JP2002159447A - 眼組織におけるキノロン系抗菌剤の定量法 - Google Patents
眼組織におけるキノロン系抗菌剤の定量法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 組織を傷つけることなく、投与されたキノロ
ン系抗菌剤の眼組織における濃度を定量測定する方法を
提供すること。 【解決手段】 キノロン系抗菌剤の眼組織における濃度
を定量測定する方法であって、被検眼に対して外部より
紫外域の励起光を照射し、投与されたキノロン系抗菌剤
が励起されて発する可視域の蛍光強度を測定し、その強
度から濃度を算出することを含む上記定量方法。
ン系抗菌剤の眼組織における濃度を定量測定する方法を
提供すること。 【解決手段】 キノロン系抗菌剤の眼組織における濃度
を定量測定する方法であって、被検眼に対して外部より
紫外域の励起光を照射し、投与されたキノロン系抗菌剤
が励起されて発する可視域の蛍光強度を測定し、その強
度から濃度を算出することを含む上記定量方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はレボフロキサシン、
オフロキサシン等のキノロン系抗菌剤の眼組織における
濃度を非侵襲的に定量する方法に関する。
オフロキサシン等のキノロン系抗菌剤の眼組織における
濃度を非侵襲的に定量する方法に関する。
【従来の技術】オフロキサシン等のキノロン系抗菌剤は
広い抗菌スペクトルを有する薬剤で、眼科領域において
も広く活用されている。キノロン系抗菌剤に紫外線の励
起光を当てると蛍光を発することが知られており、この
性質を利用して種々の生体組織中のキノロン系抗菌剤の
定量法も研究されている。しかし、これらの定量法とし
ては、生体組織を単離し、化学的処理をした後に測定す
る方法が一般的であり、生体組織中のキノロン系抗菌剤
の濃度を、生体組織を単離せずに直接定量する方法はほ
とんど知られておらず、特に眼組織中の濃度を直接定量
する方法について全く知られていない。
広い抗菌スペクトルを有する薬剤で、眼科領域において
も広く活用されている。キノロン系抗菌剤に紫外線の励
起光を当てると蛍光を発することが知られており、この
性質を利用して種々の生体組織中のキノロン系抗菌剤の
定量法も研究されている。しかし、これらの定量法とし
ては、生体組織を単離し、化学的処理をした後に測定す
る方法が一般的であり、生体組織中のキノロン系抗菌剤
の濃度を、生体組織を単離せずに直接定量する方法はほ
とんど知られておらず、特に眼組織中の濃度を直接定量
する方法について全く知られていない。
【０００２】一方、眼組織の機能、特に角膜上皮のバリ
アー機能を測定する方法として、フルオロセインを用い
る方法（フルオロフォトメトリー）が実際に使用されて
いる。この方法は、フルオロセインを点眼投与した後、
励起光を当て一定時間後、励起される蛍光強度を測定
し、フルオロセインの濃度減少速度を測ることにより角
膜上皮のバリアー機能を測定する方法である。このフル
オロフォトメトリーの為の装置として、ハロゲンランプ
を光源として用い、エキサイターフィルターによって波
長４６０−５２０ｎｍの励起光とし、励起される蛍光を
バリアフィルターにより５２０−６２０ｎｍのバンド幅
として測定できる装置が報告されている（日本眼科学会
雑誌、９８巻、６４１−６４７頁）。
アー機能を測定する方法として、フルオロセインを用い
る方法（フルオロフォトメトリー）が実際に使用されて
いる。この方法は、フルオロセインを点眼投与した後、
励起光を当て一定時間後、励起される蛍光強度を測定
し、フルオロセインの濃度減少速度を測ることにより角
膜上皮のバリアー機能を測定する方法である。このフル
オロフォトメトリーの為の装置として、ハロゲンランプ
を光源として用い、エキサイターフィルターによって波
長４６０−５２０ｎｍの励起光とし、励起される蛍光を
バリアフィルターにより５２０−６２０ｎｍのバンド幅
として測定できる装置が報告されている（日本眼科学会
雑誌、９８巻、６４１−６４７頁）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】抗菌剤はターゲット組
織にどれだけの濃度で存在するかによって効果を発揮す
るか否かが決まってくる。その効果発現濃度は、菌の最
小発育阻止濃度（ＭＩＣ）で一般的に表され、抗菌剤と
しての効果が発現するためにはターゲット組織において
ＭＩＣ以上の濃度で存在することが必要となる。そこ
で、ターゲット組織における濃度測定が非常に重要とな
ってくる。動物を用いた実験では、組織を単離した後、
その組織中での濃度を測定することは容易であるが、ヒ
