JP2002514053A

JP2002514053A - 核局在化配列を持つ、核タンパク輸送のペプチド阻害物質およびその使用方法

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Publication number: JP2002514053A
Application number: JP51477498A
Authority: JP
Inventors: ナドラー，スティーブン・ジー; クリーブランド，ジェフリー・エス; ブレイク，ジェイムズ; ハファー，オマー・ケイ
Original assignee: ブリストル―マイヤーズ・スクイブ・カンパニー
Priority date: 1996-09-20
Filing date: 1997-09-15
Publication date: 2002-05-14
Also published as: CA2265571A1; AU731725B2; US5877282A; AU4345597A; EP1015012A1; EP1015012A4; TW575580B; WO1998011907A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、免疫抑制剤、抗ウイルス剤および抗腫瘍剤として有効な、シグナル配列ペプチドおよび少なくとも２個の核局在化配列からなる、細胞質タンパク核輸送の新規なポリペプチド阻害物質を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】核局在化配列を持つ、核タンパク輸送のペプチド阻害物質およびその使用方法技術分野本発明は、一般的に遺伝子発現のポリペプチド阻害物質に関する。特に、本発明は遺伝子発現モジュレート活性、免疫抑制活性、抗ウイルス活性および抗腫瘍活性を有する核タンパク輸送（translocation）のポリペプチド阻害物質に関する。背景技術核輸送は、ウィルス複製、腫瘍発生および腫瘍細胞増殖と同様に、遺伝子発現および細胞分裂をはじめとした多くの生物プロセスにとって必須である。核輸送の機構は最近になってやっと詳細に特徴づけられ、多くの不連続な段階を内包していることが分かった。核にまで輸送されることが運命づけられたタンパクは、そのアミノ酸配列内に、核局在化配列(“ＮＬＳ”)と呼ばれるアミノ酸の短伸長鎖を含有している。しかしながら、これらの配列は一般に本来塩基性であり、同定された共通配列はいまだ存在しない。したがって、特定のタンパクに対して特異的であると思われる広範囲の様々な配列が存在していた。細胞中では、これらのＮＬＳは副タンパクにより、あるいはＮＬＳ−含有タンパク内の立体配座の変化により、マスクされたりマスクされなかったりする。ＮＬＳはタンパクの核中に埋めこまれており、またタンパクの表面にさらされていないため、マスクされ得る。ＮＬＳの非マスキングおよび細胞質タンパクの核輸送は、ホスホリル化、脱ホスホリル化、タンパク加水分解消化、サブユニットの会合もしくは阻害性サブユニットの解離などがきっかけで起こり（trigger）得る。したがって、ＮＬＳのマスキングおよび非マスキングにより、これらの細胞質タンパクの核までの輸送を調節可能な機構が提供される。転写因子の核輸送は、核−標的タンパク中にマスクされていないあるいは活性化されたＮＬＳの存在を必要とする。特定のリガンドの細胞表面受容体への結合により細胞質転写因子の核輸送は活性化される。一旦核中に入ると、これらの転写因子は遺伝子発現モジュレート活性に影響を及ぼす。ＮＦ-κＢは、様々な活性化のレベルおよび状態の異種細胞中で見られる遍在性転写因子である。ＮＦ-κＢは、ｐ６５、ｐ５０、ｃ−ｒｅｌ、ｐ５２およびｐ１０５をはじめとするいくつかの異なるサブユニットからなる。最近の研究では、異なるＮＦ-κＢ複合体が遺伝子転写の調節制御に寄与していると示唆されている。ＮＦ-κＢの機能および調節については、リンパ球細胞において最もよく特徴づけられている。これらの細胞中では、広範囲にわたる様々な標的遺伝子、例えば免疫調節遺伝子が存在し、これらはκＩＧ軽鎖を含有したＮＦ-κＢによって調節される。該遺伝子としては、インターロイキン−２α（“ＩＬ-２α ”）受容体、インターロイキン−２（“ＩＬ−２”）、インターロイキン−６（ “ＩＬ-６”）、腫瘍壊死因子−α（“ＴＮＦ−α”）などをコード化したものが挙げられる。刺激を受けていない細胞中では、ＮＦ-κＢの主要形態はｐ５０とｐ６５（ＲｅｌＡ）サブユニットのヘテロ二量体である。非活性化ＮＦ-κＢはＩκＢα、 βおよびγなどの阻害性タンパクにより不活性な複合体として細胞質中に保持される。細胞を例えば、サイトカインなどの副炎症（proinflammatory）刺激により適当に刺激すると、ＩκＢは分解し、その結果遊離なＮＦ-κＢ二量体を放出し、このものは核にまで輸送され、また標的遺伝子、例えばリンホカイン遺伝子および他の免疫調節遺伝子を活性化する。この応答は一過性のものであり、遅延ＮＦ-κＢを媒介したＩκＢα誘発により終結する。最近、グルココルチコイドがＮＦ-κＢ核輸送を阻害することによって免疫抑制活性に影響を及ぼすことが示された。シェインマン（Scheinman）ら（サイエンス270：283−286（1995））およびオーファン（Auphan）ら（サイエンス270： 286−290（1995））は独立して、該阻害がＩκＢ阻害性タンパクのグルココルチコイドによる誘発の増加によって介されることを示した。これらの研究者は、ＮＦ-κＢの阻害物質が有用な免疫抑制剤および抗炎症剤であると提唱した。該ＮＦ-κＢ核輸送阻害物質は、膜−透過可能なポリペプチドモチーフに付着したＮＦ-κＢのｐ５０サブユニット由来のＮＬＳからなり、リン（Lin）らによる生化学ジャーナル（J．Biol．Chem.）270：14255−14258（1995）中に記載されている。外因性転写因子以外のタンパクおよび他の細胞質タンパクの核輸送もまた、活性化されたあるいはマスクされていないＮＬＳの存在に依存する。例えば、レトロウイルス組み込み前（preintegration）複合体の核輸送は、単核細胞および成長−停止Ｔ細胞といった非分裂細胞におけるヒト免疫不全ウイルス１型（“ＨＩＶ−１”）複製の重要な段階である。該輸送は、ＨＩＶ−マトリックス抗原(“ ＭＡ”)ｐ１７のＮ−末端部におけるＮＬＳの存在に依存する。実際、ＨＩＶ-１エンハンサーは、ウイルス複製にとって必須であるＮＦ-κＢに対するタンデム（tandem）結合部位を含有する（ロス（Ross）らによるウイルス学ジャーナル（ J．Virol）65:4350-4358(1991)、パロット（Parrott）らによるウイルス学ジャーナル65:1414-1419(1991)）。ＨＩＶ-１組み込み前複合体の核輸送は、過剰のＳＶ４０ラージＴ抗原ＮＬＳによっていくらか阻害され得る（グリズィア（Guli zia）らによるウイルス学ジャーナル68:2021-2025(1994)）。その上、ドュブロフスキー（Dubrovsky）ら（分子医学（Molecular Med.）2:217−230(1995)）は、ＨＩＶ-１ＭＡｐ１７ＮＬＳに結合かつ反応することが可能な一連の化合物がヒト単核細胞中のＨＩＶ-１複製を阻害すると報告している。加えて、腫瘍発生および腫瘍細胞増殖は発癌タンパクの発現によって調節され、その多くはＮＬＳの存在によって核にまで輸送される細胞質転写因子である。ミラー（Miller）らによる細胞生化学ジャーナル（J．Cell Biochemistry）60:5 60（1996）。したがって、細胞質タンパクの核輸送の阻害物質は遺伝子発現モジュレート剤、免疫調節剤、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤などとして有用となる。発明の概要本発明は、細胞質タンパクの核輸送を阻害する目的で無傷の細胞中に導入可能なポリペプチドを提供するものである。該ポリペプチドは少なくとも２個のＮＬＳおよび、細胞質膜を通して細胞中へ該ポリペプチドを運ぶことが可能なアミノ酸配列を含有する。本発明における研究者は、該ポリペプチドがわずか１個のＮＬＳを有するポリペプチドと比べて驚くべき優れた特性を示すことを見出した。したがって、１つの実施態様では、本発明はシグナル配列ペプチドおよびそれらに共有結合した少なくとも２個のＮＬＳからなるポリペプチドに関する。別の実施態様では、本発明は細胞系タンパクの核輸送を阻害するためにＮＬＳからなる外因性のポリペプチドを無傷の細胞中に導入する方法に関する。方法としては、上記に記載の通りシグナル配列ペプチドおよび少なくとも２個のＮＬＳからなるポリペプチドを提供し、また外因性ポリペプチドを細胞中に導入するのに有効な期間該ポリペプチドと細胞を接触させる方法が挙げられる。さらに別の実施態様では、本発明はシグナル配列ペプチドと少なくとも２個のＮＬＳからなるポリペプチドの免疫抑制量を被験者に投与することからなる、該被験者の免疫応答を抑制する方法に関する。更なる実施態様では、本発明は細胞系タンパクの核輸送のポリペプチド阻害物質を抗ウイルスに有効な量だけ個体に投与することからなる、該個体におけるウイルス感染を治療もしくは予防する方法に関するものである（ここで該阻害物質とはシグナル配列ペプチドおよび少なくとも２個のＮＬＳからなるものである）。しかし、更なる実施態様では、本発明は標的細胞を細胞系タンパクの核輸送の阻害物質と接触させることからなる細胞系遺伝子の発現を転写的にモジュレートする方法に関するものである（ここで該阻害物質とはシグナル配列ペプチドおよび少なくとも２個のＮＬＳからなるものである）。本発明のこれらおよび他の実施態様は、本明細書中に開示の観点において、通常の当業者によって容易に実施可能であろう。図面の簡単な説明図１Ａは、７０Ｚ／３マウスの白血病プレ(pre)−Ｂ細胞中のリポ多糖（“ＬＰＳ”）刺激−表面抗原発現におけるＰＫＫＫＲＫＶＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰＫＫＫＲＫＶＣ（SEQ ID NO:１）（“ＳＶ４０ＭＥＭ”ポリペプチド）の影響に関する図面である（ソリッドバー：κＩＧ軽鎖；スティップル（stippled）バー：ＩＬ-２α受容体；ストライプバー：ＣＤ４５）。図１Ｂは、７０Ｚ／３マウスの白血病プレ−Ｂ細胞中でのＬＰＳ刺激−κＩＧ軽鎖産性における、３個の阻害性ポリペプチドの影響に関する図面である（ひし形：ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチド；正方形：ＫＫＫＹＫＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＫＫＫＹＫＣ（SEQ ID NO:２）（“ＨＩＶ−ＩＭＥＭ”ポリペプチド）；三角形：ＡＫＲＶＫＬＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＫＲＶＫＬＣ（SEQ ID NO:３）（ “Ｃ−ＭＹＣＭＥＭ”ポリペプチド））。図１Ｃは、７０Ｚ／３マウスの白血病プレ−Ｂ細胞中のＳＶ４０ＭＥＭ阻害−κＩＧ軽鎖産性におけるＬＰＳ濃度の増加の影響に関する図面である。図２は、７０Ｚ／３マウスの白血病プレ−Ｂ細胞中のＬＰＳ刺激−サイトカイン産生における、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドの影響に関する図面である（正方形：未処理；ひし形：ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチド（１０μＭ）；円形：ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチド（５μＭ）；三角形：ＳＶ４０ＮＬＳ（１０μＭ））。