JP2001511183A

JP2001511183A - 癌または感染症の予防／治療のための熱ショック／ストレスタンパク質−ペプチド複合体を用いた養子免疫療法

Info

Publication number: JP2001511183A
Application number: JP53488098A
Authority: JP
Inventors: スリヴァスタヴァ，プラモッド，ケイ．
Original assignee: フォーダムユニバーシティー
Priority date: 1997-02-07
Filing date: 1998-02-03
Publication date: 2001-08-07
Also published as: US6322790B1; AU742986B2; AU6056498A; CA2280945A1; US5830464A; EP1001807A4; EP1001807A1; WO1998034642A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、免疫応答を引き出すための、並びに原発性または転移性の新生物疾患および感染症を予防もしくは治療するための、方法および組成物に関する。本発明の方法は、本質的に抗原性分子に非共有結合で結合された熱ショックタンパク質(hsp)からなる複合体の有効量を含有する組成物を投与すると共に、抗原性分子に非共有結合で結合されたhspからなる複合体により感作された抗原提示細胞を投与することを含む。本明細書中で用いる「抗原性分子」とは、in vivoでhspと内因的に結合しているペプチドおよび外因性の抗原／免疫原（すなわち、invivoでhspと複合体を形成していない）またはその抗原性／免疫原性の断片もしくは誘導体を意味する。好ましい実施形態において、この複合体は自己のものである。特定の実施形態において、皮内に投与される前記複合体の有効量は、hsp70を含む複合体では0.1〜9.0μg、hsp90を含む複合体では5〜49μg、そしてgp96を含む複合体では0.1〜9.0μgの範囲である。他の実施形態において、皮下に投与される前記複合体の有効量は、hsp70を含む複合体では10〜600μg、hsp90を含む複合体では50〜5000μg、そしてgp96を含む複合体では10〜600μgの範囲である。

Description

【発明の詳細な説明】癌または感染症の予防／治療のための熱ショック／ストレスタンパク質-ペプチド複合体を用いた養子免疫療法本発明は、米国立衛生研究所から受けた助成第CA44786号および第CA64394号に基づく政府の援助によりなされた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。１．緒言本発明は、感染症、原発性および転移性の腫瘍性疾患（ヒトの肉腫および癌腫を含むが、これらに限定されるものではない）の予防および治療のための方法および組成物に関する。本発明の実施において、抗原分子に非共有結合した熱ショック／ストレスタンパク質（hsps）（単独のhsp70、hsp90、gp96またはそれら相互の組合せを含むが、これらに限定されるものではない）の複合体の組成物は、遺伝子毒性因子または非遺伝子毒性因子、腫瘍および感染性因子に対する免疫応答を増強するために、hsp抗原分子非共有結合性複合体で感作した抗原提示細胞とともに、投与される。２．発明の背景腫瘍免疫学の時代は、PrehnおよびMainによる実験から始まった。彼らは、メチルコラントレン（MCA）により誘発された肉腫上の抗原が、移植アッセイにおいてマウスの正常組織で検出できなかったことから、この抗原が腫瘍特異的なものであることを示した（Prehn，R.T.ら，1957，J．Natl．Cancer Inst．18:769- 778）。この見解は、MCAにより誘発された腫瘍に対する腫瘍特異的抵抗性が、自己由来の宿主（すなわち、その腫瘍が由来するマウス）において惹起されうることを立証するさらなる実験により確認された（Klein，G．ら，1960，Cancer Res ．20:1561-1572）。その後の研究において、腫瘍特異的抗原は、他の化学的または物理的発癌性物質で誘発された腫瘍上または自然発生腫瘍上にも見出された（Kripke，M.L.，19 74，J．Natl．Cancer Inst．53:1333-1336;Vaage，J.，1968，Cancer Res．28:2 477-2483;Carswell，E.A.ら，1970，J．Natl．Cancer Inst．44:1281-1288）。これらの研究では、移植された腫瘍の増殖に対する防御免疫が腫瘍特異的抗原に関する基準として用いられたため、これらの抗原は、一般に、「腫瘍特異的移植抗原」または「腫瘍特異的拒絶抗原」とも称される。いくつかの因子は、誘発された腫瘍の免疫原性（例えば、関与する特定の型の発癌性物質を含む）、宿主の免疫適格性および潜伏期に著しい影響を及ぼしうる（Old，L.J.ら，1962，Ann． N.Y.Acad．Sci．101:80-106;Bartlett，G.L.，1972，J．Natl．Cancer Inst.49: 493-504）。すべてというわけではないが、ほとんどの発癌性物質は、腫瘍特異的抗原の発現につながる突然変異を引き起こしうる突然変異誘発物質である（Ames，B.N.， 1979，Science 204:587-593;Weisburger，J.H.ら，1981，Science 214:401-407 ）。いくつかの発癌性物質は免疫抑制性である（Malmgren，R.A.ら，1952，Proc ．Soc．Exp．Biol．Med．79:484-488）。実験的証拠は、腫瘍の免疫原性と潜伏期（発癌性物質に対する曝露から腫瘍出現までの時間）との間に一定の逆相関の関係が存在することを示唆している（Old，L.J.ら，1962，Ann．N.Y．Acad．Sci ．101:80-106;およびBartlett，G.L.，1972，J．Natl．Cancer Inst．49:493-50 4）。拒絶につながらないが、それでもなお特異的免疫応答を刺激する可能性のある腫瘍特異的抗原の存在が、他の研究から明らかにされている（Roitt，I.，B rostoff，JおよびMale，D.，1993，Immunology，第３版，Mosby，St．Louis，pp s．17.1-17.12）。２．１．熱ショック／ストレスタンパク質hsp70、hsp90およびgp96の腫痕特異的免疫原性 Srivastavaらは、メチルコラントレンにより誘発された近交マウスの肉腫に対する免疫応答を示した（1988，Immunol．Today 9:78-83）。これらの研究において、これらの腫瘍のそれぞれ異なる免疫原性を引き起こす分子は、96kDaの細胞表面糖タンパク質（gp96）および84〜86kDaの細胞内タンパク質と同定されることが判明した（Srivastava，P.K.ら，1986，Proc．Natl．Acad．Sci．USA83 :3407-3411;Ullrich，S.J.ら，1986，Proc．Natl．Acad．Sci．USA83:3121-3125 ）。ある特定の腫瘍から単離されたgp96またはp84/86でマウスを免疫すると、そのマウスは、その特定の腫瘍に対しては免疫されたが、抗原的に異なる腫瘍に対しては免疫されなかった。gp96およびp84/86をコードする遺伝子の単離および特徴づけから、それらの間の有意な相同性が示され、gp96およびp84/86は、それぞれ、同じ熱ショックタンパク質の小胞体およびサイトゾルの等価体であることが示された（Srivastava，P.K.ら，1988，Immunogenetics 28:205-207;Srivastava ，P.K.ら，1991，Curr．Top．Microbiol．Immunol．167:109-123）。さらに、hs p70は、それが単離された腫瘍に対する免疫は惹起するが、抗原的に異なる腫瘍に対する免疫は惹起しないことが示されている。しかしながら、ペプチドが枯渇したhsp70は、その免疫原性活性を失うことが判明した（Udono，M.およびSrivas tava，P.K.，1993，J．Exp．Med．178:1391-1396）。これらの観察は、これらの熱ショックタンパク質は、それら自体が免疫原性なのではなく、癌に対して特異的な免疫を惹起する抗原性ペプチドの担体であることを示唆している（Srivasta va，P.K.，1993，Adv．Cancer Res.62:153-177）。２．２．癌の病理生物学癌は、主に、ある与えられた正常な組織に由来する異常な細胞の数の増加、これらの異常細胞による隣接組織への浸潤、および局所リンパ腺および別の部位への悪性細胞のリンパ行性または血液行性の広がり（転移）により特徴づけられる。臨床データおよび分子生物学的研究から、癌は、ある条件下で新形成にまで進行しうる小さな腫瘍発現前変化から始まる複数段階の過程であることが示されている。前癌性異常細胞増殖は、過形成、異形成、または最も厳密には異形成により例示される（そのような異常増殖状態の概説としては、RobbinsおよびAngell，197 6，Basic Pathology,第２版，W.B．Saunders Co.，Philadelphia，pp.68- 79を参照されたし）。過形成は、構造または機能の有意な変化を伴うことなく組織または器官内の細胞数の増加を含む制御された細胞増殖の形態である。一例だけを挙げると、子宮内膜増殖症は、しばしば、子宮内膜癌に先行する。化生は、ある１つの型の成体細胞または完全に分化した細胞が別の型の成体細胞に置換される制御された細胞増殖の形態である。化生は、上皮性組織細胞または結合組織細胞において生じうる。例外的な化生は、いくらか無秩序な化生上皮を含む。異形成は、しばしば、癌の前兆であり、主として上皮に見出され、非腫瘍性細胞増殖の最も無秩序な形態であり、個々の細胞の均質性の喪失および細胞の構造的配向の喪失を伴う。異形成細胞は、しばしば、異常に大きな濃く染色された核を有し、多形性を示す。異形成は、慢性的な刺激または炎症が存在する部位に特徴的に生じ、しばしば、頚、呼吸通路、口腔および胆嚢に見出される。腫瘍性病変は、クローン的に生成し、特に、腫瘍細胞が宿主の免疫監視機構から逃れる条件下で、浸潤、増殖、転移および不均質化の能力を次第に増強することがある（Roitt，I.，Brostoff，JおよびKale，D.，1993，Immunology，第３版，Mosby，St．Louis，pps．17.1-17.12）。２．３．免疫療法以下の４つの基本的な細胞型が、抗腫瘍性細胞免疫および身体からの腫瘍細胞の除去と機能的に関連している：i）非自己の侵入細胞を同定し標識するために血漿中に免疫グロブリンを分泌するB−リンパ球、ii）免疫グロブリンで覆われた標的侵入細胞の溶解およびプロセシングを引き起こす補体タンパク質を分泌する単球、iii）腫瘍細胞の破壊（抗体依存性細胞傷害）およびナチュラルキリング（natural killing）のための２つの機構を有するナチュラルキラーリンパ球、およびiv）抗原特異的受容体を有するTリンパ球および相補マーカー分子を保持する腫瘍細胞を認識する能力を有する各Tリンパ球クローン（Schreiber，H.， 1989，Fundamental Immunology，W.E．Paul編，pp．923-955）。いくつかの因子が、誘発された腫瘍の免疫原性に影響を及ぼしうる。これらの因子には、発癌性物質の量、宿主の免疫適格性、および潜伏期が含まれる。癌の誘発および発生の期間中の宿主の免疫適格性により、宿主が免疫原性腫瘍細胞に応答するのが可能となる。これは、これらの細胞の増殖を妨げるか、あるいは、それぞれの拒絶抗原を喪失しているはるかに少数の免疫原性逸脱変異体（im munogenic escape variant）を選択するかもしれない。逆に、発癌または腫瘍形成の間の宿主の免疫抑制または免疫不全により、高い免疫原性の腫瘍の増殖が許容されるかもしれない（Schreiber，H.，1989，Fundamental Immunology，W.E． Paul編，pp．923-955）。以下の主要な３つのタイプの癌免疫療法が現在研究されている：i）養子細胞免疫療法、ii）遮断因子を除去し、殺腫瘍性因子を加えるための患者の血漿のin vivo操作、およびiii）生体応答調節物質（例えば、インターフェロン（IFN；I FN−アルファおよびIFN−ガンマ）、インターロイキン（IL；IL−2、IL−4およびIL−6）、コロニー刺激因子、腫瘍壊死因子（TNF）、モノクローナル抗体、およびコリネバクテリウム・パルブム(C．parvum)などの他の免疫強化剤）のin vi vo投与（Kopp，W.C.ら，1994，Cancer Chemotherapy and Bjol．Response Modif iers 15:226-286）。癌の免疫療法の現状が、それに対する期待に添うものでないことほとんど明らかである。多数の免疫療法的アプローチが試されているが、これらの方法のうち、癌の予防および治療の単独の形態として、あるいはたとえ補助的な形態としても、有効だと判明しているものはほとんどない。２．３．１.養子細胞性免疫療法癌の養子免疫療法とは、腫瘍を保持する宿主に抗腫瘍反応性を有する免疫細胞を投与することによって、形成された腫瘍の退行をこれらの細胞に直接的または間接的に媒介させることを目的とした治療方法をいう。リンパ球、特にTリンパ球の注入はこのカテゴリーに当てはまり、国立癌研究所（NCI）の研究者らは、ヒトの数種の癌を治療するために、末梢血液リンパ球または腫瘍浸潤性リンパ球（TIL）、皮下リンパ小節の生検材料からのT細胞培養物、の自系再注入を使用してきた（Rosenberg，S.A.，米国特許第4,690,914号、1987年９月１日発行；Rose nberg，S.A.ら、1988，N．England J．Med．319:1676-1680）。例えば、インターロイキン（IL）-2の存在下においてin vitroで広がったTILを癌患者に養子転移し、これにより転移性黒色腫を有する選択された患者において腫瘍を退行させた。IL-2の中で増殖した黒色腫TILは活性化Tリンパ球CD3⁺HLA-DR⁺ と同定されたが、これは独特のin vitro抗腫瘍特性を有する優性なCD８⁺細胞である。多くの長期黒色腫TIL培養物は、特定のMHCクラスI-およびT細胞抗原受容体に依存するようなかたちで自己由来腫瘍を溶解する（Topalian，S.L.ら、1989 、J．Immunol．142：3714）。しかし、他のタイプの腫瘍に由来するTILの研究では、細胞溶解性もしくは増殖性の抗腫瘍免疫特異性については僅かな証拠しか示されなかった（Topalian，S.L.ら、1990，Important Advances in Oncology，V. T．DeVita，S.A．HellmanおよびS.A．Rosenberg編、J.B．Lippincott，Philadel phia，pp.19-41）。さらに、NCIグループが主張した高投与量のIL-2+活性化リンパ球治療の毒性はかなりのものであり、これにより引き起こされるものには高熱、重症硬直、低血圧、毛細血管の漏出症候群による内皮壁の損傷、および不整脈や心筋梗塞などの心臓の様々な異常が含まれる（Rosenberg S.A.ら、1988，N．E ngland J．Med．319:1676-1680）。２．３．２．インターロイキン（IL−2、IL−4およびIL−6） IL−２は、腎細胞癌および黒色腫の患者のごく一部において、有意な抗腫瘍活性を有する。研究者らは、IL−２応答性腫瘍の応答率を増加させるIL−２に基づく治療方式を探り続けているが、大部分の場合、新たな適用を明らかにしていないし、また、IL−２療法において用量強度が重要であるか否かなどの基本的な問題を解決していない（Kopp，W.C.ら，1994，Cancer Chemotherapy and Biol．Re sponse Modifiers 15:226-286）。多数の報告が、硝酸塩レベルの増加、血管漏出および低血圧の症候群（敗血症性ショックに類似したもの）などのIL−２に関連した毒性を実証している。さらに、非日和見細菌感染症および自己免疫合併症の発生率の増加は、しばしば、IL−２の抗腫瘍性応答を伴う（Kopp，W.C.ら，19 94，Cancer Chemotherapy and Biol．Response Modifiers 15:226-286）。また、IL−４およびIL−６が、直接的に又は免疫修飾機構を介して、抗腫瘍剤として試験されている。