JP2003160596A - 蛍光標識化ペクチン多糖、蛍光標識化酸性糖類の製造方法、酸性糖類の分解または合成活性の測定方法およびそのためのキット - Google Patents
蛍光標識化ペクチン多糖、蛍光標識化酸性糖類の製造方法、酸性糖類の分解または合成活性の測定方法およびそのためのキットInfo
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- JP2003160596A JP2003160596A JP2001364818A JP2001364818A JP2003160596A JP 2003160596 A JP2003160596 A JP 2003160596A JP 2001364818 A JP2001364818 A JP 2001364818A JP 2001364818 A JP2001364818 A JP 2001364818A JP 2003160596 A JP2003160596 A JP 2003160596A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ペクチンやアルギン酸などの酸性多糖類の分
解または合成活性の測定に有用な蛍光標識された酸性糖
類を提供する。 【解決手段】 一般式（１） 【化１】 〔ただし式中、Ｘは、水素原子またはＧａｌＡ、Ｇａｌ
Ａ2 、ＧａｌＡ4 、ＧａｌＡ5 、ＧａｌＡ6 、ＧａｌＡ
7 、ＧａｌＡ8 、ＧａｌＡ9 、ＧａｌＡ−Ｒｈａ、（Ｇ
ａｌＡ−Ｒｈａ）2 、（ＧａｌＡ−Ｒｈａ）3 、ＲＧ−
Ｉ、ＲＧ−IIで示される糖鎖残基であり、糖鎖中のヒド
ロキシ基の水素原子がアセチル基で置換されていてもよ
く、糖鎖中のカルボキシル基の水素原子がメチル基で置
換されていてもよい。〕で表される蛍光標識化ペクチン
多糖。
解または合成活性の測定に有用な蛍光標識された酸性糖
類を提供する。 【解決手段】 一般式（１） 【化１】 〔ただし式中、Ｘは、水素原子またはＧａｌＡ、Ｇａｌ
Ａ2 、ＧａｌＡ4 、ＧａｌＡ5 、ＧａｌＡ6 、ＧａｌＡ
7 、ＧａｌＡ8 、ＧａｌＡ9 、ＧａｌＡ−Ｒｈａ、（Ｇ
ａｌＡ−Ｒｈａ）2 、（ＧａｌＡ−Ｒｈａ）3 、ＲＧ−
Ｉ、ＲＧ−IIで示される糖鎖残基であり、糖鎖中のヒド
ロキシ基の水素原子がアセチル基で置換されていてもよ
く、糖鎖中のカルボキシル基の水素原子がメチル基で置
換されていてもよい。〕で表される蛍光標識化ペクチン
多糖。
Description
【０００１】
【発明が属する技術分野】本発明は、新規な蛍光標識化
酸性糖類の製造方法、酸性糖類の分解または合成活性の
測定方法およびそのためのキットに関するものである。
酸性糖類の製造方法、酸性糖類の分解または合成活性の
測定方法およびそのためのキットに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】自然界に存在する多糖類の中には、カル
ボキシル基を有する酸性多糖類がある。酸性多糖類であ
るペクチンは植物細胞壁を構成するものとして存在し、
またそれらは植物の成長調節や生体防御などの生理機能
に関与している。植物細胞、組織におけるペクチンの構
造は成長又は成熟に伴って変化することが知られてい
る。このペクチンの正常な代謝が乱れると、様々な組織
の異常を引き起こし、農作物の収量の減少や商品価値の
著しい低下をもたらす。また、ペクチンは柑橘類の皮な
どに多く存在し、それらはジャムやゼリーなど食品や糊
剤や増強剤などの添加物として広く工業的に利用されて
いる。ペクチンが分解して生成するガラクツロン酸オリ
ゴ糖は、植物の成長・分化を調節したり、植物の病原菌
抵抗性に関与する。ＲＧ−Ｉは、柔組織などに見出さ
れ、組織や成長の段階により多様な構造をとることが知
られている。ＲＧ−IIは複雑な構造をもつ分子量約５，
０００の多糖である。
ボキシル基を有する酸性多糖類がある。酸性多糖類であ
るペクチンは植物細胞壁を構成するものとして存在し、
またそれらは植物の成長調節や生体防御などの生理機能
に関与している。植物細胞、組織におけるペクチンの構
造は成長又は成熟に伴って変化することが知られてい
る。このペクチンの正常な代謝が乱れると、様々な組織
の異常を引き起こし、農作物の収量の減少や商品価値の
著しい低下をもたらす。また、ペクチンは柑橘類の皮な
どに多く存在し、それらはジャムやゼリーなど食品や糊
剤や増強剤などの添加物として広く工業的に利用されて
いる。ペクチンが分解して生成するガラクツロン酸オリ
ゴ糖は、植物の成長・分化を調節したり、植物の病原菌
抵抗性に関与する。ＲＧ−Ｉは、柔組織などに見出さ
れ、組織や成長の段階により多様な構造をとることが知
られている。ＲＧ−IIは複雑な構造をもつ分子量約５，
０００の多糖である。
【０００３】上述のようにペクチンはオリゴガラクツロ
ナンのごとく生理活性物質として、また、種々の生理機
能の関与する生体組織の構築因子として、それぞれに重
要な生体成分であり、ペクチンの正常な代謝と細胞壁中
での分布は植物の生命活動の維持に極めて重要である。
したがって植物におけるペクチンの代謝および細胞壁中
での分布と機能との関連などペクチンの代謝、構造解
析、ペクチンの生合成や分解に関与する酵素群の分布、
活性の測定などが不可欠である。また、ペクチンは工業
材料として重要な素材である。
ナンのごとく生理活性物質として、また、種々の生理機
能の関与する生体組織の構築因子として、それぞれに重
要な生体成分であり、ペクチンの正常な代謝と細胞壁中
での分布は植物の生命活動の維持に極めて重要である。
したがって植物におけるペクチンの代謝および細胞壁中
での分布と機能との関連などペクチンの代謝、構造解
析、ペクチンの生合成や分解に関与する酵素群の分布、
活性の測定などが不可欠である。また、ペクチンは工業
材料として重要な素材である。
【０００４】また、海藻に含まれるアルギン酸は、ｄ−
マンヌロン酸残基とｌ−グルロン酸残基を含有し、著し
く不均一な分子構造の水溶性の酸性多糖類である。アル
ギン酸は、食品添加物、繊維、アイスクリームやチーズ
の安定化剤、医薬品用ガーゼ、歯の鋳型、ダイエット食
品等として応用されている。
マンヌロン酸残基とｌ−グルロン酸残基を含有し、著し
く不均一な分子構造の水溶性の酸性多糖類である。アル
ギン酸は、食品添加物、繊維、アイスクリームやチーズ
の安定化剤、医薬品用ガーゼ、歯の鋳型、ダイエット食