トの場合組織を単離することは対象となる組織によって
は非常に困難となってくる。血中濃度の測定等は患者か
ら採血することによって簡単に実施できるが、眼組織の
様に生体から切り放すことが実際上できない組織の場
合、薬物の組織内濃度を測定することは極めて困難とな
る。抗菌剤の様に組織内濃度と効果との相関が極めて高
い薬物において、組織を傷つけることなく、非侵襲的に
組織内濃度を測定する方法が見いだせれば、薬物の開発
研究ひいては実際の医療において大いに役立つものとな
り、このような方法の研究が望まれていた。従って、本
発明は、組織を傷つけることなく、投与されたキノロン
系抗菌剤の眼組織における濃度を定量測定する方法を提
供することを目的とする。
織にどれだけの濃度で存在するかによって効果を発揮す
るか否かが決まってくる。その効果発現濃度は、菌の最
小発育阻止濃度（ＭＩＣ）で一般的に表され、抗菌剤と
しての効果が発現するためにはターゲット組織において
ＭＩＣ以上の濃度で存在することが必要となる。そこ
で、ターゲット組織における濃度測定が非常に重要とな
ってくる。動物を用いた実験では、組織を単離した後、
その組織中での濃度を測定することは容易であるが、ヒ
トの場合組織を単離することは対象となる組織によって
は非常に困難となってくる。血中濃度の測定等は患者か
ら採血することによって簡単に実施できるが、眼組織の
様に生体から切り放すことが実際上できない組織の場
合、薬物の組織内濃度を測定することは極めて困難とな
る。抗菌剤の様に組織内濃度と効果との相関が極めて高
い薬物において、組織を傷つけることなく、非侵襲的に
組織内濃度を測定する方法が見いだせれば、薬物の開発
研究ひいては実際の医療において大いに役立つものとな
り、このような方法の研究が望まれていた。従って、本
発明は、組織を傷つけることなく、投与されたキノロン
系抗菌剤の眼組織における濃度を定量測定する方法を提
供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、紫外域の励起
光を照射すると、組織内にあるキノロン系抗菌剤が蛍光
を発し、その強度を測定すると上記課題を効率的に達成
できるとの知見に基づいてなされたのである。すなわ
ち、本発明は、キノロン系抗菌剤の眼組織における濃度
を定量測定する方法であって、被検眼に対して外部より
紫外域の励起光を照射し、投与されたキノロン系抗菌剤
が励起されて発する可視域の蛍光強度を測定し、その強
度から濃度を算出することを特徴とする上記定量方法を
提供する。本発明では、キノロン系抗菌剤の眼組織にお
ける濃度の定量装置であって、光源から発せられた光を
紫外域の励起光とする手段、その励起光を被検眼に照射
する手段、被検眼組織内のキノロン系抗菌剤が励起して
発する可視域の蛍光を収束する手段、収束した蛍光の蛍
光強度を測定する手段を有することを特徴とする上記定
量装置を用いるのが好ましい。
光を照射すると、組織内にあるキノロン系抗菌剤が蛍光
を発し、その強度を測定すると上記課題を効率的に達成
できるとの知見に基づいてなされたのである。すなわ
ち、本発明は、キノロン系抗菌剤の眼組織における濃度
を定量測定する方法であって、被検眼に対して外部より
紫外域の励起光を照射し、投与されたキノロン系抗菌剤
が励起されて発する可視域の蛍光強度を測定し、その強
度から濃度を算出することを特徴とする上記定量方法を
提供する。本発明では、キノロン系抗菌剤の眼組織にお
ける濃度の定量装置であって、光源から発せられた光を
紫外域の励起光とする手段、その励起光を被検眼に照射
する手段、被検眼組織内のキノロン系抗菌剤が励起して
発する可視域の蛍光を収束する手段、収束した蛍光の蛍
光強度を測定する手段を有することを特徴とする上記定
量装置を用いるのが好ましい。
【０００５】
【発明の実施の形態】キノロン系抗菌剤は紫外線照射に
よって蛍光を発するが、本発明はその性質を応用したも
のであって、キノロン系抗菌剤に広く応用できる。本発
明の方法によって検出できるキノロン系抗菌剤として
は、６−フルオロキノリン−４−オキソ−４Ｈ−１，４
−ジヒドロ−３−カルボン酸や９−フルオロ−２，３−
ジヒドロ−７−オキソ−７Ｈ−ピリド［１，２，３−ｄ
ｅ］［１，４］ベンゾオキサジン−６−カルボン酸の骨
格を有し、さらに種々の置換基を有するものを挙げるこ
とができる。これらの化合物は、例えば、特開昭５３−
１４１２８６号公報、特開昭５８−７４６６７号公報、
特開昭５９−６７２７９号公報、特開昭６０−６４９７
９号公報、特開昭６０−１７４７８６号公報、特開昭６
０−２２８４７９号公報、特開平２−２３１４７５号公
報、特開平３−９５１７６号公報、特開平７−３０９８
