JP2002537267A - Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓａｒｖｅｎｓｉｓ（セイヨウヒルガオ）の高分子量抽出物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 精製されたつる植物抽出物は、腫瘍細胞の増殖を阻害する目的に、血管の増殖を阻害する目的に、そして免疫機能を高める目的に使用される。本発明のつる植物抽出物は、Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ（セイヨウヒルガオ）の毒性の低分子量成分を除くことによって調製される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （技術分野） 本発明は、つる植物材料のホモジネートされた水溶液の高分子量成分を回収す
ることによって精製されたつる植物抽出物を得ることに関する。これらの高分子
量抽出物は、予想外にも、マウスにおける２つの異なるタイプの悪性腫瘍の増殖
を阻害することが明らかにされた。この抽出物は、処置された動物の腫瘍におけ
る白血球による腫瘍浸潤によって、そしてリンパ球増殖の誘導によって実証され
るように免疫強化作用を有する。この抽出物はさらに、ヒヨコの漿尿膜膜アッセ
イにおいて明らかにされるように抗血管形成性を有する。本発明の抽出方法によ
り、毒性であることが知られている、アルカロイドを含む小分子を植物材料から
除去することができる。本発明のつる植物抽出物は、ヒトおよび動物に使用され
る低毒性の抗ガン剤としての有用性を有する。

【０００２】 （背景技術） 近年、生物学的応答調節物質（ＢＲＭ）を使用する考えが、ガンを処置するた
めに検討されている。ＢＲＭの中には、腫瘍細胞に対する直接的な細胞傷害性を
有しないが、生物の環境を変化させる特性を有するものがある。免疫刺激および
新生血管の増殖阻害は、ガンの処置において有望な２つの生物学的応答調節法で
ある。抗腫瘍活性が知られている免疫刺激剤の例には、多糖Ｋ、ベータ−１，３
−グルカンおよび丸山ワクチンがある。これらはすべて、高分子量の多糖類およ
び／またはタンパク質を含有する。血管形成を阻害する分子の例には、ＴＭＰ−
４７０およびアンギオスタチンが含まれ、これらは抗腫瘍活性が明らかにされて
いる。抗腫瘍活性についてセイヨウヒルガオの抽出物を調べているとき、本発明
者らは、毒性であることが知られ、そして従来の化学療法活性または腫瘍の細胞
傷害活性を有すると考えられる低分子量のアルカロイドを単離することを最初に
試みた。

【０００３】 毒性アルカロイドを含有する低分子量抽出物は抗腫瘍活性をほとんど示さず、
一方で、毒性アルカロイドを除いた高分子量抽出物に、生物学的応答調節物質と
して作用することによって著しい抗腫瘍活性が含まれることが見出された。

【０００４】 （発明の開示） 本発明の１つの目的は、正常な細胞に対する低い毒性を有し、かつ動物におけ
る抗腫瘍作用を誘導し、血管増殖を阻害し、そして哺乳動物における免疫機能を
高める、セイヨウヒルガオ（Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ）の高
分子量抽出物からなる製剤を提供することである。好ましくは、このような高分
子量抽出物は、約５００ダルトン未満の成分が除かれている。より好ましくは、
除かれる成分は約１，０００未満である。さらにより好ましくは、除かれる成分
は約３，０００ダルトン未満である。さらにより好ましくは、除かれる成分は約
５０００未満であり、より好ましくは１０，０００未満である。

【０００５】 本発明の１つの実施形態は、分子量フィルターを使用して、あるいは硫酸アン
モニウムを用いて沈殿させることによってセイヨウヒルガオ（Ｃｏｎｖｏｌｖｕ
ｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ）の高分子量抽出物を単離することである。

【０００６】 本発明のさらなる目的は、粗抽出物の毒性低分子量成分を除くことによって低
い毒性を有するセイヨウヒルガオ（Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ
）の高分子量抽出物を単離するための方法を提供することである。好ましくは、
約３０００ダルトン未満の成分が除かれる。より好ましくは、約６，５００ダル
トン未満の成分が除かれる。さらにより好ましくは、約１０，０００ダルトン未
満の成分が除かれる。

【０００７】 本発明の１つの実施形態は、分子量フィルターを使用して、あるいは硫酸アン
モニウムを用いて沈殿させることによってセイヨウヒルガオ（Ｃｏｎｖｏｌｖｕ
ｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ）の低分子量抽出物を除くことである。

