
．Ａ．Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，Ｐｈ．Ｄ 他、１９９７ 「ヒト免疫不全ウイルス
（ＨＩＶ）に感染した患者の、ＣＤ４^＋Ｔ−細胞測定を実施するための改訂ガイ
ドライン（Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ Ｐｅｒｆｏｒｍｉ
ｎｇ ＣＤ４^＋Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｐｅｒｓ
ｏｎｓ Ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉ
ｅｎｃｙ Ｖｉｒｕｓ（ＨＩＶ）」Ｔｈｅ Ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ Ｍｏ
ｒｔａｌｉｔｙ Ｗｅｅｋｌｙ Ｒｅｐｏｒｔ，４６（ＲＲ−２）：［ページ番
号を含めて］、Ｆｅｂ １４，１９９７，Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａ
ｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ．にて発行されている。

【００５３】 簡単には、ほとんどの研究室が多重プラットフォーム、３段階工程にて、全血
中の絶対的なＣＤ４^＋Ｔ−細胞濃度を測定している。ＣＤ４^＋Ｔ−細胞数は、３
つの研究室技術の産物である。それは白血球（ＷＢＣ）数、（分化）リンパ球で
あるＷＢＣのパーセント、ＣＤ４^＋Ｔ−細胞であるリンパ球のパーセントである
。全血液試料中のＣＤ４^＋Ｔ−リンパ球の割合の測定の工程中の最後の段階は、
「フローサイトメトリーによる免疫表現型決定」と呼ばれる。

【００５４】 免疫表現型決定は、蛍光色素または蛍光発色団（たとえばフィコエリスリン［
ＰＥ］またはフルオレセイン イソチオシアネート［ＦＩＴＣ］）で標識化した
抗原特異的モノクローナル抗体を用いたＷＢＣの表面上の（特定の細胞型に対し
て固有である）抗原性決定基の検出を指す。蛍光発色団標識化細胞は、大きさ、
粒状、蛍光発色団および蛍光の強度にしたがって個々の細胞を分類する、フロー
サイトメトリーを用いることで解析する。光散乱によって検出する大きさおよび
粒状がＷＢＣの型（すなわち顆粒球、単球およびリンパ球）を特性化する。蛍光
発色団標識化抗体は、ＷＢＣの集団と亜集団を区別する。

【００５５】 ＣＤ４^＋細胞を測定するための系は市販されている。たとえばベクトン デッ
キンソン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ）のＦＡＣＳＣｏｕｎｔ Ｓｙｓ
ｔｅｍは、絶対的ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋およびＣＤ３^＋Ｔリンパ球を自動的に測定
する。これは内蔵式系であり、取扱説明書、試薬および対照が含まれている。

【００５６】 ウイルスタイター 患者中のウイルスタイターを測定するための様々な方法が存在する。本技術分
野の状態の総論が、「Ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｅ
ｅｋｌｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ」Ａｐｒｉｌ ２４，１９９８，Ｖｏｌ．４７，Ｎｏ
．ＲＲ−５、６／１７／９８改訂にて出版された「ＨＩＶ感染の治療の原理を決
定するためのＮＩＨレポート（Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ＮＩＨ Ｔｏ Ｄ
ｅｆｉｎｅ Ｐｒｏｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ＨＩＶ Ｉ
ｎｆｅｃｔｉｏｎ）」で見ることができる。感染患者におけるＨＩＶ複製速度が
、血漿ＨＩＶ濃度の測定によって正確に測定できることが知られている。

【００５７】 血漿中のＨＩＶ ＲＮＡは、循環ウイルス粒子またはビリオン中に含まれ、そ
れぞれのビリオンはＨＩＶゲノムＲＮＡの２つのコピーを含んでいる。血漿ＨＩ
Ｖ ＲＮＡ濃度は、標的増幅方法（たとえば、定量性ＲＴポリメラーゼ連鎖反応
［ＲＴ−ＰＣＲ］、Ａｍｐｌｉｃｏｒ ＨＩＶ Ｍｏｎｉｔｏｒアッセイ、ロッ
シュ モレキュラー システムズ（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔ
ｅｍｓ）、または核酸配列に基づく増幅、［ＮＡＳＢＡ（登録商標）］、Ｎｕｃ
ｌｉＳｅｎｓ（商標） ＨＩＶ−１ ＱＴアッセイ、Ｏｒｇａｎｏｎ Ｔｅｋｎ
ｉｋａ）またはシグナル増幅方法（たとえば分岐ＤＮＡ［ｂＤＮＡ］、Ｑｕａｎ
ｔｉｐｌｅｘ（商標） ＨＩＶ ＲＮＡ ｂＤＮＡアッセイ、Ｃｈｉｒｏｎ Ｄ
ｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）のいずれかによって定量できる。ｂＤＮＡシグナル増幅
方法は、連続的オリゴヌクレオチドハイブリッド形成工程を用いることによって
捕獲されたＨＩＶ ＲＮＡ標的から得たシグナルを増幅し、一方でＲＴ−ＰＣＲ
およびＮＡＳＢＡ（登録商標）アッセイは、核酸産物の測定可能量に標的ＨＩＶ
ＲＮＡを増幅する酵素的方法を用いる。標的ＨＩＶ ＲＮＡ配列は、使用した
アッセイに依存して、内部または外部参照標準との比較によって定量する。

【００５８】 ＣＤ８^＋応答の測定 ＣＤ８^＋Ｔ−細胞応答は、たとえば新鮮な、または培養ＰＢＭＣのテトラマー
染色（たとえば、Ａｌｔｍａｎ，Ｊ．Ｄ．他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１０３３０，１９９３、Ａｌｔｍａｎ，Ｊ．Ｄ．他、Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２７４：９４，１９９６を参照のこと）、またはＥＬＩＳＰＯＴ
アッセイのようなγ−インターフェロン放出アッセイ（たとえば、Ｌａｌｖａｎ
ｉ，Ａ．他、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：８５９，１９９７、Ｄｕｎｂａｒ，
Ｐ．Ｒ．他、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．８：４３１，１９９８、Ｍｕｒａｌｉ−Ｋｒ
ｉｓｈｎａ，Ｋ．他、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ８：１７７，１９９８）を用いること
によって、または機能性細胞毒性アッセイを用いることによって、測定可能であ
る。これらのアッセイのそれぞれは当業者に周知である。たとえば、細胞毒性ア
ッセイは、以下のように実施することができる。

