JP2002101885A - マダイイリドウイルスのウイルス中和・感染防御関連タンパク質をコードするdna - Google Patents

マダイイリドウイルスのウイルス中和・感染防御関連タンパク質をコードするdna

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JP2002101885A
JP2002101885A JP2000294991A JP2000294991A JP2002101885A JP 2002101885 A JP2002101885 A JP 2002101885A JP 2000294991 A JP2000294991 A JP 2000294991A JP 2000294991 A JP2000294991 A JP 2000294991A JP 2002101885 A JP2002101885 A JP 2002101885A
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pro
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thr
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JP2000294991A
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Jun Kurita
潤 栗田
Kazuhiro Nakajima
員洋 中島
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NATIONAL RESEARCH INSTITUTE OF AQUACULTURE
Original Assignee
NAT RES INST OF AQUACULTURE
NATIONAL RESEARCH INSTITUTE OF AQUACULTURE
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 マダイイリドウイルスの感染防御抗原として
有用なタンパク質をコードするDNAの提供。 【解決手段】 マダイイリドウイルスのウイルス中和・
感染防御関連タンパク質をコードするDNA。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、マダイイリドウイ
ルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク質を
コードするDNAに関する。
【0002】
【従来の技術】マダイイリドウイルスは多種類の海産養
殖魚に感染し、毎年10億円もの経済的被害をもたらす
重大な疾病、マダイイリドウイルス病の原因ウイルスで
ある。現在のところ、本疾病に対しては、培養ウイルス
をホルマリンで不活性化した有効な不活化ワクチンが開
発されている。しかしながら、ホルマリン不活化ワクチ
ンの作製にはウイルス培養のための細胞培養に不可欠な
ウシ胎児血清、細胞培養液等の高価な材料が必要であ
り、これがワクチン価格を押し上げて普及に支障を及ぼ
すという問題が生じている。
【0003】こうした問題の解決法として、ワクチンの
有効成分(すなわち、感染防御抗原となるウイルスタン
パク質)を特定し、該タンパク質の遺伝子を単離し、該
遺伝子を発現ベクターに組み込んで、培養にコストのか
からない大腸菌、酵母等を用いて該タンパク質を量産さ
せたり、あるいは該遺伝子をバキュロウイルスに組み込
んでカイコ等の昆虫でタンパク質を量産させる等により
遺伝子組換えワクチンを製造する方法が考えられる。ま
た、前記遺伝子を真核生物用発現ベクターに組み込み、
直接DNAワクチンとして利用する方法も考えられる。
【0004】一方、マダイイリドウイルスの物理的性状
については既に明らかにされており、該ウイルスが有機
溶剤感受性であることがわかっている(Nakajima およ
び Sorimachi, Fish Pathology 29, 29-33,1994)。こ
のことから、該ウイルスの感染にはウイルスの脂質膜に
組み込まれた膜タンパク質が必要であることが推察さ
れ、従ってこの膜タンパク質がウイルス中和や感染防御
に関与すると考えられる。また、マダイイリドウイルス
の精製ウイルス粒子に対するポリクローナル抗体には僅
かながらウイルス中和能が認められることから、該ウイ
ルスの構造タンパク質中に中和に関与するタンパク質が
存在することも明らかにされている。こうしたウイルス
中和に関連するタンパク質は感染防御抗原として極めて
重要な候補であるものの、マダイイリドウイルスではこ
うしたタンパク質は未だ特定されておらず、その遺伝子
も同定されていない。そのため、マダイイリドウイルス
病に対する、上記したような遺伝子組換えワクチンやD
NAワクチンの開発は為されていない。
【0005】また一方で、ワクチニアウイルスなどで
は、ウイルスの増殖に必須ではない遺伝子の一部(チミ
ジンキナーゼ遺伝子など)を人為的に壊すことによっ
て、病原性の弱い弱毒ウイルスの作出が可能となってい
る。このような弱毒ウイルスは生ワクチンとして期待で
きるほか、壊した遺伝子部分に外来遺伝子を組み込むこ
とにより、他の疾病に対するワクチンを兼ねた多価生ワ
クチンとしても期待できる。しかし、マダイイリドウイ
ルスにおいてはこのような目的のターゲットとなるチミ
ジンキナーゼ等の遺伝子も同定されていない。
【0006】
【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明は、マ
ダイイリドウイルスの感染防御抗原として有用なタンパ
ク質をコードするDNAを提供することを目的とする。
【0007】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究を重ねた結果、マダイイリド
ウイルスゲノムDNAの全塩基配列(112414 bp)を決定
し、該配列についてオープンリーディングフレーム(OR
F)解析およびホモロジー解析およびアミノ酸の機能部位
の探索等を行うことにより、マダイイリドウイルスのウ
イルス中和・感染防御関連タンパク質および該タンパク
質をコードするDNAを特定するに到った。この知見に
基づいて本発明は完成されたものである。
【0008】(1) すなわち本発明は、以下の(a)ま
たは(b)のタンパク質をコードするDNAである。 (a)配列番号3で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号3で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。
【0009】(2) また本発明は、以下の(a)または
(b)のタンパク質をコードするDNAである。 (a)配列番号5で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号5で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。
【0010】(3) さらに本発明は、以下の(a)また
は(b)のタンパク質をコードするDNAである。 (a)配列番号7で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号7で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。
【0011】(4) また本発明は、以下の(a)または
(b)のタンパク質をコードするDNAである。 (a)配列番号9で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号9で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。
【0012】(5) さらに本発明は、以下の(a)また
は(b)のタンパク質をコードするDNAである。 (a)配列番号11で表されるアミノ酸配列からなるタ
ンパク質、(b)配列番号11で表されるアミノ酸配列
において1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もし
くは付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリ
ドウイルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパ
ク質。
【0013】また、本発明には、以下の発明も包含され
る。すなわち、 (6) さらに本発明は、以下の(a)または(b)のタ
ンパク質である。 (a)配列番号3で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号3で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。
【0014】(7) また本発明は、以下の(a)または
(b)のタンパク質である。 (a)配列番号5で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号5で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。
【0015】(8) また本発明は、以下の(a)または
(b)のタンパク質である。 (a)配列番号7で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号7で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。
【0016】(9) さらに本発明は、以下の(a)また
は(b)のタンパク質である。 (a)配列番号9で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号9で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。
【0017】(10) また本発明は、以下の(a)または
(b)のタンパク質である。 (a)配列番号11で表されるアミノ酸配列からなるタ
ンパク質、(b)配列番号11で表されるアミノ酸配列
において1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もし
くは付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリ
ドウイルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパ
ク質。
【0018】(11) また本発明は、(1)〜(5)のいずれか
のDNAを含む組換えベクターである。
【0019】(12) さらに本発明は、(11)の組換えベク
