JP2002535985A5

JP2002535985A5 -

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Publication number: JP2002535985A5
Application number: JP2000597417A
Authority: JP
Filing date: 2000-02-03
Publication date: 2007-04-19

Description

【特許請求の範囲】
【請求項１】分析物に対するアッセイであって、該分析物を熱安定性リポーターキナーゼと特異的に結合させる工程、ＡＤＰを添加する工程、およびＡＴＰの形成についてテストする工程を含み、ＡＤＰの添加前に、リポーターキナーゼ以外のキナーゼが洗浄によって実質的に除去され、そして該分析物中の残りの内因性キナーゼが加熱により不活性化される、アッセイ。
【請求項２】前記熱安定性リポーターキナーゼがリポーターアデニル酸キナーゼであり、そして前記分析物と特異的に結合したリポーターアデニル酸キナーゼの量が、分析物の量と実質的に比例する、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３】前記ＡＴＰの形成が、ルシフェリン／ルシフェラーゼを使用して測定される、請求項１または２に記載のアッセイ。
【請求項４】試料中の分析物の存在および／または量を測定するための請求項１から３のいずれかの項に記載のアッセイであって、
該試料を、該分析物に特異的な結合剤にカップリングしたリポーターアデニル酸キナーゼに曝露して、該リポーターアデニル酸キナーゼが該試料中に存在する分析物と特異的に結合する工程；
分析物と特異的に結合しないリポーターアデニル酸キナーゼを除去する工程；
該分析物と特異的に結合したリポーターアデニル酸キナーゼをＡＤＰに曝露する工程；および
ＡＴＰの形成についてテストする工程、を含み、
ＡＤＰの添加前に、リポーターアデニル酸キナーゼ以外の残りのアデニル酸キナーゼが、加熱により実質的に除去される、アッセイ。
【請求項５】ＡＴＰアーゼを前記分析物に添加する工程、およびＡＤＰの添加前に該分析物から該ＡＴＰアーゼを除去する工程を含む、請求項１から４のいずれかの項に記載のアッセイ。
【請求項６】前記ＡＴＰアーゼが、該ＡＴＰアーゼを加熱することによって不活性化される、請求項５に記載のアッセイ。
【請求項７】試料中の分析物の存在および／または量を測定するための試薬キットであって、
該分析物または該分析物に特異的な抗体が固定された固相；
該分析物に特異的な抗体にカップリングした熱安定性アデニル酸キナーゼを含むリポーター組成物；および
熱安定性アデニル酸キナーゼによるＡＤＰのＡＴＰへの変換のためのＡＤＰプラス関連試薬、を含む、キット。
【請求項８】さらにＡＴＰアーゼを含む、請求項７に記載のキット。
【請求項９】試料中の分析物の存在および／または量を測定するためのアッセイであって、
該試料を検出組成物に曝露する工程であって、該検出組成物が、熱安定性酵素にカップリングした該分析物に特異的な抗体を含む、工程；
分析物に特異的に結合した検出組成物（ｉ）を分析物に特異的に結合しなかった検出組成物（ii）から単離する工程；および
該熱安定性酵素に対する基質を添加することによって、分析物に結合した検出組成物の存在および／または量を測定する工程；を含み、
該基質を添加する前に、非熱安定性酵素が熱の適用によって破壊される、アッセイ。
【請求項１０】基質が前記熱安定性酵素によって生成物に変換され、そして該基質の添加前に、該生成物と同一のバックグラウンド化合物が除去される、請求項９に記載のアッセイ。
【請求項１１】前記生成物と同一のバックグラウンド化合物が、酵素の作用または熱不活性化によって除去される、請求項１０に記載のアッセイ。
【請求項１２】請求項１から６および９から１１のいずれかの項に記載のアッセイにおける使用のための、熱安定性酵素に結合した抗体を含む、結合体。
【請求項１３】前記酵素がアデニル酸キナーゼである、請求項１２に記載の結合体。
【請求項１４】前記抗体が、タンパク質、微生物、ペプチド、毒素、ホルモン、および代謝物から選択される分析物に結合する、請求項１２または１３に記載の結合体。
【請求項１５】前記抗体がプリオンタンパク質に結合する、請求項１４に記載の結合体。
【請求項１６】分析物に対するアッセイにおける請求項７または８に記載のキットあるいは請求項１２から１５のいずれかの項に記載の結合体の使用。 [Claims]
1. An assay for an analyte, the method comprising specifically binding the analyte to a thermostable reporter kinase, adding ADP, and testing for ATP formation, wherein the addition of ADP is performed. Previously, an assay wherein kinases other than the reporter kinase are substantially removed by washing and the remaining endogenous kinase in the analyte is inactivated by heating.
2. The thermostable reporter kinase is a reporter adenylate kinase, and the amount of the reporter adenylate kinase specifically bound to the analyte is substantially proportional to the amount of the analyte. 2. The assay according to 1.
3. The assay according to claim 1, wherein the formation of ATP is measured using luciferin / luciferase.
4. The assay according to claim 1, for determining the presence and / or amount of an analyte in a sample,
Exposing said sample to a reporter adenylate kinase coupled to a binding agent specific for said analyte, wherein said reporter adenylate kinase specifically binds to an analyte present in said sample;
Removing reporter adenylate kinase that does not specifically bind to the analyte;
Exposing a reporter adenylate kinase specifically bound to the analyte to ADP; and testing for ATP formation;
Assay wherein the remaining adenylate kinase other than the reporter adenylate kinase is substantially removed by heating prior to the addition of ADP.
5. The assay according to claim 1, comprising adding an ATPase to the analyte, and removing the ATPase from the analyte before adding ADP. .
6. The assay of claim 5, wherein said ATPase is inactivated by heating said ATPase.
7. A reagent kit for determining the presence and / or amount of an analyte in a sample, comprising:
A solid phase on which the analyte or an antibody specific to the analyte is immobilized;
A reporter composition comprising a thermostable adenylate kinase coupled to an antibody specific for the analyte; and an ADP plus related reagent for the conversion of ADP to ATP by the thermostable adenylate kinase. .
8. The kit according to claim 7, further comprising an ATPase.
9. An assay for determining the presence and / or amount of an analyte in a sample, the assay comprising:
Exposing said sample to a detection composition, said detection composition comprising an antibody specific for said analyte coupled to a thermostable enzyme;
Isolating the detection composition (i) specifically bound to the analyte from the detection composition (ii) not specifically bound to the analyte; and adding a substrate for the thermostable enzyme Measuring the presence and / or amount of the detection composition bound to the analyte;
An assay in which the non-thermostable enzyme is destroyed by the application of heat before adding the substrate.
10. The assay of claim 9, wherein a substrate is converted to a product by said thermostable enzyme and prior to addition of said substrate, background compounds identical to said product are removed.
11. The assay according to claim 10, wherein the same background compound as the product is removed by enzymatic action or heat inactivation.
12. A conjugate comprising an antibody conjugated to a thermostable enzyme for use in an assay according to any one of claims 1 to 6 and 9 to 11.
13. The conjugate of claim 12, wherein said enzyme is adenylate kinase.
14. The conjugate of claim 12, wherein said antibody binds to an analyte selected from proteins, microorganisms, peptides, toxins, hormones, and metabolites.
15. The antibody you bind to prion protein conjugate according to claim 14.
16. Use of a kit according to claim 7 or 8 or a conjugate according to any of claims 12 to 15 in an assay for an analyte.