【発明の詳細な説明】
分泌蛋白およびそれらをコードするポリヌクレオチド
本願は、1996年10月4日出願の第08/726237号の一部継続出願
である。
発明の分野
本発明は新規なポリヌクレオチドおよびかかるポリヌクレオチドによりコード
される蛋白、ならびにこれらのポリヌクレオチドおよび蛋白に関する治療的、診
断的および研究的有用性を提供する。
発明の背景
蛋白性因子(例えば、リンホカイン、インターフェロン、CSFsおよびイン
ターロイキンのごときサイトカインを含む)の発見を目的とした方法はこの10
年間に急速に成熟した。現在では常套的なハイブリダイゼーションクローニング
および発現クローニング法は、発見された蛋白に直接関連した情報(すなわち、
ハイブリダイゼーションクローニングの場合には蛋白の部分DNA/アミノ酸配
列;発現クローニングの場合には蛋白の活性)に依存するという意味において、
新規ポリペプチドを「直接的に」クローン化する。シグナル配列クローニング(
現在よく認識されている分泌リーダー配列モチーフの存在に基づいてDNA配列
を単離する)、ならびに種々のPCRによるあるいは低い厳密性によるハイブリ
ダイゼーションクローニング法のごとき、より最近の「間接的」クローニング法
は、リーダー配列のクローニングの場合には分泌されるという性質により、ある
いはPCRによる方法の場合には細胞または組織源により、生物学的活性を有す
ることが知られている蛋白に関する多数のDNA/アミノ酸配列を使用可能にす
ることによって現状を進歩させてきた。本発明はこれらの蛋白およびそれらをコ
ードするポリヌクレオチドに指向されるものである。発明の概要
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群より選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:1のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:1のヌクレオチド282からヌクレオチド565までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(c)配列番号:1のヌクレオチド342からヌクレオチド565までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンAX65 22
の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンAX65 22
のcDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンAX65 22
の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(g)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンAX65 22
のcDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(h)配列番号:2のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド;
(i)生物学的活性を有する配列番号:2のアミノ酸配列のフラグメントを含
む蛋白をコードしているポリヌクレオチド;
(j)上記(a)〜(g)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド;
(k)上記(h)または(i)の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド;および
(l)厳密な条件下で(a)〜(i)に示すポリヌクレオチドのいずれか1つ
にハイブリダイゼーション可能なポリヌクレオチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:1のヌクレオチド282
からヌクレオチド565までのヌクレオチド配列;配列番号:1のヌクレオチド
342からヌクレオチド565までのヌクレオチド配列;受託番号ATCC98
196として寄託されたクローンAX65 22の全長蛋白コーディング配列の
ヌクレオチド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたクロー
ンAX65 22の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他の
好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC98196と
して寄託されたクローンAX65 22のcDNAインサートによりコードされ
る全長または成熟蛋白をコードする。
他の具体例は配列番号:1または配列番号:3のcDNA配列に対応する遺伝
子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:2のアミノ酸配列;
(b)配列番号:2のアミノ酸配列のフラグメント;および
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンAX65 22
のcDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。
好ましくは、かかる蛋白は、配列番号:2のアミノ酸配列を含む。
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群から選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:56のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:56のヌクレオチド配列のヌクレオチド192からヌクレオ
チド2318までを含むポリヌクレオチド;
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
BD335 14の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌ
クレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
BD335 14のcDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードす
るポリヌクレオチド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
BD335 14の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌ
クレオチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
BD335 14のcDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードす
るポリヌクレオチド;
(g)配列番号:57のアミノ酸配列を含む蛋白をコードするポリヌクレオチ
ド;
(h)生物学的活性を有する配列番号:57のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードするポリヌクレオチド;
(i)上記(a)〜(d)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド
(j)上記(g)または(h)の蛋白の種相同体をコードするポリヌクレオチ
ド;および
(k)厳密な条件下で(a)〜(h)に示すポリヌクレオチドのいずれか1つ
にハイブリダイゼーション可能なポリヌクレオチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:56のヌクレオチド配列
のヌクレオチド192からヌクレオチド2318まで;受託番号ATCC981
96として寄託されたクローンBD335 14の全長蛋白コーディング配列の
ヌクレオチド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたクロー
ンBD355 14の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他
の好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC98196
として寄託されたクローンBD335 14のcDNAインサートによりコード
される全長または成熟蛋白をコードする。さらなる他の好ましい具体例において
、本発明は、配列番号:57のアミノ酸148からアミノ酸240ま
でのアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレオチドを提供する。
他の具体例は、配列番号:56のcDNA配列に対応する遺伝子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:57のアミノ酸配列;
(b)配列番号:57のアミノ酸148からアミノ酸240までのアミノ酸配
列;
(c)配列番号:57のアミノ酸配列のフラグメント;および
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
BD335 14のcDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。
好ましくは、かかる蛋白は配列番号:57のアミノ酸配列または配列番号:57
のアミノ酸148からアミノ酸240までのアミノ酸配列を含む。
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群から選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:9のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:9のヌクレオチド206からヌクレオチド391までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBG241 1
の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBG241 1
のcDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBG241 1
の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBG241 1
のcDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(g)配列番号:10のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(h)生物学的活性を有する配列番号:10のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド;
(i)上記(a)〜(d)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド;および
(j)上記(g)または(h)の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:9のヌクレオチド206
からヌクレオチド391までのヌクレオチド配列;受託番号ATCC98196
として寄託されたクローンBG241 1の全長蛋白コーディング配列のヌクレ
オチド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBG
241 1の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他の好まし
い具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC98196として寄
託されたクローンBG241 1のcDNAインサートによりコードされる全長
または成熟蛋白をコードする。
他の具体例は配列番号:9、配列番号:8または配列番号:11のcDNA配
列に対応する遺伝子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:10のアミノ酸配列;
(b)配列番号:10のアミノ酸配列のフラグメント;および
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBG241 1
のcDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。
好ましくは、かかる蛋白は、配列番号:10のアミノ酸配列を含む。
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群から選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:13のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:13のヌクレオチド194からヌクレオチド328までのヌ
クレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBL187 4
の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBL187 4
のcDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBL187 4
の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBL187 4
のcDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(g)配列番号:14のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(h)生物学的活性を有する配列番号:14のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド;
(i)上記(a)〜(d)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド;および
(j)上記(g)または(h)の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:13のヌクレオチド19
4からヌクレオチド328までのヌクレオチド配列;受託番号ATCC9819
6として寄託されたクローンBL187 4の全長蛋白コーディング配列のヌク
レオチド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたクローンB
L187 4の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他の好ま
しい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC98196として
寄託されたクローンBL187 4のcDNAインサートによ
りコードされる全長または成熟蛋白をコードする。
他の具体例は配列番号:13、配列番号:12または配列番号:15のcDN
A配列に対応する遺伝子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:14のアミノ酸配列;
(b)配列番号:14;および
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBL187 4
のcDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。
好ましくは、かかる蛋白は、配列番号:14のアミノ酸配列を含む。
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群から選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:16のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:16のヌクレオチド2からヌクレオチド309までのヌクレ
オチド配列を含むポリヌクレオチド;
(c)配列番号:16のヌクレオチド131からヌクレオチド309までのヌ
クレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
BL249 18の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌ
クレオチド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
BL249 18のcDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードし
ているポリヌクレオチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
BL249 18の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌ
クレオチド;
(g)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
BL249 18のcDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードし
ているポリヌクレオチド;
(h)配列番号:17のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(i)生物学的活性を有する配列番号:17のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド;
(j)上記(a)〜(g)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド;および
(k)上記(h)または(i)の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:16のヌクレオチド2か
らヌクレオチド309までのヌクレオチド配列;配列番号:16のヌクレオチド
131からヌクレオチド309までのヌクレオチド配列受託番号ATCC981
986として寄託されたクローンBL249 18の全長蛋白コーディング配列
のヌクレオチド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたクロ
ーンBL249 18の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。
他の好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC9819
6として寄託されたクローンBL249 18のcDNAインサートによりコー
ドされる全長または成熟蛋白をコードする。さらなる他の好ましい具体例におい
て、本発明は、配列番号:17のアミノ酸2から101までのアミノ酸配列を含
む蛋白をコードするポリヌクレオチドを提供する。
他の具体例は配列番号:16または配列番号:18のcDNA配列に対応する
遺伝子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:17のアミノ酸配列;
(b)配列番号:17のアミノ酸2からアミノ酸101までのアミノ酸配列
(c)配列番号:17のアミノ酸配列のフラグメント;および
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
BL249 18のcDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。
好ましくは、かかる蛋白は、配列番号:17のアミノ酸配列または配列番号:1
7のアミノ酸2からアミノ酸101までのアミノ酸配列を含む。
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群から選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:20のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:20のヌクレオチド459からヌクレオチド539までのヌ
クレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBO71 1の
全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBO71 1の
cDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBO71 1の
成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBO71 1の
cDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド;
(g)配列番号:21のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(h)生物学的活性を有する配列番号:21のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド;
(i)上記(a)〜(d)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド;
(j)上記(g)または(h)の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド;および
(k)厳密な条件下で(a)〜(h)に示すポリヌクレオチドのいずれか1つ
にハイブリダイゼーション可能なポリヌクレオチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:20のヌクレオチド45
9からヌクレオチド539までのヌクレオチド配列;受託番号ATCC9819
6として寄託されたクローンBO71 1の全長蛋白コーディング配列のヌクレ
オチド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBO
71 1の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他の好ましい
具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC98196として寄託
されたクローンBO71 1のcDNAインサートによりコードされる全長また
は成熟蛋白をコードする。
他の具体例は配列番号:20、配列番号:19または配列番号:22のcDN
A配列に対応する遺伝子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:21のアミノ酸配列;
(b)配列番号:21のアミノ酸配列のフラグメント;および
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBO71 1の
cDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。
好ましくは、かかる蛋白は、配列番号:21のアミノ酸配列を含む。
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群から選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:24のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:24のヌクレオチド300からヌクレオチド512までのヌ
クレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(c)配列番号:24のヌクレオチド372からヌクレオチド512までのヌ
クレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBO365 2
の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBO365 2
のcDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBO365 2
の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(g)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBO365 2
のcDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(h)配列番号:25のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(i)生物学的活性を有する配列番号:25のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド;
(j)上記(a)〜(g)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド;
(k)上記(h)または(i)の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド;および
(l)厳密な条件下で(a)〜(i)に示すポリヌクレオチドのいずれか1つ
にハイブリダイゼーション可能なポリヌクレオチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:24のヌクレオチド30
0からヌクレオチド512までのヌクレオチド配列;配列番号:24のヌクレオ
チド372からヌクレオチド512までのヌクレオチド配列;受託番号ATCC
98196として寄託されたクローンBO365 2の全長蛋白コーディング配
列のヌクレオチド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたク
ローンBO365 2の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。
他の好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC9819
6として寄託されたクローンBO365 2のcDNAインサートによりコード
される全長または成熟蛋白をコードする。
他の具体例は配列番号:24、配列番号:23または配列番号:26のcDN
A配列に対応する遺伝子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:25のアミノ酸配列;
(b)配列番号:25のアミノ酸配列のフラグメント;および
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBO265 2
のcDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。
好ましくは、かかる蛋白は、配列番号:25のアミノ酸配列を含む。
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群から選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:27のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:27のヌクレオチド68からヌクレオチド328までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV51 1の
全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV51 1の
cDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV51 1の
成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV51 1の
cDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド;
(g)配列番号:28のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(h)生物学的活性を有する配列番号:28のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド;
(i)上記(a)〜(d)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド;
(j)上記(g)または(h)の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド;および
(k)厳密な条件下で(a)〜(h)に示すポリヌクレオチドのいずれか1つ
にハイブリダイゼーション可能なポリヌクレオチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:27のヌクレオチド68
からヌクレオチド328までのヌクレオチド配列;受託番号ATCC98196
として寄託されたクローンBV51 1の全長蛋白コーディング配列のヌクレオ
チド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV5
1 1の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他の好ましい具
体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC98196として寄託さ
れたクローンBV51 1のcDNAインサートによりコードされる全長または
成熟蛋白をコードする。
他の具体例は配列番号:27または配列番号:29のcDNA配列に対応する
遺伝子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:28のアミノ酸配列;
(b)配列番号:28のアミノ酸配列のフラグメント;および
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV51 1の
cDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。
好ましくは、かかる蛋白は、配列番号:28のアミノ酸配列を含む。
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群から選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:31のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:31のヌクレオチド57からヌクレオチド396までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV140 3
の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV140 3
cDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV140 3
の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV140 3
cDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド;
(g)配列番号:32のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(h)生物学的活性を有する配列番号:32のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド;
(i)上記(a)〜(d)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド;および
(j)上記(g)または(h)の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:31のヌクレオチド57
からヌクレオチド396までのヌクレオチド配列;受託番号ATCC98196
として寄託されたクローンBV140 3の全長蛋白コーディング配列のヌクレ
オチド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV
140 3の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他の好まし
い具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC98196として寄
託されたクローンBV140 3のcDNAインサートによりコードされる全長
または成熟蛋白をコードする。さらなる他の好ましい具体例において、本発
明は、配列番号:32のアミノ酸29からアミノ酸57までのアミノ酸配列を含
む蛋白をコードするポリヌクレオチドを提供する。
他の具体例は配列番号:31、配列番号:30または配列番号:33のcDN
A配列に対応する遺伝子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:32のアミノ酸配列;
(b)配列番号:32のアミノ酸29からアミノ酸57までのアミノ酸配列;
(c)配列番号:32のアミノ酸配列のフラグメント;および
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV140 3
のcDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。
好ましくは、かかる蛋白は、配列番号:32のアミノ酸配列または配列番号:3
2のアミノ酸29からアミノ酸57までのアミノ酸配列を含む。
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群から選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:34のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:34のヌクレオチド132からヌクレオチド242までのヌ
クレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV141 2
の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV141 2
のcDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV141 2
の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV141 2
のcDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(g)配列番号:35のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(h)生物学的活性を有する配列番号:35のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド;
(i)上記(a)〜(d)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド;
(j)上記(g)または(h)の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド;および
(k)厳密な条件下で(a)〜(h)に示すポリヌクレオチドのいずれか1つ
にハイブリダイゼーション可能なポリヌクレオチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:34のヌクレオチド13
2からヌクレオチド242までのヌクレオチド配列;受託番号ATCC9819
6として寄託されたクローンBV141 2の全長蛋白コーディング配列のヌク
レオチド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたクローンB
V141 2の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他の好ま
しい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC98196として
寄託されたクローンBV141 2のcDNAインサートによりコードされる全
長または成熟蛋白をコードする。
他の具体例は配列番号:34または配列番号:36のcDNA配列に対応する
遺伝子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の捕乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:35のアミノ酸配列;
(b)配列番号:35のアミノ酸配列のフラグメント;および
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンBV141 2
のcDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。
好ましくは、かかる蛋白は、配列番号:35のアミノ酸配列を含む。
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群から選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:37のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:37のヌクレオチド28からヌクレオチド351までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(c)配列番号:37のヌクレオチド328からヌクレオチド351までのヌ
クレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンCC194 4
の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンCC194 4
のcDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンCC194 4
の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(g)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンCC194 4
のcDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(h)配列番号:38のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(i)生物学的活性を有する配列番号:38のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド;
(j)上記(a)〜(g)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド;および
(k)上記(h)または(i)の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:37のヌクレオチド28
からヌクレオチド351までのヌクレオチド配列;配列番号:37のヌクレオチ
ド328からヌクレオチド351までのヌクレオチド配列;受託番号ATCC9
8196として寄託されたクローンCC194 4の全長蛋白コーディング配列
のヌクレオチド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたクロ
ーンCC194 4の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他
の好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC98196
として寄託されたクローンCC194 4のcDNAインサートによりコードさ
れる全長または成熟蛋白をコードする。さらなる他の好ましい具体例において、
本発明は、配列番号:38のアミノ酸56からアミノ酸108までのアミノ酸配
列を含む蛋白をコードするポリヌクレオチドを提供する。
他の具体例は配列番号:37または配列番号:39のcDNA配列に対応する
遺伝子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:38のアミノ酸配列;
(b)配列番号:38のアミノ酸56からアミノ酸108までのアミノ酸配列
;
(c)配列番号:38のアミノ酸配列のフラグメント;および
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンCC194 4
のcDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。
好ましくは、かかる蛋白は、配列番号:38のアミノ酸配列または配列番号:3
8のアミノ酸56からアミノ酸108までのアミノ酸配列を含む。
1の具体例において、本発明は、下記のものからなる群から選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する:
(a)配列番号:41のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(b)配列番号:41のヌクレオチド62からヌクレオチド592までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド;
(c)受託番号ATCC98196として寄託されたクローンDA136 1
1の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌ
クレオチド;
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
DA136 11のcDNAインサートによりコードされる全長蛋白をコードし
ているポリヌクレオチド;
(e)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
DA136 11の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌ
クレオチド;
(f)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
DA136 11のcDNAインサートによりコードされる成熟蛋白をコードし
ているポリヌクレオチド;
(g)配列番号:42のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド;
(h)生物学的活性を有する配列番号:42のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド;
(i)上記(a)〜(d)のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド;および
(j)上記(g)または(h)の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド。
好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号:41のヌクレオチド62
からヌクレオチド592までのヌクレオチド配列;受託番号ATCC98196
として寄託されたクローンDA136 11の全長蛋白コーディング配列のヌク
レオチド配列;または受託番号ATCC98196として寄託されたクローンD
A136 11の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他の好
ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ATCC98196とし
て寄託されたクローンDA136 11のcDNAインサートによりコードされ
る全長または成熟蛋白をコードする。さらなる他の具体例において、本発明は、
配列番号:42のアミノ酸61からアミノ酸119までのアミノ酸配列を含む蛋
白をコードするポリヌクレオチドを提供する。
他の具体例は配列番号:41、配列番号:40または配列番号:43のcDN
A配列に対応する遺伝子を提供する。
他の具体例において、本発明は、以下のものからなる群から選択されるアミノ
酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白を実質的に含まない蛋白を含む組
成物を提供する:
(a)配列番号:42のアミノ酸配列;
(b)配列番号:42のアミノ酸61からアミノ酸119までのアミノ酸配列
;
(c)配列番号:42のアミノ酸配列のフラグメント;および
(d)受託番号ATCC98196として寄託されたクローン
DA136 11のcDNAインサートによりコードされるアミノ酸配列。好ま
しくは、かかる蛋白は、配列番号:42のアミノ酸配列または配列番号:42の
アミノ酸61からアミノ酸119までのアミノ酸配列を含む。
ある種の好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは発現調節配列に作動可
能に連結される。本発明はまた、かかるポリヌクレオチド組成物で形質転換され
た、細菌、酵母、昆虫および哺乳動物細胞を含む、宿主細胞を提供する。
さらに、蛋白の製造方法であって、
(a)かかるポリヌクレオチド組成物で形質転換された宿主細胞の培養物を適
当な培地にて増殖させ;ついで
(b)該培養物から蛋白を精製する
ことからなる方法も提供される。かかる方法により産生される蛋白もまた、本発
明により提供されるものである。好ましい具体例として、かかる方法により製造
される蛋白が成熟形態の蛋白であるものが挙げられる。
本発明の蛋白組成物は、さらに医薬上許容される担体を含んでいてもよい。か
かる蛋白と特異的に反応する抗体を含む組成物も、本発明により提供される。
本発明の蛋白および医薬上許容される担体を含む治療上有効量の組成物を哺乳
動物対象に投与することを含む、医学的状態の予防、治療または改善のための方
法も提供される。図面の簡単な説明
図1は本発明クローンを寄託するのに使用したpED6およびpNotSベク
ターを示す。
詳細な説明 単離蛋白およびポリヌクレオチド
本願において開示されているクローンおよび蛋白の各々についてのヌクレオチ
ドおよびアミノ酸配列を以下に報告する。いくつかの例において、配列は仮のも
のであり、いくつかの不正確または不明確な塩基またはアミノ酸を含んでいるか
もしれない。既知方法により寄託クローンの配列決定を行うことにより各クロー
ンの実際のヌクレオチド配列を容易に決定することができる。次いで、推定アミ
ノ酸配列(全長ならびに成熟の両方)をかかるヌクレオチド配列から決定するこ
とができる。適当な宿主細胞中でクローンを発現させ、蛋白を集め、次いで、そ
の配列を決定することにより、個々のクローンによりコードされる蛋白のアミノ
酸配列も決定することができる。開示されている各蛋白について、出願人は、出
願時に利用可能な配列の情報を用いて最もよく同定できる読み枠であると決定さ
れたものを同定した。
本明細書の用語「分泌」蛋白は、適当な宿主細胞において発現された場合、膜
を通過して輸送されるものをいい、そのアミノ酸配列中のシグナル配列の結果と
しての輸送も含まれる。「分泌」蛋白は、発現される細胞から全体的に分泌され
る蛋白(例えば、可溶性蛋白)または部分的に分泌される蛋白(例えば、受容体
)を包含するが、これらに限らない。また「分泌」蛋白は、小胞体の膜を通過し
て輸送されるものを包含するが、これに限らない。
クローン「AX65 22」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「AX65 22」として同定された。A
X65 22は、成人精巣cDNAライブラリーから、分泌蛋白をコードするc
DNAに選択的な方法を用いて単離された。AX65 22は全長のクローン
