JP2002514400A

JP2002514400A - 遍在的に発現される新規な遺伝子のリバースストランドによってコードされている腫瘍関連抗原

Info

Publication number: JP2002514400A
Application number: JP2000548350A
Authority: JP
Inventors: デンアインド，ブノワヴァン; ブーン−ファロイア，ティエリー
Original assignee: Ludwig Institute for Cancer Research Ltd
Current assignee: Ludwig Institute for Cancer Research New York
Priority date: 1998-05-13
Filing date: 1999-05-13
Publication date: 2002-05-21
Also published as: EP1077989A4; WO1999058546A1; AU3900399A; CA2328405A1; EP1077989A1

Abstract

(57)【要約】遍在的に発現される新規な遺伝子、ＲＵＲ−１のアンチセンスストランドに由来する核酸分子が提供される。これらのＲＵＲ−１アンチセンス核酸は、腫瘍試料及び腫瘍由来細胞系中で優先的に発現されるポリペプチドをコードしている。上記の遍在的に発現される遺伝子及びそのフラグメントを構成する核酸も提供される。これら核酸によってコードされているポリペプチド、それらの機能的相同体、修飾体及び改変体、それらの有用なフラグメント並びにそれらに関連した治療法及び診断法も提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野本発明は、腫瘍内で優先的に発現される核酸分子及びコードされているポリペ
プチドに関する。これらの核酸分子やコードされているポリペプチドは、なかん
ずく、診断及び治療に関連して有用である。

【０００２】発明の背景腫瘍細胞をその正常な対応細胞と識別する表現型の変化はしばしば、この細胞
のゲノムに対する１つ又はそれより多くの変化の結果である。腫瘍細胞内で発現
されるが対応する正常細胞内では発現されない遺伝子は「腫瘍関連」遺伝子と呼
称することができる。これらの腫瘍関連遺伝子は腫瘍表現型のマーカーである。
腫瘍関連遺伝子の発現はまた腫瘍形成過程における必須の事象である可能性もあ
る。

【０００３】典型的には、宿主は正常な非腫瘍形成細胞内では発現されない腫瘍関連遺伝子
を外来として認識する。かくして、腫瘍関連遺伝子の発現はこれら腫瘍細胞に対
する宿主による免疫応答を誘発することができる。腫瘍関連遺伝子はまた、或る
種の組織内の正常細胞では、免疫応答を誘発することなく発現される可能性もあ
る。このような組織では、免疫系はこれらの免疫学的に特権を有する組織内の細
胞を「判別し」ないので、遺伝子が発現されそして／又はタンパク質産生物の通
常は免疫学的に認識可能なフラグメントが細胞表面に提示されても免疫応答を誘
発できない可能性がある。免疫学的に特権を有する組織の例には脳、網膜及び精
巣が含まれる。

【０００４】核酸又はポリペプチドの腫瘍関連発現を見つけることによって細胞を腫瘍細胞
として同定する手段が提供される。診断用化合物は腫瘍関連核酸又はポリペプチ
ドに基づいており、そしてこれらは腫瘍細胞の存在や位置を決定するために使用
される。更に、上記腫瘍関連核酸又はポリペプチドが腫瘍表現型の或る局面（例
えば、非制御増殖又は転位）に必須であるとき、この腫瘍関連核酸又はポリペプ
チドを使用して、当該核酸又はポリペプチドの発現を低下させるか又は実質的に
消失させ、そしてそれによって特定の腫瘍関連核酸又はポリペプチドの発現に依
存する表現型局面を低下させるか又は実質的に消失させることができるアンチセ
ンス核酸のような治療剤を提供することができる。

【０００５】上記したように、上記腫瘍関連遺伝子のポリペプチド産生物は宿主免疫監視の
標的であることができそして上記腫瘍関連産生物に特異的な細胞傷害性Ｔリンパ
球の１つ又はそれより多くのクローンの選択及び拡張を誘発することができる。
この現象の例には、以下で詳記されているような、遺伝子のＭＡＧＥファミリー
、チロシナーゼ遺伝子、Ｍｅｌａｎ−Ａ遺伝子、ＢＡＧＥ遺伝子、ＧＡＧＥ遺伝
子、遺伝子のＲＡＧＥファミリー、ＰＲＡＭＥ遺伝子及び脳グリコーゲンホスホ
リラーゼ遺伝子によってコードされているタンパク質及びそれらのフラグメント
が含まれる。かくして、核酸又はポリペプチドの腫瘍関連発現は、このような核
酸又はポリペプチドが、免疫系によって外来と認識されるタンパク質又はペプチ
ドをコードでき、そしてその結果腫瘍拒絶の標的を提供できることを示唆してい
る。このような核酸は「腫瘍拒絶抗原前駆体」又はＴＲＡＰをコードしており、
そしてこれらを使用して、このような遺伝子やタンパク質を発現している腫瘍に
対する免疫系応答を増強するための治療剤を生み出すことができる。

【０００６】哺乳動物の免疫系が外来又は異質物を認識し、そしてこれらと反応する過程は
複雑な過程である。この免疫系の重要な面はＴ細胞応答である。この応答には、
Ｔ細胞が、ヒト白血球抗原（「ＨＬＡ」）又は主要組織適合遺伝子複合体（「Ｍ
ＨＣ」）と称される細胞表面分子とペプチドとの複合体を認識しそしてこれらと
相互作用することが必要である。これらのペプチドは、ＨＬＡ／ＭＨＣ分子も提
示する細胞によってプロセシングされる更に大きな分子から誘導される。この点
に関しては、メール（Male）他、Advanced Immunology（J.P. Lipincott Compan
y、１９８７年）、特に６〜１０章参照。Ｔ細胞とＨＬＡ／ペプチド複合体との
相互作用は限定されているので、ＨＬＡ分子とペプチドの特定の組合せに特異的
なＴ細胞が必要である。特定のＴ細胞が存在していない場合、例えそのパートナ
ー複合体が存在していても、Ｔ細胞の応答はない。同様に、Ｔ細胞は存在してい
るが特定の複合体が存在していない場合、応答はない。このメカニズムは外来物
に対する免疫系の応答、自己免疫病理学及び細胞異常に対する応答に係わってい
る。多くの研究は、タンパク質がＨＬＡ結合ペプチドにプロセシングされるメカ
ニズムに焦点を当ててきている。この点に関しては、バリナガ（Barinaga）、Sc
ience ２５７：８８０、１９９２年；フレモント（Fremont）他、Science ２５
７：９１９、１９９２年；マツムラ（Matsumura）他、Science ２５７：９２７
、１９９２年；ラトロン（Latron）他、Science ２５７：９６４、１９９２年、
参照。

【０００７】Ｔ細胞が細胞異常を認識するメカニズムは癌にも関与している。例えば、１９
９２年５月２２日に出願され、１９９２年１１月２６日に公開されたＰＣＴ出願
ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３５４（これは参照して本明細書に組み入れる）中には
、ペプチドにプロセシングされ、そして順次、細胞表面に発現され、そして特異
的なＣＴＬによる腫瘍細胞の溶解に導き得る遺伝子の或るファミリーが開示され
ている。これらの遺伝子は「腫瘍拒絶抗原前駆体」又は「ＴＲＡＰ」分子をコー
ドしていると言われており、そしてこれらから誘導されるペプチドは「腫瘍拒絶
抗原」又は「ＴＲＡ」と呼称される。遺伝子のこのファミリーに関する更なる情
報については、トラバーサリ（Traversari）他、J. Exp. Med. １７６：１４５
３〜１４５７、１９９２年；ファン・デル・ブルゲン（van der Bruggen）他、S
cience ２５４：１６４３、１９９１年；ドゥ・プラン（De Plaen）他、Immunog
enetics ４０：３６０〜３６９、１９９４年、参照。また、米国特許第５，３４
２，７７４号も参照。

【０００８】米国特許第５，４０５，９４０号（この特許の開示は参照して本明細書に組み
入れる）中には、ＨＬＡ−Ａ１分子によって提示されるノナペプチドが教示され
ている。この参照文献は、特定のＨＬＡ分子に対する特定のペプチドの既知の特
異性を所与のものとすると、或る特定のペプチドは１つのＨＬＡ分子とは結合す
るが他のＨＬＡ分子とは結合しないと期待されることを教示している。別異の個
人は別異のＨＬＡ表現型を有しているので、上記のことは重要である。その結果
、或る特定のペプチドが或る特定のＨＬＡ分子のパートナーであるとの同定は診
断的及び治療的関連性を有しているが、これらはその特定のＨＬＡ表現型を有す
る個人にしか関係していない。細胞異常性は１つの特定のＨＬＡ表現型に限定さ
れておらず、そして目標とされる治療法には問題の異常細胞の表現型に関して何
らかの知識が必要であるので、この分野では更なる研究が必要である。

【０００９】米国特許５，６２９，１６６（これは参照して本明細書に組み入れる）中には
、ＭＡＧＥ−１発現産生物が別の第２のＴＲＡにプロセシングされるという事実
が開示されている。この第２のＴＲＡは、ＨＬＡ−Ｃｗ^＊１６０１としても知ら
れているＨＬＡ−Ｃｗ１６分子によって提示される。この開示は所定のＴＲＡＰ
が多数のＴＲＡを産生できることを示している。

【００１０】米国特許５，４８７，９７４（これは参照して本明細書に組み入れる）中には
、チロシナーゼが腫瘍拒絶抗原前駆体として記載されている。この参照文献は、
或る正常細胞（例えば、メラノサイト）によって産生される分子が腫瘍細胞内で
プロセシングされて、ＨＬＡ−Ａ２分子によって提示される腫瘍拒絶抗原が生じ
ることを開示している。

【００１１】米国特許５，６２０，８８６（これは全体を参照して本明細書に組み入れる）
中には、チロシナーゼから誘導されない別の第２のＴＲＡがＨＬＡ−Ａ２分子に
よって提示されることが教示されている。このＴＲＡはＴＲＡＰから誘導される
が、既知のＭＡＧＥ遺伝子によってコードされている。この開示は特定のＨＬＡ
分子が種々の供給源から誘導されるＴＲＡを提示できることを示している。

【００１２】米国特許５，５７１，７１１及び米国特許５，６８３，８８６（これらは開示
全体を参照して本明細書に組み入れる）中には、非関連腫瘍拒絶抗原前駆体、所
謂「ＢＡＧＥ」前駆体が記載されている。複数のＴＲＡが上記ＴＲＡＰから誘導
されそしてまた記載されている。これらは、後にＨＬＡ−Ｃｗ^＊１６０１と改名
されたＭＨＣ分子ＨＬＡ−Ｃ−Ｃｌｏｎｅ１０と複合体を形成する。

【００１３】米国特許５，６４８，２２６及び米国特許５，６１０，０１３（これらは開示
全体を参照して本明細書に組み入れる）中には、もう１つの非関連腫瘍拒絶抗原
前駆体、所謂「ＧＡＧＥ」前駆体が記載されている。このＧＡＧＥ前駆体はＢＡ
ＧＥ又はＭＡＧＥファミリーとは関係がない。

【００１４】１９９６年９月２６日に公開されそして発明の名称「ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原」
のＰＣＴ公開ＷＯ９６／２９４０９（これは全体を参照して本明細書に組み入れ
る）中には、上記遺伝子のいずれにも由来しないＴＲＡＰの１つのファミリーが
教示されている。これらのＴＲＡＰは遺伝子のＲＡＧＥファミリーと呼称される
。加えて、遺伝子のＲＡＧＥファミリーの１つのメンバーから誘導されるＴＲＡ
はＨＬＡ−Ｂ７分子によって提示されることが教示されている。この開示は、更
なるＴＲＡＰ及びＴＲＡが種々の供給源に由来し得ることを示している。

【００１５】米国特許５，５８９，３３４（これは全体を参照して本明細書に組み入れる）
中には、上記遺伝子のいずれにも由来しないもう１つのＴＲＡＰが教示されてい
る。このＴＲＡＰをコードしている遺伝子はＭＵＭ−１と呼称される。腫瘍拒絶
抗原、ＬＢ−３３がこの出願中に記載されている。

【００１６】１９９５年１月１７日に出願されそして発明の名称「ＨＬＡ分子によって提示
される抗原にプロセシングされる腫瘍拒絶抗原前駆体をコードしている単離核酸
分子及びその使用」の米国特許出願番号０８／３７３，６３６（これは全体を参
照して本明細書に組み入れる）中には、ＬＢ３３から誘導されそしてＨＬＡ−Ｂ
１３、ＨＬＡ−Ｃｗ６、ＨＬＡ−Ａ２８及びＨＬＡ−Ａ２４によって提示される
他の複数のＴＲＡＰが教示されている。

【００１７】１９９６年４月１１日に公開されそして発明の名称「腫瘍拒絶抗原前駆体ＤＡ
ＧＥをコードしている単離核酸分子及びその使用」のＰＣＴ公開ＷＯ９６／１０
５７７（これは全体を参照して本明細書に組み入れる）中には、上記遺伝子のい
ずれにも由来しないもう１つのＴＲＡＰが教示されている。このＴＲＡＰはＤＡ
ＧＥと呼称されたが、現在はＰＲＡＭＥと呼称されている。ＨＬＡ−Ａ２４によ
って提示される腫瘍拒絶抗原がこの出願中に記載されている。

【００１８】米国特許５，８２１，１２２（これは全体を参照して本明細書に組み入れる）
中には、上記遺伝子のいずれにも由来しないもう１つのＴＲＡＰが教示されてい
る。このＴＲＡＰはＮＡＧと呼称される。ＮＡＧから誘導されそしてＨＬＡ−Ａ
２によって提示される種々のＴＲＡがこの出願中に教示されている。

【００１９】米国特許５，５８７，２８９（これは全体を参照して本明細書に組み入れる）
中には、上記遺伝子のいずれにも由来しない３つのＴＲＡＰが教示されている。
これらのＴＲＡＰはＭＡＧＥ−Ｘｐ２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３及びＭＡＧＥ−Ｘｐ４
と呼称されたが、現在はＭＡＧＥ−Ｂ遺伝子と呼称されている。

【００２０】上記した論文、特許及び特許出願によって提示されている研究は、大部分が、
遺伝子のＭＡＧＥファミリー、ＢＡＧＥ遺伝子、ＧＡＧＥ遺伝子及び遺伝子のＲ
ＡＧＥファミリーを取り扱っている。

【００２１】現在知られている個々の腫瘍抗原は腫瘍の或るフラクションでしか発現され得
ないので、更なる腫瘍抗原が利用可能になると、治療介在に潜在的に適している
患者の割合は顕著に増大するであろう。それ故、種々の癌を有しているより多く
の癌患者に適用可能な治療法や診断法を開発するための更なる腫瘍抗原に対する
需要が現在存在している。

【００２２】本発明について以下の開示中で更に詳述する。

【００２３】発明の要約上記ＴＲＡＰのいずれとも関係のない遍在的に発現される遺伝子、ＲＵＲ−１
のリバースストランドが腫瘍関連パターンで発現されることが今や見いだされた
。本発明は上記遺伝子のフォワード及びリバースストランドに由来する単離核酸
分子を提供し、そしてこれら単離核酸分子の幾つかは腫瘍関連ポリペプチドをコ
ードしている。本発明はまた、このような分子を含有する発現ベクター及びこの
ような分子でトランスフェクションされている宿主細胞並びに上記核酸分子によ
ってコードされている単離ポリペプチド（これら単離ポリペプチドの腫瘍拒絶抗
原前駆体及びフラグメントを含む）も提供する。上記の単離核酸分子及びポリペ
プチドは腫瘍関連遺伝子の発現によって特徴付けられる状態の診断、予後又は治
療で使用することができる。

【００２４】本発明の１つの局面に従って、単離核酸分子が提供される。この単離核酸分子
は、ＲＵＲ−１センスコード化又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプチ
ドをコードしており、かつ配列番号：１のヌクレオチド配列及び配列番号：４の
ヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する分子とス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子、遺伝暗号の縮重のため
コドン配列が上記核酸分子の核酸分子と異なっている核酸分子及び上記核酸分子
のいずれかの相補体からなる群から選択される。或る実施態様では、上記単離核
酸分子は配列番号：１のヌクレオチド配列、配列番号：１のヌクレオチド配列の
コード領域、配列番号：４の核酸配列又は配列番号：４の核酸配列のコード領域
を含んでいる。好ましい実施態様では、上記単離核酸分子は配列番号：１のヌク
レオチド配列又は配列番号：４のヌクレオチド配列からなっている。

【００２５】本発明のもう１つの局面に従って、配列番号：１のヌクレオチド１〜１３８２
での１２から１３８１連続ヌクレオチド長の間のユニークフラグメント、配列番
号：４のヌクレオチド１〜２１６７での１２から２１６６連続ヌクレオチド長の
間のユニークフラグメント又はこれらユニークフラグメントの相補体である単離
核酸分子が提供される。上記ユニークフラグメントには配列番号：１０又は配列
番号：１１に述べられているヌクレオチド配列だけからなる核酸分子は含まれな
い。幾つかの実施態様では、上記ユニークフラグメントは上記した核酸分子の少
なくとも１４連続ヌクレオチド、１５連続ヌクレオチド、１６連続ヌクレオチド
、１８連続ヌクレオチド、２０連続ヌクレオチド、２２連続ヌクレオチド、２５
連続ヌクレオチド又はそれ以上の連続ヌクレオチドを有する核酸分子である。上
記核酸分子の１２又はそれより大きな全長までのヌクレオチドの核酸分子の各々
のフラグメント及び全てのフラグメントが本発明に包含される。他の実施態様で
は、上記ユニークフラグメントは上記核酸分子の１２から３２の間の連続ヌクレ
オチドを有する核酸分子である。好ましくは、上記単離核酸分子は配列番号：１
０又は配列番号：１１中に存在していない少なくとも５連続ヌクレオチドを含ん
でいる。

【００２６】本発明のなお他の局面に従って、上記核酸のいずれかの単離核酸分子を含んで
おり、プロモーターと作動可能に(operably)結合されている発現ベクターが提供
される。これら発現ベクターで形質転換又はトランスフェクションされている宿
主細胞も提供される。任意に、上記宿主細胞はＨＬＡ分子を発現する。

【００２７】本発明のなおもう１つの局面に従って、単離ポリペプチドが提供される。この
単離ポリペプチドは上記単離核酸分子のいずれかによってコードされている。上
記単離ポリペプチドの機能的改変体も提供される。或る実施態様では、上記単離
ポリペプチドは配列番号：２、配列番号：３又は配列番号：５に述べられている
アミノ酸配列を有している。

【００２８】本発明のもう１つの局面では、配列番号：３のアミノ酸配列を含んでいる単離
ポリペプチドが提供される。

【００２９】本発明のもう１つの局面に従って、配列番号：２の９から８３アミノ酸長の間
のユニークフラグメント又は配列番号：５の９から４７５アミノ酸長の間のユニ
ークフラグメントである単離ポリペプチドが提供される。或る実施態様では、上
記ユニークフラグメントはポリペプチド結合作用物、好ましくは抗体又は細胞傷
害性Ｔリンパ球と結合する。

【００３０】本発明のなおもう１つの局面に従って、上記単離核酸分子によってコードされ
ているポリペプチドと選択的に結合する単離ポリペプチドが提供される。或る実
施態様では、上記単離ポリペプチドは抗体のＦａｂ又はＦ（ａｂ）_２フラグメン
ト、該ポリペプチドに対して選択的なＣＤＲ３領域を含んでいる抗体のフラグメ
ント又はモノクローナル抗体である。

