JP2002519391A - 痛みを処置するための、プロテインキナーゼｃイプシロンの阻害剤の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 痛みの知覚、特に痛覚過敏における、プロテインキナーゼＣのεイソ酵素（“ＰＫＣε”）の役割、ＰＫＣεの阻害剤の投与を介した痛みを弱める方法、痛みを調節する化合物の固定法、痛みの処置のための薬剤の製造におけるＰＫＣεの阻害剤の使用、並びにＰＫＣεの阻害剤及びＰＫＣに依存していない鎮痛剤を含んで成る医薬組成物を開示する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 関連出願の相互参照 この出願は、１９９８年７月６日提出の米国仮出願番号第６０／０９１，７５
５号、及び１９９８年１０月９日提出の、米国仮出願番号第６０／１０３，７６
３号の一部継続出願である。

【０００２】 序文 背景 痛みを経験する者、並びにそれらの家族、共同体及び雇用者にとって、痛みは
かなり不自由なことであり−それは深刻な生理的、感情的、社会的及び経済的負
担である。米国だけで、２００万以上の人々が、時に慢性的な痛みによって仕事
ができないので（T.M.Jessell & D.D.Kelly, Pain and Analgesia in Principle
s of Neural Science, 3^rd edition (E.R.Kandel, J.H.Schwartz, T.M.Jessell,
ed., (1991)）、これらの苦しみに耐える人々の数及び実在の数は極めて多い。

【０００３】 不幸なことに、痛みのための現在の処置は部分的にのみ有効であり、そして多
くが衰弱又は危険な副作用をも招くことがある。例えば、非ステロイド性抗炎症
薬（“ＮＳＡＩＤ”）、例えばアスピリン、イブプロフェン及びインドメタシン
は、炎症性の痛みに対して適度に有効であるが、それらは腎毒素でもあり、そし
て多い投与量は、胃腸の刺激、潰瘍形成、出血及び錯乱を引き起こす傾向がある
。オピオイドで処置される患者は、しばしば錯乱を経験し、そして長期間のオピ
オイドの使用は、耐性及び依存性に結びつく。局所麻酔薬、例えばライドカイン
及びミキセリチン（ｍｉｘｅｌｉｔｉｎｅ）は同時に、痛みを阻害し、そして正
常な感覚の欠損を招く。従って、痛みのための、安全及び有効な処置の必要性が
存在する。

【０００４】 痛みの分子的な基礎の高まった理解は、痛みの薬剤の開発を促進するだろう。
痛みが特に挑戦的な主題であるのは、それが神経系によって環境から受け、そし
て伝達され、そして翻訳されるシグナルに基づいた知覚であるためである。有害
な刺激、例えば熱及び接触は、皮膚の特殊化した感覚受容体に、シグナルを中枢
神経系（“ＣＮＳ”）に送らせるように働く。この過程は侵害受容と呼ばれ、そ
して、それを媒介する末梢神経系は侵害受容体である。侵害受容体由来のシグナ
ル、並びに前記ＣＮＳによるそのシグナルの抽象及び同化の強度に依存して、人
は有害な刺激を痛みとして経験することがあり、あるいは経験しないことがある
。

【０００５】 痛みは愉快なことではないが、それは非常に重要であり−それが無ければ、我
々は多くの周囲にある危険に気付かないであろう。我々の痛みの知覚は、刺激の
強度に正確に対応し、痛みはその予期される保護機能を務める。しかしながら、
組織の損傷のある型は、痛覚過敏又は前侵害受容（ｐｒｏｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏ
ｎ）として知られる現象をもたらし、ここで比較的に無害の刺激が激しい痛みと
して知覚されるのは、人の痛みのしきい値が弱められたためである。炎症及び神
経の損傷は、共に痛覚過敏を誘導することがある。従って、炎症性の症状、例え
ば日焼け、変形性関節症、大腸炎、心臓炎、皮膚炎、筋炎、神経炎、膠原血管病
（関節性リウマチ及び狼瘡を含む）などで苦しむ人は、しばしば痛みの増強した
感覚を経験する。同様に、外傷、手術、切断、膿瘍、灼熱痛、膠原血管病、脱髄
病、三叉神経病、ガン、慢性アルコール中毒症、発作、視床病症候群、糖尿病、
ヘルペス感染症、後天性免疫不全症候群（“ＡＩＤＳ（エイズ）”）、毒素及び
化学療法は、過剰な痛みをもたらす神経の損傷を引き起こす。見たところ、痛覚
過敏の低下した痛みのしきい値の特徴は、炎症に隣接する侵害受容体又は損傷し
た神経が、有害な刺激に応答する方法の変化によるものである。侵害受容体が外
部のシグナルを、正常及び痛覚過敏の症状のもと変換する機構が更に理解される
ならば、中断した場合に、痛みのしきい値の低下を阻害し、そしてそれによって
経験する痛みの程度を弱めることができる、痛覚過敏に独特の方法を同定するこ
とが可能であるかもしれない。その様な慢性的な痛みの処置が、感覚性輸入ニュ
ーロンのレベルで作用するので、それはＣＮＳに作用する薬剤と関連する問題を
回避するだろう。前記の処置が、侵害受容体に特異的な伝達経路を無力化し、そ
して／あるいは他のシグナルの媒介に関与しないならば、処置によって誘導され
る副作用の可能性は低いであろう。本発明は、その様な、痛みを緩和する方法を
提供する。

【０００６】 本発明の要約 本発明は、有効量の、プロテインキナーゼＣのεイソ酵素（“ＰＫＣε”）の
阻害剤を、それを必要とする対象者に投与することを含んで成る、痛みを軽減す
る方法である。本発明の第２の観点は、痛覚過敏を低下させるための、ＰＫＣε
阻害剤の使用であり、好ましくは侵害受容を害することを伴わない。ＰＫＣεに
とって選択的である阻害剤が好ましく、そして前記阻害剤の局所投与が好ましい
。本発明の第３の観点は、ＰＫＣεの活性を調節する試験化合物を選択し、そし
て痛みが調節されるかどうかを決定するために、対象者に前記試験化合物を投与
することを含んで成る、痛みを調節する化合物の同定方法である。本発明の第４
の観点は、ＰＫＣεの阻害剤及びＰＫＣεの阻害剤ではない鎮痛剤を含んで成る
医薬組成物である。本発明の追加の観点は、ＰＫＣεの調節因子、例えばＰＫＣ
εの阻害剤の、薬剤の製造における使用を含む。その様な薬剤は、痛みの処置に
使用することができる。本発明は、神経病性又は炎症性の症状によって起こる、
急性又は慢性の痛みを有する対象者の処置に非常に適している。

【０００７】 具体的な態様の記載 プロテインキナーゼＣ（“ＰＫＣ”）は、多くのシグナル伝達経路の中央に位
置する、リン脂質依存の、セリン−スレオニンキナーゼの多重遺伝子族である。
分子クローニングの研究は、ＰＫＣファミリーの１０個のメンバーを同定した。
これらファミリーのメンバーは、イソ酵素と呼ばれ、９つの異なる遺伝子をコー
ドする。前記の１０個のイソ酵素は、α、βＩ、βII、γ、δ、ζ、η、ι／λ
及びθイソ型として表される（Y.Nishizuka, Science 258, 607-614 (1992) ; L
.A.Selbie, C.Schmitz-Peiffer, Y.Sheng, T.J.Biden, J. Biol. Chem. 268, 24
296-24302 (1993)。配列の相同性及び生化学的な特性に基づき、前記のＰＫＣ遺
伝子ファミリーは、３つの群に分けられる：（ｉ）“従来”のＰＫＣ、α、βＩ
、βII及びγイソ酵素（カルシウム、ジアシルグリセロール及びホルボールエス
テルによって制御される）；（ii）“新規”のＰＫＣ、δ、ε、θ及びηイソ酵
素（カルシウム依存性であるが、ジアシルグリセロール及びホルボールエステル
感受性である）；並びに（iii ）“非定型（ａｔｙｐｉｃａｌ）”のＰＫＣ、ζ
及びι／λイソ酵素（カルシウム、ジアシルグリセロール及びホルボール１２ミ
リステート１３アセテートに感受性である）。更に、２つの関連するリン脂質依
存性キナーゼ、ＰＫＣμ及びプロテインキナーゼＤは、それらの調節ドメインに
おいて、新規のＰＫＣに対する配列の相同性を共にし、そして新規のサブグルー
プを構成することがある（F.-J.Johannes, J.Prestle, S.Eis, P.Oberhagemann,
K.Pfizenmaiter, Biol. Chem. 269, 6140-6148 (1994) ; A.M.Valverde, J.Sin
nett-Smith, J.Van Lint, E.Rozengurt, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, 8572
-8576 (1994)）。

【０００８】 ＰＫＣファミリーのタンパク質が、細胞の増強及び分化における中心的な役割
を果たすことは、非常に確立されている。ＰＫＣは、ペプチドホルモン、増殖因
子、神経伝達物質及び発ガンプロモーターの作用を、第２（下流、細胞内）メッ
センジャーとして、これらのシグナリング分子のために働くことを媒介する（Y.
Nishizuka, Science 233, 305-312 (1986) ; Y.Takai, K.Kaibuchi, T.Tsuda, M
.Hoshijima, J. Cell. Biochem. 29, 143-155 (1985)）。特定のシグナルを特異
的な細胞型で変換する、ＰＫＣのイソ酵素の同一性は、今でも決定され続けてい
る。α、βＩ、βII、γ、δ、ε及びζイソ酵素は非神経細胞の分化に関係して
いる（E.Berra, et al., Cell 74. 555-563 (1993) ; J.Goodnight, H.Mischak,
J.F.Mushinski, Adv. Cancer Res. 64. 159-209 (1994) ; J.R.Gruber, S.Ohno
, R.M.Niles, J.Biol. Chem. 267, 13356-13360 (1992) ; D.E.Macfarlane, L.M
anzel, J. Biol. Chem. 269, 4327-4331 (1994) ; C.T.Powell et al., Proc. N
atl. Acad. Sci. USA 89, 147-151 (1992)）。近年の研究は、ＰＫＣのεイソ酵
素（“ＰＫＣε”）が、神経成長因子（“ＮＧＦ”）によって活性化され、そし
てＮＧＦ誘導の神経突起成長を媒介することを示しており、神経分化におけるＰ
ＫＣεの役割を示すとして解釈された（B.Hundle, et al., J. Biol. Chem. 272
, 15028-15035 (1997)）。

【０００９】 本発明の根底にある発見の鍵の１つは、ＰＫＣの具体的なイソ酵素、ＰＫＣε
が、一次輸入侵害受容体において、痛覚過敏のある型を媒介するために働くこと
の証明である。特に、機能的ＰＫＣεタンパク質を欠損しているマウス（“ＰＫ
Ｃε−変異マウス”）は、酢酸注射に対する応答の低下並びに機械的及び熱的刺
激に応じる、エピネフリン誘導の痛覚過敏の減少を示す。ＰＫＣεを選択的に阻
害するペプチドの投与もまた、エピネフリン誘導の痛覚過敏、カラギーナン誘導
の痛覚過敏並びに化学療法及び糖尿病に関する痛覚過敏を、機械的刺激に応じて
低下させる。エピネフリン誘導の痛覚過敏の程度が、非選択的ＰＫＣε阻害剤で
処置したラット及びＰＫＣεの選択阻害剤で処置したものにおいて類似であった
のは、ＰＫＣεがおそらく、エピネフリン誘導の痛覚過敏を媒介する、唯一のＰ
ＫＣのイソ酵素であるためである。同様に、糖尿病に関連する痛覚過敏の程度が
、非選択的ＰＫＣεの阻害剤で処置したラットにおいて、ＰＫＣεの選択阻害剤
で処置したものよりわずかに小さいのは、ＰＫＣεが主要であるようだが、おそ
らく糖尿病に関連する痛覚過敏を媒介する唯一のイソ酵素ではないためである。

【００１０】 ＰＫＣεが、痛覚過敏のある型を媒介するという発見は予想されていなかった
。ＰＫＣのタンパク質ファミリーが、糖尿病性神経病的痛覚過敏（S.C.Ahlgren,
J.D.Levine, J.Neurophys. 72, 684-692 (1994)）並びにブラジキニン誘導の、
侵害受容体の活性化及び感作（S.M.McGuirk, A.C.Dolphin, Neuroscience 49, 1
17-28 (1992) ; L.M.Boland, A.C.Allen, R.Dingledine, J. Neurosci. 11, 114
0-9 (1991)）に寄与する証拠が存在しているが、これらの過程における、個々の
ＰＫＣイソ酵素の役割は調査されておらず、そして予測されていなかった。