【０００８】 本発明のさらなる目的は、正常な細胞に対する低い毒性を有し、かつ動物にお
ける抗腫瘍作用を誘導するセイヨウヒルガオ（Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓ ａｒｖ
ｅｎｓｉｓ）の高分子量抽出物の使用方法を提供することである。

【０００９】 本発明のさらなる目的は、新生血管の増殖を阻害するセイヨウヒルガオ（Ｃｏ
ｎｖｏｌｖｕｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ）の高分子量抽出物の使用方法を提供す
ることである。

【００１０】 本発明のさらなる目的は、動物における免疫増強作用を示すセイヨウヒルガオ
（Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ）の高分子量抽出物の使用方法を
提供することである。

【００１１】 本発明のこれらの目的および他の目的は、本明細書中下記に示される材料およ
び方法を参照することによってより明らかになる。

【００１２】 （好適な実施形態の詳細な説明） 本発明者らは、驚くべきことに、正常な細胞に対する低い毒性を有し、かつ抗
腫瘍作用を誘導し、血管の増殖を阻害し、そして哺乳動物における免疫機能を高
める、つる植物の高分子量抽出物を発見した。本発明者らはまた、つる植物抽出
物の低分子量成分は、正常な細胞および腫瘍細胞の両方に対して毒性を有する３
００ダルトン〜５００ダルトン程度のアルカロイドを含有することを見出した。
毒性の低分子量成分を除くために、本発明者らは分子量篩いを使用した。一般に
、Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ（セイヨウヒルガオ）の高分子量
抽出物を得るための本発明の方法は、新鮮なつる植物または熟成させたつる植物
を水溶液中で煮沸して、茶色の茶様混合物を得ることからなる。この混合物を、
その後、遠心分離またはろ過して、固形物を除去し、溶液を得る。正常な細胞に
対する毒性を除くためには、３００〜５００の分子量の成分を除くことのみを要
する。しかし、本発明者らは、これらの低分子量成分が膜に非特異的に付着して
、逆戻りし得ることを見出した。従って、好ましくは、より大きな分子量の篩い
が使用される。すなわち、１０００ダルトン程度、より好ましくは３０００ダル
トン、さらにより好ましくは５０００ダルトンの分子量篩いが使用される。本発
明者らは、１０，０００ダルトンまでの分子量成分が除かれた場合でさえ、抽出
物は、動物における抗腫瘍作用、血管増殖を阻害するその能力、および哺乳動物
における免疫機能を高めるその能力を保持していることを見出している。下記の
実施例において、茶色の茶様混合物を得るために、新鮮なつる植物または熟成さ
せたつる植物を水溶液中で煮沸した後、溶液は、高分子量保持物（ＢＷＲ）を得
るために分子量ろ過デバイスに通されるか、あるいは高分子量沈殿物（ＢＷＰ）
を単離するために硫酸アンモニウムを使用して沈殿処理される。その後、高分子
量抽出物は凍結乾燥されるか、そうでなければ濃縮される。抽出物は、続いて、
抗腫瘍活性、免疫増強活性および抗血管形成活性についてアッセイされる。

【００１３】 その後、抽出物の成分をさらに特徴付けるために、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＩＥＦ
およびタンパク質アッセイを使用する。抽出物はまた、既知の分子量標準を用い
て、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２−ＨＲサイズ分画カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ）を使用して分子量についてアッセイされる。

【００１４】 本発明のさらなる特徴および利点は、添付された図面および請求項とともに検
討された場合、下記の好適な実施形態の詳細な説明を考慮すれば当業者には明ら
かになる。

【００１５】 本明細書中に記載された材料および方法に類似するか、または同等の他の材料
および方法を本発明の実施または試験において使用することができるが、好まし
い方法および材料が下記に記載される。実施例１には、つる植物の高分子量抽出
物を調製するために必要とされる工程が記載される。

