【発明の詳細な説明】
サイクロフィリンのポリプロリル阻害剤
発明の背景技術
1.発明の分野
本発明は、サイクロフィリン型イムノフィリンに対して親和性を有する向神経
性(neurotrophic)低分子量小分子ペプチド性サイクロフィリン阻害剤化合物、
およびイムノフィリン蛋白と関係のある酵素活性、特にペプチジル−プロリルイ
ソメラーゼやロタマーゼの酵素活性、の阻害剤としてのそれらの用途に関するも
のである。
2.関連技術の説明
イムノフィリンの用語は主要な免疫抑制剤であるサイクロスポリンA(CsA)
、FK506およびラパマイシンに対するレセプターとして使用される多くの蛋白
を意味する。イムノフィリンの公知のクラスはサイクロフィリンとFK506結合
蛋白、またはFKBPである。サイクロスポリンAはサイクロフィリンAと結合
し、一方、FK506とラパマイシンはFKBP12と結合する。これらのイムノフ
ィリン−薬剤コンプレックスは各種の細胞内シグナル形質導入システム、特に免
疫と神経のシステムと境界面をつくる。
イムノフィリンはペプチジル−プロリルイソメラーゼ(PPIase)あるいはロタマ
ーゼ酵素活性を持つことが知られている。ロタマーゼ酵素活性はイムノフィリン
蛋白用のペプチドと蛋白基質のシスとトランス異性体の相互変換を触媒作用する
役割を発揮することが決定されている。
イムノフィリンははじめに免疫組織内で発見され、研究された。
この分野の研究者は、最初は、イムノフィリンのロタマーゼ活性の阻害がT細胞
の増殖を抑制し、それによって、サイクロスポリンA、FK506およびラパマイ
シンのような免疫抑制剤によって発揮される免疫抑制活性を生じていると考えた
。その後の研究で、それ自身におけるあるいはそれ自身のロタマーゼ活性阻害は
免疫抑制活性をもたらさないことが示された。Schreiberら,Science,vol.250
,
pp556〜559,1990.そのかわりに、免疫抑制は免疫抑制剤とイムノフィリンのコ
ンプレックスの化学式から導き出されるように思われた。イムノフィリン−薬剤
コンプレックスはその作用機作として三元蛋白ターゲットと相互作用することが
示された。Schreiberら,Cell,vol.66,pp807〜815,1991.FKBP−FK506
とサイクロフィリン−CsAの場合には、イムノフィリン−薬剤コンプレックス
は酵素カルシノイリンに結合し、T細胞増殖を導くシグナルを出すT細胞レセプ
ターを阻害する。同様に、FKBP−ラパマイシンのイムノフィリン−薬剤コン
プレックスはRAFTI/FRAP蛋白と相互作用して、IL−2レセプターの
シグナルを阻害する。
イムノフィリンは中枢神経系に高い濃度で存在していることが見出された。イ
ムノフィリンは免疫系よりも中枢神経系では10〜50倍も高濃度であった。中性組
織内では、イムノフィリンは酸化窒素合成、神経伝達物質放出および神経プロセ
ス拡張に影響を与えるものと思われる。
驚くべきことに、サイクロフィリンAに対して高い親和性を有するある種の低
分子量小ペプチド配列が有力なロタマーゼ阻害剤であり、すぐれた向神経効果を
発揮することが見出された。これらの知見は、各種の末梢神経のニューロパシー
の治療と中枢神経系(CNS)における神経再生の促進におけるサイクロフィリ
ンロタマーゼ阻害剤の使用を示唆している。アルツハイマー病、パーキンソン病
、筋萎縮性側索硬化症(ALS)のような神経変性障害がこの障害において悪影
響を受けるニューロンの特定の集団に対して特異的な向神経性物質の喪失あるい
は有効性の減少によって起こりうることが研究で実証された。
中枢神経系における特定のニューロン集団に悪影響を及ぼすいくつかの向神経
性因子が同定された。例えば、アルツハイマー病が神経生長因子(NGF)の減
少あるいは喪失によるという仮説がたてられた。こうして、SDAT患者を外因
性神経生長因子あるいは他の向神経性蛋白、例えば脳由来の生長因子、神経膠由
来の生長因子、
繊毛向神経因子、ニューロトロピン−3等、で治療して変性したニューロン集団
の再生を増す方法が提案された。
各種の神経学的病状におけるこれらの蛋白の臨床上の適用は、大きな蛋白の神
経系のターゲットへの配送と生物学的利用可能性の困難さによって妨げられる。
それに対し、向神経活性を有する免疫抑制剤は比較的小さく、すぐれた生物学的
利用可能性と特異性を発揮する。しかしながら、慢性的に投与されると、免疫抑
制剤は、糸球状濾過障害や不可逆性間質性線維症のような腎毒性や(Koppら,J
.Am.Soc.Nephrol.,1:162,1991)、不随意性振頗のような神経欠損、あるい
は非局在性頭痛のような非特異性大脳アンギナや(Degroenら,N.Engl.J.Med
.,317:861,1987)、およびそれらからもたらされる高血圧症の合併症(Kahan
ら,N.Engl.J.Med.,321:1725,1989)を含む多くの深刻な副作用をもたらす
。
このような免疫抑制剤化合物の使用と関係する副作用を防止するために、本発
明は、軸索の派生を促進し、そして肉体的負傷や糖尿病のような病態にもとずく
末梢神経損傷や、中枢神経への身体の損傷(脊髄と脳)、発作に関係する脳の損
傷、パーキンソン病やSDAT(アルツハイマー病)や筋萎縮性側索硬化症など
の神経変性に関係する神経障害を含む、ニューロンの修復を容易にできる種々の
神経病理学的状態におけるニューロンの生長と再生を促進する、低分子量、小分
子ペプチド配列を含む非免疫抑制化合物を提供するものである。
発明の要約
本発明は、サイクロフィリン型イムノフィリンに対して親和性を有する、向神
経性低分子量、小分子ペプチド性サイクロフィリン阻害剤化合物に関するもので
ある。一旦これらの蛋白に結合すると、この向神経性化合物はイムノフィリン蛋
白と関係のある酵素活性、特にペプチジル−プロリルイソメラーゼやロタマーゼ
の酵素活性、の有力な阻害剤である。この本発明の化合物の要点となる特徴は、
それらの向神経性活性のほかにはいかなる重大な免疫抑制活性も発
揮しないということである。
特に、本発明は式I(配列番号:1−2)の化合物に関するものである。
X−Pro−A3−A1−Pro−A2−Z I
但し、
A3は、直接結合、あるいはアラニン(Ala)、アスパラギン酸(Asp)、
グルタミン酸(Gln)、フェニルアラニン(Phe)、グリシン(Gly)、ヒスチ
ジン(His)、イソロイシン(Ile)、リジン(Lys)、ロイシン(Leu)
、メチオニン(Met)、アスパラギン(Asn)、プロリン(Pro)、グルタミ
ン(Gln)、アルギニン(Arg)、セリン(Ser)、スレオニン(Thr)、
バリン(Val)、チロシン(Tyr)、システイン(Cys)およびトリプト
ファン(Trp)からなる群から選ばれた天然アミノ酸であり、
A1とA2はアラニン(Ala)、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸
(Gln)、フェニルアラニン(Phe)、グリシン(Gly)、ヒスチジン(
His)、イソロイシン(Ile)、リジン(Lys)、ロイシン(Leu)、
メチオニン(Met)、アスパラギン(Asn)、プロリン(Pro)、グルタミン
(Gln)、アルギニン(Arg)、セリン(Ser)、スレオニン(Thr)、
バリン(Val)、チロシン(Tyr)、システイン(Cys)およびトリプト
ファン(Trp)からなる群から独立して選ばれた天然アミノ酸であり、
Xは薬剤的に受容できるN−末端であり、
そして、
Zは薬剤的に受容できるC−末端である。
好ましい態様においては、このN−末端はアセチルであり、C−末端はアミノ
である。
別の好ましい態様においては、A3はプロリン(Pro)である(配列番号:
3)。
最も好ましい態様においては、A3はプロリン(Pro)であり、A1はチロ
シン(Tyr)およびフェニルアラニン(Phe)からなる群から選ばれたもの
であり、A2はアラニン(Ala)、グルタミン酸(Gln)、フェニルアラニン
(Phe)、グリシン(Gly)、イソロイシン(Ile)、リジン(Lys)、ロ
イシン(Leu)、プロリン(Pro)、バリン(Val)およびチロシン(Ty
r)からなる群から選ばれたものである(配列番号:4−23)。
本発明は、また、
動物に、サイクロフィリン型イムノフィリンに対して親和性を有する向神経性
化合物の有効量を投与し、このイムノフィリンはロタマーゼ活性を発揮し、そし
てこの向神経性化合物はこのイムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害することを
特徴とする、動物内でニューロンの活動をもたらす方法に関するものである。
好ましい態様においては、ニューロンの活動は、肉体的負傷や病態にもとずく
末梢神経のニューロパシー、脳の損傷、脊髄の損傷、脳の損傷と関連する発作、
および神経変性に関係する神経障害からなる群から選ばれた神経障害の治療であ
る。
最も好ましい態様においては、ニューロンの活動は神経変性に関係する神経障
害の治療であり、この障害はアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮性
側索硬化症からなる群から選ばれたものである。
本発明は、さらに、
(i)式Iの向神経性化合物(配列番号:1−2)の治療有効量
X−Pro−A3−A1−Pro−A2−Z I
および
(ii)薬剤的に受容できるキャリヤー
但し、
A3は直接結合、あるいはアラニン(Ala)、アスパラギン酸(Asp)、
グルタミン酸(Gln)、フェニルアラニン(Phe)、グリシン(Gly)、ヒスチ
ジン(His)、イソロイシン(Ile)、
リジン(Lys)、ロイシン(Leu)、メチオニン(Met)、アスパラギン
(Asn)、プロリン(Pro)、グルタミン(Gln)、アルギニン(Arg)、セ
リン(Ser)、スレオニン(Thr)、バリン(Val)、チロシン(Tyr)
、システイン(Cys)およびトリプトファン(Trp)からなる群から選ばれ
た天然アミノ酸であり、
A1とA2はアラニン(Ala)、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸
(Gln)、フェニルアラニン(Phe)、グリシン(Gly)、ヒスチジン(
His)、イソロイシン(Ile)、リジン(Lys)、ロイシン(Leu)、
メチオニン(Met)、アスパラギン(Asn)、プロリン(Pro)、グルタミ
ン(Gln)、アルギニン(Arg)、セリン(Ser)、スレオニン(Thr)、
バリン(Val)、チロシン(Tyr)、システイン(Cys)およびトリプト
ファン(Trp)からなる群から独立して選ばれた天然アミノ酸であり、
Xは薬剤的に受容できるN−末端であり、
そして、
Zは薬剤的に受容できるC−末端である
からなる薬剤組成物に関するものである。
好ましい態様においては、このN−末端はアセチルであり、C−末端はアミノ
である。
別の好ましい態様においては、A3はプロリン(Pro)である(配列番号:
3)。
最も好ましい態様においては、A3はプロリン(Pro)であり、A1はチロ
シン(Tyr)およびフェニルアラニン(Phe)からなる群から選ばれたもの
であり、A2はアラニン(Ala)、グルタミン酸(Gln)、フェニルアラニン
(Phe)、グリシン(Gly)、イソロイシン(Ile)、リジン(Lys)、ロ
イシン(Leu)、プロリン(Pro)、バリン(Val)およびチロシン(Ty
r)からなる群から選ばれたものである(配列番号:4−23)。
図面の簡単な説明
図1は、表1のテトラペプチドによるサイクロフィリンAの阻害範囲を示すも
のである。
図2は、表2のペンタペプチドによるサイクロフィリンAの阻害範囲を示すも
のである。
図3は、表3のペンタペプチドによるサイクロフィリンAの阻害範囲を示すも
のである。
図4は、1mM Ac−Pro−Gly−Pro−Phe−NH2
によるニワトリ知覚ニューロンの軸索派生促進を示すものである。
図5は、1mM Ac−Pro−Ala−Pro−Aβa−NH2
によるニワトリ知覚ニューロンの軸索派生促進を示すものである。
発明の詳細な説明
定義
“アルキル”は、特に注記がない限り、1ないし6個の炭素原子を含む分岐ま
たは枝なしの飽和炭化水素鎖、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピ
ル、ブチル、イソブチル、第3ブチル、n−ペンチル、n−ヘキシル等を意味す
る。
“アルコキシ”は、Rがここで定義されたアルキルである−OR基を意味する
。好ましくは、Rは1ないし3個の炭素原子を含む分岐または枝なしの飽和炭化
水素鎖である。
“ハロ”は、特に注記がない限り、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨード
を意味する。
“フェニル”は全ての可能なフェニルラジカル異性体を含み、アルキル、アル
コキシ、ヒドロキシ、ハロおよびハロアルキルからなる群から選ばれた置換基で
モノ置換あるいは多置換されてもよい。
“治療”は動物、特に人間、の病気および/または体調の治療をカバーし、次
のものを含む。
(i)ある病気および/または体調になりやすくてもまだそうなっているとは診
断されていない主体にこの病気および/または体調にならないように予防するこ
と、
(ii)その病気および/または体調を抑制すること、すなわち、それが進行しな
いようにひきとめること、ならびに
(iii)その病気および/または体調から救い出すこと、すなわち、その病気お
よび/または体調の退行をもたらすこと、
発明の化合物
本発明の、向神経性低分子量、小分子ペプチド性サイクロフィリン阻害剤化合
物はサイクロスポリンA結合蛋白、例えばサイクロフィリンAに対して親和性を
有している。この向神経性化合物がサイクロフィリンに結合すると、それらはプ
ロリル−ペプチジルシス−トランスイソメラーゼ活性あるいは蛋白と結合するロ
タマーゼ活性を阻害し、予測しえない軸索生長への刺激をもたらすことが見出さ
れた。
特に、本発明は式I(配列番号:1−2)の化合物に関するものである。
X−Pro−A3−A1−Pro−A2−Z I
但し、
A3は、直接結合、あるいはアラニン(Ala)、アスパラギン酸(Asp)、
グルタミン酸(Gln)、フェニルアラニン(Phe)、グリシン(Gly)、ヒスチ
ジン(His)、イソロイシン(Ile)、リジン(Lys)、ロイシン(Leu)
、メチオニン(Met)、アスパラギン(Asn)、プロリン(Pro)、グルタミ
ン(Gln)、アルギニン(Arg)、セリン(Ser)、スレオニン(Thr)、
バリン(Val)、チロシン(Tyr)、システイン(Cys)およびトリプト
ファン(Trp)からなる群から選ばれた天然アミノ酸であり、
A1とA2はアラニン(Ala)、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸
(Gln)、フェニルアラニン(Phe)、グリシン(Gly)、ヒスチジン(
His)、イソロイシン(Ile)、リジン(Lys)、ロイシン(Leu)、
メチオニン(Met)、アスパラギン(Asn)、プロリン(Pro)、グルタミン
(Gln)、
アルギニン(Arg)、セリン(Ser)、スレオニン(Thr)、バリン(Va
l)、チロシン(Tyr)、システイン(Cys)およびトリプトファン(Tr
p)からなる群から独立して選ばれた天然アミノ酸であり、
Xは薬剤的に受容できるN−末端であり、
そして、
Zは薬剤的に受容できるC−末端である。
好ましい態様においては、A3はプロリン(Pro)である(配列番号:3)
。
最も好ましい態様においては、A3はプロリン(Pro)であり、A1はチロ
シン(Tyr)およびフェニルアラニン(Pha)からなる群から選ばれたもの
でしり、A2はアラニン(Ala)、グルタミン酸(Gln)、フェニルアラニン
(Phe)、グリシン(Gly)、イソロイシン(Ile)、リジン(Lys)、ロ
イシン(Leu)、プロリン(Pro)、バリン(Val)およびチロシン(Ty
r)からなる群から選ばれたものである(配列番号:4−23)。
このN−末端(アミノ末端)はアミノを保護するいかなる保護基であってもよ
い。N−末端の例は、特に限定されないが、メチルおよびエチル、9−フルオレ
ニルメチル、9−(2−スルホ)フルオレニルメチル、9−(2,7−ジブロモ
)フルオレニルメチル、2,7−ジ−t−ブチルー[9−(10,10−ジオキソ−10
,10,10,10−テトラヒドロチオキサンチル)]メチル、および4−メトキシフェ
ナシルカルバメートなどのカルバメート;2,2,2−トリクロロエチル、2−ト
リメチルシリルエチル、2−フェニルエチル、1−(1−アダマンチル)−1−メ
チルエチル、1,1−ジメチル−2−ハロエチル、1,1−ジメチル−2,2−ジ
ブロモエチル、1,1−ジメチル−2,2,2−トリクロロエチル、1−メチル−
1−(4−ビフェニル)エチル、1−(3,5−ジ−t−ブチルフェニル)−1
−メチルエチル、2−(2’−および4’−ピリジル)エチル、2−(N,N−
ジクロロヘキシルカルボキサミド)エチル、t−ブチル、1−ア
ダマンチル、ビニル、アリル、1−イソプロピルアリル、シンナミル、4−ニト
ロシンナミル、8−キノリル、N−ヒドロキシピペリジニル、アルキルジチオ、
ベンジル、p−メトキシベンジル、p−ニトロベンジル、p−ブロモベンジル、
p−クロロベンジル、2,4−ジクロロベンジル、4−メチルスルフィニルベン
ジル、9−アンスリルメチル、およびジフェニルメチルカルバメートなどの置換
エチルカルバメート;2−メチルチオエチル、2−メチルスルホニルエチル、2
−(p−トルエンスルホニル)エチル、[2−(1,3−ジチアニル)]メチル、
4−メチルチオフェニル、2,4−ジメチルチオフェニル、2−ホスホニオエチ
ル、2−トリフェニルホスホニオイソプロピル、1,1−ジメチル−2−シアノ
エチル、m−クロロ−p−アシルオキシベンジル、p−(ジヒドロキシボリル)
べンジル、5−ベンズイソキサゾリルメチル、および2−(トリフルオロメチル
)−6−クロモニルメチルカルバメートなどのアシステッドクリアベージカルバ
メート;m−ニトロフェニル、3,5−ジメトキシベンジル、o−ニトロベンジ
ル、3,4−ジメトキシ−6−ニトロベンジル、およびフェニル(o−ニトロフ
ェニル)メチルノカルバメートなどの光分解開裂カルバメート;フェノチアジニ
ル−(10)−カルボニル、N’−p−トルエンスルホニルアミノカルボニル、お
よびN’−フェニルアミノチオカルボニル誘導体などの尿素型カルバメート誘導
体;t−アミル、s−ベンジルチオカルバメート、p−シアノベンジル、シクロ
ブチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロプロピルメチル、p−デシル
オキシベンジル、ジイソプロピルメチル、2,2−ジメトキシカルボニルビニル
、o−(N,N−ジメチルカルボキサミド)ベンジル、N−o−(ベンゾイルオキシ
メチル)ベンゾイル、および4,5−ジフェニル−3−オキサゾリン−2−オンカ
ルバメートなどの種々雑多なカルバメート;N−フタルイミド、N−ジチアスク
シノイル、N−2,5−ジメチルピロリル、N−1,1,4,4−テトラメチルジ
シリルアザシクロペンタン付加物、5−置換1,3−ジメチル−1,3,5−トリ
ア
ザシクロヘキサン−2−オン、5−置換1,3−ジベンジル−1,3,5−トリア
ザシクロヘキサン−2−オン、および1−置換3,5−ジニトロ−4−ピリドニ
ルカルバメートなどのサイクリックイミドカルバメート誘導体;N−メチル、N
−アリル、N−[2−(トリメチルシリル)エトキシ]メチル、N−3−アセト
キシプロピル、N−(1−イソプロピル−4−ニトロ−2−オキソ−3−ピロリ
ン−3−イル)、第4級アンモニウム塩、N−ベンジル、N−ジ(4−メトキシ
フェニル)メチル、N−5−ジベンゾスベリル、N−トリフェニルメチル、N−
(4−メトキシフェニル)ジフェニルメチル、N−9−フェニルフルオレニル、
N−2,7−ジクロロ−9−フルオレニルメチレン、N−フェロセニルメチル、
およびN−2−ピコリルアミンN’−オキシドアミンなどのN−アルキルおよび
N−アリールアミン;N−1,1−ジメチルチオメチレン、N−ベンジリデン、
N−p−メトキシベンジリデン、N−ジフェニルメチレン、N−[(2−ピリジ
ル)メシチル]メチレン、N−(N',N'−ジメチルアミノメチレン、N,N'−
イソプロピリデン、N−p−ニトロベンジリデン、N−サリチリデン、N−5−
クロロサリチリデン、N−(5−クロロ−2−ヒドロキシフェニル)フェニルメ
チレン、およびN−シクロヘキシリデンなどのイミン誘導体;N−(5,5−ジ
メチル)−3−オキソ−1−シクロヘキシル)エナミンなどのエナミン誘導体;
N−金属(例えば、N−ボラン、N−ジフェニルボリニックアシッド、N−[フ
ェニル(ペンタカルボニルクロム、またはタングステン)]カルベニル、N−銅
またはN−亜鉛キレート)、N−N(例えば、N−ニトロ、N−ニトロソおよび
N−オキシド)、N−P(例えば、N−ジフェニルホスフィニル、N−ジメチル
チオホスフィニル、N−ジフェニルチオホスフィニル、N−ジアルキルホスホリ
ル、N−ジベンジルホスホリル、およびN−ジフェニルホスホリル)、N−Si
、およびN−S(例えば、N−スルフェニル、例えばN−ベンゼンスルフェニル
、N−o−ニトロベンゼンスルフェニル、N−2,4−ジニトロベンゼンスルフ
ェ
ニル、N−ペンタクロロベンゼンスルフェニル、N−2−ニトロ−4−メトキシ
ベンゼンスルフェニル、N−トリフェニルメチルスルフェニル、N−3−ニトロ
ピリジンスルフェニル)誘導体などのN−ヘテロ原子誘導体;ならびに、N−p
−トルエンスルフォニル、N−ベンゼンスルホニル、N−2,3,6−トリメチル
−4−メトキシベンゼンスルホニル、N−2,4,6−トリメトキシベンゼンスル
ホニル、N−2,6−ジメチル−4−メトキシベンゼンスルホニル、N−ペンタ