ターを有効成分として含有するDNAワクチンである。
【0020】(13) 本発明は、(11)の組換えベクターに
よって形質転換された形質転換体である。
【0021】(14) また本発明は、(13)の形質転換体を
培地中に培養し、または飼育し、得られる培養物や個体
から、(6)〜(10)のいずれかのタンパク質を採取するこ
とを特徴とする、該タンパク質の製造方法である。
【0022】(15) さらに本発明は、(6)〜(10)のいず
れかのタンパク質を有効成分として含有するワクチンで
ある。
【0023】
【発明の実施の形態】以下に本発明を詳細に説明する。
本発明のタンパク質は、以下の(a)または(b)のタ
ンパク質であることを特徴とする。 (a)配列番号3で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号3で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。また、本発明のDNAは、上記タンパク質をコード
することを特徴とする。本発明のDNAの具体的な例と
しては、配列番号2で表される塩基配列を含むDNAが
挙げられる。
【0024】本発明のタンパク質は、以下の(a)また
は(b)のタンパク質であることを特徴とする。 (a)配列番号5で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号5で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。また、本発明のDNAは、上記タンパク質をコード
することを特徴とする。本発明のDNAの具体的な例と
しては、配列番号4で表される塩基配列を含むDNAが
挙げられる。
【0025】本発明のタンパク質は、以下の(a)また
は(b)のタンパク質であることを特徴とする。 (a)配列番号7で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号7で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。また、本発明のDNAは、上記タンパク質をコード
することを特徴とする。本発明のDNAの具体的な例と
しては、配列番号6で表される塩基配列を含むDNAが
挙げられる。
【0026】本発明のタンパク質は、以下の(a)また
は(b)のタンパク質であることを特徴とする。 (a)配列番号9で表されるアミノ酸配列からなるタン
パク質、(b)配列番号9で表されるアミノ酸配列にお
いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
質。また、本発明のDNAは、上記タンパク質をコード
することを特徴とする。本発明のDNAの具体的な例と
しては、配列番号8で表される塩基配列を含むDNAが
挙げられる。
【0027】本発明のタンパク質は、以下の(a)また
は(b)のタンパク質であることを特徴とする。 (a)配列番号11で表されるアミノ酸配列からなるタ
ンパク質、(b)配列番号11で表されるアミノ酸配列
において1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もし
くは付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリ
ドウイルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパ
ク質。また、本発明のDNAは、上記タンパク質をコー
ドすることを特徴とする。本発明のDNAの具体的な例
としては、配列番号10で表される塩基配列を含むDN
Aが挙げられる。
【0028】上記アミノ酸配列における「アミノ酸の欠
失、置換もしくは付加」は、当業者に公知の手法(例え
ば、突然変異誘発法)や、マダイイリドウイルスEhime-1
株に対し、わずかに遺伝的変異を有するウイルスのゲノ
ムDNAもしくはcDNAからのPCR法等によるDN
A調製により、実施することができる。尚、通常は、こ
うした「アミノ酸の欠失、置換もしくは付加」は1もし
くは数個の範囲内である。
【0029】「ウイルス中和・感染防御に関連する」と
は、生体内においては本発明のタンパク質をワクチン等
の形態で対象生物に導入することにより、または真核生
物用発現ベクターに該タンパク質をコードする本発明の
DNAを組み込み、これを該生物組織に接種することに
よって遺伝子導入された該生物の体細胞内で該タンパク
質が発現されることにより、該生物におけるマダイイリ
ドウイルスに対する感染防御能に影響を及ぼすことを意
味する。また培養系においては、該ウイルスに対して感
受性を有する細胞が、本発明のタンパク質を含む培養液
中で培養することにより、該ウイルスに対する感受性に
影響を及ぼすこと、あるいは本発明のタンパク質に対す
る抗体が該ウイルスの感染性に影響を及ぼすこと等を意
味する。また、「ウイルス中和・感染防御に関連する」
かどうかは、例えば、生体内においては、本発明のタン
パク質を腹腔内接種、浸漬、スタンプ等によりマダイ等
の該ウイルス感受性魚に免疫後、あるいは本発明タンパ
ク質をコードするDNAを用いたDNAワクチンを筋肉
内接種や遺伝子銃による接種後、適当な免疫期間(例え
ば、10〜30日)をおいた後に、該ウイルスの接種による
攻撃試験を行うことにより確認することができる。また
培養系においては、培養液に本発明のタンパク質を加え
ることにより予め該ウイルスのレセプターをブロック
し、この状態で該ウイルスの接種試験を行うことや、本
発明のタンパク質を家兎等に免疫し作製した抗体による
該ウイルスの中和試験等によって確認することができる
が、これに限定されない。
【0030】本発明のDNAは、例えば、後述の本実施
例に記載したようにしてマダイイリドウイルスのゲノム
DNAを解析することにより得ることができる。また、
例えば配列番号2に示すように、既に配列が決定されて
いる本発明のDNAについては、後述の本実施例1に示
すようにしてマダイイリドウイルスのゲノムDNAライ
ブラリーを作製し、このライブラリーから、例えば配列
番号2で表される塩基配列の一部を有するDNA断片を
プローブとして用いるハイブリダイゼーション法や、上
記DNA断片をプライマーとして用いるPCR法によ
り、本発明のDNAを調製することができる。また、そ
の塩基配列を元に、当業者に公知の核酸化学合成法(例
えば、ホスファイト・トリエステル法(Hunkapiller,M.
ら、Nature, 310,105,1984)等に準じて本発明のDNA
を得ることもできるが、これらに限定されない。
【0031】得られた本発明のDNAの塩基配列は、当
業者に公知の手法、例えばMaxam Gilbert法(Maxam,A.M.
およびW.Gilbert,.Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 74,560,19
77等)やSanger法(Sanger,F.およびA.R.Coulson,J.Mol.B
iol., 94,441,1975、Sanger,F.およびNicklenおよびA.
R.Coulson., Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 74,5463,1977
等)により確認することができるが、これらに限定され
ない。
【0032】本発明の組換えベクターは、本発明のDN
Aを含むことを特徴とする。本発明の組換えベクター
は、例えば、適当なベクターに本発明のDNAを連結
(挿入)することにより得ることができる。本発明のDN
Aを挿入するためのベクターは、宿主中で複製可能なも
のであれば特に限定されるものではなく、例えば、プラ
スミドDNA、ファージDNA、AcMNPVなどのバキュロ
ウイルスDNA等が挙げられる。プラスミドDNAは、
大腸菌やアグロバクテリウムからアルカリ抽出法(Birnb
oim,H.C. & Doly,J.(1979)Nucleic acid Res 7: 1513)
またはその変法等により調製することができる。また、
市販のプラスミドとして、例えばpBluescript II SK+(S
tratagene社製)、pUC118(宝酒造社製)、pUC119 (宝酒
造社製)、pGEM-T (Promega 社製)等を用いてもよい。こ
れらのプラスミドは、アンピシリン耐性遺伝子、カナマ
イシン耐性遺伝子、クロラムフェニコール耐性遺伝子等
が含まれていることが好ましい。ファージDNAとして
は、例えば M13mp18、M13mp19等が挙げられるが、これ
に限定されない。また、バキュロウイルスDNAとして
は、例えばBac-N-Blue DNA(Invitrogen社)等が挙げられ
るが、これに限定されない。
【0033】ベクターに本発明のDNAを挿入するに
は、例えば、精製されたDNAを適当な制限酵素で切断
し、適当なベクターDNAの制限酵素部位またはマルチ
クローニングサイトに挿入してベクターに連結する方法
等を用いることができるが、これに限定されない。ま
た、本発明のDNAの機能が発揮されるようにベクター
に組み込まれることが必要であることから、本発明のベ
クターには、プロモーター、本発明のDNAのほか、タ
ーミネーター、リボソーム結合配列等を組み込んでもよ
い。さらに、本発明のベクターには、本発明のDNAに
他のタンパク質のコード配列を融合したものを挿入して
もよく、この場合に発現されるタンパク質は、本発明の
DNAがコードするタンパク質と他のタンパク質との融
合タンパク質となる。尚、塩基配列の融合は、当業者に
公知の任意の手法を用いて実施することができる。こう
した他のタンパク質としては、例えば、β-ガラクトシ
ダーゼ、グルタチオン-S−トランスフェラーゼ等が挙
げられるが、これに限定されない。
【0034】本発明のDNAワクチンは、上記本発明の
組換えベクターを有効成分として含有することを特徴と
する。本発明のDNAワクチンは、本発明の組換えベク
ターの他に、Tris、EDTA、無機塩類等の他の成分を含み
得るが、これらに限定されない。また、本発明のDNA
ワクチンは、当業者に公知の手法に従って、例えば、D
NAワクチン用として真核生物発現ベクターに本発明の
DNAを組み込んだプラスミドベクターを大腸菌に形質
転換し、これを大量培養後に菌体を破壊したのち、塩化
セシウム超遠心法などによってプラスミドを大量調製
し、TEなど適当なバッファーで透析することにより、調
製することができる。また、この際、本発明のDNA配
列にさらに他のタンパク質コード配列を融合したものを
ベクターに組み込んで、本発明のDNAワクチンを調製
してもよい。
【0035】本発明のDNAワクチンは、対象とする生
物(例えば、マダイ、ブリ、シマアジ等の海産養殖魚、
その他該ウイルスに感受性のある魚)に0.1 mL程度など