であり、分泌蛋白(本明細書において「AX65 22蛋白」ともいう)の全コ
ーディング配列を含む。
今回決定されたAX65 22の5’部分のヌクレオチド配列を配列番号:1
に示す。現在出願人が、コーディング領域に対する正しい読み枠であると考える
ものを配列番号:2に示す。上記ヌクレオチド配列に対応するAX65 22蛋
白の推定アミノ酸配列を配列番号:2に示す。アミノ酸1から20までは推定リ
ーダー/シグナル配列であり、推定成熟アミノ酸配列はアミノ酸21から開始す
る。ポリAテイルを含む、AX65 22の3’部分由来のさらなるヌクレオチ
ド配列を配列番号:3に示す。
クローンAX65 22を含む寄託物から得られるEcoRI/NotI制限
フラグメントは約3500bpのはずである。
AX65 22に関する本明細書開示クレオチド配列を、BLASTA/BLASTXおよ
びFASTA検索プロトコールを用いてGenBankデータベースに対して検索した。デー
タベース中にヒットするものはなかった。クローン「BD335 14」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「BD335 14」として同定された。
BD335 14は、分泌蛋白をコードするcDNAに対して選択的な方法を用
いて、ヒト胎児腎臓cDNAライブラリーから単離され(米国特許第55366
37号参照)、あるいはコードされる蛋白のアミノ酸配列をコンピューター分析
することにより分泌蛋白または膜貫通蛋白をコードするものと同定された。BD
335 14は全長クローンであり、分泌蛋白(本明細書において「BD335
14蛋白」ともいう)の全コーディング配列を含む。
今回決定されたBD335 14のヌクレオチド配列を配列番号:56に示す
。現在出願人が、上記ヌクレオチド配列に対応する正しい読み枠およびBD33
5 14蛋白の推定アミノ酸配列と考えるものを配列番号:57に示す。
クローンBD335 14を含む寄託物から得られるEcoRI/NotI制
限フラグメントは約3000bpのはずである。
BLASTP検索プロトコールを用いてBD335 14に関する本明細書開示ヌク
レオチド配列をGenPetおよびGeneSeqアミノ酸配列データベースに対して検索し
た。推定されるBD335 14蛋白はU83511(APXL[Homo sapiens])に
対する少なくともある程度の相同性を示した。相同性に基づけば、BD335
14蛋白および相同性を有する各蛋白またはペプチドは少なくともある程度の活
性を共有している可能性がある。TopPredIIコンピュータープログラムにより、
3つの膜貫通ドメインがBD335 14蛋白配列中に存在する可能性が予想さ
れ、1つは配列番号:57のアミノ酸80を中心とし、もう1つは配列番号:5
7のアミノ酸320周辺にあり、さらにもう1つは配列番号:57のアミノ酸7
00周辺にあると予想された。クローン「BG241 1」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「BG241 1」として同定された。B
G241 1は、分泌蛋白をコードするcDNAに対して選択的な方法を用いて
成人脳cDNAライブラリーから単離された。BG241 1は全長クローンで
あり、分泌蛋白(本明細書において「BG241 1蛋白」ともいう)の全コー
ディング配列を含む。
今回決定されたBG241 1の5’部分のヌクレオチド配列を配列番号:8
に示す。今回決定されたBG241 1由来のさらなる内部ヌクレオチド配列を
配列番号:9に示す。現在出願人が、かかる内部配列によりコードされる正しい
読み枠および推定アミノ酸配列と考えるものを配列番号:10に示す。ポリAテ
イルを含む、BG241 1の3’部分のさらなるヌクレオチド配列を配列番号
:11に示す。
BG241 1に関する本明細書開示ヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXお
よびFASTA検索プロトコールを用いてGenBankデータベースに対して検索した。B
G241 1は、"zb27g08.r1 Soares parathyroid tumor NbHPA Homo sapiens"
(W38781,BlastN)として同定されたESTに対して少なくともある程度の同一性
を示した。同一性に基づけば、BG241 1蛋白および同一性を有する各蛋白
またはペプチドは少なくとある程度の活性を共有している可能性がある。BG2
41 1のアミノ酸配列は、それがベータートランスデュシン様蛋白(L28l25,B
lastX;T86738,BlastN)に対してある程度相同的である可能性を示す。クローン「BL187 4」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「BL187 4」として同定された。B
L187 4は、分泌蛋白をコードするcDNAに対して選択的な方法を用いて
成人精巣cDNAライブラリーから単離された。BL187 4は全長クローン
であり、分泌蛋白(本明細書において「BL187 4」ともいう)の全コーデ
ィング配列を含む。
今回決定されたBL187 4の5’部分のヌクレオチド配列を配列番号:1
2に示す。今回決定されたBL187 4由来のさらなる内部ヌクレオチド配列
を配列番号:13に示す。現在出願人が、かかる内部配列によりコードされる正
しい読み枠および推定アミノ酸配列と考えるものを配列番号:14に示す。ポリ
Aテイルを含む、BLI87 14の3’部分のさらなるヌクレオチド配列を配
列番号:15に示す。
BL341 4に関する本明細書開示ヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXお
よびFASTA検索プロトコールを用いてGenBankデータベースに対して検索した。B
L187 4は、"ESTOO10 Homo sapiens cDNA clone HTN-6-15"(H48938,Fasta
)として同定されたESTに対して少なくともある程度の同一性を示した。同一
性に基づけば、BL187 4蛋白および同一性を有する各蛋白またはペプチド
は少なくともある程度の活性を共有している可能性がある。
クローン「BL249 18」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「BL249 18」として同定された。
BL249 18は、成人精巣cDNAライブラリーから、分泌蛋白をコードす
るcDNAに選択的な方法を用いて単離された。BL249 18は全長のクロ
ーンであり、分泌蛋白(本明細書において「BL149 18蛋白」ともいう)
の
全コーディング配列を含む。
今回決定されたBL249 18の5’部分のヌクレオチド配列を配列番号:
16に示す。現在出願人が、コーディング領域の対する正しい読み枠であると考
えるものを配列番号:17に示す。上記ヌクレオチド配列に対応するBL249
18蛋白の推定アミノ酸配列を配列番号:17に示す。アミノ酸1から43ま
では推定リーダー/シグナル配列であり、推定成熟アミノ酸配列はアミノ酸44
から開始する。ポリAテイルを含む、BL249 18の3’部分のさらなるヌ
クレオチド配列を配列番号:18に示す。
BL249 18に関する本明細書開示クレオチド配列を、BLASTA/BLASTXお
よびFASTA検索プロトコールを用いてGenBankデータベースに対して検索した。B
L249 18は、"yj20a05.s1 Homo sapiens cDNA clone 149264 3'"(R82633
,BlastN)に対して少なくともある程度の同一性を示した。同一性に基づけば、
BL249 18蛋白および同一性を有する各蛋白またはペプチドは少なくとも
ある程度の活性を共有している可能性がある。クローン「BO71 1」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「BO71 1」として同定された。BO
71 1は、分泌蛋白をコードするcDNAに対して選択的な方法を用いて成人
網膜cDNAライブラリーから単離された。BO71 1は全長クローンであり
、分泌蛋白(本明細書において「BO71 1蛋白」ともいう)の全コーディン
グ配列を含む。
今回決定されたBO71 1の5’部分のヌクレオチド配列を配列番号:19
に示す。今回決定されたBO71 1由来のさらなる内部ヌクレオチド配列を配
列番号:20に示す。現在出願人が、かかる内部配列によりコードされる正しい
読み枠および推定アミノ酸配列であると考えているものを配列番号:21に示す
。ポリAテイルを含む、BO71 1の3’部分由来のさらなるヌクレオチド配
列を配列番号:22に示す。
BO71 1に関する本明細書開示ヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXおよ
びFASTA検索プロトコールを用いてGenBankデータベースに対して検索した。デー
タベース中にヒットするものはなかった。ヌクレオチド配列は、主要星状細胞リ
ン蛋白PEA−15(X86809,Fasta)に対してある程度の弱い相同性を示す。クローン「BO365 2」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「BO365 2」として同定された。B
O365 2は、分泌蛋白をコードするcDNAに対して選択的な方法を用いて
、ヒト網膜cDNAラィブラリーから単離された。BO365 2は全長クロー
ンであり、分泌蛋白(本明細書において「BO365 2蛋白」ともいう)の全
コーディング配列を含む。
今回決定されたBO365 2の5’部分のヌクレオチド配列を配列番号:2
3に示す。今回決定されたBO365 2由来のさらなる内部ヌクレオチド配列
を配列番号:24に示す。現在出願人が、かかる内部配列によりコードされる正
しい読み枠および推定アミノ酸配列であると考えるものを配列番号:25に示す
。配列番号:25のアミノ酸1から24までは推定リーダー/シグナル配列であ
り、推定成熟アミノ酸配列はアミノ酸25から開始する。ポリAテイルを含む、
BO365 2の3’部分由来のさらなるヌクレオチド配列を配列番号:22に
示す。
クローンBO365 2を含む寄託クローンから得ることのできるEcoRI
/NotI制限フラグメントは約2800bpのはずである。
BO365 2に関する本明細書開示ヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXお
よびFASTA検索プロトコールを用いてGenBankデータベースに対して検索した。デ
ータベース中にヒットするものはなかった。クローン「BV51 1」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「BV51 1」として同定された。BV
51 1は、分泌蛋白をコードするcDNAに対して選択的な方法を用いて成人
脳cDNAライブラリーから単離された。BV51 1は全長クローンであ
り、分泌蛋白(本明細書において「BV51 1蛋白」ともいう)の全コーディ
ング配列を含む。
今回決定されたBV51 1の5’部分のヌクレオチド配列を配列番号:27
に示す。現在出願人が、コーディング領域に対する正しい読み枠であると考える
ものを配列番号:28に示す。上記ヌクレオチド配列に対応するBV51 1蛋
白の推定アミノ酸配列を配列番号:28に示す。ポリAテイルを含む、BV51
1の3’部分由来のさらなるヌクレオチド配列を配列番号:29に示す。
クローンBV51 1を含む寄託クローンから得ることのできるEcoRI/
NotI制限フラグメントは約970bpのはずである。
BV51 1に関する本明細書開示ヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXおよ
びFASTA検索プロトコールを用いてGenBankデータベースに対して検索した。デー
タベース中にヒットするものはなかった。クローン「BV140 3」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「BV140 3」として同定された。B
V140 3は、分泌蛋白をコードするcDNAに対して選択的な方法を用いて
成人脳cDNAライブラリーから単離された。BV140 3は全長クローンで
あり、分泌蛋白(本明細書において「BV140 3蛋白」ともいう)の全コー
ディング配列を含む。
今回決定されたBV140 3の5’部分のヌクレオチド配列を配列番号:3
0に示す。今回決定されたBV140 3由来のさらなる内部ヌクレオチド配列
を配列番号:31に示す。現在出願人が、かかる内部配列によりコードされる正
しい読み枠および推定アミノ酸配列であると考えるものを配列番号:32に示す
。ポリAテイルを含む、BV140 3の3’部分由来のさらなるヌクレオチド
配列を配列番号:33に示す。
クローンBV140 3を含む寄託物から得られるEcoRI/Notl制限
フラグメントは約3500bpのはずである。
BV140 3に関する本明細書開示ヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXお
よびFASTA検索プロトコールを用いてGenBankデータベースに対して検索した。B
V140 3は、"ye33g08.r1 Homo sapiens cDNA clone 119582 5'"(T94057,B
lastN)として同定されたESTに対して少なくともある程度の同一性を示した。
同一性に基づけば、BV140 3蛋白および同一性を有する各蛋白またはペプ
チドは少なくともある程度の活性を共有している可能性がある。クローン「BV141 2」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「BV141 2」として同定された。B
V141 2は、分泌蛋白をコードするcDNAに対して選択的な方法を用いて
成人脳cDNAライブラリーから単離された。BV141 2は全長クローンで
あり、分泌蛋白(本明細書において「BV141 2蛋白」ともいう)の全コー
ディング配列を含む。
今回決定されたBV141 2の5’部分のヌクレオチド配列を配列番号:3
4に示す。現在出願人が、コーディング領域に対する正しい読み枠であると考え
るものを配列番号:35に示す。上記ヌクレオチド配列に対応するBV141
2蛋白の推定アミノ酸配列を配列番号:35に示す。ポリAテイルを含む、BV
141 2の3’部分由来のさらなるヌクレオチド配列を配列番号:36に示す
。
クローンBV141 2を含む寄託物から得られるEcoRI/NotI制限
フラグメントは約1100bpのはずである。
BV141 2に関する本明細書開示ヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXお
よびFASTA検索プロトコールを用いてGenBankデータベースに対して検索した。デ
ータベース中にヒットするものはなかった。クローン「CC184 4」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「CC194 4」として同定された。C
C194 4は、分泌蛋白をコードするcDNAに対して選択的な方法を用いて
成人脳cDNAライブラリーから単離された。CC184 4は全長クローン
であり、分泌蛋白(本明細書において「CC194 4蛋白」ともいう)の全コ
ーディング配列を含む。
今回決定されたCC194 4の5’部分のヌクレオチド配列を配列番号:3
7に示す。現在出願人が、コーディング領域に対する正しい読み枠である考える
ものを配列番号:38に示す。上記ヌクレオチド配列に対応するCC194 4
蛋白の推定アミノ酸配列を配列番号:38に示す。ポリAテイルを含む、CC1
94 4の3’部分由来のさらなるヌクレオチド配列を配列番号:39に示す。
クローンCC194 4を含む寄託物から得られるEcoRI/NotI制限
フラグメントは約3300bpのはずである。
CC194 4に関する本明細書開示ヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXお
よびFASTA検索プロトコールを用いてGenBankデータベースに対して検索した。C
C194 4は"ym0h08.s1 Homo sapiens cDNA clone 477813 3'"(H11476,Bla
stN)および"mc99a01.r1 Soares mouse embryo NbME13.5 14.5 Mus musculus”
(W54544,BlastN)として同定された配列に対して少なくともある程度の同一性
を示した。同一性に基づけば、CC194 4蛋白および同一性を有する各蛋白
またはペプチドは少なくともある程度の活性を共有している可能性がある。クローン「DA136 11」
本発明ポリヌクレオチドはクローン「DA136 11」として同定された。
DA136 11は、分泌蛋白をコードするcDNAに対して選択的な方法を用
いて成人胎盤cDNAライブラリーから単離された。DA136 11は全長ク
ローンであり、分泌蛋白(本明細書において「DA136 11蛋白」ともいう
)の全コーディング配列を含む。
今回決定されたDA136 11の5’部分のヌクレオチド配列を配列番号:
40に示す。今回決定されたDA136 11由来のさらなる内部ヌクレオチド
配列を配列番号:41に示す。現在出願人が、かかる内部配列によりコードされ
る正しい読み枠および推定アミノ酸配列であると考えるものを配列番号:42に
示す。ポリAテイルを含む、DA136 11の3’部分由来のさらなるヌクレ
オチド配列を配列番号:43に示す。
クローンDA136 11を含む寄託物から得られるEcoRI/NotI制
限フラグメントは約3800bpのはずである。
DA136 11に関する本明細書開示ヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTX
およびFASTA検索プロトコールを用いてGenBankデータベースに対して検索した。
DA136 11は、"yh11b12.s1 Homo sapiens cDNA clone 42891 3'"(R59925
,BlastN)として同定されたESTに対して少なくともある程度の同一性を示し
た。同一性に基づけば、DA136 11蛋白および同一性を有する各蛋白また
はペプチドは少なくともある程度の活性を共有している可能性がある。
クローンの寄託
クローンAX65 22、BD335 14、BG241 1、BL187
4、BL249 18、BO71 1、BO365 2、BV51 1、BV1
40 3、BV141 2、CC194 4、およびDA136 11は、19
96年10月3日にAmerican Type Culture Collectionに受託番号ATCC98
196として寄託され、そこから該クローンが入手可能である。寄託物について
の公衆の利用に対する制限は、37C.F.R.§1.808(b)の規定に関
する場合を除き、特許の交付により除去されるであろう。各クローンはこの複合
体寄託物として別々の細菌細胞(E.coli)中にトランスフェクションされた。
EcoRI/NotI消化(5’部位、EcoRI;3’部位、NotI)を
行い、かかるクローンについて適当な大きさのフラグメントを得ることにより、
各クローンを寄託されているベクターから取ることができる。各クローンを、図
1に示すpED6またはpNotSベクターのいずれかに入れて寄託した。いく
つかの場合、寄託クローンは寄託単離物中で「フリップ」した(すなわち、逆方
向となった)。このような場合であってもやはり、EcoRIおよびNotI消
化によりcDNAインサートを単離できる。しかしながら、その場合、適当なベ
クター中での発現のために正しい方向でcDNAを配置するために、NotIは
5’部位を生成し、EcoRIは3’部位を生成するであろう。cDNAが寄託
されているベクターからcDNAを発現させてもよい。
特定のクローンを含む細菌細胞を、次のようにして複合体寄託物から得ること
ができる:
特定のクローンとして知られる配列になるよう、オリゴヌクレオチドプローブ
またはプローブを設計すべきである。この配列は本明細書中の配列、またはそれ
らの配列の組み合わせから誘導することができる。各全長クローンを単離するの
に用いられたォリゴヌクレオチドプローブの配列を以下に示し、それらは目的ク
ローンの単離において最も信頼できるものである。クローン プローブ配列
AX65 22 配列番号:44
BD355 14 配列番号:45
BG241 1 配列番号:46
BL187 4 配列番号:47
BL249 18 配列番号:48
BO71 1 配列番号:49
BO365 2 配列番号:50
BV51 1 配列番号:51
BV140 3 配列番号:52
BV141 2 配列番号:53
CC194 4 配列番号:54
DA136 11 配列番号:55
位置2にNを含む上記配列において、その位置は、好ましいプローブ/プライ
マーにおいては一のヌクレオチド(例えば、ビオチン・ホスホラミダイト(1−
ジメトキシトリチロキシ−2−(N−ビオチニル−4−アミノブチル)−プロピ
ル−3−O−(2−シアノエチル)−(N,N−ジイソプロピル)−ホスホラマ
ダイト)(Glen Research、cat.no.10‐1953))を用いることで得られるも
の)よりもむしろビオチニル化ホスホラミダイト残基により占められている。
好ましくは、オリゴヌクレオチドプローブの設計はこれらのパラメーターに従
うべきである:
(a)もしあったとしても、不明確な塩基(N)が最少である配列の領域とな
るように設計すべきである;
(b)Tmが約80℃(それぞれ、AまたはTについては2℃、GまたはCに
ついては4℃と仮定)となるように設計すべきである。
好ましくは、オリゴヌクレオチド標識に広く用いられる方法を用い、T4ポリ
ヌクレオチドキナーゼを用いてオリゴヌクレオチドをg−32P−ATP(比活性
6000Ci/ミリモル)で標識すべきである。他の標識方法を用いることもで
きる。好ましくは、取り込まれなかった標識をゲル濾過クロマトグラフィーまた
は他の確立されている方法により除去すべきである。プローブ中に取り込まれた
放射活性量をシンチレーションカウンターで測定することにより定量すべきであ
る。好ましくは、得られたプローブの比活性は約4e+6dpm/ピコモルであ
るはずである。
好ましくは、全長クローンのプールを含む細菌培養物を融解し、100μlの
ストックを100μg/mlのアンピシリンを含有する25mlの滅菌Lブロス
を入れた滅菌培養フラスコへの接種に用いるべきである。好ましくは、培養物を
37℃で増殖させて飽和状態とすべきであり、好ましくは、飽和培養物を新鮮L
ブロスで希釈すべきである。好ましくは、これらの希釈物の一部をプレーティン
グして、150mmのペトリ皿中の100μg/mlのアンピシリンおよび1.
5%の寒天を含有するLブロスを含む固体細菌用培地上で37℃で一晩増殖させ
た場合に約5000個の明確な、しかもよく分離したコロニーが生じる希釈率お
よび体積を決定すべきである。明確な、しかもよく分離したコロニーを得るため
の他の既知方法を用いることもできる。
次いで、標準的なコロニーハイブリダイゼーション法を用いてコロニーをニト
ロセルロースフィルターに移し、溶解、変性、次いで、焼き付けを行うべきであ
る。
次いで、好ましくは、0.5%SDS、100μg/mlの酵母RNAおよび
10mM EDTAを含有する6X SSC(20Xストックは175.3gNa
Cl/リットル、88.2gクエン酸ナトリウム/リットル、NaOHでpH7
.0とする)(150mmフィルター1枚あたり約10ml)中で穏やかに撹拌
しながら65℃で1時間,該フィルターをインキュベーションする。ついで、好
ましくはプローブをハイブリダイゼーション混合物に添加して濃度が1e+6d
pm/ml以上となるようにする。ついで、65℃で穏やかに攪拌しながら一夜
インキュベーションするのが好ましい。ついで、好ましくはフィルターを室温に
おいて撹拌せずに500mlの2X SSC/0.5%SDSで洗浄し、好ましく
はつづいて、室温において穏やかに振盪しながら500mlの2X SSC/0
.1%SDSで15分間洗浄する。第3の洗浄は65℃で30分ないし1時間、
0.1X SSC/0.5%SDSで行うのが最適である。次いで、好ましくは
フィルターを乾燥し、十分な時間オートラジオグラフィーに供して陽性物をX線
フィルム上で可視化させる。他の既知ハイブリダイゼーション方法を用いること
もできる。
陽性コロニーを拾い、培地中で増殖させ、次いで、標準的操作を用いてプラス
ミドDNAを単離する。次いで、制限分析、ハイブリダイゼーション分析または
DNA配列決定によりクローンを証明することができる。
生物学的活性を示すことのできる本発明蛋白のフラグメントも本発明に含まれ
る。蛋白のフラグメントは直鎖状であってもよく、あるいは例えばH.U.Saragovi
,etal.,Bio/Technology 10,773-778(1992)およびR.S.McDowell,et al.,J.Amer.C
hem.Soc.114,9245-9253(1992)(参照により両文献を本明細書に記載されている
ものとみなす)に記載されたような既知方法を用いて環化させてもよい。多くの
目的(蛋白結合部位の結合手を増加させることを含む)のために、かかるフラグ
メントを免疫グロブリンなどのキャリヤ分子に融合させてもよい。例えば、蛋白
のフラグメントを「リンカー」配列を介して免疫グロブリンのFc部分に融合さ
せてもよい。2価形態の蛋白については、かかる融合をIgG分子のFc部分に
対して行うことができる。他の免疫グロブリンイソタイプを用いてかかる融
合を行ってもよい。例えば、蛋白−IgM融合により、10価形態の本発明の蛋
白が生じるであろう。
また本発明は全長および成熟形態の開示蛋白を提供する。かかる蛋白の全長形
態は、開示クローンのヌクレオチド配列の翻訳により配列表において同定されて
いる。かかる蛋白の成熟形態を、適当な哺乳動物細胞または他の宿主細胞におい
て開示の全長ポリヌクレオチド(好ましくは、ATCCに寄託されたもの)を発
現させることにより得てもよい。蛋白の成熟形態の配列を全長形態のアミノ酸配
列から決定してもよい。
また本発明は、本明細書に開示のcDNA配列に対応する遺伝子を提供する。
「対応する遺伝子」は、cDNA配列が由来するmRNAを生じるように転写さ
れたゲノムの領域ならびに遺伝子発現調節に必要なゲノムの連続領域であり、コ
ーディング配列、5’および3’非翻訳領域、あるいはまた、スプライシングさ
れたエキソン、イントロン、プロモーター、エンハンサー、およびサイレンサー
またはサプレッサーエレメントを包含するがこれらに限らない。対応する遺伝子
は本明細書に開示の配列情報を用いて既知方法により単離できる。かかる方法は
、適当なゲノムライブラリーまたは他のゲノム材供給源にある遺伝子の同定およ
び/または増幅のために開示されている配列情報よりプローブまたはプライマー
を調製すること、および/または適当なゲノムライブラリーまたは他のゲノム材
料の供給源中にある遺伝子の増幅を包含する。
本発明の蛋白が膜結合されている場合(例えば、受容体である場合)、本発明
はかかる蛋白の可溶性形態も提供する。かかる形態において、蛋白の細胞内およ
び膜貫通ドメインの一部または全体を欠失させて、蛋白がそれが発現された細胞
から十分に分泌されるようにする。本発明の蛋白の細胞内および膜貫通ドメイン
を、配列情報からかかるドメインを決定するための既知手法により同定すること
ができる。
本発明蛋白および蛋白フラグメントは、開示蛋白のアミノ酸配列の少なくとも
25%(より好ましくは少なくとも50%、最も好ましくは少なくとも75%)
の長さのアミノ酸配列を有し、開示蛋白に対して少なくとも60%の配列同一性
(より好ましくは少なくとも75%の同一性、最も好ましくは少なくとも90%
または95%の同一性)を有する蛋白を包含する。配列同一性は、配列のギャッ
プを最小にしつつ、重複および同一性を最大にするように配列を並置した場合に
蛋白のアミノ酸配列を比較することにより決定される。いずれの開示蛋白のセグ
メントに対しても少なくとも75%の配列同一性(より好ましくは、少なくとも
85%の同一性、最も好ましくは少なくとも95%の同一性)を有する、好まし
くは8個またはそれ以上(より好ましくは20個またはそれ以上、最も好ましく
は30個またはそれ以上)の連続したアミノ酸を含む蛋白または蛋白フラグメン
トも本発明に包含される。
開示ポリヌクレオチドおよび蛋白の種相同体も、本発明により提供される。本
明細書に示す配列から適当なプローブまたはプライマーを作成し、次いで、所望
種由来の適当な核酸源をスクリーニングすることにより種相同体を単離し同定し
てもよい。
また本発明は、開示ポリヌクレオチドの対立遺伝子変種、すなわち、本発明ポ
リヌクレオチドによりコードされている蛋白と同一、相同的またはこれに関連し
た蛋白をコードする単離ポリヌクレオチドの自然発生的別形態を包含する。
また本発明は、本明細書開示ポリヌクレオチドの配列に相捕的な配列を有する
ポリヌクレオチドも包含する。
また本発明は、厳密さを減じた条件下で、より好ましくは厳密な条件下で、最
も好ましくは非常に厳密な条件下で、本明細書記載のポリヌクレオチドにハイブ
リダイゼーションしうるポリヌクレオチドも包含する。厳密さの条件の例を下表
に示す。非常に厳密な条件は、例えば、少なくとも条件A〜Fと同程度に厳密で
あり、厳密な条件は、例えば、少なくとも条件G〜Lと同程度に厳密であり、厳
密さを減じた条件は、例えば、少なくとも条件M〜Rと同程度に厳密である。
‡:ハイブリッド長さは、ハイブリダイゼーションしているポリヌクレオチドの
ハイブリッドしている領域(複数も可)に関して予想される長さである。ポリヌ
クレオチドを未知配列の標的ポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションさせる
場合、ハイブリッド長さは、ハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドの長
さと仮定する。既知配列のポリヌクレオチドがハイブリダイゼーションする場合
、ポリヌクレオチド配列を並置し、最適な配列相補性の領域(複数も可)を同定
することによりハイブリッド長さを決定することができる。†
:ハイブリダイゼーションおよび洗浄バッファーにおいてSSPE(1XSS
PEは0.15M NaCl、10mM NaH2PO4、および1.25mM ED
TA,pH7.4である)をSSC(1XSSCは0.15M NaClおよび1
5mMクエン酸ナトリウムである)に置き換えることができる。ハイブリダイゼ
ーション完了後、洗浄を15分間行う。
*TB−TR:長さ50塩基対よりも短いと予想されるハイブリッドについてのハ
イブリダイゼーション温度は、ハイブリッドの融解温度(Tm)よりも5〜10
℃低くすべきである。下記等式によりTmが決定される。長さ18塩基対未満の
ハイブリッドについては、Tm(℃)=2(# of A+T bases)+4(# of G+C bases)。長さ
18ないし49塩基対のハイブリッドについては、Tm(℃)=81.5+16.6(log10[Na+
])+0.41(%G+C)‐(600/N)であり、Nはハイブリッドの塩基数であり、ハイブリダ
イゼーションバッファー中のナトリウムイオン濃度である(1XSSCについて
の[Na+]=0.165M)。
ポリヌクレオチドハイブリダイゼーションのための厳密さの条件のさらなる例
はSambrook,J.,E.F.Fritsch,and T.Maniatis,1989,Molecular Cloning:A
Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Har
bor,NY,chapters 9 and 11,and Current Protocols in Molecular Biology,
1995,F.M.Ausubel et al.,eds.,John Wiley & Sons,Inc.,sections 2.10
and 6.3-6.4に記載されており、参照により本明細書に記載されているものとみ
なす。
好ましくは、かかるハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドのそれぞれ
が、ハイブリダイゼーションすべき本発明ポリヌクレオチドの少なくとも25%
(より好ましくは、少なくとも50%、最も好ましくは、少なくとも75%)の
長さを有し、ハイブリダイゼーションすべき本発明ポリヌクレオチドに対して少
なくとも60%の配列同一性(より好ましくは、少なくとも75%の同一性、最
も好ましくは、少なくとも90%または95%の同一性)を有する。配列同一性
は、配列のギャップを最小にしつつ、重複および同一性を最大にするように配列
を並置した場合に蛋白のアミノ酸配列を比較することにより決定される。
本発明単離ポリヌクレオチドを、Kaufman et al.,Nucleic Acids Res.19,4
485-4490(1991)に開示のpMT2またはpED発現ベクターのごとき発現制御配
列に作動可能に連結して、蛋白を組み換え的に製造してもよい。組み換え蛋白の
発現方法も知られており、R.Kaufman,Methods in Enzymology 185,537-566(1
990)において説明されている。多くの適当な発現制御配列が当該分野において知
られている。ここで定義する「作動可能に連結」とは、本発明単離ポリヌクレオ
チドおよび発現制御配列がベクターまたは細胞中に置かれ、連結されたポリヌク
レオチド/発現制御配列で形質転換(トランスフェクション)された宿主細胞に
より発現されるようになっていることを意味する。
多くのタイプの細胞は本発明蛋白の発現に適した宿主細胞として作用しうる。
哺乳動物細胞は、例えば、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣(CH
O)細胞、ヒト腎臓293細胞、ヒト表皮A431細胞、ヒトColo205細
胞、3T3細胞、CV−1細胞、他の形質転換された霊長類細胞系、正常2倍体
細胞、一次組織のインビトロ培養から得られる細胞株、一次エクスプラント、H
eLa細胞、マウス細胞、BHK、HL−60、U937HaKまたはJurkat細
胞を包含する。
別法として、酵母のごとき下等真核細胞または細菌のごとき原核細胞において
蛋白を製造することが可能である。潜在的に適当な酵母株は、Saccharomyces ce
revisiae、Schizosaccharomyces pombe、Kluyveromyces株、Candida、または異
種蛋白を発現可能な酵母株を包含する。潜在的に適当な細菌株は、Escherichia
coli、Bacillus subtilis、Salmonella typhimurium、または異種蛋白を発現可
能な細菌株を包含する。蛋白が酵母または細菌において生成される場合、その中
で生成された蛋白を、例えば適当部位のリン酸化またはグリコシレーションによ
り修飾して機能的蛋白を得る必要があるかもしれない。既知化学的または酵素的
方法を用いてかかる共有結合を行ってもよい。
本発明単離ポリヌクレオチドを1種またはそれ以上の昆虫発現ベクター中の適
当な制御配列に作動可能に連結し、昆虫発現系を用いることにより蛋白を得ても
よい。バキュロウイルス/昆虫細胞発現系のための材料および方法は、例えば
Invitrogen,San Diego,California,USAからのキット形態(MaxBacRキット)
で市販されており、かかる方法は当該分野においてよく知られており、Summers
およびSmith,Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No.1555(198
7)(参照により本明細書に記載されているものとみなす)に記載のようなものが
ある。本明細書で用いるように、本発明ポリヌクレオチドを発現可能な昆虫細胞
は「形質転換」されている。
組み換え蛋白の発現に適した培養条件下で形質転換宿主細胞を培養することに
より本発明蛋白を製造してもよい。次いで、得られた発現蛋白を、ゲル濾過およ
びイオン交換クロマトグラフィーのごとき既知精製プロセスを用いてかかる培養
物(すなわち、培地または細胞抽出物)から精製してもよい。また、蛋白の精製
は、蛋白に結合するであろう作用剤を含有するアフィニティ一カラム;コンカナ
バリンA−アガロース、ヘパリン−トヨパールRまたはCibacrom blue 3GAセファ
ロースRのごときアフィニティーカラムによる1またはそれ以上のカラム工程;
フェニルェーテル、ブチルエーテル、またはプロピルエーテルのごとき樹脂を用
いる疎水性相互作用クロマトグラフィーを用いる1またはそれ以上の工程;ある
いは免疫アフィニティークロマトグラフィーを包含する。
別法として、本発明蛋白を精製容易形態として発現させてもよい。例えば、マ
ルトース結合蛋白(MBP)、グルタチオン−S−トンスフェラーゼ(GST)
またはチオレドキシン(TRX)との融合蛋白のごとき融合蛋白として発現させ
てもよい。かかる融合蛋白の発現および精製のためのキットは、それぞれNew En
glan BioLab(Beverly,MA)、Pharmacia(Piscataway,NJ)およびInVitrogenから
市販されている。蛋白にエピトープでタグを付し、次いで、かかるエピトープに
指向された特異的抗体を用いることにより精製することもできる。1のかかるエ
ピトープ(「フラッグ」)はKodak(New Haeven,CT)から市販されている。
最後に、疎水性RP−HPLC媒体、例えば懸垂メチルまたは他の脂肪族基を
有するシリカゲルを用いる1またはそれ以上の逆相高品質液体クロマトグラフィ
ー(RP−PLC)工程を用いてさらに蛋白を精製することができる。いくつか
またはすべての上記精製工程を種々組み合わせて用いて実質的に均一な単離組み
換
え蛋白を得ることもできる。かくして精製された蛋白は他の哺乳動物蛋白を実質
的に含まず、本発明において「単離蛋白」と定義される。
本発明蛋白をトランスジェニック動物の生産物として、例えば、蛋白をコード
しているヌクレオチド配列を含む体細胞または生殖細胞により特徴づけられるト
ランスジェニックウシ、ヤギ、ブタ、またはヒツジの乳の成分として発現させて
もよい。
既知の慣用的化学合成により蛋白を製造してもよい。合成的手段による本発明
蛋白の構築方法は当業者に知られている。合成的に構築された蛋白配列は、一次
、二次または三次構造および/またはコンホーメーション特性を共有することに
よって、蛋白活性をはじめとする共通の生物学的特性を有する可能性がある。よ
って、それらを、治療化合物のスクリーニングおよび抗体の生成のための免疫学
的プロセスにおいて、天然の精製蛋白の生物学的活性または免疫学的置換物とし
て使用してもよい。
本明細書に示す蛋白は、精製蛋白のアミノ酸配列に類似したアミノ酸配列によ
り特徴づけられるが、その中に自然にあるいは誘導体化によって修飾されていて
もよい。例えば、ペプチドまたはDNA配列の修飾は既知方法を用いて当業者に
より行われうる。蛋白配列中の目的とされる修飾は、コーディング配列中の選択
アミノ酸残基の変化、置換、交換、挿入または欠失を包含する。例えば、1個ま
たはそれ以上のシステイン残基を欠失させ、あるいは別のアミノ酸と交換して分
子のコンホーメーションを変化させてもよい。かかる変化、置換、交換、挿入ま
たは欠失のための方法は当業者によく知られている(例えば、米国特許第415
8584号参照)。好ましくは、かかる変化、置換、交換、挿入または欠失は蛋
白の所望活性を保持するものである。
全体的または部分的に蛋白活性を保持すると期待され、かくしてスクリーニン
グまたは他の免疫学的方法に有用でありうる蛋白配列の他のフラグメントおよび
誘導体も、本明細書の開示から当業者により作成されうる。かかる修飾は本発明
により包含されると確信される。用途および生物学的活性
本発明ポリヌクレオチドおよび蛋白は、下記の1またはそれ以上の用途または
生物学的活性(本明細書に引用されたアッセイに関連するものも含む)を示すと
考えられる。本発明蛋白に関して説明された用途または活性は、かかる蛋白の投
与または使用により、あるいはかかる蛋白をコードしているポリヌクレオチドの
投与または使用(例えば、遺伝子治療またはDNA導入に適したベクターのごと
き)により提供されうる。研究用途および有用性
本発明により提供されるポリヌクレオチドは、研究集団によって種々の目的に
使用されうる。分析用に、特徴づけまたは治療用途に、対応蛋白が優先的に発現
される(構成的に、または組織分化もしくは発達の特定段階において、または疾
病状態において発現される)組織のマーカーとして、さらにはサザンゲルの分子
量マーカーとして、染色体の同定または関連遺伝子位置のマッピングのための染
色体マーカーまたはタグとして(標識された場合)、患者の内在性DNAと比較
して潜在的な遺伝病の同定を行うために、ハイブリダイゼーションするプローブ
として用いて新規な関連DNA配列を発見するために、遺伝学的フィンガープリ
ンティングのためのPCRプライマーを得るための情報源として、他の新規ポリ
ヌクレオチドを発見するプロセスにおいて既知配列を差し引くためのプローブと
して、「遺伝子チップ」または他の支持体に結合させるためにオリゴマーを選択
し作成するために、発現パターンの試験のために、DNA免疫法を用いて抗蛋白
抗体を生成させるために、ならびに抗DNA抗体を生成させ、あるいはさらなる
免疫応答を誘導するための抗原として、ポリヌクレオチドを使用することができ
る。別の蛋白に結合または潜在的に結合(例えば、受容体−リガンド相互作用に
おけるように)する蛋白をコードしている場合、結合する他の蛋白を同定し、あ
るいは、または結合相互作用の阻害剤を同定するための相互作用トラップアッセ
イ(例えば、Gyuris et al.,Cell 75:791-803(1993)に記載されたような)にお
いてポリヌクレオチドを使用することができる。
本発明により提供される蛋白は、高処理量スクリーニングのための一群の多数
の蛋白を含む、生物学的活性を決定するためのアッセイに;抗体の生成または他
の免疫応答を誘導するために;生物学的液体中の蛋白(またはその受容体)のレ
ベルを定量的に決定するために設計されたアッセイにおける試薬(標識試薬を包
含)として;対応蛋白が優先的に発現される(構成的に、または組織分化もしく
は発達の特定段階において、または疾病状態において発現される)組織のマーカ
ーとして;ならびに、もちろん関連受容体またはリガンドを単離するために用い
てもよい。蛋白がもう1つの蛋白に結合または潜在的に結合する場合、結合する
他の蛋白を同定し、あるいは、または結合相互作用の阻害剤を同定するために蛋
白を使用することができる。これらの結合相互作用に関与する蛋白を用いて、結
合相互作用に関するペプチドまたは小型分子状阻害剤またはアゴニストのスクリ
ーニングを行うこともできる。
これらの研究用途のいずれかまたはすべては、研究用製品として商品化するた
めに試薬グレードまたはキットのフォーマットへと発展させることができる。
上記使用を実行するための方法は当業者によく知られている。かかる方法を開
示する文献は、"Molecular Cloning:A Laboratory Manual",2nd ed.,Cold Spr
ing Harbor Laboratory Press,Sambrook,J.,E.F.Fritsch and T.Maniatis
eds.,1989,および"Methods in Enzymology:Guide to Molecular Cloning Techn
iques",Academic Press,Berger,S.L.and A.R.Kimmel eds.,1987を包含す
るが、これらに限らない。
栄養としての用途
本発明ポリヌクレオチドおよび蛋白を栄養源または添加物として使用すること
ができる。かかる用途は、蛋白またはアミノ酸添加物としての用途、炭素源とし
ての用途、窒素源としての用途および炭水化物源としての用途を包含するが、こ
れらに限らない。かかる場合、本発明蛋白またはポリヌクレオチドを特定の生物
のエサとして添加してもよく、あるいは粉末、ピル、溶液、懸濁液またはカプセ
ルの形態のごとき別個の個体または液体調合物として投与することもできる。微
生物の場合、微生物が培養される培地に本発明蛋白またはポリヌクレオチドを添
加することができる。
サイトカインおよび細胞増殖/分化活性
本発明蛋白はサイトカイン活性、細胞増殖活性(誘導もしくは阻害)または細
胞分化活性(誘導もしくは阻害)を示しうるか、またはある種の細胞集団におい
て他のサイトカインの産生を誘導しうる。今日まで見いだされてきた多くの蛋白
性因子(すべての既知サイトカインを包含)は、1またはそれ以上の因子依存的
細胞増殖アッセイにおいて活性を示しており、よって、アッセイはサイトカイン
活性の便利な確認法として役立つ。本発明蛋白の活性は、細胞系(32D、DA
2、DA1G、T10、B9、B9/11、BaF3、MC9/G、M+(pr
eB M+)、2E8、RB5、DA1、123、T1165、HT2、CTL
L2、TF−1、Mo7eおよびCMKを包含するが、これらに限らない)のた
めの多くの常套的な因子依存的細胞増殖アッセイのいずれかにより確認される。
本発明蛋白の活性を、とりわけ、下記方法により測定してもよい:
T細胞または胸腺細胞の増殖についてのアッセイは、Current Protocols in I
mmunology,Edby J.E.Coligan,A.M.Kruisbeek,D.H.Margulies,E.M.Shev
ach,W Strober,Pub.Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience
(Chapter 3,In Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19;Chapt
er 7,Immunologic studies in Humans);Takai et al.,J.Immunol.137:3494-
3500,1986;Bertagnolli et al.,J.Immunol.145:1706-1712,1990;Bertagnol
li et al.,Cellular Immunology 133:327-341,1991;Bertagnolli,et al.,J
.Immunol.149:3778-3783,1992;Bowman et al.,J.Immunol.152:1756-1761
,1994に記載されたものを包含するが、これらに限らない。
脾臓細胞、リンパ節細胞または胸腺細胞のサイトカイン生成および/または増
殖に関するアッセイは、Polyclonal T cell stimulation,Kruisbeek,A.M.and
Shevach,E.M.In Current Protocols in Immunology.J.E.e.a.Coligan eds
.Vol
1 pp.3.12.1-3.12.14,John Wiley and Sons,Toronto.1994;and Measurement
of mouse and human Interferon γ,Schreiber,R.D.In Current Protocols
in Immunology.J.E.e.a.Coligan eds.Vol 1 pp.6.8.1-6.8.8,John Wiley an
d Sons,Toronto.1994に記載されたものを包含するが、これらに限らない。
造血およびリンパ生成細胞の増殖および分化についてのアッセイは、Measurem
ent of Human and Murine Interleukin 2 and Interleukin 4,Bottomly,K.,D
avis,L.s.and Lipsky,P.E.In Current Protocols in Immunology.J.E.e.a
.Coligan eds.Vol 1 pp.6.3.1-6.3.12,John Wiley and Sons,Toronto.199
1;deVries et al.,J.Exp.Med.173:1205-1211,1991;Moreau et al.,Nature
336:690-692,1988;Greenberger et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80:
2931-2938,1983;Measurement of mouse and human interleukin 6-Nordan,R.
