JP2002204696A - 冬虫夏草のリボソームrna遺伝子塩基配列および冬虫夏草の種を分類する方法 - Google Patents

冬虫夏草のリボソームrna遺伝子塩基配列および冬虫夏草の種を分類する方法

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Abstract

(57)【要約】 【課題】 冬虫夏草について、生育地による違いを見出
し、客観的な判別および分類方法を確立すること。 【解決手段】 冬虫夏草の、ITS領域を含むリボソー
ムRNA遺伝子の生育地別塩基配列とそれらの比較によ
る分類方法、及び分類に使用する塩基配列決定用のプラ
イマーと増幅用プライマー。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は冬虫夏草のリボソー
ムRNA遺伝子塩基配列とそれを利用した分類方法に関す
る。
【0002】
【従来の技術】冬虫夏草は子嚢菌(バッカクキン科)の一
種で、漢方薬として珍重されている。冬虫夏草とは昆虫
やクモに寄生し、子実体を形成する菌類の総称であり、
一般に「広義には昆虫類・蜘蛛類に寄生してその体上に
著しい子実体を形成するノムシタケ属(Cordyce
ps)やHirsutella属などの菌類をいうが、
狭義には中国においてヤガ科の幼虫に生じるCordy
ceps sinensisを虫体とともに採って乾燥
した生薬を指す」(生物学辞典、岩波書店)とされてい
る。
【0003】冬虫夏草の薬効については近年学術的論文
でも多く報告がなされており、気管支の拡張作用や鎮静
作用(Furuya et al, 1983, Phytochem. 22: 2509-251
2、生本ら、1991、薬学雑誌 111: 504-509)、代謝機
能や免疫機能の制御・亢進、血圧低下作用、細胞増殖へ
の関与等、様々な効果が確認されている(Chiou WF. et
al. Life Sci. 2000, 66(14): 1369-1376、 Zhu JS et
al. J Altern Complement Med. 1998 Winter; 4(4): 4
29-457)。
【0004】上記のように、自然界において昆虫や蜘蛛
類に寄生し子実体を形成する菌には、Cordycep
s属だけではなく、Hirsutella属やIsar
ia属等もあり、これらのどの種類が漢方薬としての冬
虫夏草に含められるかの判断は、ほとんど経験によるも
のである。また、冬虫夏草とされたものについてのさら
に詳細な分類は、主に宿主と産地に基づいて行われてき
た。
【0005】例えば、Cordyceps crass
isporaは冬虫夏草として薬効が認められている
が、1990年代に入るまで、分類学においてCord
yceps sinensisに含まれ、漢方薬の分野
でも冬虫夏草を区別する最も慣用的な方法である、産地
による判別によって「雲南省の冬虫夏草」として区別さ
れていたにすぎない。Cordyceps crass
isporaがC.sinensisと同一であるとさ
れていた理由は、どちらもコウモリガの幼虫に寄生する
ことと、肉眼的な形態が酷似していることである。しか
しながらCordyceps crassispora
は、冬虫夏草として最も一般的なCordyceps
sinensisとは明らかに異なる薬効があることが
示されている(Kinjoら、Asian Inter
national Mycological Cong
ress、1996)。
【0006】さらに、冬虫夏草として最も一般に用いら
れているC.sinensisについても、地域によっ
ていくつかに分類され、それぞれ効能の種類や程度の違
いが認められている。しかしそれらを明確に分類する方
法はなく、購買者にとって、薬効の種類や強度の違いの
種類分けが非常に曖昧でわかり難いものになっている。
また、天然の冬虫夏草はその需要に答えるほど採取され
ず、市場に出回っている冬虫夏草がいくつかの原産地か
ら採取され、混合されたものであっても、それを確認す
る方法がなく、購買者のみならず当業者にとっても明確
な分類法が望まれている。
【0007】一方近年の分子遺伝学の発展は、生物分類
学における方法論に多大な影響を与えた。すなわちこれ
までの形態学的な分類に加えて、ある特定の遺伝子を選
択して、生物種についてその塩基配列を比較すると、遺
伝子の相同性からその進化の過程を推定し、分類するこ
とが可能となった。
【0008】生物種による遺伝子の分散の度合いは、基
本的な生命活動をつかさどる蛋白質をコードする遺伝子
で驚くほど保存されている一方、多くの遺伝子ではそれ
ぞれの蛋白質の機能の分散に従って変化し、もはや同一
起源であるかどうかの判断さえ難しいものまで様々であ
る。従って分類の対象となる生物種の範囲に応じて適切
な遺伝子領域を選択することで、例えば鯨と他の哺乳類
との関係のような、広い範囲の近縁関係から、カラスの
地域差のような、ごく限定された範囲内の詳細な分類ま
で可能となる。このような進化上の相対距離の推定及び
分類に最も一般的に利用される遺伝子としては、リボソ
ームRNA遺伝子(Bruce Alberts et al., Essential
Cell Biology,, Garland Publishing Inc., 439-440, 1
998)やミトコンドリアの遺伝子(宝来聰、細胞工学、
14巻、1031〜1035、1995)等が数多く報
告されている。
【0009】真核生物リボソームRNAは、RNAポリ
メラーゼによって転写されたRNAがプロセッシングを
受けて、いくつかの断片に分かれ、リボソームを構成す
る小サブユニット(SS;Small Subuni
t)と大サブユニット(LS;Large Subun
it)に組み込まれる。小サブユニットに組み込まれる
RNAは18SrRNA(「18S」は超遠心での沈降
速度を表す)とよばれ、約1900(酵母)ないし20
00塩基(ヒト)から成り、大サブユニットに組み込ま
れるRNAは28SrRNAと5.8SrRNAの2種
類で、28SrRNAは約4700(酵母)ないし50
00塩基、5.8SrRNAは約160塩基(酵母また
はヒト)から成る。
【0010】これらはrRNA遺伝子上に18SrRN
A(以下、「SS領域」という)、5.8SrRNA、
28SrRNA(以下、「LS領域」という)の順に縦
列にならび、18SrRNAと5.8SrRNA、5.
8SrRNAと28SrRNAの間はITS(Inte
rnal Transcribed Spacer)と
よばれる非転写領域によって分断されている。なおこの
2つのITSとその間にある5.8Sを、以下、まとめ
てITS領域と称している(図1参照)。
【0011】これまで冬虫夏草のリボソームRNAの配
列については、C.sinensisのITSを中心と
したごく限られた領域についてのみ、いくつか報告され
ているが、それぞれの産地と関連づけた報告はされてい
ない。また、冬虫夏草のなかでも薬効が高いと言われて
いるC.crassisporaのリボソームRNA遺
伝子配列については、まったく未報告である。
【0012】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的はCor
dyceps crassisporaとCordyc
eps sinensisの産地別各種のリボソームR
NA遺伝子配列の一部を提供し、冬虫夏草の産地別分類
について、客観的鑑別方法を提供することである。
【0013】
【課題を解決するための手段】以上のような課題を解決
すべく、本願発明者は、実際に当地に赴き、冬虫夏草の
主な生育地で自らサンプル採取を行い、さらに顕微鏡下
において形態上の厳しい選択をした上で、Cordyc
eps crassispora(中国雲南産)とCo
rdyceps sinensisのMarch(中国
甘粛産)、Seisazan(中国青海産)、Deru
ge(中国四川産)、Gyokuju(中国青海産)、
Bingo(チベット産)、Roho(中国四川産)、
Yakuzan(中国貴州産)、Gyokuryuse
tuzan(中国雲南産)、Nyaramu(ヒマラヤ
産)、Rusyasya(ヒマラヤ産)のそれぞれのリ
ボソームRNA遺伝子の一部、即ちSS領域からITS
領域、及びLS領域にいたる約3.7Kbpの塩基配列
を決定した。その結果、当該配列において相互鑑別に用
いることができる程度の相違を見出し、これに基づいて
本発明を完成させたものである。
【0014】即ち、本発明の塩基配列の第1の態様は、
配列表のID NO:1で示される、Cordycep
s crassisporaにおけるリボソームRNA
遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリボソー
ムRNA遺伝子の一部は、SS領域の一部、即ちSS領
域の3'側約1.8Kbpの塩基配列である。
【0015】本発明の塩基配列の第2の態様は、配列表
のID NO:2で示される、Cordyceps c
rassisporaにおけるリボソームRNA遺伝子
の一部である塩基配列である。上述したリボソームRN
A遺伝子の一部は、ITS領域、即ちITS1、5.8
S、ITS2を含む約0.7Kbpの塩基配列である。
【0016】本発明の塩基配列の第3の態様は、配列表
のID NO:3で示される、Cordyceps c
rassisporaにおけるリボソームRNA遺伝子
の一部である塩基配列である。上述したリボソームRN
A遺伝子の一部は、LS領域の一部、即ちLS領域の
5’側約1.3Kbpの塩基配列である。
【0017】本発明の塩基配列の第4の態様は、配列表
のID NO:4で示される、Cordyceps s
inensis March におけるリボソームRN
A遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリボソ
ームRNA遺伝子の一部は、SS領域の一部、即ちSS
領域の3’側約1.8Kbpの塩基配列である。
【0018】本発明の塩基配列の第5の態様は、配列表
のID NO:5で示される、Cordyceps s
inensis March におけるリボソームRN
A遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリボソ
ームRNA遺伝子の一部は、ITS領域、即ちITS
1、5.8S、ITS2を含む約0.7Kbpの塩基配列
である。
【0019】本発明の塩基配列の第6の態様は、配列表
のID NO:6で示される、Cordyceps s
inensis March におけるリボソームRN
A遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリボソ
ームRNA遺伝子の一部は、LS領域の一部、即ちLS
領域の5’側約1.4Kbpの塩基配列である。
【0020】本発明の塩基配列の第7の態様は、配列表
のID NO:7で示される、Cordyceps s
inensis Seisazanにおけるリボソーム
RNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリ
ボソームRNA遺伝子の一部は、SS領域の一部、即ち
SS領域の3’側約1.8Kbpの塩基配列である。
【0021】本発明の塩基配列の第8の態様は、配列表
のID NO:8で示される、Cordyceps s
inensis Seisazanにおけるリボソーム
RNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリ
ボソームRNA遺伝子の一部は、ITS領域、即ちIT
S1、5.8S、ITS2を含む約0.6Kbpの塩基配
列である。
【0022】本発明の塩基配列の第9の態様は、配列表
のID NO:9で示される、Cordyceps s
inensis Seisazanにおけるリボソーム
RNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリ
ボソームRNA遺伝子の一部は、LS領域の一部、即ち
LS領域の5'側約1.4Kbpの塩基配列である。
【0023】本発明の塩基配列の第10の態様は、配列
表のID NO:10で示される、Cordyceps
sinensis Derugeにおけるリボソーム
RNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリ
ボソームRNA遺伝子の一部は、SS領域の一部、即ち
SS領域の3'側約1.8Kbpの塩基配列である。
【0024】本発明の塩基配列の第11の態様は、配列
表のID NO:11で示される、Cordyceps
sinensis Derugeにおけるリボソーム
RNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリ
ボソームRNA遺伝子の一部は、ITS領域、即ちIT
S1、5.8S、ITS2を含む約0.6Kbpの塩基配
列である。
【0025】本発明の塩基配列の第12の態様は、配列
表のID NO:12で示される、Cordyceps
sinensis Derugeにおけるリボソーム
RNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリ
ボソームRNA遺伝子の一部は、LS領域の一部、即ち
LS領域の5'側約1.4Kbpの塩基配列である。
【0026】本発明の塩基配列の第13の態様は、配列
表のID NO:13で示される、Cordyceps
sinensis Gyokujuにおけるリボソー
ムRNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述した
リボソームRNA遺伝子の一部は、SS領域の一部、即
ちSS領域の3'側約1.8Kbpの塩基配列である。
【0027】本発明の塩基配列の第14の態様は、配列
表のID NO:14で示される、Cordyceps
sinensis Gyokujuにおけるリボソー
ムRNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述した
リボソームRNA遺伝子の一部は、ITS領域、即ちI
TS1、5.8S、ITS2を含む約0.7Kbpの塩基
配列である。
【0028】本発明の塩基配列の第15の態様は、配列
表のID NO:15で示される、Cordyceps
sinensis Gyokujuにおけるリボソー
ムRNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述した
リボソームRNA遺伝子の一部は、LS領域の一部、即
ちLS領域の5'側約1.4Kbpの塩基配列である。
【0029】本発明の塩基配列の第16の態様は、配列
表のID NO:16で示される、Cordyceps
sinensis BingoにおけるリボソームR
NA遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリボ
ソームRNA遺伝子の一部は、SS領域の一部、即ちS
S領域の3'側約1.8Kbpの塩基配列である。
【0030】本発明の塩基配列の第17の態様は、配列
表のID NO:17で示される、Cordyceps
sinensis BingoにおけるリボソームR
NA遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリボ
ソームRNA遺伝子の一部は、ITS領域、即ちITS
1、5.8S、ITS2を含む約0.6Kbpの塩基配列
である。
【0031】本発明の塩基配列の第18の態様は、配列
表のID NO:18で示される、Cordyceps
sinensis BingoにおけるリボソームR
NA遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリボ
ソームRNA遺伝子の一部は、LS領域の一部、即ちL
S領域の5'側約1.4Kbpの塩基配列である。
【0032】本発明の塩基配列の第19の態様は、配列
表のID NO:19で示される、Cordyceps
sinensis RohoにおけるリボソームRN
A遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリボソ
ームRNA遺伝子の一部は、SS領域の一部、即ちSS
領域の3'側約1.8Kbpの塩基配列である。
【0033】本発明の塩基配列の第20の態様は、配列
表のID NO:20で示される、Cordyceps
sinensis RohoにおけるリボソームRN
A遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリボソ
ームRNA遺伝子の一部は、ITS領域、即ちITS
1、5.8S、ITS2を含む約0.6Kbpの塩基配列
である。
【0034】本発明の塩基配列の第21の態様は、配列
表のID NO:21で示される、Cordyceps
sinensis RohoにおけるリボソームRN
A遺伝子の一部である塩基配列である。上述したリボソ
ームRNA遺伝子の一部は、LS領域の一部、即ちLS
領域の5'側約1.4Kbpの塩基配列である。
【0035】本発明の塩基配列の第22の態様は、配列
表のID NO:22で示される、Cordyceps
sinensis Yakuzanにおけるリボソー
ムRNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述した
リボソームRNA遺伝子の一部は、SS領域の一部、即
ちSS領域の3'側約1.8Kbpの塩基配列である。
【0036】本発明の塩基配列の第23の態様は、配列
表のID NO:23で示される、Cordyceps
sinensis Yakuzanにおけるリボソー
ムRNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述した
リボソームRNA遺伝子の一部は、ITS領域、即ちI
TS1、5.8S、ITS2を含む約0.7Kbpの塩基
配列である。
【0037】本発明の塩基配列の第24の態様は、配列
表のID NO:24で示される、Cordyceps
sinensis Yakuzanにおけるリボソー
ムRNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述した
リボソームRNA遺伝子の一部は、LS領域の一部、即
ちLS領域の5'側約1.4Kbpの塩基配列である。
【0038】本発明の塩基配列の第25の態様は、配列
表のID NO:25で示される、Cordyceps
sinensis Gyokuryusetuzan
におけるリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列
である。上述したリボソームRNA遺伝子の一部は、S
S領域の一部、即ちSS領域の3'側約1.8Kbpの塩
基配列である。
【0039】本発明の塩基配列の第26の態様は、配列
表のID NO:26で示される、Cordyceps
sinensis Gyokuryusetuzan
におけるリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列
である。上述したリボソームRNA遺伝子の一部は、I
TS領域、即ちITS1、5.8S、ITS2を含む約
0.7Kbpの塩基配列である。
【0040】本発明の塩基配列の第27の態様は、配列
表のID NO:27で示される、Cordyceps
sinensis Gyokuryusetuzan
におけるリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列
である。上述したリボソームRNA遺伝子の一部は、L
S領域の一部、即ちLS領域の5'側約1.4Kbpの塩
基配列である。
【0041】本発明の塩基配列の第28の態様は、配列
表のID NO:28で示される、Cordyceps
sinensis Nyaramuにおけるリボソー
ムRNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述した
リボソームRNA遺伝子の一部は、SS領域の一部、即
ちSS領域の3'側約1.8Kbpの塩基配列である。
【0042】本発明の塩基配列の第29の態様は、配列
表のID NO:29で示される、Cordyceps
sinensis Nyaramuにおけるリボソー
ムRNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述した
リボソームRNA遺伝子の一部は、ITS領域、即ちI
TS1、5.8S、ITS2を含む約0.7Kbpの塩基
配列である。
【0043】本発明の塩基配列の第30の態様は、配列
表のID NO:30で示される、Cordyceps
sinensis Nyaramuにおけるリボソー
ムRNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述した
リボソームRNA遺伝子の一部は、LS領域の一部、即
ちLS領域の5'側約1.4Kbpの塩基配列である。
【0044】本発明の塩基配列の第31の態様は、配列
表のID NO:31で示される、Cordyceps
sinensis Rusyasyaにおけるリボソ
ームRNA遺伝子の一部である塩基配列である。上述し
たリボソームRNA遺伝子の一部は、ITS領域、即ち
ITS1、5.8S、ITS2を含む約0.7Kbpの塩
基配列である。
【0045】本発明の塩基配列の第32の態様は、配列
表のID NO:1から31で示される塩基配列におい
て、1もしくは複数の塩基配列が付加、欠失もしくは置
換されていることを特徴とする、上記リボソームRNA
遺伝子の一部である塩基配列である。
【0046】また本発明のプライマーの第1の態様は、
配列表のID NO:1からNO:31で示される塩基
配列または配列表のID NO:1からNO:31で示
される塩基配列の相補的配列のうち、連続する15ない
し40塩基からなる塩基配列を有するオリゴヌクレオチ
ドを含む、塩基配列決定用のプライマーである。
【0047】本発明のプライマーの第2の態様は、配列
表のID NO:1からNO:31で示される塩基配列
または配列表のID NO:1からNO:31で示され
る塩基配列の相補的配列のうち、連続する15ないし4
0塩基からなる塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを
含む、DNA増幅用のプライマーである。
【0048】本発明のプライマーの第3の態様は、配列
表のID NO:2の塩基番号57から193及び35
1から538、ID NO:5の塩基番号57から21
7及び374から550、ID NO:8の塩基番号5
7から216及び374から550、NO:11の塩基
番号57から216及び374から550、NO:14
の塩基番号57から216及び374から550、ID
NO:17の塩基番号57から216及び374から
550、ID NO:20の塩基番号57から216及
び374から550、ID NO:23の塩基番号57
から216及び375から538、ID NO:26の
塩基番号57から207及び372から531、ID
NO:29の塩基番号57から217及び374から5
50、ID NO:31の塩基番号57から216及び
372から549で示される塩基配列またはその相補的
配列のうち、連続する15ないし40塩基からなる塩基
配列を有するオリゴヌクレオチドを含む、上記塩基配列
決定用またはDNA増幅用のプライマーである。
【0049】さらに、本発明の方法の第1の態様は、冬
虫夏草のリボソームRNA遺伝子のSS領域の3'側
1.4KbpからITS領域、及びLS領域5'側1.
7Kbpにいたる領域の塩基配列の全部または一部を、
配列表のID NO:1から31に記載の塩基配列と比
較し、その異同により、冬虫夏草を分類する方法であ
る。
【0050】本発明の方法の第2の態様は、上記比較
が、上記領域の塩基配列を決定し、その相同性の割合を
測定して比較するものであることを特徴とする、冬虫夏
草を分類する方法である。
【0051】本発明の方法の第3の態様は、上記比較
が、冬虫夏草のリボソームRNAのITS領域と、配列
表ID NO:2、5、8、11、14、17、20、
23、26、29、31のいずれかに記載の塩基配列と
の相同性の比較であることを特徴とする、冬虫夏草を分
類する方法である。
【0052】本発明の方法の第4の態様は、上記塩基配
列決定において、配列表のID NO:1からNO:3
1で示される塩基配列または配列表のID NO:1か
らNO:31で示される塩基配列の相補的配列のうち、
連続する15ないし40塩基からなる塩基配列を有する
オリゴヌクレオチドを、塩基配列決定のプライマーとし
て用いることを特徴とする、冬虫夏草を分類する方法で
ある。即ち、相同性の比較である。
【0053】本発明の方法の第5の態様は、上記塩基配
列の決定におけるプライマーが、配列表のID NO:
2の塩基番号57から193及び351から538、I
D NO:5の塩基番号57から217及び374から
550、ID NO:8の塩基番号57から216及び
374から550、NO:11の塩基番号57から21
6及び374から550、NO:14の塩基番号57か
ら216及び374から550、ID NO:17の塩
基番号57から216及び374から550、ID N
O:20の塩基番号57から216及び374から55
0、ID NO:23の塩基番号57から216及び3
75から538、ID NO:26の塩基番号57から
207及び372から531、ID NO:29の塩基
番号57から217及び374から550、ID N
O:31の塩基番号57から216及び372から54
9で示される塩基配列またはその相補的配列のうち、連
続する15ないし40塩基からなる塩基配列を有するオ
リゴヌクレオチドであることを特徴とする、冬虫夏草を
分類する方法である。即ち、相同性の比較である。
【0054】本発明の方法の第6の態様は、上記分類方
法における比較が、配列表のIDNO:1からNO:3
1で示される塩基配列または配列表のID NO:1か
らNO:31で示される塩基配列の相補的配列のうち、
連続する15ないし40塩基からなる塩基配列を有する
オリゴヌクレオチドをプライマーとして用いる、DNA
増幅の過程を含むことを特徴とする、冬虫夏草を分類す
る方法である。
【0055】本発明の方法の第7の態様は上記DNA増
幅の過程において、配列表のIDNO:2、5、8、1
1、14、17、20、23、26、29、31のいず
れかに記載の塩基配列またはそれらの相補的配列のう
ち、連続する15ないし40塩基からなる塩基配列を有
するオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いること
を特徴とする、冬虫夏草を分類する方法である。
【0056】本発明の方法の第8の態様は、上記DNA
増幅過程におけるプライマーが、配列表のID NO:
2の塩基番号57から193及び351から538、I
D NO:5の塩基番号57から217及び374から
550、ID NO:8の塩基番号57から216及び
374から550、NO:11の塩基番号57から21
6及び374から550、NO:14の塩基番号57か
ら216及び374から550、ID NO:17の塩
基番号57から216及び374から550、ID N
O:20の塩基番号57から216及び374から55
0、ID NO:23の塩基番号57から216及び3
75から538、ID NO:26の塩基番号57から
207及び372から531、ID NO:29の塩基
番号57から217及び374から550、ID N
O:31の塩基番号57から216及び372から54
9で示される塩基配列またはその相補的配列のうち、連
続する15ないし40塩基からなる塩基配列を有するオ