メチルベンゼンスルホニル、N−2,3,5,6−テトラメチル−4−メトキシベ
ンゼンスルホニル、N−4−メトキシベンゼンスルホニル、N−2,4,6−トリ
メチルベンゼンスルホニル、N−2,6−ジメトキシ−4−メチルベンゼンスル
ホニル、N−2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−6−スルホニル、N−メ
タンスルホニル、N−β−トリメチルシリルエタンスルホニル、N−9−アント
ラセンスルホニル、N−4−(4',8'−ジメトキシナフチルメチル)ベンゼンス
ルホニル、N−トリフルオロメチルスルホニル、およびN−フェナシルスルホニ
ル)などのN−スルホニルを含む。
C−末端(カルボキシル末端)はカルボキシルを保護するいかなる保護基であ
ってもよい。C−末端の例は、特に限定されないが、9−フルオレニルメチル、
メトキシメチル、メチルチオメチル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラ
ニル、メトキシエトキシメチル、2−(トリメチルシリル)エトキシメチル、ベ
ンジルオキシメチル、フェナシル(例えば、p−ブロモフェナシル、α−メチル
フェナシル、およびp−メトキシフェナシル)、カルボキサミドメチル、および
N−フタルイミドメチルエステルなどの置換メチルエステル;2,2,2−トリク
ロロエチル、2−ハロエチル、ω−クロロアルキル、2−(トリメチルシリル)
エチル、2−メチルチオエチル、1,3−ジチアニル−2−メチル、2−(p−ニ
トロフェニルスルフェニル)エチル、2−(p−トルエンスルホニル)エチル、
2−(2'−ピリジル)エチル、2−(ジフェニルホスフィノ)エチ
ル、1−メチル−1−フェニルエチル、t−ブチル、シクロペンチル、シクロヘ
キシル、アリル、3−ブテン−1−イル、4−(トリメチルシリル)−2−ブテ
ン−1−イル、シンナミル、α−メチルシンナミル、フェニル、p−(メチルメ
ルカプト)フェニル、およびベンジルエステルなどの2−置換エチルエステル;
トリフェニルメチル、ジフェニルメチル、ビス(o−ニトロフェニル)メチル、
5−ジベンゾスベリル、1−ピレニルメチル、2−(トリフルオロメチル)−6
−クロミルメチル、2,4,6−トリメチルベンジル、p−ブロモベンジル、o−
ニトロベンジル、p−ニトロベンジル、p−メトキシベンジル、2,6−ジメト
キシベンジル、4−(メチルスルフィニル)ベンジル、4−スルホベンジル、ピ
ペロニル、4−ピコリル、およびp− −ベンジルエステルなどの置換ベンジル
エステル;トリメチルシリル、トリエチルシリル、t−ブチルジメチルシリル、
i−プロピルジメチルシリル、フェニルジメチルシリル、およびジ−t−ブチル
メチルシリルエステルなどのシリルエステル;チオールなどの活性エステル;オ
キサゾール、2−アルキル−1,3−オキサゾール、4−アルキル−5−オキソ
−1,3−オキサソリジン、5−アルキル−4−オキソ−1,3−ジオキソラン
、オルトエステル、フェニルエステル、およびペンタアミノコバルト(III)コン
プレックスなどのエステル誘導体;トリエチルスタニルおよびトリ−n−ブチル
スタニルエステルなど錫酸エステル;N,N−ジメチル、ピロリジニル、ピペリ
ジニル、5,6−ジヒドロフェナントリジニル、0−ニトロアニリド、N−7−
ニトロインドリル、N−8−ニトロ1,2,3,4−チハラヒドロキノリル、お
よびP− −ベンゼンスルホナミドなどのアミド;ならびにN−フェニルおよび
N,N’−ジイソプロピルヒドラジトなどのヒドラジドを含む。
好ましい態様においては、N−末端がアセチルでC−末端がアミノである。
本発明の化合物は当業界公知の如何なる方法によって合成しても
よい。実例として、本発明の化合物のいくつかを合成する代表的方法が後述の実
施例1に明らかにされている。
使用方法
本発明の化合物はサイクロスポリン型結合蛋白、特に脳に存在するサイクロフ
ィリンAに対して親和性を有している。これらの化合物が脳のなかのサイクロフ
ィリンAに結合すると、それらはすぐれた向神経性活性を発揮する。この活性は
損傷を受けたニューロンの刺激、ニューロンの再生の促進、神経変性の防止、な
らびに神経変性および末梢ニューロパシーと関係することが知られているいくつ
かの神経障害の治療に対して有用である。前述の理由から、本発明はさらに、動
物に、サイクロフィリン型イムノフィリンに対して親和性を有する向神経性化合
物の有効量を投与し、このイムノフィリンはロタマーゼ活性を発揮し、そしてこ
の向神経性化合物はこのイムノフィリンのロタマーゼ活性を阻害することを特徴
とする、動物内でニューロンの活動をもたらす方法に関するものである。
好ましい態様においては、このニューロンの活動は、損傷を受けたニューロン
の刺激、ニューロンの再生の促進、神経変性の防止および神経障害の治療からな
る群から選ばれたものである。
この治療することができる神経障害は、特に限定されないが、三叉神経痛;舌
咽神経痛;ベル麻痺;筋無力症;筋ジストロフィー;筋萎縮性側索硬化症;進行
性筋萎縮症:進行性延髄遺伝性筋萎縮症;脱出した、破れたあるいは脱出した無
脊椎ディスク症候群;変形性脊椎症;神経叢障害;胸郭口破壊症候群;鉛;ダプ
ソーン、ダニ、ポルフィリアあるいはギラン・バレー症候群などによる末梢ニュ
ーロパシー;アルツハイマー病;およびパーキンソン病を含む。
本発明の化合物は、特に肉体的負傷や病態にもとずく末梢神経のニューロパシ
ー、脳の損傷、脊髄の損傷、脳の損傷と関連する発作、および神経変性に関係す
る神経障害からなる群から選ばれた神経障害の治療に有用である。
神経変性に関係する神経障害の例はアルツハイマー病、パーキン
ソン病および筋萎縮性側索硬化症である。
これらの目的でこれらの化合物は普通の無毒性で薬剤的に受容できるキャリヤ
ー、アジュバンド、および賦形剤を含む投与形態で、経口で、非経口的に、スプ
レー吸入で、局所的に、直腸に、鼻腔に、口腔に、腔に、又は移植された貯蔵器
を通じて投与することができる。ここで用いられる非経口的の用語は、皮下、静
脈内、筋肉内、腹腔内、莢腔内、(脳または心臓の)室内、胸骨内および頭蓋内
の注射あるいは注入技術を含む。
中枢神経系ターゲットとして治療上有効にするために、これらの化合物は末梢
から投与されたときには容易に血液脳関門を通過しなければならない。血液脳関
門を通過できない化合物は(脳または心臓の)室ルートから有効に投与すること
ができる。
これらの化合物は無菌の注射可能な製剤の形態で、例えば無菌の注射可能な水
性あるいは油性の懸濁液として投与することができる。これらの懸濁液は適当な
分散剤や湿潤剤および懸濁剤を用いた当業界で知られている技術に従って調合す
ることができる。これらの無菌の注射可能な製剤はまた無毒性で非経口的に受容
できる希釈剤あるいは溶媒の無菌の注射可能な溶液または懸濁液、例えば、1,
3−ブダンジオール溶液、であってもよい。受容可能な賦形剤および溶媒のなか
で、水、リンゲル液および等張食塩液は使用可能である。さらに、無菌の不揮発
油も溶媒や懸濁媒として普通用いられる。このため、合成モノまたはジグリセリ
ドなどのいかなる無刺激性不揮発油を用いることができる。オレイン酸やそのグ
リセリド誘導体などの脂肪酸、それらはオリーブ油やヒマシ油、特にそれらのポ
リオキシエチル化物を含む、は注射剤の調製に有用である。これらの油溶液ある
いは懸濁液は長鎖アルコール希釈剤あるいは分散剤を含んでいてもよい。
さらに、これらの化合物はカプセル、錠剤、水懸濁液または溶液の形態で経口
投与することができる。錠剤は乳糖やコーンスターチのようなキャリヤー、およ
び/またはステアリン酸マグネシウムの
ような滑剤を含んでいてもよい。カプセルは乳糖や乾燥コーンスターチのような
希釈剤を含んでいてもよい。水性懸濁液はこの活性成分に乳化、懸濁剤を併用す
ることができる。この経口投与形態はさらに甘味剤および/または香味料および
/または着色料を含有させることができる。
これらの化合物は坐薬の形態で直腸に投与することができる。これらの組成物
は、室温では固体であるが直腸温度では液体で、従って直腸で溶けてこの薬を放
出する、適当な無刺激性賦形剤をこの薬に混合することによって調製することが
できる。このような物質はココアバター、密ろうおよびポリエチレングリコール
を含む。
さらに、これらの化合物は、特に、治療に取りかかる体調が、目や皮膚や下部
腸管の神経障害を含む、局所的な塗布によって容易にアクセスできる部位や器官
を含むときは、局所的に投与できる。適当な局所用製剤はこれらの部位のそれぞ
れに対応して容易に調製できる。
目の局所的塗布や眼の用途に、これらの化合物は、ベンジルアルコニウムクロ
ライドなどの保存料を入れたあるいは入れていない等張性のpHが調製された無
菌の生理食塩の超微粉懸濁液として、あるいは、好ましくは、等張性のpHが調
製された無菌の生理食塩溶液として調剤することができる。その代わりに、これ
らの化合物をワセリンなどの軟膏に入れて眼用として調剤することもできる。
皮膚への局所塗布用としては、これらの化合物を、例えば鉱物油、液体ワセリ
ン、白ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピ
レン化合物、乳化ワックスおよび水の一以上に懸濁あるいは溶解混合した適当な
軟膏として調剤することができる。その代わりに、これらの化合物を、例えば鉱
物油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート60、セチルエステルワッ
クス、ステアリルアルコール、2−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール
および水の一以上に懸濁あるいは溶解混合した適当なローションあるいはクリー
ムとして調剤することもできる。
下部腸管への局所的塗布は直腸坐薬、製剤(上記参照)あるいは適当な浣腸製
剤によって達成できる。この活性成分化合物の、上記体調の治療のための有用な
投薬レベルは約0.1mg−約10,000mgのオーダーであり、好ましくは約0.1mg−約1,
000mgのレベルである。単一投薬形態を生み出すキャリヤー物質と組み合わせて
もよい活性成分のこの量は治療されるホストおよび投薬モードによって変わるだ
ろう。
しかしながら、特定の患者に対する投薬レベルは、用いた化合物の活性;この
患者の年齢、体重、全身の健康、性および食事;投与時期;排出率;併用される
薬;治療される病気の厳しさ;ならびに投与形態を含む各種の因子に依存するも
のと理解される。
これらの化合物は他の向神経性薬、例えば向神経性生長因子(NGF)、神経
膠由来生長因子、脳由来生長因子、毛様向神経因子、およびニューロトロピン−
3などと一緒に投与することができる。
薬剤組成物
本発明の化合物は前述の各種の用途の薬剤組成物に組み入れて調剤することが
できる。従って、本発明はまた、(i)式Iの向神経性化合物(配列番号:1−
2)の治療有効量