６４号公報等の他、内科［６２巻、１号、２８〜３３頁
（１９８８）］、ファルマシア［２５巻、５号、４３４
〜４４０頁］に開示されており、その製造もこれらの公
報中に開示された方法に準じて行うことができる。これ
らの中で、市販された薬剤としてはオフロキサシン（Ｏ
ＦＬＸ）の他、レボフロキサシン（ＬＶＦＸ：Ｓ（−）
−９−フルオロ−２，３−ジヒドロ−３−メチル−１０
−（４−メチル−１−ピペラジニル）−７−オキソ−７
Ｈ−ピリド［１，２，３−ｄｅ］［１，４］ベンゾオキ
サジン−６−カルボン酸ヘミハイドレート）、ノルフロ
キサシン（ＮＦＬＸ：１−エチル−６−フルオロ−１，
４−ジヒドロ−４−オキソ−７−（１−ピペラジニル）
−３−キノリンカルボン酸、シプロフロキサシン塩酸塩
（ＣＰＦＸ：１−シクロプロピル−６−フルオロ−１，
４−ジヒドロ−４−オキソ−７−（１−ピペラジニル）
−３−キノリンカルボン酸・塩酸塩、ロメフロキサシ
（ＬＦＬＸ：（±）−１−エチル−６，８−ジフルオロ
−１，４−ジヒドロ−７−（３−メチル−１−ピペラジ
ニル）−４−オキソ−３−キノリンカルボン酸・塩酸
塩）等がある。キノロン系抗菌剤の投与形態として点眼
投与の場合に本発明の方法は好適に用いられるが、経口
等の全身投与した場合にも用いることができる。測定は
キノロン系抗菌剤を投与後所望の時間に行えばよい。本
発明の測定方法は、光源から発せられた光を紫外域の励
起光とする手段、その励起光を被検眼に照射する手段、
被検眼組織内のキノロン系抗菌剤が励起して発する可視
域の蛍光を収束する手段、収束した蛍光の蛍光強度を測
定する手段を有するキノロン系抗菌剤の眼組織における
濃度の定量装置を用いることによって、効率的に測定す
ることができる。
よって蛍光を発するが、本発明はその性質を応用したも
のであって、キノロン系抗菌剤に広く応用できる。本発
明の方法によって検出できるキノロン系抗菌剤として
は、６−フルオロキノリン−４−オキソ−４Ｈ−１，４
−ジヒドロ−３−カルボン酸や９−フルオロ−２，３−
ジヒドロ−７−オキソ−７Ｈ−ピリド［１，２，３−ｄ
ｅ］［１，４］ベンゾオキサジン−６−カルボン酸の骨
格を有し、さらに種々の置換基を有するものを挙げるこ
とができる。これらの化合物は、例えば、特開昭５３−
１４１２８６号公報、特開昭５８−７４６６７号公報、
特開昭５９−６７２７９号公報、特開昭６０−６４９７
９号公報、特開昭６０−１７４７８６号公報、特開昭６
０−２２８４７９号公報、特開平２−２３１４７５号公
報、特開平３−９５１７６号公報、特開平７−３０９８
６４号公報等の他、内科［６２巻、１号、２８〜３３頁
（１９８８）］、ファルマシア［２５巻、５号、４３４
〜４４０頁］に開示されており、その製造もこれらの公
報中に開示された方法に準じて行うことができる。これ
らの中で、市販された薬剤としてはオフロキサシン（Ｏ
ＦＬＸ）の他、レボフロキサシン（ＬＶＦＸ：Ｓ（−）
−９−フルオロ−２，３−ジヒドロ−３−メチル−１０
−（４−メチル−１−ピペラジニル）−７−オキソ−７
Ｈ−ピリド［１，２，３−ｄｅ］［１，４］ベンゾオキ
サジン−６−カルボン酸ヘミハイドレート）、ノルフロ
キサシン（ＮＦＬＸ：１−エチル−６−フルオロ−１，
４−ジヒドロ−４−オキソ−７−（１−ピペラジニル）
−３−キノリンカルボン酸、シプロフロキサシン塩酸塩
（ＣＰＦＸ：１−シクロプロピル−６−フルオロ−１，
４−ジヒドロ−４−オキソ−７−（１−ピペラジニル）
−３−キノリンカルボン酸・塩酸塩、ロメフロキサシ
（ＬＦＬＸ：（±）−１−エチル−６，８−ジフルオロ
−１，４−ジヒドロ−７−（３−メチル−１−ピペラジ
ニル）−４−オキソ−３−キノリンカルボン酸・塩酸
塩）等がある。キノロン系抗菌剤の投与形態として点眼
投与の場合に本発明の方法は好適に用いられるが、経口
等の全身投与した場合にも用いることができる。測定は
キノロン系抗菌剤を投与後所望の時間に行えばよい。本
発明の測定方法は、光源から発せられた光を紫外域の励
起光とする手段、その励起光を被検眼に照射する手段、
被検眼組織内のキノロン系抗菌剤が励起して発する可視
域の蛍光を収束する手段、収束した蛍光の蛍光強度を測
定する手段を有するキノロン系抗菌剤の眼組織における
濃度の定量装置を用いることによって、効率的に測定す
ることができる。
【０００６】本発明で用いる定量装置を、図１を参照し
て説明する。図中、２０は光源から発せられた光を紫外
域の励起光とする手段であり、紫外線光源（好ましくは
水銀キセノンランプ）１から出射した光を石英ファイバ
ー２を通して、測定装置の照明光学系２１に導き、出射
光をレンズ３で収束した後、エキサイターフィルター４
を通し、２６０−３９０ｎｍの波長帯域の光とし、励起