In Current Protocols in Immunology.J.E.e.a.Coligan eds.Vol 1 pp.6.6.
1-6.6.5,John Wiley and Sons,Toronto.1991;Smith et al.,Proc.Natl.Ac
ad.Sci.U.S.A.83:1857-1861,1986;Measurement of human Interleukin 11-B
ennett,F.,Giannotti,J.,Clark,S.C.and Turner,K.J.In Current Prot
ocols in Immunology.J.E.e.a.Coligan eds.Vol 1 pp.6.15.1 John Wiley a
nd Sons,Toronto.1991;Measurement of mouse and human Interleukin 9‐Cia
rletta,A.,Giannotti,J.,Clark,S.C.and Turner,K.J.In Current Proto
cols in Immunology.J.E.e.a.Coligan eds.Vol 1 pp.6.13.1,John Wiley a
nd Sons,Toronto.1991に記載されたものを包含するが、これらに限らない。
抗原に対するT細胞クローンの応答についてのアッセイ(特に、増殖およびサ
イトカイン産生を測定することによりAPC−T細胞相互作用ならびに直接的な
T細胞の効果を同定する)は、Current Protocols in Immunology,Ed by J.E
.Coligan,A.M.Kruisbeek,D.H.Margulies,E.M.Shevach,W Strober,Pub
.Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience(Chapter 3,In Vitr
o assays for Mouse Lymphocyte Function;Chapter 6,Cytokines and their ce
llular receptors;Chapter 7,Immunologic studies in Humans);Weinberger et
al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:6091-6095,1980;Weinberger et al.,E
ur.J.Immun.
11:405-411,1981;Takai et al.,J.Immunol.137:3494-3500,1986;Takai et
al.,J.Immunol.140:508-512,1988に記載されたものを包含するが、これらに
限らない。
免疫刺激または抑制活性
また本発明蛋白は、本明細書記載のアッセイにおける活性(これらに限らない
)を包含する免疫刺激または免疫抑制活性を示すものであってもよい。蛋白は、
種々の欠乏症および障害(重症の免疫欠乏合併症(SCID)を包含)において
有用である可能性があり、例えば、Tおよび/またはBリンパ球の増殖をアップ
レギュレーションまたはダウンレギュレーションすることにおいて、ならびにN
K細胞および他の細胞集団の細胞溶解活性を有効ならしめることにおいて有用で
ありうる。これらの免疫欠乏症は遺伝的なものであってもよく、またウイルス(
例えば、HIV)ならびに細菌または真菌感染により引き起こされるものであっ
てもよく、あるいは自己免疫疾患により引き起こされるものであってもよい。よ
り詳細には、ウイルス、細菌、真菌または他の感染物質により引き起こされる感
染性疾患、例えば、HIV、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、ミコバクテリア
、レシュマニア、マラリアおよびカンジダ種のごとき種々の真菌感染症を、本発
明蛋白を用いて治療可能である。もちろん、この点において、免疫系に対するブ
ーストが指示される場合、すなわち、癌の治療において、本発明蛋白を用いてよ
い。
本発明蛋白を用いて治療してもよい自己免疫疾患は、例えば、多発性硬化症、
全身性の深在性エリトマーデス、リューマチ性関節炎、自己免疫性肺炎、Guilla
in-Barre症候群、自己免疫性甲状腺炎、インスリン依存性糖尿病、重症筋無力症
、対宿主移植片疾患および自己免疫性の炎症性の目の疾患を包含する。本発明の
かかる蛋白を、喘息または他の呼吸器系の疾患のごときアレルギー性反応および
症状の治療に用いてもよい。免疫抑制が望まれる他の症状(例えば、喘息(特に
アレルギー性喘息)および関連呼吸器系の問題を包含)を本発明蛋白を用いて治
療してもよい。免疫抑制が望まれる他の状態(例えば、器官移植を包含)を、本
発明蛋白を用いて治療してもよい。
本発明蛋白を用いて、多くのやり方で免疫応答を可能にすることもできる。ダ
ウンレギュレーションは、すでに進行中の免疫応答を阻害またはブロックする形
態のものであってもよく、あるいは免疫応答の誘導を妨害することを含むもので
あってもよい。T細胞応答を抑制することにより、あるいはT細胞中に特異的な
耐性を誘導することにより、あるいはその両方により活性化T細胞の機能を阻害
してもよい。一般的には、T細胞応答の免疫抑制は活性のある、非抗原特異的な
プロセスであり、T細胞を抑制剤に連続的に曝露することを必要とする。耐性と
は、T細胞における非応答性またはアネルギーを意味し、一般的には抗原特異的
であり耐性化剤への曝露を止めた後も持続するという点で免疫抑制とは異なる。
操作上は、耐性化剤の不存在下で特異的抗原に曝露した際のT細胞応答の欠如に
より耐性が示されうる。
1またはそれ以上の抗原機能(Bリンパ球抗原機能(例えばB7のごとき)を
包含するが、これに限らない)をダウンレギュレーションすることまたは妨害す
ること、例えば、活性化T細胞による高レベルのリンホカイン合成の妨害は、組
織、皮膚および器官の移植および対宿主移植片疾患(GVHD)において有用で
あろう。例えば、T細胞機能のブロックは組織移植における組織破壊を減少させ
るはずである。典型的には、組織移植において、移植片の拒絶反応は、組織片が
T細胞により外来のものと認識されることにより開始され、次いで、移植片を破
壊する免疫反応が起こる。免疫細胞上でのB7リンパ球抗原とその本来的なリガ
ンドとの相互作用を阻害またはブロックする分子(別のBリンパ球抗原(例えば
、B7−1、B7−3)の活性を有するモノマー形態のペプチドと混合された、
あるいは単独の、B7−2活性を有する可溶性でモノマー形態のペプチド)の移
植前の投与は、応答的な同時刺激シグナルを伝達することなく免疫細胞上の本来
のリガンドへの分子の結合を誘導する可能性がある。この点においてBリンパ球
抗原機能をブロックすることは、T細胞のごとき免疫細胞によるサイトカイン合
成を妨害し、かくして、免疫抑制剤として作用する。そのうえ、同時刺激の欠如
はT細胞の反応を失わせるのに十分でありうる。Bリンパ球抗原ブロッキング試
薬による長期の耐性の誘導により、これらのブロッキング試薬の繰り返し投与の
必
要性が回避されうる。対象において十分な免疫抑制または耐性を達成するために
は、Bリンパ球抗原の組み合わせの機能をブロックすることも必要かもしれない
。
器官移植拒絶反応またはGVHDを妨害することにおける個々のブロッキング
試薬の有効性を、ヒトにおける有効性を推定しうる動物モデルを用いて評価する
ことができる。使用可能な適当な系の例は、ラットにおける同種心臓移植片およ
びマウスにおける異種膵臓島細胞移植片を包含し、それらは両方ともインビボで
のCTLA4Ig融合蛋白の免疫抑制効果を試験するために使用された(Lenscho
w et al.,Science 257:789-792(1992)およびTurka et al.,Proc Natl.Acad.
Sci.USA,89:11102-11105(1992)に記載されている)。さらに、GVHDのネズ
ミモデル(Paul ed.,Fundamental Immunology,Ravan Press,New York,1989,
pp.846-847参照)を用いて、インビボでの当該疾患の進行に対するBリンパ球抗
原機能のブロッキング効果を決定することができる。
また、抗原機能をブロックすることは自己免疫疾患の治療にとり治療的に有用
でありうる。多くの自己免疫疾患は、自己組織に対して反応性があり、疾病の病
理に関与するサイトカインおよび自己抗体の産生を促進するT細胞の不適当な活
性化の結果である。自己反応性T細胞の活性化を妨害することは疾病の徴候を減
少または除去しうる。Bリンパ球抗原の受容体:リガンド相互作用を破壊するこ
とによりT細胞の同時刺激をブロックする試薬の投与を用いてT細胞活性化を阻
害し、疾病プロセスに関与しうる自己抗体またはT細胞由来のサイトカインの産
生を妨害することができる。さらに、ブロッキング試薬は、疾病の長期の寛解を
導く可能性のある自己反応性T細胞の抗原特異的耐性を誘導しうる。自己免疫疾
患の予防または改善におけるブロッキング試薬の有効性を、ヒトの自己免疫疾患
についての十分に特徴づけられた多くの動物モデルを用いて決定することができ
る。例は、ネズミの実験的自己免疫脳炎、MRLlpr/lprマウスまたはN
ZBハイブリッドマウスにおける全身性深在性エリトマトーデス、ネズミ自己免
疫コラーゲン関節炎、NODマウスおよびBBラットにおける糖尿病、およびネ
ズミの実験的重症筋無力症(Paul ed.,Fundamental Immunology,Raven Press
,New York,1989,pp.840-856)を包含する。
免疫応答をアップレギュレーションするための手段としての抗原機能(好まし
くは、Bリンパ球抗原機能)のアップレギュレーションは治療に有用でもある。
免疫応答のアップレギュレーションは存在している免疫応答を促進する形態また
は最初の免疫応答を除去する形態であってよい。例えば、Bリンパ球抗原機能を
刺激することによる免疫応答の促進は、ウイルス感染の場合に有用でありうる。
さらに、インフルエンザ、通常のかぜ、および脳炎のごとき全身的なウイルス性
疾患を、刺激性形態のBリンパ球抗原を全身投与することにより改善してもよい
。
別法として、T細胞を患者から取り、本発明ペプチドを発現するACPsを付
加したウイルス抗原とともにインビトロにおいてT細胞を同時刺激するか、また
は刺激性形態の本発明可溶性ペプチドと一緒にし、次いで、インビトロで活性化
されたT細胞を患者体内に再導入することにより、感染患者における抗ウイルス
免疫応答を促進してもよい。抗ウイルス免疫応答を促進するもう1つの方法は、
感染細胞を患者から取り、本明細書記載の本発明蛋白をコードする核酸をそれら
にトランスフェクションして細胞がその表面に蛋白全体または一部を発現するよ
うにし、次いで、トランスフェクション細胞を患者体内に再導入することであろ
う。すると、感染細胞はインビボにおいて同時刺激シグナルをT細胞に伝えるこ
とができ、そのことによりT細胞を活性化することができよう。
もう1つの適用例において、抗原機能(好ましくは、Bリンパ球抗原機能)の
アップレギュレーションまたは促進は腫瘍免疫性の誘導において有用でありうる
。本発明の少なくとも1種のペプチドをコードする核酸でトランスフェクション
された腫瘍細胞(例えば、肉腫、黒色腫、リンパ腫、白血病、神経芽細胞腫、癌
腫)を対象に投与して対象中の腫瘍特異的耐性を克服することができる。所望な
らば、腫瘍細胞をトランスフェクションしてペプチドの組み合わせを発現させる
ことができる。例えば、患者から得た腫瘍細胞を、B7−2様活性を有するペプ
チドのみ、またはB7−1様活性および/またはB7−3様活性を有するペプチ
ドと組み合わせて発現することを指令する発現ベクターで、エクスビボにおいて
トランスフェクションすることができる。トランスフェクションされた腫瘍細胞
を患者に戻して、トランスフェクションされた細胞の表面上にペプチドを発現さ
せる。
別法として、遺伝子治療法を用いてインビボでのトランスフェクションのために
腫瘍細胞を標的化することができる。
腫瘍細胞表面上におけるBリンパ球抗原の活性を有する本発明ペプチドの存在
は、T細胞に必要な同時刺激シグナルを提供して、T細胞により媒介されるトラ
ンスフェクションされた腫瘍細胞に対する免疫応答を誘導する。さらに、MHC
クラスIまたはMHCクラスII分子を欠く腫瘍細胞、あるいは十分量のMHC
クラスIまたはMHCクラスII分子を再発現できない腫瘍細胞を、MHCクラ
スIα鎖蛋白およびβ2マイクログロブリン蛋白またはMHCクラスIIα鎖お
よびMHCクラスIIβ鎖蛋白の全体または一部(例えば、末端切断蛋白の細胞
質ドメイン)をコードしている核酸でトランスフェクションして、そのことによ
りクラスIまたはクラスIIMHC蛋白を細胞表面上に発現させることができる
。Bリンパ球抗原(例えば、B7−1、B7−2、B7−3)の活性を有するペ
プチドと組み合わせた適当なクラスIまたはクラスII HMCの発現は、T細
胞により媒介されるトランスフェクションされた腫瘍細胞に対する免疫応答を誘
導する。所望により、不変鎖のごとき、MHCクラスII結合蛋白の発現をブロ
ックするアンチセンス構築物をコードしている遺伝子を、Bリンパ球抗原の活性
を有するペプチドをコードしているDNAとともに同時トランスフェクションし
て腫瘍関連抗原の提示を促進し、腫瘍特異的免疫性を誘導こともできる。よって
、ヒト対象におけるT細胞により媒介される免疫応答の誘導は、対象における腫
瘍特異的耐性を克服するに十分でありうる。
本発明蛋白の活性を、特に、下記方法により測定してもよい:
胸腺細胞または脾臓細胞の細胞毒性に適したアッセイは、Current Protocols
in Immunology,Ed by J.E.Coligan,A.M.Kruisbeek,D.H.Margulies,E.M
.Shevach,W Strober,Pub.Greene Publishing Associates and Wiley-Inters
cience(Chapter 3,In Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19
;Chapter 7,Immunologic studies in Humans);Herrmann et al.,Proc.Natl.
Acad.Sci.USA 78:2488-2492,1981;Herrmann et al.,J.Immunol.128:1968-
1974,1982;Handa et al.,J.Immunol.135:1564-1572,1985;Takai et al.,J
.Immunol.
137:3494-3500,1986;Takai et al.,J.Immunol.140:508-512,1988;Herrmann
et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78:2488-2492,1981;Herrmann et al.,
J.Immunol.128:1968-1974,1982;Handa et al.,J.Immunol.135:1564-1572
,1985;Takai et al.,J.Immunol.137:3494-3500,1986;Bowman et al.,J.V
irology 61:1992-1998;Takai et al.,J.Immunol.140:508-512,1988;Bertagn
olli et al.,Cellular Immunology 133:327-341,1991;Brown et al.,J.Immu
nol.153:3079-3092,1994に記載されたアッセイを包含するが、これらに限らな
い。
T細胞依存性免疫グロブリン応答およびイソタイプスイッチングのためのアッ
セイ(特に、T細胞依存性抗体応答を転調させ、Th1/Th2プロフィールに
影響する蛋白を同定する)は、Maliazewski,J.Immunol.144:3028-3033,1990に記
載されているアッセイを包含するが、これに限らず、さらにB細胞の機能のアッ
セイは、In vitro antibody production,Mond,J.J.and Brunswick,M.In Current
Protocols in Immunology J.E.Coligan eds.Val 1 pp.3.8.1-3.8.16,John Wile
y and Sons,Tronto 1994に記載のアッセイを包含する。
混合リンパ球反応(MLR)アッセイ(特に、主としてTh1およひCTL応
答を発生させる蛋白を同定する)は、Current Protocols in Immunology,Ed by
J.E.Coligan,A.M.Kruisbeek,D.H.Margulies,E.M.Shevach,W Strober
,Pub.Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience(Chapter 3,In
Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19;Chapter 7,Immunolo
gic studies in Humans);Takai et al.,J.Immunol.137:3494-3500,1986;Tak
ai et al.,J.Immunol.140:508-512,1988;Bertagnolli et al.,J.Immunol
.149:3778-3783,1992に記載されたアッセイを包含するが、これらに限らない
。
樹枝状細胞依存的アッセイ(特に、無処理のT細胞を活性化する樹枝状細胞に
より発現される蛋白を同定する)は、Guery et al.,J.Immunol.134:536-544,
1995;Inaba et al.,Journal of Experimental Medicine 173:549-559,1991;Ma
catonia et al.,Journal of Immunology 154:5071-5079,1995;Porgador et al
.,Journal of Experimental Medicine 182:255-260,1995;Nair et al.,Journ
al of Virology 67:4062-4069、1993;Huang et al.,Science 264:961-965,199
4;Macatonia et
al.,Journal of Experimental Medicine 169:1255-1264,1989;Bhardwaj et al
.,Journal of Clinical Investigation 94:797-807,1994;and Inaba et al.,
Journal of Experimental Medicine 172:631-640,1990に記載されたアッセイを
包含するが、これらに限らない。
リンパ球生存/アポトーシスのアッセイ(特に、超抗体誘導後のアポトーシス
を防止する蛋白、ならびにリンパ球のホメオスタシスを調節する蛋白を同定する
)は、Darzynkiewicz et al.,Cytometry 13:795-808,1992;Gorczyca et al.,
Leukemia 7:659-670,1993;Gorczyca et al.,Cancer Research 53:1945-1951,
1993;Itoh et al.,Cell 66:233-243,1991;Zacharchuk,Journal of Immunolog
y 145:4037-4045,1990;Zamai et al.,Cytometry 14:891-897,1993;Gorczyca
et al.,International Journal of Oncology 1:639-648,1992に記載のアッセ
イを包含するが、これらに限らない。
初期段階のT細胞のコミットメント(commitment)および発達のアッセイは、
Antica et al.,Blood 84:111-117,1994;Fine et al.,Cellular Immunology 155:
111-122,1994;Galy et al.,Blood 85:2770-2778,1995;Toki et al.,Proc.Natl.A
cad.Sci.USA 88:7548-7551,1991に記載のアッセイを包含するが、これらに限ら
ない。造血調節活性
本発明蛋白は、造血の調節において有用であり、それゆえ、骨髄およびリンパ
球欠乏症の治療において有用である。コロニー形成細胞または因子依存性細胞系
を支持する最低限の生物学的活性でさえも、造血の調節への関与を示している。
例えば、赤血球系前駆細胞のみの増殖を支持すること、あるいは他のサイトカイ
ンと組み合わされて、例えば種々の貧血の治療に有用性を示すこと、あるいは放
射線療法/化学療法と組み合わされて赤芽前駆細胞および/または赤芽細胞の産
生を刺激すること;顆粒球のごとき骨髄細胞および単球/マクロファージの増殖
を支持すること(すなわち、伝統的なCSF活性)、例えば、化学療法と組み合
わされて、引き続き起こる骨髄抑制を防止することに有用であり;巨核細胞の増
殖、次いで、血小板の増殖を支持すること、またそれにより血小板減少症のごと
き種々の血小板疾患を予防または治療することに有用であり、また一般的には血
小板輸液の代わりにあるいはそれと相補的に使用され;さらに/あるいは造血幹
細胞(成熟して上記のすべての造血細胞となり、それゆえ、種々の幹細胞疾患(
通常には、移植により治療される疾患であり、例えば、再生不良性貧血および発
作性ヘモグロビン尿症)において有用性がわかる)の増殖を支持することに有用
であり、さらにはインビボまたはエクスビボでの放射線/化学療法後(すなわち
、骨髄移植と組み合わされる)、あるいは遺伝子治療のために遺伝子操作された
後の幹細胞コンパートメントの正常細胞としての再増殖においても有用である。
本発明蛋白の活性を、特に、下記方法測定してもよい。
種々の造血細胞系の増殖および分化に適したアッセイはすでに引用されている
。
胚の幹細胞の分化のアッセイ(特に、胚の分化造血に影響する蛋白を同定する
)は、Johansson et al.Cellular Biology 15:141-151,1995;Keller et al.,Mol
ecular and Cellular Biology 13:473-486,1993;McClanahan et al.,Blood81:29
03-2915,1993に記載のアッセイを包含するが、これらに限らない。
幹細胞生存および分化のアッセイ(特に、リンパ−造血を調節する蛋白を同定
する)は、Methylcellulose colony forming assays,Freshney,M.G.In Cultu
re of Hematopoietic Cells.R.I.Freshney,et al.eds.Vol pp.265-268,W
iley-Liss,Inc.,New York,NY.1994;Hirayama et al.,Proc.Natl.Acad.S
ci.USA 89:5907-5911,1992;Primitive hematopoietic colony forming cells
with high proliferative potential,McNiece,I.K.and Briddell,R.A.In C
ulture of Hematopoietic Cells.R.I.Freshney,et al.eds.Vol pp.23-39
,Wiley-Liss,Inc.,New York,NY.1994;Neben et al.,Experimental Hemato
logy 22:353-359,1994;Cobblestone area forming cell assay,Ploemacher,R
.E.In Culture of Hematopoietic Cells.R.I.Freshney,et al.eds.Vol pp
.1-21,Wiley-Liss,Inc..,New York,NY.1994;Long term bone marrow cult
ures in the presence of stromal cells,Spooncer,E.,Dexter,M.and Alle
n,T.In Culture of Hematopoietic Cells.R.I.Freshney,et al.eds.Vol
pp.163-179,Wiley-Liss,
Inc.,New York,NY.1994;Long term culture initiating cell assay,Suther
land,H.J.In culture of Hematopoietic Cells.R.I.Freshney,et al.eds
.Vol pp.139-162,Wiley-Liss,Inc.,New York,NY.1994に記載されたアッ
セイを包含するが、これらに限らない。
組織増殖活性
本発明蛋白は、骨、軟骨、鍵、靭帯および/または神経組織の成長または再生
、ならびに傷の治癒および組織修復に用いる組成物において、さらに熱傷、裂傷
および潰瘍の治療において有用性を有する。
骨が正常に形成されない環境において軟骨および/または骨の成長誘導する本
発明蛋白は、ヒトおよび他の動物における骨折および軟骨損傷または欠損の治癒
における用途がある。本発明蛋白を用いるかかる調合物は、閉鎖性骨折ならびに
解放性骨折の軽減に有用であり、また人工関節の固定の改善にも有用である。骨
形成剤により誘導されるデノボ骨形成は、先天性の、外傷による、あるいは腫瘍
学的切除により誘発される脳顔面頭蓋の欠損の修復に貢献し、さらに美容整形外
科手術においても有用である。
本発明蛋白を歯周病の治療および他の歯の修復プロセスに用いてもよい。かか
る作用剤は、骨形成細胞を誘引する環境を提供し、骨形成細胞の増殖を刺激し、
あるいは骨形成細胞前駆体の分化を誘導しうる。本発明蛋白は、例えば、骨およ
び/または軟骨修復の刺激により、あるいは炎症または炎症プロセスにより媒介
される組織破壊のプロセス(コラゲナーゼ活性、破骨細胞活性等)をブロックす
ることにより、骨粗鬆症または骨関節炎の治療においても有用でありうる。
本発明蛋白によるものとしてもよい組織発生活性のもう1つのカテゴリーは鍵
/靭帯の形成である。鍵/靭帯様組織または他の組織が正常に形成されない環境
におけるかかる組織の形成を誘導する本発明蛋白は、ヒトおよび他の動物におけ
る鍵または靭帯の裂傷、変形および他の鍵または靭帯の欠損の治癒、に適用され
る。鍵/靭帯様組織誘導蛋白を用いるかかる調合物は、鍵または靭帯組織に対す
るダメージの予防ならびに鍵または靭帯の骨または他の組織への固定の改善に用
いてもよい。本発明組成物により誘導されるデノボ鍵/靭帯様組織形成は、先天
性の、外傷による、あるいは腫瘍学的切除により誘発される脳顔面頭蓋の欠損の
修復に貢献し、さらに鍵または靭帯の付着または修復のための美容整形外科手術
においても有用である。本発明組成物は、鍵−または靭帯−形成細胞を誘引する
ための環境を提供し、鍵−または靭帯−形成細胞の増殖を刺激し、鍵−または靭
帯−形成細胞の前駆体の分化を誘導し、あるいはインビボに戻した場合に組織修
復を行うようにエクスビボでの鍵/靭帯細胞または前駆体の増殖を誘導しうる。
本発明組成物は、鍵炎、手根骨トンネル症候群および他の鍵または靭帯の欠損に
も有用である。本発明組成物は、適当なマトリックスおよび/または当該分野で
よく知られた担体のごとき隔離剤を含んでいてもよい。
本発明蛋白は、神経細胞の増殖ならびに神経および脳組織の再生に、すなわち
、中枢および末梢神経系疾患およびニューロパシーならびに機械的疾患および外
傷性疾患(神経細胞または神経組織に対する変性、死もしくは外傷を包含)の治
療にも有用でありうる。より詳細には、末梢神経傷害、末梢ニューロパシーおよ
び局在化ニューロパシーのごとき末梢神経系の疾病、ならびにアルツハイマー病
、パーキンソン病、ハンチントン病、筋委縮性外側脊髄硬化症およびShy-Drager
症候群のごとき中枢神経系の疾病の治療に蛋白を使用してもよい。本発明により
治療してもよいさらなる症状は、脊髄疾患のごとき機械的疾患および外傷性疾患
、頭部外傷ならびに卒中のごとき脳血管系の疾患を包含する。化学療法または他
の医学的療法により引き起こされる末梢ニューロパシーは、本発明蛋白を用いて
治療可能である。
また本発明蛋白は、圧迫性潰瘍、血管機能不全に関連した潰瘍、外科的および
外傷による創傷等(これらに限らない)を包含する非治癒性創傷のより好ましく
迅速な閉口の促進にも有用でありうる。
また本発明蛋白は、器官(例えば、膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内皮を包含
)、筋肉(平滑筋、骨格筋または心筋)、および血管(血管内皮を包含)組織の
ごとき他の組織の発生、あるいはかかる組織を構成している細胞の増殖促進のた
めの活性を示しうる。望ましい効果の一部は、線維症性瘢痕を抑制することによ
る正
常組織の再生であってもよい。本発明蛋白は脈管形成活性も示しうる。
本発明蛋白は、腸の保護または再生、および肺または肝臓の線維症、種々の組
織の再灌流傷害、および全身的なサイトカインのダメージにより生じる症状の治
療にも有用でありうる。
本発明蛋白は、前駆体組織または細胞からの上記組織の分化促進または抑制;
あるいは上記組織の増殖抑制にも有用でありうる。
本発明蛋白の活性は、とりわけ、以下の方法により測定してもよい:
組織再生活性のアッセイは、国際公開WO95/16035(骨、軟骨、鍵)
;国際公開WO95/05846(神経、ニューロン);国際公開WO91/0
7491(皮膚、内皮)に記載されたアッセイを包含するが、これらに限らない
。
創傷治癒活性のアッセイは、Maibach,HI and Rovee,DT,eds.,Year Book M
edical Publishers,Inc.,Chicago(Eaglstein and Mertz,J.Invest.Dermato
l 71:382-384(1978)により修飾されている)に記載されたものを包含するが、こ
れらに限らない。
アクチビン/インヒビン活性
また、本発明蛋白はアクチビン−またはインヒビン−関連活性を示しうる。イ
ンヒビン類は、卵胞刺激ホルモン(FSH)の放出抑制能により特徴づけられ、
アクチビン類は、卵胞刺激ホルモン(FSH)の放出刺激能により特徴づけられ
る。よって、本発明蛋白は、単独であるいはインヒビンαファミリーのメンバー
とのヘテロダイマーの形態で、メスの哺乳動物の繁殖力を減少させ、オスの哺乳
動物の精子形成減少させるインヒビンの能力に基づく不妊薬として有用でありう
る。十分な量の他のインヒビンの投与により、これらの哺乳動物において不妊を
誘導することができる。別法として、本発明蛋白は、ホモダイマーとしてあるい
はインヒビン−βグループの他の蛋白のサブユニットとのヘテロダイマーとして
、下垂体前葉細胞からのFSH放出の刺激におけるアクチビン分子の能力に基づ
いて、繁殖力を誘導する治療薬として有用でありうる。例えば、米国特許第
4798885号参照。また本発明蛋白は、性的に未成熟な哺乳動物における繁
殖の向上に有用である可能性があり、その結果、ウシ、ヒツジおよびブタのごと
き家畜の生存期間中の繁殖力が増大する。
本発明蛋白の活性は、とりわけ、下記方法により測定してもよい:
アクチビン/インヒビン活性のアッセイは、Vale et al.,Endocrinology 91:5
62-572,1972;Ling et al.,Nature 321:779-782,1986;Vale et al.,Nature 321:7
76-779,1986;Mason et al.,Nature 318:659-663,1985;Forage et al.,Proc.Natl
.Acad.Sci.USA 83:3091-3095,1986に記載のアッセイを包含するが、これらに限
らない。
化学走性/ケモキネシス活性
本発明蛋白は、哺乳動物細胞、例えば単球、好中球、T細胞、肥満細胞、好酸
球および/または内皮細胞の化学走性またはケモキネシス活性(例えば、ケモカ
インとして作用)を有する可能性がある。化学走性およびケモキネシス蛋白を用
いて所望細胞集団を所望作用部位に動員または誘引することができる。化学走性
またはケモキネシス蛋白は、組織に対する傷害および他の外傷の治療ならびに局
所的な感染の治療に特に有利である。例えば、リンパ球、単球または好中球の腫
瘍または感染部位への誘引は、腫瘍または感染因子に対する免疫応答を改善しう
る。
特定の蛋白またはペプチドは特定の細胞集団に対して化学走性活性を有してお
り、刺激可能な場合には、直接的または間接的にかかる細胞集団の方向または運
動を指令する。好ましくは、蛋白またはペプチドは、細胞の方向づけられた運動
を直接的に刺激する能力を有する。特定の蛋白が細胞集団に対する化学走性活性
を有するかどうかを、かかる蛋白またはペプチドを細胞化学走性の既知アッセイ
に用いることにより容易に決定することができる。
本発明蛋白の活性は、とりわけ、下記方法により測定してもよい:
化学走性活性のアッセイ(化学走性を誘導または妨害する蛋白を同定するアッ
セイ)は、細胞の膜を越えた移動を誘導する蛋白の能力ならびに1の細胞集団の
他の細胞集団への付着を誘導する蛋白の能力を測定するアッセイを含む。移動お
よび付着に適したアッセイは、Current Protocols in Immunology,Ed by J.E.