【００３１】本発明はもう１つの局面で、腫瘍関連ポリペプチド前駆体をコードしている核
酸の発現の存在を検出するためのキットを提供する。このキットは、各々が配列
番号：１のヌクレオチド１〜１３８２での１２〜３２ヌクレオチド連続断片及び
その相補体からなる群から選択される分子からなる１対の単離核酸分子を含んで
おり、その際上記連続断片は重複していない。幾つかの実施態様では、上記単離
核酸分子対は、配列番号：１のヌクレオチド配列を含んでいる単離核酸分子を選
択的に増幅するように構築されそして配列される。或る好ましい実施態様では、
上記単離核酸分子対は配列番号：８及び配列番号：９である。他の好ましい実施
態様では、上記単離核酸分子対はＰＣＲプライマーであり、その際これらプライ
マーの１つは配列番号：１のユニークフラグメントである。

【００３２】本発明のなおもう１つの局面に従って、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ核酸
分子の発現又はその発現産生物によって特徴付けられる疾患の診断方法が提供さ
れる。これらの方法は、対象から単離した生物学的試料を請求項１に記載の単離
ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ核酸分子又はその発現産生物と選択的に結合す
る作用物と接触させ、そしてこの疾患の測定として、作用物と上記核酸分子又は
発現産生物間の相互作用を測定することを含んでいる。或る実施態様では、上記
作用物は配列番号：１若しくはそのユニークフラグメントを含んでいる核酸分子
、細胞傷害性Ｔリンパ球又は抗体若しくは抗体フラグメントである。他の実施態
様では、上記相互作用は上記核酸分子の少なくとも一部分を増幅することによっ
て測定される。なお他の実施態様では、上記生物学的試料は、非肝臓組織、非腎
臓組織、非膀胱組織及び非精巣組織からなる群から選択される組織から単離され
る。

【００３３】本発明のなおもう１つの局面に従って、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコー
ド化腫瘍関連ポリペプチドの発現によって特徴付けられる疾患を有する対象の治
療方法が提供される。これらの方法は上記対象に上記疾患を改善するのに充分な
量の、ＨＬＡ分子とＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプ
チドから誘導される腫瘍拒絶抗原との複合体の存在を上記対象内で選択的に豊富
化する作用物を投与することを含んでいる。幾つかの実施態様では、上記作用物
は配列番号：３のアミノ酸配列、その免疫原性フラグメント又はその機能的改変
体を含んでいる単離ポリペプチドである。他の実施態様では、上記疾患は肝臓癌
、腎臓癌、膀胱癌及び精巣癌以外の癌である。

【００３４】本発明のもう１つの局面に従って、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ核酸分子
の発現又はその発現産生物によって特徴付けられる疾患を有する対象の治療方法
が提供される。これらの方法は上記疾患を改善するのに充分な量の自己由来細胞
傷害性Ｔ細胞を上記対象に投与することを含んでいる。細胞傷害性Ｔ細胞はＨＬ
Ａ分子とＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチド、その
免疫原性フラグメント又はその機能的改変体との複合体に特異的である。幾つか
の実施態様では、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチ
ドは配列番号：３のアミノ酸配列を含んでいる。或る実施態様では、上記疾患は
、好ましくは肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌及び精巣癌以外の癌である。

【００３５】本発明はまた、もう１つの局面では、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ核酸分
子の発現又はその発現産生物によって特徴付けられる疾患を有する患者の治療方
法も提供する。これらの方法は上記対象に上記疾患を改善するのに充分な量の、
ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチド又はその免疫原
性フラグメント若しくはその機能的改変体を投与することを含んでいる。或る実
施態様では、上記ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチ
ドは配列番号：３のアミノ酸配列を含んでいる。他の実施態様では、上記疾患は
、好ましくは肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌及び精巣癌以外の癌である。

【００３６】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチドに特異的な細
胞傷害性Ｔ細胞でＴ細胞集団を選択的に豊富化する方法も提供される。これらの
方法は、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチド、その
免疫原性フラグメント又はその機能的改変体とＨＬＡ提示分子との複合体を提示
している作用物と単離Ｔ細胞集団を、この単離Ｔ細胞集団を上記細胞傷害性Ｔ細
胞で選択的に豊富化するのに充分な量で接触させることを含んでいる。或る実施
態様では、上記のＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチ
ドは配列番号：３のアミノ酸配列を含んでいる。好ましくは、上記作用物はＲＵ
Ｒ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチド及びＨＬＡ分子を発
現する細胞である。

【００３７】上記の全ての方法において、投与される量は有効な量である。

【００３８】本発明の他の局面に従って、ワクチン組成物が提供される。これらのワクチン
組成物はＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチド若しく
はその免疫原性フラグメントをコードしている核酸、これらの核酸によってコー
ドされているポリペプチド若しくはフラグメント、又は上記核酸、ポリペプチド
若しくはその免疫原性フラグメントを発現する細胞を含んでいる。好ましくは、
上記のＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチド又はその
免疫原性フラグメントは配列番号：３のアミノ酸配列を含んでいる。或る実施態
様では、上記ワクチン組成物は、非ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫
瘍関連ポリペプチド又はその免疫原性フラグメントである第２の腫瘍関連ポリペ
プチド又はその免疫原性フラグメントをコードしている核酸を更に含んでいる。
他の実施態様では、上記ワクチン組成物は、非ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ
コード化腫瘍関連ポリペプチド又はその免疫原性フラグメントである第２の腫瘍
関連ポリペプチド又はその免疫原性フラグメントを含んでいる。なお他の実施態
様では、上記ワクチン組成物はいずれもアジュバント及び／又は薬学的に許容し
うる担体も含んでいる。

【００３９】本発明のもう１つの局面に従って、配列番号：３のアミノ酸配列を含んでいる
ポリペプチド又はその免疫原性フラグメントをコードしているヌクレオチド配列
を含んでいる単離核酸分子が提供される。幾つかの実施態様では上記核酸分子は
また、非ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチド又はそ
の免疫原性フラグメントである第２の腫瘍関連ポリペプチド又はその免疫原性フ
ラグメントをコードしているヌクレオチド配列も含んでいる。

【００４０】本発明のなお他の局面に従って、単離ＲＵＲ−１センス若しくはＲＵＲ−１ア
ンチセンス核酸又はこれら核酸によってコードされているポリペプチド及び薬学
的に許容しうる担体を含んでいる組成物が提供される。

【００４１】本発明はもう１つの局面では、ＲＵＲ−１アンチセンス核酸分子の発現又はそ
の発現産生物によって特徴付けられる疾患の予後を測定する方法を提供する。こ
れらの方法は、（ａ）対象から１回目に単離された生物学的試料を、請求項１に
記載の単離ＲＵＲ−１アンチセンス核酸分子又はその発現産生物と選択的に結合
する作用物と接触させ、（ｂ）１回目の疾患状態の測定として上記作用物と上記
核酸分子又は上記発現産生物間の相互作用を測定し、（ｃ）上記対象から２回目
に単離された第２の生物学的試料を上記作用物と接触させ、（ｄ）２回目の上記
疾患状態の測定として上記作用物と上記第２の生物学的試料中の上記核酸分子又
は上記発現産生物間の相互作用を測定し、そして（ｅ）予後の決定として、上記
の1回目及び２回目の疾患状態を比較する段階を含んでいる。或る実施態様では
、上記作用物は配列番号：１のヌクレオチド配列若しくはそのユニークフラグメ
ント又は細胞溶解性Ｔリンパ球或いは抗体若しくは抗体フラグメントを含んでい
る核酸分子である。他の実施態様では、上記相互作用は上記核酸分子の少なくと
も一部分を増幅することによって測定される。なお他の実施態様では、上記生物
学的試料は非肝臓組織、非腎臓組織、非膀胱組織及び非精巣組織からなる群から
選択される組織から単離される。

【００４２】医薬品調製における上記組成物の使用も提供される。特に、癌治療用の医薬品
調製において上記組成物を使用することが提供される。

【００４３】上記核酸分子、ポリペプチド及び免疫原性フラグメントの機能的改変体も、ヌ
クレオチド又はアミノ酸配列の付加、置換及び欠失を含んでいる改変体を含めて
、本発明に包含される。

【００４４】本発明のこれらの目的や他の目的は、本発明の詳細な説明に関連して更に詳細
に記載する。

【００４５】配列の簡単な説明配列番号：１はＲＵＲ−１アンチセンス（４．１）ｃＤＮＡクローンのヌクレ
オチド配列である。配列番号：２は、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡでコードされているポリペ
プチドのアミノ酸配列である。配列番号：３はＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプチドから誘導される
腫瘍拒絶抗原のアミノ酸配列である。配列番号：４はＲＵＲ−１センス（Ｉ．１）ｃＤＮＡクローンのヌクレオチド
配列である。配列番号：５はＲＵＲ−１ｃＤＮＡでコードされているポリペプチドのアミノ
酸配列である。配列番号：６はＶＤＥ８７プライマーのヌクレオチド配列である。配列番号：７はＶＤＥ９３プライマーのヌクレオチド配列である。配列番号：８はＶＤＥ１１９プライマーのヌクレオチド配列である。配列番号：９はＶＤＥ１２０プライマーのヌクレオチド配列である。配列番号：１０はＥＳＴＡＡ８６３４４３のヌクレオチド配列である。配列番号：１１はＥＳＴＡＡ００４５８７のヌクレオチド配列である。

【００４６】発明の詳細な説明以下の実施例は、ポリペプチドをコードしておりそして腫瘍試料及び腫瘍由来
細胞系で優先的に発現される核酸分子の単離を示す。しかしながら、これらの単
離された核酸分子は、上記で述べた参照文献中に記載されているこれまでに開示
されたコード化配列のいずれとも相同ではない。それ故、本発明の１つの局面は
、本明細書で「ｃＤＮＡ４．１」、「ＲＵＲ−１アンチセンス(antisense)」又
は「ＲＵＲ−１アンチパラレル(antipararell)」ｃＤＮＡ又は核酸、「ＲＵＲ−
１リバースストランド(reverse strand)」等と呼称されており、配列番号：１に
述べられているヌクレオチド配列の全て又はユニーク部分を含んでいる単離核酸
分子である。この配列は、上記参照文献中に記載されている任意の遺伝子の配列
と比較することによって分かるように、ＭＡＧＥ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＲＡＧ
Ｅ、ＬＢ３３／ＭＵＭ−１、ＰＲＡＭＥ、ＮＡＧ又はＭＡＧＥ−Ｂ配列のいずれ
でもない。配列番号：１に述べられている核酸は、全く予期されなかったことに
、遍在的に発現される遺伝子のアンチパラレル又はリバースストランドを表して
いることが決定された。本明細書で「ｃＤＮＡＩ．１」、「ＲＵＲ−１センスｃ
ＤＮＡ」、「ＲＵＲ−１」等と呼称されている上記の遍在的に発現される遺伝子
のヌクレオチドは配列番号：４として提供される。それ故、本発明では配列番号
：４に述べられているヌクレオチド配列の全て又は一部分を含んでいる核酸も提
供される。

【００４７】かくして本発明は、ＲＵＲ−１センス及びアンチセンス核酸、これら核酸によ
ってコードされているポリペプチド、それらの機能的相同体、修飾体及び改変体
、これらの有用なフラグメント、並びにそれらに関連した治療法及び診断法に係
わっている。

【００４８】更に、ＲＵＲ−１コード化ポリペプチド又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化
ポリペプチドもコードしておりそして配列番号：１（ＲＵＲ−１アンチセンスｃ
ＤＮＡ）又は配列番号：４（ＲＵＲ−１センスｃＤＮＡ）に述べられているヌク
レオチド配列からなる核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブダイズする
ような核酸配列も本発明の一部分である。これらの相補体も本発明に包含される
。

【００４９】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡの場合における腫瘍関連ポリペプチド前駆体
であるような核酸はＤＮＡ、ＲＮＡであるか又はデオキシリボヌクレオチドとリ
ボヌクレオチドの混合物から構成されていることができる。これらの核酸はまた
、合成の非天然ヌクレオチドを組み入れることもできる。腫瘍関連核酸又はポリ
ペプチドは腫瘍細胞内で優先的に発現される核酸又はポリペプチドである。正常
及び腫瘍細胞内における核酸及び／又はポリペプチドの発現を測定する種々の方
法は当業者に知られており、そしてこれらを以下で更に記載する。本明細書で使
用するとき、腫瘍関連ポリペプチドにはタンパク質、タンパク質フラグメント及
びペプチドが含まれる。特に、腫瘍関連ポリペプチドには複数のＴＲＡＰ及びＴ
ＲＡが含まれる。

【００５０】本明細書で使用するとき、用語「ストリンジェントな条件」とは当該技術分野
でよく知られているパラメーターを言う。更に詳細には、本明細書で使用すると
き、ストリンジェントな条件とはハイブリダイゼーション緩衝液（３．５×ＳＳ
Ｃ、０．０２％フィコール、０．０２％ポリビニルピロリドン、０．０２％ウシ
血清アルブミン、２５ｍＭＮａＨ_２ＰＯ_４（ｐＨ７）、０．５％ＳＤＳ、２ｍ
ＭＥＤＴＡ）中６５℃でのハイブリダイゼーションを言う。ＳＳＣは０．１５
Ｍ塩化ナトリウム／０．０１５Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ７、であり；ＳＤＳ
はドデシル硫酸ナトリウムであり；そしてＥＤＴＡはエチレンジアミン四酢酸で
ある。ハイブリダイゼーション後に、核酸が移送されているメンブレンは室温で
２×ＳＳＣで、そしてその後６５℃で０．１×ＳＳＣ/０．１×ＳＤＳで洗浄す
る。

【００５１】使用することができ、そして同じ程度のストリンジェント性をもたらす他の条
件、試薬等が存在する（例えば、Molecular Cloning: A Laboratory Manual、J.
Sambrook他編集、第２版、Cold Spring Harbor Laboratory Press、ニューヨー
ク州コールドスプリングハーバー、１９８９年又はCurrent Protocols in Molec
ular Biology、F.M. Ausbel他編集、John Wiley & Sons, Inc.、ニューヨーク、
参照）。熟練技術者はこのような条件に精通しているであろうから、これら条件
はここでは示さない。しかしながら、熟練技術者はこれらの条件を、本発明のＲ
ＵＲ−１センス及びアンチセンス核酸分子の相同体及び対立遺伝子の明確な同定
を可能にする態様で操作できることが理解されよう。熟練技術者はまた、上記分
子を発現させるために細胞、好ましくは癌細胞及びライブラリーをスクリーニン
グし、そしてその後上記分子を定型的に単離し、続いて関連核酸を単離し、そし
て配列を決定する方法にも精通している。好ましい相同体及び対立遺伝子は、上
記ＲＵＲ−１センス及びアンチセンス核酸分子と少なくとも約７５％の同一性、
好ましくは少なくとも約９０％の同一性、更に好ましくは少なくとも約９５％の
同一性、そして最も好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有しているもので
ある。

【００５２】本明細書で開示されている核酸は、標準的なハイブリダイゼーション方法に従
ってＲＵＲ−１アンチセンス又はセンス核酸の発現を測定するのに有用である。
これらの核酸はまた、ＲＵＲ−１センスコード化又はＲＵＲ−１アンチセンスコ
ード化ポリペプチドをインビトロ又はインビボで発現させるために使用すること
もできる。これらの核酸はまた、例えば抗体の調製に有用なＲＵＲ−１センスコ
ード化又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプチドのフラグメントを調製
するために使用することもできる。他の多くの用途は熟練技術者に明白であろう
。

【００５３】ＲＵＲ−１センス又はアンチセンス核酸ファミリーメンバーのスクリーニング
では、放射性プローブと一緒に上記条件を使用してサザンブロット法を実施する
ことができる。好ましくはハイブリダイゼーションは、ＲＵＲ−１アンチセンス
ｃＤＮＡ又はＲＵＲ−１センスｃＤＮＡのコード領域又はそれらの一部分を含ん
でいるプローブを使用して実施される。核酸が最終的に移送されているメンブレ
ンを洗浄した後、放射性シグナルを検出するために上記メンブレンをｘ線フィル
ムに対して配置することができる。

【００５４】本発明にはまた、天然物中に存在するコドンの代替コドンを含んでいる縮重核
酸も含まれる。例えば、セリン残基はコドンＴＣＡ、ＡＧＴ、ＴＣＣ、ＴＣＧ、
ＴＣＴ及びＡＧＣでコードされる。これら６つの各コドンはセリン残基をコード
する目的では等価である。それ故、これらセリンをコードしているヌクレオチド
トリプレットはいずれも、インビトロ又はインビボで、タンパク質合成装置にセ
リン残基を組み入れるように指令するために使用することができることは当業者
に明白であろう。同様に、他のアミノ酸残基をコードしているヌクレオチド配列
トリプレットには：ＣＣＡ、ＣＣＣ、ＣＣＧ及びＣＣＴ（プロリンのコドン）；
ＣＧＡ、ＣＧＣ、ＣＧＧ、ＣＧＴ、ＡＧＡ及びＡＧＧ（アルギニンのコドン）；
ＡＣＡ、ＡＣＣ、ＡＣＧ及びＡＣＴ（スレオニンのコドン）；ＡＡＣ及びＡＡＴ
（アスパラギンのコドン）:並びにＡＴＡ、ＡＴＣ及びＡＴＴ（イソロイシンの
コドン）が含まれるが、これらに限定されない。他のアミノ酸残基も同様に、多
数のヌクレオチド配列でコード化されていることができる。かくして、本発明は
、遺伝暗号の縮重のため生物学的に単離された核酸とコドン配列が異なっている
縮重核酸を包含する。

【００５５】本発明はまた、配列番号：１若しくは配列番号：４の単離されたユニークフラ
グメント、又は配列番号：１若しくは配列番号：４の相補体も提供する。ユニー
クフラグメントは、より大きな核酸の「折記号(signature)」となるものである
。ユニークフラグメントは例えば、その正確な配列がＲＵＲ−１遺伝子ファミリ
ー、即ちＲＵＲ−１ｃＤＮＡ及び／又はＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡとハ
イブリッドを形成しそして関連タンパク質をコードしている分子以外の分子中に
は見られないことを確保する程充分に長い。ユニークフラグメントは、サザンブ
ロットアッセイでプローブとして使用してファミリーメンバーを同定することが
できるか又はＰＣＲを用いるような増幅アッセイで使用することができる。当業
者に知られているように、サザンブロットのような或る種の用途には２００ヌク
レオチド又はそれより多い（例えば、２００、２５０、３００、４００、５００
ヌクレオチド）ような大きなプローブが好ましいが、ＰＣＲのような用途にはよ
り小さなフラグメントが好ましいであろう。ユニークフラグメントはまた、抗体
若しくはペプチド産生用又はイムノアッセイ構成成分産生用の融合タンパク質を
産生させるために使用することもできる。ユニークフラグメントは更に、本発明
のＲＵＲ−１センスコード化及び／又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化タンパ
ク質の発現を阻止するために、特に以下で更に詳細に記載されているような治療
目的のためにアンチセンス分子として使用することができる。