【００１１】 本発明の特に有用な観点は、ＰＫＣεの阻害剤が、侵害受容に影響するか、又
は他の感覚の知覚を危険にさらすこと無く、痛覚過敏を減少させることができる
という事実である。従って、ＰＫＣε阻害剤を受ける人は、無害な刺激から生じ
る過剰な痛みが除去され、同時に、激しい刺激に応じて、痛みを更に感じる様に
なるだろう。本発明のこの観点は、機械的及び熱的刺激を用いる実験に基づき、
ＰＫＣεがエピネフリン誘導の痛覚過敏及びカラギーナン誘導の痛覚過敏を媒介
するが、侵害受容（すなわち、基礎的な応答）に関与していないことを示してい
る。酢酸を注射したＰＫＣε変異マウスにおいて、野生型マウスとの比較で見ら
れる減じた苦しみは、炎症性の痛覚過敏における役割を有するが、侵害受容では
有さないＰＫＣεと一致している。酢酸注射が痛覚過敏をもたらす炎症を起こす
という理論は、抗炎症薬（これらの場合ではＮＳＡＩＤ）が、酢酸の暴露によっ
て誘導される苦しみの程度を阻害することを示すデータによって支持されている
（C.J.Niemegger, J.A.Van Bruggen and P.A.Janssen, Arzneimittelforschung
25, 1505-1509 (1975) ; R. Vinegar, J.F.Truax and J.L.Selph, Eur. J. Phar
macol. 37, 23-30 (1976) ; R.Bjorkman, Acta Anaesthesiol. Scand. Supp. 10
3, 1-44 (1995)）。ＰＫＣεの選択的阻害剤の投与が、カラギーナン、よく確立
された炎症因子によって起こる痛覚過敏以外のものをほぼ排除するという事実は
、炎症性の痛覚過敏の媒介において、更にＰＫＣεの役割を固定する。

【００１２】 上述した様に、本発明は痛みを和らげ、将来の痛みを予防し、そして／又は有
害の刺激に対する、高まった感度を阻害する、ＰＫＣεの阻害剤の投与に関する
。ＰＫＣεイソ酵素を阻害するいずれの分子も、痛みを和らげるのに十分である
が、前記のＰＫＣεイソ酵素を選択的に阻害する分子が好ましいのは、ＰＫＣε
変異マウスで示す様に、ＰＫＣεの除去が重大な発育の時の異常又は深刻な副作
用を引き起こさないためである。ＰＫＣε以外のＰＫＣイソ酵素を阻害すること
もできる分子が、それらのイソ酵素によって行われる様々な機能を阻害するので
、その様なＰＫＣεの非選択阻害剤は、痛みを軽減させるが、多くの望まない副
作用を持ちやすい。

【００１３】 本発明において使用することができる、多くの知られているＰＫＣεの阻害剤
が存在する。例えば、米国特許第５，７８３，４０５号は、ＰＫＣイソ酵素を阻
害する多くのペプチドを記載している。これらのうち、εＶ１−１、εＶ−２、
εＶ１−３、εＶ１−４、εＶ１−５及びεＶ１−６ペプチドは、ＰＫＣεにと
って選択的であり、そして好ましいペプチド阻害剤である。ペプチドεＶ１−２
は、特に好ましい阻害剤ペプチドである。ＰＫＣの小分子阻害剤は、米国特許第
５，１４１，９５７号、第５，２０４，３７０号、第５，２１６，０１４号、第
５，２７０，３１０号、第５，２９２，７３７号、第５，３４４，８４１号、第
５，３６０，８１８号及び第５，４３２，１９８号に記載されている。これらの
分子は、以下のクラス：Ｎ，Ｎ’−ビス−（スルホンアミド）−２−アミノ−４
−イミノナフタレン−１−オン；Ｎ，Ｎ’−ビス−（アミド）−２−アミノ−４
−イミノナフタレン−１−オン；ビシナル置換炭素環；１，３−ジオキサン誘導
体；１，４−ビス−（アミノ−ヒドロキシアルキルアミノ）−アントラキノン；
フロ（ｆｕｒｏ）−クーマリンスルホンアミド；ビス−（ヒドロキシアルキルア
ミノ）−アントラキノン；及びＮ−アミノアルキルアミドに属する。それらの比
較的な投与しやすさにより（例えば、経皮輸送又は摂取は、小分子にとって可能
であるが、ペプチドは可能ではない）、ＰＫＣεの小分子阻害剤はペプチド阻害
剤以上に好ましい。前述の特許の関連部分は、引用によって本明細書に組入れら
れる。

【００１４】 ＰＫＣεの追加の阻害剤は、ＰＫＣεの活性化、細胞内転移、細胞内受容体（
例えば、ＲＡＣＫ）への結合又は触媒活性を測定するアッセイを用いて同定する
ことができる。伝統的に、ＰＫＣファミリーのメンバーのキナーゼ活性は、少な
くとも部分的に精製したＰＫＣを用いて、放射性ＡＴＰをリン酸供与体として、
及びヒストンタンパク質又は短かいペプチドを基質として有する再構成したリン
脂質環境でアッセイされてきた（T.Kitano, M.Go, U.Kikkawa, Y.Nishizuka, Me
th. Enzymol. 124, 349-352 (1986) ; R.O.Messing, P.J.Peterson, C.J.Henric
h, J. Biol. Chem. 266, 23428-23432 (1991) ）。近年の改良は、プロテインキ
ナーゼ活性を生理学的濃度で測定し、そして高処理量スクリーニングにおいて自
動化し、そして／あるいは使用することができる、すばやい、高度に感度のある
化学発光アッセイ（C.Lehel, S.Daniel-Issakani, M.Brasseur, B.Strulovici,
Anal. Biochem. 244, 340-346 (1997)）並びに単離した膜中のＰＫＣ、及びＭＡ
ＲＣＫＳタンパク質由来の選択性ペプチド基質を用いるアッセイを含む（B.R.Ch
akravarthy, A.Bussey, J.F.Whitfield, M.Sikorska, R.E.Williams, J.P.Durki
n, Anal. Biochem. 196, 144-150 (1991) ）。ＰＫＣεの細胞内転移に影響を与
える阻害剤は、アッセイによって同定することができ、ここでＰＫＣεの細胞内
転移は分画（R.O.Messing, P.J.Peterson, C.J.Henrich, J. Biol. Chem. 266,
23428-23432 (1991)）又は免疫組織化学（米国特許第５，７８３，４０５号、米
国特許出願０８／６８６，７９６号）によって決定される。ＰＫＣεの阻害剤を
同定するために、前記アッセイはＰＫＣεを用いて行うべきである。その様な阻
害剤の選択性は、ＰＫＣεへの前記阻害剤の効果を、他のＰＫＣイソ酵素へのそ
の作用と比較することで決定することができる。前述の特許及び刊行物の関連部
分は、引用によって本明細書に組入れられる。

【００１５】 ＰＫＣεは細胞内タンパク質であるので、本発明の好ましい態様は、細胞膜を
通過することができる、医薬として許容される阻害剤調製物を含む。小さい無極
性分子は、しばしば膜透過性である。他の分子の膜透過性は、当業者に知られて
いる様々な方法によって増強することができ、これは、それらを低張液中に溶解
させ、それらを輸送タンパク質に結合させ、そしてそれらはミセル中に詰め込む
ことを含む。

【００１６】 ＰＫＣε阻害剤は、１時間ごとに、１日当たり複数回、毎日、前記の人が痛み
を経験するたびに又は前記の人の医者が適当であると思うときに投与することが
できる。好ましくは、投与の間隔は８〜２４時の範囲内であるだろう。患者の痛
みの苦しさを、ＰＫＣε阻害剤の処置に適当な間隔を決定する際に考慮すること
ができる。ＰＫＣε阻害剤の処置は、数日、１ヶ月、数ヶ月、１年、数年又は前
記患者の人生の間、その期間にわたって続けることができる。あるいは、ＰＫＣ
ε阻害剤は、痛みが一時的であることが予想され、そして、それが再発しないこ
とを提供する、前述の理論によってのみ投与することができる。ＰＫＣε阻害剤
は、患者の身体において痛みを軽減するのに十分な量で投与すべきである。当業
者は、ＰＫＣε阻害剤の増大する投与量が、前記患者が痛みの軽減を経験するま
で投与されるべきであり、そしてより多くの投与量がより大きな痛みの改善に作
用しやすいことを理解するだろう。投与は、前記患者が、彼等の経験する痛みの
程度に従い、ＰＫＣε阻害剤の将来の投与量を調節することができる様に計画す
ることができる。

【００１７】 阻害剤の投与量は多くの要因に従い変化し、これは前記阻害剤の性質及び投与
形態を含む。εＰＫＣ−ｖ１ペプチドにとって、１５０μｇ／mlの細胞内濃度が
、ＰＫＣεの転移及びＰＫＣεの活性化の下流作用を阻害した（米国特許第５，
７８３，４０５号）。１μｇ／kg〜１００mg／kg体重、好ましくは１μｇ／kg〜
１mg／kg及び最も好ましくは１０μｇ／kg〜１mg／kgの範囲にある一日量が、Ｎ
，Ｎ’−ビス−（スルホンアミド）−２−アミノ−４−イミノナフタレン−１−
オン又はＮ，Ｎ’−ビス−（アミド）−２−アミノ−４−イミノナフタレン−１
−オンであるＰＫＣ阻害剤のために考慮される。１μｇ／kg〜１００mg／kg体重
、好ましくは１μｇ／kg〜４０mg／kg及び最も好ましくは１０μｇ／kg〜２０mg
／kgの範囲にある一日量が、ビシナル置換炭素環であるＰＫＣ阻害剤のために考
慮される。５〜４００mg／kg体重、好ましくは１０〜２００mg／kg及び最も好ま
しくは１０〜５０mg／kgの範囲にある一日量が、１，４−ビス−（アミノ−ヒド
ロキシアルキルアミノ）−アントラキノン、ビス−（ヒドロキシアルキルアミノ
）−アントラキノン、又はＮ−アミノアルキルアミドであるＰＫＣ阻害剤のため
に考慮される。０．１〜４０mg／kg体重、好ましくは１〜２０mg／kgの範囲にあ
る一日量が、１，３−ジオキサン誘導体であるＰＫＣ阻害剤のために考慮される
。１〜１００mg／kg体重の範囲にある一日量が、フロクマリンスルホンアミドで
あるＰＫＣ阻害剤のために考慮される。

【００１８】 ＰＫＣε阻害剤は、炎症又は末梢神経の損傷の部位の近くに、局所的に投与す
ることができる。その様な局所（ｌｏｃａｌ）投与は、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）
であってもよく、あるいは、これは皮内又は皮下注射による。ＰＫＣε阻害剤の
全身系の投与は、本発明の別の態様を表す。経口及び静脈内注射は、全身系投与
の好ましい型である。ＰＫＣεが、末梢の侵害受容体レベルで痛みを調節し、そ
して脳では他の機能を行うことがあるので、ＰＫＣε阻害剤の局所投与は全身系
の投与よりも更に好ましく、何故ならば、ＰＫＣε阻害剤の局所投与は、遠くの
部位における、ＰＫＣε活性に対する最小の有害な効果によって、近くにある痛
みを有効に処置すると思われるからである。この発明の方法は、通常の哺乳類、
及び特にヒトを処置するのに有用である。

【００１９】 本発明の好ましい態様は、ＰＫＣεの阻害剤の、医薬として許容される製剤の
投与である。“医薬として許容される製剤”は、前記ＰＫＣε阻害剤の投与に適
しており、ある意味では所望の結果を与え、そして更に、患者に対する潜在的な
害が、その患者に対する潜在的な利益以上であることを医者に確信させるのに十
分な、有害な副作用を生まないものを含んで成る。注射可能な製剤にとって基本
的な成分は、水の賦形剤である。使用する水は、注射のための滅菌水のための、
ＵＳＰスタンダードに合う純度のものであるだろう。有用な水性賦形剤は、塩化
ナトリウム（ＮａＣｌ）溶液、リンガー溶液、ＮａＣｌ／デキストロース溶液な
どを含む。水混和性賦形剤もまた、前記ＰＫＣε阻害剤の完全な溶解に作用する
のに有用である。抗菌剤、緩衝液及び抗酸化剤が、必要性に依存して有用である
。