Coligan,A.M.Kruisbeek,D.H.Margulies,E.M.Shevach,W.Strober,Pub.G
reene Publishing Associates and Wiley-Interscience(Chapter 6.12,Measur
ement of alpha and beta Chemokines 6.12.1-6.12.28;Taub et al.J.Clin.I
nvest.95:1370-1376,1995;Lind et al.APMIS 103:140-146,1995;Muller et
al Eur.J.Immunol.25:1744-1748;Gruber et al.J.of Immunol.152:5860-5
867,1994;Johnston et al.J.of Immnunol.153:1762-1768,1994に記載のア
ッセイを包含するが、これらに限らない。
止血および血栓溶解活性
また、本発明蛋白は、止血または血栓溶解活性を示す可能性がある。結果とし
て、かかる蛋白は、種々の凝血疾患(血友病のごとき遺伝性疾患を包含)の治療
に有用であり、あるいは外傷、手術または他の原因により生じた傷害の治療にお
ける凝血および他の止血を促進しうる。本発明蛋白は、血栓の溶解または血栓形
成阻害ならびにそれらにより生じる症状(例えば、心筋梗塞および中枢神経系血
管の梗塞(例えば、卒中)のごとき)の治療および予防に有用でありうる。
本発明蛋白の活性を、とりわけ、下記方法により測定してもよい:
止血および血栓溶解活性のアッセイは、Linet et al.,J.Clin.Pharmacol.26:1
31-140,1986;Burdick et al.,Thrombosis Res.45:413-419,1987;Humphrey et al
.,Fibrinolysis 5:71-79(1991);Schaub,Prostaglandins 35:467-474,1988に記載
のアッセイを包含するが、これらに限らない。
受容体/リガンド活性
また、本発明蛋白は、受容体、受容体リガンドまたは受容体/リガンド相互作
用の阻害剤もしくはアゴニストとしての活性を示しうる。かかる受容体およびリ
ガンドの例は、サイトカイン受容体およびそれらのリガンド、受容体キナーゼお
よびそれらのリガンド、受容体ホスファターゼおよびそれらのリガンド、細胞−
細胞相互作用に関与する受容体およびそれらのリガンド(細胞付着分子(セレク
チン、インテグリンおよびそれらのリガンドのごとき)ならびに抗原提示、抗原
認識、細胞性および体液性免疫応答の発生に関与する受容体/リガンド対などを
包含)を包含するがこれらに限らない。受容体およびリガンドは、関連する受容
体/リガンド相互作用に対する潜在的なペプチドまたは小型分子阻害剤のスクリ
ーニングにも有用である。本発明蛋白(受容体およびリガンドのフラグメントを
包含するが、これらに限らない)は、それ自体、受容体/リガンド相互作用の阻
害剤として有用でありうる。
本発明蛋白の活性を、とりわけ、下記方法により測定してもよい:
受容体−リガンド活性の適当なアッセイは、Current Protocols in Immunolog
y,Ed by J.E.Coligan,A.M.Kruisbeek,D.H.Margulies,E.M.Shevach,W.S
trober,Pub.Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience(Chapter
7.28,Measurement of Cellular Adhesion under static conditions 7.28.1-7
.28.22),Takai et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:6864-6868,1987;Bie
rer et al.,J.Exp.Med.168:1145-1156,1988;Rosenstein et al.,J.Exp.
Med.169:149-160 1989;Stoltenborg et al.,J.Immunol.Methods 175:59-68
,1994;Stitt et al.,Cell 80:661-670,1995に記載のアッセイを包含するが、
これらに限らない。
抗炎症活性
本発明蛋白は抗炎症活性を示しうる。抗炎症活性は、刺激応答に関与している
細胞に刺激を与えることにより、細胞−細胞相互作用(例えば、付着のごとき)
を阻害または促進することにより、炎症プロセスに関与している細胞の化学走性
を阻害または促進することにより、細胞溢出を阻害または促進することにより、
あるいは炎症応答をより直接的に阻害または促進する他の因子の産生を刺激また
は抑制することにより発揮される。かかる活性を示す蛋白を用いて炎症の症状(
慢性もしくは急性症状を包含、感染に関連した炎症(敗血性ショック、敗血症も
し
くは全身性炎症応答症候群(SIRS)のごとき)、虚血−再潅流傷害、エンド
トキシンによる致命的傷害、関節炎、補体により媒介される超急性拒否反応、腎
炎、サイトカインもしくはケモカインにより誘導される肺の傷害、炎症性腸疾患
、クローン病またはTNFもしくはIL−1のごときサイトカインの過剰産生か
ら生じる疾病を包含するがこれらに限らない)を治療することができる。本発明
蛋白は、アナフィラキシーおよび抗原性物質もしくは材料に対する過敏症の治療
にも有用でありうる。
カドヘリン/腫瘍侵入抑制活性
カドヘリン(cadherin)はカルシウム依存性付着分子であり、発達中において
、詳細には特定の細胞タイプを決定することにおいて主要な役割を果たしている
と思われる。正常なカドヘリン発現の損失または変化は、腫瘍増殖および転移に
関連した細胞付着特性への変化を誘導しうる。カドヘリンの機能失調は、尋常性
天疱瘡および落葉状天疱瘡(自己免疫性の皮膚水泡疾患)、クローン病、および
いくつかの発達異常のごときヒトの他の疾病にも関与している。
カドヘリンスーパーファミリーは40余りのメンバーを包含し、それぞれが異
なる発現パターンを有している。当該スーパーファミリーのすべてのメンバーは
、共通の保存された細胞外リピート(カドヘリンドメイン)を有するが、分子の
他の部分において構造の相違が見られる。カドヘリンドメインはカルシウムに結
合してそれらの三次構造を形成するので、カルシウムはそれらの付着に必要であ
る。第1のカドヘリンドメインにおける少数のアミノ酸は同種親和性付着のため
の基礎を提供するので、この認識部位の修飾はカドヘリンの特異性を変化させる
可能性があり、その結果、自分自身だけを認識するのではなく、変異分子も異な
るカドヘリンに結合できるようになる。さらに、いくつかのカドヘリンは他のカ
ドヘリンとの異種親和性付着にも関与している。
カドヘリンスーパーファミリーのメンバーの1つであるE−カドヘリンは上皮
細胞タイプにおいて発現される。病理学的には、E−カドヘリン発現が腫瘍にお
いて失われる場合、悪性細胞は侵入性となり、癌が転移する。E−カドヘドリン
を発現するポリヌクレオチドを癌細胞系にトランスフェクションすることは、変
化した細胞形態を元に戻し、細胞相互および他の基質への付着性を回復させ、細
胞増殖速度を低下させ、足場依存性細胞の増殖を劇的に減少させることにより、
癌に関連した変化を回復させた。よって、E−カドヘドリン発現を再導入するこ
とは、癌腫をより進行していない段階に戻す。他のカドヘドリンも、他の組織タ
イプ由来の癌腫において同じ侵入抑制的役割を有している可能性がある。それゆ
え、カドヘドリン活性を有する本発明蛋白、およびかかる蛋白をコードする本発
明ポリヌクレオチドを用いて癌を治療することができる。かかる蛋白またはポリ
ヌクレオチドを癌細胞に導入することは、正常なカドヘドリン発現を提供するこ
とにより、これらの細胞において観察される癌性の変化を減少または除去しうる
。
癌細胞は、本来のものとは異なる組織タイプのカドヘリンを発現することも知
られており、それゆえこれらの癌細胞は異なる組織に侵入でき、転移できる。カ
ドヘリン活性を有する本発明蛋白、およびかかる蛋白をコードする本発明ポリヌ
クレオチドは、これらの細胞において不適切に発現されたカドヘドリンと置換し
、正常な細胞付着特性を回復させ、細胞の転移傾向を減少させ、あるいは除去し
うる。
さらに、カドヘリン活性を有する本発明蛋白、およびかかる蛋白をコードする
本発明ポリヌクレオチドを用いてカドヘリンを認識しこれに結合するする抗体を
得ることもできる。かかる抗体を用いて不適切に発現された腫瘍細胞カドヘドリ
ンの付着をブロックし、細胞が他の場所で腫瘍を形成しないようにすることもで
きる。かかる抗−カドヘドリン抗体を、癌の等級、病理学的タイプ、および予後
のためのマーカーとして使用できる。すなわち、癌が進行すると、カドヘドリン
発現は低下し、カドヘドリン結合抗体を用いることによりこのカドヘドリン発現
の低下を検出することができる。
カドヘドリン活性を有する本発明蛋白のフラグメント、好ましくはカドヘドリ
ン認識部位のデカペプチド、およびかかる蛋白フラグメントをコードする本発明
ポリヌクレオチドを用いて、カドヘリンに結合させ、望ましくない効果を生じる
カドヘリンの結合を妨げることにより、カドヘリン機能をブロックすることもで
きる。さらに、カドヘリン活性を有する本発明蛋白のフラグメント、好ましくは
癌患者の循環系において安定であることがわかっている末端切断された可溶性カ
ドヘドリンフラグメント、およびかかる蛋白フラグメントをコードするポリヌク
レオチドを用いて正しい細胞−細胞付着を混乱させることもできる。
カドヘドリンの付着および侵入抑制活性のアッセイは、Hortsch et al.J Bio
l Chem 270(32):18809-18817,1995;Miyaki et al.Oncogene 11:2547-2552,19
95;Ozawa et al.Cell 63:1033-1038,1990.に記載されたものを包含するが、こ
れらに限らない。
腫瘍阻害活性
腫瘍の免疫学的治療または予防に関する上記活性のほかに、本発明蛋白は他の
抗腫瘍活性を示しうる。ある蛋白は腫瘍増殖を直接的または間接的に(例えば、
ADCCを介して)阻害しうる。ある蛋白は、腫瘍組織または腫瘍前駆体組織に
作用して、腫瘍増殖を支持するに必要な組織の形成を阻害し(例えば、脈管形成
を阻害することにより)、腫瘍増殖を阻害する他の因子、作用剤または細胞タイ
プの産生を引き起こすことにより、あるいは腫瘍増殖を促進する因子、作用剤ま
たは細胞タイプを除去または阻害することにより腫瘍阻害活性を示しうる。
他の活性
本発明蛋白は、下記のさらなる活性または効果の1つまたはそれ以上を示しう
る:細菌、ウイルス、真菌および他の寄生虫(これらに限らず)を包含する感染
性因子の殺傷;身長、体重、体毛の色、目の色、皮膚または他の組織の色素沈着
、または器官または身体部分のサイズまたは形態(例えば、豊胸またはその逆)
を包含する身体特性への影響(抑制または促進);摂食した脂肪、蛋白または炭
水化物の消化への影響;食欲、性欲、ストレス、認識(認識の疾患を包含)、鬱
(鬱病性疾患を包含)および暴力的行為(これらに限らず)を包含する行動特性
への影響;鎮痛効果または他の痛み軽減効果の提供;造血系以外の系統における
胚の幹細胞の分化および増殖の促進;ホルモンまたは内分泌活性;酵素の場合、
酵素
欠乏の修正および関連疾患の治療;過剰増殖性疾患(例えば、乾癬のごとき)の
治療;免疫グロブリン様活性(例えば、抗体または補体に結合する能力);なら
びにワクチン組成物において抗原として作用してかかる蛋白またはかかる蛋白と
交差反応する他の物質もしくは存在に対する免疫応答を生じさせる能力。投与および用量
本発明蛋白(どのような源からであってもよく、組み換え法および非組み換え
法によるものを包含するが、これらに限らない)を、医薬上許容される担体と混
合して医薬組成物中に用いてもよい。かかる組成物は(蛋白および担体のほかに
)、希釈剤、充填剤、塩類、バッファー、安定化剤、可溶化剤、および当該分野
でよく知られた他の物質を含有していてもよい。用語「医薬上許容される」は、
有効成分の生物学的活性の有効性を妨害しない無毒の物質を意味する。担体の特
性は投与経路に依存する。本発明医薬組成物は、M−CSF、GM−CSF、T
NF、IL−1、IL−2、IL−3、IL−4、IL−5、IL−6、IL−
7、IL−8、IL−9、IL−10、1L−11、IL−12、IL−13、
IL−14、IL−15、IFN、TNF0、TNF1、TNF2、G−CSF
、Meg−CSF、スロンボポイエチン、幹細胞因子、およびエリスロポイエチ
ンのごときサイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子を含有していても
よい。医薬組成物はさらに、蛋白活性を増強し、あるいは治療においてその活性
または有用性を補う他の作用剤を含有していてもよい。かかるさらなる因子およ
び/または作用剤を医薬組成物に含有させて、本発明蛋白との相乗効果を発揮さ
せ、あるいは副作用を最小化してもよい。逆に、特定のサイトカイン、リンホカ
イン、他の造血因子、血栓溶解因子または抗血栓因子、または抗炎症剤の処方に
本発明蛋白を含有させて、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶
解因子または抗血栓因子、または抗炎症剤の副作用を最小化してもよい。
本発明蛋白は、多量体(例えば、ヘテロダイマーまたはホモダイマー)または
それ自体もしくは他の蛋白との複合体となって活性でありうる。結果的に、本発
明医薬組成物は、かかる多量体または複合体形態の本発明蛋白を含むものであっ
てもよい。
本発明医薬組成物は、本発明蛋白と蛋白もしくはペプチド抗原との複合体の形
態であってもよい。蛋白および/またはペプチド抗原は、Bリンパ球ならびにT
リンパ球に対して刺激シグナルを送達するであろう。Bリンパ球はその表面免疫
グロブリン受容体を通して抗原に応答するであろう。Tリンパ球は、MHC蛋白
による抗原提示後、T細胞受容体(TCR)を通して抗原に応答するであろう。
MHCならびに宿主細胞のクラスIおよびクラスIIのMHC遺伝子によりコー
ドされたものを包含する構造上関連した蛋白は、Tリンパ球に対するペプチド抗
原の提示に役立つであろう。抗原成分は、精製MHC−ペプチド複合体のみとし
て、または直接T細胞にシグナルを送ることのできる同時刺激分子とともに供給
される。あるいはまた、B細胞上の表面免疫グロブリンおよび他の分子に結合し
うる抗体を、本発明医薬組成物と混合することもできる。
本発明医薬組成物はリポソーム形態であってもよく、その中で本発明蛋白はさ
らに他の医薬上許容される担体、脂質のごとき両親媒性作用剤(水溶液中でミセ
ルのような凝集体形態、不溶性単層、液状結晶またはラメラ層として存在)と混
合されている。リポソーム処方に適する脂質は、モノグリセリド、ジグリセリド
、スルファチジド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸等を包含するが
、これらに限らない。かかるリポソーム処方の製造は当業者のレベルの範囲内で
あり、例えば、米国特許第4235871、4501728、4837028、
および4737323号(参照によりそれらすべてを本明細書に記載されている
ものとみなす)に記載されたようなものである。
本明細書の用語「治療上有効量」とは、有意な患者の利益、例えば、かかる症
状の徴候の改善、治癒、治癒速度の増大を示すに十分な医薬組成物または方法の
各有効成分の合計量を意味する。単独で投与される個々の有効成分について用い
る場合、該用語は当該成分のみをいう。有効成分の組み合わせに用いる場合、逐
次投与あるいは同時投与にかかわらず治療効果を生じる有効成分量の合計量をい
う。
本発明の治療方法の実施において、治療上有効量の本発明蛋白を治療すべき症
状を有する哺乳動物に投与する。本発明方法に従って、単独またはサイトカイン
、リンホカインもしくは他の造血因子のごとき他の治療薬とともに本発明蛋白を
投与してもよい。1種またはそれ以上のサイトカイン、リンホカインまたは他の
造血因子と共投与する場合、本発明蛋白をサイトカイン、リンホカイン、他の造
血因子、血栓溶解因子もしくは抗血栓因子と同時または逐次投与してもよい。逐
次投与する場合、担当医師は、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血
栓溶解因子もしくは抗血栓因子と本発明蛋白との組み合わせにおける適切な投与
順序を決定するであろう。
本発明医薬組成物中または本発明の実施に用いる本発明蛋白の投与を種々の慣
用的方法、例えば、経口的摂食、吸入、または皮内、皮下、または静脈注射で行
うことができる。患者への静脈注射が好ましい。
治療上有効量の本発明蛋白を経口投与する場合、本発明蛋白は錠剤、カプセル
、粉末、溶液またはエリキシルの形態であろう。錠剤形態で投与する場合、本発
明医薬組成物はゼラチンのごとき固体担体またはアジュバントをさらに含有して
いてもよい。錠剤、カプセル、および粉末は、約5ないし95%の本発明蛋白、
好ましくは約25ないし90%の本発明蛋白を含有する。液体形態で投与する場
合、水、ペトロレウム、動物または植物起源の油脂、例えばピーナッツ油、鉱油
、大豆油、またはゴマ油、または合成油脂を添加してもよい。液体形態の医薬組
成物は、生理食塩溶液、デキストロースまたは他の糖類溶液、またはグリコール
類(例えばエチレングリコール、プロピレングリコールもしくはポリエチレング
リコール)をさらに含有していてもよい。液体形態で投与する場合、医薬組成物
は、約0.5ないし90重量%の本発明蛋白、好ましくは約1ないし50%の本
発明蛋白を含有する。
治療上有効量の本発明蛋白を静脈、皮内または皮下注射により投与する場合、
本発明蛋白はパイロジェン不含で、非経口的に許容される水溶液の形態であろう
。適切なpH、等張性、安定性を有するかかる非経口的に許容される蛋白溶液の
調製は、当業者の範囲内である。静脈、皮内、または皮下注射用の好ましい医薬
組成物は、本発明蛋白のほかに、注射用塩化ナトリウム、リンゲル溶液、注射用
デ
キストロース、注射用デキストロースおよび塩化ナトリウム溶液、注射用乳酸含
有リンゲル溶液、または当該分野で知られている他の担体を含有すべきである。
本発明医薬組成物は、安定化剤、保存料、バッファー、抗酸化剤、または当業者
に知られた他の添加物を含んでいてもよい。
本発明医薬組成物中の本発明蛋白の量は、治療すべき症状の性質および重さ、
ならびに患者がすでに受けていた治療の性質による。最終的には、担当医師が、
各患者を治療すべき本発明蛋白量を決定するであろう。まず、担当医師は、低用
量の本発明蛋白を投与し、患者の応答を観察する。最適治療効果が得られるまで
、より高用量の本発明蛋白を投与してもよく、最適治療効果が得られた時点で用
量をさらに増加させない。本発明方法を実施するための種々の医薬組成物は、体
重1kgあたり約0.01μgないし約100mgの本発明蛋白(好ましくは、
体重1kgあたり約0.1μgないし約10mg、より好ましくは体重1kgあ
たり0.1μgないし約1mgの本発明蛋白を含有すべきである。
本発明組成物を用いる静脈投与による治療の期間は、治療すべき疾病の重さな
らびに各患者の状態および応答により変化させられるであろう。本発明蛋白の各
適用期間は、連続静脈投与の場合12ないし24時間の範囲であると考えられる
。最終的には、担当医師が、本発明医薬組成物を用いる静脈投与による治療の期
間を決定するであろう。
本発明蛋白を用いて動物を免役して、本発明蛋白と特異的に反応するポリクロ
ーナルおよびモノクローナル抗体を得てもよい。蛋白全体またはそのフラグメン
トを免疫原として用いてかかる抗体を得てもよい。ペプチド免疫源はカルボキシ
末端にシステイン残基をさらに含んでいてもよく、キーホールリムペット・ヘモ
シアニン(KLH)のごときハプテンに結合する。かかるペプチドを合成する方
法は当該分野において知られており、例えば、R.P.Merrifield,J.Amer.Chem.Soc
.85,2149-2154(1963);J.L.Krstenansky,et.al.,FEBS Lett.211,10(1987)に記載
のごときものがある。本発明蛋白に結合するモノクローナル抗体は、本発明蛋白
の免疫検出用の有用な診断薬でありうる。本発明蛋白に結合する中和抗体は、本
発明蛋白に関連した症
状の治療薬として有用でありうるし、さらに本発明蛋白の異常発現が関与してい
るいくつかの形態の癌の治療におけるある種の腫瘍の治療において有用でありう
る。癌細胞または白血球細胞の場合、本発明蛋白に対する中和モノクローナル抗
体は、本発明蛋白により媒介されうる癌細胞の転移蔓延の検出および予防に有用
でありうる。
骨、軟骨、腱または靭帯の再生に有用な本発明組成物に関して、治療方法は、
組成物を局所的、全身的、またはインプラントもしくはデバイスのごとく局部的
に投与することを包含する。投与する場合、本発明に使用する治療組成物は、も
ちろん、パイロジェン不含の生理学的に許容される形態である。さらに、望まし
くは、組成物をカプセル封入するかまたは粘性形態として注射して骨、軟骨また
は組織ダメージ部位に送達してもよい。局所投与は傷の治癒および組織修復に適
する。上記組成物中に含有されていてもよい本発明蛋白以外の治療上有用な作用
剤を、代替的または付加的に、本発明方法における組成物と同時または逐次投与
してもよい。好ましくは、骨および/または軟骨形成のためには、組成物は、蛋
白含有組成物を骨および/または軟骨ダメージ部位に送達し、骨および軟骨の発
生のための構造を提供し、さらに最適には体内に吸収されうるマトリックスを含
有するであろう。かかるマトリックスは、他の移植される医学的器具に現在使用
されている材料からできていてもよい。
マトリックス材料の選択は、生体適合性、生分解性、機械的特性、美容上の外
観および界面特性に基づく。組成物の特別な適用により適当な処方が決定されよ
う。組成物用として可能なマトリックスは生分解性で、化学的に知られた硫酸カ
ルシウム、リン酸三カルシウム、ヒドロキシアパタイト、ポリ乳酸、ポリグリコ
ール酸およびポリ無水物であってもよい。他の使用可能な材料は生分解性で、生
物学的によく知られたもの、例えば、骨または皮膚のコラーゲンである。さらに
マトリックスは純粋な蛋白または細胞外マトリックス成分を含んでいてもよい。
他の可能なマトリックスは、焼結ヒドロキシアパタイト、バイオガラス、アルミ
ネート、または他のャラミックスのごとき生分解性でなく、化学的に知られたも
のである。マトリックスは上記タイプの材料の組み合わせ、例えばポリ乳酸およ
びヒ
ドロキシアパタイトあるいはコラーゲンおよびリン酸三カルシウムを含んでいて
もよい。バイオセラミックスを、組成物中、例えばカルシウム−アルミネート−
ホスフェート中において変更してもよく、加工して孔サイズ、粒子サイズ、粒子
形状および生分解性を変化させてもよい。
150ないし800ミクロンの範囲の直径を有する多孔性粒子形態の乳酸およ
びグリコール酸の50:50(モル重量)のコポリマーが現在のところ好ましい
。いくつかの適用例においては、カルボキシメチルセルロースまたは自己由来の
血餅のごとき隔離剤を用いてマトリックスからの蛋白組成物の解離を防止するこ
とが有用であろう。
隔離剤の好ましいファミリーは、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒド
ロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル
メチルセルエオース、およびカルボキシメチルセルロースを包含するアルキルセ
ルロース(ヒドロキシアルキルセルロースを包含)のごときセルロース性材料で
あり、カルボキシメチルセルロース(CMC)のカチオン性の塩が最も好ましい
。他の好ましい隔離剤は、ヒアルロン酸、アルギン酸ナトリウム、ポリ(エチレ
ングリコール)、ポリオキシエチレンオキシド、カルボキシビニルポリマーおよ
びポリ(ビニルアルコール)を包含する。本発明に有用な隔離剤の量は、全処方
重量に対して0.5〜20重量%、好ましくは1〜10重量%であり、この量は
、ポリマーマトリックスからの蛋白の脱離を防止し、組成物の適切な取り扱いを
可能にする量であるが、前駆細胞がマトリックスから浸潤し、そのことにより前
駆細胞の骨形成活性を促進する機会を蛋白に付与するようにするには、あまり多
くないようにする。
さらなる組成物において、本発明蛋白が骨および/または軟骨の欠損、傷、ま
たは組織の治療に有益な他の作用剤と混合されていてもよい。これらの作用剤は
、上皮増殖因子(EGF)、血小板由来増殖因子(PDGF)、形質転換増殖因
子(TGF−αおよびTGF−β)、およびインスリン様増殖因子(IGF)を
包含する。
また、目下のところ、治療組成物は獣医学的用途にも価値がある。詳細には、
ヒトのほかに、家畜およびサラブレッドのウマが本発明蛋白を用いるかかる治療
に望ましい患者である。
組織の再生に使用される蛋白含有医薬組成物の投与規則は、蛋白の作用を変化
させる種々の要因、例えば形成が望まれる組織重量、ダメージ部位、ダメージを
受けた組織の状態、傷のサイズ、必要な組織のタイプ(例えば、骨)、患者の年
齢、性別、および食事、感染の重さ、投与期間、ならびに他の臨床的要因を考慮
して医師が決定するであろう。用量は、復元に使用するマトリックスのタイプお
よび医薬組成物中の他の蛋白の含有に応じて変更されてもよい。例えば、IGF
I(インスリン様増殖因子I)のごとき他の既知増殖因子の最終組成物への添
加も用量に影響しうる。組織/骨の増殖および/または修復を、例えばX線、組
織形態学的調査およびテトラサイクリン標識により定期的に評価することにより
経過をモニターすることができる。
本発明ポリヌクレオチドを遺伝子治療に用いることもできる。かかるポリヌク
レオチドをインビボまたはエクスビボで細胞に導入して哺乳動物対象中で発現さ
せることができる。核酸を細胞または生物に導入するための他の知られた方法に
より本発明ポリヌクレオチドを投与してもよい(ウイルスベクターに入れて、あ
るいは裸のDNAの形態として等があるが、これらに限らない)。
本発明蛋白存在下で細胞をエクスビボにおいて培養して増殖させ、あるいはか
かる細胞に対する所望効果を生じさせ、あるいはかかる細胞中に所望活性を生じ
させてもよい。次いで、処理された細胞を、治療目的で、インビボにおいて導入
することができる。
本明細書に引用した特許および文献を、参照により全体が本明細書に記載され
ているものとみなす。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Secreted proteins and polynucleotides encoding them
This application is a continuation-in-part of 08/726237, filed October 4, 1996.
