JP2003183161A - 骨粗鬆症の予防治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 マジンドリン−Ａが高いサイトカイン選択抑
制を示すこと、更にｇｐ１３０に作用してｇｐ１３０の
２量体化を阻害する作用機序にもとずいて骨吸収を抑制
せしめることにより、これまでの薬物に起因していた子
宮出血、子宮内膜癌、乳癌等のリスクの増大、或いは、
骨軟化症や頻回投与による効果の低下等の問題を解消し
得る骨粗鬆症の予防治療剤を得るものである。 【解決手段】 下記式 【化１】 （式中、Ｈは水素、Ｏは酸素、Ｎは窒素、Ｒ及びＳは絶
対立体配置を表す記号）で表される化合物を有効成分と
する、骨粗鬆症の予防治療剤である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、マジンドリン−Ａ
が高いサイトカイン選択抑制を示すこと、さらに情報伝
達性１３０−ｋＤ糖タンパク鎖の２量体化（ｄｉｍｅｒ
ｉｚａｔｉｏｎ）を介した６量体を形成するインターロ
イキン−６及びインターロイキン−１１の活性を抑制
し、６量体の形成を阻害するという新たな作用機序に基
づくものであって、下記式

【０００２】

【化２】 （式中、Ｈは水素、Ｏは酸素、Ｎは窒素、Ｒ及びＳは絶
対立体配置を表す記号）で表されるマジンドリン−Ａを
有効成分とする骨粗鬆症の予防治療剤に関する。

【０００３】

【従来の技術】現在までの骨粗鬆症（ｏｓｔｅｏｐｏｒ
ｏｓｉｓ）予防治療薬としては、例えば骨吸収抑制を中
心として、選択的エストロゲン誘導体［ｓｅｌｅｃｔｉ
ｖｅｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｄｕｌ
ａｔｏｒ（ＳＥＲＭ）］のタモキシフェン、ラロキシフ
ェン［Ｂｕｒｃｋｈａｒｄｔ，Ｐ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ
ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｄｕｌａ
ｔｏｒｓ（ＳＥＲＭ）：ｎｅｗ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ
ｆｏｒ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ
ｔｈｅｒａｐｙ．Ｓｃｈｗｅｉｚ．Ｍｅｄ．Ｗｏｃｈｅ
ｎｓｃｈｒ．１２９，１９２６−１９３０（１９９
９）］等が、また、ビスフォスフォネートやカルシトニ
ン等、破骨細胞に直接作用して、その活性を抑制する薬
物が開発されてきた。しかしながら、これら薬物は、子
宮出血、子宮内膜癌、乳癌等のリスクの増大、或いは、
骨軟化症や頻回投与による効果の低下（エスケープ現
象）が大きな問題となっていた。

【０００４】最近、破骨細胞分化を制御する分子メカニ
ズムが次第に解明され、破骨細胞の分化誘導を促す破骨
細胞形成因子／ＮＦκＢ受容体活性化（以下、ＯＤＦ／
ＲＡＮＫＬと称する）、その作用を抑制する破骨細胞形
成抑制因子／オステオプロテゲリン（以下、ＯＣＩＦ／
ＯＰＧと称する）が見出されている。［Ｙａｓｕｄａ，
Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｄｉｆｆｅｒ
ｅｎｔｉａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ ｉｓ ａ ｌｉｇａ
ｎｄ ｆｏｒ ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ／ｏｓ
ｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓ−ｉｎｈｉｂｉｔｏ
ｒｙ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｉｓ ｉｄｅｎｔｉｃａ
ｌ ｔｏ ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ，Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９５，３５９７−３
６０２（１９９８）］。

【０００５】一方、サイトカインの一つであるＩＬ−６
は骨芽細胞に作用してＯＤＦ／ＲＡＮＫＬを発現させる
が、エストロゲンは、ＩＬ−６遺伝子を抑制し骨吸収を
抑制することが報告されている。［Ｇｉｒａｓｏｌｅ，
Ｇ．ｅｔ ａｌ．１７ ｂｅｔａ−ｅｓｔｒａｄｉｏｌ
ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６ｐｒ
ｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ−ｄ
ｅｒｉｖｅｄ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ
ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ：ａ ｐｏ
ｔｅｎｔｉａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｔｈｅ
ａｎｔｉｏｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ
ｏｆ ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓ
ｔ ８９，８８３−８９１（１９９２）］。

【０００６】サイトカインは免疫反応や生体防御を介し
て生体の恒常性維持（ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）に寄与
しているだけでなく、癌や炎症アレルギー、自己免疫疾
患などにも深く関与していることが報告されている。
［Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．，Ａｋｉｒａ，Ｓ．＆ Ｔ
ａｇａ，Ｔ．ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６ ａｎｄ ｉ
ｔｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ａ ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏ
ｒ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８，５
９３−５９７（１９９２）］。これらサイトカインの中
でＩＬ−６は抗体産生やＴ細胞活性化、造血、急性期反
応などの制御に関与する多機能性サイトカインであるこ
とから、ＩＬ−６活性の非制御は様々な重篤な疾患を引
き起こす要因となる。

【０００７】事実、ＩＬ−６の過剰産生が癌性悪液質に
深く関与していることが報告されている。［Ｓｔｒａｓ
ｓｍａｎｎ，Ｇ．，Ｊａｃｏｂ，Ｃ．Ｏ．，Ｅｖａｎ
ｓ，Ｒ．，Ｂｅａｌｌ，Ｄ．＆ Ｆｏｎｇ，Ｍ．Ｍｅｃ
ｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃａ
ｎｃｅｒ ｃａｃｈｅｘｉａ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ
ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｐｈａｇｏ
ｃｙｔｅｓ ａｎｄｃｏｌｏｎ−２６ ｃａｒｃｉｎｏ
ｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌｅｖａｎｃｅｔｏ ＩＬ
−６−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｃａｃｈｅｘ
ｉａ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８，３６７４−３６
７８（１９９２）］。

【０００８】また、ＩＬ−６の過剰産生が、キャッスル
マン症候群［Ｙｏｓｈｉｚａｋｉ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ｐ
ａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ
ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６（ＩＬ−６／ＢＳＦ−
２）ｉｎ Ｃｓａｔｌｅｍａｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．
Ｂｌｏｏｄ ７４，１３６０−１３６７（１９８
９）］；リウマチ関節炎［Ｔａｋａｇｉ，Ｎ．ｅｔ ａ
ｌ．Ｂｌｏｃｋａｇｅ ｏｆｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−
６ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｊｏ
ｉｎｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｃｏｌ
ｌａｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａ
ｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．４１，２１１７−２１
２１（１９９８）にも深く関与していることも報告され
ている。

【０００９】更にまた、ＩＬ−６の過剰産生が、高カル
シウム血症および多発性骨髄腫に深く関与していること
が報告されている。［ｄｅ ｌａ Ｍａｔａ，Ｊ．，Ｕ
ｙ，Ｈ．Ｌ．，Ｇｕｉｓｅ Ｔ．Ａ．，Ｓｔｏｒｙ，
Ｂ．，Ｂｏｙｃｅ，Ｂ．Ｆ．，Ｍｕｎｄｙ，Ｇ．Ｒ．＆
Ｒｏｏｄｍａｎ，Ｇ．Ｄ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−
６ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｈｙｐｅｒｃａｌｃｅｍｉａ
ａｎｄ ｂｏｎｅ ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ
ｔｅｄ ｂｙ ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎ
ｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｖｉｖ
ｏ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５，２８４６−２
８５２（１９９５）及びＺｈａｎｇ，Ｘ．Ｇ．ｅｔ ａ
ｌ．Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ
ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ
ｓｙｎｅｒｇｉｚｅｓ ｗｉｔｈｉｎｔｅｒｌｅｕｋ
ｉｎ−６ ｉｎ ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒ
ｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｙｅｌ
ｏｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ，７６，２５９９−２
６０５（１９９０）］。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
疾患に対する有効な予防治療薬は未だ開発されていなか
った。それ故、サイトカインの機能を特異的に修飾する
低分子化合物は、新たな作用機序を有する治療薬として
期待されてきた。ＩＬ−６受容体機構は、配位子結合性
８０−ｋＤ糖タンパク鎖（以下、ＩＬ−６Ｒと称する）
と情報伝達性１３０−ｋＤ糖タンパク鎖（以下、ｇｐ１
３０と称する）の２成分から構成され、さらにこれとリ
ンクしたＩＬ−６特異的情報伝達系であるジェーナスキ
ナーゼ／情報伝達及び転写活性化因子３（以下、ＪＡＫ
／ＳＴＡＴ３と称する）のリン酸化により活性を表わ
す。従って、このカスケード（ｃａｓｃａｄｅ）を阻害
するものはＩＬ−６特異的阻害剤になり得ると本発明者
らは推測した。