【００５９】 簡単には、患者からの末梢血リンパ球を、約五百万細胞／ｍｌの濃度にてＨＩ
Ｖペプチドエピトープとともに培養する。３日間の培養後、培地にヒトＩＬ−２
を２０ユニット／ｍｌで加え、培養をさらに４日間維持した。ＰＢＬをＦｉｃｏ
ｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ上で遠心し、エフェクター細胞濃度を変化させて約１０^４
標的細胞を含んでいるＵ底マイクロタイタープレートを用いた標準^５１Ｃｒ−放
出アッセイにて、エフェクター細胞として査定する。すべての細胞を２回アッセ
イする。自己Ｂリンパ芽球様細胞株を標的細胞として使用し、^５１Ｃｒ標識化の
間一晩のインキュベーションにてペプチドを負荷する。特異的放出を以下の様式
にて計算する。（実験に基づく放出−自発的放出）／（最大放出−自発的放出）
×１００。自発的放出は一般的に、すべてのアッセイにおいて、界面活性剤（２
％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）での最大放出の２０％より少ない。

【００６０】 ワクチンの処方および投与 組換え体ウイルスまたはＤＮＡに関する投与手順は重要ではない。ワクチン組
成物（たとえば、ポックスウイルス組換え体またはＤＮＡを含む組成物）は、薬
理学的技術分野における当業者に周知である標準の技術にしたがって処方できる
。そのような組成物は、特定の患者の年齢、性別、体重および状態のような因子
、および投与経路を考慮に入れて、適量にて、そして医学技術分野の当業者に周
知の方法にて投与できる。

【００６１】 たとえば、ＮＹＶＡＣ−ＨＩＶ、またはＡＬＶＡＣ−ＨＩＶまたはＭＶＡ−Ｈ
ＩＶのような他の弱毒化ポックスウイルスワクチンを、１７０ポンドの患者に対
して、接種あたり約１０^８ｐｆｕの用量にて、筋肉内経路にて、１回以上接種さ
せる。ワクチンは、たとえば１ｍｌの容量中で、無菌ＰＢＳのような生理学的に
適用可能な溶液中で伝送できる。用量は体重に比例し得る。

【００６２】 組成物は単独で投与でき、または他の免疫学的、抗原性、ワクチンまたは治療
的組成物と共投与または連続投与できる。そのような組成物には、たとえばＩＬ
−２またはＣＤ４０リガンドのような免疫応答を増強または広げるための他の薬
剤を含むことができ、特定化された時間間隔にて、または連続的に投与できる（
たとえば、Ｓｍｉｔｈ他、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ １９９７ Ａｐｒ ２４
；３３６（１７）：１２６０−１、およびＳｍｉｔｈ，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｓｃ
ｉ Ａｍ．１９９７ Ｄｅｃ，３ Ｓｕｐｐｌ １：Ｓ１３７−４０を参照のこ
と）。たとえば、ＩＬ−２は広範囲にて、たとえば１０，０００〜１，０００，
０００またはそれ以上のユニットにて投与できる。投与は、ワクチン化に続いて
連続的に実施できる。しばしば、低用量、たとえば１００，０００〜２００，０
００、しばしば１２０，０００、１５０，０００または１７０，０００ユニット
のＩＬ−２がとりわけ有用である。

【００６３】 共投与できる他の組成物には、免疫不全ウイルスからの精製した抗原、または
他の治療的組成物を産出できる第二組換え体ベクター系によって発現された抗原
を含みうる。そのような組成物には、他の免疫不全抗原または生物学的応答変更
因子（たとえば、サイトカイン、共刺激分子）を発現している組換え体ポックス
ウイルスを含みうる。ここでも、共投与は、特定の患者の年齢、性別、体重およ
び状態のような因子、および投与経路を考慮に入れて実施される。

【００６４】 ＤＮＡの患者組織への直接導入のためのＤＮＡ発現ベクターもさらに、ペプチ
ド、ポリペプチドおよび糖鎖のような他の成分と複合体形成できる。発現ベクタ
ーはまた、たとえばワクチン銃を用いて、個体に投与できる粒子またはビーズに
複合化できる。

【００６５】 発現ベクターは、それぞれ参考文献にて本明細書に組み込まれている、Ｄｏｎ
ｎｅｌｌｙ他（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：６１７−６４８（１９
９７））、Ｆｅｌｇｎｅｒ他（１９９６年１２月３日発行の米国特許第５，５８
０，８５９号）、およびＣａｒｓｏｎ他（１９９７年１０月２１日発行の米国特
許第５，６７９，６４７号）に記述されたように、本技術分野で周知の方法にて
投与される。当業者は、生理学的に許容可能な化合物を含む、薬理学的に許容可
能な担体の選択が、たとえば発現ベクターの投与の経路に依存することを知って
いる。

【００６６】 たとえば、水性担体中の裸のＤＮＡまたはポリヌクレオチドを、部分あたり１
０μｌ〜部分あたり約１ｍｌの量で、筋肉のような組織中に注入できる。処方中
のポリヌクレオチドの濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌである。

【００６７】 ワクチンはさまざまな経路を介して伝送できる。典型的な伝送経路には、非経
口投与、たとえば皮内、筋肉内または皮下経路が含まれる。他の経路には、経口
投与、鼻内、および膣内経路が含まれる。

【００６８】 本発明のための使用の発現ベクターは、患者の組織の間質空間に伝送できる（
たとえばＦｅｌｇｎｅｒ他、米国特許第５，５８０，８５９号および第５，７０
３，０５５号を参照のこと）。本発明の発現ベクターの筋肉への投与は、皮内お
よび皮下注射および経皮投与を含む、とりわけ効果的な投与の方法である。イオ
ン導入法によるような経皮投与もまた、本発明の発現ベクターを筋肉に伝送する
ための効果的な方法である。本発明の発現ベクターの表皮投与もまた使用される
。表皮投与には、刺激物質への免疫応答を刺激するための上皮の最外層の物理的
または化学的刺激が含まれる（Ｃａｒｓｏｎ他、米国特許第５，６７９，６４７
号）。

【００６９】 ワクチンはまた、鼻通過による投与のために処方しうる。鼻投与に好適な処方
には、そこでは担体は固体であるが、たとえば、吸引が行われる様式で、すなわ
ち鼻の近くにおいた粉末の容器からの鼻通過による急速吸入によって投与される
、約１０〜約５００ミクロンの範囲の粒子の大きさを持つ粗粉末が含まれる。た
とえば鼻スプレー、鼻ドロップのような投与のために担体が液体である、または
噴霧器によるエアゾル投与による好適な処方には、活性成分の水性または油性溶
液が含まれる。ＡＩＤＳ関連ワクチンの鼻投与のさらなる議論に関して、以下の
特許、米国特許第５，８４６，９７８号、第５，６６３，１６９号、第５，５７
８，５９７号、第５，５０２，０６０号、第５，４７６，８７４号、第５，４１
３，９９９号、第５，３０８，８５４号、第５，１９２，６６８号、および第５
，１８７，０７４号が参照されている。