の量を筋肉内注射により、あるいは金コロイド等に調製
ベクターを付着させたものを高圧で発射する遺伝子銃を
用いて眼、表皮、筋肉等に接種する。これにより、本発
明のDNAワクチンを接種した生物にその後のマダイイ
リドウイルス感染に対する抵抗性を付与することができ
る。また、本発明のDNA配列と他のタンパク質コード
配列との融合配列を含むベクターをDNAワクチンとし
て用いることにより、ウイルス抵抗性付与と同時に、前
記他のタンパク質の発現による別の効果を得ることも可
能である。こうした別の効果としては、例えば、β-ガラ
クトシダーゼ等の分子量の大きなタンパク質との融合タ
ンパク質とすることによって、宿主の免疫系からの認識
されやすさを向上させる等の効果があるが、これらに限
定されない。
【0036】本発明の形質転換体は、本発明の組換えベ
クターを、目的とするDNAが発現し得るように宿主中
に導入することにより得ることができる。宿主として
は、本発明のDNAまたは本発明のDNAと他のタンパ
ク質コード配列との融合配列を発現できるものであれば
特に限定されるものではなく、例えば、大腸菌(Escheri
chia coli)、バチルス・ズブチリス(Bacillus subtili
s)等のエッシェリヒア属、バチルス属に属する細菌等の
原核生物細胞が挙げられる。また真核細胞生物として
は、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerev
isiae)等の酵母、COS細胞、CHO細胞等の動物細胞、およ
びBnN4細胞、Sf 21細胞等の昆虫細胞やカイコなどの虫
体が挙げられる。本発明の形質転換体に導入する本発明
の組換えベクターは、該宿主中で自律複製可能であると
同時に、プロモーター、リボゾーム結合配列、本発明の
DNA、転写終結配列により構成されていることが好ま
しい。また、プロモーターを制御する遺伝子が含まれて
いてもよく、任意で本発明のDNAに融合された他のタ
ンパク質コード配列が含まれていてもよい。
【0037】原核生物である細菌を宿主として用いる場
合は、発現ベクターとして例えばpAX4a+(Mo Bi Tec社)
ベクター、pBluescript IIベクター、 pETベクター(St
ratagene社製)等が用いられる。プロモーターとして
は、大腸菌等の細菌宿主中で発現できるものであれば限
定されないが、例えば、trpプロモーター、lacプロモー
ター、PLプロモーター、PRプロモーターなどの、大腸菌
やファージに由来するプロモーターを用いることができ
る。細菌への組換えベクターの導入方法は、細菌にDN
Aを導入する方法であれば特に限定されず、例えば、カ
ルシウムイオンを用いる方法(Proc.Natl.Acad.Sci.,US
A,69,2110-2114(1972))等が挙げられる。
【0038】真核生物のうち、酵母を宿主として用いる
場合には、発現ベクターとして、例えばpESP-1(Stratag
ene社)、YEp13、YEp24、YCp50等が用いられる。この場
合のプロモーターとしては、酵母中で発現できるもので
あれば特に限定されず、例えばgal1プロモーター、gal1
0プロモーター、熱ショックタンパク質プロモーター、M
Fα1プロモーター等が挙げられる。酵母への組換えベク
ターの導入方法としては、酵母にDNAを導入する方法
であれば特に限定されず、例えばエレクトロポレーショ
ン法(Methods. Enzymol., 194,182-187(1990))、スフェ
ロプラスト法(Proc. Natl.Acad.Sci.,USA,84,1929-1933
(1978)、酢酸リチウム法(J. Bacteriol.,153, 163-168
(1983))等が挙げられる。
【0039】真核生物のうち動物細胞を宿主として用い
る場合は、発現ベクターとして例えばpCI-neo(Promega
社)、pCDNAI/Amp(Invitrogen社)等が用いられる。この
場合、プロモーターとしてヒトサイトメガロウイルスの
初期遺伝子プロモーター等を用いてもよい。動物細胞へ
の組換えベクターの導入方法としては、例えばエレクト
ロポレーション法、リン酸カルシウム法、リポフェクシ
ョン法等が挙げられる。
【0040】真核生物のうち昆虫細胞あるいは虫体を宿
主として用いる場合には、発現ベクターとして例えばバ
キュロウイルスAcMNPVのゲノムDNA由来であるBac-N-Blu
e DNA(Invitrogen社)等が用いられる。この場合のプロ
モーターとしてはAcMNPVのポリヘドリンプロモーターが
用いられる。虫体への導入法は多くの場合組み換えウイ
ルスを虫体に感染させることによる。組換えウイルスの
作製法としては、Bac-N-Blue DNAの場合、まずpBlueBac
4.5(Invitrogen社)等のトランスファーベクターに目的
遺伝子を組み込んだ後、これとBac-N-Blue DNAとをBnN4
等の昆虫細胞に同時にトランスフェクションし、これに
よって相同組み替えをうながして組換えウイルスを生じ
させる方法等がある。
【0041】本発明のタンパク質は、前記形質転換体を
培地に培養または飼育し、その培養物もしくは虫体から
採取することにより得ることができる。本発明の形質転
換体を培地に培養する方法は、宿主の培養に用いられる
通常の方法に従って行われる。大腸菌や酵母菌等の微生
物を宿主として得られた形質転換体を培養する培地とし
ては、微生物が資化し得る炭素源、窒素源、無機塩類等
を含有し、形質転換体の培養効率的に行える培地であれ
ば、天然培地、合成培地のいずれを用いてもよい。
【0042】炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、スクロース、デンプン等の炭水化物、酢酸、プロピ
オン酸等の有機酸、エタノール、プロパノール等のアル
コール類が用いられる。窒素源としては、アンモニア、
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム等の無機酸もしくは有機酸のア
ンモニウム塩またはその他の含窒素化合物のほか、ペプ
トン、肉エキス、コーンスティープリカー等が用いられ
る。無機物としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二
カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩
化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭
酸カルシウム等が用いられる。
【0043】培養は、通常、振盪培養または通気攪拌培
養などの好気的条件下、28℃で48〜60時間行う。培養期
間中、pHは7.0〜7.5に保持する。pHの調整は、無機
または有機の酸、アルカリ溶液等を用いて行う。なお、
大腸菌を宿主として培養を行う場合は、大腸菌内にpACC
AR16ΔcrtXプラスミド(ファルネシル二リン酸からβ-
カロテンまでが生成できる、4つのエルビニア(Erwinia)
属に属する微生物由来の遺伝子を持つ)と共存させて培
養を行うことが好ましい。培養中は必要に応じてアンピ
シリンやテトラサイクリン等の抗生物質を培地に添加し
てもよい。
【0044】プロモーターとして誘導性のプロモーター
を用いた発現ベクターで形質転換した微生物を培養する
場合は、必要に応じてインデューサーを培地に添加して
もよい。例えば、Lacプロモーターを用いた発現ベクタ
ーで形質転換した微生物を培養するときにはイソプロピ
ル-β-D-チオガラクトピラノシド(IPTG)等を、trpプロ
モーターを用いた発現ベクターで形質転換した微生物を
培養するときにはインドールアクリル酸(IAA)等を培地
に添加してもよい。動物細胞を宿主として得られた形質
転換体を培養する培地としては、一般に使用されている
RPMI1640培地、DMEM培地またはこれらの培地に牛胎児血
清等を添加した培地等が用いられる。培養は、通常、5
%CO2存在下、37℃で1〜2日行う。培養中は必要に応
じてカナマイシン、ペニシリン等の抗生物質を培地に添
加してもよい。
【0045】培養後、本発明のタンパク質が菌体内また
は細胞内に生産される場合には、菌体または細胞を破砕
等することにより該タンパク質を採取する。また、本発
明のタンパク質が菌体外または細胞外に生産される場合
には培養液をそのまま使用するか、遠心分離等により菌
体または細胞を除去した後、タンパク質の単離精製に用
いられる一般的な生化学的方法、例えば硫酸アンモニウ
ム沈殿、ゲルクロマトグラフィー、イオン交換クロマト
グラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等を単
独でまたは適宜組み合わせて用いることにより、培養物
中から本発明のタンパク質を単離・精製することができ
る。最終的に得られたタンパク質が所望のタンパク質で
あることの確認は、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳
動等により行うことができる。
【0046】こうして得られる本発明のタンパク質は、
本発明のタンパク質単独であっても、他のタンパク質と
の融合タンパク質の形態をとるものであってもよく、こ
うした融合タンパク質は本発明のDNA以外に他のタン
パク質コード配列を更に含むベクターで形質転換した前
記形質転換体を用いることで得ることができる。
【0047】また、例えば配列番号3に示すように、一
旦そのアミノ酸配列が決定された本発明のタンパク質に
ついては、その配列を元に当業者に公知の手法、例え
ば、アミノ酸1つ1つを化学的に重合してタンパク質を
合成する方法(合成ペプチド法)に従って調製すること
ができるが、これに限定されない。
【0048】本発明のワクチンは、本発明のタンパク質
を有効成分として含有することを特徴とする。本発明の
ワクチンは、本発明のタンパク質の他に、例えば、発現
させた細胞本来のタンパク質やその他の成分、培養に用
いた培地の成分等の夾雑物、植物油やスクアレン等のア
ジュバンド、その他安定剤や鮮度保持剤等の他の成分を
含み得るが、これらに限定されない。また、本発明のワ
クチンは、当業者に公知の手法により、例えば、発現さ
せた菌体、細胞あるいは生体の超音波等による破砕、あ
るいは界面活性剤等による可溶化、場合によってはアフ
ィニティーカラム等による目的タンパク質の精製などの
のち、適当な添加物を加えるなどの方法に従って、調製
することができる。
【0049】本発明のワクチンは、本発明の組換えベク
ターをDNAワクチンとして用いる場合(前述)と同様
に、本発明のワクチンを対象とする生物(前述)に、本発
明のタンパク質を適切な濃度(例えば、10〜100 μg/m
L)で含有するワクチン液を、1尾あたり例えば0.05〜0.