どちらの剤においても、第Ｉ相臨床試験で用量限定的な毒性が認められている(Gilleece，M.H.ら，1992，Br．J．Cancer 66:204-210;We ber，J.ら，1993，J．Clin．Oncol．11:499-506）。２．３．３．腫瘍壊死因子全身投与されたTNFの毒性のため、それを癌の治療に使用することは著しく制限されている。TNFは、局所療法に使用される場合に最も有効であり、そのような局所療法においては、全身用量を抑え、それによりTNFの毒性を抑えるために、潅流のための四肢の分離などの手段が取られる。TNFの用量限定的な毒性は、血小板減少症、頭痛、錯乱および低血圧よりなる（Mittleman，A.ら，1992，Inv ．New Drugs 10:183-190）。２．３．４．インターフェロン IFN−αの活性は、腎細胞癌、黒色腫、毛髪様細胞白血病、軽度の非ホジキンリンパ腫などの多数の悪性疾患において適度なものであると記載されている。いくつかの悪性疾患においては、通常、IFN−αの用量が高くなるほど、より高い応答率につながるが、毒性も著しくなる。さらに、インターフェロン療法に成功した後の再発が、インターフェロンに対する中和抗体の形成と同時に生じることを示す報告がますます増えつつある（Ouesada，J.R.ら，1987，J．Interferon R es．61:678）。３．発明の概要本発明の方法は、抗原分子に非共有結合したhspの複合体によりin vitroで感作した抗原提示細胞の投与を含む養子免疫療法と組み合わせて、抗原分子に非共有結合した熱ショックタンパク質（hsp）から本質的に構成される有効量の複合体を含む組成物を投与することによる、癌もしくは感染症の治療または防止が好ましい患者の免疫反応を引き出す方法を含む。このような養子免疫療法とhsp抗原分子複合体の投与との組み合わせは、免疫応答を誘発するのに相乗効果を奏すると思われる。投与する複合体の量は、本発明者により有効であることが発見された有効投与量の範囲内にある。この範囲の下限は、動物試験で使用された用量から、先行技術の方法による外挿法により有効であることが予測される量より驚くほど少ない。好適な実施態様において、この複合体は個体自身に由来し、すなわちこの複合体は、個体自身の癌細胞から単離される（例えば、好ましくは、患者の腫瘍生検から調製される）。あるいは、hspおよび／または抗原分子は、その個体または他の個体から単離することもできるし、または元々その個体または他の個体から得られたクローンhspを使用して組換え製造法により製造することもできる。本明細書において「抗原分子」という用語は、hspがin vivoで内因性に関連している（例えば、前癌組織または癌組織）ペプチド、ならびに外因性抗原／免疫原（すなわち、hspはin vivoで複合体を形成していない）、または抗原性／免疫原断片およびこれらの誘導体を意味する。hspと複合体を形成するのに使用される、このような外因性抗原および断片ならびにこれらの誘導体（ペプチドおよび非ペプチドの両方）は、当該分野で公知のものから、および抗体またはＭＨＣ分子（抗原性）に結合するかまたは免疫応答を引き起こす能力（免疫原性）を検出することにより当該分野で公知の標準的免疫アッセイで容易に同定されるものから、選択することができる。癌および感染症の養子免疫療法のための方法は、宿主の免疫能および免疫エフェクター細胞の活性を強化することを目的とする。抗原分子に非共有結合したhs pである非共有結合性複合体によりin vitroで感作したマクロファージおよび/または他の抗原提示細胞（APC）、例えば樹状細胞およびB細胞（Bリンパ球）を用いた養子免疫療法は、腫瘍細胞および/または抗原成分に特異的な免疫性を誘導し、場合により腫瘍の塊の退行あるいは免疫疾患または感染症の治療を促進する。特定の実施形態において、本発明は、原発性および転移性の腫瘍性疾患の予防および治療に使用される方法および組成物に関する。具体的な治療方法、薬剤組成物、およびキットは、本発明により提供される。 hsp抗原分子複合体の好適な用量は、患者の体重や表面積に依存する用量よりも少ない。本発明者は、ヒトでない小さな哺乳動物（例えば、マウス）で有効と思われる用量と実質的に同等もしくはこれより少ない用量が、そのような哺乳動物やヒトのリンパ節の相対的サイズに基づき、５０倍増加を超えない補正因子で随時補正することにより、ヒトでの皮内投与に有効であることを発見した。 hsp抗原分子複合体の投与方法としては例えば皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内、皮内または粘膜への投与が挙げられるが、これらに限定されない。本発明者は、hsp抗原分子複合体の有効な皮内投与量が、ヒトへの皮下投与で有効な驚異的に少ない用量よりもさらに約10倍少なくてすむことを発見した。（1995年９月13 日に出願された米国特許出願第08/527,391号（その開示内容は全て、本明細書中に参照により組み込まれる）および本出願と同日にSrivastavaおよびR．Chandaw arkarにより出願された“Prevention and Treatment of Primary and Metastati c Neoplastic Disease and Infectious Diseases With Heat Shock/Stress Prot ein-Peptide Complexes”と題する米国特許出願（その開示内容は全て、本明細書中に参照により組み込まれる）を参照のこと）。抗原分子および熱ショック／ストレスタンパク質（単独または組合せのhsp７０、hsp９０、ｇｐ９６などがあるが、これらに限定されない）の複合体の組成物を含む、薬物製剤が提供され、これは、hsp複合体で感作したAPCの投与前、投与と同時、または投与後に投与される。具体的には、ヒトの皮内もしくは粘膜に投与するために抗原分子に非共有結合したhspの種間の用量応答同等性は、マウスで観察された治療用量と単一の比例比（５０倍を超えない）の積であるとして推定される。本発明は、宿主の免疫能と免疫エフェクター細胞の活性を上げることによる、癌の予防と治療法を包含する。さらに本発明は、原発性および転移性腫瘍性疾患の治療のための臨床試験に参加している患者の治療と病状進行の追跡のための免疫応答の増強における、薬物の有効性を評価する方法を提供する。養子免疫療法と共に、抗原分子に非共有結合した熱ショック／ストレスタンパク質の上記複合体を投与することによる、本発明の治療法を使用する免疫療法は、腫瘍細胞に対する特異的免疫を誘発し、癌の大きさを縮小させることができる。本発明の方法による特異的免疫療法に応答する癌は、ヒトの肉腫および悪性腫瘍があるがこれらに限定されない。具体例において、hsp抗原分子複合体は、患者に対して同種であり、適切な実施形態において、hsp抗原分子複合体は投与される患者の自己由来である（から得られる）。本発明の特定の組成物およびその性質は、以下のセクションおよびサブセクションに記載される。患者に投与するためおよび患者に投与するAPCを感作するのに使用される好適な組成物は、組成物が投与される患者の腫瘍の生検から単離されたhsp−ペプチド複合体を含む。hsp７０、hsp９０および／またはｇｐ９６を含むこのような組成物は、哺乳動物において種々の腫瘍に対して強い阻害を示す。ヒトの被験者に投与した時、好ましくは毒性を示さない、hsp７０、hsp９０および／またはｇｐ９６を含む好適な組成物も、記載される。別の例において、本発明は、生物学的応答修飾物質（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＴＮＦ、または免疫細胞に作用する他のサイトカイン増殖因子）を、hsp複合体とともに投与することを、さらに随時含んでいてもよい。癌治療以外に、本発明の養子免疫療法と組み合わせた、抗原分子に非共有結合したhspの複合体の投与は、（例えば、家族歴のために癌に罹りやすい個体、または環境因子のために癌に対するリスクの高い個体の）種々の癌の予防に利用できる。以下のセクション５および６に記載の例は、進行性結腸癌および肝臓癌に罹っているヒトの患者の癌免疫療法における、養子免疫療法と組み合わせたhsp−ペプチド複合体の本発明の方法に従う使用を詳述する。４．発明の詳細な説明原発性および転移性の腫瘍性疾患および感染症の予防と治療のための、ならびにヒトの個体において免疫応答を誘発するための、方法と組成物が記載される。本発明は、抗原分子に非共有結合したhspの複合体によりin vitroで感作した抗原提示細胞（APC）の投与を含む養子免疫療法と組み合わせて、抗原分子に非共有結合したhspの複合体を含む組成物を投与することによる、免疫系を刺激する効果に基づく。このような組み合わせ療法は、相乗効果を奏すると考えられる。本明細書において「抗原分子」という用語は、hspがin vivoで（例えば、感染細胞または前癌組織または癌組織中で）内因的に結合しているペプチド、ならびに外因性抗原／免疫原（すなわち、hspはこれらとin vivoで複合体を形成していない）または抗原性／免疫原性断片およびこれらの誘導体を意味する。本発明の方法は、本発明の養子免疫療法と組み合わて、適切な投与方法を用いて、有効量の複合体（この複合体は、基本的に抗原分子に非共有結合したhspからなる）を含む組成物を投与することにより、感染症または癌の治療と予防が必要な個体において、免疫応答を誘発する方法を特徴とする。投与方法としては例えば皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内、皮内または粘膜への投与が挙げられるが、これらに限定されない。ＡＰＣは、従来技術で知られている抗原提示細胞の中から選択することができる。これら抗原提示細胞には、マクロファージ、樹状細胞、Ｂリンパ球、およびこれらの組み合わせが含まれ、好ましくはマクロファージが選択されるが、これらに限定されない。hsp複合体で感作したＡＰＣを、このhsp−抗原分子複合体の投与と同時、投与前、または投与後に、投与することができる。本発明の養子免疫療法により、hsp抗原分子複合体とのin vitroでのインキュベーションによる抗原提示細胞の活性化が可能となる。好ましくは、in vivoで細胞を使用するまえに、in vitroでの腫瘍または感染物質（infectious agent）に対する反応性の測定を行う。このin vitroブーストと、その後に行われるクローンの選択および /または拡張、および患者投与により、有効な治療/予防方法が構成される。好適な実施形態において、hsp抗原分子複合体は、個体に対して自己由来である。すなわち、複合体は、個体自身の感染細胞または癌細胞もしくは前癌細胞から単離される（例えば、好ましくは患者の感染組織または腫瘍生検から調製される）。あるいは、複合体はin vitroで産生される（例えば、外因性抗原分子との複合体が必要な場合）。あるいは、hspおよび／または抗原分子は、その個体または他の個体から単離することができ、あるいは本来その個体または他の個体に由来するクローン化hspを使用した組換え製造法により作製することができる。hspとの複合体形成に使用される、外因性抗原および断片ならびにこれらの誘導体（ペプチドと非ペプチドの両方）は、当該分野で公知のものから選択することもできるし、また抗体もしくはＭＨＣ分子に結合する能力（抗原性）または免疫応答を引き起こす能力（免疫原性）により、当該分野で公知の標準的免疫アッセイにより容易に同定されるものからも、選択することができる。hs pおよび抗原分子の複合体は、患者の癌組織もしくは前癌組織、または癌細胞株から単離するか、またはin vitroで産生することができる（これは外因性抗原が抗原分子として使用する実施態様で必要である）。患者に投与されるhsp抗原分子複合体は、その患者に投与されるＡＰＣを感作するのに使用されるhsp抗原分子複合体と同じであっても異なるものであってもよい。ＡＰＣおよび複合体を同時に投与するような特定の実施の形態において、ＡＰＣおよび精製したhsp抗原分子複合体は、単体の化合物または投与用の異なる化合物の中に存在することができる。使用可能な本発明のhspには、単独または組合せのhsp７０、hsp９０、ｇｐ９６があるが、これらに限定されない。好ましくは、hspはヒトhspである。本発明の実施において有用な熱ショックタンパク質（ストレスタンパク質とも呼ぶ）は、以下のいずれかの基準を満たす任意の細胞性タンパク質から選択することができる。これは、細胞がストレスのある刺激に暴露された時、その細胞内濃度が増加するタンパク質であり、これは他のタンパク質またはペプチドに結合することができ、これはアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）または低ｐＨの存在下で結合したタンパク質またはペプチドを放出することができ、または、これは、上記のいずれかの性質を有する任意の細胞性タンパク質と少なくとも３５％の相同性を示すタンパク質である。同定された最初のストレスタンパク質は、熱ショックタンパク質（hsp）である。その名前が示すように、hspは、熱ショックに応答して細胞により合成される。今日まで、分子量に基づき、３つの大きなファミリーのhspが同定されている。このファミリーは、hsp６０、hsp７０、hsp９０と呼ばれ、番号は、ストレスタンパク質のおよその分子量（キロダルトン）を反映する。これらのファミリーの多くのメンバーは、他のストレスのある刺激（例えば、栄養不足、代謝破壊、酸素ラジカル、および細胞内病原体による感染、があるが、これらに限定されない）に応答して誘導されることがわかった（Welch，May 1993，Scien tific American 56-64;Young，1990，Annu．Rev．Immunol．8:401-420;Craig，1 993，Science 260:1902-1903;Gethingら、1992，Nature 355:33-45;およびLindq uistら、1988，Annu．Rev．Genetics 22:631-677を参照されたい、これらの開示内容は参考のため本明細書に組み込まれる）。これらの３つのファミリーのすべてに属するhsp／ストレスタンパク質は、本発明の実施に使用できると考えられる。主要なhspは、ストレスを受けた細胞中で高レベルで蓄積されるが、ストレスを受けていない細胞では低レベルないし中レベルで存在する。例えば、誘導性の高い哺乳動物のhsp７０は、通常の温度では検出できないが、熱ショックを受けた細胞では最も活発に合成されるタンパク質の１つになる（Welchら、1985，J． Cell．Biol．101:1198-1211）。これに対して、hsp９０およびhsp６０タンパク質は、すべてではないがほとんどの哺乳動物の細胞中で通常の温度で豊富に存在し、熱によりさらに誘導される（Laiら、1984，Mol．Cell．Biol．4:2802-10;va n Bergen en Henegouwenら、1987，Genes Dev．1:525-31）。熱ショックタンパク質は現存する最も高度に保存されたタンパク質の中にある。例えば、DnaK、E.coliからのhsp70は表皮剥離物(excoriate)からのhsp70タンパク質と約50％のアミノ酸配列同一性を有する(Bardwellら，1984，Proc.Natl.A cad.Sci．81:848-852)。また、hsp60ファミリーおよびhsp90ファミリーは同様に高レベルのファミリー内保存を示す(Hickeyら，1989，Mol.Cell.Biol．9:2615-2 626;Jindal，1989，Mol.Cell.Biol．9:2279-2283)。加えて、hsp60ファミリー、 hsp70ファミリーおよびhsp90ファミリーは、例えば、35％より大きいアミノ酸同一性を有する配列中のストレスタンパク質に関係するタンパク質を含むが、その発現レベルはストレスにより変化しないことが発見された。それ故、本明細書に使用される熱ショックタンパク質すなわちストレスタンパク質の定義は、細胞中の発現レベルがストレスに満ちた刺激に応答して増進される３種のファミリーのメンバーと少なくとも35％〜55％、好ましくは55％〜75％、最も好ましくは75％〜85％のアミノ酸同一性を有する、その他のタンパク質、突然変異タンパク質、これらの類似体、および変異体を含むことが意図されている。これらの３種のファミリーに属するストレスタンパク質の精製が以下に記載される。