JP2002040029A - 全血、血漿及び血清中の外因性ヘモグロビンを検出、定量かつモニターするための自動化された方法 - Google Patents
全血、血漿及び血清中の外因性ヘモグロビンを検出、定量かつモニターするための自動化された方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 個体の血液、血漿若しくは血清サンプル、特
に全血サンプル中の、細胞外ヘモグロビン、又は外から
加えられたヘモグロビン、すなわち無細胞代用ヘモグロ
ビン若しくはヘモグロビン誘導体を検出かつモニターす
るための方法及びシステムを提供する。 【解決手段】 （ａ）該サンプルのアリコート中の総ヘ
モグロビン濃度を該分析装置のヘモグロビン分析チャン
ネルで決定する段階と； （ｂ）該サンプルアリコート中の細胞ヘモグロビン濃度
を該分析装置の赤血球分析チャンネルで決定する段階
と； （ｃ）該分析装置のヘモグロビンチャンネルから決定さ
れた総ヘモグロビン濃度と、赤血球チャンネルから決定
された細胞ヘモグロビン濃度との差を算出して、全血、
血漿又は血清サンプル中の細胞外ヘモグロビン濃度を得
る段階と；を含む方法を用いる。
に全血サンプル中の、細胞外ヘモグロビン、又は外から
加えられたヘモグロビン、すなわち無細胞代用ヘモグロ
ビン若しくはヘモグロビン誘導体を検出かつモニターす
るための方法及びシステムを提供する。 【解決手段】 （ａ）該サンプルのアリコート中の総ヘ
モグロビン濃度を該分析装置のヘモグロビン分析チャン
ネルで決定する段階と； （ｂ）該サンプルアリコート中の細胞ヘモグロビン濃度
を該分析装置の赤血球分析チャンネルで決定する段階
と； （ｃ）該分析装置のヘモグロビンチャンネルから決定さ
れた総ヘモグロビン濃度と、赤血球チャンネルから決定
された細胞ヘモグロビン濃度との差を算出して、全血、
血漿又は血清サンプル中の細胞外ヘモグロビン濃度を得
る段階と；を含む方法を用いる。
Description
【０００１】本願は、2000年６月９日付け米国特許願第
60/210,625号の恩典を請求する。
60/210,625号の恩典を請求する。
【０００２】
【発明が属する技術分野】本発明は、一般的には、血液
サンプル、特に全血サンプルはもとより、血漿及び血清
サンプル中の、細胞外のか、又は外から加えられた、代
用ヘモグロビンを包含するヘモグロビンを検出、定量か
つモニターするための新規な方法及びシステムに関す
る。本発明は、更に、血液、血漿又は血清サンプル中
の、細胞外及び外因性の、無細胞代用ヘモグロビンを包
含するヘモグロビンの濃度を決定かつ定量するための自
動化された血液学分析装置にも関し、患者の外傷又は外
科手術の際の医学的用途はもとより、回復の際のヘモグ
ロビンレベルのモニタリングにも特に好都合である。
サンプル、特に全血サンプルはもとより、血漿及び血清
サンプル中の、細胞外のか、又は外から加えられた、代
用ヘモグロビンを包含するヘモグロビンを検出、定量か
つモニターするための新規な方法及びシステムに関す
る。本発明は、更に、血液、血漿又は血清サンプル中
の、細胞外及び外因性の、無細胞代用ヘモグロビンを包
含するヘモグロビンの濃度を決定かつ定量するための自
動化された血液学分析装置にも関し、患者の外傷又は外
科手術の際の医学的用途はもとより、回復の際のヘモグ
ロビンレベルのモニタリングにも特に好都合である。
【０００３】
【従来の技術】代用全血は、医学の分野に、特に輸血を
要する外傷及び／又は手術後に用いるための全血の代替
手段として、長く追求されている。大量の血液を戦場の
軍隊に供給する必要に駆られてきたが、ヒトの病原体及
びウイルス、特に肝炎ウイルス及びＨＩＶによる汚染の
面での、血液供給の安全性を保証する供給源に制約され
て、血液銀行は、その全血供給プロジェクトを1980年代
初期に放棄した。しかし、汚染物質を含まず、患者の処
置に用いることができる、代用血液、例えば合成代用血
液の探索は、続いている。
要する外傷及び／又は手術後に用いるための全血の代替
手段として、長く追求されている。大量の血液を戦場の
軍隊に供給する必要に駆られてきたが、ヒトの病原体及
びウイルス、特に肝炎ウイルス及びＨＩＶによる汚染の
面での、血液供給の安全性を保証する供給源に制約され
て、血液銀行は、その全血供給プロジェクトを1980年代
初期に放棄した。しかし、汚染物質を含まず、患者の処
置に用いることができる、代用血液、例えば合成代用血
液の探索は、続いている。
【０００４】現在、代用血液を製造及び／又は単離する
ための更新された関心が存在する。しかし、血液の複雑
さ、及び全血を構成する様々な成分と並んで、そのよう
な合成製品の試験及び使用に適用される連邦政府の厳し
い規制のため、当業界は、その探求の努力を、輸血され
た血液が与えるその他の機能を有する、異なる様々な製
品の開発よりむしろ一時的に酸素を供給する製品の開発
に集中している。
ための更新された関心が存在する。しかし、血液の複雑
さ、及び全血を構成する様々な成分と並んで、そのよう
な合成製品の試験及び使用に適用される連邦政府の厳し
い規制のため、当業界は、その探求の努力を、輸血され
た血液が与えるその他の機能を有する、異なる様々な製
品の開発よりむしろ一時的に酸素を供給する製品の開発
に集中している。
【０００５】ヒト若しくは動物の血液から単離されたヘ
モグロビン（ＨＧＢ）、又は合成により製造された酸素
運搬体、例えばペルフルオロカーボンは、現在、臨床治
験中である代用血液のうちの２種類である。その他の代
用赤血球、すなわち酸素運搬性代用ヘモグロビンも開発
され、患者に用いるために特性記述されている［例え
ば、Red Blood Cell Substitutes, 1998, Eds., A.S. R
udolph, R. Rabinovici,& G.Z. Feuerstein, Dekker, N
ew York, NYを参照されたい］。そのような酸素運搬性
代用ヘモグロビンは、標準的な医学的治療法、例えば輸
血血液又は血液製品と結合して用い得る。
モグロビン（ＨＧＢ）、又は合成により製造された酸素
運搬体、例えばペルフルオロカーボンは、現在、臨床治
験中である代用血液のうちの２種類である。その他の代
用赤血球、すなわち酸素運搬性代用ヘモグロビンも開発
され、患者に用いるために特性記述されている［例え
ば、Red Blood Cell Substitutes, 1998, Eds., A.S. R
udolph, R. Rabinovici,& G.Z. Feuerstein, Dekker, N
ew York, NYを参照されたい］。そのような酸素運搬性
代用ヘモグロビンは、標準的な医学的治療法、例えば輸
血血液又は血液製品と結合して用い得る。
【０００６】具体的ではあるが限定的ではない例とし
て、Enzon, Inc.（Piscataway, NJ）は、ポリエチレン
グリコール（ＰＥＧ）で修飾したウシヘモグロビン（Ｐ
ＥＧ−ＨＧＢと略す）を開発した。ＰＥＧ−ＨＧＢは、
例えば、Nhoらへの米国特許第5,386,014号及び第5,234,
903号明細書に開示されたとおり、ＨＧＢ分子の表面に
ＰＥＧの鎖を架橋結合させるという方法によって製造さ
れる。その他の具体的な、しかし非限定的な例は、Hemo
pure（登録商標）及びOxyglobin（Biopure, Cambridge,
MA）を包含する。
て、Enzon, Inc.（Piscataway, NJ）は、ポリエチレン
グリコール（ＰＥＧ）で修飾したウシヘモグロビン（Ｐ
ＥＧ−ＨＧＢと略す）を開発した。ＰＥＧ−ＨＧＢは、
例えば、Nhoらへの米国特許第5,386,014号及び第5,234,
903号明細書に開示されたとおり、ＨＧＢ分子の表面に
ＰＥＧの鎖を架橋結合させるという方法によって製造さ
れる。その他の具体的な、しかし非限定的な例は、Hemo
pure（登録商標）及びOxyglobin（Biopure, Cambridge,
MA）を包含する。
【０００７】第一世代の代用ＨＧＢは、一般的には、外
科手術の際、又は外傷の後の血液／酸素損失の短期処置
の目的が意図された。代用ＨＧＢの一つの短所は、これ
らの製品に帰属する短い循環半減期である。例えば、血
液に加えられた代用ＨＧＢは、輸血された血液の３０日
以内という循環半減期に比して、３６時間以内という循
環半減期を有する。しかし、この比較的短い半減期は、
典型的には、そのような代用血液の使用に付随する重大
な問題ではない。なぜなら、これらの製品は、殆どの場
合、短期処置を目的として指示されるからである。
科手術の際、又は外傷の後の血液／酸素損失の短期処置
の目的が意図された。代用ＨＧＢの一つの短所は、これ
らの製品に帰属する短い循環半減期である。例えば、血
液に加えられた代用ＨＧＢは、輸血された血液の３０日
以内という循環半減期に比して、３６時間以内という循
環半減期を有する。しかし、この比較的短い半減期は、
典型的には、そのような代用血液の使用に付随する重大
な問題ではない。なぜなら、これらの製品は、殆どの場
合、短期処置を目的として指示されるからである。
【０００８】低い血中ヘモグロビン濃度を有する患者に
輸血すべきか否かを決定する際に、輸血の「きっかけ」
は、全血中の約６g/dlのヘモグロビンと約８g/dlのそれ
との間にあり、また数多くの固有の因子、例えば、血液
量の状態、肺、心臓及び脳血管の状態、貧血の慢性度又
は重篤度、血液損失に関連する患者の症状、特定の手順
に予測される血液損失、外科手術からの再出血の危険
性、高危険度患者（すなわち高齢者）、並びに血小板減
少症に左右される。
輸血すべきか否かを決定する際に、輸血の「きっかけ」
は、全血中の約６g/dlのヘモグロビンと約８g/dlのそれ
との間にあり、また数多くの固有の因子、例えば、血液
量の状態、肺、心臓及び脳血管の状態、貧血の慢性度又
は重篤度、血液損失に関連する患者の症状、特定の手順
に予測される血液損失、外科手術からの再出血の危険
性、高危険度患者（すなわち高齢者）、並びに血小板減
少症に左右される。
【０００９】一般に、全血サンプル中のヘモグロビンの
測定は、商業的に入手できる自動化された血液学分析装
置によって実施する。現在まで、一定の血液学分析装
置、例えば、Bayer Corporationから入手できるもの、
例えばＡＤＶＩＡ１２０（登録商標）血液学分析システ
ムを除いて、他の商業的に入手できる血液分析装置は、
総ヘモグロビンのみを測定できるにすきず、外から加え
られたヘモグロビンばかりでなく、血液サンプル中の赤
血球に由来する細胞内ヘモグロビンも含まれる。本発明
は、全血、血漿又は血清サンプル中の外因性ヘモグロビ
ンを、信頼できる、再現可能な、自動化された方法で決
定かつ測定できる能力を提供する。
測定は、商業的に入手できる自動化された血液学分析装
置によって実施する。現在まで、一定の血液学分析装
置、例えば、Bayer Corporationから入手できるもの、
例えばＡＤＶＩＡ１２０（登録商標）血液学分析システ
ムを除いて、他の商業的に入手できる血液分析装置は、
総ヘモグロビンのみを測定できるにすきず、外から加え
られたヘモグロビンばかりでなく、血液サンプル中の赤
血球に由来する細胞内ヘモグロビンも含まれる。本発明
は、全血、血漿又は血清サンプル中の外因性ヘモグロビ
ンを、信頼できる、再現可能な、自動化された方法で決
定かつ測定できる能力を提供する。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、分析
下にある血液、血漿又は血清サンプル、好ましくは全血
サンプル中の異なる種類のヘモグロビン、すなわち
（ｉ）赤血球に由来するヘモグロビン（すなわち、本明
細書に用いられる限りでの、細胞内ヘモグロビン、又は
細胞ヘモグロビン）；（ii）ＨＧＢの添加を必要とする
患者に輸注されたか、又は別途血液、血漿若しくは血清
サンプルに加えられた、細胞外ヘモグロビン、又はヘモ
グロビン製品若しくは代用品、特に無細胞ヘモグロビン
誘導体、例えばＰＥＧ−ＨＧＢ、又は合成形態のヘモグ
ロビン、例えばHemopure（登録商標）（Biopure, Cambr
idge, MA）；Oxyglobin（Biopure, Cambridge, MA）
（すなわち外因性ヘモグロビン）；（iii）総ヘモグロ
ビン（すなわち、細胞内及び外因性ヘモグロビンの併
合）を、特異的かつ正確に検出、定量かつモニターする
自動化された方法及び血液学システムを提供することで
ある。
下にある血液、血漿又は血清サンプル、好ましくは全血
サンプル中の異なる種類のヘモグロビン、すなわち
（ｉ）赤血球に由来するヘモグロビン（すなわち、本明
細書に用いられる限りでの、細胞内ヘモグロビン、又は
細胞ヘモグロビン）；（ii）ＨＧＢの添加を必要とする
患者に輸注されたか、又は別途血液、血漿若しくは血清
サンプルに加えられた、細胞外ヘモグロビン、又はヘモ
グロビン製品若しくは代用品、特に無細胞ヘモグロビン
誘導体、例えばＰＥＧ−ＨＧＢ、又は合成形態のヘモグ
ロビン、例えばHemopure（登録商標）（Biopure, Cambr
idge, MA）；Oxyglobin（Biopure, Cambridge, MA）
（すなわち外因性ヘモグロビン）；（iii）総ヘモグロ