【００７０】 本発明のための使用のワクチン組成物の例には、懸濁液、シロップまたはエリ
キセルのような、たとえば経口、経鼻、経肛門、経膣などの穴投与のための液体
調製品、および無菌懸濁液またはエマルションのような非経口、皮下、皮内、筋
肉内または静脈内投与（たとえば注射可能投与）のための調製品が含まれる。そ
のような組成物において、組換え体ポックスウイルス、発現産物、免疫原、ＤＮ
Ａまたは改変ｇｐ１２０またはｇｐ１６０を、無菌水、生理食塩水、グルコース
などのような好適な担体、希釈液、または賦形剤との混合物中に含めることがで
きる。

【００７１】 ワクチンは、もし望むのならば、リポソーム、ミクロスフィアーまたは他のポ
リマーマトリックス中に組み込むことができる（たとえば、Ｆｅｌｇｅｒ他、米
国特許第５，７０３，０５５号、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ
Ｔｈｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ〜ＩＩＩ（２版、１９９３を参照のこと
）。たとえば、リン脂質または他の脂質からなるリポソームは、作製および投与
が比較的簡単である、非毒性の、生理学的に許容可能な、そして代謝可能な担体
である。リポソームには、エマルション、泡、ミセル、不溶性単層、液体結晶、
リン脂質分散液、ラメラ層などが含まれる。

【００７２】 リポソーム担体は、特定の組織または感染細胞を標的にするために、ならびに
ワクチンの半減期を増加させるために利用可能である。これらの調製品において
、ワクチンは、単独で、または、たとえば、ＣＤ４５抗原に結合するモノクロー
ナル抗体のような、リンパ様細胞内で優勢なレセプターに結合する分子と、また
は他の治療的または免疫学的組成物と組み合わせて、リポソームの一部分として
組み込みうる。したがって、本発明の望んだ免疫源を満たすか、または装飾する
いずれかのリポソームを、リンパ性細胞の部位を指向させることができ、そこで
今度はリポソームが免疫原（類）を伝送する。

【００７３】 本発明での使用のためのリポソームは、標準の小胞形成性脂質から形成され、
それには一般的に中性または陰性電荷リン脂質およびコレステロールのようなス
テロールが含まれる。脂質の選択は、一般的に、たとえば、リポソームの大きさ
、酸不安定性および血流中のリポソームの安定性などの考慮により導かれる。た
とえばＳｚｏｋａ他、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４
６７（１９８０）、米国特許第４，２３５，８７１号、第４，５０１，７２８号
、第４，８３７，０２８号および第５，０１９，３６９号中に記述されたように
、さまざまな方法がリポソームの調製のために入手可能である。

【００７４】 本明細書で引用されたすべての出版物および特許明細書は、それぞれ個々の発
行物または特許明細書が特定的にまたは個々に参考文献にて組み込まれると示さ
れるように、参考文献にて本明細書に組み込まれている。

【００７５】 先の発明が、理解の明確化の目的のために、図面および実施例の方法にていく
らか詳細に記述されているけれども、ある変更および改変を、付随する請求項の
精神または範囲から逸脱しないで本発明に行ってもよいことが、当業者によって
容易に明らかであろう。

【００７６】 （実施例） 以下の実施例は、例示のためのみによって提供されるものであって、限定のた
めに提供されるものではない。当業者は容易に、本質的に同様の結果を産出する
ために変更または可変しうるさまざまな重要ではないパラメータを理解するであ
ろう。

【００７７】 実施例１ ＳＩＶ感染、ＨＡＡＲＴ治療アカゲザル マカク（Ｒｈｅｓｕｓ
ｍａｃａｑｕｅｓ）に対するＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_{ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ}の投与 宿主免疫応答を高めるための治療ワクチンとしての非常に弱毒化しているポッ
クスウイルスベクターの効果を、ヒトでのＨＩＶ−１感染のモデルである、ＳＩ
Ｖ_２５１アカゲザル マカクモデルで調査した。この研究に使用したワクチンは
、以前の研究（Ｂｅｎｓｏｎ他、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：４１７０−４１８２（
１９９８））において予防ワクチンとしての効力を持つことが示された非常に弱
毒化したＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_{ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ}組換え体ワクチンであった
。

【００７８】 研究設計には、３つの群Ａ、Ｂ、Ｃに分けた２４匹の動物が含まれた。すべて
の動物に、高い病原性ＳＩＶ_２５１（Ｐａｌ）の１０感染用量を静脈内に感染さ
せた。ＳＩＶ_２５１曝露の後、すべての２４匹の動物が感染し、血漿ウイルス血
症のピークはおよそ２週間の時点でおき、１０^７〜１０^９コピー数／２４匹の動
物の血漿ｍｌの範囲であった。

【００７９】 感染の２．５週間後、群ＡおよびＢの１６匹の動物に、予備研究において、Ｓ
ＩＶ_２５１に慢性的に感染したマカクの８０％にて検出不可能なレベルまでウイ
ルス血症を減少させたＨＡＡＲＴ処方養生法を与えた。ＨＡＡＲＴ処方には、２
用量のスタブジン（Ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）（１．２ｍｇ／日）の経口投与、ＤＤ
Ｉ（１０ｍｇ／ｋｇ／日）の静脈内接種、およびＰＭＰＡ（２０ｍｇ／ｋｇ／日
）の皮下接種が含まれる。群Ｃは薬物で処置しなかった。群Ｃではなく、群Ａお
よびＢの動物が、ウイルス血症の有意な減少を経験した（図１、上パネル）。

【００８０】 群ＡおよびＢの１６匹の動物において、ＨＡＡＲＴ処置を６ヶ月間毎日続けた
。感染後１０，１９および２３週において、群Ａの動物にプラセボワクチン（非
組換え体ＮＹＶＡＣベクター）を与え、群ＢおよびＣの動物に１０^８ｐｆｕのＮ
ＹＶＡＣ−ＳＩＶ_{ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ}ワクチンを与えた。すべての２４匹の
動物を、ウイルスＲＮＡコピー数／血漿ｍｌに関して毎週モニターし、純度よく
精製された野生型ｐ２７ｇａｇおよびｇｐ１２０ ｅｎｖ ＳＩＶタンパク質に
対するリンパ球増殖応答（ＬＰＲ）に関して２週間ごとにモニターした。