It is.
Field of the invention
The present invention relates to novel polynucleotides and the use of such polynucleotides.
Proteins, and therapeutic and diagnostic methods for these polynucleotides and proteins
Provides catastrophic and research utility.
Background of the Invention
Protein factors such as lymphokines, interferons, CSFs and
The method aimed at the discovery of cytokines such as
Matured rapidly over the years. Nowadays conventional hybridization cloning
And expression cloning methods provide information directly related to the discovered protein (ie,
In the case of hybridization cloning, the partial DNA / amino acid sequence of the protein
Column; the activity of the protein in the case of expression cloning)
The new polypeptide is cloned "directly". Signal sequence cloning (
DNA sequence based on the presence of the currently well-recognized secretory leader sequence motif
And hybridization by various PCRs or with low stringency
More recent "indirect" cloning methods, such as the dicing cloning method
Is secreted in the case of cloning of the leader sequence.
Or biological activity depending on the cell or tissue source in the case of the PCR method.
Access to numerous DNA / amino acid sequences for proteins known to be
Has improved the status quo. The present invention provides these proteins and their
To the polynucleotide to be loaded.Summary of the Invention
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1;
(B) the nucleotide sequence from nucleotide 282 to nucleotide 565 of SEQ ID NO: 1
A polynucleotide comprising a reotide sequence;
(C) the nucleotide sequence from nucleotide 342 to nucleotide 565 of SEQ ID NO: 1
A polynucleotide comprising a reotide sequence;
(D) Clone AX6522 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the full-length protein coding sequence of
(E) Clone AX6522 deposited under accession number ATCC 98196
Polynucleotide encoding the full-length protein encoded by the cDNA insert of
Otide;
(F) Clone AX6522 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of
(G) Clone AX6522 deposited under accession number ATCC 98196
Encoding a mature protein encoded by a cDNA insert
Otide;
(H) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2
Tide;
(I) Including a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein;
(J) Polynucleic acid which is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (g) above
Nucleotides;
(K) a polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (h) or (i) above
Otide; and
(L) any one of the polynucleotides (a) to (i) under strict conditions
A polynucleotide capable of hybridizing to
Preferably, such a polynucleotide is nucleotide 282 of SEQ ID NO: 1.
A nucleotide sequence from SEQ ID NO: 1 to nucleotide 565;
Nucleotide sequence from 342 to nucleotide 565; accession number ATCC98
196 of the full-length protein coding sequence of clone AX6522 deposited as
Nucleotide sequence; or claw deposited under accession number ATCC 98196
AX6522 contains the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence. other
In a preferred embodiment, the polynucleotide has accession number ATCC 98196.
Encoded by the cDNA insert of clone AX6522
Encodes a full-length or mature protein.
Another embodiment is a gene corresponding to the cDNA sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 3.
Provide a child.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other mammalian proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2;
(B) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2; and
(C) Clone AX6522 deposited under accession number ATCC 98196
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert of FIG.
Preferably, such a protein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2.
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 56;
(B) nucleotides from nucleotide 192 of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 56
A polynucleotide comprising up to Pride 2318;
(C) clone deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the full-length protein coding sequence of BD33514
Nucleotides;
(D) Clone deposited under accession number ATCC 98196
Encoding the full-length protein encoded by the cDNA insert of BD33514
A polynucleotide;
(E) the clone deposited under accession number ATCC 98196
Polynucleotides comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of BD33514
Nucleotides;
(F) clone deposited under accession number ATCC 98196
Encodes the mature protein encoded by the cDNA insert of BD33514
A polynucleotide;
(G) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 57
Do;
(H) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 57 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein comprising;
(I) a polynucleotide that is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (d) above
Creotide
(J) a polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (g) or (h) above;
C; and
(K) any one of the polynucleotides (a) to (h) under strict conditions
A polynucleotide capable of hybridizing to
Preferably, such a polynucleotide has the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 56.
Accession number ATCC 981 from nucleotide 192 to nucleotide 2318 of
96, the full length protein coding sequence of clone BD33514
Nucleotide sequence; or claw deposited under accession number ATCC 98196
The nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of BD35514. other
In a preferred embodiment, the polynucleotide has accession number ATCC 98196.
Encoded by the cDNA insert of clone BD33514 deposited as
Encodes the full-length or mature protein to be produced. In still other preferred embodiments
The present invention relates to amino acids 148 to 240 of SEQ ID NO: 57.
A polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of
Another embodiment provides a gene corresponding to the cDNA sequence of SEQ ID NO: 56.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other mammalian proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 57;
(B) amino acid sequence from amino acid 148 to amino acid 240 of SEQ ID NO: 57
Column;
(C) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 57; and
(D) Clone deposited under accession number ATCC 98196
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert of BD33514.
Preferably, such a protein is the amino acid sequence of SEQ ID NO: 57 or SEQ ID NO: 57.
The amino acid sequence from amino acid 148 to amino acid 240.
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 9;
(B) the nucleotide sequence from nucleotide 206 to nucleotide 391 of SEQ ID NO: 9
A polynucleotide comprising a reotide sequence;
(C) clone BG241 1 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the full-length protein coding sequence of
(D) clone BG241 1 deposited under accession number ATCC 98196
Polynucleotide encoding the full-length protein encoded by the cDNA insert of
Otide;
(E) Clone BG241 1 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of
(F) Clone BG241 1 deposited under accession number ATCC 98196
Encoding a mature protein encoded by a cDNA insert
Otide;
(G) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10
Otide;
(H) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein comprising;
(I) a polynucleotide that is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (d) above
Nucleotides; and
(J) Polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (g) or (h) above
Otide.
Preferably, such a polynucleotide is nucleotide 206 of SEQ ID NO: 9.
To nucleotide 391; accession number ATCC 98196
Of the full-length protein coding sequence of clone BG241_1 deposited as
Otide sequence; or clone BG deposited under accession number ATCC 98196
2411 contains the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence. Other favors
In a specific embodiment, the polynucleotide is deposited under accession number ATCC 98196.
The full length encoded by the cDNA insert of the deposited clone BG241-11
Or encode the mature protein.
Other specific examples include the cDNA sequence of SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 8 or SEQ ID NO: 11.
Provide the gene corresponding to the column.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other mammalian proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10;
(B) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10;
(C) clone BG241 1 deposited under accession number ATCC 98196
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert of FIG.
Preferably, such a protein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10.
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 13;
(B) nucleotides from nucleotide 194 to nucleotide 328 of SEQ ID NO: 13
A polynucleotide comprising a nucleotide sequence;
(C) Clone BL1874 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the full-length protein coding sequence of
(D) Clone BL1874 deposited under accession number ATCC 98196
Polynucleotide encoding the full-length protein encoded by the cDNA insert of
Otide;
(E) Clone BL1874 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of
(F) Clone BL1874 deposited under accession number ATCC 98196
Encoding a mature protein encoded by a cDNA insert
Otide;
(G) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14
Otide;
(H) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein comprising;
(I) a polynucleotide that is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (d) above
Nucleotides; and
(J) Polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (g) or (h) above
Otide.
Preferably, such a polynucleotide is nucleotide 19 of SEQ ID NO: 13.
Nucleotide sequence from 4 to nucleotide 328; accession number ATCC 9819
No. 6 of the full-length protein coding sequence of clone BL1874 deposited as No. 6
Clone B deposited as accession number ATCC 98196;
Contains the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of L1874. Other favored
In a preferred embodiment, the polynucleotide has the accession number ATCC 98196.
By the cDNA insert of clone BL1874 deposited
Encodes the entire encoded or mature protein.
Another specific example is the cDN of SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 12 or SEQ ID NO: 15.
A gene corresponding to the A sequence is provided.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other mammalian proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14;
(B) SEQ ID NO: 14; and
(C) Clone BL1874 deposited under accession number ATCC 98196
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert of FIG.
Preferably, such a protein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14.
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 16;
(B) nucleotides from nucleotide 2 to nucleotide 309 of SEQ ID NO: 16
A polynucleotide comprising an otide sequence;
(C) nucleotides from nucleotide 131 to nucleotide 309 of SEQ ID NO: 16
A polynucleotide comprising a nucleotide sequence;
(D) Clone deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the full length protein coding sequence of BL24918
Nucleotides;
(E) the clone deposited under accession number ATCC 98196
Encoding the full-length protein encoded by the cDNA insert of BL24918.
A polynucleotide that is;
(F) clone deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of BL24918
Nucleotides;
(G) Clone deposited under accession number ATCC 98196
Encoding the mature protein encoded by the cDNA insert of BL24918.
A polynucleotide that is;
(H) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17
Otide;
(I) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein comprising;
(J) Polynucleic acid which is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (g) above
Nucleotides; and
(K) a polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (h) or (i) above
Otide.
Preferably, such a polynucleotide is nucleotide 2 of SEQ ID NO: 16.
Nucleotide sequence from SEQ ID NO: 16 to nucleotide 309;
Nucleotide sequence accession number ATCC 981 from 131 to nucleotide 309
Full length protein coding sequence of clone BL24918 deposited as 986
Or a nucleotide sequence deposited under accession number ATCC 98196.
And the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of BL24918.
In another preferred embodiment, the polynucleotide has accession number ATCC 9819.
6. The cDNA insert of clone BL24918 deposited as
Encodes the full-length or mature protein to be encoded. In still other preferred embodiments
Thus, the present invention includes the amino acid sequence of amino acids 2 to 101 of SEQ ID NO: 17.
A polynucleotide encoding the protein.
Other embodiments correspond to the cDNA sequence of SEQ ID NO: 16 or SEQ ID NO: 18.
Provide the gene.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other mammalian proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17;
(B) amino acid sequence from amino acid 2 to amino acid 101 of SEQ ID NO: 17
(C) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17;
(D) Clone deposited under accession number ATCC 98196
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert of BL24918.
Preferably, such a protein is the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17 or SEQ ID NO: 1.
7 amino acid sequence from amino acid 2 to amino acid 101.
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 20;
(B) nucleotides from nucleotide 459 to nucleotide 539 of SEQ ID NO: 20
A polynucleotide comprising a nucleotide sequence;
(C) of clone BO711 deposited under accession number ATCC 98196;
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the full-length protein coding sequence;
(D) of clone BO711 deposited under accession number ATCC 98196;
Polynucleotide encoding full-length protein encoded by cDNA insert
Tide;
(E) of clone BO711 deposited under accession number ATCC 98196;
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence;
(F) of clone BO711 deposited under accession number ATCC 98196;
Polynucleotide encoding mature protein encoded by cDNA insert
Tide;
(G) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21
Otide;
(H) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein comprising;
(I) a polynucleotide that is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (d) above
Nucleotides;
(J) Polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (g) or (h) above
Otide; and
(K) any one of the polynucleotides (a) to (h) under strict conditions
A polynucleotide capable of hybridizing to
Preferably, such a polynucleotide is nucleotide 45 of SEQ ID NO: 20.
Nucleotide sequence from 9 to nucleotide 539; accession number ATCC 9819
No. 6 of the full length protein coding sequence of clone BO711 deposited as No. 6.
Otide sequence; or clone BO deposited under accession number ATCC 98196
711 comprises the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence. Other preferred
In a specific example, the polynucleotide is deposited under accession number ATCC 98196.
Length or the full length encoded by the cDNA insert of cloned clone BO711
Encodes the mature protein.
Other specific examples include the cDN of SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 22.
A gene corresponding to the A sequence is provided.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other mammalian proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21;
(B) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21;
(C) of clone BO711 deposited under accession number ATCC 98196;
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert.
Preferably, such a protein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21.
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 24;
(B) nucleotides from nucleotide 300 to nucleotide 512 of SEQ ID NO: 24
A polynucleotide comprising a nucleotide sequence;
(C) nucleotides from nucleotide 372 to nucleotide 512 of SEQ ID NO: 24
A polynucleotide comprising a nucleotide sequence;
(D) Clone BO365 2 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the full-length protein coding sequence of
(E) Clone BO365 2 deposited under accession number ATCC 98196
Polynucleotide encoding the full-length protein encoded by the cDNA insert of
Otide;
(F) Clone BO365 2 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of
(G) Clone BO365 2 deposited under accession number ATCC 98196
Encoding a mature protein encoded by a cDNA insert
Otide;
(H) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25
Otide;
(I) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein comprising;
(J) Polynucleic acid which is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (g) above
Nucleotides;
(K) a polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (h) or (i) above
Otide; and
(L) any one of the polynucleotides (a) to (i) under strict conditions
A polynucleotide capable of hybridizing to
Preferably, such a polynucleotide is nucleotide 30 of SEQ ID NO: 24.
A nucleotide sequence from 0 to nucleotide 512; the nucleotide of SEQ ID NO: 24
Nucleotide sequence from nucleotide 372 to nucleotide 512; accession number ATCC
Full length protein coding sequence of clone BO3652 deposited as 98196
The nucleotide sequence of the sequence; or the clone deposited under accession number ATCC 98196.
Contains the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence for Lone BO3652.
In another preferred embodiment, the polynucleotide has accession number ATCC 9819.
Coded by cDNA insert of clone BO3652 deposited as No. 6.
Encodes the full-length or mature protein to be produced.
Other specific examples include the cDN of SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 23 or SEQ ID NO: 26.
A gene corresponding to the A sequence is provided.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other mammalian proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25;
(B) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25;
(C) clone BO265 2 deposited under accession number ATCC 98196
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert of FIG.
Preferably, such a protein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25.
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 27;
(B) the nucleotide sequence from nucleotide 68 to nucleotide 328 of SEQ ID NO: 27
A polynucleotide comprising a reotide sequence;
(C) of clone BV511 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the full-length protein coding sequence;
(D) of clone BV511 deposited under accession number ATCC 98196
Polynucleotide encoding full-length protein encoded by cDNA insert
Tide;
(E) of clone BV511 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence;
(F) of clone BV511 deposited under accession number ATCC 98196
Polynucleotide encoding mature protein encoded by cDNA insert
Tide;
(G) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28
Otide;
(H) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein comprising;
(I) a polynucleotide that is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (d) above
Nucleotides;
(J) Polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (g) or (h) above
Otide; and
(K) any one of the polynucleotides (a) to (h) under strict conditions
A polynucleotide capable of hybridizing to
Preferably, such a polynucleotide is nucleotide 68 of SEQ ID NO: 27.
To nucleotide 328; accession number ATCC 98196
Of the full-length protein coding sequence of clone BV511 deposited as
Clone sequence BV5 deposited under accession number ATCC 98196
11 includes the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence. Other preferred equipment
In an embodiment, the polynucleotide is deposited under accession number ATCC 98196.
Full length encoded by the cDNA insert of cloned BV511
Encodes a mature protein.
Other embodiments correspond to the cDNA sequence of SEQ ID NO: 27 or SEQ ID NO: 29.
Provide the gene.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other mammalian proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28;
(B) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28;
(C) of clone BV511 deposited under accession number ATCC 98196
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert.
Preferably, such a protein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28.
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 31;
(B) the nucleotide sequence from nucleotide 57 to nucleotide 396 of SEQ ID NO: 31
A polynucleotide comprising a reotide sequence;
(C) clone BV140 3 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the full-length protein coding sequence of
(D) clone BV1403 deposited under accession number ATCC 98196
Polynucleotide encoding full-length protein encoded by cDNA insert
Tide;
(E) clone BV140 3 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of
(F) Clone BV1403 deposited under accession number ATCC 98196
Polynucleotide encoding mature protein encoded by cDNA insert
Tide;
(G) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32
Otide;
(H) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein comprising;
(I) a polynucleotide that is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (d) above
Nucleotides; and
(J) Polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (g) or (h) above
Otide.
Preferably, such a polynucleotide is nucleotide 57 of SEQ ID NO: 31.
To nucleotide 396; accession number ATCC 98196
Of the full-length protein coding sequence of clone BV1403 deposited as
Otide sequence; or clone BV deposited under accession number ATCC 98196
140 Contains the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence. Other favors
In a specific embodiment, the polynucleotide is deposited under accession number ATCC 98196.
The full length encoded by the cDNA insert of the deposited clone BV1403
Or encode the mature protein. In still other preferred embodiments, the present invention
Akira includes the amino acid sequence from amino acid 29 to amino acid 57 of SEQ ID NO: 32.
A polynucleotide encoding the protein.
Another specific example is the cDN of SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 30 or SEQ ID NO: 33.
A gene corresponding to the A sequence is provided.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other mammalian proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32;
(B) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32 from amino acid 29 to amino acid 57;
(C) fragments of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32;
(D) clone BV1403 deposited under accession number ATCC 98196
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert of FIG.
Preferably, such a protein is the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32 or SEQ ID NO: 3.
2 comprises the amino acid sequence from amino acid 29 to amino acid 57.
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 34;
(B) nucleotides from nucleotide 132 to nucleotide 242 of SEQ ID NO: 34
A polynucleotide comprising a nucleotide sequence;
(C) Clone BV141 2 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the full-length protein coding sequence of
(D) clone BV141 2 deposited under accession number ATCC 98196
Polynucleotide encoding the full-length protein encoded by the cDNA insert of
Otide;
(E) Clone BV141 2 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of
(F) clone BV141 2 deposited under accession number ATCC 98196
Encoding a mature protein encoded by a cDNA insert
Otide;
(G) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35
Otide;
(H) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein comprising;
(I) a polynucleotide that is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (d) above
Nucleotides;
(J) Polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (g) or (h) above
Otide; and
(K) any one of the polynucleotides (a) to (h) under strict conditions
A polynucleotide capable of hybridizing to
Preferably, such a polynucleotide is nucleotide 13 of SEQ ID NO: 34.
Nucleotide sequence from 2 to nucleotide 242; accession number ATCC 9819
No. 6 of the full length protein coding sequence of clone BV1412 deposited as No. 6.
Clone B deposited as accession number ATCC 98196;
V141 2 contains the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence. Other favored
In a preferred embodiment, the polynucleotide has the accession number ATCC 98196.
The entirety encoded by the cDNA insert of the deposited clone BV1412
Encodes a long or mature protein.
Other embodiments correspond to the cDNA sequence of SEQ ID NO: 34 or SEQ ID NO: 36.
Provide the gene.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other lactate proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35;
(B) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35;
(C) Clone BV141 2 deposited under accession number ATCC 98196
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert of FIG.
Preferably, such a protein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35.
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 37;
(B) the nucleotide sequence from nucleotide 28 to nucleotide 351 of SEQ ID NO: 37
A polynucleotide comprising a reotide sequence;
(C) nucleotides from nucleotide 328 to nucleotide 351 of SEQ ID NO: 37
A polynucleotide comprising a nucleotide sequence;
(D) Clone CC1944 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the full-length protein coding sequence of
(E) Clone CC1944 deposited under accession number ATCC 98196
Polynucleotide encoding the full-length protein encoded by the cDNA insert of
Otide;
(F) Clone CC1944 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of
(G) Clone CC1944 deposited under accession number ATCC 98196
Encoding a mature protein encoded by a cDNA insert
Otide;
(H) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38
Otide;
(I) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein comprising;
(J) Polynucleic acid which is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (g) above
Nucleotides; and
(K) a polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (h) or (i) above
Otide.
Preferably, such a polynucleotide is nucleotide 28 of SEQ ID NO: 37.
From SEQ ID NO: 37 to nucleotide 351;
Nucleotide sequence from nucleotide 328 to nucleotide 351; accession number ATCC9
Full length protein coding sequence of clone CC1944 deposited as 8196
Or a nucleotide sequence deposited under accession number ATCC 98196.
And the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of CC1944. other
In a preferred embodiment, the polynucleotide has accession number ATCC 98196.
Encoded by the cDNA insert of clone CC1944 deposited as
Encodes the full-length or mature protein to be derived. In still other preferred embodiments,
The present invention relates to an amino acid sequence from amino acid 56 to amino acid 108 of SEQ ID NO: 38.
A polynucleotide encoding a protein comprising the sequence is provided.
Other embodiments correspond to the cDNA sequence of SEQ ID NO: 37 or SEQ ID NO: 39.
Provide the gene.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other mammalian proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38;
(B) amino acid sequence from amino acid 56 to amino acid 108 of SEQ ID NO: 38
;
(C) fragments of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38;
(D) Clone CC1944 deposited under accession number ATCC 98196
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert of FIG.
Preferably, such protein is the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38 or SEQ ID NO: 3.
Includes an amino acid sequence from 8 amino acids 56 to 108.
In one embodiment, the present invention provides an isolated polypeptide selected from the group consisting of:
Provide a composition comprising a renucleotide:
(A) a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 41;
(B) the nucleotide sequence from nucleotide 62 to nucleotide 592 of SEQ ID NO: 41
A polynucleotide comprising a reotide sequence;
(C) Clone DA1361 deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of one full-length protein coding sequence
Nucleotides;
(D) Clone deposited under accession number ATCC 98196
Encoding the full-length protein encoded by the cDNA insert of DA13611.
A polynucleotide that is;
(E) the clone deposited under accession number ATCC 98196
A polynucleotide comprising the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence of DA13611
Nucleotides;
(F) clone deposited under accession number ATCC 98196
Encoding the mature protein encoded by the cDNA insert of DA13611.
A polynucleotide that is;
(G) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 42
Otide;
(H) a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 42 having biological activity
A polynucleotide encoding a protein comprising;
(I) a polynucleotide that is an allelic variant of the polynucleotide of (a) to (d) above
Nucleotides; and
(J) Polynucleotide encoding a species homolog of the protein of (g) or (h) above
Otide.
Preferably, such a polynucleotide is nucleotide 62 of SEQ ID NO: 41.
To nucleotide 592; accession number ATCC 98196
Of the full-length protein coding sequence of clone DA13611 deposited as
Reotide sequence; or clone D deposited under accession number ATCC 98196
A13611 contains the nucleotide sequence of the mature protein coding sequence. Other good
In a preferred embodiment, the polynucleotide is accession number ATCC 98196.
Encoded by the cDNA insert of clone DA13611 deposited
Encodes a full-length or mature protein. In yet another embodiment, the present invention provides a method comprising:
A protein comprising the amino acid sequence from amino acid 61 to amino acid 119 of SEQ ID NO: 42;
A polynucleotide encoding white is provided.
Another specific example is the cDN of SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 40 or SEQ ID NO: 43.
A gene corresponding to the A sequence is provided.
In another embodiment, the present invention relates to an amino acid selected from the group consisting of:
A set comprising a protein comprising an acid sequence and substantially free of other mammalian proteins
Serve the product:
(A) the amino acid sequence of SEQ ID NO: 42;
(B) amino acid sequence from amino acid 61 to amino acid 119 of SEQ ID NO: 42
;
(C) fragments of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 42; and
(D) Clone deposited under accession number ATCC 98196
Amino acid sequence encoded by the cDNA insert of DA13611. Like
Alternatively, such a protein is the amino acid sequence of SEQ ID NO: 42 or the amino acid sequence of SEQ ID NO: 42.
Includes the amino acid sequence from amino acid 61 to amino acid 119.
In certain preferred embodiments, the polynucleotide is operable with an expression control sequence.
Noh is linked to Noh. The present invention also provides a method for transforming such a polynucleotide composition.
Also provided are host cells, including bacterial, yeast, insect and mammalian cells.
Further, a method for producing a protein,
(A) culturing a host cell culture transformed with such a polynucleotide composition;
Grown in the appropriate medium;
(B) purifying the protein from the culture
There is also provided a method comprising: The protein produced by such a method is also
It is provided by Ming. As a preferred specific example, it is produced by such a method.
And the protein to be produced is a mature form of the protein.
The protein composition of the present invention may further contain a pharmaceutically acceptable carrier. Or
Compositions comprising antibodies specifically reactive with such proteins are also provided by the present invention.
Administering a therapeutically effective amount of a composition comprising a protein of the invention and a pharmaceutically acceptable carrier.
For preventing, treating or ameliorating a medical condition, including administering to an animal subject
A law is also provided.BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES
FIG. 1 shows the pED6 and pNotS vectors used to deposit the clone of the present invention.
Indicates
Detailed description Isolated proteins and polynucleotides
Nucleotides for each of the clones and proteins disclosed herein
And amino acid sequences are reported below. In some cases, the array is
Contains some inaccurate or unclear bases or amino acids
Maybe. By sequencing the deposited clones by known methods,
The actual nucleotide sequence of the protein can be easily determined. Then the estimated net
The acid sequence (both full length and mature) can be determined from such nucleotide sequences.
Can be. Express the clone in a suitable host cell, collect the protein, and then
Of the protein encoded by each clone
The acid sequence can also be determined. For each protein disclosed, Applicants
Determined to be the best identifiable reading frame using sequence information available at the time of filing
Were identified.
As used herein, the term "secreted" protein refers to a membrane when expressed in a suitable host cell.
Refers to those that are transported through, and the result of the signal sequence in that amino acid sequence
Transportation is also included. "Secreted" proteins are secreted entirely by the cells in which they are expressed.
Proteins (eg, soluble proteins) or partially secreted proteins (eg, receptors)
), But not limited thereto. Also, "secreted" proteins pass through the membrane of the endoplasmic reticulum
Including but not limited to those transported by
Clone “AX65 22”
The polynucleotide of the present invention has been identified as clone "AX6522". A
X6522 is a cDNA encoding a secreted protein from an adult testis cDNA library.
Isolated using a method selective for DNA. AX6522 is a full-length clone
And all secretory proteins (also referred to herein as "AX6522 protein").
Including the coding sequence.
The nucleotide sequence of the 5 'portion of AX6522 determined this time is shown in SEQ ID NO: 1.
Shown in Applicant now considers reading frame to be correct for coding area
Those are shown in SEQ ID NO: 2. AX6522 protein corresponding to the above nucleotide sequence
The deduced amino acid sequence in white is shown in SEQ ID NO: 2. Amino acids 1 to 20 are estimated
Putative mature amino acid sequence starting at amino acid 21.
You. Additional nucleotides from the 3 'portion of AX6522, including a poly A tail
The nucleotide sequence is shown in SEQ ID NO: 3.
EcoRI / NotI restriction from deposit containing clone AX6522
The fragment should be about 3500 bp.
The nucleotide sequence disclosed herein for AX6522 was compared to BLASTA / BLASTX and
And a search against the GenBank database using the FASTA search protocol. Day
Nothing hit during the tab.Clone "BD335 14"
The polynucleotide of the present invention has been identified as clone "BD33514".