ビン（すなわち、細胞内及び外因性ヘモグロビンの併
合）を、特異的かつ正確に検出、定量かつモニターする
自動化された方法及び血液学システムを提供することで
ある。
【００１１】処置の経過又は処方の間、それを必要とす
る患者又は個体の血液に加えられた、ヘモグロビン又は
ヘモグロビン製品、誘導体若しくは代用品、例えば無細
胞ヘモグロビン誘導体をモニターできる能力を提供する
ことは、本発明のもう一つの目的である。また、本発明
によれば、ヘモグロビン、又はヘモグロビン製品、誘導
体若しくは代用品、例えば無細胞ヘモグロビン誘導体
は、患者が、そのようなヘモグロビン製品、又は該製品
を含有する物質（例えば、生理学的に許容され得る溶液
又は組成物など）を輸注された後に、患者の血液、血漿
又は血清中の外因性ヘモグロビンとしてモニター、決定
又は定量することができる。
る患者又は個体の血液に加えられた、ヘモグロビン又は
ヘモグロビン製品、誘導体若しくは代用品、例えば無細
胞ヘモグロビン誘導体をモニターできる能力を提供する
ことは、本発明のもう一つの目的である。また、本発明
によれば、ヘモグロビン、又はヘモグロビン製品、誘導
体若しくは代用品、例えば無細胞ヘモグロビン誘導体
は、患者が、そのようなヘモグロビン製品、又は該製品
を含有する物質（例えば、生理学的に許容され得る溶液
又は組成物など）を輸注された後に、患者の血液、血漿
又は血清中の外因性ヘモグロビンとしてモニター、決定
又は定量することができる。
【００１２】加えられたか、又は外因性であるヘモグロ
ビン製品若しくは代用血液、例えばＰＥＧ−ＨＧＢの寄
与を、患者の赤血球に由来する細胞ＨＧＢの寄与から別
個に、かつ明確に弁別し、正確に定量するシステムを提
供することも、本発明の更に一つの目的である。本発明
によれば、記載されたとおりの自動化された分析方法及
びシステムは、ヘモグロビン製品により輸注された血液
サンプル中のか、又は検出しようとする細胞外ヘモグロ
ビンを含有する血液、血漿若しくは血清サンプル中の細
胞外ヘモグロビンの特定の濃度を算出する。そのため、
本発明は、与えられたサンプル中の赤血球に由来する細
胞ヘモグロビン成分の存在下であってさえ、細胞外ヘモ
グロビン製品の検出及びモニタリングを許す。加えて、
本方法によって、約０．５g/dlという少量のヘモグロビ
ンを、合計約６．０g/dlの細胞外ヘモグロビン中に検出
することができる。実験を、輸血に妥当であるＨＧＢ濃
度の範囲内、すなわち血中約６〜７g/dlの総ＨＧＢとい
う決定点で実施した。その上、ヘモグロビンは、２４時
間経過後であり、２〜８℃の温度で貯蔵した血液サンプ
ル中で、回復可能であり、定量した。
ビン製品若しくは代用血液、例えばＰＥＧ−ＨＧＢの寄
与を、患者の赤血球に由来する細胞ＨＧＢの寄与から別
個に、かつ明確に弁別し、正確に定量するシステムを提
供することも、本発明の更に一つの目的である。本発明
によれば、記載されたとおりの自動化された分析方法及
びシステムは、ヘモグロビン製品により輸注された血液
サンプル中のか、又は検出しようとする細胞外ヘモグロ
ビンを含有する血液、血漿若しくは血清サンプル中の細
胞外ヘモグロビンの特定の濃度を算出する。そのため、
本発明は、与えられたサンプル中の赤血球に由来する細
胞ヘモグロビン成分の存在下であってさえ、細胞外ヘモ
グロビン製品の検出及びモニタリングを許す。加えて、
本方法によって、約０．５g/dlという少量のヘモグロビ
ンを、合計約６．０g/dlの細胞外ヘモグロビン中に検出
することができる。実験を、輸血に妥当であるＨＧＢ濃
度の範囲内、すなわち血中約６〜７g/dlの総ＨＧＢとい
う決定点で実施した。その上、ヘモグロビンは、２４時
間経過後であり、２〜８℃の温度で貯蔵した血液サンプ
ル中で、回復可能であり、定量した。
【００１３】本発明が与えるそれ以上の目的及び利点
は、以下の詳しい説明から明らかになるであろう。
は、以下の詳しい説明から明らかになるであろう。
【００１４】
【課題を解決しようとする手段】本発明は、全血、血漿
又は血清サンプル中の異なる種類のヘモグロビンを特異
的かつ正確に検出かつ定量するための、自動化された方
法及び血液学システムを提供する。本願の被譲渡人であ
るBayer Corporationが製造し、同社から商業的に入手
できる、自動化された血液学分析装置は、サンプル中の
外因性の、すなわち細胞外のヘモグロビンの濃度を直接
決定かつ測定できることが見出されている。本発明の分
析を実施するのに適する機器は、血液サンプル中のヘモ
グロビンの濃度を測定する、二つの分析チャンネルを有
する。具体的には、また例示のため、BayerのＨシリー
ズ（登録商標）の血液学分析装置という機器、及びBaye
rのＡＤＶＩＡシリーズ（登録商標）の血液学分析装置
という機器［例えばＡＤＶＩＡ１２０］はもとより、類
似の設計又は機能を有する血液学分析装置は、外因性ヘ
モグロビンを含有する血液、血漿及び血清のヘモグロビ
ン含量に対する定量的分析を実施できる能力を有する。
又は血清サンプル中の異なる種類のヘモグロビンを特異
的かつ正確に検出かつ定量するための、自動化された方
法及び血液学システムを提供する。本願の被譲渡人であ
るBayer Corporationが製造し、同社から商業的に入手
できる、自動化された血液学分析装置は、サンプル中の
外因性の、すなわち細胞外のヘモグロビンの濃度を直接
決定かつ測定できることが見出されている。本発明の分
析を実施するのに適する機器は、血液サンプル中のヘモ
グロビンの濃度を測定する、二つの分析チャンネルを有
する。具体的には、また例示のため、BayerのＨシリー
ズ（登録商標）の血液学分析装置という機器、及びBaye
rのＡＤＶＩＡシリーズ（登録商標）の血液学分析装置
という機器［例えばＡＤＶＩＡ１２０］はもとより、類
似の設計又は機能を有する血液学分析装置は、外因性ヘ
モグロビンを含有する血液、血漿及び血清のヘモグロビ
ン含量に対する定量的分析を実施できる能力を有する。
【００１５】その他の商業的に入手できる血液分析装置
は、現在、血液サンプル中の総ヘモグロビン（すなわ
ち、細胞ＨＧＢ、及び細胞外の、外部から加えられたＨ
ＧＢの合併）のみを測定するにすぎない。しかし、本発
明に用いるための自動化された血液学機器、例えば上記
のBayer血液学分析装置は、全血サンプル中の細胞ＨＧ
Ｂ（「算出ＨＧＢ」として報告される）とともに、総ヘ
モグロビン（「ＨＧＢ」として報告される）も別個に、
かつ無関係に決定することができる。現在まで、現在入
手できる血液学分析装置は、全血、血漿又は血清サンプ
ル中の細胞ヘモグロビンと非細胞ヘモグロビン、すなわ
ち外から加えられたヘモグロビンとを同時に検出するこ
とはできず、そのため、これらの測定の値を別個に報告
することができない。
は、現在、血液サンプル中の総ヘモグロビン（すなわ
ち、細胞ＨＧＢ、及び細胞外の、外部から加えられたＨ
ＧＢの合併）のみを測定するにすぎない。しかし、本発
明に用いるための自動化された血液学機器、例えば上記
のBayer血液学分析装置は、全血サンプル中の細胞ＨＧ
Ｂ（「算出ＨＧＢ」として報告される）とともに、総ヘ
モグロビン（「ＨＧＢ」として報告される）も別個に、
かつ無関係に決定することができる。現在まで、現在入
手できる血液学分析装置は、全血、血漿又は血清サンプ
ル中の細胞ヘモグロビンと非細胞ヘモグロビン、すなわ
ち外から加えられたヘモグロビンとを同時に検出するこ
とはできず、そのため、これらの測定の値を別個に報告
することができない。
【００１６】加えて、外因性ヘモグロビン、例えばＰＥ
Ｇ−ＨＧＢ、又は無細胞の酸素運搬性代用ヘモグロビ
ン、例えばHemopure（登録商標）又はOxyglobin（Biopu
re, Cambridge, MA）を例えば輸注を通じて摂取したよ
うな患者における、患者の進行のモニタリングは、他の
商業的に入手できる分析装置では、外から与えられた代
用ＨＧＢが寄与するヘモグロビンと、全血サンプル中の
赤血球が寄与するヘモグロビンとを、特に急性の血液損
失又は自己溶解の場合に、区別できないため、不可能で
あった。
Ｇ−ＨＧＢ、又は無細胞の酸素運搬性代用ヘモグロビ
ン、例えばHemopure（登録商標）又はOxyglobin（Biopu
re, Cambridge, MA）を例えば輸注を通じて摂取したよ
うな患者における、患者の進行のモニタリングは、他の
商業的に入手できる分析装置では、外から与えられた代
用ＨＧＢが寄与するヘモグロビンと、全血サンプル中の
赤血球が寄与するヘモグロビンとを、特に急性の血液損
失又は自己溶解の場合に、区別できないため、不可能で
あった。
【００１７】現在用いられている血液分析装置とは対照
的に、本発明による自動化された分析装置及び方法は、
外因性代用ＨＧＢの寄与を、赤血球に由来する細胞ＨＧ
Ｂの寄与から別個に、かつ明確に弁別し、正確に測定す
ることができる。本明細書に記載される限りで、自動化
された分析装置は、ヘモグロビン製品により輸注された
全血、血漿又は血清サンプル中の細胞外ヘモグロビンの
特定の濃度を算出し、それによって、与えられたサンプ
ル中の赤血球に由来する細胞ヘモグロビン成分の不在下
での、外因性ヘモグロビンの検出及びモニタリングを許
す。加えて、本明細書に記載された分析装置は、加えら
れたヘモグロビン製品を含有する血液サンプルについて
の細胞及び総ヘモグロビン値を与える。
的に、本発明による自動化された分析装置及び方法は、
外因性代用ＨＧＢの寄与を、赤血球に由来する細胞ＨＧ
Ｂの寄与から別個に、かつ明確に弁別し、正確に測定す
ることができる。本明細書に記載される限りで、自動化
された分析装置は、ヘモグロビン製品により輸注された
全血、血漿又は血清サンプル中の細胞外ヘモグロビンの
特定の濃度を算出し、それによって、与えられたサンプ
ル中の赤血球に由来する細胞ヘモグロビン成分の不在下
での、外因性ヘモグロビンの検出及びモニタリングを許
す。加えて、本明細書に記載された分析装置は、加えら
れたヘモグロビン製品を含有する血液サンプルについて
の細胞及び総ヘモグロビン値を与える。
【００１８】本発明は、数多くの無細胞ヘモグロビン誘
導体が、特に外傷の場合に、全血に代えて用いるよう開
発されているため、特に好都合である。したがって、本
発明は、そのような製品が外から血液に加えられ、全血
の代用品として患者に導入され（例えば輸注され）たと
きに、血液、血漿又は血清サンプル中のそのようなヘモ
グロビン製品のレベルを決定、測定かつモニターするた
めの存立できる方法を提供する。
導体が、特に外傷の場合に、全血に代えて用いるよう開
発されているため、特に好都合である。したがって、本
発明は、そのような製品が外から血液に加えられ、全血
の代用品として患者に導入され（例えば輸注され）たと
きに、血液、血漿又は血清サンプル中のそのようなヘモ
グロビン製品のレベルを決定、測定かつモニターするた
めの存立できる方法を提供する。
【００１９】本発明の方法は、様々な医学的な理由で、
無細胞代用赤血球を摂取した、すなわちその血中にヘモ
グロビン、又は酸素運搬性代用血液が加えられた、患者
からの血液サンプル、好ましくは全血サンプルはもとよ
り、血漿及び血清サンプルの分析を包含する。様々な治
療法及び処置条件、例えば、輸血、血液量の回復、急性
の血液損失、外科手術、ショック（例えば出血ショッ
ク）、又は腫瘍の酸素添加を目的として、そのような赤
血球又は酸素運搬性代用血液を必要とする患者を処置す
るために、血液に加えるか、又は代用血液として用いる
ことができる、数多くの無細胞の、ヘモグロビンを基剤
とする代用赤血球が存在することも、更に認識されると
思われる。
無細胞代用赤血球を摂取した、すなわちその血中にヘモ
グロビン、又は酸素運搬性代用血液が加えられた、患者
からの血液サンプル、好ましくは全血サンプルはもとよ
り、血漿及び血清サンプルの分析を包含する。様々な治
療法及び処置条件、例えば、輸血、血液量の回復、急性
の血液損失、外科手術、ショック（例えば出血ショッ
ク）、又は腫瘍の酸素添加を目的として、そのような赤
血球又は酸素運搬性代用血液を必要とする患者を処置す
るために、血液に加えるか、又は代用血液として用いる
ことができる、数多くの無細胞の、ヘモグロビンを基剤
とする代用赤血球が存在することも、更に認識されると
思われる。
【００２０】本発明の方法に従って、全血、血漿又は血
清サンプル中で決定、測定及び／又はモニターすること
ができる、無細胞の、ヘモグロビンを基剤とする代用赤
血球の非限定的な例は、架橋結合させた、特に化学的に
架橋結合させた、ヒトヘモグロビン製品［例えば、Red
Blood Cell Substitutes, 1998, Eds., A.S. Rudolph,
R. Rabinovici, & G.Z. Feuerstein, Dekker, New Yor
k, NY, pp. 353-400中の D.J. Nelson, 1998, "HemAssi
st: Development and Clinical Profile"；J.Adamson e
t al., 1998、同上、pp. 335-351；及びT.M.S. Chang,
1998、同上、pp. 465-473］；組換えヘモグロビン製