リゴヌクレオチドであることを特徴とする、冬虫夏草を
分類する方法である。
【0057】
【発明の実施の形態】上述のように、リボソーム遺伝子
配列は、生物の分類に広く用いられている。その理由と
しては、真核生物のなかで最も単純な酵母から非常に複
雑な哺乳動物にいたるまで広く保存されている一方、一
部ITS領域のようにプロセッシングの過程で捨てられ
る配列については、ある程度の分散が期待できるからで
ある。本発明のように、限られた種の地域差を見るに
は、配列のある程度の分散が必要であるが、あまりにも
分散の度合いが強い場合は配列の決定や増幅のプライマ
ーに問題が生じたりすることがある。その点リボソーム
RNA遺伝子のITSを中心とする配列決定は、保存性
の高いSS領域やLS領域を足がかりに、分散度の高い
ITS領域を探索できるという利点がある。
【0058】C.sinensis又はC.crass
isporaの塩基配列を決定するにあたり、最も一般
的な方法は、まず菌体を培養してDNAを抽出し、それ
を鋳型としてPCR(plymerase Chain
Reaction)によってリボソームRNA遺伝子
をクローニングし、それらについて塩基配列を決定する
方法である。PCR、塩基配列決定は、どちらも定法に
より行うことができる。PCRに用いたプライマーの配
列は酵母(S.Cerevisiae)の塩基配列に基
づいて決定し、常法に従って合成することができる。ま
たシーケンスに用いたプライマーは、PCRプライマー
と同様に酵母の塩基配列に基づいて作成してもよいし、
あるいは、これらのプライマーでまず最初に読み進み、
その後は読み取った配列にもとづき順次プライマー合成
を行ってもよい 。
【0059】一般的に塩基配列に基づく判別・分類方法
としては、数100bpの一定領域の塩基配列全体を比
較する方法、1ないし数カ所の特定部位の塩基の違いを
比較する方法、あるいは1ないし数カ所の特定部位の塩
基の違いを複数組合わせ、パターン化して比較する方法
がある。
【0060】数100bpの一定領域の塩基配列全体を
比較する方法としては、判別・分類の対象となるサンプ
ルの一定領域の塩基配列を決定し、既知の塩基配列と比
較し、その相同性の割合で判定する方法がある。一般に
生物種は近接する地域であっても、進化の過程を反映し
て微妙にその相同性に違いをみせるので、サンプルの配
列は必ずしも既知の配列と100%同一ではないことが多
い。このような場合にも、相同性の割合を求めることに
より、相対的な類縁関係の推測を容易に行うことができ
る。
【0061】この相同性の割合を比較する方法には、生
育地によって相違の生じるITS領域を用いるのが望ま
しい。また、ITS領域内のITS1またはITS2を
用いて比較する方法は最も望ましい。ITS1とITS
2は、Cordycepscrassisporaでは
それぞれ配列表ID No.2の塩基番号57−193
と351−538、Cordyceps sinens
is Marchではそれぞれ配列表ID No.5の塩
基番号57−217と374−550、Seisaza
nではそれぞれ配列表ID No.8の塩基番号57−
216と374−550、Derugeではそれぞれ配
列表ID No.11の塩基番号57−216と374
−550、Gyokujuではそれぞれ配列表ID N
o.14の塩基番号57−216と374−550、B
ingoではそれぞれ配列表ID No.17の塩基番
号57−216と374−550、Rohoではそれぞ
れ配列表ID No.20の塩基番号57−216と3
74−550、Yakuzanではそれぞれ配列表ID
No.23の塩基番号57−216と375−53
8、Gyokuryusetuzanではそれぞれ配列
表ID No.26の塩基番号57−207と372−
531、Nyaramuではそれぞれ配列表ID N
o.29の塩基番号57−217と374−550、R
usyasyaではそれぞれ配列表ID No.31の
塩基番号57−216と372−549であることが相
同性により推定される。ただし上記の位置は報告により
若干のずれがある。
【0062】1ないし数カ所の特定部位の塩基の違いを
利用する方法としては、PCRのプライマーによる判別
がある。塩基配列を比較し、相違のある領域にPCRの
プライマーを設定し、どのプライマーによって増幅され
るかによって判別する方法である。この場合非相同的な
領域だけでなく、相同的な領域にもプライマーを設定
し、インターナルコントロールとするのが望ましい。増
幅が見られないのは、反応の失敗ではなく、サンプルの
リボソームRNA遺伝子の配列によるものであることを
確認するためである。上記PCRのプライマーによる判
別方法において、プライマーを設定する領域は、本発明
のSS領域配列(配列表ID NO:1、4、7、1
0、13、16、19、22、25、28)、ITS領
域配列(配列表ID NO:2、5、8、11、14、
17、20、23、26、29、31)、またはLS領
域配列(配列表ID NO:3、6、9、12、15、
18、21、24、27、30)のいずれでもよい。S
S領域とLS領域はITS領域に比較して相同性が高い
が、上記方法は、1ないし数塩基の非相同性でも充分判
別可能なので、いずれの領域においても容易にプライマ
ーを設定することができる。
【0063】上記の、特定のプライマーによってリボソ
ームRNA遺伝子が増幅するかどうかで判別する方法
は、PCR以外の増幅法であってもよい。例えば最近発
表されたLAMP法(栄研化学)、ICAN法(宝酒
造)のプライマーとして設定することも可能である。
【0064】分類は必ずしも核酸の増幅によるものでな
くてもよい。例えば1本鎖の核酸同士をハイブリダイズ
させて、それを電気的に検出する方法は、非常に感度が
良いので、核酸の増幅なしで検出が可能である。1本鎖
のプローブを上記増幅法と同様に非相同的な領域に設定
することにより、ハイブリダイズしたかどうかで配列を
確認できる。
【0065】また、1ないし数カ所の特定部位の塩基の
違いを比較する方法による判別・分類は、RFLP(R
estriction Fragment Lengt
hPolymorphism)法でも可能である。鑑定
の対象となる何種類かの塩基配列を比較し、制限酵素に
よる切断に違いのある部分を見つけ、増幅されたDNA
断片にその部分が含まれるように、プライマーを設定す
る。増幅したDNA断片がその制限酵素によって切断さ
れるか否かによって配列の違いが判断できる。切断の有
無は通常の電気泳動法等によって容易に判定可能であ
る。
【0066】さらに、上記の特定部位における塩基の違
いを複数組合わせ、パターン化して比較する方法があ
る。例えば、上記プライマー法で、いくつかのプライマ
ー対を用いる方法や、あるいは上記RFLP法で、比較
的広い領域を増幅し、複数の制限酵素で切断し、それぞ
れの切断パターンによって判別することも可能である。
このRFLP法では、上述のプライマーによる判別法と
同様、SS領域、ITS領域、LS領域のいずれを用い
ることができるが、非相同性の高いITS領域は、切断
パターンが多様であり、制限酵素の選択肢も多く、望ま
しい。さらに、ITS領域内のITS1またはITS2
は、生育地による相違を最も反映していると考えられる
ので、パターン作成にこれらの領域を含めることは、よ
り望ましい。上述のように、自然界においては近接した
生物種であっても、たとえばITSのようにその生物種
にとって必須ではない塩基配列領域は広く分散している
ことが多いので、往々にして配列全体の比較が必要にな
ることがあり、その点RFLPは、塩基配列を決定して
相同性の割合を求めるより簡便で、かつ配列全体の比較
であるので、有効性が高く、かつ実用的である。
【0067】以下、本発明を実施例に基づき、より具体
的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定さ
れるものではない。
【0068】
【実施例】冬虫夏草は主に中国の高山帯で採取される
が、本発明に用いたC.crassispora(この
発明の塩基配列の第1、2、3の態様)のサンプルは、
特に中国雲南省の標高3000m以上の高山帯で採取さ
れた。また、C.sinensisのそれぞれのサンプ
ルは、この発明の塩基配列の第4、5、6の態様にある
Marchは中国甘粛省、 この発明の塩基配列の第
7、8、9の態様にあるC.sinensis Sei
sazanは中国青海省、 この発明の塩基配列の第1
0、11、12の態様にあるC.sinensis D
erugeは中国四川省、この発明の塩基配列の第1
3、14、15の態様にあるC.sinensis G
yokujuは中国青海省、この発明の塩基配列の第1
6、17、18の態様のC.sinensis Bin
goはチベット自治区、 この発明の塩基配列の第1
9、20、21の態様のC.sinensis Roh
oは中国四川省、この発明の塩基配列の第22、23、
24の態様のC.sinensisYakuzanは中
国貴州省、この発明の塩基配列の第25、26、27の
態様のC.sinensis Gyokuryuset
uzanは中国雲南省、この発明の塩基配列の第28、
29、30の態様のC.sinensis Nyara
muと、この発明の塩基配列の第31の態様のC.si
nensis Rusyasyaはヒマラヤにおいてそ
れぞれ採取された。
【0069】冬虫夏草からのDNA抽出 可及的にアガロース部分を除去した培養菌体を、滅菌水
に一晩浸水し、含まれている培地由来の成分を除去し
た。上記処理を行った培養菌体を、酵素溶液(SCE
0.5ml、Zymolyase20−T 5mg、C
hitinase−GODO 5mg(生化学工業))
中で24時間室温でインキュベートした。これにPro
teinaseK(プロメガ社、特異的活性30単位/
mg以上)を50mg及び10%SDSを5μl、55
℃で3時間インキュベートした。その後、室温で10,
000rpm5分遠心し、水相400μlを200μl
づつ2本の新しい1.5mlチューブへ移し、等量のフ
ェノール・クロロフォルム混合液を加え5分間転倒混和
した。再度室温にて15,000rpm、5分遠心し
て、水相を新しいチューブに移し、3M酢酸ナトリウム
20μl、ethachinmate(日本ジーン)2
μl、エタノール500μlを加え、転倒混和し、4
℃、15,000rpmで15分で遠心した。上清を捨
て、70%エタノール1mlと4℃、15,000rp
m、2分の遠心で上清を捨て、塩分を除いた。ペレット
を凍結乾燥した後200μlTEに溶解し、QIAam
p DNA Blood mini kit(キアゲン
社)を用い精製した。
【0070】冬虫夏草リボソームRNA遺伝子の部分ク
ローニング 冬虫夏草リボソームRNA遺伝子のSS領域の一部、L
S領域の一部を、上記抽出DNAを鋳型として、PCR
(Plymerase Chain Reactio
n)法によってクローニングした。用いたプライマー
は、SS領域にはSSJ(5'-ctggt tgatc ctgcc agtag
-3' )又はSS10(5'-agtag tcata tctt gtctc aaag
-3')のフォワード側プライマーとSST(5'-acgga ac
ctt gttac gact-3')のリバース側プライマーのセッ
ト、LS領域にはLS1(5'-agtac ccgctgaact taag-
3')のフォワード側プライマーとLSD(5'-ggaac ctt
tc cccac ttc-3')のリバース側プライマーのセットで
ある。これらのプライマーは酵母(S.Cerevis
iae)の塩基配列に基づいて作製した。またこれらの
プライマーの相対的位置を図2に示した。
【0071】PCRの反応液を図3のように設定し、最
初に95℃で3分変性させた後、94℃で0.5分、53
℃で0.5分、72℃で1分のサイクルを40回行い、
最後に72℃3分加熱した。
【0072】(3)SS領域とLS領域の塩基配列の決
定 上記PCR産物をShrimp Alkaline P
hosphataseとExonucleaseIによ
り処理した後、PCRに用いたプライマー(SSJ、S
S10、SST、LS1、LSD)と、さらに、SS2
( 5'-aattc cagctccaat agcgt-3')、SS3(5'-tcag
c cttgc gacca tactc-3')、SS4(5'-acttt cgatg t
ttgg gtagt-3')、SSU(5'-gtaat tccag ctcca atag
c-3' )、SS5(5'-gtgct gggga tagag cattg-3'
)、SS6(5'-caatg ctcta tcccc agcac-3')、SS
7(5'-acttt cgatg tttgg gtagt-3')、SS8(5'-catc
g aaagttgata ggg-3')、SS11(5'-catgc tgaaa at
ccc gactc cggaa gg-3')SS12(5'-ctgtt tcccc gc
cac gccca gtg-3')、SS13(5'-agtac cttac tacttg
gata accg-3')、LSC(5'-gcctt agtaa cggcg agtg-
3')、LS4(5'-ttgtg cgcta tcggt ctc-3')、LS
6(5'-tcaag ttctc attga agtat ttgc-3')、LS9
(5'-ggtaa gcaga actgg cgatg cggga tg-3')、LS10
(5'-caagt agagt gatcg aaaga-3')、LS11(5'-ttcat
cccgc atcgc cagtt ct-3')、LS12(5'-caagg atgct
ggcgt aatgg t-3')をシーケンスプライマーとして、T
hermoSequenaseII determina
tor cycle sequencing kit
(アマシャムファルマシアバイオテク社)を用い、C.
