JP2002212079A - Endotoxin inhibitor containing diacylglycerol derivative as active ingredient - Google Patents

Endotoxin inhibitor containing diacylglycerol derivative as active ingredient

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JP2002212079A
JP2002212079A JP2001014059A JP2001014059A JP2002212079A JP 2002212079 A JP2002212079 A JP 2002212079A JP 2001014059 A JP2001014059 A JP 2001014059A JP 2001014059 A JP2001014059 A JP 2001014059A JP 2002212079 A JP2002212079 A JP 2002212079A
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acid
endotoxin
formula
compound
general formula
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JP2001014059A
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Ryohei Tsuji
亮平 辻
Yoshiko Kurokawa
淑子 黒川
Hitomi Yamaguchi
仁美 山口
Riichiro Uchida
理一郎 内田
Itsuo Sato
五雄 佐藤
Tsutomu Masuda
力 増田
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Noda Institute for Scientific Research
Original Assignee
Noda Institute for Scientific Research
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new endotoxin inhibitor, to provide a preventive/curative medicine for inflammation caused by the endotoxin, to provide an anti-septicemic medicine, and to provide food and drink or cosmetics containing the above medicines. SOLUTION: This endotoxin inhibitor contains a 3-O-[α-D- glycopyranosyl-(1-4)-α-D-glycopyranuronosyl]-1,2-diacylglycerol derivative as an active ingredient.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【0001】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、主として特定構造
のジアシルグリセロール誘導体を有効成分とする、エン
ドトキシン阻害剤、エンドトキシンにより誘導される炎
症の予防治療剤および抗敗血症剤に関する。また、本発
明は、上記の薬剤を含有する飲食品または化粧品に関す
る。更に本発明は、上記ジアシルグリセロール誘導体の
効率的な製造法に関する。
TECHNICAL FIELD The present invention relates to an endotoxin inhibitor, a prophylactic / therapeutic agent for inflammation induced by endotoxin, and an antiseptic agent containing a diacylglycerol derivative having a specific structure as an active ingredient. The present invention also relates to a food or drink or cosmetic containing the above-mentioned drug. Further, the present invention relates to a method for efficiently producing the diacylglycerol derivative.

【0002】[0002]

【従来の技術】グラム陰性菌の細胞壁の構成成分である
エンドトキシン(リポポリサッカライド)はグラム陰性
菌感染症において生体と相互作用する主要な成分であ
る。ヒトおよび動物においてエンドトキシンとエンドト
キシンによって惹起される病理学的現象に対して非常に
敏感である免疫系が強く活性化される。すなわち、エン
ドトキシンが血液中に混入すると、エンドトキシンによ
り誘導される免疫応答に起因してエンドトキシンショッ
クから敗血症に至る全身性炎症反応症候群(SIRS)
が誘発される。この様なエンドトキシンショックによる
敗血症は、エンドトキシンが単球などの種々の細胞に作
用して炎症性のメディエーターを産生させることにより
引き起こされることが知られている(アドバンシス・イ
ン・イミュノロジー(Advances in Immunology)53巻、
267〜289ページ、1993年)。
2. Description of the Related Art Endotoxin (lipopolysaccharide), a component of the cell wall of Gram-negative bacteria, is a major component that interacts with living organisms in Gram-negative bacterial infections. The immune system, which is very sensitive to endotoxin and pathological phenomena caused by endotoxin in humans and animals, is strongly activated. That is, when endotoxin enters the blood, systemic inflammatory response syndrome (SIRS) ranging from endotoxin shock to sepsis due to the immune response induced by endotoxin
Is triggered. It is known that such endotoxin-induced sepsis is caused by endotoxin acting on various cells such as monocytes to produce inflammatory mediators (Advances in Immunology (Advances in Immunology)). Immunology) 53 volumes,
267-289, 1993).

【0003】炎症性メディエーターとしては、インター
ロイキン1、インターロイキン6、インターロイキン
8、TNF-αなどが重要である。これらの炎症メディエー
ターは炎症反応における生体機能調節や感染に対する生
体防御機構において中心的な役割を担っている(アニュ
アル・レビューズ・オブ・バイオケミストリー(AnnualR
eviews of Biochemistry)59巻、783〜836ペー
ジ、1990年)。更に、エンドトキシンによって、B
細胞の非特異的な増殖やマクロファージや樹状細胞上に
発現するICAM-1などの膜タンパク質の上昇を誘導するな
ど、非常に広範な免疫応答を誘導する。敗血症は、不可
逆性低血圧、多臓器不全などの死亡の原因となる重篤か
つ致命的な感染合併症である(ランセット(The Lancet)
338巻、732〜736ページ、1991年)。特に
エンドトキシンはグラム陰性菌による敗血症の主要なメ
ディエーターであることが知られている。敗血症の症状
はエンドトキシンを注入することによって各種動物にお
いて再現され、またエンドトキシンを血中から除去する
治療が敗血症患者にしばしば施されるが、血液を一度体
外に循環させる必要があるなど、煩雑な治療法である。
エンドトキシンに対する中和抗体等を用いて、ショック
応答も軽減する方法も取られているが、タンパク性の因
子は血中で速やかに分解されてしまうなど問題があり、
これらの方法も依然充分とは言えないのが現状である。
グラム陰性菌による敗血症はこれまでにいくつかの治療
法の考案がなされてきたにもかかわらず、いまだに高い
死亡率が臨床上の大きな問題となっている。エンドトキ
シンに起因する免疫反応や炎症反応を抑制する薬剤(以
下「エンドトキシン阻害剤」という)は、エンドトキシ
ンにより誘導される炎症の予防治療剤および抗敗血症剤
としての用途が期待される。このため、医療の現場等で
は、優れた薬効を有するエンドトキシン阻害剤が望まれ
ている。
As inflammatory mediators, interleukin 1, interleukin 6, interleukin 8, TNF-α and the like are important. These inflammatory mediators play a central role in the regulation of biological functions in the inflammatory response and defense mechanisms against infection (Annual Reviews of Biochemistry (AnnualR)
eviews of Biochemistry) 59, 783-836, 1990). In addition, endotoxin causes B
It induces a very wide range of immune responses, including nonspecific proliferation of cells and elevation of membrane proteins such as ICAM-1 expressed on macrophages and dendritic cells. Sepsis is a serious and fatal infectious complication that causes death, including irreversible hypotension and multiple organ failure (The Lancet)
338, 732-736, 1991). In particular, endotoxin is known to be a major mediator of sepsis due to Gram-negative bacteria. The symptoms of sepsis are reproduced in various animals by injecting endotoxin, and treatment to remove endotoxin from the blood is often given to sepsis patients, but complicated treatment such as the need to circulate blood once outside the body Is the law.
Although a method of reducing the shock response by using a neutralizing antibody against endotoxin has also been adopted, there is a problem that the protein factor is rapidly degraded in the blood,
At present, these methods are still insufficient.
Despite several treatments for gram-negative sepsis, high mortality is still a major clinical problem. A drug that suppresses an immune response or an inflammatory response caused by endotoxin (hereinafter, referred to as “endotoxin inhibitor”) is expected to be used as a prophylactic / therapeutic agent for endotoxin-induced inflammation and an antiseptic agent. For this reason, endotoxin inhibitors having excellent medicinal effects are desired in medical sites and the like.

【0004】[0004]

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記課題に鑑
みてなされたものであり、新規なエンドトキシン阻害
剤、エンドトキシンにより誘導される炎症の予防治療剤
および抗敗血症剤の提供を主たる目的とする。
SUMMARY OF THE INVENTION The present invention has been made in view of the above problems, and has as its main object to provide a novel endotoxin inhibitor, a prophylactic / therapeutic agent for inflammation induced by endotoxin, and an antiseptic agent. .