光とする。尚、紫外光線を当てる被検眼の位置合わせの
ため、紫外光線と同軸の可視光線を透過させるアライン
メント用のフィルター１６を用いてもよい。図中、３０
は励起光を被検眼に照射する手段であり、励起光はスリ
ット５の開口部を通り、結像レンズ６によりスリット開
口の像を被検眼１５の角膜、前房水中等の測定部位に結
像させる。これにより、被検眼の測定部位のみを局所的
に照射することができ、測定部位に存在するキノロン系
抗菌剤が可視域の蛍光を発する。
て説明する。図中、２０は光源から発せられた光を紫外
域の励起光とする手段であり、紫外線光源（好ましくは
水銀キセノンランプ）１から出射した光を石英ファイバ
ー２を通して、測定装置の照明光学系２１に導き、出射
光をレンズ３で収束した後、エキサイターフィルター４
を通し、２６０−３９０ｎｍの波長帯域の光とし、励起
光とする。尚、紫外光線を当てる被検眼の位置合わせの
ため、紫外光線と同軸の可視光線を透過させるアライン
メント用のフィルター１６を用いてもよい。図中、３０
は励起光を被検眼に照射する手段であり、励起光はスリ
ット５の開口部を通り、結像レンズ６によりスリット開
口の像を被検眼１５の角膜、前房水中等の測定部位に結
像させる。これにより、被検眼の測定部位のみを局所的
に照射することができ、測定部位に存在するキノロン系
抗菌剤が可視域の蛍光を発する。
【０００７】図中、４０は被検眼組織内のキノロン系抗
菌剤が励起されて発する可視域の蛍光を収束する手段で
あり、収束用レンズ７を有し、さらにバリアフィルター
８及びマスク９を有するのがよい。バリアフィルターは
４３０−６３０ｎｍの可視域に透過波長の帯域を持つと
同時に励起光の波長２６０−３９０ｎｍは透過しない特
性をもつ様に設計されるのがよく、励起光の散乱光は、
蛍光強度を測定する手段に到達せず、キノロン系抗菌剤
の発する蛍光（４３０−６３０ｎｍ）のみが到達する。
マスク９は測定部位と光学的に共役関係にあり、マスク
の開口の大きさと観察光学系の調節により測定サイズが
決められる。
菌剤が励起されて発する可視域の蛍光を収束する手段で
あり、収束用レンズ７を有し、さらにバリアフィルター
８及びマスク９を有するのがよい。バリアフィルターは
４３０−６３０ｎｍの可視域に透過波長の帯域を持つと
同時に励起光の波長２６０−３９０ｎｍは透過しない特
性をもつ様に設計されるのがよく、励起光の散乱光は、
蛍光強度を測定する手段に到達せず、キノロン系抗菌剤
の発する蛍光（４３０−６３０ｎｍ）のみが到達する。
マスク９は測定部位と光学的に共役関係にあり、マスク
の開口の大きさと観察光学系の調節により測定サイズが
決められる。
【０００８】図中、５０は収束した蛍光の蛍光強度を測
定する手段であり、マスク９を通り光電子増倍管１０か
ら出た電気出力信号を増倍管１１で増幅し、コントロー
ル部１２で信号解析を行う。測定値はデイスプレー１３
またはプリンター１４に出力表示される。実際の定量に
際しては、予め一定濃度の標準液の蛍光強度を測定し検
量線を作成し、その検量線に基づいて計算する。尚、投
与前の眼組織の蛍光強度（バックグランド）を測定して
おき、抗菌剤投与後測定した蛍光強度よりバックグラン
ドを差し引いておくのがよい。
定する手段であり、マスク９を通り光電子増倍管１０か
ら出た電気出力信号を増倍管１１で増幅し、コントロー
ル部１２で信号解析を行う。測定値はデイスプレー１３
またはプリンター１４に出力表示される。実際の定量に
際しては、予め一定濃度の標準液の蛍光強度を測定し検
量線を作成し、その検量線に基づいて計算する。尚、投
与前の眼組織の蛍光強度（バックグランド）を測定して
おき、抗菌剤投与後測定した蛍光強度よりバックグラン
ドを差し引いておくのがよい。
【０００９】本発明の方法は、眼組織に障害を与えるこ
となく、キノロン系抗菌剤の眼組織内濃度を定量的に測
定することを可能にするものであり、繰り返し測定可能
であるから、薬物投与後所望の時間に測定することがで
きる。励起光としては紫外域のものを用いれば良いが、
波長が短すぎると眼組織に障害を与える可能性もあり、
より好適な波長についても研究した結果、２６０−３９
０ｎｍ程度の波長が好ましいことも見いだした。また、
測定する蛍光として可視域のものを用いれば良いが、よ
り好適な波長についても研究した結果、４３０−６３０
ｎｍ程度の波長が好ましいことも見いだした。本発明で
は、これらの励起光および蛍光の好ましい波長の領域に
厳密に限定されるものではなく、ある程度の幅をもって
解釈されるものである。尚、励起光および測定する蛍光
の波長は、使用するキノロン系抗菌剤の種類に応じて適
宜選択することができる。また、励起光の照射時間は0.