【００２０】 この発明のＰＫＣε阻害剤組成物の製造において、人は、公知の医薬の情報源
、例えばRemington : The Science and Practice of Pharmacy, 19^th ed., (Mac
k Publishing, 1995）の標準的な推奨に従うことができる。一般に、この発明の
医薬組成物は粉末又は水溶液を基にし、前記ＰＫＣε阻害剤の溶解度、前記組成
物の等張性、化学的安定性及び微生物の増殖の抑制力を促進する補形薬を加えた
ものである。経口投与にとって、前記ＰＫＣε阻害剤を、消化剤による分解から
保護する物質を含むことが好ましい。

【００２１】 本発明の好ましい態様は、炎症性の痛みを有する患者の処置である。その様な
炎症性の痛みは、急性又は慢性であってもよく、そして限定しないが、日焼け、
関節性リウマチ、変形性関節症、大腸炎、心臓炎、皮膚炎、筋炎、神経炎及び膠
原血管病を含む炎症を特徴とする、かなり多くの症状に起因することがある。本
発明のこの態様は、ＰＫＣε阻害剤の投与が、前記炎症剤カラギーナンへの暴露
から生じる、急性又は慢性、その両方の痛覚過敏を有意に減少させることを示す
実験に基づいている。ＰＫＣε阻害剤が、前記炎症剤（これらの実験ではカラギ
ーナン）の後に長期間投与される場合に、効果的に慢性的な痛覚過敏を減少させ
るという事実は、炎症性の疾患に関する、長い間苦しんでいる痛みを有する人、
例えば上文の者が、ＰＫＣεの阻害剤の投与の後に、少なくとも部分的な痛みの
軽減を経験するはずであることを示す。更に、炎症の起きる前、起きている間、
起きた後、すぐに対象者にＰＫＣε阻害剤を投与することは、前記対象者が別に
経験するであろう急性及び慢性、その両方の痛覚過敏を改善することができる。

【００２２】 本発明の別の好ましい態様は、神経病性の痛みを有する患者の処置である。そ
の様な患者は、神経根病、単神経病、多発性単神経病、多発神経病又はプレキソ
パシー（ｐｌｅｘｏｐａｔｈｙ）として分類される神経病を持つことがある。こ
れらの分類における疾患は、様々な神経損傷の症状又は方法によって起こること
があり、これらは、限定しないが外傷、発作、脱髄病、膿瘍、手術、切断、神経
の炎症状疾患、灼熱痛、糖尿病、膠原血管病、三叉神経病、関節性リウマチ、毒
素、ガン（直接的又は間接的（例えば、腫瘍随伴性）に神経の損傷を引き起こす
もの）、慢性アルコール中毒症、ヘルペス感染症、エイズ、及び化学療法を含ん
でいる。神経の損傷が起こす痛覚過敏は、末梢又はＣＮＳ神経に存在しているこ
とがある。本発明のこの態様は、ＰＫＣε阻害剤が、糖尿病、化学療法又は外傷
性の神経損傷による痛覚過敏を有意に減少させることを示す実験に基づいている
。

【００２３】 ＰＫＣεの阻害剤が、感覚性輸入ニューロン（侵害受容体又は一次輸入ニュー
ロンとしても知られている）におけるＰＫＣεの機能を妨害することで痛みを和
らげることが信じられている。これらのニューロン、小径及び中径の脊髄神経節
ニューロン（“ＤＲＧニューロン”）の部分集合は、真皮から延びており、ここ
でそれらの末梢性の末端は後角の浅葉に位置し、ここでそれらはＣＮＳニューロ
ンとシナプスを形成する。感覚性輸入ニューロンにおいて、ＰＫＣεは有害な刺
激又は痛覚過敏誘導因子によって開始される応答を変換する二次的メッセンジャ
ーであることが信じられている。

【００２４】 本発明に存在している観察のいくつかは、痛覚過敏をマウス又はラットの後脚
への、エピネフリンの皮内注射によって誘導した実験で作られた。エピネフリン
誘導の痛覚過敏は、自然に発生する痛覚過敏の研究のためのモデル系であり、そ
して、この系の臨床的な関連は、エピネフリンの局所投与が神経病の痛みを有す
る患者の症状を悪化させ（B.Choi, M.C.Rowbotham, Pain 69, 55-63 (1997) ）
、そしてエピネフリンが外見上の虚血がないときに狭心症の痛みを引き起こす（
B.Eriksson et al., Am. J. Cardiol. 75, 241-245 (1995) ）という事実によっ
て支持されている。エピネフリンは、投与量依存性の機械的及び熱的痛覚過敏を
、皮膚の知覚神経末端において引き起こし、これは、これらの神経末端上のβ−
アドレナリン受容体に結合することによるものである。エピネフリンと結合した
β−アドレナリン受容体は順番に、２つの独立した第２メッセンジャー経路、Ｐ
ＫＣ経路及びサイクリックＡＭＰ（“ｃＡＭＰ”）／プロテインキナーゼＡ（“
ＰＫＡ”）経路を活性化する。エピネフリン誘導の痛覚過敏は、プロスタグラン
ジンによって媒介されず、エピネフリン及びプロスタグランジンＥ₂ （“ＰＧＥ ₂ ”）は、その両方ともテトロドトキシン耐性ナトリウム電流（ＴＴＸ−ＲＩ_Na ）を増強し、このことは炎症メディエーター誘導の痛覚過敏及び侵害受容体の感
作において重要である。ＰＫＣ阻害剤が、エピネフリンの、その電流への効果を
低下させるので、ＴＴＸ−ＲＩ_NaはＰＫＣ、及びＰＫＡの標的となりうる。

【００２５】 エピネフリンの、一次感覚性輸入ニューロンへの直接的な働きは、間接的にこ
れらのニューロンを感作する他の痛覚過敏誘導因子と反対である。例えば、ブラ
ジキニン及び／ノルエピネフリンは、侵害受容体に働くプロスタグランジンを、
媒介細胞に放出させ、そして侵害受容体にシグナルを、交感神経のニューロンに
送らせることで侵害受容体に作用する（N.Y.Andreev, N.Dimitrieva, M.Koltzen
burg, S.B.McMahon, Pain 63, 109-1105 (1995) ; S.H.Ferreira, et al., Brit
. J. Pharmacol, 121, 883-888 (1997) ; Y.O.Taiwo, P.H.Heller, J.D.Levine,
NeuroScience 39, 523-531 (1990)）。プロスタグランジン合成の阻害も、後脚
の交換神経切除（後脚の交感神経の神経支配の除去）もまた、エピネフリンの痛
覚過敏を誘導する能力に対して、全く効果を持たないという事実は、エピネフリ
ンの働きの単独の形態が直接的であることを示す。一次輸入侵害受容体への、エ
ピネフリンの直接的な作用は更に、それが、侵害受容のシグナリングに関するＰ
ＫＣイソ酵素の寄与を調査するのに良いモデルであるという証拠を提供する。

【００２６】 本発明の別の観点は、試験化合物として、ＰＫＣεの活性を調節する化合物を
選択し、そして痛みが調節されるかどうかを決定するために、対象者に前記試験
化合物を投与することによって、痛みを調節する化合物を同定する方法である。
好ましくは、前記化合物はＰＫＣεの活性を阻害し、そして前記対象者は、痛み
の研究及び／又は開発において通常使用する動物であるだろう。ＰＫＣεの活性
を阻害し、増強し、又は調節する試験化合物の能力は、ＰＫＣεの機能を測定す
る適当なアッセイで決定することができる。例えば、応答、例えばその活性、例
えば酵素活性、又はそのリガンド、アダプター分子又は基質に結合するＰＫＣε
の能力は、ｉｎ ｖｉｔｒｏのアッセイで決定することができる。細胞のアッセ
イは、第２メッセンジャーの調節、細胞の代謝における変化、又は酵素活性への
作用を監視することで発展することができる。これらのアッセイは、これらの目
的のために発展した従来技術を用いて行ってもよい。最終的に、ＰＫＣε機能を
阻害し、増強し、又は調節する試験化合物の能力は、適当な動物モデルで、ｉｎ
ｖｉｖｏで測定されるだろう。

【００２７】 本発明の好ましい態様は、ＰＫＣεの阻害剤を、１又は複数の追加の、痛みを
軽減させる薬剤と組合わせた組成物、及びその様な組成物の投与方法を含む。個
々の、痛みの薬物療法が、しばしば、部分的にのみ有効な痛みの軽減を提供する
のは、それが多数の中から、ただ１つの痛みを変換する経路を妨げるためである
。例えば、本明細書に提示した実験は、ＰＫＣε及びＰＫＡが共に、エピネフリ
ン誘導の第２メッセンジャーであることを示す。痛覚過敏のこの型と関連する痛
みは、ＰＫＣε及びＰＫＡの両方を阻害することで、ＰＫＣεを単独で阻害する
よりも更に効果的に扱うことができる。あるいは、ＰＫＣεの阻害剤は、痛みを
知覚する過程において、異なる時点で働く、痛みを軽減させる（鎮痛性）薬剤と
組合わせて投与することができる。ＰＫＣε阻害剤は、有害な刺激に対する侵害
受容の応答を変換することで、痛みを最小化することができる。鎮痛薬の１つの
クラス、例えばＮＳＡＩＤは、前記侵害受容体によって検出される刺激の化学的
メッセンジャーをダウンレギュレートし、そして薬剤の別のクラス、例えばオピ
オイドは、ＣＮＳにおける侵害受容性の情報処理を変更する。他の鎮痛薬は局所
麻酔薬、鎮痙剤、及び抗うつ薬である。１又は複数の薬剤のクラスを、ＰＫＣε
阻害剤と共に投与することは、更に効果的な痛みの改善を提供することができる
。ＮＳＡＩＤは、本発明の組成物の好ましい構成成分である。好ましいＮＳＡＩ
Ｄは、アスピリン、アセトアミノフェン、イブプロフェン、及びインドメタシン
である。

【００２８】 “痛みを軽減する”の用語を本明細書で使用する場合、対象者が知覚する痛み
のレベルが、介入が無ければ前記対象者が知覚するであろう痛みのレベルと比較
して低下する方法を含んで成る。前記対象者が人の場合、前記の人が知覚する痛
みのレベルは、彼又は彼女に、前記の痛みを記述するように又は他の痛ましい実
験とそれを比較するように頼むことで評価することができる。あるいは、痛みの
レベルは、痛みに対する対象者の身体の応答、例えばストレスに関する要因の解
放あるいは末梢神経系又はＣＮＳにおける痛みが誘導する神経の活動を測定する
ことで較正することができる。ある者はまた、よく特徴づけられた鎮痛性の程度
を測定することで、痛みのレベルを較正することができ、これは人に、痛みが存
在していないことを報告させること、又は対象者に、痛みの症状を示すのを止め
させることを必要とする。痛みを軽減することは、対象者が、与えられた刺激を
痛みとして経験するときのしきい値の増大に起因することがある。それは、痛覚
過敏の阻害、有害な刺激に対して高まった感受性に起因することがあり、そして
その様な阻害は、侵害受容、前記対象者の、有害な刺激に対する正常な感受性を
損うことなく起こりうる。

【００２９】 “それを必要とする対象者”は動物又は人を含んで成り、好ましくは近い将来
に痛みを経験することが予想される人である。その様な動物又は人は、目下痛み
をもたらしており、そして痛みをもたらし続けるであろう、進行中の症状を持っ
ていてもよく、あるいは、前記の動物又は人は、通常、痛ましい結合を有する進
行又は発生に耐えたが、耐えているか、又は耐えるだろう。慢性的な痛ましい症
状、例えば糖尿病の神経病性痛覚過敏及び膠原血管病は、前者の型の例であり；
歯科の作業、特に炎症又は神経の損傷の領域、及び毒素の暴露（化学療法剤への
暴露を含む）は、後者の型の例である。

【００３０】 “有効量”は、痛みの軽減をもたらす量を含んで成る。その様な有効量は、痛
みに対する対象者の標準の感受性、その身長、体重、年齢、及び健康、痛みのも
と、ＰＫＣεの阻害剤の投与の形式、特に投与した阻害剤、並びに他の因子に依
存して、対象者によって変化するだろう。その結果、特定の対象者のために、特
定の環境の集合のもと、経験的に有効量を決定することが賢明である。