BD33514 uses a method that is selective for cDNAs encoding secreted proteins.
And isolated from a human fetal kidney cDNA library (US Pat. No. 5,366,663).
Computer analysis of the amino acid sequence of the encoded protein
By doing so, it was identified as encoding a secretory protein or a transmembrane protein. BD
33514 is a full-length clone, which is a secreted protein (herein referred to as “BD335”).
14 protein).
The nucleotide sequence of BD33514 determined this time is shown in SEQ ID NO: 56.
. The applicant now has the correct reading frame and BD33 corresponding to the above nucleotide sequence.
The predicted amino acid sequence of the 514 protein is shown in SEQ ID NO: 57.
EcoRI / NotI system obtained from the deposit containing clone BD33514
The restriction fragment should be about 3000 bp.
Nucleus disclosed herein for BD33514 using the BLASTP search protocol
Reotide sequences are searched against the GenPet and GeneSeq amino acid sequence databases.
Was. The predicted BD33514 protein is located in U83511 (APXL [Homo sapiens]).
Showed at least some homology to them. Based on homology, BD335
14 proteins and each homologous protein or peptide have at least some activity
May share a gender. With the TopPredII computer program,
It is predicted that three transmembrane domains may be present in the BD33514 protein sequence
One centered on amino acid 80 of SEQ ID NO: 57 and the other one was SEQ ID NO: 5
7 around amino acid 320 and yet another is amino acid 7 of SEQ ID NO: 57.
It was expected to be around 00.Clone "BG241 1"
The polynucleotide of the present invention was identified as clone "BG241-1". B
G241-1 is prepared using a method that is selective for cDNAs encoding secreted proteins.
Isolated from an adult brain cDNA library. BG241-11 is a full-length clone
And all secretory proteins (also referred to herein as "BG241-1 protein").
Including the coding sequence.
The nucleotide sequence of the 5 'portion of BG241-11 determined this time is shown in SEQ ID NO: 8.
Shown in Additional internal nucleotide sequence derived from BG241-1 determined this time
This is shown in SEQ ID NO: 9. Applicant now has the right to be encoded by such an internal sequence
The reading frame and what is considered the deduced amino acid sequence are shown in SEQ ID NO: 10. Poly Ate
The additional nucleotide sequence of the 3 'portion of BG241-11, including
: 11.
The nucleotide sequence disclosed herein for BG241_1 was compared to BLASTA / BLASTX and
And searched against the GenBank database using the FASTA search protocol. B
G241-1 is "zb27g08.r1 Soares parathyroid tumor NbHPA Homo sapiens"
At least some identity to an EST identified as (W38781, BlastN)
showed that. Based on identity, the BG241 1 protein and each protein with identity
Alternatively, peptides may share at least some activity. BG2
The amino acid sequence of 411 indicates that it is a beta-transducin-like protein (L28125, B
lastX; T86738, BlastN).Clone "BL187 4"
The polynucleotide of the present invention was identified as clone "BL1874". B
L1874 is prepared using a method that is selective for cDNAs encoding secreted proteins.
Isolated from an adult testis cDNA library. BL187-4 is a full-length clone
And the entire code of secreted protein (also referred to herein as "BL1874").
Includes the printing sequence.
The nucleotide sequence of the 5 'portion of BL1874 determined this time is shown in SEQ ID NO: 1.
2 is shown. Additional internal nucleotide sequence from BL1874 determined this time
Is shown in SEQ ID NO: 13. At present, the applicant has determined that the correct
A good reading frame and what is considered a deduced amino acid sequence are shown in SEQ ID NO: 14. Poly
Additional nucleotide sequence of the 3 'portion of BLI8714, including the A tail
Column number: shown in 15
The nucleotide sequence disclosed herein for BL341-4 was compared with BLASTA / BLASTX and
And searched against the GenBank database using the FASTA search protocol. B
L1874 is "ESTOO10 Homo sapiens cDNA clone HTN-6-15" (H48938, Fasta
) Showed at least some identity to ESTs identified as Same
Based on sex, BL187_4 protein and each protein or peptide having identity
May share at least some activity.
Clone "BL249 18"
The polynucleotide of the present invention was identified as clone "BL24918".
BL24918 encodes a secreted protein from an adult testis cDNA library.
CDNA was isolated using methods selective for the cDNA. BL249 18 is full length black
And a secretory protein (also referred to herein as "BL14918 protein").
of
Includes all coding sequences.
The nucleotide sequence of the 5 'portion of BL24918 determined this time is represented by SEQ ID NO:
16. Applicant now considers the coding frame to be the correct reading frame.
The result is shown in SEQ ID NO: 17. BL249 corresponding to the above nucleotide sequence
The deduced amino acid sequence of 18 protein is shown in SEQ ID NO: 17. Amino acids 1 to 43
Is a predicted leader / signal sequence and the predicted mature amino acid sequence is amino acid 44
Start with. Additional nucleotides in the 3 'portion of BL24918, including a poly A tail
The nucleotide sequence is shown in SEQ ID NO: 18.
The nucleotide sequence disclosed herein for BL24918 was compared to BLASTA / BLASTX and
And searched against the GenBank database using the FASTA search protocol. B
L24918 is "yj20a05.s1 Homo sapiens cDNA clone 149264 3 '" (R82633
, BlastN). Based on identity,
BL249-18 protein and each protein or peptide having identity should be at least
They may share some activity.Clone "BO71 1"
The polynucleotide of the present invention has been identified as clone "BO711". BO
711 expresses an adult using a method selective for cDNA encoding a secreted protein.
Isolated from a retinal cDNA library. BO711 is a full-length clone
, All cordins of secreted proteins (also referred to herein as “BO711 protein”)
Includes logging arrays.
The nucleotide sequence of the 5 'portion of BO711 determined this time is shown in SEQ ID NO: 19.
Shown in Further internal nucleotide sequence derived from BO711 determined this time
Column number: 20 Applicant now has the right to be encoded by such an internal sequence
The reading frame and what is considered to be the deduced amino acid sequence are shown in SEQ ID NO: 21.
. Additional nucleotide sequences from the 3 'portion of BO711, including a poly A tail
The sequence is shown in SEQ ID NO: 22.
The nucleotide sequence disclosed herein for BO711 was compared to BLASTA / BLASTX and
And a search against the GenBank database using the FASTA search protocol. Day
Nothing hit during the tab. The nucleotide sequence is
Shows some weak homology to the protein PEA-15 (X86809, Fasta).Clone “BO365 2”
The polynucleotide of the present invention has been identified as clone "BO365-2". B
O3652 is prepared using methods that are selective for cDNAs encoding secreted proteins.
, Isolated from the human retinal cDNA library. BO365 2 is full length claw
And all secretory proteins (also referred to herein as "BO3652 protein").
Includes coding sequence.
The nucleotide sequence of the 5 'portion of BO365-2 determined this time is shown in SEQ ID NO: 2.
3 is shown. Additional internal nucleotide sequence from BO365 2 determined this time
Is shown in SEQ ID NO: 24. At present, the applicant has determined that the correct
A new reading frame and what is considered to be a deduced amino acid sequence are shown in SEQ ID NO: 25.
. Amino acids 1 to 24 of SEQ ID NO: 25 are a predicted leader / signal sequence.
Thus, the predicted mature amino acid sequence starts at amino acid 25. Including a poly A tail,
Additional nucleotide sequence from the 3 'portion of BO365 2 is set forth in SEQ ID NO: 22.
Show.
EcoRI obtainable from the deposited clone containing clone BO3652
The / NotI restriction fragment should be about 2800 bp.
The nucleotide sequence disclosed herein for BO3652 was compared to BLASTA / BLASTX and
And searched against the GenBank database using the FASTA search protocol. De
There were no hits in the database.Clone "BV51 1"
The polynucleotide of the present invention has been identified as clone "BV511". BV
511 uses adult methods to select cDNAs encoding secreted proteins.
Isolated from a brain cDNA library. BV511 is a full-length clone.
All the secretory proteins (also referred to herein as "BV511 protein").
Includes marking sequences.
The nucleotide sequence of the 5 'portion of BV511 determined this time is shown in SEQ ID NO: 27.
Shown in Applicant now considers reading frame to be correct for coding area
Those are shown in SEQ ID NO: 28. BV511 protein corresponding to the above nucleotide sequence
The deduced amino acid sequence in white is shown in SEQ ID NO: 28. BV51 containing poly A tail
An additional nucleotide sequence from the 3 'portion of 1 is shown in SEQ ID NO: 29.
EcoRI / which can be obtained from the deposited clone containing clone BV511
The NotI restriction fragment should be approximately 970 bp.
The nucleotide sequence disclosed herein for BV511 is compared to BLASTA / BLASTX and
And a search against the GenBank database using the FASTA search protocol. Day
Nothing hit during the tab.Clone "BV140 3"
The polynucleotide of the present invention was identified as clone "BV1403". B
V1403 is prepared using a method that is selective for cDNAs encoding secreted proteins.
Isolated from an adult brain cDNA library. BV1403 is a full-length clone
And all secretory proteins (also referred to herein as "BV1403 protein").
Including the coding sequence.
The nucleotide sequence of the 5 'portion of BV1403 determined this time is shown in SEQ ID NO: 3.
0 is shown. Additional internal nucleotide sequence from BV1403 determined this time
Is shown in SEQ ID NO: 31. At present, the applicant has determined that the correct
A new reading frame and what is considered to be a deduced amino acid sequence are shown in SEQ ID NO: 32.
. Additional nucleotides from the 3 'portion of BV1403, including the poly A tail
The sequence is shown in SEQ ID NO: 33.
EcoRI / Notl restriction from deposit containing clone BV1403
The fragment should be about 3500 bp.
The nucleotide sequence disclosed herein for BV1403 was compared to BLASTA / BLASTX and
And searched against the GenBank database using the FASTA search protocol. B
V1403 is "ye33g08.r1 Homo sapiens cDNA clone 119582 5 '" (T94057, B
It showed at least some identity to an EST identified as lastN).
Based on identity, BV1403 protein and each protein or peptide having identity
Tides may share at least some activity.Clone “BV141 2”
The polynucleotide of the present invention has been identified as clone "BV141-2". B
V141 2 is prepared using a method that is selective for cDNAs encoding secreted proteins.
Isolated from an adult brain cDNA library. BV141 2 is a full-length clone
And all secretory proteins (also referred to herein as "BV141 2 protein").
Including the coding sequence.
The nucleotide sequence of the 5 'portion of BV141-2 determined this time is shown in SEQ ID NO: 3.
It is shown in FIG. Applicant now considers reading frame to be correct for coding area
Are shown in SEQ ID NO: 35. BV141 corresponding to the above nucleotide sequence
The deduced amino acid sequences of the two proteins are shown in SEQ ID NO: 35. BV containing poly A tail
An additional nucleotide sequence from the 3 'portion of 1412 is provided in SEQ ID NO: 36.
.
EcoRI / NotI restriction obtained from the deposit containing clone BV1412
The fragment should be about 1100 bp.
The nucleotide sequence disclosed herein for BV1412 was compared to BLASTA / BLASTX and
And searched against the GenBank database using the FASTA search protocol. De
There were no hits in the database.Clone "CC184 4"
The polynucleotide of the present invention has been identified as clone "CC1944". C
C1944 is prepared using a method that is selective for cDNAs encoding secreted proteins.
Isolated from an adult brain cDNA library. CC1844 is a full-length clone
And all secretory proteins (also referred to herein as “CC1944 proteins”).
Including the coding sequence.
The nucleotide sequence of the 5 'portion of CC1944 determined this time is shown in SEQ ID NO: 3
FIG. Applicant now considers correct reading frame for coding area
Those are shown in SEQ ID NO: 38. CC194 4 corresponding to the above nucleotide sequence
The deduced amino acid sequence of the protein is shown in SEQ ID NO: 38. CC1 containing poly A tail
An additional nucleotide sequence from the 3 'portion of 944 is shown in SEQ ID NO: 39.
EcoRI / NotI restriction from deposits containing clone CC1944
The fragment should be about 3300 bp.
The nucleotide sequence disclosed herein for CC1944 is provided by BLASTA / BLASTX and
And searched against the GenBank database using the FASTA search protocol. C
C1944 is "ym0h08.s1 Homo sapiens cDNA clone 477813 3 '" (H11476, Bla
stN) and "mc99a01.r1 Soares mouse embryo NbME13.5 14.5 Mus musculus"
At least some identity to the sequence identified as (W54544, BlastN)
showed that. Based on identity, the CC1944 protein and each protein with identity
Alternatively, the peptides may share at least some activity.Clone “DA136 11”
The polynucleotide of the present invention was identified as clone "DA13611".
DA13611 uses a method that is selective for cDNAs encoding secreted proteins.
And isolated from an adult placenta cDNA library. DA136 11 is full length
And a secretory protein (also referred to herein as "DA13611 protein").
)).
The nucleotide sequence of the 5 'portion of DA13611 determined this time is represented by SEQ ID NO:
40. Additional internal nucleotides from DA13611 determined this time
The sequence is shown in SEQ ID NO: 41. Applicant currently encodes such an internal sequence
The correct reading frame and what is considered to be the deduced amino acid sequence are set forth in SEQ ID NO: 42.
Show. Additional nucleotides from the 3 'portion of DA13611, including a poly A tail
The otide sequence is shown in SEQ ID NO: 43.
EcoRI / NotI system obtained from the deposit containing clone DA13611
The restriction fragment should be about 3800 bp.
The nucleotide sequence disclosed herein for DA13611 was compared to BLASTA / BLASTX
And searched against the GenBank database using the FASTA search protocol.
DA13611 is "yh11b12.s1 Homo sapiens cDNA clone 42891 3 '" (R59925
, BlastN) show at least some identity to ESTs identified as
Was. Based on identity, the DA13611 protein and each identity protein or
The peptides may share at least some activity.
Depositing clones
Clone AX65 22, BD335 14, BG241 1, BL187
4, BL249 18, BO71 1, BO365 2, BV51 1, BV1
403, BV141 2, CC1944, and DA13611
Accession No. ATCC 98 on October 3, 1996 at the American Type Culture Collection
196, from which the clone is available. About deposit
Restrictions on the public use of 37 C.I. F. R. § 1.808 (b)
Unless otherwise granted, it will be removed by the issuance of the patent. Each clone has this composite
Transfected into separate bacterial cells (E. coli) as a body deposit.
EcoRI / NotI digestion (5 'site, EcoRI; 3' site, NotI)
To obtain fragments of appropriate size for such clones,
Each clone can be taken from the deposited vector. Each clone is
No. 1 and deposited in either the pED6 or pNotS vector. Go
In some cases, the deposited clones have “flipped” in the deposited isolate (ie,
Direction). Even in such a case, EcoRI and NotI are deleted.
Can be used to isolate the cDNA insert. However, in that case,
To place the cDNA in the correct orientation for expression in the vector, NotI
A 5 'site will be created and EcoRI will create a 3' site. cDNA deposited
CDNA may be expressed from a vector that has been used.
Obtaining bacterial cells containing a particular clone from a complex deposit as follows:
Can:
Oligonucleotide probes to obtain sequences known as specific clones
Or a probe should be designed. This sequence is the sequence described herein, or
It can be derived from a combination of these sequences. To isolate each full-length clone
The sequences of the oligonucleotide probes used for the following are shown below,
It is the most reliable in loan isolation.clone Probe sequence
AX65 22 SEQ ID NO: 44
BD355 14 SEQ ID NO: 45
BG241 1 SEQ ID NO: 46
BL187 4 SEQ ID NO: 47
BL249 18 SEQ ID NO: 48
BO71 1 SEQ ID NO: 49
BO365 2 SEQ ID NO: 50
BV51 1 SEQ ID NO: 51
BV140 3 SEQ ID NO: 52
BV141 2 SEQ ID NO: 53
CC194 4 SEQ ID NO: 54
DA136 11 SEQ ID NO: 55
In the above sequence containing N at position 2, that position is the preferred probe / ply
In a mer, one nucleotide (for example, biotin phosphoramidite (1-
Dimethoxytrityloxy-2- (N-biotinyl-4-aminobutyl) -propyl
R-3-O- (2-cyanoethyl)-(N, N-diisopropyl) -phosphorama
Dite) (Glen Research, cat.no. 10-1953))
) Rather than biotinylated phosphoramidite residues.
Preferably, the design of the oligonucleotide probe follows these parameters.
Should be:
(A) The region of the sequence where the number of unclear bases (N), if any, is minimal
Should be designed to:
(B) TmAbout 80 ° C (2 ° C for A or T, G or C respectively)
About 4 ° C.).
Preferably, a method widely used for oligonucleotide labeling is used,
The oligonucleotide is g-32P-ATP (specific activity
6000 Ci / mmol). You can use other labeling methods
Wear. Preferably, unincorporated labels are separated by gel filtration chromatography or
Should be removed by other established methods. Incorporated in the probe
Radioactivity should be quantified by measuring with a scintillation counter.
You. Preferably, the specific activity of the probe obtained is about 4e + 6 dpm / picomolar.
Should be.
Preferably, a bacterial culture containing a pool of full-length clones is thawed and 100 μl of
Stock was added to 25 ml of sterile L-broth containing 100 μg / ml ampicillin
Should be used to inoculate sterile culture flasks containing. Preferably, the culture is
It should be grown at 37 ° C. to saturation, and preferably, the saturated culture should be fresh L
Should be diluted with broth. Preferably, some of these dilutions are plated
100 μg / ml ampicillin in a 150 mm Petri dish and
Grow overnight at 37 ° C. on solid bacterial culture medium containing L broth containing 5% agar
Dilution yields approximately 5000 distinct and well-separated colonies
And volume should be determined. To get clear, well-separated colonies
Other known methods can also be used.
The colonies are then nitted using standard colony hybridization techniques.
Transfer to a low cellulose filter for dissolution, denaturation and baking.
You.
Then, preferably, 0.5% SDS, 100 μg / ml yeast RNA and
6X SSC containing 10 mM EDTA (20X stock is 175.3 g Na
Cl / liter, 88.2 g sodium citrate / liter, pH 7 with NaOH
. Gently stirring in 0) (approx. 10ml per 150mm filter)
Incubate the filter at 65 ° C. for 1 hour. By the way, good
Preferably, the probe is added to the hybridization mixture to give a concentration of 1e + 6d
pm / ml or more. Then overnight at 65 ° C with gentle stirring
Incubation is preferred. The filter is then preferably brought to room temperature.
Wash with 500 ml of 2X SSC / 0.5% SDS without stirring
This is followed by 500 ml of 2X SSC / 0 at room temperature with gentle shaking.
. Wash with 1% SDS for 15 minutes. A third wash at 65 ° C. for 30 minutes to 1 hour,
It is optimal to perform with 0.1X SSC / 0.5% SDS. Then, preferably
The filter is dried and subjected to autoradiography for a sufficient time to remove positives by X-ray.
Visualize on film. Using other known hybridization methods
Can also.
Positive colonies are picked, grown in culture medium, and then added using standard procedures.
Isolate the mid DNA. Then, restriction analysis, hybridization analysis or
Clones can be verified by DNA sequencing.
A fragment of the protein of the present invention that can exhibit biological activity is also included in the present invention.
You. Protein fragments may be linear or, for example, H.U.Saragovi
, et al., Bio / Technology 10,773-778 (1992) and R.S.McDowell, et al., J. Amer. C
hem. Soc. 114, 9245-9253 (1992) (both references are incorporated herein by reference).
Cyclization using known methods as described in many
For purposes, including increasing the number of valencies at the protein binding site, such flags
The fragment may be fused to a carrier molecule such as an immunoglobulin. For example, protein
Is fused to the Fc portion of an immunoglobulin via a "linker" sequence.
You may let it. For a bivalent form of the protein, such a fusion could be made to the Fc portion of an IgG molecule.
Can be done against Such fusions using other immunoglobulin isotypes
A combination may be performed. For example, a protein of the present invention in a 10-valent form can be obtained by a protein-IgM fusion.
White will result.
The invention also provides the full length and mature forms of the disclosed proteins. Full length form of such a protein
Is identified in the sequence listing by translation of the nucleotide sequence of the disclosed clone.
I have. The mature form of such a protein can be found in a suitable mammalian cell or other host cell.
To release the disclosed full-length polynucleotides (preferably those deposited with the ATCC).
It may be obtained by exposing. Amino acid sequence of full-length form
It may be determined from the column.
The present invention also provides a gene corresponding to the cDNA sequence disclosed herein.
A "corresponding gene" is transcribed to give rise to the mRNA from which the cDNA sequence is derived.
Region of the genome, and contiguous regions of the genome required for regulation of gene expression.
Coding sequences, 5 'and 3' untranslated regions, or alternatively,
Exons, introns, promoters, enhancers, and silencers
Or, it includes, but is not limited to, suppressor elements. Corresponding gene
Can be isolated by known methods using the sequence information disclosed herein. Such a method is
Identification and identification of genes in appropriate genomic libraries or other sources of genomic material
Probe or primer based on the sequence information disclosed for amplification and / or amplification
And / or a suitable genomic library or other genomic material
The amplification of genes in the source of the material.
When the protein of the present invention is membrane-bound (for example, when it is a receptor), the present invention
Also provides soluble forms of such proteins. In such a form, the protein
Cells in which the protein has been expressed by deleting some or all of its transmembrane domain
To be sufficiently secreted from Intracellular and transmembrane domains of the protein of the invention
Is identified by a known method for determining such a domain from sequence information.
Can be.
The proteins and protein fragments of the present invention have at least the amino acid sequence of the disclosed protein.
25% (more preferably at least 50%, most preferably at least 75%)
At least 60% sequence identity to the disclosed proteins.
(More preferably at least 75% identity, most preferably at least 90%
Or 95% identity). Sequence identity is a measure of sequence gap.
When sequences are juxtaposed to maximize overlap and identity while minimizing
It is determined by comparing the amino acid sequences of the proteins. Seg of any disclosed protein
At least 75% sequence identity (more preferably at least 75%
85% identity, most preferably at least 95% identity).
8 or more (more preferably 20 or more, most preferably
Is a protein or protein fragment containing 30 or more contiguous amino acids
And the present invention is also included in the present invention.
Species homologs of the disclosed polynucleotides and proteins are also provided by the invention. Book
A suitable probe or primer is prepared from the sequence shown in the specification, and then
Species homologues can be isolated and identified by screening appropriate sources of nucleic acids from the species.
You may.
The present invention also relates to allelic variants of the disclosed polynucleotides,
Identical, homologous or related to the protein encoded by the oligonucleotide.
Spontaneous variants of the isolated polynucleotides encoding the described proteins.
Also, the present invention has a sequence complementary to the sequence of the polynucleotide disclosed herein.
Also encompasses polynucleotides.
The invention also relates to the use of the present invention under reduced stringency conditions, more preferably under stringent conditions.
The polynucleotides described herein may also be hybridized, preferably under very stringent conditions.
Also encompasses polynucleotides that can be redistributed. The following table shows examples of strictness conditions.
Shown in The very strict conditions are, for example, at least as strict as conditions A to F.
Yes, the strict conditions are, for example, at least as strict as the conditions GL,
The condition for reducing the density is, for example, at least as strict as the conditions M to R.
‡: The hybrid length is the length of the hybridizing polynucleotide.
Expected length for hybridized region (s). Polinu
Hybridize a nucleotide to a target polynucleotide of unknown sequence
If so, the hybrid length is the length of the polynucleotide to be hybridized.
Suppose When a polynucleotide of known sequence hybridizes
Aligns polynucleotide sequences to identify region (s) of optimal sequence complementarity
By doing so, the hybrid length can be determined.†
: SSPE (1 × SS) in hybridization and wash buffer
PE was 0.15 M NaCl, 10 mM NaHTwoPOFour, And 1.25 mM ED
TA, pH 7.4, was converted to SSC (1 × SSC was 0.15 M NaCl and 1
5 mM sodium citrate). Hybridization
After the completion of the washing, the washing is performed for 15 minutes.
* TB-TR: For hybrids that are expected to be shorter than 50 base pairs in length
The hybridization temperature is the melting temperature of the hybrid (Tm5) than 10)
C should be lowered. T by the following equationmIs determined. Less than 18 base pairs in length
For hybrids, Tm(° C) = 2 (# of A + T bases) +4 (# of G + C bases). length
For hybrids of 18 to 49 base pairs, Tm(℃) = 81.5 + 16.6 (logTen[Na+
]) + 0.41 (% G + C) − (600 / N), where N is the number of hybrid bases and
The concentration of sodium ion in the lysis buffer (1XSSC
[Na+] = 0.165M).
Further examples of stringency conditions for polynucleotide hybridization
Is Sambrook, J., E.F. Fritsch, and T.W. Maniatis, 1989, Molecular Cloning: A
Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Har
bor, NY, chapters 9 and 11, and Current Protocols in Molecular Biology,
1995, F.M. Ausubel et al., Eds., John Wiley & Sons, Inc., sections 2.10
and 6.3-6.4 and are considered to be hereby incorporated by reference.
Eggplant
Preferably, each of such hybridizing polynucleotides
Is at least 25% of the polynucleotide of the invention to be hybridized
(More preferably at least 50%, most preferably at least 75%)
A length that is small relative to the polynucleotide of the invention to be hybridized.
At least 60% sequence identity (more preferably, at least 75% identity;
And preferably also at least 90% or 95% identity). Sequence identity
Are sequenced to maximize overlap and identity while minimizing sequence gaps.
Are determined by comparing the amino acid sequences of the proteins when are aligned.
The isolated polynucleotide of the present invention can be prepared as described in Kaufman et al., Nucleic Acids Res. 19, 4
485-4490 (1991), such as a pMT2 or pED expression vector.
The protein may be produced recombinantly by operably linking the columns. Recombinant protein
Expression methods are also known. Kaufman, Methods in Enzymology 185, 537-566 (1
990). Many suitable expression control sequences are known in the art.
Have been. "Operably linked," as defined herein, refers to an isolated polynucleotide of the present invention.
The nucleotides and expression control sequences are placed in a vector or cell and ligated into a polynucleotide.
For host cells transformed (transfected) with leotide / expression control sequences
Means that it is more expressed.
Many types of cells can serve as suitable host cells for expression of the proteins of the present invention.
Mammalian cells include, for example, monkey COS cells, Chinese hamster ovary (CH
O) cells, human kidney 293 cells, human epidermal A431 cells, human Colo205 cells
Vesicles, 3T3 cells, CV-1 cells, other transformed primate cell lines, normal diploid
Cells, cell lines obtained from in vitro culture of primary tissues, primary explants, H
eLa cells, mouse cells, BHK, HL-60, U937HaK or Jurkat cells
Vesicles.
Alternatively, in lower eukaryotic cells such as yeast or prokaryotic cells such as bacteria.
It is possible to produce proteins. A potentially suitable yeast strain is Saccharomyces ce
revisiae, Schizosaccharomyces pombe, Kluyveromyces strain, Candida, or different
Includes yeast strains capable of expressing the seed protein. A potentially suitable bacterial strain is Escherichia
capable of expressing E. coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium, or heterologous proteins
Functional bacterial strains. If the protein is produced in yeast or bacteria,
The protein produced in the above step is, for example, phosphorylated or glycosylated at an appropriate site.
May need to be modified to obtain a functional protein. Known chemical or enzymatic
Such covalent bonding may be performed using a method.
The isolated polynucleotides of the present invention can be used in one or more insect expression vectors to
The protein can be obtained by operably linking to an appropriate control sequence and using an insect expression system.
Good. Materials and methods for baculovirus / insect cell expression systems are described, for example, in
Kit form from Invitrogen, San Diego, California, USA (MaxBacRkit)
And such methods are well known in the art and are available from Summers.
And Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. 1555 (198
7) (such as those described herein by reference)
is there. As used herein, insect cells capable of expressing the polynucleotide of the present invention
Has been "transformed".
Culturing transformed host cells under culture conditions suitable for expressing the recombinant protein
The protein of the present invention may be produced more. Next, the obtained expressed protein was subjected to gel filtration and filtration.
Such cultures using known purification processes, such as ion exchange chromatography
(I.e., medium or cell extract). Also, protein purification
Is an affinity column containing an agent that will bind to the protein;
Valine A-agarose, heparin-ToyopearlROr Cibacrom blue 3GA Sepha
LoinROne or more column steps with an affinity column such as
Use resin such as phenyl ether, butyl ether, or propyl ether
One or more steps using hydrophobic interaction chromatography;
Or immunoaffinity chromatography.
Alternatively, the protein of the invention may be expressed in an easily purified form. For example,
Lactose binding protein (MBP), glutathione-S-tonspherase (GST)
Or expressed as a fusion protein such as a fusion protein with thioredoxin (TRX)
You may. Kits for expression and purification of such fusion proteins are available from New En
from glan BioLab (Beverly, MA), Pharmacia (Piscataway, NJ) and InVitrogen
It is commercially available. Tag a protein with an epitope, and then tag such epitope
Purification can also be achieved by using directed, specific antibodies. It takes 1
Pitopes ("flags") are commercially available from Kodak (New Haeven, CT).
Finally, a hydrophobic RP-HPLC medium such as a pendant methyl or other aliphatic group is added.
One or more reversed-phase high quality liquid chromatography using silica gel with
The protein can be further purified using the-(RP-PLC) step. A few
Or a substantially homogeneous isolation system using various combinations of all of the above purification steps.
Exchange
You can also get protein. The protein thus purified is substantially different from other mammalian proteins.
