JP2003505009A - ロイコトリエンb4受容体のトランスジェニック哺乳動物 - Google Patents

ロイコトリエンb4受容体のトランスジェニック哺乳動物

Info

Publication number
JP2003505009A
JP2003505009A JP2000604675A JP2000604675A JP2003505009A JP 2003505009 A JP2003505009 A JP 2003505009A JP 2000604675 A JP2000604675 A JP 2000604675A JP 2000604675 A JP2000604675 A JP 2000604675A JP 2003505009 A JP2003505009 A JP 2003505009A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
bltr
human
leukocytes
mammal
transgenic mammal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2000604675A
Other languages
English (en)
Inventor
サーハン,チヤールズ・エヌ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Brigham and Womens Hospital Inc
Original Assignee
Brigham and Womens Hospital Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Brigham and Womens Hospital Inc filed Critical Brigham and Womens Hospital Inc
Publication of JP2003505009A publication Critical patent/JP2003505009A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A01K67/0278Knock-in vertebrates, e.g. humanised vertebrates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70546Integrin superfamily
    • C07K14/70553Integrin beta2-subunit-containing molecules, e.g. CD11, CD18
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00Modified animals
    • A01K2207/15Humanized animals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00Genetically modified animals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00Genetically modified animals
    • A01K2217/05Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00Animals characterised by species
    • A01K2227/10Mammal
    • A01K2227/105Murine
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00Animals characterised by purpose
    • A01K2267/01Animal expressing industrially exogenous proteins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03Animal model, e.g. for test or diseases
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/035Animal model for multifactorial diseases
    • A01K2267/0368Animal model for inflammation
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/0393Animal model comprising a reporter system for screening tests
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/008Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】 本発明は白血球中にヒトBLTRの生理活性をもつ組み換えヒト・ロイコトリエンB4受容体(BLTR)を生産する、非ヒトトランスジェニック哺乳動物につき説明する。トランスジェニック哺乳動物は(A)BLTR特異性プロモーターを含む5’発現調節配列、(B)BLTR及び、トランスジェニック哺乳動物の白血球中にBLTRの過剰発現を誘導するために有効なシグナル配列をコードするDNA並びに(C)白血球中にDNAの過剰発現をもたらす3’調節配列、を含む外来の遺伝子構造物をゲノム中に安定に取り込んでいる。一態様においては、(A)、(B)及び(C)はトランスジェニック哺乳動物の白血球中のBLTRの生産及びその過剰発現が得られるように、遺伝子構造物中で操作可能に連結されている。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】 (発明の背景) 炎症及び二次的器官傷害の部位に対するPMN補充及び腐骨形成は、そのなか
でLTB4が非常に重要であると考えられている前炎症媒介物質により誘発され
る(Weissmann,G.,Smolen,J.E., and Korchak,H.M.1980. Release of inflammat
ory mediators from stimulated neutrophils. N.Engl.J.Med. 303:27-34; Samm
uelsson,B.1983. Leukotrienes: Mediators of inflammation and immediate hy
persensitivity. Science 220:568-575)。近年、LTB4受容体(BLTR)は
また、宿主の防御におけるこのシステムの重要な役割を更に強調する、HIV−
1侵入に対する共受容体として作用することが示された(Owman,C.1998. The le
ukotriene B4 receptor functions as a novel type of coreceptor mediating
entry of primary HIV-1 isolates into CD4-positive cells. Proc. Natl.Acad .Sci.USA 95:9530-9534)。アスピリンは、アスピリンの作用機序の完全な知識
を得ることの重要性を増加させる、心臓血管疾患の予防及び肺、大腸及び乳ガン
の発生率減少を含む幾つかの新規に確認された治療的作用を伴う、その抗炎症及
び鎮痛特性のために、広く使用されている(Marcus,A.J.1995.Aspirin as proph
ylaxis against colorectal cancer. N.Engl.J. Med.333:656-658)。アスピリ
ンを投与すると、プロスタノイドの生合成抑制に加えて、それはまた、アスピリ
ンのある治療的影響の一部を媒介するように見え、インビボで生成される、アス
ピリン引金LXA4(ATL)と称される15エピマー又は15 LXA4の内
因性の経細胞生産の引金を引く。(Serhan,C.N.1997. Lipoxins and novel aspi
rin-triggered 15-epi-lipoxins(ATL). Prostaglandins 53:107-137; Chiang,N.
,Takano,T.,Clish,C.B.,Petasis,N.A. and Serhan C.N.1998. Aspirin-triggere
d 15-epi-Lipoxin A4(ATL) generation by human leukocytes and murine perit
onitis exudates: development of a specific 15-epi-LXA4 ELISA. J.Phar.Exp .Ther .287:779-790 )。LXA4は、これも15−エピ−LXA4を組み込むAL
XRと名付けたそれ自体の特異的なGタンパク質結合受容体により白血球反応を
調節する(Serhan,C.N.1997.Lipoxins and novel aspirin-triggered 15-epi-li
poxins(ATL). Prostagrandins 53:107-137; Takano,T.,Clish,C.B.,Gronert,K.,
Petasis,N.A. and Serhan C.N.1997. Neutrophil-mediated changes in vascula
r permeability are inhibited by topical application of aspirin-triggered
15-epi-lipoxin A4 and novel lipoxin B4 stable analogues. J.Clin.Invest.
101:819-826)。他の局部的媒介物質のように、LXは早急に生成され、反応を
引き起こし、そして更なる代謝により不活性化される(Serhan,C.N.1997.Lipoxi
ns and novel aspirin-triggered 15-epi-lipoxins(ATL). Prostagrandins 53:1
07-137)。従って、同定された受容体と相互作用する、可能な薬剤、例えば抗炎
症剤をモニターし、研究しそしてスクリーニングする方法は興味深い。
【0002】 (発明の要約) 本発明は、一つのアスペクトにおいて、白血球中にヒトBLTRの生理活性を
有する組み換えヒト・ロイコトリエンB4受容体(BLTR)を生産する非ヒト
トランスジェニック哺乳動物に関する。トランスジェニック哺乳動物は(A)B
