JP2002521668A - 顕微解剖サンプルの流体抽出 - Google Patents

顕微解剖サンプルの流体抽出

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JP2002521668A
JP2002521668A JP2000561502A JP2000561502A JP2002521668A JP 2002521668 A JP2002521668 A JP 2002521668A JP 2000561502 A JP2000561502 A JP 2000561502A JP 2000561502 A JP2000561502 A JP 2000561502A JP 2002521668 A JP2002521668 A JP 2002521668A
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トーマス エム． ベイアー，
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アークトゥラス エンジニアリング， インコーポレイテッド
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Abstract

(57)【要約】 レーザー捕獲顕微解剖（ＬＣＭ）サンプルの処理のためのシステムおよび方法が記載される。生物学的サンプル処理システムは、生物学的サンプルキャリアと嵌合されて、流体回路を形成する反応チャンバーを備える積層フィルムサンプル処理デバイスを備える。多段階流体デバイスは、流体体積を規定するために、ＬＣＭ移動フィルムおよび移動フィルムから離れて配置される表面を備える。反応緩衝液は、表面において、出口ポートまたは停止接合部を通して除去され得る。このシステムおよび方法の利点は、試薬の体積を減少させる引き続く加工を容易にすること、および経済性を高めることである。例えば、反応緩衝液は、ＬＣＭ移動フィルムから簡便に除去され得る。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （関連出願との相互参照） 本出願は、同時係属の米国特許出願番第号６０／０９３，７４４号（１９９８
，７月２１日出願）；および同第０８／９８４，９８３号（１９９７年、１２月
４日出願）（これら両方の内容全体は、本明細書において完全に示されるかのよ
うに、参考として本明細書に援用されている）の、米国特許法第１２０条に基づ
く一部係属出願である。
【０００２】 （発明の背景） （１．発明の分野） 本発明は、全般に、顕微解剖サンプルの液体抽出に関する。より詳細には、本
発明は、流体回路を通じた、顕微解剖組織サンプルの液体抽出に関する。これに
は、顕微解剖サンプルキャリアと顕微解剖分析容器との間の相互関係を含む。
【０００３】 （２．関連技術の考察） 先行技術の顕微解剖の技術および処理は、当業者に公知である。例えば、従来
の顕微解剖は、代表的に小型の手術装置で実行される。
【０００４】 この技術に伴う問題は、顕微解剖サンプルのその後の処理が、サンプルのサイ
ズの小ささにより困難であるということであった。従って、顕微解剖サンプルの
処理を容易にする解決策が必要である。
【０００５】 この技術に関する別の問題は、サンプルの成分を希釈する、比較的大量の反応
緩衝液および／またはその後の試薬の使用が、比較的少量のサンプルからデータ
を得ることを困難にさせ得るということであった。従って、より少量の反応緩衝
液および／または他の試薬を用いる解決策も必要である。
【０００６】 上記で考察した問題を解決するための試みの１つのアプローチは、顕微解剖サ
ンプルを捕獲および移動するためのキャリアフィルムを用いる方法に関する。次
いで、このフィルムおよびサンプルを、両方とも遠心分離管に入れ、ここでサン
プルは、反応緩衝液に接触する。しかし、このアプローチでは、反応緩衝液およ
び／またはその後の試薬の体積を必ずしも減少させない。
【０００７】 さらに、先のアプローチは、一般に、別の装置でのサンプル、反応緩衝液およ
びその後の試薬の連続的な取り扱いを必要とする。これには、多くの手動的な取
り扱い工程を含み、これは潜在的な人為的誤差および相対的な高コストにつなが
る。従って、上記で考察した要件を、より経済的な様式で満たす解決策も必要で
ある。
【０００８】 以前には、上記で言及された、引き続く処理を容易にする方法、試薬の体積を
減らすこと、および経済の要件は、完全には満たされていなかった。これらの要
件全てを同時に取り組む解決策が必要である。本発明は、とりわけ、これらの要
件を満たす方法に関する。
【０００９】 （発明の要旨） 本発明の目的は、上記で考察した、引き続く処理を容易にしそして単純化する
こと、試薬の体積を減少すること、および経済的要件を同時に満足させることで
ある。これらの要件は、先行技術の場合は、互いに相反し、そして同時には満足
されていない。
【００１０】 本発明の１つの実施態様は、生物学的なサンプル処理システムに基づく。この
システムは、流体回路を形成するように、生物学的サンプルのキャリアと嵌合さ
れた反応チャンバーを備えた、積層フィルムサンプル処理デバイスを含む。本発
明の別の実施態様は、以下を備える流体回路に基づく：反応チャンバー；この反
応チャンバーと連結されたサンプルキャリア嵌合表面；およびこの反応チャンバ
ーに連結された導管（配水管）。本発明の別の実施態様は、以下を包含する生物
学的サンプルを処理する方法に基づく：サンプルキャリアに生物学的サンプルを
提供する工程；積層フィルムサンプル処理デバイス（流体回路を形成するために
反応チャンバーを備える）に、このサンプルキャリアを嵌合させる工程（ここで
、この生物学的サンプルは、この反応チャンバー内に配置される）。本発明の別
の実施態様は、以下を備える顕微解剖サンプル抽出デバイスに基づく：少なくと
も一部、中間積層層および底部積層層により規定された充填ポート；この充填ポ
ートに連結された充填ポート−反応チャンバー間の毛細管であって、この充填ポ
ート−反応チャンバー間の毛細管は、少なくとも一部、この中間積層層、この底
部積層層および頂部積層層によって規定され、この頂部積層層をこえて伸展する