本発明の免疫原性hsp-ペプチド複合体は哺乳類に免疫応答を誘導することができるペプチドとhspを含むあらゆる複合体を含んでもよい。ペプチドはhspと非共有結合されることが好ましい。好ましい複合体として、hsp60-ペプチド複合体、 hsp70-ペプチド複合体およびhsp90-ペプチド複合体が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、真核細胞の小胞体中に存在し、細胞質hsp90に関係するgp9 6と称されるhspがgp96-ペプチド複合体を含む有効なワクチンを生成するのに使用し得る。 hspは患者に同種であってもよいが、好ましい実施形態では、hspはそれらが投与される患者に自己である（由来する）。hspおよび／または抗原分子は天然源から精製でき、化学合成でき、または組換え生成できる。本発明は宿主個体の免疫能力を増進し、感染物質に対する特異的な免疫または前腫瘍細胞もしくは腫瘍細胞に対する特異的な免疫を誘発する組成物の組み合わせを提供する。本発明の治療レジメおよび医薬組成物が以下に記載される。これらの組成物は感染症の発病および進行を阻止し、腫瘍細胞の発生を阻止し、腫瘍細胞の増殖および進行を抑制する能力を有し、このような組成物が感染症および癌療法で特異的免疫を誘発することができることを示す。 hspは腫瘍部位で炎症反応を誘発し、最終的に治療された癌患者に腫瘍の苦しみの退行を生じさせるようである。抗原分子に非共有結合されたhspの複合体で治療し得る癌として、ヒト肉腫および癌腫が挙げられるが、これらに限定されない。ヒトの肉腫および癌腫は、hsp複合体で感作したマクロファージおよび/またはＡＰＣによる養子免疫療法にも反応する。それ故、本発明は、宿主個体の免疫能力を刺激し、前腫瘍細胞および／または腫瘍細胞に特異的な免疫を誘発する、個体の癌を予防および治療する方法であって、hsp抗原分子複合体およびこのような複合体で感作したＡＰＣを投与することを含んでなる方法を提供する。本明細書に使用される“前腫瘍(preneopla stic)”細胞は正常な形態から腫瘍形態へ移行中にある細胞を表し、そして分子生物学的研究により次第に支持された形態学的証拠は、前腫瘍新生(preneoplasi a)が多工程により進行することを示す。普通、非腫瘍細胞の増殖は過形成、化成、または最も特別には、異形成からなる（このような異常な増殖条件の総説については、RobbinsおよびAngell，1976，Basic Pathology，2d Ed.，W.B．Saunder s Co.，Philadelphia，pp．68-79を参照のこと）。過形成は構造または機能に有意な変化を生じないで組織または器官中の細胞数の増加に関係する調節された細胞増殖の形態である。一例として、子宮内膜過形成はしばしば子宮膜癌に先行してみられる。化成は、成体細胞または充分に分化した細胞の一つの型が成体細胞の別の型を置換する調節された細胞増殖の形態である。化成は上皮細胞または結合組織細胞中で生じ得る。非定型の化成は若干無秩序の化成上皮を伴う。異形成は癌の前駆体であることが多く、主として上皮中に見られる。それは個体細胞一様性および細胞の構造的配向の損失を伴う非腫瘍細胞増殖の最も無秩序な形態である。異形成細胞はしばしば異常に大きい、深部染色された核を有し、多形態性を示す。異形成は慢性刺激または炎症が存在する場合に特徴的に起こり、しばしば頸部、呼吸道、口腔、および胆嚢中に見られる。前腫瘍病変は腫瘍新生に進行し得るが、それらはまた長期間にわたって安定のままであり、特に誘発性物質が除去される場合、または病変がその宿主による免疫攻撃に屈する場合には退行することさえあり得る。下記セクション４．１．で記載するもの等のように、本発明者は、ヒトでない小さな動物（例えばマウス）で有効と思われる用量と実質的に同等もしくはこれより少ない用量が、ヒトへの投与に有効であることを発見した。本発明の治療レジメおよび医薬組成物は、サイトカインIFN-α、IFN-γ、IL-2 、IL-4、IL-6、TNF、または免疫細胞に影響を及ぼすその他のサイトカインを含むがこれらに限定されない付加的な免疫応答増強物質または生物学的応答改変物質とともに使用することができる。本発明のこの態様によれば、hspと抗原分子の複合体が一種以上のこれらのサイトカインとの組み合わせ療法で投与される。更に、本発明は家族歴または環境リスク因子のために癌の危険性の高い個体への、養子免疫療法と組み合わせたhsp-抗原分子複合体の投与に関する。４．１．癌または感染症に対する免疫応答を誘発するための、および APC のin vitro感作のための、hspペプチド複合体を含む組成物抗原分子に非共有結合されたhspを含む組成物は複合体形成された抗原分子に対する（hspに対するのではない）有効な特異的免疫応答を誘発するために投与される。本明細書に記載される方法に従い、好ましくは総タンパク質（mg）の60 〜100％の範囲、または少なくとも70％、80％もしくは90％で、hsp抗原分子複合体を精製する。他の実施形態においては、ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により分析した際に明らかに均質であるように、hsp抗原分子複合体を精製する。好ましい実施態様では、hsp70、hsp90およびgp96とペプチドの非共有結合複合体が調製され、癌患者から得られた腫瘍細胞から手術後に精製される。本明細書に記載された方法によれば、hspまたはMHC抗原に内因的に複合体形成される免疫原ペプチドまたは抗原ペプチドが抗原分子として使用し得る。例えば、異なる腫瘍抗原（例えば、チロシナーゼ、gp100、melan-A、gp75、ムチン等）並びに免疫不全ウイルスＩ型(HIV-1)、ヒト免疫不全ウイルスII型(HIV-II)，Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、水痘、アデノウイルス、Ｉ型単純ヘルペス(HSV-I)、II型単純ヘルペス(HSV-II)、牛疫、ライノウイルス、エコーウイルス、ロタウイルス、RSウイルス、乳頭腫ウイルス、パポーバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス、アルボウイルス、フンタウイルス、コクサッキーウイルス、おたふくかぜウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルスおよびポリオウイルスのタンパク質を含むが、これらに限定されないウイルスタンパク質に対し細胞障害性Ｔ細胞応答を刺激するようなペプチドを調製し得る。抗原分子がin vivoでhspに非共有結合的に複合体形成されたペプチドである実施態様では、複合体が細胞から単離でき、またはhspおよび抗原分子のそれぞれの精製調製物からin vitroで生成し得る。別の特定の実施態様では、癌（例えば、腫瘍）の抗原または感染性物質（例えば、ウイルス抗原、バクテリア抗原等）が天然源からの精製により、化学合成により、または組換えにより得られ、そして以下に記載されるようなin vitro操作により、hspに非共有結合的に複合体形成される。使用すべきhsp-抗原分子複合体が細胞中でin vivoで生成される実施態様では、下記の4.1.1-4.1.3節に記載されるような例示の精製操作を使用し得る。あるいは、in vitroでhspに複合体形成することにより抗原分子を使用することが所望される実施態様では、hspがATPまたは低pHの存在下で内在性hsp-ペプチド複合体からこのような使用のために精製し得る（または化学合成され、もしくは組換えにより生成し得る）。本明細書に記載されたプロトコルが真核細胞、例えば、組織、単離細胞、または予め選択された細胞内病原、腫瘍細胞もしくは腫瘍細胞系で感染された不死化真核細胞系からhsp-ペプチド複合体、またはhspのみを単離するのに使用し得る。４．１．１.hsp70- ペプチド複合体の調製および精製 hsp70-ペプチド複合体の精製は既に記載されている。例えば、Udonoら，1993 ，J.Exp.Med．178:1391-1396を参照のこと。限定ではなく例として示される、使用し得る操作は以下のとおりである。最初に、腫瘍細胞を５mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH7、150mM NaCl、２mM Ca Cl₂、２mM MgCl₂および１mMフェニルメチルスルホニルフルオリド(PMSF)からなる１×溶解緩衝液３倍容中に懸濁する。次に、>99％の細胞が顕微鏡試験により測定して溶解されるまで、ペレットを氷の上で音波処理する。音波処理の別法として、細胞を機械剪断により溶解してもよく、このアプローチでは細胞を典型的には30mM重炭酸ナトリウムpH7.5、１mM PMSF中に再度懸濁し、氷の上で20分間インキュベートし、次に>95％の細胞が溶解されるまでダウンスホモジナイザー中で均一にする。次に溶解産物を1,000gで10分間にわたって遠心分離し、非破壊細胞、核およびその他の細胞破砕物を除去する。得られた上澄みを100,000gで90分間にわたって再度遠心分離し、上澄みを回収し、次に２mM Ca²⁺および２mM Mg²⁺を含むリン酸緩衝塩水(PBS)で平衡化したCon A Sepharoseと混合する。細胞が機械剪断により溶解された時、上澄みをCon A Sepharoseとの混合の前に等容積の２×溶解緩衝液で希釈する。次に上澄みを４℃で２〜３時間にわたってCon A Se pharoseに結合させる。結合できない物質を回収し、10mM Tris-酢酸pH7.5、0.1m M EDTA、10mM NaCl、1mM PMSFに対し36時間にわたって透析する（３回、毎回100 倍容）。次に透析物を17,000rpm（Sorvall SS34ローター）で20分間にわたって遠心分離する。次に得られた上澄みを回収し、20mM Tris-酢酸pH7.5、20mM NaCl 、0.1mM EDTAおよび15mM２−メルカプトエタノール中で平衡化したMono Q FPLC カラムに負荷する。次にカラムを20mM〜500mM NaCl勾配で展開し、溶離した画分をドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)により分画し、適当な抗hsp70抗体（例えば、StressGenからのクローンN27F3-4からのもの）を使用してイムノブロッティングにより特性決定する。抗hsp70抗体と強い免疫反応性の画分を貯溜し、hsp70-ペプチド複合体を硫酸アンモニウム、詳しくは50％-70％硫酸アンモニウムカットで沈殿させる。次に得られた沈殿を17,000rpm（SS34 Sorvallローター）で遠心分離により回収し、7 0％硫酸アンモニウムで洗浄する。次に洗浄された沈殿を可溶化し、残留硫酸アンモニウムをSephadex^R G25カラム(Pharmacia)によるゲル濾過により除去する。必要により、こうして得られたhsp70調製物を上記のようなMono Q FPLCカラムにより再度精製し得る。この方法を使用して、hsp70-ペプチド複合体を明らかに均一になるまで精製し得る。典型的には、hsp70-ペプチド複合体1mgが細胞／組織1gから精製し得る。 hsp70-ペプチド複合体を精製するための改良された方法は、細胞タンパク質を固形基質に固定された、ADP、またはATPの非加水分解性類似体と接触させ、これにより、溶解産物中のhsp70がADPまたは非加水分解性ATP類似体に結合することができ、そして結合されたhsp70を溶離することを含む。好ましい方法は、固形基質に固定されたADP(例えば、ADP-アガロース)によるカラムクロマトグラフィーを使用する。得られたhsp70調製物は純度が高く、汚染ペプチドを含まない。また、hsp70収率が約10倍以上に有意に増大される。あるいは、 ADPに代えて、ATPの非加水分解性類似体によるクロマトグラフィーを、hsp70-ペプチド複合体の精製に使用することができる。限定ではなく例として、ADP-アガロースクロマトグラフィーによるhsp70-ペプチド複合体の精製を、以下のようにして行うことができる。 Meth A肉種細胞（5億個）を低張緩衝液中で均一にし、溶解物を90分間4℃にて 100,000gで遠心分離する。ADP-アガロースカラムに上澄みを加える。カラムを緩衝液で洗浄し、カラム容積の５倍量の3mM ADPで溶出する。hsp70-ペプチド複合体は抽出される全15画分の2〜10画分で溶出される。溶出された画分をSDS-PAGE により分析する。この方法を用いて、hsp70-ペプチド複合体を明らかに均質になるまで精製することができる。４．１．２．hsp90- ペプチド複合体の調製および精製限定ではなく例として示される、使用し得る操作は以下のとおりである。最初に、腫瘍細胞を５mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7)、150mM NaCl、２mM Ca Cl₂、２mM MgCl₂および１mMフェニルメチルスルホニルフルオリド(PMSF)からなる１×溶解緩衝液３倍容中に懸濁する。次に、>99％の細胞が顕微鏡試験により測定して溶解されるまで、ペレットを氷の上で音波処理する。音波処理の別法として、細胞を機械剪断により溶解してもよく、このアプローチでは細胞を典型的には30mM重炭酸ナトリウムpH7.5、１mM PMSF中に再度懸濁し、氷の上で20分間インキュベートし、次に>95％の細胞が溶解されるまでダウンスホモジナイザー中で均一にする。次に溶解産物を1,000gで10分間にわたって遠心分離して、非破壊細胞、核およびその他の細胞破砕物を除去する。得られた上澄みを100,000gで90分間にわたって再度遠心分離し、上澄みを回収し、次に２mM Ca²⁺および２mM Mg²⁺を含むPBS で平衡化したCon A Sepharoseと混合する。細胞が機械剪断により溶解された時、上澄みをCon A Sepharoseとの混合の前に等容積の２×溶解緩衝液で希釈する。次に上澄みを４℃で２〜３時間にわたってCon A Sepharoseに結合させる。結合できない物質を回収し、10mM Tris-酢酸pH7.5、0.1mM EDTA、10mM NaCl、1mM PMSFに対し36時間にわたって透析する（３回、毎回100倍容）。次に透析物を17,000rpm（Sorvall SS34ローター）で20分間にわたって遠心分離する。次に得られた上澄みを回収し、溶解緩衝液で平衡したMono Q FPLC カラムに負荷する。次にタンパク質を200mM〜600mM NaClの塩勾配で溶離する。次に溶離された画分をSDS-PAGEにより分画し、抗hsp90抗体、例えば、3G3（Af finity Bioreagents）を使用して、hsp90-ペプチド複合体を含む画分をイムノブロッティングにより同定する。この操作を使用して、hsp90-ペプチド複合体が明らかに均一になるまで精製し得る。典型的には、hsp90-ペプチド複合体150-200 マイクログラムが細胞／組織1gから精製し得る。４．１．３．gp96- ペプチド複合体の調製および精製限定ではなく例として示される、使用し得る操作は以下のとおりである。腫瘍のペレットを30mM重炭酸ナトリウム緩衝液(pH7.5)および1mM PMSFからなる緩衝液３倍容中に再度懸濁し、細胞を氷の上で20分間膨潤させる。次に>95％の細胞が溶解されるまで、細胞ペレットを氷の上でダウンスホモジナイザー中で均一にする（ホモジナイザーの適当なクレアランスはそれぞれの細胞型に応じて変化するであろう）。溶解産物を1,000gで10分間にわたって遠心分離して、非破壊細胞、核およびその他の破砕物を除去する。次にこの遠心分離工程からの上澄みを100,000gで90分間にわたって再度遠心分離する。gp96-ペプチド複合体が100,000のペレットまたは上澄みから精製し得る。上清から精製する場合、上清を同容量の2X細胞溶解緩衝液で希釈し、次いで4 ℃において、この上清を、2mM Ca²⁺および2mM Mg²⁺を含有するPBSと平衡状態にあるCon A Sepharoseと、２時間〜３時間混合する。この後、スラリーをカラムに充填し、OD₂₈₀がベースラインまで低下するまで1X細胞溶解緩衝液で洗浄する。次に、2mM Ca²⁺および2mM Mg²⁺を含有するPBSに溶解したカラム床容積の1/3の量の10％α-メチルマンノシド(α-MM)でカ／ラムを洗浄し、一枚のパラフィルムでカラムをシールし、37℃で15分間インキュベートする。次に、カラムを室温まで冷却し、カラムの底からパラフィルムを除去する。