LTR特異性プロモーターを含む5’発現調節配列、(B)BLTR及び、トラ
ンスジェニック哺乳動物の白血球中にBLTRの過剰発現を誘導するために有効
なシグナル配列をコードするDNA並びに(C)白血球中にDNAの過剰発現を
もたらす3’調節配列、を含む外来の遺伝子構造物をゲノム中に安定に組み込ん
でいる。一態様において(A)、(B)及び(C)は、トランスジェニック哺乳
動物において白血球中のBLTRの生産及びその過剰発現が得えられるように遺
伝子構造物中で操作可能に連結されている。
【0003】 本発明はもう一つのアスペクトにおいて、ヒトBLTRの生理活性を有する組
み換えヒトBLTRの生産法に関する。本方法は(A)BLTR特異性プロモー
ターを含む5’発現調節配列、(B)BLTR及び、トランスジェニック哺乳動
物の白血球中にBLTRの過剰発現を誘導するために有効なシグナル配列をコー
ドするDNA並びに(C)白血球中にDNAの過剰発現をもたらす3’調節配列
、を含む外来の遺伝子構造物をゲノム中に組み込んでいる非ヒトトランスジェニ
ック哺乳動物を提供することを含む。一態様において、(A)、(B)及び(C
)は、トランスジェニック哺乳動物において白血球中のBLTRの生産及びその
過剰発現が得られるように遺伝子構造物中で操作可能に連結されている。BLT
Rはトランスジェニック哺乳動物の白血球中に過剰発現し、分泌される。
【0004】 本発明は更にもう一つのアスペクトにおいて、ヒトBLTRの生理活性を有す
る組み換えヒト・ロイコトリエンB4受容体(BLTR)をその白血球中に生産
する非ヒトトランスジェニック哺乳動物を生産する方法に関する。その方法は(
a)(A)BLTR特異性プロモーターを含む5’発現調節配列、(B)BLT
R及び、トランスジェニック哺乳動物の白血球中にBLTRの過剰発現を誘導す
るために有効なシグナル配列をコードするDNA並びに(C)白血球中にDNA
の過剰発現をもたらす3’調節配列、を含む外来の遺伝子構造物を提供すること
を含む。一態様において(A)、(B)及び(C)は、トランスジェニック哺乳
動物において白血球中のBLTRの生産及びその過剰発現が得られるように、遺
伝子構造物中で操作可能に連結されている。段階(a)の構造物は非ヒト哺乳動
物の胚中に導入され、そこで構造物は哺乳動物の胚のゲノム中に安定に組み込ま
れる。胚を非ヒトトランスジェニック哺乳動物中に発育させ、(c)の非ヒトト
ランスジェニック哺乳動物がBLTRを過剰発現するかどうかが決定される。
【0005】 本発明は更にもう一つのアスペクトにおいて、ヒトBLTRの生理活性を有す
る組み換えヒト・ロイコトリエンB4受容体(BLTR)をその白血球中に生産
する非ヒトトランスジェニック哺乳動物において多形核白血球生産の過剰発現を
抑制する化合物をスクリーニングするための方法に関する。その方法は(a)(
A)BLTR特異性プロモーターを含む5’発現調節配列、(B)BLTR及び
、トランスジェニック哺乳動物の白血球中にBLTRの過剰発現を誘導するため
に有効なシグナル配列をコードするDNA並びに(C)白血球中にDNAの過剰
発現をもたらす3’調節配列、を含む外来の遺伝子構造物をゲノム中に組み込ん
でいる非ヒトトランスジェニック哺乳動物を提供すること、を含む。一態様にお
いて(A)、(B)及び(C)は、トランスジェニック哺乳動物において白血球
中のBLTRの生産及びその過剰発現が得られるように、遺伝子構造物中で操作
可能に連結されている。BLTRはトランスジェニック哺乳動物の白血球中に過
剰発現され、分泌される。トランスジェニック哺乳動物に生理学的ストレスをか
け、それにより過剰発現BLTRにより白血球に好中球の補充増加を引き起こす
ことができる。治療的に有効量の化合物を哺乳動物に投与して、ストレスに反応
する好中球の補充と相互作用させる。次いで、化合物、例えばリポキシン誘導体
が、その中にBLTRを過剰発現したトランスジェニック哺乳動物の白血球の好
中球の活性化を減少させるかどうかを実験的に決定する。代替的には、段階(d
)を段階(c)の前に実施し、それにより好中球の活性化が予防又は抑制される
【0006】 一つの好ましい態様においては、トランスジェニック哺乳動物はヒトのBLT
Rを生産する。もう一つの好ましい態様においては、ヒトのBLTRはヒトBL
TRのアミノ酸配列を有する。更にもう一つの好ましい態様においては、哺乳動
物はラット、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤギ又はウシからなる群、そして最も好ま
しくはマウスから選択される。哺乳動物が雌、例えば雌のマウスであることが好
ましい。
【0007】 本発明は付記の図面に関連する下記の詳細な説明から、より十分に理解される
であろう。
【0008】 (発明の詳細な説明) 今度は、本発明の特徴物及びその他の詳細がより具体的に説明され、特許請求
の範囲中に指摘されるであろう。本発明の具体的な態様は具体的例により示され
、本発明の制限としては示されていない。本発明の主要な特徴物を本発明の範囲
から逸脱せずに様々な態様に使用することができる。
【0009】 略語:ALXR=リポキシンA4受容体、ATL=アスピリン−引金15−エ
ピ−LXA4(ATLの類似物:15−エピ−16−パラ−フルオロ−フェノキ
シ−LXA4(15()−16−パラ−フルオロ−フェノキシ−17,18,
19,20−テトラノール−LXA4メチルエステル))、BLTR=ロイコト
リエンB4受容体、5−HETE=5−ヒドロキシル−8,11,14−
−6−トランス−エイコサテトラエン酸、LC/MS/MS=液体クロマトグ
ラフィータンデム型質量分析−質量分析、LO=リポオキシゲナーゼ、LT=ロ
イコトリエン、LX=リポキシン、LXA4=5(),6(),15(
−トリヒドロキシ−7,9,13−トランス−11−シス−エイコサテトラエン
酸、MPO=ミエロペルオキシダーゼ、及びRT−PCR=逆転写ポリメラーゼ
連鎖反応。リポキシン化合物の調製の適切な方法は例えば、引用により本明細書
に取り込まれている、米国特許第5,411,951号、第5,648,512
号、第5,650,435号及び第5,750,354号明細書に認めることが
できる。
【0010】 好中球(PMN)の活性化は急性の炎症及び再潅流からの傷害において中心的
である。インビボにおいて好中球を調節している構成成分を解明するために、機
能的特徴付けのためにヒト・ロイコトリエン(LT)B4受容体(BLTR)を
含む新規のトランスジェニックマウスを用意した。本発明に従うトランスジェニ
ック動物はBLTR又はその変種をコードしている遺伝子を含んで成る核酸配列
を含んで成り、その遺伝子を過剰発現することができる。核酸は天然でも人工的
な供給源からのものでもよい。それはゲノムDNA(gDNA)、相補DNA(
cDNA)、ハイブリッド配列又は合成もしくは半合成配列の可能性がある。そ
れはヒト、動物、植物、バクテリヤ又はウイルス等の由来のものの可能性がある
。それは例えば、化学合成又は代替的には、配列の化学的もしくは酵素学的修飾
を含む混合法により、当業者に知られたあらゆる技法により得ることができる。
それは好ましくはcDNA又はgDNAである。ヒトBLTRに対する完全なD
NA及びアミノ酸配列はその内容全体が引用により本明細書に取り込まれている
、Yokomizo et al.(1997)Nature 387:620-624に開示されており、更にGenBank A
ccession No.NM000752に認めることができる。
【0011】 白血球中のBLTRの過剰発現は皮膚の微小膿瘍及び虚血−再潅流後の肺への
PMN流通を劇的に増加し、一方5−リポオキシゲナーゼ(LO)欠乏マウスは
再潅流肺中への減少したPMN蓄積をもたらした。従ってBLTR発現及びLT
生合成の両方が再潅流−誘発の二次的器官傷害のPMN浸潤に対して重要である
。更にBLTRトランスジェニックマウスにおいて、5−LO発現及び生成物の
形成は浸潤物中に選択的に増加し、受容体の過剰発現が前−炎症回路を増幅する
ことを示している。外来のリポキシン(LX)A4は虚血肺中に生成され、再潅
流により上昇された。LXA4及び、アスピリン処置により生成されたアスピリ
ン−引金15−エピマーLXA4(ATL)は白血球の反応を選択的に調節する
ので、それらはBLTRトランスジェニックマウスにおいて試験される。BLT
Rトランスジェニックマウスにおける過剰PMNの補充にもかかわらず、ATL
の静脈内注射は遠隔器官への再潅流誘発PMNの流通を急激に減少させ、局部の
LXA4は急性の皮膚の炎症において防御的であった。これらの結果はPMN調
節における、BLTR及び5−LO信号発信に関与する正のフィードバックを伴
う、BLTRに対する直接的役割を示している。更に、LXA4及びATLは、
手術時の薬剤の適用を有するストレス反応におけるLX及びATLに対する新規
の防御的役割を示すBLTR−増幅のネットワークに拮抗する。
【0012】 ヒト及びマウスのBLTRの近年のクローニングは受容体及び遺伝子レベルに
おけるこの信号送信経路の解明を可能にした(Yokomizo,T.,Izumi,T.,Chang,K.,
Takuwa,Y. and Shimizu,T.1997. A G-protein-coupled receptor for leukotrie
ne B4 that mediates chemotaxis. Nature 387:620-624;Huang,W.W.,Garcia-Zep
eda,E.A.,Sauty,A.,Oettgen,H.C.,Rothenberg,M.E. et al.1998. Molecular and
bilogical characterization of the murine leukotriene B4 receptor expres
sed on esinophils. J.Exp.Med. 188:1063-1074)。これらのBLTRはそれぞ
れALXR並びに、fMLP、C5a及びIL−8受容体により例示される受容
体のケミカイン及びケモスタチックペプチド族(〜30%)と相同性を示すが、
プロスタノイド受容体には相同性を示さず、LX及びLTに対する受容体の供給
源はプロスタノイドに対するものと異なることの更なる証明を提供している(To
h,H.,Ichikawa,A. and Narumiya,S.1995. Molecular evolution of receptors f
or eicosanoids.FEBS Letters 361:17-21)。これらの方針に沿って、ヒトBL
TR(hBLTR)をもつトランスジェニックマウスを発育させた。使用可能な
