JP2002508768A

JP2002508768A - ３’−モノリン酸化オリゴヌクレオチド

Info

Publication number: JP2002508768A
Application number: JP50518799A
Authority: JP
Inventors: 陸長▲徳▼; 庄旻; 夏宇蕾
Original assignee: 中国科学院上海生物化学研究所
Priority date: 1997-06-28
Filing date: 1998-06-26
Publication date: 2002-03-19
Also published as: CN1203919A; AU7905198A; WO1999000401A1; CN1261893A; CN1060177C

Abstract

(57)【要約】インビトロおよび細胞内にて、血漿中および細胞内での安定度が非修飾オリゴヌクレオチドよりも明らかに高く、ホスホロチオエート修飾オリゴヌクレオチドよりもわずかに高いことが実証され、細胞に取り込まれる能力が非修飾オリゴヌクレオチドやホスホロチオエート修飾オリゴヌクレオチドよりも高い３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドを提供する。３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドは非天然修飾物を含まないために、その代謝分解産物はいかなる毒性および副作用も有しない。それゆえ、治療薬として使用される時、３'モノリン酸化オリゴヌクレオチドはホスホロチオエート修飾オリゴヌクレオチドよりも好都合でかつ安全である。

Description

【発明の詳細な説明】３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチド発明の分野本発明は、修飾オリゴヌクレオチドに関し、特に、毒性や副作用が少なく安定性も増大した、治療薬として使用され得る３'-ＯＨモノリン酸化オリゴヌクレオチドに関する。技術的背景アンチセンスおよびアンチ遺伝子オリゴヌクレオチド(３重鎖形成オリゴヌクレオチド)を含むオリゴヌクレオチドは、遺伝子発現のインヒビターとして用いられている。これらは近年開発された新たな種類の治療的アプローチの典型を示す(ワグナー、アールダブリュ、ネイチャー(Wagner，RW，Nature)、１９９４年、３７２、３３３-３３５；クルーケ、エスティー、アニュ.レヴ.ファーマコル. トキシカル.(Crook，ST，Annu．Rev．Pharmacol．Toxical.)、１９９２年、３２、３２９-３７６；ヘレン、シー、ユア.ジェイ.キャンサー(Helene，C，Eur．J ．Cancer)、１９９４年、３０Ａ、１７２１-１７２６；クルーケ、エスティー、アンチセンスヌクレイックアシッズドラッグデヴ.(Crooke，ST，Antise nse Nucleic Acids Drug Dev.)１９９６年、６、１４１-１４７)。その作用機構は、ウイルス遺伝子の複製、転写および翻訳の抑制；ヒト体内の有害な遺伝子の転写および翻訳の抑制；生体内ＲＮａｓｅＨの作用を経た標的ＲＮＡの分解；を含む。これらのオリゴヌクレオチドは低い毒性および副作用を有する高い特異性を呈する治療薬のクラスに属する。現在臨床試験がなされているアンチセンスのオリゴヌクレオチドの例は、抗ＨＩＶ剤ＧＥＭ９１(第ＩＩ相)、抗炎症剤ＩＳＩＳ２３０２(第ＩＩ相)、抗癌剤ＩＳＩＳ３５２１(第Ｉ相)およびＩＳＩＳ５１３２(第Ｉ相)、ＡＩＤＳ患者に用いられる抗ＣＭＶ網膜炎剤ＩＳＩＳ２９２２（第ＩＩＩ相）、慢性骨髄性白血病の治療に用いられるＬＲ-３００１(第Ｉ相)などである(ジェネティックエンジニアリングニュース(Genetic Engineering News)、１９９６年、１６、２９-３４)。オリゴヌクレオチドはヒトの体内に侵入後、標的器官や細胞を貫通し得る前に生体内酵素により容易に分解される。