カラム容積の５倍量のα-MM緩衝液をカラムに供給し、溶出液をSDS-PAGEで分析する。典型的には、得られる物質の純度は約60%〜95%であるが、この純度は、細胞のタイプおよび使用した組織対溶解緩衝液比に依存する。次に、このサンプルを、5mMリン酸ナトリウムを含有する緩衝液(pH7)と平衡状態にあるMono Q FPLCカラム(Pharmacia)に供給する。次に、0M〜1M NaCl濃度勾配を用いてタンパク質をカラムから溶離させると、400mM〜550mM NaClの範囲でgp96画分が溶離する。しかしながら、２つの追加工程を単独でまたは組合せて利用することにより、この手順を変更し、見掛け上均一なgp96ペプチド複合体が確実に形成されるようにしてもよい。一方の任意工程では、Con A精製工程の前に硫酸アンモニウムを沈殿させ、他方の任意工程では、Con A精製工程の後かつMono Q FPLC工程の前に DEAE-Sepharose精製を行う。第一の任意工程（以下の実施例により記載される）において、100,000g遠心分離工程により得られた上清に硫酸アンモニウムを添加することにより、50%硫酸アンモニウムの最終濃度となるようにする。氷水の入ったトレー中に配置されたビーカー中で溶液を穏やかに攪拌しながら、硫酸アンモニウムをゆっくりと添加する。4℃において溶液を約1/2時間〜12時間攪拌し、得られた溶液を6,000rpmで遠心分離する(Sorvall SS34ロータを使用)。この工程で得られた上清を取り出し、硫酸アルミニウムを添加して70%硫酸アルミニウム飽和液とし、6,000rpmで遠心分離する(Sorvall SS34ロータを使用)。この工程で得られたペレットを回収し、70%硫酸アンモニウムを含有するPBS中に懸濁させてペレットを洗浄する。この混合物を6,000rpmで遠心分離し(Sorvall SS34ロータを使用)、2mM Ca²⁺およびMg²⁺ を含有するPBS中にペレットを溶解させる。15,000rpmで簡単な遠心分離を行って未溶解物質を除去する(Sorvall SS34ロータを使用)。次に、この溶液をCon A Sepharoseと混合し、先に述べた手順を繰り返す。第２の任意工程（以下の実施例により記載される）において、Con Aカラムから溶離したgp96含有画分をプールし、透析によりまたは好ましくはSephadex G25 カラムを用いた緩衝液交換により、緩衝液を、5mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7、300mM NaCl)と交換する。緩衝液を交換した後、溶液を、5mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7、300mM NaCl)と予め平衡状態にあるDEAE-Sepharoseと混合する。このタンパク質溶液およびビーズを１時間穏やかに混合し、カラムに注ぐ。次に、280nMにおける吸光度がベースラインまで低下するまで、5mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7、300mM NaCl)を用いて、カラムを洗浄する。次に、５倍容量の5mMリン酸ナトリウム(pH7、700mM NaCl)を用いて、結合タンパク質をカラムから溶離させる。タンパク質含有画分をプールし、5mMリン酸ナトリウム緩衝液( pH7)で希釈して塩濃度を175mMまで減少させる。次に、得られた物質を、5mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7)と平衡状態にあるMono Q FPLCカラム(Pharmacia)にかけ、先に記載したように、Mono Q FPLCカラム(Pharmacia)に結合したタンパク質を溶離させる。しかしながら、当業者は、第２の任意工程を精製プロトコルに組入れることの利点を普通の実験により評価できると考えられる。更に、任意工程のいずれかを追加することの利点は出発原料の供給源に依存するであろうと考えられる。 gp96画分を100,000gペレットから単離する場合、1%デオキシコレートまたは1% オクチルグルコピラノシドのいずれかを含有する５倍容量のPBS(ただし、Mg²⁺およびCa²⁺は含まれない)中にペレットを懸濁させ、氷上で１時間インキュベートする。この懸濁液を20,000gで30分間遠心分離し、得られた上清をPBSの数種の変化体(この場合にも、Mg²⁺およびCa²⁺は含まれない)に対して透析を行い、洗浄剤を除去する。透析液を100,000gで90分間遠心分離し、上清を回収し、この上清にカルシウムおよびマグネシウムを添加してそれぞれ2mMの最終濃度となるようにする。次に、未改良法または改良法のいずれかによりサンプルを精製し、100,00 0g上清からgp96-ペプチドを単離する（上記参照）。この手順を用いて、見掛け上均一になるまでgp96-ペプチドを精製することができる。1g細胞／組織から約10マイクログラム〜20マイクログラムのgp96が単離される。感染症感染症の患者の治療が望まれる他の実施態様において、第4.1.1節〜第4.1. 3節で既に記載した方法を使用すると、感染性生物体(例えば、所定の細胞系の、または患者由来の感染性生物体)が感染した細胞から、hsp-ペプチド複合体が単離される。こうした感染性生物体としては、以下の第4.1.4節に詳述されているように、ウイルス、細菌、原生動物、真菌、および寄生体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。４．１．４．抗原成分／免疫成分の単離 ATPの存在下または低pHのいずれかにおいて、抗原ペプチドおよび／または抗原成分をhsp-複合体から溶離させることができることを見出した。こうした実験条件を利用すると、有望な抗原決定基を含有しうる細胞からペプチドおよび／または抗原成分を単離することができる。単離した後、従来のアミノ酸配列法を用いて、各抗原ペプチドのアミノ酸配列を決定することができる。次に、こうした抗原分子を化学合成または組換え法により調製し、精製し、in vitroでhspとの複合体を形成することができる。同じように、当該技術分野で周知の技法(Falk，K．et al.，1990，Nature 348 :248-251;Elliott，T.，et al.，1990,Nature 348:195-197;Falk，K.，et al.， 1991，Nature 351:290-296))を用いて、MHC-ペプチド複合体から有望な免疫ペプチドを溶離させることができることを見出した。従って、内因性ストレスタンパク質‐ペプチド複合体または内因性MHC‐ペプチド複合体のいずれかから有望な免疫ペプチドまたは抗原ペプチドを単離し、続いて、in vitroでhspとの複合体を形成することにより、抗原分子として使用することが可能となる。これらの複合体のいずれかからペプチドおよび／または抗原成分を単離するための具体的なプロトコルは、以下の第4.1.4.1節および第4.1 .4.2節に記載されている。４．１．４．１．ストレスタンパク質‐ペプチド複合体由来のペプチドストレスタンパク質‐ペプチド複合体からペプチドを溶離させるために、２つの方法が使用できる。一方の手法では、ATPの存在下でストレスタンパク質‐ペプチド複合体をインキュベートする。他方の手法では、低pH緩衝液中で該複合体をインキュベートする。簡単に述べれば、対象の複合体をCentricon 10アセンブリ(Milllipore)にかけて遠心分離し、複合体にゆるく結合した低分子量物質を除去する。高分子量画分は、取り出してSDS-PAGEで分析することができ、一方、低分子量画分は、以下に示すようにHPLCで分析することができる。ATPインキュベーションプロトコルでは、高分子量画分中のストレスタンパク質‐ペプチド複合体を、10mM ATPと共に室温で30分間インキュベートする。低pHプロトコルでは、ストレンタンパク質‐ ペプチド複合体に酢酸またはトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を添加して最終濃度を 10%(体積比)とし、室温でまたは熱湯浴中でまたはこれらの間の任意の温度で、混合物を10分間インキュベートする(Van Bleek，et al.，1990，Nature 348:213 -216;およびLi，et al.，1993,EMBO Journal 12:3143-3151を参照されたい)。得られたサンプルは、先に述べたように、Centricon 10アセンブリにかけて遠心分離する。高分子量画分を回収する。残存する高分子量ストレスタンパク質‐ ペプチド複合体を、ATPを用いてまたは低pHで再びインキュベートすると、残存するペプチドを取り出すことができる。得られた低分子量画分は、プールし、エバポレーションにより濃縮し、0.1%ＴＦＡに溶解する。次に、例えば、0.1% TFAと平衡状態にあるVYDAC C18逆相カラムを用いて、溶解した物質を逆相高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)にかけて分別する。次に、0.1% TFAにおいて0%〜80%アセトニトリルの直線勾配を用いてカラムを展開することにより、約0.8ml／分の流速で結合物質を溶離させる。ペプチドの溶離をOD₂₁₀によりモニタすることにより、ペプチドを含有する画分を回収することができる。４．１．４．２．MHC ‐ペプチド複合体由来のペプチド MHC分子からの有望な免疫ペプチドの単離は、当該技術分野で周知であるので、本明細書中では詳述しない(Falk，et al.，1990,Nature 348:248-251;Rotzsch e，et al.，1990，Nature 348:252-254;Elliott，et al.，1990,Nature 348:191 -197;Falk，et al.，1991，Nature 351:290-296;Demotz，et al.，1989，Nature 343:682-684;Rotzsche，et al.，1990，Science 249:283-28 7を参照されたい)。これらの開示内容は、引用により本明細書中に含まれるものとする。簡単に述べれば、MHC‐ペプチド複合体は、従来のイムノアフィニティ法により単離することができる。この場合、アセトニトリル中において、約0.1%TFAの存在下で複合体をインキュベートすることにより、ペプチドをMHC‐ペプチド複合体から溶離させることができる。先に記載したように、溶離したペプチドは、逆相HPLCにより分別および精製を行うことができる。溶離したペプチドのアミノ酸配列の決定は、当該技術分野で周知の手動または自動アミノ酸配列決定法のいずれかにより行うことができる。有望な防御ペプチドのアミノ酸配列が決定された後、従来のペプチド合成または当該技術分野で周知の他のプロトコルを用いて、このペプチドを所望の量で合成することができる。上述したように単離されたペプチドと同じアミノ酸配列を有するペプチドは、 Merrifield，1963，J．Am．Chem．Soc.，85:2149に記載の合成法と類似の固相ペプチド合成により合成することができる。合成中、保護側鎖を有するN-α-保護アミノ酸は、C-末端が連結されて成長するポリペプチド鎖および不溶性ポリマ支持体(すなわち、ポリスチレンビーズ)に少しずつ添加される。N-α-脱保護アミノ酸のアミノ基と、ジシクロヘキシルカルボジイミドなどの試薬と反応させることにより活性化させたN-α-保護アミノ酸のα-カルボキシ基とを連結することにより、ペプチドを合成する。遊離のアミノ基を活性化したカルボキシル基に結合させるとペプチド結合が生成する。最も普通に使用されるN-α-保護基としては、酸反応活性を有するBocおよび塩基反応活性を有するFmocが挙げられる。簡単に述べれば、まず最初に、C-末端N-α-保護アミノ酸をポリスチレンビーズに結合する。次にN-α-保護基を除去する。脱保護されたα-アミノ基を、次の N-α-保護アミノ酸の活性化したα-カルボキシレート基に連結する。所望のペプチドが合成されるまで、この処理を繰り返す。次に、得られたペプチドを不溶性ポリマ支持体から切り離し、アミノ酸側鎖の脱保護を行う。保護ペプチド断片を縮合することにより、より長いペプチドを誘導することができる。適切な化学、樹脂、保護基、保護アミノ酸、および試薬の詳細については、当該技術分野で周知であるので、本明細書中では詳述しない(Atherton，et al.，198 9,Solid Phase Peptide Synthesis:A Practical Approach，IRL PressおよびBod anszky，1993，Peptide Chemistry，A Practical Textbook，2nd Ed.，Springer -Verlagを参照されたい)。得られたペプチドの精製は、ゲル浸透分取クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、および／またはイオン交換クロマトグラフィーなどの従来の方法を用いて行われる。適切なマトリックスおよび緩衝液の選択は、当該技術分野で周知であるので、本明細書中では詳述しない。４．１．５．外因性抗原分子抗原またはその抗原性部分は、hspとの複合体を形成する抗原分子として使用するために、当該技術分野で周知のものの中から選択することができるか、またはイムノアッセイにより、抗体またはMHC分子に結合できるか(抗原性)もしくは免疫応答が可能であるか(免疫原性)を調べることができる。抗体との結合を検出することにより免疫原性または抗原性を調べるために、当該技術分野で周知の種々のイムノアッセイを利用することができる。例えば、ラジオイムノアッセイ、 ELISA(酵素結合免疫吸着検定法)、「サンドイッチ」イムノアッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、in vivoイムノアッセイ(例えば、コロイド金、酵素、またはラジオアイソトープ標識などを使用する)、ウェスタンブロット、免疫沈降反応、凝集アッセイ(例えば、ゲル凝集アッセイ、血球凝集アッセイ)、補体結合アッセイ、免疫蛍光アッセイ、プロテインAアッセイ、免疫電気泳動アッセイなどの競合アッセイシステムおよび非競合アッセイシステムが挙げられるが、これらに限定されるものではない。１実施態様において、抗体結合の検出は、一次抗体上の標識を検出することにより行われる。もう１つの実施態様において、二次抗体との結合または一次抗体に対する試薬との結合を検出することにより、一次抗体の検出が行われる。更なる実施態様において、二次抗体を標識化する。イムノアッセイにおいて結合を検出するための多くの手段が当該技術分野で公知であり、これらが利用できるものと考えられる。免疫原性を検出するための１実施態様において、標準的な方法(例えば、in vitro細胞毒性アッセイまたはin vivo 遅延型過敏症アッセイ)でT細胞仲介反応を検定することができる。また、抗原分子として使用するための有望な抗原またはその誘導体は、病原体感染力の中和に対する抗原の寄与(こうした病原体による感染の治療または予防が望まれる場合)(Norrby，1985，Summary，in Vaccines 85，Lerner，et al．(e ds.)，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，New York，pp.38 8-389)、型特異性または群特異性、患者の抗血清または免疫細胞による認識、および／または抗体に特異的な抗血清または免疫細胞の防護効果の出現、などの種々の判定基準により認識することができる。更に、病原体に起因した疾患の治療または予防が望まれる場合、抗原のコード化エピトープは、後になってまたは同じ病原体の様々な単離体中において、抗原変異を少し示すかまたはまったく示さないことが好ましい。好ましくは、癌の治療または予防が望まれる場合、既知の癌特異的抗原もしくは断片またはそれらの誘導体が使用される。例えば、こうした腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原としては、KS1/4全癌腫抗原(PerezおよびWalker，1990,J．Imm unol．142:3662-3667;Bumal，1988,Hybridoma 7(4):407-415)；卵巣癌抗原(CA12 5)(Yuら，1991，Cancer Res．