品等として応用されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従来、糖の代謝を分析
する方法として、糖の特定の基を蛍光標識化した蛍光標
識化糖を利用する方法が知られている（特開平１０−２
６７９３１号公報）。しかしながら、蛍光標識したペク
チンやアルギン酸は知られておらず、ペクチンやアルギ
ン酸の代謝、構造解析、ペクチンやアルギン酸の生合成
や分解に関与する酵素群の分布、活性の測定を行うに
は、ペクチンやアルギン酸を放射性同位元素でラベル化
しなければならなかった。
する方法として、糖の特定の基を蛍光標識化した蛍光標
識化糖を利用する方法が知られている（特開平１０−２
６７９３１号公報）。しかしながら、蛍光標識したペク
チンやアルギン酸は知られておらず、ペクチンやアルギ
ン酸の代謝、構造解析、ペクチンやアルギン酸の生合成
や分解に関与する酵素群の分布、活性の測定を行うに
は、ペクチンやアルギン酸を放射性同位元素でラベル化
しなければならなかった。
【０００６】蛍光標識したペクチン等が知られていなか
った理由は、ペクチンやアルギン酸などの酸性基を多く
含む酸性の糖質に対しては、従来知られている蛍光標識
化反応がほとんど進行しないためである。すなわち従
来、糖の蛍光標識反応は有機溶媒中で行われており、蛍
光標識化反応が脱水反応であるため、水分を十分除いて
行う必要があるが、ペクチンなどの酸性多糖類は有機溶
媒に全く溶解せず、反応は進行しない。
った理由は、ペクチンやアルギン酸などの酸性基を多く
含む酸性の糖質に対しては、従来知られている蛍光標識
化反応がほとんど進行しないためである。すなわち従
来、糖の蛍光標識反応は有機溶媒中で行われており、蛍
光標識化反応が脱水反応であるため、水分を十分除いて
行う必要があるが、ペクチンなどの酸性多糖類は有機溶
媒に全く溶解せず、反応は進行しない。
【０００７】本発明が解決しようとする課題は、ペクチ
ンやアルギン酸などの酸性多糖類の分解または合成活性
の測定に有用な蛍光標識された酸性糖類、その製造方
法、酸性糖類の分解または合成活性の測定方法およびそ
のためのキットを提供することにある。
ンやアルギン酸などの酸性多糖類の分解または合成活性
の測定に有用な蛍光標識された酸性糖類、その製造方
法、酸性糖類の分解または合成活性の測定方法およびそ
のためのキットを提供することにある。
【０００８】
【発明を解決するための手段】本発明者等は上記課題を
解決するため鋭意研究を重ねた結果、特定の標識化試薬
を水性溶媒中で酸性糖類と反応させることにより、酸性
糖類の還元性末端が蛍光標識された蛍光標識化酸性糖類
が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
解決するため鋭意研究を重ねた結果、特定の標識化試薬
を水性溶媒中で酸性糖類と反応させることにより、酸性
糖類の還元性末端が蛍光標識された蛍光標識化酸性糖類
が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】すなわち、上記課題を解決するための第１
の発明は、一般式（１）
の発明は、一般式（１）
【００１０】
【化３】
【００１１】〔ただし式中、Ｘは、水素原子またはＧａ
ｌＡ、ＧａｌＡ2 、ＧａｌＡ4 、ＧａｌＡ5 、ＧａｌＡ
6 、ＧａｌＡ7 、ＧａｌＡ8 、ＧａｌＡ9 、ＧａｌＡ
−Ｒｈａ、（ＧａｌＡ−Ｒｈａ）2 、（ＧａｌＡ−Ｒ
ｈａ）3 、ＲＧ−Ｉ、ＲＧ−IIで示される糖鎖残基で
あり、糖鎖中のヒドロキシ基の水素原子がアセチル基で
置換されていてもよく、糖鎖中のカルボキシル基の水素
原子がメチル基で置換されていてもよい。〕で表される
蛍光標識化ペクチン多糖に関するものである。
ｌＡ、ＧａｌＡ2 、ＧａｌＡ4 、ＧａｌＡ5 、ＧａｌＡ
6 、ＧａｌＡ7 、ＧａｌＡ8 、ＧａｌＡ9 、ＧａｌＡ
−Ｒｈａ、（ＧａｌＡ−Ｒｈａ）2 、（ＧａｌＡ−Ｒ
ｈａ）3 、ＲＧ−Ｉ、ＲＧ−IIで示される糖鎖残基で
あり、糖鎖中のヒドロキシ基の水素原子がアセチル基で
置換されていてもよく、糖鎖中のカルボキシル基の水素
原子がメチル基で置換されていてもよい。〕で表される
蛍光標識化ペクチン多糖に関するものである。
【００１２】上記課題を解決するための第２の発明は、
一般式（２）
一般式（２）
【００１３】
【化４】
【００１４】〔ただし式中、ｎは１〜９の整数を表
す。〕で示される蛍光標識化オリゴ−ｌ−グルロン酸に
関するものである。
す。〕で示される蛍光標識化オリゴ−ｌ−グルロン酸に
関するものである。
【００１５】上記課題を解決するための第３の発明は、
酸性糖類を水性溶媒中蛍光試薬と反応させることによ
り、酸性糖類の還元性末端を蛍光標識化することを特徴
とする蛍光標識化酸性糖類の製造方法に関するものであ
る。
酸性糖類を水性溶媒中蛍光試薬と反応させることによ
り、酸性糖類の還元性末端を蛍光標識化することを特徴
とする蛍光標識化酸性糖類の製造方法に関するものであ
る。
【００１６】上記課題を解決するための第４の発明は、
上記第３の発明であって、前記酸性糖類が、ペクチンで
あることを特徴とするものである。
上記第３の発明であって、前記酸性糖類が、ペクチンで
あることを特徴とするものである。
【００１７】上記課題を解決するための第５の発明は、
上記第３の発明であって、前記ペクチンが、ホモガラク
ツロナン、ラムノガラクツロナンI 、ラムノガラクツロ
ナンII、それらの構成糖のヒドロキシ基の水素原子がア
セチル基で置換されたものまたはそれらの構成糖のカル
ボキシル基の水素原子がメチル基で置換されたものから
選ばれるペクチン多糖であることを特徴とするものであ
る。
上記第３の発明であって、前記ペクチンが、ホモガラク
ツロナン、ラムノガラクツロナンI 、ラムノガラクツロ
ナンII、それらの構成糖のヒドロキシ基の水素原子がア
セチル基で置換されたものまたはそれらの構成糖のカル
ボキシル基の水素原子がメチル基で置換されたものから
選ばれるペクチン多糖であることを特徴とするものであ
る。
【００１８】上記課題を解決するための第６の発明は、
上記第３の発明であって、前記酸性糖類が、ガラクツロ
ン酸単糖、ガラクツロン酸二糖、オリゴガラクツロン
酸、ＲＧ−Ｉオリゴマー、それらの構成糖のヒドロキシ
基の水素原子がアセチル基で置換されたものまたはそれ
らの構成糖のカルボキシル基の水素原子がメチル基で置
換されたものであることを特徴とするものである。
