JP2001500013A

JP2001500013A - ＨＴ▲下ｍ４▼、治療およびアッセイ方法、アゴニストおよびアンタゴニスト

Info

Publication number: JP2001500013A
Application number: JP10512862A
Authority: JP
Inventors: リム，ビング; アドラ，チェイカー，エヌ．; レリアス，ジーン―ミッシェル
Original assignee: ベスイスラエルディーコネスメディカルセンター
Priority date: 1996-09-03
Filing date: 1997-09-02
Publication date: 2001-01-09
Also published as: EP0931096A2; AU4178497A; WO1998009992A3; US5972688A; CA2264490A1; WO1998009992A2; US5705615A

Abstract

(57)【要約】本発明は、ＨＴ_m4タンパク質をコードする組み換えＤＮＡ分子、ＨＴ_m4タンパク質をコードするＤＮＡ分子が安定的に形質転換された形質転換宿主細胞、及び組み換えＨＴ_m4タンパク質に関する。本発明はまた、遺伝性アトピーの存在を検出する方法、ＨＴ_m4タンパク質のアゴニスト及びアンタゴニスト、並びにそれらの診断のための及び治療のための使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】ＨＴ_m4、治療およびアッセイ方法、アゴニストおよびアンタゴニスト発明の背景白血球細胞表面蛋白質は、環境に感じ、応答して、相互作用している重要なものである。かかる蛋白質の１つのクラスは、白血球上で様々に発現している少なくとも１５のメンバー（ＣＤ９、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ８２、Ａ１５等）からなる４−膜貫通蛋白質（ＴＭ４ＳＦ）のスーパーファミリーである。非常に多くの異なるＴＭ４ＳＦ分子の存在ならびにヒトから住血吸虫まで多様な生物での該分子の発現は、生物学における重要な役割を示唆する。ごく最近では、前立腺癌転移蛋白質に対するｃＤＮＡがクローニングされ、同じファミリーの蛋白質に会合していることが見出されている。このファミリーの蛋白質に関する明らかな機能はわからないが、累積しつつある証拠は、これらの蛋白質が細胞増殖および活性化の制御に重要な機能を有しているらしいことを示唆する。ＴＭ４ＳＦとは構造的に異なる４−膜貫通蛋白質の別のファミリーが存在する。最近まで、このファミリーのわずか２つの知られたメンバーは、高アフィニティーＩｇＥＦｃレセプターのβ−サブユニットであるＦｃεＲＩβおよびＢ細胞特異的抗原ＣＤ２０であった。ＦｃεＲＩβは、１つのα鎖、１つのβ鎖および２つのγ鎖からなる四量体レセプター複合体の一部である（キネット(Kinet)ら、Proc．Natl．Acad．Sci．US A，15:6483-6487(1988)）。同時に、それらは、肥満細胞の広範囲の核分解のような劇的な細胞応答につながるＩｇＥ結合抗原との相互作用を媒介する。最近まで、肥満細胞および好塩基球でのみ発現されると思われたが、高アフィニティーレセプターＦｃεＲＩは、ランゲルハンス細胞（キネット(Kinet，J.-P.)ら、Pr oc．Natl．Acad．Sci．USA，85:6483-6487(1988)）、好酸球(サットン(Sut ton，B．J.)とゴウルド(Gould，H．J.)、Nature（London）366:421-428(1993)) にも存在することが示され、蛋白質が明らかにされたが、累積しつつある証拠は、これらの蛋白質が細胞増殖および活性化の制御に重要な機能を有しているらしいことを示唆する。ＴＭ４ＳＦとは構造的に異なる４−膜貫通蛋白質の別のファミリーが存在する。最近まで、このファミリーのわずか２つの知られたメンバーは、高アフィニティーＩｇＥＦｃレセプターのβ−サブユニットであるＦｃεＲＩβおよびＢ細胞特異的抗原ＣＤ２０であった。ＦｃεＲＩは、１つのα鎖、１つのβ鎖および２つのγ鎖からなる四量体レセプター複合体の一部である（キネット(Kinet)ら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA ，15:6483-6487(1988)）。同時に、それらは、肥満細胞の広範囲の核分解のような劇的な細胞応答につなかるＩｇＥ結合抗原との相互作用を媒介する。最近まで、肥満細胞および好塩基球でのみ発現されると思われたが、高アフィニティーレセプターＦｃεＲＩは、ランゲルハンス細胞（キネット(Kinet，J.-P.)ら、Proc ．Natl．Acad．Sci．USA，85:6483-6487(1988)）、好酸球（サットン(Sutton，B ．J.)とゴウルド(Gould，H．J.)、Nature（London）366:421-428(1993)）および末梢単球にも存在することが示された。βサブユニットであるＦｃεＲＩβは、細胞質に存在するアミノ末端およびカルボキシ末端の両方を有する４−膜貫通蛋白質である。アトピーは、花粉またはハウスダストダニのような共通抗原に対する免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）応答障害として一般に定義されている。それは、全血清ＩｇＥレベルの上昇、抗原特異的ＩｇＥ応答または共通アレルゲンに対する陽性の皮膚テストのいずれかにより頻繁に検出される。原則として、アトピーは、抗原曝露およびＩｇＥと肥満細胞上のそのレセプターとの相互作用に対するＩｇＥ応答で始まる経路、高アフィニティ−ＦｃレセプターＦｃεＲＩ、ならびにそのリガンド−レセプター連動により媒介されるその後の細胞の活性化のいかなる部分の調節不全から生じることもできる（ラベッチ(Ravetch)、Nature Genetics，7:11 7-118(1994)）。クックソン(Cookson)ら、Lancet，333:1292-1295(1989)は、一般化されたアトピー性ＩｇＥ応答とヒト染色体１１ｑの遺伝子座との間の遺伝的関連を報告している。したがって、ＦｃＲＩは、同様にアトピー性疾患に重要な役割を果している。アレルギー、喘息、アトピー性皮膚炎（または湿疹）およびアレルギー性鼻炎を含むアトピー性疾患は、同時に、医学的介入を要求する臨床的障害の最大群の１つを構成する。英国だけで、アトピーは３〜５百万症例に昇り、毎年２，０００もの死亡が生じている。ヒトＣＤ２０抗原(テッダー(Tedder，T．F.)ら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 85:208-212(1988))ならびにそのネズミ等価物Ｌｙ−４４(テッダー(Tedder，T ．F.)ら、J．Immumol．141:4388-4394(1988))は、Ｂ細胞でのみ発現する。異なるＣＤ２０抗体を用いる機能研究により、ＣＤ２０は、Ｂ細胞の活性化の制御に関与することが示唆される(クラーク(Clark，E．A.)とレーン(Lane，J．L.)Annu ．Rev．Immumol．9:97-127(1991))。また、ＣＤ２０蛋白質も、細胞膜の細胞質側にアミノ末端およびカルボキシ末端を有する４つの膜貫通ドメインを含む。ＣＤ２０は、膜経由Ｃａ流動において直接的な役割を果たすと思われる。