And is defined as "isolated protein" in the present invention.
The protein of the present invention may be used as a product of a transgenic animal.
Characterized by somatic or germ cells containing the nucleotide sequence
Expressed as an ingredient in milk of transgenic cows, goats, pigs, or sheep
Is also good.
The protein may be produced by known conventional chemical synthesis. The present invention by synthetic means
Methods for constructing proteins are known to those skilled in the art. Synthetically constructed protein sequences are primary
Sharing secondary or tertiary structure and / or conformational properties
Thus, they may have common biological properties, including protein activity. Yo
For the screening of therapeutic compounds and the immunology for the production of antibodies.
Process to replace the biologically active or immunological replacement of the naturally occurring purified protein
May be used.
The protein shown in the present specification has an amino acid sequence similar to that of the purified protein.
Which are modified naturally or by derivatization
Is also good. For example, modification of a peptide or DNA sequence can be accomplished by one of ordinary skill in the art using known methods.
More can be done. The desired modification in the protein sequence depends on the choice in the coding sequence.
Includes amino acid residue changes, substitutions, exchanges, insertions or deletions. For example, up to one
Or more cysteine residues have been deleted or exchanged for another amino acid.
The conformation of the child may be changed. Such changes, replacements, exchanges, insertions, etc.
Methods for deletion or deletion are well known to those skilled in the art (see, for example, US Pat.
No. 8584). Preferably, such changes, substitutions, exchanges, insertions or deletions
It retains the desired activity of white.
Expected to retain protein activity in whole or in part, thus screening
Or other fragments of the protein sequence that may be useful for immunological or other immunological methods.
Derivatives can also be made by those skilled in the art from the disclosure herein. Such modifications are the subject of the present invention.
Is believed to be encompassed byApplications and biological activities
The polynucleotides and proteins of the present invention may have one or more of the following uses or
Exhibiting biological activity (including those associated with the assays cited herein)
Conceivable. The uses or activities described for the proteins of the invention may be attributed to the administration of such proteins.
Supply or use, or a polynucleotide encoding such a protein.
Administration or use (e.g., per vector suitable for gene therapy or DNA transfer)
C).Research applications and usefulness
The polynucleotide provided by the present invention can be used for various purposes depending on the research population.
Can be used. Preferential expression of the corresponding protein for analysis, characterization or therapeutic use
(Constitutively, at a particular stage of tissue differentiation or development, or
As tissue markers (expressed in disease states), as well as Southern gel molecules
As a quantity marker, it can be used to identify chromosomes or map related gene locations.
Compared to the patient's endogenous DNA as a chromosome marker or tag (if labeled)
Probes to identify potential genetic diseases
Genetic fingerprinting to discover new related DNA sequences
As a source of information for obtaining PCR primers for
Probes to subtract known sequences in the process of nucleotide discovery
And select the oligomer to bind to a “gene chip” or other support
To test for expression patterns, use DNA immunization to
To generate antibodies, as well as to generate anti-DNA antibodies, or
Polynucleotides can be used as antigens to induce an immune response
You. Binds or potentially binds another protein (e.g.,
If it encodes a protein that binds to it, identify other proteins that bind
Or interaction trap assays to identify inhibitors of binding interactions
A (for example, as described in Gyuris et al., Cell 75: 791-803 (1993)).
And polynucleotides can be used.
The proteins provided by the present invention are a family of multiple proteins for high-throughput screening.
For assays to determine biological activity, including proteins of interest; production of antibodies or other
A protein (or its receptor) in a biological fluid
Reagents (including labeling reagents) in assays designed to quantitatively determine
The corresponding protein is expressed preferentially (constitutively or with tissue differentiation or
Is expressed at a particular stage of development or in a disease state)
As well as, of course, to isolate the relevant receptor or ligand
You may. Bind when a protein binds or potentially binds to another protein
Proteins to identify other proteins and / or inhibitors of binding interactions
White can be used. Using proteins involved in these binding interactions,
Of peptide or small molecular inhibitor or agonist for binding interaction
Training can also be performed.
Any or all of these research uses may be commercialized as research products.
Can be developed to reagent grade or kit format.
Methods for performing the above uses are well known to those skilled in the art. Open this method
References shown are "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 2nd ed., Cold Spr.
ing Harbor Laboratory Press, Sambrook, J., E.F. Fritsch and T. Maniatis
eds., 1989, and "Methods in Enzymology: Guide to Molecular Cloning Techn.
iques ", Academic Press, Berger, S.L. and A.R. Kimmel eds., 1987
But not limited to these.
Nutritional uses
Use of the polynucleotide and protein of the present invention as a nutrient source or additive
Can be. Such uses include the use as a protein or amino acid additive, and the use as a carbon source.
All uses, as a nitrogen source and as a carbohydrate source.
Not limited to these. In such a case, the protein or polynucleotide of the present invention is
Food, pills, solutions, suspensions or capsules.
It can also be administered as a separate individual or liquid formulation, such as in the form of a liquid. Fine
In the case of an organism, the protein or polynucleotide of the present invention is added to the medium in which the microorganism is cultured.
Can be added.
Cytokines and cell proliferation / differentiation activity
The protein of the present invention has cytokine activity, cell growth activity (induction or inhibition) or cell activity.
Can show blast differentiation activity (induction or inhibition) or in certain cell populations
To induce the production of other cytokines. Many proteins found to date
Sex factors (including all known cytokines) are dependent on one or more factors
Showing activity in cell proliferation assays, and thus the assay
Serves as a convenient way to confirm activity. The activity of the protein of the present invention is determined in cell lines (32D, DA
2, DA1G, T10, B9, B9 / 11, BaF3, MC9 / G, M + (pr
eB M +), 2E8, RB5, DA1, 123, T1165, HT2, CTL
L2, TF-1, Mo7e and CMK, but not limited to)
It is confirmed by any of a number of conventional factor-dependent cell proliferation assays.
The activity of the protein of the invention may be measured, inter alia, by the following method:
Assays for T cell or thymocyte proliferation are described in Current Protocols in I
mmunology, Edby J. E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shev
ach, W Strober, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience
(Chapter 3, In Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19; Chapt
er 7, Immunologic studies in Humans); Takai et al. Immunol. 137: 3494-
3500, 1986; Bertagnolli et al., J. Mol. Immunol. 145: 1706-1712, 1990; Bertagnol
li et al., Cellular Immunology 133: 327-341, 1991; Bertagnolli, et al., J
. Immunol. 149: 3778-3783, 1992; Bowman et al., J. Am. Immunol. 152: 1756-1761
, 1994, but not limited thereto.
Cytokine production and / or expansion of spleen cells, lymph node cells or thymocytes
Assays for propagation are described in Polyclonal T cell stimulation, Kruisbeek, A.M. and
Shevach, E.M. In Current Protocols in Immunology. J.E.e.a. Coligan eds
. Vol
1 pp. 3.12.1-3.12.14, John Wiley and Sons, Toronto. 1994; and Measurement
of mouse and human Interferon γ, Schreiber, R.D. In Current Protocols
in Immunology. J.E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.8.1-6.8.8, John Wiley an
d Sons, Toronto. Includes, but is not limited to, those described in 1994.
Assays for proliferation and differentiation of hematopoietic and lymphogenic cells
ent of Human and Murine Interleukin 2 and Interleukin 4, Bottomly, K., D
avis, L.s. and Lipsky, P.E. In Current Protocols in Immunology. J.E.e.a
. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.3.1-6.3.12, John Wiley and Sons, Toronto. 199
1; deVries et al. Exp. Med. 173: 1205-1211, 1991; Moreau et al., Nature
336: 690-692, 1988; Greenberger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:
2931-2938, 1983; Measurement of mouse and human interleukin 6-Nordan, R.A.
In Current Protocols in Immunology. J.E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.6.
1-6.6.5, John Wiley and Sons, Toronto. 1991; Smith et al., Proc. Natl. Ac
ad. Sci. U.S.A. 83: 1857-1861, 1986; Measurement of human Interleukin 11-B
ennett, F., Giannotti, J., Clark, S.C. and Turner, K. J. In Current Prot
ocols in Immunology. J.E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.15.1 John Wiley a
nd Sons, Toronto. 1991; Measurement of mouse and human Interleukin 9-Cia
rletta, A., Giannotti, J., Clark, S.C. and Turner, K.J. In Current Proto
cols in Immunology. J.E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.13.1, John Wiley a
nd Sons, Toronto. Includes, but is not limited to, those described in 1991.
Assays for the response of T cell clones to antigens (particularly proliferation and
APC-T cell interaction as well as direct
To identify the effects of T cells) is described in Current Protocols in Immunology, Ed by J. et al. E
. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W Strober, Pub
. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Chapter 3, In Vitr
o assays for Mouse Lymphocyte Function; Chapter 6, Cytokines and their ce
llular receptors; Chapter 7, Immunologic studies in Humans); Weinberger et
al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 6091-6095, 1980; Weinberger et al., E
ur. J. Immun.
11: 405-411, 1981; Takai et al., J. Am. Immunol. 137: 3494-3500, 1986; Takai et
al., J. et al. Immunol. 140: 508-512, 1988, including but not limited to
Not exclusively.
Immunostimulatory or suppressive activity
Further, the protein of the present invention has an activity in the assay described in the present specification (not limited thereto).
), And may exhibit immunostimulatory or immunosuppressive activity. Protein is
In various deficiencies and disorders, including severe immunodeficiency complications (SCID)
May be useful, for example, to increase the proliferation of T and / or B lymphocytes
In regulating or down-regulating, and N
Useful in enhancing the cytolytic activity of K cells and other cell populations
It is possible. These immune deficiencies can be genetic and can include viral (
HIV, as well as those caused by bacterial or fungal infections.
Or may be caused by an autoimmune disease. Yo
More specifically, the susceptibility caused by viruses, bacteria, fungi or other infectious agents
Infectious diseases such as HIV, hepatitis virus, herpes virus, mycobacteria
A variety of fungal infections such as Leishmania, Malaria and Candida species
It can be treated with myoprotein. Of course, in this regard, the immune system
When the protein is designated, that is, in the treatment of cancer, the protein of the present invention may be used.
No.
Autoimmune diseases that may be treated using the protein of the present invention include, for example, multiple sclerosis,
Systemic deep elitomades, rheumatoid arthritis, autoimmune pneumonia, Guilla
in-Barre syndrome, autoimmune thyroiditis, insulin-dependent diabetes, myasthenia gravis
, Graft-versus-host disease and autoimmune inflammatory eye diseases. Of the present invention
Such proteins can be used to treat allergic reactions such as asthma or other respiratory disorders and
It may be used to treat symptoms. Other conditions for which immunosuppression is desired (eg, asthma (especially
Allergic asthma) and related respiratory problems) using the protein of the present invention.
You may be treated. Other conditions in which immunosuppression is desired (including, for example, organ transplantation)
The treatment may be performed using the inventive protein.
The proteins of the present invention can also be used to enable an immune response in a number of ways. Da
Unregulation can block or block an immune response already in progress
Or includes interfering with the induction of an immune response.
There may be. By suppressing the T cell response, or
Inhibits activated T cell function by inducing resistance or both
May be. Generally, immunosuppression of T cell responses is an active, non-antigen specific
Process, which requires continuous exposure of T cells to the inhibitor. Resistance and
Means non-responsive or anergic in T cells, generally antigen-specific
In that it persists after exposure to the tolerizing agent has ceased.
Operationally, the lack of a T cell response when exposed to a specific antigen in the absence of a resistance agent
More resistance may be shown.
One or more antigen functions (eg, B lymphocyte antigen function (eg, B7)
Including, but not limited to, down-regulating
For example, blocking high levels of lymphokine synthesis by activated T cells
Useful in tissue, skin and organ transplantation and graft versus host disease (GVHD)
There will be. For example, blocking T cell function reduces tissue destruction in tissue transplantation
Should be. Typically, in tissue transplants, graft rejection is
Initiated by T cells being recognized as foreign and then breaking the graft
A destructive immune response occurs. B7 Lymphocyte Antigen on Immune Cells and Its Native Riga
A molecule that inhibits or blocks interaction with another B lymphocyte antigen (eg,
, B7-1, B7-3), in the form of a monomer having the activity of
Or a single, soluble, monomeric peptide having B7-2 activity)
Pre-implant administration is essential for immune cells without transmitting responsive costimulatory signals.
May induce binding of the molecule to its ligand. B lymphocytes in this regard
Blocking antigen function depends on cytokine synthesis by immune cells such as T cells.
It interferes with growth and thus acts as an immunosuppressant. Besides, lack of co-stimulation
May be sufficient to cause a loss of T cell response. B lymphocyte antigen blocking test
The induction of long-term tolerance by drugs allows repeated administration of these blocking reagents.
Must
The need can be avoided. To achieve sufficient immunosuppression or tolerance in the subject
May also need to block the function of the B lymphocyte antigen combination
.
Individual blocking in preventing organ transplant rejection or GVHD
Evaluate the effectiveness of the reagents using animal models that can predict their effectiveness in humans
be able to. Examples of suitable systems that can be used include allografts in rats and allografts.
Xenogeneic pancreatic islet cell grafts in mice and
Was used to test the immunosuppressive effect of the CTLA4Ig fusion protein (Lenscho
w et al., Science 257: 789-792 (1992) and Turka et al., Proc Natl. Acad.
Sci. USA, 89: 11102-11105 (1992)). In addition, GVHD mice
Mimodel (Paul ed., Fundamental Immunology, Ravan Press, New York, 1989,
pp. 846-847), using a B lymphocyte antibody against the progression of the disease in vivo.
The blocking effect of the original function can be determined.
In addition, blocking antigen function is therapeutically useful for treating autoimmune diseases
It can be. Many autoimmune diseases are responsive to self-
Inappropriate activity of T cells to promote the production of cytokines and autoantibodies involved in
It is the result of sexualization. Interfering with the activation of self-reactive T cells reduces the symptoms of the disease.
Less or may be eliminated. Disrupting B lymphocyte antigen receptor: ligand interaction
Inhibit T cell activation using administration of a reagent that blocks T cell costimulation
Production of autoantibodies or T cell-derived cytokines that can harm and participate in the disease process
Can interfere with life. In addition, blocking reagents can provide long-term remission of disease
It may induce antigen-specific resistance of autoreactive T cells that may lead. Autoimmune disease
The effectiveness of blocking reagents in the prevention or amelioration of
Can be determined using a number of well-characterized animal models
You. Examples are murine experimental autoimmune encephalitis, MRLlpr / lpr mice or N
Systemic deep erythematosus and murine self-immunity in ZB hybrid mice
Plague collagen arthritis, diabetes in NOD mice and BB rats, and
Experimental rat myasthenia gravis (Paul ed., Fundamental Immunology, Raven Press)
, New York, 1989, pp. 840-856).
Antigen function as a means of up-regulating the immune response (preferred
Alternatively, up-regulation of B lymphocyte antigen function) is also therapeutically useful.
Up-regulation of the immune response may be
May be in a form that eliminates the initial immune response. For example, B lymphocyte antigen function
Enhancing the immune response by stimulating may be useful in the case of a viral infection.
In addition, systemic viral such as influenza, common cold, and encephalitis
Disease may be ameliorated by systemic administration of a stimulatory form of B lymphocyte antigen
.
Alternatively, T cells are taken from a patient and tagged with ACPs that express a peptide of the invention.
Co-stimulate T cells in vitro with added viral antigens, or
Is combined with a stimulating form of the soluble peptide of the invention and then activated in vitro
Re-introduced T cells into the patient, the anti-virus in infected patients
It may enhance the immune response. Another method of promoting an antiviral immune response is
Infected cells are taken from the patient and the nucleic acid encoding the protein of the invention described herein is
To allow cells to express all or part of the protein on their surface.
And then reintroduce the transfected cells into the patient.
U. The infected cells then transmit a costimulatory signal to the T cells in vivo.
Could thereby activate T cells.
In another application, antigen function (preferably B lymphocyte antigen function)
Up-regulation or promotion may be useful in inducing tumor immunity
. Transfection with a nucleic acid encoding at least one peptide of the invention
Tumor cells (eg, sarcoma, melanoma, lymphoma, leukemia, neuroblastoma, cancer
Tumor) can be administered to a subject to overcome tumor-specific resistance in the subject. Desired
Transfect tumor cells to express a combination of peptides
be able to. For example, a tumor cell obtained from a patient is transformed into a peptide having B7-2-like activity.
Peptide having only tide or B7-1-like activity and / or B7-3-like activity
Expression vector that directs expression in combination with
Can be transfected. Transfected tumor cells
To the patient to express the peptide on the surface of the transfected cells.
Let
Alternatively, for transfection in vivo using gene therapy
Tumor cells can be targeted.
Existence of the peptide of the present invention having B lymphocyte antigen activity on the surface of tumor cells
Provides the necessary co-stimulatory signals for T cells to provide T cell-mediated trafficking.
Induces an immune response against the transfected tumor cells. In addition, MHC
Tumor cells lacking class I or MHC class II molecules, or sufficient MHC
Tumor cells that cannot reexpress class I or MHC class II molecules are
I α chain protein and βTwoMicroglobulin protein or MHC class II α chain or
Or all or part of the MHC class II β chain protein (eg,
Transfection with the nucleic acid encoding the
Class I or class II MHC proteins can be expressed on the cell surface
. A marker having the activity of a B lymphocyte antigen (eg, B7-1, B7-2, B7-3)
Expression of the appropriate class I or class II HMC in combination with the peptide is
Elicits an immune response to transfected tumor cells mediated by vesicles
Lead. If desired, expression of MHC class II binding proteins, such as invariant chains, can be blocked.
The gene coding for the antisense construct to be detected can be linked to the activity of the B lymphocyte antigen.
Co-transfection with DNA encoding a peptide having
To promote the presentation of tumor-associated antigens and induce tumor-specific immunity. Therefore
Induction of an immune response mediated by T cells in a human subject can be caused by tumors in the subject.
It may be sufficient to overcome tumor-specific resistance.
The activity of the protein of the invention may be measured, inter alia, by the following method:
Suitable assays for thymocyte or spleen cell cytotoxicity are described in Current Protocols
in Immunology, Ed by J. E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M
. Shevach, W Strober, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Inters
cience (Chapter 3, In Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19
; Chapter 7, Immunologic studies in Humans); Herrmann et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 78: 2488-2492, 1981; Herrmann et al., J. Am. Immunol. 128: 1968-
1974, 1982; Handa et al., J. Mol. Immunol. 135: 1564-1572, 1985; Takai et al., J
. Immunol.
137: 3494-3500, 1986; Takai et al., J. Am. Immunol. 140: 508-512, 1988; Herrmann
et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 2488-2492, 1981; Herrmann et al.,
J. Immunol. 128: 1968-1974, 1982; Handa et al., J. Am. Immunol. 135: 1564-1572
1985; Takai et al. Immunol. 137: 3494-3500, 1986; Bowman et al., J. Am. V
irology 61: 1992-1998; Takai et al., J. Am. Immunol. 140: 508-512, 1988; Bertagn
olli et al., Cellular Immunology 133: 327-341, 1991; Brown et al., J. Am. Immu
nol. 153: 3079-3092, 1994, including but not limited to
No.
Updates for T cell-dependent immunoglobulin response and isotype switching
Say (especially to modulate the T cell dependent antibody response to a Th1 / Th2 profile
Influencing proteins are identified in Maliazewski, J. Immunol. 144: 3028-3033, 1990.
Includes, but is not limited to, the assays described, and further enhances B cell function.
Say, In vitro antibody production, Mond, J.J. and Brunswick, M. In Current
Protocols in Immunology J.E.Coligan eds.Val 1 pp.3.8.1-3.8.16, John Wile
y and Sons, Tronto 1994.
Mixed lymphocyte reaction (MLR) assays (especially primarily Th1 and CTL
Identify the protein that produces the answer), Current Protocols in Immunology, Ed by
J. E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W Strober
, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Chapter 3, In
Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19; Chapter 7, Immunolo
gic studies in Humans); Takai et al. Immunol. 137: 3494-3500, 1986; Tak
ai et al. Immunol. 140: 508-512, 1988; Bertagnolli et al., J. Am. Immunol
. 149: 3778-3783, including but not limited to the assays described in 1992.
.
Dendritic cell-dependent assays (especially for dendritic cells that activate untreated T cells)
Identify proteins expressed from) by Guery et al., J. Am. Immunol. 134: 536-544,
1995; Inaba et al., Journal of Experimental Medicine 173: 549-559, 1991; Ma
catonia et al., Journal of Immunology 154: 5071-5079, 1995; Porgador et al.
., Journal of Experimental Medicine 182: 255-260, 1995; Nair et al., Journal
al of Virology 67: 4062-4069, 1993; Huang et al., Science 264: 961-965, 199
4; Macatonia et
al., Journal of Experimental Medicine 169: 1255-1264, 1989; Bhardwaj et al.
., Journal of Clinical Investigation 94: 797-807, 1994; and Inaba et al.,
Journal of Experimental Medicine 172: 631-640, 1990
Including but not limited to:
Lymphocyte survival / apoptosis assays (especially apoptosis after superantibody induction)
Identify Proteins That Prevent Lysis and that Regulate Lymphocyte Homeostasis
) Is Darzynkiewicz et al., Cytometry 13: 795-808, 1992; Gorczyca et al.,
Leukemia 7: 659-670, 1993; Gorczyca et al., Cancer Research 53: 1945-1951,
1993; Itoh et al., Cell 66: 233-243, 1991; Zacharchuk, Journal of Immunolog.
y 145: 4037-4045, 1990; Zamai et al., Cytometry 14: 891-897, 1993; Gorczyca
et al., International Journal of Oncology 1: 639-648, 1992.
Includes, but is not limited to:
Early stage T cell commitment and development assays
Antica et al., Blood 84: 111-117, 1994; Fine et al., Cellular Immunology 155:
111-122, 1994; Galy et al., Blood 85: 2770-2778, 1995; Toki et al., Proc. Natl. A
cad.Sci. USA 88: 7548-7551, 1991, including but not limited to
Absent.Hematopoietic regulatory activity
The proteins of the present invention are useful in regulating hematopoiesis and are therefore
Useful in the treatment of bulb deficiency. Colony forming cells or factor-dependent cell lines
Even minimal biological activity in support of has been implicated in regulating hematopoiesis.
For example, to support the growth of erythroid progenitor cells alone, or to
In combination with, for example, treatment of various anemias, or release
Production of erythroid progenitors and / or erythroblasts in combination with radiation therapy / chemotherapy
Stimulating viability; proliferation of bone marrow cells such as granulocytes and monocytes / macrophages
Support (ie, traditional CSF activity), eg, in combination with chemotherapy
In addition, it is useful in preventing subsequent myelosuppression;
Breeding, then supporting platelet growth, and thereby thrombocytopenia
It is useful for preventing or treating various platelet diseases, and
Used instead of or in addition to platelet infusion; and / or hematopoietic stem
Cells (mature to all of the above hematopoietic cells, and therefore various stem cell diseases (
Diseases that are usually treated by transplantation, such as aplastic anemia and development
It is useful for supporting the growth of the hemoglobinuria
And even after radiation / chemotherapy in vivo or ex vivo (ie,
Or combined with bone marrow transplantation) or genetically engineered for gene therapy
It is also useful in later repopulation of the stem cell compartment as normal cells.
In particular, the activity of the protein of the present invention may be measured by the following method.
Assays suitable for proliferation and differentiation of various hematopoietic cell lines have already been cited
.
Assays for embryonic stem cell differentiation, specifically identifying proteins that affect embryonic hematopoiesis
) Is Johansson et al. Cellular Biology 15: 141-151, 1995; Keller et al., Mol
ecular and Cellular Biology 13: 473-486,1993; McClanahan et al., Blood81: 29
Includes, but is not limited to, the assays described in 03-2915,1993.
Assays for stem cell survival and differentiation, specifically identifying proteins that regulate lympho-hematopoiesis
) Is described in Methylcellulose colony forming assays, Freshney, M.G. In Cultu
re of Hematopoietic Cells. R.I. Freshney, et al. eds. Vol pp. 265-268, W
iley-Liss, Inc., New York, NY. 1994; Hirayama et al., Proc. Natl. Acad. S
ci. USA 89: 5907-5911, 1992; Primitive hematopoietic colony forming cells
with high proliferative potential, McNiece, I.K. and Briddell, R.A. In C
ulture of Hematopoietic Cells. R.I. Freshney, et al. eds. Vol pp. 23-39
, Wiley-Liss, Inc., New York, NY. 1994; Neben et al., Experimental Hemato
logy 22: 353-359, 1994; Cobblestone area forming cell assay, Ploemacher, R
.E. In Culture of Hematopoietic Cells. R.I. Freshney, et al. eds. Vol pp
. 1-21, Wiley-Liss, Inc .., New York, NY. 1994; Long term bone marrow cult
ures in the presence of stromal cells, Spooncer, E., Dexter, M. and Alle
n, T. In Culture of Hematopoietic Cells. R.I. Freshney, et al. eds. Vol
pp. 163-179, Wiley-Liss,
Inc., New York, NY. 1994; Long term culture initiating cell assay, Suther
land, H.J. In culture of Hematopoietic Cells. R.I. Freshney, et al. eds
. Vol pp. 139-162, Wiley-Liss, Inc., New York, NY. In 1994,
Includes but is not limited to Say.
Tissue proliferation activity
The protein of the present invention may be used to grow or regenerate bone, cartilage, keys, ligaments and / or nerve tissue.
And compositions used for wound healing and tissue repair, further including burns, lacerations
And has utility in the treatment of ulcers.
Book that induces cartilage and / or bone growth in an environment where bone is not formed normally
Inventive proteins cure healing of fractures and cartilage damage or defects in humans and other animals
There are applications in Such formulations using the protein of the present invention include closed fractures and
It is useful for reducing open fractures and improving fixation of artificial joints. Bone
De novo bone formation induced by plasticizers can be congenital, traumatic or tumor
Contributes to the repair of craniofacial deficits induced by radiological resection and further
It is also useful in general surgery.
The proteins of the present invention may be used in the treatment of periodontal disease and other tooth restoration processes. Heel
Agents provide an environment to attract osteogenic cells, stimulate the growth of osteogenic cells,
Alternatively, it can induce osteogenic cell precursor differentiation. For example, the protein of the present invention
And / or mediated by inflammatory or inflammatory processes
Block the process of tissue destruction (collagenase activity, osteoclast activity, etc.)
This may be useful in the treatment of osteoporosis or osteoarthritis.
Another category of tissue developmental activity that may be attributed to the proteins of the invention is the key.
/ Ligament formation. Environments where key / ligament-like or other tissues are not formed properly
The protein of the present invention that induces the formation of such a tissue in humans is useful in humans and other animals.
Applied to healing of key or ligament lacerations, deformations and other key or ligament defects
You. Such a formulation using a key / ligament-like tissue-inducing protein may be used for key or ligament-like tissue.
To prevent key or ligament fixation to bone or other tissue
May be. The de novo key / ligament-like tissue formation induced by the composition of the present invention
Sexual, traumatic, or oncological resection-induced craniofacial defects
Cosmetic surgery for contributing to the repair and also for attaching or repairing keys or ligaments
It is also useful in The composition of the present invention attracts key- or ligament-forming cells
Provide an environment for stimulating the proliferation of key- or ligament-forming cells,
Induction of precursors of band-forming cells or tissue repair when returned to vivo.
Ex vivo can induce the growth of key / ligament cells or progenitors ex vivo.
The compositions of the present invention can be used to treat keratitis, carpal tunnel syndrome and other key or ligament defects.
Is also useful. The composition of the present invention may comprise a suitable matrix and / or
It may include a sequestering agent, such as a well-known carrier.
The protein of the present invention is used for proliferation of nerve cells and regeneration of nerve and brain tissue,
, Central and peripheral nervous system diseases and neuropathy and mechanical diseases and
Treatment of traumatic diseases (including degeneration, death or trauma to nerve cells or nerve tissue)
Can also be useful for treatment. More specifically, peripheral nerve injury, peripheral neuropathy and
Diseases of the peripheral nervous system such as neuropathy and localized neuropathy, and Alzheimer's disease
, Parkinson's disease, Huntington's disease, amyotrophic lateral spinal sclerosis and Shy-Drager
Proteins may be used in the treatment of diseases of the central nervous system, such as the syndrome. By the present invention
Additional conditions that may be treated include mechanical disorders such as spinal cord disorders and traumatic disorders
And cerebrovascular diseases such as head trauma and stroke. Chemotherapy or other
Peripheral neuropathy caused by medical therapy of
It is treatable.
The protein of the present invention may also be used for pressure ulcer, ulcer associated with vascular dysfunction,
More preferred for non-healing wounds, including (but not limited to) wounds due to trauma
It may also be useful for promoting quick closure.
The protein of the present invention includes organs (eg, pancreas, liver, intestine, kidney, skin, endothelium).
), Muscle (smooth, skeletal or cardiac) and vascular (including vascular endothelium) tissue
To promote the development of other tissues or the proliferation of cells that make up such tissues.
Activity. Part of the desired effect is to reduce fibrotic scarring.
Positive
It may be regeneration of a normal tissue. The proteins of the present invention may also exhibit angiogenic activity.
The protein of the present invention is useful for protecting or regenerating intestine, and for fibrosis of lung or liver,
Treatment of tissue reperfusion injury and symptoms caused by systemic cytokine damage
Can also be useful for treatment.