【００８１】 ＣＤ８^＋Ｔ−細胞応答を追うために、３匹のＭＡＭＵ−Ａ^＊０１（ＨＬＡクラ
スＩＡ^＊０１のマカク ムラタ（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔａ）相当物（Ｋｕｒ
ｏｄａ他、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１３７３−１３８１，１９９８））を
それぞれの群に含めた。ＭＡＭＵ−Ａ^＊０１動物は一般的にＳＩＶのｇａｇ抗原
内の免疫優性ペプチド１１ｃ−ｍを認識することができる。したがって、テトラ
マー結合アッセイを用いて、直接インビボでのＣＤ８^＋Ｔ−細胞応答を定量した
。４つの同一の、ペプチド１１ｃ−ｍに共役したＭＡＭＵ−Ａ^＊０１分子によっ
て形成されたテトラマーを、蛍光標識化ストレプトアビジンに連結させ、その表
面上に好ましいＴ細胞レセピター複合体を発現しているマカクの血液におけるＣ
Ｄ８^＋Ｔ−細胞を染色するのに使用した。ペプチドＭＡＭＵ−Ａ^＊１テトラマー
による全ＣＤ８^＋／ＣＤ３^＋染色の割合を、それぞれのＭＡＭＵ−Ａ^＊０１動物
において、それぞれ連続した時間間隔で測定した。

【００８２】 ＭＡＭＵ Ａ^＊０１／ペプチド１１ｃ−ｍテトラマーでの新鮮な、または培養
したＰＢＭＣの染色を、ＳＩＶ_２５１感染に続く、そして第二ＮＹＶＡＣ−ＳＩ
Ｖワクチン化の後、本研究に含まれる合計９匹（それぞれの群のうち３匹）のＭ
ＡＭＵ Ａ^＊０１動物で実施した。ＭＡＭＵ−Ａ^＊０１／ペプチド−１１ｃ−ｍ
−テトラマー−染色ＣＤ８^＋Ｔ−細胞（０．８〜４．６％の範囲）が、ウイルス
曝露後最初の１か月内で、すべての９匹の動物においてＳＩＶ感染にて誘導され
、ＣＤ８^＋Ｔ−細胞集団が、特異的ペプチド１１ｃ−ｍ刺激にしたがってインビ
トロにて（およそ７０％の値まで）増加した。ＳＩＶ_２５１曝露後２か月の時点
で、ＨＡＡＲＴにて処置した群ＡおよびＢの動物を含む、感染したマカクをＳＩ
Ｖ_２５１に対してセロコンバートした。ｇｐ１２０およびｐ２５ｇａｇに対する
ＬＰＲの測定は、ウイルス感染後、最初の４週間の間、すべての２４匹の動物に
おいて一定して陰性であった。

【００８３】 ＨＡＡＲＴ−処置動物におけるＣＤ４^＋Ｔ−ヘルパー応答の頻度および程度は
、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶワクチン化によって増加する 以上で言及したように、ＳＩＶ_２５１による急性感染は、ｐ２７ ｇａｇおよ
びｇｐ１２０ ｅｎｖ両方に対する増殖応答がないことに関連する。しかしなが
ら、ｐ２７ ｇａｇに対する応答は、感染後およそ１０週間の時点でＨＡＡＲＴ
−処置動物にて現れ、これらの応答は、群Ｃの動物でよりも群Ａの動物でより頻
度が高かった。ｇｐ１２０に対するＬＰＲにおける違いは、これらの２つの群間
では観察されなかった（図１、中および下パネル）。

【００８４】 この概念はさらに、群Ｂの２匹の動物（６４７および６５５）が治療に対する
応答を起こさず、高いウイルス負荷を維持し、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶワクチン化の
後、ＣＤ４^＋Ｔ−細胞増殖応答が発達しなかったという発見によって支持された
。

【００８５】 この概念をさらに確証すると、通常ウイルス血症が制御された群Ｃの２匹の動
物で、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶワクチン化の後に、ＬＰＲが発達した。したがって、
ＣＤ４^＋Ｔ−ヘルパー記憶応答が、高いウイルス血症のＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ動物
によって効率悪く誘導されることが明らかである。いくつかの因子が、この発見
に関わっている可能性があり、ＣＤ４^＋Ｔ細胞は既にインビボにて活性化されて
おり、ＬＰＲアッセイにおいてインビトロでさらに増殖はせず、および／または
ワクチン誘導記憶細胞が、ＳＩＶ感染およびさらなる抗原刺激における死の標的
となる。これらのデータは、非常に弱毒化された生組換え体ポックスウイルスベ
クターワクチンが、薬理学的に制御されたレンチウイルス感染に関連して、保持
されたＣＤ４^＋ヘルパー記憶応答を誘導し、増強することができることの第一の
証拠を提供する。

【００８６】 ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶワクチン化は、ＨＡＡＲＴ−処置動物においてのみ、ＣＤ
８^＋／ＣＤ３^＋ＭＡＭＵ−Ａ^＊０１−テトラマー陽性細胞を増加させる。 ＳＩＶ感染は、ＭＡＭＵ−Ａ^＊０１テトラマーに結合した多数のＣＤ８^＋Ｔ−
細胞を誘導した。４週目までにこの応答はほとんどの動物で減少した。第二およ
び第三ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶワクチン化に続き、高い割合のＣＤ８^＋／ＣＤ３^＋Ｔ
−細胞が群ＢのすべてのＭＡＭＵ−Ａ^＊０１動物の新鮮なＰＢＭＣ中のテトラマ
ーに結合したが、しかし群Ｃではどの動物のものも結合しなかった（図２）。テ
トラマー染色の特異性は、ペプチド−１１ｃ−ｍ特異的刺激の後に、インビトロ
にて９匹のＭＡＭＵ−Ａ^＊０１動物からの細胞の増加によってと同様に、異なる
ハプロタイプを持つ動物からのＰＢＭＣを用いた平行実験において明らかになっ
た。ＭＡＭＵ−Ａ^＊０１ハプロタイプに関連して発現したペプチド１１ｃ−ｍは
、細胞傷害性活性を持つＣＤ８^＋ Ｔ−細胞によって認識される。（図２におい
て、上パネルは群Ａからの３匹のＭＡＭＵ−Ａ^＊０１動物で得られた結果を示し
、中パネルは群Ｂからの、そして下パネルは群Ｃからの結果を示している。最初
の４週間内のＭＡＭＵ−Ａ^＊０１／ペプチド−１１ｃ−ｍ−テトラマー−染色細
胞の割合は、Ｔ細胞マーカーとしてα−ＣＤ８^＋抗体のみを用いて評価し、一方
で１９〜２９週にて提示されたデータは、ＭＡＭＵ−Ａ^＊０１／ペプチド−１１
ｃ−ｍテトラマーと共にα−ＣＤ−３^＋およびα−ＣＤ８^＋抗体を同時に使用し
て得た。何匹かのＭＡＭＵ−Ａ^＊０１−陽性動物に関して、培養ＰＢＭＣ［１９
および２０週］たは新鮮なＰＢＭＣ［２３週］にて得たＣＴＬ活性もまた提示し
ている。横座標中の数字はＣＴＬアッセイ系でのエフェクター−標的比を表して
いる。）