それゆえ、それらはその期待される治療能力を発揮しない(ホーク(Hoke)、ジー.ディー.(G.D.)、ら、ヌクレイックアシッドレス.(Nucleic Acids Res.)、１９９１年、１９、５７３４-５７４８)。そこで、オリゴヌクレオチドの安定度、特に酵素分解に対するその安定度を高め得ることが明らかに重要となる。これが出来れば、その治療効果が増加し、必要な投与量が減少するだけでなく、治療にかかるコストや副作用の程度もいくらか減少するであろう。オリゴヌクレオチドの安定度を高め、ヒト体内でのその半減期を伸ばすために、化学的および構造的修飾を含む一連の方法が研究されており、それは多くの刊行物に報告されているごとくである。例えば、ホスホロチオエートジエステルボンドがホスフェートジエステルボンドに置換する(ＷＯ９１１５５００、１９９１年)；および２つのオリゴヌクレオチドがその３'および３'又は５'および５' 末端を介して結合する(ＥＰ４６４６３８、１９９２年)；などである。現在、ほとんどのアンチセンスのオリゴヌクレオチドはその安定度を高めるために、化学的修飾(ホスホチオエート修飾法が最も理想的なものの一つであると考えられている)を用いる。しかしながら、そのような物質は天然物ではなく、ヒトの細胞中で高い程度の「異物性」を示す。加えて、これらの修飾オリゴヌクレオチドの合成にかかる費用は非修飾オリゴヌクレオチドの合成にかかる費用に比べて高く、その天然のホスフェートジエステル対応物よりも化学的に安定度が低い。ホスホロチオエート修飾オリゴヌクレオチドは、特異性なく作用し、細胞の他の生物学的機能を逐行し得ると同時にいくらかの重要な細胞内タンパク質と結合し得、それにより細胞がシグナルを伝達する能力にも影響を与える。これらのオリゴヌクレオチドは強い免疫原性を示し、体の免疫系を刺激し得る。又、ホスホロチオエートジエステル類似体の生体内代謝産物はヒトの体内で毒性の副作用を引き起こし得る(ステイン(Stein)、ＣＡ、トレンズインバイオテクノロジー(T rends in Biotechnology)、１９９６年、１４、１４７-１４９)。本発明はそれゆえ、オリゴヌクレオチドを修飾するより良い方法を開発することを目指す。発明の目的本発明の目的は、安定度が増し、毒性および副作用が減少したオリゴヌクレオチドの例など、３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドを製造することである。発明の詳細本発明は、構造式５'ｄ(ＮＮＮ......ＮＮＮ)ｐ３'又はオリゴ(ｄＮ)-３'Ｐ( Ｎ＝Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ；ｐ３'又は３'Ｐ＝３'モノリン酸基である)を有する３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドを製造する。３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドは、３'-ホスフェート固体相カラム(グレンリサーチカンパニー提供の３' -ホスフェートＣＰＧ；正式名称は、２−[２−(４,４'-ジメトキシトリチロキシ )エチルスルホミル]エチル−サクシノイル長鎖アルキルアミノ-ＣＰＧである)上で３９１ＥＰＤＮＡシンセサイザー（ＡＢＩカンパニー）を用いて合成され、その後、濃アンモニア溶液中で脱保護を受ける。酵素分解に対するこれらの３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドの安定度を試験した。３'→５'エキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼに対する非修飾オリゴヌクレオチド、３'−モノリン酸化オリゴヌクレオチド、ホスホロチオエート修飾オリゴヌクレオチドおよび３'−ホスホロチオエート部分修飾オリゴヌクレオチドの安定度の生体内での比較において、ヘビ毒ホスホジエステラーゼを３'→５'エキソヌクレアーゼの代わりに用い、ＤＮａｓｅＩをヒトのエンドヌクレアーゼの代わりに用いた。