5−LO欠乏マウスとともにこれらの新規のBLTRトランスジェニックマウス
を使用して、LXA4及びATLが再潅流におけるPMN−誘発二次的器官傷害
を調節し、5−LO信号送信における新規の正の回路を暴露することが示された
(Funk C.D.1999. in “Molecular and Cellular Basis in Inflammation"(eds.
C.N.Serhan and P.A.Ward) Lipid -mediator-deficient mice in models of inf
lammation,pp.109-125. Humana Press, Totowa, NJ)。
【0013】 本発明は、一アスペクトにおいて、その白血球中に、ヒトBLTRの生理活性
を有する組み換えヒト・ロイコトリエンB4受容体(BLTR)を生産する非ヒ
トトランスジェニック哺乳動物に関する。トランスジェニック哺乳動物は(A)
BLTR特異的プロモーターを含む5’発現調節配列、(B)BLTR及び、ト
ランスジェニック哺乳動物の白血球中へBLTRの過剰発現を誘導するために有
効なシグナル配列をコードするDNA並びに(C)白血球にDNAの過剰発現を
もたらす3’調節配列、を含む外来の遺伝子構造物をゲノム中に安定に組み込ん
でいる。一態様において、(A)、(B)及び(C)はトランスジェニック哺乳
動物の白血球中のBLTRの生産及びその過剰発現が得られるように遺伝子構造
物中で操作可能に連結されている。
【0014】 本発明はもう一つのアスペクトにおいて、ヒトBLTRの生理活性を有する組
み換えヒトBLTRの生産法に関する。その方法は(A)BLTR特異的プロモ
ーターを含む5’発現調節配列、(B)BLTR及び、トランスジェニック哺乳
動物の白血球中へBLTRの過剰発現を誘導するために有効なシグナル配列をコ
ードするDNA並びに(C)白血球にDNAの過剰発現をもたらす3’調節配列
、を含む外来の遺伝子構造物をそのゲノム中に安定に組み込んでいる非ヒトトラ
ンスジェニック哺乳動物を提供することを含む。一態様においては、(A)、(
B)及び(C)は、トランスジェニック哺乳動物の白血球中のBLTRの生産及
びその過剰発現が得られるように遺伝子構造物中で操作可能に連結されている。
BLTRはトランスジェニック哺乳動物の白血球中に過剰発現され、分泌される
【0015】 本発明は、更にもう一つのアスペクトにおいて、その白血球中に、ヒトBLT
Rの生理活性を有する組み換えヒト・ロイコトリエン受容体(BLTR)を生産
する非ヒトトランスジェニック哺乳動物の生産法に関する。その方法は(A)B
LTR特異的プロモーターを含む5’発現調節配列、(B)BLTR及び、トラ
ンスジェニック哺乳動物の白血球中へBLTRの過剰発現を誘導するために有効
なシグナル配列をコードするDNA並びに(C)白血球にDNAの過剰発現をも
たらす3’調節配列、を含む外来の遺伝子構造物をそのゲノム中に安定に組み込
んでいる非ヒトトランスジェニック哺乳動物を提供することを含む。一態様にお
いては、(A)、(B)及び(C)はトランスジェニック哺乳動物の白血球中の
BLTRの生産及びその過剰発現が得られるように、遺伝子構造物中で操作可能
に連結されている。段階(a)の構造物は非ヒト哺乳動物の胚中に導入され、そ
こで構造物は哺乳動物の胚のゲノム中に安定に組み込まれる。胚は非ヒトトラン
スジェニック哺乳動物中に発育を許され、(c)の非ヒトトランスジェニック哺
乳動物がBLTRを過剰発現するかどうかを決定される。
【0016】 本発明は更にもう一つのアスペクトにおいて、その白血球中に、ヒトBLTR
の生理活性を有する組み換えヒト・ロイコトリエンB4受容体(BLTR)を生
産する非ヒトトランスジェニック哺乳動物における多形核白血球生産の過剰発現
を抑制する化合物をスクリーニングする方法に関する。その方法は(a)(A)
BLTR特異性プロモーターを含む5’発現調節配列、(B)前記BLTR及び
前記トランスジェニック哺乳動物の白血球中に前記BLTRの過剰発現を誘導す
るために有効なシグナル配列をコードするDNA、並びに(C)前記白血球中に
前記DNAの過剰発現をもたらす3’調節配列、を含む外来の遺伝子構造物をそ
のゲノム中に組み込んでいる非ヒトトランスジェニック哺乳動物を提供すること
を含む。一態様においては、(A)、(B)及び(C)は、トランスジェニック
哺乳動物における白血球中の前記BLTRの生産及びその過剰発現が得られるよ
うに遺伝子構造物中で操作可能に連結されている。BLTRはトランスジェニッ
ク哺乳動物の白血球中に過剰発現され、分泌されることを許される。トランスジ
ェニック哺乳動物に生理学的ストレスをかけて、それにより過剰発現BLTRに
よる白血球への好中球補充増加を惹起させることができる。ストレスに反応する
好中球の補充と相互作用するために、治療的に有効量の化合物を哺乳動物に投与
する。次いで、化合物、例えばリポキシン誘導体が、その中にBLTRを過剰発
現したトランスジェニック哺乳動物の白血球中の好中球活性化を減少するかどう
かを実験的に決定する。代替的には、段階(d)を段階(c)の前に実施して、
それにより、好中球活性化を予防又は抑制する。
【0017】 一つの好ましい態様においては、トランスジェニック哺乳動物はヒトBLTR
を生産する。もう一つの好ましい態様においては、ヒトBLTRはヒトBLTR
のアミノ酸配列を有する。更にもう一つの好ましい態様においては、哺乳動物は
ラット、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤギ又はウシからなる群から、そして最も好ま
しくはマウスから選択される。その哺乳動物が雌である、例えば雌マウスである
ことが好ましい。
【0018】 材料及び方法 hBLTRのクローニン及び機能的発現 TriZol試薬(GIBCO BRL, Grand Island, NY)を使用して総RNAをレチノイ
ン酸分化HL−60細胞から単離し、50℃で30分間、逆転写し、次いでhB
LTRに対する特異的プライマー(BLTR−N:5’−GCCGGATCCA
TGAACACTACATCTTCTGCA−3’及びBLTR−C:5’−G
CCCTCGAGCTAGTTCAGTTCGTTTAACTT−3’)ととも
にVentDNAポリメラーゼ(New England BioLabs, Beverly, MA)を使用する4
0サイクルのポリメラーゼ連鎖反応(PCR)(1分間98℃、1分間60℃及
び2分間72℃)を実施した(Fiore,S.,Romano,M.,Reardon,E.M. and Serhan,C
.N.1993. Inductin of functional lipoxin A4 receptors in HL-60 cells. Blo od 81:3395-3403)。hBLTRのcDNAをCDIIbプロモーターの下流のH
indIII−PpuMIサイトでpGLベクター(Promega)中に挿入した。HE
K293細胞をSuperFect試薬(Qiagen, Chatsworth, CA)を使用してこのpG
L−CDIIb−hBLTR構造物とトランスフェクションさせた。それぞれ参考
文献(Yokomizo,T.,Izumi,T.,Chang,K.,Takuwa,Y.and Shimizu,T.1997. A G-pro
tein-coupled receptor for leukotriene B4 that mediates chemotaxis. Natur e 387:620-624)及び(Ng,C.F.,Sun,F.F.,Taylor,B.M.,Wolin,M.S. and Wong,P.Y
.1991. Functional properties of guinea pig eosinophil eukotriene B4 rece
ptors. J.Immunol. 147:3096-3103)におけるように、リガンドの結合及び細胞内
Ca2+放出を実施した。安定なトランスフェクションのためにhBLTRのcD
NAをネオマイシン耐性遺伝子を担持するpcDNA3ベクター(Invitrogen,
Carlsbad, CA)中に挿入した。hALXRのcDNAを、異なる選択マーカー(
ブラスチシジン耐性遺伝子)を担持するpcDNA6(Invitrogen, Carlsbad,
CA)に挿入した。HEK293細胞を両方の構造物でトランスフェクションし、
ネオマイシン及びブラスチシジンの両方で選択した。(Gronert,K.,Colgan,S.P.
and Serhan C.N.1998. Characterization of human neutrophil and endotheli
al cell ligand-operated extracellular acidification rate by microphysiom
etry:impact of reoxyganation.J.Phar.Exp.Ther.285:252-261)におけるように
、細胞外酸性化速度(EAR)のCytosensorの微量物理測定分析を実施した。
【0019】 hBTRトランスジェニックマウスの準備及び同定 hBLTRトランスジェニック遺伝子(transgene)をNotI及びBamH
Iによるプラスミド(pGL−CDIIb−hBLTR)の消化により得、Elu
tip(Schleicher & Schuell, Keene, NH)により精製した。精製トランスジ
ェニック遺伝子をマイクロインジェクションによりマウス(FVB種)の胚中に
注入し、次いで仮親マウスに移植した。トランスジェニック遺伝子を取り込んだ
トランスジェニック創始マウスは同種のマウスとともに飼育された。トランスジ
ェニック創始マウスからの正の子マウスは、マウスの全血から単離したゲノムD
NAを使用してPCRにより同定された。端的に言うと、血液15μlを各マウ
スから採血し、1mMのEDTA及び0.5%NP−40を含む10mMトリス
−HCl(pH7.8)250μl中に再懸濁した。細胞材料を5分間11,0
00rpmの遠心分離により得て、0.1%トリトンX−100を40μl及び
0.4NのNaOH10μl中に再懸濁させて、細胞膜を部分的に消化してタン
パク質を変性させた。次いで、それらを5分間95℃に加熱し、氷上で冷却し、
1Mのトリス(pH7.5)10μlで中和し、そして各試料(1μl)を25
μlのPCRに使用した。高温開始PCR(Ventポリメラーゼ添加前5分間
98℃)をプライマーBLTR−N及びBLTR−Cによる40サイクルの増幅
(1分間の98℃、1分間の60℃及び2分間の72℃)により実施した。hB
LTR及び5−LO発現を証明するために、カゼイン誘発腹膜炎(2%カゼイン