２秒程度の瞬間的なものでよい。
となく、キノロン系抗菌剤の眼組織内濃度を定量的に測
定することを可能にするものであり、繰り返し測定可能
であるから、薬物投与後所望の時間に測定することがで
きる。励起光としては紫外域のものを用いれば良いが、
波長が短すぎると眼組織に障害を与える可能性もあり、
より好適な波長についても研究した結果、２６０−３９
０ｎｍ程度の波長が好ましいことも見いだした。また、
測定する蛍光として可視域のものを用いれば良いが、よ
り好適な波長についても研究した結果、４３０−６３０
ｎｍ程度の波長が好ましいことも見いだした。本発明で
は、これらの励起光および蛍光の好ましい波長の領域に
厳密に限定されるものではなく、ある程度の幅をもって
解釈されるものである。尚、励起光および測定する蛍光
の波長は、使用するキノロン系抗菌剤の種類に応じて適
宜選択することができる。また、励起光の照射時間は0.
２秒程度の瞬間的なものでよい。
【００１０】本発明の方法は、角膜または房水中の濃度
の定量に特に適しており、角膜内濃度の定量測定には測
定角（入射する励起光と測定する蛍光の角度）が３０
°、房水の定量には測定角が９０°が適していることを
併せて見いだした。本発明の方法は眼組織中のキノロン
系抗菌剤の濃度を正しく測定できる方法であることは、
ウサギを用いた実験で明らかにされた。このウサギを用
いた実験を実施例で詳細に説明する。
の定量に特に適しており、角膜内濃度の定量測定には測
定角（入射する励起光と測定する蛍光の角度）が３０
°、房水の定量には測定角が９０°が適していることを
併せて見いだした。本発明の方法は眼組織中のキノロン
系抗菌剤の濃度を正しく測定できる方法であることは、
ウサギを用いた実験で明らかにされた。このウサギを用
いた実験を実施例で詳細に説明する。
【００１１】
【実施例】実施例１ キノロン系抗菌剤の代表例としてレボフロキサシンを用
い、ウサギに点眼した後、経時的に眼組織中の濃度を定
量した。定量法として、本発明の方法と従来の高速液体
クロマト法とを用い、両者の定量値を比較検討した。本発明の方法（ＦＰＭ）による定量 １）検量線の作成 レボフロキサシンを０、0.０５、0.１、0.２５、１、2.
５、１０又は２０μg／ml含有する水溶液を調製し、励
起光（２６０−３９０ｎｍ）を当て発する蛍光（４３０
−６３０ｎｍ）強度を測定した。測定は励起光と蛍光の
角度を３０°および９０°に設定して行った。測定した
蛍光強度に基づき検量線を作成した。
い、ウサギに点眼した後、経時的に眼組織中の濃度を定
量した。定量法として、本発明の方法と従来の高速液体
クロマト法とを用い、両者の定量値を比較検討した。本発明の方法（ＦＰＭ）による定量 １）検量線の作成 レボフロキサシンを０、0.０５、0.１、0.２５、１、2.