【0005】[0005]

【課題を解決するための手段】本発明者等は、エンドト
キシンによるマクロファージからのTNF-α産生の阻害活
性を指標とし、新規なエンドトキシン阻害剤を探索する
べく鋭意研究を重ねた。その結果、特定のグリセロール
誘導体が、エンドトキシンによるTNF-α産生の阻害活性
を有すること、および抗敗血症剤として有用であること
を見出し、本発明を完成するに至った。また、本発明者
等は、研究の過程において上記グリセロール誘導体を効
率よく製造する方法も見出した。即ち、本発明は、以下
の物および方法に関する。 1.一般式(I)で示される化合物またはその誘導体を
有効成分とする、エンドトキシン阻害剤。
Means for Solving the Problems The present inventors have conducted intensive studies to search for novel endotoxin inhibitors using the inhibitory activity of endotoxin on TNF-α production from macrophages as an index. As a result, they have found that a specific glycerol derivative has an activity of inhibiting TNF-α production by endotoxin, and that it is useful as an antisepsis agent, thereby completing the present invention. In addition, the present inventors have found a method for efficiently producing the glycerol derivative in the course of research. That is, the present invention relates to the following objects and methods. 1. An endotoxin inhibitor comprising a compound represented by the general formula (I) or a derivative thereof as an active ingredient.

【0006】[0006]

【化5】 (式中、R1またはR2は、ラウリン酸、ミリスチン
酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、トリ
デカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカ
ン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸から選ばれ
る1種。) 2.上記一般式(I)で示される化合物またはその誘導
体を有効成分とする、エンドトキシンにより誘導される
炎症の予防治療剤。 3.上記一般式(I)で示される化合物またはその誘導
体を有効成分とする抗敗血症剤。 4.上記1.〜3.のいずれか1項に記載の薬剤を含有
する、飲食品または化粧品。 5.Brevundimonas属の微生物を培養し、培養物から上
記一般式(I)の化合物を採取することを特徴とする、
請求項1記載の化合物の製造法。
Embedded image (In the formula, R1 or R2 is one selected from lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, arachidic acid, tridecanoic acid, pentadecanoic acid, heptadecanoic acid, nonadecanoic acid, oleic acid, linoleic acid, and linolenic acid. ) 2. An agent for preventing or treating endotoxin-induced inflammation, comprising a compound represented by the above general formula (I) or a derivative thereof as an active ingredient. 3. An antiseptic agent comprising a compound represented by the above general formula (I) or a derivative thereof as an active ingredient. 4. The above 1. ~ 3. A food, beverage, or cosmetic, comprising the drug according to any one of the above. 5. Culturing a microorganism of the genus Brevundimonas, and collecting the compound of the general formula (I) from the culture,
A method for producing the compound according to claim 1.

【0007】[0007]

【発明の実施の形態】以下に本発明について説明する。 1.一般式(I)で示される化合物について 本発明のエンドトキシン阻害剤、エンドトキシンにより
誘導される炎症の予防治療剤または抗敗血症剤は、以下
の一般式(I)で示される化合物(以下「式(I)の化
合物」という)またはその誘導体を有効成分とする。
DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The present invention will be described below. 1. Regarding the compound represented by the general formula (I) The endotoxin inhibitor, the prophylactic / therapeutic agent for inflammation induced by endotoxin or the antiseptic agent of the present invention is a compound represented by the following general formula (I) (hereinafter referred to as "formula (I )) Or a derivative thereof as an active ingredient.

【0008】一般式(I):General formula (I):

【化6】 (式中、R1またはR2は、ラウリン酸、ミリスチン
酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、トリ
デカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカ
ン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸から選ばれ
る1種。) 式(I)の化合物は、ジアシルグリセロールの3位にα
-D-glucopyranosyl-(1-4)- α-D-glucopyranuronosyl基
を含有する、一種のグリセロール誘導体である。また、
該化合物は、構造上、3-O-[α-D-glucopyranosyl-(1-4)
- α-D-glucopyranuronosyl]-1,2,-diacyl-グリセロー
ル誘導体であるとも表現できる。式(I)の化合物にお
いて、R1またはR2は、種々の脂肪酸であってもよ
い。脂肪酸とは、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、
パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、トリデカ
ン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカン
酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸である。式
(I)の化合物のより具体的な構造としては、以下の一
般式(II)で示される化合物(以下「式(II)の化合
物」という)が例示される。
Embedded image (In the formula, R1 or R2 is one selected from lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, arachidic acid, tridecanoic acid, pentadecanoic acid, heptadecanoic acid, nonadecanoic acid, oleic acid, linoleic acid, and linolenic acid. ) The compound of formula (I) has an α at position 3 of the diacylglycerol.
-D-glucopyranosyl- (1-4)-A type of glycerol derivative containing an α-D-glucopyranuronosyl group. Also,
The compound is structurally 3-O- [α-D-glucopyranosyl- (1-4)
-α-D-glucopyranuronosyl] -1,2, -diacyl-glycerol derivative. In the compounds of formula (I), R1 or R2 may be various fatty acids. Fatty acids include, for example, lauric acid, myristic acid,
Palmitic acid, stearic acid, arachidic acid, tridecanoic acid, pentadecanoic acid, heptadecanoic acid, nonadecanoic acid, oleic acid, linoleic acid, and linolenic acid. As a more specific structure of the compound of the formula (I), a compound represented by the following general formula (II) (hereinafter, referred to as “compound of the formula (II)”) is exemplified.

【0009】一般式(II):General formula (II):

【化7】 式(II)の化合物(1-O−asclepoyl-2-O-palmitoyl-3-O
-[α-D-glucopyranosyl-(1-4)-α-D-glucopyranuronosy
l]glycerol)は、式(I)において、R1がパルミチン
酸、R2がオレイン酸の異性体である化合物に相当す
る。式(II)の化合物は、Caulobactor bacteroides NP-1
05の膜構成成分として公知である(バイオキミカ・バイ
オフィジカ・アクタ(Biochimica et Biophysica Acta)
1347巻, 127〜139ページ、1997年)。
Embedded image Compound of formula (II) (1-O-asclepoyl-2-O-palmitoyl-3-O
-[α-D-glucopyranosyl- (1-4) -α-D-glucopyranuronosy
l] glycerol) corresponds to a compound of the formula (I) wherein R1 is an isomer of palmitic acid and R2 is an isomer of oleic acid. Compound of formula (II) is Caulobactor bacteroides NP-1
05 is known as a membrane component (Biochimica et Biophysica Acta)
1347, 127-139, 1997).

【0010】実施例に記載の通り、式(II)の化合物
は、Brevundimonas属の培養物から精製可能であり、エ
ンドトキシン阻害剤および抗敗血症剤としての薬効を有
する。なお、式(I)の化合物は、エンドトキシン阻害
剤、エンドトキシンにより誘導される炎症の予防治療剤
または抗敗血症剤としての薬効を有する限り、その構造
の一部が改変あるいは修飾されている誘導体であっても
よい。本発明において、式(I)のグルコース残基また
はグルクロン酸残基の3位の水酸基は、メチル化、エチ
ル化、プロピル化、イソプロピル化、アセチル化あるい
は硫酸化されていてもよい。また、グルコース残基また
はグルクロン酸残基の2位の水酸基は、アミノ基であっ
てもよい。さらに、グルクロン酸残基の6位のカルボニ
ル基に結合した水酸基は、メチル基、エチル基、プロピ
ル基またはイソプロピルなどのエステルであってもよ
い。また、式(I)の化合物の誘導体としては、例え
ば、薬理上許容される塩、エステルあるいはプロドラッ
クが挙げられる。薬理上許容される塩としては、特に限
定されないが、例えば、アルカリ金属(ナトリウム、カ
リウム等)、アルカリ土類金属(マグネシウム、カルシウ
ム等)。これらの水酸化物または炭酸塩、アルカリ金属
アルコキサイド(ナトリウムメトキサイド、カリウムt-
プトキサイド等)との塩が挙げられる。また、塩として
は、無機酸(塩酸、硫酸、リン酸)や有機酸(マレイン
酸、クエン酸、フマル酸等)を付加した酸付加塩、更に
はアミンの付加塩、アミノ酸の付加塩等が挙げられる。
なお、上記の塩の水和物もここでいう塩に含まれる。
As described in the examples, the compounds of formula (II) can be purified from cultures of the genus Brevundimonas and have pharmacological activity as endotoxin inhibitors and antiseptic agents. The compound of formula (I) is a derivative whose structure is partially modified or modified as long as it has an effect as an endotoxin inhibitor, a prophylactic or therapeutic agent for inflammation induced by endotoxin or an antiseptic agent. You may. In the present invention, the hydroxyl group at the 3-position of the glucose residue or glucuronic acid residue of the formula (I) may be methylated, ethylated, propylated, isopropylated, acetylated or sulfated. Further, the hydroxyl group at the 2-position of a glucose residue or a glucuronic acid residue may be an amino group. Further, the hydroxyl group bonded to the carbonyl group at the 6-position of the glucuronic acid residue may be an ester such as a methyl group, an ethyl group, a propyl group or isopropyl. Examples of the derivative of the compound of the formula (I) include pharmacologically acceptable salts, esters and prodrugs. The pharmacologically acceptable salt is not particularly limited, but includes, for example, alkali metals (such as sodium and potassium) and alkaline earth metals (such as magnesium and calcium). These hydroxides or carbonates, alkali metal alkoxides (sodium methoxide, potassium t-
And the like. Examples of the salt include an acid addition salt to which an inorganic acid (hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid) or an organic acid (maleic acid, citric acid, fumaric acid, etc.) is added, an amine addition salt, an amino acid addition salt, and the like. No.
In addition, the hydrate of the above-mentioned salt is also included in the salt mentioned here.