【００３１】 “プロテインキナーゼＣのεイソ酵素（ＰＫＣε）の阻害剤”は：（１）ＰＫ
Ｃεの発現、修飾、制御又は活性化、（２）ＰＫＣεの１又は複数の正常な機能
、あるいは（３）ＰＫＣε依存の経路における、ＰＫＣεの下流で働く分子の発
現、修飾、制御又は活性化、に関わる分子又は分子群を含んで成る。ＰＫＣεの
正常な機能、活性化に依存するものの多くが、基質のリン酸化（すなわち、ＰＫ
Ｃεの触媒活性）、自己リン酸化、活性化による一方の細胞内位置から他方への
移動（すなわち細胞内転移）、与えられた位置においてＰＫＣεを固定する、１
又は複数のタンパク質との結合又はそれからの解放を含む。ＰＫＣεの阻害剤は
また、ＰＫＣε他のイソ酵素を阻害することができる。しかしながら、ＰＫＣε
の選択阻害剤は、ＰＫＣの他のイソ酵素が有意に阻害されない濃度で、１又は複
数の、ＰＫＣεの正常な機能を有意に阻害する。阻害剤が“ＰＫＣεに直接的に
働く”のは、阻害剤が静電的又は化学的な相互作用を介してＰＫＣεに結合する
場合である。その様な相互作用は、他の分子によって媒介されてもよく又はされ
なくてもよい。阻害剤が“ＰＫＣεに間接的に働く”のは、その最も即時的な作
用が、ＰＫＣεの発現、活性化又は働きあるいはＰＫＣεの下流への作用に影響
する、ＰＫＣε以外の分子に対する場合である。

【００３２】 化合物又は分子が“ＰＫＣεの活性を調節する”のは、それが（１）ＰＫＣε
の、１又は複数の正常な機能、あるいは（２）ＰＫＣ又は、調節又は酵素的経路
において、ＰＫＣεの下流に働く分子の発現、修飾、制御、活性化又は減成、に
影響する場合である。ＰＫＣεの正常な機能、活性化に依存するその多くが、基
質のリン酸化（すなわち、ＰＫＣεの触媒活性）、自己リン酸化、活性化による
、一方の細胞内位置から他方への移動（すなわち細胞内転移）、及び与えられた
位置においてＰＫＣεを固定化する、１又は複数のタンパク質の結合又は解放、
を含む。

【００３３】 “急性”の痛みと、“慢性”の痛みとの間の差異はタイミングにあり：急性の
痛みは、その様な痛みを導く事象（例えば、炎症又は神経の損傷）の発生後すぐ
に（好ましくは約４８時間以内、更に好ましくは約２４時間以内、最も好ましく
は約１２時間以内）経験する。反対に、慢性の痛みの経験と、その様な痛みを導
く事象の発生との間には、重大な時間のずれがある。その様な時間のずれは、そ
の様な事象の、少なくとも約４８時間後であり、好ましくは、その様な事象の、
少なくとも約９６時間後、更に好ましくはその様な事象の、少なくとも１週間後
である。

【００３４】 “神経病の痛み”は、神経の損傷をもたらす症状又は事象から起こる痛みを含
んで成る。“神経病”は、神経に損傷をもたらす疾患の過程を含んで成る。“灼
熱痛”は、神経の損傷に続く、慢性的な痛みの状態、あるいは関連痛を起こす、
心筋梗塞の様な症状又は事象を表す。“異痛”は人が、常態では無痛の刺激、例
えば優しい接触に対する応答において、痛みを経験する症状を含んで成る。“鎮
痛剤”は、、痛みの軽減をもたらす分子又は分子の組合わせを含んで成る。鎮痛
剤が、ＰＫＣεの阻害以外の作用機構を使用するのは、その作用機構が、ＰＫＣ
ε又はＰＫＣε経路のいずれかの細胞内分子への直接的（静電的又は化学的相互
作用を介する）結合及びそれらの機能の低下に関与しない場合である。

【００３５】 前文の定義において言及した具体的な項目は、本発明の好ましい態様を表す。

【００３６】 例 例１．エピネフリン誘導の痛覚過敏はプロスタグランジン非依存性であり、そ
してβ−アドレナリン受容体、ＰＫＣ、プロテインキナーゼＡ及びμオピオイド
受容体によって媒介される。 図１Ａに示す様に、ラットの後脚の背部表面への、１ng〜１μｇのエピネフリ
ンの皮内注射は、Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅ無痛覚計（Stoelting, Chicago, IL) に
よる、直線的に増大する機械力の適用に応じて、前記ラットが脚を引っ込めるし
きい値における投与量依存性の減少（Ｆ＝９０．７、ｐ＜０．０１）を生んだ。
このエピネフリン誘導の痛覚過敏の、開始までの潜伏期間は短かく−それは、１
μｇのエピネフリン注射から有意に２分後であり、５分でピーク作用に達し（図
２Ａ）、そして約２時間持続した（図２Ｂ）。

【００３７】 エピネフリンが、α−及びβ−アドレナリン受容体の両方（それぞれ、“α−
ＡＲ”及び“β−ＡＲ”）に親和性を有するので、α−ＡＲのエピネフリン誘導
の痛覚過敏に対する寄与は、フェントルアミン（α−ＡＲ拮抗薬）を用いて試験
した。初期の研究は、フェントルアミンの同様の投与量が、正常なラットにおけ
る基礎の脚のしきい値に対する作用を持たないが、有意に、ホルマリン誘導の痛
覚過敏を一変し、そしてロリプラム（ｒｏｌｉｐｒａｍ、４型ホスホジエステラ
ーゼの阻害剤）の能力を阻害し、ＰＧＥ₂ −誘導の痛覚過敏を延長したことを示
した（J.D.Levine et al., Nature 323, 158-160 (1986) ; A.K.Ouseph et al.,
NeuroSci. 64, 769-776 (1995)）。しかしながら、フェントルアミンは、有意
にエピネフリン誘導の痛覚過敏に影響せず（図１Ａ）、このことは、α−ＡＲが
エピネフリンの痛覚過敏を媒介しないことを示す。

【００３８】 エピネフリン誘導の痛覚過敏におけるβ−ＡＲの役割を試験するために、プロ
プラノロール（β−ＡＲ拮抗薬）、及びイソプロテレノール（選択的β−ＡＲ作
用薬）を皮内注射で投与した。イソプロテレノールは、エピネフリン無しで、投
与量依存の痛覚過敏を生んだ（図３）。プロプラノロールは、イソプロテレノー
ルによって生じた痛覚過敏及びエピネフリンによるものの両方を有意に弱めた（
それぞれ図３及び１Ａ）。従って、エピネフリンはβ−ＡＲを活性化することで
、痛覚過敏を生んだ。

【００３９】 ブラジキニン及びノルエピネフリンは、一次輸入ニューロンへの感作効果を持
つプロスタグランジンを、他の細胞に産生させ、そして侵害受容体に影響する交
感神経のニューロンを刺激することで、間接的に痛覚過敏を引き起こすことが知
られている（J.D.Levine et al., Nature 323, 158-160 (1986) ; Y.O.Taiwo, P
.H.Heller, J.D.Levine, Neurosci. 39, 523-531 (1990) ）。エピネフリンもま
た、痛覚過敏を間接的に引き起こすかどうかを試験するために、プロスタグラン
ジン合成を４mg／kgのインドメタシンによる連続処置（ｎ＝８）で阻害し、そし
て交感神経ニューロンの寄与を、交換神経切除で排除した（ｎ＝８）。インドメ
タシン処置も交感神経切除もまた、痛覚過敏を誘導するエピネフリンの能力に対
して、いずれの効果も持たなかった（図１Ｂ）。このことは、エピネフリンが侵
害受容性ＤＲＧニューロンに直接働くことを示している。

【００４０】 ＰＫＣ、プロテインキナーゼＡ（“ＰＫＡ”）及びμオピオイド受容体の、エ
ピネフリン誘導の痛覚過敏の媒介における役割は、Ｒｐ−アデノシン３’、５’
−サイクリック一リン酸（“Ｒｐ−ｃＡＭＰ”）及びＷＩＰＴＩＤＥ（共にＰＫ
Ａの阻害剤；ＳＱ２２５３６（アデニリルシクラーゼ（ＰＫＡによって活性化さ
れる酵素）の阻害剤）；ビスインドリマレイミド(bisindolymaleimide)（“ＢＩ
Ｍ”、ＰＫＣイソ酵素の非選択性選択剤）；並びに〔Ｄ−Ａｌａ² ，Ｎ−Ｍｅ−
Ｐｈｅ⁴ ，Ｇｌｙ−オール〕−エンケファリン（“ＤＡＭＧＯ”、μオピオイド
受容体作用薬）の効果を測定することで評価した。各阻害剤のための投与量は１
μｇであり、但し、ＷＩＰＴＩＤＥは１００ngの投与量で投与した。ＤＡＭＧＯ
は、エピネフリンと一緒に注射し、一方、他の阻害剤は、エピネフリン注射の１
５分前に適用した。表１に示す様に、これらの阻害剤の全てが、有意にエピネフ
リン誘導の痛覚過敏を弱め、このことは、エピネフリン媒介の痛覚過敏が、ＰＫ
Ｃ及びＰＫＡ経路並びにμオピオイド受容体によって媒介されることを示してい
る。ＢＩＭの同一の投与量は、ＰＧＥ₂ 誘導の痛覚過敏に対する効果を持たなか
ったが、有意にイソプロテレノール誘導の痛覚過敏を弱めた。対照的に、ＷＩＰ
ＴＩＤＥの同一の投与量はまた、有意にＰＧＥ₂ 誘導の痛覚過敏を弱め、そして
ほぼ完全にイソプロテレノール誘導の痛覚過敏を除いた。このことは、プロスタ
グランジン及びβ−ＡＲの両方が媒介する痛覚過敏におけるＰＫＡの役割、並び
に後者のみにおけるＰＫＣの役割を示す。

【００４１】 表１：エピネフリン、ＰＧＥ₂ 又はイソプロテレノール（各１００ng）に応じ
る侵害受容のしきい値の％減少及びＤＡＭＧＯ、ＳＱ２２５３６、ＢＩＭ、Ｒｐ
−ｃＡＭＰ（全て１μｇ）又はＷＩＰＴＩＤＥ（０．１μｇ）の効果。大きな値
は、更なる痛覚過敏を意味する。 エピネフリン ＰＧＥ₂§ イソプロテレノール 単独 29.6±2.1 33.6±1.9 25.8±0.9 （ｎ＝24） （ｎ＝20） （ｎ＝16） ＤＡＭＧＯ 11.5±3.1^* 11.1±4.0^** （ｎ＝６） （ｎ＝８） ＳＱ２２５３６ 9.5±2.4^* 10.0±2.9^** （ｎ＝８） （ｎ＝11） ＢＩＭ 4.6±2.1^* 33.4±4.1 7.1±2.4^*† （ｎ＝６） （ｎ＝６） （ｎ＝12） Ｒｐ−ｃＡＭＰｓ 13.9±4.6^* 3.1±5.2^** （ｎ＝６） （ｎ＝６） ＷＩＰＴＩＤＥ 10.9±3.6^* 9.4±3.1^** １±2.8^*† （ｎ＝６） （ｎ＝６） （ｎ＝６） * エピネフリン単独と有意に異なる（ｐ＜０．０１）。 ^*† イソプロテレノール単独と有意に異なる（ｐ＜０．０１）。 ** ＰＧＥ₂ 単独と有意に異なる（ｐ＜０．０１）。 § ＰＧＥ₂ のデータは、(S.G.Khasar et al., Neurosci. 64, 1161-1165 (1995)）又は（Y.O.Taiwo and J.D.Levine, Neurosci. 44, 131-135 (1 991)）由来のものであり、但し、ＢＩＭ及びＷＩＰＴＩＤＥを除く。

【００４２】 例２．エピネフリンは一次輸入侵害受容体に直接働くことで、エピネフリン誘
導の痛覚過敏を引き起こす。 行動モデルを用いて測定した、エピネフリン誘導の痛覚過敏が、一次輸入侵害
受容体へのエピネフリンの直接的な働きによるものであるかどうかを試験するた
めに、全細胞のパッチ・クランプ（ｐａｔｃｈ−ｃｌａｍｐ）実験は、分離した
、小径のＤＲＧニューロン上で、プレーティングの１２〜２４時間以内に行った
。これらのニューロンは、これまでに末梢の侵害受容体末端のためのモデルとし
て務めるために、示されてきた（P.I.Baccaglini and P.G.Hogan, Proc. Natl.
Acad. sci. USA 80, 594-598 (1983) ; S.Pitchford and J.D.Levine, Neurosci
. Let. 132, 105-108 (1991) ; S.England et al., J.Physiol. London 495, 42
9-440 (1996) ; M.S.Gold et al., Neurosci. 71, 265-275（1996)）。