品、特に組換えヒトヘモグロビン［例えば、J.H. Siege
l et al., 1998、同上、pp.119-164；及びJ.W. Freytag
& D. Templeton, 1998、同上、pp. 325-222］又は組換
えウシヘモグロビン；精製された、好ましくは超純化さ
れた動物ヘモグロビン製品、例えば超純化されたウシヘ
モグロビン及び超純化されたヒトヘモグロビン；及び動
物に基づく酸素運搬性製品、例えばウシヘモグロビンを
基剤とする酸素運搬体（ＨＢＯＣ）製品、例えば「Hemo
pure（登録商標）」及びOxyglobin（Biopure, Cambridg
e, MA）［W.R. Lightet al., 1998、同上、pp. 421-43
6；T. Standl et al., 1998, Br. J. Anaesth., 80(2):
189-194；及びPalaparthy et al., 2000, Adv. Drug De
livery Reviews, 40:187-198］を包含する。精製又は超
純化されたヘモグロビン製品は、無細胞であり、架橋結
合又は重合させることができる。例えば、Hemopure（登
録商標）及びOxyglobin（Biopure, Cambridge, MA）。
清サンプル中で決定、測定及び／又はモニターすること
ができる、無細胞の、ヘモグロビンを基剤とする代用赤
血球の非限定的な例は、架橋結合させた、特に化学的に
架橋結合させた、ヒトヘモグロビン製品［例えば、Red
Blood Cell Substitutes, 1998, Eds., A.S. Rudolph,
R. Rabinovici, & G.Z. Feuerstein, Dekker, New Yor
k, NY, pp. 353-400中の D.J. Nelson, 1998, "HemAssi
st: Development and Clinical Profile"；J.Adamson e
t al., 1998、同上、pp. 335-351；及びT.M.S. Chang,
1998、同上、pp. 465-473］；組換えヘモグロビン製
品、特に組換えヒトヘモグロビン［例えば、J.H. Siege
l et al., 1998、同上、pp.119-164；及びJ.W. Freytag
& D. Templeton, 1998、同上、pp. 325-222］又は組換
えウシヘモグロビン；精製された、好ましくは超純化さ
れた動物ヘモグロビン製品、例えば超純化されたウシヘ
モグロビン及び超純化されたヒトヘモグロビン；及び動
物に基づく酸素運搬性製品、例えばウシヘモグロビンを
基剤とする酸素運搬体（ＨＢＯＣ）製品、例えば「Hemo
pure（登録商標）」及びOxyglobin（Biopure, Cambridg
e, MA）［W.R. Lightet al., 1998、同上、pp. 421-43
6；T. Standl et al., 1998, Br. J. Anaesth., 80(2):
189-194；及びPalaparthy et al., 2000, Adv. Drug De
livery Reviews, 40:187-198］を包含する。精製又は超
純化されたヘモグロビン製品は、無細胞であり、架橋結
合又は重合させることができる。例えば、Hemopure（登
録商標）及びOxyglobin（Biopure, Cambridge, MA）。
【００２１】本発明による方法において自動化された血
液学分析装置を用いることは、更に利点を与え、それを
ここに説明し、後述するとおり、実施例によって立証す
る。より具体的には、かつ例示のために、本発明による
自動化された血液学分析装置の使用は、凝集防止された
全血サンプルに加えられた、細胞外（又は細胞に由来し
ない）ＰＥＧ−ＨＧＢの検出及び測定を許す（例えば血
液の≧０．２〜５．６g/dl）。また、ＰＥＧ−ＨＧＢ
は、２〜８℃で貯蔵された２４時間経過したサンプルで
回復可能である。加えて、ウシヘモグロビン製品であ
る、やはりBiopureから得られるHemopure（Biopure, Ca
mbridge, MA）及びOxyglobinは、全血及び血漿サンプル
に加えられ、本発明の方法に従って、酸素運搬性代用血
液として正確に検出されている（実施例５及び６）。
液学分析装置を用いることは、更に利点を与え、それを
ここに説明し、後述するとおり、実施例によって立証す
る。より具体的には、かつ例示のために、本発明による
自動化された血液学分析装置の使用は、凝集防止された
全血サンプルに加えられた、細胞外（又は細胞に由来し
ない）ＰＥＧ−ＨＧＢの検出及び測定を許す（例えば血
液の≧０．２〜５．６g/dl）。また、ＰＥＧ−ＨＧＢ
は、２〜８℃で貯蔵された２４時間経過したサンプルで
回復可能である。加えて、ウシヘモグロビン製品であ
る、やはりBiopureから得られるHemopure（Biopure, Ca
mbridge, MA）及びOxyglobinは、全血及び血漿サンプル
に加えられ、本発明の方法に従って、酸素運搬性代用血
液として正確に検出されている（実施例５及び６）。
【００２２】血液サンプル中の加えられたＨＧＢ成分
は、総ＨＧＢ（血液学分析装置のヘモグロビンチャンネ
ルにおける比色分析の吸光度から演算される）と算出さ
れた細胞ＨＧＢ（血液学分析装置の赤血球チャンネルに
おける赤血球（ＲＢＣ）サイトグラムから導かれる）と
の差を決定することによって得られるが、後者は、式：
（ＲＢＣｘＭＣＶｘＣＨＣＭ／１０００）［式中、ＭＣ
Ｖは、平均細胞体積であり；ＣＨＣＭは、細胞ヘモグロ
ビン濃度平均であって、溶血されていない血液中の、Ｍ
ＣＨＣ、すなわち平均細胞ヘモグロビン濃度と同じ細胞
特性を測定する］から算出される。ＣＨＣＭ値は、血液
学分析装置、例えばＡＤＶＩＡ１２０血液学システムの
赤血球チャンネルから得られる。
は、総ＨＧＢ（血液学分析装置のヘモグロビンチャンネ
ルにおける比色分析の吸光度から演算される）と算出さ
れた細胞ＨＧＢ（血液学分析装置の赤血球チャンネルに
おける赤血球（ＲＢＣ）サイトグラムから導かれる）と
の差を決定することによって得られるが、後者は、式：
（ＲＢＣｘＭＣＶｘＣＨＣＭ／１０００）［式中、ＭＣ
Ｖは、平均細胞体積であり；ＣＨＣＭは、細胞ヘモグロ
ビン濃度平均であって、溶血されていない血液中の、Ｍ
ＣＨＣ、すなわち平均細胞ヘモグロビン濃度と同じ細胞
特性を測定する］から算出される。ＣＨＣＭ値は、血液
学分析装置、例えばＡＤＶＩＡ１２０血液学システムの
赤血球チャンネルから得られる。
【００２３】特に、ＣＨＣＭは、Mie理論［Tycko et a
l., 1985, Appl. Optics, 24:1355-1365、及びTyckoへ
の米国特許第4,735,504号明細書を参照されたい］によ
る光散乱の測定から得られる。対照的に、ＭＣＨＣは、
総ＨＧＢを積（ＭＣＶｘＲＢＣ）で除すことによって得
られる。実践的に述べると、ＭＣＨＣは、正常な血液サ
ンプルについては、ＣＨＣＭに厳密に等しくはないが、
これらの値は、密接に一致するのが好ましい。例えば、
加えられたヘモグロビン成分に付随するＭＣＨＣ値は、
好ましくは血液の約０〜５g/dlの範囲内、より好ましく
は血液の約０〜２g/dlのＣＨＣＭ値である。総ヘモグロ
ビンと細胞内ヘモグロビンとの差は、「ＨＧＢデルタ」
（「ＨＧＢΔ」）と呼ばれ、血液サンプル中の外から加
えられたヘモグロビン、例えばＰＥＧ−ＨＧＢの濃度を
表す。
l., 1985, Appl. Optics, 24:1355-1365、及びTyckoへ
の米国特許第4,735,504号明細書を参照されたい］によ
る光散乱の測定から得られる。対照的に、ＭＣＨＣは、
総ＨＧＢを積（ＭＣＶｘＲＢＣ）で除すことによって得
られる。実践的に述べると、ＭＣＨＣは、正常な血液サ
ンプルについては、ＣＨＣＭに厳密に等しくはないが、
これらの値は、密接に一致するのが好ましい。例えば、
加えられたヘモグロビン成分に付随するＭＣＨＣ値は、
好ましくは血液の約０〜５g/dlの範囲内、より好ましく
は血液の約０〜２g/dlのＣＨＣＭ値である。総ヘモグロ
ビンと細胞内ヘモグロビンとの差は、「ＨＧＢデルタ」
（「ＨＧＢΔ」）と呼ばれ、血液サンプル中の外から加
えられたヘモグロビン、例えばＰＥＧ−ＨＧＢの濃度を
表す。
【００２４】ＭＣＨＣ値とＣＨＣＭ値との完全な同等性
の上記の欠如に関する説明は、下記のとおりである。例
えば代表的な食餌の後では、血漿が、僅かな程度の脂肪
血（すなわち、脂質の超顕微鏡的及び顕微鏡的な微細な
粒子の懸濁液、キロミクロンと呼ばれる）を発症するこ
とは稀ではない。粒子の存在は、少量の光散乱を生起
し、それによって、ヘモグロビン計内のヘモグロビン溶
液を通じて伝達される光の量を減少させる。その結果、
溶液は、実際にそうであるよりやや多くのヘモグロビン
を含有するように見える。ヘモグロビン濃度の細胞ごと
の測定は、BayerのＡＤＶＩＡ１２０血液学分析装置に
よって実施され、この誤差を免れる。ＡＤＶＩＡ１２０
は、ΔＨＧＢが１．９g/dlより大きいならば、サンプル
を異常であるとして合図する；すなわち、この量が過剰
である程度の脂肪血を異常であるとするよう較正されて
いる。また、血液サンプルの一部を、患者のin vivoで
か、採集管内でのいずれかで溶血させるならば、あるΔ
ＨＧＢ値も生成される。ＡＤＶＩＡ１２０分析装置が実
施する二つのＨＧＢ測定は、患者のサンプル中のいかな
る脂肪血又は溶血の存在も、内科医又は臨床医に警告す
る。
の上記の欠如に関する説明は、下記のとおりである。例
えば代表的な食餌の後では、血漿が、僅かな程度の脂肪
血（すなわち、脂質の超顕微鏡的及び顕微鏡的な微細な
粒子の懸濁液、キロミクロンと呼ばれる）を発症するこ
とは稀ではない。粒子の存在は、少量の光散乱を生起
し、それによって、ヘモグロビン計内のヘモグロビン溶
液を通じて伝達される光の量を減少させる。その結果、
溶液は、実際にそうであるよりやや多くのヘモグロビン
を含有するように見える。ヘモグロビン濃度の細胞ごと
の測定は、BayerのＡＤＶＩＡ１２０血液学分析装置に
よって実施され、この誤差を免れる。ＡＤＶＩＡ１２０
は、ΔＨＧＢが１．９g/dlより大きいならば、サンプル
を異常であるとして合図する；すなわち、この量が過剰
である程度の脂肪血を異常であるとするよう較正されて
いる。また、血液サンプルの一部を、患者のin vivoで
か、採集管内でのいずれかで溶血させるならば、あるΔ
ＨＧＢ値も生成される。ＡＤＶＩＡ１２０分析装置が実
施する二つのＨＧＢ測定は、患者のサンプル中のいかな
る脂肪血又は溶血の存在も、内科医又は臨床医に警告す
る。
【００２５】本発明以前は、他の商業的に入手できる自
動化された血液学分析装置で、全血サンプル中の細胞内
（又は細胞）ヘモグロビン（「算出ＨＧＢ」）と細胞外
ヘモグロビン（ＨＧＢΔ）とを同時に検出できるもの
は、皆無であった。上記により、本発明は、血液に加え
られた代用ヘモグロビンを、血液の赤血球成分が寄与す
るヘモグロビンと無関係に、加えられた代用ヘモグロビ
ンの量を決定することによってモニターできる能力を提
供する。溶血されていない正常な血液サンプル、及び異
常なそれについて、適正に較正されたシステムによれ
ば、ＨＧＢデルタは、０に等しくなる。
動化された血液学分析装置で、全血サンプル中の細胞内
（又は細胞）ヘモグロビン（「算出ＨＧＢ」）と細胞外
ヘモグロビン（ＨＧＢΔ）とを同時に検出できるもの
は、皆無であった。上記により、本発明は、血液に加え
られた代用ヘモグロビンを、血液の赤血球成分が寄与す
るヘモグロビンと無関係に、加えられた代用ヘモグロビ
ンの量を決定することによってモニターできる能力を提
供する。溶血されていない正常な血液サンプル、及び異
常なそれについて、適正に較正されたシステムによれ
ば、ＨＧＢデルタは、０に等しくなる。
【００２６】本発明の実施態様によれば、本発明に用い
るのに適する血液学分析装置、例えばＡＤＶＩＡ１２０
及びBayerのＨ*（登録商標）システム系列の血液学分析
装置は、二つの分析又は検出チャンネルを保有して、そ
れぞれが、全血又は血漿サンプル中の異なる種類のヘモ
グロビン濃度を測定するため、外因性の細胞外ヘモグロ
ビンの濃度を直接測定することができる。
るのに適する血液学分析装置、例えばＡＤＶＩＡ１２０
及びBayerのＨ*（登録商標）システム系列の血液学分析
装置は、二つの分析又は検出チャンネルを保有して、そ
れぞれが、全血又は血漿サンプル中の異なる種類のヘモ
グロビン濃度を測定するため、外因性の細胞外ヘモグロ
ビンの濃度を直接測定することができる。
【００２７】そのような機器では、分析又は検出チャン
ネルの一方は、ヘモグロビン（ＨＧＢ）チャンネルであ
って、サンプル中の総ヘモグロビンの濃度を、溶血さ
せ、グロビンとのその生物学的複合体からヘムを抽出し
て、結合された鉄（III）ヘム種を形成し、それを界面
活性剤ミセルに捕捉し、分光測光によって測定すること
によって測定する［例えば、M. Malinへの米国特許第5,
858,794号明細書；M. Malin et al., 1992, Anal. Chi
m. Acta, 262:67-77；及びM. Malin et al., 1998, Am.