【００１１】本発明者らはこれまでに微生物代謝産物よ
り抗寄生虫薬であるエバーメクチン、キナーゼ阻害剤で
あるスタウロスポリン、及びプロテアゾーム阻害剤であ
るラクタスチン等、数多くの有用活性物質を見出した。
そして、ＩＬ−６阻害剤の探索の過程でフロインドリン
（ｆｕｌｏｉｎｄｏｌｉｎｅ）骨格にディケトサイクロ
ペンテン（ｄｉｋｅｔｃｙｃｌｏｐｅｎｔｅｎ）がメチ
ル基で結合した化合物を見出し、この化合物を新規物質
としてマジンドリン（ｍａｄｉｎｄｏｌｉｎｅ）と命名
した。［Ｈａｙａｓｈｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｍａｄｉｎ
ｄｏｌｉｎｅ，ａ ｎｏｖｅｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｏｆ ＩＬ−６ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｒｏｍ Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ｋ９３−０７１１．Ｉ．Ｔ
ａｘｏｎｏｍｙ，ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｉｓｏｌ
ａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉ
ｖｉｔｉｅｓ．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ（Ｔｏｋｙｏ）４
９，１０９１−１０９５（１９９６）。

【００１２】本マジンドリンは非常にユニークな活性を
示すものの産生量が微量であったため、その特異性の検
討や作用機序の解析は遅れていたが、本マジンドリンの
化学合成法の成功［Ｓｕｎａｚｕｋａ，Ｔ．ｅｔ ａ
ｌ．Ｔｏｔａｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ（＋）−Ｍ
ａｄｉｎｄｏｌｉｎｅ Ａ ａｎｄ（−）−Ｍｄｉｎｄ
ｏｌｉｎｅ Ｂ，Ｐｏｔｅｎｔ，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ
Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ
６．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅ
ｌａｔｉｖｅ ａｎｄ Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｃｏｎｆｉ
ｇｕｒａｔｉｏｎｓ；ジャーナル オブ ザ アメリカ
ン ケミカル ソサイティー（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓ
ｏｃ．２０００，１２２，９，ｐｐ．２１２２−２１２
３（２０００）］により、それの特異性や作用機序の解
析が本発明者らによって検討された。

【００１３】その結果、意外にもマジンドリン（ｍａｄ
ｉｎｄｏｌｉｎｅ）−Ａ（以下、ＭＤＬ−Ａと称する）
が高いサイトカイン選択抑制を示すこと、さらに情報伝
達性１３０−ｋＤ糖タンパク鎖の２量体化を介した６量
体を形成するインターロイキン−６及びインターロイキ
ン−１１の活性を抑制し、６量体の形成を阻害するとい
う新たな作用機序があることを見出した。

【００１４】このような選択的サイトカイン阻害剤及び
情報伝達性１３０−ｋＤ糖タンパク鎖の阻害物質は未だ
報告はなされておらず、このようなＭＤＬ−Ａによる作
用機序は本発明者らによって初めて解明されたものであ
る。従って、本発明に用いるＭＤＬ−Ａは高いサイトカ
イン選択抑制を示すこと、さらに情報伝達性１３０−ｋ
Ｄ糖タンパク鎖の２量体化を介した６量体を形成するイ
ンターロイキン−６及びインターロイキン−１１の活性
を抑制し、６量体の形成を阻害するという新たな作用機
序にもとずいたものである。すなわち、細胞を用いた実
験においては破骨細胞形成を阻害し、動物実験において
は閉経後骨粗鬆症モデルの実験動物である卵巣摘出マウ
スにおける骨吸収を抑制し、ｇｐ１３０阻害物質が破骨
細胞分化を制御して骨吸収を抑制することを見出し、本
発明は完成されたものである。

【００１５】本発明は、このような特異的な作用機序に
より、これまでの薬物により起因していた子宮出血、子
宮内膜癌、乳癌等のリスクの増大、或いは、骨軟化症や
頻回投与による効果の低下（エスケープ現象）等の問題
を全て解消し、骨吸収を抑制する骨粗鬆症の予防、治療
に有効な予防治療剤を提供することを目的とするもので
ある。

【００１６】

【課題を解決するための手段】本発明は、高いサイトカ
イン選択抑制を示し、さらに情報伝達性１３０−ｋＤ糖
タンパク鎖の２量体化を介した６量体を形成するインタ
ーロイキン−６及びインターロイキン−１１の活性を抑
制し、６量体の形成を阻害する下記式

【００１７】

【化３】 （式中、Ｈは水素、Ｏは酸素、Ｎは窒素、Ｒ及びＳは絶
対立体配置を表す記号）で表されるマジンドリン−Ａを
有効成分とする骨粗鬆症の予防治療剤である。

【００１８】更に本発明は、マジンドリン−Ａはサイト
カイン選択的抑制を有し、この選択的抑制が細胞内情報
伝達系であるジェーナスキナーゼ／情報伝達及び転写活
性化因子の抑制であり、さらにまた、マジンドリン−Ａ
の選択的抑制が情報伝達性１３０−ｋＤ糖タンパク鎖の
２量体化を介した６量体を形成するインターロイキン−
６及びインターロイキン−１１の活性を抑制し、６量体
形成を阻害することである骨粗鬆症の予防治療剤であ
る。

【００１９】以下に本発明の作用機序を詳しく説明す
る。微生物代謝産物より得られたマジンドリン（特開平
９−１９４４９４号公報）は、ＩＬ−６依存細胞増殖や
分化誘導を抑制したが他のサイトカインであるインター
ロイキン−２（以下、ＩＬ−２と称する）、インターロ
イキン−３（以下、ＩＬ−３と称する）、インターロイ
キン−４（以下、ＩＬ−４と称する）、インターロイキ
ン−８（以下、ＩＬ−８と称する）、組織壊死因子（以
下、ＴＮＦと称する）、神経成長因子（以下、ＮＧＦと
称する）、顆粒球コロニー刺激因子（以下、ＧＣＳＦと
称する）の作用は抑制しなかった。

【００２０】ＩＬ−６はＩＬ−６レセプター（以下、Ｉ
Ｌ−６Ｒと称する）と結合してＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複
合体を形成し、さらに共有サブユニットの情報伝達性１
３０−ｋＤ糖タンパク鎖（以下、ｇｐ１３０と称する）
と結合し、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０の３量体
を形成する。次いで、もう一つのＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ
／ｇｐ１３０の３量体と会合し６量体を形成する。これ
によりジェーナスキナーゼ２（以下、ＪＡＫ２と称す
る）を活性化して情報伝達及び転写活性化因子３（以
下、ＳＴＡＴ３と称する）をリン酸化し、２分子会合し
たＳＴＡＴ３が核内に移行することによって情報が核内
に伝達される。

【００２１】インターロイキンは共有するサブニットの
種類によりいくつかの系に分類される。ｇｐ１３０を共
有する系にはＩＬ−６、ＩＬ−１１、白血病抑制因子
（以下、ＬＩＦと称する）、オンコスタチンＭ（以下、
ＯＳＭと称する）、カルディオトロフィン１（以下、Ｃ
Ｔ−１と称する）等が含まれる。このファミリーは更に
ＩＬ−６やＩＬ−１１のようにｇｐ１３０同士が会合し
て６量体を形成する同種２量体タイプと、ＬＩＦやＯＳ
ＭのようにＬＩＦレセプターあるいはＯＳＭレセプター
とｇｐ１３０が会合する異種２量体タイプにそれぞれ区
別される。