【００５６】当業者によって認識されるように、上記ユニークフラグメントのサイズはその
遺伝暗号の保存性に依存するであろう。かくして、配列番号：１又は配列番号：
４及びこれらの相補体の幾つかの領域はより長い断片がユニークであることが必
要であるが、他の領域はほんの短い、典型的には１２から３２ヌクレオチドの間
（例えば、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２
２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１及び３２ヌクレオ
チド長）の断片しかユニークである必要はないであろう。１８又はそれより長い
ヌクレオチド長の、配列番号：１若しくは配列番号：４又はこれらの相補体の実
質的に全ての断片はユニークであろう。しかしながら、ＲＵＲ−１アンチセンス
のユニークフラグメントには、配列番号：１と重複している配列番号：１０（Ge
nBank受理番号ＡＡ８６３４４３を有するＥＳＴ）のヌクレオチド配列から完全
に構成されているフラグメントは含まれない。ＲＵＲ−１センスのユニークフラ
グメントには、配列番号：４と重複している配列番号：１１（GenBank受理番号
ＡＡ００４５８７を有するＥＳＴ）のヌクレオチド配列から完全に構成されてい
るフラグメントは含まれない。配列番号：１０又は配列番号：１１の配列から完
全に構成されているフラグメントは、それぞれＲＵＲ−１アンチセンス又はＲＵ
Ｒ−１センス核酸に特有のどのヌクレオチドも全く含んでいないフラグメントで
ある。或る実施態様では、ＲＵＲ−１アンチセンス又はＲＵＲ−１センス核酸の
ユニークフラグメントは、配列番号：１０又は配列番号：１１中に存在していな
い（例えば、配列番号：１又は配列番号：４中に存在している）少なくとも５連
続ヌクレオチドを含んでいる；好ましいユニークフラグメントは、配列番号：１
０又は配列番号：１１中には存在していない６、７、８、９、１０、１２、１４
、１６、１８、２０又はそれより長いヌクレオチドを有するものである。当業者
は、典型的には、非ファミリーメンバーから問題の配列を選択的に識別する上記
ユニークフラグメントの能力に基づいて、上記のような配列を選択する方法に精
通している。既知のデータベースに寄託されている他の配列とＲＵＲ−１アンチ
センス又はＲＵＲ−１センス核酸フラグメントの配列を比較することが典型的に
は必要な全てであるが、インビトロ確認ハイブリダイゼーション(in vitro conf
irmatory hybridization)及び配列決定分析を実施することができる。

【００５７】本発明の１つの実施態様では、単離核酸分子にはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣ
Ｒ）のような核酸増幅アッセイに有用なプライマーが含まれる。選択的に増幅す
るように構築されそして配列された任意のＰＣＲプライマー対には、例えば、Ｒ
ＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ核酸、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ特異的プ
ライマーを使用することができる。このようなプライマーは、ＲＵＲ−１アンチ
センスｃＤＮＡと選択的にハイブリッドを形成しそして他の核酸とはハイブリッ
ドを形成しないＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡの連続した長さのものである。
このような特異的プライマーはＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ中の連続した長
さのヌクレオチドとだけは完全にハイブリッドを形成するが、ＲＵＲ−１アンチ
センスｃＤＮＡ特異的プライマーが結合するヌクレオチドを共有していない遺伝
子とはせいぜい部分的にしかハイブリッドを形成しないであろう。効率的なＰＣ
Ｒプライミング及びＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ同定用には、ＲＵＲ−１ア
ンチセンスｃＤＮＡ特異的プライマーはＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ以外の
遺伝子とは３’末端で効率的にハイブリッドを形成しないように構築しそして配
列すべきであろう。それ故、ハイブリダイゼーションの動力学(kinetics)は５’
末端でのハイブリダイゼーションを強く支持するであろう。この場合には、３’
で開始するＰＣＲ伸張は、５’及び３’の両末端が上記核酸とハイブリッドを形
成するときにしか生起しないであろう。ＲＵＲ−１センスｃＤＮＡに特異的なプ
ライマーは同様にして選択することができる。好ましくは、非同一性領域は少な
くとも１〜４ヌクレオチド長であり、そしてＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ又
はＲＵＲ−１センスｃＤＮＡ特異的プライマーの３’末端を形成する。このよう
なプライマーは好ましくは、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ又はＲＵＲ−１セ
ンスｃＤＮＡ核酸の１つにおけるその相補体と完全に相補的でありそして隣接し
ていよう。ＲＵＲ−１（センス又はアンチセンス）以外の遺伝子とハイブリッド
を形成したときにプライマーの３’末端で生じるミスマッチはこのような遺伝子
の効率的な増幅を妨げるであろう。代表的なプライマーには以下の配列表及び実
施例に記載されているものが含まれる。他のプライマーは、当業者が配列番号：
１又は配列番号：４の配列を互いにそしてデータベースに寄託されている既知の
配列と比較することによって調製することができる。他の代表的なプライマーは
、上記プライマーの５’末端から１、２、３、４、５又はそれより多くのヌクレ
オチドが付加又は欠失することによって上記プライマーと異なっていることがで
きる。或る場合には、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ又はＲＵＲ−１センスｃ
ＤＮＡ核酸分子を増幅させるために選択されたプライマーは分子サイズで容易に
識別可能な増幅産生物を提供する。このサイズの差異は、アガロース及びアクリ
ルアミドゲル電気泳動を含む当該技術分野の標準的な方法を使用して容易に識別
することができる。実質的に相同性のヌクレオチド配列を識別できる更なる方法
、例えばリガーゼ連鎖反応（「ＬＣＲ」）及び他の方法は熟練技術者に明白であ
ろう。

【００５８】核酸に関して本明細書で使用するとき、用語「単離されている」とは：（ｉ）
例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってインビトロで増幅されている
；（ｉｉ）クローニングによって組換え的に産生させられている；（ｉｉｉ）開
裂やゲル分離によるようにして精製されている；又は（ｉｖ）例えば、化学的合
成によって合成されていることを意味する。単離核酸分子は当該技術分野で周知
の組換えＤＮＡ技術によって容易に操作できるものである。それ故、５’及び３
’制限部位が知られているか又はそのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマ
ー配列が開示されているベクター内に含まれるヌクレオチド配列は単離されてい
るとみなされるが、天然宿主中に天然状態で存在する核酸配列は単離されている
とはみなされない。単離核酸は実質的に純粋であることができるが、純粋である
必要はない。例えば、クローニング又は発現ベクター内で単離されている核酸は
、これが存在する細胞内の物質をほんの僅かな割合で含んでいる点で純粋ではな
い。しかしながら、このような核酸は、この用語を本明細書で使用するとき、当
業者に知られている標準的な技術によって容易に処理できるので、単離されてい
る。本明細書で使用されている単離核酸分子は天然生起の染色体ではない。

【００５９】本発明はまた、配列番号：２又は配列番号：５のようなＲＵＲ−１アンチセン
ス核酸又はＲＵＲ−１センス核酸でコードされている、ユニークフラグメントを
含む単離ポリペプチドも提供する。このようなポリペプチドは、例えば、抗体を
産生させるために単独で若しくは融合タンパク質として、ＴＲＡペプチド（例え
ば、配列番号：３）として、イムノアッセイの構成成分として、又はＨＬＡ分子
及び／若しくはＣＴＬクローンのＲＵＲ−１若しくはＲＵＲ−１アンチセンスタ
ンパク質結合特異性を測定するために有用である。ポリペプチドに関して本明細
書で使用するとき、用語「単離されている」とは、単離核酸配列によってコード
されているポリペプチド、並びに、例えば、化学的合成方法によって合成されて
いるポリペプチド、及び生物学的材料から分離されそしてその後慣用のタンパク
質分析又は分離方法を使用して精製されているポリペプチドを意味する。上記ポ
リペプチドをコードしている核酸も本発明に包含される。好ましくは、ＲＵＲ−
１又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化タンパク質は、配列番号：２、配列番号
：３又は配列番号：５のいずれかに述べられているアミノ酸配列と少なくとも９
０％、更に好ましくは９５％、そして最も好ましくは９９％同一である。

【００６０】ＲＵＲ−１又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化タンパク質のユニークフラグ
メントは、一般的に、核酸に関連して上記で考察したようなユニークフラグメン
トの特性及び特徴を有している。当業者に認識されるように、ユニークフラグメ
ントのサイズは、そのフラグメントが保存されているタンパク質ドメインの一部
分を構成しているかどうかのようなファクターに依存するであろう。かくして、
配列番号：２及び配列番号：５の幾つかの領域はユニークであるためにより長い
断片を必要とするが、他の領域はほんの短い断片、典型的には５から１２個の間
のアミノ酸（例えば、５、６、７、８、９、１０、１１及び１２個アミノ酸長）
しか必要でないであろう。１０個又はそれより多くのアミノ酸長である配列番号
：２又は配列番号：５の実質的に全ての断片がユニークであろう。

【００６１】ポリペプチドのユニークフラグメントは、好ましくは、このポリペプチドの明
確な機能的能力を保持しているようなフラグメントである。ポリペプチドのユニ
ークフラグメント内で保持され得る機能的能力にはＨＬＡ分子による提示、抗体
との相互作用、他のポリペプチド又はそれらのフラグメントとの相互作用、核酸
の選択的結合及び酵素的活性が含まれる。腫瘍拒絶抗原は、ＨＬＡの結合や細胞
傷害性Ｔリンパ球との相互作用に関する機能的能力を保持している腫瘍関連ポリ
ペプチドのユニークフラグメントの１例である。ＨＬＡクラスＩ分子によって提
示される腫瘍拒絶抗原は典型的には９アミノ酸長であるが、８、９及び１０並び
にこれらより多くのアミノ酸も、細胞傷害性Ｔリンパ球応答を誘発するのに有効
な程度にまでＨＬＡ及び細胞傷害性Ｔリンパ球と相互作用する能力を保持してい
る（例えば、Van den Eynde & Brichard、Curr. Opin. Immunol. ７：６７４〜
６８１、１９９５年；Coulie他、Stem Cells １３：３９３〜４０３、１９９５
年、参照）。同様に、腫瘍拒絶抗原（例えば、１０〜２０個アミノ酸長）はＨＬ
ＡクラスＩＩ分子及びＴヘルパーリンパ球と相互作用し、Ｔヘルパーリンパ球の
増殖及び応答を誘発することができる（例えば、Van den Eynde & van der Brug
gen、Curr. Opin. Immunol. ９：６８４〜６９３、１９９７年；Topalian他、J
. Exp. Med. １８３：１９６５〜１９７１、１９９６年、参照）。

【００６２】当業者は、典型的には、問題のユニークアミノ酸配列を非ＲＵＲ−１又はＲＵ
Ｒ−１アンチセンスコード化ファミリーポリペプチドから選択的に識別するユニ
ークフラグメントの能力に基づいて、ユニークアミノ酸配列を選択する方法に精
通している。このフラグメントの配列を既知のデータベースの配列と比較するこ
とが典型的には必要な全てである。ＲＵＲ−１又はＲＵＲ−１アンチセンスコー
ド化ポリペプチドのユニークフラグメントの或る機能的な局面は、周知のコンピ
ューターアルゴリズムを使用してＲＵＲ−１センスコード化又はＲＵＲ−１アン
チセンスコード化ポリペプチドフラグメントを他のポリペプチドのフラグメント
と比較することによって測定することができる。例えば、ＨＬＡペプチド結合ア
ルゴリズム（the National Institutes of Health website [http://bimas.dcrt
.nih.gov]で利用可能；Parker他、J. Immunol. １５２：１６３、１９９４年）
を使用して、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡでコードされているタンパク質か
ら誘導されるペプチドのＨＬＡ結合特性を予測することができる。例えば、ＲＵ
Ｒ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化ペプチド（配列番号：３）のＨＬＡ−Ｂ７
結合スコア（解離半減期）は１２００と予測され、そしてこれはこのペプチドと
ＨＬＡ分子との非常に安定な相互作用を示している。

【００６３】熟練技術者はまた、保存的アミノ酸置換がＲＵＲ−１センスｃＤＮＡ又はＲＵ
Ｒ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化ポリペプチド内で行われて、これらポリペ
プチドの機能的相同体又は改変体が提供され得る、即ちこれらの相同体又は改変
体はＲＵＲ−１センスｃＤＮＡ又はＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化ポ
リペプチドの１つ又はそれより多くの機能的能力を保持することも認識するであ
ろう。本明細書で使用するとき、「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸置換が
なされるタンパク質の相対的荷電又はサイズ特性を変えないアミノ酸置換を言う
。アミノ酸の保存的置換には次のグループ：（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ；（ｂ）Ｆ、
Ｙ、Ｗ；（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ；（ｄ）Ａ、Ｇ；（ｅ）Ｓ、Ｔ；（ｆ）Ｑ、Ｎ；及び
（ｇ）Ｅ、Ｄ内のアミノ酸間でなされる置換が含まれる。

【００６４】ＲＵＲ−１センスｃＤＮＡ又はＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化ポリ
ペプチドの機能的相同体又は改変体は、当業者に知られているポリペプチド配列
改変方法を集めている参照文献、例えば、分子クローニング：実験室マニュアル
（Molecular Cloning: A Laboratory Manual）、ジェイ．サムブルック（J. Sam
brook）他編集、第２版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プ
レス（Cold Spring Harbor Laboratory Press）、ニューヨーク州コールドスブ
リングハーバー、１９８９年又は分子生物学における現在のプロトコール（Curr
ent Protocols in Molecular Biology）、エフ．エム．アウスベル（F.M. Ausbe
l）他編集、ジョーン・ウイリー・アンド・サンズ・インク．（John Wiley & So
ns, Inc.）、ニューヨーク、中に見いだされるような方法に従って調製すること
ができる。ＲＵＲ−１センスｃＤＮＡ又はＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコー
ド化ポリペプチドの代表的な機能的改変体には配列番号：２、配列番号：３及び
配列番号：５の保存的アミノ酸置換体が含まれる。ＲＵＲ−１センスｃＤＮＡ又
はＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化ポリペプチドの機能的改変体を産生
させるための上記ポリペプチドのアミノ酸配列内の保存的アミノ酸置換は典型的
には、このようなポリペプチドをコードしている核酸（配列番号：１、配列番号
：４）の改変によって行われる。このような置換は当業者に知られている多様な
方法で行うことができる。例えば、アミノ酸置換はＰＣＲ特異的突然変異(PCR-d
irected mutation)、クンケル（Kunkel）（Kunkel、Proc. Nat. Acad. Sci. U.S
.A. ８２：４８８〜４９２、１９８５年）の方法に従う部位特異的突然変異形成
(site-directed mutagenesis)又はポリペプチドをコードしているＲＵＲ−１セ
ンス若しくはアンチセンス核酸の化学的合成によって行うことができる。ＲＵＲ
−１センスｃＤＮＡ又はＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化ポリペプチド
の小さなユニークフラグメント、例えば９アミノ酸ペプチドに対してアミノ酸置
換を行う場合、これらの置換は上記ペプチドを直接合成することによって行うこ
とができる。

【００６５】ＲＵＲ−１センスｃＤＮＡ又はＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化ポリ
ペプチドの機能的相同体又は改変体（ユニークフラグメントを含む）の活性は、
細菌又は哺乳動物発現ベクター内に上記改変ポリペプチドをコードしている遺伝
子をクローニングし、このベクターを適当な宿主細胞内に導入し、この改変ポリ
ペプチドを発現させ、そして本明細書に開示されているようにしてポリペプチド
の機能的能力について試験することによって試験することができる。

【００６６】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化ＴＲＡの機能的改変体又は相同体に
関しては、上記したコンピューターアルゴリズムを使用し、ポリペプチド配列に
対して行い得るアミノ酸置換を予測して、ＨＬＡ結合を保持している機能的改変
体又は相同体を調製することができる。例えば、Ｆか又はＹ残基のどちらかによ
る配列番号：３の４位のＷの置換（これらは保存的アミノ酸置換である）はＴＲ
ＡペプチドとＨＬＡ−Ｂ７の結合に対して影響を有していないと予測される。対
照的に、配列番号：３の３位のＲ残基に対するＨ又はＫ置換はＨＬＡ結合を１０
倍低下させる（解離を増大させる）と予測される。次いで、このような改変ＴＲ
Ａペプチドは下記実施例に記載されているようにして生物学的活性について試験
することができる。

【００６７】上記したように、本発明はタンパク質をコードしているＲＵＲ−１センス又は
ＲＵＲ−１アンチセンス核酸分子と選択的に結合してＲＵＲ−１センス又はＲＵ
Ｒ−１アンチセンス核酸の転写及び／又は翻訳を低下させるアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドを包含する。これは、ＲＵＲ−１センス又はＲＵＲ−１アンチセン
ス遺伝子発現に起因する腫瘍細胞表現型の任意の局面を低下させることを含めて
、ＲＵＲ−１センス又はＲＵＲ−１アンチセンス遺伝子産生物発現の低下が望ま
しい実質的に全ての医学的条件下で望ましい。この態様でアンチセンス分子を使
用して、腫瘍細胞表現型の上記局面を減速又は抑制することができる。

【００６８】本明細書で使用するとき、用語「アンチセンスオリゴヌクレオチド」又は「ア
ンチセンス」によって、特定の遺伝子を含んでいるＤＮＡ又はその遺伝子のｍＲ
ＮＡ転写物と生理学的条件下でハイブリダイズし、そしてそれによって上記遺伝
子の転写及び／又はそのｍＲＮＡの翻訳を阻害するオリゴリボヌクレオチド、オ
リゴデオキシリボヌクレオチド、修飾オリゴリボヌクレオチド又は修飾オリゴデ
オキシリボヌクレオチドであるオリゴヌクレオチドが記載される。これらのアン
チセンス分子は、標的遺伝子とのハイブリダイゼーションによって標的遺伝子の
転写又は翻訳を妨げるように設計される。当業者は、上記アンチセンスオリゴヌ
クレオチドの正確な長さ及びその標的との相補性の程度が、標的の配列及びその
配列を構成する特定の塩基を含めて、選択される特定の標的に依存することを認
識するであろう。上記アンチセンスオリゴヌクレオチドが生理学的条件下で上記
標的と選択的に結合するように、即ち、生理学的条件下で上記標的細胞内の他の
どの配列よりも上記標的配列と一層実質的にハイブリッドを形成するように構築
されそして配列されることが好ましい。配列番号：１及び／若しくは配列番号：
４に基づいて、又は対立遺伝子若しくは相同性ゲノム及び／若しくはＤＮＡ配列
に基づいて、当業者は本発明に従って使用するために多数の適当なアンチセンス
分子のいずれかを容易に選択しそして合成することができる。阻害に関して充分
選択的であり且つ強力であるためには、このようなアンチセンスオリゴヌクレオ
チドは、上記標的と相補的な少なくとも７個（Wagner他、Nature Biotechnology
１４：８４０〜８４４、１９９６年）、そして更に好ましくは少なくとも１５
個の連続塩基を含んでいるべきであろう。最も好ましくは、上記アンチセンスオ
リゴヌクレオチドは２０〜３０塩基の相補的配列を含んでいる。上記遺伝子又は
ｍＲＮＡ転写物の任意の領域とアンチセンスであるオリゴヌクレオチドを選択す
ることができるが、好ましい実施態様では、上記アンチセンスオリゴヌクレオチ
ドは、翻訳開始、転写開始又はプロモーター部位のようなＮ末端又は５’上流部
位に相当する。加えて、３’非翻訳領域を標的にすることができる。ｍＲＮＡス
プライシング部位の標的化も当該技術分野で使用されているが、代替的なｍＲＮ
Ａスプライシングが生起する場合にはより好ましくないと思われる。更に、上記
アンチセンスは、好ましくはｍＲＮＡの二次的な構造が予期されず（例えば、Sa
inio他、Cell Mol. Neurobiol. １４（５）：４３９〜４５７、１９９４年参照
）そしてタンパク質が結合すると予期されない部位に標的化される。最後に、配
列番号：１及び配列番号：４はｃＤＮＡ配列を開示しているが、当業者は、実施
例に記載されているようにして、これらのｃＤＮＡに対応するゲノムＤＮＡを容
易に誘導することができる。それ故、本発明はまた、配列番号：１及び配列番号
：４に対応するゲノムＤＮＡと相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドも提供
する。同様に、対立遺伝子又は相同ＤＮＡ及びゲノムＤＮＡに対するアンチセン
スは過度の実験をすることなく実施可能である。