中間停止接合部を規定する、充填ポート−反応チャンバー間の毛細管；この頂部
積層層に連結されたスペーサー（このスペーサーは、表面に嵌合する顕微解剖サ
ンプルフィルムキャリアを備える）；この中間停止接合部をこえて、この充填ポ
ート−反応チャンバー間毛細管に結合する反応チャンバー（この反応チャンバー
は、少なくとも一部はこの頂部積層層およびこのスペーサーにより規定されてい
る）；およびこの反応チャンバーに連結された反応チャンバー出口毛細管（この
反応チャンバー出口毛細管は、少なくとも一部はこの中間積層層、この底部積層
層およびこの頂部積層層により規定されており、この抽出チャンバー出口毛細管
は、この頂部積層層をこえて伸展し、そしてこの反応チャンバーに結合する第２
の停止接合部を規定する）。本発明の別の実施態様は、以下を備える装置に基づ
く：レーザー捕獲（捕捉）顕微解剖のための複数工程の流体デバイスであって、
この複数工程の流体デバイスは、分析されるべきサンプルを含有する移動フィル
ム、およびこの移動フィルムから間隔を隔て、液量を規定する表面（この表面は
、反応緩衝液の出口ポートとして機能する出口停止接合部に連結されている）を
備えているデバイス。本発明の別の実施態様は、以下を包含する方法に基づく：
レーザー捕獲（捕捉）顕微解剖のための複数工程の流体デバイスを提供する工程
であって、この複数工程の流体デバイスは、ｉ）サンプルの一部が接着されてい
る移動フィルム、およびｉｉ）この移動フィルムから間隔を隔てて、液量を規定
する表面（この表面は、反応緩衝液の出口ポートとして機能する出口停止接合部
に連結されている）を備える、工程；この部分をこの反応緩衝液と接触させる工
程；次いで、この液量からこの反応緩衝液を取り出す工程。
【００１１】 本発明のこれらおよび他の目的および実施態様は、以下の記載および添付の図
面と組み合わせて考慮した場合、良好にみとめられ理解される。しかし、以下の
記載は、本発明の好ましい実施態様、およびその多くの特定の詳細を示すが、例
示の目的で示され、限定される目的ではないことが理解されるべきである。本発
明の精神から逸脱することなく、多くの変化および改変が、本発明の範囲内でな
され得、そして本発明はこのような改変すべてを含む。
【００１２】 （発明の詳細な説明） 本発明ならびにそれらの種々の特徴および有利な詳細が、添付の図面および以
下の説明の詳細において例示される非限定的な実施態様に対する参照とともによ
り十分に説明される。周知の構成要素および処理技術の記載が、本発明の詳細を
不必要に不明瞭にすることがないように省略される。
【００１３】 本発明は、流体回路を形成する任意の顕微解剖サンプルキャリアと嵌合する任
意の積層フィルムデバイスを含む。積層フィルムデバイスは、抽出デバイスと呼
ばれ得る。顕微解剖したサンプルは、以下を含む任意の様式において得られ得る
：レーザー捕獲顕微解剖、レーザー圧発射（ｃａｔａｐｕｌｔｉｎｇ）、レーザ
ー補足（ｔｒａｐｐｉｎｇ）、レーザー切断、および／またはレーザー切除、機
械切断など。
【００１４】 本発明は、抽出チャンバーを含み得る。抽出チャンバーは、サンプルキャリア
によりある程度規定され得る。抽出チャンバーはまた、スペーサーリングにより
ある程度規定され得る。最初に、スペーサーリングの内部のサンプルキャリアに
より運ばれる顕微解剖サンプルを整列し、次いでスペーサーリングとサンプルキ
ャリアを嵌合させることにより、キャリアの表面上の顕微解剖サンプルを抽出チ
ャンバー中に清潔に誘導し得る。使用の前に、抽出チャンバーは、スペーサーリ
ングの嵌合する表面上に放出層を提供することにより清潔に保たれ得る。
【００１５】 本発明は、一つ以上の毛細管を含み得る。毛細管は、抽出デバイス内の大量輸
送を可能にするパイプおよび導管である。流体が流れ、次いで停止する毛細管の
端部は、停止接合部と呼ばれ得る。流体が導入される毛細管の端部は、流体ウェ
ルまたは流体ポートと呼ばれ得る。毛細管は、抽出デバイスの内部または外部に
位置する構造機能を連結し得る。停止接合部および／または充填ポートは、ポン
プの追加でアップグレードされ得る。このようなポンプは、１つまたはそれ以上
の積層層に形成された簡単な外部作動バブル（別名ブリスター）であり得る。介
在性の弾性層（例えば、気泡）が、このようなバブルポンプのより有効な、確実
かつ予測可能な操作を作り出し得る。このポンプブリスターは、穴を有し得る。
この穴は、操作者の指により覆われ得、従って、覆われてポンプブリスターが抑
制される場合、流体回路において空気圧の増加は、回路中で流体の移動を引き起
こす。ポンプブリスター穴はまた、流体ウェルまたは流体ポートとして作用し得
る。
【００１６】 マス（ｍａｓｓ）（すなわち、流体、固体および気体）は、毛管力、ポンピン
グ力、および／または加速力（例えば、抽出デバイス全体が配置され得る研究室
遠心機からの求心性加速）により毛細管を通して押しやられ得る。チャンバーを
充填および／または空にするために、ポンプまたは加速力が通常要求される。遠
心チューブに少なくとも部分的に適合するように形成される抽出デバイスは、そ
れらの形状を説明するダーツ（ｄａｒｔ）と呼ばれる。
【００１７】 毛細管内の流体の流速は、毛細管の直径により制御され得る。毛細管内の体積
流速は、静水圧の関数であり得る。従って、大きな水頭圧（ｈｅａｄ ｐｒｅｓ
ｓｕｒｅ）を生成するウェルでの大体積の流体は、より早い流速である傾向があ
る。毛細管出口径に対する毛細管入り口直径の比率を使用して、体積フローを制
御し得る。例えば、大きなウェルから引いている小さな毛細管は、より小さなウ
ェルから引いている同じ毛細管よりも、より高い体積フローを有する。毛管力を
また使用して、デバイスを通して流体を移動し得る。親水性材料からデバイスを
製造することにより、水ベースの流体が、毛細管作用により毛細管中に引き込ま
れる。流体は、小さな直径を有する出口ポート（すなわち、停止接合部）に達す
るまで、移動する。流体は、例えば、遠心加速を用いることによりまたは空気圧
を増加することによって、流体に対する力を増加することにより停止結合部を通
し得る。この様式において、流体は、消化またはインキュベーションのためのデ
バイスの特定の部分に引き込まれ得、次いで、その後流体を、続く希釈または分