【００２２】本発明に用いられるＭＤＬ−Ａはｇｐ１３
０を共有サブユニットとするＩＬ−６系のサイトカイン
であるＬＩＦの作用を抑制しなかった。すなわち、細胞
内情報伝達系は同種２量体タイプ（ＩＬ−６、ＩＬ−１
１）、異種２量体タイプ（ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＴ−１）
とも共通の経路であることから、ＭＤＬ−Ａは、ジェー
ナスキナーゼ／情報伝達及び転写活性化因子系には影響
しないことが示唆された。このことは、顆粒球コロニー
刺激因子（以下、ＧＣＳＦと称する）−ｇｐ１３０キメ
ラレセプター／ヒトプロＢ細胞（以下、Ｂａｆ３と称す
る）の結果からも裏付けられた。

【００２３】次に、ＩＬ−６Ｒを多く発現しているＵ２
６６細胞（ヒト）について本発明のＭＤＬ−Ａの影響に
ついて検討した。Ｕ２６６細胞（ヒト）の細胞破砕液を
用いて免疫沈降法とオートラヂオグラフィー法によりＭ
ＤＬ−Ａの標的分子をしらべた。免疫沈降法による検討
の結果、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０の３量体の
形成は阻害しなかった。しかしながら、放射性ＭＤＬ−
Ａを用いたオートラヂオグラフィー法による検討では、
ｇｐ１３０相当位置に放射性ＭＤＬ−Ａによるバンドが
観察され、ＭＤＬ−Ａがｇｐ１３０に結合していること
が示唆された。一方、過剰の非放射性ＭＤＬ−Ａを添加
してオートラヂオグラフィー法で測定したところ、ｇｐ
１３０相当のバンドが減少したことが観察された。

【００２４】この結果は、過剰の非放射性ＭＤＬ−Ａ添
加によりｇｐ１３０に結合していた放射性標識ＭＤＬ−
Ａが外れたことを示している。すなわち、これらの結果
は、ＭＤＬ−Ａがｇｐ１３０に結合するが、ＩＬ−６／
ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０の３量体形成は阻害しないこと
を示している。ＭＤＬ−Ａ処理によりジェーナスキナー
ゼ／情報伝達及び転写活性化因子（以下、ＪＡＫ／ＳＴ
ＡＴと称する）による細胞内情報伝達系は阻害されない
こと、３量体形成は阻害されないこと、およびｇｐ１３
０の異種２量体タイプのＬＩＦやＯＳＭの活性は抑制さ
れないこと、等からＭＤＬ−Ａの作用点はｇｐ１３０を
介した６量体形成の阻害であることが示唆された。

【００２５】ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０複合体
の会合による６量体化の安定化に際して、最近、Ｂａｒ
ｔｏｎ，Ｖ．Ａ．ｅｔ ａｌ．はＩＬ−６のサイト３と
ｇｐ１３０のＩｇドメインにあるサイト２が結合し、安
定化に寄与していることを報告した。［Ｉｎｔｅｒｌｅ
ｕｋｉｎ−１１ ｓｉｇｎａｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈｔｈ
ｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｅｘａｍｅｒｉ
ｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．２７５，３６１９７−３６２０３（２０
００）］。本発明による作用機序は彼らの仮説とよく一
致しており、本発明によるＭＤＬ−Ａがｇｐ１３０の結
合サイト２に結合している６量体形成による安定化を阻
害することが強く示唆される。

【００２６】更にまた、ＭＤＬ−Ａは破骨細胞新生を顕
著に抑制し、卵巣摘出マウスでの骨吸収を１７β−エス
トラジオール（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）と異なる作用機序
で抑制することが観察された。すなわち、新生児マウス
頭頂骨より分離した骨芽細胞と大腿骨より調整した骨髄
細胞との共培養系に２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−６と５０ｎ
ｇ／ｍＬのＩＬ−６Ｒを添加することにより多核性破骨
細胞が形成される。ＭＤＬ−ＡはこのＩＬ−６刺激によ
る破骨細胞形成を用量依存的に抑制した。一方、閉経後
骨粗鬆症モデルである卵巣摘出マウスでの骨量比減少の
抑制においてもＭＤＬ−Ａは１０〜６０ｍｇ／ｋｇ／ｄ
ａｙの経口投与により顕著に抑制した。

【００２７】閉経後骨粗鬆症は女性ホルモンである１７
β−エストラジオールの欠乏により発症するが、１７β
−エストラジオールは、通常ＩＬ−６産生を抑制してい
る。しかしながら、閉経により１７β−エストラジオー
ルが減少するとＩＬ−６産生抑制が抑制されたことによ
りＩＬ−６産生が増加し、骨粗鬆症の引き金になると言
われている。卵巣摘出マウスに１７β−エストラジオー
ルを投与することにより骨量比減少の抑制、血中Ｃａ
^{2 +} 濃度増加の抑制が観察される。

【００２８】一方、ＭＤＬ−Ａ投与においても１７β−
エストラジオールと同様の現象が観察される。しかしな
がら、１７β−エストラジオール投与により子宮重量増
加、血中ＩＬ−６増加抑制が認められるが、ＭＤＬ−Ａ
投与においては子宮重量増加、血中ＩＬ−６増加抑制は
共に認められなかった。これらの事実から、ＭＤＬ−Ａ
は現在用いられている１７β−エストラジオールとは全
く異なった作用機序により骨吸収を抑制していることが
示された。

【００２９】骨量比減少の抑制を測定することにより、
正常骨量比への回復度合いが判断できる。また、血中Ｃ
ａ²⁺濃度増加抑制の測定は、骨吸収により血中に放出さ
れるＣａ²⁺が増加するため、これを測定することによっ
て、骨吸収が起こっているか、その程度が評価できる。
更に、子宮重量増加の測定は、投与した物質に女性ホル
モン様作用があるかどうか判定できる。特に１７β−エ
ストラジオールは女性ホルモンであることから、投与に
より子宮重量は増加するが、ＭＤＬ−Ａは増加しない。
このことから、ＭＤＬ−Ａにはホルモン様作用は無いこ
とが示される。更にまた血中ＩＬ−６増加抑制の測定
は、その物質にＩＬ−６産生作用があるか否か判定でき
る。特に１７β−エストラジオールはＩＬ−６産生を増
加させて骨吸収を抑制するが、ＭＤＬ−Ａはそのような
作用を示さないことからＩＬ−６産生を介さないことを
示すことになる。

【００３０】以上の作用機序により、ＭＤＬ−Ａが高い
サイトカイン選択抑制を示すこと、更にｇｐ１３０に作
用してｇｐ１３０の２量体化（ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏ
ｎ）を阻害すること、の新たな作用機序が見出された。
すなわち、選択的サイトカイン阻害剤およびｇｐ１３０
阻害作用による骨吸収抑制作用はこれまでに報告されて
おらず、この特異的な作用機序により、はじめて閉経後
骨粗鬆症の実験モデルである卵巣摘出マウスにおける骨
吸収を顕著に抑制することが解明された。

【００３１】ＩＬ−６は種々の重篤な疾患の主因子とな
ることについての報告は前述の通りであるが、ＩＬ−６
ノックアウトマウスは、期待された様な疾患は起こらな
かった。その理由としては、ＩＬ−６が欠損しても他の
サイトカインがその作用を補完、修飾する、いわゆる作
用の重複性により恒常性を維持すると考えられる。それ
故、ＩＬ−６遺伝子のみをノックアウトしてもＩＬ−６
と同様の作用をするＩＬ−６タイプのサイトカイン、Ｉ
Ｌ−１１等がその作用を補完し、ＩＬ−６ノックアウト
の効果を打ち消していると推測される。

【００３２】一方、ＩＬ−６タイプサイトカインの共有
サブユニットであるｇｐ１３０のノックアウトは致死的
であり、ｇｐ１３０が恒常性維持に重要な働きをしてい
ることが示唆されている。［Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｋ．Ｔａ
ｇａ，Ｓａｉｔｏ，Ｍ．ａｃｏｍｍｏｎ ｓｉｇｎａｌ
ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒ
ｌｅｕｋｉｎ ６ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉ
ｎｅｓ，ｌｅａｄｓｔｏ ｍｙｃｏｃａｒｄｉａｌ ａ
ｎｄ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒ
ｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，
９３，４０７−４１１（１９９６）］。