５、１０又は２０μg／ml含有する水溶液を調製し、励
起光（２６０−３９０ｎｍ）を当て発する蛍光（４３０
−６３０ｎｍ）強度を測定した。測定は励起光と蛍光の
角度を３０°および９０°に設定して行った。測定した
蛍光強度に基づき検量線を作成した。
【００１２】２）測定装置 図１に示した装置を用いた。図中、２０は光源から発せ
られた光を紫外域の励起光とする手段であり、水銀キセ
ノンランプ１から出射した光を石英ファイバー２を通し
て、測定装置の照明光学系に導き、出射光をレンズ３で
収束した後、エキサイターフィルター４を通し、２６０
−３９０ｎｍの波長帯域の光とし、励起光とする。３０
は励起光を被検眼に照射する手段であり、励起光はスリ
ット５の開口部を通り、結像レンズ６によりスリット開
口の像を被検眼の測定部位に結像させる。４０は被検眼
組織内のキノロン系抗菌剤が励起されて発する可視域の
蛍光を収束する手段であり、収束用レンズ７、バリアフ
ィルター８及びマスク９を有し、バリアフィルター８は
４３０−６３０ｎｍの可視域に透過波長の帯域を持つと
同時に励起光の波長２６０−３９０ｎｍは透過しない特
性をもつ様に設計されている。５０は収束した蛍光の蛍
光強度を測定する手段であり、マスク９を通り光電子増
倍管１０から出た電気出力信号を増倍管１１で増幅し、
コントロール部１２で信号解析を行う。測定値はデイス
プレー１３またはプリンター１４に出力表示される。
られた光を紫外域の励起光とする手段であり、水銀キセ
ノンランプ１から出射した光を石英ファイバー２を通し
て、測定装置の照明光学系に導き、出射光をレンズ３で
収束した後、エキサイターフィルター４を通し、２６０
−３９０ｎｍの波長帯域の光とし、励起光とする。３０
は励起光を被検眼に照射する手段であり、励起光はスリ
ット５の開口部を通り、結像レンズ６によりスリット開
口の像を被検眼の測定部位に結像させる。４０は被検眼
組織内のキノロン系抗菌剤が励起されて発する可視域の
蛍光を収束する手段であり、収束用レンズ７、バリアフ
ィルター８及びマスク９を有し、バリアフィルター８は
４３０−６３０ｎｍの可視域に透過波長の帯域を持つと
同時に励起光の波長２６０−３９０ｎｍは透過しない特
性をもつ様に設計されている。５０は収束した蛍光の蛍
光強度を測定する手段であり、マスク９を通り光電子増
倍管１０から出た電気出力信号を増倍管１１で増幅し、
コントロール部１２で信号解析を行う。測定値はデイス
プレー１３またはプリンター１４に出力表示される。
【００１３】３）レボフロキサシン点眼後の眼組織内濃
度の測定 0.５％レボフロキサシン点眼液５０μl を雄性 Dutch種
ウサギの両眼にそれぞれ点眼し、点眼後５、１５、３０
分、１、２、４および６時間後に図１に示す装置を用い
て、角膜および房水中の蛍光強度を測定した。角膜の場
合には励起光と蛍光の角度を３０°にし、房水の場合は
９０°に設定して行った。得られた蛍光強度を１）で作
成した検量線に基づき換算して濃度を求めた。尚、点眼
直前の角膜および房水中の蛍光を測定しておき（バック
グランド）、点眼後の蛍光強度から差し引いた。
度の測定 0.５％レボフロキサシン点眼液５０μl を雄性 Dutch種
ウサギの両眼にそれぞれ点眼し、点眼後５、１５、３０
分、１、２、４および６時間後に図１に示す装置を用い
て、角膜および房水中の蛍光強度を測定した。角膜の場
合には励起光と蛍光の角度を３０°にし、房水の場合は
９０°に設定して行った。得られた蛍光強度を１）で作
成した検量線に基づき換算して濃度を求めた。尚、点眼
直前の角膜および房水中の蛍光を測定しておき（バック
グランド）、点眼後の蛍光強度から差し引いた。
【００１４】高速液体クロマト法（ＨＰＬＣ）による定
量 0.５％レボフロキサシン点眼液（レボフロキサシンを生
理食塩水に0.５％の濃度で溶解し調製、以下同じ）５０
μl を雄性 Dutch種ウサギの両眼にそれぞれ点眼し、点
眼後５、１５、３０分、１、２、４および６時間後にネ
ンブタール投与により安楽死させた後、両眼球を摘出
し、房水と角膜を採取した。採取したサンプルを次の様
に処理した後、ＨＰＬＣにて測定した。 （処理方法）採取した角膜はメタノールでホモジナイズ
し遠心分離した後の上清をサンプルとし、房水について
は採取したものをそのままサンプルとした。これらのサ
