JP2003210158A

JP2003210158A - 微生物濃縮方法

Info

Publication number: JP2003210158A
Application number: JP2002015201A
Authority: JP
Inventors: Hajime Kono; 源河野; Hiroaki Inoue; 浩章井上
Original assignee: Aquas Corp
Current assignee: Aquas Corp
Priority date: 2002-01-24
Filing date: 2002-01-24
Publication date: 2003-07-29

Abstract

(57)【要約】【課題】試料中の微生物を生菌として濃縮する方法に
おいて、遠心分離操作や膜分離操作等を必要とせず、し
かも低コストで省エネルギーに有効であり、且つ簡便で
汎用性のある微生物濃縮方法を提供すること。【解決手段】試料中の微生物を磁性体粒子に吸着さ
せ、磁石を利用した磁気分離を行う吸着・磁気分離工程
と、前記磁性体粒子に吸着された微生物を脱離処理液で
脱離し生菌を回収する脱離工程とを有することを特徴と
する微生物濃縮方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、微生物濃縮方法に
関し、詳しくは、遠心分離操作や膜分離操作等を必要と
せず、しかも低コストでエネルギー消費が少なく、且つ
簡便で汎用性のある微生物濃縮方法に関するものであ
る。本発明において、微生物濃縮方法とは、環境水等、
一般に菌数の少ない試料中の微生物の検査等にあたり、
試料中の微生物濃度を上げるために、微生物を生きた状
態で（生菌として）濃縮する方法を言う。

【０００２】

【従来の技術】近年、冷却塔用冷却水、下水処理水、排
水処理水、温浴水、河川水などの環境水中に生存してい
る微生物の中には、ヒト・動物への感染等で人間社会へ
の影響が懸念される細菌やウイルスなどの微生物が存在
することが知られるようになり、その検査の重要性が認
識されると共に、新しい検査技術の開発が求められてい
る。

【０００３】しかし、これら環境水中の微生物の多くは
菌数が少なく、微生物濃度を上げるための濃縮操作が必
要とされるが、微生物は粒径が小さいため、一般の水処
理に用いられる固液分離技術の中で、水中の微生物濃縮
に適用できる技術は限られている。重力式分離法では、
微生物は粒径も小さく、また比重も水に近いため、自然
沈降による分離は困難であり、凝集沈殿法や遠心分離法
が用いられる。一方、ろ過式分離法では、精密ろ過や助
剤ろ過が用いられている。

【０００４】重力式分離法のうち凝集沈殿法は、凝集剤
と微生物が結合して形成されたフロックを脱水機等によ
り濃縮分離する方法であり、主に排水処理の余剰汚泥分
離に使われている。しかし、凝集沈殿法では、濃縮度は
低く、また、分離回収されたフロックから微生物と凝集
剤を分けることは難しく、回収された微生物を他の目的
に使用する場合には、凝集剤の混入が阻害要因になる。

【０００５】一方、重力式分離法のうち遠心分離法は、
遠心力を利用して分離するため、微生物濃度を上げるこ
とも可能であるが、不溶性のＳＳ成分の混入は避けられ
ない。また、高速遠心分離機を使用するため装置コスト
も高く、多くの電気エネルギーを消費するためランニン
グコストも高い。

【０００６】また、ろ過式分離法のうち精密ろ過では、
ろ過材として膜（ＭＦ膜）を用いることが多く、ろ過材
には無機系（セラミック、ガラス）と有機系（酢酸セル
ロース系、ニトロセルロース系、ポリアミド系、ポリス
ルホン等）があり、ろ過方式としては、全量ろ過方式と
クロスフロー方式に分けられるが、ろ過効率が膜面積に
依存することや目詰まりの問題を解決するためのモジュ
ール設計面での工夫が要求される。また、ろ過には加圧
又は減圧のための電気エネルギーを消費する。さらに、
ＭＦ膜は、高価な上、定期的な交換が必要なため、ろ過
剤のコストも無視できない。