【００３３】本発明に用いたＭＤＬ−Ａの各種サイトカ
インや成長因子に対する特異性の検討法は、以下の方法
に従った。 １．ＩＬ−６依存性増殖 ９６穴プレートに５×１０⁴ ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製し
たＩＬ−６依存性ＭＨ６０細胞懸濁液を１００μＬ、
０．４Ｕ／ｍＬに調製したＩＬ−６溶液を１００μＬ加
え、サンプル５μＬを添加し、７２時間インキュベート
した。細胞増殖の測定はＭＴＴ法により行った。細胞培
養液中にＭＴＴ試薬５ｍｇ／ｍＬを２０μＬ／ｗｅｌｌ
で添加し、４時間培養後、４℃、１０００ｒｐｍ、５分
間遠心し、培養上清を捨てた。各ｗｅｌｌにジメチルス
ルホキシド１００μＬを加え、マイクロミキサーで１５
分間攪拌した後、ＭＴＴ試薬により生成されたホルマザ
ンを溶出した。これを９６穴マルチプレートリーダー
［Ｔｉｔｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＰＬＵＳ
ＭＫＩＩ（大日本製薬社製）］を用いて測定波長５４０
ｎｍ、対照波長６２０ｎｍで比色定量した。

【００３４】２．ＰＣ−１２細胞分化誘導 ＰＣ−１２細胞懸濁液を、無血清のＲＰＭＩ−１６４０
培地で２．５×１０⁴ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製し、コラ
ーゲンコートした９６穴平底プレートに２００μＬずつ
まき、２４時間インキュベートした。βＮＧＦ（５０ｎ
ｇ／ｍＬ、１２．５ｎｇ／ｍＬ）及びサンプル５μＬを
添加し、４日間インキュベートし、細胞の形態変化を毎
日観察した。ＰＣ−１２細胞はβＮＧＦ（５０ｎｇ／ｍ
Ｌ、１２．５ｎｇ／ｍＬ）刺激により突起を伸長して細
胞間ネットワークを形成し、神経様細胞へ分化する。こ
のβＮＧＦ（５０ｎｇ／ｍＬ、１２．５ｎｇ／ｍＬ）に
よるＰＣ−１２細胞の分化誘導は、１２．５μｇ／ｍＬ
のＭＤＬ−Ａ添加による有意な変化を生じなかった。

【００３５】３．Ｍ１細胞分化誘導 ２４穴平底プレートにＭ１細胞を５×１０⁵ ｃｅｌｌｓ
／ｗｅｌｌ（２５０μＬ）ずつまき、ＭＤＬ−Ａ ６８
μＭ、ＩＬ−６ １２．５Ｕ／ｍＬ添加し、７２時間、
３７℃、５％ＣＯ₂ 下でインキュベートした。そこに、
１×１０⁹ 個オプソニン化した蛍光ビーズを加え、更に
２４時間、３７℃、５％ＣＯ₂ 下でインキュベートした
後、フローサイトメーター（ベックマンコールター社
製、米国）で貪食能を評価した。

【００３６】４．ＩＬ−４によるＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２
３）発現 Ｕ９３７細胞は１０％ＦＣＳ−ＲＰＭＩ−１６４０培地
で継代した。これをＨａｎｋｓ液で２回洗浄した後、５
×１０⁵ ｃｅｌｌ／ｍＬにＲＰＭＩ培地で調整し、２４
穴平底プレートに２００μＬで播種し、ＭＤＬ−Ａ ６
８μＭ、ＩＬ−４ １０ｎｇ／ｍＬを添加し、最終容量
を５００μＬとし、３７℃、５％ＣＯ₂下、４８時間イ
ンキュベートした。これにフルオレセインイソチオシア
ネート（以下、ＦＩＴＣと称する）標識抗ＣＤ２３抗体
２μｇ／１０μＬを添加し、常法にしたがって染色、洗
浄し、ＰＢＳ（−）緩衝液１ｍＬに懸濁後、フローサイ
トメーター（ベックマンコールター社製、米国）で測定
した。

【００３７】５．ＩＬ−８による細胞遊走活性 健常成人男子より採血し、常法に従いデキストランＴ５
００、Ｆｉｃｏｌ遠心分離法により好中球を分離した。
得られた好中球は、カルボキシフルオレセインジアセテ
ートサクシニルエステル（以下、ＣＳＦＥと称する）に
より蛍光標識された。ボイデンチャンバー上室に６８μ
ＭのＭＤＬ−Ａと１×１０⁹ 個の好中球を添加した。２
０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−８はボイデンチャンバー（Ｂｏｙ
ｄｅｎｃｈａｍｂｅｒ）下室に添加した。次いで３７
℃、５％ＣＯ₂ 下、４時間インキュベートした後、ボイ
デンチャンバー下室の液を回収し、遠心分離後、沈渣の
蛍光を測定した。

【００３８】６．ＴＮＦ−αによる細胞増殖抑制試験 ９６穴丸底プレートにＵ９３７細胞を１×１０⁵ ｃｅｌ
ｌｓ／ｗｅｌｌ（２００μＬ）ずつまき、１時間後、Ｍ
ＤＬ−Ａ ６８μＭ添加し、３時間、３７℃、５％ＣＯ
₂ 下でインキュベートした。そこに、ＴＮＦ−α ２０
ｎｇ／ｍＬ添加し、７２時間、３７℃、５％ＣＯ₂ 下で
インキュベートした。細胞増殖の測定は、ＭＴＴ法によ
り行った。細胞培養液中にＭＴＴ試薬（５ｍｇ／ｍＬ）
を２０μＬ／ｗｅｌｌで添加し、４時間培養後、４℃、
１０００ｒｐｍ、５分間遠心し、培養上清を捨てた。

【００３９】次に、各ｗｅｌｌにジメチルスルホキシド
１００μＬを加えて、マイクロミキサーで１５分間攪拌
したのち、ＭＴＴ試薬により生成されたホルマザンを溶
出した。これを９６穴マルチプレートリーダー［Ｔｉｔ
ｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＰＬＵＳ ＭＫＩＩ
（大日本製薬社製）］を用いて測定波長５４０ｎｍ、対
照波長６２０ｎｍで比色定量した。ＴＮＦ−α無添加の
ウェルを１００％として細胞増殖率を算出した。

【００４０】本ＭＤＬ−Ａの各種サイトカインや成長因
子に対する選択特異性は下記のとおりである。 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ サイトカイン 細胞 活性 ＩＣ₅₀（μＭ） ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ ＩＬ−２ ＣＴＬＬ−２ 細胞増殖 ＞７０ ＩＬ−３ Ｂａｆ３ 細胞増殖 ＞７０ ＩＬ−４ Ｕ９３７ FcεRII 発現 ＞７０ ＩＬ−６ ＭＨ−６０ 細胞増殖 ８．２ ＰＣ１２ 神経分化 ４．３ Ｍ１ 分化（マクロファージ様） １４．５ 卵巣細胞 破骨発生 ３．８ ＩＬ−８ ＰＭＮＬｓ 細胞遊走活性 ＞７０ ＴＮＦ Ｕ９３７ 成長抑制 ＞７０ ＮＧＦ ＰＣ１２ 神経分化 ＞７０ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

【００４１】尚、上記細胞の略号名は下記の通りであ
る。ＣＴＬＬ−２；細胞障害性マウスＴ細胞株（ＩＬ−
２感受性）、Ｂａｆ３；ヒトプロＢ細胞株（ＩＬ−３感
受性）、Ｕ９３７；ヒト組織球性リンパ腫（ＴＮＦ感受
性）、ＭＨ−６０；マウス骨髄細胞由来のＩＬ−６依存
性ＭＨ−６０、ＰＣ１２；ラット副腎髄質褐色細胞腫
（ＮＧＦ感受性）、Ｍ１；マウス骨髄芽球様白血病細胞
株（ＩＬ−６感受性）、ＰＭＮＬｓ；ヒト多核性白血球
（ＩＬ−８感受性）を意味する。

【００４２】ＭＤＬ−Ａの各種サイトカインや成長因子
に対する選択特異性は、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＴＮＦに
よる細胞増殖、ＩＬ−４刺激により誘導されるＦｃεＲ
ＩＩ発現、ＩＬ−８による好中球の細胞遊走活性、ＮＧ
ＦによるＰＣ１２細胞の神経分化等に対して阻害しなか
った。一方において、ＭＤＬ−ＡはＩＬ−６によるＭＨ
６０細胞の増殖のみならず、ＰＣ１２細胞、Ｍ１細胞、
骨髄幹細胞の各機能細胞への分化を顕著に抑制した。こ
れらの結果は、ＭＤＬ−ＡがＩＬ−６の作用を、幼弱化
活性化プロテインキナーゼ（以下、ＭＡＰＫと称する）
が関与している細胞増殖作用のみならず、ＳＴＡＴが関
与する情報伝達系による分化をも特異的に抑制すること
を示している。