ンプルにリン酸緩衝液（pH7.０）を加えクロロホルムで
抽出した。有機層を減圧下乾固後、ＨＰＬＣ移動相（１
０mMリン酸カリウム緩衝液（pH3.０／アセトニトリル
（８５／１５））に溶解し、ＨＰＬＣ（カラム：ＴＳＫ
ｇｅｌ ＯＤＳ−８０Ｔｓ）に注入した。検出には蛍光
検出器をもちいた（励起波長２９４ｎｍ、蛍光波長５１
０ｎｍ）。
量 0.５％レボフロキサシン点眼液（レボフロキサシンを生
理食塩水に0.５％の濃度で溶解し調製、以下同じ）５０
μl を雄性 Dutch種ウサギの両眼にそれぞれ点眼し、点
眼後５、１５、３０分、１、２、４および６時間後にネ
ンブタール投与により安楽死させた後、両眼球を摘出
し、房水と角膜を採取した。採取したサンプルを次の様
に処理した後、ＨＰＬＣにて測定した。 （処理方法）採取した角膜はメタノールでホモジナイズ
し遠心分離した後の上清をサンプルとし、房水について
は採取したものをそのままサンプルとした。これらのサ
ンプルにリン酸緩衝液（pH7.０）を加えクロロホルムで
抽出した。有機層を減圧下乾固後、ＨＰＬＣ移動相（１
０mMリン酸カリウム緩衝液（pH3.０／アセトニトリル
（８５／１５））に溶解し、ＨＰＬＣ（カラム：ＴＳＫ
ｇｅｌ ＯＤＳ−８０Ｔｓ）に注入した。検出には蛍光
検出器をもちいた（励起波長２９４ｎｍ、蛍光波長５１
０ｎｍ）。
【００１５】結果 本発明のＦＰＭ法と従来のＨＰＬＣ法で定量した結果を
図２および３に示す。房水中の濃度は両法でほぼ一致し
た。角膜での濃度はＦＰＭ法では全体的に低かった。こ
れは検量線に用いた標準液と角膜の屈折率の違いに起因
するものと推定されるが、一定の定数（1.７）を掛けて
補正すれば、角膜においてもＦＰＭ法とＨＰＬＣ法での
定量値はほぼ一致することがわかる（図４参照）。上記
の結果は、本発明の方法によると角膜および房水中のレ
ボフロキサシンの濃度を正しく定量できることを示して
いる。
図２および３に示す。房水中の濃度は両法でほぼ一致し
た。角膜での濃度はＦＰＭ法では全体的に低かった。こ
れは検量線に用いた標準液と角膜の屈折率の違いに起因
するものと推定されるが、一定の定数（1.７）を掛けて
補正すれば、角膜においてもＦＰＭ法とＨＰＬＣ法での
定量値はほぼ一致することがわかる（図４参照）。上記
の結果は、本発明の方法によると角膜および房水中のレ
ボフロキサシンの濃度を正しく定量できることを示して
いる。
【００１６】参考例１ ２６０−３９０ｎｍの励起光（紫外線）の照射が眼組織
に影響を与えるか否かについて、照射後の眼組織（角
膜、虹彩、水晶体、網膜）の変化を顕微鏡を用いて調べ
た。その結果２６０−３９０ｎｍの励起光（紫外線）は
眼組織に影響を与えないことがわかった。また、網膜電
位に対する影響も調べたが、異常は見られなかった。
に影響を与えるか否かについて、照射後の眼組織（角
膜、虹彩、水晶体、網膜）の変化を顕微鏡を用いて調べ
た。その結果２６０−３９０ｎｍの励起光（紫外線）は
眼組織に影響を与えないことがわかった。また、網膜電
位に対する影響も調べたが、異常は見られなかった。
【図１】本発明で用いる定量装置の概略を示す。
【図２】本発明の定量方法（ＦＰＭ法）を用いた場合及
び従来方法（ＨＰＬＣ法）を用いた場合の房水中のレボ
フロキサシン濃度を示す。
び従来方法（ＨＰＬＣ法）を用いた場合の房水中のレボ
フロキサシン濃度を示す。
【図３】本発明の定量方法（ＦＰＭ法）を用いた場合及
び従来方法（ＨＰＬＣ法）を用いた場合の角膜中のレボ
フロキサシン濃度を示す。
び従来方法（ＨＰＬＣ法）を用いた場合の角膜中のレボ
フロキサシン濃度を示す。
【図４】図３における本発明の定量方法（ＦＰＭ法）を
用いた場合の角膜中のレボフロキサシン濃度に定数（1.
７）を掛けて補正した値を従来方法（ＨＰＬＣ法）を用
いた場合の角膜中のレボフロキサシン濃度とともに示
す。 図中、１は光源、３はレンズ、４はフィルター、６は結
像レンズ、７は収束用レンズ、８はフィルター、１０は
光電子増倍管、１１は増倍管、２０は光源から発せられ
た光を紫外域の励起光とする手段、３０は励起光を被検
眼に照射する手段、４０は被検眼組織内のキノロン系抗
菌剤が励起されて発する可視域の蛍光を収束する手段、
５０は収束した蛍光の蛍光強度を測定する手段、であ
る。
用いた場合の角膜中のレボフロキサシン濃度に定数（1.