析のために前記の力を適用することにより、デバイスの異なる部分に移動され得
る。
【００１８】 本発明は、積層フィルムデバイスにより規定される希釈チャンバーを含み得る
。希釈物は、消化試薬の後にデバイスに添加され得、そしてこのデバイスは、希
釈チャンバー中の希釈物および消化産物を移動するために遠心機中に配置され得
る。本発明はまた、チャンバー、導管、ウェルおよび停止接合部に沈着した試薬
を含み得、積層材料あるいは流体の表面張力または親水性を変化させ得る。沈着
した試薬はまた、消化化合物、分析試薬（例えば、抗体）、または核酸プローブ
を含み得る。
【００１９】 本発明の状況は、顕微解剖サンプル分析、特に細胞組織分析である。サンプル
フィルムキャリアへの嵌合に加えて、抽出デバイスは、他の分析装置（例えば、
フィルター、ハイブリダイゼーションチャンバー、ＰＣＲチャンバー、アッセイ
装置など）に接続され得る。
【００２０】 積層抽出デバイスを組みたてるために使用される特定の製造プロセスは、廉価
でありかつ再現性があるべきである。積層層は、リール上への積層フィルムおよ
びアセンブリーの連続的な様式の機械的穿孔または切断を取りこむ、標準的な積
層フィルム転換プロセスにより処理され得る。このプロセスは、当業者に周知で
あり、そしてウェブに基づくプロセスと呼ばれる。このデバイスはまた、機械的
切断およびレーザー切断（例えば、２５Ｗ ＣＯ２レーザー）の組み合わせによ
り製造され得る。積層層は、連続的なロールカレンダリングまたは接着プロセス
により結合され得る。積層層はまた、超音波処理溶接および／または熱かしめ（
ｈｅａｔ ｓｔａｋｉｎｇ）により接合され得る（またはさらなる構造構成要素
（例えば、カバー）が追加され得る）。
【００２１】 しかし、積層抽出デバイスを組みたてるために使用される特定の製造プロセス
は、それが記載の機能性を提供する限り、本発明に必須ではない。通常、本発明
を作製するまたは使用する者は、工作機械器具設備およびエネルギーの必要条件
、最終産物の予想された用途の必要条件、および製造プロセス全体の必要に基づ
き製造するプロセスを選択する。
【００２２】 積層抽出デバイスに使用される特定の材料は、生物学的および化学的に不活性
であるべきである。積層材料が親水性ポリマーであることが好ましい。製造操作
のために、ポリエステル材料を利用することは有益である。材料の選択された領
域は、流体の流れを方向付けかつ制御するために表面処理（例えば、肌目付け（
ｔｅｘｔｕｒｉｎｇ））を有し、および／またはプラズマ処理もしくは化学処理
を有し得る。これらの処理は、材料をより水和性に作製するために表面の強度を
変化し得る。
【００２３】 しかし、積層抽出デバイスのために選択される特定の材料は、記載の機能を提
供する限り、本発明に必須ではない。通常、本発明を作製するまたは使用する者
は、費用および利用性の経済性、最終産物の予想された用途の必要条件および製
造プロセス全体の必要に基づき最高の市販の材料を選択する。
【００２４】 本発明の目的は、種々の異なる形状を利用し得、そして少量の反応緩衝液を必
要とし得る、レーザー捕獲顕微解剖（ＬＣＭ）フィルムから細胞材料を抽出する
ための方法を提供することである。現在の技術は、流体中にＬＣＭフィルムキャ
リアを挿入することを必要とする。抽出反応の後、ＬＣＭフィルムキャリアは、
反応緩衝液から取り除かれ、次いで液体反応緩衝液が、次の段階で処理される。
フィルムキャリアが緩衝液から取り除かれるときに、液体が、反応容器から持ち
上げられないように、フィルムキャリアを抽出する前に、フィルムキャリアから
、反応緩衝液を取り除く、簡単で便利な方法が望ましい。
【００２５】 この目標を達成するための１つの方法は、図１〜図８に例示されるように、単
純な停止接合部を微小遠心管の設計へ組み込むことである。この停止接合部は、
この管のインサートにおける小孔１０または複数の孔からなり得、インサートは
、いくらかの力（すなわち、遠心力）が流体に適用されない限り、この流体がこ
の孔を通過することを妨げる。この流体をこの孔に通過させるために必要な力は
、この孔のサイズを変化させることによって調整され得る。
【００２６】 図１〜８を参照して、処理工程は、（ａ）図１〜４に示されるように、緩衝液
をインサート１００の上部に適用する工程、を含む。この緩衝液は、停止接合部
の力によって、インサート１００を貫通することを妨げられる。次いで、（ｂ）
図２および図５に示されるように、フィルムキャリアがこの管へ挿入された場合
に、この流体、従ってこの容器のサイズを調整し、この流体がこの孔を完全に通
過する力を妨げる。抽出は、図２および図５に例示される構成の際にこの装置で
生じる。抽出後、反応容器アセンブリを遠心分離機に配置し、（ｃ）そして図３
および図６に示されるように、この液体が停止接合部を通過し、そしてリザーバ
内に移動するために十分な力を供給する速度で回転させる。次いで、フィルムキ
ャリアは、この流体体積を乱すことなく除去される。この流体は、細いピペット
またはシリンジを使用して試薬容器から取り出され得る。インサートまたはプラ
グは、図７〜図８に示されるように、この容器の内側に利用され得る。
【００２７】 （代替の実施態様） 本発明の目的は、組織サンプルの大部分を被覆し、そしてさらに移動された組
織を消化するための小体積の液体を要求するために、大きな表面積を有するＬＣ
Ｍフィルムキャリアを提供することである。これは、毛細管アセンブリの一部と
してレーザー捕獲顕微解剖（ＬＣＭ）フィルムキャリアを提供することによって
達成され得る。
【００２８】 本発明は、図９に示されるように、ＬＣＭフィルムキャリア９００を流体アセ
ンブリへ組み込む。この流体アセンブリは、流体の薄層がこのフィルムと接触す
ることを可能にする。フィルム９１０は、精密スペーサーによって嵌合表面から
間隔をあけて配置され得る。この精密スペーサーは、適切な厚さ（例えば、約１
００ミクロン）の一枚の両面接着体９２０を備え得る。このテープは、図１０に
示されるように、フィルムキャリアと嵌合表面との間のギャップを作製し、そし
て液体をこのフィルムキャリアの内表面にシールする。適切な体積の液体試薬は
、このフィルムキャリアを用いてシールする前に、この嵌合表面に適用される。