上記第３の発明であって、前記酸性糖類が、ガラクツロ
ン酸単糖、ガラクツロン酸二糖、オリゴガラクツロン
酸、ＲＧ−Ｉオリゴマー、それらの構成糖のヒドロキシ
基の水素原子がアセチル基で置換されたものまたはそれ
らの構成糖のカルボキシル基の水素原子がメチル基で置
換されたものであることを特徴とするものである。
【００１９】上記課題を解決するための第７の発明は、
上記第３の発明であって、前記酸性糖類が、アルギン
酸、それらの構成糖のヒドロキシ基の水素原子がアセチ
ル基で置換されたものまたはそれらの構成糖のカルボキ
シル基の水素原子がメチル基で置換されたものであるこ
とを特徴とするものである。
上記第３の発明であって、前記酸性糖類が、アルギン
酸、それらの構成糖のヒドロキシ基の水素原子がアセチ
ル基で置換されたものまたはそれらの構成糖のカルボキ
シル基の水素原子がメチル基で置換されたものであるこ
とを特徴とするものである。
【００２０】上記課題を解決するための第８の発明は、
上記第３の発明であって、前記酸性糖類が、ｌ−グルロ
ン酸を構成単位とする酸性多糖類であることを特徴とす
るものである。
上記第３の発明であって、前記酸性糖類が、ｌ−グルロ
ン酸を構成単位とする酸性多糖類であることを特徴とす
るものである。
【００２１】上記課題を解決するための第９の発明は、
上記第３の発明であって、前記水性溶媒が水であること
を特徴とするものである。
上記第３の発明であって、前記水性溶媒が水であること
を特徴とするものである。
【００２２】上記課題を解決するための第１０の発明
は、上記第３の発明であって、前記蛍光試薬が、２−ア
ミノピリジン、２−アミノベンズアミド、２−アミノ安
息香酸、７−アミノ−４−メチルクマリン、８−アミノ
ナフタレン−１，３，６−トリスルホン酸、５−ジメチ
ルアミノナフタレン−１−（Ｎ−（２−アミノメチ
ル））スルホンアミドおよび１−アミノピレン−３，
６，８−トリスルホン酸からなる群よりえらばれる蛍光
試薬であることを特徴とするものである。
は、上記第３の発明であって、前記蛍光試薬が、２−ア
ミノピリジン、２−アミノベンズアミド、２−アミノ安
息香酸、７−アミノ−４−メチルクマリン、８−アミノ
ナフタレン−１，３，６−トリスルホン酸、５−ジメチ
ルアミノナフタレン−１−（Ｎ−（２−アミノメチ
ル））スルホンアミドおよび１−アミノピレン−３，
６，８−トリスルホン酸からなる群よりえらばれる蛍光
試薬であることを特徴とするものである。
【００２３】上記課題を解決するための第１１の発明
は、上記第３ないし第１０のいずれかの発明に記載の方
法により製造した蛍光標識化酸性糖類を基質とし分解ま
たは合成活性を測定することを特徴とする酸性糖類の分
解または合成活性の測定方法に関するものである。
は、上記第３ないし第１０のいずれかの発明に記載の方
法により製造した蛍光標識化酸性糖類を基質とし分解ま
たは合成活性を測定することを特徴とする酸性糖類の分
解または合成活性の測定方法に関するものである。
【００２４】上記課題を解決するための第１２の発明
は、上記第３ないし第１０のいずれかの発明に方法によ
り製造した蛍光標識化酸性糖類を含むことを特徴とする
酸性糖類の分解または合成活性の測定用キットに関する
ものである。
は、上記第３ないし第１０のいずれかの発明に方法によ
り製造した蛍光標識化酸性糖類を含むことを特徴とする
酸性糖類の分解または合成活性の測定用キットに関する
ものである。
【００２５】上記課題を解決するための第１３の発明
は、上記第１２の発明であって、水性溶媒と蛍光試薬を
含むことを特徴とする酸性糖類の分解または合成活性の
測定用キットに関するものである。
は、上記第１２の発明であって、水性溶媒と蛍光試薬を
含むことを特徴とする酸性糖類の分解または合成活性の
測定用キットに関するものである。
【００２６】
【発明の実施の形態】本発明において、前記一般式
（１）で示される蛍光標識化ペクチン多糖は、新規な化
合物である。一般式（１）で表される化合物を、具体的
に表記したものを表１に示す。なお、表１中「２ＡＢ」
は、２−アミノベンズアミドを表す。
（１）で示される蛍光標識化ペクチン多糖は、新規な化
合物である。一般式（１）で表される化合物を、具体的
に表記したものを表１に示す。なお、表１中「２ＡＢ」
は、２−アミノベンズアミドを表す。
【００２７】
【表１】
【００２８】前記一般式（１）で示される蛍光標識化ペ
クチン多糖を製造するには、ホモガラクツロナン、ラム
ノガラクツナンＩ、ラムノガラクツロナンII並びにそれ
らのメチルエステルからなる群より選ばれるペクチン多
糖と２−アミノベンズアミドとを、水等の水性溶媒中で
反応させて、ペクチン多糖の還元性末端をアミノ化し、
蛍光標識化したものである。
クチン多糖を製造するには、ホモガラクツロナン、ラム
ノガラクツナンＩ、ラムノガラクツロナンII並びにそれ
らのメチルエステルからなる群より選ばれるペクチン多
糖と２−アミノベンズアミドとを、水等の水性溶媒中で
反応させて、ペクチン多糖の還元性末端をアミノ化し、
蛍光標識化したものである。
【００２９】また、本発明における前記一般式（２）で
表される蛍光標識化オリゴグルロン酸は、新規化合物で
ある。
表される蛍光標識化オリゴグルロン酸は、新規化合物で
ある。
【００３０】前記一般式（２）で表される蛍光標識化オ
リゴグルロン酸を製造するには、１〜９糖のオリゴ−ｌ
−グルロン酸と２−アミノベンズアミドとを、水等の水
性溶媒中で反応させて、オリゴ−ｌ−クルロン酸の還元
性末端をアミノ化し、蛍光標識化したものである。
リゴグルロン酸を製造するには、１〜９糖のオリゴ−ｌ
−グルロン酸と２−アミノベンズアミドとを、水等の水
性溶媒中で反応させて、オリゴ−ｌ−クルロン酸の還元
性末端をアミノ化し、蛍光標識化したものである。
【００３１】また、前記一般式（１）および一般式
（２）で表される蛍光標識化糖化合物のの立体化学を明
確にするために表示すると以下のようになる。
（２）で表される蛍光標識化糖化合物のの立体化学を明
確にするために表示すると以下のようになる。
【００３２】
【化５】
【００３３】請求項３に記載した本発明方法において、
蛍光標識化されるのは酸性糖類である。本発明における
酸性糖類とは、カルボキシル基を有するウロン酸から構
成される糖類であれば特に限定されないが、例えばペク
チン、アルギン酸等の酸性多糖類およびそれらの分解物