2 mL/尾の容量で腹腔内あるいは筋肉内に接種する。ま
たはワクチン液に1時間等の適当な時間魚体を浸漬す
る。あるいはワクチン液を塗布した魚体に多短針をさす
ことによりスタンプする。これらにより、本発明のワク
チンを投与した生物にその後のマダイイリドウイルス感
染に対する抵抗性を付与することができる。
【0050】
【実施例】以下に実施例を示して本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。 〔実施例1〕 マダイイリドウイルス・ゲノムDNAの
全塩基配列の決定 まず最初に、愛媛県の養殖マダイから分離されたマダイ
イリドウイルス Ehime-1株のウイルス培養上清から、塩
化セシウム勾配を用いた超遠心法によりウイルス粒子を
回収し、TEバッファーで透析後、SDS-フェノール法によ
りゲノムDNAを抽出した。次に上記ゲノムDNAを制
限酵素Sph I, PstI, Sau3AI(宝酒造)を用いて各制限
酵素最適条件下において断片化し、プラスミドベクター
pGEM3zf(+)(Promega社)にライゲーションし、大腸菌
XL1 Blue MRF'に形質転換してゲノムライブラリーを作
製した。該ライブラリーにについてこれを構成する各ク
ローンからアルカリ-SDS法(Sambrookら, Molecular cl
onig: A laboratory manual, 2nd edn,1989)によりプ
ラスミドを抽出後、主にABI BigDye Primer Cycle Sequ
encingFS Ready Reaction Kit, ABI BigDye Terminator
Cycle Sequencing FS Ready Reaction Kit (Applied B
iosystems社)等を用いてサイクルシークエンスを行い、
主にABI Prism 377 自動蛍光シークエンサー(Applied
Biosystems社)を用いてランダムシークエンスを行っ
た。各DNA断片のうち大きなものはさらに適当な制限
酵素サイトによるサブクローニング、Kilo-Sequence用D
eletion kit(宝酒造)を用いた欠失変異体の作製、お
よびプライマーウォーキングを組み合わせて塩基配列を
決定した。各断片の重複関係は遺伝子解析ソフトGENETY
X-Mac (SDC software社)およびDNASIS-Mac(日立ソフト
ウエアエンジニアリング社)を用いた配列の重複関係
と、各断片から設計した外向きのプライマーによるPCR
とその産物のダイレクトシークエンスによる隣接断片の
把握により明らかにした。ライブラリーでカバーできて
いない一部配列はゲノムDNAを鋳型としたPCRとその
産物のダイレクトシークエンス、pT7 Blue (R)ベクター
(Novagen社)によるPCR産物のTAクローニング後による
塩基配列の決定により補充した。PCR は、耐熱酵素とし
てEX Taq (宝酒造)、サーマルサイクラーはTakara th
ermal cycler MP3000(宝酒造)を用いて、熱変性94
℃、アニーリング55℃、伸長反応72℃で、30サイクルの
条件下で行った。このようにして、遺伝子地図として円
環状に連結するマダイイリドウイルス・ゲノムDNAの
全塩基配列(112414 bp)を決定した。全塩基配列を配列
番号1に示す。また、その遺伝子地図を図1に示す。
【0051】〔実施例2〕 ウイルス中和・感染防御に
関連するDNAの決定 (ORF解析)実施例1で決定した全塩基配列について、G
ENETYX Mac (SDC software社) およびDNASIS Mac(日立
ソフトウエアエンジニアリング社)によりオープンリー
ディングフレーム(ORF)解析を行った。その結果、40
アミノ酸以上のタンパク質をコードし得るORFは644個存
在し、そのうち遺伝子と思われるORFは90個強存在し
ていた。ゲノムDNAにおけるこれらORFの位置および
向きを図2に矢印で示す。
【0052】(ウイルス中和・感染防御に関連すると推
定されるタンパク質の探索)ウイルスの感染には、ウイ
ルスが細胞に感染する際に細胞表面のレセプターに結合
する機能を担うタンパク質(アタッチメントタンパク質
と呼ばれる)が必要とされ、このことから、このタンパ
ク質がウイルスの中和・感染防御に関連すると考えられ
る。また、マダイイリドウイルスは有機溶剤処理により
感染性を失うことが知られているため、マダイイリドウ
イルスにおけるウイルス中和・感染防御タンパク質は該
ウイルスの脂質膜に組み込まれた膜タンパク質であると
予想される。そこで、上記ORFの予想アミノ酸配列につ
いて、BLASTP(Atschul,S.F.ら、Nucleic Acids Res. 2
5:3389-3402)により公知の種々のタンパク質との比較を
行い、膜通過部位、すなわちトランスメンブレンドメイ
ンを持つことを条件として膜タンパク質をコードすると
思われるORFを選抜した。さらに、他の多くのウイルス
において、膜タンパク質であり、かつ糖鎖をもつタンパ
ク質(糖タンパク質)がアタッチメントタンパク質として
機能していて、同時に感染防御抗原として有効である例
が知られていることから、糖タンパク質であることも選
抜条件とした。各ORFと公知のタンパク質との比較結果
を下記表1にまとめて記す。
【0053】
【表1】 *1:ここでいうヌクレオチド番号は、配列番号1のマダ
イイリドウイルス全ゲノムDNA配列における番号であ
る。*2 :各ORF塩基配列から推定されるアミノ酸配列におけ
るアミノ酸の総数を示す。
【0054】(ウイルス中和・感染防御関連タンパク質
コードORFの最有力候補:ORF291L)表1に記載の比較結
果から、ORF291L(全ゲノム配列の53357-50208番目;塩
基配列を配列番号2に、推定アミノ酸配列を配列番号3
および図3に示す)がウイルス中和・感染防御関連タン
パク質をコードするDNAであると推定した。推定理由
を以下に記載する。
【0055】第1に、ORF291Lは、その推定アミノ酸配
列(配列番号3および図3)において、N末端側に切断型
シグナルペプチド(図3に示すアミノ酸配列中、左上が
り斜線(e)を付した部位)、C末端付近に膜通過部位、
すなわちトランスメンブレンドメイン(図3中、右上が
り斜線(c)を付した部位)、C末端に細胞側にアンカーの
役割を果たすサイトプラズミックテール(cytoplasmic t
ail)(図3中、波線(d)を付した部位)を有していた。こ
のことから、ORF291Lはトランスメンブレンドメインか
らC末端側を細胞質側、N末端側をその反対側として脂
質膜に組み込まれる膜タンパク質であると推定された。
【0056】第2に、脂質膜の外側に位置すると考えら
れる部分について公知のタンパク質との相同性を調べた
ところ、ラミニン各鎖、およびその関連タンパク質と高
い相同性を示した。相同性を示したのはこれらタンパク
質のラミニンEGF配列とよばれるEGF様の繰り返し配列で
あった。BLAST 2.0解析におけるこれらタンパク質とのB
LASTP スコア206〜291は、真核生物のタンパク質とウイ
ルスタンパク質との比較としては、極めて高いスコアで
あり、このウイルスタンパク質の起源が真核生物にある
ことが明らかとなった。該ウイルスタンパク質のラミニ
ンEGF配列は既知のタンパク質ではラミニンγ鎖ドメイ
ンIIIのラミニンEGF配列と最も高い相同性を示し、完全
な配列が6コ(このうち5個はコンセンサス配列を完璧
に満たしている)とその両側に部分的配列が1つずつ存
在していた。ラミニンは細胞外マトリックスである基底
膜の主な構成タンパク質の1つであり、このタンパク質
の機能に基底膜と細胞との接着が挙げられ、γ鎖ドメイ
ンIIIが含まれるラミニンPIフラグメントにも細胞接着
機能の存在が明らかにされている。このことから、この
タンパク質のラミニンEGF繰り返し配列が細胞接着機能
を有することが推定された。尚、ウイルスがラミニンEG
F配列を含む遺伝子を有することは全ウイルスを通して
前例が無く、極めて重要な所見である。
【0057】第3に、ラミニンEGF繰り返し配列付近か
らN末端付近にかけてアスパラギン(Asn)グリコシル化
部位(=アスパラギン糖鎖結合部位)が多数存在し(図3
中、陰影(b)をつけた部位)、ラミニンと同様に糖タンパ
ク質であることが推定された。
【0058】尚、このようにしてウイルス中和・感染防
御関連タンパク質であると推定されたORF291L推定コー
ドタンパク質が有力な感染防御抗原、ORF291LのDNA配列
それ自体がDNAワクチンとしての有効塩基配列となり得
るものであることは、当業者であれば容易に理解されよ
う。
【0059】また、上記ORF291Lの塩基配列(配列番号
2)における1から1869番目の領域(配列番号4)は、
本タンパク質の疎水性部分のC-末端側を削除した、親水
性を示すN-末端側の配列であり、N-末端のシグナルペプ
チドとラミニンEGF繰り返し配列を含み、細胞接着タン
パク質としての機能部位と考えられることから、またさ
らに655〜1869番目の領域は(配列番号6)は、ラミニ
ンEGF繰り返し配列部分であり、その機能部位の中枢部
であることからそれぞれ有用であると考えられる。1〜1
869番目の領域の塩基配列から推定されるアミノ酸配列
は配列番号3のアミノ酸配列の1〜623番目の領域に対応
し、配列番号5のアミノ酸配列で示される。655〜1869
番目の領域は配列番号3のアミノ酸配列の219〜623番目
の領域に対応し、配列番号7のアミノ酸配列で示され
る。
【0060】(ウイルス中和・感染防御関連タンパク質
コードORFの他の候補:ORF407R)ウイルスが細胞接着に
利用しているタンパク質は必ずしも1つとは限らず、複
数のタンパク質を利用している可能性も考えられる。そ
こで、ORF291Lの他にも候補があるかどうかを検討し
た。
【0061】その結果、ORF407R(全ゲノム配列の73774-
74151番目;塩基配列を配列番号8に、推定アミノ酸配
列を配列番号9および図4に示す)もまたウイルス中和
・感染防御関連タンパク質をコードしているものと推定
された。推定理由を以下に示す。
【0062】ORF407Rは、配列番号9および図4に示す
アミノ酸配列において、トランスメンブレンドメイン
(図4中、斜線を付した部位)および細胞接着に関わるア
ミノ酸配列として知られるアルギニン−グリシン−アス
パラギン酸(R-G-D)配列(図4中、枠で囲った部位)を有
していた。マダイイリドウイルスの近縁ウイルスである
魚類リンホシスチス病ウイルス(FLDV)にはORF407Rの相
同遺伝子(FLDVのORF194R)が発見されており、この相同
遺伝子においてもRGD配列が保存されている。高い相同
性がみられる領域はこのRGD配列付近であったことか
ら、これらのタンパク質の機能部位はRGD配列付近にあ
ることが示唆された。そして、このことから、ORF407R
推定コードタンパク質についてもウイルス中和・感染防
御関連タンパク質として機能している可能性が示唆さ
れ、該タンパク質およびORF407RのDNA配列それ自体が感
染防御抗原およびDNAワクチンとしての有効塩基配列
の有力な候補であると推定した。
【0063】また、上記ORF407Rの塩基配列(配列番号
8)における229から378番目の領域(配列番号10)
は、FLDV相同タンパク質との相同性が高い部分であり、
さらに双方ともその内部に細胞接着に関わるRGD配列を
含んでいる。このことからこの領域はこのタンパク質の
細胞接着タンパク質としての機能部位であることが想定
され、有用であると考えられる。該領域の塩基配列から
推定されるアミノ酸配列は配列番号9のアミノ酸配列の
77〜126番目の領域に対応し、配列番号11のアミノ酸
配列で示される。
【0064】
【発明の効果】本発明により、マダイイリドウイルスの
ウイルス中和・感染防御関連タンパク質、該タンパク質
をコードするDNA、該DNAを含む組換えベクター、
該ベクターを有効成分として含有するDNAワクチン、
該ベクターによって形質転換された形質転換体、該タン
パク質の製造方法および該タンパク質を有効成分として
含有するワクチンが提供される。