A protein of the present invention, which promotes or suppresses differentiation of the above-mentioned tissue from precursor tissue or cells;
Alternatively, it may be useful for suppressing the growth of the tissue.
The activity of the protein of the invention may be measured, inter alia, by the following method:
Assay for tissue regeneration activity is described in WO 95/16035 (bone, cartilage, key)
International Publication WO95 / 05846 (nerves, neurons); International Publication WO91 / 05
7491 (skin, endothelium), including but not limited to
.
Wound healing activity assays are described in Maibach, HI and Rovee, DT, eds., Year Book M
edical Publishers, Inc., Chicago (Eaglstein and Mertz, J. Invest. Dermato
l 71: 382-384 (modified by 1978)).
Not limited to these.
Activin / inhibin activity
Also, the protein of the present invention may exhibit activin- or inhibin-related activity. I
Inhibins are characterized by their ability to inhibit the release of follicle stimulating hormone (FSH),
Activins are characterized by their ability to stimulate the release of follicle stimulating hormone (FSH).
You. Therefore, the protein of the present invention may be used alone or as a member of the inhibin α family.
In the form of a heterodimer with a female mammal, which reduces the fertility of a female mammal
May be useful as an infertility drug based on the ability of inhibin to reduce spermatogenesis in animals
You. Administration of sufficient amounts of other inhibins may result in infertility in these mammals.
Can be guided. Alternatively, the proteins of the present invention may be homodimers or
Is a heterodimer with other protein subunits of the inhibin-β group
Based on the ability of activin molecules to stimulate FSH release from anterior pituitary cells
And may be useful as therapeutic agents to induce fertility. For example, U.S. Patent No.
See 4798885. In addition, the protein of the present invention can be used in sexually immature mammals.
It may be useful for improving breeding and, as a result, cattle, sheep and pigs
Livestock have increased fertility during their lifetime.
The activity of the protein of the invention may be measured, inter alia, by the following method:
Assays for activin / inhibin activity are described in Vale et al., Endocrinology 91: 5.
62-572,1972; Ling et al., Nature 321: 779-782,1986; Vale et al., Nature 321: 7
76-779, 1986; Mason et al., Nature 318: 659-663, 1985; Forage et al., Proc. Natl
Acad. Sci. USA 83: 3091-3095, 1986, including but not limited to
No.
Chemotaxis / chemokinesis activity
The protein of the present invention can be used for mammalian cells such as monocytes, neutrophils, T cells, mast cells, and eosinophils.
Chemotactic or chemokinetic activity of spheres and / or endothelial cells (eg,
Acting as in). Uses chemotaxis and chemokinesis proteins
And recruit or attract the desired cell population to the desired site of action. Chemotaxis
Alternatively, chemokinesis proteins may be used to treat and localize tissue injuries and other trauma.
It is particularly advantageous for treating localized infections. For example, tumors of lymphocytes, monocytes or neutrophils
Attraction to tumor or infected site may improve immune response to tumor or infectious agent
You.
Certain proteins or peptides have chemotactic activity for specific cell populations.
Direct or indirect, if stimulated, the direction or kinetics of such cell populations.
Command movement. Preferably, the protein or peptide has a directed movement of the cell.
Have the ability to directly stimulate Specific proteins have chemotactic activity on cell populations
Is used to determine whether such proteins or peptides have known chemotaxis
Can be easily determined.
The activity of the protein of the invention may be measured, inter alia, by the following method:
Assay for chemotaxis activity (an assay to identify proteins that induce or interfere with chemotaxis)
Say) describes the ability of proteins to induce cell translocation across the membrane as well as the ability of one cell population to
Includes assays that measure the ability of a protein to induce adhesion to other cell populations. Moving
Assays suitable for and adhesion are described in Current Protocols in Immunology, Ed by J.E.
Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W. Strober, Pub. G
reene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Chapter 6.12, Measur
ement of alpha and beta Chemokines 6.12.1-6.12.28; Taub et al. J. Clin. I
nvest. 95: 1370-1376, 1995; Lind et al. APMIS 103: 140-146, 1995; Muller et
al Eur. J. Immunol. 25: 1744-1748; Gruber et al. J. of Immunol. 152: 5860-5
867, 1994; Johnston et al. J. of Immnunol. 153: 1762-1768, 1994.
Include, but are not limited to,
Hemostasis and thrombolytic activity
Further, the protein of the present invention may exhibit hemostatic or thrombolytic activity. As a result
Thus, such proteins are useful in the treatment of various clotting disorders, including genetic disorders such as hemophilia.
Or in the treatment of injury caused by trauma, surgery or other causes.
Blood clots and other hemostasis. The protein of the present invention may be used to dissolve or form thrombus.
Growth inhibition and the symptoms resulting therefrom (eg, myocardial infarction and central nervous system blood)
It may be useful in the treatment and prevention of vascular infarcts (eg, stroke).
The activity of the protein of the invention may be measured, inter alia, by the following method:
Assays for haemostatic and thrombolytic activity are described by Linet et al., J. Clin. Pharmacol. 26: 1.
31-140, 1986; Burdick et al., Thrombosis Res. 45: 413-419, 1987; Humphrey et al.
., Fibrinolysis 5: 71-79 (1991); Schaub, Prostaglandins 35: 467-474, 1988
But not limited to:
Receptor / ligand activity
Further, the protein of the present invention may be a receptor, a receptor ligand or a receptor / ligand interaction.
May exhibit activity as inhibitors or agonists. Such receptors and
Examples of gand are cytokine receptors and their ligands, receptor kinases and
And their ligands, receptor phosphatases and their ligands, cells
Receptors involved in cell interactions and their ligands (cell adhesion molecules (SELEC
, Integrin and their ligands) and antigen presentation, antigens
Receptor / ligand pairs involved in the development of cognitive, cellular and humoral immune responses
Inclusive), but not limited to. Receptors and ligands are related receptors
Screening of potential peptide or small molecule inhibitors for body / ligand interactions
It is also useful for training. The protein of the present invention (receptor and ligand fragments
Include, but are not limited to, blocking the receptor / ligand interaction itself.
May be useful as a harmful agent.
The activity of the protein of the invention may be measured, inter alia, by the following method:
Suitable assays for receptor-ligand activity are described in Current Protocols in Immunolog.
y, Ed by J.E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W.S
trober, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Chapter
7.28, Measurement of Cellular Adhesion under static conditions 7.28.1-7
.28.22), Takai et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 6864-6868, 1987; Bie
rer et al. Exp. Med. 168: 1145-1156, 1988; Rosenstein et al., J. Am. Exp.
Med. 169: 149-160 1989; Stoltenborg et al., J. Am. Immunol. Methods 175: 59-68
, 1994; Stitt et al., Cell 80: 661-670, 1995.
Not limited to these.
Anti-inflammatory activity
The protein of the present invention can exhibit anti-inflammatory activity. Anti-inflammatory activity is involved in the stimulus response
By stimulating cells, cell-cell interaction (eg, attachment)
Chemotaxis of cells involved in the inflammatory process by inhibiting or promoting
By inhibiting or promoting, by inhibiting or promoting cell extravasation,
Alternatively, it stimulates the production of other factors that more directly inhibit or promote the inflammatory response or
Is exhibited by suppressing. Symptoms of inflammation using a protein showing such activity (
Includes chronic or acute symptoms, infection-related inflammation (including septic shock, sepsis)
I
Or systemic inflammatory response syndrome (SIRS)), ischemia-reperfusion injury, endo
Fatal injury from toxins, arthritis, hyperacute rejection mediated by complement, kidney
Inflammation, lung injury induced by cytokines or chemokines, inflammatory bowel disease
, Crohn's disease or overproduction of cytokines such as TNF or IL-1?
(Including but not limited to diseases resulting from them). The present invention
Proteins are used to treat anaphylaxis and hypersensitivity to antigenic substances or materials
Can also be useful.
Cadherin / tumor invasion inhibitory activity
Cadherin is a calcium-dependent adhesion molecule,
Plays a major role in determining specific cell types, in particular
I think that the. Loss or alteration of normal cadherin expression is associated with tumor growth and metastasis.
It can induce a change to the relevant cell adhesion properties. Cadherin dysfunction is vulgaris
Pemphigus and pemphigus foliaceus (autoimmune cutaneous blistering disease), Crohn's disease, and
It is also involved in other human diseases, such as some developmental abnormalities.
The cadherin superfamily contains over 40 members, each of which is distinct.
Expression patterns. All members of the superfamily
Have a common conserved extracellular repeat (cadherin domain), but
There are structural differences in other parts. Cadherin domain binds to calcium
Calcium is necessary for their attachment as they combine to form their tertiary structure.
You. Few amino acids in the first cadherin domain are due to homophilic attachment
Modification of this recognition site alters the specificity of cadherin as it provides the basis for
May not only recognize themselves, but also
Can bind to cadherin. In addition, some cadherins are
It is also involved in heterophilic attachment to doherin.
E-cadherin, one of the members of the cadherin superfamily,
It is expressed in cell types. Pathologically, E-cadherin expression is
If lost, the malignant cells become invasive and the cancer metastasizes. E-cadhedrine
Transfection of a polynucleotide that expresses
Restores cell morphology, restores adherence to cells and to other substrates,
By reducing the rate of cell growth and dramatically reducing the growth of anchorage-dependent cells,
The changes associated with cancer were reversed. Thus, re-introducing E-cadhedrin expression
Returns the carcinoma to a less advanced stage. Other cadherins are also used in other tissue
It may have the same invasive inhibitory role in Ip-derived carcinomas. Soy sauce
, A protein of the present invention having cadherin activity, and a gene encoding such a protein
The bright polynucleotides can be used to treat cancer. Such protein or poly
Introducing nucleotides into cancer cells may provide normal cadherin expression.
Can reduce or eliminate the cancerous changes observed in these cells
.
Cancer cells are also known to express cadherin in a different tissue type than originally intended.
Therefore, these cancer cells can invade different tissues and metastasize. Mosquito
The protein of the present invention having doherin activity, and the polynucleotide of the present invention encoding such a protein
Nucleotide replaces cadherin, which is inappropriately expressed in these cells.
Restores normal cell adhesion properties and reduces or eliminates cell propensity to metastasize
sell.
Further, the protein of the present invention having cadherin activity, and encoding such a protein
Antibodies that recognize and bind to cadherin using the polynucleotides of the present invention
You can also get. Tumor cell cadherds inappropriately expressed using such antibodies
Can block cell adhesion and prevent cells from forming tumors elsewhere.
Wear. Such anti-cadhedrin antibodies can be used to evaluate cancer grade, pathological type, and prognosis.
Can be used as a marker for In other words, when the cancer progresses, cadherin
The expression is reduced and this cadherin expression can be
Can be detected.
A fragment of the protein of the present invention having cadherin activity, preferably cadherin
Of the present invention encoding such protein fragments
Use polynucleotides to bind to cadherin, producing undesirable effects
By blocking cadherin binding, it can also block cadherin function.
Wear. Furthermore, a fragment of the protein of the present invention having cadherin activity, preferably
Truncated soluble mosquitoes known to be stable in the circulatory system of cancer patients
Dohedrin fragments and polynucs encoding such protein fragments
Reotide can also be used to disrupt correct cell-cell attachment.
Assays for cadherin adhesion and entry inhibitory activity are described in Hortsch et al. J Bio
l Chem 270 (32): 18809-18817, 1995; Miyaki et al. Oncogene 11: 2547-2552, 19
95; Ozawa et al. Cell 63: 1033-1038, 1990.
Not limited to these.
Tumor inhibitory activity
In addition to the activities described above for immunological treatment or prevention of tumors, the protein of the present invention
Can exhibit antitumor activity. Certain proteins directly or indirectly affect tumor growth (eg,
(Via ADCC). Certain proteins are found in tumor or progenitor tissue
Act to inhibit the formation of tissue necessary to support tumor growth (eg, angiogenesis)
Other factors, agents or cell types that inhibit tumor growth
Factors, agents or agents that cause the production of tumors or promote tumor growth
Alternatively, tumor-inhibiting activity may be exhibited by removing or inhibiting cell types.
Other activities
The proteins of the present invention may exhibit one or more of the following additional activities or effects:
: Infections, including but not limited to bacteria, viruses, fungi and other parasites
Sex factor killing; height, weight, hair color, eye color, skin or other tissue pigmentation
Or the size or form of an organ or body part (eg, breast augmentation or vice versa)
Effects on body characteristics (suppression or promotion), including: fat, protein or charcoal consumed
Effects of hydrate on digestion; appetite, libido, stress, cognition (including cognitive disorders), depression
Behavioral characteristics, including (but not limited to) depressive disorders and violent behavior
Effects; providing analgesic or other pain relief; in non-hematopoietic lineages
Promoting differentiation and proliferation of embryonic stem cells; hormonal or endocrine activity;
enzyme
Correcting deficiencies and treating related disorders; for hyperproliferative disorders (eg, psoriasis)
Treatment; immunoglobulin-like activity (eg, the ability to bind antibodies or complement);
And such a protein acting as an antigen in a vaccine composition or such a protein.
Ability to generate an immune response to other substances or entities that cross-react.Administration and dose
The protein of the invention (from any source, recombinant and non-recombinant)
Methods, including, but not limited to, those described above) with a pharmaceutically acceptable carrier.
They may be used together in a pharmaceutical composition. Such compositions comprise (in addition to the protein and carrier,
), Diluents, fillers, salts, buffers, stabilizers, solubilizers, and the like.
It may contain other substances well known in the above. The term "pharmaceutically acceptable"
A non-toxic substance that does not interfere with the effectiveness of the biological activity of the active ingredient. Characteristics of carrier
Sex depends on the route of administration. The pharmaceutical composition of the present invention comprises M-CSF, GM-CSF, T
NF, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-
7, IL-8, IL-9, IL-10, 1L-11, IL-12, IL-13,
IL-14, IL-15, IFN, TNF0, TNF1, TNF2, G-CSF
, Meg-CSF, thrombopoietin, stem cell factor, and erythropoietin
Contain cytokines, lymphokines, or other hematopoietic factors, such as
Good. The pharmaceutical composition further enhances the protein activity or its activity in therapy.
Or it may contain other agents that supplement its usefulness. Such additional factors and
A synergistic effect with the protein of the present invention by containing
Or minimize side effects. Conversely, certain cytokines
In the formulation of other hematopoietic, thrombolytic or antithrombotic, or anti-inflammatory drugs
By containing the protein of the present invention, cytokines, lymphokines, other hematopoietic factors, thrombolytics
Side effects of anti-thrombotic or anti-thrombotic factors or anti-inflammatory agents may be minimized.
The protein of the present invention may be a multimer (for example, a heterodimer or a homodimer) or
It may be active by itself or in a complex with other proteins. As a result,
The pharmaceutical composition comprises such a multimeric or complexed form of the protein of the present invention.
You may.
The pharmaceutical composition of the present invention may be in the form of a complex of the protein of the present invention and a protein or peptide antigen.
It may be in a state. Protein and / or peptide antigens can be
It will deliver a stimulus signal to the lymphocytes. B lymphocytes have their surface immunity
Will respond to antigen through globulin receptors. T lymphocytes are MHC proteins
Will respond to the antigen through the T cell receptor (TCR).
MHC and host cell class I and class II MHC genes
Structurally related proteins, including those that have been loaded, are peptide-antigens against T lymphocytes.
It will help to present the original. The antigen component was a purified MHC-peptide complex only.
Or with co-stimulatory molecules that can send signals directly to T cells
Is done. Alternatively, it binds to surface immunoglobulins and other molecules on B cells
The resulting antibodies can also be mixed with the pharmaceutical compositions of the present invention.
The pharmaceutical composition of the present invention may be in the form of liposome, in which the protein of the present invention is contained.
And other pharmaceutically acceptable carriers, amphipathic agents such as lipids (mice in aqueous solution).
Agglomerate form, such as insoluble monolayer, liquid crystal or lamellar layer)
Have been combined. Suitable lipids for liposome formulations are monoglycerides, diglycerides
, Sulfatizide, lysolecithin, phospholipids, saponins, bile acids, etc.
However, it is not limited to these. The preparation of such liposome formulations is within the level of ordinary skill in the art.
And, for example, U.S. Pat. Nos. 4,235,871, 4501728, 4837028,
And 4737323, all of which are described herein by reference.
Is considered).
As used herein, the term "therapeutically effective amount" refers to a significant patient benefit, e.g.,
Sufficient pharmaceutical composition or method to show improvement in symptoms of the condition, healing, increased rate of healing
It means the total amount of each active ingredient. Used for individual active ingredients administered alone
When used, the term refers only to that component. When used in combinations of active ingredients,
The total amount of active ingredients that produces a therapeutic effect, regardless of whether
U.
In practicing the treatment method of the present invention, a disease to be treated with a therapeutically effective amount of the protein of the present invention.
Administered to a mammal having a morphology. According to the method of the present invention, alone or with a cytokine
The protein of the invention together with other therapeutic agents such as lymphokines or other hematopoietic factors.
It may be administered. One or more cytokines, lymphokines or other
When co-administered with hematopoietic factors, the protein of the present invention may be administered with cytokines, lymphokines, and other
It may be administered simultaneously or sequentially with blood, thrombolytic or antithrombotic factors. Gradually
When administering the next dose, the attending physician will ask for cytokines, lymphokines, other hematopoietic factors, blood
Appropriate administration of thrombolytic factor or antithrombotic factor in combination with the protein of the present invention
Will determine the order.
The administration of the protein of the present invention in the pharmaceutical composition of the present invention or used in the practice of the present invention can be carried out by various conventional methods.
Administration methods, e.g., oral feeding, inhalation, or intradermal, subcutaneous, or intravenous injection.
I can. Intravenous injection into a patient is preferred.
When a therapeutically effective amount of the protein of the present invention is orally administered, the protein of the present invention may be in the form of a tablet or capsule.
, Powder, solution or elixir form. When administered in tablet form,
The pharmaceutical composition may further comprise a solid carrier such as gelatin or an adjuvant.
May be. Tablets, capsules, and powders contain about 5 to 95% of a protein of the present invention,
It preferably contains about 25-90% of the protein of the invention. Place to administer in liquid form
Oil, water, petroleum, oils of animal or vegetable origin, such as peanut oil, mineral oil
, Soybean oil, sesame oil, or synthetic fats and oils may be added. Pharmaceutical group in liquid form
The composition can be a saline solution, dextrose or other saccharide solution, or glycol
(Eg, ethylene glycol, propylene glycol or polyethylene glycol)
Recall). Pharmaceutical compositions when administered in liquid form
Is about 0.5 to 90% by weight of the protein of the present invention, preferably about 1 to 50%
Contains invention proteins.
When a therapeutically effective amount of the protein of the present invention is administered by intravenous, intradermal or subcutaneous injection,
The protein of the present invention may be in the form of a pyrogen-free, parenterally acceptable aqueous solution
. Of such a parenterally acceptable protein solution having the appropriate pH, isotonicity, and stability.
Preparation is within the skill of the art. Preferred medicament for intravenous, intradermal or subcutaneous injection
The composition comprises, in addition to the protein of the present invention, sodium chloride for injection, Ringer's solution,
De
Contains dextrose, dextrose and sodium chloride solution for injection, lactic acid for injection
It should contain Ringer's solution, or other carriers known in the art.
The pharmaceutical composition of the present invention may comprise a stabilizer, a preservative, a buffer, an antioxidant,
It may contain other additives known to the public.
The amount of the protein of the invention in the pharmaceutical composition of the invention depends on the nature and severity of the condition to be treated,
As well as the nature of the treatment the patient has already received. Ultimately, your doctor
Each patient will determine the amount of the protein of the invention to be treated. First, the doctor in charge
Administer an amount of the protein of the invention and observe the patient's response. Until optimal therapeutic effects are obtained
Higher doses of the protein of the present invention may be administered and may be used once optimal therapeutic effect is obtained.
Do not increase the volume further. Various pharmaceutical compositions for performing the methods of the present invention include
About 0.01 μg to about 100 mg of the protein of the present invention (preferably,
About 0.1 μg to about 10 mg / kg body weight, more preferably 1 kg / kg body weight
0.1 to about 1 mg of the protein of the present invention.
The duration of treatment by intravenous administration using the composition of the present invention depends on the severity of the disease to be treated.
And will vary depending on the condition and response of each patient. Each of the proteins of the present invention
The duration of application will range from 12 to 24 hours for continuous intravenous administration
. Ultimately, the attending physician will determine the stage of treatment by intravenous administration using the pharmaceutical composition of the present invention.
Will decide between.
Immunizing an animal with the protein of the present invention to specifically react with the protein of the present invention;
And monoclonal antibodies may be obtained. Whole protein or its fragment
Such antibodies may be obtained using immunoglobulin as an immunogen. Carboxy peptide immunogen
It may further contain a cysteine residue at the end, and can be used for keyhole rimpet hemoglobin.
Binds to haptens such as cyanine (KLH). Those who synthesize such peptides
The method is known in the art, for example, R.P.Merrifield, J. Amer.Chem. Soc
.85, 2149-2154 (1963); described in J.L.Krstenansky, et.al., FEBS Lett. 211, 10 (1987)
There is something like. The monoclonal antibody that binds to the protein of the present invention
May be a useful diagnostic agent for the immunodetection of Neutralizing antibodies that bind to the protein of the present invention
Diseases related to the invention protein
And may be associated with abnormal expression of the protein of the present invention.
May be useful in the treatment of certain tumors in the treatment of some forms of cancer
You. In the case of cancer cells or white blood cells, a neutralizing monoclonal antibody against the protein of the present invention
The body is useful for detecting and preventing metastatic spread of cancer cells that can be mediated by the proteins of the present invention
It can be.
For compositions of the invention useful for regenerating bone, cartilage, tendons or ligaments, the method of treatment comprises:
The composition can be administered locally, systemically, or locally as an implant or device.
Administration. When administered, the therapeutic composition used in the present invention comprises
Of course, it is a pyrogen-free, physiologically acceptable form. In addition,
Alternatively, the composition may be encapsulated or injected as a viscous form to provide bone, cartilage or
May be delivered to the site of tissue damage. Local administration is suitable for wound healing and tissue repair
I do. Therapeutically useful action other than the protein of the present invention which may be contained in the above composition
The agent is, alternatively or additionally, administered simultaneously or sequentially with the composition in the method of the present invention.
May be. Preferably, for bone and / or cartilage formation, the composition comprises
Delivering the white-containing composition to the site of bone and / or cartilage damage, and developing the bone and cartilage;
Provides a structure for living, and optimally contains a matrix that can be absorbed into the body
Will have. Such matrices are currently used for other implanted medical devices
It may be made from the materials that have been used.
The choice of matrix material depends on its biocompatibility, biodegradability, mechanical properties, cosmetic
Based on appearance and interface properties. The appropriate formulation will be determined by the particular application of the composition.
U. Possible matrices for the composition are biodegradable, chemically known sulfuric acid
Lucium, tricalcium phosphate, hydroxyapatite, polylactic acid, polyglyco
It may be oleic acid and polyanhydride. Other available materials are biodegradable,
Well-known in nature, for example, bone or skin collagen. further
The matrix may contain pure proteins or extracellular matrix components.
Other possible matrices include sintered hydroxyapatite, bioglass, aluminum
Is not biodegradable, such as nate or other alamix, and is chemically known
It is. The matrix is a combination of materials of the above type, for example polylactic acid and
Bihi
Contains droxyapatite or collagen and tricalcium phosphate
Is also good. Bioceramics may be added to the composition, for example, calcium-aluminate-
It may be changed in the phosphate, processed and pore size, particle size, particle
The shape and biodegradability may be varied.
Lactic acid in the form of porous particles having a diameter in the range of 150 to 800 microns and
A 50:50 (molar weight) copolymer of biglycolic acid is presently preferred.
. In some applications, carboxymethylcellulose or autologous
Prevent the dissociation of the protein composition from the matrix using a sequestering agent such as a clot
And would be useful.
Preferred families of sequestrants are methylcellulose, ethylcellulose,
Roxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl
Alkylcells including methylcellose and carboxymethylcellulose
With cellulosic materials such as Lurose (including hydroxyalkylcellulose)
Yes, cationic salts of carboxymethylcellulose (CMC) are most preferred
. Other preferred sequestering agents are hyaluronic acid, sodium alginate, poly (ethylene)
Glycol), polyoxyethylene oxide, carboxyvinyl polymer and
And poly (vinyl alcohol). The amount of sequestrant useful in the present invention depends on the total formulation.
It is 0.5 to 20% by weight, preferably 1 to 10% by weight, and this amount is
Prevents protein desorption from the polymer matrix and ensures proper handling of the composition
In an amount that allows it, the progenitor cells invade the matrix,
To give proteins the opportunity to promote the osteogenic activity of carcinoma cells, there is not much
Not to be.
In a further composition, the protein of the present invention comprises a bone and / or cartilage defect, wound,
Alternatively, it may be mixed with other agents that are beneficial in treating the tissue. These agents are
, Epidermal growth factor (EGF), platelet-derived growth factor (PDGF), transformed growth factor
(TGF-α and TGF-β) and insulin-like growth factor (IGF)
Include.
At present, the therapeutic compositions are also valuable for veterinary use. For details,
In addition to humans, livestock and thoroughbred horses are treated with the protein of the present invention.
Is a desirable patient.
Rules of administration of protein-containing pharmaceutical compositions used for tissue regeneration alter the effect of proteins
Factors, such as tissue weight, damage site, and damage desired to be formed.
The condition of the tissue received, the size of the wound, the type of tissue required (eg, bone), the patient's year
Consider age, gender and diet, severity of infection, duration of administration, and other clinical factors
And your doctor will decide. The dose depends on the type of matrix used for reconstitution.
And depending on the content of other proteins in the pharmaceutical composition. For example, IGF
Addition of other known growth factors, such as I (insulin-like growth factor I) to the final composition
Addition can also affect dosage. Tissue / bone growth and / or repair,
By regular assessment by morphological survey and tetracycline labeling
The progress can be monitored.
The polynucleotide of the present invention can also be used for gene therapy. Such polynuks
Leotide is introduced into cells in vivo or ex vivo and expressed in a mammalian subject.
Can be made. Other known methods for introducing nucleic acids into cells or organisms
The polynucleotide of the present invention may be administered more (in a viral vector,
Or in the form of naked DNA, but is not limited thereto).
Culturing and growing the cells ex vivo in the presence of the protein of the invention, or
Produce the desired effect on such cells or produce the desired activity in such cells.
May be. The treated cells are then introduced in vivo for therapeutic purposes.
can do.
The patents and publications cited herein are hereby incorporated by reference in their entirety.
It is assumed that
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 FI テーマコート゛(参考)
C12N 5/10 C12N 5/00 B
C12P 21/02 A61K 37/02
(81)指定国 EP(AT,BE,CH,DE,
DK,ES,FI,FR,GB,GR,IE,IT,L
U,MC,NL,PT,SE),OA(BF,BJ,CF
,CG,CI,CM,GA,GN,ML,MR,NE,
SN,TD,TG),AP(GH,KE,LS,MW,S
D,SZ,UG,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG
,KZ,MD,RU,TJ,TM),AL,AM,AT
,AU,AZ,BA,BB,BG,BR,BY,CA,
CH,CN,CU,CZ,DE,DK,EE,ES,F
I,GB,GE,GH,HU,IL,IS,JP,KE
,KG,KP,KR,KZ,LC,LK,LR,LS,
LT,LU,LV,MD,MG,MK,MN,MW,M
X,NO,NZ,PL,PT,RO,RU,SD,SE
,SG,SI,SK,SL,TJ,TM,TR,TT,
UA,UG,UZ,VN,YU,ZW
(72)発明者 ラバリー,エドワード・アール
アメリカ合衆国01876マサチューセッツ州
トゥークスベリー、グリーン・メドー・ド
ライブ90番
(72)発明者 レイシー,リサ・エイ
アメリカ合衆国01720マサチューセッツ州
アクトン、スクール・ストリート124番
(72)発明者 マーバーグ,デイビッド
アメリカ合衆国01720マサチューセッツ州
アクトン、オーチャード・ドライブ2番
(72)発明者 トレーシー,モーリス
アメリカ合衆国02167マサチューセッツ州
チェスナット・ヒル、ウォルコット・ロー
ド93番
(72)発明者 スパルディング,ビッキー
アメリカ合衆国01821マサチューセッツ州
ビラリカ、メドーバンク・ロード11番
(72)発明者 アゴスティノ,マイケル・ジェイ
アメリカ合衆国01810マサチューセッツ州
アンドーバー、ウォルコット・アベニュー
26番──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int. Cl. 7 Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) C12N 5/10 C12N 5/00 B C12P 21/02 A61K 37/02 (81) Designated countries EP (AT, BE) , CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN) , ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (GH, KE, LS, MW, SD, SZ, UG, ZW), EA (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), AL, AM, AT, AU, AZ, BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI GB, GE, GH, HU, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX , NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, UZ, VN, YU, ZW , Edward Earl, United States 01876 Green Meadow Drive, No. 90 (72), Tuxbury, Mass. Lacey, Lisa A United States 01720 Acton, School Street 124 (72), Acton, Mass., USA Inventor Marberg, David United States 01720 Orchard Drive, Acton, MA No. 2 (72) Inventor Tracy, Morris United States 02167 Massachusetts Walnut Road 93, Chetznut Hill, Setts Inventor Spalding, Vicky United States 01821 Billorica, Mass., Meadowbank Road 11 (72) Inventor Augustino, Michael Jay United States 01810 Andover, Mass. Walcott Avenue 26