【００６９】１組の実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは「天然の」
デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド又はこれらの任意の組合せから構
成されていることができる。即ち、１つの天然のヌクレオチドの５’末端ともう
１つの天然のヌクレオチドの３’末端は、天然の系の場合と同様に、ホスホジエ
ステルヌクレオシド間結合によって共有結合することができる。これらのオリゴ
ヌクレオチドは、手動で又は自動合成器で実施できる当該技術分野で認められて
いる方法によって調製することができる。これらはベクターによって組換え的に
産生させることもできる。

【００７０】しかしながら、好ましい実施態様では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオ
チドには「修飾」オリゴヌクレオチドも含めることができる。即ち、本発明のオ
リゴヌクレオチドは、標的とのハイブリッド形成は妨げないで安定性若しくは標
的化を高めるか、又はそうではなくて、治療的有効性を高める多数の方法で修飾
することができる。

【００７１】本明細書で使用するとき、用語「修飾オリゴヌクレオチド」によって、（１）
そのヌクレオチドのうち少なくとも２つが合成ヌクレオシド間結合（即ち、１つ
のヌクレオチドの５’末端ともう１つのヌクレオチドの３’末端間のホスホジエ
ステル結合以外の結合）によって共有結合しており、そして／又は（２）通常は
核酸と結合していない化学基が上記オリゴヌクレオチドと共有結合しているオリ
ゴヌクレオチドが記載される。好ましい合成ヌクレオシド間結合はホスホロチオ
エート、アルキルホスホネート、ホスホロジチオエート、ホスフェートエステル
、アルキルホスホノチオエート、ホスホラミデート、カルバメート、カルボネー
ト、ホスフェートトリエステル、アセタミデート、ペプチド及びカルボキシメチ
ルエステルである。

【００７２】用語「修飾オリゴヌクレオチド」は共有的に修飾された塩基及び／又は糖を有
するオリゴヌクレオチドも包含する。例えば、修飾オリゴヌクレオチドには、３
’位のヒドロキシル基及び５’位のリン酸基以外の低分子量有機基と共有結合し
ているバックボーン糖を有するオリゴヌクレオチドが含まれる。それ故、修飾オ
リゴヌクレオチドは２’−Ｏ−アルキル化リボース基を含んでいることができる
。加えて、修飾オリゴヌクレオチドはリボースの代わりにアラビノースのような
糖を含んでいることができる。修飾オリゴヌクレオチドはまた、Ｃ−５プロピン
修飾塩基（Wagner他、Nature Biotechnology １４：８４０〜８４４、１９９６
年）のような塩基類似体を含んでいることもできる。かくして、本発明は、薬学
的に許容しうる担体と一緒に、ポリペプチドをコードしているＲＵＲ−１センス
又はＲＵＲ−１アンチセンス核酸と相補的でありそして生理学的条件下でこれら
核酸とハイブリッドを形成できる修飾アンチセンス分子を含有する医薬製剤を意
図している。

【００７３】アンチセンスオリゴヌクレオチドは医薬組成物の一部として投与することがで
きる。このような医薬組成物は、当該技術分野で知られている任意の標準的な薬
学的に許容しうる担体と組み合わせたアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有し
ていることができる。これらの組成物は無菌であるべきであり、そして患者に投
与するのに適する重量又は容量単位で治療的に有効な量のアンチセンスオリゴヌ
クレオチドを含有しているべきである。用語「薬学的に許容しうる」は、上記活
性成分の生物学的活性の有効性を妨げない非傷害性物を意味している。上記担体
の特徴は投与経路に依存するであろう。薬学的に許容しうる担体には希釈剤、充
填剤、塩類、緩衝液、安定化剤、溶解剤及び当該技術分野で周知の他の物が含ま
れる。

【００７４】本発明が、ＲＵＲ−１センス及び／又はＲＵＲ−１アンチセンス配列を発現ベ
クター内で使用すること並びに原核（例えば、大腸菌）又は真核（例えば、ＣＨ
Ｏ細胞、ＣＯＳ細胞、酵母発現系及び昆虫細胞内での組換えバキュロウイルス発
現）の宿主細胞及び細胞系をトランスフェクションするために使用することを包
含することも実施例から分かるであろう。マウス、ハムスター、ブタ、ヤギ、霊
長類等のような哺乳動物細胞は特に有用である。これらは、マスト細胞、繊維芽
細胞、卵母細胞及びリンパ球を含む多種多様な組織タイプのものであることがで
き、そしてそれらは一次細胞又は細胞系であることができる。特定の例には樹状
細胞、Ｕ２９３細胞、末梢血白血球、骨髄幹細胞及び胚幹細胞が含まれる。上記
発現ベクターは、関連配列、即ち、上記したような核酸がプロモーターと作動可
能に結合していることを必要としている。ヒトＨＬＡクラスＩ分子はＲＵＲ−１
アンチセンス核酸分子（即ち、配列番号：３）によってコードされている腫瘍拒
絶抗原を提示することが知られているので、上記発現ベクターはこれらの遺伝子
やポリペプチドに由来する任意の特定の腫瘍拒絶抗原を提示するＨＬＡ分子（配
列番号：３のＴＲＡではＨＬＡ−Ｂ７）をコードしている核酸配列を含んでいる
こともできる。或いは、このようなＨＬＡ分子をコードしている核酸配列は別個
の発現ベクター内に含有されていることができる。上記ベクターが両コード化配
列を含有している状況では、単一のベクターを使用して、通常はこれらをどちら
も発現しない細胞をトランスフェクションすることができる。腫瘍拒絶抗原前駆
体及びこれを提示するＨＬＡ分子のコード化配列が別々の発現ベクターに含まれ
ている場合、これらの発現ベクターをコトランスフェクションすることができる
。例えば、上記宿主細胞がＲＵＲ−１アンチセンスコード化ＴＲＡを提示するＨ
ＬＡ分子を既に発現しているとき、腫瘍拒絶抗原前駆体コード化配列は単独で使
用することができる。勿論、使用できる特定の宿主細胞に制限はない。上記２つ
のコード化配列を含有するベクターは、所望の場合任意の抗原提示細胞内で使用
できるので、ＲＵＲ−１アンチセンスコード化ＴＲＡを提示するＨＬＡ分子を発
現しない宿主細胞内で、腫瘍拒絶抗原前駆体の遺伝子を使用することができる。
更に、細胞フリーの転写系を細胞の代わりに使用することができる。

【００７５】熟練技術者は、例えば、抗体を使用して個々のＨＬＡクラスＩ分子を特異的に
ブロックする実験によって、どのＨＬＡ分子が腫瘍拒絶抗原前駆体から誘導され
る腫瘍拒絶抗原と結合するのかを決定することができる。例えば、実施例中に示
されているように、ＨＬＡ−Ｂ７と選択的に結合する抗体は配列番号：３に述べ
られているＴＲＡの効率的な提示を妨げた。それ故、ＲＵＲ−１アンチセンスｃ
ＤＮＡコード化ポリペプチドから誘導される更なるＴＲＡの結合特異性は、広範
に入手可能な抗ＨＬＡ抗体を使用する同様な実験で決定することができる。

【００７６】本明細書で使用するとき、「ベクター」は、異なる遺伝子環境間での輸送又は
宿主細胞内での発現のために所望の配列を制限及び結合によって挿入できる多数
の核酸の任意のものであることができる。ベクターは典型的にはＤＮＡで構成さ
れているが、ＲＮＡベクターも利用可能である。ベクターにはプラスミド及びフ
ァージミドが含まれるが、これらに限定されない。クローニングベクターは、宿
主細胞内で複製することができ、そしてベクターを測定可能な態様で切断できそ
して新たな組換えベクターが宿主細胞内で複製能力を保持するように所望のＤＮ
Ａ配列を結合できる１つ又はそれより多くのエンドヌクレアーゼ制限部位によっ
て更に特徴付けられるものである。プラスミドの場合には、所望の配列の複製は
、このプラスミドが宿主細菌内でコピー数を増すにつれて多数回、又は宿主が有
糸分裂で再生産する前に宿主当たり正確に１回生起することができる。ファージ
の場合には、複製は溶菌相中能動的に又は溶原相中受動的に生起することができ
る。発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列が調節配列に作動可能に結合されてＲＮ
Ａ転写物として発現され得るように、所望のＤＮＡ配列を制限及び結合によって
挿入できるものである。ベクターは更に、ベクターで形質転換又はトランスフェ
クションされているか又はされていない細胞の同定で使用するのに適している１
つ又はそれより多くのマーカー配列を含有していることができる。マーカーには
、例えば、抗生物質又は他の化合物に対する耐性又は感受性のどちらかを増大又
は低下させるタンパク質をコードしている遺伝子、当該技術分野で知られている
標準的なアッセイでその活性を検出できる酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼ
又はアルカリホスファターゼ）をコードしている遺伝子、及び形質転換又はトラ
ンスフェクションされた細胞、宿主、コロニー又はプラークの表現型に可視的に
影響を与える遺伝子（例えば、グリーン蛍光タンパク質）が含まれる。好ましい
ベクターは、作動可能に結合されているＤＮＡ断片中に存在する構造遺伝子産生
物の自律複製及び発現が可能なものである。

【００７７】本明細書で使用されているように、コード配列と調節配列は、これらがコード
配列の発現又は転写を調節配列の影響下又は制御下にあるような態様で共有結合
しているとき、「作動可能に」結合していると言われる。上記コード配列が機能
的なタンパク質に翻訳されることが望ましい場合、５’調節配列にプロモーター
を導入した結果上記コード配列の転写が生じそしてこれら２つのＤＮＡ配列間の
結合の性質が（１）フレームシフト突然変異の導入をもたらさない、（２）上記
プロモーター領域が上記コード配列の転写を指令する能力を妨げない、又は（３
）対応するＲＮＡ転写物がタンパク質に翻訳される能力を妨げない場合、上記２
つのＤＮＡ配列は作動可能に結合していると言われる。それ故、プロモーター領
域が上記ＤＮＡ配列の転写に影響を与えることができ、その結果得られた転写物
が所望のタンパク質又はポリペプチドに翻訳され得る場合、このプロモーター領
域はコード領域と作動可能に結合されているであろう。

【００７８】遺伝子発現に必要な調節配列の正確な性質は種又は細胞タイプ間で変動する可
能性があるが、一般的には、必要に応じて、それぞれ転写及び翻訳の開始に係わ
る５’非転写及び５’非翻訳配列、例えば、ＴＡＴＡボックス、キャップ形成配
列、ＣＡＡＴ配列等を含んでいなければならない。特に、このような５’非転写
調節配列は、作動可能に結合した遺伝子の転写制御用プロモーター配列を含んで
いるプロモーター領域を含んでいよう。調節配列は、所望に応じて、エンハンサ
ー配列又は上流アクチベーター配列を含んでいることもできる。本発明のベクタ
ーは任意に、５’リーダー又はシグナル配列、５’又は３’を含んでいることが
できる。適当なベクターの選択および設計は当業者の能力及び自由裁量の範囲内
である。

【００７９】発現に必要な要素を全て含有する発現ベクターは商業的に入手可能であり、そ
して当業者に知られている。分子クローニング：実験室マニュアル、ジェイ．サ
ムブルック他編集、第２版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・
プレス、ニューヨーク州コールドスブリングハーバー、１９８９年参照。細胞は
、ＲＵＲ−１センスコード化若しくはＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプ
チド又はこれらのフラグメント若しくは改変体をコードしている異種ＤＮＡ（Ｒ
ＮＡ）を細胞内に導入することによって遺伝子的に操作される。上記異種ＤＮＡ
（ＲＮＡ）は宿主細胞内での異種ＤＮＡの発現を可能にするために転写要素の作
動可能な制御下に置かれる。

【００８０】哺乳動物細胞内でのｍＲＮＡ発現に好ましい系は、Ｇ４１８耐性（これは安定
的にトランスフェクションされた細胞系の選択を助長する）及びヒトサイトメガ
ロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサー・プロモーター配列を付与する遺伝子のよう
な選択可能マーカーを含有するｐＲｃ／ＣＭＶ（Invitrogen、カリフォルニア州
サンジエゴから入手可能）のような系である。更に、エプスタイン・バー・ウイ
ルス（ＥＢＶ）複製起点を含有しており、多コピー染色体外要素としてプラスミ
ドの維持を助長するｐＣＥＰ４ベクター（Invitrogen）は霊長類又はイヌ細胞系
における発現に適している。もう１つの発現ベクターは、ポリペプチド延長因子
１αのプロモーターを含有するｐＥＦ−ＢＯＳプラスミドであり、そしてこれは
インビトロで転写を効率的に刺激する。このプラスミドはミシズマ（Mishizuma
）及びナガタ（Nagata）（Nuc. Acids Res. １８：５３２２、１９９０年）によ
って記載されており、そして転写実験におけるその使用は、例えば、デモウリン
（Demoulin）（Mol. Cell. Biol. １６：４７１０〜４７１６、１９９６年）に
よって開示されている。なおもう１つの好ましい発現ベクターはストラトフォー
ド・ペリカウデット（Stratford-Perricaudet）によって記載されているアデノ
ウイルスであり、そしてこれはＥ１及びＥ３タンパク質を欠いている（J. Clin.
Invest. ９０：６２６〜６３０、１９９２年）。Ａｄｅｎｏ．Ｐ１Ａ組み換え
体としてのアデノウイルスの使用はＰ１Ａに対して免疫化するためにマウスの皮
内注射でワルニエル（Warnier）他によって開示されている（Int. J. Cancer、
６７：３０３〜３１０、１９９６年）。

【００８１】本発明はまた、所謂発現キットも包含し、そしてこれによって技術者は所望の
発現ベクター（単数又は複数）を調製することができる。このような発現キット
は、上記で考察した各コード化配列の少なくとも別個の部分を含んでいる。他の
構成成分は、必要な上記した配列が含まれている限り、所望に応じて、加えるこ
とができる。

【００８２】本発明はまた、ＲＵＲ−１センスコード化及び／又はＲＵＲ−１アンチセンス
コード化ポリペプチドと、そして或る実施態様では、好ましくはこれらポリペプ
チドのユニークフラグメントと結合する作用物にも係わっている。このような結
合パートナーは、ＲＵＲ−１センスコード化及び／又はＲＵＲ−１アンチセンス
コード化ポリペプチドの存在又は不存在を検出するためにスクリーニングアッセ
イで、そしてこのようなポリペプチドを単離するために精製プロトコールで使用
することができる。同様に、このような結合パートナーは、ＲＵＲ−１アンチセ
ンスコード化腫瘍関連ポリペプチドを提示している腫瘍細胞に対して医薬品、ト
キシン又は他の分子を選択的に標的化するために使用することができる。この態
様で、ＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプチドを発現する腫瘍細胞は細胞
傷害性化合物で処置することができる。

【００８３】それ故、本発明は、ＲＵＲ−１センス及び／又はＲＵＲ−１アンチセンスコー
ド化ポリペプチド、そして好ましくはこれらのユニークフラグメントと選択的に
結合する能力を有している抗体又は抗体のフラグメントに係わっている。抗体に
は、慣用の方法に従って調製されるポリクローナル及びモノクローナル抗体が含
まれる。

【００８４】重要なことには、当該技術分野で良く知られているように、抗体とそのエピト
ープの結合には抗体分子のほんの小さな部分、即ちパラトープ(paratope)が係わ
っている（一般的に、Clark, W.R.（１９８６年）The Experimental Foundation
s of Modern Immunology, John Wiley & Sons, Inc.、ニューヨーク；Roitt, I.
（１９９１年）Essential Immunology、第７版、Blackwell Scientific Publica
tions、オックスフォード、参照）。例えば、ｐＦｃ’及びＦｃ領域は相補体カ
スケードのエフェクターではあるが、抗原結合には係わっていない。ｐＦｃ’領
域が酵素的に開裂されているか又はｐＦｃ’領域無しに産生されており、Ｆ（ａ
ｂ’）_２フラグメントと呼称される抗体は無傷抗体の両抗原結合部位を保持して
いる。同様にＦｃ領域が酵素的に開裂されているか又はＦｃ領域無しに産生され
ており、Ｆａｂフラグメントと呼称される抗体は無傷抗体分子の抗原結合部位の
うちの１つを保持している。更に進めると、Ｆａｂフラグメントは共有結合した
抗体軽（Ｌ）鎖及びＦｄという名称の抗体重（Ｈ）鎖の一部分からなっている。
これらのＦｄフラグメントは抗体特異性の主要な決定因子であり（１個のＦｄフ
ラグメントは、抗体の特異性を変えることなく１０種までのＬ鎖と結合すること
ができる）、そしてＦｄフラグメントは単離においてエピトープ結合能力を保持
している。

【００８５】当該技術分野で良く知られているように、抗体の抗原結合部分内には、抗原の
エピトープと直接相互作用する相補性決定領域（ＣＤＲ）及びパラトープの三次
構造を維持するフレームワーク領域（ＦＲ）が存在する（一般的には、Clark、
１９８６年；Roitt、１９９１年参照）。ＩｇＧ免疫グロブリンのＨ鎖Ｆｄフラ
グメントとＬ鎖の両方には、それぞれ３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１からＣＤ
Ｒ３まで）によって分離されている４つのフレームワーク領域（ＦＲ１からＦＲ
４まで）が存在する。上記ＣＤＲ、そして特にＣＤＲ３領域、そして更に詳細に
はＨ鎖ＣＤＲ３は抗体特異性に大いに寄与する。

【００８６】哺乳動物抗体の非ＣＤＲ領域が、元の抗体のエピトープ特異性を保持しながら
、同種又は異種特異的抗体の類似領域で置換され得ることは現在当該技術分野で
良好に確立されている。これは、非ヒトＣＤＲをヒトＦＲ及び／又はＦｃ／ｐＦ
ｃ’領域と共有結合させて機能的抗体を産生させる「ヒト化(humanaized)」抗体
の開発や使用で最も明白に示されている。例えば、米国特許４，８１６，５６７
、５，２２５，５３９、５，５８５，０８９、５，６９３，７６２及び５，８５
９，２０５参照。

【００８７】かくして、例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９２／０４３８１は、マウスＦＲ
領域の少なくとも一部分がヒト起源のＦＲ領域で置換されているヒト化マウスＲ
ＳＶ抗体の産生及び使用を教示している。抗原結合能力を有する無傷抗体のフラ
グメントを含んでいる上記のような抗体はしばしば「キメラ」抗体と呼称される
。