更なる安定度の試験を血漿中および細胞内において行った。結果は、３'-リン酸化オリゴヌクレオチドはヘビ毒ホスホジエステラーゼに抵抗性があり、血漿および細胞内におけるその安定度は３'-非修飾又は３ '-部分修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの安定度よりも明らかに高いことを示した。しかし、その安定度はホスホロチオエート修飾オリゴヌクレオチドよりもわずかに高いだけであった。更に、３'-リン酸化は、オリゴヌクレオチドが細胞内に侵入し得る速度に影響を及ぼさず、その速度はホスホロチオエート修飾オリゴヌクレオチドよりも速かった。これらの結果は３'→５'エキソヌクレアーゼが血漿および細胞中に存在する主な酵素であることおよびそれが３'−ＯＨ基質を要することを示す。オリゴヌクレオチド内の３'−ＯＨ基がリン酸化された後では、オリゴヌクレオチドはもはや３'→５'エキソヌクレアーゼの基質として作用し得ない。それゆえ、そのようなオリゴヌクレオチドは３'→５'エキソヌクレアーゼの作用に抵抗し得、ヒト血漿中におけるその保有時間は延長され、そのため、より効率的に標的細胞に輸送され得る。３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドの細胞内における安定度が高められたために、それらは標的遺伝子の相補的配列に、より効率的に結合し得る。３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドは、３'-ホスフェートがホスホモノエステラーゼにより切断された後のみ、３'→５'エキソヌクレアーゼにより分解され得る。血漿および細胞内における３'-モノリン酸化オリゴヌクエオチドの高い安定度はこれらの部位においてホスホモノエステラーゼ活性が低いことを示す。加えて、ＤＮＡの複製は３'-ＯＨ末端を有するプライマーを必要とするので、３'モノリン酸化オリゴヌクエオチドがＤＮＡに結合するや否やそれらはウイルスＤＮＡの複製およびＲＮＡ逆転写を抑制する。現在使用されているアンチセンスのオリゴヌクレオチドのほとんどは３'-ＯＨ末端を有する修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチオドであり、それらはウイルスＤＮＡの複製又はＲＮＡの逆転写を抑制しない。さらに、３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドは通常の塩基対形成に影響を及ぼさないので、そのような修飾オリゴヌクレオチドは容易にかつ特異的に標的ＤＮＡ又はＲＮＡに結合することが保証され得る。まとめると、ウイルス又は腫瘍遺伝子などの有害遺伝子のＤＮＡ又はＲＮＡ中の特異的配列に従って設計された３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドは選択的に標的ＤＮＡおよびＲＮＡに結合し得、ウイルスＤＮＡの複製、転写および翻訳を抑制し得、ヒト体内の有害遺伝子の転写および翻訳を抑制し得る。それらは、生体内ＲＮａｓｅＨを利用して、その結合する標的ＲＮＡの分解を引き起こすことも出来る。それゆえ、上記のメカニズムと利点のために、３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドはさらなる生物学的機能さえも有する。更に、Ｂ型肝炎ウイルスに対して設計されたアンチセンスのオリゴヌクレオチドに関する研究は、３ '-モノリン酸化オリゴヌクレオチドは非修飾のオリゴヌクレオチドに比べて２倍以上の程度でＢ型肝炎ウイルス遺伝子の発現を抑制し得ることを示した。本発明の利点本発明中に記述されている3'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオラート化オリゴヌクレオチドよりも安定かつ容易に細胞に取り込まれるという利点を有する。