【００４３】また、サイトカインは他のレセプター機構
と異なり、以下のサブユニットを共有している。 （１）γ鎖を共有（ｓｈａｒｅ）するＩＬ−２タイプの
サイトカインであるＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、Ｉ
Ｌ−１５。 （２）β鎖を共有（ｓｈａｒｅ）するＩＬ−３タイプの
サイトカインであるＩＬ−３、ＩＬ−５、グラニュロサ
イト マクロファージ コロニー スティミュレーティ
ング ファクター（以下、Ｇ−ＭＣＳＦと称する）。 （３）ｇｐ１３０を共有（ｓｈａｒｅ）するＩＬ−６タ
イプのサイトカインであるＩＬ−１１、ＯＳＭ、カルヂ
オトロピン−１（以下、ＣＴ−１と称する）、毛様体神
経親和性因子（以下、ＣＮＴＦと称する）。

【００４４】ＭＤＬ−ＡがＩＬ−６の反応を特異的に抑
制することは前述した通りであるが、ＩＬ−６と同様の
活性を示すｇｐ１３０を共有サブユニットとするＩＬ−
６タイプのサイトカイン等に対する作用は不明である。
そこで、ｇｐ１３０を共有サブユニットとするＩＬ−６
タイプのサイトカインの作用について検討する。ＩＬ−
６タイプのサイトカインは特異的なＪＡＫ／ＳＴＡＴの
情報伝達系を有しているが、ＩＬ−６タイプのサイトカ
インのレセプターは２種類に分けられる。すなわち、ｇ
ｐ１３０の同種２量体化を必須とするＩＬ−６、ＩＬ−
１１と、特異的サイトカインレセプターとｇｐ１３０と
の異種２量体化を必要とするＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＴ−
１、ＣＮＴＦに分類される。

【００４５】従って、これら２種のＩＬ−６タイプのサ
イトカインに対するＭＤＬ−Ａの反応の違いによってＭ
ＤＬ−Ａの作用機序を推測することができる。例えば、
Ｍ１細胞は、ｇｐ１３０の同種２量体化を必須とするＩ
Ｌ−６或いはＬＩＦの刺激により貪食能を有したマクロ
ファージ様細胞に分化する。そこで、マクロファージ様
細胞に対するＭ１細胞のＩＬ−６またはＬＩＦ分化誘導
に対するＭＤＬ−Ａの効果について検討を行った。検討
法は以下に従った。

【００４６】２４穴プレートにＭ１細胞を５×１０⁵ 細
胞／２５０μＬ／ｗｅｌｌでまき、ＩＬ−６の５０ｎｇ
／ｍＬあるいはＬＩＦの５ｎｇ／ｍＬの存在下、あるい
は不在下にＭＤＬ−Ａを７０μＭ添加、あるいは非添加
で７２時間、３７℃、５％ＣＯ₂ 下でインキュベートし
た。次いで、１×１０⁹ 個のオプソニン（ｏｐｓｏｎｉ
ｎ）化した蛍光ビーズを加え、２４時間、３７℃、５％
ＣＯ₂ 下でインキュベートした。未反応のビーズを洗浄
後、フローサイトメーター（ベックマンコールター社
製、米国）で貪食能を測定した。

【００４７】マクロファージ様細胞へのＭ１細胞のＩＬ
−６またはＬＩＦ分化誘導に対するＭＤＬ−Ａの効果の
測定結果は、下記に示す通りである。 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 処理 分類（％） 未分化 分化 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 無処理 ８３．４±４．６ １１．３±０．２ ＭＤＬ−Ａ，７０μＭ ７２．４±６．７ １３．９±１．２ ＩＬ−６，５０ｎｇ／ｍＬ ３０．４±４．２ ４８．３±８．６ ＋ＭＤＬ−Ａ，７０μＭ ５７．７±４．３ ２６．４±３．５ ＬＩＦ，５ｎｇ／ｍＬ ２８．８±５．６ ５０．４±８．９ ＋ＭＤＬ−Ａ，７０μＭ ３３．１±４．４ ４８．３±７．６ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

【００４８】上記の測定結果から、ＩＬ−６の５０ｎｇ
／ｍＬ刺激により分化したＭ１細胞の増加はＭＤＬ−Ａ
の７０μＭの処理により減少した。しかしながら、ＬＩ
Ｆの５ｎｇ／ｍＬの刺激による増加は、同濃度のＭＤＬ
−Ａでは抑制されなかった。そこで、Ｍ１細胞分化に対
するＩＬ−６とＬＩＦとの作用の違いについて検討する
ことにする。

【００４９】ＩＬ−６レセプターとＬＩＦレセプターは
共にｇｐ１３０を共有サブユニットに持つＩＬ−６レセ
プターファミリーである。ＩＬ−６はＩＬ−６レセプタ
ーと結合した後ｇｐ１３０と結合し、形成された３量体
は別の３量体とｇｐ１３０同士で会合して６量体を形成
し、２量体を形成したｇｐ１３０によるＪＡＫの活性化
とＳＴＡＴのリン酸化を介して核内へ情報を伝達する。
一方、ＬＩＦはＬＩＦレセプター、ｇｐ１３０と結合す
る。しかしながら、ＬＩＦの場合はＩＬ−６と異なり、
６量体は形成せず、同じＪＡＫ／ＳＴＡＴの情報伝達系
を使って、核内に情報を伝達する。

【００５０】ＩＬ−６やＬＩＦ刺激によるＭ１細胞分化
経路は形成される受容体複合体以外は共通である。両者
における相違点は、ＩＬ−６の反応においてはＩＬ−６
／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０同士のｇｐ１３０を介した６
量体を、一方、ＬＩＦの反応においてはＬＩＦレセプタ
ーとｇｐ１３０との３量体を形成することである。上記
の結果より、Ｍ１細胞分化誘導においてＭＤＬ−ＡはＬ
ＩＦではなく、ＩＬ−６刺激による分化誘導のみを阻害
したことから、受容体複合体形成、とくにｇｐ１３０の
２量体化による６量体形成を抑制することによって、Ｉ
Ｌ−６の作用を阻害していることが示唆された。

【００５１】更に、サイトカイン特有の情報伝達系であ
るＪＡＫ／ＳＴＡＴにも数種のサブユニットタイプがあ
り、その組み合わせでサイトカインに特異的な情報伝達
を制御していることが知られている。例えば、ＩＬ−６
タイプのサイトカインではジェーナスキナーゼ１（以
下、ＪＡＫ１と称する）、ジェーナスキナーゼ２（以
下、ＪＡＫ２と称する）、ＳＴＡＴ３のキナーゼのサブ
ユニットが関与している。［Ｌｕｔｔｉｃｋｅｎ，Ｃ．
ｅｔ ａｌ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎ
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＡＰＲＦ ａｎｄ
ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ Ｊａｋ１ ｗｉｔｈ
ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６ ｓｉｇｎａｌ
ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ，ｇｐ１３０．Ｓｃｉｅｎｃｅ，
２６３，８９−９２（１９９４）］。

【００５２】そこで、細胞外ドメインに顆粒球コロニー
刺激因子レセプター（以下、ＧＣＳＦＲと称する）を、
細胞内ドメインにＢＯＸ１，２構造（ｇｐ１３０の細胞
内リン酸化部位）のＪＡＫ２を組み込んだＧＣＳＦＲ−
ｇｐ１３０キメラレセプターを発現したＢａｆ３／ＧＣ
ＳＦＲ−ｇｐ１３０細胞を用いてＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３
に対するＭＤＬ−Ａの効果を検討した。その検討は以下
の方法に従った。