【００８７】 マカクのＰＢＬ中のＭＡＭＵ−Ａ^＊０１／ペプチド−１１ｃ−ｍ−テトラマー
−染色ＣＤ８^＋／ＣＤ３^＋Ｔ−細胞の検出が、ＣＴＬ活性に関連したかどうかを
査定するために、細胞毒性アッセイを、ペプチド１１ｃ−ｍをパルスしたそれぞ
れの動物からの自己Ｂ細胞を用いて実施した。殺傷の程度が、テトラマー−染色
細胞のパーセントと相関しなかったけれども（図２）、ＣＴＬ活性が１９および
２０週の時点で試験したすべての動物にてＣＤ８^＋Ｔ−細胞のインビトロ刺激の
後に測定されたことが示された。最も注目に値するのは、２３日に新鮮なＣＤ８
^＋Ｔ細胞にて実施されたＣＴＬアッセイが、群Ｂ動物での有意なＣＴＬ活性を示
し、このことはこれらの動物の血中の多数の循環ＣＤ８^＋テトラマー染色細胞の
ＣＴＬ機能性活性を確かにしている（図２）。したがって、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ
ワクチン化は、ウイルス複製が治療によって抑制された動物においてのみ高いレ
ベルのＣＤ８^＋応答を誘導した。

【００８８】 ウイルスｐ２７ ｇａｇに対する遅延型Ｔ−細胞過敏症（ＤＴＨ） Ｔ−細胞仲介免疫を誘導可能であるワクチンは、しばしばＤＴＨを誘導可能で
ある。ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶにてワクチン化した任意の動物が、この応答を発達さ
せたかどうかを査定するために、１または１０ｕｇの純度よく精製したＳＩＶ
ｐ２７または対照としてＨＴＬＶ−Ｉ ｐ２４いずれかを、群ＢおよびＣの動物
の、皮内に接種した。ＤＴＨ反応性は、接種７２時間後の時点で、１０ｍｍ以上
の厚さが現れた場合に陽性と見なした。群Ｂの３匹の動物および群Ｃの２匹の動
物のみが、ＤＴＨ陽性の要求を満たした。

【００８９】 本実施例にて示されたデータは、ＨＡＡＲＴに続くＮＹＶＡＣ−ＳＩＶの接種
が、ウイルス血症が十分に抑制された動物おけるこれらの応答の頻度、程度およ
び期間を大きく増加させ、このことはワクチン誘導ＣＤ４^＋Ｔ−細胞ヘルパー応
答が、宿主におけるウイルス複製のレベルに厳密に依存していたことを示唆して
いる。同様に、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶワクチン化は、抗ウイルス治療にて効果的に
処置された動物においてのみ、免疫優性ＳＩＶ ｇａｇペプチドに対して特異的
なＣＤ８^＋／ＣＤ３^＋ＭＡＭＵ−Ａ^＊０１細胞の数の有意な増加を誘導した。治
療中止に続いて、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶワクチン化動物は、抗ウイルス治療のみに
よって処置された動物よりもよりウイルス血症を制御させ得た。これらのデータ
は、ワクチンがＳＩＶ感染マカクにおいて、ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋Ｔ−細胞応
答両方をさらに誘導できることを示唆している。

【００９０】 実施例２ ＨＩＶに感染した患者の免疫化 ３５歳のオス患者がＨＩＶに血清陽性であり、その血漿中ミリリットルあたり
、１５０００コピーのウイルス数、および３００のＣＤ４^＋数を持っている。こ
の患者を、先に処方した用量にて２つのヌクレオチド阻害剤、および１つのプロ
テアーゼ阻害剤（Ｚａｄｕｖｉｄｉｎ［１日３回］、Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ［１
日３回］およびＮｅｓｉｎａｖｉｒ［１日３回］）からなる抗ウイルス薬剤のカ
クテルで処置した。典型的には、抗ウイルス治療は、少なくとも１ログの血漿ウ
イルスＲＮＡの減少が観察されたならば効果があると考えられる。血漿ＲＮＡ負
荷、ならびに血中のＣＤ４^＋Ｔ−細胞数を毎月測定する予定である。

【００９１】 ６ヶ月後、患者を再評価し、その血漿中にミリリットル当たり１５００コピー
以下のウイルス数、および５００のＣＤ４^＋数を持つと測定される。次いで患者
に、以下のウイルスペプチド、ＣＴＬエピトープのｇａｇ、ｐｒｏ、ｇｐ１２０
−ＴＭ、ｐｏｌおよびｎｅｄストリングを含んでいる弱毒化ポックスウイルスベ
クターＮＹＶＡＣを注入した。注入には１０^８ｐｆｕのポックスウイルスが含ま
れる。

【００９２】 患者の免疫応答を評価し（ＣＤ４^＋増殖応答、細胞傷害性ＣＤ８^＋Ｔ−細胞活
性など）、そして免疫化を再びするかどうか、そしていつするか決定を行う。典
型的には、最大３〜４回のＮＹＶＡＣ−ＨＩＶ−１による免疫化が考慮される。
この養生法は、その後（同様のＨＩＶ−１遺伝子成分を含む）ＡＬＶＡＣ−ＨＩ
Ｖ−１による３〜４回の免疫化を実施してよく、必要であれば、さらにＤＮＡの
み、すなわちウイルスベクター中のものでないＤＮＡ免疫化の養生法を引き続き
おこなう。ＮＹＶＡＣ−ＨＩＶ−１およびそれに続くＡＬＶＡＣ−ＨＩＶ−１は
、チンパンジーでの免疫応答を誘導するのに効果的である。同様に、以下のよう
な免疫化養生法が効果的であることが示された。ＮＹＶＡＣおよびそれに続くＤ
ＮＡ、およびＡＬＶＡＣおよびそれに続くＤＮＡ。したがって、上述したワクチ
ンすべてを含むワクチン化養生法を使用してよい。