しかしながら、ＣＤ２０だけがチャンネル蛋白質であるかどうか、ＣＤ２０が他の蛋白質との会合においてそのように機能するかどうかまたはＣＤ２０が内在する膜チャンネルの活性化を誘導するかどうかは不明である。発明の要約本発明は、ＨＴ_m4、ＨＴ_m4のアゴニストおよびＨＴ_m4のアンタゴニストを含有する組成物、ＨＴ_m4に結合する抗体、これらの生成物を用いる治療方法、ＨＴ_m4 の結合を阻害する方法ならびにＨＴ_m4相互作用の阻害のための候補作用剤のスクリーニング方法に関する。図面の簡単な説明図１Ａおよび１Ｂは、ＨＴ_m4遺伝子のｃＤＮＡ配列およびコードする蛋白質のアミノ酸配列を示す。ヌクレオチド配列は、左側に番号を付す。最長のオープンリーディングフレームのアミノ酸配列は、右側に最初の推定開始メチオニンで始まる番号を付す。上流のイン・フレーム停止コドンであるＴＡＡは、８５位で太字で示す。ＴＡＡ停止コドン（ＥＮＤ）後に、ＡＡＴＡＡＡポリアデニル化シグナルを含む３’未翻訳領域がある。４つの推定膜貫通ドメインを下線で示す。２つのリン酸化部位を点線の下線で示す。発明の詳細な説明本発明は、ＨＴ_m4のｃＤＮＡの発見とクローニングに関する。１６７２ヌクレオチド長のｃＤＮＡは、ヌクレオチド位置９７で開始する長いオープンリーディングフレームを含む。ｃＤＮＡの発現産物は、約２５ｋＤａの計算された分子質量および２１４個のアミノ酸を有する４つの膜貫通部位を有する膜をまたがる蛋白質である。該配列を図１Ａおよび１Ｂに示す。ＨＴ_m4は、２０〜２１アミノ酸の４つの疎水性ドメインを含む。最初の疎水性ドメインの開始前のアミノ末端領域は、４個のプロリンを含む。膜貫通セグメント間の各親水性領域は、１個のプロリンを含む。セリン／スレオニンのカゼインキナーゼ２リン酸化（ピナ(Pina，L．A.)Biochem．Biophys．Acta．1054:267-28 4(1990)）に対するいくつかの基質は、残基２４（ＴＧＰＥ）、１５５（ＳＳＳＥ）、１８１（ＴＬＬＥ）および２０３（ＳＲＥＥ）で見られ、プロテインキナーゼＣリン酸化に対しては残基１４９（ＳＬＲ）で見られる。該配列は、膜を４回交差するポリペプチド鎖と一致し、細胞外に２つの小さなループを突出し、細胞質にアミノ末端およいカルボキシ末端部分を保持している。本明細書で規定されるＨＴ_m4は、シグナル伝達、細胞成長、細胞増殖、転写因子の活性化等の転写調節およびアトピー性障害の媒介を含む天然の蛋白質の機能を１以上有する発現産物を包含するものである。天然の蛋白質および／または１以上のアミノ鎖か欠失、付加もしくは置換された蛋白質もしくはポリペプチドの機能的蛋白質またはポリペプチド断片および領域が含まれる。該蛋白質またはポリペプチドは、図１Ａおよび１Ｂの天然の蛋白質の対応する配列と好ましくは少なくとも約５０％のホモロジー、より好ましくは少なくとも約７５％のホモロジーを共有する。また、ＨＴ_m4の融合蛋白質およびアミノ酸配列改変体を含む誘導体も含まれるが、これに限定されるものではない。１つの態様において、本発明の組換えＤＮＡ分子は、本明細書で規定されるＨＴ_m4をコードする。１つの態様において、該分子は、天然の遺伝子またはその断片の対応する配列と、特にＨＴ_m4、ＣＤ２０およびＦｃεＲＩβの４−膜貫通蛋白質ファミリーの高度に保存された領域において、少なくとも約５０％のホモロジーまたは配列同一性、好ましくは少なくとも約７５％のホモロジー（少なくとも約９０％のホモロジー等）を共有する。好ましくは、該組換えＤＮＡ分子は、図１Ａおよび１Ｂの対応するコーディングヌクレオチド配列を含有する。別の態様において、プローブ等の組換えＤＮＡ分子は、例えば、ＦｃεＲＩ等の膜貫通蛋白質またはレセプターをコードする遺伝子を単離するために用いることができる。かかる分子は、図１Ａおよび１Ｂの配列の全部または断片に好ましくは選択的にハイブリダイズする組換えＤＮＡ分子を含有する。好ましくは、該分子は、サンブルーク(Sambrook)ら、Molecular Cloning: A Laboratory Manual ，第２版（Cold Spring Harbor Lab.，Cold Spring harbor，NY(1989)）に記載されたようなストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。ストリンジェントな条件の例は、ハイブリッドの計算上の融解温度の約１２〜２０℃以下である温度と塩濃度の組合せでありうる。該温度と塩濃度は、フィルター上に固定されたゲノムＤＮＡの試料をプローブにハイブリダイズさせ、次いで洗浄する予備実験で経験的に決定可能なことが多い。前述、９．５０にて。組換えＤＮＡ分子は、コーディングおよびノンコーディング配列を含むことができる。好ましくは、該分子は、遺伝子を取り出すために９５〜１００％の配列同一性を有する少なくとも約２５ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約６０ヌクレオチドを含有する。好ましくは、ＤＮＡプローブは、蛋白質のＮ末端またはＣ末端をコードする対応する領域と同一または相同な配列を含有する。本明細書で論ずるＨＴ_m4の予想構造は、この蛋白質とＦｃεＲＩβおよびＣＤ２０抗原との関連性を示唆し、４−膜貫通スパン蛋白質のファミリーに関する証拠を提供する。３つの蛋白質すべての間のアミノ酸の保存性は、４つの膜貫通ドメインで最も高い。より大きな相違が親水性アミノ末端およびカルボキシ末端に存在するが、これらの領域内のいくつかのアミノ酸は、３つの蛋白質すべてのアミノ末端に４〜５個のプロリンの存在のような保存性がある。Ｔｍ−３とＴｍ− ４との間の２番目の細胞外ドメイン中の２つの保存されたシステイン残基は、このドメインに分子内または分子間ジスルフィド結合が３つの蛋白質すべてに存在することを示唆する。また、ＨＴ_m4は、蛋白質の細胞質領域中に２個のリン酸化部位（スレオニン²⁴およびセリン²⁰³）も含む。最後に、３つの蛋白質すべてのカルボキシ末端で高度に保存されたＳＳＰＰドメインが存在する。ＣＤ２０と他の２つの蛋白質との間の相違は、非相同性アミノ酸の複数の長いひと続きの区間によって有意に貢献される。ＦｃεＲＩβのカルボキシ末端は、ＣＤ２０またはＨＴ_m4に存在しないＲｅｔｈまたは抗原レセプター活性化モチーフ（ＡＲＡＭ）を含む(レス(Reth，M.)、Nature（London）338:383-384(1989))。ＡＲＡＭ配列は、ＣＤ３γ、δ、εおよびζを含む複数のレセプターサブユニット、ＩｇαおよびＩｇβの細胞質テールで、ＭＢ−１およびＢ２９抗原で、ならびにＦｃεＲＩのβおよびγ鎖で見出される（ワイス(Weiss，A.)とリットマン(Littman，D． R.）Cell 76:263-274(1994)）。ＡＲＡＭ配列中のチロシン残基は、追加のエフェクター分子の補充を可能にする、細胞質チロシンキナーゼによるリン酸化の厳密な誘導剤および基質であると考えられる(ワイス(Weiss，A.)とリットマン(Littman，D．R.)Cell 76:263-274(1994);パオリーニ(Paolini，R.)ら、Natur e（London）353:855-858(1991));アイズマン(Eiseman，E.)とボーレン(Bolen，J ．B.)、Nature（London）355:78-80(1992))。