、4時間)を有するマウスからの腹腔白血球を、(Chiang,N.,Takano,T.,Clish,
C.B.,Petasis,N.A. and Serhan C.N.1998. Aspirin-triggered 15-epi-Lipoxin
A4(ATL) generation by human leukocytes and murine peritonitis exudates:
development of a specific 15-epi-LXA4 ELISA. J.Phar.Exp.Ther.287:779-790
.)におけるように採取し、総RNAを単離した。ヒト及びマウスBLTRの両
方を増幅する、プライマーBLTR−III:5’−TACGCCAGCGTCC
TGCTT−3’及びBLTR−VII:5’−GCTGCTCAGGAAGGC
GAG−3’を使用して前記と本質的に同様な条件を使用して逆転写(RT)−
PCRを実施した。5−LOを増幅するためには、マウス特異性の有意な(5’
−ATCAGGACGTTCACGGCCAGG−3’)及びアンチセンス(5
’−CCAGGAACAGCTCGTTTTCCTG−3’)プライマーを使用
した。
【0020】 耳の皮膚の炎症モデル hBLTRトランスジェニック及びwtマウスを麻酔し、N.A.Petasis教授及
びその共同研究者、 Dept. of Chemistry, Univ. of Southern Californiaによ
る参考文献7におけるような総合的合成により調製した16−フェノキシル−L
XA4(15()−16−フェノキシ−17,18,19,20−テトラノー
ル−LXA4メチルエステル(10μg)(10μlのアセトン中)を右耳の内
側に投与した。ビヒクルの対照として左耳にアセトンのみを投与した。5分後に
、LTB4(5,12−ジヒドロキシ−6,8,10,14−エイコサテト
ラエン酸;1μg)(10μlのアセトン中)を両耳に投与した。耳の皮膚穿孔
生検物を白血球MPO活性のために採取した(Takano,T.,Clish,C.B.,Gronert,K
.,Petasis,N.A. and Serhan C.N.1997. Neutrophil-mediated changes in vascu
lar permeability are inhibited by topical application of aspirin-trigger
ed 15-epi-lipoxin A4 and novel lipoxin B4 stable analogues. J.Cin.Invest .101:819-826)。
【0021】 後肢の虚血−再潅流に誘発された二次的器官傷害 マウスを麻酔し、(Takano,T.,Clish,C.B.,Gronert,K.,Petasis,N.A. and Ser
han C.N.1997. Neutrophil-mediated changes in vascular permeability are i
nhibited by topical application of aspirin-triggered 15-epi-lipoxin A4 a
nd novel lipoxin B4 stable analogues. J.Cin.Invest.101:819-826)における
ように調製したATL類似体の15−エピ−16−パラ−フルオロ−フェノキシ
−LXA4(15()−16−パラーフルオロ−フェノキシ−17,18,1
9,20−テトラノール−LXA4メチルエステル)又はビヒクルをトランスジ
ェニックマウスに静脈内投与した。約5分後に、止血帯を各後肢の周囲に、中心
に近位に配置して金属クランプで固定した(Goldman,G.,Welbourn,R.,Klausner,
J.M.,Kobzik,L.,Valeri,C.R. et al.1992. Mast cells and leukotrienes media
te neutrophil sequestration and lung edema after remote ischemia in rode
nts. Surgery 112:578-586)。脚の充血及び脱色により血管閉塞が証明された。
虚血の3時間後に、止血帯を外し、3時間再潅流を実施した。次いで、5−LO
(+/+)及び(−/−)マウス(Jackson Laboratory, Bar Harbor, MEからの
)並びにhBTRトランスジェニックマウスをHarvard Medical Area Standing C
ommittee on Animal(ハーバード医学部門動物監視委員会)(プロトコール番号
02570−R98)に従い、過剰量のペントバルビタール腹腔内注射で安楽死
させた(Chen,X.-S,Sheller,J.R.,Johnson,E.N. and Funk,C.D.1994. Role of l
eukotrienes revealed by targeted disruption of the 5-lipoxygenase gene. Nature 372:179-182)。左肺を採取し、リン酸カリウムバッファー(pH7.4
)1.5ml中にホモジナイズし、次いで14,000rpm(5分間)で遠心
分離した。沈澱物を更に白血球MPO分析のために抽出し、上澄み液をエイコサ
ノイド分析のために貯蔵(−80℃)した(Takano,T.,Clish,C.B.,Gronert,K.,
Petasis,N.A. and Serhan C.N.1997. Neutrophil-mediated changes in vascula
r permeability are inhibited by topical application of aspirin-triggered
15-epi-lipoxin A4 and novel lipoxin B4 stable analogues. J.Cin.Invest.1
01:819-826)。
【0022】 LC/MS/MS分析 ネズミの腹腔浸潤物をカゼイン誘発腹膜炎から得て、30分間37℃でA23
187(5μM)とともにインキュベーションした。回復性を計算するための内
部標準としてそれぞれにd4−LTB4(6,7,14,15−ジューテリウム[
4]−LTB4を10ngを添加した、固体−相抽出クロマトグラフィー(SP
E)(Takano,T.,Clish,C.B.,Gronert,K.,Petasis,N.A. and Serhan C.N.1997.
Neutrophil-mediated changes in vascular permeability are inhibited by to
pical application of aspirin-triggered 15-epi-lipoxin A4 and novel lipox
in B4 stable analogues. J.Cin.Invest.101:819-826)により試料を調製した。
液体クロマトグラフィー−タンデム型質量分析法(LC/MS/MS)を電子ス
プレーイオン化プローブの付いたLCQ(Finnigan Corp.,San Jose,CA)イオン
トラップ質量分析システムで実施した。試料を移動相に懸濁させ、4分の一勾配
ポンプ、LUNA C18−2(150×2mm、5μm)カラム(Phenomenex
, Torrance, CA)及び走査UV/VIS吸収検出計からなるHPLC構成部品(
Thermo Separation Products, San Jose, CA)中に注入した。カラムをメタノー
ル/水/酢酸(65/35/0.01、v/v/v)で20分間0.2ml/分
で無勾配で、次いで99.99/0.01メタノール/酢酸(v/v)への20
分間の直線勾配で溶離させた。質量スペクトルを、5kVに設定したスプレー電
圧で陰イオンモード、250℃に加熱した毛細管及び350msの最大イオン注
入時間で記録した。選択されたイオンモニター(SIM)質量スペクトルを分子
アニオン([M−H]-)について生成物のイオンスペクトル(MS/MS)を
記録して、溶離期間中m/z315〜360間で測定した。
【0023】 統計的分析 結果は平均±SEMとして表し、スチューデントのt−試験を統計的に有意と
考えられるP値<0.05で実施した。
【0024】 結果及び考察 トランスジェニックマウスを、(Yokomizo,T.,Izumi,T.,Chang,K.,Takuwa,Y.
and Shimizu,T.1997. A G-protein-coupled receptor for leukotriene B4 that
mediates chemotaxis. Nature 387:620-624)で報告された配列を使用して、(
Funk C.D.1999.In “molecular and Cellular Basis of Inflammation" (eds.C
.N.Serhan and P.A.Ward) Lipid-mediator-deficient mice in models of infla
mmation,pp.109-125. Human Press,Totowa,NJ)におけるようなLTB4結合及び
信号発信を示すレチノイド酸分化HL−60細胞からクローニングしたヒトBL
TRにより、これらの実験のために準備した。このBLTRトランスジェニック
遺伝子を、(Dziennis,S.,Van Etten,R.A.,Pahl,H.L.,Morris,D.L.,Rothstein,T
.L. et al. 1995. The CDIIb promoter directs high-level expression of rep
orter genes in macrophages in transgenic mice. Blood 85:319-329)におけ
るように、白血球中に高度に異型の遺伝子発現を誘導するCDIIbプロモーター
(図1A)のコントロール下に置いた。クローンを確認するために、ヒト胚の腎
臓細胞(HEK293)をhBLTRのcDNA(pGL−CDIIb−hBLT
R)でトランスフェクションさせた。これらの細胞は特異的[3H]−LTB4
合及び、細胞内Ca2+のリガンド刺激移動(図1A)の両方を示し、hBLTR
トランスジェニックマウスを準備するためのその使用の適確性を示している。正
のhBLTRトランスジェニックマウスから腹腔白血球浸潤物(カゼイン誘発腹
膜炎から)を採取し、年令及び種の合致した野生タイプ(wt)に比較してBL
TRメッセージレベルの〜7倍の増加を示し(図1B、挿入図)、hBLTRト
ランスジェニック遺伝子(transgene)が事実、発現し、総BLTR発現が劇的