crassispora及びC.sinensisの8
種について、SS領域の3'側約1.8KbpとLS領域
の5'側約1.4Kbpの塩基配列を決定した(図2、図
4参照)。
【0073】(4)ITS領域の塩基配列の決定 上記により決定したSS領域、LS領域の塩基配列に基
づき、ITS領域の塩基配列を決定した。酵母(S.C
erevisiae)の塩基配列に基づいて、PCRプ
ライマーITS7(5'-ggccg ggaag ctctc caaac tcggt
catt-3')とITS8(5'-cctct gcaaa ttaca actcg ggcc
-3')を作製し、ITS領域を増幅し、上記プライマーに
加えて、ITS2(5'-gctgc gttct tcatc gatgc-3')、
ITS3(5'-gcatc gatga agaac gcagc-3')、ITS4
(5'-tcctc cgctt attga tatgc-3')、ITS5(5'-ggaag
taaaa gtcgt aacaa gg-3')のシーケンスプライマーを
用いて配列決定を行った(図2)。具体的実験方法は上記
SS領域、LS領域の決定と同様に行った。
【0074】(5)相同性の決定 上記により決定した、C.sinensis Marc
hと、C.crassisporaのITS領域の相同
性をDNASISのマキシマムマッチング(日立ソフ
ト)によって調べたところ、78%であった(図5参
照)。一方、保存性が高いことが予測されているLS領
域では相同性93%を示した。
【0075】(6)RFLPによるパターン分析 C.crassisporaとC.sinensis
DerugeよりDNAを抽出し、これを鋳型としてI
TS5、ITS4のプライマー対でPCR法による増幅
を行った。C.crassisporaから得られた6
04bpのDNA断片とC.sinensis Der
ugeから得られた568bpのDNA断片を、Bcg
I、BglI、DdeI、DrdI、MaeI、Mse
I、XhoIの7種類の制限酵素処理を行った。得られ
た断片を6%アクリルアミドゲル(0.5xTBE)に
より電気泳動し、比較したところ、塩基配列より予想さ
れたとおりのパターンの相違が示された(図6、図7参
照)。
【0076】
【発明の効果】上述したように、この発明によると、C
ordyceps crassisporaとCord
yceps sinensisの産地別各種のリボソー
ムRNA遺伝子配列の一部を提供することができ、更
に、冬虫夏草の産地別分類について、客観的鑑別方法を
提供することができる。
【0077】
【配列表】 <100> Kinjo, Noriko Healthway Inc. <120> Method for classifying tochu-kaso <160> 31 <210> 1 <211> 1761 <212> DNA <213> Cordyceps crassispora <400> 1 ctggttgatc ctgccagtag tcatatgctt gtctcaaaga ttaagccatg catgtctaag 60 tataagcaat tatacagcga aactgcgaat ggctcattat ataagttatc gtttatttga 120 tagtacctta ctacttggat aaccgtggta attctagagc taatacatgc taaaaatccc 180 gacttcggaa gggatgtatt tattagatta aaaaccaatg cccttcgggg ctccttggtg 240 attcatgata actcctcgaa tcgcatggcc ttgtgccggc gatggttcat tcaaatttct 300 tccctatcaa ctttcgatgt ttgggtattg gccaaacatg gttgcaacgg gtaacggagg 360 gttagggctc gaccccggag aaggagcctg agaaacggct actacatcca aggaaggcag 420 caggcgcgca aattacccaa tcccgacacg gggaggtagt gacaataaat actgatacag 480 ggctcttttg ggtcttgtaa ttggaatgag tacaatttaa atcccttaac gaggaacaat 540 tggagggcaa gtctggtgcc agcagccgcg gtaattccag ctccaatagc gtatattaaa 600 gttgttgtgg ttaaaaagct cgtagttgaa ccttgggcct ggctggccgg tccgcctcac 660 cgcgtgtact ggtccggccg ggcctttccc tctgtggaac cccatgccct tcactgggtg 720 tggcggggaa acaggacttt tactttgaaa aaattagagt gctccaggca ggcctatgct 780 cgaatacatt agcatggaat aatagaatag gacgtgtggt tctattttgt tggtttctag 840 gaccgccgta atgattaata gggacagtcg ggggcatcag tattcaattg tcagaggtga 900 aattcttgga tttattgaag actaactact gcgaaagcat ttgccaagga tgttttcatt 960 aatcaggaac gaaagttagg ggatcgaaga cgatcagata ccgtcgtagt cttaaccata 1020 aactatgccg actagggatc ggacgatgtt attttttgac tcgttcggca ccttacgaga 1080 aatcaaagtg cttgggctcc agggggagta tggtcgcaag gctgaaactt aaagaaattg 1140 acggaagggc accaccaggg gtggagcctg cggcttaatt tgactcaaca cggggaaact 1200 caccaggtcc agacacaatg aggattgaca gattgagagc tctttcttga ttttgtgggt 1260 ggtggtgcat ggccgttctt agttggtgga gtgatttgtc tgcttaattg cgataacgaa 1320 cgagacctta acctgctaaa tagcccgtat tgctttggca gtacgctggc ttcttagagg 1380 gactatcggc tcaagccgat ggaagtttga ggcaataaca ggtctgtgat gcccttagat 1440 gttctgggcc gcacgcgcgc tacactgacg gagccagcga gtactccctt gaccggaagg 1500 tccgggtaat cttgttaaac tccgtcgtgc tggggataga gcattgtaat tattgctctt 1560 caacgaggaa tccctagtaa gcgcaagtca tcagcttgcg ttgattacgt ccctgccctt 1620 tgtacacacc gcccgtcgct actaccgatt gaatggctca gtgaggcgtc cggactggcc 1680 cagagaggtg ggcaaccacc actcagggcc ggaaagctct ccaaactcgg tcatttagag 1740 gaagtaaaag tcgtaacaag g 1761
【0078】 <210> 2 <211> 647 <212> DNA <213> Cordyceps crassispora <400> 2 tagaggaagt aaaagtcgta acaaggtctc cgttggtgaa ccagcggagg gatcattacc 60 gagtttacaa ctcccaaacc cctgtgaaca tacctatcgt tgcctcggcg gtgcccgctc 120 cggcggcccg ccagaggacc cccaaactct tgttttatac agtatcttct gagtaacacg 180 attaaataaa tcaaaacttt caacaacgga tctcttggtt ctggcatcga tgaagaacgc 240 agcgaaatgc gataagtaat gtgaattgca gaattcagtg aatcatcgaa tctttgaacg 300 cacattgcgc ccgccagtat tctggcgggc atgcctgttc gagcgtcatt tcaaccctca 360 agcccccggg cttggtgttg gggatcggcg tgccctcgcg gcgcgccgtc ccctaaatct 420 agtggcggtc tcgctgtagc ttcctctgcg tagtagcaac actcgcactg gatcgcagcg 480 cggccacgcc gttaaacccc ccacttctga aagtttgacc tcggatcagg taggaatacc 540 cgctgaactt aagcatatca ataagcggag gaaaagaaac caacagggat tgcccctagt 600 aacggcgagt gaagcggcaa cagctcaaat ttgaaatctg cctccgg 647
【0079】 <210> 3 <211> 1324 <212> DNA <213> Cordyceps crassispora <400> 3 cccgagttgt aatttgcaga ggatgctttt ggcgcggcgc cttccgagtg ccctggaacn 60 ggacgccata gagggtgaga gccccgtctg gtcggacgcc cagcctctgt aaagctcctt 120 cgacgagtcg agtagtttgg gaatgctgct ctaaacggga ggtatatgtc ttctaaagct 180 aaatactggc cagagaccga tagcgcacaa gtagagtgat cgaaagatga aaagcacttt 240 gaaaagaggg ttaaacagta cgtgaaattg ttgaaaggga agcgcttgtg accagactcg 300 ggcgcggcga atcacccggc gttctcgccg gtgcacttcg acgcgcccgg gccagcatca 360 gctcgccgcg ggggacaaag gcgccgggaa cgtggctccc cagggagtgt tatagcccgg 420 cgcgcaacgc cccgcggcgg actgaggttc gcgcgtccgc aaggatgctg gcgtaatggt 480 caccagtgac ccgtcttgaa acacggacca aggagtcgtc ctcgtatgcg agtgttcggg 540 tgtcaaaccc ctacgcgcaa tgaaagtgaa cgcgggtgag agcctcgcgg cgcatcatcg 600 accgatcctg atgttctcgg atggatttga gtaggagcat acggggccgg acccgaaaga 660 aggtgaacta tgcctgtgta gggtgaagcc agaggaaact ctggtggagg ctcgcagcgg 720 ttctgacgtg caaatcgatc gtcaaacatg ggcatggggg cgaaagacta atcgaacctt 780 ctagtagctg gtttccgccg aagtttccct caggatagca gtgttgatct cagttttatg 840 aggtaaagcg aatgattagg gacccggggg cgctcttcag ccttcatcca ttctcaaact 900 ttaaatatgt aagaagccct tgttgcttgg ttgaacgtgg gcattcgaat gtatcgacac 960 tagtgggcca tttttggtaa gcagaactgg cgatgcggga tgaaccgaac gcgaggttaa 1020 ggtgccggaa tacacgctca tcagacacca caaaaggtgt tagttcatct agacagccgg 1080 acggtggcca tggaagtcgg aatccgctaa ggagtgtgta acaactcacc ggccgaatga 1140 actagccctg aaaatggatg gcgctcaagc gtgttaccta tactctaccg tcagggttga 1200 tatgatgccc tgacgagtag gcaggcgtgg aggtcagtga cgaagcctag accgtaaggt 1260 cgggtcgaac ggcctctagt gcagatcttg gtggtagtag caaatattca aatgagaact 1320 tgaa 1324
【0080】 <210> 4 <211> 1766 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 4 ctggttgatc ctgccagtag tcatatgctt gtctcaaaga ttaagccatg catgtctaag 60 tataagcaat tatacagcga aactgcgaat ggctcattat ataagttatc gtttatttga 120 tagtacctta ctacttggat aaccgtggta attctagagc taatacatgc tgaaaatccc 180 gactccggaa gggatgtatt tattagattc aaagccaatg ccctccgggc tcactggtga 240 ttcatgataa ctcctcgaat cgcacggcct tgcgccggcg atggttcatt caaatttctt 300 ccctatcaac tttcgatgtt tgggtagtgg ccaaacatgg ttgcaacggg taacggaggg 360 ttagggctcg accccggaga aggagcctga gaaacggcta ctacatccaa ggaaggcagc 420 aggcgcgcaa attacccaat cccgacacgg ggaggtagtg acaataaata ctgatacagg 480 gctcttttgg gtcttgtaat tggaatgagt acaatttaaa tcccttaacg aggaacaatt 540 ggagggcaag tctggtgcca gcagccgcgg taattccagc tccaatagcg tatattaaag 600 ttgttgtggt taaaaagctc gtagttgaac cttgggcctg gctggccggt ccgcctcacc 660 gcgtgtactg gtccggccgg gcctttccct ctgtggaacc ccatgccctt cactgggcgt 720 ggcggggaaa caggactttt actttgaaaa aattagagtg ctccaggcag gcctatgctc 780 gaatacatta gcatggaata atgaaatagg acgcgcggtt ctattttgtt ggtttctagg 840 accgccgtaa tgattaatag ggacagtcgg gggcatcagt attcaatggt cagaggtgaa 900 attcttggat ccattgaaga ctaactactg cgaaagcatt tgtcaaggat gttttcatta 960 atcaggaacg aaagttaggg gatcgaagac gatcagatac cgtcgtagtc ttaaccataa 1020 actatgccga ctagggatcg gacgatgtta ttttttgact cgttcggcac cttacgagaa 1080 atcaaagtgc ttgggctcca gggggagtat ggtcgcaagg ctgaaactta aagaaattga 1140 cggaagggca ccaccagggg tggagcctgc ggcttaattt gactcaacac ggggaaactc 1200 accaggtcca gacacaatga ggattgacag attgagagct ctttcttgat tttgtgggtg 1260 gtggtgcatg gccgttctta gttggtggag tgatttgtct gcttaattgc gataacgaac 1320 gagaccttaa cctgctaaat agcccgtact gctccggcag tgcgccggct tcttagaggg 1380 actatcggct caagccgatg gaagtttgag gcaataacag gtctgtgatg cccttagatg 1440 ttctgggccg cacgcgcgct acactgacgg agccagcgag tcctcccttg gccggaaggc 1500 ccgggtaatc ttgttaaact tcgtcgtgct ggggatagag cattgcaatt attgctcttc 1560 aacgaggaat ccctagtaag cgcaagtcat cagcttgcgt tgactacgtc cctgcccttt 1620 gtacacaccg cccgtcgcta ctaccgattg aatggctcag tgaggcgtcc ggactggccc 1680 aggggggtgg gaaaccgccc cccagggccg ggaagctctc caaactcggt catttagagg 1740 aagtaaaagt cgtaacaagg ttccgt 1766