【0065】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Nakamura Yasuaki, Director-General of National Research Institute of Aquaculture, Fisheries Agency, Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries. Jun Kurita <120> DNAs which encode neutralizing and protective antigen related prot eins of red sea bream iridovirus. <130> P00-0333 <160> 11 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 112414 <212> DNA <213> Ehime-1 strain of red sea bream iridovirus (RSIV) <400> 1 gaattccagt ctaccatcga catcccggcc gagggccaga ggcacgtggg tcgtgacgag 60 tgcattgcgc gggcgtacgc gtgtttgggt ccgcacgtct atgtcgagga tcactggcag 120 tcagacctga ttgcccgcat accactgacc ctggatgccc cggccgaaat gagcacattt 180 gtggactttg tcatgaacga cgagtacaca aggcgcacct ttgcaattga cgagtcgagc 240 gtgccgcacc gcgcaaggcc tattatttat atgcacctca tgggatcgcg gcaggtgatg 300 agcctgtcgc ttatgacaga gggccgtgcg gtgctcaagt ttcgtgtcac tgacttggag 360 gtgcttatgt tcctgcgcga ctgctttgat attatgtggc accggtatag cgttggcggt 420 taccgagacg aatgtatagc tttttatcga gaccacggcc aggacccctt tgaatggggc 480 atgccacatg gctctgacat ccagccacaa caggcgcggg ccaccggacg tatcgcatcg 540 ctcagagagg ccgagcccga cgtattcatc aatacatatt ctagatactg cagcaacatg 600 ccccgcattg tggacgcggc ggaggcccag 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gcgcgccgcc gacaaccaca cctccgccca agacggcatg caaaaagaaa 2580 cccaagccgc caatgggtgc aacgcccgta catgacccac agactccacc acctcgaaag 2640 cctgagcccg tggcaccagc tggaaggccc atgccagaga ctgaggcacc gcaacgcgac 2700 gtacctattg tggcagtggt acacacccct gaaagggcac cgcctcaaaa gccctcacag 2760 acccaggccc cgcaacacga tgcgcctatt gtggcagtgg tacacacccc tgaacgggca 2820 ccgcctccct cacagactga ggccccaaaa cataaggtac ctgttgccac agtggtacac 2880 actcctgaaa gagcaccgcc tgctgcgccc tcacgcatac cacctgccat ccaaaatgaa 2940 gtgcctgttg tgaaacaaag tactggtgag gaagatgacg atgatgtgca ccttggtgac 3000 attgggggta tgaagaaagg aggcctgttg atgggaattg tcattgggtc ttgcatggtt 3060 gccgctgcat tcattatgtt tgctataata gggcatctgt ttttccgttt tacccgctgt 3120 ggtcaatatg atgttactac tactgaacca 3150 <210> 3 <211> 1050 <212> PRT <213> Ehime-1 strain of red sea bream iridovirus (RSIV) <220> <223> Amino acid seuence deduced from nucleotide sequence of SEQ ID NO:2 . <400> 3 Met Ala Thr Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Thr Val Ala Cys Thr His 1 5 10 15 Ala Thr Thr Phe Tyr Asn Leu Glu Ile Asp Asn Gln Thr Thr Thr Leu 20 25 30 Ser Cys Gly Val Pro Arg Glu Thr Asp Val Lys Ile Val Trp Ser Ser 35 40 45 Asp Ser Asn Ser Leu Leu Ala Glu His Val Val His Gly Glu Val Val 50 55 60 His Val Gly Arg Asn Ser Ser Glu Val Leu Lys His Gly Val Val Leu 65 70 75 80 Tyr Asp Gly Thr Ile Leu Ser Val Ile Lys Leu Lys Pro His Pro Val 85 90 95 Gln Thr Val Thr Cys His Ala Ser Arg Ile Ser Ser Asp Ser Gln Pro 100 105 110 Cys Val Gly Val Ser Cys Glu Leu Pro Thr Asp Thr Asp Asn Val Thr 115 120 125 Pro Pro Pro Thr Leu Leu Asp Asp Gly Gly Ser Gly Met Asp Asp Tyr 130 135 140 Asp Asp Ile Asp Glu Pro Glu Cys Leu Ser Gly Asn Cys Ser Asp Cys 145 150 155 160 Ile Asn Val Val Arg Tyr Thr Asn Gly Ser Leu Glu Cys Leu Asp Asp 165 170 175 Lys Leu Cys Val Pro Gly Glu Met Pro Tyr Asn Met Leu Gln Cys Tyr 180 185 190 Gln Ser Asn Val Thr Cys His Cys Asp Asn Gly Leu Cys Arg Val Ser 195 200 205 Tyr Asp Gly Thr Asp Val Cys Cys Pro Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Pro 210 215 220 Ile Ser Cys Gln Gln Cys Pro Cys Pro Glu Asp Gly Pro Cys Glu Ile 225 230 235 240 His Met Gly Arg Leu Val Cys Thr Ser Cys Pro Pro Gly His Ile Gly 245 250 255 Asp Thr Cys Asn Arg Cys Leu Asp Gly Tyr Tyr Gln Ala Lys Asp Gly 260 265 270 Val Cys Arg Glu Cys Gln Cys Pro Phe Asn Ser Pro Cys Thr Leu Glu 275 280 285 Asn Gly Thr Ala Thr Cys Val Cys Pro Ile Gly His Thr Gly Gln Arg 290 295 300 Cys Glu Val Cys Glu Ser Gly Tyr Phe Trp Thr Gly His Gln Cys Ile 305 310 315 320 Arg Cys Pro Cys Asp Gly His Cys Ala Leu Gln His Asp Gly Gln Val 325 330 335 Ile Cys Tyr Arg Cys Val Asp Cys Val Gly Glu Gly Pro Cys His Val 340 345 350 Asp Met Thr Asn Lys Asn Ser Ile Tyr Cys Val Asp Cys Pro Tyr Gly 355 360 365 Ser Ser Gly Gln Tyr Cys Glu Met Cys Asp Val Gly Phe Phe Arg Gly 370 375 380 Ser Asn Gly Cys Arg Pro Cys Pro Cys Pro Asn Asn Gly Ala Cys Arg 385 390 395 400 Gln Ala Gly Asn Asn Ile Ile Cys Thr Gly Cys Pro Ile Asn Thr Thr 405 410 415 Lys Asn Asn Leu Cys Glu Glu Cys Leu Asp Gly Ser Phe Gly Asp Pro 420 425 430 Ser Gly Leu Leu Gly Pro Val Arg Pro Cys Arg Arg Cys His Cys Ser 435 440 445 Gly Asn Thr Asp Asp Asn Pro Val Gly Gln Cys His Pro Glu Thr Gly 450 455 460 Glu Cys Met Arg Cys Leu His Asn Thr Asp Gly Phe Phe Cys Asp Arg 465 470 475 480 Cys Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Asn Ala Leu Ser Ser Asp Pro Asn Lys 485 490 495 Cys Lys Gln Cys Val Cys Ser Gly His Gly Ser Leu His Pro Ile Cys 500 505 510 Asp Val Tyr Thr Gly Gln Cys Val Cys Lys Pro Asn Val Val Gly Leu 515 520 525 Gln Cys Asp Thr Cys Leu Pro Gly Tyr Tyr Gly Leu Tyr His Asp Gly 530 535 540 Ile Cys Lys Pro Cys Gln Cys His Pro Ala Gly Thr Gln Met Cys Asp 545 550 555 560 Ser Gln Thr Gly Gln Cys Val Cys His Thr Gly Val Tyr Gly Glu Ala 565 570 575 Cys Asp Gln Cys Met Pro Gly Tyr Phe Asn Ile Gln Ala Gly Cys Glu 580 585 590 Ala Cys Met Cys His Pro Asn Gln Ser Ile Ser Gln Gln Cys Asp Gln 595 600 605 Asp Gly Gln Cys Ile Cys Lys Glu Gly Phe Thr Gly Leu Met Cys Thr 610 615 620 Val Ala Ile Pro Leu Pro Thr Glu Ala Glu Pro Glu Glu Pro Glu Glu 625 630 635 640 Glu Glu Asp Glu Tyr Asp Cys Pro Glu Tyr Glu Asp Asp Thr Thr Thr 645 650 655 Ser Ala Pro Pro Thr Thr Met Pro Pro Pro Lys Arg Glu Cys Lys Lys 