【０００７】また、ろ過式分離法のうち助剤ろ過は、パ
ン酵母等の比較的大きい微生物の分離には使用できるも
のの、細菌のように小さい微生物には適用が困難であ
り、また、ろ過機を使用するため、電気エネルギーを消
費する。以上述べたように、従来の微生物濃縮法は、操
作性、装置コスト及びエネルギー消費の上で課題が多
い。

【０００８】近年、磁性体粒子を用いる磁気分離法が省
エネルギー・高効率な分離法として注目され、免疫磁気
ビーズによる微生物の分離や、超伝導磁石を用いた余剰
汚泥の分離等が検討されている。

【０００９】しかし、免疫磁気ビーズ法は特異的な微生
物の分離・検出には有効な方法であるが、高価な抗体が
必要であり、ランニングコストも無視できない。また、
微生物の種類に応じた免疫磁気ビーズを準備することが
必要であり、汎用性のある微生物濃縮方法とはいえな
い。また、余剰汚泥の分離では、磁性体粒子の回収に加
熱アルカリ処理や超音波処理が必要であり、生きた状態
での微生物の回収には適用できない。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】このように、従来、微
生物の濃縮方法としては、重力式分離法のうちの遠心分
離法や、ろ過式分離法が多く用いられているが、いずれ
も操作性、コスト及びエネルギー消費の上で問題が多
い。また、従来の磁性体粒子を用いる磁気分離法では、
生きた状態での微生物の回収、コスト及び汎用性の点に
おいて、これらの課題を解決できていない。

【００１１】即ち、現状では、試料中の微生物を生菌と
して濃縮する方法において、遠心分離操作や膜分離操作
等を必要とせず、しかも低コストで省エネルギーに有効
であり（エネルギー消費が少なく）、且つ簡便で汎用性
のある微生物濃縮方法は見出されておらず、これらの課
題を解決する微生物濃縮方法が望まれている。

【００１２】本発明は、このような従来技術の問題点を
悉く解消したものであって、試料中（試料水中）の微生
物を生菌として濃縮する方法において、遠心分離操作や
膜分離操作等を必要とせず、低コストで省エネルギーに
有効であり、且つ簡便で汎用性のある微生物濃縮方法を
提供することを目的とするものである。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するため鋭意検討した結果、種々の微生物が磁性
体粒子に非特異的に吸着するが、その一方で、微生物以
外の不溶成分はほとんど吸着しないこと、更に磁性体粒
子に吸着した微生物をリン酸塩等の脱離処理液で脱離さ
せ生菌として回収できることを見出し、これらの知見に
基づいて本発明を完成するに至った。

【００１４】即ち、請求項１に係る本発明は、試料中の
微生物を磁性体粒子に吸着させ、磁石を利用した磁気分
離を行う吸着・磁気分離工程と、前記磁性体粒子に吸着
された微生物を脱離処理液で脱離し生菌を回収する脱離
工程とを有することを特徴とする微生物濃縮方法を提供
するものである。

【００１５】請求項２に係る本発明は、磁性体粒子が、
四三酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）であることを特徴とする請求
項１記載の微生物濃縮方法を提供するものである。

【００１６】請求項３に係る本発明は、脱離処理液が、
リン酸塩、硫酸塩及びエチレンジアミン四酢酸塩から選
ばれる１種又は２種以上の組合せを含有する塩溶液であ
ることを特徴とする請求項１又は２記載の微生物濃縮方
法を提供するものである。

【００１７】請求項４に係る本発明は、脱離処理液の塩
濃度が、０．１〜２５０m mol/Ｌであることを特徴とす
る請求項１乃至３のいずれかに記載の微生物濃縮方法を
提供するものである。

【００１８】請求項５に係る本発明は、脱離処理液のｐ
Ｈが、５．５以上８．５以下であることを特徴とする請
求項１乃至４のいずれかに記載の微生物濃縮方法を提供
するものである。