【0011】エステルは、アルコールまたはカルボン酸
とのエステル化反応で生じるエステルであれば特に限定
されない。アルコールとしてはメタノール、エタノー
ル、1−プロパノール、2−プロパノール等が挙げら
れ、またはカルボン酸としてはギ酸、酢酸、乳酸等が挙
げられる。
The ester is not particularly limited as long as it is an ester formed by an esterification reaction with an alcohol or a carboxylic acid. Examples of the alcohol include methanol, ethanol, 1-propanol, and 2-propanol. Examples of the carboxylic acid include formic acid, acetic acid, and lactic acid.

【0012】プロドラックとは、生体に投与された後に
式(I)の化合物あるいはその誘導体に変化して、上記
薬効を発現する化合物を意味する。薬剤としての安定性
や吸収性の改善、副作用の低減等を目的としてプロドラ
ック化された化合物も、本発明でいう誘導体に含まれ
る。
The term "prodrug" means a compound which is converted into the compound of the formula (I) or a derivative thereof after being administered to a living body and exerts the above-mentioned medicinal effects. Prodrug-modified compounds for the purpose of improving drug stability and absorbability, reducing side effects, and the like are also included in the derivatives of the present invention.

【0013】2.式(I)の化合物の製造法 本発明において、式(I)の化合物またはその誘導体
は、どのような方法で製造されたものであってもよく、
該化合物の生産能を有する微生物、例えばBrevundimona
s属、Caulobactor属、Streptomyces属の微生物培養物か
ら精製する方法、化学合成法、半合成法等が広く採用で
きる。式(I)の化合物を微生物培養物から精製する方
法においては、微生物培養物を含む粗精製物から目的の
化合物を効率よく精製することが重要となる。有機溶媒
を用いて抽出する工程は、効率的な精製方法として有用
である。特に、有機溶剤としてはアセトンが好ましい。
アセトンは単独で用いてもよく、50%以下の水を含有
してもよい。またアセトンの代わりにメタノール、エタ
ノール、プロパーノール、ブタノールなどの水溶性有機
溶媒を用いることも可能である。酢酸エチルなどの非水
溶性有機溶媒は、水溶性有機溶媒にて抽出された粗精製
物から、式(I)の化合物を効率よく濃縮するのに重要
である。また、式(I)の化合物は、非水溶性有機溶媒
を用いて、微生物培養物の粗精製物から直接抽出するこ
ともできる。また、式(I)の化合物の誘導体である薬
理上許容される塩は、式(I)の化合物に、アルカリ金
属、アルカリ土類金属、アルカリ金属アルコキサイド、
無機酸あるいは有機酸を作用させることにより製造でき
る。さらに、エステルは、酸触媒の存在下で、式(I)
の化合物に、アルコールまたはカルボン酸を作用させる
ことにより製造できる。なお、本発明で用いる式(I)
の化合物は、単一となるまで精製されていてもよく、ま
た、精製工程の途中にある粗精製物であってもよい。
2. Process for Producing Compound of Formula (I) In the present invention, the compound of formula (I) or a derivative thereof may be produced by any method,
A microorganism capable of producing the compound, for example, Brevundimona
A method of purifying from a microorganism culture of the genus s, Caulobactor, or Streptomyces, a chemical synthesis method, a semisynthesis method, and the like can be widely used. In a method for purifying the compound of the formula (I) from a microorganism culture, it is important to efficiently purify the target compound from a crudely purified product containing the microorganism culture. The step of extracting with an organic solvent is useful as an efficient purification method. In particular, acetone is preferable as the organic solvent.
Acetone may be used alone or may contain up to 50% water. It is also possible to use a water-soluble organic solvent such as methanol, ethanol, propanol and butanol instead of acetone. A water-insoluble organic solvent such as ethyl acetate is important for efficiently concentrating the compound of the formula (I) from the crude product extracted with the water-soluble organic solvent. The compound of the formula (I) can also be directly extracted from a crudely purified microorganism culture using a water-insoluble organic solvent. Also, a pharmacologically acceptable salt which is a derivative of the compound of the formula (I) is obtained by adding an alkali metal, an alkaline earth metal, an alkali metal alkoxide to the compound of the formula (I).
It can be produced by reacting an inorganic acid or an organic acid. Further, the ester can be converted to a compound of formula (I) in the presence of an acid catalyst.
Can be produced by reacting an alcohol or a carboxylic acid with the compound of the formula (1). The formula (I) used in the present invention
May be purified to a single compound, or may be a crude product in the middle of the purification step.

【0014】3.本発明の薬剤の使用法 本発明のエンドトキシン阻害剤、エンドトキシンにより
誘導される炎症の予防治療剤または抗敗血症剤(以下、
総称して「本発明の薬剤」ともいう)の使用法について
説明する。本発明の薬剤は、式(I)の化合物を有効成
分とし、エンドトキシンに起因する免疫反応や炎症反応
を抑制することにより、エンドトキシンにより誘導され
る炎症の予防治療剤および抗敗血症剤としての薬効を発
揮する。本発明の薬剤は、例えば、エンドトキシンが血
中に混入することにより誘発されるエンドトキシンショ
ック、致死、発熱、炎症、Shwartzman反応の予防剤また
は治療剤として、医学上有用である。また本発明の薬剤
は、エンドトキシンや敗血症の研究用試薬等として学術
上も有用である。本発明の薬剤は、医薬品、飲食品また
は化粧品として、そのままであるいはこれらの製品に対
する添加物として使用できる。本発明の薬剤は、単独で
医薬品、飲食品または化粧品として使用してもよく、ま
た、他のエンドトキシン阻害剤、抗炎症剤あるいは抗敗
血症剤と併用してもよい。具体的な使用方法について以
下に説明する。
3. Use of the agent of the present invention The endotoxin inhibitor of the present invention, a prophylactic / therapeutic agent for inflammation induced by endotoxin or an antiseptic agent (hereinafter, referred to as
The usage of the “genetic agent of the present invention” will be described. The medicament of the present invention comprises a compound of the formula (I) as an active ingredient and suppresses an endotoxin-induced immune or inflammatory response, thereby exerting its efficacy as a prophylactic / therapeutic agent for endotoxin-induced inflammation and an antiseptic agent. Demonstrate. The agent of the present invention is medically useful, for example, as a preventive or therapeutic agent for endotoxin shock, lethality, fever, inflammation, and Shwartzman reaction induced by contamination of blood with endotoxin. The drug of the present invention is also scientifically useful as a reagent for research on endotoxin and sepsis, and the like. The medicament of the present invention can be used as a medicament, food or drink, or cosmetics, as it is, or as an additive to these products. The medicament of the present invention may be used alone as a medicine, food or drink, or cosmetic, or may be used in combination with other endotoxin inhibitors, anti-inflammatory agents or anti-sepsis agents. The specific usage will be described below.