【００９３】 しばしばワクチン養生法は、ＩＬ−２と共に投与し、好ましくは１００，００
０〜２００，０００ユニットのような低用量にて、ＩＬ−２を毎日投与する。Ｃ
Ｄ４０^＋リガンドもまた、それ自身で、またはＩＬ−２と組み合わせて投与する
かいずれかで、治療プロトコール内に組み込むことができる。

【００９４】 実施例３ ＳＩＶ感染、ＨＡＡＲＴ処置アカゲザル マカク（Ｒｈｅｓｕｓ
ｍａｃａｑｕｅｓ）へのＡＬＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅの投与 非常に弱毒化したＡＬＶＡＣベクターの、ＨＡＡＲＴ処置動物での宿主免疫応
答を増強するための治療的ワクチンとしての効果を、ヒトにおけるＨＩＶ−１感
染のモデルである、ＳＩＶ_２５１アカゲザル マカク（Ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａ
ｑｕｅｓ）にて調査した。本研究には、ＳＩＶ_２５１ウイルスを接種させ、１５
日目およびその後、実施例１にて記述したようなＨＡＡＲＴ養生法にて処置した
１６匹のマカクが含まれた。これらのマカクのうち、８匹を、１０^８ｐｆｕのモ
ック−ワクチンＡＬＶＡＣベクターの合計３用量で免疫化し（群Ｄ）、残りの８
匹（群Ｅ）を、実施例１のＮＹＶＡＣベクターの類似体である、組換え体ＡＬＶ
ＡＣ−ＳＩＶ−ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖベクター（ＡＬＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅ）
にて免疫化した。

【００９５】 単一用量のＡＬＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅワクチンの後に得られたデータは、ＡＬ
ＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅワクチンが、ｐ２７ Ｇａｇタンパク質に対する、ならび
にワクチンのｇｐ１２０ Ｅｎｖ先端に対するＣＤ４^＋Ｔ−細胞応答を増強する
ことができることを示唆している（図３を参照のこと）。さらに、ＭＡＭＵ Ａ
^＊０１／ペプチド１１ｃ−ｍテトラマー薬剤を用いて検出した特異的ＣＤ８^＋Ｔ
−細胞応答（たとえば実施例１を参照のこと）はまた、ＡＬＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐ
ｅにて増強され（図４）、さらに、そのＣＤ８^＋Ｔ−細胞は培養中で増加しうる
。モックワクチン化動物は、これらの免疫応答の広がりを経験しなかった。

【００９６】 したがって、ＡＬＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅは、ＨＡＡＲＴ治療を受けている動物
において免疫原性である。実施例１のＮＹＶＡＣワクチンと類似のＡＬＶＡＣワ
クチンも同様に、ＨＡＡＲＴを受けている実施例２に記述したようなＨＩＶ−感
染個体を処置するのに使用できる。

【００９７】 実施例４ ＳＩＶ感染マカクのＭＶＡ−ＳＩＶ−ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ免疫
化 ＭＶＡ−ＳＩＶワクチンの効果を、ＮＹＶＡＣおよびＡＬＶＡＣ ＳＩＶ ｇ
ａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖワクチンを評価するために使用したものと類似の方法を用
いて評価した。ＣＤ８^＋およびＣＤ４^＋応答を、ウイルス血症を制御可能である
ＳＩＶ_２５１感染マカクにて測定し、すなわち１０^８ｐｆｕのＭＶＡ−ＳＩＶ−
ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ組換え体ワクチンの単一用量の投与の後、ＣＤ４^＋数は
５００いる大であった。この結果は、ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋応答両方が、感染
動物において広がった可能性があることを示唆している。 したがって、ＭＶＡ−ＳＩＶ−ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖはまた、動物において
免疫原性であり、ＨＡＡＲＴ治療を受けている患者において使用することができ
る。

【００９８】 実施例５ ＤＮＡとＮＹＶＡＣワクチンの免疫原性の比較 ＤＮＡのみまたはＮＹＶＡＣ−ＳＩＶまたはＡＬＶＡＣ−ＳＩＶとの組合せで
のＤＮＡの投与、またはＮＹＶＡＣ−ＳＩＶおよびＡＬＶＡＣ−ＳＩＶの組合せ
の投与からなるワクチン養生法はまた、ＳＩＶ_２５１感染動物における免疫応答
の連続増強においても効果的である。

【００９９】 研究を、実験に未使用の動物において、それぞれのプラスミドを４ｍｇ筋肉内
投与および１ｍｇ皮内投与を用いて投与した１０^８ｐｆｕのＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ
_ｇｐｅの２回接種と、ＤＮＡの３回接種を比較して平行に設計した。ＤＮＡワク
チンは、ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋ Ｔ−細胞応用を誘導し、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ
_ｇｐｅワクチンによって誘導されたものと同等であった（図５および６）。ＡＬ
ＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅは、少なくともＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅと同程度の免疫
原性であり（たとえば図１を参照のこと）、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅはＤＮＡ
と同程度の免疫原性であった。したがって、単独または種々の組合せいずれかで
のすべての３つのワクチンは、ＨＩＶ−１感染個体にて使用することができる。

【０１００】 ＡＬＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅはまた、慢性感染動物（ＣＤ４^＋Ｔ−細胞範囲５０
〜９００）においてＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋両Ｔ−細胞応答を誘導することがで
き、ＨＡＡＲＴなしでウイルス血症を抑制することができる。これらの動物は、
先にＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅに基づくワクチンにてワクチン化されているが、
長期進行ＨＩＶ−１感染個体のモデルになることがあきらかである。したがって
、本発明のワクチンは、単独で、または種々の変更可能な組合せで、ウイルス血
症が薬理学的に、または他の方法で制御されている個体における早期感染、なら
びに遅延感染において使用できる。

【０１０１】 実施例６ ＮＹＶＡＣおよびＩＬ−２での治療的ワクチン化 本実施例は、免疫調整分子、たとえばＩＬ−２の、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_{ｇａｇ
−ｐｏｌ−ｅｎｖ}ワクチンによって誘導されたＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋両Ｔ−細
胞をさらに増加させる、そしてウイルスに対する宿主の応答の活力を増強する能
力を示している。