【0081】 <210> 5 <211> 664 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 5 tagaggaagt aaaagtcgta acaaggtctc cgttggtgaa ccagcggagg gatcattatc 60 gagtcaccac tcccaaaccc cctgcgaaca ccacagcagt tgcctcggcg ggaccgcccc 120 ggcgccccag ggcccggacc agggcgcccg ccggaggacc cccagaccct cctgtcgcag 180 tggcatctct cagtcaagaa gcaagcaaat gaatcaaaac tttcaacaac ggatctcttg 240 gttctggcat cgatgaagaa cgcagcgaaa tgcgataagt aatgtgaatt gcagaattca 300 gtgaaccatc gaatctttga acgcacattg cgcccgccag cactctggcg ggcatgcctg 360 tccgagcgtc atctcaaccc tcgagccccc cgcctcgcgg cggcggggcc cggccttggg 420 ggtcacggcc ccgcgccgcc ccctaaacgc agtggcgacc ccgccgcggc tcccctgcgc 480 agtagctcgc tgagaacctc gcaccgggag cgcggaggcg gtcacgccgt gaaaccacca 540 caccctccag ttgacctcgg atcaggtagg gatacccgct gaacttaagc atatcaataa 600 gcggaggaaa agaaaccaac agggattgcc ccagtaacgg cgagtgaagc ggcaacagct 660 caaa 664
【0082】 <210> 6 <211> 1437 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 6 cccgctgaac ttaagcatat caataagcgg aggaaaagaa accaacaggg attgccccag 60 taacggcgag tgaagcggca acagctcaaa tttgaaatct ggcccccccg cgggcccgag 120 ttgtaatttg cagaggatgc ttttggcgcg gcgccttccg agtgccctgg aacgggacgc 180 catagagggt gagagccccg tctggtcgga cgcccagcct ctgtaaagct ccttcgacga 240 gtcgagtagt ttgggaatgc tgctctaaac gggaggtata tgtcttctaa agctaaatac 300 cggccagaga ccgatagcgc acaagtagag tgatcgaaag atgaaaagca ctttgaaaag 360 agggttaaac agtacgtgaa atcgttgaaa gggaagcgct tgtgaccaga ctcgggcgcg 420 gcgaatcacc cggcgttctc gccggtgcac ttcgacgcgc ccgggccagc atcagctcgc 480 cgcgggggac aaaggcgccg ggaacgtggc tccccaggga gtgttatagc ccggcgcgca 540 acgccccgcg gcggactgag gttcgcgcgt ccgcaaggat gctggcgtaa tggtcaccag 600 tgacccgtct tgaaacacgg accaaggagt cgtcctcgta tgcgagtgtt cgggtgtcaa 660 acccctacgc gcaatgaaag tgaacgcggg tgagagcctc gcggcgcatc atcgaccgat 720 cctgatgttc tcggatggat ttgagtagga gcatacgggg ccggacccga aagaaggtga 780 actatgcctg tgtagggtga agccagagga aactctggtg gaggctcgca gcggttctga 840 cgtgcaaatc gatcgtcaaa catgggcatg ggggcgaaag actaatcgaa ccttctagta 900 gctggtttcc gccgaagttt ccctcaggat agcagtgttg atctcagttt tatgaggtaa 960 agcgaatgat tagggacccg ggggcgctct tcagccttca tccattctca aactttaaat 1020 atgtaagaag cccttgttgc ttggttgaac gtgggcattc gaatgtatca acactagtgg 1080 gccatttttg gtaagcagaa ctggcgatgc gggatgaacc gaacgcgagg ttaaggtgcc 1140 ggagtggacg ctcatcagac accacaaaag gcgttagtac atcttgacag caggacggtg 1200 gccatggaag tcggaacccg ccaaggactg tgtaacaact cacctgccga atgtactagc 1260 cctgaaaatg gatggcgctc aagcgtccca cccatacctc gccctcaggg tagaagcgat 1320 gccctgagga gtaggcggac gtgggggtcc gtgacgaagc ccagggcgcg agcccgggtc 1380 gaacggcctc tagtgcagat cttggtggta gtagcaaata cttcaatgag aacttga 1437
【0083】 <210> 7 <211> 1766 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 7 ctggttgatc ctgccagtag tcatatgctt gtctcaaaga ttaagccatg catgtctaag 60 tataagcaat tatacagcga aactgcgaat ggctcattat ataagttatc gtttatttga 120 tagtacctta ctacttggat aaccgtggta attctagagc taatacatgc tgaaaatccc 180 gactccggaa gggatgtatt tattagattc aaagccaatg ccctccgggc tcactggtga 240 ttcatgataa ctcctcgaat cgcacggcct tgcgccggcg atggttcatt caaatttctt 300 ccctatcaac tttcgatgtt tgggtagtgg ccaaacatgg ttgcaacggg taacggaggg 360 ttagggctcg accccggaga aggagcctga gaaacggcta ctacatccaa ggaaggcagc 420 aggcgcgcaa attacccaat cccgacacgg ggaggtagtg acaataaata ctgatacagg 480 gctcttttgg gtcttgtaat tggaatgagt acaatttaaa tcccttaacg aggaacaatt 540 ggagggcaag tctggtgcca gcagccgcgg taattccagc tccaatagcg tatattaaag 600 ttgttgtggt taaaaagctc gtagttgaac cttgggcctg gctggccggt ccgcctcacc 660 gcgtgtactg gtccggccgg gcctttccct ctgtggaacc ccatgccctt cactgggcgt 720 ggcggggaaa caggactttt actttgaaaa aattagagtg ctccaggcag gcctatgctc 780 gaatacatta gcatggaata atgaaatagg acgcgcggtt ctattttgtt ggtttctagg 840 accgccgtaa tgattaatag ggacagtcgg gggcatcagt attcaatggt cagaggtgaa 900 attcttggat ccattgaaga ctaactactg cgaaagcatt tgtcaaggat gttttcatta 960 atcaggaacg aaagttaggg gatcgaagac gatcagatac cgtcgtagtc ttaaccataa 1020 actatgccga ctagggatcg gacgatgtta ttttttgact cgttcggcac cttacgagaa 1080 atcaaagtgc ttgggctcca gggggagtat ggtcgcaagg ctgaaactta aagaaattga 1140 cggaagggca ccaccagggg tggagcctgc ggcttaattt gactcaacac ggggaaactc 1200 accaggtcca gacacaatga ggattgacag attgagagct ctttcttgat tttgtgggtg 1260 gtggtgcatg gccgttctta gttggtggag tgatttgtct gcttaattgc gataacgaac 1320 gagaccttaa cctgctaaat agcccgtact gctccggcag tgcgccggct tcttagaggg 1380 actatcggct caagccgatg gaagtttgag gcaataacag gtctgtgatg cccttagatg 1440 ttctgggccg cacgcgcgct acactgacgg agccagcgag tcctcccttg gccggaaggc 1500 ccgggtaatc ttgttaaact tcgtcgtgct ggggatagag cattgcaatt attgctcttc 1560 aacgaggaat ccctagtaag cgcaagtcat cagcttgcgt tgactacgtc cctgcccttt 1620 gtacacaccg cccgtcgcta ctaccgattg aatggctcag tgaggcgtcc ggactggccc 1680 aggggggtgg gaaaccgccc cccagggccg ggaagctctc caaactcggt catttagagg 1740 aagtaaaagt cgtaacaagg ttccgt 1766
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【0088】 <210> 12 <211> 1437 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 12 cccgctgaac ttaagcatat caataagcgg aggaaaagaa accaacaggg attgccccag 60 taacggcgag tgaagcggca acagctcaaa tttgaaatct ggcccccccg cgggcccgag 120 ttgtaatttg cagaggatgc ttttggcgcg gcgccttccg agtgccctgg aacgggacgc 180 catagagggt gagagccccg tctggtcgga cgcccagcct ctgtaaagct ccttcgacga 240 gtcgagtagt ttgggaatgc tgctctaaac gggaggtata tgtcttctaa agctaaatac 300 cggccagaga ccgatagcgc acaagtagag tgatcgaaag atgaaaagca ctttgaaaag 360 agggttaaac agtacgtgaa attgttgaaa gggaagcgct tgtgaccaga ctcgggcgcg 420 gcgaatcacc cggcgttctc gccggtgcac ttcgacgcgc ccgggccagc atcagctcgc 480 cgcgggggac aaaggcgccg ggaacgtggc tccccaggga gtgttatagc ccggcgcgca 540 acgccccgcg gcggactgag gttcgcgcgt ccgcaaggat gctggcgtaa tggtcaccag 600 tgacccgtct tgaaacacgg accaaggagt cgtcctcgta tgcgagtgtt cgggtgtcaa 660 acccctacgc gcaatgaaag tgaacgcggg tgagagcctc gcggcgcatc atcgaccgat 720 cctgatgttc tcggatggat ttgagtagga gcatacgggg ccggacccga aagaaggtga 780 actatgcctg tgtagggtga agccagagga aactctggtg gaggctcgca gcggttctga 840 cgtgcaaatc gatcgtcaaa catgggcatg ggggcgaaag actaatcgaa ccttctagta 900 gctggtttcc gccgaagttt ccctcaggat agcagtgttg atctcagttt tatgaggtaa 960 agcgaatgat tagggacccg ggggcgctct tcagccttca tccattctca aactttaaat 1020 atgtaagaag cccttgttgc ttggttgaac gtgggcattc gaatgtatca acactagtgg 1080 gccatttttg gtaagcagaa ctggcgatgc gggatgaacc gaacgcgagg ttaaggtgcc 1140 ggagtggacg ctcatcagac accacaaaag gcgttagtac atcttgacag caggacggtg 1200 gccatggaag tcggaacccg ccaaggactg tgtaacaact cacctgccga atgtactagc 1260 cctgaaaatg gatggcgctc aagcgtccca cccatacctc gccctcaggg tagaagcgat 1320 gccctgagga gtaggcggac gtgggggtcc gtgacgaagc ccagggcgcg agcccgggtc 1380 gaacggcctc tagtgcagat cttggtggta gtagcaaata cttcaatgag aacttga 1437
【0089】 <210> 13 <211> 1766 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 13 ctggttgatc ctgccagtag tcatatgctt gtctcaaaga ttaagccatg catgtctaag 60 tataagcaat tatacagcga aactgcgaat ggctcattat ataagttatc gtttatttga 120 tagtacctta ctacttggat aaccgtggta attctagagc taatacatgc tgaaaatccc 180 gactccggaa gggatgtatt tattagattc aaagccaatg ccctccgggc tcactggtga 240 ttcatgataa ctcctcgaat cgcacggcct tgcgccggcg atggttcatt caaatttctt 300 ccctatcaac tttcgatgtt tgggtagtgg ccaaacatgg ttgcaacggg taacggaggg 360 ttagggctcg accccggaga aggagcctga gaaacggcta ctacatccaa ggaaggcagc 420 aggcgcgcaa attacccaat cccgacacgg ggaggtagtg acaataaata ctgatacagg 480 gctcttttgg gtcttgtaat tggaatgagt acaatttaaa tcccttaacg aggaacaatt 540 ggagggcaag tctggtgcca gcagccgcgg taattccagc tccaatagcg tatattaaag 600 ttgttgtggt taaaaagctc gtagttgaac cttgggcctg gctggccggt ccgcctcacc 660 gcgtgtactg gtccggccgg gcctttccct ctgtggaacc ccatgccctt cactgggcgt 720 ggcggggaaa caggactttt actttgaaaa aattagagtg ctccaggcag gcctatgctc 780 gaatacatta gcatggaata atgaaatagg acgcgcggtt ctattttgtt ggtttctagg 840 accgccgtaa tgattaatag ggacagtcgg gggcatcagt attcaatggt cagaggtgaa 900 attcttggat ccattgaaga ctaactactg cgaaagcatt tgtcaaggat gttttcatta 960 atcaggaacg aaagttaggg gatcgaagac gatcagatac cgtcgtagtc ttaaccataa1020 actatgccga ctagggatcg gacgatgtta ttttttgact cgttcggcac cttacgagaa 1080 atcaaagtgc ttgggctcca gggggagtat ggtcgcaagg ctgaaactta aagaaattga 1140 cggaagggca ccaccagggg tggagcctgc ggcttaattt gactcaacac ggggaaactc 1200 accaggtcca gacacaatga ggattgacag attgagagct ctttcttgat tttgtgggtg 1260 gtggtgcatg gccgttctta gttggtggag tgatttgtct gcttaattgc gataacgaac 1320 gagaccttaa cctgctaaat agcccgtact gctccggcag tgcgccggct tcttagaggg 1380 actatcggct caagccgatg gaagtttgag gcaataacag gtctgtgatg cccttagatg 1440 ttctgggccg cacgcgcgct acactgacgg agccagcgag tcctcccttg gccggaaggc 1500 ccgggtaatc ttgttaaact tcgtcgtgct ggggatagag cattgcaatt attgctcttc 1560 aacgaggaat ccctagtaag cgcaagtcat cagcttgcgt tgactacgtc cctgcccttt 1620 gtacacaccg cccgtcgcta ctaccgattg aatggctcag tgaggcgtcc ggactggccc 1680 aggggggtgg gaaaccgccc cccagggccg ggaagctctc caaactcggt catttagagg 1740 aagtaaaagt cgtaacaagg ttccgt 1766