図３は、７０Ｚ／３マウスの白血病プレ−Ｂ細胞中のＬＰＳ刺激−κＩＧ軽鎖産性における、３個の阻害性ポリペプチドの服用量−応答の関係に関する図面である（三角形：繊維芽細胞成長因子（“ＦＧＦ”）シグナル配列ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰ（SEQ ID NO:４）（“ＭＥＭ”ペプチド）のみを含有するペプチド；正方形：ＦＧＦシグナル配列および該シグナル配列のカルボキシル末端上にＮＦ-κＢｐ５０のＮＬＳを有するポリペプチド、いわゆるＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰＶＱＲＫＲＱＫＬＭＰ（SEQ ID NO:５）ポリペプチド（“ＮＦ-κＢＭＥＭ”ポリペプチド）；ひし形：Ｌ-アミノ酸からなるＳＶ４０ＭＥＭポリペプチド；円型：Ｄ-アミノ酸からなるＳＶ４０ＭＥＭポリペプチド）。図４Ａは、ＬＰＳ刺激−ＴＮＦ-α産生における、阻害性ポリペプチドの影響に関する図面である。図４Ｂは、ＬＰＳ刺激−インターロイキン-８（“ＩＬ-８ ”）産生における、阻害性ポリペプチドの影響に関する図面である。図４Ａおよび図４Ｂの両方において以下の記号：正方形−培地コントロール；クロスした正方形−ＭＥＭペプチド（５μＭ）；ひし形−ＮＦ-κＢＭＥＭポリペプチド（５ μＭ）；円型−Ｌ-アミノ酸（５μＭ）からなるＳＶ４０ＭＥＭポリペプチド；および三角形−Ｄ-アミノ酸（５μＭ）からなるＳＶ４０ＭＥＭポリペプチド）を使用する。図５は、７０Ｚ／３マウスの白血病プレ−Ｂ細胞中のＬＰＳ誘発−ＣＤ４０発現における、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドの影響に関する図面である。図６Ａは、末梢血球単核細胞（“ＰＢＭＣｓ”）内への³Ｈ-デオキシリボチミジン取り込みにおける、ＨＩＶ-１ＭＥＭポリペプチドの影響に関する図面である。図６Ｂは、ＨＩＶ-1一次単離Ｍ１に感染させた抗−ＣＤ３刺激−ＰＢＭＣ中でのウイルスｐ２４産生における、ＨＩＶ−１ＭＥＭの影響に関する図面である。図６Ｃは、ＨＩＶ−１一次単離Ｍ１に感染させた抗−ＣＤ３活性化−ＰＢＭＣ中でのプロウイルスｇａｇ配列発現における、ＨＩＶ−１ＭＥＭポリペプチドの影響を示すゲル図である。図７は、ＨＩＶ−１ＭＥＭ一次単離Ｍ１に感染させたＨ９ヒトリンパ球Ｔ−細胞もしくはジャーカットヒト白血病Ｔ−細胞中のプロウイルスｇａｇ配列発現における、ＨＩＶ−ＩＭＥＭポリペプチドの影響のポリメラーゼ連鎖反応分析結果を示すゲル図である。図８Ａは、ＨＩＶ_LAIに感染させたジャーカットＴ−細胞中のプロウイルスｇａｇ配列発現における、ＨＩＶ−１ＭＥＭおよびＮＦ-κＢＭＥＭポリペプチドの影響のポリメラーゼ連鎖反応分析結果を示すゲル図である。図８Ｂは、ＨＩＶ_LAI に感染させたジャーカットＴ−細胞中の２−長末端反復（“ＬＴＲ”）輪発現における、ＨＩＶ−ＩＭＥＭおよびＮＦ-κＢＭＥＭポリペプチドの影響のポリメラーゼ連鎖反応分析結果を示すゲル図である。図９は、７０Ｚ／３マウスの白血病プレ−Ｂ細胞の増殖における、Ｄ-アミノ酸から製造したＳＶ４０ＭＥＭの影響に関する図面である。図１０は、ラジ（Raji）ヒトＢ−細胞白血病細胞系の増殖における、Ｄ-アミノ酸から製造したＳＶ４０ＭＥＭの影響に関する図面である。図１１Ａは、羊赤血球に対するマウスのインビボでの応答における、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドの静脈内投与の影響に関する図面である。図１１Ｂは、羊赤血球に対するマウスのインビボでの応答における、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドの経口投与の影響に関する図面である。図１２は、マウスにおける抗−ヘモシアニン（ＫＬＨ）応答における、ＢＭＳ 205820およびＣ-ＭＹＣＭＥＭ（ＢＭＳ 214572）の影響を示す。図１３Ａは、インビボでのＴＮＦ-αの産生における、ＢＭＳ 205820ポリペプチドの影響を示す。図１３Ｂは、インビボでのＩＬ-６の産生における、ＢＭＳ 205820ポリペプチドの影響を示す。図１３Ｃは、インビボでのＩＬ-１０の産生における、ＢＭＳ 205820ポリペプチドの影響を示す。図１４は、ＣＤ１４へのリポ多糖（ＬＰＳ）結合における、ＢＭＳ 205820、ｃ-ＭＹＣＭＥＭ（ＢＭＳ 214572）、ＳＶ４０ＮＬＳポリペプチド（一本鎖ＮＬＳ含有）、ｃ−ｍｙｃＮＬＳ単独（輸送配列（ＡＫＲＶＫＬ（SEQ ID NO:6）無し）およびコントロール非−ＮＬＳポリペプチド３７７Ｇの影響を示す。図１５Ａは、オボアルブミン（ＯＶＡ）、噴霧したＯＶＡ、ＢＭＳ 205820およびＣ-ＭＹＣＭＥＭの腹腔内注入に関する投与スキームを示す時間ラインである。図１５Ｂは、図１５Ａ中で略述した処置に伴う肺中の好酸球の％を示す。発明の詳細な説明本発明の実行には、特に指示がなければ該分野の技術範囲内であるタンパク化学および生物学、分子生物学、微生物学および組換えＤＮＡ技術における従来の技法を使用する。これらの技法は文献内で十分に説明されている。例えば、サムブルック（Sambrook）、フリッシュ（Fritsch）&マニアティス（Maniatis）による分子クローニング（Molecular Cloning）：実験室マニュアル（A Laboratory Manual）、二版（1989）；ＤＮＡクローニング(DNA Cloning)、Ｉ巻及びII巻（D ．N．グローバー（Glover）ら、1985）；オリゴヌクレオチド合成（Oligonucleo tide Synthesis）（M．J．ガイト（Gait）ら、1984）；核酸ハイブリダイゼーション（Nucleic Acid Hybridization）（B．D．ハーメス（Hames）&S．J．ヒギンス（Higgins）ら、1984）；動物細胞培養（Animal Cell Culture）（R．K．フレッシュニー（Freshneyら、1986）；固定化細胞および酵素（IRL刊、1986）；パーバル(Perbal),B.による、分子クローニングへの実施ガイド（A．Pratical Gui de to Molecular Cloning）1984）；シリーズ、酵素学法（Methods In Enzymolo gy）（S．コロウィック（Colowick）及びN．カプラン（Kaplan）らによるアカデミックプレス（Academic Press）社）。本明細書及びそれに付加した請求の範囲中で用いる際、内容により明らかに特に指示されていないならば、単数形“a”、“an”および“the”は複数の引例を含むこととする。Ａ．定義本発明を記述する際、以下の語句を使用し、かつ以下に示す通りに定義するものとする。本明細書で用いる際、語句“シグナル配列（signal sequence）”あるいは“ シグナル配列ペプチド（signal sequence peptide）”は、細胞膜を通過する一部であるポリペプチドの動きを方向づけることが可能なペプチドを示すのに用いる。特に、該語句は細胞質膜を横切って細胞にまで達するポリペプチドの動きを方向付けることが可能なペプチドを示すのに用いる。語句“シグナル配列”は、特定のポリペプチドのシグナル配列だけでなく、細胞膜を通過してポリペプチドを運ぶことの可能なポリペプチドのフラグメントもしくは誘導体を包含するものである。“シグナル配列”はＬ-もしくはＤ-アミノ酸からなる。語句“核局在化配列（nuclear localization sequence）”及び“ＮＬＳ”とは、核エンベロープ壁を横切って細胞の細胞質由来のペプチドと会合するタンパクの輸送を方向付けるペプチドを示すのに相互置換可能に使用するものである。語句“ＮＬＳ”とは特定のペプチドの核局在化配列だけでなく、核エンベロープ壁を横ぎる細胞質ポリペプチドの輸送を方向づけることのできる該誘導体をも包含する。ＮＬＳは、ポリペプチドのＮ−末端、Ｃ−末端またはＮ−及びＣ−末端両方に結合するとき、ポリペプチドの核輸送を方向付けることのできるものである。加えて、ポリペプチドのアミノ酸配列に沿って乱雑に局在しているアミノ酸側鎖へＮ-もしくはＣ-末端によってカップリングしたＮＬＳを有するポリペプチドは輸送されるであろう。アダム（Adam）らによる、細胞生物学のジャーナル（ J．Cell．Biol.）111:807-818（1990）。“核局在化配列”は、Ｄ−もしくはＬ −アミノ酸からなっていてもよい。 “１番目及び２番目のＮＬＳによってそのアミノ−及びカルボキシ−末端で相互置換可能にフランクしている（flank）”とは、１番目もしくは２番目のＮＬＳがシグナル配列ポリペプチドのアミノ−もしくはカルボキシ−末端位に局在しうることを意味する。 “核輸送の阻害物質（inhibitor of nuclear translocation）”とは、シグナル配列ペプチドおよび少なくとも２個のＮＬＳからなり、細胞質タンパクの核局在化を阻害、例えば減少もしくは停止するポリペプチドである。該ポリペプチドは、１番目もしくは２番目のＮＬＳによってアミノ−及びカルボキシ−末端位で相互置換可能にフランクしているシグナル配列ペプチドからなるものが好ましい。Ｎ−及びＣ−末端位でのＮＬＳは同一もしくは相違していてもよい。好ましい実施態様の一例では、シグナル配列ペプチドとＮＬＳは各Ｌ-アミノ酸からなる。別の好ましい実施態様では、シグナル配列ペプチドとＮＬＳは各Ｄ−アミノ酸からなる。ポリペプチドの“誘導体（derivative）”とは、保存されるべきアミノ酸置換基からなる相同ポリペプチドが挙げられ、併せて例えばシグナル配列ペプチド、ＮＬＳもしくは核局在化の阻害物質といった機能を保持したポリペプチドを生じる他のアミノ酸置換基を含むものである相同ポリペプチドが挙げられる。ペプチドの“誘導体”とはペプチド擬似体であってよい。 “ペプチド擬似体（Peptide mimetics）”とは受容体分子との相互作用においてペプチドの代わりに置換基として作用する構造である（ペプチド擬似体の総説として、モーガン（Morgan）らによる医化学の年間報告（Ann．Reports Med．Ch em.）24:243-252（1989）参照）。ペプチド擬似体とは本明細書で使用する際、アミノ酸および／またはペプチド結合を含有するかどうかを問わないが、ペプチドリガンドの構造的および機能的特徴を保持した合成的構造が挙げられる。語句 “ペプチド擬似体”とは、またＮ−置換アミノ酸のペプチドもしくはオリゴマーであるペプトイド（peptoids）およびオリゴペプトイド（oligopeptoids）が挙げられる（シモン（Simon）らによる米国科学アカデミー紀要（Proc．Natl．Aca d．Sci．USA）89:9367-9371(1972)）。さらに、ペプチド擬似体としてペプチドライブラリーが挙げられ、このものは目的のアミノ酸鎖を設計し、およびそれに相当するアミノ酸のあらゆる可能性のある配列を表したペプチドの収集である。ペプチド擬似体の産生に関する方法は以下により十分に記載する。２個のポリペプチド配列は、ヌクレオチドもしくはアミノ酸の少なくとも約８５％（少なくとも約８５〜９０％が好ましく、および少なくとも約９５％であることが最も好ましい）が、分子の規定（defined）鎖上で一致している場合、“ 本質的に同族（substantially homologues）”である。本明細書で用いるとおり、本質的に同族とはまた、特定のポリペプチド配列について同一性を示す配列について称する。語句“ポリペプチド（polypeptide）”、“ペプチド（peptide）”および“タンパク（protein）”は相互変換可能に使用でき、またペプチド結合を通じて連結した、アミノ酸のいかなるポリマー（ジペプチドもしくはそれ以上）をも称する。