【０１０２】 ＳＩＶ_２５１感染ＨＡＡＲＴ処置アカゲザル マカク（図７）を、皮下に投与
したＩＬ−２（１２０，０００ＩＵ）での同時の、そして連続的な日々の処置あ
り、またはなしで、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_{ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ}で筋肉内にワク
チン化した。動物の対照群は、ＩＬ−２で処理し、モックワクチン化（ＮＹＶＡ
Ｃ非組換え体ベクター）した。本研究でのすべての１５匹のマカクは、ＨＡＡＲ
Ｔ（１０ｍｇ／ｋｇ／日 ＤＤＩ、静脈内、２．４ｍｇ／ｋｇ／日 Ｓｔａｖｕ
ｄｉｎｅ、経口、１０ｍｇ／ｋｇ／日 ＰＭＰＡ、皮下）に応答し、１３匹の動
物において、ウイルス血症が、処置の最初の４週間以内で、５×１０^３コピー／
ｍｌ以下に抑制された。残りの２匹の動物でのウイルス血症は、処置の６および
８週まで検出不能になった。ｐ２７ Ｇａｇおよびｇｐ１２０に対する増殖応答
は、ＩＬ−２処置に関わらず、それぞれ３倍および１２倍までＮＹＶＡＣ−ＳＩ
Ｖ_{ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ}ワクチン化によって増加し、このことは、ＩＬ−２が
大量増殖応答を増加させないか、またはアッセイが、抗原特異的ＣＤ４^＋−ヘル
パー応答における微妙な変化を測定するのに十分感度がよくなかったかのいずれ
かを示唆している。

【０１０３】 本研究におけるおよそ半分の動物が、遺伝子的に、Ｍａｍｕ−Ａ^＊０１分子の
キャリアーとして選択された。したがって、ＳＩＶ_２５１に対するＣＴＬ ＣＤ
８^＋Ｔ−細胞応答はいくつかの精製したＳＩＶｍａｃ_２３９ナノマーペプチドお
よびその相当するＭａｍｕ−Ａ^＊０１テトラマーを用いたＥＬＩＳＰＯＴによっ
て測定した。すべてのＳＩＶ_２５１感染Ｍａｍｕ−Ａ^＊０１動物のエクスビボ
ＰＢＭＣは、免疫優性ｐ１１Ｃ、Ｃ→Ｍペプチドを認識し、インビトロ刺激に続
いてγ−インターフェロン（γ−ＩＦＮ）を産出した。この応答は、ＮＹＶＡＣ
−ＳＩＶ_{ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ}による免疫化の後にさらに広がった。ＩＬ−２
は、モックワクチン化動物におけるｐ１１ｃ、Ｃ→Ｍペプチドに対する応答にお
いて、γＩＮＦ産出細胞の数を広げなかった一方で、この応答の広がりは、ＩＬ
−２もまた与えられたＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_{ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ}処置マカクに
おいて、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖのみを与えられたマカクに
おいてよりも高かった。反対に、ＩＬ−２それ自身は、処置動物におけるＳＩＶ
ｔａｔおよびｖｉｆタンパク質内の２つの他の免疫優性エピトープに対する免
疫応答を広げた（ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_{ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ}は、これらの抗原
がワクチン内に含まれない時には、これらの応答をさらに広げはしなかった）。
さらに、ＳＩＶのＧａｇおよびＥｎｖタンパク質内の２つの副優性エピトープに
対するＣＤ８^＋Ｔ−細胞応答は、同時の、そして連続的なＩＬ−２処置を受けた
マカクにおけるＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_{ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ}ワクチン化にしたが
って明らかに広がった。したがって、非常に弱毒化されたＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_{ｇ
ａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ}ワクチンでのワクチン化と一緒の低用量のＩＬ−２の投与
は、ＳＩＶ_２５１に対するＣＤ８^＋Ｔ−細胞機能的応答を増強し、広げる。

【０１０４】 ＩＬ−２は、抗レトロウイルス治療中断の後、ウイルス血症を制御するために
ワクチンと共に使用できる ＨＡＡＲＴ−処置マカクに、図８で示した間隔にて、ＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ_{ｇａ
ｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ}を接種した。マカクにはまた、低用量ＩＬ−２を与え、すな
わち１２０，０００ユニットを毎日皮下に投与した。この動物は、ＣＤ８^＋（上
パネル、図８）およびＣＤ４^＋増殖応答（下パネル、図８）を広げた。さらに、
図８の上パネルで示したように、一過性ウイルスリバウンドが、ＨＡＡＲＴ処置
の中断の後、およびＩＬ−２処置の中止の後に起こった。したがって、ワクチン
と一緒のＩＬ−２の投与は、抗レトロウイルス治療の中断の後のウイルス血症の
制御に役割を果たしうる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 感染され、処置され、ワクチン接種されたマカクにおける、ウイルス負荷量お
よびｐ２７ｇａｇおよびｇｐ１２０に対する増殖性のＣＤ４^＋Ｔヘルパー応答を
示している。上段のパネルは、群Ａ、Ｂ、およびＣからの動物の血漿中のウイル
ス負荷量の動態を示している。群Ａでは２匹の動物（６４１および６４２）が治
療に応答せず、この分析には含められなかった。

【図２】 感染され、処置され、ワクチン接種された動物におけるＣＤ８^＋応答を示して
いる。

【図３】 ＳＩＶ感染され、ＨＡＡＲＴ処置されたアカゲザルにおける、一用量のＡＬＶ
ＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅ．（図３ａおよび図３ｂ）またはＡＬＶＡＣ（図３ｃおよび
図３ｄ）投与後の、ｐ２７特異的（図３ａおよび図３ｃ）およびｇｐ１２０特異
的（図３ｂおよび図３ｄ）Ｔ細胞増殖を示している。矢印は、ＳＩＶ感染後の、
当該動物がワクチン接種された時間を示す。

【図４】 ＳＩＶ感染され、ＨＡＡＲＴ処置され、ＡＬＶＡＣ−ＳＩＶ_ｇｐｅ．（図４ａ
）またはＡＬＶＡＣ（図４ｂ）接種されたマカクからの、新鮮な末梢血単球にお
いて検出されたＣＤ３^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を示す。

【図５】 実験に未使用のマカクに対するＤＮＡワクチン投与後のＣＤ８^＋（図５ａおよ
び図５ｂ）およびＣＤ４^＋（図５ｃおよび図５ｄ）Ｔ細胞応答の誘導を示してい
る。ＤＮＡは矢印で示された時間に投与された。用いられたプラスミドはｐＣＭ
Ｖ−ｇａｇおよびｐＣＭＶ−ｅｎｖであり、各々ｇａｇおよびｅｎｖ遺伝子を発
現するＣＭＶ発現プラスミドである。