【0090】 <210> 14 <211> 667 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 14 tagaggaagt aaaagtcgta acaaggtctc cgttggtgaa ccagcggagg gatcattatc 60 gagtcaccac tcccaaaccc cctgcgaaca ccacagcagt tgcctcggcg ggaccgcccc 120 ggcgccccag ggcccggacc agggcgcccg ccggaggacc cccagaccct cctgtcgcag 180 tggcatctct cagtcaagaa gcaagcaaat gaatcaaaac tttcaacaac ggatctcttg 240 gttctggcat cgatgaagaa cgcagcgaaa tgcgataagt aatgtgaatt gcagaattca 300 gtgaaccatc gaatctttga acgcacattg cgcccgccag cactctggcg ggcatgcctg 360 tccgagcgtc atctcaaccc tcgagccccc cgcctcgcgg cggcggggcc cggccttggg 420 ggtcacggcc ccgcgccgcc ccctaaacgc agtggcgacc ccgccgcggc tcccctgcgc 480 agtagctcgc tgagaacctc gcaccgggag cgcggaggcg gtcacgccgt gaaaccacca 540 caccctccag ttgacctcgg atcaggtagg gatacccgct gaacttaagc atatcaataa 600 gcggaggaaa agaaaccaac agggattgcc ccagtaacgg cgagtgaagc ggcaacagct 660 caaattt 667
【0091】 <210> 15 <211> 1437 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 15 cccgctgaac ttaagcatat caataagcgg aggaaaagaa accaacaggg attgccccag 60 taacggcgag tgaagcggca acagctcaaa tttgaaatct ggcccccccg cgggcccgag 120 ttgtaatttg cagaggatgc ttttggcgcg gcgccttccg agtgccctgg aacgggacgc 180 catagagggt gagagccccg tctggtcgga cgcccagcct ctgtaaagct ccttcgacga 240 gtcgagtagt ttgggaatgc tgctctaaac gggaggtata tgtcttctaa agctaaatac 300 cggccagaga ccgatagcgc acaagtagag tgatcgaaag atgaaaagca ctttgaaaag 360 agggttaaac agtacgtgaa attgttgaaa gggaagcgct tgtgaccaga ctcgggcgcg 420 gcgaatcacc cggcgttctc gccggtgcac ttcgacgcgc ccgggccagc atcagctcgc 480 cgcgggggac aaaggcgccg ggaacgtggc tccccaggga gtgttatagc ccggcgcgca 540 acgccccgcg gcggaccgag gttcgcgcgt ccgcaaggat gctggcgtaa tggtcaccag 600 tgacccgtct tgaaacacgg accaaggagt cgtcctcgta tgcgagtgtt cgggtgtcaa 660 acccctacgc gcaatgaaag tgaacgcggg tgagagcctc gcggcgcatc atcgaccgat 720 cctgatgttc tcggatggat ttgagtagga gcatacgggg ccggacccga aagaaggtga 780 actatgcctg tgtagggtga agccagagga aactctggtg gaggctcgca gcggttctga 840 cgtgcaaatc gatcgtcaaa catgggcatg ggggcgaaag actaatcgaa ccttctagta 900 gctggtttcc gccgaagttt ccctcaggat agcagtgttg atctcagttt tatgaggtaa 960 agcgaatgat tagggacccg ggggcgctct tcagccttca tccattctca aactttaaat 1020 atgtaagaag cccttgttgc ttggttgaac gtgggcattc gaatgtatca acactagtgg 1080 gccatttttg gtaagcagaa ctggcgatgc gggatgaacc gaacgcgagg ttaaggtgcc 1140 ggagtggacg ctcatcagac accacaaaag gcgttagtac atcttgacag caggacggtg 1200 gccatggaag tcggaacccg ccaaggactg tgtaacaact cacctgccga atgtactagc 1260 cctgaaaatg gatggcgctc aagcgtccca cccatacctc gccctcaggg tagaagcgat 1320 gccctgagga gtaggcggac gtgggggtcc gtgacgaagc ccagggcgcg agcccgggtc 1380 gaacggcctc tagtgcagat cttggtggta gtagcaaata cttcaatgag aacttga 1437
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【0098】 <210> 22 <211> 1766 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 22 ctggttgatc ctgccagtag tcatatgctt gtctcaaaga ttaagccatg catgtctaag 60 tataagcaat tatacagcga aactgcgaat ggctcattat ataagttatc gtttatttga 120 tagtacctta ctacttggat aaccgtggta attctagagc taatacatgc taaaaatccc 180 gacttcggaa gggatgtatt tattagatta aaaaccaatg ccctctgggc tctctggtga 240 ttcatgataa cttctcgaat cgcatggcct tgcgccggcg atggttcatt caaatttctt 300 ccctatcaac tttcgatgtt tgggtagtgg ccaaacatgg ttgcaacggg taacggaggg 360 ttagggctcg accccggaga aggagcctga gaaacggcta ctacatccaa ggaaggcagc 420 aggcgcgcaa attacccaat cccgacacgg ggaggtagtg acaataaata ctgatacagg 480 gctcttttgg gtcttgtaat tggaatgagt acaatttaaa tcccttaacg aggaacaatt 540 ggagggcaag tctggtgcca gcagccgcgg taattccagc tccaatagcg tatattaaag 600 ttgttgtngt taaaaagctc gtagttgaac cttgggcctg gctggccggt ccgcctcacc 660 gcgtgtactg gtccggccgg gcctttccct ctgtggaacc ccatgccctt cactgggtgt 720 ggcggggaaa caggactttt actttgaaaa aattagagtg ctccaggcag gcctatgctc 780 gaatacatta gcatggaata atgaaatagg acgtgcggtt ctattttgtt ggtttctagg 840 accgccgtaa tgattaatag ggacagtcgg gggcatcagt attcaattgt cagaggtgaa 900 attcttggat ttattgaaga ctaactactg cgaaagcatt tgccaaggat gttttcatta 960 atcaggaacg aaagttaggg gatcgaagac gatcagatac cgtcgtagtc ttaaccataa 1020 actatgccga ctagggatcg gacgatgtta ttttttgact cgttcggcac cttacgagaa 1080 atcaaagtgc ttgggctcca gggggagtat ggtcgcaagg ctgaaactta aagaaattga 1140 cggaagggca ccaccagggg tggagcctgc ggcttaattt gactcaacac ggggaaactc 1200 accaggtcca gacacaatga ggattgacag attgagagct ctttcttgat tttgtgggtg 1260 gtggtgcatg gccgttctta gttggtggag tgatttgtct gcttaattgc gataacgaac 1320 gagaccttaa cctgctaaat agcccgtatt gctttggcag tacgctggct tcttagaggg 1380 actatcggct caagccgatg gaagtttgag gcaataacag gtctgtgatg cccttagatg 1440 ttctgggccg cacgcgcgct acactgacgg agccagcgag tactcccttg gccggaaggc 1500 ccgggtaatc ttgttaaact ccgtcgtgct ggggatagag cattgcaatt attgctcttc 1560 aacgaggaat ccctagtaag cgcaagtcat cagcttgcgt tgattacgtc cctgcccttt 1620 gtacacaccg cccgtcgcta ctaccgattg aatggctcag tgaggcgtcc ggactggccc 1680 agagaggtgg gcaactacca ctcagggccg gaaagctctc caaactcggt catttagagg 1740 aagtaaaagt cgtaacaagg ttccgt 1766
【0099】 <210> 23 <211> 661 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 23 tagaggaagt aaaagtcgta acaaggtctc cgttggtgaa ccagcggagg gatcattacc 60 gagttatcaa ctcccaaacc cctgtgaaca tacccaacgt tgcttcggcg ggaccgcccc 120 ggcgcctcgg cgtcccggaa ccaggcgccc gccggaggac ccaaactctt gtttaaccat 180 agtggcatat tctgagtctc acaagaaaaa tgaatcaaaa ctttcaacaa cggatctctt 240 ggctctggca tcgatgaaga acgcagcgaa atgcgataag taatgtgaat tgcagaattc 300 agtgaatcat cgaatctttg aacgcacatt gcgcccgcca gtattctggc gggcatgcct 360 gttcgagcgt catttcaacc ctcaagcccc agcggcttgg tgttggggac cggccccggc 420 cgccccccaa atgcagtggc gacctcgccg cagcctcccc tgcgtagtag cacaactcgc 480 accggagcgc ggagacggtc acgccgtaaa acgcccaact tctcagagtt gacctcggat 540 caggtaggaa tacccgctga acttaagcat atcaataagc ggaggaaaag aaaccaacag 600 ggattgcccc agtaacggcg agtgaagcgg caacagctca aatttgaaat ctngcccccn 660 g 661
【0100】 <210> 24 <211> 1436 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 24 cccgctgaac ttaagcatat caataagcgg aggaaaagaa accaacaggg attgccccag 60 taacggcgag tgaagcggca acagctcaaa tttgaaatct ggcccccagg gcccgagttg 120 taatttgcag aggatgcttt tggcgcggcg ccttccgagt tccctggaac gggacgccat 180 agagggtgag agccccgtct ggtcggacgc caagccagtg taaagctcct tcgacgagtc 240 gagtagtttg ggaatgctgc tctaaatggg aggtatatgt cttctaaagc taaatatagg 300 ccagagaccg atagcgcaca agtagagtga tcgaaagatg aaaagcactt tgaaaagagg 360 gttaaacagt acgtgaaatt gttgaaaggg aagcacttgt gaccagactt gggcccggtg 420 aatcatccag cgttctcgct ggtgcacttc gccgggccca ggccagcatc agttcgccgc 480 gggggataaa agcttcggga acgtagctcc ctcgggagtg ttatagcccg ttgcataata 540 ccctgcggtg gactgaggtt cgcgctccgc aaggatgctg gcgtaatggt caccagtgac 600 ccgtcttgaa acacggacca aggagtcgtc ttcgtatgcg agtgttcggg tgtcaaaccc 660 ctacgcgtaa tgaaagtgaa cgcaggtgag agcttcggcg catcatcgac cgatcctgat 720 gttctcggat ggatttgagt aagagcatac ggggccggac ccgaaagaag gtgaactatg 780 cctgtatagg gtgaagccag aggaaactct ggtggaggct cgcagcggtt ctgacgtgca 840 aatcgatcgt caaatatggg catgggggcg aaagactaat cgaaccttct agtagctggt 900 ttccgccgaa gtttccctca ggatagcagt gttgaactca gttttatgag gtaaagcgaa 960 tgattaggga cccgggggcg ctctttagcc ttcatccatt ctcaaacttt aaatatgtaa 1020 gaagcccttg ttgcttaatt gaacgtgggc attcgaatgt atcaacacta gtgggccatt 1080 tttggtaagc agaactggcg atgcgggatg aaccgaacgc gaggttaagg tgccagagta 1140 gacgctcatc agacaccaca aaaggcgtta gtacatcttg acagcaggac ggtggccatg 1200 gaagtcggaa tccgctaagg actgtgtaac aactcacctg ccgaatgtac tagccctgaa 1260 aatggatggc gctcaagcgt ctcacccata cctcgccctc agggtagaaa cgaagccctg 1320 aggagtaggc ggacgtggag gtcgtgacga agcctagggc gtgagcccgg gtcgaacggc 1380 ctctagtgca gatcttggtg gtagtagcaa atacttcaat gagaacttga agganc 1436