【００４３】 電流クランプの記録は、穿孔したパッチの全細胞の技術を用いて行った。７５
０msのランプ−及び−プラト−の脱分極電流の注入の間、並びに最初のスパイク
までの潜伏時間の間に生じた活動電位の数は、一定の興奮性として使用した。基
準線の記録の５〜１０分後、エピネフリン（１μＭ）を槽に加えた。図４Ａは、
１μＭエピネフリンへの暴露の前及びその間の、典型的なニューロンからの電圧
の痕跡を示し、一方、図４Ｂは活動電位数における変化の時間経過及び別の細胞
の、最初の活動電位までの潜伏時間を示す。１μＭのエピネフリンで処置した１
１個のニューロンは、電流のランプ−及び−プラト−に応じて生じた活動電位数
の平均は、エピネフリンの添加前には１．７±０．２であり、そして薬剤灌流の
開始後、５分又はそれ以上では５．３±０．９であった（ｐ＜０．００５）。エ
ピネフリンが存在しなかったとき、電流注入の開始から最初のスパイクのピーク
までの平均潜伏時間は、２７８±４２msであり；エピネフリンの灌流後には、平
均潜伏時間は１８９±２１ms（ｎ＝１１、ｐ＜０．０５）になった。試験した１
１個のニューロンのうち９個（８１％）が、スパイク数の増大を示し、そしてこ
れらのニューロンのうち５個（４５％）がまた、少なくとも５０msのスパイク潜
伏時間の減少を示した。平均静止電位は、エピネフリンによって影響を受けなか
った。

【００４４】 １μＭのエピネフリンの添加の３０秒前及びそれと同時の、１０μＭのプロプ
ラノロールの添加が、スパイク数の増大（エピネフリンの添加の前１．２±０．
１、後１．３±０．２、ｎ＝７、ｐ＜０．０５）を排除し、そして最初のスパイ
クの潜伏時間の減少（エピネフリン添加の前２３５±９ms及び後２３３±１０ms
、ｎ＝７、ｐ＜０．０５）が、一般にエピネフリンによってもたらされたという
事実は、例えば行動研究において、エピネフリンがβ−ＡＲを活性化することで
、一次輸入ニューロン上で働くことを示している。

【００４５】 ｉｎ ｖｉｔｒｏで侵害受容体を感作する痛覚過敏剤が、ＴＴＸ−ＲＩ_Naを増
大させることが示されてきたので（S.England et al., J. Physiol. London 495
, 429-440 (1996) ; M.S.Gold et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 1108-
1112 (1996) ）、エピネフリンのＴＴＸ−ＲＩ_Naに対する効果を試験した。図５
に示す様に、１μＭのエピネフリンは、ＴＴＸ−ＲＩ_Naの著しい相乗作用を引き
起こし、過分極化した方向における約１０mVによる活性化のための、電流−電圧
プロットを変えた（図５Ｂ）。このエピネフリンの投与量は、１４／２１（６７
％）のニューロンにおけるＴＴＸ−ＲＩ_Naの増大を引き起こした。イソプロテレ
ノールの適用が、エピネフリンと同様の結果を生み（図５Ｃ）、そして２μＭの
プロプラノロールが、この相乗作用を排除したが、５μＭのフェントルアミンが
排除しなかったので、エピネフリンのＴＴＸ−ＲＩ_Naへの効果はβ−ＡＲによっ
て媒介され、そしてα−ＡＲによって媒介されなかった。

【００４６】 ＰＫＣ及びＰＫＡの、ＴＴＸ−ＲＩ_Naのエピネフリン誘導の相乗作用を媒介す
るときの役割は、１００μＭ Ｒｐ−ｃＡＭＰ又は１００μＭ ＢＩＭの添加で
試験した。Ｒｐ−ｃＡＭＰはエピネフリン誘導のＴＴＸ−ＲＩ_Naの相乗作用を失
い、そしてＢＩＭは有意に減少させ（ｎ＝１１、ｐ＜０．０１）（図７及び８）
、その結果、ＰＫＡ及びＰＫＣ経路の関与を証明した。ＢＩＭによるＰＫＣの阻
害は、エピネフリンに応答するニューロンの数（５／１１対８／１１）及びそれ
らの応答の程度（３２％対４９％の平均ピーク電流の増大）を減少させた。

【００４７】 従って、動物によって示したエピネフリン誘導の痛覚過敏は、β−アドレナリ
ン受容体並びに一次輸入侵害受容体におけるＰＫＣ及びＰＫＡ経路の、エピネフ
リンの刺激によるものである。

【００４８】 例３．機械的及び熱的刺激並びに酢酸注射に対する痛覚過敏は、ＰＫＣεの不
在で有意に減少する。 過程において、タンパク質の役割を試験するための最も力強い方法の１つは、
前記タンパク質を欠く変異動物を生み出し、そして変異動物における過程を、そ
れらの野生型対応物のそれと比較することである。ＰＫＣεが痛みの伝達におけ
る役割を果たしているかどうかを試験するために、ホモ接合ＰＫＣε変異マウス
を、相同性組換え、キメラマウスの産生及び続く飼育によって作り出した。これ
らのマウスの構築は、“ＰＫＣε ａｓ Ｍｏｄｕｌａｔｏｒ ｏｆ Ａｎｘｉ
ｅｔｙ”と題され、そして１９９８年７月６日に提出された、米国暫定特許出願
に詳細に記載されており、これは引用によって本明細書に組入れられる。ＰＫＣ
ε変異マウスは生存可能であり、そして標準的なカゴの環境において野生型の同
腹子と識別することができない。更に、脳、脊髄及びＤＲＧニューロンのヘマト
キシリン及びエオシン染色は、解剖学的な異常を示さなかった。

【００４９】 機械的、熱的及び化学的侵害受容は、野生型及びＰＫＣεを変異マウスで評価
した。野生型（ｎ＝８）及びＰＫＣε変異体（ｎ＝８）のマウス、その両方にと
って、基底の機械的侵害受容のしきい値は、マウスがｖｏｎ Ｆｒｅｙ Ｈａｉ
ｒ（“ＶＨＦ”；Ｓｔｏｅｌｔｉｇ Ｃｏ．）を用いて、４、６．９又は１４．
８グラムの力を適用して後脚を突かれた後、それらの脚を引っ込める回数として
測定された。図９Ａに示す様に、ＶＨＦ刺激後の、引っ込みの応答のパーセント
は、野生型及び変異マウスにおいて同様であった。１００ngのエピネフリン又は
プロスタグランジンＥ2 （“ＰＧＥ₂ ”）を、ＶＨＦ刺激の前に足の裏からの注
射によって投与した場合、ＶＨＦ刺激の特定の強度に対する引っ込みの応答のパ
ーセントが劇的に野生型で増大し、このことは前記の注射した化合物が、侵害受
容のしきい値を低下させることを示す（E.Kinnman, J.D.Levine, Neuroscience
64, 751-767 (1995)）。変異マウス及び野生型のマウスが、ＰＧＥ₂ への暴露の
後のＶＨＦ刺激に対する、引っ込み応答の同一のパーセントを示し、一方、エピ
ネフリン注射後の引っ込み応答のパーセントは、野生型マウスよりもＰＫＣε変
異マウスにおいて有意に低下した（４ｇ ＶＨＦのときｐ＝０．００１３；６．
９ｇ ＶＨＦのときｐ＝０．０６９２；そして１４．８ｇ ＶＨＦのときにｐ＝
０．００２３であった（図９Ａ）。

【００５０】 熱的侵害受容のしきい値を、Ｈａｒｇｒｅａｖｅの熱的侵害受容試験（K.O.Al
ey, D.B.Reichling, J.D.Levine, Neuroscience 73, 259-265 (1996) ）で決定
した場合、野生型（ｎ＝８）及び変異（ｎ＝８）のマウスは、類似の基底のしき
い値及びＰＧＥ₂ に対する類似の応答を示したが、ＰＫＣε変異動物は、それら
の野生型同腹子と比較して、有意に低下（ｐ＝０．０００６）したエピネフリン
誘導の熱的痛覚過敏を示した（図９Ｂ）。

【００５１】 野生型（ｎ＝４）及び変異（ｎ＝４）のマウスにおいて、化学的に誘導した痛
覚過敏は、酢酸で苦しませる試験（S.J.Ward, A.E. Takemori, J.Pharmacol. Ex
p. Ther. 224, 525-530 (1983)）によって決定した。図９Ｃに示した様に、ＰＫ
Ｃε変異マウスは、野生型動物より侵害受容のしきい値を有意に低下させた（ｐ
＝０．０１２４）。

【００５２】 ＰＫＣε変異マウスにおける、正常なＰＧＥ₂ の媒介する応答の存在は、ＰＧ
Ｅ₂ の痛覚過敏及び感作がＰＫＣ依存ではないが、代わりにＰＫＡ依存であるこ
とを示すデータと一致している（G.R.Lewin, A.M.Ritter, L.M.Mendell, J. Neu
rosci. 13, 2136-2148 (1993) ）。これらの研究は、ＰＫＣεが媒介するシグナ
ル伝達の欠損が、ＰＫＣε変異マウスにおける、低下した、エピネフリンが媒介
する痛覚過敏を説明することを示している。ＰＫＣε変異マウスにおける酢酸で
苦しませる試験の低い値もまた、ＰＫＣεが炎症性の痛みに寄与することを示し
ている。ＰＫＣεが基準線の侵害受容のしきい値に寄与せず、そして前記の変異
マウスが機能を発揮し、そして正常の様に見えることは、ＰＫＣεの阻害剤が深
刻な全身性の副作用を引き起こさず、又は正常な侵害受容の応答を害することな
く、痛みを改善することを示す。

【００５３】 例４．ＰＫＣεの選択的阻害剤の投与が、機械的刺激に応じる痛覚過敏を弱め
る。 例３で報告したＰＫＣε変異マウスの痛覚過敏応答が、神経系の発育の間に、
ＰＫＣεにとって可能な必要物よりもむしろ、これらの過程におけるＰＫＣεの
役割に起因することを確認するために、Bantin-Kingman (Fremont CA) から購入
したＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの野生型の成体の、侵害受容的及び痛
覚過敏的応答は、ＰＫＣεの選択阻害剤、εＶ１−２ペプチドでの処置後すぐに
試験した。このペプチドは選択的にＰＫＣのεイソ酵素を阻害し、これはその活
性化が誘導する転移を害することによるものであり、εＶ１−２の存在下では、
ＰＫＣεのβ’ＣＯＰ（その固定化タンパク質）への結合が損われる（J.A.John
son, M.O.Gray, C.-H.Chen, D.Mochly-Rosen, J.Biol.Chem. 271, 24962-24966
(1996) ; M.Csukai, C.-H.Chen, M.A.De Matteis, D.Mochly-Rosen, J. Biol. C
hem. 272, 29200-29206 (1997) ; B.Hundle, et al., J.Biol. Chem. 272, 1502
8-15035 (1997) ）。

【００５４】 機械的侵害受容の試験にとって、侵害受容の屈曲の反射は、グラムで測定され
る、一定で増大する荷重を適用するＵｇｏ Ｂａｓｉｌｅの無痛覚計を用いて定
量した（Stoelting, Chicago, IL ; K.O.Aley, J.D.Levine, J. Neurosci. 17,
8018-23 (1997)）。これらの実験で使用したラットの、平均の基底機械的しきい
値は、１０５．３＋／−２．８グラムであった。痛覚過敏を誘導する薬剤、エピ
ネフリン（１００ng）及びＰＧＥ₂ （１００ng）の、機械的侵害受容のしきい値
に対する効果は、前記の痛覚過敏の薬剤を投与した１５，２０、及び２５分後に
、脚の引っ込み回数を測定し、そして次にこれら３つの記録の平均を計算するこ
とで決定した。図１０Ｅに示す様に、エピネフリン処置の前に、滅菌水（低浸透
圧環境を作製するためのもの）及び１μｇの、εＶ１−２ペプチドを混ぜたもの
の、フットパッド注射を受けたラット（ｎ＝８）の機械的侵害受容のしきい値は
、エピネフリンのみを処置したラット（ｎ＝８）のものと非常に類似しており；
両グループが、約２５〜３０％のしきい値の低下を示した。対照的に、エピネフ
リン処置の前に、滅菌水（低浸透圧環境を作製するためのもの）及び１μｇのε
Ｖ１−２ペプチドのフットパッド注射を受けたラット（ｎ＝８）は、有意に低い
、エピネフリン誘導のしきい値の低下を示した（図１０Ｅ）。予想される様に、
εＶ１−２及びＰＧＥ₂ （ｎ＝１０）を受けたラットは、ＰＧＥ₂ のみを受けた
ラット（ｎ＝１０）のものと識別不可能な、しきい値の低下を示した。これらの
結果は、成体のニューロンにおけるＰＫＣεの阻害が、エピネフリンが媒介する
痛覚過敏を低下させることを証明している。