X−Pro−A3−A1−Pro−A2−Z I
および
(ii)薬剤的に受容できるキャリヤー
但し、
A3は直接結合、あるいはアラニン(Ala)、アスパラギン酸(Asp)、
グルタミン酸(Gln)、フェニルアラニン(Phe)、グリシン(Gly)、ヒスチ
ジン(His)、イソロイシン(Ile)、リジン(Lys)、ロイシン(Leu)
、メチオニン(Met)、アスパラギン(Asn)、プロリン(Pro)、グルタミ
ン(Gln)、アルギニン(Arg)、セリン(Ser)、スレオニン(Thr)、
バリン(Val)、チロシン(Tyr)、システイン(Cys)お
よびトリプトファン(Trp)からなる群から選ばれた天然アミノ酸であり、
A1とA2はアラニン(Ala)、アスパラギン酸(Asp)、グルタミン酸
(Gln)、フェニルアラニン(Phe)、グリシン(Gly)、ヒスチジン(
His)、イソロイシン(Ile)、リジン(Lys)、ロイシン(Leu)、
メチオニン(Met)、アスパラギン(Asn)、プロリン(Pro)、グルタミ
ン(Gln)、アルギニン(Arg)、セリン(Ser)、スレオニン(Thr)、
バリン(Val)、チロシン(Tyr)、システイン(Cys)およびトリプト
ファン(Trp)からなる群から独立して選ばれた天然アミノ酸であり、
Xは薬剤的に受容できるN−末端であり、
そして、
Zは薬剤的に受容できるC−末端である
からなる薬剤組成物に関するものである。
好ましい態様においては、このN−末端はアセチルであり、C−末端はアミノ
である。
別の好ましい態様においては、A3はプロリン(Pro)である(配列番号:
3)。
最も好ましい態様においては、A3はプロリン(Pro)であり、A1はチロ
シン(Tyr)およびフェニルアラニン(Phe)からなる群から選ばれたもの
であり、A2はアラニン(Ala)、グルタミン酸(Gln)、フェニルアラニン
(Phe)、グリシン(Gly)、イソロイシン(Ile)、リジン(Lys)、ロ
イシン(Leu)、プロリン(Pro)、バリン(Val)およびチロシン(Ty
r)からなる群から選ばれたものである(配列番号:4−23)。
この化合物の投与に関する前記考察はまたこの薬剤組成物にも適用される。
実施例
次の実施例は本発明の具体例であり、そして、それらは何ら本発
明に限定を加えるものではない。全てのポリマー分子量は平均分子量である。特
にことわらない限り、全てのパーセントは最終化合物または薬剤組成物の重量を
100%とし、それに対するものである。
実施例1
ペプチドの合成
リンク(Rink)樹脂0.25g(0.44meq/g)を反応管に移し、ジメチルホル
ムアミド(DMF)で洗浄し(3×5分間)、さらに50%ピペリジンDMF溶液
で洗浄して(2×10分間)保護基の9−フルオレニルメトキシカルボニル基(F
moc)を除去した。この樹脂をDMFで洗浄し(5×5分間)、第1のアミノ
酸を加えたAc−Pro−Gly−Pro−Phe−NH2(配列番号:1)の
ために、この第1の保護されたアミノ酸Fmoc−Phe(0.25mmol)を1−ヒ
ドロキシベンゾートリアゾール(HOBt;0.25mmol)とともに2.5mlDMFに
溶解して予備活性化し(3分間)、さらに、ベンゾトリアゾリルオキシ−(トリ
ス)ジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(BOP;0.25mm
ol)と4−メチルモルホリン(NMM;0.375mmol)を溶解した。この混合物を
直ちに反応管に入れ、2時間振盪した。3×5分間DMFで洗浄後には、残留ア
ミンに対するカラー試験が陰性になった。このDMF洗浄を繰返し、その後の残
基(Fmoc−Pro,Fmoc−Gly,Fmoc−Pro)を同じ脱保護、
洗浄、カップリング、洗浄サイクルを用いて加え、この配列の全てのアミノ酸を
設計通りに結合した。最後のアミノ酸を結合してから、Fmocを前のように50
%ピペリジンDMF溶液で洗浄し(2×10分間)、続いてDMFで洗浄して(5
×5分間)除去した。この樹脂の末端アミノ基をDMF:無水酢酸:N−エチル
ジイソプロピルアミン=193:6:1(v/v/v)混合物2mlで90分間室温で
アセチル化した。この最終ペプチド樹脂をDMF(3×5分間)、t−アミルア
ルコール(2×3分間)、酢酸(2×3分間)、t−アミルアルコール(2×3
分間)、エーテル(3×3分間)で洗浄し、高真
空で一夜乾燥した。この乾燥ペプチド樹脂を2mlのTFA:フェノール:水=90
:5:5で2時間室温で処理した。この樹脂を濾過し、TFAで充分に洗浄し、
全濾液をN2雰囲気で蒸発させた。この残渣にメチルt−ブチルエーテル(50m
l)を加えて、白い沈殿物を遠心分離して集めた。そのNMRスペクトルは期待
した構造と一致した。
実施例2
テトラペプチドとペンタペプチドの結合ライフブラリー
サイクロフィリンへのポリプロリン基質の予測しえない優位性とこの基質の有
力な向神経性活性は、酵素サイクロフィリンの基質特異性をマップにした結合さ
れたペプチドのライブラリーを用いて発見された。テトラペプチドとペンタペプ
チド基質のプールは文献(Houghtenら、Nature,354巻,84-86頁,1991)に記載され
ているように描かれており、それらのサイクロフィリンAの結合する強さは、ペ
プチジルプロリルイソメラーゼ活性の阻害を調べることによって求められている
。テトラあるいはペンタペプチドの各位置の最も適するアミノ酸の決定には位置
を走査する技術(positional scanning technique)が用いられた。
次の表I−IIIにはテストされたテトラペプチドとペンタペプチド基質が列挙
されている。表I−IIIのA1’、A2’およびA3’は18のアミノ酸(トリプ
トファンとシステイン以外は全て天然アミノ酸)の等モル混合物を表している。 実施例III
Kiテスト手順
本発明の化合物のペプチジルプロリルイソメラーゼ(ロタマーゼ)活性の阻害
は文献(Hardingら,Nature,341:758〜760,1989)に記載さされた公知の方法によ
って求めることができる。これらの値は見掛けのKi値として得られるものであ
り、表I−IIIの化合物のものが提示されている。モデル基質であるN−サクシ
ニル−Ala−Ala−Pro−Phe−p−ニトロアニリドのアラニン−プロ
リン結合のシスートランス異性化はこの基質のトランス形からパラニトロアニリ
ドを放出するキモトリプシン結合分析で分光測光することによりモニターされる
。阻害剤の異なる濃度での添加によるこの反応の阻害が求められ、そのデータは
見掛けのKi値を求める阻害剤濃度の関数としての一時速度定数の変化として解
析される。時間に対する390nmの吸光度が分光光度計を用いて90秒ごとにモニタ
ーされ、この吸光度と時間のデータファイルから速度定数が決定
される。
ペプチド性基質が前述のようにプールに描かれた。これらの結合ライブラリー
の評価のための代表的なデータが図1−3に示されている。図1には、Ac−X
'−A1'−Pro−A2'−NH2型で、X'が特定のアミノ酸、A1'とA2'が1
8アミノ酸(トリプトファンとシステインを除いて全て天然アミノ酸)の等モル
混合物であるテトラペプチドからのデータが示されている。その阻害カーブは、
プロリンとチロシン、特にプロリン、が第1の位置に好ましい、すなわち、サイ
クロフィリンAの好ましいテトラペプチド阻害剤はAc−Pro−A1’−Pr
o−A2’−NH2がAc−tyr−A1’−Pro−A2’−NH2nの形のも
のであることを示している。後述の表4には好ましい混合物のIC50値が示され
ている。
このライブラリーの他の全てのメンバーはかなり活性が低く、サイクロフィリ
ンによって発揮される高度の特異性とプロリンが1個より多い基質が好ましいこ
とを示している。
同様に、図2は、ペンタペプチドのライブラリー、Ac−X'−A3'−A1'
−Pro−A2'−NH2において好ましい配列の基調がAc−Pro−A3'−
A1'−Pro−A2'−NH2であることを示している。これらの結果は、サイ
クロフィリンAがポリプロリル基質として好ましいことを示している。このサイ
クロフィリンAの基質特異性は全く予測できないものである。代表的なそれ以後
のペンタペプチドライブラリーのデータは図3に示されている。
実施例IV
ニワトリ背根神経節
サイクロフィリン阻害剤の向神経性効果が背根神経節から培養されたニワトリ
知覚ニューロンにおける軸索の派生促進するこれらの化合物の能力を評価するこ
とによって示された。背根神経節は妊娠10日目のニワトリ胚から摘出された。全
神経節の体外移植物を、2mMグルタミンと10%ウシ胎児血清が補われ、かつ10
μMシトシンβ−Dアラビノフラノシド(Ara C)を含むLiebovitz L15プ
ラス高グルコース培地を有する薄層マトリゲル(Matrigel)被覆12ウエルプレー
トで、37℃で5%CO2を含む雰囲気で培養した。24時間後、DRGを各種濃度の
神経生長因子、イムノフィリンリガンドまたはNGFと薬剤の組合せで処理した
。薬剤処理後48間経ってから、神経節を位相差あるいはZeiss Axiovert倒立顕微
鏡と対比させたHoffmanuモジュレーションで目にみえるようにした。移植物の顕
微鏡写真を作製して軸策の派生を定量した。DRG直径よりも長い軸索を、各実
験条件ごとに定量された軸索の全数について、陽性であるとして数えた。ウェル
ごとに3〜4のDRGを培養し、各処理を二重に行った。
突起の数、それらの長さおよび分枝における最大の増加はサイクロフィリンリ
ガンドとNGF(100ng/ml)の最大有効収縮時と全くよく似ている。各種薬剤の
漸増する濃度につれて、多数の突起、より伸長した分枝および個々の突起のより
大きな長さが観察される。
図4にはAc−Pro−Gly−Pro−Phe−NH2のニワトリ知覚ニュ
ーロンへの作用が示されている;1mM濃度において、細胞体からの長い線維の
誘発によってわかるように、これらの化合物は強力な向神経性効果を発揮する。
同様に、図5には、Ac−Pro−Ala−Pro−Ala−NH2これらの
ニューロン培養における有力な向神経性効果が示されている。
本発明をこれまで説明してきたが、この発明はいろいろなやり方
で変更できることは明らかであろう。そのような変更は本発明の精神および範囲
から逸脱するものではなく、そして全てのそのような変更は次のクレームの範囲
に含まれるよう意図されたものである。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Polyprolyl inhibitors of cyclophilin
BACKGROUND OF THE INVENTION
1. Field of the invention
The present invention relates to a neurotrophic neuron having an affinity for cyclophilin-type immunophilin.