【００８８】かくして、当業者に明白なように、本発明はまた、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ、
Ｆｖ及びＦｄフラグメント；Ｆｃ及び／又はＦＲ及び／又はＣＤＲ１及び／又は
ＣＤＲ２及び／又はＬ鎖ＣＤＲ３領域が相同ヒト又は非ヒト配列で置換されてい
るキメラ抗体；ＦＲ及び／又はＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２及び／又はＬ鎖ＣＤ
Ｒ３領域が相同ヒト又は非ヒト配列で置換されているキメラＦ（ａｂ’）_２フラ
グメント抗体；ＦＲ及び／又はＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２及び／又はＬ鎖ＣＤ
Ｒ３領域が相同ヒト又は非ヒト配列で置換されているキメラＦａｂフラグメント
抗体；並びにＦＲ及び／又はＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２領域が相同ヒト又は非
ヒト配列で置換されているキメラＦｄフラグメント抗体も提供する。本発明には
また、所謂一本鎖抗体も含まれる。かくして、本発明は、ＲＵＲ−１センスコー
ド化及び／又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプチドと特異的に結合す
る多数のサイズ及びタイプのポリペプチドに係わっている。これらのポリペプチ
ドは抗体テクノロジー以外の供給源に由来することもできる。例えば、このよう
なポリペプチド結合作用物は、溶液で、固定形態で又はファージディスプレイラ
イブラリー(phage display libraries)として容易に調製できる縮重ペプチドラ
イブラリーによって提供することができる。コンビナトリアルライブラリー(com
binatorial libraries)を１個又はそれより多くのアミノ酸を含有するペプチド
から合成することもできる。ライブラリーは更に、ペプトイド及び非ペプチド合
成部分から合成することができる。

【００８９】ファージディスプレイは、本発明に従う有用な結合ペプチドの同定で特に有効
であることができる。簡単に述べると、慣用の方法を使用して４個から約８０個
までのアミノ酸残基の挿入物をディスプレイするファージライブラリーを調製す
る（例えば、ｍ１３、ｆｄ又はラムダファージを使用して）。これらの挿入物は
完全に縮重するか又はバイアスのかかった配置を表していることができる。次に
、ＲＵＲ−１センスコード化又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプチド
と結合するファージを有する挿入物を選択することができる。この過程は、ＲＵ
Ｒ−１センスコード化又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプチドと結合
するファージを数サイクル再選択することによって反復することができる。数回
反復することによって特定の配列を有するファージが豊富化される。ＤＮＡ配列
分析を実施して、発現されたポリペプチドの配列を同定することができる。ＲＵ
Ｒ−１センスコード化又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプチドと結合
する配列の最小線状部分を決定することができる。最小線状部分の一部分又は全
部とその上流又は下流の１個又はそれより多くの追加的縮重残基とを含有する挿
入物を含有するバイアスのかかった(biased)ライブラリーを使用して上記方法を
反復することができる。かくして、本発明のＲＵＲ−１センスコード化又はＲＵ
Ｒ−１アンチセンスコード化ポリペプチドを使用して、本発明のＲＵＲ−１セン
スコード化又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプチドのパートナーと結
合するペプチドを同定しそして選択するために、ファージディスプレイライブラ
リーを含むペプチドライブラリーをスクリーニングすることができる。このよう
な分子は、スクリーニングアッセイ用に、診断アッセイ用に、精製プロトコール
用に、又は医薬品、トキシン及び／若しくは標識化剤（例えば、放射性同位元素
、蛍光分子等）を、細胞表面にＲＵＲ−１アンチセンスコード化ペプチドを提示
している細胞に標的化するために、記載されているようにして使用することがで
きる。このような結合作用物分子を調製し、ＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポ
リペプチドとＨＬＡ分子の複合体を使用して結合作用物を選択することによって
、このような複合体を結合させることもできる。このような複合体又はＲＵＲ−
１アンチセンスコード化ポリペプチドを発現する腫瘍細胞を不能にするか又は破
壊する医薬品分子は当業者に知られており、そして商業的に入手可能である。例
えば、イムノトキシン技術によって、抗体又はそのフラグメントによって細胞に
送達するとき有効なトキシンの例が提供されている。トキシンの例には、リシン
、アブリン、サポリン、シュードモナス・エンドトキシン、ジフテリアトキシン
、Ａ鎖トキシン、遮断リシン等のような植物又は細菌に由来するリボソーム損傷
トキシンが含まれる。

【００９０】本明細書に記載されているように本発明は多数の用途を有しており、それらの
幾つかをここに記載する。先ず、本発明によって技術者はＴＲＡＰの発現によっ
て特徴付けられる疾患を診断することができる。これらの方法はＴＲＡＰ遺伝子
及び／又はこの遺伝子から誘導されるＴＲＡの発現を測定することに係わってい
る。前者の状況では、上記の測定は、以下の実施例で例示されているようなポリ
メラーゼ連鎖反応又は標識化ハイブリダイゼーションプローブを使用するアッセ
イを含む任意の標準的な核酸測定アッセイによって実施することができる。

【００９１】一般的に、腫瘍関連核酸又はポリペプチドの発現によって特徴付けられる疾患
の診断方法は、対象から単離された生物学的試料を腫瘍関連核酸又はポリペプチ
ドに特異的な作用物と接触させて、上記生物学的試料中の腫瘍関連核酸又はポリ
ペプチドの存在を検出することに係わっている。本明細書で使用するとき、「接
触させる」とは、上記作用物と上記生物学的試料中に存在する腫瘍関連核酸又は
ポリペプチドとの間の特異的な相互作用を可能にするために、上記生物学的試料
を上記作用物と充分に近接させ、そして、例えば濃度、温度、時間、イオン強度
の適当な条件下に置くことを意味する。一般的に、上記作用物を上記生物学的試
料と接触させるための条件は、生物学的試料中の或る分子とそのコグネイト（例
えば、タンパク質とそのレセプターコグネイト、抗体とそのタンパク質抗原コグ
ネイト、核酸とその相補的配列コグネイト）間の特異的な相互作用を助長するた
めに当業者に知られている条件である。或る分子とそのコグネイト間の特異的な
相互作用を助長するための代表的な条件は、ロウ（Low）他に発行された米国特
許第５，１０８，９２１号に記載されている。

【００９２】上記生物学的試料はインビボ又はインビトロに置くことができる。例えば、こ
の生物学的試料はインビボの組織であることができ、そして上記腫瘍関連核酸又
はポリペプチドに特異的な作用物を使用して上記組織中の上記分子の存在を検出
することができる（例えば、上記腫瘍関連遺伝子産生物を発現している組織の一
部分を画像化するために）。或いは、上記生物学的試料をインビトロに置くこと
ができる（例えば、血液試料、腫瘍生検、組織抽出物）。特に好ましい実施態様
では、上記生物学的試料は細胞含有試料、更に好ましくは腫瘍細胞を含有する試
料であることができる。好ましくは、上記生物学的試料は肝臓、腎臓、膀胱又は
精巣に由来しない。

【００９３】上記診断方法は上記対象の予後、例えば、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ発
現によって特徴付けられる状態の進行又は後退の測定で使用することができる。
更に、本明細書で記載されている診断方法は、腫瘍又は他のＲＵＲ−１関連状態
に与える治療（例えば、ワクチン、ＣＴＬ）の効果を追跡する手段を提供する。

【００９４】腫瘍関連核酸分子の発現又はその発現産生物によって特徴付けられる疾患の治
療方法も提供される。一般的に、これらの治療方法は、ＨＬＡ分子とＲＵＲ−１
アンチセンスコード化腫瘍関連ポリペプチドから誘導される腫瘍拒絶抗原との複
合体の存在を対象内で選択的に豊富化する作用物の或る量を当該対象に投与する
ことを含んでいる。上記作用物は上記疾患を改善するのに有効な量で投与される
。ＲＵＲ−１アンチセンス核酸又はコード化ポリペプチドの発現によって特徴付
けられる疾患の治療作用物には、配列番号：３のアミノ酸配列を含んでいるポリ
ペプチド及びその免疫原性フラグメント並びにＨＬＡ分子と上記腫瘍関連ポリペ
プチド及び／若しくはフラグメントとの複合体又は上記腫瘍関連ポリペプチド及
び／若しくはフラグメントとＨＬＡ分子を発現する細胞に特異的な自己由来細胞
傷害性Ｔ細胞が含まれる。

【００９５】これら遺伝子の単離によって、配列番号：２及び配列番号：５のようなコード
化ポリペプチド分子を単離することも可能になる。熟練実務者に周知の多様な方
法を使用して単離ポリペプチド分子を得ることができる。上記タンパク質は、こ
のタンパク質を天然に産生する細胞から精製することができる。或いは、上記タ
ンパク質の産生を生起させるために発現ベクターを細胞内に導入することができ
る。もう１つの方法では、ｍＲＮＡ転写物を細胞内に微量注入するか又は別の方
法で導入して、コードされているタンパク質の産生を生起させることができる。
網状赤血球溶解液系のような細胞フリーの抽出物中でのｍＲＮＡの翻訳を使用し
てタンパク質を産生させることもできる。当業者はまた、単離ＲＵＲ−１センス
コード化又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプチドを取得するために、
既知のタンパク質単離方法に容易に従うこともできる。これらには免疫クロマト
グラフィー、ＨＰＬＣ、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグ
ラフィー及び免疫アフィニティクロマトグラフィーが含まれるが、これらに限定
されない。

【００９６】これらの単離ポリペプチド分子は、プロセシングされ、ＴＲＡ（例えば、配列
番号：３）として又はＴＲＡとＨＬＡ、例えばＨＬＡ−Ｂ７との複合体として提
示されたとき、アジュバントのような物質と組み合わせて、ＴＲＡＰ分子の発現
によって特徴付けられる疾患の治療で有用なワクチンを生じさせることができる
。ＲＵＲ−１アンチセンスコード化ペプチドに加えて、ペプチドエピトープをコ
ードしている核酸を使用してワクチンを調製することができる。ワクチンで使用
するための核酸及び／又はペプチドの調製は当該技術分野で良く知られている。
「疾患」を本明細書で使用するとき、これは上記腫瘍拒絶抗原前駆体が発現され
る任意の病理学的状態を言う。このような疾患の例は癌であり、腎細胞癌腫、結
腸直腸癌、メラノーマ、肉腫、白血病等が含まれる。

【００９７】加えて、ワクチンはＴＲＡ／ＨＬＡ複合体を表面に提示している細胞、例えば
非増殖性癌細胞、非増殖性トランスフェクション体等から調製することができる
。ワクチンとして細胞を使用する全ての場合において、これら細胞はＣＴＬ応答
を誘発するのに必要な構成成分の１つ若しくは両方をコードしている配列でトラ
ンスフェクションされた細胞であることができるか、又は上記の両分子を既に発
現しておりトランスフェクションする必要のない細胞であることができる。

【００９８】上記開示に基づく治療方法は、ＨＬＡ−Ｂ７細胞のようなＴＲＡ提示細胞を溶
解させる対象の免疫系による応答が前提となっている。このような１つの試みは
、問題の表現型異常細胞を有する対象に、上記複合体に特異的な自己由来ＣＴＬ
を投与することである。このようなＣＴＬをインビトロで発現させることは当該
技術者の技倆の範囲内である。一般的に、対象から採取した細胞試料、例えば血
液細胞を、上記複合体を提示している細胞と接触させ、そしてＣＴＬの増殖を誘
発することができる。標的細胞はトランスフェクション体、例えば本明細書で記
載されているタイプのＣＯＳ細胞であることができる。これらのトランスフェク
ション体は表面の所望の複合体を提示し、そして問題のＣＴＬと組み合わせられ
たとき、上記複合体の増殖を刺激する。本明細書で使用されているようなＣＯＳ
細胞は、他の適当な宿主細胞と同様に、広範に入手可能である。ＣＴＬの特異的
な産生は当業者に周知である。次に、クローン的に拡張された自己由来ＣＴＬを
上記対象に投与する。ＲＵＲ−１アンチセンスコード化ＴＲＡに特異的な他のＣ
ＴＬを単離し、そして同様な方法で投与することができる。

【００９９】抗原特異的ＣＴＬクローンを選択するもう１つの方法が最近記載されており（
Altman他、Science ２７４：９４〜９６、１９９６年；Dunbar他、Curr. Biol. ８：４１３〜４１６、１９９８年）、そしてこの方法では特異的なＣＴＬクロー
ンを検出するためにＭＨＣクラスＩ分子／ペプチド複合体の蛍光発生性テトラマ
ーが使用されている。簡単に述べると、可溶性ＭＨＣクラスＩ分子はβ_２−ミク
ログロブリン及びクラスＩ分子と結合するペプチド抗原の存在下インビトロで折
り畳まれる。精製後、上記ＭＨＣ／ペプチド複合体は精製されそしてビオチンで
標識化される。テトラマーは、ビオチン結合ペプチド−ＭＨＣ複合体を４：１の
モル比で標識化アビジン（例えば、フィコエリスリン）と混合することによって
形成される。次にテトラマーは末梢血又はリンパ節のようなＣＴＬ供給源と接触
させられる。これらのテトラマーは上記のペプチド抗原／ＭＨＣクラスＩ複合体
を認識するＣＴＬと結合する。これらのテトラマーが結合した細胞は蛍光活性化
細胞選別で分類して反応性ＣＴＬを分離することができる。次に、これらの単離
ＣＴＬは、本明細書に記載されているようにして使用するためにインビトロで拡
張させることができる。

【０１００】養子移入(adoptive transfer)（Greenberg、J. Immunol. １３６（５）：１９
１７、１９８６年；Riddel他、Science ２５７：２３８、１９９２年；Lynch他
、Eur. J. Immunol. ２１：１４０３〜１４１０、１９９１年；Kast他、Cell ５９：６０３〜６１４、１９８９年）と呼称される治療方法を詳記すると、所望の
複合体を提示している細胞をＣＴＬと組み合わせて、これらの複合体に特異的な
ＣＴＬを増殖させる。次に、増殖したＣＴＬを、特定の複合体を提示している異
常細胞のうちの或る細胞によって特徴付けられる細胞異常性を有する対象に投与
する。その後、これらのＣＴＬは異常細胞を溶解し、そしてそれによって所望の
治療目標が達成される。

【０１０１】上記治療法は、上記対象の異常細胞のうち少なくとも幾つかは関連ＨＬＡ／Ｔ
ＲＡ複合体を提示していると仮定している。これは、当該技術分野では特定のＨ
ＬＡ分子を提示している細胞の同定方法並びに関連配列、例えばＲＵＲ−１アン
チセンス配列のＤＮＡを発現している細胞の同定方法は非常に良く知られている
ので、非常に容易に測定することができる。上記関連複合体を提示している細胞
が上記スクリーニング方法で同定されると、これら細胞は、ＣＴＬを含有してい
る患者由来の試料と組み合わせることができる。上記複合体提示細胞が混合ＣＴ
Ｌ試料によって溶解される場合には、ＲＵＲ−１アンチセンスコード化ＴＲＡが
提示されているので、上記対象は上記で述べた治療方法の適切な候補であると推
定することができる。

【０１０２】養子移入は本発明に従って利用できる唯一の治療形態ではない。ＣＴＬは多数
の方法を使用してインビボで誘発することもできる。１つの方法は上記複合体を
発現している非増殖性細胞を使用することである。この方法で使用される細胞は
、通常上記複合体を発現している細胞、例えば照射腫瘍細胞であるか又は上記複
合体を提示するのに必要な遺伝子の１つ又は両方でトランスフェクションされて
いる細胞であることができる。チェン（Chen）他、Proc. Natl. Acad. Sci. USA
８８：１１０〜１１４（１９９１年）は、治療方式においてＨＰＶＥ７ペプチ
ドを発現しているトランスフェクション細胞の使用を示して、この方法を例証し
ている。種々の細胞タイプを使用することができる。同様に、問題の遺伝子の１
つ又は両方を有するベクターを使用することができる。ウイルス又は細菌ベクタ
ーは特に好ましい。例えば、配列番号：３をコードしている核酸は、或る組織又
は細胞タイプ内でＴＲＡの発現を指令するプロモーター及びエンハンサー配列と
作動可能に結合させることができる。この核酸を発現ベクター内に組み入れるこ
とができる。発現ベクターは配列番号：３をコードしているような外来核酸の挿
入を可能にするように構築されるか又は修飾された非修飾染色体外核酸、プラス
ミド又はウイルスゲノムであることができる。ＲＵＲ−１アンチセンスコード化
ＴＲＡをコードしている核酸をレトロウイルスゲノムに挿入し、そしてそれによ
って上記標的組織又は細胞タイプのゲノム内への上記核酸の取り込みを助長する
こともできる。これらの系では、問題の遺伝子は微生物、例えばワクシニアウイ
ルス、レトロウイルス又は細菌ＢＣＧ及び事実上「感染している」宿主細胞材料
によって運ばれる。得られる細胞は問題の複合体を提示しているので、その後増
殖する自己由来ＣＴＬによって認識される。

【０１０３】同様な効果は、ＴＲＡＰ又はその刺激フラグメントをアジュバントと組み合わ
せてインビボでのＨＬＡ提示細胞への組み入れを助長することによって達成する
ことができる。上記ＴＲＡＰはプロセシングされてＨＬＡ分子のペプチドパート
ナーを産生し、一方ＴＲＡは更にプロセシングする必要性なしに提示される。一
般的に、対象には有効量のＴＲＡＰ及び／又はそれから誘導されるＴＲＡの皮内
注入で投与することができる。当該技術分野で標準的な免疫化プロトコールに従
って、初期投与量の後にブースター投与量を続けることができる。

【０１０４】免疫応答を誘発するために使用できる更にもう１つの方法は、「ポリトープ(p
olytopes)」として知られている一連のエピトープをコードしている核酸の形態
でＴＲＡを提供することである。これらのエピトープは、天然のフランキング配
列を有して又は有さないで、連続又は重複態様で配列させることができ（例えば
、Thomson他、Proc. Natl. Acad. Sci. USA ９２：５８４５〜５８４９、１９９
５年；Gilbert他、Nature Biotechnol. １５：１２８０〜１２８４、１９９７年
、参照）、そして所望の場合、非関連リンカー配列で分離されていることができ
る。上記ポリトープはプロセシングされて個々のエピトープが産生され、そして
これらのエピトープは免疫系で認識されて免疫応答が生じる。

【０１０５】それ故、例えば、配列番号：１の核酸でコードされているアミノ酸配列を有す
るポリペプチドから誘導されそしてＭＨＣ分子によって提示されてＣＴＬ又はＴ
ヘルパーリンパ球によって認識されるペプチドは、他の腫瘍拒絶抗原由来のペプ
チドと組み合わせて（例えば、ハイブリッド核酸又はポリペプチドの調製によっ
て）、表現型を形成することができる。免疫応答を誘導するか又は増強するため
に投与できる代表的な腫瘍関連ペプチド抗原（これらはＭＨＣクラスＩ又はＩＩ
によって提示される）は腫瘍関連遺伝子に由来しそしてコードされているタンパ
ク質であり、そしてこれらにはＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、Ｍ
ＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ＭＡＧＥ−７、ＭＡＧＥ−８、ＭＡ
ＧＥ−９、ＭＡＧＥ−１０、ＭＡＧＥ−１１、ＭＡＧＥ−１２、ＭＡＧＥ−１３
、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、
ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＢＡＧＥ−１、ＲＡＧＥ−１、Ｌ
Ｂ３３／ＭＵＭ−１、ＰＲＡＭＥ、ＮＡＧ、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ３、
ＭＡＧＥ−Ｂ４、チロシナーゼ、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、Ｍｅｌａｎ−
Ａ、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＳＳ
Ｘ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣ
Ｐ−１及びＣＴ−７が含まれる。例えば、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ９６／１０５
７７参照。他の例は当業者に知られており（例えば、Coulie、Stem Cells １３
：３９３〜４０３、１９９５年参照）、そしてこれらは本明細書に開示されてい
る方法と同様な方法で本発明で使用することができる。当業者は、分子生物学の
標準的な手順に従って、１つ若しくはそれより多くのＲＵＲ−１アンチセンスコ
ード化ペプチド及び１つ若しくはそれより多くの上記腫瘍拒絶抗原ペプチドを含
んでいるポリペプチド、又はこのようなポリペプチドをコードしている核酸を調
製することができる。