J. Clin. Path., 92:286-294を参照されたい］。その
ような機器における第二の分析又は検出チャンネルは、
赤血球（ＲＢＣ）チャンネルであって、赤血球濃度、並
びに約10,000の個々の赤血球の平均細胞体積（ＭＣＶ）
及び平均細胞ヘモグロビン濃度を、それらが二つの光散
乱検出器を通過する際に測定する。
ネルの一方は、ヘモグロビン（ＨＧＢ）チャンネルであ
って、サンプル中の総ヘモグロビンの濃度を、溶血さ
せ、グロビンとのその生物学的複合体からヘムを抽出し
て、結合された鉄（III）ヘム種を形成し、それを界面
活性剤ミセルに捕捉し、分光測光によって測定すること
によって測定する［例えば、M. Malinへの米国特許第5,
858,794号明細書；M. Malin et al., 1992, Anal. Chi
m. Acta, 262:67-77；及びM. Malin et al., 1998, Am.
J. Clin. Path., 92:286-294を参照されたい］。その
ような機器における第二の分析又は検出チャンネルは、
赤血球（ＲＢＣ）チャンネルであって、赤血球濃度、並
びに約10,000の個々の赤血球の平均細胞体積（ＭＣＶ）
及び平均細胞ヘモグロビン濃度を、それらが二つの光散
乱検出器を通過する際に測定する。
【００２８】ＨＧＢチャンネルとＲＢＣチャンネルとの
双方を、ＲＢＣを含有する血液サンプルがＲＢＣの光学
的チャンネルを通過する際に、散乱された光を個別の細
胞ベースで検出する、二つの光散乱検出器と結び付けて
有する、血液学分析装置の存在及び設計は、細胞内ヘモ
グロビンと細胞外ヘモグロビンとの差を決定かつ算出で
きるようにし、それによって、本明細書に記載された方
法の実施を与える。本発明の方法を実施できる、適切な
自動化された分析装置の光学的機序の説明については、
Kim & Ornstein, 1983, Cytometry, 3:419-427；Ornste
in及びKimへの米国特許第4,412,004号明細書；Tycko et
al., 1985, Appl. Optics, 24:1355-1365；Tyckoへの
米国特許第4,735,504号明細書；並びにMohandas et a
l., 1986,Blood, 68:506-513を参照されたい。
双方を、ＲＢＣを含有する血液サンプルがＲＢＣの光学
的チャンネルを通過する際に、散乱された光を個別の細
胞ベースで検出する、二つの光散乱検出器と結び付けて
有する、血液学分析装置の存在及び設計は、細胞内ヘモ
グロビンと細胞外ヘモグロビンとの差を決定かつ算出で
きるようにし、それによって、本明細書に記載された方
法の実施を与える。本発明の方法を実施できる、適切な
自動化された分析装置の光学的機序の説明については、
Kim & Ornstein, 1983, Cytometry, 3:419-427；Ornste
in及びKimへの米国特許第4,412,004号明細書；Tycko et
al., 1985, Appl. Optics, 24:1355-1365；Tyckoへの
米国特許第4,735,504号明細書；並びにMohandas et a
l., 1986,Blood, 68:506-513を参照されたい。
【００２９】具体的であるが、限定的ではない例とし
て、BayerのＡＤＶＩＡ１２０血液学分析装置は、総Ｈ
ＧＢ濃度と細胞内ＨＧＢ濃度（すべてのＨＧＢ濃度は、
全血１デシリットルあたりのグラム、すなわちg/dlで示
す）との差（「ＨＧＢデルタ」又は「ＨＧＢΔ」）を、
下記のとおりに算出することができる：ＨＧＢΔ、g/dl
＝総ＨＧＢ、g/dlHGBチャンネル−細胞内ＨＧＢ、g/dl
赤血球 チャンネル
て、BayerのＡＤＶＩＡ１２０血液学分析装置は、総Ｈ
ＧＢ濃度と細胞内ＨＧＢ濃度（すべてのＨＧＢ濃度は、
全血１デシリットルあたりのグラム、すなわちg/dlで示
す）との差（「ＨＧＢデルタ」又は「ＨＧＢΔ」）を、
下記のとおりに算出することができる：ＨＧＢΔ、g/dl
＝総ＨＧＢ、g/dlHGBチャンネル−細胞内ＨＧＢ、g/dl
赤血球 チャンネル
【００３０】上記の等式中、ＨＧＢΔは、血液、血漿又
は血清サンプル中の細胞外ＨＧＢの濃度を表わす。通常
の条件下では、デルタＨＧＢ（ＨＧＢΔ）＝０である。
は血清サンプル中の細胞外ＨＧＢの濃度を表わす。通常
の条件下では、デルタＨＧＢ（ＨＧＢΔ）＝０である。
【００３１】こうして、本発明によれば、総ヘモグロビ
ンは、血液学機器のＨＧＢチャンネルを用いて測定かつ
モニターされるが、ＲＢＣチャンネルは、血液サンプル
の赤血球内に含有された細胞内ＨＧＢのみを検出するに
すぎない。これら二つの測定を減算して、ＨＧＢデルタ
が得られ、これが細胞外ＨＧＢを表わす。
ンは、血液学機器のＨＧＢチャンネルを用いて測定かつ
モニターされるが、ＲＢＣチャンネルは、血液サンプル
の赤血球内に含有された細胞内ＨＧＢのみを検出するに
すぎない。これら二つの測定を減算して、ＨＧＢデルタ
が得られ、これが細胞外ＨＧＢを表わす。
【００３２】本発明によるシステムでは、ＨＧＢデルタ
は、脂肪血及び黄疸の血液サンプル、並びに血球数が増
加したサンプルを包含する、一定の種類の異常又は病理
学的な血液サンプルでＨＧＢチャンネルに得られたＨＧ
Ｂの結果に対する照合を与えるための、読出しパラメー
タとして導入された。そのような異常な血液サンプル
は、人為的に上昇したＨＧＢの結果をＨシステムのＨＧ
Ｂチャンネルに生じることが示されている［M. Malin e
t al., 1989, Am. J. Clin. Path., 92:286-294を参照
されたい］。例えば、ある一定の血液サンプルは、光を
散乱させ、そのような光散乱干渉は、光のいくらかを検
出されなくする。この光散乱干渉は、サンプルについて
の吸収光、若しくは吸光度値に見かけの増加、又は人為
的上昇を生起する。ＨＧＢ濃度は、血液学分析装置の赤
血球チャンネルから得ることができるため［Tycko et a
l., 1985, Appl. Optics, 24:1355-1365］、ＨＧＢ
Δ（又はＨＧＢデルタ）は、分析装置のための読出しパ
ラメータとして導入することができ、分析装置の赤血球
チャンネルから導出された細胞内ヘモグロビンについて
の値を、分析装置のヘモグロビンチャンネルから導出さ
れた総ヘモグロビンについての値から減算して、ＨＧＢ
Δ値（血中のg/dl）が得られることが、本発明者らによ
って新たに見出された。
は、脂肪血及び黄疸の血液サンプル、並びに血球数が増
加したサンプルを包含する、一定の種類の異常又は病理
学的な血液サンプルでＨＧＢチャンネルに得られたＨＧ
Ｂの結果に対する照合を与えるための、読出しパラメー
タとして導入された。そのような異常な血液サンプル
は、人為的に上昇したＨＧＢの結果をＨシステムのＨＧ
Ｂチャンネルに生じることが示されている［M. Malin e
t al., 1989, Am. J. Clin. Path., 92:286-294を参照
されたい］。例えば、ある一定の血液サンプルは、光を
散乱させ、そのような光散乱干渉は、光のいくらかを検
出されなくする。この光散乱干渉は、サンプルについて
の吸収光、若しくは吸光度値に見かけの増加、又は人為
的上昇を生起する。ＨＧＢ濃度は、血液学分析装置の赤
血球チャンネルから得ることができるため［Tycko et a
l., 1985, Appl. Optics, 24:1355-1365］、ＨＧＢ
Δ（又はＨＧＢデルタ）は、分析装置のための読出しパ
ラメータとして導入することができ、分析装置の赤血球
チャンネルから導出された細胞内ヘモグロビンについて
の値を、分析装置のヘモグロビンチャンネルから導出さ
れた総ヘモグロビンについての値から減算して、ＨＧＢ
Δ値（血中のg/dl）が得られることが、本発明者らによ
って新たに見出された。
【００３３】全血サンプル中の細胞内ＨＧＢ濃度を、細
胞外の、又は外から加えられたＨＧＢ濃度はもとより、
総ＨＧＢ濃度にも対比させて測定かつ決定する本方法
は、商業的に入手できるBayerのＨシステム又はＡＤＶ
ＩＡ１２０血液学分析装置という機器のいずれでも使用
かつ実施することができる。しかし、関連する技術の習
熟者には、血中のＨＧＢ濃度を測定する二チャンネルシ
ステムを有する、その他の血液学機器を設計して、本明
細書に記載されたようなＨＧＢ決定及びモニタリングの
方法を実施できること、及びそれらが本発明に包含され
ることを理解されるであろう。やはり本方法に包含され
るのは、二チャンネルヘモグロビン分析システムに依拠
して稼動するよう設計及び／又はプログラムされた、血
液学分析装置の系列又は組合せである。
胞外の、又は外から加えられたＨＧＢ濃度はもとより、
総ＨＧＢ濃度にも対比させて測定かつ決定する本方法
は、商業的に入手できるBayerのＨシステム又はＡＤＶ
ＩＡ１２０血液学分析装置という機器のいずれでも使用
かつ実施することができる。しかし、関連する技術の習
熟者には、血中のＨＧＢ濃度を測定する二チャンネルシ
ステムを有する、その他の血液学機器を設計して、本明
細書に記載されたようなＨＧＢ決定及びモニタリングの
方法を実施できること、及びそれらが本発明に包含され
ることを理解されるであろう。やはり本方法に包含され
るのは、二チャンネルヘモグロビン分析システムに依拠
して稼動するよう設計及び／又はプログラムされた、血
液学分析装置の系列又は組合せである。
【００３４】したがって、本発明は、好ましくはヘモグ
ロビン測定のために二つのチャンネルを有する、自動化
された血液学分析装置で実施される、血液サンプル、好
ましくは全血サンプル中の細胞外ヘモグロビン濃度を直
接決定かつモニターする方法を提供する。該方法は、該
分析装置の、ヘモグロビンを決定、検出及び／又は測定
するのに適したチャンネル内での血液サンプルアリコー
トの総ヘモグロビン濃度の決定を含む。本方法を用い
て、血液の約０．５〜１又は１．１g/dlないし約２５g/
dl、好ましくは約１〜約２５g/dl、より好ましくは約２
〜約２５g/dl、最も好ましくは約６〜約２２g/dlの総ヘ
モグロビン濃度を、血液、血漿若しくは血清サンプル、
又はそのアリコート中で決定することができる。当業者
が認識すると思われるとおり、正常なヘモグロビン値
は、血液の約１１〜１８g/dlの範囲内にある。女性につ
いては、正常ヘモグロビンの範囲は、約１１〜１６g/dl
であり；男性については、正常ヘモグロビンの範囲は、
血液の約１３〜１８g/dlであり；新生児については、正
常ヘモグロビンの範囲は、血液の約１６〜２０g/dlであ
る［Fundamentals of Clinical Chemistry, Eds. N. Ti
etz, W.B. Saunders Co., 1970, p.944］。また、例示
のために、貧血の個体は、典型的には、血液の約６〜約
１２g/dlの範囲内のヘモグロビン値を有する可能性が高
いと思われる。
ロビン測定のために二つのチャンネルを有する、自動化
された血液学分析装置で実施される、血液サンプル、好
ましくは全血サンプル中の細胞外ヘモグロビン濃度を直
接決定かつモニターする方法を提供する。該方法は、該
分析装置の、ヘモグロビンを決定、検出及び／又は測定
するのに適したチャンネル内での血液サンプルアリコー
トの総ヘモグロビン濃度の決定を含む。本方法を用い
て、血液の約０．５〜１又は１．１g/dlないし約２５g/
dl、好ましくは約１〜約２５g/dl、より好ましくは約２
〜約２５g/dl、最も好ましくは約６〜約２２g/dlの総ヘ
モグロビン濃度を、血液、血漿若しくは血清サンプル、
又はそのアリコート中で決定することができる。当業者
が認識すると思われるとおり、正常なヘモグロビン値
は、血液の約１１〜１８g/dlの範囲内にある。女性につ
いては、正常ヘモグロビンの範囲は、約１１〜１６g/dl
であり；男性については、正常ヘモグロビンの範囲は、
血液の約１３〜１８g/dlであり；新生児については、正
常ヘモグロビンの範囲は、血液の約１６〜２０g/dlであ
る［Fundamentals of Clinical Chemistry, Eds. N. Ti
etz, W.B. Saunders Co., 1970, p.944］。また、例示
のために、貧血の個体は、典型的には、血液の約６〜約
１２g/dlの範囲内のヘモグロビン値を有する可能性が高
いと思われる。
【００３５】該方法は、更に、分析装置の、赤血球を決
定、検出及び/又は測定するのに適したチャンネル内で
の血液サンプルアリコートの細胞内（ヘモグロビン）濃