【0015】(1)医薬品 本発明の薬剤は、有効成分である式(I)の化合物を、
そのまま、もしくは公知の医薬用担体と共に製剤化する
ことにより医薬品として使用できる。本発明の薬剤は、
例えば、錠剤、顆粒剤、粉剤、シロップ剤等の経口剤
や、坐剤、外用剤等の非経口剤として製剤化できる。医
薬用担体としては、特に制限はなく、例えば、固形担体
(デンプン、乳糖、カルボキシメチルセルロース等)、
液体担体(蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタ
ノール、プロピレングリコール等)、油性担体(各種の
動植物油、白色ワセリン、パラフィン等)が挙げられ
る。上記医薬品は、人および人以外の動物(ペット、家
畜)用として使用できる。上記医薬の服用量は、それを
使用する患者等の症状、性別、年齢に応じて適宜設定す
ればよい。例えば、成人一人あたり一日に、有効成分で
ある式(I)の化合物が、0.1〜5000 mg 程度摂取でき
るよう服用すればよい。
(1) Drug The drug of the present invention comprises a compound of the formula (I) as an active ingredient,
It can be used as a pharmaceutical as it is or by formulating it with a known pharmaceutical carrier. The agent of the present invention
For example, they can be formulated as oral preparations such as tablets, granules, powders and syrups, and parenteral preparations such as suppositories and external preparations. The pharmaceutical carrier is not particularly limited and includes, for example, solid carriers (starch, lactose, carboxymethyl cellulose, etc.),
Examples thereof include liquid carriers (distilled water, physiological saline, aqueous glucose solution, ethanol, propylene glycol, etc.) and oily carriers (various animal and vegetable oils, white petrolatum, paraffin, etc.). The medicament can be used for humans and non-human animals (pets, livestock). The dose of the above-mentioned medicine may be appropriately set according to the symptoms, sex, and age of the patient or the like who uses the medicine. For example, an adult may take the compound of formula (I), which is an active ingredient, in a daily dose of about 0.1 to 5000 mg per adult.

【0016】(2)飲食品 本発明の薬剤を飲食品に添加することにより、その飲食
品に、エンドトキシン阻害活性、エンドトキシンにより
誘導される炎症の予防治療活性または抗敗血症活性を付
与することができる。添加されるべき飲食品は特に限定
されないが、肉製品、加工野菜、惣菜類、乳製品、菓
子、パン、清涼飲料、果実飲料、酒類等が挙げられる。
食品に対する本発明の抗炎症剤の配合率も特に限定され
ないが、有効成分である式(I)の化合物が、成人一人
あたり一日に、0.1〜5000 mg 程度摂取できるよう添加
すればよい。
(2) Foods and drinks By adding the drug of the present invention to foods and drinks, the foods and drinks can be provided with an endotoxin inhibitory activity, a prophylactic / therapeutic activity for endotoxin-induced inflammation or an antiseptic activity. . Foods and drinks to be added are not particularly limited, but include meat products, processed vegetables, prepared foods, dairy products, confectionery, bread, soft drinks, fruit drinks, alcoholic beverages, and the like.
The compounding ratio of the anti-inflammatory agent of the present invention to foods is not particularly limited, either, but the compound of formula (I), which is an active ingredient, may be added so that about 0.1 to 5000 mg per adult per day can be taken.

【0017】また、本発明の抗炎症剤とその他の食品素
材を混合して、顆粒状・粉末状・錠剤状あるいはブロッ
ク状などに成形し、食品素材や健康食品等としてもよ
い。その他の食品素材とは、例えば、糖類、食用たんぱ
く質、アルコール、ビタミン、増粘多糖類、アミノ酸、
カルシウム塩類、色素、香料、保存剤等である。
Further, the anti-inflammatory agent of the present invention and other food materials may be mixed and formed into granules, powders, tablets, blocks, or the like to obtain food materials or health foods. Other food materials include, for example, sugars, edible proteins, alcohol, vitamins, thickening polysaccharides, amino acids,
Calcium salts, pigments, fragrances, preservatives and the like.

【0018】(3)化粧品 本発明の薬剤を化粧品に添加することにより、その化粧
品にエンドトキシン阻害活性、エンドトキシンにより誘
導される炎症の予防治療活性または抗敗血症活性を付与
することができる。化粧品とは、特に限定されないが、
例えば、化粧水、化粧クリーム、乳液、ファンデーショ
ン、口紅、整髪料、ヘアトニック、育毛料、歯磨き、洗
口料、シャンプー、リンス等である。化粧品を調製する
場合には、植物油等の油脂類、ラノリンやミツロウ等の
ロウ類、炭化水素類、脂肪酸、高級アルコール類、種々
の界面活性剤、色素、香料、ビタミン類、植物・動物抽
出成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、保存剤等、通常の化
粧品原料として使用されているものを適宜配合して製造
することができる。
(3) Cosmetics By adding the agent of the present invention to cosmetics, the cosmetics can be provided with an endotoxin inhibitory activity, a prophylactic / therapeutic activity for inflammation induced by endotoxin or an antiseptic activity. Cosmetics are not particularly limited,
For example, lotions, cosmetic creams, emulsions, foundations, lipsticks, hair styling products, hair tonics, hair growth products, toothpastes, mouthwashes, shampoos, rinses and the like. When preparing cosmetics, oils and fats such as vegetable oils, waxes such as lanolin and beeswax, hydrocarbons, fatty acids, higher alcohols, various surfactants, pigments, fragrances, vitamins, plant and animal extract components And those commonly used as raw materials for cosmetics, such as ultraviolet absorbers, antioxidants, preservatives, etc., can be produced as appropriate.

【0019】化粧品に対する本発明の薬剤の配合率も特
に限定されないが、有効成分である式(I)の化合物
が、成人一人あたり一日に、0.1〜5000 mg 程度経皮的
に吸収されるような比率で添加すればよい。
The compounding ratio of the drug of the present invention to cosmetics is not particularly limited either, but the compound of the formula (I), which is an active ingredient, is percutaneously absorbed in an amount of about 0.1 to 5000 mg per adult per day. It may be added at an appropriate ratio.

【0020】[0020]

【実施例】以下に、式(II)の化合物の製造方法、エン
ドトキシン阻害活性試験、抗敗血症活性試験および式
(II)の化合物を含有する医薬品・飲食品・化粧品の製
造に関する実施例を示す。
Examples Examples of the method for producing the compound of the formula (II), the endotoxin inhibitory activity test, the antiseptic activity test and the production of pharmaceuticals, foods and drinks and cosmetics containing the compound of the formula (II) are shown below.