図１１を参照して、この液体は、通気孔９４０に空気圧を適用することによって
、出口ポートを通ってシールされたアセンブリから抽出される。またあるいは、
アセンブリは、遠心分離機に挿入され得、そしてこの出口ポートはより大きな半
径側にあり、通気孔および出口ポートは適切な試薬容器に取り付けられる。この
アセンブリは、停止接合部の力に打ち勝つために十分な角速度で回転され得、そ
してこの流体を出口ポートに通し、試薬容器を空にする。
【００２９】 図１２〜図１４において、代替の実施態様は、微小遠心管アセンブリと組み合
わせて、まとめて示される。図１２において、ＬＣＭ移動フィルムを保有するキ
ャップ１２００は、流体体積１２１０を規定するために両面接着体スペーサーを
用いて嵌合表面から離される。図１３において、嵌合表面の通気孔および出口停
止接合部１２２０が見られ得る。複数の通気孔を用いて、適用ポートおよび空気
口を可能にし得、その結果、試薬は、デバイスのアセンブリ後にこの適用ポート
を介して適用され得る。液体は、積層アセンブリの中央に充填され得、次いで、
キャップが上部に配置され得る。この液体体積は、反応試薬を満たし、そしてこ
のキャップ（すなわち、ＬＣＭ移動フィルムおよび獲得されたサンプルの一部）
の表面を湿潤させるように計量され得るが、停止接合部を通して力は加えられな
い。次いで、キャップ／積層アセンブリ１２３０は、微小遠心管へ挿入され得る
。反応後、この微小遠心管アセンブリは、流体が停止接合部を通過し、そして管
の底部に留まることを可能にするために十分な回転速度で、回転され得る。この
技術はまた、マイクロタイタープレートを用いて作業する。
【００３０】 （実施例） ここで、本発明の具体的な実施態様は、以下の非制限的な実施例によってさら
に記載され、これらは重要な種々の特徴を幾分詳細に例示するために提供される
る。本実施例は、本発明が実施され得る方法の理解を容易にすること、およびさ
らに当業者が本発明を実施することを可能にすることを単に意図する。従って、
本実施例は、本発明の範囲を制限するように解釈されるべきではない。
【００３１】 （実施例１） 代表的な外形について、フィルムキャリアが１ｃｍ×１ｃｍの寸法を有し、そ
して両面テープ厚が１００ミクロンであると呈され得る。得られる封入体積は、
わずか１０ｍｍ3すなわち１０マイクロリットルである。１，０００ｒｐｍ〜３
０，０００ｒｐｍの回転速度で封入液体に及ぼされる力は、抽出生成物を停止接
合部に通過させるために十分であり、この抽出生成物を封入体積と接触させ、そ
して管の底部に収集する。
【００３２】 （実施例２） 図１５Ａから図１５Ｄを参照して、ポンプを備える単一ステージ抽出デバイス
を示す。図１５Ａを参照して、この単一ステージ抽出デバイスは、ベース積層１
５１０を備える。このベース積層１５１０は、出口ポート１５２０を備える。
【００３３】 図１５Ｂを参照して、この単一ステージ抽出デバイスは、中間積層１５３０を
備える。この中間積層１５３０は、ポンプ領域１５４０を規定する第１の開口部
を備える。この中間積層１５３０は、反応領域１５５０を規定する第２の開口部
を備える。この反応領域１５５０は、三次元抽出チャンバーに対応し得る。この
ポンプ領域１５４０を、第１の毛細管１５６０を介して反応領域１５５０に連結
する。第２の毛細管１５７０もまた、反応領域１５５０に連結させる。中間積層
領域１５３０を、第１の粘着面および第２の粘着面を有するポリマーのシートか
ら作製し得、それによって両面接着層を規定する。
【００３４】 図１５Ｃを参照して、この単一ステージ抽出デバイスは、頂部積層１５８０を
備える。この頂部積層１５８０は、反応領域１５５０と一致する第１の開口部１
５９０を備える。共に、中間積層１５３０の第２の開口部および頂部積層１５８
０の第１の開口部は、サンプルからの成分の抽出に対して抽出チャンバーを規定
するように協同する。頂部積層１５８０は、ポンプ領域１５４０と一致する二配
置（ｂｉ−ｐｏｓｉｔｉｏｎ）ポンプブリスター１５９５を備える。
【００３５】 図１５Ｄを参照して、ベース積層１５１０、中間積層１５３０、および頂部積
層１５８０は、単一ステージ抽出デバイスを形成するために共に連結して示され
得る。フィルムキャリア１５０５を、頂部積層１５８０に隣接させて示す。共に
、フィルムキャリア１５０５の底部、第１の開口部１５９０および反応領域１５
５０は、抽出チャンバーを規定するように協同する。
【００３６】 ここで、この単一ステージ抽出デバイスの操作を記載する。ポンプ領域１５４
０は、反応緩衝液（別名、抽出流体）が提供される。次いで、フィルムキャリア
１５０５に顕微解剖サンプルを導入し、そしてこの抽出チャンバーを頂部積層１
５８０の上部表面上にフィルムキャリア１５０５を配置することによって閉じる
。次いで、二配置ポンプブリスター１５９５を作動させて、反応緩衝液を抽出チ
ャンバーへ押し出し、その結果、顕微解剖サンプルと接触する。抽出流体が顕微
解剖サンプルと反応するために十分な時間を有した後、二配置ポンプブリスター
１５９５をさらに作動させて、サンプルの局面を運搬する抽出流体を出口ポート
１５２０に向けて押し出す。
【００３７】 （実施例３） ここで図１６〜２２について言うと、別の単一段階抽出デバイスおよびその製
造方法をここで記載する。このデバイスをまず記載し、次にそのデバイスの構成
パーツを記載し、次に、そのデバイスの製造プロセスを記載し、次いでそのデバ
イスの操作プロセスを記載する。
【００３８】 図２１Ｅについて言うと、組み立てられた単一段階抽出デバイスを示す。この
デバイスは、一部分で抽出チャンバー２１８０を規定するスペーサー２１７０を
備える。より一般的には、この抽出チャンバー２１８０は、反応チャンバーと呼
ばれ得る。この抽出チャンバー２１８０は、第１毛細管２１３０に連結される。
この第１毛細管２１３０は、充填ポート２１１０に連結される。抽出チャンバー
２１８０はまた第２毛細管２１４０に連結される。スペーサー２１７０が横たわ
りかつ２つの毛細管停止接合部穴２１６０と整列していることが、明白であり得
る。従って、スペーサー２１７０の内側は、抽出チャンバー２１８０を規定する
。スペーサー２１７０は、嵌合表面２１９０を含む。この嵌合表面２１９０は、
生物学的サンプルキャリア（例えば、レーザー捕獲顕微解剖移動フィルムキャリ