に増加したことを示す。興味深いことには、これらのhBLTRトランスジェニ
ックマウスは健康で、特別のチャレンジ(下記を参照されたい)の不在下で、明
白な大きな病理学的所見をもたないように見えた。
【0025】 マウスの耳の皮膚に局所投与したLTB4は急性の皮膚の炎症反応においてP
MN流入及び微小膿瘍を誘発する(Takano,T.,Clish,C.B.,Gronert,K.,Petasis,
N.A. and Serhan C.N. 1997. Neutrophil-mediated changes in vascular perme
ability are inhibited by topical application of aspirin-triggered 15-epi
-lipoxin A4 and novel lipoxin B4 stable analogues. J. Clin. Invest. 101:
819-826)。本発明のトランスジェニックマウスは皮膚中へのPMN浸潤の著し
い増加(7.4±0.9倍)をもたらし(図1B)、一方wtの反応はビヒクル
の対照に比較して3.2±0.5倍だけ増加した。著しく対照的には、LTB4
の天然の前駆体すなわちアラキドン酸(10μg)、又はタンパク質キナーゼC
の直接的拮抗物フォルボール12−ミリスタート13−アセタート(100ng
)のいづれかによる耳の皮膚へのPMN浸潤はhBLTRトランスジェニックマ
ウスにおいて増加しなかった。両方の薬剤は耳の皮膚の組織構造を破壊しないレ
ベルで投与された。これらの所見は、hBLTRが機能的に発現し、皮膚におけ
るLTB4誘発PMN微小膿瘍の形成の著しい増幅と直接相関したことを示して
いる。
【0026】 LXA4がこの増幅されたLTB4−BLTR信号送信経路を調節するかどうか
、そしてこれらのBLTRトランスジェニックマウスがwtマウスのようにLX
4に反応するかどうかを決定するために、早急な不活性化に抵抗し、LXA4
作用を模倣する安定なLX類似体(LXA4類似テンプレート構造体に対しては
図1Cの挿入図を参照されたい)をPMN流通を調節するその能力につき試験し
た(Serhan,C.N.1997. Lipoxins and novel apririn-triggered 15-epi-lipoxin
s (ATL) Prostaglandins 53:107-137;Takano,T.,Clish,C.B.,Gronert,K.,Petasi
s,N.A. and Serhan C.N. 1997. Neutrophil-mediated changes in vascular per
meability are inhibited by topical application of aspirin-triggered 15-e
pi-lipoxin A4 and novel lipoxin B4 stable analogues. J. Clin. Invest. 10
1:819-826)。hBLTRトランスジェニックマウスの過剰PMN浸潤にもかか
わらず、LXA4安定な類似体の局所的投与はPMN浸潤を明白に抑制すること
ができた(図1C、n=3からの代表的データ)。wtマウスに対するhBLT
Rトランスジェニックマウスにおける抑制百分率(〜45%対〜37%)は有意
差であるとは証明されなかった。更に、大きさにおいては、LXA4の安定な類
似体は、これらの穿孔生検からの白血球ミエロペルオキシダーゼ(MPO)活性
を目盛り合わせして、PMNの総数に変換する時に明白なように、wtマウスに
おけるよりもhBLTRトランスジェニックマウスにおいて3倍も多数のPMN
の浸潤を抑制した(図1C)。ALXRのメッセージレベルの明白な増加は認め
られなかった。従って、LXA4及びALXRはインビボのBLTR調節のため
の強力な系を構成する。BLTR又は、安定なトランスフェクション物質として
ALXRと一緒にBLTRを発現するHEK293細胞における特異的結合及び
信号発信が試験された。LXA4は[3H]−LTB4結合体と競合せず(図1D
)、LXA4又はその類似体はLTB4−惹起細胞外酸性化速度にも影響を与えな
かった(図1E)(Gronert,K.,Colgan,S.P. and Serhan C.N. 1998. Character
ization of human neutrophil and endothelial cell ligand-operated extrace
llular acidification rate by microphysiometry: impace of reoxygenation. J.Phar.Exp.Ther .285:252-261)。従って、ALXR活性化は指標のLTB4−B
LTR認識物である信号の形質導入成分を抑制する。
【0027】 虚血−再潅流は主要な臨床的重要性をもつ事例である。再潅流傷害におけるB
LTR及びLT両者の形成の寄与を評価するために、5−LO欠乏及びhBLT
Rトランスジェニックマウス(図2A及びB)の両者で、二次的器官傷害の後肢
止血モデルを使用した(Goldman,G.,Welbourn,R.,Klausner,J.M.,Kobzik,L.,Val
eri,C.R. et al. 1992. Mast cells and leukotrienes mediate neutrophil seq
uestration and lung edema after remote ischemia in rodents. Surgery 112:
578-586)。ヒトにおいて、手術に基づいたクランプ手順が異型のPMN活性化
をもたらして、より長期の入院の原因となる二次的器官傷害をもたらすことは周
知である(Gelman,S.1995. The pathophysiology of aortic cross-clamping an
d unclamping. Anesthesiology 82:1026-1060)。5−LO(+/+)及び(−
/−)マウスは、疑似処理マウス(図2A)に比較して、肺中への白血球蓄積を
それぞれ〜10倍及び〜5倍の増加をもたらし、5−LO誘導生成物(例えばL
TB4、図3の挿入図を参照されたい)が後肢虚血−再潅流後の肺中へのPMN
補充の主要な媒介物質であることを示した。薬理学的証拠は、マウス及びラット
における虚血−再潅流−誘導の二次的器官傷害における一成分として、LTB4
を示唆した(Goldman,G.,Welbourn,R.,Klausner,J.M.,Kobzik,L.,Valeri,C.R. e
t al. 1992. Mast cells and leukotrienes mediate neutrophil sequestration
and lung edema after remote ischemia in rodents. Surgery 112:578-586; S
eekamp,A. and Ward,P.A.1993. Ischemia-reperfusion injury. Agents Actions
(Suppl.)41:137-152)。5−LO(−/−)マウスのPMN補充を伴う結果は
また、PMN補充が内因性LTB4形成の不在下で起こるので(図2A)、C5
a、I−8及びPAFのような他の媒介物質の寄与を示した(Gronert,K.,Colga
n,S.P. and Serhan C.N. 1998. Characterization of human neutrophil and en
dothelial cell ligand-operated extracellular accidification rate by micr
ophysiometry: impace of reoxygenation. J.Phar.Exp.Ther.285:252-261)。h
BLTRトランスジェニックマウスはまた、wtマウスに比較して、再潅流後の
肺中へのPMN浸潤の劇的な増加を示した(図2B)。これらの遺伝子操作され
たマウス、すなわち5−LO欠乏及びhBLTRトランスジェニックマウスから
の結果を合わせると、BLTR及びLT両者の形成の高められた様相は虚血−再
潅流に誘起された二次的器官傷害において重要な事例であり、従って、手術時の
処置の更なる考慮のための可能な治療の標的であることを示す。
【0028】 PMN誘導の反応を調節するためのLXA4の能力を考慮すると、LXA4が虚
血−再潅流期間に生成されるかどうか、そしてそれがトランスジェニック増幅B
LTR信号発信に影響を有するかどうかを決定することは興味深い(Serhan,C.N
.1997. Lipoxins and novel apririn-triggered 15-epi-lipoxins(ATL) Prostag landins 53:107-137)。後肢虚血マウスは肺中の内因性LXA4量の増加を示し
、止血帯の取り外し(再潅流)が更にこれらのレベルを増加させた(図2C)。
従って、アスピリン−引金LXA4(ATL)類似体(15−エピ−LXA4類似
体のテンプレート構造物については図2Dの挿入図を参照されたい)が、後肢虚
血−再潅流の前にhBLTRトランスジェニックマウスへの静脈内注射により投
与された。ATLの投与は、ビヒクルのみを注射したhBLTRトランスジェニ
ックマウスに比較すると、肺中へのPMN浸潤を著しく減少させた(図2D)。
従って、虚血組織内のLXA4形成及び再潅流によるその上昇はPMNの流通及
びPMN媒介の損傷を制限するための内因性の代償的又は防御的役割を表すかも
知れない。これは、BLTR−誘起PMN浸潤を減衰させる、虚血−再潅流の前
のATXR拮抗体(例えば、内因性LXA4よりも持続性のATL安定類似体、
を参照されたい)の血管内注射による結果により支持される(Serhan,C.N.1997.
Lipoxins and novel apririn-triggered 15-epi-lipoxins (ATL) Prostaglandi ns 53:107-137;Takano,T.,Clish,C.B.,Gronert,K.,Petasis,N.A. and Serhan C
.N. 1997. Neutrophil-mediated changes in vascular permeability are inhib
ited by topical application of aspirin-triggered 15-epi-lipoxin A4 and n
ovel lipoxin B4 stable analogues. J. Clin. Invest. 101:819-826)。更に、