【０１０６】それ故、ポリトープは、種々の配列で一緒に結合させる（例えば、連結されて
、重複して）ことができる２つ又はそれより多くの潜在的に免疫原性又は免疫応
答刺激性ペプチドのグループである。上記ポリトープ（又はこのポリトープをコ
ードしている核酸）は、免疫応答の刺激、増強及び／又は誘発における当該ポリ
トープの有効性を試験するために、標準的な免疫化プロトコールで、例えば動物
に投与することができる。

【０１０７】上記ペプチドは、直接又はフランキング配列を使用して一緒に結合されてポリ
トープを形成することができ、そしてワクチンとしてポリトープを使用すること
は当該技術分野で周知である（例えば、Thomson他、Proc. Acad. Natl. Acad. S
ci USA ９２（１３）：５８４５〜５８４９、１９９５年；Gilbert他、Nature B
iotechnol. １５（１２）：１２８０〜１２８４、１９９７年；Thomson他、J. I
mmunol. １５７（２）：８２２〜８２６、１９９６年；Tam他、J. Exp. Med. １７１（１）：２９９〜３０６、１９９０年、参照）。例えば、タム（Tam）はＭ
ＨＣクラスＩ及びクラスＩＩ結合エピトープの両方からなるポリエピトープはマ
ウスモデルで抗体及び保護免疫を上首尾に産生することを示した。タムはまた、
エピトープの「ストリング(strings)」を含んでいるポリトープはプロセシング
されて、ＭＨＣ分子によって提示されそしてＣＴＬによって認識される個々のエ
ピトープを産生することも証明した。かくして、種々の数及び組合せのエピトー
プを含有するポリトープを調製しそしてＣＴＬによる認識及び免疫応答を増大さ
せる有効性について試験することができる。

【０１０８】腫瘍は１組の腫瘍抗原を発現し、そして任意の所定の患者の腫瘍ではこれら抗
原のうち或るサブセットしか発現され得ないことが知られている。特定の患者で
発現される腫瘍拒絶抗原のサブセットを表している種々の組合せのエピトープに
対応するポリトープを調製することができる。ポリトープはまた、腫瘍タイプに
よって発現されることが知られている腫瘍拒絶抗原のより広いスペクトルを反映
するように調製することもできる。ポリトープは、ポリペプチド構造として又は
当該技術分野で知られている核酸送達系（例えば、Allsopp他、Eur. J. Immunol
. ２６（８）：１９５１〜１９５９、１９９６年参照）を使用して上記治療を必
要としている患者に導入することができる。アデノウイルス、ポックスウイルス
、Ｔｙ−ウイルス様粒子、アデノ関連ウイルス、プラスミド、細菌等はこのよう
な送達で使用することができる。上記ポリトープ送達系の有効性を測定するため
にマウスモデルでこれら送達系を試験することができる。これらの系はまた、ヒ
ト臨床試験で試験することもできる。

【０１０９】免疫応答を誘導するためにか又は免疫応答を増大させるために、免疫化組成物
の一部分として、１つ又はそれより多くの腫瘍抗原又はそれらの刺激フラグメン
トは１つ又はそれより多くのアジュバントと一緒に投与される。アジュバントは
、免疫応答を高める抗原に組み入れられるか又はこのような抗原と一緒に投与さ
れる物質である。アジュバントは抗原の容器を提供し（細胞外にか又はマクロフ
ァージ内に）、マクロファージを活性化しそして特定のリンパ球セットを刺激す
ることによって免疫学的応答を高めることができる。多種類のアジュバントが当
該技術分野で良く知られている。アジュバントの特定の例にはモノホスホリル脂
質Ａ（ＭＰＬ、SmithKline Beecham）、即ちサルモネラ・ミネソタＲｅ５９５リ
ポ多糖の精製及び酸加水分解後に得られる同族体；ＱＳ２１サポニン（SmithKli
ne Beecham）、即ちクイリア・サポナリア（Quillja saponaria）抽出物から精
製される純粋なＱＡ−２１サポニンを含むサポニン類；ＰＣＴ出願ＷＯ９６／３
３７３９（SmithKline Beecham）に記載されているＤＱＳ２１；ＱＳ−７、ＱＳ
−１７、ＱＳ−１８及びＱＳ−Ｌ１（So他、Mol. Cells ７：１７８〜１８６、
１９９７年）；不完全フロイントアジュバント；完全フロイントアジュバント；
モンタニド；並びにスクワレン及び／又はトコフェロールのような生物分解性油
から調製される種々の油中水型エマルジョンが含まれる。好ましくは、上記ペプ
チドはＤＱＳ２１／ＭＰＬの組合せ物と混合して投与される。ＤＱＳ２１対ＭＰ
Ｌの比率は典型的には約１:１０〜１０：１、好ましくは約１:５〜５：１、そし
て更に好ましくは約１:１であろう。ヒト投与用には典型的には、ＤＱＳ２１及
びＭＰＬはワクチン処方製剤中約１μｇ〜約１００μｇの範囲で存在するであろ
う。他のアジュバントは当該技術分野で知られており、そして本発明で使用する
ことができる（例えば、Goding、Monoclonal Antibodies: Principles and Prac
tice、第２版、１９８６年参照）。ペプチドとアジュバントの混合物又はエマル
ジョンを調製する方法はワクチン接種技術分野の熟練者に周知である。

【０１１０】上記対象の免疫応答を刺激する他の作用物をこの対象に投与することもできる
。例えば、ワクチン接種プロトコールでは他のサイトカインも、これらのリンパ
球調節特性の結果として有用である。このような目的に有用な多数の他のサイト
カインは当業者に知られており、そしてこれらにはワクチンの保護効果を高める
ことが示されているインターロイキン−１２（ＩＬ−１２）（例えば、Science ２６８：１４３２〜１４３４、１９９５年参照）、ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−１８
が含まれる。それ故、サイトカインは抗原及びアジュバントと一緒に投与して、
これらの抗原に対する免疫応答を高めることができる。

【０１１１】ワクチン接種プロトコールで使用できる多数の免疫応答増強化合物が存在する
。これらにはタンパク質か又は核酸のどちらかの形態で提供される同時刺激分子
が含まれる。このような同時刺激分子には、樹状細胞（ＤＣ）上で発現されそし
てＴ細胞上で発現されるＣＤ２８分子と相互作用するＢ７−１及びＢ７−２（そ
れぞれ、ＣＤ８０及びＣＤ８６）分子が含まれる。この相互作用によって、抗原
／ＭＨＣ／ＴＣＲ刺激（シグナル１）Ｔ細胞に対して同時刺激（シグナル２）が
提供され、そしてＴ細胞増殖及びエフェクター機能が高められる。Ｂ７はまたＴ
細胞上のＣＴＬＡ４（ＣＤ１５２）とも相互作用し、そしてＣＴＬＡ４及びＢ７
リガンドに係わる研究によって、Ｂ７−ＣＴＬＡ４の相互作用は抗腫瘍免疫及び
ＣＴＬ増殖を高め得ることが示されている（Zheng P.他、Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA ９５（１１）：６２８４〜６２８９（１９９８年））。

【０１１２】Ｂ７は典型的には腫瘍細胞で発現されないので、これらはＴ細胞に対する効率
的な抗原提示細胞（ＡＰＣ）ではない。Ｂ７発現を誘導すると、腫瘍細胞はＣＴ
Ｌ増殖及びエフェクター機能を一層効率的に刺激できるであろう。Ｂ７／ＩＬ−
６／ＩＬ−１２同時刺激組合せ物は、Ｔ細胞集団でＩＦＮ−ガンマ及びＴｈｌサ
イトカインプロフィールを誘導してＴ細胞活性を更に高めることが示されている
（Gajewski他、J. Immunol、１５４：５６３７〜５６４８（１９９５年））。Ｂ
７による腫瘍細胞トランスフェクションはワング（Wang）他（J. Immunol.、１
９：１〜８（１９８６年））によって、養子移入免疫療法のためにインビトロＣ
ＴＬ拡張に関連して考察されている。Ｂ７分子に関する他の送達メカニズムには
核酸（ネーキド(naked)ＤＮＡ）免疫化（Kim J.他、Nat Biotechnol.、１５:７
：６４１〜６４６（１９９７年））並びにアデノ及びポックスのような組換えウ
イルス（Wendtner他、Gene Ther.、４:７：７２６〜７３５（１９９７年））が
含まれよう。これらの系は全て、Ｂ７と、本明細書で考察されている抗原若しく
は抗原フラグメント（単数又は複数）（ポリトープを含む）又はサイトカインの
ような選択される他の分子との同時発現用発現カセットの構築及び使用になじみ
易い。これらの送達系は、インビトロでの適当な分子の誘導用にそしてインビボ
でのワクチン接種状況用に使用することができる。インビトロ及びインビボでＴ
細胞を直接刺激するために抗ＣＤ２８抗体を使用することも考慮できよう。同様
に、外来抗原に対してＴ細胞応答を誘導する誘導可能な同時刺激分子ＩＣＯＳは
、例えば、抗ＩＣＯＳ抗体（Hutloff他、Nature ３９７：２６３〜２６６、１９
９９年）を使用して調節することができよう。

【０１１３】リンパ球機能関連抗原−３（ＬＦＡ−３）はＡＰＣや幾つかの腫瘍細胞上で発
現され、そしてＴ細胞上に発現されたＣＤ２と相互作用する。この相互作用によ
ってＴ細胞ＩＬ−２及びＩＦＮ−ガンマ産生が誘導され、そしてその結果Ｂ７／
ＣＤ２８同時刺激相互作用を補完することはできるが、代替することはできない
（Parra他、J. Immunol.、１５８：６３７〜６４２（１９９７年）、Fenton他、
J. Immunother.、２１：２：９５〜１０８（１９９８年））。

【０１１４】リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）は白血球上に発現され、そしてＡＰ
Ｃや幾つかの腫瘍細胞上に発現されたＩＣＡＭ−１と相互作用する。この相互作
用によってＴ細胞ＩＬ−２及びＩＦＮ−ガンマ産生が誘導され、そしてその結果
Ｂ７／ＣＤ２８同時刺激相互作用を補完することはできるが、代替することはで
きない（Fenton他、J. Immunother.、２１：２：９５〜１０８（１９９８年））
。それ故、ＬＦＡ−１は、ワクチン接種プロトコールにおいてＢ７に関して上記
で考察されている種々の方法で提供できる同時刺激分子の更なる例である。

【０１１５】完全なＣＴＬ活性化及びエフェクター機能には、ＤＣによって発現されるＴｈ
細胞ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０リガンド）分子とＣＤ４０分子間の相互作用によるＴ
ｈ細胞ヘルプが必要である（Ridge他、Nature、３９３：４７４（１９９８年）
、Bennett他、Nature、３９３：４７８（１９９８年）、Schoenberger他、Natur
e、３９３：４８０（１９９８年））。この同時刺激シグナルのメカニズムは、
ＤＣ（ＡＰＣ）によるＢ７及び関連ＩＬ−６／ＩＬ−１２産生の上方調節に係わ
っているように思われる。それ故、ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌの相互作用はシグナル
１（抗原／ＭＨＣ−ＴＣＲ）とシグナル２（Ｂ７−ＣＤ２８）の相互作用を補完
する。

【０１１６】ＤＣ細胞を直接刺激するために抗ＣＤ４０抗体を使用すると、通常は炎症に関
連しないで遭遇するか又は非専門的ＡＰＣ（腫瘍細胞）によって提示される腫瘍
抗原に対する応答を高めることが予期されよう。これらの状況下では、Ｔｈヘル
プとＢ７の同時刺激シグナルは提供されない。このメカニズムは、抗原パルス処
理ＤＣに基づく治療法に関連してか又はＴｈエピトープが既知のＴＲＡ前駆体の
範囲内では特定されていない状況下で使用することができよう。例えば、ＣＤ４
０−ＣＤ４０Ｌの相互作用を高めることによって又はＤＣをＣｐＧ含有オリゴデ
オキシヌクレオチド若しくは細胞外マトリックス由来の刺激性糖部分と接触させ
ることによって樹状細胞の成熟を誘導する他の方法が当該技術分野で知られてい
る。

【０１１７】本発明の治療組成物は、投与するとき、薬学的に許容しうる製剤で投与される
。このような製剤は定型的には、薬学的に許容しうる濃度の塩、緩衝化剤、保存
剤、適合可能な担体、アジュバントやサイトカインのような補足免疫強化剤及び
、任意に、他の治療剤を含有している。

【０１１８】本発明の治療剤は、注射又は時間をかけた徐注を含めて、任意の慣用の経路で
投与することができる。上記投与は、例えば経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、腔
内、皮下又は経皮であることができる。抗体を治療的に使用するとき、好ましい
投与経路は肺エアゾールによるものである。抗体を含有するエアゾール送達系を
調製する技術は当業者に良く知られている。一般的に、このような系は抗体の生
物学的特性、例えばパラトープ結合能を顕著には損なわない構成成分を使用すべ
きである（例えば、Sciarra及びCutie、「エアゾール」、Remington’s Pharmac
eutical Sciences、第１８版、１９９０年、１６９４〜１７１２頁参照）。当業
者は、過度の実験に頼ることなく、抗体エアゾールを製造する種々のパラメータ
ーや条件を容易に決定することができる。本発明のアンチセンス製剤を使用する
ときには、緩慢な静脈内投与が好ましい。

【０１１９】非経口投与用製剤には無菌の水性又は非水性溶液、懸濁物及びエマルジョンが
含まれる。非水性溶媒の例はプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、
オリーブ油のような植物油、及びオレイン酸エチルのような注射用有機エステル
である。水性担体には、生理食塩水及び緩衝化した媒体を含む水、アルコール性
／水性溶液、エマルジョン又は懸濁物が含まれる。非経口媒体には塩化ナトリウ
ム溶液、リンゲル・デキストロース、デキストロースと塩化ナトリウム、乳酸加
リンゲル又は固定油が含まれる。静脈内媒体には補液及び栄養補液、電解質補液
（リンゲル・デキストロースに基づくもののような）等が含まれる。例えば、抗
微生物剤、抗酸化剤、キレート化剤及び不活性気体等のような保存剤や他の添加
剤も存在することができる。

【０１２０】本発明はまた、ワクチン接種用の核酸、ポリペプチド又はペプチドの送達も意
図している。ポリペプチドやペプチドの送達は、当該技術分野で周知の標準的な
ワクチン接種プロトコールに従って達成することができる。もう１つの実施態様
では、核酸の送達はエクスビボ方法で、即ち細胞を対象から取り出し、腫瘍抗原
を含有するようにこの細胞を遺伝子的に操作し、そしてこの操作された細胞を上
記対象内に再度導入することによって達成される。このような方法の１つは米国
特許５，３９９，３４６及びこの特許の包袋中に提出されている証拠書類に概略
されており、そしてこれらは全て公に入手可能な文書である。一般的には、上記
方法は或る遺伝子の欠陥コピーを有している対象の細胞（単数又は複数）内に該
遺伝子の機能的コピーをインビトロで導入しそして遺伝子的に操作された細胞（
単数又は複数）を上記対象に戻すことに係わっている。上記遺伝子の機能的コピ
ーは、遺伝子的に操作された細胞（単数又は複数）内での上記遺伝子の発現を可
能にする調節要素の作動可能な制御下にある。多数のトランスフェクション及び
形質導入技術並びに適当な発現ベクターは当業者に良く知られており、そしてそ
れらの幾つかはＰＣＴ出願ＷＯ９５／００６５４に記載されている。プラスミド
又はウイルスベクター、例えばアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ワクシニ
アウイルス等を使用するインビボ遺伝子療法も本発明に従って意図されている。

【０１２１】本発明の製剤は有効量で投与される。有効量とは、単独で又は更なる投与量と
一緒になって所望の応答を刺激する医薬製剤の量である。癌を治療する場合には
、所望の応答は癌の進行を阻止することである。これはこの疾病の進行を単に一
時的に緩慢化することにしか係わっていないことができるが、更に好ましくは、
これはこの疾病の進行を永久的に停止させることに係わっている。これは定型的
な方法でモニターすることができるか又は本明細書で考察されている本発明の診
断方法に従ってモニターすることができる。上記疾病又は状態の治療に対する所
望の応答はまた、上記疾病又は状態の開始遅延又は更には開始阻止であることも
できる。

【０１２２】勿論、このような量は治療されている特定の状態、その状態の重篤度、年齢、
体調、身長及び体重を含む個々の患者のパラメーター、治療期間、併用療法（存
在する場合には）の性質、特定の投与経路並びに開業医の知識及び専門知識の範
囲内の同様なファクターに依存するであろう。これらのファクターは当業者に良
く知られており、そして定型的な実験だけを行って取り扱うことができる。一般
的には、個々の構成成分又はそれらの組合せ物の最大投与量、即ち、健全な医学
的判断に従って最も安全性の高い投与量を使用することが好ましい。しかしなが
ら、当業者には、患者は、医学的理由、心理学的理由又は実際上任意の他の理由
により、より低い投与量又は許容投与量を主張できることが理解されよう。

【０１２３】本発明の治療組成物を使用して免疫応答を刺激することが望ましい場合、これ
はヒト抗体応答を刺激して、血清中の抗体力価、細胞傷害性リンパ球のクローン
拡張(clonal expansion)又は或る他の望ましい免疫学的応答の増大を生じさせる
ことに係わっていることができる。投与様式に依存して１ナノグラム／キログラ
ムから１００ミリグラム／キログラムまでの範囲の免疫原の投与量が有効であろ
うと考えられる。好ましい範囲は１キログラム当たり５００ナノグラムから５０
０マイクログラムの間であると考えられる。絶対量は、投与が単回投与量であろ
うと複数回投与量であろうと、投与するために選択される物を含めて多様なファ
クターに依存し、そして上記したパラメーターを含む個々の患者のパラメーター
に依存するであろう。これらのファクターは当業者に良く知られており、そして
定型的な実験だけを行って取り扱うことができる。

【０１２４】ワクチン接種のために抗原性ペプチドを使用する場合、上記腫瘍抗原及びアジ
ュバントを、この抗原に対する免疫応答が高められるように、効果的に送達する
投与態様を使用することができる。アジュバント中の腫瘍抗原ペプチドの投与で
は、好ましい方法には皮内、静脈内、筋肉内及び皮下投与が含まれる。これらは
好ましい実施態様であるが、本発明は本明細書に開示されている特定の投与態様
に限定されない。当該技術分野の標準的な参照文献（例えば、Remington’s Pha
rmaceutical Sciences、第１８版、１９９０年）にはアジュバントを使用するか
又は非アジュバント担体中で免疫原を送達するための投与様式及び処方が提供さ
れている。