51(2):466-475)；プロスタン酸ホスフェート(Tail erら，1990,Nucl．Acids Res．18(16):4928)；前立腺特異的抗原(HenttuおよびV ihko，1989,Biochem．Biophys．Res．Comm．160(2):903-910;Israeliら，1993， Cancer Res．53:227-2300)；メラノーマ関連抗原p97(Estinら，1989，1 J．Natl ．Cancer Inst．81(6):445-446)；メラノーマ抗原gp75(Vijayasardahlら，1990 ，J．Exp．Med．17184):1375-1380)；高分子量メラノーマ抗原(Nataliら，1987 ，Cancer 59:55-63)；および前立腺特異的膜抗原が挙げられるが、これらに限定されるものではない。特定の実施態様において、所定の腫瘍に特異的な抗原もしくは断片またはそれらの誘導体が選択され、hspとの複合体形成およびこれに続くこうした腫瘍を有する患者への投与に利用される。好ましくは、ウイルス性疾患の治療または予防が望まれる場合、既知のウイルスのエピトープを含有する分子が使用される。例えば、こうした抗原エピトープは、肝炎A型ウイルス、肝炎B型ウイルス、肝炎C型ウイルス、インフルエンザウイルス、水痘ウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ型(HSV-1)、単純ヘルペスウイルスII型(HSV-II)、牛疫ウイルス、リノウイルス、エコーウイルス、ロタウイルス、呼吸シンシチアルウイルス、乳頭腫ウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、おたふくかぜウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、ヒト免疫不全ウイルスＩ型(HIV-I)、およびヒト免疫不全ウイルスII型(HIV-II)などのウイルスから調製することができるが、これらに限定されるものではない。好ましくは、細菌性感染症の治療または予防が望まれる場合、既知の細菌のエピトープを含有する分子が使用される。例えば、こうした抗原エピトープは、マイコバクテリア、リケッチア、マイコプラズマ、ナイセリア、レジオネラなどの細菌から調製することができるが、これらに限定されるものではない。好ましくは、原虫類感染症の治療または予防が望まれる場合、既知の原虫のエピトープを含有する分子が使用される。例えば、こうした抗原エピトープは、リーシュマニア、コクジジオア(kokzidioa)、トリパノソーマなどの原虫から調製することができるが、これらに限定されるものではない。好ましくは、寄生菌感染症の治療または予防が望まれる場合、既知の寄生菌のエピトープを含有する分子が使用される。例えば、こうした抗原エピトープは、クラミジア、リケッチアなどの寄生菌由来のものであってもよいが、これらに限定されるものではない。４．１．６．ストレスタンパク質‐抗原分子複合体のin vitro産生 hspと、in vivoでhspとの内因的会合を起こすペプチドと、の複合体を利用しない実施態様において、hspと抗原分子との複合体がin vitroで産生される。当業者には分かるであろうが、先に述べた手順で単離されたか、または化学的に合成されたか、または組換えにより産生されたペプチドを、種々の自然精製型もしくは組換え型ストレスタンパク質を用いてin vitroで再構成すると、免疫非共有結合ストレスタンパク質‐抗原分子複合体を形成することができる。この他、外因性の抗原もしくは抗原／免疫断片またはこれらの誘導体と、ストレスタンパク質と、の非共有結合型複合体を形成して、本発明の免疫療法用または予防用のワクチンに利用することができる。ストレスタンパク質と抗原分子との非共有結合型複合体をin vitroで形成するための好ましい具体的プロトコルについては、以下で述べる。複合体を形成する前に、hspをATPまたは低pHで前処理して、対象となるhspと会合を起こす恐れのあるペプチドを除去する。ATP法を利用する場合、Levy，et al.，1991，Cell 67:265-274に記載されているように、アピラナーゼを添加することにより、調製物から過剰のATPを除去する。低pH法を利用する場合、pH調節試薬を添加し、緩衝液を再調節して中性pHにする。抗原分子(1マイクログラム)および前処理したhsp(9マイクログラム)を、抗原分子：ストレスタンパク質のモル比が約5:1となるように混合する。次に、4℃〜 45℃において、好適な結合用緩衝液〔例えば、20mMリン酸ナトリウム(pH7.2)、3 50mM NaCl、3mM MgCl₂、および1mMフェニルメチルスルホニルフルオリド(PMSF) を含有する緩衝液〕中で15分〜３時間インキュベートする。調製物をCentricon 10アセンブリ(Millipore)にかけて遠心分離し、未結合ペプチドを除去する。ペプチドとストレスタンパク質との会合は、SDS-PAGEにより検定することができる。この方法は、内因性hsp‐ペプチド複合体の脱会合により得られたペプチドのM HC‐ペプチド複合体から単離されたペプチドのin vitro複合体形成を行うための好ましい方法である。 hsp70とタンパク質などの外因性抗原分子との複合体を形成するための本発明の他の好ましい実施態様において、５マイクログラム〜10マイクログラムの精製 hspを、等モル量の抗原分子と共に、37℃において、pH7.5の20mMリン酸ナトリウム緩衝液、0.5M NaCl、3mM MgCl₂、および1mM ADPから成る容積100マイクロリットルの溶液中で１時間インキュベートする。このインキュベーション混合物を、リン酸緩衝食塩水で1mlまで更に希釈する。本発明のさらに他の態様において、ペプチドに対するgp96またはhsp90複合体を製造する好ましい方法は、0.5 M NaClおよび３nM MgCl₂を含有する20mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.5を含む緩衝液のごとき適当な緩衝液中で5-20分間、6 0-65℃で、5-10マイクログラムの精製したgp96またはhsp90を等モル量または過剰量の抗原性ペプチドとインキュベーションする。このインキュベーション混合物を室温まで冷却し、必要なら１回またはそれ以上Centricon 10アセンブリ（ミリポア社）により遠心分離して結合していないペプチドを除く。複合体形成の後、得られた免疫原性ストレスタンパク質抗原分子複合体は、任意に、例えば、下記の混合リンパ球標的細胞アッセイ(MLTC)を使用して、in vit roで測定することが出来る。免疫原性複合体が単離されたら、以下に記載の好ましい投与プロトコルおよび賦形剤を使って、動物モデルでさらに特性付けすることもできる。４．１．７．ストレスタンパク質-ペプチド複合体の免疫原性の測定精製したストレスタンパク質−抗原分子複合体の免疫原性は、当業界に周知の MLTCアッセイを用いて測定することができる。一例として挙げれば、以下の方法を使用することができるが、本発明はこれに限定されるものではない。簡単に記すと、適切な投与経路を用いて、マウスにストレスタンパク質-抗原分子複合体候補を注射する。他のマウスには他のストレスタンパク質-ペプチド複合体または本アッセイの陽性対照になる全感染細胞のどちらかを注射する。マウスは7-10日おいて２回注射する。最後の免疫化から10 日経過後、脾臓を取り出してリンパ球を採取する。次いで、対象の複合体を発現した死細胞を得られたリンパ球に添加して、in vitroでもう一度刺激してもよい。例えば、８ｘ10⁶免疫脾臓細胞は、10%胎児ウシ血清含有RPMI培地３ml中４x10⁴ マイトマイシンC処理された、またはγ-照射（5-10,000rads）感染細胞（または必要なら適当な遺伝子でトランスフェクトした細胞）で刺激してもよい。ある場合には、Ｔ細胞増殖因子の供給源として、33%二次混合リンパ球培養上清が培地に含まれていてもよい（Glasebrook，et al.，1980，J．Exp．Med．151:876参照）。免疫化後の一次細胞傷害性T細胞応答を試験するため、脾臓細胞は刺激を与えないで培養してもよい。ある実験においては、免疫化マウスの脾臓細胞は抗原性の異なる細胞で再度刺激して、細胞傷害性T細胞応答の特異性を測定することもできる。６日後、４時間⁵¹Cr-放出アッセイで培養物の細胞傷害性について試験を行う( Palladinoら，1987，Cancer Res．47:5074-5079，Blachereら，1993，J．Immuno therapy 14:352-356参照)。このアッセイでは、混合リンパ球培養物を標的細胞懸濁液に添加すると、異なるエフェクター対標的（E:T）比が得られる（通常1:1 〜40:1）。200mCi ⁵¹Cr/ml含有培地中、37℃で１時間１x10⁶個の標的細胞をインキュベーションすることによって、標的細胞は予め標識される。標識後、細胞を３回洗浄する。各アッセイ点（E:T比）は３回行い、適当な対照を添加して自発⁵ ¹ Cr放出（リンパ球を添加しないでアッセイ）および100%放出（界面活性剤で溶解した細胞）を測定する。細胞混合物を４時間インキュベーションした後、200 ×gで５分間遠心分離して細胞をペレット化する。上清へ放出された⁵¹Cr量をガンマカウンタで測定する。細胞傷害性%を、以下の式により求めたcpmとして測定する。（試験サンプル−自発放出cpm）÷（総界面活性剤放出cpm−自発放出cpm） MHCクラスＩカスケードをブロックするため、K-44ハイブリドーマ細胞（抗-MH CクラスＩハイブリドーマ）から得られた濃縮ハイブリドーマ上清を試験サンプルに添加して最終濃度を12.5%にする。４．１．８．投薬レジメマウスに腫瘍退行を生じさせるペプチド複合体に非共有結合したhspの最低投薬量は10〜25マイクログラム／20〜25g体重マウス（これは25mg/25g=1mg/kgに等しい）であることが実験腫瘍モデル（Blachereら，1993，J．Immunotherapy 14: 352-356）で確定された。従来の方法は体重および表面積を基準としてヒト投薬量に外挿する。例えば、体重を基準としてヒト投薬量を外挿する従来方法は以下のようにして行い得る。すなわち、マウス投薬量をヒト投薬量に変換するための変換係数は１kg当たりのヒト投薬量＝１kg当たりのマウス投薬量×12（Fr-eirei ch,E.J.ら，1966，Cancer Chemotherap.Rep．50:219-244を参照のこと）であるので、体重70kgのヒトのhsp-ペプチド複合体の有効投薬量は1mg/kg÷12×70、即ち約6mg（5.8mg）であるべきである。投薬量はまた体表面積１平方メートル当たりのミリグラム数で示される。何となれば、体重によらないこの方法は特定の代謝機能および排泄機能に対する良好な相関関係を与えるからである(Shirkey,H.C.，1965，JAMA 193:443)。更に、体表面積は成人および小児だけでなく下記の表１に示されるような異なる動物種に共通の投薬量の基準として使用し得る(Freireich,E.J.ら，1966，Cancer Chem-o therap.Rep．50:219-244)。表１種々の種に関する代表的な表面積対体重の比(km)¹ 種体重表面積 km係数（kg）（Sqm）マウス 0.02 0.0066 3.0 ラット 0.15 0.025 5.9 サル 3.0 0.24 12 イヌ 8.0 0.40 20 ヒト、小児 20 0.80 25 成人 60 1.6 37¹ Freireich,E.J.ら，1966，Cancer Chemotherap.Rep．50:219-244 例：所定の種におけるmg/kg投薬量を同等のmg/sq m投薬量として表すために、投薬量に適当なkm係数を掛ける。ヒト成人では、100mg/kgは100mg/kg×37kg/sq m=3700mg/sq mに相当する投薬量を決定する上記の両従来方法とは対照的に、投与に使用される精製した hsp抗原分子複合体の用量は、好ましくは従来法により推定された投薬量よりも極めて少ない。例えば、本発明の好適な実施形態によれば、hsp70-および／またはgp96-抗原分子複合体の量は、ヒト患者について約10マイクログラム〜約600マイクログラムの範囲で皮下投与され、より好ましくはヒトに対する用量は25gのマウスで使用されるものと同じ、すなわち10〜100マイクログラムの範囲である。本発明により提供されるヒト患者におけるhsp-90ペプチド複合体の好適な用量は、約50〜5,000マイクログラム、より好ましい用量は100マイクログラムである。あるいは、特定の実施の形態において、hsp70および/またはgp96抗原分子複合体の量は、ヒト患者に対しては約0.1マイクログラム〜約60マイクログラムの範囲で、皮内または筋肉内に投与される。他の特定の実施形態において、hsp70−および/またはgp96-抗原分子複合体の治療上有効な量は、10マイクログラム未満、たとえば0.1〜9マイクログラムであり、ヒトへの好適な用量は、25 gのマウスで使用されるのと実質的に同じかもしくはそれより少なく、例えば0.5 〜2.0マイクログラムの範囲内である。ヒト患者への皮内もしくは粘膜投与のためのhsp90抗原分子複合体の好適な投薬量は約5〜500マイクログラムの範囲内である。特定の実施形態において、hsp90-抗原分子複合体の治療上有効な量は50マイクログラム未満、例えば5〜49マイクログラムの範囲であり、好適な用量は5〜 40マイクログラムである。上記用量は、１日おきに全部で５回の注射を行って投与することができる。好適な実施形態において、上記投薬量は約４〜６週にわたって毎週１回投与されることが好ましく、投与様式をそれぞれの投与で変化させることが好ましい。好ましい例では、各投与部位を逐次変化させる。すなわち、非限定的な例として、最初の注射が左腕に皮内に施され、２回目が右腕に、３回目が左腹部に、４回目が右腹部に、５回目が左腿に、６回目が右腿に、等々、施されてもよい。同じ部位は、１回以上の注射の後に繰り返されてもよい。また、分割注射が施されてもよい。こうして、例えば、投薬量の半分が一つの部位に施され、別の半分が同日に他の部位に施されてもよい。４〜６週後に、更なる注射を１ケ月の期間にわたって２週間隔で施すことが好ましい。その後、注射を毎月施してもよい。その後の注射のペースは、患者の臨床経過および免疫療法に対する応答に応じて変更し得る。あるいは、投与の様式を逐次変化させる（例えば、毎週の注射が皮内または粘膜に順々に施される）。 hsp-抗原分子複合体の投与のための上記レジメは、hsp抗原分子複合体で感作したAPCの投与前、投与中、または投与後に行われても良い。例えば、治療方法は逐次異なってもよい。例えばあるときはhsp抗原分子複合体を投与し、またあるときはhsp抗原分子で感作したAPCを投与してもよい。あるいは、hsp抗原分子複合体は、hsp抗原分子で感作したAPCと同時に投与してもよい。好ましくは、該 APCおよび該複合体を、それぞれ１週間以内に患者に投与する。本発明を５節および６節において非限定実施例により説明する。４．２．養子免疫療法との組み合わせ養子免疫療法とは、宿主に免疫細胞を投与することによって、この免疫細胞に、場合により腫瘍細胞および/または抗原性成分への特異的な免疫、または場合により腫瘍の退行もしくは感染症の治療を、直接的または間接的に媒介させることを目的とした、癌または感染症の治療方法をいう（1995年９月13日に出願された米国特許出願第08/527,546号参照。当該特許の開示内容は全て、本明細書中に参照により組み込まれる）。本明細書に記載された方法に従って、APCは、非共有結合により抗原性（または免疫原性）分子と複合体形成されたhspで感作され、養子免疫療法に使用される。本発明に従って、所望の投与経路を用いたhspペプチド複合体の投与による治療は、hsp抗原分子複合体で感作したAPCを用いた養子免疫療法法と組み合わされる。本明細書のセクション４で記載したように、hspペプチド複合体で感作したA PCは、hspペプチド複合体と共に、あるいはhspペプチド複合体の投与前または投与後に、投与することができる。さらに、投与様式は様々に変化させることができる。投与方法には例えば皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮内または粘膜への投与が挙げられるが、これらに限定されない。４．２．１．