ＡＲＡＭ配列を含む遺伝子の共通のエキソン−イントロン構成は、同一の遺伝子ファミリーから進化したらしいという示唆に至った（ワイス(Weiss，A.)とリットマン(Littman，D．R.)Cell 76:2 63-274(1994)）。しかしながら、ＦｃεＲＩβとＣＤ２０およびＨＴ_m4との構造上の類似性は、ＡＲＡＭ配列が進化の間にＦｃεＲＩβ遺伝子によって獲得されたことを示唆する。染色体マッピングにより、ＨＴ_m4遺伝子はＣＤ２０遺伝子の位置である染色体１１ｑ１２−１３．１に位置した。ネズミＦｃεＲＩβおよびＣＤ２０のネズミ等価物であるＬｙ−４４は、両方ともマウス染色体１９の同じ位置に存在する( テッダー(Tedder，T．F.)ら、J．Immunol．141:4388-4394(1988);クラーク(Clar k，E．A.)とレーン(Lane，J．L.)、Annu．Rev．Immunol．9:97-127(199l);ハッピ(Huppi，K.)ら、J．Immunol．143:3787-3791(1989))。したがって、３つの遺伝子は同一の遺伝子座に由来して進化したものであると考えられ、このことは、さらに、それらが関連蛋白質の同一のファミリーのメンバーであるという提案を支持する。また、それらは、ＣＤ９、ＣＤ３７、ＣＤ５３２、ＣＤ６３およびＲ２を含むＴＡＰＡ−１(フェアロン(Fearon，D．T.)Curr．Op．Immunol．5:341-3 48(1993);バークレイ(Barclay，A．N.)ら、The Leucocyte Antigen Facts Book ，（Academic Press Inc.，San Diego，CA）(1993))に関連した４−膜貫通蛋白質の別の大きなファミリーとは完全に区別される蛋白質のファミリーを形成する。ＦｃεＲＩβに関連するＨＴ_m4のような遺伝子産物の同定は、重要である。α 、βおよびγ遺伝子の同時のコトランスフェクションがネズミＦｃεＲＩレセプターの表面発現を誘導するのに必要であるが、β遺伝子なしでのヒトαおよびγ 遺伝子のコトランスフェクションは、高アフィニティーＦｃレセプターの発現を誘導するのに十分である(ミラー(Miller，L.)ら、Science 244:334-337(1989)) 。さらに、最近の証拠により、機能的な高アフィニティ−ＩｇＥＦｃレセプターが、β鎖の非存在下で単球上で見出されうることが示唆された（マウラー(Mau rer，D.)ら、J．Exp．Med．179:745-750(1994)）。さらに、異なる造血細胞のＦｃレセプターにおけるサブユニットの多様な会合が確立されている。例えば、ＦｃεＲＩβは、肥満細胞において、ＩｇＧに対する低アフィニティーＦｃレセプターであるＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）と会合していることがわかった（クロサキ(Kurosaki，T.)ら、J．Exp．Med．175:447-45 １(1992)）。また、ＦｃεＲＩγは、マクロファージにおいてＦｃγＲＩＩＩと会合したホモダイマーとして（ラー(Ra，C.)ら、Nature，341:752-754(1989)）、またはＴ細胞レセプター複合体中でζおよびη鎖とのヘテロダイマーとして( オルロッフ(Orloff，D．G.)ら、Nature，347:189(1990))発見された。ＮＫ細胞において、ＦｃεＲＩγは、ホモダイマーとしておよびＴ細胞レセプターのζ鎖とのヘテロダイマーとして発見されるであろう(レトールノイアー(Letourneur， O.)ら、J．Immunol．147:2652-2656(1991))。ごく最近、別の研究者は、単球細胞株および好中球において、γ鎖もまた、ＩｇＧに対する高アフィニティーレセプターであるＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）との会合を形成することができることを示した（ショール(Scholl，P．R.)とゲーハ(Geha，R．S.)Proc．Natl．Acad．Sci ．USA 90:8847-8850(1993);アーンスト(Ernst，L．K.)ら、Proc．Natl．Acad．S ci．USA 90:6023-6027(1993)）。これらの知見は、異なるサブユニットから構成されるシグナル伝達複合体の多様性が、類似のエフェクター機能を介するが異なる機能の結果を伴うことを示唆する。多量体レセプター複合体におけるこれらのサブユニットと代替リガンド認識サブユニットとの会合は、共通のシグナル伝達経路に対して異なるリガンドのカップリングを可能にするであろう。すべての造血細胞系譜におけるＨＴ_m4の発現および試験した非造血細胞のいずれにおいてもＨＴ_m4を発現していないことは、ＨＴ_m4が造血細胞系譜に独特の生物学的経路に関与することを示唆する。ＨＴ_m4をコードする遺伝子の配列を含有するＤＮＡプローブ等の核酸は、遺伝性アトピー性障害に罹っている患者を検出するためのアッセイに使用することができる。ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれかを本発明のアッセイ方法に使用することができる。該方法に使用されうるＤＮＡは、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡであってもよい。ＤＮＡの供給源は、いかなる細胞または個体から取られた細胞であってもよく、体細胞、血液細胞、精子、繊維芽細胞もしくは他の体細胞または生殖細胞等のそれらの培養継代物を含むことができる。また、分析されることが好ましい核酸は生殖細胞ＤＮＡであるので、該方法は、疾患または疾患症状の開始前にまたは開始後に行なうことができる。ｃＤＮＡまたはＲＮＡが使用される対象である場合、核酸供給源は、造血細胞由来であるべきである。変異の存在は、ＰＣＲ（本明細書において下記記載）等の当該技術分野において一般に知られた方法を用いて決定することができる。あるいは、変異の部位またはその相補的部位を含有する核酸をシーケンスし、それにより変異の存在を同定することができる。さらに別の態様において、該ＤＮＡによりコードされる蛋白質をシーケンスまたは同定し、それにより変異の存在を確立することができる。さらに別の態様において、変異した配列または野生型配列の１つに選択的に結合する抗体を作製して、それぞれの蛋白質に対する蛋白質画分をスクリーニングするために用いることができる。かかる方法の１つは、変異領域に隣接する配列に対して特異的な１対のプライマーを用いるＰＣＲ法である。得られた産物をシーケンスし、ポリアクリルアミドもしくはアガロースゲル等のゲル上で分析し、または融解温度もしくは二次構造等の物理学的特性により評価することができる。核酸の変異または修飾を決定するための他の方法も同様に用いることができる。ヘテロ接合体における２つの対立遺伝子の共増幅は、遺伝子が異なる、よってそれらの融解および／または二次構造特性が異なると思われるＰＣＲ産物を生成することができる。例えば、ムッター(Mutter)とボイントン(Boynton)(Nucleic Acids Res．23:1411(1995)）に記載されたような条件下で、２つの対立遺伝子の増幅効率はほとんど同等であり、ゲノムの鋳型のそれに比例した比率でＰＣＲ産物を生成する。可変性と偏りは、増幅中にｄＧＴＰに対して７−デアザ−２’− ｄＧＴＰの置換、分子内および分子間ＧＣ塩基対形成の安定性を低下させる介入により消滅させることができる。