Neurotrophic low molecular weight small molecule peptidic cyclophilin inhibitor compound,
And enzyme activities related to immunophilin proteins, especially peptidyl-prolylyl
It also relates to their use as inhibitors of the enzyme activities of somerase and rotamase.
It is.
2. Description of related technology
The term immunophilin refers to the major immunosuppressant cyclosporin A (CsA)
Proteins used as receptors for FK506, FK506 and rapamycin
Means A known class of immunophilins is cyclophilin and FK506 binding
Protein or FKBP. Cyclosporin A binds to cyclophilin A
On the other hand, FK506 and rapamycin bind to FKBP12. These imnov
Illin-drug complexes can be used in a variety of intracellular signal transduction systems,
Create boundaries with the epidemic and nervous systems.
Immunophilins are peptidyl-prolyl isomerases (PPIases) or rotamers.
It is known to have enzyme activity. Rotamase enzyme activity is immunophilin
Catalyzes the interconversion of cis and trans isomers of peptides and protein substrates for proteins
It has been decided to play a role.
Immunophilins were first discovered and studied in the immune system.
Researchers in the field initially suggested that the inhibition of immunophilin rotamase activity was
Inhibits the growth of cyclosporin A, FK506 and rapamai
Thought to have caused the immunosuppressive activity exerted by immunosuppressants such as Shin
. In subsequent studies, inhibition of rotamase activity on its own or on its own
It was shown not to result in immunosuppressive activity. Schreiber et al., Science, vol.250
,
pp 556-559, 1990. Instead, immunosuppression is a combination of immunosuppressants and immunophilins.
Seemed to be derived from the complex formula. Immunophilin-drug
Complexes can interact with ternary protein targets as a mechanism of action
Indicated. Schreiber et al., Cell, vol. 66, pp. 807-815, 1991. FKBP-FK506
And cyclophilin-CsA, immunophilin-drug complex
Is a T cell receptor that binds to the enzyme
Inhibits Similarly, the immunophilin-drug consortium of FKBP-rapamycin
Plex interacts with the RAFTI / FRAP protein to activate the IL-2 receptor.
Inhibits signal.
Immunophilins have been found to be present in high concentrations in the central nervous system. I
Munophilin was 10 to 50 times higher in the central nervous system than in the immune system. Neutral group
Within the weave, immunophilins are responsible for nitric oxide synthesis, neurotransmitter release and neural processes.
It is likely that this will affect the service expansion.
Surprisingly, certain low-affinity compounds with high affinity for cyclophilin A
Small peptide sequence with high molecular weight is a potent rotamase inhibitor and has excellent neurotrophic effect.
It has been found to work. These findings are important for the neuropathy of various peripheral nerves.
In the treatment of nerves and promotion of nerve regeneration in the central nervous system (CNS)
Suggests the use of a rotamase inhibitor. Alzheimer's disease, Parkinson's disease
Neurodegenerative disorders, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS)
Loss or loss of a specific neurotrophic substance for a particular population of affected neurons
Studies have demonstrated that this can be caused by reduced efficacy.
Some neurotrophs adversely affect specific neuronal populations in the central nervous system
Sex factors were identified. For example, Alzheimer's disease reduces nerve growth factor (NGF).
It was hypothesized that it was due to little or no loss. Thus, SDAT patients are
Neurite growth factor or other neurotrophic proteins such as brain-derived growth factor, gliosis
Coming growth factor,
Degenerated neuronal populations treated with ciliary tropic factor, neurotropin-3, etc.
Methods have been proposed to increase the regeneration of the.
The clinical application of these proteins in a variety of neurological pathologies is
It is hampered by the difficulties of trans-system delivery to the target and bioavailability.
In contrast, immunosuppressants with neurotrophic activity are relatively small and have excellent biological
Demonstrate availability and specificity. However, when administered chronically, immunosuppression occurs.
The drug may be used for nephrotoxicity such as glomerular filtration disorder or irreversible interstitial fibrosis (Kopp et al., J.
. Am. Soc. Nephrol., 1: 162, 1991), nerve deficits such as involuntary tremor, or
Are non-specific cerebral angina such as non-localized headaches (Degroen et al., N. Engl. J. Med.
., 317: 861, 1987) and the resulting complications of hypertension (Kahan
N. et al. Engl. J. Med., 321: 1725, 1989).
.
To prevent the side effects associated with the use of such immunosuppressant compounds,
Ming promotes axonal derivation and bases on conditions such as physical injury and diabetes
Peripheral nerve injuries, physical damage to the central nervous system (spinal cord and brain), brain damage related to seizures
Wounds, Parkinson's disease, SDAT (Alzheimer's disease), amyotrophic lateral sclerosis, etc.
Various neurological disorders, including neuropathy related to neurodegeneration
Low molecular weight, small fraction promotes neuronal growth and regeneration in neuropathological conditions
A non-immunosuppressive compound comprising a child peptide sequence is provided.
Summary of the Invention
The present invention relates to a municipality having an affinity for cyclophilin-type immunophilin.
Percutaneous low molecular weight, small molecular peptide cyclophilin inhibitor compounds
is there. Once bound to these proteins, the neurotrophic compound becomes an immunophilin protein.
Enzyme activities related to white, especially peptidyl-prolyl isomerase and rotamase
Is a potent inhibitor of the enzyme activity. The key features of this compound of the invention are:
In addition to their neurotrophic activity, they also exhibit any significant immunosuppressive activity.
That is not to conduct.
In particular, the present invention relates to compounds of Formula I (SEQ ID NOs: 1-2).
X-Pro-A3-A1-Pro-A2-ZI
However,
A3 is a direct bond or alanine (Ala), aspartic acid (Asp),
Glutamic acid (Gln), phenylalanine (Phe), glycine (Gly), histidine
Gin (His), Isoleucine (Ile), Lysine (Lys), Leucine (Leu)
, Methionine (Met), asparagine (Asn), proline (Pro), glutami
(Gln), arginine (Arg), serine (Ser), threonine (Thr),
Valine (Val), Tyrosine (Tyr), Cysteine (Cys) and Trypto
A natural amino acid selected from the group consisting of fans (Trp),
A1 and A2 are alanine (Ala), aspartic acid (Asp), glutamic acid
(Gln), phenylalanine (Phe), glycine (Gly), histidine (
His), isoleucine (Ile), lysine (Lys), leucine (Leu),
Methionine (Met), Asparagine (Asn), Proline (Pro), Glutamine
(Gln), arginine (Arg), serine (Ser), threonine (Thr),
Valine (Val), Tyrosine (Tyr), Cysteine (Cys) and Trypto
A natural amino acid independently selected from the group consisting of fans (Trp),
X is a pharmaceutically acceptable N-terminus;
And
Z is a pharmaceutically acceptable C-terminus.
In a preferred embodiment, the N-terminus is acetyl and the C-terminus is amino.
It is.
In another preferred embodiment, A3 is proline (Pro) (SEQ ID NO:
3).
In a most preferred embodiment, A3 is proline (Pro) and A1 is tyro.
Selected from the group consisting of syn (Tyr) and phenylalanine (Phe)
A2 is alanine (Ala), glutamic acid (Gln), phenylalanine
(Phe), glycine (Gly), isoleucine (Ile), lysine (Lys),
Isine (Leu), proline (Pro), valine (Val) and tyrosine (Ty
r) (SEQ ID NO: 4-23).
The present invention also provides
Neurotrophic animals with affinity for cyclophilin-type immunophilins
Administering an effective amount of the compound, the immunophilin exerts rotamase activity and
Leverotropic compounds inhibit the immunophilin rotamase activity.
It features a method of producing neuronal activity in an animal.
In a preferred embodiment, the activity of the neurons is based on physical injury or pathology.
Neuropathy of peripheral nerves, brain damage, spinal cord damage, strokes associated with brain damage,
And neuropathy selected from the group consisting of neuropathy related to neurodegeneration.
You.
In a most preferred embodiment, the activity of the neuron is a neuropathy associated with neurodegeneration.
Is a treatment for harm, and the disorder is Alzheimer's disease, Parkinson's disease and muscular atrophy
It is selected from the group consisting of lateral sclerosis.
The present invention further provides:
(I) A therapeutically effective amount of a neurotrophic compound of Formula I (SEQ ID NOS: 1-2)
X-Pro-A3-A1-Pro-A2-ZI
and
(Ii) a pharmaceutically acceptable carrier
However,
A3 is a direct bond, or alanine (Ala), aspartic acid (Asp),
Glutamic acid (Gln), phenylalanine (Phe), glycine (Gly), histidine
Gin (His), isoleucine (Ile),
Lysine (Lys), Leucine (Leu), Methionine (Met), Asparagine
(Asn), proline (Pro), glutamine (Gln), arginine (Arg),
Phosphorus (Ser), threonine (Thr), valine (Val), tyrosine (Tyr)
, Cysteine (Cys) and tryptophan (Trp)
Natural amino acids,
A1 and A2 are alanine (Ala), aspartic acid (Asp), glutamic acid
(Gln), phenylalanine (Phe), glycine (Gly), histidine (
His), isoleucine (Ile), lysine (Lys), leucine (Leu),
Methionine (Met), Asparagine (Asn), Proline (Pro), Glutami
(Gln), arginine (Arg), serine (Ser), threonine (Thr),
Valine (Val), Tyrosine (Tyr), Cysteine (Cys) and Trypto
A natural amino acid independently selected from the group consisting of fans (Trp),
X is a pharmaceutically acceptable N-terminus;
And
Z is a pharmaceutically acceptable C-terminus
And a pharmaceutical composition comprising:
In a preferred embodiment, the N-terminus is acetyl and the C-terminus is amino.