ATLは5−LO(−/−)又はBLTRトランスジェニックマウスのいずれか
において認めたPMN浸潤を、大体相反的レベル(40〜60%変化)で抑制し
たので(図2A、B及びD)、それらの相反性はこれらの遺伝子的に規定された
マウスにおけるLXA4−LTB4調節系の重要性を強調している。
【0029】 興味深いことには、BLTRトランスジェニックマウスにおいては、組織的な
液体クロマトグラフィー−タンデム型質量分析法(LC/MS/MS)に基づい
た分析を使用して、5−HETE(図3A)(5−LOの生成物、図3Bの挿
入図を参照されたい)の生成は、wtに比較して(図3B)腹膜の炎症の浸潤物
中で選択的にそして劇的に上昇したことを認めた。それに比較して、15−H
ETE,12−HETE(図3B)又はLTB4を含む主要なリポオキシゲナ
ーゼ経路からの他のモノ−HETEの量には有意差を認めなかった。5−HE
TEはまた、LTB4よりは弱いが、PMN化学吸引物であることは注目に値す
る(Capodici,C.,Pillinger,M.H.,Han,G.,Philips,M.R. and Weissmann,G.1998.
Integrin-dependent homotypic adhesion of neutrophils. Arachidonic acid
activates Raf-1/Mek/Erk via a 5-lipoxygenase-dependent pathway. J.Clin.I nvest . 102:165-174)。腹腔白血球内の5−LO転写の発現はhBLTRトラン
スジェニックマウスにおいて〜3.5倍高い(図3B、挿入図)。BLTRトラ
ンスジェニックマウスにおいてLTB4でなく5−HETEに認められた増加
は、このモデルの増加したLTB4使用及び消失(すなわち、更なる代謝)を反
映している可能性がある。シクロオキシゲナーゼ−2のメッセージレベルの明白
な増加は認めなかった。更に、シクロオキシゲナーゼ生成物(例えば、プロスタ
グランジンE2)の著しい上昇はLC/MS/MS分析では認めなかった。従っ
て、BLTRの過剰発現はインビボで明白な5−LO遺伝子転写のレベルで作用
することにより前炎症ネットワークを特異的に上昇させ(図3B)、5−LO経
路内のこの正のフィードバックを広範囲の疾病状態において操作可能である可能
性があろうことを示唆している。
【0030】 この所見はBLTRの過剰発現が急性の皮膚の炎症、腹膜炎及び再潅流−誘発
の二次的器官損傷のネズミモデルにおけるPMNの補充、機能及び5−LO信号
発信を著しく増幅することの第1の証明を提供する。更に、研究のこれらの独立
した結果を総合すると、PMN活性化の調節及び5−LO経路の調節増強におけ
るBLTR発現のインビボの役割に対する第1の直接的証明を提供する。更に、
それらは宿主の反応並びに虚血−再潅流における重要な調節段階としての受容体
の発現の影響を強調しており、ヒトの免疫機能の調節に関係しているサイトカイ
ンによるALXR(Gronert,K.,Gewirtz,A.,Madara,J.L. and Serhan,C.N.1998.
Identification of a human enterocyte lipoxin A4 receptor that is regula
ted by interleukin(IK)-13 and interferon γ and inhibits tumor necrosis
factor α-induced IL-8 release. J.Exp.Med.187:1285-1294)及びBLTR(H
uang,W-W.,Garcia-Zepeda,E.A.,Sauty,A.,Ottegen,H.C.,Rothenberg,M.E. et al
. 1998. Molecular and biological characterization of the murine leukotri
ene B4 receptor expressed on eosinophils. J.Exp.Med.188:1063-1074)の発
現の調節と一致している。更に、これらの結果は、過剰なPMN浸潤及び活性化
を特徴とし、それらにより悪化される炎症性疾患及び再潅流−関連の傷害の事例
を選択的に調節するための、調節信号拮抗体、すなわちALXR拮抗体及び安定
なアスピリン−引金LXの使用に対する新規な道筋を開く。
【0031】
【表1】
【0032】
【表2】
【0033】 当業者の一人は前記の態様に基づいた本発明の更なる特徴物及び利点を認識す
るであろう。従って、本発明は付記の特許請求の範囲に示されたものを除いて、
具体的に示され、説明されたものにより制約はされない。本明細書に引用された
すべての刊行物及び参考文献は発明の背景の節に引用されたものを含み、それら
の全体を引用により本明細書に特に取り入れている。
【図面の簡単な説明】
【図1】 LXA4の局所投与がLTB4−BLTRの認識を妨げずにhBLTRトランス
ジェニックマウスのPMN浸潤を抑制することを示す。(A)pGL−CDIIb
−hBLTR及び偽物(pGL)のプラスミドをHEK293細胞中に一時的に
トランスフェクションさせ、細胞内Ca2+をLTB4(100nM)の添加によ
り移動させた。(B)LTB4(1μg)をwtマウス(影線棒)及びトランス
ジェニックマウス(充填棒)の右耳に局所投与した。左耳はビヒクルのみ(アセ
トン)を受けた。耳の皮膚の生検試料をMPO分析のために採取し、その値はビ
ヒクルの対照より倍の増加を示す(*p<0.01、wtに対してn=7、そし
てTG−hBLTRに対してn=10)。wt及びhBLTRトランスジェニッ
クマウスのBLTR発現は矢印(挿入図)により示されるように〜0.5kbに
おいて期待されたバンドを与えたhBLTR−III及びhBLTR−VIIIプライ
マーを使用してRT−PCRにより分析した。(C)LXA4の安定な類似体(
10μg)16−フェノキシ−LXA4(挿入図:LXA4類似テンプレートR2
=フェノキシ)をwt及びhBLTRトランスジェニックマウス(灰色)の右耳
に局所投与した。左耳はビヒクルのみ(黒)を受けた。次いで、5分後にLTB 4 (1μg)を各マウスの両耳に投与した。皮膚の生検を前記のように得た。値
は耳の皮膚中へのPMN浸潤物総数を表す(n=3からの代表的データ)。(D
)BLTRで安定にトランスフェクションしたHEK293細胞において、LT
4(正方形、構造が示されている)、LXA4(菱形)又はLXB4(丸)によ
る特異的[3H]−LTB4結合の置き換えを決定した。(E)LXA4及びLT
4に反応する細胞外酸性化速度(EAR)を、BLTR及びALXR(安定な
トランスフェクション物質)を含むHEK293細胞においてCytosensor微量物
理学測定により分析した。細胞をLTB4(1μM)にさらす20分前にLXA4 (1μM、中空円)又は溶媒のみ(充填円)にさらした。値は基底線(100%
)に標準を合わせたEAR(μV/s)として表され、リガンドの添加は矢印で
示されている。
【図2】 5−LO経路及びBLTRが後肢虚血−再潅流後の肺中へのPMN浸潤の主要
な決定因子であることを示す:アスピリン−引金LXA4による抑制。(A)5
−LO(−/−)及び(+/+)、並びに(B)hBLTRトランスジェニック
及びwtマウスを後肢虚血−再潅流にさらした。左肺を採取した。MPO活性を
決定し、データを(A)2種の別々の実験から、対照動物(虚血のみ)に比較し
た肺PMN浸潤物中の増加倍数及び(B)虚血−再潅流後の肺中のPMN浸潤物
の総数として表している。hBLTRトランスジェニック及びwtマウスから得
たPMN総数は有意差を有した(*p=0.02、n=3)。(C)バルビニア
/cマウスを虚血−再潅流(〜0.8ng、充填棒)又は虚血のみ(〜0.5n
g、影線棒)にさらした。後肢の止血帯を取り外し後、再潅流を伴って又は伴わ
ずに左肺を採取した。各肺組織内に存在したLXA4をELISA(Neogen, Lex
ington, KY)又はLC/MS/MSにより定量した。(D)hBLTRトランス
ジェニックマウスにビヒクル(影線棒)又はATL類似体(10μg、挿入図:
ATL類似テンプレートR2=パラ−フルオロ−フェノキシ)(充填棒)を注射
した。白血球MPO値を虚血−再潅流後に各マウスの左肺から得て、肺PMN浸
潤の抑制百分率で表した。ATL類似体を受けたマウス対ビヒクルのみ(〜12
×105PMN)を受けたマウスからの値は有意差を有した(*p=0.04,
n=3)。
【図3】 hBLTRトランスジェニックマウスの正のフィードバックループを表す:5
−LO転写物及び5−HETEは腹膜炎において調節されない。(A)5
HETEのMS/MSスペクトル。カゼイン誘起腹膜炎からの腹膜の白血球を採
取し、LC/MS/MSにより分析した。5−HETEのm/z319におけ
るSIMクロマトグラム並びにMS/MSスペクトルをFinniganLCQ LC/
MS/MSで得た。5−HETEをm/z=319(),301(−H2
O)、275()、257(−H2O)及び115()におけるその診断
用MS/MS生成イオンにより同定した。(B)wt(影線棒)及びhBLTR
トランスジェニックマウス(充填棒)における5−HETE、15−HET
E及び12−HETEのレベルをLC/MS/MSにより定量し、pg/5×
105腹腔浸潤白血球で表した(*p<0.01、n=3)。wt及びhBLT
Rトランスジェニックマウスの浸潤白血球からの総RNAを単離し、矢印(挿入
図)により示した〜0.3kbにおける期待された帯を与えたマウスの5−LO
特異性プライマーを使用してRT−PCRにより分析した。
【手続補正書】特許協力条約第34条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成13年5月10日(2001.5.10)
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 FI テーマコート゛(参考) G01N 33/15 C12N 15/00 ZNAA 33/50 5/00 B Fターム(参考) 2G045 AA40 4B024 AA01 AA11 BA63 CA04 CA20 DA02 DA03 EA04 FA02 FA06 FA18 GA11 GA12 HA11 4B063 QA05 QQ21 QQ41 QQ61 QQ89 QR77 QR80 QX10 4B064 AG20 CA10 CA19 CC01 CC24 DA01 DA13 4B065 AA91X AA93X AA93Y AB01 AC14 BA02 BA04 CA24 CA43 CA44 CA46