【００１６】 実施例１ つる植物の高分子量抽出物の調製 本発明者らは、下記のようにして、Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉ
ｓ（セイヨウヒルガオ）の高分子量抽出物を単離した。新鮮なＣｏｎｖｏｌｖｕ
ｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓを集め、その種および花を捨てた。植物のこれらの部
分を、ワーリングブレンダーを使用してホモジネートした。ホモジネートした植
物材料に３倍容量の脱イオン水を加えて、混合物を得た。次いで、この混合物を
３０分間煮沸して、煎じ液を得た。固形分を煎じ液からろ過によって除き、上清
を確保した。上清を冷却し、上清から２つの高分子量単離物を調製した。煎じ液
上清の一部を、３，０００ダルトン以上のカートリッジを取り付けたＣＨ２濃縮
器で処理した。濃縮器の保持物（３，０００ダルトンよりも大きな分子のみを含
有する）を保持し、凍結乾燥した。これは、本明細書中ではＢＷＲと呼ばれる。
あるいは、煎じ液上清の一部を硫酸アンモニウムと混合して、５０％硫酸アンモ
ニウムの最終飽和度にした。これにより、煎じ液上清成分の一部が沈殿した。次
いで、沈殿成分を２５，０００ｇで３０分間の遠心分離後に集め、リン酸塩緩衝
化生理食塩水に再懸濁し、新しい溶液を得た。次いで、この新しい溶液を、３，
０００ダルトン膜を使用する限外ろ過デバイスに通した。保持物を集めて凍結乾
燥した。これは、本明細書中ではＢＷＰと呼ばれる。ＢＷＰおよびＢＷＲは、特
徴付けならびに抗腫瘍、抗血管形成および免疫パラメーターの研究において使用
されるまでデシケーター中４℃で保存された。

【００１７】 実施例２および３において、これらの高分子量抽出物は特徴付けが行われ、毒
性が調べられた。

【００１８】 実施例２ つる植物の高分子量抽出物の特徴付け ＢＷＲおよびＢＷＰの両方のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析は、２００，０００ダルト
ン以上から６，５００ダルトンまでの範囲にある様々な分子量にいくつかのタン
パク質バンドが存在する、多糖類の特徴である全体に広がった不鮮明なパターン
を示した。両方の抽出物はモーリッシュ反応に関して陽性であった。このことは
、糖残基が存在することを示している。さらに、両者は、ビシンクロニン酸アッ
セイを使用して、タンパク質について強陽性であった。これらより、ＢＷＰおよ
びＢＷＲはタンパク質および糖の両方を含有するという結論が導かれる。Ｓｕｐ
ｅｒｏｓｅ１２−ＨＲサイズ分画カラムを使用するＢＷＲおよびＢＷＰのＦＰＬ
Ｃクロマトグラフィーは、高分子量ピークのみを示し、１０，０００ダルトン未
満の分子は検出されなかった。

【００１９】 実施例３ つる植物の高分子量抽出物の毒性の特徴付け 細胞傷害性の抗腫瘍剤に関する標準的な化学療法スクリーニングにより、５ｍ
ｃｇ／ｍｌの濃度で細胞傷害活性を有する薬剤が選択される。つる植物の両方の
抽出物は、１０００ｍｃｇ／ｍｌ以上の濃度で培養腫瘍細胞に対して毒性を示し
ただけであった。このことより、毒性が低いことが明らかにされる。

【００２０】 実施例４〜実施例１０において、ＢＷＲおよびＢＷＰの高分子量抽出物の作用
を、抗血管形成活性、抗腫瘍活性および免疫機能に対する作用として分析した。

【００２１】 実施例４ ＢＷＲの抗血管形成活性 高分子量の糖／タンパク質を含有するつる植物抽出物を上記の方法に従って調
製した。

【００２２】 ＢＷＲの抗血管形成活性を調べた。血管形成を、１０ｍｃｇのヘパリンを含有
する２ｍｍメチルセルロースディスクを１１日目のニワトリ卵の漿尿膜に置くこ
とによってニワトリ卵の漿尿膜に誘導させた。２００ｍｃｇ、１００ｍｃｇおよ
び５０ｍｃｇの各用量のＢＷＲを、それぞれが６個の卵からなる３組において、
ヘパリン含有ディスクに同時に加えた。６個の卵をコントロールとした。４日後
、大きな窓を漿尿膜の上部に開け、それぞれの卵における新生血管の数を計数し
た。

【００２３】 血管形成に対する阻害パーセントを下記の式に従って得た： 血管形成阻害（％）＝ （１−試験群の新生血管の平均数／コントロール群の新生血管の平均数）Ｘ１０
０ 得られた結果を下記の表１に示す。血管形成（すなわち、新生血管の誘導）が
ＢＷＲの投与により用量依存様式で著しく阻害されたことが分かる。