対立遺伝子ＰＣＲ断片は、例えば、ゲル電気泳動により容易に分離され、挿入する色素染色（臭化エチジウム等）により検出される。代替手法として、キャピラリー電気泳動を用いることができる。キャピラリー電気泳動の１例は、架橋剤の非存在下で８％ポリアクリロイルアミノエトキシエタノールからなるポリマーネットワークにおけるものであり、分離用の単純な手法および２５４ｎｍでのＵＶ吸光度を介するオンライン検出を提供し、よって、追加の染色工程を回避する。キャピラリーカラムは、繰り返して使用することができ、エレクトロフェログラムは、磁気支持体上で保存することができる。異なる泳動間の比較は、マーカーとして添加した既知の塩基対サイズの内部標準に対するすべてのトレースを整列させて得られうる(ネシ(Nesi)ら、Electrophoresis，15:644-6(1994))。さらに別の態様において、変異の存在は、ヤマモト(Yamamoto)ら(Biochem．Bi ophys．Res．Comm.，182:507(1992))の方法に従って決定することができる。試験対象の目的物から得られたＤＮＡまたはＲＮＡを、標準ＰＣＲにより増幅し、プライマー伸長は、反応混合物にジデオキシＡＴＰの付加後に行なう。変異の部位の３’末端に隣接した末端標識逆プライマーの伸長は、試験対象の配列の後ろの選択されたヌクレオチドで停止し、得られたプライマー産物は、変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびオートラジオグラフィーにより分析することができる。使用することができる追加のＰＣＲに基づく方法には、カーネイ(Carney)ら（ Gene，155:289，(1995)）により記載されたｃＤＮＡ末端のランダム迅速増幅（ＲＡＣＥ）；一本鎖コンフォメーションポリモルフィズムアナリシス（リスースタルパー(Ris-Stalpers)ら、Pediatric Res.，36:227(1994)）および逆転写酵素ＰＣＲ(ナカムラ(Nakamura)ら、J．Neurological Sci．122:74(1994))が含まれる。追加のハイブリダイゼーション技術には、例えば、同一もしくは異なる放射性または蛍光色素で標識されたプローブの使用が含まれる。この方法は、変異または野生型配列の直接検出を可能にする（例えば、サンペイ(Sanpei)ら、Bioche m．Biophys．Res．Comm．212:341-6(1995);タネジャ(Taneja)、J．Cell Biology ，128:995-1002（1995）およびサイトー(Saito)、Japanese Journal Of Human G enetics，39:421-5(1994)を参照のこと）。さらに別の態様において、遺伝子またはその断片にコードされる蛋白質、あるいは別法として核酸は、当該技術分野で認識された分離媒体および方法を用いてサイズにより分離することができる。低濃度のメチレンビスアクリルアミドおよび長い泳動を用いる標準ポリアクリルアミドゲルまたは改変されたＳＤＳ−ＰＡＧＥプロトコール（イデ(Ide)ら、Biochem．Biophys．Res．Comm．209:1119(199 5))。遺伝性アトピーに関連する変異は、遺伝性アトピーを有することが疑わしい個体の集団および遺伝性アトピーを有しないと考えられる個体の集団のＨＴ_m4遺伝子を単離してシーケンスすることにより同定することができる。このように提供された配列を相互に関連させて比較することができる（例えば、コンセンサス配列を得ることまたは配列を整列させること）。本明細書で規定される「変異」とは、遺伝性アトピーを有しないと考えられる個体の集団（または亜集団）で見出される配列と比較して、遺伝性アトピーを有することが疑わしい個体の集団（またはその亜集団）に共有された配列の一貫した偏りである。また、本発明の核酸は、蛍光インサイチュ・ハイブリダイゼーション法(コバヤシ(Kobayashi)ら、Blood，81:3027-3033(1993))を用いる等のヒト染色体上の遺伝子をマッピングするためのプローブとしても有用でありうる。さらに、機能的ＨＴ_m4がコードされないか発現されないようにそのゲノムに遺伝子の変異を有する動物モデルを用いて、薬剤標的を試験することができる。かかる１つの例において、そうしなければ免疫原の蓋然性がある薬剤または薬剤標的のスクリーニング用に使用可能な動物を免疫抑制する。さらに、本発明の蛋白質は、天然のリガンドをスクリーニングするために使用することができる。ＨＴ_m4と相互作用する分子ここで、ＨＴ_m4は２つのタイプの蛋白質に結合することが発見され、ＨＴ_m4活性の活性化と阻害に関してさらなる情報が提供されることになった。一つは、ＫＡＰと呼ばれる両特異性ホスファターゼ、すなわちサイクリン依存性キナーゼであるＣＤＫ２と相互作用するチロシンおよびセリン／スレオニン脱リン酸化蛋白質である。もう一つのタイプの蛋白質は、ＴＮＦレセプター、腫瘍壊死因子関連因子ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２およびＴＲＡＦ−３のカルボキシ末端に結合する。これらはレセプターとＮＦ−κＢなどの転写因子の間のシグナル伝達と、ＥＢＶウイルスの腫瘍原性に関与するようである。ＨＴ_m4に対するこれら蛋白質の結合を促進および阻害することに関連する方法とアッセイも本発明に包含される。両機能性ＣＤＫ２関連ホスファターゼ（ＫＡＰ）両機能性ＣＤＫ２関連ホスファターゼ（ＫＡＰ）は細胞周期化に関与する哺乳類サイクリン依存性キナーゼである。ＣＤＫ２蛋白質はＧ１期とＳ期で細胞周期を制御する。ハンノン（Hannon，G.J.）ら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，91:1 731-1735（1994）、ツサイ(Tsai，L-H)ら，Oncogene，8:1593-1602（1993）を参照されたい（これらの教示は全て参照により本明細書に組み込まれる）。同時免疫沈降実験により、サイクリン依存性キナーゼはサイクリンの他にいくつかの蛋白質を結合することが示されている。ガラクチノフ(Galaktionov，K.)ら，Cel l，67:1181-1194、セバスチャン(Sebastian)ら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA， 90:3521-3524（1993）、ハーキス(Hakes)ら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，90: 4017-4021（1993）、ハーパー(Harper)ら，Cell，74:805-816（1993）、これらの教示は全て参照により本明細書に組み込まれる。ＣＤＫ関連蛋白質（ＫＡＰ）はホスホチロシルだけでなくホスホセリルをも脱リン酸化することから、この蛋白質はいわゆる「両機能性」ホスファターゼの一群に分類されている。ＫＡＰのようなホスファターゼは、ＣＤＫ蛋白質のリン酸化レベルを制御するのに決定的な役割を果たしていると考えられる。ごく最近、プーン(Poon)らは、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）の活性化には保存されたスレオニン（ＣＤＫ２中のＴｈｒ）のＣＤＫ活性化キナーゼ（ＣＡＫ）によるリン酸化が必要であることを示した。