度の決定を含む。本方法を用いて決定かつ測定すること
ができる細胞内ヘモグロビン量は、血液の約０．５〜１
又は１．１g/dlないし約２５g/dl、好ましくは約１〜約
２５g/dl、より好ましくは約４〜約２４g/dl、最も好ま
しくは約５〜約２３g/dlのＨＢＧ濃度を包含する。検出
に最も好ましいＨＧＢ濃度の範囲は、血液の約６〜約１
８g/dlである。本発明の方法によって測定することがで
きる臨界総ヘモグロビン濃度は、約６g/dl、より好まし
くは５．６g/dlであって、これは、輸血するのに適切な
ヘモグロビン濃度である（患者に輸血するための意思決
定点は、約６〜７g/dlの総ヘモグロビンである）。
定、検出及び/又は測定するのに適したチャンネル内で
の血液サンプルアリコートの細胞内（ヘモグロビン）濃
度の決定を含む。本方法を用いて決定かつ測定すること
ができる細胞内ヘモグロビン量は、血液の約０．５〜１
又は１．１g/dlないし約２５g/dl、好ましくは約１〜約
２５g/dl、より好ましくは約４〜約２４g/dl、最も好ま
しくは約５〜約２３g/dlのＨＢＧ濃度を包含する。検出
に最も好ましいＨＧＢ濃度の範囲は、血液の約６〜約１
８g/dlである。本発明の方法によって測定することがで
きる臨界総ヘモグロビン濃度は、約６g/dl、より好まし
くは５．６g/dlであって、これは、輸血するのに適切な
ヘモグロビン濃度である（患者に輸血するための意思決
定点は、約６〜７g/dlの総ヘモグロビンである）。
【００３６】総及び細胞内ヘモグロビン濃度を決定した
とき、これらの値は、総ヘモグロビン濃度と細胞内ヘモ
グロビン濃度との差を算出して、血液サンプル中の細胞
外ヘモグロビン濃度についての値を得るために用いられ
るが、この値は、血液学分析装置によって自動的に算出
される。本発明によれば、血液学分析装置の赤血球チャ
ンネルは、全血中のヘモグロビン濃度を下記のとおりに
測定する：［血液、赤血球チャンネル／細胞内のＨＧ
Ｂ］（g/dl）＝［ＣＨＣＭ（g/dl）ｘＲＢＣ数（細胞／
mm3）ｘＭＣＶ（フェムトリットル／細胞）／1000］。
ＨＧＢチャンネルは、この総ヘモグロビン濃度、すなわ
ち［細胞内ＨＧＢ］＋［細胞外ＨＧＢ］を測定する。
とき、これらの値は、総ヘモグロビン濃度と細胞内ヘモ
グロビン濃度との差を算出して、血液サンプル中の細胞
外ヘモグロビン濃度についての値を得るために用いられ
るが、この値は、血液学分析装置によって自動的に算出
される。本発明によれば、血液学分析装置の赤血球チャ
ンネルは、全血中のヘモグロビン濃度を下記のとおりに
測定する：［血液、赤血球チャンネル／細胞内のＨＧ
Ｂ］（g/dl）＝［ＣＨＣＭ（g/dl）ｘＲＢＣ数（細胞／
mm3）ｘＭＣＶ（フェムトリットル／細胞）／1000］。
ＨＧＢチャンネルは、この総ヘモグロビン濃度、すなわ
ち［細胞内ＨＧＢ］＋［細胞外ＨＧＢ］を測定する。
【００３７】記載された方法によれば、自動化された血
液学分析装置、例えばＡＤＶＩＡ１２０は、総ＨＧＢ濃
度と細胞内ＨＧＢ濃度との差を算出して、細胞外又は外
因性ＨＧＢ濃度に相当する、ＨＧＢデルタを得る。
液学分析装置、例えばＡＤＶＩＡ１２０は、総ＨＧＢ濃
度と細胞内ＨＧＢ濃度との差を算出して、細胞外又は外
因性ＨＧＢ濃度に相当する、ＨＧＢデルタを得る。
【００３８】
【実施例】本明細書に記載される限りでの下記の実施例
は、本発明を実施する様々な態様を例示かつ例証するた
めの意味を有し、いかなる方法であれ、本発明を限定す
ることは意図されない。
は、本発明を実施する様々な態様を例示かつ例証するた
めの意味を有し、いかなる方法であれ、本発明を限定す
ることは意図されない。
【００３９】実施例１ （材料及び方法）ＰＥＧ−ＨＧＢ（Enzon, Inc., Pisca
taway, NJ）は、凍結して受け入れ、冷凍庫内で凍結し
て保存した。使用前に、凍結した袋を解凍し、５０ml入
りポリプロピレン製試験管５本に移した。３本は、後日
の使用のために再凍結し；残る２本を冷蔵庫内で保管し
た。各実験のための適切なアリコートを、試験管内に傾
瀉し、使用前に室温と平衡させた。
taway, NJ）は、凍結して受け入れ、冷凍庫内で凍結し
て保存した。使用前に、凍結した袋を解凍し、５０ml入
りポリプロピレン製試験管５本に移した。３本は、後日
の使用のために再凍結し；残る２本を冷蔵庫内で保管し
た。各実験のための適切なアリコートを、試験管内に傾
瀉し、使用前に室温と平衡させた。
【００４０】ここに記載した実験は、較正されたＡＤＶ
ＩＡ１２０（登録商標）自動化血液学機器（Bayer Corp
oration）で実施した。この機器のヘモグロビンチャン
ネルは、シアン化物含有ＨＧＢ試薬、例えば、M. Malin
への米国特許第5,858,794号明細書に記載のもの、並び
にD. Zelmanovicらへの米国特許第5,817,519号明細書、
及びD. Zelmanovicらへの1997年６月27日付け米国特許
願第08/884,595号明細書に記載されたような赤血球希釈
剤（ＲＢＣ希釈剤）を用いた。
ＩＡ１２０（登録商標）自動化血液学機器（Bayer Corp
oration）で実施した。この機器のヘモグロビンチャン
ネルは、シアン化物含有ＨＧＢ試薬、例えば、M. Malin
への米国特許第5,858,794号明細書に記載のもの、並び
にD. Zelmanovicらへの米国特許第5,817,519号明細書、
及びD. Zelmanovicらへの1997年６月27日付け米国特許
願第08/884,595号明細書に記載されたような赤血球希釈
剤（ＲＢＣ希釈剤）を用いた。
【００４１】ＡＤＶＩＡ１２０血液学システムを較正す
るため、較正剤材料（ＡＤＶＩＡ１２０用Setpoint（登
録商標）較正剤）を１０回吸引し、平均ＨＧＢ値を決定
した。次いで、システムの較正剤係数を、平均較正剤値
が較正剤に対するＨＧＢ（g/dl）についての標識値（g/
dl）に相当するように設定する。ＨＧＢチャンネルの精
度を推計するために、直前に抽出した全血サンプルを、
２０回吸引し、平均及び標準偏差（ＳＤ）を算出した。
許容され得る精度は、次のとおりである：ＳＤ≦０．１
１g/dl。
るため、較正剤材料（ＡＤＶＩＡ１２０用Setpoint（登
録商標）較正剤）を１０回吸引し、平均ＨＧＢ値を決定
した。次いで、システムの較正剤係数を、平均較正剤値
が較正剤に対するＨＧＢ（g/dl）についての標識値（g/
dl）に相当するように設定する。ＨＧＢチャンネルの精
度を推計するために、直前に抽出した全血サンプルを、
２０回吸引し、平均及び標準偏差（ＳＤ）を算出した。
許容され得る精度は、次のとおりである：ＳＤ≦０．１
１g/dl。
【００４２】正常な志願者から得た血液サンプルを、好
ましくはＫ3ＥＤＴＡ（≒１２．１５mg／管）を用い
て、凝固防止した。
ましくはＫ3ＥＤＴＡ（≒１２．１５mg／管）を用い
て、凝固防止した。
【００４３】ここに実施例に記載した実験の殆どは、約
６g/dlのＨＧＢ濃度の水準で実施したが、それは、ＰＥ
Ｇ−ＨＧＢ（Enzon, Inc.）が、６g/dlのウシヘモグロ
ビンを含有すると報告されているからである。回復され
たＨＧＢ値は、５．４±２g/dlであって、血液の６g/dl
という正常値と充分に相関する。加えて、Bayer Corpor
ationの血液学分析装置を用いて実施例のすべてにおい
て、機器のヘモグロビン精度は、各実験の前にＰＥＧ−
ＨＧＢを２回吸引することによって、較正前に照合し
た。
６g/dlのＨＧＢ濃度の水準で実施したが、それは、ＰＥ
Ｇ−ＨＧＢ（Enzon, Inc.）が、６g/dlのウシヘモグロ
ビンを含有すると報告されているからである。回復され
たＨＧＢ値は、５．４±２g/dlであって、血液の６g/dl
という正常値と充分に相関する。加えて、Bayer Corpor
ationの血液学分析装置を用いて実施例のすべてにおい
て、機器のヘモグロビン精度は、各実験の前にＰＥＧ−
ＨＧＢを２回吸引することによって、較正前に照合し
た。
【００４４】実施例２ 血漿サンプル中に加えられたヘモグロビンの回復率を決
定するために、実施例に記載された実験を実施した。こ
の実験では、様々な量のＰＥＧヘモグロビン（Enzon, I
nc.）を、血漿に加え、BayerのＡＤＶＩＡ１２０血液学
機器で分析して、血漿中の外因性ＰＥＧ−ＨＧＢの変動
を査定した。
定するために、実施例に記載された実験を実施した。こ
の実験では、様々な量のＰＥＧヘモグロビン（Enzon, I
nc.）を、血漿に加え、BayerのＡＤＶＩＡ１２０血液学
機器で分析して、血漿中の外因性ＰＥＧ−ＨＧＢの変動
を査定した。
【００４５】エチレンジアミン四酢酸、すなわちＥＤＴ
Ａ中に採集した正常な血液サンプル（「正常ＥＤＴＡ全
血」）のアリコートを含む管１０本を、７５０ｘｇで遠
心分離した。血漿を取り出し、次いで再遠心分離して、
無細胞血漿を得た。管７本のそれぞれに、表１に示した
とおりの量の血漿及びＰＥＧ−ＨＧＢを加えて、各管内
に４．０mlの最終体積を得た。各管を４回吸引して、複
製値を決定した。
Ａ中に採集した正常な血液サンプル（「正常ＥＤＴＡ全
血」）のアリコートを含む管１０本を、７５０ｘｇで遠
心分離した。血漿を取り出し、次いで再遠心分離して、
無細胞血漿を得た。管７本のそれぞれに、表１に示した
とおりの量の血漿及びＰＥＧ−ＨＧＢを加えて、各管内
に４．０mlの最終体積を得た。各管を４回吸引して、複
製値を決定した。
【００４６】
【表１】
【００４７】４つの複製ＨＧＢ値を平均し、期待された
結果と観察されたそれとの差の百分率を算出した（表１
を参照されたい）。
結果と観察されたそれとの差の百分率を算出した（表１
を参照されたい）。
【００４８】これらの複製実験の結果は、出力像に基づ
いて（表１）、外から与えられたヘモグロビン、すなわ
ちＰＥＧ−ＨＧＢ（Enzon, Inc.）が、自動化された血
液学分析装置という機器の、ＲＢＣチャンネルからでは
なく、ヘモグロビンチャンネルから検出されたことを示
している。これは、ＰＥＧ−ＨＧＢがすべて細胞外ヘモ
グロビンとして存在することと一致する。加えて、回復
率は、実験の設計に応じて線形であった。すべてのＨＧ
Ｂレベルは、０．２g/dl、又は予測値の２％という線形
という仕様に合致した。
いて（表１）、外から与えられたヘモグロビン、すなわ
ちＰＥＧ−ＨＧＢ（Enzon, Inc.）が、自動化された血
液学分析装置という機器の、ＲＢＣチャンネルからでは
なく、ヘモグロビンチャンネルから検出されたことを示
している。これは、ＰＥＧ−ＨＧＢがすべて細胞外ヘモ
グロビンとして存在することと一致する。加えて、回復
率は、実験の設計に応じて線形であった。すべてのＨＧ
Ｂレベルは、０．２g/dl、又は予測値の２％という線形
という仕様に合致した。
【００４９】実施例３ 本実施例では、不変の濃度のヘモグロビンを、血液学分
析装置のＨＧＢチャンネルから測定した限りで総ヘモグ
ロビンが変化する、全血の基質に加える実験を実施し
た。
析装置のＨＧＢチャンネルから測定した限りで総ヘモグ
ロビンが変化する、全血の基質に加える実験を実施し
た。
【００５０】正常なＥＤＴＡ全血の管１０本を、７５０
ｘｇで遠心分離した。無細胞血漿を取り出し、赤血球を
プールした。赤血球のアリコートを取り出し、総ヘモグ
ロビン濃度が１０g/dl、すなわち充填された赤血球約６
mlプラス血漿１４mlとなるように、血漿を加えた。必要
とした１０g/dlのアリコートの総量は、１５mlであっ
た。６本の管のそれぞれに、１０g/dlのアリコート及び
無細胞血漿の体積を、表３に示した量で加えて、６．
０、５．０、４．０、３．０、２．０及び１．０g/dlの
濃度を生成した。
ｘｇで遠心分離した。無細胞血漿を取り出し、赤血球を
プールした。赤血球のアリコートを取り出し、総ヘモグ
ロビン濃度が１０g/dl、すなわち充填された赤血球約６
mlプラス血漿１４mlとなるように、血漿を加えた。必要
とした１０g/dlのアリコートの総量は、１５mlであっ
た。６本の管のそれぞれに、１０g/dlのアリコート及び
無細胞血漿の体積を、表３に示した量で加えて、６．
０、５．０、４．０、３．０、２．０及び１．０g/dlの
濃度を生成した。
【００５１】
【表２】
【００５２】表２の「Ａ」サンプル２mlを、ＰＥＧ−Ｈ
ＧＢ２mlで希釈した。等量のＰＥＧ−ＨＧＢを等量の各
アリコートに加えたため（すなわち６．０g/dl、５．０
g/dl、４．０g/dl、３．０g/dl、２．０g/dl及び１．０