Claims (21)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 白血球内に、ヒト・ロイコトリエンB4受容体(BLTR)
    の生理活性を有する組み換えヒトのBLTRを生産する非ヒトトランスジェニッ
    ク哺乳動物であって、 (A) BLTR特異性のプロモーターを含む5’発現調節配列、 (B) 前記BLTR及び、前記トランスジェニック哺乳動物の白血球中に前記
    BLTRの過剰発現を誘導するために有効なシグナル配列をコードするDNA、
    並びに (C) 前記白血球中に前記DNAの過剰発現をもたらす3’調節配列、 を含んで成る外来の遺伝子構造物を前記トランスジェニック哺乳動物ゲノム中に
    安定に組み込んでおり、かつ、 前記トランスジェニック哺乳動物における前記白血球中の前記BLTRの生産
    及びその過剰発現が得られるように(A)、(B)及び(C)は前記遺伝子構造
    物中で操作可能に連結されている、非トランスジェニック哺乳動物。
  2. 【請求項2】 前記トランスジェニック哺乳動物がヒトBLTRを生産する
    、請求項1記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
  3. 【請求項3】 前記ヒトBLTRがヒトBLTRのアミノ酸配列を有する、
    請求項2記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
  4. 【請求項4】 前記哺乳動物がマウス、ラット、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤ
    ギ又はウシからなる群から選択される、請求項1記載の非ヒトトランスジェニッ
    ク哺乳動物。
  5. 【請求項5】 前記哺乳動物が雌である、請求項1記載の非ヒトトランスジ
    ェニック哺乳動物。
  6. 【請求項6】 (a)(A) BLTR特異性プロモーターを含む5’発現
    調節配列、 (B) 前記BLTR及び、前記トランスジェニック哺乳動物の白血球中に前記
    BLTRの過剰発現を誘導するために有効なシグナル配列をコードするDNA、
    及び (C) 前記白血球中に前記DNAの過剰発現をもたらす3’調節配列、 を含んで成る外来の遺伝子構造物をゲノム中に組み込んでいる非ヒトトランスジ
    ェニック哺乳動物を提供する段階、[ここで、前記トランスジェニック哺乳動物
    における前記白血球中の前記BLTRの生産及びその過剰発現が得られるように
    (A)、(B)及び(C)は前記遺伝子構造物中で操作可能に結合されておる。
    ]、並びに (b) 前記BLTRを前記トランスジェニック哺乳動物の前記白血球中に過剰
    発現させ、分泌させる段階、 を含んで成る、ヒトBLTRの生理活性を有する組み換えヒトBLTRの生産法
  7. 【請求項7】 前記トランスジェニック哺乳動物がヒトBLTRを生産する
    、請求項6記載の方法。
  8. 【請求項8】 前記ヒトBLTRがヒトBLTRのアミノ酸配列を有する、
    請求項7記載の方法。
  9. 【請求項9】 前記哺乳動物がマウス、ラット、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤ
    ギ又はウシからなる群から選択される、請求項6記載の方法。
  10. 【請求項10】 前記哺乳動物が雌である、請求項6記載の方法。
  11. 【請求項11】 (a)(A) BLTR特異性プロモーターを含む5’発
    現調節配列、 (B) 前記BLTR及び、前記トランスジェニック哺乳動物の白血球中に前記
    BLTRの過剰発現を誘導するために有効なシグナル配列をコードするDNA、
    並びに (C) 前記白血球中に前記DNAの過剰発現をもたらす3’調節配列、 を含んで成る外来の遺伝子構造物を提供する段階[ここで、前記トランスジェニ
    ック哺乳動物における前記白血球中の前記BLTRの生産及びその過剰発現が得
    られるように(A)、(B)及び(C)は前記遺伝子構造物中で操作可能に連結
    されておる。]、 (b) 非ヒト哺乳動物の胚内に段階(a)の構造物を導入する段階(ここで、
    前記構造物は前記哺乳動物の胚のゲノム中に安定に組み込まれる。)、 (c) 前記胚を非ヒトトランスジェニック哺乳動物中に発育させる段階、並び
    に (d) (c)の非ヒトトランスジェニック哺乳動物がBLTRを生産するかど
    うかを決定する段階、 を含んで成る、白血球中に、ヒトBLTRの生理活性を有する組み換えヒト・ロ
    イコトリエンB4受容体(BLTR)を生産する非ヒトトランスジェニック哺乳
    動物を生産する方法。
  12. 【請求項12】 前記トランスジェニック哺乳動物がヒトBLTRを生産す
    る、請求項11記載の方法。
  13. 【請求項13】 前記ヒトBLTRがヒトBLTRのアミノ酸配列を有する
    、請求項12記載の方法。
  14. 【請求項14】 前記哺乳動物がマウス、ラット、ウサギ、ブタ、ヒツジ、
    ヤギ又はウシからなる群から選択される、請求項11記載の方法。
  15. 【請求項15】 前記哺乳動物が雌である、請求項11記載の方法。
  16. 【請求項16】 (a)(A) BLTR特異性プロモーターを含む5’発
    現調節配列、 (B) 前記BLTR及び、前記トランスジェニック哺乳動物の白血球中に前記
    BLTRの過剰発現を誘導するために有効なシグナル配列をコードするDNA、
    並びに (C) 前記白血球中に前記DNAの過剰発現をもたらす3’調節配列、 を含んで成る外来の遺伝子構造物をゲノム中に組み込んでいる非ヒトトランスジ
    ェニック哺乳動物を提供する段階[ここで、前記トランスジェニック哺乳動物に
    おける前記白血球中の前記BLTRの生産及びその過剰発現が得られるように(
    A)、(B)及び(C)は前記遺伝子構造物中で操作可能に連結されておる。]
    、 (b) 前記BLTRを前記トランスジェニック哺乳動物の前記白血球中に過剰
    発現させ、分泌させる段階、 (c) 前記トランスジェニック哺乳動物に生理学的にストレスをかけ、それに
    より前記白血球に好中球の増加した補充を誘起する段階、 (d) 前記ストレスに反応する前記好中球の補充と相互作用させるために治療
    的に有効量の化合物を投与する段階、並びに (e) 前記化合物が前記トランスジェニック哺乳動物の前記白血球中の好中球
    の活性化を減少させるかどうかを決定する段階、 を含んで成る、白血球中に、ヒトBLTRの生理活性を有する組み換えヒト・ロ
    イコトリエンB4受容体(BLTR)を生産する非ヒトトランスジェニック哺乳
    動物における多形核白血球生産を抑制する化合物をスクリーニングするための方
    法。
  17. 【請求項17】 前記トランスジェニック哺乳動物がヒトBLTRを生産す
    る、請求項16記載の方法。
  18. 【請求項18】 前記ヒトBLTRがヒトBLTRのアミノ酸配列を有する
    、請求項17記載の方法。
  19. 【請求項19】 前記哺乳動物がマウス、ラット、ウサギ、ブタ、ヒツジ、
    ヤギ又はウシからなる群から選択される、請求項16記載の方法。
  20. 【請求項20】 前記哺乳動物が雌である、請求項16記載の方法。
  21. 【請求項21】 段階(d)が段階(c)の前に実施され、それにより好中
    球の活性化が予防される、請求項16記載の方法。
JP2000604675A 1999-03-18 2000-03-14 ロイコトリエンb4受容体のトランスジェニック哺乳動物 Pending JP2003505009A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12519699P 1999-03-18 1999-03-18
US60/125,196 1999-03-18
PCT/US2000/006733 WO2000054580A2 (en) 1999-03-18 2000-03-14 Leukotriene b4 receptor transgenic mammals