ア）（図２１Ｅには示されず）に装着（嵌合）するためのものである。
【００３９】 図２１Ａ〜２１Ｅについて言うと、この単一段階抽出デバイスの構成パーツを
示す。図２１Ａについて言うと、底部積層は、デバイスの外形に反映し、そして
非特異的なさらなる構造特徴を備える。図２１Ｂについて言うと、中間積層層２
１２０は、充填ポート２１１０を備える。この充填ポート２１１０は、第１毛細
管２１３０に接続される。中間積層２１２０はまた、第２出口毛細管２１４０を
備える。充填ポート２１１０、第１毛細管２１３０、および第２毛細管２１４０
は、図１８に全て示され得る。
【００４０】 図２１Ｃについて言うと、単一段階抽出デバイスの頂部積層２１５０を示す。
この頂部積層２１５０は、充填ポート穴２１５５および２つの毛細管停止接合部
穴２１６０を備える。頂部積層２１５０におけるこの毛細管停止接合部穴２１６
０は、図２１Ｂに示される毛細管２１３０および２１４０の末端と整列する。同
様に、図２１Ｃ中の充填ポート穴２１５５は、図２１Ｂ中の充填ポート２１１０
と整列する。
【００４１】 図２１Ｄについて言うと、環状形態のスペーサー２１７０を示す。このスペー
サー２１７０は、顕微解剖サンプルフィルムキャリア嵌合表面２１７５を備える
。
【００４２】 図１６〜２０について言うと、一連の積層ストック片を示す。図１６について
言うと、底部積層の積層ストック片を示す。底部積層は、４つの作業ピン穴１６
１０を備える。底部積層は、必要に応じて界面活性剤処理をした親水性ポリマー
（例えば、ポリエステル）であるべきである。例えば、適切な親水性ポリマーは
、くもり止め特性を有するように製造されたポリマーである。
【００４３】 図１７について言うと、頂部積層の積層ストック片を示す。この頂部積層の積
層ストック片は、４つの作業ピン穴１７１０および多くの停止接合部穴１７２０
を備える。各々の積層ストック片は、単一段階抽出デバイスの２つの列を備える
（図２１に示される）。単一段階抽出デバイスの各々は、２つの停止接合部穴１
７２０を有する頂部積層部分を有する。種々の例示的な寸法を図１７においてイ
ンチで示す。もちろん、本発明は、任意の特定の寸法に限定されない。頂部積層
ストック片材料は、再度、必要に応じて表面活性剤処理をした親水性ポリマー（
例えば、ポリエステル）であるべきである。また、この親水性ポリマーがくもり
止め特性を有する場合、有用である。
【００４４】 図１８について言うと、中間積層の積層ストック片を示す。中間積層は、４つ
の作業ピン穴１８１０および多くの他の構造的特徴を備える。中間積層はしばし
ば、両表面上で粘着性を有するように選択される。種々の例示的な寸法を図１８
においてインチで示す。もちろん、本発明は、いずれの特定の寸法にも限定され
ない。単一段階抽出デバイスの２つの列は、このストック片上で互いに向かい合
うことが、図１８より明らかであり得る。頂部、中間、および底部のフィルムは
、整列穴１６１０、１７１０、および１８１０を使用して、３層が整列するよう
に組み立てられる。このアセンブリは、ハンドローラーもしくはローリングミル
または当業者に公知の他の技術を用いて共にプレス加工され得る。
【００４５】 図１９について言うと、穿孔処理した積層アセンブリのレーザー切断トラック
を示す。この切断トラックは、図１６、１７および１８に示されるデバイスの二
重列を、２つの別々の一列に分離する。次いで、このデバイスまたはダーツをは
さみのような簡単な切断用具を用いて個々に分離し得る。再度、種々の例示的な
寸法を図１９に示し、そして本発明は、これらの寸法に限定されない。より詳細
には、図１８に示される穿孔処理した積層ストック片を、ピン穴１８１０につい
て配置し、そして二酸化炭素レーザーにより処理し、図１９に示されるカットラ
イン１９１０を形成する。
【００４６】 図２０について言うと、図１９に示されるトレースと一致する、図１８に示さ
れる片を処理して得られるレーザーカット積層ストック片を示す。２つの平行し
て向き合う単一段階抽出デバイスの列は、切断トレースが適切に割り込む場合、
タブ２０１０で保持され得る。
【００４７】 この単一段階抽出デバイスの操作をここで記載する。顕微解剖サンプルを保有
する移動フィルム（示さず）は、顕微解剖サンプルフィルムキャリア嵌合表面２
１７５と嵌合され得、それによって、抽出チャンバー２１８０を完成する。抽出
チャンバーおよび充填毛細管２１３０を満たすのに十分な体積で、抽出流体を充
填ポート２１１０に供する。毛細管効力は、抽出流体を充填毛細管２１３０なら
びにリング２１７０および移動フィルムにより形成される抽出チャンバー中へ流
す。停止接合部効力は、この流体が抽出チャンバーに存在することを妨げる。あ
るいは、複合システムを微小遠心管に配置しそして回転させることによって、充
填ポート２１１０中の抽出流体は、第１毛細管２１３０から抽出チャンバー２１
８０まで駆動され、この抽出チャンバー２１８０で、この流体は、顕微解剖サン
プルと反応（別名、消化）する。遠心分離のｒｐｍを増大することによって、顕
微解剖サンプルの一部（または全て）を保有する抽出流体は、抽出チャンバー２
１８０を通過して第２毛細管２１４０へ行き、そしてチップ２１９０にて単一段
階抽出デバイスから出て行く。第１または入口停止接合部穴１７２０は、この連
結部でより大きな上め連結効力を提供するために、出口停止接合部穴より若干大
きく作製され得る。これによって、遠心分離のｒｐｍが増大するまで抽出チャン
バー中に抽出流体を保持する。このアセンブリ全体は、先に微小遠心管中に配置
されているので、チップ２１９０から出る消化したサンプルを保有する流体は、
微小遠心管中に回収され、そして捕獲される。この型の抽出デバイスは、その全
体の見かけのため、「ダーツ」と呼ばれ得る。
【００４８】 図２２について言うと、この単一段階抽出デバイスに関連する多くの提示的な
寸法を示す。もちろん、本発明は、いずれの特定の寸法にも限定されない。充填
ポート２１１０からの反応緩衝液はスペーサー２１７０により備えられ、そして
最終的に第２毛細管２１４０を通過することは、明らかであり得る。
【００４９】 （実施例４） 図２３Ａ〜２３Ｇを参照して、２段階抽出デバイスを示す。図の２３Ａを参照