【００５５】 例５．ＰＫＣεは、エピネフリン誘導の痛覚過敏に関与する唯一のＰＫＣイソ
酵素である。 エピネフリン誘導の痛覚過敏に対する、ＰＫＣεの寄与を評価するために、我
々は、イソ酵素選択的でないＰＫＣ阻害剤、ビスインドリマレイミドＩ（“ＢＩ
Ｍ”、D.Toullec, et al., J. Biol. Chem. 266, 15771-15781 (1991) ）と一緒
にエピネフリンを注射し、そして生じた侵害受容のしきい値を、その後のεＶ１
−２ペプチド及びエピネフリンの連続的な注射で記録したものと比較した。ＢＩ
Ｍは、εＶ１−２と同じ程度まで、エピネフリン誘導の痛覚過敏を阻害するので
（図１０Ｄ）、ＰＫＣεはエピネフリン誘導の痛覚過敏に関与する唯一のＰＫＣ
イソ酵素であると思われる。

【００５６】 例６．ＰＫＣεは一次輸入ニューロンにおいて働く。 ＰＫＣεの痛覚過敏変換活性の位置を決定するために、ＰＫＣεの細胞内分布
を試験した。麻酔したマウス及びラットを、ＰＢＳ（１３７mM ＮａＣｌ、２．
７mM ＫＣｌ、１．４７mM ＫＨ₂ ＰＯ₄ 、８mM Ｎａ₂ ＨＰＯ₄ 、０．５mM
ＭｇＣｌ₂ 、０．９mM ＣａＣｌ₂ 、pH７．２）で、そして次に４％パラホルム
アルデヒド／ＰＢＳで灌流した。脊髄及びＤＲＧを摘出し、そして３時間４％パ
ラホルムアルデヒド中に、続いて２４時間ＰＢＳ含有２０％スクロース中に、そ
して２４時間４０％スクロース中に据えた。切片（５〜１０μｍ）を、冷凍した
ミクロトーム（Ｌｅｉｃａ ＳＭ２０００Ｒ）を用いて切断し、そしてノタノー
ル：アセトン（１：１）を用いて、−２０℃で１０分間処理した。ＤＲＧニュー
ロンを、２５℃でＰＢＳ／１％正常なヤギの血清／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２
０中で１時間、そして続いてポリクローナル抗ＰＫＣεを含む同一の緩衝液（１
：３００希釈、Santa Cruz Biotechnology）中で１〜２時間インキュベートした
。切片は、ＦＩＴＣ結合ヤギ抗ウサギＩｇＧ（１：５０希釈、Vector Laborator
ies,Burlingame,CA ）を用いて可視化した。ＰＫＣεの免疫細胞化学のために、
脊髄の切片を、４％の正常なヤギの血清及び０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０を用
いる、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）中でのインキュベーションの前に
、３％ Ｈ₂ Ｏ₂ で前処理した。試料を、続いてポリクローナル抗ＰＫＣε抗体
（１：３００希釈）を用いて一晩、ＰＢＳ／１％ Ｔｗｅｅｎ−２０中でインキ
ュベートし、そして免疫反応性は、ＡＢＣキット（Ｖｅｃｔｏｒ）を、ジアミノ
ベンズアミンと共に用いて、０．０２％四酸化オスミウムを用いる増強の後に検
出した。

【００５７】 ＰＫＣεは、野生型の成体のマウス（ｎ＝６）の、７０±２％のＤＲＧに存在
しており、これは、ほとんどの小径及び多くの中径のＤＲＧニューロンを含む（
図１１Ａ及びＣ）。ラットにおいて、類似の大きさのＤＲＧニューロンは、ＰＫ
Ｃεを発現している（図１０Ａ）。

【００５８】 侵害受容性ＤＲＧニューロンは、脊髄の後角で終了するので、ＰＫＣεの分布
はまた、野生型及びＰＫＣε変異マウスの脊髄で試験した。正常なマウス（ｎ＝
４）の脊髄において、ＰＫＣεは後角の表面で検出された（図３Ｄ）。従って、
ＰＫＣεはＤＲＧニューロンの一次輸入神経繊維に存在している。ＰＫＣε変異
マウスにおいて、ＰＫＣεは脊髄で検出されなかった（図１１Ｂ）。

【００５９】 εＶ１−２ペプチド又はＢＩＭの皮内注射が、真皮に存在する非神経細胞のＰ
ＫＣεを阻害することで、痛覚過敏を妨害した可能性に取り組むために、正常な
ラットの皮膚を、ＰＫＣε抗体で染色した。ＰＫＣεは表皮の基底層における薄
いバンドで検出されたが、ＰＫＣεは真皮において検出不可能であった。前記の
抗ＰＫＣε抗体の、免役化ペプチドとの予備吸収は染色を排除し、それが特異的
であることを示した。これらの結果は、ＰＫＣεが真皮に存在しないので、皮内
注射したＰＫＣε阻害剤が真皮の結合組織のＰＫＣεを阻害することによって働
かないことを示す。むしろ、上文に提示したものと組合せたデータは、真皮に注
射したＰＫＣε阻害剤が一次輸入ニューロン（小径及び中径のＤＲＧニューロン
）に入り、そしてこれらの細胞に存在するＰＫＣε上で働くという結論を導く。

【００６０】 ＰＫＣεの免疫反応性は、小さい及び中間のサイズのＤＲＧニューロン並びに
侵害受容性の輸入が終結する、脊髄の後角の、表面の層に存在した。更に、ＰＫ
Ｃε阻害剤ペプチドの皮内注射は、エピネフリン誘導の痛覚過敏を弱め；このペ
プチドは低浸透圧溶液の注射後、末梢神経の終末にペプチドを導入するために効
果的な方法で注射された（L.K.West, L.Huang, Biochemistry 19, 4418-4423 (1
980)）。真皮中の他の細胞型がＰＫＣεを発現しないので、これらの結果は、Ｄ
ＲＧニューロンに存在するＰＫＣεが、エピネフリンの痛覚過敏の効果に重要で
あることを示す。

【００６１】 例７．ＰＫＣεは、急性及び慢性の、化学療法が誘導する神経病性の痛みを調
節する。 化学療法を頻繁に受ける人は、痛覚過敏を経験する。ビンクリスチンは、その
様な痛覚過敏を引き起こすことが知られている化学療法の薬剤であり、そしてビ
ンクリスチン誘導の痛覚過敏のラットモデルは、以下の様に確立された。ビンク
リスチン（塩溶液中、１００μｇ／kg；Sigma Chemical Catalog）を、３２匹の
ラットにそれぞれ、２週間にわたり毎日血管内より投与した。ビンクリスチン投
与の２日目の後、前記ラットは、コントロールラットと比較して、Ｕｇｏ Ｂａ
ｓｉｌｅ無痛覚計によって与えられた、機械的侵害受容のしきい値における、急
性の投与量依存の減少及び無害な機械的刺激に対する増大した応答（“痛覚過敏
”）を示したが、有意な運動性の欠損は全く示さなかった（Ｒｏｔｏｒｏｄの解
析によって測定されたもの）。ビンクリスチン投与の２週目の間、ビンクリスチ
ン処置したラットは、慢性の機械的な侵害受容のしきい値の減少及び最も新しい
ビンクリスチン処置の２４時間後の、無害な機械的刺激に対する応答の増大を示
した。機械的刺激に対する応答は、ビンクリスチン処置の中断後の２週間、除々
に基準線まで低下した。

【００６２】 ＰＫＣε阻害剤の投与が、上述のラットモデルにおいて、ビンクリスチン誘導
の痛覚過敏を弱めるかどうかを決定するために、ビンクリスチン処置の１３日目
に、ラットは機械刺激を与える２０〜３０分前に、１μｇのεＶ１−２（ＰＫＣ
ε阻害ペプチド、ｎ＝８；図１２Ａ上で“ＰＫＣεＩ”と表す）、又は１μｇの
Ｓ−ＶεＶ１−２（εＶ１−２ペプチドの混合版、ｎ＝８；図１２Ａ上で“ＰＫ
ＣεＩ ＳＣＲ”と表す）のいずれかの皮内注射後、処置を受けないか（ｎ＝１
６）、あるいは滅菌水の皮内注射を受けた。図１２Ａに示す様に、ビンクリスチ
ン誘導の、慢性的な痛覚過敏は、前記ＰＫＣε阻害剤によって有意に減少したが
（ｐ＜０．０５）、混合した阻害剤ペプチドによって影響を受けなかった。これ
らのデータは、ＰＫＣεの阻害が、毒性の神経損傷による痛み、例えば化学療法
薬剤によって誘導されるものを弱めることを示す。

【００６３】 例８．ＰＫＣεは、糖尿病性の神経病に関する痛みを調節する。 未管理又はほとんど管理されていない糖尿病の人は、しばしば痛覚過敏を経験
する。糖尿病性の神経病における、ＰＫＣεの役割は、糖尿病のモデルにおいて
試験がされ、ここで、雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットは、ストレプト
ゾトシン（７０mg／kg、膵臓のβ細胞毒素）の皮下注射を受けた。これらのラッ
トは、注射後２４時間以内に、過血糖症及び糖尿を示し、そして１週間後、後脚
において、Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅ無痛覚計で与えられた機械的刺激に応じた、侵
害受容のいしきい値の減少を示す（Ahlgren, S.C. et al, J. Neurophysiology,
68, 2077-2085 (1992) ; Ahlgren, S.C. and Levine, J.D., Neuroscience 52,
1049-1055 (1993) ）。ストレプトゾトシン注射の４週間後、各ラットは、（１
）１μｇのビスインドリマレイミド（プロテインキナーゼＣの阻害剤、ｎ＝４；
図１２Ｂ上で“ＢＩＭＭ”と表す）、（２）１μｇのεＶ１−２（ＰＫＣεの阻
害ペプチド、ｎ＝８；図１２Ｂ上で“ＰＫＣεＩ”と表す）、又は（３）１μｇ
のＳ−ＶεＶ１−２（前記εＶ１−２ペプチドの混合版、ｎ＝４；図１２Ｂ上で
“ＰＫＣεＩ ＳＣＲ”と表す）の皮内注射の後、処置を受けないか（ｎ＝８）
、あるいは滅菌水の皮内注射を受け、そして次に、機械的刺激に暴露された。図
１２Ｂに示す様に、ビスインドリマレイミド又はεＶ１−２のいずれかの投与は
、侵害受容のしきい値における糖尿病誘導の減少を大きく低下させたが（共にｐ
＜０．０５）、前記の混合ペプチドによる処置は、侵害受容のしきい値の減少に
あまり影響しなかった。これらのデータは、ＰＫＣεが糖尿病の痛覚過敏を媒介
するＰＫＣの主要な ¹イソ酵素であり、そしてＰＫＣε阻害剤の投与が、糖尿病
性の神経病に関する痛みを弱めることを示す。

【００６４】 ¹ ビスインドリマレイミドが、ＰＫＣεＩよりも、侵害受容のしきい値の減少
のパーセンテージの、多少大きな低下をもたらしたので、ＰＫＣε以外の１又は
複数のイソ酵素は、糖尿病誘導の痛覚過敏を調節する役割を有することが可能で
ある。

【００６５】 例９．ＰＫＣεは外傷性の神経損傷によって誘導される痛覚過敏を調節する。 Seltzerの外傷性神経損傷モデル（Seltzer, Z.et al, Pain 43, 205-218 (199
0))を、外傷性の神経損傷によって誘導される痛覚過敏の調節における、ＰＫＣ
εの役割を研究するために使用する。外傷性の神経損傷が痛覚過敏をもたらした
、後脚の背中側の部位を決定した後、ラットはその様な部位での（１）１μｇの
ビスインドリマレイミド、（２）１μｇのεＶ１−２、又は（３）１μｇのＳ−
ＶεＶ１−２の皮内注射の後、未処置又は滅菌水の皮内注射を受けた。機械的刺
激に対する応答を、次に試験し、そしてＰＫＣεの阻害剤は、外傷性の神経損傷
に関する痛覚過敏を、少なくとも部分的にくつがえすことを示す。