【００１９】

【発明の実施の形態】請求項１に係る本発明は微生物濃
縮方法に関し、試料中の微生物を磁性体粒子に吸着さ
せ、磁石を利用した磁気分離を行う吸着・磁気分離工程
と、前記磁性体粒子に吸着された微生物を脱離処理液で
脱離し生菌を回収する脱離工程とを有することを特徴と
するものである。

【００２０】まず、請求項１に係る本発明では、試料中
の微生物を磁性体粒子に吸着させ、磁石を利用した磁気
分離を行う吸着・磁気分離工程を行う。ここで、試料と
しては、微生物を含む試料であれば特に限定されず、例
えば、冷却塔用却水、下水処理水、排水処理水、温浴
水、河川水などの環境水等が挙げられる。また、微生物
の種類は特に限定されず、広く細菌、ウイルス、糸状菌
等を含むものである。

【００２１】この吸着・磁気分離工程においては、ま
ず、上記試料中の微生物を磁性体粒子に吸着させる。こ
こで磁性体粒子の粒径は、磁性体粒子重量あたりの微生
物に対する吸着面積が相対的に増える点で、小さいほど
好ましいが、０．１μｍ以下では磁石への吸着力が低下
するため、０．１μｍ以上、１００μｍ以下であること
が好ましい。このような磁性体粒子としては、磁性を持
つ粒子状の物質であれば特に限定されず、例えばフェラ
イト粒子等を用いることができ、その中でも、請求項２
に記載するように、四三酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）は、入手
しやすく、取扱いが容易な点で好ましい。

【００２２】試料中の微生物を磁性体粒子に吸着させる
方法としては、例えば、試料溶液を磁性体粒子に添加し
て、必要に応じて振とう、撹拌しながら１０分程度接触
させる方法が挙げられる。磁性体粒子は、通常、試料の
容量あたり、０．１〜０．２％程度用いれば十分である
が、これに限定されるものではない。

【００２３】請求項１に係る本発明における吸着・磁気
分離工程において、微生物を吸着させた磁性体粒子の洗
浄操作が必要な場合は、吸着させた微生物を脱離させ
ず、且つ死滅させない条件を選択する必要がある。洗浄
に用いる塩溶液の陰イオンは、磁性体粒子に吸着した微
生物に影響がないように適宜選択する。そのため、洗浄
操作には、塩化物イオン、硫酸イオン及び硝酸イオンか
ら選ばれる１種又は２種以上の陰イオンの組合せを有す
る塩溶液を用いることができる。洗浄操作に用いる塩溶
液は、リン酸塩、エチレンジアミン四酢酸塩などのよう
な、吸着した微生物を磁性体粒子から脱離させる物質を
含有しないことが望ましい。また、洗浄操作に用いる塩
溶液の塩濃度は、微生物を脱離させる性質が発現する濃
度より充分低いことが必要である。

【００２４】吸着・磁気分離工程においては、上述のよ
うに磁性体粒子に微生物を吸着させた後、磁石を利用し
た磁気分離、即ち、磁石を利用して微生物を吸着した磁
性体粒子をその他の不溶成分（非吸着画分、水などの溶
媒等）と分離（磁気分離）する。例えば、磁性流体の入
った容器の外側から磁石を近づけて容器内壁に微生物を
吸着した磁性体粒子を集めておいて、液相を除去するこ
とにより、容易に非吸着画分、水などの溶媒等を除くこ
とができる。

【００２５】請求項１に係る本発明においては、上記し
た如き吸着・磁気分離工程の後、前記磁性体粒子に吸着
された微生物を脱離処理液で脱離し生菌を回収する脱離
工程を行なう。この脱離工程において、磁性体粒子に吸
着した微生物を脱離させるときに用いる脱離処理液とし
ては、請求項３に記載するように、リン酸塩、硫酸塩及
びエチレンジアミン四酢酸塩から選ばれる１種又は２種
以上の組合せを含有する塩溶液が好ましい。これらの中
でも、リン酸塩溶液を脱離処理液として用いることによ
り、特異的に極めて回収率の高い脱離が可能となる。