【0021】〔実施例1〕式(II)の化合物の製造方
法:Brevundimonas属の微生物培養物より、エンドトキ
シン阻害剤として、式(II)の化合物を精製した。精製
の各工程で得られた画分のエンドトキシン阻害活性は、
実施例2に記載の方法で測定した。まず、 Brevundimon
as sp. Y381 (寄託番号:NISL-B-4725として財団法人
野田産業科学研究所に寄託されている)を、オートクレ
ーブにより滅菌した12Lの培地(グルコース2%、でん
ぷん1%、Meat Extract 0.1%、乾燥酵母0.4%、大豆粉2.5
%、食塩0.2%、K2HPO4 0.005%、pH7.3)で3日から4
日培養した。得られた菌体を集菌し66%アセトンで一
晩、4℃にて抽出した。アセトン抽出物を減圧濃縮後、
塩酸でpH2に調整し、酢酸エチルにて可溶性画分を抽出
し、減圧濃縮して固形物15.4 g を得た。該固形物を酢
酸エチルに再可溶化した後シリカゲルカラムに供し、ヘ
キサン、トルエン、トルエン:酢酸エチル(1:1)、
酢酸エチル、酢酸エチル:アセトン(1:1)、アセト
ン、アセトン:メタノール(1:1)、メタノールの順
に溶出を行ったところ、2種類の溶出画分(F5、F
7)が得られた。F5は、エンドトキシン阻害活性を有
し、酢酸エチル:アセトン(1:1)で溶出され、粗精
製物として2.82 g得られた。F7は、アセトン:メタノ
ール(1:1)で溶出され、粗精製物として2.86 g得ら
れた。なお、F7は、精製標品の解析の結果、F5の化
合物と構造上類似することが判明したが、エンドトキシ
ン阻害活性を示さなかった。F5は、更にシカゲルクロ
マトグラフィーを用いて酢酸エチル:MeOH:水の溶媒を
[16:2:1, 8:2:1, 4:2:1]の組成に変化させて溶出させ、
487.8 mgの活性画分を得た。クロロホルム:メタノール
(1:1)で平衡化したセファデックスLH20を用いてク
ロマトグラフィーを行い活性画分を372.0 mg得た。クロ
ロホルム:メタノール:水(30:60:8)で平衡化
したDEAE-トヨパールカラムに活性画分を吸着させ非吸
着物を除去後、クロロホルム:メタノール:0.8M酢酸ナ
トリウム(30:60:8)で溶出し、最終精製標品と
してF5を262.8 mg得た。F7は、クロロホルム:メタ
ノール:水(30:60:8)で平衡化したDEAE-トヨ
パールカラムに活性画分を吸着させ非吸着物を除去後、
クロロホルム:メタノール:0.8M酢酸ナトリウム(3
0:60:8)で溶出し、228.6 mgの溶出画分を得た。
シカゲルクロマトグラフィーを用いて酢酸エチル:MeO
H:水の溶媒を[12:2:1, 4:2:1]の組成に変化させて溶出
させ、最終精製標品としてF7を37.0mg得た。
Example 1 Method for producing compound of formula (II): A compound of formula (II) was purified as an endotoxin inhibitor from a microorganism culture of the genus Brevundimonas. The endotoxin inhibitory activity of the fraction obtained at each purification step is as follows:
It was measured by the method described in Example 2. First, Brevundimon
as sp. Y381 (Deposit No .: NISL-B-4725
Noda Institute of Scientific Research) was replaced with 12 L of medium (glucose 2%, starch 1%, Meat Extract 0.1%, dry yeast 0.4%, soy flour 2.5%) sterilized by an autoclave.
%, Salt 0.2%, K 2 HPO 4 0.005%, pH 7.3)
Cultured for one day. The obtained cells were collected and extracted with 66% acetone overnight at 4 ° C. After concentration of the acetone extract under reduced pressure,
The pH was adjusted to 2 with hydrochloric acid, the soluble fraction was extracted with ethyl acetate, and concentrated under reduced pressure to obtain 15.4 g of a solid. After resolubilizing the solid in ethyl acetate, the solid was applied to a silica gel column, and hexane, toluene, toluene: ethyl acetate (1: 1),
When elution was performed in the order of ethyl acetate, ethyl acetate: acetone (1: 1), acetone, acetone: methanol (1: 1), and methanol, two kinds of eluted fractions (F5 and F5) were obtained.
7) was obtained. F5 had endotoxin inhibitory activity, and was eluted with ethyl acetate: acetone (1: 1) to obtain 2.82 g of a crude product. F7 was eluted with acetone: methanol (1: 1) to obtain 2.86 g of a crude product. As a result of analysis of the purified sample, F7 was found to be structurally similar to the compound of F5, but did not show endotoxin inhibitory activity. F5 was further eluted using silica gel chromatography with ethyl acetate: MeOH: water solvent.
Eluted by changing the composition of [16: 2: 1, 8: 2: 1, 4: 2: 1]
487.8 mg of an active fraction was obtained. Chromatography was performed using Sephadex LH20 equilibrated with chloroform: methanol (1: 1) to obtain 372.0 mg of an active fraction. The active fraction was adsorbed on a DEAE-Toyopearl column equilibrated with chloroform: methanol: water (30: 60: 8) to remove unadsorbed substances, and then chloroform: methanol: 0.8M sodium acetate (30: 60: 8). To obtain 262.8 mg of F5 as a final purified sample. F7 is obtained by adsorbing an active fraction on a DEAE-Toyopearl column equilibrated with chloroform: methanol: water (30: 60: 8) to remove non-adsorbed substances.
Chloroform: methanol: 0.8M sodium acetate (3
0: 60: 8) to obtain 228.6 mg of an eluted fraction.
Ethyl acetate: MeO using silica gel chromatography
H: The solvent of water was eluted while changing the composition to [12: 2: 1, 4: 2: 1] to obtain 37.0 mg of F7 as a final purified sample.

【0022】最終精製標品F5、F7を、シリカゲルTL
C、HPLC、IR、NMR、MSに供し、構造解析を行った。F5
およびF7のIRスペクトルを図1および4、1H-NMRスペ
クトルを図2および5、13C-NMRスペクトルを図3およ
び6に示した。また、脂肪酸側鎖の決定は精製標品をメ
タノリシスして脂肪酸メチルエステルに変換後、GCおよ
びGC-MSを行うことにより標準品と比較して決定した。
尚、asclepoyl基(またはcis-11,12-methyleneoctadeca
noyl基)の二重結合の位置の確認はタンデム-MS法を用
いたフラグメンテーションにより決定した。構造解析の
結果、エンドトキシン阻害活性を有するF5は、以下の
一般式(II)の化合物であることが判明した。
The final purified preparations F5 and F7 were converted to silica gel TL.
It was subjected to C, HPLC, IR, NMR, and MS, and structural analysis was performed. F5
1 and 4, the 1 H-NMR spectrum is shown in FIGS. 2 and 5, and the 13 C-NMR spectrum is shown in FIGS. 3 and 6. In addition, the fatty acid side chain was determined by methanolysis of the purified sample to convert it to fatty acid methyl ester, followed by GC and GC-MS to compare with the standard product.
In addition, asclepoyl group (or cis-11,12-methyleneoctadeca
Confirmation of the position of the double bond of the noyl group) was determined by fragmentation using a tandem-MS method. As a result of the structure analysis, F5 having endotoxin inhibitory activity was found to be a compound represented by the following general formula (II).

【0023】一般式 (II):Formula (II):

【化8】 またエンドトキシン阻害活性を示さないF7は、以下の
一般式 (III)で示される化合物(1-O-asclepoyl-2-O-pa
lmitoyl-3-O-α-D-(6'-sulfo)quinovopyranosylglycero
l)であることが判明した。
Embedded image F7 having no endotoxin inhibitory activity is a compound represented by the following general formula (III) (1-O-asclepoyl-2-O-pa
lmitoyl-3-O-α-D- (6'-sulfo) quinovopyranosylglycero
l) was found to be.

【0024】一般式 (III):General formula (III):

【化9】 該化合物は、式(II)と脂肪酸側鎖が同一であるが、グ
リセロールの3位の置換基が異なる。この違いが、エン
ドトキシン阻害活性の有無に影響していると考えられ
る。
Embedded image This compound has the same fatty acid side chain as Formula (II), but differs in the substituent at the 3-position of glycerol. This difference is considered to affect the presence or absence of endotoxin inhibitory activity.

【0025】[実施例2] TNF-α産生抑制試験によるエ
ンドトキシン阻害活性の測定:エンドトキシンの作用に
より細胞はTNF-αを産生し、そのことが炎症反応を誘導
する。TNF-α産生抑制率が高いほど、エンドトキシン阻
害活性が強いといえる。細胞が産出するTNF-α量に対す
る、式(II)の化合物の影響を測定することにより、式
(II)の化合物のエンドトキシン阻害活性を測定した。
まず、マウスマクロファージ腫瘍細胞J774A.1を、RPMI-
1640 (10%FBS, 50 mMHEPES, 0.1mM 2-mercaptoethanol,
100 unit/ml penicillin, 100μg/ml streptomycin)
培地にて増殖させ、最終濃度2.5 × 105 cells/mlにな
るようRPMI培地に懸濁した。Sigma社製エンドトキシン
を最終濃度[2 μg/ml]になるように加えた。一方、実施
例1で得た式(II)の化合物を メタノールに溶解後、R
PMI培地で最終濃度50〜0.1μg/mlになるよう希釈し、先
に用意したJ774A.1細胞懸濁液に加えた。一晩、CO2イン
キュベーターで培養後、培養上清を採取し産生されたTN
F-αの量をELISA法により測定した(Pharmingen社製Opt
EIAkit)。式(II)の化合物を種々の濃度で試験系に添
加した際の、TNF-α産生抑制率(%)を、以下の式によ
り求めた。結果を表1に示す。 計算式: 100×(1−A/B) (Aは、式(II)の化合物の存在下でJ774A.1細胞をエン
ドトキシンで刺激で刺激したときのTNF-α産生量。B
は、式(II)の化合物の非存在下でJ774A.1細胞をエンド
トキシンで刺激で刺激したときのTNF-α産生量。)
Example 2 Measurement of Endotoxin Inhibitory Activity by TNF-α Production Inhibition Test: Cells produce TNF-α by the action of endotoxin, which induces an inflammatory response. It can be said that the higher the TNF-α production suppression rate, the stronger the endotoxin inhibitory activity. The endotoxin inhibitory activity of the compound of formula (II) was determined by measuring the effect of the compound of formula (II) on the amount of TNF-α produced by the cells.
First, mouse macrophage tumor cells J774A.1 were transformed into RPMI-
1640 (10% FBS, 50 mM HEPES, 0.1 mM 2-mercaptoethanol,
100 unit / ml penicillin, 100μg / ml streptomycin)
The cells were grown in a medium and suspended in an RPMI medium to a final concentration of 2.5 × 10 5 cells / ml. Sigma endotoxin was added to a final concentration of [2 μg / ml]. On the other hand, after dissolving the compound of formula (II) obtained in Example 1 in methanol, R
It was diluted to a final concentration of 50-0.1 μg / ml with PMI medium and added to the previously prepared J774A.1 cell suspension. After culturing overnight in a CO 2 incubator, the culture supernatant was collected and TN produced.
The amount of F-α was measured by ELISA (Pharmingen Opt.
EIAkit). The TNF-α production inhibition rate (%) when the compound of formula (II) was added to the test system at various concentrations was determined by the following formula. Table 1 shows the results. Formula: 100 × (1-A / B) (A is the amount of TNF-α production when J774A.1 cells are stimulated with endotoxin in the presence of the compound of formula (II). B
Is the amount of TNF-α production when J774A.1 cells are stimulated with endotoxin in the absence of the compound of formula (II). )