g/dl）、各アリコートの細胞ＨＧＢと細胞外ＨＧＢとの
双方が、５０％低下した。そのため、５．６g/dlの濃度
の未希釈であるＰＥＧ−ＨＧＢは、各アリコート中２．
８g/dlに低下した。総ＨＧＢは、細胞外ＰＥＧ−ＨＧＢ
と細胞ＨＧＢとの和に等しかった。各管を５回吸引し
て、複製の結果を求めた。
ＧＢ２mlで希釈した。等量のＰＥＧ−ＨＧＢを等量の各
アリコートに加えたため（すなわち６．０g/dl、５．０
g/dl、４．０g/dl、３．０g/dl、２．０g/dl及び１．０
g/dl）、各アリコートの細胞ＨＧＢと細胞外ＨＧＢとの
双方が、５０％低下した。そのため、５．６g/dlの濃度
の未希釈であるＰＥＧ−ＨＧＢは、各アリコート中２．
８g/dlに低下した。総ＨＧＢは、細胞外ＰＥＧ−ＨＧＢ
と細胞ＨＧＢとの和に等しかった。各管を５回吸引し
て、複製の結果を求めた。
【００５３】
【表３】
【００５４】本実施例で表３に提示された結果は、不変
の濃度の細胞外ＰＥＧ−ＨＧＢを、細胞内ＨＧＢ濃度が
変化する全血基質に加えたとき、細胞外ＰＥＧ−ＨＧＢ
と細胞ＨＧＢとの双方の許容され得る回復率が存在した
ことを示す。表３の結果は、ＰＥＧ−ＨＧＢを低い細胞
ＨＧＢの全血サンプルに加えたとき、ＰＥＧ−ＨＧＢの
量は、BayerのＡＤＶＩＡ１２０の機器で回復可能かつ
測定可能であったことを示す。ＰＥＧ−ＨＧＢで強化し
たヒト血液サンプル中の、外因性ＨＧＢはもとより、細
胞ＨＧＢの値も回復する本方法の許容され得る性能を考
慮すると、該方法は、上記のとおり、輸血された患者
の、加えられた無細胞ＨＧＢ誘導体、又は酸素運搬性代
用ＨＧＢを含有する血液、血漿又は血清サンプル、特に
全血サンプルに用いるための類似の適用可能性を与え
る。
の濃度の細胞外ＰＥＧ−ＨＧＢを、細胞内ＨＧＢ濃度が
変化する全血基質に加えたとき、細胞外ＰＥＧ−ＨＧＢ
と細胞ＨＧＢとの双方の許容され得る回復率が存在した
ことを示す。表３の結果は、ＰＥＧ−ＨＧＢを低い細胞
ＨＧＢの全血サンプルに加えたとき、ＰＥＧ−ＨＧＢの
量は、BayerのＡＤＶＩＡ１２０の機器で回復可能かつ
測定可能であったことを示す。ＰＥＧ−ＨＧＢで強化し
たヒト血液サンプル中の、外因性ＨＧＢはもとより、細
胞ＨＧＢの値も回復する本方法の許容され得る性能を考
慮すると、該方法は、上記のとおり、輸血された患者
の、加えられた無細胞ＨＧＢ誘導体、又は酸素運搬性代
用ＨＧＢを含有する血液、血漿又は血清サンプル、特に
全血サンプルに用いるための類似の適用可能性を与え
る。
【００５５】実施例４ 本実施例は、全血サンプルに外から加えられたＰＥＧ−
ＨＧＢの安定性を示すデータを提示する。様々な量のＰ
ＥＧ−ＨＧＢ（５．６g/dl）への様々な量の全血（６．
０g/dlＨＧＢ）の添加（表４Ａ）によって、サンプルを
調製した。各サンプルを４回吸引した。サンプルを、調
製の１時間後、次いで、５℃で冷蔵した２４時間後に検
定した（表４Ｂ）。
ＨＧＢの安定性を示すデータを提示する。様々な量のＰ
ＥＧ−ＨＧＢ（５．６g/dl）への様々な量の全血（６．
０g/dlＨＧＢ）の添加（表４Ａ）によって、サンプルを
調製した。各サンプルを４回吸引した。サンプルを、調
製の１時間後、次いで、５℃で冷蔵した２４時間後に検
定した（表４Ｂ）。
【００５６】これらの実験から、ＰＥＧ−ＨＧＢ代用ヘ
モグロビンは、血液サンプルを２〜８℃で貯蔵したと
き、２４時間後も回復可能であることが立証された。表
４Ａ及び４Ｂに示されたとおり、２〜８℃で２４時間貯
蔵された血液サンプル中の総ＨＧＢ、算出ＨＧＢ（すな
わち細胞ＨＧＢ）又はＨＧＢデルタ（すなわち細胞外Ｈ
ＧＢ）には、ゼロ時点での値からの変化が実質的に皆無
であった（表４Ａ）。したがって、赤血球数が貯蔵の間
安定であるならば、ＨＧＢデルタも、ＰＥＧ−ＨＧＢの
存在のために、２〜８℃で２４時間の貯蔵後も不変であ
った。
モグロビンは、血液サンプルを２〜８℃で貯蔵したと
き、２４時間後も回復可能であることが立証された。表
４Ａ及び４Ｂに示されたとおり、２〜８℃で２４時間貯
蔵された血液サンプル中の総ＨＧＢ、算出ＨＧＢ（すな
わち細胞ＨＧＢ）又はＨＧＢデルタ（すなわち細胞外Ｈ
ＧＢ）には、ゼロ時点での値からの変化が実質的に皆無
であった（表４Ａ）。したがって、赤血球数が貯蔵の間
安定であるならば、ＨＧＢデルタも、ＰＥＧ−ＨＧＢの
存在のために、２〜８℃で２４時間の貯蔵後も不変であ
った。
【００５７】
【表４】
【００５８】
【表５】
【００５９】実施例５ 本実施例は、もう一つの酸素運搬性代用血液、すなわち
無細胞のグルタルアルデヒド重合ヘモグロビンに基づく
酸素運搬体（ＨＢＯＣ）である、Biopure Corporation
（Cambridge, MA）から得られるHemopure（登録商標）
の、ＡＤＶＩＡ１２０血液学分析装置（Bayer Corporat
ion）で本発明に従って実施された限りでの分析的測定
を説明する。Hemopureは、グルタルアルデヒドと重合さ
せて、500,000のＭＷを有するオリゴマーを生成した、
ウシヘモグロビンである。重合は、腎排出率を低下させ
るために、この製品に設計された。
無細胞のグルタルアルデヒド重合ヘモグロビンに基づく
酸素運搬体（ＨＢＯＣ）である、Biopure Corporation
（Cambridge, MA）から得られるHemopure（登録商標）
の、ＡＤＶＩＡ１２０血液学分析装置（Bayer Corporat
ion）で本発明に従って実施された限りでの分析的測定
を説明する。Hemopureは、グルタルアルデヒドと重合さ
せて、500,000のＭＷを有するオリゴマーを生成した、
ウシヘモグロビンである。重合は、腎排出率を低下させ
るために、この製品に設計された。
【００６０】Hemopure製品を用いて、２種類の実験を実
施し、記載した：（１）Hemopureをヒト血漿中に強化
し、（２）Hemopureをヒト全血中に強化してから、自動
化血液学分析を実施し、外因性ヘモグロビン濃度を決定
した。
施し、記載した：（１）Hemopureをヒト血漿中に強化
し、（２）Hemopureをヒト全血中に強化してから、自動
化血液学分析を実施し、外因性ヘモグロビン濃度を決定
した。
【００６１】血液又は血漿サンプル中の外因性ヘモグロ
ビン物質としてのHemopureを測定する実験は、ＡＤＶＩ
Ａ１２０自動化血液学分析装置を用いた、上記の実施例
に記載したとおりに実施した。本発明によれば、ＡＤＶ
ＩＡ１２０分析装置は、総ヘモグロビンとＲＢＣ細胞内
ヘモグロビンとの濃度の差を算出して、ヘモグロビンデ
ルタ（すなわち外因性ヘモグロビン）を得る。
ビン物質としてのHemopureを測定する実験は、ＡＤＶＩ
Ａ１２０自動化血液学分析装置を用いた、上記の実施例
に記載したとおりに実施した。本発明によれば、ＡＤＶ
ＩＡ１２０分析装置は、総ヘモグロビンとＲＢＣ細胞内
ヘモグロビンとの濃度の差を算出して、ヘモグロビンデ
ルタ（すなわち外因性ヘモグロビン）を得る。
【００６２】（無細胞血漿中でのＨＢＯＣという外因性
ＨＧＢ（Hemopure）の回復）ＨＢ４Ｌ水平バケットロー
ターを装備したSorvallのＲ−３（登録商標）遠心分離
器内で、２４００rpm（６２０ｘｇ）で２５分間の遠心
分離によって、血漿を得た。血漿上清を、６２０ｘｇで
１０分間遠心分離し、ペレットを除去した。無細胞血漿
を、ガラス管に下記のとおりに配分した：５．００、
４．７５、４．５０、３．００、２．００、１．００及
び０．００ml。これらの管内に、Hemopure製品を、それ
ぞれ、下記のとおりに加えて、総体積を５．００mlとし
た：０．００、０．２５、０．５０、１．００、２．０
０、３．００、４．００及び５．００ml。管に栓をし、
反転（１０回）によって混合し、次いで、管１本あたり
５本の複製を用いて、ＡＤＶＩＡ１２０で３０〜６０分
後に検定した。総ＨＧＢ、細胞内ＨＧＢ及びＨＧＢデル
タの濃度を作表した。
ＨＧＢ（Hemopure）の回復）ＨＢ４Ｌ水平バケットロー
ターを装備したSorvallのＲ−３（登録商標）遠心分離
器内で、２４００rpm（６２０ｘｇ）で２５分間の遠心
分離によって、血漿を得た。血漿上清を、６２０ｘｇで
１０分間遠心分離し、ペレットを除去した。無細胞血漿
を、ガラス管に下記のとおりに配分した：５．００、
４．７５、４．５０、３．００、２．００、１．００及
び０．００ml。これらの管内に、Hemopure製品を、それ
ぞれ、下記のとおりに加えて、総体積を５．００mlとし
た：０．００、０．２５、０．５０、１．００、２．０
０、３．００、４．００及び５．００ml。管に栓をし、
反転（１０回）によって混合し、次いで、管１本あたり
５本の複製を用いて、ＡＤＶＩＡ１２０で３０〜６０分
後に検定した。総ＨＧＢ、細胞内ＨＧＢ及びＨＧＢデル
タの濃度を作表した。
【００６３】結果を表５に要約した（表中、検定結果
は、５本の複製の平均である）。Hemopure製品について
は、予測されたＨＧＢデルタと検定されたＨＧＢデルタ
との差は、０又は０．１であり、したがって、ＡＤＶＩ
Ａ１２０分析装置の０．２g/dl、又は２％の相対差とい
うＨＧＢ線形仕様内であった。すべてのレベルについ
て、細胞内ＨＧＢ濃度は、実験の設計が要求するとお
り、０であった。データは、外因性ＨＧＢの回復率が、
血漿という基質中で、０．６〜１３．０g/dlの範囲にわ
たって線形であったことを示している。
は、５本の複製の平均である）。Hemopure製品について
は、予測されたＨＧＢデルタと検定されたＨＧＢデルタ
との差は、０又は０．１であり、したがって、ＡＤＶＩ
Ａ１２０分析装置の０．２g/dl、又は２％の相対差とい
うＨＧＢ線形仕様内であった。すべてのレベルについ
て、細胞内ＨＧＢ濃度は、実験の設計が要求するとお
り、０であった。データは、外因性ＨＧＢの回復率が、
血漿という基質中で、０．６〜１３．０g/dlの範囲にわ
たって線形であったことを示している。
【００６４】
【表６】
【００６５】（全血中でのＨＢＯＣという外因性ＨＧＢ
（Hemopure）の回復）志願者から得られ、Ｋ3ＥＤＴＡ
中で凝固防止した全血を、総ＨＧＢ濃度が１３．０g/dl
になるよう操作を加えた。全血を、ガラス管に下記のと
おりに配分した：５．００、４．７５、４．５０、４．
００、３．００、２．００、１．００及び０．００ml。
これらの管内に、Hemopureを、それぞれ、下記のとおり
に加えて、総体積を５．００mlとした：０．００、０．
２５、０．５０、１．００、２．００、３．００、４．
００及び５．００ml。管に栓をし、反転（１０回）によ
って混合し、次いで、管１本あたり５本の複製を用い
て、ＡＤＶＩＡ１２０で３０〜６０分後に検定した。総
ＨＧＢ、細胞内ＨＧＢ及びＨＧＢデルタの濃度を作表し
た。
（Hemopure）の回復）志願者から得られ、Ｋ3ＥＤＴＡ
中で凝固防止した全血を、総ＨＧＢ濃度が１３．０g/dl
になるよう操作を加えた。全血を、ガラス管に下記のと
おりに配分した：５．００、４．７５、４．５０、４．
００、３．００、２．００、１．００及び０．００ml。
これらの管内に、Hemopureを、それぞれ、下記のとおり
に加えて、総体積を５．００mlとした：０．００、０．
２５、０．５０、１．００、２．００、３．００、４．
００及び５．００ml。管に栓をし、反転（１０回）によ
って混合し、次いで、管１本あたり５本の複製を用い
て、ＡＤＶＩＡ１２０で３０〜６０分後に検定した。総
ＨＧＢ、細胞内ＨＧＢ及びＨＧＢデルタの濃度を作表し
た。
【００６６】全血及びHemopureを用いて、細胞内ＨＧＢ
濃度を、細胞外ＨＧＢ濃度を上昇させるに連れて、低下
させた。結果を表６に要約した（表中、検定結果は、５
本の複製の平均である）。Hemopure製品については、予
測されたＨＧＢデルタと検定されたＨＧＢデルタとの差
は、概して０又は０．１であり、ＡＤＶＩＡ１２０分析
装置のＨＧＢ線形仕様を越えなかった。すべてのレベル
について、細胞内ＨＧＢ濃度は、実験の設計が要求する
とおり、０であった。データは、外因性ＨＧＢの回復率
が、全血という基質中で、０．０９〜１３．０g/dlの範
囲にわたって線形であったことを示している。
濃度を、細胞外ＨＧＢ濃度を上昇させるに連れて、低下
させた。結果を表６に要約した（表中、検定結果は、５
本の複製の平均である）。Hemopure製品については、予
測されたＨＧＢデルタと検定されたＨＧＢデルタとの差
は、概して０又は０．１であり、ＡＤＶＩＡ１２０分析
装置のＨＧＢ線形仕様を越えなかった。すべてのレベル
について、細胞内ＨＧＢ濃度は、実験の設計が要求する