【００６６】 例１０．ＰＫＣεは急性の炎傷性の痛みを調節する。 例３で報告した、酢酸で苦しませる試験は、ＰＫＣεが炎症性の痛みに寄与す
ることを示す。ＰＫＣεが他の炎症剤によって誘導される痛覚過敏を調節するか
どうかを研究するために、ラットは、カラギーナン（強い刺激薬）の１％溶液を
皮内注射によって１０μｌ受け（Ferreira, S.H. et al., Nature 334, 698-700
(1988) ）、そして３．５時間後、前記ラットは１μｇのεＶ１−２（ＰＫＣε
の阻害ペプチド、ｎ＝６；図１３上で“εＶ”と表す）、又は１μｇのＳ−Ｖε
Ｖ１−２（前記εＶ１−２ペプチドの混合版、ｎ＝６；図１３上で“Ｓ−εＶ”
と表す）のいずれかの皮内注射の後、処置を受けないか（ｎ＝１２；図１３上で
“Ｃａｒ−４”と表す）、あるいは滅菌水の皮内注射を受けた。機械的刺激が、
３０分後にかけられた場合、図１３に示すように、カラギーナンのみ又はカラギ
ーナン及び前記の混合ペプチドの両方を受けたラットは、実質的な痛覚過敏を示
した。比較すると、カラギーナン及びＰＫＣε阻害ペプチドを受けたラットは、
機械的な痛覚過敏をほとんど示さなかった。これらのデータは、ＰＫＣε阻害剤
の投与が、カラギーナン誘導の痛覚過敏を有意に減少させることを示す。

【００６７】 例１１．ＰＫＣεは慢性の炎症性の痛みを調節する。 Ａ．慢性の炎症性の痛みのためのモデル あるかどうかはわからないが、慢性の炎症性の痛みにおけるＰＫＣεの役割を
研究するために、慢性の炎症性の痛みのための、以下のモデル系を開発した。ラ
ットは、後脚に、カラギーナン（炎症剤）の皮内注射を受けた。カラギーナン投
与の後、３〜４日の間まで、前記ラットはＲａｎｄａｌｌ−Ｓｅｌｉｔｔｏの脚
の引っ込み試験によって評価された、機械的な痛覚過敏を示した。このことは、
カラギーナン誘導の炎症に対する急性の応答であると思われた。プロスタグラン
ジンＥ₂ （“ＰＧＥ₂ ”）、５−ヒドロキシトリプタミン（“５−ＨＴ”、セロ
トニン）又はＣＧＳ−２１６８０（アデノシンＡ₂ −選択受容体作用薬）の投与
は、通常、未処置のラット（カラギーナン注射を受けていないラット）に、６時
間まで持続する痛覚過敏を経験させるが、これらの物質のいずれか１つの投与の
後、カラギーナンで感作したラットが経験する痛覚過敏は、２４時間まで持続し
た。延長した痛覚過敏は、カラギーナン注射後、その様なラットにおいて３週間
まで見られたこれらのデータは、慢性の延長した炎症の痛みのモデルを確立し、
そして急性の炎症によって誘導される変化が、長期間続くことを示す。

【００６８】 Ｂ．ＰＫＣεは、慢性の炎症の痛み及びそれをもたらす過程を調節する。 特に、慢性の炎症の痛みの調節における、通常のプロテインキナーゼＣ酵素及
びＰＫＣεイソ酵素の役割を、カラギーナン注射後、数日、１μｇのビスインド
リマレイミド（“ＢＩＭ”、非選択的ＰＫＣε阻害剤）又は１μｇのεＶ１−２
（ＰＫＣεを選択的に阻害するペプチド）を投与し、そして次に、前記ラットを
ＰＧＥ₂ で処置し、そして生じた痛覚過敏を測定することで試験した。通常、カ
ラギーナンで感作したラットで見られる延長された、ＰＧＥ₂ 誘導の痛覚過敏は
、ＢＩＭ又はεＶ１−２の投与で阻害された。これらのデータは、延長されたＰ
ＧＥ₂ 誘導の痛覚過敏が、ＰＫＣεの活性依存であることを示し、そしてＰＫＣ
εの阻害剤の投与が先の炎症による、慢性の増強された痛みを弱めることを示す
。

【００６９】 単純な炎症の事象が、何日も後に、延長した痛覚過敏をもたらす過程を、プロ
テインキナーゼＣが調節するかどうかを試験するために、ラットは同時にカラギ
ーナン及び１μｇのＢＩＭの注射を受けた。痛覚過敏は、前記ラットがＰＧＥ₂
で処置された場合に、７２時間後に測定した。ＢＩＭの、カラギーナンと同時の
投与は、通常カラギーナンによって誘導される急性の痛覚過敏及び、カラギーナ
ン暴露の７２時間後、又はそれ以上の時間の後、ラットをＰＧＥ₂ で処置したと
きに通常観察される延長された痛覚過敏、その両方を弱めた。これらのデータは
、ＰＫＣが急性及び慢性の痛覚過敏、その両方を調節することを示す。従って、
慢性の、延長される痛覚過敏をもたらす前記の炎症剤とほぼ同時、又は痛覚過敏
を誘導する刺激とほぼ同時の、そのいずれかのときのＰＫＣの阻害剤の投与は、
その様な慢性の痛覚過敏を弱めることができる。ＢＩＭの代わりの、εＶ１−２
の投与は、これらの効果がＰＫＣεのイソ酵素に起因することを確認し、そして
炎症性の事象の直前、その間、又はその後の、ＰＫＣεの選択的阻害剤の投与が
、その様な事象による両方の急性の痛みを弱め、そしてその様な事象の後の、慢
性的な痛みを導く機構を妨げることを示した。

【００７０】 この明細書で言及した全ての刊行物及び特許出願は、各刊行物又は特許出願が
具体的に又は個々に、引用によって組入れられるように、同程度まで引用によっ
て本明細書に組入れられる。

【００７１】 すでに、十分に記述されている本発明は、当業者にとって数多くの変更及び変
形を、本発明の精神又は添付した特許請求の範囲の範囲を逸脱することなく、行
うことができることは明らかであるだろう。

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ】 機械的刺激に応じる、エピネフリン誘導の、投与量依存痛覚過敏に対する、α
及びβアドレナリン拮抗薬、交感神経切除並びにプロスタグランジン合成阻害剤
の効果。未処置（四角）、プロプラノロール注射（三角）、フェントルアミン注
射（黒丸）後の、１，１０，１００及び１０００ngのエピネフリン注射による侵
害受容のしきい値の減少（％）。

【図１Ｂ】 擬似の交感神経切除（四角）、交感神経切除（白丸）及びインドメタシン注射
（逆三角）後の、１，１０，１００及び１０００ng注射による、侵害受容のしき
い値の減少（％）。

【図２Ａ】 機械的刺激に応じる、エピネフリン誘導の痛覚過敏の潜伏時間及び継続時間。
１μｇのエピネフリン注射後の、指示した時間における、侵害受容のしきい値の
減少（％）。

【図２Ｂ】 機械的刺激に応じる、エピネフリン誘導の痛覚過敏の潜伏時間及び継続時間。
１μｇのエピネフリン注射後の、指示した時間における、侵害受容のしきい値の
減少（％）。

【図３】 機械的刺激に応じる、イソプロテレノール誘導の痛覚過敏に対する、α及びβ
アドレナリン拮抗薬の効果。未処置（四角）、フェントルアミン注射（ひし形）
及びプロプラノロール注射（三角）の後の、１，１０，１００及び１０００ngの
イソプロテレノール注射による、侵害受容のしきい値の減少（％）。

【図４Ａ】 １μＭのエピネフリンの暴露の前及びその間の、培養したラットの、小径のＤ
ＲＧニューロン由来の電圧の痕跡。

【図４Ｂ】 別の培養したラットの、小径のニューロンにおける、活動電位数（四角）及び
最初の活動電位（丸）に対する、１μＭエピネフリンの、超過時間の効果。

【図５Ａ】 ピークのテトロドトキシン耐性ナトリウム電流（“ＴＴＸ−ＲＩ_Na電流”）に
対する、１μＭエピネフリンの超過時間の効果。

【図５Ｂ】 エピネフリン無し（白丸）及び１μＭエピネフリン（黒丸）の、ＴＴＸ−ＲＩ _Na 電流−電圧プロット。

【図５Ｃ】 ピークのＴＴＸＲＩ_Na電流に対する、イソプロテレノールの超過時間の効果。

【図６】 ＴＴＸ−ＲＩ_Na電流の、エピネフリン誘導の増強に対する、α及びβアドレナ
リン拮抗薬の効果。１μＭエピネフリン単独（白丸）、１μＭエピネフリン及び
フェントルアミン（三角）、並びに１μＭエピネフリン及びプロプラノロール（
四角）の灌流による、超過時間の正規化内部電流。

【図７】 ＴＴＸ−ＲＩ_Na電流の、エピネフリン誘導の増強に対するＰＫＡ阻害剤の効果
。１μＭエピネフリン単独の灌流（白丸）又は１μＭエピネフリンの、記録ピペ
ットに存在するＲｐ−ｃＡＭＰと一緒の灌流（黒丸）による、超過時間の正規化
電流。

【図８】 ＴＴＸ−ＲＩ_Naのエピネフリン誘導の増強に対する、ＰＫＣ阻害剤の効果。１
μＭエピネフリン単独の灌流（白丸）又は１μＭエピネフリンの、ＢＩＭ前処理
と一緒の灌流（黒丸）による、超過時間の正規化内部電流。

【図９Ａ】 図９は、野生型及びＰＫＣε変異体マウスの、機械的、熱的、及び化学的侵害
受容並びに痛覚過敏を示す。機械的刺激に対する、野生型（斜線が入った棒）及
びＰＫＣε変異体（白棒）のマウスの応答は、４、６．９又は１４．８グラム強
度のｖｏｎ Ｆｒｅｙ ｈａｉｒ（“ＶＦＨ”）刺激後に、脚の引っ込みの回数
を測定することで試験した。ＶＦＨ刺激は、未処置（“基底”）、エピネフリン
注射、又はＰＧＥ₂ 注射の後に行った。

【図９Ｂ】 熱的刺激に対する、野生型（斜線が入った棒）及びＰＫＣε変異体（白棒）の
マウスの耐性は、脚を引っ込める前の、５０ワットの放射熱刺激に対する暴露の
長さ（秒）を測定することで決定した。熱刺激は、未処置（“基底”）、エピネ
フリン注射、又はＰＧＥ₂ 注射の後に行った。

【図９Ｃ】 腹部の収縮（“身もだえ”）を誘導する、腹腔内の酢酸注射の能力は、野生型
及びＰＫＣε変異（“ノックアウト”）のマウスで試験した。

【図１０Ａ】 ラットのＤＲＧニューロン及び皮膚におけるＰＫＣεの発現；非選択的ＰＫＣ
ε阻害剤及び選択的ＰＫＣε阻害剤による、エピネフリン誘導の痛覚過敏のラッ
トにおける阻害。ラットのＤＲＧニューロン（Ａ）及び皮膚（Ｂ及びＣ）は、Ｐ
ＫＣε抗体（Ａ及びＢ）並びに抗原をあらかじめ吸収した抗体（Ｃ）で染色した
。棒＝５０μｍ（Ａ，Ｂ及びＣ）；Ｅｐ＝表皮；Ｄｅ＝真皮。ラットは、１μｇ
のεＶ１−２ペプチド（“ＶＩε１−２”）又は１μｇの混合ペプチド（“Ｓ−
ＶＩε１−２”）のいずれかに続く、（Ｄ）１μｇのビスインドリマレイミドＩ
（“ＢＩＭ”）、又は（Ｅ）滅菌水の、後脚の背面への注射に続き、１００ngの
エピネフリン（“ｅｐｉ”）又は１００ngのＰＥＧ₂ の皮内注射を受けた。侵害
受容のしきい値における変化は、Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅの刺激に対する応答を測
定することで試験した。

【図１０Ｂ】 ラットのＤＲＧニューロン及び皮膚におけるＰＫＣεの発現；非選択的ＰＫＣ
ε阻害剤及び選択的ＰＫＣε阻害剤による、エピネフリン誘導の痛覚過敏のラッ
トにおける阻害。ラットのＤＲＧニューロン（Ａ）及び皮膚（Ｂ及びＣ）は、Ｐ
ＫＣε抗体（Ａ及びＢ）並びに抗原をあらかじめ吸収した抗体（Ｃ）で染色した
。棒＝５０μｍ（Ａ，Ｂ及びＣ）；Ｅｐ＝表皮；Ｄｅ＝真皮。ラットは、１μｇ
のεＶ１−２ペプチド（“ＶＩε１−２”）又は１μｇの混合ペプチド（“Ｓ−
ＶＩε１−２”）のいずれかに続く、（Ｄ）１μｇのビスインドリマレイミドＩ
（“ＢＩＭ”）、又は（Ｅ）滅菌水の、後脚の背面への注射に続き、１００ngの
エピネフリン（“ｅｐｉ”）又は１００ngのＰＥＧ₂ の皮内注射を受けた。侵害
受容のしきい値における変化は、Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅの刺激に対する応答を測
定することで試験した。