It is.
In another preferred embodiment, A3 is proline (Pro) (SEQ ID NO:
3).
In a most preferred embodiment, A3 is proline (Pro) and A1 is tyro.
Selected from the group consisting of syn (Tyr) and phenylalanine (Phe)
A2 is alanine (Ala), glutamic acid (Gln), phenylalanine
(Phe), glycine (Gly), isoleucine (Ile), lysine (Lys),
Isine (Leu), proline (Pro), valine (Val) and tyrosine (Ty
r) (SEQ ID NO: 4-23).
BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES
FIG. 1 shows the range of cyclophilin A inhibition by the tetrapeptides in Table 1.
It is.
FIG. 2 shows the extent of cyclophilin A inhibition by the pentapeptides in Table 2.
It is.
FIG. 3 shows the extent of cyclophilin A inhibition by the pentapeptides in Table 3.
It is.
FIG. 4 shows 1 mM Ac-Pro-Gly-Pro-Phe-NHTwo
Fig. 3 shows the promotion of axon derivation of chicken sensory neurons.
FIG. 5 shows 1 mM Ac-Pro-Ala-Pro-Aβa-NH.Two
Fig. 3 shows the promotion of axon derivation of chicken sensory neurons.
Detailed description of the invention
Definition
“Alkyl” refers to a branch containing 1 to 6 carbon atoms unless otherwise specified.
Or unbranched saturated hydrocarbon chains such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl
Butyl, isobutyl, tertiary butyl, n-pentyl, n-hexyl, etc.
You.
“Alkoxy” means an —OR group where R is alkyl as defined herein.
. Preferably, R is a branched or unbranched saturated carbon containing 1 to 3 carbon atoms.
It is a hydrogen chain.
“Halo” is fluoro, chloro, bromo, or iodo unless otherwise specified.
Means
“Phenyl” includes all possible phenyl radical isomers and includes alkyl, alk
A substituent selected from the group consisting of oxy, hydroxy, halo and haloalkyl
It may be mono- or polysubstituted.
“Treatment” covers the treatment of diseases and / or physical conditions of animals, especially humans, and includes the following:
Including
(I) Diagnosis that a certain disease and / or physical condition is likely to occur but is still
Preventing unauthorized persons from becoming ill and / or ill
When,
(Ii) suppress the illness and / or physical condition;
To be determined, and
(Iii) rescue from the disease and / or condition;
And / or causing physical deterioration,
Compounds of the invention
The neurotropic low molecular weight, small molecule peptide cyclophilin inhibitor compound of the present invention
Have affinity for cyclosporin A binding proteins, for example cyclophilin A
Have. When this neurotrophic compound binds to cyclophilin, they
Loryl-peptidyl cis-trans isomerase activity or protein binding
Inhibits tamase activity and results in unexpected stimulation of axonal growth
Was.
In particular, the present invention relates to compounds of Formula I (SEQ ID NOs: 1-2).
X-Pro-A3-A1-Pro-A2-ZI
However,
A3 is a direct bond or alanine (Ala), aspartic acid (Asp),
Glutamic acid (Gln), phenylalanine (Phe), glycine (Gly), histidine
Gin (His), Isoleucine (Ile), Lysine (Lys), Leucine (Leu)
, Methionine (Met), asparagine (Asn), proline (Pro), glutami
(Gln), arginine (Arg), serine (Ser), threonine (Thr),
Valine (Val), Tyrosine (Tyr), Cysteine (Cys) and Trypto
A natural amino acid selected from the group consisting of fans (Trp),
A1 and A2 are alanine (Ala), aspartic acid (Asp), glutamic acid
(Gln), phenylalanine (Phe), glycine (Gly), histidine (
His), isoleucine (Ile), lysine (Lys), leucine (Leu),
Methionine (Met), Asparagine (Asn), Proline (Pro), Glutamine
(Gln),
Arginine (Arg), Serine (Ser), Threonine (Thr), Valine (Va
l), tyrosine (Tyr), cysteine (Cys) and tryptophan (Tr
p) a natural amino acid independently selected from the group consisting of
X is a pharmaceutically acceptable N-terminus;
And
Z is a pharmaceutically acceptable C-terminus.
In a preferred embodiment, A3 is proline (Pro) (SEQ ID NO: 3)
.
In a most preferred embodiment, A3 is proline (Pro) and A1 is tyro.
Selected from the group consisting of syn (Tyr) and phenylalanine (Pha)
A2 is alanine (Ala), glutamic acid (Gln), phenylalanine
(Phe), glycine (Gly), isoleucine (Ile), lysine (Lys),
Isine (Leu), proline (Pro), valine (Val) and tyrosine (Ty
r) (SEQ ID NO: 4-23).
The N-terminus (amino terminus) may be any protecting group that protects amino.
No. Examples of the N-terminus include, but are not limited to, methyl and ethyl, 9-fluorene.
Nylmethyl, 9- (2-sulfo) fluorenylmethyl, 9- (2,7-dibromo
) Fluorenylmethyl, 2,7-di-t-butyl- [9- (10,10-dioxo-10)
, 10,10,10-Tetrahydrothioxanthyl)] methyl, and 4-methoxy
Carbamates such as nacil carbamate; 2,2,2-trichloroethyl, 2-to
Limethylsilylethyl, 2-phenylethyl, 1- (1-adamantyl) -1-me
Tylethyl, 1,1-dimethyl-2-haloethyl, 1,1-dimethyl-2,2-di
Bromoethyl, 1,1-dimethyl-2,2,2-trichloroethyl, 1-methyl-
1- (4-biphenyl) ethyl, 1- (3,5-di-t-butylphenyl) -1
-Methylethyl, 2- (2'- and 4'-pyridyl) ethyl, 2- (N, N-
Dichlorohexylcarboxamido) ethyl, t-butyl, 1-a
Damantyl, vinyl, allyl, 1-isopropylallyl, cinnamyl, 4-nit
Rosinnamyl, 8-quinolyl, N-hydroxypiperidinyl, alkyldithio,
Benzyl, p-methoxybenzyl, p-nitrobenzyl, p-bromobenzyl,
p-chlorobenzyl, 2,4-dichlorobenzyl, 4-methylsulfinylben
Substitutions such as jyl, 9-anthrylmethyl, and diphenylmethylcarbamate
Ethyl carbamate; 2-methylthioethyl, 2-methylsulfonylethyl, 2
-(P-toluenesulfonyl) ethyl, [2- (1,3-dithianyl)] methyl,
4-methylthiophenyl, 2,4-dimethylthiophenyl, 2-phosphonioethyl
, 2-triphenylphosphonioisopropyl, 1,1-dimethyl-2-cyano
Ethyl, m-chloro-p-acyloxybenzyl, p- (dihydroxyboryl)
Benzyl, 5-benzisoxazolylmethyl, and 2- (trifluoromethyl
) Assisted clear vage carba such as 6-chromonylmethyl carbamate
Mate; m-nitrophenyl, 3,5-dimethoxybenzyl, o-nitrobenzyl
, 3,4-dimethoxy-6-nitrobenzyl and phenyl (o-nitrophenyl
Phenyl) Photolytic cleavage carbamates such as methylnocarbamate; phenothiazini
-(10) -carbonyl, N'-p-toluenesulfonylaminocarbonyl,
And urea-type carbamate derivatives such as N'-phenylaminothiocarbonyl derivatives
T-amyl, s-benzylthiocarbamate, p-cyanobenzyl, cyclo
Butyl, cyclohexyl, cyclopentyl, cyclopropylmethyl, p-decyl
Oxybenzyl, diisopropylmethyl, 2,2-dimethoxycarbonylvinyl
, O- (N, N-dimethylcarboxamido) benzyl, No- (benzoyloxy
Methyl) benzoyl and 4,5-diphenyl-3-oxazoline-2-one
Miscellaneous carbamates such as rubamate; N-phthalimide, N-dithiask
Shinoyl, N-2,5-dimethylpyrrolyl, N-1,1,4,4-tetramethyldi
Silylazacyclopentane adduct, 5-substituted 1,3-dimethyl-1,3,5-tri
A
Zacyclohexane-2-one, 5-substituted 1,3-dibenzyl-1,3,5-tria
Zacyclohexane-2-one and 1-substituted 3,5-dinitro-4-pyridoni
Cyclic imide carbamate derivatives such as rucarbamate; N-methyl, N
-Allyl, N- [2- (trimethylsilyl) ethoxy] methyl, N-3-aceto
Xypropyl, N- (1-isopropyl-4-nitro-2-oxo-3-pyrroli
N-3-yl), quaternary ammonium salt, N-benzyl, N-di (4-methoxy
Phenyl) methyl, N-5-dibenzosuberyl, N-triphenylmethyl, N-
(4-methoxyphenyl) diphenylmethyl, N-9-phenylfluorenyl,
N-2,7-dichloro-9-fluorenylmethylene, N-ferrocenylmethyl,
And N-alkyls such as N-2-picolylamine N'-oxideamine and
N-arylamine; N-1,1-dimethylthiomethylene, N-benzylidene,
Np-methoxybenzylidene, N-diphenylmethylene, N-[(2-pyridy
L) mesityl] methylene, N- (N ', N'-dimethylaminomethylene, N, N'-
Isopropylidene, Np-nitrobenzylidene, N-salicylidene, N-5-
Chlorosalicylidene, N- (5-chloro-2-hydroxyphenyl) phenyl
N- (5,5-diimine derivatives such as Tylene and N-cyclohexylidene
Enamine derivatives such as methyl) -3-oxo-1-cyclohexyl) enamine;
N-metals (for example, N-borane, N-diphenylborinic acid, N- [f
Phenyl (pentacarbonylchromium or tungsten)] carbenyl, N-copper
Or N-zinc chelate), NN (eg, N-nitro, N-nitroso and
N-oxide), NP (for example, N-diphenylphosphinyl, N-dimethyl)
Thiophosphinyl, N-diphenylthiophosphinyl, N-dialkyl phosphoryl
, N-dibenzylphosphoryl, and N-diphenylphosphoryl), N-Si
, And NS (e.g., N-sulfenyl, e.g., N-benzenesulfenyl)
, No-nitrobenzenesulfenyl, N-2,4-dinitrobenzenesulfur
E
Nyl, N-pentachlorobenzenesulfenyl, N-2-nitro-4-methoxy
Benzenesulfenyl, N-triphenylmethylsulfenyl, N-3-nitro
N-heteroatom derivatives such as pyridinesulfenyl) derivatives;
-Toluenesulfonyl, N-benzenesulfonyl, N-2,3,6-trimethyl
-4-methoxybenzenesulfonyl, N-2,4,6-trimethoxybenzenesulfon
Honyl, N-2,6-dimethyl-4-methoxybenzenesulfonyl, N-penta
Methylbenzenesulfonyl, N-2,3,5,6-tetramethyl-4-methoxy
Nsensulfonyl, N-4-methoxybenzenesulfonyl, N-2,4,6-tri
Methylbenzenesulfonyl, N-2,6-dimethoxy-4-methylbenzenesulfur
Fonyl, N-2,2,5,7,8-pentamethylchroman-6-sulfonyl, N-meth
Tansulfonyl, N-β-trimethylsilylethanesulfonyl, N-9-ant
Licensulfonyl, N-4- (4 ', 8'-dimethoxynaphthylmethyl) benzenes
Ruphonyl, N-trifluoromethylsulfonyl, and N-phenacylsulfonyl
And N-sulfonyl.