したがって、語句“ポリペプチド”、“ペプチド”および“タンパク”とは、オリゴペプチド、タンパクフラグメント、類縁体、ムテイン、融合タンパクなどが挙げられる。以下の１文字表記アミノ酸略号を本明細書中で用いる。アラニンＡアルギニンＲアスパラギンＮアスパラギン酸ＤシステインＣグルタミンＱグルタミン酸ＥグリシンＧヒスチジンＨイソロイシンＩロイシンＫリシンＬメチオニンＭフェニルアラニンＦプロリンＰセリンＳトレオニンＴトリプトファンＷチロシンＹバリンＶ “単離ポリペプチド（isolated polypeptide）”とは、タンパクが通常自然界で会合している組織もしくは細胞系成分の全体もしくは一部に全く存在しないポリペプチドを意味するものである。従って、組織エキス中に含まれるポリペプチドは、ポリペプチドを合成的にもしくは組換えで製造した場合、“単離”ポリペプチドを構成するようになる。 “哺乳類の被験者（mammalian subject）”とは、哺乳類綱のいかなる一員をも含み、例えば；ヒトおよび非ヒト霊長類、例えばチンパンジーなど、他の類人猿および猿種；酪農動物、例えば、牛、羊、豚、および馬；家庭的な哺乳類、例えば犬および猫；および実験室動物、例えば、マウス、ラットおよびモルモットが挙げられるが、これらに限定されるものではない。該語句は特定の年齢を表すものではない。従って、成人、新生および胎児の哺乳類が包含される。本明細書で用いる“処理（treatment）”とは、（ｉ）感染もしくは再感染の防止（予防（prophylaxis））、あるいは（ii）関心ある病気の徴候の低下もしくは除去（治療（therapy））を称する。Ｂ．一般的方法本発明の中心は、細胞質タンパクの核局在化を阻害するポリペプチド分子の発見である。これらの分子はシグナル配列ペプチドおよび少なくとも２個のＮＬＳからなる。ポリペプチド阻害物質およびそれらの誘導体は、細胞系タンパクの核輸送を阻害するためにＮＬＳからなる外因性のポリペプチドを無傷の細胞に導入し、かつ細胞系プロセスの調節における核輸送の役割を研究するのに有用なツールを提供する。加えて、特定の細胞系ペプチドの核輸送は免疫応答をマウント（mount）するための宿主生物を必要とするので、ポリペプチド阻害物質は免疫抑制剤として有用である。免疫応答は典型的に、抗体の発現、大量のサイトカインの産生、および／または細胞表面受容体の発現によって現れる。したがって、阻害性ペプチドによる免疫応答の阻害は、抗体産生、例えばκ軽鎖ポリペプチドなどの抗体成分ペプチドの産生などの阻害；サイトカイン、例えばインターロイキン−１、インターロイキン−２、インターロイキン−４、インターロイキン−６、インターロイキン−１０、腫瘍壊死因子、もしくは顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子などのサイトカイン産生の阻害；および／またはインターロイキン−２受容体、ｇｐ３９、ＣＤ４９、ＣＤ４５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＡＭ、ＥＬＡＭ、主要組織適合性遺伝子複合体（“ＭＨＣ”）群IIもしくはＶＣＡＭなどの細胞表面受容体の発現における阻害の形態をとりうる。クラーク（Clark）らによるネイチャー（Nature）367:425（1994）。それらの免疫抑制活性によって、本発明のポリペプチド阻害物質は広範囲の免疫疾患の治療に有用であり、自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、多発性硬化症、幼年性糖尿病、全身系エリトマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫ぶどう膜網膜炎、自己免疫血管炎、水庖性天疱瘡、重症筋無力症、自己免疫性甲状腺炎もしくは橋本甲状腺炎、シェーグレン症候群、肉芽腫精巣炎、自己免疫卵巣炎、クローン病、サイコイドーシス、リウマチ性心臓炎、強直性脊椎炎、グレーヴス病、および自己免疫血小板減少性紫斑病の治療などが挙げられるが、これらのものに限定されるわけではない（ポール（Paul）W．E.による、基礎免疫学（Fundamental I mmunology）、３版、ラベンプレス、ニューヨーク、３０章、p.1033〜1097（199 3）；およびコーヘン（Cohen）らによる、自己免疫疾患モデル（Autoimmune Dis ease Models）、ガイドブック、アカデミックプレス（1994）参照）。同様に、本発明のポリペプチド阻害物質は、既にアレルゲンで感作した被験者において過敏症の状態が開始し、もしくは過敏症反応を引き起こす可能性のあるアレルゲンへの応答によって現れる身体的症候を治療するのに有用である。該身体的症候としては、例えば喘息、関節膨張、じんましんなどが挙げられる。加えて、免疫抑制性のため、本発明のポリペプチド阻害物質は敗血症の治療および、敗血症ショック、リポ多糖類（ＬＰＳ）などの細胞外バクテリア由来の内毒素の存在が原因で特定のサイトカインの産生を制御できないために起こる潜在的な致死容態の予防に有用である。その上、多くのウイルス、例えばヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルスなどは宿主細胞の核輸送機構を使用しているので、阻害性ポリペプチドは抗ウイルス剤として有用である。加えて、腫瘍形成および腫瘍細胞の増殖はがん遺伝子の発現を媒介してがんタンパクを作ると思われるため、その多くは核にまで輸送される転写因子である。ミラー(Miller)(1996)らにより上述の通り、ポリペプチド阻害物質もしくはその誘導体は腫瘍成長を抑制するのに使用可能である。要求される阻害物質としては、細胞質膜を通して細胞にまで阻害物質を運ぶことができる、アンテナペディアホメオドメイン、ＦＧＦ、ＨＩＶＴａｔもしくはＨｓｃ７０などのポリペプチド由来のシグナル配列からなるアミノ酸およびその誘導体もしくは擬似体の配列が挙げられる。好ましいシグナル配列としては、細胞質膜を通して細胞にまで阻害物質を運ぶことができる、ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（SEQ ID NO:７）、ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡ（SEQ ID N O:８）、ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰ（SEQ ID NO:４）、ＣＦＩＴＫＡＬＧＩＳＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＱＧＳＱＴＨ（SEQ ID NO:９）など、もしくはその誘導体もしくは擬似体が挙げられる。候補的（candidate）シグナル配列に関して、例えば細胞質中にまで外因性の検出可能な標識化タンパクの局在化を追跡することで、細胞膜を横切るタンパクの輸送を方向づけることが可能な能力を試験した。リンらにより（1995、上述）、放射線標識化タンパクの使用が記載されている。アダム(Adam)らにより記載の方法（1990、上述）によって蛍光タンパクに結合させたＮＬＳペプチドを用いて、インビトロでの核ペプチドの移入を測定可能である。ポリペプチド阻害物質はさらに少なくとも２個のＮＬＳからなる。該ＮＬＳはシグナル配列ポリペプチドのＮ−末端、Ｃ−末端、Ｎ−およびＣ−末端両方、シグナル配列ポリペプチドのアミノ酸配列に沿って局在化しているアミノ酸の側鎖、もしくはそれらのいずれの組合せに対しても共有結合可能である。シグナル配列ポリペプチドは１番目と２番目のＮＬＳによって、そのアミノ−およびカルボキシ−末端で相互置換可能にフランクしているものが好ましい。１番目および２番目のＮＬＳは同一であっても相違していてもよい。ＮＬＳの議論およびＮＬＳの表については、ボウリカス（Boulikas）（真核遺伝子発現の批評総説（Crit． Rev．Eukaryotic Gene Expression）3:193-227（1993））およびそこで引用した文献が挙げられる。ＮＬＳを同定するためのアプローチとしては、（１）ＤＮＡセグメントをコード化した−候補的ＮＬＳと細胞質タンパクをコード化した遺伝子間での遺伝子融合実験（例えば、シルバー（Silver）らによる米国科学アカデミー紀要（Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A.）81:5951（1984）；モーランド（Moreland）らによる分子細胞生物学（Mol．Cell．Biol.）7:4048（ 1987）；およびピカード（Picard）らによるＥＭＢＯ J．6:3333（1987）参照）；（２）合成ＮＬＳペプチドに共役した無核タンパクの核移入（例えば、ゴルドファルブ（Goldfarb）らによるネイチャー322:641（1986）；マークランド（Mar kland）らによる分子細胞生物学7:4255（1987）;およびチェルスキー(Chelsky) らによる分子細胞生物学9:2487（1989）参照）；および（３）細胞質保持を生じる、核タンパクの特定セグメントの部位特定突然変異誘発（例えば、グリーンスパン（Greenspan）らによるウイルス学のジャーナル（J．Virol.）62:3020（198 8）；ファンエテン（van Etten）らによる細胞（Cell）58:669（1989）；およびボウルコス（Boulukos）らによる分子細胞生物学9:5718（1989）参照）。ＮＬＳは、ＳＶ４０Ｔ抗原由来のＰＫＫＫＲＫＶ（SEQ ID NO:１０）およびＫＫＫＲＫＶＣ（SEQ ID NO:１１）（カルデロン（Kalderon）らによる、細胞39:4 99（1984）参照）、酵母菌ヒストンＨ２Ｂ由来のＧＫＫＲＳＫＡ（SEQ ID NO:１２）（モーランドらによる、分子細胞生物学7:4048（1987）参照）、アデノウイルスＥ１Ａ由来のＫＲＰＲＰ（SEQ ID NO:１３）（リオンス（Lyons）らによる、分子細胞生物学7:2451（1987）参照）、トリ細網内皮症レトロウイルスＴ鎖のｖ−ｒｅｌ発癌遺伝子由来のＧＮＫＡＫＲＱＲＳＴ(SEQ ID NO:１４）（ギルモア（Gilmore）らによる、ウイルス学のジャーナル62:703（1988）参照）、ヒトｃ-ｍｙｃ発癌タンパク由来のＧＧＡＡＫＲＶＫＬＤ（SEQ ID NO:１５）（チェルスキーらによる分子細胞生物学9:2487（1989）参照）、マウスｃ-ａｂ１(IV) 遺伝子産物由来のＳＡＬＩＫＫＫＫＫＭＡＰ（SEQ ID NO:１６）（ファンエテンらによる、細胞58:669（1989）参照）、ヒトもしくはラットアンドロゲン受容体由来のＲＫＬＫＫＬＧＮ（SEQ ID NO:１７）(ガイオション−マンテル（Guiocho n-Mantel）らによる、細胞57:1147（1989））、タンパクｐ５３由来のＰＱＰＫＫＫＰ（SEQ ID NO:18）（ダンク（Dang）らによる、生体化学のジャーナル（J ．Biol．Chem）264：18019（1989）参照）、ウイルスJun由来のＡＳＫＳＲＫＲＫＬ（SEQ ID NO:19）、ＡＰ−１複合体の輸送因子（チダ（Chida）らによる、米国科学アカデミー紀要89：4290（1992）参照）、ヒト免疫欠損ウイルスマトリックスタンパク由来のＫＫＫＹＫ（SEQ ID NO:20）およびＫＫＫＹＫＣ(SEQ ID NO:21)（ブックリンスキー（Bukrinsky）による、ネイチャー365:666（1993））、ヒト免疫欠損ウイルスマトリックス２タンパク由来のＫＳＫＫＫ(SEQ ID NO:22)（ブックリンスキーによる（1993）、上述）、ヒトｃ -ｍｙｃ発ガンタンパク由来のＡＫＲＶＫＬ（SEQ ID NO:6）およびＫＲＶＫＬＣ（SEQ ID NO:23）（チェルスキーらによる（1989）、上述）、およびＮＬＳとして有効なそれらの誘導体および擬似体、であることが好ましい。