【００５３】共有サブユニットｇｐ１３０及びＩＬ−６
の特異的情報伝達系ＪＡＫ／ＳＴＡＴについて検討する
ため、遺伝子操作により細胞外にＧＣＳＦの細胞外ドメ
インを、細胞内にｇｐ１３０の細胞内ドメインを持つキ
メラレセプターを発現させたＢａｆ３細胞を作製した。
このキメラ細胞はＩＬ−６には反応せず、ＧＣＳＦの刺
激で反応し、増殖する。従って、レセプター複合体形成
に関わりなく、情報伝達系であるＪＡＫ／ＳＴＡＴに対
する効果を検討することができる。

【００５４】キメラレセプター細胞（Ｂａｆ３／ＧＣＳ
ＦＲ−ｇｐ１３０、１０⁴ ｃｅｌｌｓ／１００μＬ／ｗ
ｅｌｌ）を８０μＭのＭＤＬ−Ａの存在下あるいは不在
下に、１００ｎｇ／ｍＬのＧＣＳＦあるいは５０ｎｇ／
ｍＬのＩＬ−６を添加し、５％ＣＯ₂ 下、３７℃で７２
時間インキュベートした。次いで、５ｍｇ／ｍＬのＭＴ
Ｔ試薬を２０μＬ添加し、４時間、３７℃でインキュベ
ートした。遠心分離後、染色した細胞を１００μＬのジ
メチルスルホキシド溶液で溶解し、６４５ｎｍの吸光度
を９６穴マルチプレートリーダー（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ
Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ Ｐｌｕｓ ＭＫＩＩ、大日本製薬
社製）により測定した。測定結果は以下の通りであっ
た。

【００５５】キメラレセプター細胞のＪＡＫ／ＳＴＡＴ
情報伝達系に対するＭＤＬ−Ａの効果の測定結果は、下
記に示す通りである。 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 細 胞 増 殖（％） 作用因子 ＭＤＬ−Ａ，０μＭ ＭＤＬ−Ａ，８０μＭ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ ＧＣＳＦ，０ｎｇ／ｍＬ ２１．２±０．５ １８．４±１．１ ＧＣＳＦ，１００ｎｇ／ｍＬ １００．０ １０８．６±６．９ ＋ＧＣＳＦ抗体，３μｇ／ｍＬ １８．９±０．２ ２０．３±１．４ ＋チロフォスチンＡＧ４９０，１０μｇ／ｍＬ １３．５±１．８ １５．８±１．８ ＩＬ−３，２０ｎｇ／ｍＬ １２５．７±１０．３ １３０．１±１２．４ ＩＬ−６, ５０ｎｇ／ｍＬ ２３．５±１．７ ２０．６±１．４ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

【００５６】上記の測定結果が示すように、ＧＣＳＦの
１００ｎｇ／ｍＬ添加時の細胞増殖を１００％としたと
き、ＧＣＳＦモノクロナール抗体の３μｇ／ｍＬ、ＪＡ
Ｋ２阻害剤、チロフォスチンＡＧ４９０の１０μｇ／ｍ
Ｌの処理による細胞増殖は、それぞれ完全に抑制され
た。この結果から、この実験系がＧＣＳＦの刺激により
ＪＡＫ／ＳＴＡＴの情報伝達系を介して反応しているこ
とが確認された。ＧＣＳＦの１００ｎｇ／ｍＬ刺激によ
る細胞増殖は、ＭＤＬ−Ａの８０μＭの添加により抑制
されなかった。

【００５７】更に、前記の測定結果が示すように、ヒト
プロＢ細胞株はＩＬ−３依存的であることから、ＩＬ−
３の２０ｎｇ／ｍＬの添加によっても増殖するが、ＭＤ
Ｌ−Ａはこの増殖にも影響しなかった。キメラレセプタ
ー細胞は、過剰のＩＬ−６の５０ｎｇ／ｍＬ添加によっ
ても増殖しなかった。これらの結果は、ＭＤＬ−Ａが顆
粒球コロニー刺激レセプターには作用せず、更に細胞内
ドメインのＪＡＫ／ＳＴＡＴにも作用していないことを
明確に示している。これらの結果より、ＭＤＬ−Ａの作
用部位は情報伝達系及び、リン酸化や転写ではないこと
が示唆されたことからレセプター機構について検討する
必要がある。

【００５８】そこで、レセプター機構の実験には、ＩＬ
−６Ｒを多く発現しているＵ２６６細胞（ヒト）の細胞
破砕液を用いた。図１のＡに示すように、抗ＩＬ−６Ｒ
抗体により免疫沈降し、電気泳動後、抗ｇｐ１３０抗体
でブロッティングした。ＩＬ−６添加によりＭＤＬ−Ａ
処理（［ ³Ｈ］ＭＤＬ−Ａ、０．１μｇを含む）、未処
理の、いずれの場合もｇｐ１３０のバンドが観察された
ことから、ＭＤＬ−ＡはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１
３０の複合体の形成を阻害しないことが示された。しか
しながら、図１のＢに示したように、オートラヂオグラ
フィーにより、ｇｐ１３０に相当する位置に明瞭な［ ³
Ｈ］ＭＤＬ−Ａによるバンドが認められ、更に過剰の非
放射性標識ＭＤＬ−Ａ添加によりバンドの減少が観察さ
れた。

【００５９】一方、図１のＣに示すＩＬ−６Ｒのオート
ラヂオグラフィーを示す図１のＤには、ＩＬ−６Ｒ相当
部分にはバンドは認められなかった。これらの結果は、
ＭＤＬ−Ａがｇｐ１３０と競合的に結合するが、ＩＬ−
６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０の複合体の形成は阻害して
いないことを明瞭に示している。なお、ＳＴＡＴ３抗体
による免疫沈降法とフォスホチロシンキナーゼ抗体によ
るブロッテイング法よりＭＤＬ−ＡはＳＴＡＴ３を阻害
しないことが確認された。

【００６０】ＭＤＬ−ＡはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ
１３０の複合体の形成を阻害しないことについて検討す
る。Ｕ２６６細胞破砕液にＩＬ−６を添加していること
から、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０複合体が形成
される。この反応液を抗ＩＬ−６Ｒ抗体で免疫沈降して
いるのでＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体およ
びＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０複合体がそれぞれ
沈降する。沈降物を電気泳動し、抗ｇｐ１３０抗体でウ
ェスタン ブロッティング（ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔ
ｉｎｇ）した。その結果、染色されたのはＩＬ−６／Ｉ
Ｌ−６Ｒ／ｇｐ１３０複合体のみである。

【００６１】ＭＤＬ−ＡがＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ
１３０複合体の形成を阻害すれば、ｇｐ１３０のバンド
は減少あるいは消失するはずであるが、そのような結果
が得られなかったことから、ＭＤＬ−Ａは、３量体形成
には影響しないことが示された。更に、［³ Ｈ］ＭＤＬ
−Ａを同時に添加したオートラヂオグラフィーの結果よ
り、ｇｐ１３０のバンドに一致して［³ Ｈ］ＭＤＬ−Ａ
の活性が認められた。これらの結果は、ＭＤＬ−Ａが３
量体形成は阻害しないが、ｇｐ１３０に結合しているこ
とを明確に示している。従って、ＭＤＬ−Ａが細胞内情
報伝達系ＪＡＫ／ＳＴＡＴには影響しないこと、ｇｐ１
３０の２量体化を介した６量体を形成するＩＬ−６やＩ
Ｌ−１１の活性を選択的に抑制すること、からＭＤＬ−
ＡのＩＬ−６阻害作用はｇｐ１３０に作用して６量体形
成を阻害することが示唆される。

【００６２】更にまた、ＩＬ−６は３個のトポロジー的
な結合サイト１、２および３を持ち、結合サイト１を介
してＩＬ−６Ｒと、結合サイト２を介してｇｐ１３０
（第一ｇｐ１３０）と結合し、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／
ｇｐ１３０の３量体複合体を形成する。次いで、３量体
複合体はｇｐ１３０の同種２量体化を誘導して６量体複
合体を形成し、ＪＡＫ／ＳＴＡＴの情報伝達系の活性化
へと導く。