とおり、０であった。データは、外因性ＨＧＢの回復率
が、全血という基質中で、０．０９〜１３．０g/dlの範
囲にわたって線形であったことを示している。
【００６７】
【表７】
【００６８】実施例６ 本実施例は、もう一つの無細胞酸素運搬性代用血液であ
る、Oxyglobin（Biopure Corporation, Cambridge, M
A）の、ＡＤＶＩＡ１２０血液学機器（Bayer Corporati
on）で本発明に従って実施された分析的測定を説明す
る。Hemopureと同様に、Oxyglobinも、グルタルアルデ
ヒド重合ヘモグロビンの無細胞溶液である。
る、Oxyglobin（Biopure Corporation, Cambridge, M
A）の、ＡＤＶＩＡ１２０血液学機器（Bayer Corporati
on）で本発明に従って実施された分析的測定を説明す
る。Hemopureと同様に、Oxyglobinも、グルタルアルデ
ヒド重合ヘモグロビンの無細胞溶液である。
【００６９】実施例５におけるとおり、Oxyglobin製品
を用いて、２種類の実験を実施した：（１）Oxyglobin
をヒト血漿中に強化し、（２）Oxyglobinをヒト全血中
に強化してから、自動化血液学分析を実施した。
を用いて、２種類の実験を実施した：（１）Oxyglobin
をヒト血漿中に強化し、（２）Oxyglobinをヒト全血中
に強化してから、自動化血液学分析を実施した。
【００７０】血液又は血漿サンプル中の外因性ヘモグロ
ビン物質としてのOxyglobinを測定する実験は、ＡＤＶ
ＩＡ１２０自動化血液学分析装置を用いた、上記の実施
例に記載したとおりに実施した。
ビン物質としてのOxyglobinを測定する実験は、ＡＤＶ
ＩＡ１２０自動化血液学分析装置を用いた、上記の実施
例に記載したとおりに実施した。
【００７１】（無細胞血漿中でのOxyglobinの回復）Ｈ
Ｂ４Ｌ水平バケットローターを装備したSorvallのＲ−
３（登録商標）遠心分離器内で、２４００rpm（６２０
ｘｇ）で２５分間の遠心分離によって、血漿を得た。血
漿上清を、６２０ｘｇで１０分間遠心分離し、ペレット
を除去した。無細胞血漿を、ガラス管に下記のとおりに
配分した：５．００、４．７５、４．５０、３．００、
２．００、１．００及び０．００ml。これらの管内に、
Oxyglobin製品を、それぞれ、下記のとおりに加えて、
総体積を５．００mlとした：０．００、０．２５、０．
５０、１．００、２．００、３．００、４．００及び
５．００ml。管に栓をし、反転（１０回）によって混合
し、次いで、管１本あたり５本の複製を用いて、ＡＤＶ
ＩＡ１２０で３０〜６０分後に検定した。総ＨＧＢ、細
胞内ＨＧＢ及びＨＧＢデルタの濃度を作表した。
Ｂ４Ｌ水平バケットローターを装備したSorvallのＲ−
３（登録商標）遠心分離器内で、２４００rpm（６２０
ｘｇ）で２５分間の遠心分離によって、血漿を得た。血
漿上清を、６２０ｘｇで１０分間遠心分離し、ペレット
を除去した。無細胞血漿を、ガラス管に下記のとおりに
配分した：５．００、４．７５、４．５０、３．００、
２．００、１．００及び０．００ml。これらの管内に、
Oxyglobin製品を、それぞれ、下記のとおりに加えて、
総体積を５．００mlとした：０．００、０．２５、０．
５０、１．００、２．００、３．００、４．００及び
５．００ml。管に栓をし、反転（１０回）によって混合
し、次いで、管１本あたり５本の複製を用いて、ＡＤＶ
ＩＡ１２０で３０〜６０分後に検定した。総ＨＧＢ、細
胞内ＨＧＢ及びＨＧＢデルタの濃度を作表した。
【００７２】結果を表７に要約した（表中、検定結果
は、５本の複製の平均である）。Hemopure製品について
観察されたとおり（実施例５）、予測されたＨＧＢデル
タと検定されたＨＧＢデルタとの差は、０又は０．１で
あり、したがって、ＡＤＶＩＡ１２０分析装置の０．２
g/dl、又は２％の相対差というＨＧＢ線形仕様内であっ
た。すべてのレベルについて、細胞内ＨＧＢ濃度は、実
験の設計が要求するとおり、０であった。データは、外
因性ＨＧＢの回復率が、血漿という基質中で、０．６〜
１３．０g/dlの範囲にわたって線形であったことを示し
ている。
は、５本の複製の平均である）。Hemopure製品について
観察されたとおり（実施例５）、予測されたＨＧＢデル
タと検定されたＨＧＢデルタとの差は、０又は０．１で
あり、したがって、ＡＤＶＩＡ１２０分析装置の０．２
g/dl、又は２％の相対差というＨＧＢ線形仕様内であっ
た。すべてのレベルについて、細胞内ＨＧＢ濃度は、実
験の設計が要求するとおり、０であった。データは、外
因性ＨＧＢの回復率が、血漿という基質中で、０．６〜
１３．０g/dlの範囲にわたって線形であったことを示し
ている。
【００７３】
【表８】
【００７４】（全血中でのOxyglobinの回復）志願者か
ら得られ、Ｋ3ＥＤＴＡ中で凝固防止した全血を、総Ｈ
ＧＢ濃度が１３．０g/dlになるよう操作を加えた。全血
を、ガラス管に下記のとおりに配分した：５．００、
４．７５、４．５０、４．００、３．００、２．００、
１．００及び０．００ml。Oxyglobin（Biopure，Cambri
dge, MA）を、それぞれ、下記のとおりに管に加えて、
各管内の総体積を５．００mlとした：０．００、０．２
５、０．５０、１．００、２．００、３．００、４．０
０及び５．００ml。管に栓をし、反転（１０回）によっ
て混合し、次いで、管１本あたり５本の複製を用いて、
ＡＤＶＩＡ１２０で３０〜６０分後に検定した。総ＨＧ
Ｂ、細胞内ＨＧＢ及びＨＧＢデルタの濃度を作表した。
ら得られ、Ｋ3ＥＤＴＡ中で凝固防止した全血を、総Ｈ
ＧＢ濃度が１３．０g/dlになるよう操作を加えた。全血
を、ガラス管に下記のとおりに配分した：５．００、
４．７５、４．５０、４．００、３．００、２．００、
１．００及び０．００ml。Oxyglobin（Biopure，Cambri
dge, MA）を、それぞれ、下記のとおりに管に加えて、
各管内の総体積を５．００mlとした：０．００、０．２
５、０．５０、１．００、２．００、３．００、４．０
０及び５．００ml。管に栓をし、反転（１０回）によっ
て混合し、次いで、管１本あたり５本の複製を用いて、
ＡＤＶＩＡ１２０で３０〜６０分後に検定した。総ＨＧ
Ｂ、細胞内ＨＧＢ及びＨＧＢデルタの濃度を作表した。
【００７５】全血及びOxyglobin製品を用いて、細胞内
ＨＧＢ濃度を、細胞外ＨＧＢ濃度を上昇させるに連れ
て、低下させた。結果を表８に要約した（表中、検定結
果は、５本の複製の平均である）。Hemopure製品につい
て観察された結果と同様に、予測されたＨＧＢデルタと
検定されたＨＧＢデルタとの差は、概して０又は０．１
であり、ＡＤＶＩＡ１２０分析装置のＨＧＢ線形仕様を
越えなかった。すべてのレベルについて、細胞内ＨＧＢ
濃度は、実験の設計が要求するとおり、０であった。デ
ータは、外因性ＨＧＢの回復率が、全血という基質中
で、０．０９〜１３．０g/dlの範囲にわたって線形であ
ったことを示している。
ＨＧＢ濃度を、細胞外ＨＧＢ濃度を上昇させるに連れ
て、低下させた。結果を表８に要約した（表中、検定結
果は、５本の複製の平均である）。Hemopure製品につい
て観察された結果と同様に、予測されたＨＧＢデルタと
検定されたＨＧＢデルタとの差は、概して０又は０．１
であり、ＡＤＶＩＡ１２０分析装置のＨＧＢ線形仕様を
越えなかった。すべてのレベルについて、細胞内ＨＧＢ
濃度は、実験の設計が要求するとおり、０であった。デ
ータは、外因性ＨＧＢの回復率が、全血という基質中
で、０．０９〜１３．０g/dlの範囲にわたって線形であ
ったことを示している。
【００７６】
【表９】
【００７７】実施例５及び６に記載された実験の結果
は、酸素運搬性代用血液のHemopure及びOxyglobin（Bio
pure, Cambridge, MA）が、Bayer CorporationのＡＤＶ
ＩＡ１２０血液学分析装置のような自動化血液学分析装
置によって、直接方式で定量的に検出され得たことを立
証する。ＡＤＶＩＡ１２０分析装置は、血漿及び全血中
のHemopure及びOxyglobin材料を０．６〜１３g/dlの範
囲にわたって直接かつ定量的に検出することができた。
ＡＤＶＩＡ１２０は、これらの代用ヘモグロビンを細胞
外ヘモグロビンとして報告した。
は、酸素運搬性代用血液のHemopure及びOxyglobin（Bio
pure, Cambridge, MA）が、Bayer CorporationのＡＤＶ
ＩＡ１２０血液学分析装置のような自動化血液学分析装
置によって、直接方式で定量的に検出され得たことを立
証する。ＡＤＶＩＡ１２０分析装置は、血漿及び全血中
のHemopure及びOxyglobin材料を０．６〜１３g/dlの範
囲にわたって直接かつ定量的に検出することができた。
ＡＤＶＩＡ１２０は、これらの代用ヘモグロビンを細胞
外ヘモグロビンとして報告した。
【００７８】本明細書に記載されたとおり、また本発明
による自動化血液学分析装置の操作によれば、ヘモグロ
ビンチャンネルは、サンプル中の総ＨＧＢ濃度を、その
中のＨＧＢと、界面活性剤ミセルの存在下でのシアン化
物イオンとの相互作用によって、比色分析で測定する
［M.J. Malin et al., 1992, Anal. Chim. Acta, 262:6
7-77及びM.J. Malin et al., 1989, J. Amer. Clin. Pa
th., 92:286-294を参照されたい］。したがって、総Ｈ
ＧＢは、細胞内ＨＧＢと細胞外ＨＧＢとの合併である。
対照的に、ＲＢＣチャンネルは、典型的には、サンプル
中に存在する細胞内ＨＧＢのみを登録するにすぎない。
この自動化システムは、総ＨＧＢレベルと細胞内ＨＧＢ
レベルとの差を得ることによって、細胞外ＨＧＢの濃度
を算出する。両材料とも、血漿及び全血の基質中で、線
形実験における仕様内で回復された。
による自動化血液学分析装置の操作によれば、ヘモグロ
ビンチャンネルは、サンプル中の総ＨＧＢ濃度を、その
中のＨＧＢと、界面活性剤ミセルの存在下でのシアン化
物イオンとの相互作用によって、比色分析で測定する
［M.J. Malin et al., 1992, Anal. Chim. Acta, 262:6
7-77及びM.J. Malin et al., 1989, J. Amer. Clin. Pa
th., 92:286-294を参照されたい］。したがって、総Ｈ
ＧＢは、細胞内ＨＧＢと細胞外ＨＧＢとの合併である。
対照的に、ＲＢＣチャンネルは、典型的には、サンプル
中に存在する細胞内ＨＧＢのみを登録するにすぎない。
この自動化システムは、総ＨＧＢレベルと細胞内ＨＧＢ
レベルとの差を得ることによって、細胞外ＨＧＢの濃度
を算出する。両材料とも、血漿及び全血の基質中で、線
形実験における仕様内で回復された。
【００７９】実施例７ 水中での吸収スペクトルによって、Hemopure及びOxyglo
binという材料（Biopure, Cambridge, MA）は、ヘム基
を酸素添加することができるヘモグロビン誘導体である
ことを確認した。より具体的には、Hemopure、Oxyglobi
n及び全血を、MilliQによる蒸留水中に２５１倍に希釈
し、混合し、Cary 3という分光光度計で、蒸留水に対比
して７５０〜４５０nmを走査した。全血、及び２種類の
代用血液のスペクトルは、それぞれ、５４１nm及び５７
７nmで最高スペクトルを、また５０８nm及び５６０nmで
最低スペクトルを示した。これらの特徴は、全血と比較
したときのオキシヘモグロビンのそれに特徴的である
［van Kampen & Ziljstra, 1965, Adv. Clin. Chem.,
8:141］。Hemopure及びOxyglobin製品は、酸素添加され
た水中のオキシヘモグロビンのスペクトルを有するた
め、ヘムの鉄は、全血ヘモグロビンにおけると同様に、
鉄（II）酸化状態にある。
binという材料（Biopure, Cambridge, MA）は、ヘム基
を酸素添加することができるヘモグロビン誘導体である
ことを確認した。より具体的には、Hemopure、Oxyglobi
n及び全血を、MilliQによる蒸留水中に２５１倍に希釈
し、混合し、Cary 3という分光光度計で、蒸留水に対比
して７５０〜４５０nmを走査した。全血、及び２種類の
代用血液のスペクトルは、それぞれ、５４１nm及び５７
７nmで最高スペクトルを、また５０８nm及び５６０nmで