であるオリゴ糖を挙げることができる。
蛍光標識化されるのは酸性糖類である。本発明における
酸性糖類とは、カルボキシル基を有するウロン酸から構
成される糖類であれば特に限定されないが、例えばペク
チン、アルギン酸等の酸性多糖類およびそれらの分解物
であるオリゴ糖を挙げることができる。
【００３４】本発明におけるペクチンとは、ホモガラク
ツロナン（以下、「ＨＧ」と略記する）、ラムノガラク
ツロナンＩ（以下、「ＲＧ−Ｉ」と略記する）、及びラ
ムノガラクツロナンII（以下、「ＲＧ−II」と略記す
る）を包含するものである。
ツロナン（以下、「ＨＧ」と略記する）、ラムノガラク
ツロナンＩ（以下、「ＲＧ−Ｉ」と略記する）、及びラ
ムノガラクツロナンII（以下、「ＲＧ−II」と略記す
る）を包含するものである。
【００３５】本発明におけるペクチン多糖の分解物であ
るオリゴ糖としては、ホモガラクツロナンを分解して得
られる３〜１０糖のオリゴガラクツロン酸や、３〜９糖
のＲＧ−Ｉオリゴマーを挙げることができる。またペク
チン多糖の分解物としては、ガラクツロン酸単糖、ガラ
クツロン酸二糖を挙げることができる。
るオリゴ糖としては、ホモガラクツロナンを分解して得
られる３〜１０糖のオリゴガラクツロン酸や、３〜９糖
のＲＧ−Ｉオリゴマーを挙げることができる。またペク
チン多糖の分解物としては、ガラクツロン酸単糖、ガラ
クツロン酸二糖を挙げることができる。
【００３６】本発明における、アルギン酸とはマンヌロ
ン酸とグルロン酸からなる不均一な分子である。
ン酸とグルロン酸からなる不均一な分子である。
【００３７】本発明におけるアルギン酸を分解して得ら
れるオリゴ糖としては、オリゴ−ｌ−グルロン酸等を挙
げることができる。
れるオリゴ糖としては、オリゴ−ｌ−グルロン酸等を挙
げることができる。
【００３８】本発明の酸性糖類は、上記のものの他、酸
性多糖類を構成する糖のヒドロキ基の水素原子がアセチ
ル基で置換されたものや、酸性多糖類を構成する糖のカ
ルボキシル基の水素原子がメチル基で置換されたもので
あってもよい。
性多糖類を構成する糖のヒドロキ基の水素原子がアセチ
ル基で置換されたものや、酸性多糖類を構成する糖のカ
ルボキシル基の水素原子がメチル基で置換されたもので
あってもよい。
【００３９】本発明の蛍光標識化酸性糖類を製造するに
は、上記酸性糖類を水性溶媒中蛍光試薬と反応させ、そ
の還元性末端を蛍光試薬で標識することにより得られ
る。
は、上記酸性糖類を水性溶媒中蛍光試薬と反応させ、そ
の還元性末端を蛍光試薬で標識することにより得られ
る。
【００４０】本発明方法における水性溶媒とは、水を挙
げることができる。
げることができる。
【００４１】本発明方法における蛍光試薬とは、上記酸
性糖類の還元性末端を蛍光標識化できる試薬であれば特
に限定されないが、例えば２−アミノピリジン、２−ア
ミノベンズアミド、２−アミノ安息香酸、７−アミノ−
４−メチルクマリン、８−アミノナフタレン−１，３，
６−トリスルホン酸、５−ジメチルアミノナフタレン−
１−（Ｎ−（２−アミノメチル））スルホンアミドおよ
び１−アミノピレン−３，６，８−トリスルホン酸等を
挙げることができる。
性糖類の還元性末端を蛍光標識化できる試薬であれば特
に限定されないが、例えば２−アミノピリジン、２−ア
ミノベンズアミド、２−アミノ安息香酸、７−アミノ−
４−メチルクマリン、８−アミノナフタレン−１，３，
６−トリスルホン酸、５−ジメチルアミノナフタレン−
１−（Ｎ−（２−アミノメチル））スルホンアミドおよ
び１−アミノピレン−３，６，８−トリスルホン酸等を
挙げることができる。
【００４２】上記酸性糖類を水性溶媒中で蛍光標識化す
る条件は、ｐＨ５〜ｐＨ７の弱酸性から中性、さらに好
ましくは５．５〜６．０の範囲で行えばよく、反応時間
は基質の種類によって異なるが、２時間程度行えばよ
い。
る条件は、ｐＨ５〜ｐＨ７の弱酸性から中性、さらに好
ましくは５．５〜６．０の範囲で行えばよく、反応時間
は基質の種類によって異なるが、２時間程度行えばよ
い。
【００４３】例えばペクチンを２−アミノベンズアミド
で蛍光標識化する場合を例にとって具体的に説明する
と、以下のようになる。
で蛍光標識化する場合を例にとって具体的に説明する
と、以下のようになる。
【００４４】まず還元剤であるシアノホウ素化ナトリウ
ム（ＮａＣＮＢＨ3 ）を水に溶解し、次いで蛍光試薬で
ある２−アミノベンズアミドを加え、約６５℃に加温
し、溶解させる。これに１０％酢酸を加えてｐＨ５．５
〜６．０に調節する。６５℃、２時間反応を行い、蛍光
標識化ペクチンを調製する。脱離しやすいアセチル基や
メチルエステル基を含むとき、あるいは、酸に不安定な
３−デオキシ糖を含む場合は４０℃、１６時間で行う。
２−アミノベンズアミド化したオリゴガラクツロン酸
（３糖）の構造を例示すると、以下の化学式（３）のよ
うになる。
ム（ＮａＣＮＢＨ3 ）を水に溶解し、次いで蛍光試薬で
ある２−アミノベンズアミドを加え、約６５℃に加温
し、溶解させる。これに１０％酢酸を加えてｐＨ５．５
〜６．０に調節する。６５℃、２時間反応を行い、蛍光
標識化ペクチンを調製する。脱離しやすいアセチル基や
メチルエステル基を含むとき、あるいは、酸に不安定な
３−デオキシ糖を含む場合は４０℃、１６時間で行う。
２−アミノベンズアミド化したオリゴガラクツロン酸
（３糖）の構造を例示すると、以下の化学式（３）のよ
うになる。
【００４５】
【化６】
【００４６】蛍光標識化反応により得られた蛍光標識化
酸性糖類は、以下のように精製すればよい。
酸性糖類は、以下のように精製すればよい。
【００４７】蛍光標識化酸性糖類が高分子である場合
は、反応混合物を透析し、透析液を乾燥させればよい。
蛍光標識化オリゴ糖の場合は、比較的短いカラムにサイ
ズ排除クロマトグラフィー担体を充填し、例えば１０ｍ
Ｍ酢酸アンモニウムを用い、ｐＨ７．０で脱塩すればよ
い。３糖より大きいオリゴ糖はカラムの排除体積に溶出
するので容易に回収される。例えば２−アミノベンズア
ミド糖の蛍光試薬は、カラムに吸着されるので、２−ア
ミノベンズアミド化糖を回収後、カラム体積の約５〜１
０倍の緩衝液でカラムを洗浄すると、カラムは容易に再
生できる。
は、反応混合物を透析し、透析液を乾燥させればよい。
蛍光標識化オリゴ糖の場合は、比較的短いカラムにサイ
ズ排除クロマトグラフィー担体を充填し、例えば１０ｍ
Ｍ酢酸アンモニウムを用い、ｐＨ７．０で脱塩すればよ