【００２４】

【表１】 実施例５ ＢＷＲの抗腫瘍活性 上記にようにして調製されたＢＷＲの抗腫瘍作用を調べた。群あたり１０匹の
６週齢の雌雄混合Ｋｕｎ Ｍｉｎｇマウスを試験動物として使用した。Ｓ−１８
０線維肉腫細胞を左鼠蹊領域に皮下移植した。１４日間にわたり毎日、ＢＷＲを
右鼠蹊領域に皮下注射した。移植後１５日目に腫瘍を切除して、重量測定した。
腫瘍増殖に対する阻害パーセントを下記の式に従って得た： 腫瘍増殖阻害（％）＝ （１−試験群の平均腫瘍重量／コントロール群の平均腫瘍重量）Ｘ１００ 得られた結果を下記の表２に示す。腫瘍増殖がＢＷＲの投与により著しく阻害
されたことが分かる。

【００２５】

【表２】 実施例６ ＢＷＰの抗腫瘍作用 さらに、ＢＷＰの抗腫瘍作用を調べた。群あたり１０匹の６週齢の雌雄混合Ｋ
ｕｎ Ｍｉｎｇマウスを試験動物として使用した。Ｓ−１８０細胞を左鼠蹊領域
に皮下移植した。１４日間にわたり毎日、ＢＷＰを右鼠蹊領域に皮下注射した。
移植後１５日目に腫瘍を切除して、重量測定した。腫瘍増殖に対する阻害パーセ
ントを下記の式に従って得た： 腫瘍増殖阻害（％）＝ （１−試験群の平均腫瘍重量／コントロール群の平均腫瘍重量）Ｘ１００ 得られた結果を下記の表３に示す。腫瘍増殖がＢＷＰの投与により著しく阻害
されたことが分かる。

【００２６】

【表３】 実施例７ ＢＷＰのさらなる抗腫瘍作用 ＢＷＰの抗腫瘍作用をさらに調べた。群あたり１０匹の６週齢のＣ５７雌雄混
合マウスを試験動物として使用した。ＬＬＣ（ルイス肺カルシノーマ細胞）を左
鼠蹊領域に皮下移植した。２１日間にわたり毎日、ＢＷＲを右鼠蹊領域に皮下注
射した。移植後２２日目に腫瘍を切除して、重量測定した。腫瘍増殖に対する阻
害パーセントを下記の式に従って得た： 腫瘍増殖阻害（％）＝ （１−試験群の平均腫瘍重量／コントロール群の平均腫瘍重量）Ｘ１００ 得られた結果を下記の表４に示す。腫瘍増殖がＢＷＰの投与により著しく阻害
されたことが分かる。

【００２７】

【表４】 実施例８ ＢＷＲのさらなる抗腫瘍作用 ＢＷＲの抗腫瘍作用をさらに調べた。群あたり１０匹の６週齢の雌雄混合Ｋｕ
ｎ Ｍｉｎｇマウスを試験動物として使用した。Ｓ−１８０細胞を左鼠蹊領域に
皮下移植した。１４日間にわたり毎日、ＢＷＰを腹腔内に注射した。移植後１５
日目に腫瘍を切除して、重量測定した。腫瘍増殖に対する阻害パーセントを下記
の式に従って得た： 腫瘍増殖阻害（％）＝ （１−試験群の平均腫瘍重量／コントロール群の平均腫瘍重量）Ｘ１００ 得られた結果を下記の表５に示す。腫瘍増殖がＢＷＲの投与により著しく阻害
されたことが分かる。

【００２８】

【表５】 この研究から得られた腫瘍をパラフィンに包埋し、染色して、顕微鏡で検査し
た。処置群から切除された腫瘍は非常に多数のリンパ球および単球を含有し、そ
して１０％にすぎない腫瘍組織を含んでいることが見出された。従って、処置群
における腫瘍組織から得られた腫瘍組織重量は、記録された重量の１０％にすぎ
ず、すなわち、０．８グラムではなく０．０８グラムであった。従って、実際の
阻害は９６．８％であった。これらの結果はまた、ＢＷＲは腫瘍組織に対する免
疫応答を高める特性を含むことを示している。

【００２９】 実施例９ ヒトリンパ球増殖に対するＢＷＲおよびＢＷＰの作用 培養におけるヒトリンパ球増殖に対するＢＷＲおよびＢＷＰの作用を調べた。
ヒトリンパ球を、静脈穿刺を使用して集め、続いて密度勾配遠心分離を使用する
ことによって単離した。次いで、ヒトリンパ球を、市販のリンパ球培養培地（Ａ
ＩＭ Ｖ、インターロイキン２および２メルカプトエタノールを含有する）で、
９５％空気、５％二酸化炭素を含む雰囲気中で、３７℃で３日間インキュベーシ
ョンした。次いで、リンパ球を、Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｅｐｉｃｓ ＸＬフローサイ
トメーターを使用して計数した。リンパ球増殖における増大パーセントを下記の
式に従って得た： リンパ球増殖増大（％）＝ （試験群のリンパ球の平均数／コントロール群のリンパ球の平均数Ｘ１００）−
１００ 得られた結果を下記の表６に示す。ＢＷＲおよびＢＷＰによりリンパ球増殖が
用量依存様式で誘導されたことが分かる。