【０１２５】本発明の医薬製剤は、投与するとき、薬学的に許容しうる量及び薬学的に許容
しうる組成物で適用される。用語「薬学的に許容しうる」とは、活性成分の生物
学的活性の有効性を妨げない非毒性の材料を意味する。このような製剤は定型的
には塩、緩衝化剤、保存剤、適合可能な担体及び、任意に、他の治療剤を含有し
ていることができる。医薬品中で使用するとき、上記塩は薬学的に許容可能でな
ければならないが、薬学的に許容可能でない塩は、その薬学的に許容しうる塩を
調製するために好都合に使用することができるので、本発明の範囲から除外され
ない。このような薬理学的にそして薬学的に許容しうる塩には次の酸：塩酸、臭
化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ
酸、マロン酸、コハク酸等から調製されるものが含まれるが、これらに限定され
ない。更に、薬学的に許容しうる塩はアルカリ金属又はアルカリ土類塩、例えば
ナトリウム、カリウム又はカルシウム塩として調製することもできる。

【０１２６】腫瘍抗原組成物は、所望の場合、薬学的に許容しうる担体と組み合わせること
ができる。本発明で使用するとき、用語「薬学的に許容しうる担体」とはヒトへ
の投与に適する１つ又はそれより多くの適合性固体若しくは液体充填剤、希釈剤
又はカプセル化物質を意味する。用語「担体」は、活性物質と組み合わせて上記
適用を助長する天然又は合成の有機又は無機成分を意味する。上記医薬組成物の
構成成分はまた、所望の薬学的有効性を実質的に損なう相互作用が存在しないよ
うな態様で、本発明の分子と、そして互いに混合することもできる。

【０１２７】上記医薬組成物は、塩中での酢酸；塩中でのクエン酸；塩中でのホウ酸；及び
塩中でのリン酸を含む、適当な緩衝化剤を含有することができる。

【０１２８】上記医薬組成物はまた、任意に、適当な保存剤、例えば：塩化ベンザルコニウ
ム；クロロブタノール；パラベン及びチメロサールを含有することもできる。

【０１２９】上記医薬組成物は好都合には単位投与量形態で提供することができ、そして薬
剤学分野で周知の任意の方法で調製することができる。これらの方法は全て、上
記活性物質を１つ又はそれより多くの補助成分を構成する担体と混合する段階を
含んでいる。一般的に、上記組成物は上記活性化合物を液体担体、微細に粉砕し
た固形担体、又はこれらの両方と均一にそして良く混合し、そしてその後、必要
な場合、製品に成形することによって調製される。

【０１３０】経口投与に適する組成物は、例えば各々が予め定められた量の活性化合物を含
有するカプセル、錠剤、トローチのような分離した単位として提供することがで
きる。他の組成物には、シロップ、エリキシル又はエマルジョンのような水性液
体又は非水性液体中の懸濁物が含まれる。

【０１３１】非経口投与に適する組成物は好都合には、好ましくは受容者の血液と等張の腫
瘍抗原ポリペプチド又は核酸の無菌水性又は非水性製剤を含んでいる。この製剤
は、適当な分散化又は湿潤化剤及び懸濁化剤を使用して既知の方法に従って処方
することができる。無菌の注射用製剤はまた、非毒性の非経口的に許容可能な希
釈剤又は溶媒中の無菌注射溶液又は懸濁物、例えば１，３−ブタンジオール溶液
であることもできる。使用できる許容可能な媒体及び溶媒のなかには水、リンゲ
ル溶液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、無菌の固定油は溶媒又は懸
濁化媒体として慣用的に使用される。この目的では、合成モノ又はジグリセリド
を含めて任意の低刺激固定油を使用することができる。更に、オレイン酸のよう
な脂肪酸類は注射用製剤中で使用することができる。経口、皮下、静脈内、筋肉
内等の投与に適する担体処方は、レミントンズ・ファーマシューティカル・サイ
エンシズ（Remington’s Pharmaceutical Sciences）、マック・パブリッシング
・コ．（Mack Publishing Co.）、ペンシルベニア州イーストン中に見ることが
できる。

【０１３２】例例１：腎細胞癌系ＬＥ９２１１−ＲＣＣによって特異的に発現される配列の単離腎細胞癌系ＬＥ９２１１−ＲＣＣは自己由来ＣＴＬによって認識される幾つか
の抗原を発現する（Brouwenstijn他、Int. J. Cancer ６８：１７７〜１８２、
１９９６年）。上記抗原の１つがＲＡＧＥ遺伝子によってコードされていること
は以前に見いだされた（Gaugler他、Immunogenetics ４４：３２３〜３３０、１
９９６年）。特定の細胞傷害性Ｔリンパ球クローン、ＣＴＬ３６１Ａ／２１によ
って認識されるもう１つの抗原は現在、特徴が決定されている。ＣＴＬを産生させるために、患者ＬＥ９２１１由来の末梢血単核細胞をＬＥ９
２１１−ＲＣＣ細胞と接触させた。１４日後、この混合物を癌細胞の溶解につい
て観察し、そして癌細胞によって提示されるペプチドとＨＬＡ分子の複合体に特
異的なＣＴＬが上記試料中に存在することが示された。使用した溶解アッセイは
クロム放出アッセイ（Herin他、Int. J. Cancer ３９：３９０〜３９６、１９８
７年）であった。高いＣＴＬ活性を示した単核血液試料は限界希釈によって拡張
させてクローン化し、そして同じ方法を使用して再度スクリーニングした。次い
で、ＣＴＬ３６１Ａ／２１クローンを単離した。

【０１３３】図１は、ＣＴＬ３６１Ａ／２１は自己由来腫瘍細胞系ＬＥ９２１１−ＲＣＣを
溶解したが、対照ＬＥ９２１１−ＥＢＶ細胞（自己由来ＥＢＶで形質転換したＢ
細胞系）又はＮＫ−標的Ｋ５６２細胞を溶解しなかったことを示している。クロ
ム放出は４時間後に測定した。ＮＫ−標的Ｋ５６２細胞はメリーランド州ロック
ビルのＡＴＣＣから入手可能である。上記抗原をＣＴＬ３６１Ａ／２１に提示したＨＬＡ分子を同定するために、Ｈ
ＬＡ分子に向けられるモノクローナル抗体の存在下でＴＮＦの産生を試験する阻
害実験を実施した（図２）。ＣＴＬ３６１Ａ／２１は指示された抗体の存在下、
自己由来腫瘍細胞で刺激した。ＭＺ２−ＭＥＬは陰性対照として使用したＨＬＡ
−Ｂ７陰性同種メラノーマ細胞系である。ＴＮＦの産生はＴＮＦ感受性ＷＥＨＩ
−１６４ｃ１３細胞（Gaugler他、１９９６年）を使用して１８時間後に測定し
た。図２に示されているように、ＣＴＬ３６１Ａ／２１で認識される抗原はＨＬ
Ａ−Ｂ７によって提示された。ＣＴＬ３６１Ａ／２１で認識される抗原をコードしている核酸分子を単離する
ために、オリゴ−ｄＴに基づくｃＤＮＡライブラリーを使用した（Gaugler他、
１９９６年参照）。ＣＯＳ細胞はこのライブラリープールから得られるＤＮＡと
ＨＬＡ−Ｂ７ｃＤＮＡを含有するプラスミドとでコトランスフェクションした
。これらのトランスフェクションされた細胞を、上記したアッセイを使用してＴ
ＮＦ産生を測定することによってＣＴＬ３６１Ａ／２１でスクリーニングした。

【０１３４】この実験によって、ｃＤＮＡ４．１（配列番号：１）が単離され、そしてこれ
はＨＬＡ−Ｂ７ｃＤＮＡと一緒にＣＯＳ細胞内にトランスフェクションしたと
きＣＴＬを刺激することができた（図２）。このｃＤＮＡクローンは９２４ｂｐ
長であった。その配列は新規であり、そして８４個アミノ酸の推定上のタンパク
質（配列番号：２）をコードしている読取り枠を含有していた。トランスフェクションされたＣＯＳ細胞の認識が、一時的なトランスフェクシ
ョン後の高い発現値による人工産物である可能性を排除するために、ＨＬＡ−Ｂ
７陽性肉腫系（ＬＢ２３−ＳＡＲ）をｃＤＮＡ４．１含有発現プラスミドでトラ
ンスフェクションし、そして安定なトランスフェクション体を得た。このトラン
スフェクション体、ＬＢ２３−ＳＡＲ＋４．１はＣＴＬ３６１Ａ／２１で認識さ
れた（図３）。クロム放出は４時間後に測定した。

【０１３５】ＣＴＬ３６１Ａ／２１で認識される抗原性エピトープを同定するために、ＨＬ
Ａ−Ｂ７の推定上の結合モチーフ（Rammensee他、Immunogenetics ４１：１７８
〜２２８、１９９５年）を有する配列番号：２から誘導される幾つかの合成ペプ
チドを試験した。これら合成ペプチドの１つ、ＬＰＲＷＰＰＰＱＬ（配列番号：
３）は自己由来ＥＢＶ−Ｂ細胞を感作してＣＴＬ３６１Ａ／２１で溶解すること
ができた（図４）。クロムで標識したＬＥ９２１１−ＥＢＶ細胞は指示された濃
度のペプチドと共に３７℃で３０分間インキュベートした。ＣＴＬ３６１Ａ／２
１はエフェクター対標的比１０で添加し、そしてクロム放出は４時間後に測定し
た。全長メッセンジャーＲＮＡのサイズを決定するために、ＬＥ９２１１−ＲＣＣ
腫瘍細胞から得られるＲＮＡで作成したノーザンブロットをｃＤＮＡ４．１に対
応するプローブとハイブリッドを形成させた。２．２ｋｂのメッセンジャーＲＮ
Ａが観察され、ｃＤＮＡ４．１は完全でないことが示唆された。欠けている５’
配列を見つけるために、上記４．１配列に対応するプライマー及び５’アンカー
プライマーを使用して５’−ＲＡＣＥプロトコール（Gibco／BRL、Life Technol
ogies、メリーランド州ガイザースバーグ）に従って、上記ｃＤＮＡのＰＣＲ増
幅を実施した。これは、読取り枠を修飾することなく、４．１配列を５’末端で
４５８ヌクレオチドだけ延長することができた配列フラグメントを生じさせた（
図５）。

【０１３６】得られた１３８２ｂｐの配列はやはり上記メッセンジャーＲＮＡより実質的に
小さかったので、上記ｃＤＮＡライブラリーは、より長いｃＤＮＡクローンを単
離するためにプローブとしてｃＤＮＡ４．１を使用してハイブリッド形成でスク
リーニングした。０．６ｋｂの１つの陽性クローンが得られ、そして２．２ｋｂ
の３個の同一の陽性クローンが得られた。これらのなかではクローンＩ．１が代
表的である。小さなクローンの配列はｃＤＮＡ４．１の３’末端の配列と適合し
たが、クローンＩ．１の配列は、驚いたことに、ｃＤＮＡ４．１の陽性ストラン
ドの配列に対応していなかった。クローンＩ．１の配列は新規であり、そして４
７６個アミノ酸の推定上のタンパク質をコードしている読み取り枠を含有してい
た（図６）。このタンパク質配列は抗原性ペプチドＬＰＲＷＰＰＰＱＬを含有し
ていない。従って、ｃＤＮＡＩ．１及びＨＬＡ−Ｂ７ｃＤＮＡでトランスフェ
クションしたＣＯＳ細胞はＣＴＬ３６１Ａ／２１では認識されなかった。

【０１３７】ｃＤＮＡＩ．１はｃＤＮＡ４．１と特異的にハイブリッドを形成したので、こ
れら２つの配列を更に詳細に比較し、そしてｃＤＮＡＩ．１の最初の５９５ヌク
レオチドは４．１のアンチセンスストランドの一部分と同一であること見いださ
れた。残りの配列はｃＤＮＡ４．１と関係がなかった。これら２つのｃＤＮＡ間
の関係を更に特定するために、対応するゲノム配列を得た。ｃＤＮＡ４．１をプ
ローブとして使用して、ＬＥ９２１１−ＲＣＣ細胞から得られるゲノムＤＮＡで
構築されたファージライブラリーをスクリーニングした。１４ｋｂの挿入物を含
有する陽性ファージを単離し、そしてこの挿入物は関連部分で配列を決定した。
これら３つの配列を比較することによって、ｃＤＮＡＩ．１は上記遺伝子の完全
にスプライシングされた転写物に対応し、一方ｃＤＮＡ４．１は、最初のイント
ロンのアンチセンスストランドで開始し、ｃＤＮＡＩ．１のエキソン１のアンチ
パラレルストランドで逆方向に転写され、そしてプロモーターのリバースストラ
ンドに位置するポリアデニル化部位で終了する異常メッセージに対応することが
明らかになった（図７）。それ故、この遺伝子は両方向で転写される。この遺伝
子はＲＵＲ−１と呼称され、そしてこれはリバースストランド上に或るペプチド
をコードしている腎臓腫瘍遍在性遺伝子を表している。ｃＤＮＡＩ．１に対応す
るＲＵＲ−１の２．２ｋｂ転写物は多分、この遺伝子の正常なメッセージであり
、一方ｃＤＮＡ４．１に対応するＲＵＲ−１メッセージはこの同じ遺伝子のアン
チセンス転写から生じるように思われる。

【０１３８】正常組織におけるこれら２つの転写物の発現をＲＴ−ＰＣＲで試験した。上記
ＲＵＲ−１センスメッセージの発現は、異なるエキソンに位置しているプライマ
ーＶＤＥ８７（５’−ＣＣＧＴＣＡＧＧＡＡＣＡＴＣＴＡＣＡ−３’；配列番号
：６）及びＶＤＥ９３（５’−ＣＣＡＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＡＡＡＡＣ−５’；
配列番号：７）を使用して評価した（図７）。ＲＵＲ−１アンチセンスメッセー
ジの発現は、プライマーＶＤＥ１１９（５’−ＴＡＡＡＴＧＧＧＴＧＧＧＣＧＧ
ＴＧＧＧＧＧＡＧＡＣ−３’；配列番号：８）及びＶＤＥ１２０（５’−ＴＡＧ
ＧＣＴＧＴＴＴＧＧＡＡＡＧＧＧＴＡＧＣＡＣＡ−３’；配列番号：９）を使用
して試験した（図７）。ＲＴ−ＰＣＲ増幅は２段階で実施した。逆転写は総ＲＮ
Ａ２μｇから出発して記載されているようにして実施した（Van den Eynde他、J
. Exp. Med. １８２：６８９〜６９８、１９９５年）。次に、初期ＲＮＡ５０ｎ
ｇに相当する分別物をＰＣＲ反応で使用し、そしてこの反応は次のようにして行
った：

【０１３９】 −Ｈ_２Ｏ１６．８７５μｌ −緩衝液１０×（Takara）２μｌ −ｄＮＴＰ（各々２．５ｍＭ）２μｌ −プライマー１（２０μＭ）０．５μｌ −プライマー２（２０μＭ）０．５μｌ −ＴａｑＤＮＡポリメラーゼ（Takara、５ｕ／μｌ）０．１２５μｌ −ｃＤＮＡ（５０ｎｇのＲＮＡに相当する）２．５μｌＰＣＲ条件は：９４℃で５分間、これに続く９４℃で１分間、プライマーＶＤＥ
８７／ＶＤＥ９３では５４℃で又はプライマーＶＤＥ１１９／ＶＤＥ１２０では
６２℃で１分間及び７２℃で１分間からなる３５サイクルであった。最後の伸長
段階は７２℃で１５分間実施した。次に、ＰＣＲ産生物をエチジウムブロマイド
で染色したアガロースゲル上で可視化した。

【０１４０】プライマーＶＤＥ１１９及びＶＤＥ１２０は、これらの位置の故に、ＲＮＡ試
料中に存在することができるゲノムＤＮＡも増幅した。それ故、ＲＵＲ−１アン
チセンスに関して陽性の試料はＲＮＡのＤＮアーゼ処理後に再試験し、そして陽
性のまま残ったものだけがＲＵＲ−１アンチセンスメッセージを発現するとみな
した。ＲＮＡの無欠性をチェックするためにアクチンプライマーを常に使用した
。ＲＵＲ−１のセンス転写物は試験した全ての組織で発現され、一方ＲＵＲ−１
のアンチセンス転写物は腎臓、肝臓及び精巣にしか存在していなかった（表１）
。腫瘍では、上記アンチセンス転写物は全ての腎細胞癌試料で、結腸直腸癌、メ
ラノーマ、肉腫及び白血病試料では高い割合で、そして他の腫瘍では低い割合で
検出された（表１）。

【０１４１】

【表１】 ^１ＲＵＲ−１センス転写物の発現はプライマーＶＤＥ８７及びＶＤＥ９３を使用
してＲＴ−ＰＣＲで試験した；ＲＵＲ−１アンチセンス転写物の発現はプライマ
ーＶＤＥ１１９及びＶＤＥ１２０を使用してＲＴ−ＰＣＲで試験した（図７参照
）。^２膀胱のＲＮＡはＤＮアーゼで処理しなかったので、検出された弱いバンドは夾
雑するＤＮＡによるものであろう。

【０１４２】上記アンチセンス転写物及びＨＬＡ−Ｂ７を発現する細胞系がＣＴＬ３６１Ａ
／２１で認識されることも確認された（図８）。図８Ａは、ＲＵＲ−１アンチセ
ンス転写物を発現する２つのＨＬＡ−Ｂ７陽性腎臓細胞癌（ＲＣＣ）系のＣＴＬ
３６１Ａ／２１による溶解を示している。ＭＺ１２５７−ＲＣＣ及びＭＺ１８５
１−ＲＣＣは異なるＨＬＡ−Ｂ７患者に由来する２つのＲＣＣ系である。クロム
放出は４時間後に測定した。図８Ｂは、ＣＴＬ３６１Ａ／２１によるＴＮＦ放出
がＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡを発現するＨＬＡ−Ｂ７陽性腫瘍細胞で特異
的に刺激されたことを示している。ＣＴＬ３６１Ａ／２１を指示された腫瘍細胞
と接触させ、そしてＴＮＦ産生を１８時間後に測定した。ＬＹ４−ＭＥＬ、ＬＢ
２６５−ＭＥＬ、ＬＢ１６８−ＭＥＬ及びＬＢ３０−ＭＥＬは、４人の異なるＨ
ＬＡ−Ｂ７陽性患者に由来するメラノーマ細胞系である。上記と同一の細胞系に
おけるＲＵＲ−１アンチセンス転写物の発現を、プライマーＶＤＥ１１９及びＶ
ＤＥ１２０を使用してＲＴ−ＰＣＲで測定した。