Science，270:90-93（1995）、これらの教示は全て参照として本明細書に組み込まれる。ヒトＫＡＰ（Ｃｄｉｌとも呼ばれる）は、ヒトＣＤＫ２中のスレオニンを脱リン酸化することを示した。ＫＡＰは、天然の単量体ＣＤＫ２中のチロシンを脱リン酸化することができず、スレオニンを脱リン酸化した。熱変性されたＣＤＫ２は、ＫＡＰによって脱リン酸化されなかった。ＣＤＫ２へのサイクリンＡの結合は、ＫＡＰによるＴｈｒの脱リン酸化を阻害したが、サイクリンＡ −ＣＤＫ２複合体へのＫＡＰの結合を妨げなかった。さらに、ＫＡＰによるＴｈｒの脱リン酸化は、それ以降のサイクリンＡとの会合時にＣＤＫ２キナーゼ活性を妨げた。これらの結果から、会合したサイクリンサブミットが分解または解離すると、ＫＡＰはＣＤＫ２に結合してＴｈｒ¹⁶⁰を脱リン酸化することが示唆される。したがって、ＫＡＰは、活性化ループ中のリン酸基を除去することによって特定の標的蛋白質キナーゼを不活化することができ、この能力が両特異性ホスファターゼファミリーのメンバーにとっての普遍的役割を構成すると考えられる。ＫＡＰの生理学的重要性は、ＫＡＰの過剰発現がＨｅＬａ細胞において細胞周期の前複製Ｇ１期の進行を遅らせるという知見によって証明される（プーン(Poon)ら，前掲）。ＴＮＦレセプター関連因子（ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２およびＴＲＡＦ−３）ＴＮＦレセプター関連因子（ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２およびＴＲＡＦ−３）もＨＴ_m4と結合する。ＴＲＡＦ−２は腫瘍壊死因子レセプター−２（ＴＮＦ− Ｒ２）のカルボキシ末端に結合する蛋白質である。ロッテ(Rothe，M.)，Cell，7 8:681-692（1994）、モシアロス(Mosialos，G.)，Cell，80：389-399（1995）、チェング(Cheng，G.)ら，Science，267：1494-1498、これらの教示は全て参照として本明細書に組み込まれる。ＴＲＡＦ−２はもう１つの関連蛋白質であるＴＲＡＦ−１とも強く結合して、腫瘍壊死因子レセプターであるＴＮＦ−Ｒ２の細胞質ドメインと結合するヘテロ二量体型複合体を形成する。ＴＮＦ−Ｒ２は、細胞増殖の刺激、遺伝子誘導の媒介およびＮＦ−κＢなどの転写因子の活性化につながるＴＮＦシグナル伝達を媒介する。ＴＲＡＦ−１とＴＲＡＦ−２は、「ＴＲＡＦドメイン」と呼ばれるＣ末端ホモロジー領域を含む蛋白質ファミリーのメンバーである。興味深いことに、エプスタイン・バーウイルス形質転換蛋白質であるＬＭＰ１との相互作用に関与するシグナル伝達蛋白質を検索するために二重ハイブリッド酵母系を使用したところ、ＬＭＰ１の細胞質カルボキシ末端に結合するＴＲＡＦ−２様蛋白質（ここではＴＲＡＦ−３と呼ぶ）が同定された。モシアロス(Mosialos)（前掲）。感染細胞上に発現されるＬＭＰ１（６回膜貫通型蛋白質）はＴＲＡＦ−３とＴＲＡＦ様蛋白質を介して細胞増殖経路を構成的に活性化し、ＮＦ−κＢの転写をもたらすと考えられる。ＨＴ_m4の両機能性ホスファターゼであるＫＡＰとの会合は、ＨＴ_m4の活性化がリン酸化を含みうることを示唆している。またこれは、ＨＴ_m4をリン酸化し活性化するキナーゼが存在するかもしれないことをも示している。ＫＡＰは細胞周期関連ホスファターゼであるため、ＨＴ_m4は細胞周期の制御に関与するかもしれない。ＨＴ_m4と会合する第二の蛋白質であるＴＲＡＦ−２は、ＨＴ_m4が遺伝子転写、細胞活性化、細胞の増殖と分化、炎症応答およびアポトーシスの制御に重要でありうることを示唆している。総合すると、これらの新しい発見は、特定の造血細胞の成長または活性化の制御に関するＨＴ_m4蛋白質の潜在的な重要性を強調するものである。上述のように、ＨＴ_m4は造血細胞に選択的に発現され、これまでに得られた証拠はＨＴ_m4がシグナル伝達経路に関与する新規なレセプター蛋白質であることを示唆している。細胞成長、細胞活性化およびアポトーシスを含む多面的機能を媒介するＴＮＦと、重要なＥＢＶ形質転換蛋白質であるＬＭＰ−１が、どちらも類似する経路を利用することは重要である。それゆえ、ＴＲＡＦ蛋白質は細胞成長にとって決定的なシグナル伝達を媒介する。レセプターの架橋は、ＴＲＡＦと会合した分子とを局所的に凝集させ、それにより、レセプター会合セリン／スレオニンキナーゼによって媒介され、転写因子ＮＦ−κＢの活性化と細胞成長を含む表現型の変化によって顕在化する第二メッセンジャーシグナルを生じると考えられる。この経路の負の制御はホスファターゼによる脱リン酸化であると考えられる。したがって、細胞シグナル伝達と細胞増殖および転写を変調させるには、ＨＴ_m4 の活性化を、例えば、ＨＴ_m4の天然リガンド、ＫＡＰまたはＴＲＡＦ−２へのその結合を阻害することなどによって阻害または活性化することが望ましいだろう。このような変調は、ＨＴ_m4の断片、突然変異体および抗体を含むＨＴ_m4のアゴニストとアンタゴニストのスクリーニング、開発および使用によって起こりうる。天然ＨＴ_m4蛋白質または断片のアミノ酸配列改変体ＨＴ_m4およびＨＴ_m4断片のＨＴ_m4天然リガンドの天然リガンドのＨＴ_m4天然リガンドの天然リガンドのアミノ酸配列改変体は、天然または改変ＨＴ_m4ＤＮＡに適当なヌクレオチド変異を導入することにより、あるいは所望のポリペプチドのインビトロ合成により、当該技術分野で知られている方法で調製することができる。アミノ酸配列改変体の構築には２つの主要な変異性、すなわち突然変異部位の位置および突然変異の性質がある。ＨＴ_m4のアミノ酸配列改変体は、ＨＴ_m4をコードするＤＮＡ配列の操作を必ずしも必要としない天然に発生する対立遺伝子を除いて、好ましくは、自然界には存在しないアミノ酸配列改変体となるようにそのＤＮＡを突然変異させることによって構築される。突然変異は、膜貫通型、細胞外型または細胞内型と同定される１または複数のＨＴ_m4ドメイン（ＨＴ_m4の天然リガンド、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３またはＫＡＰとの相互作用に関与するものなど）の外部または内部で作製することができる。ＨＴｍ₄の天然リガンド、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３またはＫＡＰとの会合（結合または間接的会合）が増加するように、および／またはそれらの結合能力を保ち、好ましくはそれと同時にＮＦ−κＢ活性化をシグナル伝達するそれらの能力を減少または排除するように突然変異させたＨＴ_m4改変体は、ＨＴ_m4の天然リガンド、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３および／またはＫＡＰ蛋白質によって媒介される天然の生物学的活性の阻害剤として有用だろう。また、そのような改変体ならびに天然ＨＴ_m4とその結合断片は、それら蛋白質の過剰発現と関連する病理学的状態の診断や、ＨＴ_m4の天然リガンド、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３またはＫＡＰの精製に役立つだろう。そのような突然変異の好ましい標的は細胞質カルボキシ末端である。