マクロファージおよび抗原提示細胞を得る抗原提示細胞（マクロファージ、樹状細胞およびB細胞が含まれるが、これらに限定されない）は、好ましくはヒトの末梢血液または骨髄に由来する幹細胞および前駆細胞からのin vitro精製により得られる（Inaba，K.ら、J．Exp．Med．176 :1693-1702(1992)に記載）。 APCは、従来技術において公知である様々な方法により得ることができる。好適な態様において、ヒトの血液細胞から得たヒトマクロファージが使用される。例示的なものであって限定的なものではないが、マクロファージは以下のようにして得ることができる。フィコール-ハイパーク勾配遠心分離により、患者（好ましくは治療する患者）の末梢血液から単核細胞を単離し、患者自身の血清または他のAB+ヒト血清で予めコーティングしておいた組織培養皿上に接種する。この細胞を37℃にて１時間インキュベートしたあと、ピペッティングにより非接着性細胞を除去する。培養皿に残った接着性細胞に、冷たい（4℃）１mM EDTAのリン酸緩衝生理食塩水を加え、この皿を室温で15分間放置する。細胞を採取し、RPMI緩衝液で洗浄し、RP MI緩衝液中に懸濁する。マクロファージ-コロニー刺激因子（M-CSF）と共に37℃ でインキュベートすることにより、マクロファージの数を増加させることができる。顆粒球-マクロファージ-コロニー刺激因子（GM-CSF）と共にインキュベートすることにより、樹状細胞の数を増加させることができる（Inaba，K.ら、J．Ex p．Med．176:1693-1702(1992)に記載）。４．２．２．Hsp- ペプチド複合体によるマクロファージおよび抗原提示細胞の感作抗原分子に非共有結合したhspでAPCを感作するが、この感作は該細胞を該複合体と共にin vitroでインキュベートすることにより、行われる。好ましくはAPC をhspと抗原分子の複合体と共に37℃にて15分間〜24時間in vitroでインキュベートすることにより、hspと抗原分子の複合体でAPCを感作する。例示的なものであってこれに限定されるものではないが、4×10⁷個のマクロファージを１mlあたり10マイクログラムのgp96-ペプチド複合体と共に、または１mlあたり100マイクログラムのhsp90-ペプチド複合体と共に、37℃にて15分間〜24時間、不純物のない１mlのRPMI培地でインキュベートすることができる。細胞を３回洗浄し、患者に注射するのに適した濃度（例えば１×10⁷/ml）で、好ましくは無菌状態の生理学的培地の中に再懸濁する。好ましくは、感作したAPCを注射する患者は、そのA PCを単離したもとの患者である（自己由来の実施形態）。任意で、例えば、抗原特異的クラスＩ拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を刺激する感作したＡＰＣの能力を、ＣＴＬを刺激して腫瘍壊死因子を放出させるその能力、およびこのようなＣＴＬの標的として作用するその能力により、モニターすることができる。４．２．３．感作したＡＰＣの再注入 hsp-抗原分子で感作したAPCを、患者の全身に、好ましくは静脈内に、従来の臨床方法により再注入する。これらの活性化細胞を、好ましくは全身投与により自系患者に全身投与することにより、再注入する。患者は、一般にはその患者の状態に応じて約10⁶〜約10¹²個の感作マクロファージの投与を受ける。幾つかのレジメにおいて、患者は任意にさらに好適量の生物学的応答修飾因子を受けても良い。これらの修飾因子には、サイトカインIFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6 、TNFまたは他のサイトカイン増殖因子が含まれるが、これらに限定されない。４．３．製剤、投与およびキット本発明のキットは、第一容器の中に、抗原分子に非共有結合した熱ショックタンパク質および製薬上許容可能な担体から主に構成される複合体を含む医薬組成物を含み、および第２容器の中に、抗原提示細胞を含む。本発明のhsp-抗原分子複合体は、癌または感染症の治療あるいは予防のために、ほ乳類、好ましくはヒトに投与する医薬調製物に製剤化することができる。適合性の医薬用担体に製剤化した本発明の化合物を含有する組成物を調製し、包装し、下記の適応腫瘍治療用の表示をする。適応腫瘍としては、ヒト肉腫、癌腫のような腫瘍、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、背索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、偏平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ビルムス腫、子宮頸癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫；白血病、例えば、急性リンパ球性白血病および急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤血白血病）；慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒細胞性）白血病および慢性リンパ球性白血病）；および真性多血球血症、リンパ腫（ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、およびＨ鎖病を例示することができる。あるいは、適当な感染症治療用の表示をすることができる。あるいはまた、適当な感染症治療用の医薬組成物にしてもよい。薬物溶解性および吸収部位は、治療薬の投与経路を選択する際に考慮すべき要因である。本発明の１実施形態において、hsp抗原分子複合体は、所望の投与経路を使用して、好ましくは皮内または粘膜に、投与される。皮内または粘膜への投与の利点としてはそれぞれ、低使用用量および高速吸収が挙げられる。皮下および筋肉内投与の利点としては、それぞれ幾つかの不溶性懸濁液および油性懸濁液に適していることが挙げられる。粘膜への投与経路には、経口、直腸、および鼻への投与が含まれるが、これらに限定されない。粘膜投与用製剤は、以下に記載するような様々な処方において適している。複合体が水溶性であれば、例えば、リン酸緩衝生理食塩水や他の生理学的に許容できる溶液（好ましくは無菌）などの適当な緩衝液に複合体を製剤化してもよい。さらにまた、得られた複合体が水系溶媒にほとんど溶解しない場合には、例えば、Tweenのような非イオン性界面活性剤またはポリエチレングリコールと一緒に製剤化する。このように、本発明の化合物およびその生理学的に許容できる溶媒化合物を製剤化して、吸入または吹き付け（口または鼻経由）投与、または経口、口腔粘膜、非経口あるいは直腸投与、腫瘍の場合には、固形腫瘍に直接注射する投与用に製剤化することができる。経口投与用としては、医薬調製物は、例えば、溶液、シロップ、懸濁液のような液体であってもよく、あるいはまた、使用前に水、その他の適当なビヒクルを用いて再構築するための薬物産物として提供してもよい。そのような液体調製物は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、水素化食用脂）、乳濁剤（例えば、レシチン、アカシア）、非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油状エステル類、分別植物油）および保存剤（例えば、p−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピル、ソルビン酸）を使用し、常法に従って製剤する。本発明の医薬組成物は、結合材（例えば、予めゼラチン化したメイズスターチ、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロース、リン酸水素カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ）、崩壊剤（例えば、馬鈴薯澱粉、グリコール酸ナトリウム澱粉）または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの製薬学的に許容できる賦形剤を用いて、常法により製造して、例えば、錠剤やカプセルの剤型をとることができる。錠剤は当業界に周知の方法でコーティングしてもよい。経口投与用調製物は適当な製剤化によって、本発明の活性化合物の制御放出を可能とすることができる。口腔粘膜投与用の組成物は、常法により製剤化された錠剤または舌下錠の形態をとることができる。本発明の化合物は、例えば、ボーラス注射または連続注入による注射で非経口投与することができる。注射用製剤は、添加された保存剤と一緒に、例えば、アンプルや複数用量容器にいれて、単位用量形態で提供することができる。この組成物は、油性または水性媒体の懸濁液、溶液または乳液の形をとることができ、さらに、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤のような製剤用添加剤を含むことができる。あるいは、活性成分は、使用前に、例えば、パイロジェンを含まない滅菌水のごとき適当な媒体と共に粉状体とすることができる。本発明の化合物は、例えば、ココアバターまたはその他のグリセリド類のような公知の坐薬基材を含む坐薬または貯留性浣腸に配合することができる。前記の製剤に加えてさらに、本発明の化合物は、デポ製剤として製剤化してもよい。そのような持続性製剤は、移植（例えば、皮下または筋肉内）や筋注により投与することができる。このように、本発明の化合物は、適当なポリマー物質または疎水性物質(例えば、許容できる油中の乳液として)、イオン交換樹脂、難溶性誘導体、例えば、難溶性塩と共に、製剤化することができる。リポソームおよび乳剤は親水性薬剤の送達担体（vehicles or carriers）として周知の例である。注入法による投与では、本発明に使用する化合物は、好適な高圧ガス（例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガス）を使用して、加圧パックまたは噴霧器からエアゾール噴霧式で、適宜送達される。加圧式エアゾールの場合、用量単位は、計量した量を送達するためのバルブを備えることにより、測定することができる。例えば、吸入器または吹入れ器で使用するためのゼラチン製のカプセルやカートリッジに、該化合物と好適な粉末状基剤（ラクトースやでんぷんなど）との粉末状混合物を含ませることによって、製剤を調製することができる。所望であれば、本発明の組成物は、活性成分を含有する一またはそれ以上の単位用量形態を含んでもよいパックまたはディスペンサーの形で提供することができる。パックは、例えば、ブリスターパックのような、金属またはプラスチック箔から構成することができる。パックまたはディスペンサー装置には、投与指示を添付してもよい。本発明はまた、本発明の治療法を実施するためのキットを提供する。そのようなキットは、薬学的に許容できる形で、一またはそれ以上の第一容器の中に治療または予防上有効量のhsp-抗原分子複合体（好ましくは精製されたもの）、および第２容器の中に、本発明の感作したAPC（好ましくは精製したもの）をさらに含む。キットのバイアルに入れた本発明のhsp-抗原分子複合体は、例えば、滅菌生理食塩水、デキストロース溶液、緩衝液、その他の薬学的に許容できる滅菌液体と組み合わせて、薬学的に許容できる溶液の形にすることができる。あるいは、本発明の複合体は、凍結乾燥または乾燥してもよい。この場合、キットはさらに、必要に応じて、注射用の溶液を作るために複合体を解凍するための、好ましくは滅菌した薬学的に許容できる溶液(例えば、生理食塩水、デキストロース溶液など)を容器中に含ませることができる。他の態様において、本発明のキットは、複合体を注射するための、好ましくは滅菌状態で包装した注射針または注射器、および/または包装したアルコールパッドをさらに含む。医者または患者によるhsp-抗原分子複合体投与のため、当該キットには、必要に応じて、投薬指示書を添付することができる。４．４．標的感染症本発明方法によって治療または予防できる感染症は、感染性因子によって引き起こされる。感染性因子の例としては、ウイルス、細菌、かび、原虫、寄生虫を挙げることができるが、本発明はこれに限定されるものではない。本発明方法によって治療または予防できるウイルス疾患の例としては、肝炎A 型、肝炎B型、肝炎C型、インフルエンザ、水痘、アデノウイルス、単純ヘルペスＩ型（HSV-I）、単純ヘルペスII型（HSV-II）、牛疫、リノウイルス、エコーウイルス、ロタウイルス、呼吸シンシチアルウイルス、乳頭腫ウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス(huntaviras)、コクサッキーウイルス、おたふくかぜウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、ヒト免疫不全ウイルスＩ型（HIV-I）およびヒト免疫不全ウイルスII型（HIV-II）を挙げることができるが、これらだけに限定されるものではない。本発明方法によって治療または予防できる細菌疾患は、細菌によって引き起こされる。細菌の例としては、マイコバクテリウム、リッケチア、マイコプラズマ、ナイセリア、レジオネラを挙げることができるが、本発明はこれらに限定されるものではない。本発明方法によって治療または予防できる原虫性疾患は、例えば、リーシュマニア、コクジジオア(kokzidioa)、トリパノソーマの原虫類によって引き起こされるが、本発明はこれらに限定されるものではない。本発明方法によって治療または予防できる寄生虫性疾患は、例えば、クラミジア、リッケチアの寄生虫類によって引き起こされるが、本発明はこれらに限定されるものではない。４．５．標的癌本発明方法によって治療または予防できる癌としては、以下の例を挙げることができるが、ヒト肉腫、癌腫のような腫瘍に限定されるものではない。例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、背索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腫癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ビルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫；白血病、例えば、急性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病）；慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒細胞性）白血病および慢性リンパ性白血病）；および真性多血球血症、リンパ腫（ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン、並びにＨ鎖病を例示することができる。そのような癌の具体例は、以下の節に記載されている。具体的一態様において、癌は転移性である。他の具体的態様において、癌患者は、hsp-抗原分子複合体の投与またはhsp感作APCの投与に先立って抗癌療法（例えば、化学療法放射線治療）を受けているために免疫が低下している患者である。４．５．１．肝臓に転移した結腸直腸癌 1992年におよそ15万人のアメリカ人が結腸直腸癌であると診断された。そして結腸直腸転移の結果６万人以上が死亡した。彼らが死亡したとき、結腸直腸癌患者の80%に、肝臓を含む転移疾患があり、その患者の半分には他の（肝臓外の）転移があるという証拠は見つからなかった。肝臓の最も転移性の腫瘍は、胃腸の原発部から始まる。不幸にも、転移性肝病変の履歴は、重篤な予後を伴い、全身的化学療法では有意の応答率を得ることができず、また生存期間を変えることはできなかった（Drebin，J.A.ら編，Current Therapy In Oncology，J.E．Nieder huber，B.C．Decker，Mosby編，1993，p.426）。結腸直腸癌はまず局部的なリンパ節から門脈静脈性循環を通じて肝臓へ広がる。肝臓は転移の最も一般的な内臓部位を代表している。結腸直腸癌患者が治療を求めるに至る症状は、病変の解剖学的局在によって変わる。例えば、上行結腸にある病変は潰瘍を引き起こすことが多い。この潰瘍は便通時に慢性的失血を起こす。根治的切除は侵襲性結腸直腸癌患者の治療には最大の効果をもたらす。手術の前にはCEA力価が測定される。放射線治療および化学療法は進行性結腸直腸癌患者に適用される。