The C-terminus (carboxyl terminus) is any protecting group that protects carboxyl.
You may. Examples of the C-terminus include, but are not limited to, 9-fluorenylmethyl,
Methoxymethyl, methylthiomethyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofura
Nil, methoxyethoxymethyl, 2- (trimethylsilyl) ethoxymethyl,
Benzyloxymethyl, phenacyl (for example, p-bromophenacyl, α-methyl
Phenacyl, and p-methoxyphenacyl), carboxamidomethyl, and
Substituted methyl esters such as N-phthalimidomethyl ester; 2,2,2-tric
Loroethyl, 2-haloethyl, ω-chloroalkyl, 2- (trimethylsilyl)
Ethyl, 2-methylthioethyl, 1,3-dithianyl-2-methyl, 2- (p-ni
Trophenylsulfenyl) ethyl, 2- (p-toluenesulfonyl) ethyl,
2- (2'-pyridyl) ethyl, 2- (diphenylphosphino) ethyl
1-methyl-1-phenylethyl, t-butyl, cyclopentyl, cyclohexane
Xyl, allyl, 3-buten-1-yl, 4- (trimethylsilyl) -2-bute
1-yl, cinnamyl, α-methylcinnamyl, phenyl, p- (methylmeth
2-substituted ethyl esters such as (capto) phenyl and benzyl esters;
Triphenylmethyl, diphenylmethyl, bis (o-nitrophenyl) methyl,
5-dibenzosuberyl, 1-pyrenylmethyl, 2- (trifluoromethyl) -6
-Chromylmethyl, 2,4,6-trimethylbenzyl, p-bromobenzyl, o-
Nitrobenzyl, p-nitrobenzyl, p-methoxybenzyl, 2,6-dimethoate
Xybenzyl, 4- (methylsulfinyl) benzyl, 4-sulfobenzyl,
Substituted benzyls such as peronyl, 4-picolyl, and p-benzyl esters
Esters; trimethylsilyl, triethylsilyl, t-butyldimethylsilyl,
i-propyldimethylsilyl, phenyldimethylsilyl, and di-t-butyl
Silyl esters such as methylsilyl ester; active esters such as thiol;
Xazole, 2-alkyl-1,3-oxazole, 4-alkyl-5-oxo
-1,3-oxasolidine, 5-alkyl-4-oxo-1,3-dioxolane
, Orthoester, phenylester, and pentaaminocobalt (III)
Ester derivatives such as plex; triethylstannyl and tri-n-butyl
Stannate esters such as stannyl esters; N, N-dimethyl, pyrrolidinyl, piperi
Dinyl, 5,6-dihydrophenanthridinyl, 0-nitroanilide, N-7-
Nitroindolyl, N-8-nitro 1,2,3,4-thiharahydroquinolyl,
And amides such as P-benzenesulfonamide; and N-phenyl and
And hydrazides such as N, N'-diisopropylhydrazite.
In a preferred embodiment, the N-terminus is acetyl and the C-terminus is amino.
The compounds of the present invention can be synthesized by any method known in the art.
Good. By way of illustration, representative methods for synthesizing some of the compounds of the present invention are described in the examples below.
Example 1 clarifies this.
how to use
The compounds of the present invention are cyclosporin-type binding proteins, particularly cyclop
It has affinity for illin A. These compounds are the ones in the brain
Upon binding to pilin A, they exert excellent neurotrophic activity. This activity is
Stimulating damaged neurons, promoting neuronal regeneration, preventing neurodegeneration,
Some are known to be associated with neurodegeneration and peripheral neuropathy
Useful for the treatment of certain neurological disorders. For the reasons described above, the present invention is further dynamic.
A neurotrophic compound having affinity for cyclophilin-type immunophilin
The immunophilin exerts rotamase activity, and
Neurotrophic compound inhibits the rotamase activity of this immunophilin
A method of causing neuron activity in an animal.
In a preferred embodiment, the activity of the neuron is
Stimulation of neurons, promotion of neuron regeneration, prevention of neurodegeneration and treatment of neurological disorders.
Selected from the group.
The neuropathy that can be treated includes, but is not limited to, trigeminal neuralgia;
Sore throat; Bell's palsy; myasthenia; muscular dystrophy; amyotrophic lateral sclerosis; progression
Muscular atrophy: progressive medullary hereditary muscular atrophy; no escaped, torn or escaped
Spinal disc syndrome; spondyloarthropathy; plexus disorder; thoraco-oral destruction syndrome; lead;
Peripheral disease caused by Thorn, tick, porphyria or Guillain-Barre syndrome
And Alzheimer's disease; and Parkinson's disease.
The compounds of the present invention are particularly useful for neuropathy of peripheral nerves based on physical injury or pathology.
Related to brain injury, spinal cord injury, seizures associated with brain injury, and neurodegeneration
It is useful for treating a neurological disorder selected from the group consisting of neurological disorders.
Examples of neuropathy related to neurodegeneration are Alzheimer's disease, Parkin
Songson's disease and amyotrophic lateral sclerosis.
For these purposes, these compounds are common non-toxic, pharmaceutically acceptable carriers.
Parenteral, parenteral, and oral dosage forms containing
Rey inhalation, topical, rectal, nasal, oral, cavity or implanted reservoir
Can be administered. Parenteral terms as used herein include subcutaneous, static
Intravenous, intramuscular, intraperitoneal, intracapsular, indoor (brain or heart), intrasternal and intracranial
Includes injection or infusion techniques.
To be therapeutically effective as central nervous system targets, these compounds are
It must easily cross the blood-brain barrier when administered from Blood brain barrier
Compounds that cannot pass through the phylum should be effectively administered via the ventricular route (brain or heart)
Can be.
These compounds may be in the form of a sterile injectable preparation, for example, sterile injectable water.
It can be administered as an oily or oily suspension. These suspensions are suitable
Formulated according to techniques known in the art using dispersing or wetting agents and suspending agents
Can be These sterile injectable preparations are also non-toxic and parenterally acceptable
A sterile injectable solution or suspension in a possible diluent or solvent, for example, 1,
3-butanediol solution. Among acceptable excipients and solvents
Water, Ringer's solution and isotonic saline solution can be used. In addition, sterile non-volatile
Oils are also commonly used as solvents and suspending media. Because of this, synthetic mono- or diglycerides
Any non-irritating fixed oil can be used, such as Oleic acid and its
Fatty acids, such as lyseride derivatives, which include olive oil and castor oil, especially
Lioxyethylated compounds are useful for preparing injections. These oil solutions are
Alternatively, the suspension may contain a long-chain alcohol diluent or dispersant.
In addition, these compounds are administered orally in the form of capsules, tablets, aqueous suspensions or solutions.
Can be administered. Tablets contain carriers such as lactose and corn starch, and
And / or magnesium stearate
Such a lubricant may be included. Capsules like lactose or dried corn starch
It may contain a diluent. Aqueous suspensions contain the active ingredient with emulsifying and suspending agents.
Can be This oral dosage form may further comprise a sweetener and / or a flavorant and
And / or a coloring agent can be contained.
These compounds can be administered rectally in the form of a suppository. These compositions
Is a solid at room temperature but a liquid at rectal temperature, so it melts in the rectum and releases the drug.
Can be prepared by mixing an appropriate non-irritating excipient with the drug.
it can. Such materials include cocoa butter, beeswax and polyethylene glycols.
including.
In addition, these compounds are particularly useful for treating
Areas and organs easily accessible by topical application, including intestinal neuropathy
When containing, it can be administered locally. A suitable topical formulation is available at each of these sites.
It can be easily prepared accordingly.
For topical application in the eye and ophthalmic applications, these compounds can be used in benzylalkonium chloride.
No isotonic pH adjusted with or without preservatives such as ride
As an ultrafine suspension of bacterial saline or, preferably, an isotonic pH
It can be formulated as a sterile physiological saline solution. Instead, this
These compounds may be formulated in an ointment such as petrolatum for ophthalmic use.
For topical application to the skin, these compounds can be used, for example, in mineral oil, liquid petrolatum.
, White petrolatum, propylene glycol, polyoxyethylene polyoxypropyl
A suitable compound suspended or dissolved in one or more of a ren compound, emulsified wax and water
It can be formulated as an ointment. Instead, these compounds, for example,
Oil, sorbitan monostearate, polysorbate 60, cetyl ester wax
Box, stearyl alcohol, 2-octyldodecanol, benzyl alcohol
And a suitable lotion or cream suspended or dissolved in one or more of water
Can be dispensed as a system.
Topical application to the lower intestinal tract is made with rectal suppositories, preparations (see above) or appropriate enema
Can be achieved by the agent. Useful of this active ingredient compound for the treatment of the above physical condition
Dosage levels are on the order of about 0.1 mg to about 10,000 mg, preferably about 0.1 mg to about 1,1 mg.
000mg level. Combined with a carrier substance to create a single dosage form
This amount of active ingredient may vary depending on the host treated and the mode of administration.
Would.
However, the dosage level for a particular patient will depend on the activity of the compound used;
Age, weight, general health, sex and diet of patient; timing of administration; elimination rate;
Depending on various factors including the severity of the disease being treated;
Will be understood.
These compounds may be used in other neurotrophic drugs such as neurotrophic growth factor (NGF),
Glial-derived growth factor, brain-derived growth factor, ciliary nervous factor, and neurotropin-
3 and the like.