【００２６】また、脱離処理液の塩濃度は、通常、０．
１m mol/Ｌ以上であり、好ましくは０．１〜２５０m mo
l/Ｌであり、０．４〜２５０m mol/Ｌがとりわけ好まし
い。特にリン酸塩溶液を用いる場合には、０．４〜２５
０m mol/Ｌの範囲で充分な脱離が可能である。また、硫
酸塩溶液を用いる場合には、５０〜２５０m mol/Ｌの範
囲で充分な脱離が可能である。さらに、エチレンジアミ
ン四酢酸塩溶液を用いる場合には、２〜５０m mol/Ｌの
範囲で充分な脱離が可能である。一方、塩濃度の上限と
しては、微生物が死滅しない濃度であることが必要であ
る。

【００２７】なお、エチレンジアミン四酢酸塩溶液を脱
離処理液として用いる場合、生菌としての回収率低下を
避けるため、塩濃度を５０m mol/Ｌ未満とすることが好
ましい。回収率の低下の原因は明らかではないが、エチ
レンジアミン四酢酸塩の濃度が５０m mol/Ｌ以上である
と、微生物の細胞膜や細胞壁の構成成分であるマグネシ
ウムなどの金属が、エチレンジアミン四酢酸塩によって
除去され、その結果、生菌としての回収率が低下するも
のと考えられる。

【００２８】なお、一般に界面活性剤は、担体等に吸着
した細菌を脱離させるのに有効と考えられるが、請求項
１に係る本発明においては、脱離が不充分となる点で、
脱離処理液としては好ましくない。界面活性剤のうち、
最も微生物に対して影響が少ないと思われる非イオン性
界面活性剤の一種であるポリオキシエチレンソルビタン
モノオレート（Polyoxyethylene sorbitan monooleat
e）を、仮に脱離処理液として用いた場合でも、微生物
の回収率は低いものとなってしまう。

【００２９】さらに、脱離処理液のｐＨは、請求項５に
記載するように、５．５以上８．５以下であることが好
ましく、特に好ましい範囲は６．０以上７．５以下であ
る。

【００３０】請求項１に係る本発明は、以上の如き構成
を有するものである。請求項１に係る本発明の微生物濃
縮方法によれば、吸着・磁気分離工程及び脱離工程を経
て、試料中の微生物を充分に濃縮し、生菌として回収す
ることができる。従って、請求項１に係る本発明の微生
物濃縮方法は、例えば、冷却塔水などの環境水等の試料
水中のレジオネラ検査をはじめとする微生物検査や、菌
数が非常に少ない試料中での微生物の遺伝子を検出する
ときなどに適用することが可能である。また、勿論、請
求項１に係る本発明は上記のような環境水中の微生物検
査における予備濃縮への適用の他に、微生物の大量濃縮
の手段として有効なことは、言うまでもない。

【００３１】

【実施例】次に、本発明を実施例により説明するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。

【００３２】実施例１［細菌の磁性体粒子への吸着］磁性体粒子（キシダ化学（株）製「四三酸化鉄」、３２
５メッシュ；以下、「マグネタイト」という。）に対す
る各種細菌の吸着性を以下の方法で評価した。

【００３３】（１）供試細菌供試細菌として、以下の細菌を用いた。・バチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）IAM114
5 ・スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus a
ureus ）IAM1011 ・エシェリヒア・コリ（Escherichia coli ）IAM12119 ・シュードモナス・アエルギノーサ（Pseudomonas aeru
ginosa ）IAM1514 ・レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophi
la ）SG1（環境分離株）・レジオネラ・ドゥモフィー（Legionella dumoffii ）
P4201

【００３４】（２）実験方法５０ｍＬ平底フラスコに、蒸留水３０ｍＬとマグネタイ
ト６０ｍｇ（０．２％）を入れ、１２１℃・１５分条件
でのオートクレーブ滅菌を行ない、上記供試細菌を培養
して調製した菌体懸濁液を、菌数が約１０^４ＣＦＵ／ｍ
Ｌとなるように添加して、振とう培養機で振とうし（１
６０ｒｐｍ、室温）、磁気分離により経時的に非吸着画
分を採取して、残存する細菌数を計測した。