最低スペクトルを示した。これらの特徴は、全血と比較
したときのオキシヘモグロビンのそれに特徴的である
［van Kampen & Ziljstra, 1965, Adv. Clin. Chem.,
8:141］。Hemopure及びOxyglobin製品は、酸素添加され
た水中のオキシヘモグロビンのスペクトルを有するた
め、ヘムの鉄は、全血ヘモグロビンにおけると同様に、
鉄（II）酸化状態にある。
【００８０】実施例８ Hemopure及びOxyglobin（Biopure Corporation, Cambri
dge, MA）製品は、ともに、シアン化物含有ヘモグロビ
ン試薬で２５１倍に希釈し、ＡＤＶＩＡ１２０血液学分
析装置で分析したときに、全血中のヘモグロビンのよう
な挙動を示した。特に、Hemopure及びOxyglobin２０μl
を、それぞれ、ＡＤＶＩＡ１２０分析装置で用いられる
とおりに、シアン化物含有ヘモグロビン試薬５．０mlに
希釈した。サンプルを混合し、次いで、Cary3の分光光
度計で７５０〜４５０nmを走査し、１cmの経路長のキュ
ベット内で試薬と比較した。Ａ750は、０に設定した。
対照として、新鮮な人血のアリコートを、試験製品につ
いて上に述べたとおりに処理した。結果を表９に要約す
るが、これは、シアン化物含有ヘモグロビン試薬中の、
ヘモグロビンに基づく酸素運搬体と全血との最高及び最
低スペクトルを示す。
dge, MA）製品は、ともに、シアン化物含有ヘモグロビ
ン試薬で２５１倍に希釈し、ＡＤＶＩＡ１２０血液学分
析装置で分析したときに、全血中のヘモグロビンのよう
な挙動を示した。特に、Hemopure及びOxyglobin２０μl
を、それぞれ、ＡＤＶＩＡ１２０分析装置で用いられる
とおりに、シアン化物含有ヘモグロビン試薬５．０mlに
希釈した。サンプルを混合し、次いで、Cary3の分光光
度計で７５０〜４５０nmを走査し、１cmの経路長のキュ
ベット内で試薬と比較した。Ａ750は、０に設定した。
対照として、新鮮な人血のアリコートを、試験製品につ
いて上に述べたとおりに処理した。結果を表９に要約す
るが、これは、シアン化物含有ヘモグロビン試薬中の、
ヘモグロビンに基づく酸素運搬体と全血との最高及び最
低スペクトルを示す。
【００８１】
【表１０】
【００８２】データは、BiopureのＨＢＯＣの双方が、
シアン化物含有ヘモグロビン試薬との反応に関しては、
人血と類似することを示している。スペクトルは、すべ
て、５５０nｍで最高値を、また５１４nmで最低値を類
似の最高／最低吸光比で示した。この実験は、Hemopure
及びOxyglobin製品は、ともに、ＨＧＢ試薬中で得られ
た生成物が、ミセル化されたジシアノＦｅ+3プロトポル
フィリンIXであることから［M. Malin et al., 1992, A
nal. Chim. Acta, 262:67-77を参照されたい］、ヘムを
有することを立証している。
シアン化物含有ヘモグロビン試薬との反応に関しては、
人血と類似することを示している。スペクトルは、すべ
て、５５０nｍで最高値を、また５１４nmで最低値を類
似の最高／最低吸光比で示した。この実験は、Hemopure
及びOxyglobin製品は、ともに、ＨＧＢ試薬中で得られ
た生成物が、ミセル化されたジシアノＦｅ+3プロトポル
フィリンIXであることから［M. Malin et al., 1992, A
nal. Chim. Acta, 262:67-77を参照されたい］、ヘムを
有することを立証している。
【００８３】本明細書に引用されたすべての特許、特許
願、公表された論文、書籍、参考文献、マニュアル及び
抄録は、本発明が関与する当技術の状態を、より充分に
説明するために、参照によってその全体がここに組み込
まれる。
願、公表された論文、書籍、参考文献、マニュアル及び
抄録は、本発明が関与する当技術の状態を、より充分に
説明するために、参照によってその全体がここに組み込
まれる。
【００８４】上記の主題事項には、様々な変化を、本発
明の範囲及び精神から逸脱せずに加えることができるた
め、上記の説明に含まれるか、又は冒頭の請求の範囲に
定義される主題事項は、すべて、本発明を説明かつ例示
するとして解されるものとする。本発明の多くの変更及
び変化形が、上記の教示に照らして可能である。
明の範囲及び精神から逸脱せずに加えることができるた
め、上記の説明に含まれるか、又は冒頭の請求の範囲に
定義される主題事項は、すべて、本発明を説明かつ例示
するとして解されるものとする。本発明の多くの変更及
び変化形が、上記の教示に照らして可能である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 フィリス、シャピロ アメリカ合衆国カネティカット州06902、 スタムフォード、フィールドストウン・ロ ウド 51番 Ｆターム(参考） 2G045 AA13 BB29 BB39 CA02 CA25 CA26 DA51 FA14 FA17 GA02 GA06 GA07 GA08 GA09 GC10 GC11 JA01 JA07
Claims (31)
- 【請求項１】 ヘモグロビン測定のための少なくとも二
つの分析チャンネルを有する自動化された血液学分析装
置で実施される、全血、血漿又は血清サンプル中の細胞
外ヘモグロビンを決定、定量かつモニターする方法であ
って、 （ａ）該サンプルのアリコート中の総ヘモグロビン濃度
を該分析装置のヘモグロビン分析チャンネルで決定する
段階と； （ｂ）該サンプルアリコート中の細胞ヘモグロビン濃度
を該分析装置の赤血球分析チャンネルで決定する段階
と； （ｃ）該分析装置のヘモグロビンチャンネルから決定さ
れた総ヘモグロビン濃度と、赤血球チャンネルから決定
された細胞ヘモグロビン濃度との差を算出して、全血、
血漿又は血清サンプル中の細胞外ヘモグロビン濃度を得
る段階と；を含む方法。 - 【請求項２】 サンプルが正常な全血サンプルである請
求項１記載の方法。 - 【請求項３】 サンプルが異常な全血サンプルである請
求項１記載の方法。 - 【請求項４】 サンプルが血漿又は血清サンプルである
請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 段階（ａ）における総ヘモグロビン濃度
が、血液、血漿又は血清の約０．５〜約２５g/dlである
請求項１記載の方法。 - 【請求項６】 段階（ａ）における総ヘモグロビン濃度
が、血液、血漿又は血清の約６〜約２２g/dlである請求
項５記載の方法。 - 【請求項７】 段階（ｂ）における細胞ヘモグロビン濃
度が、血液、血漿又は血清の約０．５〜約２５g/dlであ
る請求項１記載の方法。 - 【請求項８】 段階（ｂ）における細胞ヘモグロビン濃
度が、血液、血漿又は血清の約４〜約２４g/dlである請
求項７記載の方法。 - 【請求項９】 細胞ヘモグロビン濃度が、血液、血漿又
は血清の約６．０g/dlである請求項８記載の方法。 - 【請求項１０】 異常な全血サンプルが、病理学的状態
を有する個体に由来する請求項３記載の方法。 - 【請求項１１】 病理学的状態が、外科手術の際の血液
損失、外傷の際の血液損失、及び出血性ショックから選
ばれる請求項１０記載の方法。 - 【請求項１２】 段階（ａ）のヘモグロビン分析チャン
ネルが、溶血、及び界面活性剤ミセルに捕捉できる結合
鉄（III）ヘム種を形成することによる、グロビンとの
その生物学的複合体のからのヘムの抽出によってサンプ
ル中の総ヘモグロビン濃度を測定する請求項１記載の方
法。 - 【請求項１３】 段階（ｂ）の赤血球分析チャンネル
が、個体の赤血球の赤血球濃度、赤血球量及びヘモグロ
ビン濃度を、それらが二つの光散乱検出器を一度に実質
的に１細胞ずつ通過する際に測定する請求項１記載の方
法。 - 【請求項１４】 段階（ａ）の総ヘモグロビン濃度を、
分析器のヘモグロビンチャンネルにおける比色分析の吸
光度から決定する請求項１記載の方法。 - 【請求項１５】 段階（ｂ）の細胞ヘモグロビンを、
式： ＲＢＣｘＭＣＶｘＣＨＣＭ／１０００ ［式中、ＲＢＣは、血液学分析装置の赤血球チャンネル
における赤血球サイトグラムの値であり；ＭＣＶは、平
均細胞体積であり；ＣＨＣＭは、血液学分析装置の赤血
球チャンネルから得られた細胞ヘモグロビン濃度の平均
である］によって決定する請求項１記載の方法。 - 【請求項１６】 サンプル中の細胞外ヘモグロビンが、
血中の無細胞ヘモグロビン製品又は酸素運搬性代用ヘモ
グロビンの存在に起因する請求項１記載の方法。 - 【請求項１７】 無細胞ヘモグロビン製品又は酸素運搬
性代用ヘモグロビンが、精製されたヘモグロビン、組換
えヘモグロビン、架橋結合ヘモグロビン、重合ヘモグロ
ビン、及びポリエチレングリコールにカップリングさせ
たヘモグロビン（ＰＥＧ−ＨＧＢ）よりなる群から選ば
れる請求項１６記載の方法。 - 【請求項１８】 精製ヘモグロビンが、精製ウシヘモグ
ロビン又は精製ヒトヘモグロビンである請求項１７記載
の方法。 - 【請求項１９】 組換えヘモグロビンが、組換えヒトヘ
モグロビンである請求項１７記載の方法。 - 【請求項２０】 ヘモグロビン測定のための少なくとも
二つの分析チャンネルを有する自動化された血液学分析
装置で実施される、全血、血漿又は血清サンプル中の細
胞外ヘモグロビンを決定、定量かつモニターする自動化
された方法であって、 （ａ）全血、血漿又は血清サンプルのアリコート中の総
ヘモグロビン濃度を該分析装置のヘモグロビン分析チャ
ンネルで決定するが、ここで、該ヘモグロビン分析チャ
ンネルは、溶血、及び界面活性剤ミセルに捕捉できる結
合鉄（III）ヘム種を形成することによる、グロビンと
のその生物学的複合体のからのヘムの抽出によってサン
プル中の総ヘモグロビン濃度を測定する段階と； （ｂ）該サンプルアリコート中の細胞ヘモグロビン濃度
を該分析装置の赤血球分析チャンネル内で決定するが、
ここで、該赤血球分析チャンネルは、個体の赤血球の赤
血球濃度、赤血球量及びヘモグロビン濃度を、それらが
二つの光散乱検出器を一度に実質的に１細胞ずつ通過す
る際に測定する段階と； （ｃ）該分析装置のヘモグロビンチャンネルから決定さ
れた総ヘモグロビン濃度と、赤血球チャンネルから決定
された細胞ヘモグロビン濃度との差を算出して、全血、
血漿又は血清サンプル中の細胞外ヘモグロビン濃度を得
る段階と；を含む方法。 - 【請求項２１】 サンプルが正常な全血サンプル、又は
異常な全血サンプルである請求項２０記載の方法。 - 【請求項２２】 サンプルが血漿又は血清サンプルであ
る請求項２０記載の方法。 - 【請求項２３】 段階（ａ）における総ヘモグロビン濃
度が、血液、血漿又は血清の約０．５〜約２５g/dlであ
り；段階（ｂ）における細胞ヘモグロビン濃度が、血
液、血漿又は血清の約０．５〜約２５g/dlである請求項
２０記載の方法。 - 【請求項２４】 細胞ヘモグロビン濃度が、約６．０g/
dlである請求項２３記載の方法。 - 【請求項２５】 異常な全血サンプルが、病理学的状態
を有する個体に由来する請求項２０記載の方法。 - 【請求項２６】 病理学的条件が、外科手術の際の血液
損失、外傷の際の血液損失、及び出血性ショックから選
ばれる請求項２５記載の方法。 - 【請求項２７】 サンプル中の細胞外ヘモグロビンが、
血中の無細胞ヘモグロビン製品又は酸素運搬性代用ヘモ
グロビンの存在に起因する請求項２０記載の方法。 - 【請求項２８】 無細胞ヘモグロビン製品又は酸素運搬
性代用ヘモグロビンが、精製ヘモグロビン、組換えヘモ
グロビン、架橋結合ヘモグロビン、重合ヘモグロビン、
精製ウシヘモグロビン、及びポリエチレングリコールに
カップリングさせたヘモグロビン（ＰＥＧ−ＨＧＢ）か
ら選ばれる請求項２７記載の方法。 - 【請求項２９】 精製ヘモグロビンが、精製ウシヘモグ
ロビン又は精製ヒトヘモグロビンである請求項２８記載
の方法。 - 【請求項３０】 組換えヘモグロビンが、組換えヒトヘ
モグロビンである請求項２８記載の方法。 - 【請求項３１】 段階（ｂ）の細胞ヘモグロビンを、
式： ＲＢＣｘＭＣＶｘＣＨＣＭ／１０００ ［式中、ＲＢＣは、血液学分析装置の赤血球チャンネル
における赤血球サイトグラムの値であり；ＭＣＶは、平
均細胞体積であり；ＣＨＣＭは、血液学分析装置の赤血
球チャンネルから得られた細胞ヘモグロビン濃度の平均
である］によって決定する請求項２０記載の方法。
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