い。３糖より大きいオリゴ糖はカラムの排除体積に溶出
するので容易に回収される。例えば２−アミノベンズア
ミド糖の蛍光試薬は、カラムに吸着されるので、２−ア
ミノベンズアミド化糖を回収後、カラム体積の約５〜１
０倍の緩衝液でカラムを洗浄すると、カラムは容易に再
生できる。
【００４８】なお、分取したフラクションのＵＶ（２５
４ｎｍ）の吸光度を測定することにより目的物を確認で
きる。
４ｎｍ）の吸光度を測定することにより目的物を確認で
きる。
【００４９】酸性糖類の分解または合成活性の測定方
は、蛍光標識化酸性糖類を基質として分解酵素または合
成酵素を作用させ、酵素による代謝物を蛍光分析または
エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）やマトリック
ス支援レーザー脱離イオン化法（ＭＡＬＤＩ）等により
質量分析すればよい。以下、２ＡＢにより蛍光標識した
１０糖のオリゴガラクツロン酸（以下、「２ＡＢＧａｌ
Ａ10」と略称する）の分解酵素による分解活性の測定法
を例に取って説明する。
は、蛍光標識化酸性糖類を基質として分解酵素または合
成酵素を作用させ、酵素による代謝物を蛍光分析または
エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）やマトリック
ス支援レーザー脱離イオン化法（ＭＡＬＤＩ）等により
質量分析すればよい。以下、２ＡＢにより蛍光標識した
１０糖のオリゴガラクツロン酸（以下、「２ＡＢＧａｌ
Ａ10」と略称する）の分解酵素による分解活性の測定法
を例に取って説明する。
【００５０】まず、２ＡＢＧａｌＡ10１０ｍＭを１．５
μＬ秤取し、３００μＬの酢酸バッファー（５０ｍＭ、
ｐＨ５．０）に加え、精製したエンドポリガラクツロナ
ーゼ５単位を加え、室温に所定時間反応させ、一部をと
って１００℃、５分加熱して活性を失活させる。加水分
解液の１部５μＬを蛍光検出器付ダイオネックＨＰＬＣ
に注入し、蛍光検出法により分解して精製した２ＡＢ化
オリゴガラクツロン酸を検出すればよい。
μＬ秤取し、３００μＬの酢酸バッファー（５０ｍＭ、
ｐＨ５．０）に加え、精製したエンドポリガラクツロナ
ーゼ５単位を加え、室温に所定時間反応させ、一部をと
って１００℃、５分加熱して活性を失活させる。加水分
解液の１部５μＬを蛍光検出器付ダイオネックＨＰＬＣ
に注入し、蛍光検出法により分解して精製した２ＡＢ化
オリゴガラクツロン酸を検出すればよい。
【００５１】本発明の酸性糖類の分解または合成活性の
測定のためのキットの第１実施形態としては、上記した
蛍光試薬と水性溶媒を必須構成要素としてなる。すなわ
ち、該キットに酸性糖類を加えて蛍光標識化し、分解酵
素または合成酵素を加えて代謝物を蛍光検出すればよ
い。またキットの第２実施形態としては、上述の蛍光標
識化された酸性糖類を必須構成要素とするものである。
蛍光標識化酸性糖類を含む該キットに酵素を加えて反応
させ、代謝物を蛍光検出すればよい。これらの必須構成
要素を公知の方法により、液体ないし固体の形状とする
ことができる。
測定のためのキットの第１実施形態としては、上記した
蛍光試薬と水性溶媒を必須構成要素としてなる。すなわ
ち、該キットに酸性糖類を加えて蛍光標識化し、分解酵
素または合成酵素を加えて代謝物を蛍光検出すればよ
い。またキットの第２実施形態としては、上述の蛍光標
識化された酸性糖類を必須構成要素とするものである。
蛍光標識化酸性糖類を含む該キットに酵素を加えて反応
させ、代謝物を蛍光検出すればよい。これらの必須構成
要素を公知の方法により、液体ないし固体の形状とする
ことができる。
【００５２】
【実施例】以下に実施例を示して本発明をさらに詳しく
説明する。 実施例１ シアノホウ素化ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ3 ）６３ｍｇ
を１ｍｌの水に溶解した。２−アミノベンズアミド（以
下、「２ＡＢ」と略称する）４８ｍｇをＮａＣＮＢＨ3
水溶液に加え、６５℃に加温して溶解した。１０％酢酸
を加えてｐＨ５〜６に調節した。オリゴガラクツロン酸
約１ｍｇをＮａＣＮＢＨ3 −２ＡＢ混液１００〜１５０
μｌに溶解した。反応液を６５℃に保ち、２時間反応さ
せた。反応液に０．５ｍｌの１０ｍＭ酢酸アンモニウム
緩衝液（ｐＨ７．０）を加え、１．５ｃｍ×１０ｃｍの
「トヨパールＨＷ−４０Ｆ」（商品名、東ソー（株）
製）カラムにロードした。カラムの排除体積に溶出した
画分を集め、凍結乾燥により２−ＡＢ化オリゴガラクツ
ロン酸を約１ｍｇを得た。得られた２−ＡＢ化オリゴガ
ラクツロン酸を蛍光分光光度計により測定して蛍光特性
を調べ、さらに高速液体クロマト分析を行った。 （１）２−ＡＢ化オリゴガラクツロン酸の蛍光特性 励起最大波長：３３０ｎｍ 蛍光最大波長：４３６ｎｍ （２）２−ＡＢ化オリゴガラクツロン酸のＨＰＬＣ 得られた２ＡＢ化オリゴガラクツロン酸を、「CarboPac
PA1」（商品名、日本ダイオネクス社製）カラムを用
い、溶離液として１００ｍＭＮａＯＨに溶解したＣＨ3
ＣＯＯＮａのグラジェント溶液（４００ｍＭから１Ｍ）
により溶出させた。結果を図１に示す。図中の算用数字
はオリゴガラクツロン酸の重合度を示す。
説明する。 実施例１ シアノホウ素化ナトリウム（ＮａＣＮＢＨ3 ）６３ｍｇ
を１ｍｌの水に溶解した。２−アミノベンズアミド（以
下、「２ＡＢ」と略称する）４８ｍｇをＮａＣＮＢＨ3
水溶液に加え、６５℃に加温して溶解した。１０％酢酸
を加えてｐＨ５〜６に調節した。オリゴガラクツロン酸
約１ｍｇをＮａＣＮＢＨ3 −２ＡＢ混液１００〜１５０
μｌに溶解した。反応液を６５℃に保ち、２時間反応さ
せた。反応液に０．５ｍｌの１０ｍＭ酢酸アンモニウム
緩衝液（ｐＨ７．０）を加え、１．５ｃｍ×１０ｃｍの
「トヨパールＨＷ−４０Ｆ」（商品名、東ソー（株）
製）カラムにロードした。カラムの排除体積に溶出した
画分を集め、凍結乾燥により２−ＡＢ化オリゴガラクツ
ロン酸を約１ｍｇを得た。得られた２−ＡＢ化オリゴガ
ラクツロン酸を蛍光分光光度計により測定して蛍光特性
を調べ、さらに高速液体クロマト分析を行った。 （１）２−ＡＢ化オリゴガラクツロン酸の蛍光特性 励起最大波長：３３０ｎｍ 蛍光最大波長：４３６ｎｍ （２）２−ＡＢ化オリゴガラクツロン酸のＨＰＬＣ 得られた２ＡＢ化オリゴガラクツロン酸を、「CarboPac
PA1」（商品名、日本ダイオネクス社製）カラムを用