して、この実施態様では、底部積層２３１０は、４つの毛細管停止接合部穴２３
２０を備える。これらの停止接合部穴は、わずかに異なる直径であり得、従って
、流体が停止接合部を通過するために、異なる圧力を必要とする。
【００５０】 図２３Ｂを参照して、中間積層２３３０は、充填ポート２３３５を備える。第
１の毛細管２３４０は、充填ポート２３３５に連結される。この中間積層２３３
０は、第２の毛細管２３４５を備える。この中間層２３３０はまた、チップ２３
５５で終わる第３の毛細管２３５０を備える。
【００５１】 図２３Ｃを参照して、頂部積層２３６０は、ポンプ空間２３６４を規定する発
泡材２３６２の層を備える。この頂部積層２３６０は穴２３６６を備える。被覆
シート２３６８を、発泡材２３６２の層を覆って設置する。
【００５２】 図２３Ｄを参照して、環の形状のスペーサー２３７０を、リリース層２３７２
に連結して示す。この環は、両側面に接着体を有するプラスチックの小片であり
得る。リリース層２３７２は、１枚のシリコン被覆紙であり得る。
【００５３】 図２３Ｅを参照して、両側面に感圧性接着体を有する発泡材の層２３８０は、
穴２３８２を有する。この穴２３８２は、稀釈チャンバーを規定する。図２３Ｆ
を参照して、被覆層２３９０を示す。この被覆層２３９０は、発泡材２３８０の
上面に配置される。
【００５４】 図２３Ｇを参照して、組み立てた２段階抽出デバイスを示す。図２３Ｇは、２
段階抽出デバイスに関連した多くの例示的寸法を示す。もちろん、本発明は、特
定の寸法に限定されない。
【００５５】 この２段階抽出デバイスの操作（単数または複数）をここで記述する。反応緩
衝液（抽出液体としても知られる）を、製造者が出荷前に充填ポート２３３５に
設置し得るか、または最終使用者が、ウェルに配置し得る。使用の準備の時、リ
リース層２３７２を、スペーサー２３７０から除去し、そしてサンプルフィルム
キャリア（示されていない）を、顕微解剖されたサンプルを抽出チャンバーに導
入するために、スペーサー２３７０の表面に嵌る顕微解剖されたサンプルフィル
ムキャリアと嵌め合わせる。次いで、抽出緩衝液を充填ポート２３３５に適用す
る。次いで、被覆シート２３６８内の穴を覆い、ポンプを発泡材２３６２を圧縮
することによって作動させ、汲み上げを開始し、それによって、充填ポート２３
３５中の反応緩衝液を毛細管２３４０を押し通し、次いで抽出チャンバーに押し
入れる。抽出の完了後、稀釈剤を入口ポート２３３５に適用する。ポンプを圧縮
（すなわち、カバー２３６２を押す）によって作動させる。次いで、反応緩衝液
、顕微解剖されたサンプル、および稀釈剤を抽出チャンバーから穴２３８２で規
定される稀釈チャンバーに押し入れる。このようにして、顕微解剖されたサンプ
ルを、第１の体積の反応緩衝液によって処理し得、次いで、この反応緩衝液を、
稀釈液体の添加のよって、第２の体積に増加させる。このことは、非常に小さい
顕微解剖されたサンプルを、それに対応して、少量の反応緩衝液によって処理し
得るという有意な利点を有するが、引き続く処理では、稀釈液体を含む大量の物
質を使用し得る。第２のポンプを作動させ続けることによって、稀釈生成物を、
第３の毛細管２３５０を通して、チップ２３５０へと押しやり得る。他の試薬を
、毛細管および／または停止接合部穴内に被覆し得る。
【００５６】 （本発明の実際の適用） 技術分野内で価値を有する本発明の実際の適用は、顕微解剖されたサンプルか
らの有機分子の抽出である。さらに、本発明は、ＤＮＡを解析すること（疾患へ
の感受性を決定する目的のために有用）に関連して、または悪性度を同定するこ
と（診断の目的のために有用）などに関連して有用である。本発明について、実
際上無数の用途が存在するが、それらの全てを、ここで、詳述する必要はない。
【００５７】 （本発明の利点） 本発明の実施態様を代表する、抽出デバイスは、少なくとも以下の理由につい
て、費用に対して効率が良く、有利であり得る。本発明は、小さな顕微解剖され
たサンプルを、少量の試薬によって消化することを可能にする。本発明は、少量
の消化体積を、大きい体積に希釈することを可能にする。本発明は、顕微解剖さ
れたサンプルを経済的な手段で処理することを可能にする。
【００５８】 本明細書中に記載された、本発明の開示された全ての実施態様は、過度の実験
をせずとも、十分に理解され、そして実施され得る。本発明によって意図される
本発明を実施する最も良い形式は、上に開示されるが、本発明の実施は、それに
限定されない。従って、本発明が本明細書中に明確に記載されるものとは別の方
法で、実施され得ることが、当業者によって理解される。
【００５９】 例えば、個々の構成要素は、開示される形態に形成されるか、または開示され
る配置に組み立てられる必要はないが、実質的な任意の形態で提供され得、そし
て、実質的な任意の配置に組み立てられ得る。さらに、個々の構成要素は、開示
される材料から製造される必要はないが、実質的な任意の適切な材料から製作さ
れ得る。さらに、本明細書中に記載の抽出デバイスは、物理的に分離されたモジ
ュールであり得るが、抽出デバイスは、それらが結合される装置内へと統合され
得ることが明白である。そのうえ、開示される各々の実施態様の開示される全て
の要素および特性は、このような要素または機構が互い両立しない場合を除いて
、他の全ての開示される実施態様の開示される要素および特性と組み合わせ得る
か、またはそれらに対して代用され得る。
【００６０】 本発明の特性の種々の追加、改変および再配置が、基礎をなす発明の概念の精
神および範囲から逸脱することなく、なされ得ることが明らかである。添付の特
許請求の範囲によって定義されるような本発明の範囲およびその等価物は、全て
のこのような追加、改変、および再配置を含むことが意図される。この添付の特
許請求の範囲は、このような制限が、句「〜のための手段」を用いる所定の特許
請求の範囲に明確に列挙されない限り、手段および機能の制限を含んでいるとは
解釈されない。本発明の好都合な実施態様は、添付の下位の特許請求の範囲によ
って、区別される。
【図面の簡単な説明】
本発明を構成する特徴および利点の明確な着想、ならびに本発明を用いて提供
されるモデルシステムの構成要素および作動は、例示的な、従って限定的ではな