【００３０】

【表６】 実施例１０ ヒト食細胞活性に対するＢＷＲおよびＢＷＰの作用 ヒト食細胞活性に対するＢＷＲおよびＢＷＰの作用を調べた。２つの軟膜サン
プルを、２名の被験者から得られた抗凝固処理ヒト血液を含むチューブを遠心分
離することによって調製した。次いで、このサンプルを２つに分けた。それぞれ
の被験者から得られた一方の軟膜には２マイクログラムのＢＷＲおよびＢＷＰを
加えた。それぞれの被験者から得られた一方の軟膜をコントロールとした。すべ
てのサンプルを５時間インキュベーションした。その後、３０ミリグラムの新し
く再水和したパン酵母をすべてのサンプルに加えた。１時間後、アクリジンオレ
ンジ染色の２ｘ保存溶液を各サンプルに加えた。その後、各サンプルの一部を顕
微鏡スライドガラスに載せた。各サンプルから得られる、パン酵母を細胞内に含
有する食細胞の割合を記録した。

【００３１】 その結果、コントロールと比較した場合、処置サンプルでは、パン酵母を細胞
内に含有する食細胞の割合が平均して８５％増大したことが明らかにされた。こ
れにより、ＢＷＲおよびＢＷＰが免疫系を刺激する別の機構が明らかにされる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 リオーダン ネイル、エイチ アメリカ合衆国 アリゾナ州 85281 テ ンペ、サウス 第48 ストリート 621、 スウィート 111 Ｆターム(参考） 4C088 AB12 BA08 BA21 CA14 CA16 NA14 ZB09 ZB21 ZB26

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ガンを処置するため、新生血管の増殖を阻害するため、およ
   び／または哺乳動物における免疫機能を高めるための医薬組成物であって、約５
   ００ダルトン未満の分子量の成分が除かれているセイヨウヒルガオ（Ｃｏｎｖｏ
   ｌｖｕｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ）抽出物の効果的な量と、薬学的に許容されう
   る賦形剤とを含む医薬組成物。
2. 【請求項２】 約１０００ダルトン未満の分子量の成分が除かれている、請
   求項１に記載の医薬組成物。
3. 【請求項３】 約３０００ダルトン未満の分子量の成分が除かれている、請
   求項２に記載の医薬組成物。
4. 【請求項４】 約５０００ダルトン未満の分子量の成分が除かれている、請
   求項３に記載の医薬組成物。
5. 【請求項５】 約１０，０００ダルトン未満の分子量の成分が除かれている
   、請求項４に記載の医薬組成物。
6. 【請求項６】 Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓ ａｒｖｅｎｓｉｓ（セイヨウヒル
   ガオ）の非毒性抽出物を調製する方法であって、分子量が約５００ダルトン未満
   の成分を除くことからなる方法。
7. 【請求項７】 分子量が約１０００ダルトン未満の成分が除かれる、請求項
   ６に記載の方法。
8. 【請求項８】 分子量が約３０００ダルトン未満の成分が除かれる、請求項
   ７に記載の方法。
9. 【請求項９】 分子量が約５０００ダルトン未満の成分が除かれる、請求項
   ８に記載の方法。
10. 【請求項１０】 分子量が約１０，０００ダルトン未満の成分が除かれる、
    請求項９に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記成分が分子量フィルターを使用して除かれる、請求項
    ６に記載の方法。
12. 【請求項１２】 前記成分が硫酸アンモニウムを用いて沈殿させることによ
    って除かれる、請求項６に記載の方法。
13. 【請求項１３】 ガンを処置するための医薬の調製における請求項１に記載
    の組成物の使用。
14. 【請求項１４】 血管の増殖を遅くするため、または停止させるための医薬
    の調製における請求項１に記載の組成物の使用。
15. 【請求項１５】 哺乳動物における免疫機能を高めるための医薬の調製にお
    ける請求項１に記載の組成物の使用。
16. 【請求項１６】 前記免疫機能がリンパ球増殖活性および食細胞活性からな
    る群より選択される、請求項１５に記載の使用。