660 665 670 Lys Thr Thr Thr Thr Val Ala Pro Thr Thr Thr Thr Thr Thr Val Ala 675 680 685 Pro Thr Glu Pro Glu Pro Glu Glu Pro Glu Glu Glu Glu Asp Glu Tyr 690 695 700 Asp Cys Pro Glu Tyr Glu Asp Ile Thr Ser Ala Pro Pro Thr Thr Met 705 710 715 720 Pro Pro Pro Lys Arg Glu Cys Lys Lys Lys Thr Thr Thr Thr Val Ala 725 730 735 Thr Thr Thr Thr Thr Val Ala Pro Thr Thr Thr Thr Thr Thr Val Ala 740 745 750 Pro Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Val Ala Pro Thr Glu Pro Glu Pro 755 760 765 Glu Glu Pro Glu Glu Glu Glu Asp Glu Tyr Asp Cys Pro Glu Tyr Glu 770 775 780 Asp Ile Thr Ser Ala Pro Pro Thr Thr Met Pro Pro Pro Lys Arg Glu 785 790 795 800 Cys Lys Lys Lys Thr Thr Thr Thr Val Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr 805 810 815 Val Ala Pro Thr Glu Pro Glu Pro Glu Glu Pro Glu Glu Glu Glu Asp 820 825 830 Glu Tyr Asp Cys Pro Glu Tyr Glu Asp Ile Thr Ser Ala Pro Pro Thr 835 840 845 Thr Thr Pro Pro Pro Lys Thr Ala Cys Lys Lys Lys Pro Lys Pro Pro 850 855 860 Met Gly Ala Thr Pro Val His Asp Pro Gln Thr Pro Pro Pro Arg Lys 865 870 875 880 Pro Glu Pro Val Ala Pro Ala Gly Arg Pro Met Pro Glu Thr Glu Ala 885 890 895 Pro Gln Arg Asp Val Pro Ile Val Ala Val Val His Thr Pro Glu Arg 900 905 910 Ala Pro Pro Gln Lys Pro Ser Gln Thr Gln Ala Pro Gln His Asp Ala 915 920 925 Pro Ile Val Ala Val Val His Thr Pro Glu Arg Ala Pro Pro Pro Ser 930 935 940 Gln Thr Glu Ala Pro Lys His Lys Val Pro Val Ala Thr Val Val His 945 950 955 960 Thr Pro Glu Arg Ala Pro Pro Ala Ala Pro Ser Arg Ile Pro Pro Ala 965 970 975 Ile Gln Asn Glu Val Pro Val Val Lys Gln Ser Thr Gly Glu Glu Asp 980 985 990 Asp Asp Asp Val His Leu Gly Asp Ile Gly Gly Met Lys Lys Gly Gly 995 1000 1005 Leu Leu Met Gly Ile Val Ile Gly Ser Cys Met Val Ala Ala Ala Phe 1010 1015 1020 Ile Met Phe Ala Ile Ile Gly His Leu Phe Phe Arg Phe Thr Arg Cys 1025 1030 1035 1040 Gly Gln Tyr Asp Val Thr Thr Thr Glu Pro 1045 1050 <210> 4 <211> 1869 <212> DNA <213> Ehime-1 strain of red sea bream iridovirus (RSIV) <220> <223> Functional part of the nucleotide sequence of SEQ ID NO:2(nucleoti de number 1 to 1869). <400> 4 atggcgaccc tgctacttct tctgttgctg actgtggcgt gtactcacgc caccaccttc 60 tataacctgg aaatcgacaa ccagacgacc accctcagct gcggggtacc tcgagagacg 120 gatgtgaaga ttgtttggtc aagcgacagc aacagcctct tggcggagca tgttgtacat 180 ggcgaggtgg tccatgtagg ccgcaacagc agtgaagtcc tgaagcatgg agtggtgctg 240 tatgacggta ccatcttgtc tgtcatcaag ctgaaacctc accctgtgca gaccgtcaca 300 tgccacgcca gccgcatctc atctgacagt cagccttgtg taggtgtctc atgtgagctg 360 ccaacagaca ccgataatgt tactccaccg cctacactgc ttgacgatgg gggcagcgga 420 atggacgact acgatgacat agatgagcca gagtgtttga gcggcaactg cagtgactgt 480 ataaatgtgg tgagatacac aaatggctct ttggagtgtc tggatgataa gctgtgtgtc 540 cccggtgaga tgccctacaa tatgctccag tgctaccaat cgaatgtcac atgccactgt 600 gacaatggac tatgtagagt gagctatgat gggaccgacg tgtgctgtcc agtcggctac 660 tacggcgacc cgatttcatg ccaacaatgc ccatgtccag aagatggtcc atgtgaaata 720 catatgggtc gcctggtatg tacaagctgt ccaccgggac acataggaga cacatgcaac 780 cgctgtctgg atggatatta tcaagccaaa gacggtgtgt gccgtgaatg tcagtgtcca 840 ttcaatagcc cgtgtacact ggagaacggc acggcaacct gcgtatgccc catcggacat 900 accggacaaa ggtgcgaggt gtgtgaatca ggctactttt ggacaggaca ccaatgtata 960 cgctgcccgt gtgatggaca ctgtgcactg caacatgacg gacaggtgat ctgctatcgg 1020 tgtgtggatt gtgtaggaga aggcccatgc catgtagaca tgaccaataa gaatagcata 1080 tattgtgtgg actgcccata cggctcaagc gggcaatact gtgaaatgtg tgacgtcggc 1140 ttctttcgtg gttcaaatgg atgcaggcca tgtccgtgcc ccaacaatgg ggcatgtaga 1200 caggctggca ataacatcat atgtacaggc tgccctatca ataccacaaa gaacaacttg 1260 tgcgaagagt gcctcgatgg gtcatttggt gacccgagtg gcttgctagg ccctgttcgc 1320 ccgtgtaggc gctgtcactg ttcaggcaac actgacgaca acccagtagg acagtgtcac 1380 cctgagacgg gtgaatgtat gcgctgcctg cataataccg atggattctt ctgtgacagg 1440 tgcgccaggg gatattatgg caacgccctg agttctgacc ctaacaaatg caaacaatgt 1500 gtttgcagtg ggcatggctc attgcatcca atatgtgacg tgtacactgg acaatgcgtg 1560 tgcaagccta atgtggttgg cctgcaatgt gatacatgtc tgcctggata ctatgggtta 1620 taccacgatg gcatttgcaa gccatgtcag tgtcatccgg cgggaacaca aatgtgcgac 1680 tcacagaccg gacaatgtgt ctgtcacact ggggtgtatg gtgaagcatg tgatcaatgt 1740 atgcctggat atttcaatat acaggcaggc tgtgaagcat gcatgtgtca tcccaatcaa 1800 tcaatatcac agcagtgtga ccaagacggg cagtgtatct gtaaagaagg cttcacagga 1860 ctaatgtgc 1869 <210> 5 <211> 623 <212> PRT <213> Ehime-1 strain of red sea bream iridovirus (RSIV) <220> <223> Amino acid seuence deduced from nucleotide sequence of SEQ ID NO:4 . <400> 5 Met Ala Thr Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Thr Val Ala Cys Thr His 1 5 10 15 Ala Thr Thr Phe Tyr Asn Leu Glu Ile Asp Asn Gln Thr Thr Thr Leu 20 25 30 Ser Cys Gly Val Pro Arg Glu Thr Asp Val Lys Ile Val Trp Ser Ser 35 40 45 Asp Ser Asn Ser Leu Leu Ala Glu His Val Val His Gly Glu Val Val 50 55 60 His Val Gly Arg Asn Ser Ser Glu Val Leu Lys His Gly Val Val Leu 65 70 75 80 Tyr Asp Gly Thr Ile Leu Ser Val Ile Lys Leu Lys Pro His Pro Val 85 90 95 Gln Thr Val Thr Cys His Ala Ser Arg Ile Ser Ser Asp Ser Gln Pro 100 105 110 Cys Val Gly Val Ser Cys Glu Leu Pro Thr Asp Thr Asp Asn Val Thr 115 120 125 Pro Pro Pro Thr Leu Leu Asp Asp Gly Gly Ser Gly Met Asp Asp Tyr 130 135 140 Asp Asp Ile Asp Glu Pro Glu Cys Leu Ser Gly Asn Cys Ser Asp Cys 145 150 155 160 Ile Asn Val Val Arg Tyr Thr Asn Gly Ser Leu Glu Cys Leu Asp Asp 165 170 175 Lys Leu Cys Val Pro Gly Glu Met Pro Tyr Asn Met Leu Gln Cys Tyr 180 185 190 Gln Ser Asn Val Thr Cys His Cys Asp