【0101】 <210> 25 <211> 1766 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 25 ctggttgatc ctgccagtag tcatatgctt gtctcaaaga ttaagccatg catgtctaag 60 tataagcaat tatacagcga aactgcgaat ggctcattat ataagttatc gtttatttga 120 tagtacctta ctacttggat aaccgtggta attctagagc taatacatgc taaaaatccc 180 gacttcggaa gggatgtatt tattagatta aaaaccaatg cccttcgggg ctcactggtg 240 attcatgata actcctcgaa tcgcatggcc ttgtgccggc gatggttcat tcaaatttct 300 tccctatcaa ctttcgatgt ttgggtattg gccaaacatg gttgcaacgg gtaacggagg 360 gttagggctc gaccccggag aaggagcctg agaaacggct actacatcca aggaaggcag 420 caggcgcgca aattacccaa tcccgacacg gggaggtagt gacaataaat actgatacag 480 ggctcttttg ggtcttgtaa ttggaatgag tacaatttaa atcccttaac gaggaacaat 540 tggagggcaa gtctggtgcc agcagccgcg gtaattccag ctccaatagc gtatattaaa 600 gttgttgtgg ttaaaaagct cgtagttgaa ccttgggcct ggctggccgg tccgcctcac 660 cgcgtgtact ggtccggccg ggcctttccc tctgtggaac cccatgccct tcactgggtg 720 tggcggggaa acaggacttt tactgtgaaa aaattagagt gctccaggca ggcctatgct 780 cgaatacatt agcatggaat aatagaatag gacgtgtggt tctattttgt tggtttctag 840 gaccgccgta atgattaata gggacagtcg ggggcatcag tattcaattg tcagaggtga 900 aattcttgga tttattgaag actaactact gcgaaagcat ttgccaagga tgttttcatt 960 aatcaggaac gaaagttagg ggatcgaaga cgatcagata ccgtcgtagt cttaaccata 1020 aactatgccg actagggatc ggacggtgtt attttttgac ccgttcggca ccttacgaga 1080 aatcaaagtg cttgggctcc agggggagta tggtcgcaag gctgaaactt aaagaaattg 1140 acggaagggc accaccaggg gtggagcctg cggcttaatt tgactcaaca cggggaaact 1200 caccaggtcc agacacaatg aggattgaca gattgagagc tctttcttga ttttgtgggt 1260 ggtggtgcat ggccgttctt agttggtgga gtgatttgtc tgcttaattg cgataacgaa 1320 cgagacctta acctgctaaa tagcccgtat tgctttggca gtacgctggc ttcttagagg 1380 gactatcggc tcaagccgat ggaagtttga ggcaataaca ggtctgtgat gcccttagat 1440 gttctgggcc gcacgcgcgc tacactgacg gagccagcga gtacttcctt gtccgaaagg 1500 tccgggtaat cttgttaaac tccgtcgtgc tggggataga gcattgcaat tattgctctt 1560 caacgaggaa tccctagtaa gcgcaagtca tcagcttgcg ttgattacgt ccctgccctt 1620 tgtacacacc gcccgtcgct actaccgatt gaatggctca gtgaggcgtc cggactggcc 1680 cagagaggtg ggcaactacc actcagggcc ggaaagctct ccaaactcgg tcatttagag 1740 gaagtaaaag tcgtaacaag gtcgtt 1766
【0102】 <210> 26 <211> 659 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 26 tagaggaagt aaaagtcgta acaaggtctc cgttggtgaa ccagcggagg gatcattacc 60 gagtttacaa ctcccaaacc cctgtgaaca taccttaatg ttgcctcggc ggatcagccc 120 gcgccccgta aaacgggacg gcccgccaga ggacccaaac tctaatgttt cttattgtaa 180 cttctgagta aaacaaacaa ataaatcaaa actttcaaca acggatctct tggttctggc 240 atcgatgaag aacgcagcaa aatgcgataa gtaatgtgaa ttgcagaatt cagtgaatca 300 tcgaatcttt gaacgcacat tgcgcccgct ggtattccgg cgggcatgcc tgttcgagcg 360 tcatttcaac cctcaagccc ccgggtttgg tgttggggat cggctctgcc tcacggcggt 420 gccgcccccg aaatacattg gcggtctcgc tgcagcctcc attgcgtagt agctaacacc 480 tcgcaactgg aacgcggcgc ggccatgccg taaaacccca acttctgaat gttgacctcg 540 gatcaggtag gaatacccgc tgaacttaag catatcaata agcggaggaa aagaaaccaa 600 cagggattgc cctagtaacg gcgagtgaag cggcaacagc tcaaatttga aatctgctt 659
【0103】 <210> 27 <211> 1436 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 27 cccgctgaac ttaagcatat caataagcgg aggaaaagaa accaacaggg attgccctag 60 taacggcgag tgaagcggca acagctcaaa tttgaaatct ggctttcggg cccgagttgt 120 aatttgtaga ggatactttt gatgcggtgc cttccgagtt ccctggaacg ggacgccata 180 gagggtgaga gccccgtctg gttggatgcc aaatctctgt aaagttcctt cgacgagtcg 240 agtagtttgg gaatgctgct ctaaatggga ggtatatgtc ttctaaagct aaatattggc 300 cagagaccga tagcgcacaa gtagagtgat cgaaagatga aaagcacttt gaaaagagag 360 ttaaaaagta cgtgaaattg ttgaaaggga agcgtttatg accagacttg gacttggtta 420 atcatctggg gttctcccca gtgcactttt ccagttcagg ccagcatcag ttttcgccgg 480 gggataaagg cagtgggaat gtagctctct tcggggagtg ttatagccca ttgtgtaata 540 ccctggtgga gactgaggtt cgcgcttctg caaggatgct ggcgtaatgg tcatcaacga 600 cccgtcttga aacacggacc aaggagtcgt cttcgtatgc gagtgttcgg gtgtcaaacc 660 cctacgcgta atgaaagtga acgcaggtga gagcttcggc gcatcatcga ccgatcctga 720 tgttctcgga tggatttgag taagagcata cggggccgga cccgaaagaa ggtgaactat 780 gcctgtatag ggtgaagcca gaggaaactc tggtggaggc tcgcagcggt tctgacgtgc 840 aaatcgatcg tcaaatatgg gcatgggggc gaaagactaa tcgaaccttc tagtagctgg 900 tttccgccga agtttccctc aggatagcag tgttgaactc agttttatga ggtaaagcga 960 atgattaggg actcgggggc gctatattgc cttcatccat tctcaaactt taaatatgta 1020 agaagccctt gttgcttaat tgaacgtggg cattcgaatg tatcaacact agtgggccat 1080 ttttggtaag cagaactggc gatgcgggat gaaccgaacg cgaggttaag gtgccggagt 1140 ggacgctcat cagacaccac aaaaggtgtt agtacatctt gacagcagga cggtggccat 1200 ggaagtcgga atccgctaag gactgtgtaa caactcacct gccgaatgta ctagccctga 1260 aaatggatgg cgctcaagcg tctcacccat acctcgccct cagggtagaa acgatgccct 1320 gaggagtagg cggacgtgga ggtcagtgac gaagcctagg gcgtgagccc gggttgaacg 1380 gcctctagtg cagatcttgg tggtagtagc aaatacttca atgagaactt gaagga 1436
【0104】 <210> 28 <211> 1727 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 28 tcatatgctt gtctcaaaga ttaagccatg catgtctaag tataagcaat tatacagcga 60 aactgcgaat ggctcattat ataagttatc gtttatttga tagtacctta ctacttggat 120 aaccgtggta attctagagc taatacatgc tgaaaatccc gactccggaa gggatgtatt 180 tattagattc aaagccaatg ccctccgggc tcactggtga ttcatgataa ctcctcgaat 240 cgcacggcct tgcgccggcg atggttcatt caaatttctt ccctatcaac tttcgatgtt 300 tgggtagtgg ccaaacatgg ttgcaacggg taacggaggg ttagggctcg accccggaga 360 aggagcctga gaaacggcta ctacatccaa ggaaggcagc aggcgcgcaa attacccaat 420 cccgacacgg ggaggtagtg acaataaata ctgatacagg gctcttttgg gtcttgtaat 480 tggaatgagt acaatttaaa tcccttaacg aggaacaatt ggagggcaag tctggtgcca 540 gcagccgcgg taattccagc tccaatagcg tatattaaag ttgttgtggt taaaaagctc 600 gtagttgaac cttgggcctg gctggccggt ccgcctcacc gcgtgtactg gtccggccgg 660 gcctttccct ctgtggaacc ccatgccctt cactgggcgt ggcggggaaa caggactttt 720 actttgaaaa aattagagtg ctccaggcag gcctatgctc gaatacatta gcatggaata 780 atgaaatagg acgcgcggtt ctattttgtt ggtttctagg accgccgtaa tgattaatag 840 ggacagtcgg gggcatcagt attcaatggt cagaggtgaa attcttggat ccattgaaga 900 ctaactactg cgaaagcatt tgtcaaggat gttttcatta atcaggaacg aaagttaggg 960 gatcgaagac gatcagatac cgtcgtagtc ttaaccataa actatgccga ctagggatcg 1020 gacgatgtta ttttttgact cgttcggcac cttacgagaa atcaaagtgc ttgggctcca 1080 gggggagtat ggtcgcaagg ctgaaactta aagaaattga cggaagggca ccaccagggg 1140 tggagcctgc ggcttaattt gactcaacac ggggaaactc accaggtcca gacacaatga 120 0 ggattgacag attgagagct ctttcttgat tttgtgggtg gtggtgcatg gccgttctta 12 60 gttggtggag tgatttgtct gcttaattgc gataacgaac gagaccttaa cctgctaaat 1 320 agcccgtact gctccggcag tgcgccggct tcttagaggg actatcggct caagccgatg 1380 gaagtttgag gcaataacag gtctgtgatg cccttagatg ttctgggccg cacgcgcgct 1440 acactgacgg agccagcgag tcctcccttg gccggaaggc ccgggtaatc ttgttaaac t 1500 tcgtcgtgct ggggatagag cattgcaatt attgctcttc aacgaggaat ccctagta ag 1560 cgcaagtcat cagcttgcgt tgactacgtc cctgcccttt gtacacaccg cccgtcg cta 1620 ctaccgattg aatggctcag tgaggcgtcc ggactggccc aggggggtgg gaaacc gccc 1680 cccagggccg ggaagctctc caaactcggt catttagagg aagtaaa 1727
【0105】 <210> 29 <211> 686 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 29 taaaggaagt aaaagtcgta ataaggtctc cgttagtaaa ctagcggagg gattattatc 60 g agttactac tcttaaaccc cctataaata ctatagcagt tgccttagcg ggaccgccct 120 a gcgccctaa ggcccggact aaagcgcccg ccggaggacc cttagaccct cctattatag 180 t agtatctct tagttaagaa gcaagcaaat aaattaaaac ttttaacaac ggatctctta 240 g ttctagcat taataaaaaa cgcagcgaaa tgcaataagt aatataaatt acagaattta 300 g taaactatc gaatctttaa acgcatatta cgcccgctag cactctagcg ggcatgccta 360 tccgagcgtt atcttaaccc tcgagccccc cgcctcgcgg cggcggggct cggccttagg 420 ggttacggcc ccgcgccgcc ccttaaacgt agtagcgacc ccgccgcggc tcccctacgt 480 ggtagctcac cgagaacctc gcaccggaag cgcggaggcg gtcacgccgt aaaaccacta 540 cgccttttag ttaacctcgg attaggtagg gatacccgct aaacttaagc atattaataa 600 gcggaggaaa agaaactaat agggattgcc ttagtaacgg cgagtaaagc ggtaatagct 660 taaatttaaa atctagcccc cctacg 686
【0106】 <210> 30 <211> 1404 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 30 catatcaata agcggaggaa aagaaaccaa cagggattgc cccagtaacg gcgagtgaag 60 cggcaacagc tcaaatttga aatctggccc ccccgcgggc ccgagttgta atttgcagag 120 gatgcttttg gcgcggcgcc ttccgagtgc cctggaacgg gacgccatag agggtgagag 180 ccccgtctgg tcggacgccc agcctctgta aagctccttc gacgagtcga gtagtttggg 240 aatgctgctc taaacgggag gtatatgtct tctaaagcta aataccggcc agagaccgat 30 0 agcgcacaag tagagtgatc gaaagatgaa aagcactttg aaaagagggt taaacagtac 3 60 gtgaaattgt tgaaagggaa gcgcttgtga ccagactcgg gcgcggcgaa tcacccggcg 420 ttctcgccgg tgcacttcga cgcgcccggg ccagcatcag ctcgccgcgg gggacaaagg 480 cgccgggaac gtggctcccc agggagtgtt atagcccggc gcgcaacgcc ccgcggcgga 540 ctgaggttcg cgcgtccgca aggatgctgg cgtaatggtc accagtgacc cgtcttgaa a 600 cacggaccaa ggagtcgtcc tcgtatgcga gtgttcgggt gtcaaacccc tacgcgca at 660 gaaagtgaac gcgggtgaga gcctcgcggc gcatcatcga ccgatcctga tgttctc gga 720 tggatttgag taggagcata cggggccgga cccgaaagaa ggtgaactat gcctgt gtag 780 ggtgaagcca gaggaaactc tggtggaggc tcgcagcggt tctgacgtgc aaatc gatcg 840 tcaaacatgg gcatgggggc gaaagactaa tcgaaccttc tagtagctgg tttc cgccga 900 agtttccctc aggatagcag tgttgatctc agttttatga ggtaaagcga atg attaggg 960 acccgggggc gctcttcagc cttcatccat tctcaaactt taaatatgta ag aagccctt 1020 gttgcttggt tgaacgtggg cattcgaatg tatcaacact agtgggccat t tttggtaag 1080 cagaactggc gatgcgggat gaaccgaacg cgaggttaag gtgccggagt ggacgctcat 1140 cagacaccac aaaaggcgtt agtacatctt gacagcagga cggtggccat ggaagtcgga 1200 acccgccaag gactgtgtaa caactcacct gccgaatgta ctagccctg a aaatggatgg 1260 cgctcaagcg tcccacccat acctcgccct cagggtagaa gcgatgcc ct gaggagtagg 1320 cggacgtggg ggtccgtgac gaagcccagg gcgcgagccc gggtcga acg gcctctagtg 1380 cagatcttgg tggtagtagc aaat 1404