い、溶離液として１００ｍＭＮａＯＨに溶解したＣＨ3
ＣＯＯＮａのグラジェント溶液（４００ｍＭから１Ｍ）
により溶出させた。結果を図１に示す。図中の算用数字
はオリゴガラクツロン酸の重合度を示す。
【００５３】なお、２ＡＢ化オリゴガラクツロン酸およ
び２ＡＢ化ＲＧ−５を同様に調製し、図３に1Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルを示す。図３中、（Ａ）〜（Ｄ）は、下記
の化合物のスペクトルである。 （Ａ）２ＡＢ化トリガラクツロン酸（２ＡＢＧａｌ
Ａ3） （Ｂ）２ＡＢ化へプタガラクツロン酸（２ＡＢＧａｌＡ
7） （Ｃ）２ＡＢ化デカガラクツロン酸（２ＡＢＧａｌ
Ａ10） （Ｄ）ＲＧ−Ｉ由来のＲＧ−５の２ＡＢ化合物（２ＡＢ
ＲＧ−５） さらに、表１に示した化合物１〜１３のネガティブイオ
ンモードによるエレクトロスプレーイオン化によるマス
スペクトル分析の結果を表２に示す。
び２ＡＢ化ＲＧ−５を同様に調製し、図３に1Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルを示す。図３中、（Ａ）〜（Ｄ）は、下記
の化合物のスペクトルである。 （Ａ）２ＡＢ化トリガラクツロン酸（２ＡＢＧａｌ
Ａ3） （Ｂ）２ＡＢ化へプタガラクツロン酸（２ＡＢＧａｌＡ
7） （Ｃ）２ＡＢ化デカガラクツロン酸（２ＡＢＧａｌ
Ａ10） （Ｄ）ＲＧ−Ｉ由来のＲＧ−５の２ＡＢ化合物（２ＡＢ
ＲＧ−５） さらに、表１に示した化合物１〜１３のネガティブイオ
ンモードによるエレクトロスプレーイオン化によるマス
スペクトル分析の結果を表２に示す。
【００５４】
【表２】
【００５５】注１）下記式のように非還元性末端から解
裂して生成するフラグメントイオン
裂して生成するフラグメントイオン
【００５６】
【化７】
【００５７】注２）表１参照
【００５８】実施例２
ラムノガラクツロンII（ＲＧ−II）１ｍｇを実施例１と
同様にＮａＣＮＢＨ3−２ＡＢ混液２００μｌに溶解し
た。反応液を４０℃に１６時間保った。反応液を透析膜
（「スペクトラ／ポア１，０００モルカット」、商品
名、スペクトラム社製）に移し、イオン交換水に対して
２４時間透析した後、凍結乾燥して２−ＡＢ化ＲＧ−I
I を１ｍｇ得た。得られた２−ＡＢ化ＲＧ−IIを蛍光分
光光度計により測定して蛍光特性を調べた。 （１）２−ＡＢ化ＲＧ−IIの蛍光特性 励起最大波長：３３０ｎｍ 蛍光最大波長：４３５ｎｍ
同様にＮａＣＮＢＨ3−２ＡＢ混液２００μｌに溶解し
た。反応液を４０℃に１６時間保った。反応液を透析膜
（「スペクトラ／ポア１，０００モルカット」、商品
名、スペクトラム社製）に移し、イオン交換水に対して
２４時間透析した後、凍結乾燥して２−ＡＢ化ＲＧ−I
I を１ｍｇ得た。得られた２−ＡＢ化ＲＧ−IIを蛍光分
光光度計により測定して蛍光特性を調べた。 （１）２−ＡＢ化ＲＧ−IIの蛍光特性 励起最大波長：３３０ｎｍ 蛍光最大波長：４３５ｎｍ
【００５９】実施例３（エンドポリガラクツロナーゼに
よる２ＡＢＧａｌＡ10の分解） 実施例１と同様の方法で調製した２ＡＢＧａｌＡ10を２
５℃、２時間エンドポリガラクツロナーゼ（以下、「Ｅ
ＰＧ」と略称する）で処理した。ＥＰＧ処理前の２ＡＢ
−デカガラクツロン酸と前記によるＥＰＧ処理後の２Ａ
ＢＧａｌＡ10のＨＰＬＣを行った。その結果を図２に示
す。
よる２ＡＢＧａｌＡ10の分解） 実施例１と同様の方法で調製した２ＡＢＧａｌＡ10を２
５℃、２時間エンドポリガラクツロナーゼ（以下、「Ｅ
ＰＧ」と略称する）で処理した。ＥＰＧ処理前の２ＡＢ
−デカガラクツロン酸と前記によるＥＰＧ処理後の２Ａ
ＢＧａｌＡ10のＨＰＬＣを行った。その結果を図２に示
す。
【００６０】図２（Ａ）は、２ＡＢＧａｌＡ10を「トヨ
パールＨＷ−４０Ｆ」（商品名、東ソー（株）製）で脱
塩および過剰の２ＡＢを除去したものをＨＰＬＣで分析
し蛍光検出したクロマトである。
パールＨＷ−４０Ｆ」（商品名、東ソー（株）製）で脱
塩および過剰の２ＡＢを除去したものをＨＰＬＣで分析
し蛍光検出したクロマトである。
【００６１】図２（Ｂ）は、（Ａ）と同じものをパルス
ドアンペロメトリー法（ＰＡＤ）で同時検出したクロマ
トである。図２（Ｂ）中、１０’は未反応のデカガラク
ツロン酸（以下、「ＧａｌＡ10」と略称する）である。
ドアンペロメトリー法（ＰＡＤ）で同時検出したクロマ
トである。図２（Ｂ）中、１０’は未反応のデカガラク
ツロン酸（以下、「ＧａｌＡ10」と略称する）である。
【００６２】図２（Ａ）および図２（Ｂ）の比較より、
反応が高収率であることが分かる。
反応が高収率であることが分かる。
【００６３】また、図２（Ａ）のクロマトからＧａｌＡ
10が反応中分解してＧａｌＡ9 などに変化していないこ
とが分かる。
10が反応中分解してＧａｌＡ9 などに変化していないこ
とが分かる。
【００６４】図２（Ｃ）は、２ＡＢＧａｌＡ10をＥＰＧ
処理したものをＨＰＬＣで分析し蛍光検出したクロマト
である。ピーク上の１，２，３，４はガラクツロン酸の
重合度を表す。
処理したものをＨＰＬＣで分析し蛍光検出したクロマト
である。ピーク上の１，２，３，４はガラクツロン酸の
重合度を表す。
【００６５】以上の結果から２ＡＢＧａｌＡ10は未誘導
体ＧａｌＡ10と同様にＥＰＧによりα−（１→４）結合
したガラクツロン酸残基が解裂され、遊離した２ＡＢ化
モノ、ジ、トリ、テトラ−ガラクツロン酸をＨＰＬＣに
接続した蛍光検出器により高検度で検出することができ
ることが分かる。したがって、２ＡＢ化オリゴガラクツ
ロン酸を基質とすることにより、酵素の反応特異性や酵
素活性を高感度かつ短時間に検出することができる。
体ＧａｌＡ10と同様にＥＰＧによりα−（１→４）結合
したガラクツロン酸残基が解裂され、遊離した２ＡＢ化
モノ、ジ、トリ、テトラ−ガラクツロン酸をＨＰＬＣに
接続した蛍光検出器により高検度で検出することができ
ることが分かる。したがって、２ＡＢ化オリゴガラクツ
ロン酸を基質とすることにより、酵素の反応特異性や酵
素活性を高感度かつ短時間に検出することができる。
【００６６】実施例４
実施例１と同様の方法で調製した２ＡＢＧａｌＡ10を２
５℃、１時間、クロソーム画分（あずきのめばえより調
製）とウリジン５’−ジホスファート ガラクツロン酸
（ＵＤＰ−ｄ−ＧａｌＡ）と反応させた。
５℃、１時間、クロソーム画分（あずきのめばえより調