【００３５】（３）結果・考察マグネタイトへの細菌吸着の経時変化をみるためにマグ
ネタイトに吸着せずに残った細菌数を測定した結果を図
１に示した。図１から明らかな通り、いずれの細菌も１
０分間の接触で殆ど１００％がマグネタイトに吸着し
た。従って、マグネタイトへの細菌の吸着は、グラム陽
性及び陰性の細菌のいずれにも共通することが認められ
た。また、このことは、マグネタイトへの吸着が、細菌
以外の微生物でも共通して見られる現象であることを示
すものであると考えられる。

【００３６】実施例２［脱離処理液の検討及び洗浄操作
に用いる塩溶液の検討］大腸菌を用いて、マグネタイトに吸着した微生物を生菌
として回収する脱離処理液の組成について試験を行なっ
た。また、マグネタイトに吸着した微生物の洗浄操作に
用いる塩溶液についても検討を行った。

【００３７】（１）マグネタイトへの吸着実施例１の（２）実験方法と同様の条件及び手順で行な
った。

【００３８】（２）マグネタイトからの大腸菌の回収大腸菌を吸着したマグネタイトを磁気分離により回収し
た後、蒸留水３０ｍＬで１回洗浄した。次に、第１表に
示す種類及び塩濃度の塩溶液を３０ｍＬ加え、充分に撹
拌した後、磁気分離により非吸着画分を採取し、コロニ
ー法にて生菌数を計測した。結果を第１表に示す。

【００３９】

【表１】第１表［マグネタイトからの大腸菌の回収］

【００４０】（３）考察第１表から明らかな通り、リン酸緩衝液（ＫＨ_２ＰＯ_４
／Ｎａ_２ＨＰＯ_４、ｐＨ７．０）の場合、０．０１６m
mol/Ｌ以上の濃度で大腸菌を生菌として回収することが
でき、特に１０m mol/Ｌ以上の濃度では、高い回収率で
大腸菌を回収することができた。また、硫酸ナトリウム
（Ｎａ_２ＳＯ_４）水溶液の場合、２m mol/Ｌ以上の濃度
で大腸菌を生菌として回収することができ、特に５０m
mol/Ｌ以上では、高い回収率で回収することができた。
一方、０．４m mol/Ｌ以下の濃度ではほとんど大腸菌を
回収することができなかった。

【００４１】これに対し、食塩（ＮａＣｌ）水溶液の場
合、２５０m mol/Ｌ以上の高濃度の場合に僅かに大腸菌
を回収できるに過ぎなかった。また、硝酸ナトリウム
（ＮａＮＯ_３）水溶液では、濃度を５０m mol/Ｌ〜２５
０m mol/Ｌといった高濃度で変化させても殆ど生菌を回
収できなかった。

【００４２】また、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウ
ム（ＥＤＴＡ）水溶液の場合、０．４m mol/Ｌ以上の塩
濃度で生菌を回収することができ、特に濃度１０m mol/
Ｌでは、約４０％の大腸菌を生菌として回収できたが、
５０m mol/Ｌ以上の濃度では、逆に回収量が低下する傾
向が見られた。これは、ＥＤＴＡの濃度が高くなると、
微生物の細胞膜や細胞壁の構成成分であるマグネシウム
などの金属が、ＥＤＴＡによって除去され、その結果、
生菌としての回収率が低下するものと考えられる。

【００４３】これらの結果から、マグネタイトに吸着し
た微生物を脱離し生菌を回収するための脱離処理液とし
ては、請求項３に記載するように、リン酸塩、硫酸塩及
びエチレンジアミン四酢酸塩から選ばれる１種又は２種
以上の組合せを含有する塩溶液を用いることが好まし
く、特にリン酸塩を含有する塩溶液を用いることが最も
好ましいことが明らかとなった。