【0107】 <210> 31 <211> 685 <212> DNA <213> Cordyceps sinensis <400> 31 tagaggaagt aaaagtcgta ataaggtctc cgttagtaaa ctagcggagg gattattatc 60 gagttaccac tcctaaaccc cctgcgaata ctacagcagt tgcctcggcg ggaccgcccc 120 ggcgccctag ggcccggact agggcgcccg ccggaggacc cttagaccct cctattgtag 180 tagcatctct taattaagaa gcaagcaaat aaattaaaac ttttaataac ggatctctta 240 gttttagcat taataaagaa cgcagcgaaa tacgataagt aatgtaaatt gtagaattta 300 gtaaactatc gaatctttaa acgtatatta cgccgctagc actctagcgg gcatgcctgt 360 ccgagcgtta ccttaaccct taagcccccc gcctcgcggc ggcggggccc ggccttaggg 420 gtcacggccc cacgccgccc cctaaacgca gtagcgaccc cgccgcggct cccctacgca 480 atagcttact aagtacctcg cactaggagc gcggaggcgg tcacgccgta aaaccactat 540 accctctagt taacctcgga ttaggtaggg atacccgcta aacttaagca tattaataag 600 cggaggaaaa gaaactaata gggattgccc tagtaacggc gagtaaagcg gcaatagctt 660 aaatttgaaa tctagccccc ccgcg 685
【図面の簡単な説明】
【図1】図1は、リボソームRNA遺伝子におけるSS
領域とITS領域、及びLS領域の相対的位置を示す。
【図2】図2はITS領域のシーケンスプライマーの相
対的位置関係を示す。
【図3】図3はSS領域、LS領域、ITS領域を増幅
する、PCRの反応液条件を示す表である。
【図4】図4はSS領域とLS領域のシーケンスプライ
マーの相対的位置関係を示す。
【図5】図5はC.crassiporaとC.sin
ensis MarchのITS領域の相同性を示す。
【図6】図6はC.crassiporaとC.sin
ensis DerugeのITS領域塩基配列を制限
酵素で切断した場合の切断断片の長さを予測したもので
ある。
【図7】図7はC.crassiporaとC.sin
ensis Derugeを制限酵素で切断し、6%ア
クリルアミドゲル電気泳動によって検出したものであ
る。

Claims (43)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 配列表のID NO:1で示される、C
    ordycepscrassisporaのリボソーム
    RNA遺伝子の一部である塩基配列。
  2. 【請求項2】 配列表のID NO:2で示される、C
    ordycepscrassisporaのリボソーム
    RNA遺伝子の一部である塩基配列。
  3. 【請求項3】 配列表のID NO:3で示される、C
    ordycepscrassisporaのリボソーム
    RNA遺伝子の一部である塩基配列。
  4. 【請求項4】 配列表のID NO:4で示される、C
    ordycepssinensis March のリ
    ボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  5. 【請求項5】 配列表のID NO:5で示される、C
    ordycepssinensis March のリ
    ボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  6. 【請求項6】 配列表のID NO:6で示される、C
    ordycepssinensis March のリ
    ボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  7. 【請求項7】 配列表のID NO:7で示される、C
    ordycepssinensis Seisazan
    のリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  8. 【請求項8】 配列表のID NO:8で示される、C
    ordycepssinensis Seisazan
    のリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  9. 【請求項9】 配列表のID NO:9で示される、C
    ordycepssinensis Seisazan
    のリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  10. 【請求項10】 配列表のID NO:10で示され
    る、Cordyceps sinensis Deru
    geのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  11. 【請求項11】 配列表のID NO:11で示され
    る、Cordyceps sinensis Deru
    geのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  12. 【請求項12】 配列表のID NO:12で示され
    る、Cordyceps sinensis Deru
    geのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  13. 【請求項13】 配列表のID NO:13で示され
    る、Cordyceps sinensis Gyok
    ujuのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配
    列。
  14. 【請求項14】 配列表のID NO:14で示され
    る、Cordyceps sinensis Gyok
    ujuのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配
    列。
  15. 【請求項15】 配列表のID NO:15で示され
    る、Cordyceps sinensis Gyok
    ujuのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配
    列。
  16. 【請求項16】 配列表のID NO:16で示され
    る、Cordyceps sinensis Bing
    oのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  17. 【請求項17】 配列表のID NO:17で示され
    る、Cordyceps sinensis Bing
    oのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  18. 【請求項18】 配列表のID NO:18で示され
    る、Cordyceps sinensis Bing
    oのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  19. 【請求項19】 配列表のID NO:19で示され
    る、Cordyceps sinensis Roho
    のリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  20. 【請求項20】 配列表のID NO:20で示され
    る、Cordyceps sinensis Roho
    のリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  21. 【請求項21】 配列表のID NO21で示される、
    Cordycepssinensis Rohoのリボ
    ソームRNA遺伝子の一部である塩基配列。
  22. 【請求項22】 配列表のID NO:22で示され
    る、Cordyceps sinensis Yaku
    zanのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配
    列。
  23. 【請求項23】 配列表のID NO:23で示され
    る、Cordyceps sinensis Yaku
    zanのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配
    列。
  24. 【請求項24】 配列表のID NO:24で示され
    る、Cordyceps sinensis Yaku
    zanのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配
    列。
  25. 【請求項25】 配列表のID NO:25で示され
    る、Cordyceps sinensis Gyok
    uryusetuzanのリボソームRNA遺伝子の一
    部である塩基配列。
  26. 【請求項26】 配列表のID NO:26で示され
    る、Cordyceps sinensis Gyok
    uryusetuzanのリボソームRNA遺伝子の一
    部である塩基配列。
  27. 【請求項27】 配列表のID NO:27で示され
    る、Cordyceps sinensis Gyok
    uryusetuzanのリボソームRNA遺伝子の一
    部である塩基配列。
  28. 【請求項28】 配列表のID NO:28で示され
    る、Cordyceps sinensis Nyar
    amuのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配
    列。
  29. 【請求項29】 配列表のID NO:29で示され
    る、Cordyceps sinensis Nyar
    amuのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配
    列。
  30. 【請求項30】 配列表のID NO:30で示され
    る、Cordyceps sinensis Nyar
    amuのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配
    列。
  31. 【請求項31】 配列表のID NO:31で示され
    る、Cordyceps sinensis Rusy
    asyaのリボソームRNA遺伝子の一部である塩基配
    列。
  32. 【請求項32】 配列表のID NO:1から31で示
    される塩基配列において、1もしくは複数の塩基配列が
    付加、欠失もしくは置換されていることを特徴とする、
    請求項1から請求項31のいずれかの塩基配列。
  33. 【請求項33】 配列表のID NO:1からNO:3
    1で示される塩基配列または配列表のID NO:1か
    らNO:31で示される塩基配列の相補的配列のうち、
    連続する15ないし40塩基からなる塩基配列を有する
    オリゴヌクレオチドを含む、塩基配列決定用のプライマ
    ー。
  34. 【請求項34】 配列表のID NO:1からNO:3
    1で示される塩基配列または配列表のID NO:1か
    らNO:31で示される塩基配列の相補的配列のうち、
    連続する15ないし40塩基からなる塩基配列を有する
    オリゴヌクレオチドを含む、DNA増幅用のプライマ
    ー。
  35. 【請求項35】 上記塩基配列決定用またはDNA増幅用
    のプライマーが、配列表のID NO:2の塩基番号5
    7から193及び351から538、ID NO:5の
    塩基番号57から217及び374から550、ID
    NO:8の塩基番号57から216及び374から55
    0、NO:11の塩基番号57から216及び374か
    ら550、NO:14の塩基番号57から216及び3
    74から550、ID NO:17の塩基番号57から
    216及び374から550、ID NO:20の塩基
    番号57から216及び374から550、ID N
    O:23の塩基番号57から216及び375から53
    8、ID NO:26の塩基番号57から207及び3
    72から531、ID NO:29の塩基番号57から
    217及び374から550、ID NO:31の塩基
    番号57から216及び372から549で示される塩
    基配列またはその相補的配列のうち、連続する15ない
    し40塩基からなる塩基配列を有するオリゴヌクレオチ
    ドを含む、請求項33または請求項34のいずれかに記
    載のプライマー。
  36. 【請求項36】 冬虫夏草の分類において、冬虫夏草の
    リボソームRNA遺伝子のSS領域の3'側1.4Kb
    pからITS領域、及びLS領域5'側1.7Kbpに
    いたる領域の塩基配列の全部または一部を、上記請求項
    1から請求項31に記載の塩基配列と比較し、その異同
    により分類することを特徴とする、冬虫夏草の分類方
    法。
  37. 【請求項37】 上記分類方法において、上記比較が、
    上記領域の塩基配列を決定し、その相同性の割合を測定
    して比較するものであることを特徴とする、請求項36
    に記載の方法。
  38. 【請求項38】 上記比較が、冬虫夏草のリボソームR
    NAのITS領域と、配列表のID NO:2、5、
    8、11、14、17、20、23、26、29、31
    のいずれかに記載の塩基配列との比較であることを特徴
    とする、請求項37に記載の方法。
  39. 【請求項39】 上記比較における塩基配列の決定にお
    いて、配列表のIDNO:1からNO:31で示される
    塩基配列または配列表のID NO:1からNO:31
    で示される塩基配列の相補的配列のうち、連続する15
    ないし40塩基からなる塩基配列を有するオリゴヌクレ
    オチドを、塩基配列決定のプライマーとして用いること
    を特徴とする、請求項37に記載の方法。
  40. 【請求項40】 上記塩基配列の決定におけるプライマ
    ーが、配列表のIDNO:2の塩基番号57から193
    及び351から538、ID NO:5の塩基番号57
    から217及び374から550、ID NO:8の塩
    基番号57から216及び374から550、NO:1
    1の塩基番号57から216及び374から550、N
    O:14の塩基番号57から216及び374から55
    0、ID NO:17の塩基番号57から216及び3
    74から550、ID NO:20の塩基番号57から
    216及び374から550、ID NO:23の塩基
    番号57から216及び375から538、ID N
    O:26の塩基番号57から207及び372から53
    1、ID NO:29の塩基番号57から217及び3
    74から550、ID NO:31の塩基番号57から
    216及び372から549で示される塩基配列または
    その相補的配列のうち、連続する15ないし40塩基か
    らなる塩基配列を有するオリゴヌクレオチドであること
    を特徴とする、請求項39に記載の方法。
  41. 【請求項41】 上記分類方法における上記比較が、配
    列表のID NO:1からNO:31で示される塩基配
    列または配列表のID NO:1からNO:31で示さ
    れる塩基配列の相補的配列のうち、連続する15ないし
    40塩基からなる塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
    をプライマーとして用いる、DNA増幅の過程を含むこ
    とを特徴とする、請求項36に記載の方法。
  42. 【請求項42】 上記DNA増幅のプライマーが、配列
    表のID NO:2、5、8、11、14、17、2
    0、23、26、29、31のいずれかに記載の塩基配
    列またはそれらの相補的配列のうち、連続する15ない
    し40塩基からなる塩基配列を有するオリゴヌクレオチ
    ドであることを特徴とする、請求項41に記載の方法。
  43. 【請求項43】 上記DNA増幅のプライマーが、配列
    表のID NO:2の塩基番号57から193及び35
    1から538、ID NO:5の塩基番号57から21
    7及び374から550、ID NO:8の塩基番号5
    7から216及び374から550、NO:11の塩基
    番号57から216及び374から550、NO:14
    の塩基番号57から216及び374から550、ID
    NO:17の塩基番号57から216及び374から
    550、ID NO:20の塩基番号57から216及
    び374から550、ID NO:23の塩基番号57
    から216及び375から538、ID NO:26の
    塩基番号57から207及び372から531、ID
    NO:29の塩基番号57から217及び374から5
    50、ID NO:31の塩基番号57から216及び
    372から549で示される塩基配列またはその相補的
    配列のうち、連続する15ないし40塩基からなる塩基
    配列を有するオリゴヌクレオチドであることを特徴とす
    る、請求項42に記載の方法。
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