というのは、このドメインはＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３またはＫＡＰとの相互作用に関与すると考えられるからである。ＨＴ_m4の生物学的活性の阻害剤として作用する他のアミノ酸配列改変体は、例えば、後述する生化学的スクリーニングアッセイによって同定できる。一般に、突然変異は、保存的または非保存的なアミノ酸置換、アミノ酸挿入もしくはアミノ酸欠失でありうる。突然変異は、ＨＴ_m4結合部位（ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３またはＫＡＰ結合部位など）に、またはその近く（５または10アミノ酸以内）に位置しうる。より好ましくは、改変型または非改変型のＨＴ_m4をコードするＤＮＡの部位指定突然変異誘発によって、ＨＴ_m4アミノ酸配列改変体をコードするＤＮＡを調製する。部位指定（部位特異的）突然変異誘発は、所望の突然変異のＤＮＡ配列、並びに交差されている欠失接合部の両側に安定な二本鎖を形成するのに十分なサイズと配列の複雑さを有するプライマー配列を与えるのに十分な数の隣接ヌクレオチドとをコードする特定のオリゴヌクレオチド配列を使用することによってＨＴ_m4変種の作製を可能にする。通常、長さが約２０〜２５ヌクレオチドで、変化させる配列の接合部の両側に約５〜１０残基を有するプライマーが好ましい。一般に、部位特異的突然変異誘発の技術は、エデルマン(Edelman)ら，ＤＮＡ２，1 83(1983)などの刊行物によって例証されるように、当該技術分野ではよく知られている。部位特異的突然変異誘発技術では、通常、一本鎖型と二本鎖型の両方で存在するファージベクターを使用する。部位指定突然変異誘発に有用な典型的ベクターには、例えばメッシング(Messing)ら，Third Clevel and Symposium on M acromolecules and Recombinant ＤＮＡ，ワルトン(A．Walton)編，エルゼビア社，アムステルダム（1981）により開示されているようなＭ１３ファージなどのベクターが挙げられる。このファージベクターとその他のファージベクターは市販されており、それらの使用は当業者に公知である。Ｍ１３系ベクターを使ってＤＮＡ断片中のオリゴヌクレオチド指定部位特異的突然変異を構築するための、汎用性があって効率のよい手法は、ゾラー(Zoller，M.J.)およびスミス(Smith， M.)，Nucleic Acids Res．10，6487-6500[1982]）に公表されている。一本鎖ＤＮＡを得るには、一本鎖ファージ複製起点を含有するプラスミドベクター［ベイラ(Veira)ら，Meth．Enzymol．153，3(1987)］も使用できる。また、ヌクレオチド置換体は、適当なＤＮＡ断片をインビトロで合成し、それを当該技術分野で公知のＰＣＲ操作で増幅することによって導入することができる。一般に、これによる部位特異的突然変異誘発は、その配列内に関連する蛋白質をコードするＤＮＡ配列を含む一本鎖ベクターをまず得ることによって行いうる。所望の突然変異配列を保持するオリゴヌクレオチドプライマーは、一般的には、例えば、クレア(Crea)ら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 75，5765(1978)の方法によって合成的に調製される。次にこのプライマーを、一本鎖蛋白質配列含有ベクターにアニールし、大腸菌ポリメラーゼＩクレノウ断片などのＤＮＡ重合酵素に供することで、突然変異保持鎖の合成を完了させることができる。このようにして、一方の鎖が元の非突然変異配列をコードし、他方の鎖が所望の突然変異を保持するヘテロ二本鎖が形成される。次にこのヘテロ二本鎖ベクターを使ってＪＰ１０１細胞などの適当な宿主細胞を形質転換し、突然変異配列を保持する組換えベクターを含むクローンを選択することができる。その後、その突然変異領域を取り出し、蛋白質生産用の適当な発現ベクターに入れることができる。ＨＴ_m4のアミノ酸配列改変体の作製にはＰＣＲ技術も使用できる。ＰＣＲでの出発物質としてテンプレートＤＮＡを少量使用する場合、テンプレートＤＮＡ中の対応する領域と配列がわずかに異なるプライマーを使用して、そのプライマーがテンプレートと異なる位置でのみテンプレート配列と異なる特定のＤＮＡ断片を比較的大量に生産することができる。プラスミドＤＮＡに突然変異を導入するために、該突然変異の位置と一部重なり、かつ、該突然変異を含有するように、一方のプライマーを設計することができる。他方のプライマーは、該プラスミドの反対鎖の配列の範囲と同一であることが好ましいが、この配列は該プラスミドＤＮＡに沿ってどの位置にあってもよい。しかし、最後に第一、第二のプライマーに挟まれたＤＮＡの全増幅領域を容易に配列決定できるように、第二プライマーの配列は第一プライマーの配列から２００ヌクレオチド以内に位置することが好ましい。ここに記述したようなプライマーを用いたＰＣＲ増幅は、そのプライマーによって特定される突然変異の位置、あるいはテンプレートの複製がいくらかエラーを起しやすい他の位置で異なるＤＮＡ断片の集団をもたらす。産生物質に対するテンプレートの比率が極端に低い場合は、生成ＤＮＡ断片の大多数は所望の突然変異（１または複数）を内包する。この生成物を使って、標準的ＤＮＡ技術により、ＰＣＲテンプレートとして役立つプラスミド中の対応する領域を置換することができる。突然変異位型第二プライマーを使用するか、異なる突然変異型プライマーを用いる第二のＰＣＲを行ない、得られた２つのＰＣＲ断片を三つ（またはそれ以上）の部分連結反応でベクター断片に同時に連結することにより、離れた位置にある突然変異を同時に導入することができる。別の改変体調製方法であるカセット突然変異誘発は、ウェルス(Wells)らが記載の技術［Gene 34，315（1985）］に基く。突然変異させるＨＴ_m4ＤＮＡを含むプラスミド（またはベクター）を出発物質にすることができる。そのＨＴ_m4内の突然変異させるコドン（１または複数）を同定する。同定した突然変異部位（１または複数）の両側には独特の制限エンドヌクレアーゼ部位がなければならない。かかる制限部位が存在しない場合は、上述のオリゴヌクレオチド媒介突然変異誘発方法を使ってＨＴ_m4ＤＮＡ中の適当な位置に制限部位を導入することにより、それらを作製することができる。プラスミドに制限部位を導入した後、該プラスミドをそれらの部位で切断して直線化する。該制限部位間のＤＮＡの配列をコードするが所望の突然変異（１または複数）を含有する二本鎖オリゴヌクレオチドを標準的な手法を用いて合成する。２本の鎖を別個に合成した後、標準的技術を用いてそれらを互いにハイブリッド形成させる。この二本鎖オリゴヌクレオチドをカセットと呼ぶ。このカセットは、直線化したプラスミドの末端と適合する３’および５’末端を持ち、プラスミドに直接連結できるように設計される。この時点で、このプラスミドは突然変異したＨＴ_m4ＤＮＡ配列を含む。ＨＴ_m4蛋白質の改変体、誘導体またはその断片は、当該技術分野で公知の方法にしたがってモノクローナル抗体などの抗体を調製する際に使用できる。それらの抗体を使用して、ＨＴ_m4を含むレセプターまたはＦｃＲＩなどの他のレセプターへのリガンド結合を遮断または模倣し、ＨＴ_m4蛋白質またはＨＴ_m4蛋白質を含有する造血細胞に用いて単離することができる。該抗体は試料中の造血細胞の検出にも役立てることができる。