【００６３】これまで不明とされていたＩＬ−６の結合
サイト３の役割が３量体を形成したｇｐ１３０（第二ｇ
ｐ１３０）と結合し、６量体レセプター複合体の安定化
への寄与であることが提唱された［Ｐａｏｎｅｓｓａ，
Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｔｗｏ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ａｎｄ
ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｓｉｔｅｓ ｏｎ ＩＬ−６
ｔｒｉｇｇｅｒ ｇｐ１３０ ｄｉｍｅｒ ｆｏｒｍ
ａｔｉｏｎ ａｎｄｓｉｇｎａｌｉｎｇ．ＥＭＢＯ
Ｊ．１４，１９４２−１９５５）］。以上の結果より、
ＭＤＬ−Ａの作用機序はｇｐ１３０に存在するＩＬ−６
サイト３のリガンドに結合し、ｇｐ１３０の同種２量体
化を阻害してＩＬ−６やＩＬ−１１の作用を抑制するこ
とが解明された。

【００６４】ＭＤＬ−Ａは、マウス頭頂骨細胞と大腿骨
細胞との共培養系においてＩＬ−６誘導破骨細胞新生を
阻害したことから、ＩＬ−６と同様にｇｐ１３０の２量
体化形成を必須とするＩＬ−１１の反応も抑制すること
が推測された。図２のＡに示したＩＬ−６の２０ｎｇ／
ｍＬとＩＬ−６Ｒの５０ｎｇ／ｍＬとを同時添加した場
合、および図２のＢに示したＩＬ−１１の１０ｎｇ／ｍ
Ｌの添加の場合により酒石酸抵抗性酸性フォスファター
ゼ陽性（ＴＲＡＰ陽性）の多核細胞、破骨細胞がそれぞ
れ観察された。これらの破骨細胞新生は、それぞれＭＤ
Ｌ−Ａの用量依存的に抑制された。

【００６５】破骨細胞の実験には新生児マウス頭頂骨細
胞を用い骨髄細胞と共培養下でのサイトカイン誘導によ
る破骨細胞分化を指標としてＭＤＬ−Ａの効果を検討し
た。ＩＬ−６、ＩＬ−１１のいずれの刺激においても破
骨細胞分化が顕著に観察された。更に具体的に観察する
と、図３のＡはＩＬ−１１が４０ｎｇ／ｍＬ投与された
場合であり、大きく分化した細胞が観察された。図３の
ＢはＩＬ−１１が４０ｎｇ／ｍＬ＋ＭＤＬ−Ａが５０μ
ｇ／ｍＬ投与された場合であり、分化誘導作用が抑制さ
れていることが観察された。

【００６６】同様に、図３のＣはＩＬ−６が５０Ｕ／ｍ
Ｌ＋ＩＬ−６Ｒが５０ｎｇ／ｍＬ投与された場合であ
り、大きく分化した細胞が観察された。図３のＤはＩＬ
−６が５０Ｕ／ｍＬ＋ＩＬ−６Ｒが５０ｎｇ／ｍＬ＋Ｍ
ＤＬ−Ａが５０μｇ／ｍＬ投与された場合であり、分化
誘導作用が抑制されていることが観察された。従って、
ＭＤＬ−Ａは、ＩＬ−６、ＩＬ−１１共通の刺激伝達系
に対して阻害することが示唆された。

【００６７】ホルモン依存性骨粗鬆症は、通常は１７β
−エストラジオールの産生によりＩＬ−６が抑制される
が、閉経後はホルモンバランスが崩れ、増加したＩＬ−
６により骨粗鬆症が誘発されることが提唱されている。
［Ａｔｋｉｎｓ，Ｇ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｃｏｏｒｄｉｎ
ａｔｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂ
ｙ ｓｔｒｏｍａｌ ａｎｄ ｈｅｍｏｔｏｐｏｉｅｔ
ｉｃ ｃｅｌｌｓｄｕｒｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｏｓｔｅ
ｏｃｌａｓｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｂｏｎｅ，２６，
６５３−６６１（２０００）、Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏ
ｓ，Ｎ．Ｇ．，Ｇｅｏｒｇａｎａｓ，Ｋ．，Ｓｋｏｕｔ
ｅｌｌａｓ，Ｖ．，Ｋｏｎｓｔａｎｔｅｌｌｏｓ，Ｅ．
＆ Ｌｙｒｉｔｉｓ，Ｇ．Ｐ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ
ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６ ｓｅｒｕｍ ｌ
ｅｖｅｌｓ ｗｉｔｈ ｂｏｎｅ ｄｅｎｓｉｔｙ ｉ
ｎ ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ ｗｏｍｅｎ．Ｃｌ
ｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１６，１６２−１６５（１
９９７）］。

【００６８】そこで、閉経後骨粗鬆症（ｐｏｓｔｍｅｎ
ｏｐａｕｓａｌ ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ）モデルの
実験動物モデルである卵巣摘出（Ｏｖａｒｉｅｃｔｏｍ
ｙＯＶＸ）マウスを用いて骨吸収に対するＭＤＬ−Ａの
効果を、以下の実施例により検討した。

【００６９】

【実施例】本発明に用いられるＭＤＬ−Ａの化合物は、
［Ｓｕｎａｚｕｋａ，Ｔ．ｅｔａｌ．Ｔｏｔａｌ Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ（＋）−Ｍａｄｉｎｄｏｌｉｎｅ
Ａ ａｎｄ（−）−Ｍｄｉｎｄｏｌｉｎｅ Ｂ，Ｐｏｔ
ｅｎｔ，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ
ｏｆ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ６．Ｄｅｔｅｒｍｉｎ
ａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｎｄ
Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎｓ
（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０００，１２２，
９，ｐｐ．２１２２−２１２３（２０００）］の文献に
記載の方法に従って調製した。

【００７０】４週齢のｄｄｙ系雌性マウス（日本ＳＬＣ
社より入手）をエーテル軽麻酔下に背部皮膚を切開し、
卵巣を摘出した。正常群（ａ）、卵巣摘出群（ｂ）には
５％エタノールを投与した。一方、卵巣を摘出し、１７
β−エストラジオール（同仁堂社製）の５μｇ／ｋｇを
腹腔内投与した群（ｃ）、ＭＤＬ−Ａの１０ｍｇ／ｋｇ
経口投与群（ｄ）、ＭＤＬ−Ａの６０ｍｇ／ｋｇ投与群
（ｅ）として、それぞれ隔日に４週間投与した。

【００７１】４週間後における骨量比減少の抑制、血中
Ｃａ²⁺濃度増加抑制、子宮重量減少、及び血中ＩＬ−６
濃度増加抑制をそれぞれ以下の方法に従って測定した。
骨量比減少抑制は体重に対する大腿骨重量の比で表し
た。血中カルシウム濃度増加抑制や血中ＩＬ−６濃度増
加抑制はそれぞれＯＣＰＣ法（オルトクレゾールフタレ
インコンプレキソン法）、ＥＬＩＺＡ法（Ｅｎｚｙｍｅ
−ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａ
ｙ）法により測定した。なお、記号＊、＊＊は卵巣摘出
群を対照として、それぞれ５％、１％の統計的有意差を
示している。実験は各群を５匹とした。

【００７２】実験結果は図４に示した通りであった。図
４のＡに示した骨量比減少の抑制においては、正常群
（ａ）では２．１９±０．１３、卵巣摘出群（ｂ）では
１．４２±０．１９、１７β−エストラジオール投与群
（ｃ）では２．０２±０．２８ ^* 、ＭＤＬ−Ａの１０ｍ
ｇ／ｋｇ投与群（ｄ）では１．７２±０．１８、ＭＤＬ
−Ａの６０ｍｇ／ｋｇ投与群（ｅ）では１．９４±０．
２７^* であった。これらの結果によれば、ＭＤＬ−Ａは
陽性対象として用いた１７β−エストラジオールと同等
の効果が示された。

【００７３】図４のＢに示した血中Ｃａ²⁺濃度（ｍｇ／
ｄＬ）抑制においては、正常群（ａ）では１０．７±
０．７、卵巣摘出群（ｂ）では１４．７±２．０、１７
β−エストラジオール投与群（ｃ）では１０．３±０．
５^* 、ＭＤＬ−Ａの１０ｍｇ／ｋｇ投与群（ｄ）では１
２．９±０．９、ＭＤＬ−Ａの６０ｍｇ／ｋｇ投与群
（ｅ）では１２．３±２．８であった。これらの結果に
よれば、ＭＤＬ−Ａは陽性対照とした１７β−エストラ
ジオールと同様に骨吸収が起こっていることが認められ
た。