７）を掛けて補正した値を従来方法（ＨＰＬＣ法）を用
いた場合の角膜中のレボフロキサシン濃度とともに示
す。 図中、１は光源、３はレンズ、４はフィルター、６は結
像レンズ、７は収束用レンズ、８はフィルター、１０は
光電子増倍管、１１は増倍管、２０は光源から発せられ
た光を紫外域の励起光とする手段、３０は励起光を被検
眼に照射する手段、４０は被検眼組織内のキノロン系抗
菌剤が励起されて発する可視域の蛍光を収束する手段、
５０は収束した蛍光の蛍光強度を測定する手段、であ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 太田 淳稔 奈良県生駒市高山町8916番−16 参天製薬 株式会社研究所内 (72)発明者 池井 辰夫 奈良県生駒市高山町8916番−16 参天製薬 株式会社研究所内 (72)発明者 鈴木 孝佳 静岡県浜松市新都田１丁目３番１号 興和 株式会社浜松工場内 Ｆターム(参考） 2G043 AA01 BA14 EA01 HA05 HA15 JA02 KA02 KA03 KA05 MA01 NA11
Claims (5)
- 【請求項１】 キノロン系抗菌剤の眼組織における濃度
を定量測定する方法であって、被検眼に対して外部より
紫外域の励起光を照射し、投与されたキノロン系抗菌剤
が励起されて発する可視域の蛍光強度を測定し、その強
度から濃度を算出することを特徴とする上記定量方法。 - 【請求項２】 キノロン系抗菌剤がレボフロキサシンま
たはオフロキサシンである請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 照射する励起光の波長が２６０−３９０
ｎｍで、蛍光波長が４３０−６３０ｎｍである請求項１
記載の方法。 - 【請求項４】 眼組織が角膜または房水である請求項１
記載の方法。 - 【請求項５】 レボフロキサシンまたはオフロキサシン
の眼組織における濃度を定量する方法であって、被検眼
に対して外部より２６０−３９０ｎｍの励起光を照射
し、投与されたレボフロキサシンまたはオフロキサシン
が励起されて発する４３０−６３０ｎｍの蛍光強度を測
定し、その強度から濃度を算出することを特徴とする上
記定量方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001347622A JP2002159447A (ja) | 2001-11-13 | 2001-11-13 | 眼組織におけるキノロン系抗菌剤の定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001347622A JP2002159447A (ja) | 2001-11-13 | 2001-11-13 | 眼組織におけるキノロン系抗菌剤の定量法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP06333197A Division JP3290914B2 (ja) | 1997-03-17 | 1997-03-17 | 眼組織におけるキノロン系抗菌剤の定量装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002159447A true JP2002159447A (ja) | 2002-06-04 |
Family
ID=19160599
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001347622A Pending JP2002159447A (ja) | 2001-11-13 | 2001-11-13 | 眼組織におけるキノロン系抗菌剤の定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002159447A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008508526A (ja) * | 2004-07-29 | 2008-03-21 | イーストマン ケミカル カンパニー | 蛍光に基づく装置を用いた微生物の検出 |
| JP2009159837A (ja) * | 2007-12-28 | 2009-07-23 | Technical Research & Development Institute Ministry Of Defence | 多剤耐性緑膿菌の単離方法及び多剤耐性緑膿菌選択培地 |
| WO2018092973A1 (ko) * | 2016-11-15 | 2018-05-24 | 포항공과대학교 산학협력단 | 다광자 특성을 이용한 안과용 진단 및 치료장치 |
-
2001
- 2001-11-13 JP JP2001347622A patent/JP2002159447A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008508526A (ja) * | 2004-07-29 | 2008-03-21 | イーストマン ケミカル カンパニー | 蛍光に基づく装置を用いた微生物の検出 |
| US8535937B2 (en) | 2004-07-29 | 2013-09-17 | Neogen Corporation | Detection of microorganisms with a fluorescence-based device |
| US9207180B2 (en) | 2004-07-29 | 2015-12-08 | Neogen Corporation | Detection of microorganisms with a fluorescence-based device |
| JP2009159837A (ja) * | 2007-12-28 | 2009-07-23 | Technical Research & Development Institute Ministry Of Defence | 多剤耐性緑膿菌の単離方法及び多剤耐性緑膿菌選択培地 |
| JP4696251B2 (ja) * | 2007-12-28 | 2011-06-08 | 防衛省技術研究本部長 | 多剤耐性緑膿菌の単離方法並びに多剤耐性緑膿菌選択培地の作成方法 |
| WO2018092973A1 (ko) * | 2016-11-15 | 2018-05-24 | 포항공과대학교 산학협력단 | 다광자 특성을 이용한 안과용 진단 및 치료장치 |
| KR20180054319A (ko) * | 2016-11-15 | 2018-05-24 | 포항공과대학교 산학협력단 | 다광자 특성을 이용한 안과용 진단 및 치료장치 |
| KR101894150B1 (ko) * | 2016-11-15 | 2018-08-31 | 포항공과대학교 산학협력단 | 다광자 특성을 이용한 안과용 진단 및 치료장치 |
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| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20040203 |
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| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070213 |
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| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20070611 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20070710 |