化学療法剤(例えば、5-フルオロウラシル)を投与した結果は様々であり、25%未満の患者が腫瘍塊の50%を超える退縮を経験している（Rchards ，第２版，F.ら，1986，J．Cljn．Oncol．4:565）。広範に広がった転移のある患者は生存に限界があり、このグループの患者には全身化学療法はほとんど効果がない。さらに、全身投与化学療法は、種々の薬剤に伴う重篤な毒性、例えば、重症の下痢、粘膜炎および/または脊髄抑圧などによって制限されることが多い。肝臓放射線照射や全身化学療法、肝動脈結索、腫瘍塞栓化、免疫療法などの他の治療方法もすべて検討されたが、大部分については、患者の生存に効果があるとの証明は得られていない。具体的な一態様において、腫瘍性疾患の進行を阻止するために、本発明は、肝臓に転移した結腸直腸癌患者の腫瘍特異的免疫を高める組成物および方法を提供する。これら腫瘍性疾患を治療する好ましい方法は、ペプチド複合体に非共有結合した自己由来のhsp組成物を投与することを含んでなる。当該組成物は腫瘍細胞に対する腫瘍特異的免疫を引き出す。さらに詳述すれば、gp96を含有する本発明の組成物を使用すると、毒性を誘発することなく、癌患者の肝臓癌成長をほとんど完全に阻止するという結果を得ることができるので、劇的な治療効果を提供することができる。従って、本発明方法の一例として、結腸直腸癌と診断された患者に、肝臓転移の有無にかかわらず、種々の異なる投与ルートの一つにより、gp96-抗原分子複合体を投与する。好ましい投与経路は、解剖学的に異なる部位、例えば、左腕、右腕、左腹部、右腹部、左大腿部、右大腿部などの皮内である。注射部位は、セクション７および８で記載するように、各週毎の注射毎に異なる。本発明の方法に従って予防または治療することができる原発性および転移性癌の例は、以下のセクションおよび以下の例において詳細に記載される。４．５．２．肝細胞癌腫肝細胞癌腫は合衆国の老人に一般的な疾患である。多くの要因が肝細胞癌腫を引き起こすが、この疾患は通常肝疾患既往症のある人に限られている。合衆国の肝細胞癌腫患者のおよそ60-80%が肝硬変に罹っており、肝硬変のある患者の約4% は最終的に肝細胞癌腫になる（Niederhuber，J.E.編、1994，Current Therapy i n Oncology，B.C．Decker，Mosby）。肝疾患が遺伝的血色素症またはB型肝炎ウイルス感染によって引き起こされた患者には、このリスクは高い（Bradbear，R. A.ら，1985，J．Natl．Cancer Inst．75:81;Beasley，R.P.ら，1981，Lancet 2: 1129）。肝細胞癌腫に至る可能性をもつ硬変のその他の原因としては、アルコール乱用とメトトレキセートの慢性的投与により引き起こされた肝繊維症がある。肝細胞癌腫の最も頻発する症状は、体重減少を伴う、右上腹部の四分一区分または上腹部における痛覚塊の発現である。肝硬変患者において、腹水症、門脈圧亢進症および比較的急激な臨床上の劣化は、肝細胞癌腫発症の前触れとなる。ほとんどの場合、血清アミノトランスフェラーゼやアルカリフォスファターゼの標準的肝機能テストにおいて、異常値が観察される。肝臓のCTスキャンを用いることにより、肝細胞癌腫の解剖学的分布を調べることができ、また経皮穿刺生検法のための方向づけを提供することができる。肝細胞癌腫患者の約70%は、上昇した血清アルファーフェトプロテイン濃度をもっており（McIntire，K.R.ら，1975，Cancer Res．35:991）、その濃度は疾患の程度と相関する。根治的切除は、肝細胞癌腫患者の治療にはわずかの希望しかもたらさない。そのような手術手順によれば、５年生存する比率は12-30%である。肝臓移植はより若い患者の生存率を改善することができる。しかしながら、拡大した肝硬変多病巣腫瘍パターンまたは適合ドナー臓器不足のために、ほとんどの患者はこの手術を受けられない。静脈内ルートまたは肝動脈内カテーテルによって化学療法剤が投与されている。そのような治療法は肝臓への放射線療法と併用されていることがある。ドキソルビシンまたは5-フルオロウラシルの全身投与治療を受けている患者の中に、測定可能な腫瘍サイズの50%以上の退縮があったことが報告されている。しかしながら、化学療法は免疫抑制を誘発することが多く、腫瘍を完全に消滅させることは稀であって、しかもその応答持続は短い。肝細胞癌腫患者の予後は、肝硬変や肺または骨への転移とは相関していない。患者の平均生存率は、わずか4〜6ケ月である。他の具体的態様において、腫瘍性疾患の進行を阻止し最終的にすべての前腫瘍性細胞および腫瘍性細胞を放射線で治療するために、本発明は、結腸直腸癌患者の特異的免疫を高める組成物および方法を提供する。４．５．３．乳癌本発明の他の具体的態様は、乳癌の治療に関する。アメリカ癌協会は、1992年に18万人のアメリカ人女性が乳癌と診断され、４万６千人がその病に倒れたと推定した（Niederhuber，J.E.編、Current Therapy in Oncology B.C．Decker，Mo sby，1993）。これにより、乳癌は、肺癌に次いで女性の癌死の第二番目の主要原因となる。不穏なのは、1980年以来、3%の割合で乳癌が増え続けているという状況である（Niederhuber，J.E.編、Current Therapy in Oncology B.C．Decker ，Mosby，1993）。現在行われている乳癌の治療としては、外科手術、放射線療法、ホルモン療法および/または化学療法がある。ホルモンリセプターと疾患の程度という乳癌の二大特徴を考慮することにより、どのようにホルモン療法と標準用量化学療法とを併用して生存率を改善し、生活のクオリティを維持または改善するかが決定される。乳癌患者における補助剤療法として、2-シクロフォスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン・メトトレキセート、5-フルオロウラシルおよび/またはロイコボリン（これらには限定されない）を併用した広範囲にわたる多剤療法が使われている。具体的な一態様において、本発明は、女性の前腫瘍性および腫瘍性哺乳細胞に対する特異的免疫を高める組成物および方法を提供する。本発明はまた、乳癌を発症するリスクの高い女性における腫瘍性細胞の発生を予防する組成物および方法を提供し、さらに癌細胞の増殖と転移を阻止する組成物および方法を提供する。これらの組成物は、単独で、あるいは相互にまたは生物学的応答改変剤と組み合わせて適用することができる。４．６．自己由来の態様 hspの特異的免疫原性は、hspそれ自身だけでなく、それに結合したペプチドにも由来する。癌ワクチンとしてのhsp-ペプチド自己複合体の使用に関する本発明の好ましい一態様においては、癌の免疫療法に対する最も手に負えない二つのハードルが克服される。第一のハードルは、ヒトの癌が、実験動物の癌と同様に、抗原性が異なる可能性である。本発明の一態様において、hspはそれらが由来する癌細胞の抗原ペプチドに付随し（chaperone）、このハードルを克服する。第二に、癌の免疫療法に対する最新のアプローチは癌細胞株のCTL-認識エピトープの測定に集中している。このアプローチでは、細胞株と癌に対するCTLを使用することが必要である。圧倒的な割合のヒト癌に対しては、これらの物質は入手できない。hsp-ペプチド自己複合体の使用に関する本発明の一態様においては、癌の免疫療法は細胞株またはCTLが使用可能かどうかに依存しておらず、また、癌細胞の抗原エピトープの特定も必要としない。これらの利点は、ペプチド複合体に非共有結合した自己由来のhspの魅力を高め、当該自己由来のhspを癌に対する魅力のある免疫原にする。４．７．原発性および転移性新生腫瘍疾患の予防と治療本発明によって提供される免疫療法が癌患者での使用に望ましい理由として、数多くのものを挙げることができる。第一に、癌患者が免疫抑制状態にあれば、麻酔を伴う手術およびその後の化学療法は免疫抑制を悪化させる。また手術前の適切な免疫療法によって、この免疫抑制は予防または逆方向に向かわせることができる。これは、感染合併症を少なくし、傷の治癒を促進させる。第二に、術後の腫瘍総量が最小化し、この状況下で免疫療法は最も効果をあげる可能性がある。第三の理由は、手術時に腫瘍細胞が循環器に流しだされて、この時期に適用される効果的な免疫療法がこれらの細胞を排除できるという可能性である。癌を阻止しそして最終的には臨床上癌の全体的退縮及び撲滅を目的とした、本発明の予防および治療法は、手術前、手術時または手術後の、癌患者の免疫能力を高めること、そして癌細胞に対する腫瘍特異的な免疫を誘発することに関する。４．８．養子免疫療法と組み合わせたhsp-ペプチド複合体による癌の予防および免疫療法期間中の効果のモニタリング新生腫瘍疾患の発症と進行におけるhsp-抗原分子複合体による免疫療法の効果は、当業者に公知の任意の方法でモニターすることができる。これらに限定されるものではないが、a)細胞性免疫を評価する遅延型過敏性；b)in vitroでの細胞溶解性T-リンパ球の活性；c)腫瘍特異的抗原、例えば、癌胎児性抗原（CEA）のレベル；d)コンピュータ断層撮影(CT)スキャンなどの技術を利用した腫瘍形態の変化；およびe)高いリスクをもつ個体の特定癌に対するリスクの推定バイオマーカーのレベル変化、そしてf)ソノグラムを使用する腫瘍形態の変化を測定する方法が挙げられる。４．８．１．遅延型過敏皮膚試験遅延型過敏症皮膚試験は、全体的な免疫適格性および抗原に対する細胞性免疫に非常な価値がある。一連の共通皮膚抗原に対する反応不能性は、アネルギーと呼ばれる（Sato，T.，et al.，1995，Clin．Immunol．Pathol．74：35-43）。皮膚試験を適正に行うには、抗原を4℃で滅菌保存し、遮光して使用直前に再構成する技術が必要である。抗原の、皮下ではなく、皮内投与を確実にするには、25または27ゲージ針が必要である。抗原を皮内投与して24および48時間後最大の紅斑と硬結両方をルーラーで測定する。投与された抗原または抗原群に対する活性低下を、より高濃度の抗原でテストすることによって、または状況があいまいな場合には、中間試験を伴う反復試験によって、確認する。４．８．２．細胞溶解性T-リンパ球のin vitro活性フィコール-ハイパーク遠心分離濃度勾配法によって単離した８ｘ10⁶個の末梢血由来Tリンパ球を、10%ウシ胎児血清含有RPMI培地３ml中、４ｘ10⁴個のマイシンCで処理した腫瘍細胞を用いて再刺激する。いくつかの実験では、T細胞増殖因子源として、33％の二次混合リンパ球培養上清またはIL-2を培地に加えてある。免疫後の細胞溶解性T-リンパ球の一次反応を測定するため、刺激剤である腫瘍細胞なしで、T細胞を培養する。他の実験では、抗原性の異なる細胞を用いてT細胞を再刺激する。６日後、培養物の細胞毒性を、４時間の⁵¹Cr放出アッセイで試験する。標的の自発的⁵¹Cr放出は、20%未満のレベルになるべきである。抗MHCクラスＩブロッキング活性の場合は、W6/32ハイブリドーマの10倍濃縮上清を、最終濃度が12.5%になるよう、その試験に添加する（Heike，M.ら，J．Immunothera py 15:165-174）。４．８．３．腫瘍特異的抗原のレベルすべての腫瘍にユニークな腫瘍抗原を検出することは不可能であるが、多くの腫瘍は正常細胞から識別できる抗原を出現する。モノクローナル抗体試薬によって、抗原の生化学的特性決定と単離が可能になり、形質転換細胞と非形質転換細胞の識別、および形質転換細胞の細胞系統の特定に診断上非常に価値があった。特性決定が最大限なされているヒト腫瘍関連抗原は、胎児腫瘍性抗原である。これらの抗原は胚形成中に発現されるが、正常な成人組織には存在しないか、あっても検出は極めて困難である。プロトタイプの抗原は癌胎児性抗原（CEA）、胎児消化管に見出される糖タンパク質である。CEAはヒト結腸癌細胞にはあるが、正常な成人結腸細胞にはない。CEAが結腸癌細胞から流れ出て血清中に見出される以上、もともと、この血清における抗原の存在は結腸癌患者をスクリーニングするのに使うことが出来るのではないかと考えられていた。しかしながら、膵臓癌や乳癌などの他の腫瘍患者にもまた、血清CEAの上昇値が見られた。従って、治療中の癌患者のCEAレベルの下降および上昇をモニターすることは腫瘍の進行および治療の成果を予測するのに有用であることがわかった。その他のいくつかの胎児腫瘍性抗原もヒト腫瘍を診断しモニターするのに有用であることがわかた。例えば、α-フェトプロテインは胎児肝および卵黄嚢細胞により正常に分泌されるα-グロブリンであるが、肝癌および胚芽細胞腫瘍の患者の血清中に存在し、これを疾患の現状を示す指標として利用することができる。４．８．４．コンピュータ連動断層撮影（ＣＴ）スキャンＣＴは、癌の正確な病気分類のための技術の選択の機会を残している。ＣＴは、転移の検出のための他の全ての画像化技術よりも感度が高く特異的であるということが分かっている。４．８．５．推定的な生物学的マーカーの測定特定の癌の危険度についての推定的な生物学的マーカーのレベルを、ペプチド複合体に非共有結合的に結合したhspの効果を監視するために測定する。例えば、前立腺癌に対する危険度が増大した個体において、血清前立腺特異抗原（ＰＳＡ）をBrawer，M.K.，ら，1992，J．Urol．147:841-845及びCatalona，W.J.,ら，1993，JAMA 270:948-958に記載された手法によって測定し；又は結腸直腸癌ＣＥＡに対する危険度を有する個体において、第４．５．３節に記載したようにして測定し；そして乳癌に対する危険度が増大した個体において、エストラジオールの１６−α−ヒドロキシル化を、Schneider，J．ら，1982，Proc．Natl．Acad ．Sci．ISA 79:3047-3051に記載された手法によって測定する。上記で引用した参考文献は、参照により本明細書に含まれるものとする。４．８．６．ソノグラムソノグラムは、癌の正確な病気分類のための技術のもう一つの選択の機会を残している。５．実施例： hsp-ペプチド複合体の投与と組み合わせた感作マクロファージの養子移入自己のヒトマクロファージを、抗原性／免疫原性分子に非共有結合で結合させた自己ヒトgp96により感作する。感作マクロファージを、gp96-抗原性分子複合体の投与とほぼ同時に、または投与前に、または投与後にヒト患者に投与する。５．１．材料および方法マクロファージを次のようにして取得した。すなわち、治療すべきヒト患者の末梢血から、Ficoll-Hypaque勾配遠心により単核細胞を単離し、患者自身の血清または他のAB+ヒト血清を予めコーティングしておいた組織培養皿にまく。細胞を37℃で1時間インキュベートし、その後非付着細胞をピペッティングにより取り除く。培養皿に残存した付着細胞に、冷却した(4℃)リン酸緩衝溶液中の1mM E DTAを加え、これらの培養皿を室温に15分放置する。細胞を回収し、RPMI緩衝液で洗浄し、RPMI緩衝液中に懸濁する。マクロファージ数の増加は、マクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)と共に37℃でインキュベートすることにより得られる。樹状細胞数の増加は、Inaba，K.ら，1992，J．Exp．Med．176:1693-1702に詳述されるように、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)と共に37 ℃でインキュベートすることにより得られる。次に、マクロファージ(4x10⁷個)を、第4.1.3節に記載した方法を用いて、自己腫瘍または自己肝臓に由来するgp96-ペプチド複合体50μgを含むRPMI 1ml中で37 ℃で3時間インキュベートする。その後マクロファージを3回洗浄し、RPMI培地中に1x10⁷個／mlの濃度で再懸濁する。この懸濁液200マイクロリットルを以下の実験プロトコールに記載するように投与する。５．２．肝細胞性癌の治療肝細胞性癌をもつヒト患者5群に、手術後の彼ら自身の腫瘍に由来するhsp-ペプチド複合体で感作した自己マクロファージを注射する。hsp-ペプチド複合体による治療は手術後のいつでも開始できる。しかし、患者が化学療法を受けている場合は、通常、免疫系を回復させるために4週またはそれ以上あけた後で、感作マクロファージを単独でまたはhsp-ペプチド複合体と組み合わせて投与する。患者の免疫能力は上記第4.7節に記載した方法により試験する。好ましい治療レジメは、生理食塩水または他の生理学的に適合しうる溶液に溶解したhsp-ペプチド複合体と組み合わせて感作マクロファージを週に1回注射することを含む。