【００７４】図４のＣに示した子宮重量（ｍｇ）減少に
おいては、正常群（ａ）では１８２．９±４５．３、卵
巣摘出群（ｂ）では３５．９±５．１、１７β−エスト
ラジオール投与群（ｃ）では２２９．９±２６．
５ ^** 、ＭＤＬ−Ａの１０ｍｇ／ｋｇ投与群（ｄ）では
４１．０±６．８、ＭＤＬ−Ａの６０ｍｇ／ｋｇ投与群
（ｅ）では３８．５±６．８であった。これらの結果に
よれば、陽性対照とした１７β−エストラジオールは女
性ホルモンであることから子宮重量が増加したが、ＭＤ
Ｌ−Ａにはホルモン様作用がないことが示された。

【００７５】図４のＤに示した血中ＩＬ−６濃度（ｐｇ
／ｍＬ）増加においては、正常群（ａ）では２６．９±
１１．３、卵巣摘出群（ｂ）では３９１．５±７６．
３、１７β−エストラジオール投与群（ｃ）では２２
９．９±２６．５ ^** 、ＭＤＬ−Ａの１０ｍｇ／ｋｇ投
与群（ｄ）では４１．０±６．８、ＭＤＬ−Ａの６０ｍ
ｇ／ｋｇ投与群（ｅ）では３８．５±６．８であった。
これらの結果によれば、陽性対照とした１７β−エスト
ラジオールはＩＬ−６産生を増加させて骨吸収を抑制す
るが、ＭＤＬ−ＡはＩＬ−６産生を介さないことを示し
ている。

【００７６】

【発明の効果】以上の結果から明らかなように、骨量比
減少の抑制、血中Ｃａ²⁺濃度増加抑制、子宮重量増加お
よび血中ＩＬ−６濃度増加は、ＭＤＬ−Ａが、１７β−
エストラジオールのごとき女性ホルモン作用を介して作
用しているのではなく、それとは全く異なる作用機序に
よって骨吸収抑制作用を示し、骨粗鬆症モデルにおいて
効果を発揮していることを示している。すなわち、細胞
を用いた実験においては破骨細胞形成を阻害し、動物実
験においては閉経後骨粗鬆症モデルの実験動物である卵
巣摘出マウスにおける骨吸収を抑制し、ｇｐ１３０阻害
物質が破骨細胞分化を制御して骨吸収を抑制する。従っ
て、１７β−エストラジオール治療時に見られるホルモ
ン作用による子宮出血や子宮内膜癌、乳癌等のリスクの
増大、或いは骨軟化症や頻回投与による効果の低下が解
消され、骨粗鬆症の有効な治療薬として期待される。

【図面の簡単な説明】

【図１】Ａ：Ｕ２６６細胞（ヒト）の細胞破砕液を抗Ｉ
Ｌ−６Ｒ抗体により免疫沈降し、電気泳動後抗ｇｐ１３
０抗体でブロッティングした電気泳動図である。 Ｂ：Ｕ２６６細胞（ヒト）の細胞破砕液を抗ＩＬ−６Ｒ
抗体により免疫沈降し、電気泳動後抗ＩＬ−６Ｒ抗体で
ブロッティングした電気泳動図である。 Ｃ：Ｕ２６６細胞（ヒト）の細胞破砕液を抗ＩＬ−６Ｒ
抗体により免疫沈降し、電気泳動後抗ｇｐ１３０抗体で
ブロッティングしたオートラヂオグラフィーである。 Ｄ：Ｕ２６６細胞（ヒト）の細胞破砕気を抗ＩＬ−６Ｒ
抗体により免疫沈降し、電気泳動後抗ＩＬ−６Ｒ抗体で
ブロッティングしたオートラヂオグラフィーである。

【図２】Ａ：ＩＬ−６とＩＬ−６Ｒの同時添加の場合に
おける形成された破骨細胞数に対するＭＤＬ−Ａの用量
依存的抑制を示すグラフである。 Ｂ：ＩＬ−１１の添加の場合における形成された破骨細
胞数に対するＭＤＬ−Ａの用量依存的抑制を示すグラフ
である。

【図３】Ａ：閉経後骨粗鬆症モデルの実験動物である卵
巣摘出マウスを用いてＭＤＬ−Ａの効果確認のための骨
量比減少を示すものであり、（ａ）は正常群、（ｂ）は
卵巣摘出群、（ｃ）は陽性対象群、（ｄ）及び（ｅ）は
ＭＤＬ−Ａの経口投与に対するグラフである。 Ｂ：閉経後骨粗鬆症モデルの実験動物である卵巣摘出マ
ウスを用いてＭＤＬ−Ａの効果確認のための血中Ｃａ²⁺
濃度増加抑制を示すものであり、（ａ）は正常群、
（ｂ）は卵巣摘出群、（ｃ）は陽性対象群、（ｄ）及び
（ｅ）はＭＤＬ−Ａの経口投与に対するグラフである。 Ｃ：閉経後骨粗鬆症モデルの実験動物である卵巣摘出マ
ウスを用いてＭＤＬ−Ａの効果確認のための子宮重量減
少を示すものであり、（ａ）は正常群、（ｂ）は卵巣摘
出群、（ｃ）は陽性対象群、（ｄ）及び（ｅ）はＭＤＬ
−Ａの経口投与に対するグラフである。 Ｄ：閉経後骨粗鬆症モデルの実験動物である卵巣摘出マ
ウスを用いてＭＤＬ−Ａの効果確認のための血中ＩＬ−
６濃度増加を示すものであり、（ａ）は正常群、（ｂ）
は卵巣摘出群、（ｃ）は陽性対象群、（ｄ）及び（ｅ）
はＭＤＬ−Ａの経口投与に対するグラフである。

【図４】Ａ：骨量比減少の抑制を示すもので、（ａ）は
正常群、（ｂ）は卵巣摘出群、（ｃ）は陽性対象群、
（ｄ）及び（ｅ）はＭＤＬ−Ａに対するグラフである。 Ｂ：血中Ｃａ²⁺濃度（ｍｇ／ｄＬ）の抑制を示すもの
で、（ａ）は正常群、（ｂ）は卵巣摘出群、（ｃ）は陽
性対象群、（ｄ）及び（ｅ）はＭＤＬ−Ａに対するグラ
フである。 Ｃ：子宮重量（（ｍｇ）の減少を示すもので、（ａ）は
正常群、（ｂ）は卵巣摘出群、（ｃ）は陽性対象群、
（ｄ）及び（ｅ）はＭＤＬ−Ａに対するグラフである。 Ｄ：血中ＩＬ−６濃度（ｐｇ／ｍＬ）の増加を示すもの
で、（ａ）は正常群、（ｂ）は卵巣摘出群、（ｃ）は陽
性対象群、（ｄ）及び（ｅ）はＭＤＬ−Ａに対するグラ
フである。

フロントページの続き (72)発明者 林 正彦 東京都港区白金５丁目９番１号 社団法人 北里研究所内 Ｆターム(参考） 4C050 AA01 AA07 BB04 CC16 EE01 FF01 GG03 HH01 4C086 AA01 AA02 CB22 MA01 MA04 NA14 ZA97 ZB11 ZC02

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式 【化１】 （式中、Ｈは水素、Ｏは酸素、Ｎは窒素、Ｒ及びＳは絶
   対立体配置を表す記号）で表されるマジンドリン−Ａを
   有効成分とする骨粗鬆症の予防治療剤。
2. 【請求項２】 請求項１記載のマジンドリン−Ａはサイ
   トカイン選択的抑制を有するマジンドリン−Ａを有効成
   分とする骨粗鬆症の予防治療剤。
3. 【請求項３】 選択的抑制が細胞内情報伝達系であるジ
   ェーナスキナーゼ／情報伝達及び転写活性化因子の抑制
   である請求項２に記載のマジンドリン−Ａを有効成分と
   する骨粗鬆症の予防治療剤。
4. 【請求項４】 選択的抑制が情報伝達性１３０−ｋＤ糖
   タンパク鎖の２量体化を介した６量体を形成するインタ
   ーロイキン−６及びインターロイキン−１１の活性を抑
   制し、この６量体の形成を請求項１記載のマジンドリン
   −Ａが阻害することからなる請求項２に記載のマジンド
   リン−Ａを有効成分とする骨粗鬆症の予防治療剤。