本発明のポリペプチド阻害物質は、該分野で公知の従来の技法、例えば、固相ペプチド合成といった化学合成により製造可能である。そういった方法は該分野の当業者にとって公知である。一般的に、これらの方法は該分野でよく知られた、固相もしくは液相合成法を用いるものである。例えば、固相ペプチド合成技法については、J．M．スチュワート（Stewart）およびJ．D．ヤング(Young)による固相ペプチド合成（Solid Pase Peptide Synthesis）、２版、ピエルス（Pierce ）化学社、ロックフォード、IL(1984)、並びにG.バラニー（Barany）およびR．B ．メリフィールドによるペプチド(The Peptide)：分析、合成、バイオロジー（A nalysis，Synthesis，Biology）、監修E．E．グロス（Gross）およびJ．マイエンホファー（Meienhofer）、２巻、アカデミックプレス、ニューヨーク(1980)、ｐ3-254；および古典的な溶液合成については、M．ボダンスキー（Bodansky）による、ペプチド合成の原理（Principles of Peptide Synthesis）、スプリンガー（Springer）-ベルラック(Verlag)、ベルリン（Berlin）（1984）およびE．グロスおよびJ．マイエンホファー監修、ペプチド：分析、合成、バイオロジー上述１巻参照。一般に、これらの方法は１個以上のアミノ酸もしくは適当に保護したアミノ酸の伸張ペプチド鎖への連続付加からなる。通常、１番目のアミノ酸のアミノもしくはカルボキシ基を適当な保護基によって保護する。次いで、保護したもしくは誘導化したアミノ酸を、アミド結合を形成するのに適当な条件下、内部の固体支持体に結合させたり、あるいは適当に保護した相補（アミノもしくはカルボキシル）基を有する配列中に次のアミノ酸を加えることで溶液中利用可能である。次いで、この新たに加えたアミノ酸残基から保護基を除去し、次いで次のアミノ酸（適当に保護した）を加える。目的のアミノ酸を全部適当な配列で結合させた後、残りの保護基および固体支持体を連続してもしくは同時に除去し、最終のポリペプチドを得る。本一般的な製法を簡単な改良することで、一度に伸張鎖へ１個以上のアミノ酸を加えることが可能となり、例えば保護トリペプチドを適当に保護したジペプチドとカップリングさせる（キラル中心がラヤミ化しない条件下で）ことで脱保護後、ペンタペプチドを得ることが可能となる。典型的な脱保護基としては、ｔ-ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、９-フルオレニルメトキシカルボニル(Ｆｍｏｃ)、ベンキシルオキシカルボニル(Ｃｂｚ) 、ｐ-トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）；２,４−ジニトロフェニル、ベンジル(Ｂｚｌ)、ビフェニル−イソプロピルオキシカルボキシカルボニル、シクロヘキシル、イソプロピル、アセチル、ｏ-ニトロフェニルスルホニルなどが挙げられる。これらのうち、ＢｏｃおよびＦｍｏｃが好ましい。典型的な固体支持体としては、一般的に架橋高分子物質である。これらのものとしては、ジビニルベンゼン架橋スチレン基本骨格高分子、例えばジビニルベンゼン−ヒドロキシメチルスチレン共重合体、ジビニルベンゼン−クロロメチルスチレン共重合体およびジビニルベンゼン−ベンズヒドリルアミノポリスチレン共重合体が挙げられる。ジビニルベンゼン−ベンズヒドリルアミノポリスチレン共重合体は、本明細書中ｐ-メチル−ベンズヒドリルアミンを用いて例示する通り、末端アミド官能基をペプチド鎖（ここで、該鎖を支持体から切断する際に官能基が鎖によって保持される）に直接導入できる利点を供する。好ましい方法の１つとして、従来の固相化学合成、例えばアミドペプチド形の合成を許容する樹脂並びに、標準溶媒および試薬と共にｔ-Ｂｏｃアミノ酸誘導体（ペニンシュラ（Peninsula）研究所製）を用いた応用バイオシステム（Appli ed Biosystems）社（ABI）製４３０Aペプチド合成機でポリペプチドを製造する方法がある。Ｌ-もしくはＤ-アミノ酸含有ポリペプチドを本様式で製造可能である。ポリペプチド成分は定量的アミノ酸分析によって確認し、各ペプチドの特定配列を配列分析によって決定した。別法として、目的のポリペプチドをＡＴＧ開始コドンと共にコード化したＤＮＡを合成することによる組換えＤＮＡ技法によって、ポリペプチドを製造可能である。一旦、目的のポリペプチドに対するコード配列が合成もしくは単離されると、発現に適当などんなベクター中にもクローン可能である。莫大なクローニングベクターが当該技術分野の当業者によって知られており、適当なクローニングベクターを選別することは選択の問題である。クローニング用組換えＤＮＡベクターおよびそれらを輸送可能な宿主細胞に関する実施例としては、バクテリオファージλ（大腸菌）、ｐＢＲ３２２（大腸菌）、ｐＡＣＹＣ１７７（大腸菌）、ｐＫＴ２３０（グラム陰性バクテリア）、ｐＧＶ１１０６（グラム陰性バクテリア）、ｐＬＡＦＲ１（グラム陰性バクテリア）、ｐＭＥ２９０（非−大腸菌グラム陰性バクテリア）、ｐＨＶ１４（大腸菌および枯草菌）、ｐＢＤ９（バチルス）、ｐＩＪ６１（ストレプトミセス）、ｐＵＣ６（ストレプトミセス）、ＹＩｐ５（サッカロミセス）、ＹＣｐ１９（サッカロミセス）および牛のパピローマウイルス（哺乳類細胞）が挙げられる。一般的には、ＤＮＡクローニング：I&II巻、上述；サムブルックらによる上述；B．パーバル（Perbal）、上述参照。バクロウイルス系などの昆虫細胞発現系はまた、当該技術分野の当業者によって使用可能かつ公知であり、また例えば、サマーズ（Summers）およびスミス(Smith)らによるテキサス農業実験局（Texas Agricultural Experiment Station）ブレチン番号１５５５（１９８７）に記載されている。バクロウイルス／昆虫細胞発現系に関する物質および方法は、なかんずく、インビトロゲン（Invitrogen）、サンディエゴＣＡ（“マックスバック（MaxBac）”キット）から、キットの形で商業的に入手可能である。遺伝子は、プロモーター、リボソーム結合部位（バクテリア発現用）および、任意にオペレーター（正確には、“コントロール”要素として本明細書では参照）の制御下に置かれ、その結果目的のポリペプチドをコード化するＤＮＡ配列は本発現構成成分を含有したベクターによって形質変換された宿主細胞中のＲＮＡにまで転写される。該コード配列は、シグナルペプチドもしくはリーダー配列を含んでいてもいなくてもよい。宿主生物から発現したポリペプチドの選別を引き起こすコード配列に、異種リーダー配列を加えることが可能である。リーダー配列を翻訳後プロセッシングにおいて、宿主によって除去することが可能である。例えば、米国特許番号4,431,739；4,425,437；4,338,397を参照。他の調節配列をまた、宿主細胞の成長に対応するタンパク配列の発現を調節することができるよう設計可能である。該調節配列は該分野の当業者にとって公知であり、調節化合物の存在をはじめとした、例えば化学的もしくは物理的刺激に対するして応答する際に遺伝子の発現をオンオフするものが挙げられる。他のタイプの調節要素としてはまた、ベクター内、例えばエンハンサー配列内に存在する場合がある。制御配列および他の調節配列は、ベクター、例えば上記に記載のクローニングベクターなどへの挿入に優先してコード配列にリゲート可能である。別法として、コード配列をコントロール配列および適当な制限部位を既に含んだ発現ベクター内に直接クローン化することも可能である。時には、適当な配向を持つコントロール配列に結合することができるようコード配列を修飾；例えば、適度な読み枠を維持することも必要となる。関心のあるポリペプチドの突然変異物質もしくは類縁体を産生するのが望ましいこともある。突然変異物質もしくは類似体は、タンパクをコード化した配列の一部の欠損、配列の挿入、および／または該配列中の１個以上のヌクレオチドの置換によって製造可能である。部位特定突然変異誘発などのヌクレオチド配列を修飾する技法は、該分野の当業者にとってよく知られている。例えば、サンブロックらによる、上述；DNAクローニング、ＩおよびII巻、上述；核酸ハイブリダイゼーション、上述参照。次いで、発現ベクターを適当な宿主細胞に形質変換するのに使用する。多くの哺乳類の細胞系が該分野で知られており、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから入手可能な不死化（immortalized）細胞系が挙げられ、例えば中国ハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞、ヒーラ細胞、子ハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、猿腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞系癌腫細胞（例えば、ＨＥＰＧ２）、マーディン−ダービー（Madin-Darby）牛腎臓（“ＭＤＢＫ”）細胞、併せて他のものは挙げられるが、これらに限定されるものではない。同様に、バクテリア性宿主、たとえば大腸菌、枯草菌および連鎖球菌ｓｐｐを、本発現構成物と共に使用可能である。本発明に有効な酵母菌としては、なかんずくサッカロミセスセレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、ガンジダアルビアンス（Candida albicans）、ガンジダマルトーサ（Candida maltosa）、ハンセヌラポリモルファ（Hansenula polymorpha）、クリーベロマイセスフラジリス（Kluyvero myces fragilis）、クリーベロマイセスラクティス（Kluyveromyces lactis）、ピヒアギレリモンディー（Pichia guillerimondii）、ピヒアパストロリス（Pichia pastroris）、シゾサッカロミセスポムベ（Shizosaccharomyces p ombe）およびヤロウィアリポリティカ（Yarrowia lipolytica）が挙げられる。バクロウイルス発現ベクターと共に使用する昆虫細胞としては、なかんずく、ネッタイシマ蚊、オートグラファ・カリフォルニア、カイコ、キイロショウジョウバエ、スポンドプテラフルギペルダ（Spodoptera frugiperda）およびトリコプラシアｎiが挙げられる。該タンパクはまたトリパノソーマ中で発現可能である。選んだ発現系および宿主に基づき、本発明のタンパクが発現する条件下で、上記に記載の発現ベクターにより形質変換される宿主細胞を成長させることで本発明のタンパクは産出される。次いで、該タンパクを宿主細胞から単離し、精製した。発現系が成長培地中にタンパクを分泌する場合、該タンパクを培地から直接に精製可能である。タンパクが分泌されない場合、細胞ライゼートから単離可能である。適当な成長条件および回収方法の選択は該技術分野の範囲内である。一旦精製すれば、タンパクのアミノ酸配列を決定、すなわちエドマン分解の反復繰り返し、続いてＨＰＬＣによるアミノ酸分析により決定可能である。アミノ酸シークエンシングの他の方法もまた当技術分野において公知である。上記に説明した通り、上記に記載のペプチド阻害物質を構造的にまた機能的に模倣したペプチド擬似体を本明細書中で使用していることは明らかであり、また以下の戦略および方法を用いることで生じさせることも可能となろう。