Asn Gly Leu Cys Arg Val Ser 195 200 205 Tyr Asp Gly Thr Asp Val Cys Cys Pro Val Gly Tyr Tyr Gly Asp Pro 210 215 220 Ile Ser Cys Gln Gln Cys Pro Cys Pro Glu Asp Gly Pro Cys Glu Ile 225 230 235 240 His Met Gly Arg Leu Val Cys Thr Ser Cys Pro Pro Gly His Ile Gly 245 250 255 Asp Thr Cys Asn Arg Cys Leu Asp Gly Tyr Tyr Gln Ala Lys Asp Gly 260 265 270 Val Cys Arg Glu Cys Gln Cys Pro Phe Asn Ser Pro Cys Thr Leu Glu 275 280 285 Asn Gly Thr Ala Thr Cys Val Cys Pro Ile Gly His Thr Gly Gln Arg 290 295 300 Cys Glu Val Cys Glu Ser Gly Tyr Phe Trp Thr Gly His Gln Cys Ile 305 310 315 320 Arg Cys Pro Cys Asp Gly His Cys Ala Leu Gln His Asp Gly Gln Val 325 330 335 Ile Cys Tyr Arg Cys Val Asp Cys Val Gly Glu Gly Pro Cys His Val 340 345 350 Asp Met Thr Asn Lys Asn Ser Ile Tyr Cys Val Asp Cys Pro Tyr Gly 355 360 365 Ser Ser Gly Gln Tyr Cys Glu Met Cys Asp Val Gly Phe Phe Arg Gly 370 375 380 Ser Asn Gly Cys Arg Pro Cys Pro Cys Pro Asn Asn Gly Ala Cys Arg 385 390 395 400 Gln Ala Gly Asn Asn Ile Ile Cys Thr Gly Cys Pro Ile Asn Thr Thr 405 410 415 Lys Asn Asn Leu Cys Glu Glu Cys Leu Asp Gly Ser Phe Gly Asp Pro 420 425 430 Ser Gly Leu Leu Gly Pro Val Arg Pro Cys Arg Arg Cys His Cys Ser 435 440 445 Gly Asn Thr Asp Asp Asn Pro Val Gly Gln Cys His Pro Glu Thr Gly 450 455 460 Glu Cys Met Arg Cys Leu His Asn Thr Asp Gly Phe Phe Cys Asp Arg 465 470 475 480 Cys Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Asn Ala Leu Ser Ser Asp Pro Asn Lys 485 490 495 Cys Lys Gln Cys Val Cys Ser Gly His Gly Ser Leu His Pro Ile Cys 500 505 510 Asp Val Tyr Thr Gly Gln Cys Val Cys Lys Pro Asn Val Val Gly Leu 515 520 525 Gln Cys Asp Thr Cys Leu Pro Gly Tyr Tyr Gly Leu Tyr His Asp Gly 530 535 540 Ile Cys Lys Pro Cys Gln Cys His Pro Ala Gly Thr Gln Met Cys Asp 545 550 555 560 Ser Gln Thr Gly Gln Cys Val Cys His Thr Gly Val Tyr Gly Glu Ala 565 570 575 Cys Asp Gln Cys Met Pro Gly Tyr Phe Asn Ile Gln Ala Gly Cys Glu 580 585 590 Ala Cys Met Cys His Pro Asn Gln Ser Ile Ser Gln Gln Cys Asp Gln 595 600 605 Asp Gly Gln Cys Ile Cys Lys Glu Gly Phe Thr Gly Leu Met Cys 610 615 620 <210> 6 <211> 1215 <212> DNA <213> Ehime-1 strain of red sea bream iridovirus (RSIV) <220> <223> Functional part of the nucleotide sequence of SEQ ID NO:2(nucleoti de number 655 to 1869). <400> 6 ggctactacg gcgacccgat ttcatgccaa caatgcccat gtccagaaga tggtccatgt 60 gaaatacata tgggtcgcct ggtatgtaca agctgtccac cgggacacat aggagacaca 120 tgcaaccgct gtctggatgg atattatcaa gccaaagacg gtgtgtgccg tgaatgtcag 180 tgtccattca atagcccgtg tacactggag aacggcacgg caacctgcgt atgccccatc 240 ggacataccg gacaaaggtg cgaggtgtgt gaatcaggct acttttggac aggacaccaa 300 tgtatacgct gcccgtgtga tggacactgt gcactgcaac atgacggaca ggtgatctgc 360 tatcggtgtg tggattgtgt aggagaaggc ccatgccatg tagacatgac caataagaat 420 agcatatatt gtgtggactg cccatacggc tcaagcgggc aatactgtga aatgtgtgac 480 gtcggcttct ttcgtggttc aaatggatgc aggccatgtc cgtgccccaa caatggggca 540 tgtagacagg ctggcaataa catcatatgt acaggctgcc ctatcaatac cacaaagaac 600 aacttgtgcg aagagtgcct cgatgggtca tttggtgacc cgagtggctt gctaggccct 660 gttcgcccgt gtaggcgctg tcactgttca ggcaacactg acgacaaccc agtaggacag 720 tgtcaccctg agacgggtga atgtatgcgc tgcctgcata ataccgatgg attcttctgt 780 gacaggtgcg ccaggggata ttatggcaac gccctgagtt ctgaccctaa caaatgcaaa 840 caatgtgttt gcagtgggca tggctcattg catccaatat gtgacgtgta cactggacaa 900 tgcgtgtgca agcctaatgt ggttggcctg caatgtgata catgtctgcc tggatactat 960 gggttatacc acgatggcat ttgcaagcca tgtcagtgtc atccggcggg aacacaaatg 1020 tgcgactcac agaccggaca atgtgtctgt cacactgggg tgtatggtga agcatgtgat 1080 caatgtatgc ctggatattt caatatacag gcaggctgtg aagcatgcat gtgtcatccc 1140 aatcaatcaa tatcacagca gtgtgaccaa gacgggcagt gtatctgtaa agaaggcttc 1200 acaggactaa tgtgc 1215 <210> 7 <211> 405 <212> PRT <213> Ehime-1 strain of red sea bream iridovirus (RSIV) <220> <223> Amino acid seuence deduced from nucleotide sequence of SEQ ID NO:6 . <400> 7 Gly Tyr Tyr Gly Asp Pro Ile Ser Cys Gln Gln Cys Pro Cys Pro Glu 1 5 10 15 Asp Gly Pro Cys Glu Ile His Met Gly Arg Leu Val Cys Thr Ser Cys 20 25 30 Pro Pro Gly His Ile Gly Asp Thr Cys Asn Arg Cys Leu Asp Gly Tyr 35 40 45 Tyr Gln Ala Lys Asp Gly Val Cys Arg Glu Cys Gln Cys Pro Phe Asn 50 55 60 Ser Pro Cys Thr Leu Glu Asn Gly Thr Ala Thr Cys Val Cys Pro Ile 65 70 75 80 Gly His Thr Gly Gln Arg Cys Glu Val Cys Glu Ser Gly Tyr Phe Trp 85 90 95 Thr Gly His Gln Cys Ile Arg Cys Pro Cys Asp Gly His Cys Ala Leu 100 105 110 Gln His Asp Gly Gln Val Ile Cys Tyr Arg Cys Val Asp Cys Val Gly 115 120 125 Glu Gly Pro Cys His Val Asp Met Thr Asn Lys Asn Ser Ile Tyr Cys 130 135 140 Val Asp Cys Pro Tyr Gly Ser Ser Gly Gln Tyr Cys Glu Met Cys Asp 145 150 155 160 Val Gly Phe Phe Arg Gly Ser Asn Gly Cys Arg Pro Cys Pro Cys Pro 165 170 175 Asn Asn Gly Ala Cys Arg Gln Ala Gly Asn Asn Ile Ile Cys Thr Gly 180 185 190 Cys Pro Ile Asn Thr Thr Lys Asn Asn Leu Cys Glu Glu Cys Leu Asp 195 200 205 Gly Ser Phe Gly Asp Pro Ser Gly Leu Leu Gly Pro Val Arg Pro Cys 210 215 220 Arg Arg Cys His Cys Ser Gly Asn Thr Asp Asp Asn Pro Val Gly Gln 225 230 235 240 Cys His Pro Glu Thr Gly Glu Cys Met Arg Cys Leu His Asn Thr Asp 245 250 255 Gly Phe Phe Cys Asp Arg Cys Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Asn Ala Leu 260 265 270 Ser Ser Asp Pro Asn Lys Cys Lys Gln Cys Val Cys Ser Gly His Gly 275 280 285 Ser Leu His Pro Ile Cys Asp Val Tyr Thr Gly Gln Cys Val Cys Lys 290 295 300 Pro Asn Val Val Gly Leu Gln Cys Asp Thr Cys Leu Pro Gly Tyr Tyr 305 310 315 320 Gly Leu Tyr His