【図１０Ｃ】 ラットのＤＲＧニューロン及び皮膚におけるＰＫＣεの発現；非選択的ＰＫＣ
ε阻害剤及び選択的ＰＫＣε阻害剤による、エピネフリン誘導の痛覚過敏のラッ
トにおける阻害。ラットのＤＲＧニューロン（Ａ）及び皮膚（Ｂ及びＣ）は、Ｐ
ＫＣε抗体（Ａ及びＢ）並びに抗原をあらかじめ吸収した抗体（Ｃ）で染色した
。棒＝５０μｍ（Ａ，Ｂ及びＣ）；Ｅｐ＝表皮；Ｄｅ＝真皮。ラットは、１μｇ
のεＶ１−２ペプチド（“ＶＩε１−２”）又は１μｇの混合ペプチド（“Ｓ−
ＶＩε１−２”）のいずれかに続く、（Ｄ）１μｇのビスインドリマレイミドＩ
（“ＢＩＭ”）、又は（Ｅ）滅菌水の、後脚の背面への注射に続き、１００ngの
エピネフリン（“ｅｐｉ”）又は１００ngのＰＥＧ₂ の皮内注射を受けた。侵害
受容のしきい値における変化は、Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅの刺激に対する応答を測
定することで試験した。

【図１０Ｄ】 ラットのＤＲＧニューロン及び皮膚におけるＰＫＣεの発現；非選択的ＰＫＣ
ε阻害剤及び選択的ＰＫＣε阻害剤による、エピネフリン誘導の痛覚過敏のラッ
トにおける阻害。ラットのＤＲＧニューロン（Ａ）及び皮膚（Ｂ及びＣ）は、Ｐ
ＫＣε抗体（Ａ及びＢ）並びに抗原をあらかじめ吸収した抗体（Ｃ）で染色した
。棒＝５０μｍ（Ａ，Ｂ及びＣ）；Ｅｐ＝表皮；Ｄｅ＝真皮。ラットは、１μｇ
のεＶ１−２ペプチド（“ＶＩε１−２”）又は１μｇの混合ペプチド（“Ｓ−
ＶＩε１−２”）のいずれかに続く、（Ｄ）１μｇのビスインドリマレイミドＩ
（“ＢＩＭ”）、又は（Ｅ）滅菌水の、後脚の背面への注射に続き、１００ngの
エピネフリン（“ｅｐｉ”）又は１００ngのＰＥＧ₂ の皮内注射を受けた。侵害
受容のしきい値における変化は、Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅの刺激に対する応答を測
定することで試験した。

【図１０Ｅ】 ラットのＤＲＧニューロン及び皮膚におけるＰＫＣεの発現；非選択的ＰＫＣ
ε阻害剤及び選択的ＰＫＣε阻害剤による、エピネフリン誘導の痛覚過敏のラッ
トにおける阻害。ラットのＤＲＧニューロン（Ａ）及び皮膚（Ｂ及びＣ）は、Ｐ
ＫＣε抗体（Ａ及びＢ）並びに抗原をあらかじめ吸収した抗体（Ｃ）で染色した
。棒＝５０μｍ（Ａ，Ｂ及びＣ）；Ｅｐ＝表皮；Ｄｅ＝真皮。ラットは、１μｇ
のεＶ１−２ペプチド（“ＶＩε１−２”）又は１μｇの混合ペプチド（“Ｓ−
ＶＩε１−２”）のいずれかに続く、（Ｄ）１μｇのビスインドリマレイミドＩ
（“ＢＩＭ”）、又は（Ｅ）滅菌水の、後脚の背面への注射に続き、１００ngの
エピネフリン（“ｅｐｉ”）又は１００ngのＰＧＥ₂ の皮内注射を受けた。侵害
受容のしきい値における変化は、Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅの刺激に対する応答を測
定することで試験した。

【図１１Ａ】 マウスの後根神経節（“ＤＲＧ”）ニューロン（Ａ及びＢ）及び脊髄（Ｄ及び
Ｅ）におけるＰＫＣεの発現。野生型（Ａ及びＤ）及びＰＫＣε変異（Ｂ及びＥ
）マウスの組織を、抗ＰＫＣε抗体と一緒にインキュベートした。棒＝５０μｍ
（Ａ及びＢ）又は１００μｍ（Ｄ及びＥ）。（Ｃ）ＰＫＣε発現及び全てのＤＲ
Ｇニューロンのサイズの度数ヒストグラム。

【図１１Ｂ】 マウスの後根神経節（“ＤＲＧ”）ニューロン（Ａ及びＢ）及び脊髄（Ｄ及び
Ｅ）におけるＰＫＣεの発現。野生型（Ａ及びＤ）及びＰＫＣε変異（Ｂ及びＥ
）マウスの組織を、抗ＰＫＣε抗体と一緒にインキュベートした。棒＝５０μｍ
（Ａ及びＢ）又は１００μｍ（Ｄ及びＥ）。（Ｃ）ＰＫＣε発現及び全てのＤＲ
Ｇニューロンのサイズの度数ヒストグラム。

【図１１Ｃ】 マウスの後根神経節（“ＤＲＧ”）ニューロン（Ａ及びＢ）及び脊髄（Ｄ及び
Ｅ）におけるＰＫＣεの発現。野生型（Ａ及びＤ）及びＰＫＣε変異（Ｂ及びＥ
）マウスの組織を、抗ＰＫＣε抗体と一緒にインキュベートした。棒＝５０μｍ
（Ａ及びＢ）又は１００μｍ（Ｄ及びＥ）。（Ｃ）ＰＫＣε発現及び全てのＤＲ
Ｇニューロンのサイズの度数ヒストグラム。

【図１２Ａ】 機械的刺激に応じる、ビンクリスチン誘導の痛覚過敏（Ａ）又は糖尿病誘導の
痛覚過敏（Ｂ）に対するＰＫＣε阻害剤の効果。未処置（白棒）、ＰＫＣε阻害
ペプチドの注射（斜線が入った棒）、前記阻害ペプチドの混合版の注射（黒棒）
又はビスインドリマレイミドＩの注射（逆の斜線が入った棒）の後の、侵害受容
のしきい値における減少（％）。

【図１２Ｂ】 機械的刺激に応じる、ビンクリスチン誘導の痛覚過敏（Ａ）又は糖尿病誘導の
痛覚過敏（Ｂ）に対するＰＫＣε阻害剤の効果。未処置（白棒）、ＰＫＣε阻害
ペプチドの注射（斜線が入った棒）、前記阻害ペプチドの混合版の注射（点刻し
た棒）又はビスインドリマレイミドＩの注射（逆の斜線が入った棒）の後の、侵
害受容のしきい値における減少（％）。

【図１３】 機械的刺激に応じる、カラギーナン誘導の痛覚過敏に対するＰＫＣε阻害剤の
効果。カラギーナン単独に対する暴露（白棒及び斜線が入った棒−痛覚過敏は、
カラギーナンの後、それぞれ３及び４時間後に試験した）、カラギーナンに対す
る暴露及びＰＫＣε阻害ペプチドの注射（逆の斜線が入った棒）、あるいはカラ
ギーナンに対する暴露及び前記阻害ペプチドの混合版の注射（点刻した棒）の後
の、侵害受容のしきい値の減少（％）。^* は、有意に異なることを示す（ｐ＜０
．０００１）。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年９月２８日（２０００．９．２８）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【請求項１４】 前記の選択阻害剤が：εＶ１−１，εＶ１−２，εＶ１−
３，εＶ１−４，εＶ１−５及びεＶ１−６から成る群から選択されるペプチド
である、請求項１３に記載の使用。

【手続補正書】

【提出日】平成１３年２月１５日（２００１．２．１５）

【手続補正２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１Ａ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１Ａ】

【手続補正３】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１Ｂ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１Ｂ】

【手続補正４】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図２Ａ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図２Ａ】

【手続補正５】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図２Ｂ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図２Ｂ】

【手続補正６】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図３

【補正方法】変更

【補正内容】

【図３】

【手続補正７】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図４Ｂ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図４Ｂ】

【手続補正８】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図５Ａ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図５Ａ】

【手続補正９】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図５Ｂ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図５Ｂ】

【手続補正１０】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図５Ｃ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図５Ｃ】

【手続補正１１】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図６

【補正方法】変更

【補正内容】

【図６】

【手続補正１２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図７

【補正方法】変更

【補正内容】

【図７】

【手続補正１３】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図８

【補正方法】変更

【補正内容】

【図８】

【手続補正１４】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図９Ａ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図９Ａ】

【手続補正１５】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図９Ｂ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図９Ｂ】

【手続補正１６】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図９Ｃ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図９Ｃ】

【手続補正１７】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１０Ｄ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１０Ｄ】

【手続補正１８】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１０Ｅ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１０Ｅ】

【手続補正１９】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１１Ｃ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１１Ｃ】

【手続補正２０】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１２Ａ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１２Ａ】

【手続補正２１】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１２Ｂ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１２Ｂ】

【手続補正２２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図１３

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (72)発明者 ルバイン，ジョン ディー． アメリカ合衆国，カリフォルニア 94118， サンフランシスコ，トゥエルフス アベニ ュ 791 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA17 BA44 DC32 MA02 NA05 NA14 ZA081 ZA082 ZA122 ZA202 ZA292 ZB112 ZC202 ZC751

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 痛みを軽減する方法であって、有効量の、プロテインキナー
   ゼＣのεのイソ酵素（ＰＫＣε）の阻害剤を投与することを含んで成る方法。
2. 【請求項２】 前記投与が、侵害受容を弱めることなく痛覚過敏の低下をも
   たらす、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記阻害剤が、ＰＫＣεの選択阻害剤である、請求項１に記
   載の方法。
4. 【請求項４】 前記方法が更に：プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）の阻害剤
   、ｃＡＭＰの阻害剤、非ステロイド性抗炎症薬、局所麻酔薬、鎮痙剤、抗うつ剤
   、及びオピオイドから成る群由来の化合物を投与することを含んで成る方法。
5. 【請求項５】 前記の痛みが、急性又は慢性である、請求項１に記載の方法
   。
6. 【請求項６】 前記の痛みが、炎症性又は神経病性である、請求項１に記載
   の方法。
7. 【請求項７】 前記の炎症性の痛みが、日焼け、変形性関節症、大腸炎、心
   臓炎、皮膚炎、筋炎、神経炎又は膠原血管病によるものであり、そして 前記の神経病性の痛みが、灼熱痛、糖尿病、膠原血管病、三叉神経痛、脊髄損
   傷、脳幹損傷、視床痛症候群、ガン、慢性アルコール中毒症、発作、ガン、膿瘍
   、脱髄病、ヘルペス感染、エイズ、外傷、手術、切断、毒素、又は化学療法によ
   るものである、請求項６に記載の方法。
8. 【請求項８】 痛みを調節する化合物を同定する方法であって： 試験化合物として、ＰＫＣεの活性を調節する化合物を選択し、そして、 痛みが調節されたかを決定するために、対象者に前記の試験化合物を投与する
   こと、を含んで成る方法。
9. 【請求項９】 前記化合物が、ＰＫＣεの活性を阻害する、請求項８に記載
   の方法。
10. 【請求項１０】 ＰＫＣεの阻害剤及び鎮痛剤を含んで成る組成物であって
    、前記鎮痛剤が、ＰＫＣεの阻害以外の作用機構を有する組成物。
11. 【請求項１１】 前記鎮痛剤が、非ステロイド性抗炎症薬、オピオイド、局
    所麻酔薬、鎮痙剤及び抗うつ剤から成る群から選択される、請求項１０に記載の
    組成物。
12. 【請求項１２】 痛みの処置のための薬剤の製造における、ＰＫＣεの阻害
    剤の使用。
13. 【請求項１３】 前記阻害剤がＰＫＣεの選択阻害剤である、請求項１２に
    記載の使用。
14. 【請求項１４】 前記の選択阻害剤が：εＶ１−１，εＶ１−２，εＶ１−
    ３，εＶ１−４，εＶ１−５及びεＶ１−６から成る群から選択されるペプチド
    である、請求項１３に記載の使用。