【０１４３】例２：ＲＵＲ−１アンチセンス転写物によってコードされている代替的腫瘍拒絶
抗原の同定多数の抗原性ペプチドが遺伝子のタンパク質産生物から形成されるというＭＡ
ＧＥ遺伝子（及び他の遺伝子）でなされた所見に基づいて、ＲＵＲ−１アンチセ
ンスｃＤＮＡは種々のＨＬＡ分子によって提示される更なる抗原性ペプチドをコ
ードしている可能性があると考えられる。ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡによってコードされている更なる腫瘍拒絶抗
原（例えば、配列番号：３以外の）を同定するためには、少なくとも２つの実験
方法を採用することができる。最初の方法では、ＣＴＬクローンは、ＲＵＲ−１
アンチセンスｃＤＮＡでトランスフェクションした自己由来正常細胞又は推定上
のタンパク質に対応する合成ペプチドを負荷した照射末梢血リンパ球（ＰＢＬ）
で患者のＰＢＬを刺激し、そして適当なＨＬＡクラスＩ分子のコンセンサスを適
合化させて抗原性ペプチドをＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペプチド内に
位置させることによって産生される（例えば、van der Bruggen他、Eur. J. Imm
unol. ２４：３０３８〜３０４３、１９９４年；ＨＬＡ.Ａ２によって提示され
るＭＡＧＥ３ペプチド；Herman他、Immunogenetics ４３：３７７〜３８３、１
９９６年、参照）。これが上記されている方法である。１つ又はそれより多くの
抗原性ペプチドをタンパク質配列内に位置させることは、結合能力に関して確立
されたルール（例えば、Parker他、J. Immunol. １５２：１６３、１９９４年；
Rammensee他、Immunogenetics ４１：１７８〜２２８、１９９５年）に従ってな
されるＨＬＡペプチド結合予測によって助成することができる。ＨＬＡ結合予測
は好都合なことに、インターネットによって、ＵＲＬ http://bimas.dcrt.nih.g
ovのザ・ナショナル・インスティチューツ・オブ・ヘルス・ワールド・ワイド・
ウェブ・サイト（the National Institutes of Health World Wide Web site）
で利用可能なアルゴリズムを使用して行うことができる。

【０１４４】或いは、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡを発現する自己由来腫瘍細胞でリン
パ球を刺激して得られるＣＴＬクローンは、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ及
び自己由来ＨＬＡ対立遺伝子を使用してブリチャード（Brichard）他（Eur. J.
Immunol. ２６：２２４〜２３０、１９９６年）によって記載されているように
してトランスフェクションしたＣＯＳ細胞に対する特異性についてスクリーニン
グする。ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化ペプチドのＣＴＬ認識は、細胞溶解
性Ｔリンパ球からのＴＮＦ放出を測定するか又は上記されているような^５１Ｃｒ
放出アッセイ（Herin他、Int. J. Cancer ３９：３９０〜３９６、１９８７年）
によって決定される。ＣＴＬクローンがトランスフェクションされたＣＯＳ細胞
を特異的に認識する場合、上記コード配列のより短いフラグメントを試験して、
上記ペプチドをコードしている遺伝子の領域が同定される。ＲＵＲ−１アンチセ
ンスｃＤＮＡでコードされているポリペプチドのフラグメントはエキソヌクレア
ーゼＩＩＩ消化又は他の標準的な分子生物学的方法によって調製される。合成ペ
プチドを調製することによって上記抗原の正確な配列が確認される。任意に、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡのより短いフラグメントはＰＣＲで
産生させられる。より短いフラグメントを使用して、上記のようなＴＮＦ放出又
は^５１Ｃｒ放出を誘発させる。

【０１４５】ＴＮＦ放出を誘発するＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡクローンの最短フラグ
メント部分に対応する合成ペプチドが調製される。漸次的により短いペプチドを
合成して、所定のＨＬＡ分子に最適のＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化
腫瘍拒絶抗原ペプチドが決定される。本発明の他の局面は熟練技術者に明白であるので、ここで繰り返す必要はない
。本明細書で引用した特許、公開特許出願及び参照文献は全て、全体として参照
して本明細書に組み入れる。本発明は或る実施態様に関連して記載されているが、本発明の精神から逸脱す
ることなく、当業者によって多くの修飾や変更がなされ得ることが理解されよう
。このような修飾、変更及び均等物は本発明の特許請求の範囲内に入るように意
図されている。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＣＴＬクローン３６１Ａ／２１による自己由来腫瘍細胞ＬＥ９２１１
−ＲＣＣの特異的溶解を示している。

【図２】ＣＴＬクローン３６１Ａ／２１によって認識され、ＨＬＡ−Ｂ７で制
限される抗原をコードしているｃＤＮＡクローンの単離を表している。

【図３】ｃＤＮＡ４．１（ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ）を含有している
発現プラスミドによる安定的なトランスフェクション後の、ＨＬＡ−Ｂ７陽性Ｌ
Ｂ２３−ＳＡＲ肉腫細胞のＣＴＬ３６１Ａ／２１による溶解を示している。

【図４】ペプチドＬＰＲＷＰＰＰＱＬ（配列番号：３）と共にインキュベート
した自己由来ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞のＣＴＬ３６１Ａ／２１による溶解を示して
いる。

【図５】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ及びその読取り枠で予測されるタン
パク質の配列を表している。ＣＴＬ３６１Ａ／２１によって認識される抗原性ペ
プチドには下線が引かれている。垂直矢印は、ＲＵＲ−１遺伝子の最初のエキソ
ンのリバースストランドと同一のフラグメントの境界を示している。水平矢印は
、ＲＴ−ＰＣＲでＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡの発現を試験するために使用
されたプライマーを示している。

【図６】ｃＤＮＡＩ．１（ＲＵＲ−１センスｃＤＮＡ）及びその読取り枠で予
測されるタンパク質の配列を示している。垂直矢印はエキソン１と２の間の境界
を示している。水平矢印はＲＴ−ＰＣＲでＲＵＲ−１センスｃＤＮＡの発現を試
験するために使用されたプライマーを示している。

【図７】センス（Ｉ．１）及びアンチセンス（４．１）転写物を示しているＲ
ＵＲ−１遺伝子の部分構造を表している。

【図８Ａ】ＲＵＲ−１アンチセンス転写物の発現とＣＴＬ３６１Ａ／２１によ
る認識間の相関関係。（Ａ）ＲＵＲ−１アンチセンス転写物（４．１）を発現す
る２つのＨＬＡ−Ｂ７陽性腎細胞癌（ＲＣＣ）系のうちＣＴＬ３６１Ａ／２１に
よる溶解。

【図８Ｂ】ＲＵＲ−１アンチセンス転写物の発現とＣＴＬ３６１Ａ／２１によ
る認識間の相関関係。（Ｂ）４人の異なるＨＬＡ−Ｂ７患者に由来するメラノー
マ細胞系によるＣＴＬ３６１Ａ／２１ＴＮＦ放出の刺激。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 16/18 Ｃ１２Ｎ 1/19 ４Ｃ０８５Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 ４Ｃ０８７ 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ４Ｈ０４５ 1/21 21/08 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 35/12 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＣ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02 // Ａ６１Ｋ 35/12 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＡＦターム(参考） 4B024 AA01 AA12 BA36 CA04 CA09 CA20 DA02 DA03 EA04 GA11 HA13 HA14 4B063 QA01 QA13 QQ43 QQ53 QQ79 QR32 QR35 QR40 QR56 QR77 QS34 QX02 QX10 4B064 AG01 AG27 AG31 CA10 CA19 CA20 CC01 CC24 DA01 DA05 DA14 4B065 AA90X AA93X AA93Y AB01 AC14 BA02 BA24 BD50 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA07 BA01 CA27 DA27 NA14 ZB261 ZB262 4C085 AA03 AA32 BB01 CC03 4C087 AA01 AA02 BB63 NA14 ZB26 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA86 EA28 EA51 FA72 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（ａ）ＲＵＲ−１センスコード化又はＲＵＲ−１アンチセン
スコード化ポリペプチドをコードしており、かつ配列番号：１のヌクレオチド配
列及び配列番号：４のヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド
配列を有する分子とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子、（ｂ）ＲＵＲ−１センスコード化又はＲＵＲ−１アンチセンスコード化ポリペ
プチドをコードしている（ａ）の核酸分子の欠失体、付加体及び置換体、（ｃ）遺伝暗号の縮重のためコドン配列が（ａ）又は（ｂ）の核酸分子と異な
っている核酸分子、並びに（ｄ）上記（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の相補体、からなる群から選択される単離核酸分子。
【請求項２】単離核酸分子が配列番号：１のヌクレオチド配列を含んでい
る、請求項１に記載の単離核酸分子。
【請求項３】単離核酸分子が配列番号：１のヌクレオチド配列のコード領
域を含んでいる、請求項１に記載の単離核酸分子。
【請求項４】単離核酸分子が配列番号：１のヌクレオチド配列からなって
いる、請求項１に記載の単離核酸分子。
【請求項５】単離核酸分子が配列番号：４の核酸配列を含んでいる、請求
項１に記載の単離核酸分子。
【請求項６】単離核酸分子が配列番号：４の核酸配列のコード領域を含ん
でいる、請求項１に記載の単離核酸分子。
【請求項７】単離核酸分子が配列番号：４のヌクレオチド配列からなって
いる、請求項１に記載の単離核酸分子。
【請求項８】（ａ）配列番号：１のヌクレオチド１〜１３８２での１２か
ら１３８１連続ヌクレオチド長の間のユニークフラグメント、（ｂ）配列番号：４のヌクレオチド１〜２１６７での１２から２１６６連続ヌ
クレオチド長の間のユニークフラグメント、（ｃ）「（ａ）」の相補体、及び（ｄ）「（ｂ）」の相補体、その際、上記ユニークフラグメントには配列番号：１０及び配列番号：１１か
らなる群から選択されるヌクレオチド配列だけからなる核酸分子は含まれない、
からなる群から選択される単離核酸分子。
【請求項９】単離核酸分子が、少なくとも１４連続ヌクレオチド、１５連
続ヌクレオチド、１６連続ヌクレオチド、１８連続ヌクレオチド、２０連続ヌク
レオチド、２２連続ヌクレオチド及び２５連続ヌクレオチドを有する核酸分子か
らなる群から選択される請求項８に記載の単離核酸分子。
【請求項１０】単離核酸分子が１２から３２連続ヌクレオチドの間である
請求項８に記載の単離核酸分子。
【請求項１１】単離核酸分子が配列番号：１０又は配列番号：１１中には
存在していない少なくとも５連続ヌクレオチドを含んでいる、請求項８に記載の
単離核酸分子。
【請求項１２】プロモーターと作動可能に結合している、請求項１〜１１
のいずれか１つに記載の単離核酸分子を含んでいる発現ベクター。
【請求項１３】請求項１２に記載の発現ベクターで形質転換又はトランス
フェクションされている宿主細胞。
【請求項１４】宿主細胞がＨＬＡ分子を発現する、請求項１３に記載の宿
主細胞。
【請求項１５】請求項１〜７のいずれか１つに記載の単離核酸分子によっ
てコードされている単離ポリペプチド、又はこの単離ポリペプチドのアミノ酸配
列中に付加、欠失若しくは置換を有している、上記単離ポリペプチドの機能的改
変体。
【請求項１６】単離ポリペプチドが配列番号：２のアミノ酸配列、配列番
号：３のアミノ酸配列及び配列番号：５のアミノ酸配列からなる群から選択され
るアミノ酸配列を有している、請求項１５に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１７】配列番号：３のアミノ酸配列を含んでいる単離ポリペプチ
ド。
【請求項１８】（ａ）配列番号：２の９から８３アミノ酸長の間のユニー
クフラグメント、及び（ｂ）配列番号：５の９から４７５アミノ酸長の間のユニークフラグメント、
からなる群から選択される単離ポリペプチド。
【請求項１９】ユニークフラグメントがポリペプチド結合作用物と結合す
る請求項１８に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２０】ポリペプチド結合作用物が抗体又は細胞傷害性Ｔリンパ球
である請求項１９に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２１】請求項１〜７のいずれか１つに記載の単離核酸分子によっ
てコードされているタンパク質と選択的に結合する単離ポリペプチド。
【請求項２２】単離ポリペプチドが抗体のＦａｂ又はＦ（ａｂ）_２フラグ
メントである、請求項２１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２３】単離ポリペプチドが抗体のフラグメントであり、かつこの
フラグメントが上記タンパク質に対して選択的なＣＤＲ３領域を含んでいる、請
求項２１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２４】単離ポリペプチドがモノクローナル抗体である、請求項２
１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２５】腫瘍関連ポリペプチド前駆体をコードしている核酸の発現
の存在を検出するためのキットであって、このキットは、各々が（ａ）配列番号
：１のヌクレオチド１〜１３８２での１２〜３２ヌクレオチド連続断片、及び（
ｂ）「（ａ）」の相補体からなる群から選択される分子からなっている１対の単
離核酸分子を含んでおり、その際上記連続断片は重複していない。
【請求項２６】単離核酸分子対が、配列番号：１のヌクレオチド配列を含
んでいる単離核酸分子を選択的に増幅するように構築されそして配列されている
、請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】単離核酸分子対が配列番号：８及び配列番号：９である、
請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】単離核酸分子対がＰＣＲプライマーであり、かつプライマ
ーの１つが配列番号：１のユニークフラグメントである請求項２５に記載のキッ
ト。
【請求項２９】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ核酸分子の発現又はその
発現産生物によって特徴付けられる疾患を診断する方法であって、：対象から単離した生物学的試料を、請求項１に記載の単離ＲＵＲ−１アンチセ
ンスｃＤＮＡ核酸分子又はその発現産生物と選択的に結合する作用物と接触させ
ること、および疾患の測定として作用物と核酸分子又は発現産生物間の相互作用を測定するこ
と、を含んでいる、前記方法。
【請求項３０】作用物が、配列番号：１又はそのユニークフラグメントを
含んでいる核酸分子である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】相互作用が、核酸分子の少なくとも一部分を増幅すること
によって測定される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】作用物が細胞溶解性Ｔリンパ球である、請求項２９に記載
の方法。
【請求項３３】作用物が抗体又は抗体フラグメントである、請求項２９に
記載の方法。
【請求項３４】生物学的試料が、非肝臓組織、非腎臓組織、非膀胱組織及
び非精巣組織からなる群から選択される組織から単離される、請求項２９に記載
の方法。
【請求項３５】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペ
プチドの発現によって特徴付けられる疾患を有する対象を治療する方法であって
、上記対象に疾患を改善するのに充分な量の、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ
コード化腫瘍関連ポリペプチドから誘導される腫瘍拒絶抗原とＨＬＡ分子との複
合体の存在を上記対象内で選択的に豊富化する作用物を投与すること、を含んでいる、前記方法。
【請求項３６】作用物が、配列番号：３のアミノ酸配列又はその免疫原性
フラグメントを含んでいる単離ポリペプチドである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】疾患が、肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌及び精巣癌からなる群か
ら選択される癌以外の癌である請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ核酸分子の発現又はその
発現産生物によって特徴付けられる疾患を有する対象を治療する方法であって、対象に疾患を改善するのに充分な量の自己由来細胞傷害性Ｔ細胞を投与し、そ
の際これらの細胞傷害性Ｔ細胞はＨＬＡ分子とＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ
コード化腫瘍関連ポリペプチド又はその免疫原性フラグメントとの複合体に特異
的であること、を含んでいる、前記方法。
【請求項３９】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペ
プチドが配列番号：３のアミノ酸配列を含んでいる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】疾患が肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌及び精巣癌からなる群から
選択される癌以外の癌である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ核酸分子の発現又はその
発現産生物によって特徴付けられる疾患を有する対象を治療する方法であって、上記対象に疾患を改善するのに充分な量の、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ
コード化腫瘍関連ポリペプチド又はその免疫原性フラグメントを投与すること、
を含んでいる、前記方法。
【請求項４２】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペ
プチドが配列番号：３のアミノ酸配列を含んでいる、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】疾患が、肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌及び精巣癌からなる群か
ら選択される癌以外の癌である、請求項４２に記載の方法。、
【請求項４４】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペ
プチドに特異的な細胞傷害性Ｔ細胞でＴ細胞集団を選択的に豊富化する方法であ
って、ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペプチド又はその免疫
原性フラグメントとＨＬＡ提示分子との複合体を提示している作用物と単離Ｔ細
胞集団を、この単離Ｔ細胞集団を細胞傷害性Ｔ細胞で選択的に豊富化するのに充
分な量で接触させること、を含んでいる、前記方法。
【請求項４５】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペ
プチドが配列番号：３のアミノ酸配列を含んでいる、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】作用物がＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関
連ポリペプチド及びＨＬＡ分子を発現する細胞である、請求項４５に記載の方法
。
【請求項４７】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペ
プチド又はその免疫原性フラグメントをコードしている核酸を含んでいるワクチ
ン組成物。
【請求項４８】さらに非ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関
連ポリペプチド又はその免疫原性フラグメントである第２の腫瘍関連ポリペプチ
ド又はその免疫原性フラグメントをコードしている核酸を含んでいる、請求項４
７に記載のワクチン組成物。
【請求項４９】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペ
プチド又はその免疫原性フラグメントを含んでいるワクチン組成物。
【請求項５０】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関連ポリペ
プチド又はその免疫原性フラグメントが配列番号：３のアミノ酸配列を含んでい
る、請求項４９に記載のワクチン組成物。
【請求項５１】さらに非ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関
連ポリペプチド又はその免疫原性フラグメントである第２の腫瘍関連ポリペプチ
ド又はその免疫原性フラグメントを含んでいる、請求項４９に記載のワクチン組
成物。
【請求項５２】ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ核酸又はポリペプチド若
しくはこれらの免疫原性フラグメントを発現する細胞を含んでいるワクチン組成
物。
【請求項５３】細胞が、さらに非ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡ核酸又
は腫瘍関連ポリペプチド又はこれらの免疫原性フラグメントである第２の腫瘍関
連核酸若しくはポリペプチド又はこれらの免疫原性フラグメントを含んでいる、
請求項５２に記載のワクチン組成物。
【請求項５４】さらにアジュバントを含んでいる、請求項４７〜５３のい
ずれか１つに記載のワクチン組成物。
【請求項５５】さらに薬学的に許容しうる担体を含んでいる、請求項４７
〜５３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
【請求項５６】配列番号：３のアミノ酸配列又はその免疫原性フラグメン
トを含んでいるポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含んでいる単
離核酸分子。
【請求項５７】さらに非ＲＵＲ−１アンチセンスｃＤＮＡコード化腫瘍関
連ポリペプチド又はその免疫原性フラグメントである第２の腫瘍関連ポリペプチ
ド又はその免疫原性フラグメントをコードしているヌクレオチド配列を含んでい
る、請求項５６に記載の単離核酸分子。
【請求項５８】請求項１に記載されている単離核酸、及び薬学的に許容しうる担体、を含んでいる組成物。
【請求項５９】請求項１５に記載されている単離ポリペプチド、及び薬学的に許容しうる担体、を含んでいる組成物。
【請求項６０】ＲＵＲ−１アンチセンス核酸分子の発現又はその発現産生
物によって特徴付けられる疾患の予後を測定する方法であって、（ａ）対象から１回目に単離された生物学的試料を、請求項１に記載の単離Ｒ
ＵＲ−１アンチセンス核酸分子又はその発現産生物と選択的に結合する作用物と
接触させること、（ｂ）疾患状態の１回目の測定として作用物と核酸分子又は発現産生物間の相
互作用を、測定すること、（ｃ）上記対象から２回目に単離された第２の生物学的試料を作用物と接触さ
せること、（ｄ）疾患状態の２回目の測定として作用物と第２の生物学的試料中の核酸分
子又は発現産生物間の相互作用を測定すること、及び、（ｅ）１回目と２回目の疾患状態を、予後の測定として比較すること、を含んでいる、前記方法。
【請求項６１】作用物が、配列番号：１又はそのユニークフラグメントを
含んでいる核酸分子である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】相互作用が上記核酸分子の少なくとも一部分を増幅して測
定される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】作用物が細胞溶解性Ｔリンパ球である、請求項６０に記載
の方法。
【請求項６４】作用物が抗体又は抗体フラグメントである、請求項６０に
記載の方法。
【請求項６５】生物学的試料が、非肝臓組織、非腎臓組織、非膀胱組織及
び非精巣組織からなる群から選択される組織から単離される、請求項６０に記載
の方法。