さらに、リン酸基は核酸の天然成分であるので、修飾物としてのその基の使用は異物分子を体内へ導入せず、その分解代謝産物はいずれの毒性副作用も引き起こさない。それゆえ、このシステムは他の化学的修飾法よりも安全で、全体的に見通しても、よく用いられているホスホロチオラート化オリゴヌクレオチドよりも優れている。３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドは、標的ＤＮＡおよびＲＮＡに選択的に結合し得、又、ウイルスＤＮＡの複製、転写および翻訳を抑制する。故に、３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドは臨床において有用な薬物になる可能性がある。図の一覧図１ヘビ毒ホスホジエステラーゼによる分解に対する４オリゴヌクレオチドの抵抗性図２ＤＮａｓｅＩによる分解に対する４オリゴヌクレオチドの抵抗性図３４０％ヒト血漿内の４オリゴヌクレオチドの安定度図４ヒーラ(HeLa)細胞内の４オリゴヌクレオチドの安定度図５ヒーラ細胞細胞質内の４オリゴヌクレオチドの濃度図６ヒーラ細胞核内の４オリゴヌクレオチドの濃度実施例実施例１：３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドおよび他のオリゴヌクレオチドの合成以下の４オリゴヌクレオチドを３９１ＥＰＤＮＡシンセサイザー(ＡＢＩカンパニー)にて合成した。これらのオリゴヌクレオチドおよびその３'-修飾物の配列を以下に記載する：１)３'ＯＨ：５'ｄ(ＡＴＡＧＧＧＧＣＡＴ)３' ２)３'Ｐ：５'ｄ(ＡＴＡＧＧＧＧＣＡＴ)Ｐ３' ３)ＳＰ：５'ｄ(Ａ.Ｔ.Ａ.Ｇ.Ｇ.Ｇ.Ｇ.Ｃ.Ａ.Ｇ.Ａ)３' ４)３ＳＰ：５'ｄ(ＴＴＧＡＧＧＡＴＧＧＡＧＣＣＣＴＧＧＡ.Ｃ.Ｃ.Ａ) ３' .はホスホロチオラート化ジエステル結合を示す。第１のオリゴヌクレオチドは３'-ＯＨ基を有する。第２のオリゴヌクレオチドは３'-モノリン酸基を有する。第３のオリゴヌクレオチドは全ホスホロチオラート化ジエステル結合を含み、３'-ＯＨ基を有する。第４のオリゴヌクレオチドは３つのホスホロチオラート化ジエステル結合を含み、残りの結合は、リン酸化ジエステル結合であり、３'-ＯＨ基を有する。配列２(３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチド)を０.２μモルの３'-リン酸化固体相カラム(グレンリサーチカンパニー提供の３'リン酸化ＣＰＧ、正式名称は２-[２-(４,４-ジメトキシトリチロキシ)エチルスルホミル]エチル-サクシノイル長鎖アルキルアミノＣＰＧである)上で３９１ＥＰＤＮＡシンセサイザー(ＡＢＩカンパニー)を用いて０.２μモルのサイクルで合成した。配列１(３'- ＯＨオリゴヌクレオチド)を０.２μモルのｄＴ固体相カラム(グレンリサーチカンパニー)上で類似の合成サイクルを用いて合成した。配列３および４をｄＡ固体相カラム(グレンリサーチカンパニー)上で、ホスホロチオラート化修飾が必要とされる場合にチオラート化剤を酸化剤の代わりに用いたことを除く類似の合成サイクルを用いて合成した(アイヤー(IYer)、ＲＴら、ジェイ.オーグ.ケム.(J.Org.Chem.)、１９９０年、５５、４６９３−４６９９)。合成が完了した後、オリゴヌクレオチド担体を回収し、保護基を除去するために濃アンモニア溶液を用いて５５℃にて１５時間処理を施した。生じた溶液を除去し、真空乾燥し、残存物を２００μｌの５０％ホルムアミドへ溶解した。生成物を７モル／Ｌの尿素-２０％ＰＡＧＥにて精製し、バンドをＵＶ下で切断し、塩を除去するために２回蒸留のＨ₂Ｏで透析し、濃縮物を−２０℃で貯蔵した。生成物の量をＡ₂₆₀ にて決定した。実施例２：ヘビ毒ホスホジエステラーゼに対する４オリゴヌクレオチドの安定度実施例１に記述された４オリゴヌクレオチド(３'ＯＨ、３'Ｐ、ＳＰ、３ＳＰ) をＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ(Ｔ４ＰＮＫ)によりおのおの別に５'-³²Ｐで標識した。