製）とウリジン５’−ジホスファート ガラクツロン酸
（ＵＤＰ−ｄ−ＧａｌＡ）と反応させた。
【００６７】図２（Ｄ）は２ＡＢＧａｌＡ10とＵＤＰ−
ｄ−ＧａｌＡをミクロソーム画分と反応させたものをＨ
ＰＬＣで分析し、蛍光検出したクロマトグラムである。
ピーク上の１１、１２、１３はガラクツロン酸の重合度
を表す。ＵＤＰ−ｄ−ＧａｌＡから２ＡＢＧａｌＡ10に
ガラクツロン酸が転位し、２ＡＢＧａｌＡ11さらに２Ａ
ＢＧａｌＡ12というように伸長した２ＡＢＧａｌＡ11、
２ＡＢＧａｌＡ12、２ＡＢＧａｌＡ13をＨＰＬＣに接続
した蛍光検出器により好感度で検出できることが分か
る。
ｄ−ＧａｌＡをミクロソーム画分と反応させたものをＨ
ＰＬＣで分析し、蛍光検出したクロマトグラムである。
ピーク上の１１、１２、１３はガラクツロン酸の重合度
を表す。ＵＤＰ−ｄ−ＧａｌＡから２ＡＢＧａｌＡ10に
ガラクツロン酸が転位し、２ＡＢＧａｌＡ11さらに２Ａ
ＢＧａｌＡ12というように伸長した２ＡＢＧａｌＡ11、
２ＡＢＧａｌＡ12、２ＡＢＧａｌＡ13をＨＰＬＣに接続
した蛍光検出器により好感度で検出できることが分か
る。
【００６８】実施例５
グルロン酸（アルギン酸の部分加水分解物より単離精製
したもの、Ｍｗ：１６０２）１．２ｍｇを実施例１と同
様にＮａＣＮＢＨ3 −２ＡＢ混液１５０ｍｌに溶解し
た。反応液を４０℃に１６時間保った。反応液を実施例
１と同様に精製し、２−ＡＢ化ＧｕｌＡ9 を１ｍｇ得
た。得られた２−ＡＢ化ＧｕｌＡ9 をエレクトトロスプ
レーイオン化質量分析計（ＥＳＩ−ＭＳ）により測定し
た。 （１）２−ＡＢ化ＧｕｌＡ9 の質量分析 （Ｍ−２Ｈ）2-／２＝（１７２２−２）-2／２＝８６
０．０に強いピークが検出された。その他に、（Ｍ−３
Ｈ）3-／３＝（１７２２−３）／３＝５７３．０にもピ
ークが検出された。
したもの、Ｍｗ：１６０２）１．２ｍｇを実施例１と同
様にＮａＣＮＢＨ3 −２ＡＢ混液１５０ｍｌに溶解し
た。反応液を４０℃に１６時間保った。反応液を実施例
１と同様に精製し、２−ＡＢ化ＧｕｌＡ9 を１ｍｇ得
た。得られた２−ＡＢ化ＧｕｌＡ9 をエレクトトロスプ
レーイオン化質量分析計（ＥＳＩ−ＭＳ）により測定し
た。 （１）２−ＡＢ化ＧｕｌＡ9 の質量分析 （Ｍ−２Ｈ）2-／２＝（１７２２−２）-2／２＝８６
０．０に強いピークが検出された。その他に、（Ｍ−３
Ｈ）3-／３＝（１７２２−３）／３＝５７３．０にもピ
ークが検出された。
【００６９】
【発明の効果】本発明により、本発明の蛍光標識された
ペクチン等の酸性糖類によれば、例えば、その微量を用
いてペクチン分解酵素の活性測定、ペクチン合成酵素の
活性測定、酵素の分布等を測定することも容易になる。
更に食品として広く利用されているペクチン等の酸性糖
類の生体内挙動を明らかにし、その機能性解明の研究に
役立て得ることは勿論、ペクチンの機能性食品としての
新規な用途開発の可能性が期待される。
ペクチン等の酸性糖類によれば、例えば、その微量を用
いてペクチン分解酵素の活性測定、ペクチン合成酵素の
活性測定、酵素の分布等を測定することも容易になる。
更に食品として広く利用されているペクチン等の酸性糖
類の生体内挙動を明らかにし、その機能性解明の研究に
役立て得ることは勿論、ペクチンの機能性食品としての
新規な用途開発の可能性が期待される。
【図１】実施例１の２ＡＢ化オリゴガラクツロン酸のＨ
ＰＬＣのクロマトグラム。
ＰＬＣのクロマトグラム。
【図２】（Ａ）は、２ＡＢＧａｌＡ10の蛍光検出による
ＨＰＬＣのクロマトグラムであり、（Ｂ）は、２ＡＢＧ
ａｌＡ10のＰＡＤ検出によるＨＰＬＣのクロマトグラム
であり、（Ｃ）は、２ＡＢＧａｌＡ10をＥＰＧ処理した
ものをＨＰＬＣで分析し蛍光検出したクロマトグラムで
あり、（Ｄ）は２ＡＢＧａｌＡ10とＵＤＰ−ｄ−Ｇａｌ
Ａをミクロソーム画分と反応させたものをＨＰＬＣで分
析し、蛍光検出したクロマトグラムである。
ＨＰＬＣのクロマトグラムであり、（Ｂ）は、２ＡＢＧ
ａｌＡ10のＰＡＤ検出によるＨＰＬＣのクロマトグラム
であり、（Ｃ）は、２ＡＢＧａｌＡ10をＥＰＧ処理した
ものをＨＰＬＣで分析し蛍光検出したクロマトグラムで
あり、（Ｄ）は２ＡＢＧａｌＡ10とＵＤＰ−ｄ−Ｇａｌ
Ａをミクロソーム画分と反応させたものをＨＰＬＣで分
析し、蛍光検出したクロマトグラムである。
【図３】（Ａ）は、２ＡＢＧａｌＡ3の1Ｈ−ＮＭＲのス
ペクトル図、（Ｂ）は２ＡＢＧａｌＡ7の1Ｈ−ＮＭＲの
スペクトル図、（Ｃ）は２ＡＢＧａｌＡ10の1Ｈ−ＮＭ
Ｒのスペクトル図、（Ｄ）は２ＡＢＲＧ−５の1Ｈ−Ｎ
ＭＲのスペクトル図。
ペクトル図、（Ｂ）は２ＡＢＧａｌＡ7の1Ｈ−ＮＭＲの
スペクトル図、（Ｃ）は２ＡＢＧａｌＡ10の1Ｈ−ＮＭ
Ｒのスペクトル図、（Ｄ）は２ＡＢＲＧ−５の1Ｈ−Ｎ
ＭＲのスペクトル図。
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フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ０８Ｂ 37/00 Ｃ０８Ｂ 37/00 Ｋ
37/04 37/04
37/06 37/06
(72)発明者 石井 忠
茨城県稲敷郡茎崎町松の里１番地 独立行
政法人 森林総合研究所内
(72)発明者 市田 淳治
青森県青森市第二問屋町４−11−６ 青森
県産業技術開発センター内
(72)発明者 山口 信哉
青森県青森市第二問屋町４−11−６ 青森
県産業技術開発センター内
(72)発明者 松江 一
青森県青森市第二問屋町４−11−６ 青森
県産業技術開発センター内
(72)発明者 小野 裕嗣
茨城県つくば市観音台２丁目１−12 独立
行政法人 食品総合研究所内
Ｆターム(参考） 4C057 AA17 BB02 BB03 BB04 DD01
JJ10 JJ55
4C090 AA02 AA05 AA08 BA49 BA50
BA72 BB02 BB21 BB53 BB62
BB71 BB92 BC04 DA12
4H006 AA01 AB84 BJ50 BN10 BS10
BU46 BV71
Claims (13)
- 【請求項１】 一般式（１） 【化１】 〔ただし式中、Ｘは、水素原子またはＧａｌＡ、Ｇａｌ
Ａ2 、ＧａｌＡ4 、ＧａｌＡ5 、ＧａｌＡ6 、ＧａｌＡ
7 、ＧａｌＡ8 、ＧａｌＡ9 、ＧａｌＡ−Ｒｈａ、
（ＧａｌＡ−Ｒｈａ）2 、（ＧａｌＡ−Ｒｈａ）3 、