例えば、該方法は、抗体がＨＴ_m4蛋白質に結合するのに十分な条件下で試料を抗体と接触させ、結合した抗体の存在を検出することからなる。抗体及び方法「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体(mAbs)、キメラ抗体、溶解性の形態又は結合した形態で標識され得る抗体に対する抗イディオタイプ(anti-ID)抗体、並びに公知のいかなる技術、特に限定されないが、例えば、酵素による切断、ペプチド合成又は組み換え技術等により提供されるそれらの断片、領域又は誘導体を含む。本発明の抗ＨＴ_m4抗体はＨＴ_m4と結合することができ、それにより、例えば、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、TRAF-1、TRAF-2 、TRAF-3及びKAPを含む一以上の他のタンパク質へのＨＴ_m4の結合を阻害する。抗TRAF-1、TRAF-2又はTRAF-3及び抗KAP抗体、並びに本発明のＨＴ_m4のネイティブリガンドに結合する抗体は、それぞれ、TRAF-1、TRAF-2、TRAF-3、ＫＡＰ及びＨＴ_m4のネイティブリガンドに結合する能力を有し、そのタンパク質のＨＴ_m4への結合阻害が生じる。ポリクローナル抗体は、一つの抗原で免疫された動物の血清由来の抗体分子の不均一な集団である。モノクローナル抗体は抗原に対して特異的な抗体の実質的に均一な集団からなり、その集団は実質的に類似のエピトープ結合部位を含む。 mAbsは、当業者に公知の方法によって得ることができる。例えば、コーラーとミルスタイン、Nature 256:495-497（1975）；米国特許第4,376,110号明細書；オースベルら編、CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY、グリーンパブリッシングアソシエーションアンドウィリーインターサイエンス、ニューヨーク（1987,1992）；及びハーローとレインANTIBODIES:A LABORATORY MANUAL Co ld Spring Harbor Laboratory（1988）；コリガンら編、CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY、グリーンパブリッシングアソシエーションアンドウィリーインターサイエンス、ニューヨーク（1992,1993）を参照のこと、これらの参照文献の内容は、引用により本明細書にそのまま取り込まれる。かかる抗体はIg G、IgM、IgE、IgA、GILD及びそれらのサブクラスの全てを含むあらゆる免疫グロブリンクラスとなり得る。本発明のmAbを生産するハイブリドーマは、インビトロで、インサイチュで、又はインビボで培養することができる。インビボ又はインサイチュにおいて高力価のmAbを生産することにより、これが現在好ましい生産方法となる。ヒト化した抗体を含むキメラ抗体は、別々の部分が別々の動物種に由来している分子、例えば、ネズミmAb由来の可変部とヒト免疫グロブリン定常部とを有するもの、である。キメラ抗体は主に、例えば、適用時の免疫原性を低減させるために、及び／又は生産収率を向上させるために用いられる。キメラ抗体とその製法は、当該技術分野において公知である（キャビリら、Proc．Natl．Acad．Sci ．USA 81:3273-3277(1984)；モリソンら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 81:6851 -6855(1984)；ボーリアンら、Nature 312:643-646(1984)；キャビリら、欧州特許出願125023（1984年11月14日公開）；ノイベルガーら、Nature 314:268-270(1 985)；タニグチら、欧州特許出願171496（1985年2月19日公開）；モリソンら、欧州特許出願1739494（1986年3月5日公開）；ノイゲルガーら、PCT出願WO86/015 33（1986年3月13日公開）；クドら、欧州特許出願184187（1986年6月11日公開）；モリソンら、欧州特許出願173494（1986年3月5日公開）；サーガンら、J.Immu nol．137:1066-1074(1986)；ロビンソンら、国際特許公開＃PCT/US86/02269（19 87年4月7日公開）；リウら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84:3439-3443(1987) ；スンら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84:214-218(1987);ベッターら、Scienc e 240:1041-1043(1988)；ハーローとレインANTIBODIES:A LAB ORATORY MANUAL Cold Spring Harbor Laboratory（1988））。これらの参照文献は、引用により本明細書にそのまま取り込まれる。抗イディオタイプ(anti-Id)は、通常、一つの抗体の抗原結合部位と会合する唯一の決定基を認識する抗体である。anti-Idが調製されるmAbを用いることにより、mAbの供給源としての同種で同遺伝子型の動物（例えば、マウス株）を免疫することによりanti-Id抗体を調製することができる。免疫された動物は、これらのイディオタイプ決定基に対する抗体(anti-Id抗体)を生産することにより、免疫した抗体のイディオタイプ決定基を認識し、それに応答するであろう。例えば、米国特許第4,699,880号明細書を参照すること、これは引用により本明細書にそのまま取り込まれる。 anti-Id抗体も「免疫原」として使用することができ、さらに他の動物における免疫応答を誘導し、いわゆる抗anti-Id抗体を生産する。抗anti-Id抗体は、an ti-Idを誘導する元のmAbとエピトープ上同一とすることができる。したがって、 mAbのイディオタイプ決定基に対する抗体を使用することにより、同一の又は実質的に同一の特異性の抗体を発現する他のクローンを同定することができる。本発明の抗体は、少なくとも一つの重鎖定常部（Ｈ_c）、重鎖可変部（Ｈ_v）、軽鎖可変部（Ｌ_v）、及び軽鎖定常部（Ｌ_c）を含むことが可能であり、ここで、ポリクローナルＡｂ、モノクローナルＡｂ、それらの断片及び／又は領域は、所望の抗原の一部と結合して少なくとも一つの生物学的活性を阻害及び／又は中和する、重鎖可変部（Ｈ_v）又は軽鎖可変部（Ｌ_c）を含む。本発明の好ましい抗体は高親和性坑ＨＴ_m4及びそれらの断片又は領域であり、そしてそれらはインビボでヒトＨＴ_m4に対する強力な阻害及び／又は中和活性を有する。かかる抗体は、精製組み換えＨＴ_m4又はそのペプチド断片を用いて免疫することにより創出された抗体を含み得る。好ましい抗体としては、ＨＴ_m4の非膜貫通ドメインにおけるエピトープに結合するものである。特に好ましくは、第一及び第二の膜貫通ドメイン間の細胞外ドメインにおけるエピトープや、第三及び第四の膜貫通ドメイン間の細胞外ドメインにおけるエピトープに結合する抗体である。また、配列番号：４の１９３−２１４のアミノ酸に位置するエピトープ又は残基を含む断片も好ましい。