一般的に、Ｌ−アミノ酸をＤ−アミノ酸によって組織的に置換すること、もしくはＤ−アミノ酸からなるポリペプチド阻害物質の場合Ｄ−アミノ酸をＬ−アミノ酸に組織的に置換すること、側鎖部分をメチル基もしくは異なる電気的特性（ホルビー（ Hruby）らによる、生化学ジャーナル（Biochem．J.）268：249−262（1990）参照）を有する擬類似基によって変換すること、およびアミド結合が置換された上記に記載のポリペプチド阻害物質においてペプチド結合を組織的に置換することで得られる情報により、擬似体は設計可能となる。例えば、アミド結合代用品（surrogate）を含有した類縁体はペプチド構造および機能の面、例えば基本骨格の回転自由、分子内および分子間水素結合パターン、局所的および総分極の修飾および、経口バイオアベイラビリティーの点で開発するのに使用可能である。局所的に立体配座を束縛することもまた、核輸送の候補的ポリペプチド擬似阻害物質の活性に必須条件な立体配座を決定するために導入可能である。例えば、 β，β−二置換アミノ酸をまた、ペプチド活性における立体配座の束縛の効果を試すのに使用可能である（マニッヒ（Mannig）らによる医化学のジャーナル25:4 08-414（1982）；モスベルグ(Mosberg)らによる米国アカデミー紀要106:506-512 （1983）；ペルトン（Pelton）らによる米国アカデミー紀要82:236-239（1985））。該擬似体としては、Ψ[ＣＨ₂Ｓ]、Ψ[ＣＨ₂ＮＨ]、Ψ[ＣＳＮＨ₂]、Ψ[ＮＨＣＯ]、Ψ[ＣＯＣＨ₂]およびΨ[（Ｅ）または（Ｚ）ＣＨ＝ＣＨ]などのイソステリックアミド結合が挙げられる（総説として、スパトーラ（Spatola）による（198 3）、“アミノ酸、ペプチドおよびタンパクの化学および生化学（Chemistry and Biochemistry of Amino Acids，Peptides and Proteins）”中、VII巻、（ウエインスタイン（Weinsteinら）、マルセルデッカー、ニューヨーク、267−357）。基質結合の加水分解反応に関連する四面体遷移状態を模倣した構造もまた存在可能であり、ヒドロキシメチレン、フルオロケトン分子およびホスホルアミデイト遷移状態擬似体（ベールマイヤー（Buhlmayer）らによる、医化学のジャーナル31:1839（1988）；シャム（Sham）らによる、ＦＥＢＳレター220:299（1988）；マットホウス(Matthews)化学研究の説明（Acc．Chem．Res.）21:333（1988））が挙げられる。特定の立体配座状態、例えば1-アミノシクロペンタンカルボン酸（シクロロイシン）およびβ,β−シクロペンタメチレン−β−メルカプトプロピオン酸のαα’-およびββ’-置換環状アミノ酸にアミノ酸残基を束縛する目的で、環状アミノ酸類縁体を使用可能である（ホルビー（Hruby）らによる（1 990）、上述）。該擬似体はまた、阻害性ペプチドの二級構造--つまりアミノ酸残基の３次元的配向をタンパクの公知の二級立体配座に習って作る（model）ことが可能な構造--の擬似体を包含してもよく、例えば、フェノキサチン（phenoxatin）環系などのβ−ターン擬似体およびエピインドリジオン（epindolidione）構造などのβ−シート擬似体が挙げられる。α-ヘリックス誘起テンプレートの設計、合成および立体配座分析が記載されている（ケンプ（Kemp）らによるテトラヘドロン・レター（Tetrahedron Lett.）29:4931（1988）；ケンプ（Kemp）らによるテトラヘドロン・レター29:4935（1988））。同様に、ペプトイド(Peptoids)が本明細書中に使用されている。ペプトイドは、Ｎ−置換アミノ酸のオリゴマーであり（シモンらによる（1972）、上述）、また新規な分子の化学的に異種なライブラリーの発生用モチーフとして使用可能であり、次いで核輸送阻害性活性を調べることも可能である。モノマーとしては、ｔ−ブチルを基本とした側鎖および９−フルオレニルメトキシ−カルボニルα-アミン保護を含んでいてもよい。該ペプトイドモノマーのオリゴマー化は、例えばそのままでベンゾトリアゾール− １−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェイトもしくは、ブロモトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェイトによって活性化され得る。他の工程は、α−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）アミノ酸を用いた従来のペプチド合成と同一である。オリゴペプトイドは対応する阻害性ポリペプチドに匹敵する活性を有するものと同定されており、したがって核輸送の阻害性物質として有用である（シモンらによる（1992）、上述参照）。核輸送阻害性活性を示すペプチドリガンドを、生体発現系を用いて開発することができる（クリスチャンらによる、分子生物学のジャーナル227:711-8（1992 ）；デヴリン（Devlin）らによる科学（Science）249:404-406;クウィルラ(Cwir la)らによる、米国科学アカデミー紀要87:6378-6382（1990）参照）。そういったシステムを使用することにより、ランダムなペプチド配列の大量ライブラリを産生、および目的の生化学活性を有するペプチド配列のこれらのライブラリーをスクリーニング可能となる。該ライブラリーは、ランダムなペプチド配列をコード化する合成ＤＮＡを大腸菌発現ベクター中へクローン化することで産生可能となる。繊維状ファージシステムにおいては、外来ペプチド配列を感染ファージの表面で発現可能である（スミスによる、サイエンス228:1315-1317（198 5）；パームレイ（Parmley）らによる遺伝子（Gene）73：305-318（1988）参照）。例えば、ライブラリーは適当なファージに縮重コード配列(ＮＮＫ)_n（ここで、ＮはデオキシヌクレオチドＧ、Ａ、Ｔの等量混合物を表し、またＣ、ＫはＧおよびＴの等量混合物を表し、ｎはペプチド生成物に必要とされるアミノ酸残基の数を表す）を含有した合成ＤＮＡフラグメントをリゲートすることで作ることができる。ファージは阻害性活性を発現するためにスクリーニングされる。阻害性活性を発現するこれらのものをクローン化し、また核輸送を阻害するための能力を評価できる発現ポリペプチドのアミノ酸配列を決定するために、配列決定したそれらのＤＮＡを増殖することも可能である。ポリペプチド阻害物質の大量ライブラリはまた、米国特許番号4,708,871に記載の通り、重複ペプチドの同時合成によってゲイセン（Geysen）に構築することも可能である。固体支持体はまた、一般的にポリエチレンもしくはポリプロピレンロッドであり、その上部は担体上にポリマー鎖を生み出すために、少なくとも１の官能基を含有するビニルポリマーを重合したグラフトである。該官能基は反応して１級もしくは２級のアミン基を提供するものであり、従来の固相ペプチド化学の方法を用いて目的の合成ペプチドを作り上げる目的で、適当な次数でアミノ酸残基と連続して反応可能なものである。一旦合成されもしくは他で産生されると、候補的ポリペプチドもしくはポリペプチド擬似体の阻害活性を、ＮＦ-κＢの核輸送を誘起する−リポ多糖類を阻害するために、例えばリンらにより（1995）上述に記載の方法によるマウス内皮細胞を用いて候補の能力を評価することにより調べることが可能である。阻害性ポリペプチドは、自己免疫疾患およびウイルス感染を治療するために、もしくは移植拒絶反応を抑制するために医薬組成物として使用可能である。加えて、ポリペプチドは腫瘍成長を抑制するために癌組織に投与可能である。本発明の阻害性ポリペプチドは様々な服用形態で治療成分中に処方可能であり、例えば液剤もしくは懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、坐剤、高分子マイクロカプセルもしくは微小胞、ルポソームおよび注射液剤もしくは注入液剤が挙げられるが、これらに限定されるものではない。好ましい形態は投与様式および標的である特定の癌の型に依存する。組成物はまた好ましくは、医薬的に許容し得るベヒクル、担体または、該分野でよく知られているヒト血清アルブミン、イオン交換剤、アルミナ、レシチンなどのアジュバント、ホスフェイト、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウムなどの緩衝物質および塩もしくは硫酸プロタミンなどの電解質が挙げられる。適当なビヒクルは、例えば水、食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどおよびそれらの組合せである。そういつた組成物を製造する実際の方法は公知であり、あるいは該分野の当業者にとって明らかである。例えば、レミントンの医薬科学（Remington's Pharmaceutical Sciences）、マック（Mack）出版社、イーストン、ペンシルベニア、１８版、1990参照。上記の組成物は従来のデリバリー様式、例えば静脈内、腹腔内、経口、リンパ管内、または皮下投与を用いて投与可能であるが、これらに限定されるものではない。問題の腫瘍もしくは炎症部位への局所投与、例えば関節への直接注入もまた本発明の範囲内での使用である。治療学的に有効な服用量は容易に該分野の技術者によって決定可能であり、疾患の激しさや経過、患者の健康および治療に対する応答、並びに治療をする医師への信頼に依存する。 C．実験項以下に、本発明の実施に関する特定の実施形態の実施例を挙げる．該実施例は例示的な目的でのみ供し、またとにかく本発明の範囲を限定するものではない。使用する数字（例えば、量、温度など）について正確さを求めるよう努力は払っているが、いくつかの実験的誤差および偏りは当然許容されるべきである。実験法ペプチド製造：一般的に、ポリペプチドは段階的に固相合成法を用いて製造し、逆相カラム（Ｃ₁₈）での高速液体クロマトグラフィー（溶出液：１０％〜６０％アセトニトリル、０.１％トリフルオロ酢酸、直線勾配）を用いて精製した（メリフィールド（Merrifield）によるJ．Am．Chem．Soc．85:2149-2154およびリンらによる生物化学27:5640−5645（1988）に記載）。本明細書で記載のペプチドとは、Ｆｍｏｃアミノ酸を用いたギルソン（Gilson ）ＡＭＳ-４２２多段階ペプチド合成機で製造した。ゴーセポール（Gausephal）らによるペプチド研究（Peptide Res.）５：315-320（1992）。ペプチドを樹脂から切断し、トリフルオロ酢酸／水／チオアニソール／エタンジチオール（100 ：5：5：2.5）を用いて２時間反応させ、脱保護した。該ペプチドをエーテルから沈降させ、ギ酸に再度溶解し、水で希釈、凍結乾燥した。精製は、逆相高速液体クロマトグラフィー（溶出液：アセトニトリル／０.１％トリフルオロ酢酸の勾配）を用いて精製した。全合成ペプチドをバイオ−イオン（Bio-Ion）２０装置での質量分析で確認し、期待した分子量を得た。マウス７０Z/３プレ−Ｂ白血病細胞（ATCC T1D-158）、Ｈ９ヒト白血病Ｔ細胞（ATCC CRL-8543）、ジャーカットヒト白血病Ｔ-細胞（ATCC T1B-152）およびＴＨＰ−１ヒト単核細胞（ATCC T1B-202）は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから入手した。 