【0026】[0026]

【表1】 [Table 1]

【0027】表1から明らかなように、式(II)の化合
物は、濃度依存的に、エンドトキシンに起因するTNF-α
産生を抑制した。式(II)の化合物が、エンドトキシン
阻害剤およびエンドトキシンにより誘導される炎症の予
防治療剤として有用であることが示された。
As is evident from Table 1, the compound of formula (II) showed a concentration-dependent increase in TNF-α caused by endotoxin.
Production was suppressed. Compounds of formula (II) have been shown to be useful as endotoxin inhibitors and as prophylactic and therapeutic agents for endotoxin-induced inflammation.

【0028】[実施例3] B細胞増殖抑制試験によるエ
ンドトキシン阻害活性の測定:エンドトキシンの作用に
よりB細胞は増殖を開始し、エンドトキシン活性の指標
としてよく用いられる。B細胞増殖抑制率が高いほど、
エンドトキシン阻害活性が強いといえる。B細胞増殖に
対する式(II)の化合物の影響を測定することにより、
式(II)の化合物のエンドトキシン阻害活性を測定し
た。BALB/cマウスの脾臓より常法に従い脾臓細胞を調製
し、RPMI-培地に最終濃度で5 x 105 cells/mlになるよ
う懸濁し、96ウェルプレートにまいた。Sigma社製エン
ドトキシンを最終濃度[5あるいは2 μg/ml]になるよう
に加え、実施例1で得た式(II)の化合物を、メタノー
ルに溶解後、RPMI培地で最終濃度100から0.1μg/mlにな
る様希釈し、先に用意した脾臓細胞懸濁液に加えた。7
2時間、CO2インキュベーターで培養後、最後の4時間
にトリチウムでラベルされたチミジン0.5μCi/mlをパル
スした。細胞をセルハーベスターにてグラスフィルター
上に回収後、増殖したB細胞に取り込まれたトリチウム
チミジンをベータシンチレンーションカウンターで測定
して、エンドトキシンによるB細胞の増殖の指標とし
た。式(II)の化合物を種々の濃度で試験系に添加した
際の、B細胞増殖抑制率(%)を、以下の式により求め
た。結果を表2に示す。 計算式:100×(1−A/B) (Aは、式(II)化合物の存在下、エンドトキシン刺激で
増殖したB細胞が取り込んだトリチウムチミジン量 [DP
M]。Bは、式(II)化合物の非存在下、エンドトキシン刺
激で増殖したB細胞が取り込んだトリチウムチミジン量
[DPM] )
Example 3 Measurement of Endotoxin Inhibitory Activity by B Cell Growth Inhibition Test: B cells start to proliferate by the action of endotoxin and are often used as an indicator of endotoxin activity. The higher the B cell proliferation inhibition rate,
It can be said that endotoxin inhibitory activity is strong. By measuring the effect of the compound of formula (II) on B cell proliferation,
The endotoxin inhibitory activity of the compound of formula (II) was measured. Spleen cells were prepared from spleens of BALB / c mice according to a conventional method, suspended in RPMI-medium at a final concentration of 5 × 10 5 cells / ml, and plated on a 96-well plate. Sigma endotoxin was added to a final concentration [5 or 2 μg / ml], and the compound of formula (II) obtained in Example 1 was dissolved in methanol, and then dissolved in RPMI medium to a final concentration of 100 to 0.1 μg / ml. The resulting mixture was diluted to a ml and added to the previously prepared spleen cell suspension. 7
After culturing in a CO 2 incubator for 2 hours, 0.5 μCi / ml of tritiated thymidine was pulsed for the last 4 hours. After the cells were collected on a glass filter using a cell harvester, tritiated thymidine incorporated into the proliferated B cells was measured with a beta scintillation counter to serve as an indicator of endotoxin-induced B cell proliferation. The B cell growth inhibition rate (%) when the compound of formula (II) was added to the test system at various concentrations was determined by the following formula. Table 2 shows the results. Calculation formula: 100 × (1-A / B) (A is the amount of tritiated thymidine taken up by B cells grown by endotoxin stimulation in the presence of the compound of formula (II) [DP
M]. B is the amount of tritiated thymidine taken up by endotoxin-stimulated B cells in the absence of the compound of formula (II)
[DPM])

【0029】[0029]

【表2】 [Table 2]

【0030】表2から明らかなように、式(II)の化合
物は、濃度依存的に、エンドトキシンに起因するB細胞
増殖を抑制した。式(II)の化合物が、エンドトキシン
阻害剤およびエンドトキシンにより誘導される炎症の予
防治療剤として有用であることが示された。
As is clear from Table 2, the compound of formula (II) inhibited endotoxin-induced B cell proliferation in a concentration-dependent manner. Compounds of formula (II) have been shown to be useful as endotoxin inhibitors and as prophylactic and therapeutic agents for endotoxin-induced inflammation.

【0031】[実施例4]マウス敗血症モデルによる抗敗
血症活性の測定:式(II)の化合物の、マウス敗血症に
対する効果を、下記方法により評価した。 <使用動物>:体重25〜30gのICR雌マウス(6〜8週
齢)。 <実験方法>:実施例1で得た式(II)の化合物を、0.2
%Tween-20含有生理食塩水に懸濁し、この懸濁液を、各
群4匹のマウスに、体重1 kgあたり100 mgの割合で腹腔
内投与し、5分後にエンドトキシン40mgを腹腔内投
与した。24時間後の生存率を評価したところ、生理食
塩水のみを投与した対照群では0%であったが、式(II)
の化合物で予め処理しておいた群では100%であっ
た。更に、3位のグリセールの置換基が異なる式(III)
の化合物(実施例1のF7)を同様に用いた群では25
%であった。以上の結果より、式(II)の化合物は、生体
レベルにおいても顕著な抗敗血症作用を有し、抗敗血症
剤として有用であることが示された。
[Example 4] Measurement of anti-sepsis activity using mouse sepsis model: The effect of the compound of formula (II) on mouse sepsis was evaluated by the following method. <Animals used>: ICR female mice weighing 25 to 30 g (6 to 8 weeks old). <Experimental method>: The compound of the formula (II) obtained in Example 1 was replaced with 0.2
% Tween-20 in physiological saline, and the suspension was intraperitoneally administered to four mice in each group at a rate of 100 mg / kg body weight, and after 5 minutes, 40 mg of endotoxin was intraperitoneally administered. . When the survival rate after 24 hours was evaluated, it was 0% in the control group to which only the physiological saline was administered.
Was 100% in the group that had been treated with the compound in advance. Furthermore, the substituent of the glyceryl at the 3-position is different from the formula (III)
In the group similarly using the compound (F7 of Example 1), 25
%Met. From the above results, it was shown that the compound of the formula (II) has a remarkable antisepsis effect even at a biological level, and is useful as an antisepsis agent.