５０ｐモルのオリゴヌクレオチドに５０μＣｉ[γ-³²Ｐ]-ＡＴＰ、２ユニットのＴ４ＰＮＫ、１μｌの１０×バッファーおよび２回蒸留したＨ₂Ｏを加え、１０μｌにした。混合物を３７℃で１時間インキュベートし、標識されたオリゴヌクレオチドを実施例１のようにＰＡＧＥを用いて精製した。非標識のオリゴヌクレオチドを添加し、終濃度５μモル／Ｌを得、ヘビ毒ホスホジエステラーゼを１００μＵ／ｍｌまで添加し、混合物を１０ｍモル／Ｌのトリス -ＨＣｌ、５０ｍモル／ＬのＭｇＣｌ₂および０.１％の仔ウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)を用いてｐＨ８.０まで緩衝処理し、次いで３７℃でインキュベートした。サンプル(５μｌ)を０、０.５、１、１.５、２、４、８、１２および２４時間時に採取し、等量のローディングバッファー(９８％ホルムアミド、１０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ、０.０２５％のキシレンシアノールＦＦ、０.０２５％のブロモフェノールブルー)を添加し、溶液を混合し、７モル／Ｌの尿素-２０％ＰＡＧＥ上で分析した。結果はヘビ毒ホスホジエステラーゼに対する３'Ｐ、ＳＰおよび３ＳＰの抵抗性が幾分似通っていて、それらが全て３'ＯＨよりもかなり抵抗性があるということを示した。違いは有意であり、図１に示されている。実施例３：ＤＮａｓｅＩ(エンドヌクレアーゼ)に対する４オリゴヌクレオチドの安定度実施例２のように、³²Ｐ標識オリゴヌクレオチドのおのおのに非標識オリゴヌクレオチドを終濃度５μモルＬになるように添加した。ＤＮａｓｅを１００Ｕ／ｍｌになるように添加し、混合物を１０ｍｍｏｌ／Ｌのトリス-ＨＣｌ、５ｍｍｏｌ／ＬのＭｇＣｌ₂および０.１％のＢＳＡを用いてｐＨ８.０になるように緩衝処理し、次いで３７℃にてインキュベートした。サンプル(５μｌ)を０、０. ５、１、１.５、２、４、８、１２および２４時間時に採取し、等量のローディングバッファーを添加し、溶液を混合し、７モル／Ｌの尿素-２０％ＰＡＧＥ上で分析した。結果は、ＤＮａｓｅＩに対する３'Ｐの安定度はＳＰよりもわずかに低いが、３'ＯＨおよび３ＳＰよりもかなり高いということを示した。更に、３ＳＰはＤＮａｓｅＩの作用に特に感受性がある。図２を参照されたい。実施例４：４０％ヒト血漿中での４オリゴヌクレオチドの安定度実施例２のように、³²Ｐ-標識オリゴヌクレオチドのおのおのに非オリゴヌクレオチドを終濃度５μモル／Ｌとなるように添加した。ヒト血漿を４０％になるように添加し、混合物を３７℃でインキュベートした。サンプル(５μｌ)を０、０.５、１、１.５、２、４、８、１２および２４時間時に採取し、等量のローディングバッファーを添加し、溶液を混合し、７モル／Ｌの尿素−２０％ＰＡＧＥ上で分析した。結果は３'Ｐが最も安定で、２４時間のインキュベーションの後でも、約５０％が残っていた。これは他の３つのオリゴヌクレオチドよりも明らかに勝つており、３'ＯＨがこのシステムの中で最も安定度が低かった。図３を参照されたい。実施例５：細胞内での４オリゴヌクレオチドの安定度ヒーラ細胞(２×１０⁵)を３５ｍｍの培養皿へ接種し、１.５ｍｌの細胞培地( １０％のＦＣＳを含むＤＭＢＭ)を添加し、細胞を３７℃にて５％ＣＯ₂下で成長させた。細胞が４０％−６０％コンフルエンスとなるまで成長した後、培地を廃棄し、２０μｌの５'-³²Ｐ標識３'ＯＨ、３'Ｐ、ＳＰ又は３ＳＰトランスフェクション混合物(４μｌのリポフェクチンおよび０.２μｍｏｌ／Ｌのおのおののオリゴヌクレオチドを含む)を添加した。５時間インキュベートした後、トランスフェクション混合物を廃棄し、１０％のＦＣＳを含む２ｍｌのＤＭＢＭ培地を添加し、細胞を再び３７℃にて５％ＣＯ₂下でインキュベートした。細胞を５、１２、２４、３６、４８および７２時間後に消化し、遠心分離し、ペレットを酸性溶液で洗浄し、細胞表面からオリゴヌクレオチドを除去した(ガオ(Gao)ＷＹ、ら、ジェイ.