い、実施態様を参照することによって、より容易に明らかとなる。これらの実施
態様は、本明細書に添付されその一部を形成する図面に図示され、この図面にお
いて、同じ参照記号は、（１つより多い図に見られる場合には）同じ部分を示す
。これらの図面に図示される特徴は、必ずしも同一縮尺で描かれていないことに
注意するべきである。
【図１】 図１は、本発明の実施態様を代表する、微小遠心分離管およびキャップの側面
概略図を示す。
【図２】 図２は、本発明の実施態様を代表する、図１の微小遠心分離管およびキャップ
の、キャップが管に挿入された側面概略図を示す。
【図３】 図３は、本発明の実施態様を代表する、図１および図２の微小遠心分離管およ
びキャップの、スピン後の側面概略図を示す。
【図４】 図４は、本発明の実施態様を代表する、より小さな移動フィルム領域を組み込
む微小遠心分離管およびキャップの側面概略図を示す。
【図５】 図５は、本発明の実施態様を代表する、図４の微小遠心分離管およびキャップ
の、キャップが管に挿入された側面概略図を示す。
【図６】 図６は、本発明の実施態様を代表する、図４および図５の微小遠心分離管およ
びキャップの、スピン後の側面概略図を示す。
【図７】 図７は、本発明の実施態様を代表する、停止接合部を組み込むインサートまた
はプラグの、頂面概略図を示す。
【図８】 図８は、本発明の実施態様を代表する、別のインサートまたはプラグの側面概
略図を示す。
【図９】 図９は、本発明の実施態様を代表する、レーザー捕獲顕微解剖フィルムキャリ
アの頂面概略図を示す。
【図１０】 図１０は、本発明の実施態様を代表する、レーザー捕獲顕微解剖フィルムキャ
リアのフィルムと嵌合して流体回路を形成する、積層フィルムデバイスの側面概
略図を示す。
【図１１】 図１１は、本発明の実施態様を代表する、図１０に示す流体回路の頂面概略図
を示す。
【図１２】 図１２は、本発明の実施態様を代表する、積層アセンブリにシールされたキャ
ップの側面概略図を示す。
【図１３】 図１３は、本発明の実施態様を代表する、積層抽出毛細管／停止接合部アセン
ブリの側面概略図を示す。
【図１４】 図１４は、本発明の実施態様を代表する、微小遠心分離管に挿入された、図１
２のキャップ／積層の側面概略図を示す。
【図１５】 図１５Ａは、本発明の実施態様を代表する、抽出デバイスの底部積層の頂面概
略図を示す。 図１５Ｂは、本発明の実施態様を代表する、抽出デバイスの中間積層の頂面概
略図を示す。 図１５Ｃは、本発明の実施態様を代表する、抽出デバイスの頂部積層の頂面概
略図を示す。 図１５Ｄは、本発明の実施態様を代表する、図１５Ａ〜図１５Ｃに図示した積
層を顕微解剖サンプルキャリアと一緒にした側面概略図を示す。
【図１６】 図１６は、本発明の実施態様を代表する、底部積層の頂面概略図を示す。
【図１７】 図１７は、本発明の実施態様を代表する、頂部積層の頂面概略図を示す。
【図１８】 図１８は、本発明の実施態様を代表する、切断前の中間積層の頂面概略図を示
す。
【図１９】 図１９は、本発明の実施態様を代表する、図１８に図示する中間積層の、レー
ザー切断パターンの概略図を示す。
【図２０】 図２０は、本発明の実施態様を代表する、切断後の中間積層の頂面概略図を示
す。
【図２１】 図２１Ａは、本発明の実施態様を代表する、単一段階顕微解剖サンプル抽出デ
バイスの、底部積層の頂面概略図を示す。 図２１Ｂは、本発明の実施態様を代表する、単一段階顕微解剖サンプル抽出デ
バイスの、中間積層の頂面概略図を示す。 図２１Ｃは、本発明の実施態様を代表する、単一段階顕微解剖サンプル抽出デ
バイスの、頂部積層の頂面概略図を示す。 図２１Ｄは、本発明の実施態様を代表する、単一段階顕微解剖サンプル抽出デ
バイスの、スペーサーの頂面概略図を示す。 図２１Ｅは、本発明の実施態様を代表する、組み立てられた単一段階微小分析
サンプル抽出デバイスの頂面概略図を示す。
【図２２】 図２２は、本発明の実施態様を代表する、図２１Ｅに図示する顕微解剖サンプ
ル抽出デバイスの頂面詳細図を示す。
【図２３】 図２３Ａは、本発明の実施態様を代表する、２段階顕微解剖サンプル抽出デバ
イスの、底部積層の頂面概略図を示す。 図２３Ｂは、本発明の実施態様を代表する、２段顕微解剖サンプル抽出デバイ
スの、中間積層の頂面概略図を示す。 図２３Ｃは、本発明の実施態様を代表する、２段階顕微解剖サンプル抽出デバ
イスの頂部積層が、発泡体リング、ならびにサンプルおよび希釈物のポンピング
のための穴を有するカバーシートと一緒になった、頂面概略図を示す。 図２３Ｄは、本発明の実施態様を代表する、放出層と一緒になって２段階顕微
解剖サンプル抽出デバイスのスペーサーを規定する、抽出チャンバーの頂面概略
図である。 図２３Ｅは、本発明の実施態様を代表する、２段階顕微解剖サンプル抽出デバ
イスのスペーサーを規定する、希釈チャンバーの頂面概略図である。 図２３Ｆは、本発明の実施態様を代表する、２段階顕微解剖サンプル抽出デバ
イスのスペーサーを規定する抽出チャンバーのための、カバーの頂面概略図を示
す。 図２３Ｇは、本発明の実施態様を代表する、組み立てられた２段階顕微解剖サ
ンプル抽出デバイスの頂面詳細図を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ

Claims (24)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 生物学的サンプル処理システムであって、生物学的サンプル
    キャリアと嵌合されて、流体回路を形成する反応チャンバーを備える積層フィル
    ムサンプル処理デバイスを備える、システム。
  2. 【請求項２】 前記積層フィルムサンプル処理デバイスが抽出チャンバーを
    備える、請求項１に記載の生物学的サンプル処理システム。
  3. 【請求項３】 前記積層フィルムサンプル処理デバイスが希釈チャンバーを
    備える、請求項１に記載の生物学的サンプル処理システム。
  4. 【請求項４】 前記積層フィルムサンプル処理デバイスがポンプを備える、
    請求項１に記載の生物学的サンプル処理システム。
  5. 【請求項５】 流体回路であって、 反応チャンバー； 該反応チャンバーに接続されたサンプルキャリア嵌合表面；および 該反応チャンバーに接続された導管、 を備える、流体回路。