【0032】[実施例5] 1.細胞毒性試験 実施例1で得た式(II)の化合物について、下記方法で
細胞毒性試験を行った。RPMI-1640 (10%FBS, 50 mM HEP
ES, 0.1mM 2-mercaptoethanol, 100 unit/ml penicilli
n, 100μg/ml streptomycin) 培地にて、腫瘍細胞株(J
774A.1と PU5-1R)および正常細胞株(FDC-P2とCTLL-2;
各々増殖因子としてインターロイキン(IL)-3含有WEH
I-3細胞増殖後の上清とPharmingen社製IL-2を添加し
た)を増殖させた。また、DMEM (10%FBS, 50 mM HEPES,
0.1mM 2-mercaptoethanol, 100 unit/ml penicillin,
100μg/ml streptomycin) 培地にて、正常細胞であるBA
LB/3T3と牛大動脈より採取した血管内皮細胞を増殖させ
た。各々の細胞5〜10×103 個を、式(II)の化合物100μ
g/mlの共存下で培養し、3〜5日後の細胞数を数えるこ
とにより評価した。何れの細胞においても、式(II)の化
合物は細胞毒性を示さなかった。
[Embodiment 5] Cytotoxicity test The compound of formula (II) obtained in Example 1 was subjected to a cytotoxicity test by the following method. RPMI-1640 (10% FBS, 50 mM HEP
ES, 0.1mM 2-mercaptoethanol, 100 unit / ml penicilli
n, 100 μg / ml streptomycin) medium in a tumor cell line (J
774A.1 and PU5-1R) and normal cell lines (FDC-P2 and CTLL-2;
WEH containing interleukin (IL) -3 as each growth factor
The supernatant after I-3 cell proliferation and IL-2 from Pharmingen were added). In addition, DMEM (10% FBS, 50 mM HEPES,
0.1mM 2-mercaptoethanol, 100 unit / ml penicillin,
100 μg / ml streptomycin)
Endothelial cells collected from LB / 3T3 and bovine aorta were grown. 5-10 × 10 3 cells of each were treated with 100 μl of the compound of formula (II).
The cells were cultured in the presence of g / ml and evaluated by counting the number of cells after 3 to 5 days. The compound of formula (II) did not show cytotoxicity in any of the cells.

【0033】2.単回投与毒性試験:式(II)の化合物に
ついて、下記方法で単回投与毒性試験を行った。 <使用動物>:体重25〜30gのICR雌マウス(6〜8週
齢)。 <実験方法>:医薬品のための毒性試験法ガイドライン
(昭和59年2月15日薬審第118号、都道府県衛生
主管部局長宛厚生省薬務局審査第2課長通知)に準じ、
単回投与毒性試験を行った。 0.2%Tween-20含有生理食塩水に、式(II)の化合物を懸
濁し、この懸濁液を、5匹のマウスに、体重1 kgあたり
100 mgの割合で腹腔内投与し、14日間観察した。その
結果、全例とも死亡動物はなく、また明らかな副作用は
認められなかった。よって式(II)の化合物は、きわめて
毒性が低いことが判明した。
2. Single dose toxicity test: The compound of formula (II) was subjected to a single dose toxicity test by the following method. <Animals used>: ICR female mice weighing 25 to 30 g (6 to 8 weeks old). <Experimental method>: According to the guidelines for toxicity test methods for pharmaceuticals (February 15, 1984, Pharmaceutical Affairs Commission No. 118, notification from the Ministry of Health and Welfare Pharmaceutical Affairs Bureau second section manager to prefectural health administration director)
A single dose toxicity study was performed. The compound of formula (II) is suspended in a physiological saline containing 0.2% Tween-20, and the suspension is added to 5 mice per kg of body weight.
It was administered intraperitoneally at a rate of 100 mg and observed for 14 days. As a result, no animal died in all cases, and no apparent side effect was observed. Therefore, the compound of the formula (II) was found to be extremely low in toxicity.

【0034】[実施例6]本発明の薬剤を含有する医薬
品:実施例1で得た式(II)の化合物を以下の方法で製剤
化し、エンドトキシン阻害剤、エンドトキシンにより誘
導される炎症の予防治療剤または抗敗血症剤として使用
可能な医薬品とした。 (1)式(II)の化合物100gに、同量の乳糖及びステ
アリン酸マグネシウム5gと混合し、この混合物を単発
式打錠機にて打錠し、直径10mm、重量300mgの
錠剤を製造した。 (2)上記(1)で得た錠剤を粉砕、整粒し、篩別して
20〜50メッシュの顆粒剤を得た。
[Example 6] Drug containing the drug of the present invention: Formulation of the compound of the formula (II) obtained in Example 1 by the following method to prevent and treat endotoxin inhibitor, endotoxin-induced inflammation. Drug that can be used as a drug or an antiseptic agent. (1) The same amount of lactose and 5 g of magnesium stearate were mixed with 100 g of the compound of the formula (II), and the mixture was tableted with a single-shot tableting machine to produce tablets having a diameter of 10 mm and a weight of 300 mg. (2) The tablets obtained in (1) were pulverized, sized and sieved to obtain granules of 20 to 50 mesh.

【0035】[実施例7]本発明の薬剤を含有する飲食
品: (1)本発明の薬剤を含有する食品として、以下の組成
(重量部)のキャンデーを製造した。砂糖(47.
0)、水飴(49.76)、香料(1.0)、水(2.
0)、式(II)の化合物(0.24)。 (2)本発明の薬剤を含有する飲料として、以下の組成
(重量部)のオレンジジュースを製造した。市販のオレ
ンジジュース(99.76)、式(II)の化合物(0.2
4)。
Example 7 Food and drink containing the drug of the present invention: (1) As a food containing the drug of the present invention, a candy having the following composition (parts by weight) was produced. Sugar (47.
0), syrup (49.76), fragrance (1.0), water (2.
0), a compound of the formula (II) (0.24). (2) As a beverage containing the agent of the present invention, orange juice having the following composition (parts by weight) was produced. Commercially available orange juice (99.76), compound of formula (II) (0.2
4).

【0036】[実施例8]本発明の薬剤を含有する化粧品 (1)以下の組成(重量部)の歯磨き粉を製造した。 第二リン酸カルシウム(42)、グリセリン(18)、
カラギーナン(0.9)、ラウリル硫酸ナトリウム(1.
2)、サッカリンナトリウム(0.09)、パラオキシ
安息香酸ブチル(0.005)、式(II)の化合物(0.0
5)、香料(1)、水を加え100とした。
Example 8 Cosmetics Containing the Agent of the Present Invention (1) A toothpaste having the following composition (parts by weight) was produced. Dicalcium phosphate (42), glycerin (18),
Carrageenan (0.9), sodium lauryl sulfate (1.
2), sodium saccharin (0.09), butyl paraoxybenzoate (0.005), compound of formula (II) (0.0
5), perfume (1) and water were added to give 100.

【0037】(2)以下の組成(重量部)の化粧水を製
造した。リセリン(5.0)、プロピレングリコール
(4.0)、式(II)の化合物(0.15)、ポリオキシエ
チレンソルビタン モノラウリン酸エステル(2.
0)、エタノール(10.0)、香料(0.1)、精製水
を加え100とした。
(2) A lotion having the following composition (parts by weight) was prepared. Lyserin (5.0), propylene glycol (4.0), compound of formula (II) (0.15), polyoxyethylene sorbitan monolaurate (2.
0), ethanol (10.0), fragrance (0.1), and purified water were added to give 100.

【0038】(3)以下の組成(重量部)のヘアーリン
スを製造した。ステアリルジメチル(1.4)、ベンジ
ルアンモニウムステアリルアルコール(0.6)、グリ
セリンモノステアレート(1.5)、食塩(0.1)、式
(II)の化合物(0.1)、精製水を加え100とし
た。
(3) A hair rinse having the following composition (parts by weight) was produced. Stearyl dimethyl (1.4), benzylammonium stearyl alcohol (0.6), glycerin monostearate (1.5), salt (0.1), compound of formula (II) (0.1) and purified water In addition, it was set to 100.