バイオ.ケム.１９９０年、２６５、２０１７２−２０１７８；ラッパレイネンＫ(Lappalainen K).ら、バイオケム.バイオフィズ.アクタ.(Biochim ．Biophys．Acta)、１９９４年、１１９６、２０１-２０８を参照されたい)。次いで１mlのＴＥＳ溶液(２０ｍｍｏｌ／ＬトリスＨＣｌｐＨ８.０、１０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ、１％ＳＤＳ)を添加することにより室温で１０分間細胞を溶解した。混合物を有機相(フェノール：クロロホルム：イソアミルアルコール５０：４８：２)で２回抽出し、２倍量の無水エタノールを添加してＤＮＡを沈殿させ、沈殿を１０μｌの蒸留水に溶解した。ＤＮＡを７ｍｏｌ／Ｌ尿素-１５％ＰＡＧＥ上で分析し、放射能写真撮影し、黒色密度を測定した。５時間の培養後に残っている全長のオリゴヌクレオチドの量を１００％として、様々な培養時間の後の細胞内に残っている完全長のオリゴヌクレオチドの量を５時間の培養後に残っている全長のオリゴヌクレオチドの量に対する比率として決定した。結果は、ヒーラ細胞において、３Ｐ'は３ＳＰや３'ＯＨよりも明らかにより安定であり、ＳＰは比較的安定であることを示した。図４を参照されたい。実施例６：細胞内の４オリゴヌクレオチドの分布ヒーラ細胞(５×１０⁴)を１２穴のプレート内へ接種し、０.５ｍｌの細胞培地 (１０％ＦＣＳを含むＤＭＢＭ)を添加し、細胞を３７℃で５％ＣＯ₂下で成長させた。細胞が４０％−６０％コンフルエンスとなるまで成長した後、培地を廃棄し、１００μｌの５'-³²Ｐ標識３'ＯＨ、３'ｐ、ＳＰ又は３ＳＰトランスフェクション混合物(４μｌのリポフェクチンおよび０.２μｍｏｌ／Ｌの各オリゴヌクレオチドを含む)を添加した。標本を３連で調製した。インキュベートの５時間後、１０％ＦＣＳを含む４００μｌのＤＭＢＭ培地を添加し、細胞を再び３７℃ にて５％ＣＯ₂下でインキュベートした。０、２、４、８、１８、２４および３０時間後、細胞培地を廃棄し、細胞を０.５ｍｌＰＢＳで一度洗浄し、１００μ ｌのトリプシンで６分間分解し、次いで１０％ＦＣＳを含む１００μｌのＤＭＢＭを添加した。細胞数を３回数え、平均数を出し、次いで５０００ｒｐｍで遠心分離した。実施例５のように、ペレットを酸性溶液で洗浄し、オリゴヌクレオチドを細胞表面から除去した。細胞質と核を分離し(ウェイントローブＨ(Weintr aub H)、ら、セル.１９８３年、３２、１１９１-１２０３)、細胞質および核に含まれる放射能を測定した。異なる時間に細胞質および核に含まれる３'ＯＨ、３'Ｐ、ＳＰおよび３ＳＰを計算し、３標本について、平均を取った。細胞質および核における３'ＯＨ、３'Ｐ、ＳＰおよび３ＳＰの濃度を図５および６に示す。試験条件下で、３'ＯＨと３'Ｐは細胞核にＳＰや３ＳＰよりも速く侵入し、ＳＰは比較的ゆっくりと、３ＳＰは全部の中で最も遅く侵入した。３ＳＰが比較的長いオリゴヌクレオチドであるのに対し、３'ＯＨおよび３'Ｐは同じ長さであり、ＳＰは特に長い核酸を有する。結果から分かるように、３'-モノリン酸化修飾はオリゴヌクレオチドが細胞に侵入するスピードに影響を及ぼさない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．構造：５'ｄ(ＮＮＮ... ...ＮＮＮ)ｐ３'又はオリゴ(ｄＮ)-３Ｐ'（Ｎ＝Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ）により特徴付けられる、３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドのクラス。２．３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドが標的ＤＮＡおよびＲＮＡに結合し、ウイルスおよび有害遺伝子の複製、転写および翻訳を抑制し、治療薬として使用され得る、請求項１に記載された３'-モノリン酸化オリゴヌクレオチドの使用。