【００４４】また、請求項４に記載するように、脱離処
理液として、リン酸塩、硫酸塩及びエチレンジアミン四
酢酸塩の塩濃度が１０m mol/Ｌ以上、好ましくは５０m
mol/Ｌで充分な脱離が可能となること、特に、リン酸塩
溶液を用いる場合には、リン酸塩の濃度が０．０８m mo
l/Ｌと低濃度のリン酸塩溶液であっても十分に微生物を
脱離し、生菌として回収できることが分かった。

【００４５】その一方で、マグネタイトに吸着した微生
物の洗浄操作に用いる塩溶液としては、硫酸塩濃度が
０．４m mol/Ｌ以下の塩溶液、塩化物塩溶液濃度が５０
m mol/Ｌ以下の塩溶液を用いることにより、磁性体粒子
に吸着した微生物に影響がないこと、及び、硝酸塩を含
む塩溶液の場合は、硝酸塩濃度が２５０m mol/Ｌであっ
ても、磁性体粒子に吸着した微生物に影響がないことが
明らかとなった。

【００４６】なお、上記塩溶液とは別に、プラスチック
担体等に吸着した細菌を脱離させるのに有効な界面活性
剤による脱離について検討した。検討は、界面活性剤の
うち、最も微生物に対して影響が少ないと思われる非イ
オン性界面活性剤であるポリオキシエチレンソルビタン
モノオレート（Polyoxyethylene sorbitan monooleat
e）をさまざまな濃度に希釈して検討したが、いずれの
濃度であってもリン酸塩溶液に比較して低い回収率であ
り、満足できる値ではなかった。

【００４７】実施例３［磁性体粒子からの微生物の脱離
へのｐＨの影響］大腸菌を用いて、マグネタイトに吸着した微生物を生菌
として回収する脱離処理液のｐＨの影響について試験し
た。

【００４８】（１）マグネタイトへの大腸菌の吸着実施例１の（２）実験方法と同様の条件及び手順で行な
った。

【００４９】（２）マグネタイトからの大腸菌の回収ｐＨ４．０〜８．５の１０m mol/Ｌリン酸緩衝液を使用
して、実施例２と同様にして、マグネタイトから脱離・
回収される大腸菌の生菌数を計測した。結果を第２表に
示す。

【００５０】

【表２】第２表［フェライトからの大腸菌の回収］

【００５１】（３）考察第２表から明らかな通り、いずれのｐＨの脱離処理液を
用いても、大腸菌を生菌として回収することができた
が、特に、ｐＨが５．５以上、８．５以下の場合では６
０％以上の回収ができ、ｐＨが６．０以上、７．５以下
ではほぼ完全に大腸菌を生菌として回収することができ
た。このことから、脱離処理液のｐＨは、５．５以上、
８．５以下であると、マグネタイトに吸着した微生物を
脱離し生菌を回収することができ、特に、６．０以上、
７．５以下であると、より高い回収率で生菌を回収でき
ることが分かる。

【００５２】実施例４（レジオネラ属細菌の濃縮分離）レジオネラ属細菌を用いて、本発明の微生物濃縮方法の
効果を確認した。比較のため、遠心分離機を用いた遠心
分離法による濃縮（１０，０００ｒｐｍ、３０分）も並
行して実施した。

【００５３】（１）マグネタイトへの吸着・磁気分離滅菌脱イオン水１０００ｍＬに、予め培養したレジオネ
ラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophila ）SG-1
（以下、単に「レジオネラ」という。）を１０ ^２ＣＦＵ
／１００ｍＬとなるように懸濁させた。マグネタイト１
ｇを添加し、５分間撹拌した後、磁石を利用して磁気分
離を行ない、非吸着画分を捨て、滅菌脱イオン水１００
０ｍＬを加え、洗浄した。