感作マクロファージはhsp-ペプチド複合体とほぼ同時に投与しても、一方を他方の投与に先立って投与してもよい。 hsp70またはgp96の場合に用いられる投与量は0.1から9マイクログラムの範囲であり、好ましい投与量は0.5〜2.0マイクログラムである。hsp90の場合に用いられる投与量は5から500マイクログラムの範囲であり、好ましい投与量は約10マイクログラムである。注射部位は毎回変える。例えば、1回目の注射を左腕の皮内に行い、2回目の注射を右腕の皮内に、3回目の注射を左側の腹部の皮内に、4回目の注射を右側の腹部の皮内に、5回目の注射を左太股に、6回目の注射を右太股の皮内に行うといったぐあいである。あるいは、同一の部位に1回以上の間隔をあけてから注射することもできる。さらに、注射を分割して、用量の各半量を同日のうちに異なる部位に投与してもよい。全体的には、最初の4〜6回の注射を1週おきに行う。続いて、2回の注射を2週おきに行う。その後は1カ月おきの注射レジメに従う。治療の効果は、a)細胞性免疫の評価としての遅延型過敏症、b)細胞傷害性Tリンパ球のin vitro活性、c) 腫瘍特異的抗原、例えば癌胎児性(CEA)抗原のレベル、d)コンピュータ断層撮影( CT)スキャンのような技術を用いた腫瘍の形態の変化、および／またはe)高リスク個体の特定癌についてのリスクの推定バイオマーカーの変化、を測定することによりモニターする。第4.10節で上述したように、得られた結果に応じて治療レジメを変更し、患者の免疫学的応答を維持および／または増強して、腫瘍の退縮および癌細胞の完全根絶を成し遂げることを最終目標とする。６．実施例：結腸直腸癌の治療における養子免疫療法と組み合わせた hsp-ペプチド複合体の投与検出できない微小な癌転移を排除して生存率を向上させるために、アジュバント療法および予防的アジュバント療法として、結腸直腸癌の完全な退縮後の患者に、hsp-抗原性分子複合体により感作された抗原提示細胞の投与と組み合わせて hsp-ペプチド複合体（gp96、hsp70、hsp90またはそれらの組合せ）を投与する。結腸直腸癌の患者に用いられる治療・予防レジメは、肝細胞性癌の患者について上記第5節で記載したものと同様である。結腸直腸癌の防止および治療に関して臨床評価中の患者をモニターする方法は第4.7節に記載した方法により行う。特に、腫瘍の退縮および／または再発の有効なモニターとしてCEAレベルを測定する(Mayer，R.J.ら，1978，Cancer 42:1428)。本発明はここに記載した特定の実施形態によりその範囲を制限されるものではない。実際、ここに記載したものに加えて、本発明のさまざまな改変が前記の説明および添付図面から当業者には明らかであろう。このような改変も本発明の請求の範囲に含まれるものである。本明細書中には種々の刊行物が引用されているが、それらの開示内容をそのままここに含めるものとする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 39/12 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 31/00 37/04 35/00 43/00 １１１ 37/04 Ａ６１Ｋ 37/02 43/00 １１１ 37/66 Ｇ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ

Claims

【特許請求の範囲】 1. 個体において免疫応答を引き出す方法であって、 (a) 本質的に第1抗原性分子に非共有結合で結合された第1熱ショックタンパク質からなる第1複合体を含有する第1組成物を前記個体に投与し、そして (b) 第２抗原性分子に非共有結合で結合された第２熱ショックタンパク質からなる第２複合体の感作量によりin vitroで感作された抗原提示細胞を含有する第2組成物を前記個体に投与する、ことを含んでなり、その際、前記第2組成物を第1組成物の投与前、投与と同時、または投与後に投与する、上記方法。 2. 第1熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項1に記載の方法。 3. 第2熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項1に記載の方法。 4. 第2熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項2に記載の方法。 5. 第1熱ショックタンパク質がhsp70である、請求項1に記載の方法。 6. 第1熱ショックタンパク質がhsp90である、請求項1に記載の方法。 7. 第1熱ショックタンパク質がgp96である、請求項1に記載の方法。 8. 第1熱ショックタンパク質と第2熱ショックタンパク質が同一のものである、請求項1に記載の方法。 9. 前記個体がヒトである、請求項1または2に記載の方法。 10．第1組成物と第2組成物とが同一である、請求項1に記載の方法。 11．上記個体が肝臓癌、大腸癌または乳癌を有する、請求項1または2に記載の方法。 12．インターフェロン-α、インターフェロン-γ、インターロイキン-2、インターロイキン-4、インターロイキン-6および腫瘍壊死因子よりなる群から選択される有効量の生物学的応答変更因子を前記個体に投与することをさらに含んでなる、請求項1または2に記載の方法。 13．第1組成物を週に1回投与する、請求項1または2に記載の方法。 14．第2組成物を週に1回投与する、請求項1または2に記載の方法。 15．第1複合体を筋肉内、皮下、腹腔内、静脈内、皮内または粘膜に投与する、請求項1または2に記載の方法。 16．第2組成物を静脈内に投与する、請求項1または2に記載の方法。 17．10⁶〜10¹²個の抗原提示細胞を投与する、請求項1または2に記載の方法。 18．第1複合体と第2複合体とが同一である、請求項1または2に記載の方法。 19．前記個体がヒトである、請求項4に記載の方法。 20．癌を有する個体の治療方法であって、 (a) 本質的に第1抗原性分子に非共有結合で結合された第1熱ショックタンパク質からなる第1複合体を含有する第1組成物を前記個体に投与し、そして (b) 第2抗原性分子に非共有結合で結合された第2熱ショックタンパク質からなる第2複合体の感作量によりin vitroで感作された抗原提示細胞を含有する第2組成物を前記個体に投与する、ことを含んでなり、その際、前記第2組成物を第1組成物の投与前、投与と同時、または投与後に投与する、上記方法。 21．第1熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項20に記載の方法。 22．第2熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項20に記載の方法。 23．第2熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項21に記載の方法。 24．第1熱ショックタンパク質がhsp70である、請求項20に記載の方法。 25．第1熱ショックタンパク質がhsp90である、請求項20に記載の方法。 26．第1熱ショックタンパク質がgp96である、請求項20に記載の方法。 27．第1熱ショックタンパク質と第2熱ショックタンパク質とが同一である、請求項20または21に記載の方法。 28．前記個体がヒトである、請求項20または21に記載の方法。 29．第1組成物と第2組成物とが同一である、請求項20に記載の方法。 30．インターフェロン-α、インターフェロン-γ、インターロイキン-2、インターロイキン-4、インターロイキン-6および腫瘍壊死因子よりなる群から選択される有効量の生物学的応答変更因子を前記個体に投与することをさらに含んでなる、請求項20または21に記載の方法。 31．第1組成物を週に1回投与する、請求項20または21に記載の方法。 32．第2組成物を週に1回投与する、請求項20または21に記載の方法。 33．第1複合体を筋肉内、皮下、腹腔内、静脈内、皮内または粘膜に投与する、請求項20または21に記載の方法。 34．第2組成物を静脈内に投与する、請求項20または21に記載の方法。 35．10⁶〜10¹²個の抗原提示細胞を投与する、請求項20または21に記載の方法。 36．第1複合体と第2複合体とが同一である、請求項20、21または23に記載の方法。 37．前記癌が肉腫または癌腫からなり、繊維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ビルムス腫、子宮頸癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、およびＨ鎖病よりなる群から選択される、請求項20または21に記載の方法。 38．前記個体がヒトである、請求項23に記載の方法。 39．第1抗原性分子が第1熱ショックタンパク質とin vivoで内因的に結合しているペプチドであり、第1複合体が前記個体に由来する癌組織から調製される、請求項20に記載の方法。 40．第2抗原性分子が第2熱ショックタンパク質とin vivoで内因的に結合しているペプチドであり、第2複合体が前記個体に由来する癌組織から調製される、請求項20に記載の方法。 41．第1抗原性分子が第1熱ショックタンパク質とin vivoで内因的に結合しているペプチドであり、第1複合体が前記個体の同種異系に由来する癌組織から調製される、請求項20に記載の方法。 42．第2抗原性分子が第2熱ショックタンパク質とin vivoで内因的に結合しているペプチドであり、第2複合体が前記個体の同種異系に由来する癌組織から調製される、請求項20に記載の方法。 43．第1抗原性分子が第1熱ショックタンパク質とin vivoで内因的に結合しているペプチドであり、第1複合体が癌組織から調製される、請求項20に記載の方法。 44．第2抗原性分子が第1熱ショックタンパク質とin vivoで内因的に結合しているペプチドであり、第2複合体が癌組織から調製される、請求項20に記載の方法。 45．第1hspと第1抗原性分子との第1複合体がin vitroで調製される、請求項20 に記載の方法。 46．第2hspと第2抗原性分子との第2複合体がin vitroで調製される、請求項20 に記載の方法。 47．第1抗原性分子が腫瘍特異的抗原である、請求項20に記載の方法。 48．第2抗原性分子が腫瘍特異的抗原である、請求項20に記載の方法。 49．第1複合体を全mgタンパク質の60〜100%にまで精製する、請求項20に記載の方法。 50．第1複合体を全mgタンパク質の60〜100%にまで精製する、請求項21に記載の方法。 51．癌の予防を希望する個体において癌を予防する方法であって、 (a) 本質的に第1抗原性分子に非共有結合で結合された第1熱ショックタンパク質からなる第1複合体を含有する第1組成物を前記個体に投与し、そして (b) 第２抗原性分子に非共有結合で結合された第2熱ショックタンパク質からなる第2複合体の感作量によりin vitroで感作された抗原提示細胞を含有する第2組成物を前記個体に投与する、ことを含んでなり、その際、前記第2組成物を第1組成物の投与前、投与と同時、または投与後に投与する、上記方法。 52．第1熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項51に記載の方法。 53．第2熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項51に記載の方法。 54．第2熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項52に記載の方法。 55．第1熱ショックタンパク質がhsp70である、請求項51に記載の方法。 56．第1熱ショックタンパク質がhsp90である、請求項51に記載の方法。 57．第1熱ショックタンパク質がgp96である、請求項51に記載の方法。 58．第1熱ショックタンパク質と第2熱ショックタンパク質とが同一である、請求項51または52に記載の方法。 59．前記個体がヒトである、請求項51または52に記載の方法。 60．第1組成物と第2組成物とが同一である、請求項51に記載の方法。 61．第1複合体と第2複合体とが同一である、請求項51または52に記載の方法。 62．第1抗原性分子が第1熱ショックタンパク質とin vivoで内因的に結合しているペプチドでる、請求項51に記載の方法。 63．第2抗原性分子が第2熱ショックタンパク質とin vivoで内因的に結合しているペプチドである、請求項51に記載の方法。 64．第1複合体が癌組織から調製される、請求項51に記載の方法。 65．第2複合体が癌組織から調製される、請求項51に記載の方法。 66．第1熱ショックタンパク質と第1抗原性分子との第1複合体がin vitroで調製される、請求項51に記載の方法。 67．第2熱ショックタンパク質と第2抗原性分子との第2複合体がin vitroで調製される、請求項51に記載の方法。 68．第1抗原性分子が腫瘍特異的抗原である、請求項51に記載の方法。 69．第2抗原性分子が腫瘍特異的抗原である、請求項51に記載の方法。 70．感染症の治療または予防を希望する個体において感染症を治療または予防する方法であって、 (a) 本質的に第1抗原性分子に非共有結合で結合された第1熱ショックタンパク質からなる第1複合体を含有する第1組成物を前記個体に投与し、そして (b) 第2抗原性分子に非共有結合で結合された第2熱ショックタンパク質からなる第2複合体の感作量によりin vitroで感作された抗原提示細胞を含有する第2組成物を前記個体に投与する、ことを含んでなり、その際、前記第2組成物を第1組成物の投与前、投与と同時、または投与後に投与する、上記方法。 71．第1熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項70に記載の方法。 72．第2熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項70に記載の方法。 73．第2熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項71に記載の方法。 74．第1熱ショックタンパク質がhsp70である、請求項70に記載の方法。 75．第1ショックタンパク質がhsp90である、請求項70に記載の方法。 76．第1熱ショックタンパク質がgp96である、請求項70に記載の方法。 77．第1熱ショックタンパク質と第2熱ショックタンパク質とが同一である、請求項70または71に記載の方法。 78．前記個体がヒトである、請求項70または71に記載の方法。 79．第1組成物と第2組成物とが同一である、請求項70に記載の方法。 80．第1複合体と第2複合体とが同一である、請求項70または71に記載の方法。 81．第1抗原性分子が、感染症を引き起こす病原体に感染した細胞内で第1熱ショックタンパク質と内因的に結合しているペプチドである、請求項70に記載の方法。 82．第2抗原性分子が、感染症を引き起こす病原体に感染した細胞内で第2熱ショックタンパク質と内因的に結合しているペプチドである、請求項70に記載の方法。 83．第1抗原性分子が感染症を引き起こす病原体の抗原である、請求項70に記載の方法。 84．第2抗原性分子が感染症を引き起こす病原体の抗原である、請求項70に記載の方法。 85．病原体がウイルス、細菌、原生動物、真菌または寄生体である、請求項83または84に記載の方法。 86．抗原提示細胞がマクロファージを含む、請求項1、20、51または70に記載の方法。 87．本質的に抗原性分子に非共有結合で結合された熱ショックタンパク質からなる複合体および製薬上許容される担体を含有する組成物を第1容器内に、そしてヒト抗原提示細胞を第2容器内に、含んでなるキット。 88．熱ショックタンパク質がhsp70、hsp90、gp96、およびこれらの2以上の混合物よりなる群から選択される、請求項87に記載のキット。 89．第1複合体がドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動で検出したとき見かけ上均質に精製されている、請求項1、20、51または70に記載の方法。 90．第1複合体がドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動で検出したとき見かけ上均質に精製されている、請求項87に記載のキット。