【図６】 実験に未使用のマカクに対するＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ−ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖ
の２回の投与後のＣＤ８^＋（図６ａおよび図６ｂ）およびＣＤ４^＋（図６ｃおよ
び図６ｄ）Ｔ細胞応答の誘導を示している。ワクチンは矢印で示された時間にお
いてであった。

【図７】 ＨＡＡＲＴ処置されたマカクにおけるインターロイキン−２（ＩＬ−２）を用
いた、および用いないＮＹＶＡＣの投与スケジュールを示している。

【図８】 ＩＬ−２で処置されたＮＹＶＡＣ−ＳＩＶ接種されたアカゲザルにおける、ウ
イルスＲＮＡ量（上部パネル）、およびＣＤ８^＋およびＣＤ４^＋増殖性の応答、
各々上部および下部パネル、を示している。水平の棒は抗レトロウイルス療法（
ＡＲＴ）およびＩＬ−２による処置の長さを示す。プラスミド中のウイルスＲＮ
Ａレベル（上部パネル）は白抜きの丸で示されている。ＣＤ８^＋ＣＤ３^＋４量体
結合性細胞のパーセントは、上部パネルにおいて細かい平行線が引かれた垂直の
棒で示されている。γ−インターフェロン放出を測定するＥＬＩＳＰＯＴ検定の
結果は、黒色の垂直の棒で示されている。ｐ２７ｇａｇおよびｇｐ１２０に対す
る増殖性の応答は下部パネルに示されている。ＩＬ−２は、１２０，０００単位
の用量での皮下注射により毎日投与された。

【手続補正書】

【提出日】平成１４年２月１３日（２００２．２．１３）

【手続補正１】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】全図

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） // Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (31)優先権主張番号 ６０／２００，４４５ (32)優先日 平成12年４月28日(2000．4．28) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 シェラー，ジーン アメリカ合衆国，メリーランド 20817， ベゼスダ，グレンウッド ロード 5512 (72)発明者 タータグリア，ジェイムズ アメリカ合衆国，ニューヨーク 12303， シェネクタディ，クリスティナ ドライブ イースト ７ (72)発明者 ナクサ，ジェイノス アメリカ合衆国，メリーランド 20901， シルバー スプリング，マーゲイト ロー ド 10834 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA32 BA35 CA02 DA02 DA03 EA02 GA11 HA17 4C084 AA13 BA35 NA14 ZB331 4C085 AA03 AA38 BA69 BA85 BB11 EE01 EE06 FF24

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＨＩＶまたはＨＴＬＶ−１レトロウイルスに感染されたヒト
   において効率のよいＣＤ８^＋応答を刺激する方法であって、前記方法が： ヒト細胞内に入り、かつ当該細胞のＭＨＣクラスＩ分子上の提示のためのＨ
   ＩＶ−またはＨＴＬＶ−１−特異的ペプチドを細胞内において産生する、核酸を
   主成分とするワクチンを、当該ヒトに対し投与することを含み、 前記ペプチドが、防御性のＣＤ８^＋応答を刺激するのに充分な量で提示され
   、さらに 前記ヒトが、 ｉ． 血漿１ｍｌあたり１０，０００ウイルスコピーより少ないウイルス
   負荷量と、５００細胞／ｍｌより多いＣＤ４^＋細胞数とを有しており、さらに ｉｉ． 一以上の抗ウイルス剤により処置されており、そのことが処置前
   よりも低いウイルスコピー数と、より高いＣＤ４^＋細胞数とに寄与したことを特
   徴とする方法。
2. 【請求項２】 請求項１の方法において、前記ヒトが抗ウイルス剤により処
   置されており、それが当該ヒトにおいて、血清１ｍｌあたり１，０００ウイルス
   コピーより低いウイルス負荷量と、５００細胞／ｍｌより多いＣＤ４^＋細胞とを
   有する結果を生ずることを特徴とする方法。
3. 【請求項３】 請求項２の方法において、前記抗ウイルス剤がプロテアーゼ
   阻害剤と逆転写酵素の阻害剤との組合せを含むことを特徴とする方法。
4. 【請求項４】 請求項１の方法であって、前記ワクチンがＤＮＡを主成分と
   するワクチンであることを特徴とする方法。
5. 【請求項５】 請求項１の方法であって、前記ワクチンが弱毒化された組換
   えウイルスであることを特徴とする方法。
6. 【請求項６】 請求項５の方法であって、前記ワクチンが弱毒化されたポッ
   クスウイルスであることを特徴とする方法。
7. 【請求項７】 請求項６の方法であって、前記弱毒化されたポックスウイル
   スがＮＹＶＡＣおよびＡＬＶＡＣから成る群より選ばれることを特徴とする方法
   。
8. 【請求項８】 請求項６の方法であって、前記弱毒化されたポックスウイル
   スがＭＶＡであることを特徴とする方法。
9. 【請求項９】 請求項１の方法であって、前記ワクチンが２回投与されるこ
   とを特徴とする方法。
10. 【請求項１０】 請求項１の方法であって、前記ＨＩＶ−またはＨＴＬＶ−
    １特異的ペプチドが構造性のウイルスペプチドであることを特徴とする方法。
11. 【請求項１１】 請求項１の方法であって、前記ＨＩＶ−またはＨＴＬＶ−
    １特異的ペプチドが非構造性のウイルスペプチドであることを特徴とする方法。
12. 【請求項１２】 請求項１の方法であって、前記ワクチンがさらにアジュバ
    ントを含むことを特徴とする方法。
13. 【請求項１３】 請求項１の方法であって、インターロイキン２またはＣＤ
    ４０リガンドを、ＣＤ８^＋応答を強化するのに充分な量で投与することをさらに
    含む方法。
14. 【請求項１４】 請求項１の方法であって、前記ヒトがＨＩＶに感染されて
    おり、かつｇｐ１２０外皮タンパク質に対する反復および持続増殖性のＴ細胞応
    答を示していることを特徴とする方法。
15. 【請求項１５】 請求項１４の方法であって、前記ヒトがＨＩＶに感染され
    ており、かつｐ２４ｇａｇ抗原に対する反復および持続増殖性のＴ細胞応答を示
    していることを特徴とする方法。
16. 【請求項１６】 請求項１の方法であって、前記ヒトがＨＩＶに感染され、
    さらに皮膚テストにより、ｐ２４ｇａｇ抗原に対する過敏性の応答について検査
    されることを特徴とする方法。
17. 【請求項１７】 請求項１の方法であって、前記ヒトがＨＩＶに感染され、
    さらに皮膚テストにより、ｇｐ１２０外皮抗原に対する過敏性の応答について検
    査されることを特徴とする方法。