ＲＧ−Ｉ、ＲＧ−IIで示される糖鎖残基であり、糖鎖中
のヒドロキシ基の水素原子がアセチル基で置換されてい
てもよく、糖鎖中のカルボキシル基の水素原子がメチル
基で置換されていてもよい。〕で表される蛍光標識化ペ
クチン多糖。 - 【請求項２】 一般式（２） 【化２】 〔ただし式中、ｎは１〜９の整数を表す。〕で示される
蛍光標識化オリゴ−ｌ−グルロン酸。 - 【請求項３】 酸性糖類を水性溶媒中蛍光試薬と反応さ
せることにより、酸性糖類の還元性末端を蛍光標識化す
ることを特徴とする蛍光標識化酸性糖類の製造方法。 - 【請求項４】 前記酸性糖類が、ペクチンであることを
特徴とする請求項３に記載の蛍光標識化酸性糖類の製造
方法。 - 【請求項５】 前記ペクチンが、ホモガラクツロナン、
ラムノガラクツロナンI 、ラムノガラクツロナンII、そ
れらの構成糖のヒドロキシ基の水素原子がアセチル基で
置換されたものまたはそれらの構成糖のカルボキシル基
の水素原子がメチル基で置換されたものから選ばれるペ
クチン多糖であることを特徴とする請求項４に記載の蛍
光標識化酸性多糖類の製造方法。 - 【請求項６】 前記酸性糖類が、ガラクツロン酸単糖、
ガラクツロン酸二糖、オリゴガラクツロン酸、ＲＧ−Ｉ
オリゴマー、それらの構成糖のヒドロキシ基の水素原子
がアセチル基で置換されたものまたはそれらの構成糖の
カルボキシル基の水素原子がメチル基で置換されたもの
であることを特徴とする請求項３に記載の蛍光標識化酸
性多糖類の製造方法。 - 【請求項７】 前記酸性糖類が、アルギン酸、それらの
構成糖のヒドロキシ基の水素原子がアセチル基で置換さ
れたものまたはそれらの構成糖のカルボキシル基の水素
原子がメチル基で置換されたものであることを特徴とす
る請求項３に記載の蛍光標識化酸性多糖類の製造方法。 - 【請求項８】 前記酸性糖類が、ｌ−グルロン酸を構成
単位とする酸性多糖類であることを特徴とする請求項３
に記載の蛍光標識化酸性多糖類の製造方法。 - 【請求項９】 前記水性溶媒が水であることを特徴とす
る請求項３に記載の蛍光標識化酸性糖類の製造方法。 - 【請求項１０】 前記蛍光試薬が、２−アミノピリジ
ン、２−アミノベンズアミド、２−アミノ安息香酸、７
−アミノ−４−メチルクマリン、８−アミノナフタレン
−１，３，６−トリスルホン酸、５−ジメチルアミノナ
フタレン−１−（Ｎ−（２−アミノメチル））スルホン
アミドおよび１−アミノピレン−３，６，８−トリスル
ホン酸からなる群よりえらばれる蛍光試薬であることを
特徴とする請求項３に記載の蛍光標識化酸性多糖類の製
造方法。 - 【請求項１１】 前記請求項３ないし請求項１０のいず
れか１項に記載の方法により製造した蛍光標識化酸性糖
類を基質とし分解または合成活性を測定することを特徴
とする酸性糖類の分解または合成活性の測定方法。 - 【請求項１２】 前記請求項３ないし請求項１０のいず
れか１項に記載の方法により製造した蛍光標識化酸性糖
類を含むことを特徴とする酸性糖類の分解または合成活
性の測定用キット。 - 【請求項１３】 水性溶媒と蛍光試薬を含むことを特徴
とする請求項１２に記載の酸性糖類の分解または合成活
性の測定用キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001364818A JP2003160596A (ja) | 2001-11-29 | 2001-11-29 | 蛍光標識化ペクチン多糖、蛍光標識化酸性糖類の製造方法、酸性糖類の分解または合成活性の測定方法およびそのためのキット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001364818A JP2003160596A (ja) | 2001-11-29 | 2001-11-29 | 蛍光標識化ペクチン多糖、蛍光標識化酸性糖類の製造方法、酸性糖類の分解または合成活性の測定方法およびそのためのキット |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003160596A true JP2003160596A (ja) | 2003-06-03 |
Family
ID=19174946
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001364818A Pending JP2003160596A (ja) | 2001-11-29 | 2001-11-29 | 蛍光標識化ペクチン多糖、蛍光標識化酸性糖類の製造方法、酸性糖類の分解または合成活性の測定方法およびそのためのキット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003160596A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20180132069A (ko) * | 2017-04-04 | 2018-12-11 | 스미또모 베이크라이트 가부시키가이샤 | 당쇄를 조제하는 방법 |
| CN111208284A (zh) * | 2018-11-22 | 2020-05-29 | 北京大学 | 糖代谢标记探针、包含其的试剂盒及其应用 |
-
2001
- 2001-11-29 JP JP2001364818A patent/JP2003160596A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20180132069A (ko) * | 2017-04-04 | 2018-12-11 | 스미또모 베이크라이트 가부시키가이샤 | 당쇄를 조제하는 방법 |
| KR102047906B1 (ko) * | 2017-04-04 | 2019-11-22 | 스미또모 베이크라이트 가부시키가이샤 | 당쇄를 조제하는 방법 |
| US11293926B2 (en) | 2017-04-04 | 2022-04-05 | Sumitomo Bakelite Co., Ltd. | Method for preparing sugar chain |
| CN111208284A (zh) * | 2018-11-22 | 2020-05-29 | 北京大学 | 糖代谢标记探针、包含其的试剂盒及其应用 |
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