κIg、ＣＤ４５、ＣＤ４０およびインターロイキン−２受容体の発現を、標準酵素結合イムノソルベント検定法（“ELISA s”）（コリガン（Coligan）らによる免疫学における現代のプロトコール（Current Protocols in Immunology）、ウイリー（Wiley）&ソンズ（Sons）、ｐ2.10（1991））を用いて、あるいは細胞表面マーカーを測定するためにＦＡＣＳ染色（ラッフ（Raff）による、免疫学（ Imunology）19：637（1970）に記載）によりアッセイした。細胞表面マーカーを形成する抗体はパーミンゲン（Pharmingen）社より得た。ＴＮＦ-α、ＩＬ-６、ＩＬ-８およびＩＬ−１０の量については、ゲンザイム（Genzyme）、続いて業者紹介より得たエリザキットを用いて決定した。ＨＩＶ−１Ｍ１ｐ２４レベルを、スミスガル（Smithgall）らによって記載された（エイズ研究とヒトレトロウイルス（AIDS RES．and Human Retrovirus）11 :885（1995）に記載）方法を用いてアッセイした。プロウイルスＤＮＡ内容物（ｇａｇ）は、スミスガルら（上述、1995）により記載のポリメラーゼ連鎖反応分析を用いて測定した。２−ＬＴＲサークルは、厳密に言えばＨＩＶ−１ＤＮＡの核形態であり、この発現により、ウイルスゲノムの核局在化をブクリンスキー（Bukrinsky）らによる記載（サイエンス254:423(1991)）の通りに測定できることが分かる。実施例１ κＩＧ軽鎖発現のＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドによる阻害本実験を、繊維芽成長因子由来のシグナルペプチドの疎水性領域およびＳＶ４０ラージＴ抗原ＮＬＳからなる、ポリペプチドＰＫＫＫＲＫＶＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰＫＫＫＲＫＶＣ（SEQ ID NO:１）（“ＳＶ４０ＭＥＭ”ポリペプチド）が、免疫抑制活性を有することを示す目的で遂行する。ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドの影響を、２個の別のポリペプチド、ＫＫＫＹＫＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＫＫＫＹＫＣ（SEQ ID NO:２）（“ＨＩＶ−１ＭＥＭ”ポリペプチド）（このものは、ＨＩＶ−１マトリックスタンパク由来のＮＬＳによってリンクされたＦＧＦの膜輸送ドメインからなる）と、ＡＫＲＶＫＬＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＫＲＶＫＬＣ（SEQ ID NO:３）（“Ｃ−ＭＹＣＭＥＭ”ポリペプチド、チェルスキーらによる上述（1989）、およびダンクらによる上述（19 88））（このものは、ヒトｃ-ｍｙｃ発癌タンパク由来のＮＬＳからなる）を、マウス７０Ｚ／３プレ−Ｂ細胞を用いて比較した。マウス７０Ｚ／３細胞（ATCC TID-158）は、Ｂ−細胞分化上の化合物の影響を分析するためのモデル細胞系である。Ｓ．ｔｙｐｈｏｓａＬＰＳ（Ｄｉｆｃｏ）もしくはγ−インターフェロンに対する応答の際、これらの細胞は表面κ免疫グロブリンマイナスからκＩＧプラスに分化する。図１Ａに示すとおり、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドは、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドで１時間前処理後、Ｓ．ｔｙｐｈｏｓａＬＰＳ（Ｄｉｆｃｏ）に対する応答の際、κ軽鎖発現の約７５％〜８０％の阻害性を引き起こした。ＣＤ４５もしくはインターロイキン−２受容体の発現の場合には、ＳＶ４０ＭＥＭの影響は全くなかった。最大の阻害性の影響は、ＳＶ４０ＭＥＭで３時間前処理した場合であった。ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドの本阻害性の影響は、ＬＰＳの濃度が増加するにつれて克服された。図１Ｂは、ＨＩＶ−１ＭＥＭポリペプチドのＬ−アミノ酸形態およびＡＫＲＶＫＬＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＫＲＶＫＬＣ（SEQ ID NO:３）と比較した、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドのＤ−アミノ酸形態の場合における服用量−応答データを示す。これらのデータは、３個のポリペプチドがほとんど同じ位有効であるが、後者の２個のポリペプチドはκＩＧ軽鎖産生を阻害する際の能力は、ＳＶ４０ＭＥＭほどではないことを示す。図１ｃは、ＬＰＳの濃度が増加するにつれて、ＳＶ４０ＭＥＭの阻害性影響を克服することが可能であることを示す。実施例２サイトカイン産生のＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドによる阻害ＴＨＰ−１コントロール細胞を収集、洗浄およびＲＰＭＩ１６４０（１０％胎児子牛血清、濃度：２.５６×１０⁶細胞／ｍｌ）中にセットした。リン酸緩衝塩水（“ＰＢＳ”）または、２個の別個のポリペプチドＳＶ４０ＭＥＭもしくはＳＶ４０（ＳＶ４０ラージＴ抗原ＮＬＳ配列のみを有するペプチド）の一方を、濃度：１０μＭもしくは２０μＭで細胞に加えた。次いで、細胞を０.１ｍｌ／穴で９６穴プレート中に塗り広げた。次いで、プレートを、３７℃、５％ＣＯ₂ 雰囲気下で２時間インキュベートした。インキュベートの開始に続き、ＬＰＳの培地もしくは滴定を容量０.１ｍｌの範囲内で各穴に加えた。従って、ポリペプチドの最終的な濃度は、５μＭもしくは１０μＭであった。ＬＰＳに刺激を５時間続けた後、上澄みを取り、ＴＮＦ-αおよびＩＬ−８レベルをエリザ法により決定した。加えて、ＰＢＳもしくはポリペプチドで処理するが、ＬＰＳでインキュベートしていない細胞を、細胞の生存力を決定するために上澄みの除去と同時に除去し、ポリペプチドとさらに７時間接触させた。図２に示すデーターから、Ｓｖ４０ポリペプチドはＴＮＦ−α産生において全く影響がないが、該ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドは服用量に依存する様式でＴＮＦ−α産生を阻害することを示しているのは明らかである。同様の結果は、ＩＬ−８の産生に関しても得られる（データーは示さない）。実施例３ κＩＧ軽鎖発現の、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドによる阻害と他の阻害性ポリペプチドによる阻害の比較本実験を、７０Z／３Ｂ-細胞内のκ軽鎖発現における、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドの阻害性影響とポリペプチドＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰＶＱＲＫＲＱＫＬＭＰ（SEQ ID NO:5）（“ＮＦ−κＢＭＥＭ”ポリペプチド）の阻害性影響とを比較するために実施した。７０Z／３細胞を、（１）ＦＧＦシグナル配列ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰ（SEQ ID N:4）（“ＭＥＭ”ペプチド）のみを含有したペプチド；（２）シグナル配列のカルボキシ末端上、ＦＧＦシグナル配列およびＮＦ−κＢｐ５０のＮＬＳを有するポリペプチド、いわゆるNF−κＢＭＥＭポリペプチド；（３）Ｌ−アミノ酸からなるＳＶ４０ＭＥＭポリペプチド；（４）Ｄ−アミノ酸からなるＳＶ４０ＭＥＭポリペプチド；で２時間前処理（０〜５０μM間）した。次いで、該細胞を実施例２に記載の通りＬＰＳでインキュベートし、κ軽鎖発現の発現をアッセイした。図３中のデータはＳＶ４０ＭＥＭのＬ−およびＤ−アミノ酸形態がＬＰＳ−刺激κＩＧ発現を阻害する点で、同じ位強力でありかつ有効であることを示す。加えて、該データは両ＳＶ４０ＭＥＭのＬ−およびＤ−アミノ酸形態が、一本鎖ＮＬＳ配列を有するＮＦ−κＢＭＥＭポリペプチドよりもより強力でありかつより有効であることを示す。ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドの両Ｌ−およびＤ−アミノ酸形態に対するＥＣ₅₀は０.７μＭであり、一方、一本鎖ＮＬＳ配列を有するＮＦ−κＢＭＥＭポリペプチドの場合は３２μＭであった。実施例４サイトカイン産生の、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドによる阻害と他の阻害性ポリペプチドによる阻害の比較本実験を、サイトカイン産生のＬＰＳ誘発における、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドの阻害性影響と、他の阻害性ポリペプチドの阻害影響とを比較するために実施した。ＴＨＰ-１コントロール細胞(ATCC ９/９５ストック）を収集、洗浄し、実施例Ｂに記載の通り、ＲＰＭＩ１６４０、胎児の子牛血清（１０％）中に置いた。該細胞をＰＢＳもしくは（１）ＦＧＦシグナル配列、（２）シグナル配列のカルボキシ末端上にＦＨＧシグナル配列およびＮＦ-κＢｐ５０のＮＬＳを有するポリペプチド、（３）Ｌ−アミノ酸からなるＳＶ４０ＭＥＭポリペプチド、（４）Ｄ−アミノ酸からなるＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドを用いて、最終濃度５ μＭで２時間ィンキュベートした。次いで、該細胞を０.１ｍｌ／穴で９６−穴プレート中に塗り広げた。次いでそのプレートを２時間、３７℃、５％ＣＯ₂雰囲気下インキュベートした。インキュベートの開始に続いて、培地もしくはＬＰＳの１滴を各穴に容量０.０１ｍｌ／穴で加えた。ＬＰＳの刺激を５時間続けた後、上澄み液を取り、ＴＮＦ−αレベルをエリザ法により決定した。図４Ａに示したデータには、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドのＬ−もしくはＤ−アミノ酸形態のみが著しく、ＬＰＳにより誘起されたＴＮＦ−α発現を阻害し；例えば、ＦＧＦシグナル配列ペプチドからなるポリペプチド、またＮＦ−κＢＮＬＳがＴＮＦ−α発現を著しく阻害しないことを示唆する。高ＬＰＳ濃度で、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドのＬ−もしくはＤ−アミノ酸形態でインキュベートした細胞中でさえも、ＴＮＦ−αを誘発した。同様な結果が、ＬＰＳ−誘発ＩＬ−８産生の場合でも得られた（図４Ｂ）。実施例５ＣＤ４０発現におけるＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドの影響ＬＰＳで活性化する前に、７０Z／3マウスＢ−細胞をＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドで３時間処理した。ＬＰＳで活性化後、ＣＤ４０発現において基底レベルの約４倍の増加が見られた。ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドは、ＣＤ４０の本アップ (up)−調節を阻害した（図５参照）。これらの結果は、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドがインビボでのＢ−細胞応答を阻害する際に有効であることを示唆する。実施例６ＨＩＶ−１ＭＥＭポリペプチドによる、ＨＩＶ−１Ｍ１の一次単離を有する末梢血液単核細胞の感染の阻害ＰＢＭＣｓを得、洗浄、培養し、またＨＩＶ−１（ドブロブスキー(Dubrobvsk y)らによりMol．Med．1:217-230に記載）で感染させた。