【0039】[0039]

【発明の効果】本発明により、式(I)の化合物を有効成
分とするエンドトキシン阻害剤、エンドトキシンにより
誘導される炎症の予防治療剤および抗敗血症剤が提供さ
れた。本発明の薬剤は、特に、グラム陰性菌由来のエン
ドトキシンが血中に混入することにより誘発されるエン
ドトキシンショック、致死、発熱、炎症、Shwartzman反
応の予防剤または治療剤として、医学上有用である。ま
た本発明の薬剤は、エンドトキシンや敗血症の研究用試
薬等として学術上も有用である。本発明の薬剤は、医薬
品、飲食品または化粧品として、そのままであるいはこ
れらの製品に対する添加物として使用できる。本発明の
薬剤は、単独で医薬品、飲食品または化粧品に添加して
もよく、また、他のエンドトキシン阻害剤、抗炎症剤あ
るいは抗敗血症剤と併用してもよい。
Industrial Applicability According to the present invention, there are provided an endotoxin inhibitor, a prophylactic / therapeutic agent for inflammation induced by endotoxin and an antiseptic agent comprising a compound of the formula (I) as an active ingredient. The agent of the present invention is particularly medically useful as an agent for preventing or treating endotoxin shock, lethality, fever, inflammation, and Shwartzman reaction induced by contamination of blood with endotoxin derived from Gram-negative bacteria. The drug of the present invention is also scientifically useful as a reagent for research on endotoxin and sepsis, and the like. The medicament of the present invention can be used as a medicament, food or drink, or cosmetics, as it is, or as an additive to these products. The medicament of the present invention may be added alone to pharmaceuticals, foods and drinks or cosmetics, or may be used in combination with other endotoxin inhibitors, anti-inflammatory agents or anti-sepsis agents.

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図1】実施例1で得られたエンドトキシン阻害活性画
分(F5)のIRスペクトル。
FIG. 1 is an IR spectrum of the endotoxin inhibitory activity fraction (F5) obtained in Example 1.

【図2】実施例1で得られたエンドトキシン阻害活性画
分(F5)の1H-NMRスペクトル。
FIG. 2 is a 1 H-NMR spectrum of an endotoxin-inhibiting activity fraction (F5) obtained in Example 1.

【図3】実施例1で得られたエンドトキシン阻害活性画
分(F5)の13C-NMRスペクトル。
FIG. 3 is a 13 C-NMR spectrum of the endotoxin inhibitory activity fraction (F5) obtained in Example 1.

【図4】実施例1で得られた画分(F7)のIRスペクト
ル。
FIG. 4 is an IR spectrum of the fraction (F7) obtained in Example 1.

【図5】実施例1で得られた画分(F7)の1H-NMRスペク
トル。
FIG. 5 is a 1 H-NMR spectrum of the fraction (F7) obtained in Example 1.

【図6】実施例1で得られた画分(F7)の13C-NMRスペク
トル。
FIG. 6 is a 13 C-NMR spectrum of the fraction (F7) obtained in Example 1.

フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 FI テーマコート゛(参考) A61P 29/00 A61P 29/00 4C083 31/04 31/04 4C086 C12P 19/44 C12P 19/44 4C087 // A61K 7/00 A61K 7/00 M 7/08 7/08 7/16 7/16 C07H 15/04 C07H 15/04 D (C12P 19/44 (C12P 19/44 C12R 1:01) C12R 1:01) (72)発明者 内田 理一郎 千葉県野田市野田250番地キッコ−マン株 式会社内 (72)発明者 佐藤 五雄 千葉県野田市野田250番地キッコ−マン株 式会社内 (72)発明者 増田 力 千葉県野田市野田399番地財団法人野田産 業科学研究所内 Fターム(参考) 4B014 GB06 GB07 GG07 GK05 GL03 4B017 LC03 LE10 LG02 LK11 4B018 LB01 LB08 MD27 MD85 ME14 MF01 MF13 4B064 AF41 BE09 BE12 BE14 BH02 BH04 BH05 CA02 CE07 CE11 DA01 DA10 DA20 4C057 CC01 DD01 JJ10 4C083 AB292 AC102 AC122 AC352 AC422 AC442 AC482 AC692 AC782 AC862 AD352 AD391 AD392 BB48 CC04 CC39 CC41 DD22 DD23 EE11 EE33 4C086 AA01 EA05 GA17 MA01 MA04 MA16 MA28 MA57 MA63 NA14 ZA67 ZA90 ZA92 ZB11 ZC37 4C087 BC22 BC31 CA10 MA16 MA28 MA57 MA63 NA14 ZA67 ZA90 ZA92 ZB11 ZC37 Continuation of the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI Theme coat II (reference) A61P 29/00 A61P 29/00 4C083 31/04 31/04 4C086 C12P 19/44 C12P 19/44 4C087 // A61K 7 / 00 A61K 7/00 M 7/08 7/08 7/16 7/16 C07H 15/04 C07H 15/04 D (C12P 19/44 (C12P 19/44 C12R 1:01) C12R 1:01) (72) Inventor Riichiro Uchida 250 Noda, Noda, Chiba Prefecture Kikkoman Co., Ltd. (72) Inventor Goo Sato 250 Noda, Noda, Chiba Prefecture Kikkoman Co., Ltd. (72) Riki Masuda, Noda, Chiba No. 399 Noda F-term in Noda Institute of Industrial Science (Reference) 4B014 GB06 GB07 GG07 GK05 GL03 4B017 LC03 LE10 LG02 LK11 4B018 LB01 LB08 MD27 MD85 ME14 MF01 MF13 4B064 AF41 BE09 BE12 BE14 BH02 BH04 BH11 DA02 CE07 CC01 DD01 JJ10 4C083 AB292 AC102 AC122 AC352 AC422 AC442 AC482 AC692 AC782 AC862 AD352 AD391 AD392 BB48 CC04 CC39 CC41 DD22 DD23 EE11 EE33 4C086 AA01 EA05 GA17 MA01 MA04 MA16 MA28 MA57 MA63 NA14 ZA67 ZA90 ZA92 ZB11 ZC37 4C087 BC22 BC31 CA10 MA16 MA28 MA57 MA63 NA14 ZA67 ZA90 ZA92 ZB11 Z

Claims (5)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】以下の一般式(I)で示される化合物また
はその誘導体を有効成分とする、エンドトキシン阻害
剤。 一般式(I): 【化1】 (式中、R1またはR2は、ラウリン酸、ミリスチン
酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、トリ
デカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカ
ン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸から選ばれ
る1種。)
1. An endotoxin inhibitor comprising a compound represented by the following general formula (I) or a derivative thereof as an active ingredient. General formula (I): (In the formula, R1 or R2 is one selected from lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, arachidic acid, tridecanoic acid, pentadecanoic acid, heptadecanoic acid, nonadecanoic acid, oleic acid, linoleic acid, and linolenic acid. )
【請求項2】以下の一般式(I)で示される化合物また
はその誘導体を有効成分とする、エンドトキシンにより
誘導される炎症の予防治療剤。 一般式(I): 【化2】 (式中、R1またはR2は、ラウリン酸、ミリスチン
酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、トリ
デカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカ
ン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸から選ばれ
る1種。)
2. A preventive or therapeutic agent for inflammation induced by endotoxin, comprising a compound represented by the following general formula (I) or a derivative thereof as an active ingredient. General formula (I): (In the formula, R1 or R2 is one selected from lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, arachidic acid, tridecanoic acid, pentadecanoic acid, heptadecanoic acid, nonadecanoic acid, oleic acid, linoleic acid, and linolenic acid. )
【請求項3】以下の一般式(I)で示される化合物また
はその誘導体を有効成分とする抗敗血症剤。 一般式(I): 【化3】 (式中、R1またはR2は、ラウリン酸、ミリスチン
酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、トリ
デカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカ
ン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸から選ばれ
る1種。)
3. An antiseptic agent comprising a compound represented by the following general formula (I) or a derivative thereof as an active ingredient. General formula (I): (In the formula, R1 or R2 is one selected from lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, arachidic acid, tridecanoic acid, pentadecanoic acid, heptadecanoic acid, nonadecanoic acid, oleic acid, linoleic acid, and linolenic acid. )
【請求項4】請求項1〜3のいずれか1項に記載の薬剤
を含有する、飲食品または化粧品。
(4) A food, drink, or cosmetic product containing the drug according to any one of (1) to (3).
【請求項5】Brevundimonas属の微生物を培養し、培養
物から、以下の一般式(I)の化合物を採取することを
特徴とする、請求項1記載の化合物の製造法。 一般式(I): 【化4】 (式中、R1またはR2は、ラウリン酸、ミリスチン
酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、トリ
デカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカ
ン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸から選ばれ
る1種。)
5. The method for producing a compound according to claim 1, wherein the microorganism of the genus Brevundimonas is cultured, and the compound of the following general formula (I) is collected from the culture. General formula (I): (In the formula, R1 or R2 is one selected from lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, arachidic acid, tridecanoic acid, pentadecanoic acid, heptadecanoic acid, nonadecanoic acid, oleic acid, linoleic acid, and linolenic acid. )
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