【００５４】（２）マグネタイトからのレジオネラ属細
菌の脱離回収吸着・磁気分離後の磁性体粒子に、脱離処理液として１
０m mol/Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を１０ｍＬ加
え、良く撹拌した。次いで、磁気分離によりレジオネラ
を含む脱離処理液を回収した。この脱離処理液１００μ
Ｌをレジオネラ検出用のＧＰＶＣα培地に接種し、コロ
ニー数を計測した。

【００５５】（３）結果本発明の微生物濃縮方法による操作で回収されたレジオ
ネラ生菌数は、２．５×１０^４ＣＦＵ／１００ｍＬであ
った。一方、従来の遠心分離法でのレジオネラ生菌数は
２．０×１０^４ＣＦＵ／１００ｍＬであり、両者はほぼ
同じ回収率であった。このことから、本発明の微生物濃
縮方法によれば、従来の遠心分離法と同様の精度でレジ
オネラを生菌として回収できることが分かる。

【００５６】以上より、試料中の微生物を磁性体粒子に
吸着させ、磁石を利用した磁気分離を行う吸着・磁気分
離工程と、前記磁性体粒子に吸着された微生物を脱離処
理液で脱離し生菌を回収する脱離工程とを有することを
特徴とする請求項１に係る本発明の微生物濃縮方法によ
れば、環境水等の試料中に生存している微生物を生菌と
して高い回収率で回収し濃縮できることが明らかとなっ
た。

【００５７】

【発明の効果】本発明の微生物濃縮方法によれば、環境
水等の試料中に生存している微生物を生菌として高い回
収率で回収し濃縮することができる。また、本発明の微
生物濃縮方法は、従来の遠心分離法やろ過式分離法等の
微生物濃縮方法と比較して、遠心分離操作や膜分離操作
等を必要としないため、操作性に優れている。さらに、
本発明の微生物濃縮方法は、高価な遠心分離機や膜ろ過
材をも必要としないため、コスト及びエネルギー消費の
上での問題もない。

【００５８】そして、本発明の微生物濃縮方法は、従来
の磁性体粒子を用いる磁気分離と比較しても、微生物を
生菌として回収することができ、また、対象となる微生
物の種類に応じた用具も必要ないことから、汎用性に優
れている。さらに、高価な抗体を必要としないことか
ら、コストの上での問題もない。

【００５９】よって、本発明の微生物濃縮方法は、例え
ば冷却塔水等の環境水中のレジオネラ検査をはじめ、菌
数が非常に少ない試料中の微生物の遺伝子を検出すると
きなどに適用することが可能である。また、本発明の微
生物濃縮方法は、環境水中の微生物検査における予備濃
縮への適用の他、微生物の大量濃縮の手段としても有効
である。

【図面の簡単な説明】

【図１】マグネタイトに吸着せずに残った細菌数の経
時的変化を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続きＦターム(参考） 4B063 QA01 QQ06 QQ07 QQ10 QQ18 QR41 QR50 QS12 QS15 QS40 4B065 AA01X AA58X AA95X BD50 CA46

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】試料中の微生物を磁性体粒子に吸着さ
せ、磁石を利用した磁気分離を行う吸着・磁気分離工程
と、前記磁性体粒子に吸着された微生物を脱離処理液で
脱離し生菌を回収する脱離工程とを有することを特徴と
する微生物濃縮方法。
【請求項２】磁性体粒子が、四三酸化鉄（Ｆｅ
_３Ｏ_４）であることを特徴とする請求項１記載の微生物
濃縮方法。
【請求項３】脱離処理液が、リン酸塩、硫酸塩及びエ
チレンジアミン四酢酸塩から選ばれる１種又は２種以上
の組合せを含有する塩溶液であることを特徴とする請求
項１又は２記載の微生物濃縮方法。
【請求項４】脱離処理液の塩濃度が、０．１〜２５０
m mol/Ｌであることを特徴とする請求項１乃至３のいず
れかに記載の微生物濃縮方法。
【請求項５】脱離処理液のｐＨが、５．５以上８．５
以下であることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか
に記載の微生物濃縮方法。