血清反応陰性供与体由来のＰＢＭＣｓを集め、負の選択によりＣＤ８⁺Ｔ細胞を減少させた。該細胞を、ウィー(Wee)らにより実験医学ジャーナル（J．Exp．Med.）177:219 （1993）に記載の方法にしたがって製造した抗−ＣＤ３モノクローナル抗体を用いて活性化し、ＨＩＶ−１ＭＥＭポリペプチドを用いて３時間インキュベートした。次いで、該細胞を阻害物質の存在下、ＨＩＶ−感染供与体から集めたＰＢＭＣから単離したＭ１ウイルスと共に２時間インキュベートした。該ウイルスを洗浄して除き、培養を適当な阻害物質で補足し、７日間インキュベートした。ウイルスの産生を培養上澄み液のｐ２４レベルを測定することによって決定し（図６Ｂ）、細胞増殖におけるポリペプチドの影響と対比し（図６Ａ）、ウイルス負荷をプロウイルスＤＮＡ内容物（ｇａｇ）のポリメラーゼ連鎖反応分析を用いて決定した（図６ｃ）。ＭＥＭペプチドはＨＩＶ−１ＭＥＭポリペプチドのＦＧＦ膜輸送部を表す。該ＨＩＶ−１ＭＥＭポリペプチドは、未処理だが活性化した培養の場合と比べて、ウイルス負荷およびウイルス産生を著しく減少させた。実施例７ＨＩＶ_M1ウイルスを有するＴ細胞の、ＨＩＶ−１ＭＥＭポリペプチドによる感染の阻害Ｈ９およびジャーカット細胞を、ＨＩＶ−Ｍ１ウルスを加える前に、ＨＩＶ− １ＭＥＭポリペプチド（２μM）もしくはコントロールＭＥＭペプチドと共に４時間インキュベートした。細胞を３日間収集、続いて感染させ、またＨＩＶ−１ＤＮＡのレベルをポリメラーゼ連鎖反応により評価した。図７に示すとおり、未処理およびＭＥＭペプチドで処理した−培養と比較して、ＨＩＶ−１ＤＮＡの低レベルによって決定する際、該ＨＩＶ−１ＭＥＭポリペプチドは両細胞系の感染を阻害した。実施例８ＨＩＶゲノムの核輸送の減少に基づく、ウイルス感染の減少ジャーカット細胞をＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドと共に３時間、ＨＩＶ_LAIと共に１〜２時間インキュベートした。該ウイルスを洗浄して除き、該培養を適当な阻害物質（ＳＶ４０ＭＥＭ、０.１μＭおよび１.０ｐＭ；ＮＦ−κＢＭＥＭ、１０μＭ）で補足した。２４時間後、細胞を集め、溶解し、ｇａｇ配列（図８Ａ参照）および２-ＬＴＲサークル（図８Ｂ参照）のポリメラーゼ連鎖反応分析によりＨＩＶ−１ＤＮＡを評価した。ｇａｇ配列のアッセイの場合、全試料において達成した固定のシグナルより、ウイルスをインターナリゼーションした全培養は相対的に同程度であり、また細胞質中でウイルスｃＤＮＡの形成を許容することが分かった。２−ＬＴＲサークルのレベル間の相違により、ＳＶ４０ＭＥＭはウイルスゲノムの核までの輸送を阻害する。したがって、該ポリペプチドはウイルスが細胞に侵入するのに影響を及ぼすのではなく、予想通り特に標的の核輸送に影響を及ぼす。ＮＦ−κＢＭＥＭペプチドは該ウイルスゲノムの核へのウイルスインターナリゼーションもしくは輸送には全く影響がないことを示した。実施例９７０Z／３マウスＢ−細胞白血病細胞の増殖におけるＳＶ４０ＭＥＭの影響マウス７０Z／３Ｂ−細胞をＤ−アミノ酸から製造したＳＶ４０ＭＥＭ（0、0. 2、0.5、1もしくは2μＭ）で処理した。０の日では、コントロールおよび処理した細胞の濃度は全く同一であった。ペプチドに４８時間被曝後、処理した細胞を再び計数し、コントロール細胞と比較した。図９には、マウス白血病細胞系の増殖が、試験したD-ＳＶ４０ＭＥＭの最低濃度（０.２μＭ）によって阻害され、また試験した最大濃度（２μＭ）によって９０％阻害されることを示す。実施例１０ＲＡＪＩヒトＢ−細胞白血病細胞の増殖におけるＳＶ４０ＭＥＭの影響ヒトＲＡＪＩＢ−細胞をＤ−アミノ酸から製造したＳＶ４０ＭＥＭ（0、5、1 0もしくは25μＭ）で処理した。０の日では、コントロールおよび処理した細胞の細胞濃度は全く同一であった。ペプチドに４８時間被曝後、処理した細胞を再び計数し、コントロール細胞と比較した。図１０には、マウス白血病細胞系の増殖が、試験したＤ−ＳＶ４０ＭＥＭの最低濃度（5μＭ）によって阻害され、また試験した最大濃度（25μＭ）によって９５％阻害されることを示す。実施例１１マウス羊赤血球細胞アッセイにおけるＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドのインビボ免疫抑制の影響雌性バルブシーマウス（年齢：６〜８週）を随意、食料および水に近づけたソーン単位中５グループで収容した。マウスは０日に１×１０⁸羊(sheep)赤血球（ “ＳＲＢＣｓ”）を静脈内（ＩＶ）注射することにより免疫感作させた。次いで、該マウスを５のグループに分け、コントロール溶液もしくは阻害性ペプチドを様々な薬容量で、ＩＶ注射または２４ゲージ栄養補給チューブおよび経路を持つガバージュによる経口（“ＰＯ”）で投与した。ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドを以下のスケジュール：０、１、２および３日に５ｍｇ／kgのIV投与；０、１、２、３および４日に１ｍｇ／kgのＰＯ投与で静脈内（ＩＶ）もしくは経口（ＰＯ）投与した。１４日後、マウスは眼窩洞から出血し、抗−ＳＲＢＣ抗体のレベルをエリザ法により血清中で測定した。要するに、イムロン２プレート（ダイナテック）をＳＲＢＣ膜抗原（分析生化学（Anal．Bi ochem.）82:362-371（1978））に、カルボナート／炭酸水素緩衝溶液（０.０５Ｍ、ｐＨ９.６、５μｇ／ｍｌ）で被覆(coat)し、２〜８℃で終夜インキュベートした。プレートを蒸留水で１：１０に希釈した試料希釈濃縮物（ジェネティックシステム、レッドモンド、ＷＡ）を用いて室温で１時間遮断した。該プレートを、リン酸緩衝塩水および０.０５％ツイーン（Tween）-２０（“ＰＢＳ／ツイーン”）中で洗浄した。血清試料を試料希釈物中で希釈し、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳ／ツイーン中該プレートを洗浄後、ヤギ（goat）抗−マウスIgG１−ホースラディシュペルオキシダーゼ−共役（“IgG１−ＨＲＰ”）抗体（サザンバイオテクノロジー、バーミンガムＡＬ）を１：５０００希釈液で加え、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、基質として３,３', ５,５'-テトラメチルベンジジン（“ＴＭＢ”）（ジェネティックシステム）を用いて、共有結合を検出した。ＴＭＢを加え、室温で１５分間インキュベートした。３ＮＨ₂ＳＯ₄を加えて反応を停止させた。吸光度（４５nm）を、マイクロタイタープレート記録計（バイオテック計器）を用いて複製試料から記録した。図１１Ａおよび図１１Ｂ中に表した結果は、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドをＩＶもしくはＰＯで受容したマウスにおける総ＩｇＧレベルにおいては全く影響はないが、該ポリペプチドはＩＶもしくはＰＯ投与されると、特定の抗−ＳＲＢＣ応答を阻害する。実施例１２マウスの抗−ヘモシアニン応答における、ＢＭＳ205820ポリペプチドによる阻害と他の阻害性ポリペプチドによる阻害との比較雌性バルブシーマウス（年齢：８週間）を、キーホールリムペット（keyholel impet）（メガチュラクレヌラタ（Megathura crenulata））ヘモシアニン（パシフィックバイオ−マリーンラボラトリー、ベニス、ＣＡ）２５μgを０日にアジュバントなしで腹腔内投与することで感作した。マウスを５個のグループに分け、阻害性ペプチドＣ−ＭＹＣＭＥＭおよびＢＭＳ205820（ＰＫＫＫＲＫＶＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰＫＫＫＲＫＶ）（SEQ ID NO:24）（このものは、該ポリペプチドがＣ−末端システインを欠損している点を除いてＳＶ４０ＭＥＭと同一である）を、０日に５ｍｇ/ｋｇ投与し、続いて隔日に同一濃度の薬用量を続いて５回投与した。コントロールマウスをキメラＬ６抗体（“ＣｈｉＬ６” ）の服用量：２００μｇで１回処理した。１４日後、該マウスは眼窩洞から出血し、そこで抗-ＫＬＨ抗体のレベルを実施例１１に記載の通り、エリザ法により血清中で測定した。ＢＭＳ205820およびＣ−ＭＹＣＭＥＭポリペプチドの両方が、特定の抗-ＫＬＨ応答を阻害した（図１２参照）。実施例１３抗−ＣＤ３−処理ジャーカットＴ−細胞中、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドによる断片化の刺激ジャーカットＴ−細胞をＳＶ４０ＭＥＭおよび抗−ＣＤ３で２４時間インキュベートすることにより、該細胞の８５％以上の断片化が起こった。ＳＶ４０ＭＥＭ、抗−ＣＤ３単独どちらの場合も著しい断片化は起きなかった。実施例１４ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチドによるＩκＢ分解の阻害ＩκＢは、ＮＦ−κＢ核輸送の阻害物質である。細胞は適当なプロ炎症性刺激、例えばサイトカインもしくはＬＰＳによって活性化されると、ＩκＢは分解する。このことによりＮＦ−κＢ中のＮＬＳの非マスキングを引き起こし、その結果ＮＦ−κＢは核にまで輸送可能となる。本実験は、マウス７０Z／３細胞中のＩκＢ分解におけるＳＶ４０ＭＥＭの影響を明らかにする目的で行なう。マウス７０Z／３細胞（５×１０⁷細胞）を、ＳＶ４０ＭＥＭポリペプチド(2μ Ｍ)もしくはＰＢＳを用いてインキュベートした。細胞の２個の群をさらに一部分にまで細分化し、ＬＰＳ（１００ng／ｍｌ）を用いて０、１５、３０、６０もしくは１２０分間活性化した。該細胞をライジング緩衝液（２００μＬ）（２０ mM Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ'-（２−エタンスルホン酸）（“ＨＥＰＥＳ”）、ｐＨ７.２、２０mM ＮａＣｌ、２.５ｍＭＭｇＣｌ₂、０. １％ノニルフェノキシポリエトキシエタノール（“ＮＰ−４０”））中溶解した。ＩκＢのカルボキシ末端に直列（direct）した抗体（サンタクルツ（Santa Cr uz）コーポレイテッド、サンタクルツ、ＣＡ）を業者の指示にしたがって用い、ウエスタン分析によりＩκＢの存在を分析するまで該溶菌液を凍結した。コントロール細胞をＬＰＳで活性化した１５分後、ＩκＢの分解は懸著であった。ＳＶ４０ＭＥＭペプチドで前処理した細胞中では、ＩκＢの分解は顕著ではなかった。実施例１５敗血症ショックを治療するためのＢＭＳ 205820の可能性これらの実施例はＢＭＳ 205820が敗血症ショックの治療に有効であることを示すものである。敗血症ショックの致死モデルを以下の通り使用する。Ａ．200mgリポ多糖類（ＬＰＳ）、敗血症ショックの原因的物質を注入する前の１および３時間時に、バルブシーマウスに対し、ＢＭＳ 205820もしくはＰＢＳ（５mg／kg）を静脈内投与して前処理した。ＬＰＳを腹腔内投与した。ＬＰＳ注射後直ぐ、併せてＬＰＳ注射２４時間後、マウスに対してさらにポリペプチドを注射した。マウスは典型的に、ＬＰＳ注射後４８時間以内に死亡した。表１から明らかなとおり、２個の分離実験において、ＢＭＳ 205820の投与によりＬＰＳ注射後７日間生存しているマウスの数は著しく増加した。表１ＬＰＳ注射後７日間生存しているマウスのフラクション実験ＬＰＳ＋ＰＢＳＬＰＳ＋ＢＭＳ 205820 １０／１０６／１０２２／１０１０／１０Ｂ．バルブシーを表２に指示した時間時に、ＬＰＳ（２００μg）続いてＢＭＳ 205820ポリペプチドで処理した。ＢＭＳポリペプチドを静脈内投与し、ＬＰＳを腹腔内投与した。群ＡのマウスをＬＰＳ投与後指示した時間時にポリペプチド／ＰＢＳ（5mg／kg）中で処理した。