Pharmaceutical composition
The compounds of the present invention can be formulated and incorporated into pharmaceutical compositions for the various uses described above.
it can. Accordingly, the present invention also relates to (i) a neurotrophic compound of formula I (SEQ ID NO: 1-
2) Therapeutically effective amount
X-Pro-A3-A1-Pro-A2-ZI
and
(Ii) a pharmaceutically acceptable carrier
However,
A3 is a direct bond, or alanine (Ala), aspartic acid (Asp),
Glutamic acid (Gln), phenylalanine (Phe), glycine (Gly), histidine
Gin (His), Isoleucine (Ile), Lysine (Lys), Leucine (Leu)
, Methionine (Met), asparagine (Asn), proline (Pro), glutami
(Gln), arginine (Arg), serine (Ser), threonine (Thr),
Valine (Val), tyrosine (Tyr), cysteine (Cys) and
And natural amino acids selected from the group consisting of tryptophan (Trp),
A1 and A2 are alanine (Ala), aspartic acid (Asp), glutamic acid
(Gln), phenylalanine (Phe), glycine (Gly), histidine (
His), isoleucine (Ile), lysine (Lys), leucine (Leu),
Methionine (Met), Asparagine (Asn), Proline (Pro), Glutami
(Gln), arginine (Arg), serine (Ser), threonine (Thr),
Valine (Val), Tyrosine (Tyr), Cysteine (Cys) and Trypto
A natural amino acid independently selected from the group consisting of fans (Trp),
X is a pharmaceutically acceptable N-terminus;
And
Z is a pharmaceutically acceptable C-terminus
And a pharmaceutical composition comprising:
In a preferred embodiment, the N-terminus is acetyl and the C-terminus is amino.
It is.
In another preferred embodiment, A3 is proline (Pro) (SEQ ID NO:
3).
In a most preferred embodiment, A3 is proline (Pro) and A1 is tyro.
Selected from the group consisting of syn (Tyr) and phenylalanine (Phe)
A2 is alanine (Ala), glutamic acid (Gln), phenylalanine
(Phe), glycine (Gly), isoleucine (Ile), lysine (Lys),
Isine (Leu), proline (Pro), valine (Val) and tyrosine (Ty
r) (SEQ ID NO: 4-23).
The above discussion regarding the administration of this compound also applies to this pharmaceutical composition.
Example
The following examples are illustrative of the present invention, and they do not
It is not meant to be limiting. All polymer molecular weights are average molecular weights. Special
Unless stated otherwise, all percentages are by weight of the final compound or drug composition.
100% and it is against it.
Example 1
Peptide synthesis
Transfer 0.25 g (0.44 meq / g) of Link resin to the reaction tube, and add
Wash with muamide (DMF) (3 × 5 minutes), then add 50% piperidine DMF solution
(2 × 10 minutes) and the protecting group 9-fluorenylmethoxycarbonyl group (F
moc) was removed. The resin is washed with DMF (5 × 5 minutes) and the primary amino
Ac-Pro-Gly-Pro-Phe-NH with acidTwo(SEQ ID NO: 1)
To achieve this, the first protected amino acid Fmoc-Phe (0.25 mmol) was
2.5 ml DMF with droxybenzo-triazole (HOBt; 0.25 mmol)
Dissolve and pre-activate (3 minutes), then add benzotriazolyloxy- (tri-
S) dimethylaminophosphonium hexafluorophosphate (BOP; 0.25mm)
ol) and 4-methylmorpholine (NMM; 0.375 mmol) were dissolved. This mixture
Immediately put into a reaction tube and shaken for 2 hours. After washing with DMF for 3 × 5 minutes, residual
A color test for Min turned negative. This DMF washing was repeated, and the remaining
Groups (Fmoc-Pro, Fmoc-Gly, Fmoc-Pro) with the same deprotection,
Use wash, coupling, and wash cycles to remove all amino acids in this sequence.
Combined as designed. After binding the last amino acid, Fmoc should be
2% piperidine in DMF (2 × 10 minutes) followed by DMF (5 × 10 min).
X 5 minutes). The terminal amino group of this resin is converted to DMF: acetic anhydride: N-ethyl
Diisopropylamine = 2 ml of a 193: 6: 1 (v / v / v) mixture for 90 minutes at room temperature
Acetylated. The final peptide resin was added to DMF (3 × 5 minutes), t-amylua
Alcohol (2 × 3 minutes), acetic acid (2 × 3 minutes), t-amyl alcohol (2 × 3 minutes)
Minutes), washed with ether (3 × 3 minutes)
Dried overnight in the sky. The dried peptide resin was mixed with 2 ml of TFA: phenol: water = 90
: 5: 5 for 2 hours at room temperature. The resin is filtered, washed thoroughly with TFA,
All filtrates are NTwoEvaporated in atmosphere. To the residue was added methyl t-butyl ether (50 m
l) was added and the white precipitate was collected by centrifugation. The NMR spectrum is expected
Was consistent with the structure.
Example 2
Binding Life Library of Tetrapeptide and Pentapeptide
Unexpected advantage of polyproline substrate over cyclophilin and its potential
Strong neurotrophic activity is bound by mapping the substrate specificity of the enzyme cyclophilin.
Was discovered using a library of peptides that were identified. Tetrapeptide and pentapep
Pools of tide substrates have been described in the literature (Houghten et al., Nature, 354, 84-86, 1991).
The binding strength of cyclophilin A is
Sought by examining inhibition of petidylprolyl isomerase activity
. To determine the best amino acid for each position of a tetra or pentapeptide,
A positional scanning technique was used.
Tables I-III below list the tetrapeptide and pentapeptide substrates tested.
Have been. A1 ', A2' and A3 'in Tables I-III have 18 amino acids (triple
It represents an equimolar mixture of all natural amino acids except tophan and cysteine. Example III
Ki test procedure
Inhibition of Peptidyl Prolyl Isomerase (Rotamase) Activity of Compounds of the Invention
Is a known method described in the literature (Harding et al., Nature, 341: 758-760, 1989).
Can be asked. These values are obtained as apparent Ki values.
The compounds of Tables I-III are provided. N-succi is a model substrate
Alanine-pro of nil-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide
The cis-trans isomerization of the phosphorus bond converts the trans form of this substrate to paranitroanilide.
Monitored by spectrophotometry with chymotrypsin binding assay releasing
. Inhibition of this reaction by the addition of inhibitors at different concentrations was sought and the data were
Solve for the apparent Ki value as a change in the temporal rate constant as a function of inhibitor concentration.
Is analyzed. Absorbance at 390 nm against time is monitored every 90 seconds using a spectrophotometer
The rate constant is determined from the absorbance and time data files.
Is done.
Peptidic substrates were drawn into pools as described above. These binding libraries
Representative data for the evaluation of is shown in FIGS. 1-3. In FIG. 1, Ac-X
'-A1'-Pro-A2'-NHTwoX 'is a specific amino acid and A1' and A2 'are 1
Equimolar of 8 amino acids (all natural amino acids except tryptophan and cysteine)
Data from the mixed tetrapeptide are shown. The inhibition curve is
Proline and tyrosine, especially proline, are preferred in the first position, i.
A preferred tetrapeptide inhibitor of Clofilin A is Ac-Pro-A1'-Pr
o-A2'-NHTwoIs Ac-tyr-A1'-Pro-A2'-NHTwoalso in the form of n
It indicates that Table 4 below shows the IC of the preferred mixture.50Value is shown
ing.
All other members of this library are considerably less active and
High specificity exerted by the protein and substrates with more than one proline are preferred.
Are shown.
Similarly, FIG. 2 shows a library of pentapeptides, Ac-X'-A3'-A1 '.
-Pro-A2'-NHTwoIs based on Ac-Pro-A3'-
A1'-Pro-A2'-NHTwoIs shown. These results are
This shows that Clofilin A is preferred as a polyprolyl substrate. This rhino
The substrate specificity of Clofilin A is completely unpredictable. Typical later
The pentapeptide library data is shown in FIG.
Example IV
Chicken dorsal root ganglion
Chicken cultured neurotrophic effects of cyclophilin inhibitors from dorsal root ganglia
To assess the ability of these compounds to promote axonal outgrowth in sensory neurons
And indicated by Dorsal root ganglia were removed from chicken embryos on day 10 of gestation. all
Explants of ganglia were supplemented with 2 mM glutamine and 10% fetal bovine serum and
Liebovitz L15 plate containing μM cytosine β-D arabinofuranoside (Ara C)
Thin Matrigel-Coated 12-Well Plate with Las High Glucose Medium
5% CO at 37 ℃TwoCultured in an atmosphere containing After 24 hours, DRG was
Treated with nerve growth factor, immunophilin ligand or drug combination with NGF
. After 48 hours after drug treatment, ganglia were phase-shifted or Zeiss Axiovert inverted
Visible with Hoffmanu modulation versus mirror. Transplantation manifestation
Microscopic photographs were made to quantify the derivation of the axle. Axons longer than the DRG diameter
The total number of axons quantified for each test condition was counted as positive. Well
Each time, 3-4 DRGs were cultured and each treatment was performed in duplicate.
The largest increase in the number of protrusions, their length and branching is
It is very similar to the maximum effective contraction of Gand and NGF (100 ng / ml). Of various drugs
With increasing concentrations, more protrusions, more elongated branches and more of the individual protrusions
Large lengths are observed.
FIG. 4 shows Ac-Pro-Gly-Pro-Phe-NHTwoChicken perception
Action at 1 mM concentration of long fibers from the cell body.
As shown by induction, these compounds exert potent neurotrophic effects.
Similarly, FIG. 5 shows that Ac-Pro-Ala-Pro-Ala-NHTwothese
Potential neurotrophic effects in neuronal culture have been demonstrated.
Although the present invention has been described above, the present invention can be implemented in various ways.
It will be clear that can be changed with. Such modifications are within the spirit and scope of the present invention.
Does not depart from the scope of the claims, and all such changes are intended to be within the scope of the following claims.
Is intended to be included in
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 FI テーマコート゛(参考)
C07K 7/06 ZNA A61K 37/64
(81)指定国 EP(AT,BE,CH,DE,
DK,ES,FI,FR,GB,GR,IE,IT,L
U,MC,NL,PT,SE),OA(BF,BJ,CF
,CG,CI,CM,GA,GN,ML,MR,NE,
SN,TD,TG),AP(GH,KE,LS,MW,S
D,SZ,UG,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG
,KZ,MD,RU,TJ,TM),AL,AM,AT
,AU,AZ,BA,BB,BG,BR,BY,CA,
CH,CN,CU,CZ,DE,DK,EE,ES,F
I,GB,GE,HU,ID,IL,IS,JP,KE
,KG,KP,KR,KZ,LC,LK,LR,LS,
LT,LU,LV,MD,MG,MK,MN,MW,M
X,NO,NZ,PL,PT,RO,RU,SD,SE
,SG,SI,SK,SL,TJ,TM,TR,TT,
UA,UG,UZ,VN,YU,ZW
(72)発明者 ジョーゼフ・ピー・スタイナー
アメリカ合衆国 メリーランド州21074,
ハンプステッド,シュガーメープルストリ
ート,988──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification code FI Theme coat ゛ (Reference) C07K 7/06 ZNA A61K 37/64 (81) Designated country EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES) , FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN , TD, TG), AP (GH, KE, LS, MW, SD, SZ, UG, ZW), EA (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), AL, AM , AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, HU, I D, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL , PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, UZ, VN, YU, ZW (72) Inventor Joseph P. Steiner United States Mary Land State 21074, Hampstead, Sugar Maple Street, 988