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2003505009A true JP2003505009A (ja) 2003-02-12

Family

ID=22418614

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2000604675A Pending JP2003505009A (ja) 1999-03-18 2000-03-14 ロイコトリエンb4受容体のトランスジェニック哺乳動物

Country Status (7)

Country Link
US (2) US6271435B1 (ja)
EP (1) EP1165809A2 (ja)
JP (1) JP2003505009A (ja)
AU (1) AU4010100A (ja)
CA (1) CA2367160A1 (ja)
HK (1) HK1043387A1 (ja)
WO (1) WO2000054580A2 (ja)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6670396B2 (en) 2000-02-16 2003-12-30 Brigham And Women's Hospital Aspirin-triggered lipid mediators
US7700650B2 (en) 2000-03-20 2010-04-20 Trustees Of Boston University Lipoxin analogs and method for the treatment of periodontal disease
EP1404713A4 (en) * 2001-05-24 2004-09-22 Human Dna Technology Inc NEW KERATINOCYTE GROWTH FACTOR 2 ANALOG IN HAIR FOLLICULES
US8481772B2 (en) 2002-04-01 2013-07-09 University Of Southern California Trihydroxy polyunsaturated eicosanoid derivatives
US7902257B2 (en) * 2002-04-01 2011-03-08 University Of Southern California Trihydroxy polyunsaturated eicosanoid
US7759395B2 (en) * 2002-08-12 2010-07-20 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Use of docosatrienes, resolvins and their stable analogs in the treatment of airway diseases and asthma
HUE041471T2 (hu) * 2002-08-12 2019-05-28 Brigham & Womens Hospital Rezolvinok: Biotemplátok terápiás beavatkozásokhoz
WO2004078143A2 (en) * 2003-03-05 2004-09-16 The Brigham And Women's Hospital Inc. Methods for identification and uses of anti-inflammatory receptors for eicosapentaenoic acid analogs
WO2005105025A1 (en) * 2004-04-14 2005-11-10 Boston University Methods and compositions for preventing or treating periodontal diseases
WO2007041440A2 (en) * 2005-10-03 2007-04-12 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Anti-inflammatory actions of neuroprotectin d1/protectin d1 and its natural stereoisomers
JP2009515991A (ja) * 2005-11-18 2009-04-16 トラスティーズ オブ ボストン ユニバーシティ レゾルビンを使用する骨喪失の処置および防止

Also Published As

Publication number Publication date
WO2000054580A3 (en) 2001-01-25
HK1043387A1 (zh) 2002-09-13
CA2367160A1 (en) 2000-09-21
US6455755B2 (en) 2002-09-24
US20010023500A1 (en) 2001-09-20
EP1165809A2 (en) 2002-01-02
AU4010100A (en) 2000-10-04
US6271435B1 (en) 2001-08-07
WO2000054580A2 (en) 2000-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Chiang et al. Leukotriene B 4 receptor transgenic mice reveal novel protective roles for lipoxins and aspirin-triggered lipoxins in reperfusion
Giesige et al. AAV-mediated follistatin gene therapy improves functional outcomes in the TIC-DUX4 mouse model of FSHD
Dobrzynski et al. Adrenomedullin gene delivery attenuates hypertension, cardiac remodeling, and renal injury in deoxycorticosterone acetate-salt hypertensive rats
Poynter et al. A prominent role for airway epithelial NF-κB activation in lipopolysaccharide-induced airway inflammation
US20020138855A1 (en) Non-invasive evaluation of physiological response in a mammal
EP0710283A1 (en) EXPRESSION OF HUMAN INTERLEUKIN-1$g(b) IN A TRANSGENIC ANIMAL
CA2247517A1 (fr) Recepteur nucleaire de glucocorticoides modifie, proteine de fusion, fragments d'adn codant pour ledit recepteur et ladite proteine de fusion
JP2003505009A (ja) ロイコトリエンb4受容体のトランスジェニック哺乳動物
Delaloy et al. Deletion of WNK1 first intron results in misregulation of both isoforms in renal and extrarenal tissues
US7807864B2 (en) Transgenic animal as a model for fibrotic diseases
WO1992006104A1 (en) Adipocyte-specific dna sequences and use for the production of transgenic animals exhibiting altered fat metabolism
Yokoi et al. Podocyte-specific expression of tamoxifen-inducible Cre recombinase in mice
US11882816B2 (en) Genetically engineered non-human mammal, construction method therefor and use thereof
KR101894670B1 (ko) RORα에 의한 PPARγ 매개된 전사 활성 억제를 통한 간 지질대사 조절 장애 치료제 스크리닝 방법
US20110203008A1 (en) Transgenic mouse for screening and for studies of the pharmacodynamics and pharmacokinetics of ligands acting on the oestrogen receptor and its intracellular receptors, and method for the preparation thereof
JP4778446B2 (ja) 乾癬及び乾癬性関節炎のためのマウスモデル
Kong et al. Multi‑transgenic minipig models exhibiting potential for hepatic insulin resistance and pancreatic apoptosis
JP5250810B2 (ja) ユートロフィン遺伝子発現増強物質のスクリーニング
US20230365988A1 (en) Mouse model for bio-imaging of inflammatory signals, preparation method therefor and use thereof
JP4177667B2 (ja) トランスジェニック動物の乳内における、導入遺伝子の、位置に依存しない組織特異的な発現
JP2006506968A (ja) アグーチ関連蛋白質欠損細胞、非ヒトトランスジェニック動物及びエネルギー代謝を調節する化合物の選択方法
US20030028910A1 (en) Non-human transgenic animal whose germ cells and somatic cells contain a knockout mutation in DNA encoding orphan nuclear receptor ERRalpha
Jung et al. Generation of porcine fibroblasts overexpressing 11β‑HSD1 with adipose tissue‑specific aP2 promoter as a porcine model of metabolic syndrome
JP2006314242A (ja) 哺乳動物由来の変異sdhc遺伝子を有する遺伝子組み換え動物
JP2023031064A (ja) 肝線維化モデルマウス

Legal Events

Date Code Title Description
A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20061024

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20070320