群ＢのマウスについてＬＰＳ処理の３時間後さらにポリペプチドを受容させた。表２で明らかなとおり、ＢＭＳ 205820は特にポリペプチドの服用量を２倍投与すると、ＬＰＳに応答する際、死を阻害するのに有効であった。表２敗血症ショックの致死モデルにおけるＢＭＳ 205820での遅延処理の影響処理生存フラクション群Ａ群Ｂ無し０／５２／５Ｔ＝０５／５５／５Ｔ＝３０分１／５５／５Ｔ＝１時間２／５５／５Ｔ＝１.５時間１／５４／５Ｔ＝２時間０／５０／５実施例１６ＢＭＳ 205820ポリペプチドによる、インビボでのサイトカイン産生の阻害これらの実験により、ＢＭＳ 205820ポリペプチドがサイトカイン産生をモジュレートする事が可能であることが示される。特に、敗血症ショックの非致死モデルを使用した。バルブシーマウスに対し、ＬＰＳ(1μg)および同時にＢＭＳ 2 05820ポリペプチド／ＰＢＳ（3mg／kg）の１回服用量で処理した。ＴＮＦ−α、ＩＬ-６およびＩＬ-１０レベルをエリザ法により、血清中で測定した。図１３Ａに示すとおり、ＢＭＳ 205820ポリペプチドはＴＮＦ-αの産生において著しい阻害を引き起こし、これは敗血症症候の主要な一因である。ＩＬ−６レベルはわずかに影響を受けるだけであり（図１３Ｂ）、一方、ＩＬ−１０産生は大きく増加した（図１３Ｃ）。ＩＬ−１０での該影響は本サイトカインが免疫抑制であるため利点があり、また敗血症ショックのモデルにおいて有効であることが明らかになった。実施例１７ＢＭＳ 205820およびＣ−ＭＹＣＭＥＭを用いたＣＤ１４へのＬＰＳ結合の阻害本実験は、ＢＭＳ 205820およびＣ−ＭＹＣＭＥＭ（“ＢＭＳ 214572”ポリペプチド）が細胞表面受容体、ＣＤ１４の両方へのＬＰＳ結合を阻害し、また該ポリペプチド阻害物質が敗血症の治療において有効であると立証可能であると示すものである。９６−穴プレートをヤギ−抗ヒトＩＧで被覆し、溶解性ＣＤ−１４を加え、および該プレートを４℃で終夜インキュベートした。ＢＭＳポリペプチド、Ｃ−ＭＹＣＭＥＭポリペプチド、一本鎖ＳＶ４０ラージＴ−抗原ＮＬＳを含有したＳＶ４０ＮＬＳポリペプチド、輸送配列（ＡＫＲＶＫＬ(SEQ ID NO:6)）を持たないｃ-ｍｙｃＮＬＳ、コントロールの非−ＮＬＳポリペプチド、３７７ＧもしくはＰＢＳを該プレートに加え、該プレートを５分間インキュベートした。次いで、大腸菌AO16をプレートに加え、該プレートを４℃で２時間インキュベートした。プレートを洗浄し、ＬＰＳをマウス抗−大腸菌ＬＰＳ（0.5μg／ml）、続いてヤギ抗−マウスホースラッディシュペロキシダーゼにより検出した。図１４では実験の結果を示す。ＢＭＳ 205820およびＣ−ＭＹＣＭＥＭの両方がＬＰＳに結合し、またＣＤ１４に結合するのをブロックすることができた。ｃ −ｍｙｃＮＬＳはＣＤ１４へのＬＰＳの結合をブロックしなかった。ＬＰＳは敗血症ショックの原因的物質である。したがって、ＣＤ１４へのＬＰＳの結合をブロックすることによって、本明細書に記載のＮＬＳポリペプチドはインビボで、敗血症ショックを予防しもしくは低下するよう作用し得る。本結果は予期しないものであった。特定の理論に基づいて結合しない場合、正に荷電したＮＬＳポリペプチドがＬＰＳ上の負に荷電した領域に結合することはありうる。実施例１８喘息を治療するためのＢＭＳ 205820の可能性本実験では、ＢＭＳ 205820ポリペプチドが喘息の治療に有効であることを示す。ＢＭＳ 205820ポリペプチドを喘息のマウスモデル（レンズ(Renz)らによる、J．Allergy Clin．Path．89:1127-1138(1992)）で試験した。図１５Ａに示す通り、バルブシーマウスにオバルブミンをミョウバンアジュバントとして様々な時期に腹腔内投与した。引き続き、図１５Ａに示すとおり、オバルブミンの肺への噴霧療法による治療を行なった。マウスをまた指示された時期に、ＢＭＳ 205 820ポリペプチド／ＰＢＳ（３mg／kg）で治療した。マウスを１８日目に殺し、好酸球の存在をアッセイした。図１５Ｂで明らかなとおり、ＢＭＳ 205820ポリペプチドは肺への該好酸球の侵潤、喘息状態の測定を著しく阻害した。以上、細胞系タンパクの核輸送の阻害物質について開示する。課題発明の好ましい実施態様については幾分詳細に記載しているが、付加した請求の範囲によって定義する本発明の精神および範囲から逸脱しないならば、明らかにバリエーションが可能であると理解するものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 7/06 Ｃ０７Ｋ 14/00 7/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 14/00 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ブレイク，ジェイムズアメリカ合衆国98109―3192ワシントン州シアトル、ゲイラー・ストリート・ナンバー243、201番 (72)発明者ハファー，オマー・ケイアメリカ合衆国98119ワシントン州シアトル、エリオット・アベニュー・ウエスト 101番

Claims

【特許請求の範囲】１．細胞系タンパクの核輸送を阻害することのできるポリペプチドであって、（１）細胞質膜を通して細胞にまでポリペプチドを運ぶことのできるシグナル配列ペプチド；および（２）少なくとも２個の核局在化配列（ＮＬＳｓ）からなる単離ポリペプチド。２．シグナル配列が１番目と２番目のＮＬＳによって、アミノ−およびカルボキシ−末端で相互変換可能にフランクする、請求の範囲１に記載のポリペプチド。３．シグナル配列ペプチドがアンテナペディアホメオドメインシグナル配列ペプチド、繊維芽細胞成長因子シグナル配列ペプチド、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）Ｔａｔシグナル配列ペプチドまたは、Ｈｓｃ７０シグナル配列ペプチドである請求の範囲１もしくは２に記載のポリペプチド。４．シグナル配列ペプチドがアンテナペディアホメオドメインシグナル配列ペプチドである、請求の範囲３に記載のポリペプチド。５．シグナル配列ペプチドがアミノ酸配列ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（ SEQ ID NO:７）からなる、請求の範囲４に記載のポリペプチド。６．シグナル配列ポリペプチドが繊維芽細胞成長因子シグナル配列ペプチドである、請求の範囲３に記載のポリペプチド。７．シグナル配列ペプチドがアミノ酸配列ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡ（SE Q ID NO:8）からなる、請求の範囲６に記載のポリペプチド。８．シグナル配列ペプチドがＨＩＶＴａｔシグナル配列ペプチドである、請求の範囲３に記載のポリペプチド。９．シグナル配列ペプチドがアミノ酸配列ＣＦＩＴＫＡＬＧＩＳＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＱＧＳＱＴＨ（SEQ ID NO:９）からなる、請求の範囲８に記載のポリペプチド。１０．１番目及び２番目のＮＬＳが同一もしくは相違しており、および群：ＰＫＫＫＲＫＶ（SEQ ID NO:１０）、ＫＫＫＲＫＶＣ（SEQ ID NO:１１）、ＧＫＫＲＳＫＡ（SEQ ID NO:１２）、ＫＲＰＲＰ（SEQ ID NO:１３）、ＧＮＫＡＫＲＱＲＳＴ（SEQ ID NO:１４）、ＧＧＡＡＫＲＶＫＬＤ（SEQ ID NO:１５）、ＳＡＬＩＫＫＫＫＫＭＡＰ（SEQ ID NO:１６）、ＲＫＬＫＫＬＧＮ（SEQ ID NO:１７）、ＰＱＰＫＫＫＰ（SEQ ID NO:１８）、ＡＳＫＳＲＫＲＫＬ（SEQ ID NO:１９）、ＫＫＫＹＫ（SEQ ID NO:２０）、ＫＫＫＹＫＣ（SEQ ID NO:２１）、ＫＳＫＫＫ（SEQ ID NO:２２）、ＫＲＶＫＬＣ（SEQ ID NO:２３）およびＡＫＲＶＫＬ（SEQ ID NO:６）から選ばれるアミノ酸配列からなるペプチドである、請求の範囲１もしくは２に記載のポリペプチド。１１．１番目及び２番目のＮＬＳが同一もしくは相違しており、および群：ＰＫＫＫＲＫＶ（SEQ ID NO:１０）、ＫＫＫＲＫＶＣ（SEQ ID NO:１１）、ＧＫＫＲＳＫＡ（SEQ ID NO:１２）、ＫＲＰＲＰ（SEQ ID NO:１３）、ＧＮＫＡＫＲＱＲＳＴ（SEQ ID NO:１４）、ＧＧＡＡＫＲＶＫＬＤ（SEQ ID NO:１５）、ＳＡＬＩＫＫＫＫＫＭＡＰ（SEQ ID NO:１６）、ＲＫＬＫＫＬＧＮ（SEQ ID NO:１７）、ＰＱＰＫＫＫＰ（SEQ ID NO:１８）、ＡＳＫＳＲＫＲＫＬ（SEQ ID NO:１９）、ＫＫＫＹＫ（SEQ ID NO:２０）、ＫＫＫＹＫＣ（SEQ ID NO:２１）、ＫＳＫＫＫ（SEQ ID NO:２２）、ＫＲＶＫＬＣ（SEQ ID NO:２３）およびＡＫＲＶＫＬ（SE Q ID NO:６）から選ばれるアミノ酸配列からなるペプチドである、請求の範囲７に記載のポリペプチド。１２．１番目及び２番目のＮＬＳがアミノ酸配列ＰＫＫＫＲＫＶ（SEQ ID NO:１０）からなる、請求の範囲１１に記載のポリペプチド。１３．１番目及び２番目のＮＬＳが、アミノ酸配列：それぞれＰＫＫＫＲＫＶ（ SEQ ID NO:１０）およびＫＫＫＰＫＶＣ（SEQ ID NO:１１）、それぞれＫＫＫＹＫ（SEQ ID NO:２０）およびＫＫＫＹＫＣ（SEQ ID NO:２１）、またはそれぞれＡＫＲＶＫＬ（SEQ ID NO:６）およびＫＲＶＫＬＣ（SEQ ID NO:２３）からなる、請求の範囲１１に記載のポリペプチド。１４．アミノ酸配列ＰＫＫＫＲＫＶＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰＫＫＫＲＫＶ（SEQ ID NO:２４）からなる、請求の範囲１２に記載のポリペプチド。１５．アミノ酸配列がＰＫＫＫＲＫＶＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰＫＫＫＲＫＶＣ（SEQ ID NO:１）からなる、請求の範囲１３に記載のポリペプチド。１６．細胞系タンパクが転写因子である、請求の範囲１〜１５のいずれかに記載のポリペプチド。１７．転写因子がＮＦ−κＢである、請求の範囲１６に記載のポリペプチド。１８．細胞系タンパクの核輸送を阻害するために、核局在化配列（ＮＬＳ）からなる外因性ポリペプチドを無傷の細胞に導入する方法であって、（ａ）請求の範囲１〜１７のいずれかに記載のポリペプチドを提供し；および（ｂ）外因性ポリペプチドを細胞に導入するのに有効な期間、ポリペプチドと細胞を接触させる、ことからなる方法。１９．請求の範囲１〜１７のいずれかに記載のポリペプチドの免疫抑制に有効な量を被験者に投与することからなる、被験者における免疫応答を抑制する方法。２０．請求の範囲１〜１７のいずれかに記載のポリペプチドの抗ウイルスに有効な量を個体に投与することからなる、被験者におけるウイルス感染を治療しもしくは予防する方法。２１．細胞系タンパクが転写因子であり、また阻害物質が請求の範囲１〜１７に記載のいずれかのポリペプチドからなる、細胞系タンパクの核輸送の阻害物質と標的細胞を接触させることからなる細胞系遺伝子の発現を転写的にモジュレートする方法。２２．被験者における免疫応答を抑制するのに有用な組成物の製品として、請求の範囲１〜１７のいずれかに記載のポリペプチドを使用する方法。２３．被験者におけるウイルス感染を治療または予防するのに有用な組成物の製品として、請求の範囲１〜１７のいずれかに記載のポリペプチドを使用する方法。２４．細胞系遺伝子の発現を転写的にモジュレートするのに有効な組成物の製品として、請求の範囲１〜１７のいずれかに記載のポリペプチドを使用する方法。