  6. 【請求項６】 前記導管が、前記反応チャンバーから引かれる流体に毛管流
    力を伝え得る毛細管である、請求項５に記載の流体回路。
  7. 【請求項７】 前記サンプルキャリア嵌合表面に嵌合された顕微解剖移動フ
    ィルムキャリアをさらに備える、請求項５に記載の流体回路。
  8. 【請求項８】 前記導管に接続された希釈チャンバーをさらに備える、請求
    項５に記載の流体回路。
  9. 【請求項９】 前記希釈チャンバーに接続された出口毛細管をさらに備える
    、請求項８に記載の流体回路。
  10. 【請求項１０】 前記反応チャンバーに接続された別の導管をさらに備える
    、請求項５に記載の流体回路。
  11. 【請求項１１】 前記別の導管が、前記反応チャンバーに駆動される流体に
    毛管流力を伝え得る別の毛細管である、請求項１０に記載の流体回路。
  12. 【請求項１２】 前記別の毛細管に接続された充填ポートをさらに備える、
    請求項１１に記載の流体回路。
  13. 【請求項１３】 ポンプをさらに備える、請求項５に記載の流体回路。
  14. 【請求項１４】 生物学的サンプルを処理する方法であって、以下の工程： サンプルキャリアに生物学的サンプルを提供する工程；および 該サンプルキャリアを、反応チャンバーを有する積層フィルムサンプル処理デ
    バイスに嵌合して、流体回路を形成する工程、 を包含し、ここで、該生物学的サンプルは、該反応チャンバー内に配置される、
    方法。
  15. 【請求項１５】 前記サンプルキャリアに前記生物学的サンプルを提供する
    工程が、顕微解剖移動フィルムに、レーザー捕獲顕微解剖サンプルを提供する工
    程を包含する、請求項１４に記載の方法。
  16. 【請求項１６】 顕微解剖サンプル抽出デバイスであって、 中間積層層および底部積層層によって少なくとも部分的に規定される充填ポー
    ト； 該充填ポートと接続された、充填ポートから反応チャンバーまでの毛細管であ
    って、該充填ポートから反応チャンバーまでの毛細管は、該中間積層層、該底部
    積層層、および頂部積層層によって少なくとも部分的に規定され、該充填ポート
    から反応チャンバーまでの毛細管は、該頂部積層層を通して延びる中間停止接合
    部を規定する、毛細管； 該頂部積層層に接続されたスペーサーであって、顕微解剖サンプルフィルムキ
    ャリア嵌合表面を備える、スペーサー； 該中間停止接合部を通して、該充填ポートから反応チャンバーまでの毛細管に
    接続された反応チャンバーであって、該反応チャンバーは、該頂部積層層および
    該スペーサーによって少なくとも部分的に規定される、チャンバー；および 該反応チャンバーに接続された反応チャンバー出口毛細管であって、該反応チ
    ャンバー出口毛細管は、該中間積層層、該底部積層層、および該頂部積層層によ
    って少なくとも部分的に規定され、該抽出チャンバー出口毛細管は、該頂部積層
    層を通して延びかつ該反応チャンバーに接続する第２の停止接合部を規定する、
    毛細管、 を備える、デバイス。
  17. 【請求項１７】 請求項１６に記載の顕微解剖サンプル反応デバイスであっ
    て、 前記頂部積層層に接続された別のスペーサーであって、該別のスペーサーは、
    頂部表面を備える、スペーサー； 前記反応チャンバー出口毛細管によって規定される第３の停止接合部を通して
    前記反応チャンバー出口毛細管に接続される希釈チャンバーであって、該希釈チ
    ャンバーは、該頂部積層層および該別のスペーサーによって少なくとも部分的に
    規定される、チャンバー； 該希釈チャンバーに接続される希釈チャンバー出口毛細管であって、該希釈チ
    ャンバー出口毛細管は、前記中間積層層、前記底部積層層、および該頂部積層層
    によって少なくとも部分的に規定され、該希釈チャンバー出口毛細管は、該頂部
    積層層を通して延びかつ該希釈チャンバーと接続する第４の停止接合部を規定す
    る、毛細管、 をさらに備える、デバイス。
  18. 【請求項１８】 前記希釈チャンバー中に位置する希釈組成物をさらに備え
    る、請求項１７に記載の顕微解剖サンプル反応デバイス。
  19. 【請求項１９】 前記充填ポート中に位置する抽出組成物をさらに備える、
    請求項１６に記載の顕微解剖サンプル反応デバイス。
  20. 【請求項２０】 少なくとも１つの前記充填ポート中に位置する反応組成物
    、前記充填ポートから反応チャンバーまでの毛細管、前記反応チャンバー、およ
    び前記反応チャンバー出口毛細管をさらに備える、請求項１６に記載の顕微解剖
    サンプル反応デバイス。
  21. 【請求項２１】 顕微解剖サンプルのための多段階流体デバイスを備える装
    置であって、該多段階流体デバイスは、移動表面および流体体積を規定するため
    に前記移動フィルムから離れている表面を備え、該表面は、反応緩衝液のための
    出口ポートとして機能する出口停止接合部に接続されている、装置。
  22. 【請求項２２】 前記移動フィルムと前記表面との間に位置するスペーサー
    をさらに備える、請求項２１に記載の装置。
  23. 【請求項２３】 方法であって、以下の工程： レーザー捕獲顕微解剖のための多段階流体デバイスを提供する工程であって、
    該多段階流体デバイスは、ｉ）サンプルの一部が接着する移動フィルム、および
    ｉｉ）流体体積を規定するために、該移動フィルムから離れている表面であって
    、該表面は、反応緩衝液のための出口ポートとして機能する出口停止接合部に接
    続される表面、を包含する、工程； 該サンプルの一部を該反応緩衝液と接触させる工程；および、次いで 該流体体積から該反応緩衝液を除去する工程、 を包含する、方法。
  24. 【請求項２４】 前記除去する工程が、前記流体体積から前記反応緩衝液を
    除去するために前記多段階流体デバイスを遠心分離する工程を包含する、請求項
    ２３に記載の方法。
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