Asp Gly Ile Cys Lys Pro Cys Gln Cys His Pro Ala 325 330 335 Gly Thr Gln Met Cys Asp Ser Gln Thr Gly Gln Cys Val Cys His Thr 340 345 350 Gly Val Tyr Gly Glu Ala Cys Asp Gln Cys Met Pro Gly Tyr Phe Asn 355 360 365 Ile Gln Ala Gly Cys Glu Ala Cys Met Cys His Pro Asn Gln Ser Ile 370 375 380 Ser Gln Gln Cys Asp Gln Asp Gly Gln Cys Ile Cys Lys Glu Gly Phe 385 390 395 400 Thr Gly Leu Met Cys 405 <210> 8 <211> 378 <212> DNA <213> Ehime-1 strain of red sea bream iridovirus (RSIV) <220> <223> This sequence is an open reading frame ORF407R which corresponds t o the partial nucleotide sequence (nucleotide number 73774 to 74151) of SEQ ID NO:1 . <400> 8 atggtggatc ctattgtcat gtctagtgcc attgccatgg gcctggcgct catggtggtg 60 tactatgagc gttcgaagcg ccacgcacaa cagccagagc ggcagcatcc caaaggcgtc 120 acgccggacg gcgtgaagct cttcaagtct ggccatgtgc tgcacgacca tgtcagcagt 180 gaaacggacg cccgcaagat gatcaaactg attacggtgg cctccagcaa tcggctgaag 240 cagctgggcg accccattcg aggcgacgtc atcatcaagc cccgtacgga gggcctgttt 300 ttgccacgtg gtcggccaga gcattctctg cagccgggtg ctgtgcactt gcttacacca 360 cgccagcctt gtaatcct 378 <210> 9 <211> 126 <212> PRT <213> Ehime-1 strain of red sea bream iridovirus (RSIV) <220> <223> Amino acid seuence deduced from nucleotide sequence of SEQ ID NO:8 . <400> 9 Met Val Asp Pro Ile Val Met Ser Ser Ala Ile Ala Met Gly Leu Ala 1 5 10 15 Leu Met Val Val Tyr Tyr Glu Arg Ser Lys Arg His Ala Gln Gln Pro 20 25 30 Glu Arg Gln His Pro Lys Gly Val Thr Pro Asp Gly Val Lys Leu Phe 35 40 45 Lys Ser Gly His Val Leu His Asp His Val Ser Ser Glu Thr Asp Ala 50 55 60 Arg Lys Met Ile Lys Leu Ile Thr Val Ala Ser Ser Asn Arg Leu Lys 65 70 75 80 Gln Leu Gly Asp Pro Ile Arg Gly Asp Val Ile Ile Lys Pro Arg Thr 85 90 95 Glu Gly Leu Phe Leu Pro Arg Gly Arg Pro Glu His Ser Leu Gln Pro 100 105 110 Gly Ala Val His Leu Leu Thr Pro Arg Gln Pro Cys Asn Pro 115 120 125 <210> 10 <211> 150 <212> DNA <213> Ehime-1 strain of red sea bream iridovirus (RSIV) <220> <223> Functional part of the nucleotide sequence of SEQ ID NO:8(nucleoti de number 229 to 378). <400> 10 aatcggctga agcagctggg cgaccccatt cgaggcgacg tcatcatcaa gccccgtacg 60 gagggcctgt ttttgccacg tggtcggcca gagcattctc tgcagccggg tgctgtgcac 120 ttgcttacac cacgccagcc ttgtaatcct 150 <210> 11 <211> 50 <212> PRT <213> Ehime-1 strain of red sea bream iridovirus (RSIV) <220> <223> Amino acid seuence deduced from nucleotide sequence of SEQ ID NO:1 0 . <400> 11 Asn Arg Leu Lys Gln Leu Gly Asp Pro Ile Arg Gly Asp Val Ile Ile 1 5 10 15 Lys Pro Arg Thr Glu Gly Leu Phe Leu Pro Arg Gly Arg Pro Glu His 20 25 30 Ser Leu Gln Pro Gly Ala Val His Leu Leu Thr Pro Arg Gln Pro Cys 35 40 45 Asn Pro 50
【0066】
【配列表フリーテキスト】配列番号2:この配列は、配
列番号1のヌクレオチド配列の部分配列(ヌクレオチド
番号53357〜50208番)に相当するオープンリーディング
フレームORF291Lを示す。 配列番号3:配列番号2のヌクレオチド配列から推定さ
れるアミノ酸配列。 配列番号4:配列番号2のヌクレオチド配列の機能部分
(ヌクレオチド番号1〜1869番)。 配列番号5:配列番号4のヌクレオチド配列から推定さ
れるアミノ酸配列。 配列番号6:配列番号2のヌクレオチド配列の機能部分
(ヌクレオチド番号655〜1869番)。 配列番号7:配列番号6のヌクレオチド配列から推定さ
れるアミノ酸配列。 配列番号8:この配列は、配列番号1のヌクレオチド配
列の部分配列(ヌクレオチド番号73774〜74151番)に相当
するオープンリーディングフレームORF407Rを示す。 配列番号9:配列番号8のヌクレオチド配列から推定さ
れるアミノ酸配列。 配列番号10:配列番号8のヌクレオチド配列の機能部
分(ヌクレオチド番号229〜378番)。 配列番号11:配列番号10のヌクレオチド配列から推
定されるアミノ酸配列。
【図面の簡単な説明】
【図1】 マダイイリドウイルス・ゲノムDNA全塩基
配列(112414 bp)の円環状に連結する遺伝子地図を示
す。制限酵素EcoRI認識部位が4箇所存在する。1番大
きなEcoRI断片と、これに隣接する2番目に大きなEcoRI
断片との結合は、間のEcoRI認識配列を介して、2番目
の断片を1番目の断片の右側に来るような方向で示して
いる。
【図2】 図1の遺伝子地図を1番大きなEcoRI断片と
2番目に大きなEcoRI断片との間のEcoRI認識配列GAATTC
の最初の塩基Gを第1塩基として右回りに展開したゲノ
ム地図上に、遺伝子と推定される90個強のORFの位置
を矢印で示した図である。
【図3】 ORF291Lの推定アミノ酸配列における機能部
位を示す図である。図中、N末端のシグナルペプチドと
C末端付近のトランスメンブレンドメインには右上がり
の斜線(c)を付して示した。また、ラミニンEGF様配列に
は縦線(a)を付して示し、不完全なものは囲み枠で示し
た。
【図4】 ORF407RとそのFLDVの相同遺伝子ORF194Rとの
アミノ酸配列のアラインメントを示した。保存されてい
るアミノ酸をアスタリスク(*)で示した。図中、トラン
スメンブレンドメインは斜線を付して示し、RGD配列は
囲み枠で示す。
フロントページの続き Fターム(参考) 4B024 AA10 BA32 CA03 EA04 GA11 HA01 4B065 AA72X AA90X AA95Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA43 CA60 4H045 AA11 BA10 BA19 CA01 DA86 EA31 FA72 FA73 FA74 HA04 HA05 HA06 HA07

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 以下の(a)または(b)のタンパク質
    をコードするDNA。 (a)配列番号3で表されるアミノ酸配列からなるタン
    パク質、(b)配列番号3で表されるアミノ酸配列にお
    いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
    付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
    イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
    質。
  2. 【請求項2】 以下の(a)または(b)のタンパク質
    をコードするDNA。 (a)配列番号5で表されるアミノ酸配列からなるタン
    パク質、(b)配列番号5で表されるアミノ酸配列にお
    いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
    付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
    イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
    質。
  3. 【請求項3】 以下の(a)または(b)のタンパク質
    をコードするDNA。 (a)配列番号7で表されるアミノ酸配列からなるタン
    パク質、(b)配列番号7で表されるアミノ酸配列にお
    いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
    付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
    イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
    質。
  4. 【請求項4】 以下の(a)または(b)のタンパク質
    をコードするDNA。 (a)配列番号9で表されるアミノ酸配列からなるタン
    パク質、(b)配列番号9で表されるアミノ酸配列にお
    いて1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは
    付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリドウ
    イルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパク
    質。
  5. 【請求項5】 以下の(a)または(b)のタンパク質
    をコードするDNA。 (a)配列番号11で表されるアミノ酸配列からなるタ
    ンパク質、(b)配列番号11で表されるアミノ酸配列
    において1もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換もし
    くは付加されたアミノ酸配列からなり、かつマダイイリ
    ドウイルスのウイルス中和・感染防御に関連するタンパ
    ク質。
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