また、好ましい抗ＨＴ_m4mAbは、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、TRAF-1、TRAF- 2、TRAF-3、KAPによるＨＴ_m4への結合をインビボで競合的に阻害する抗体、又は実質的に同一の特異的結合活性を有する抗体並びにそれらの断片及び領域である。また、本発明の好ましい抗体としては、TRAF-1、TRAF-2、TRAF-3、KAPにより認識され、配列番号：４のアミノ酸１９３−２１４に含まれるエピトープと結合するものである。また、好ましいものとしては、細胞質カルボキシル末端ドメインにおけるリン酸化部位と結合し、ＨＴ_m4のKAPへの結合を阻害する抗ＨＴ_m4抗体がある。競合阻害によるmAbの特異性及び親和性を決定するための好ましい方法としては、ハーローら、Antibodies:A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Labor atory Press、Cold Spring Harbor、ニューヨーク(1988)、コリガンら編、CURRE NT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY、グリーンパブリッシングアソシエーションアンドウィリーインターサイエンス、ニューヨーク(1992,1993)、及びミューラー、Meth．Enzymol.、92:589-601(1983)が挙げられ、これは引用により本明細書にそのまま取り込まれる。小さなペプチド配列に対する本発明の抗体であって、フリーの状態において、複合体において又は大きなタンパク質の内容におけるネイティブ配列として提示されたときにこれらの配列で認識して結合する抗体を惹起させる技術は、本分野で公知である。かかる抗体には、ハイブリドーマ又は本分野で公知の組み換え技術により生産されたネズミ、ネズミ−ヒト及びヒト−ヒト抗体が含まれる。本明細書で用いられる「抗原結合領域」という用語は、抗原と相互作用し、抗原に対する特異性及び親和性を抗体に付与するアミノ酸残基を含む抗体分子の部分を意味する。この抗体領域は、抗原結合残基の適切なコンフォメーションの維持に必要な「枠組み」アミノ酸残基を含む。好ましくは、抗原結合領域はネズミ起源であろう。他の態様においては、抗原結合領域は他の動物種、取り分けウサギ、ラット又はハムスター等の哺歯類動物由来が好ましい。本発明のキメラ抗体の抗原結合領域は、好ましくは、対象ヒトタンパク質に対して特異的な非ヒト抗体由来のものである。かかる非ヒト抗体をコードするＤＮＡの好ましい供給源としては、抗体を生産する細胞系、好ましくは、ハイブリドーマとして広く知られているハイブリッド細胞系を含む。「抗原」は、その抗原のエピトープに結合し得る抗体の生産を、動物に付加的に誘導し得る抗体によって結合され得る分子又は分子の一部である。一つの抗原は、一つか一つを超えるエピトープを持ち得る。上記の特異的反応とは、その抗原が高い選択性をもって対応する抗体と反応し、他の抗原によって誘導され得る他の抗体の多数とは反応しないことを示す意味である。本発明の抗体を生成するために使用することができる特定のペプチドとしては、配列番号：４のＨＴ_m4の１９３−２１４残基、及びＨＴ_m4の非膜貫通ドメインを含むＨＴ_m4の断片、例えば、第一及び第二の膜貫通ドメイン間や、第三及び第四膜貫通ドメイン間の細胞外ドメイン等が挙げられる。その中に含まれるペプチドの断片又はその組み合わせ、それらは、抗ＨＴ_m4抗体、その断片及び領域によって結合されるＨＴ_m4のエピトープを提供したり、提供された抗ＨＴ_m4生物活性に結合する。「エピトープ」という用語は、一以上のAbの抗原結合領域で抗体により認識され、結合され得る全ての分子の部分と解釈されると意味される。エピトープは通常、アミノ酸又は糖側鎖等の分子の化学的に活性的な表面配置からなり、特異的な電荷の特性だけでなく、特異的な三次元構造特性を持っている。「エピトープを阻害及び／又は中和すること」とは、抗体に結合したときに、インビボ、インビトロ又はインサイチュで、より好ましくはインビボで、エピトーブを含む分子又は生物体の生物学的活性の損失を生ずるエピトープをいい、ＨＴ_m4とＨＴ_m4リガンド又は他の結合タンパク質との結合を含む。本発明の抗体、その断片及び領域により認識されるエピトープは、ＨＴ_m4の１９３−２１４アミノ酸残基、又は抗ＨＴ_m4活性、本発明の抗体、その断片及び可変領域により認識され、及び／又は結合するＨＴ_m4のトポグラフィカルエピトープ又は三次元エピトープを提供する第一と第二の膜貫通ドメイン間及び第三と第四の膜貫通ドメイン間の細胞外ドメイン等のＨＴ_m4の非膜貫通ドメイン内に位置するアミノ酸残基の少なくとも一つを含有することができる。本明細書での「キメラ抗体」という用語は、一価、二価又は多価の免疫グロブリンを含む。一価のキメラ抗体は、キメラＬ鎖とジスルフィド結合により会合したキメラＨ鎖から形成される二量体（ＨＬ）である。二価のキメラ抗体は、少なくとも一つのジスルフィド結合により会合した二つのＨＬ二量体から形成される四量体（Ｈ₂Ｌ₂）である。多価のキメラ抗体も、例えば、凝集しているＣ_H領域（例えば、IgMのＨ鎖、又はμ鎖）を使用することにより生産することができる。本発明のネズミ及びキメラ抗体、断片及び領域は、個々の重（Ｈ）及び／又は軽（Ｌ）免疫グロブリン鎖を含有する。キメラＨ鎖は、ヒトＨ鎖Ｃ領域（Ｃ_H）、例えば、ＣＨ₁又はＣＨ₂等、の少なくとも一部に結合した抗原に特異的な非ヒト抗体のＨ鎖由来の抗原結合領域を含む。本発明におけるキメラＬ鎖は、ＨＴ_m4に特異的な非ヒト抗体のＨ鎖由来で、少なくともヒトＬ鎖のＣ領域（Ｃ_L）の一部に結合した抗原結合領域を含む。同一又は異なる可変部結合特異性のキメラＨ鎖及びＬ鎖を有する抗体、断片又は誘導体も、公知の工程の方法、例えば、後述のオースベル、後述のハーロー、及び後述のコリガンの方法に従って、個々のポリペプチド鎖を適当に会合することによって調製することができ、これらの参照文献は、引用により本明細書にそのまま取り込まれるこのアプローチによって、キメラＨ鎖（又はその誘導体）を発現する宿主は、キメラＬ鎖（又はその誘導体）を発現する宿主とは別々に培養され、免疫グロブリン鎖が別々に回収された後、会合される。あるいは、宿主を共に培養することが可能であり、鎖は培地内で自発的な会合に付され、次いで、集合した免疫グロブリン、断片又は誘導体が回収される。ハイブリッド細胞は、非ヒト抗ＨＴ_m4抗体生産細胞、典型的には、天然又は組み換えＨＴ_m4のいずれか、又はヒトＨＴ_m4タンパク質配列のペプチド断片に対して免疫された動物の脾臓細胞を融合することにより、形成される。あるいは、非ヒト抗ＨＴ_m4抗体生産細胞は、血液、脾臓、リンパ節若しくは他の組織又はＨＴ_m4 で免疫を受けた動物から得られたＢリンパ球であっても良い。不死化能を与える第二の融合相手はリンパ芽球細胞又はプラズマサイトーマ又はミエローマ細胞であり得、それはそれ自身では抗体を生産する細胞ではないが、悪性である。好ましい融合相手の細胞には、ＳＰ２／０（ＡＴＣＣＣＲＬ１５８１）と省略されているハイブリドーマＳＰ２／０−ＡＧ１４、及びミエローマＰ３Ｘ６３Ａｇ８（ＡＴＣＣＴＩＢ９）又はその誘導体か含まれる。例えば、後述のオースベル、後述のハーロー、及び後述のコリガンを参照すること。ＨＴ_m4に特異的なmAbを生産するネズミハイブリドーマは、ＳＰ２／０等のマウス融合相手細胞と、配列番号：４のＨＴ_m4の１９３−２１４残基又は他のＨＴ_m4 を含有する生物学的製剤から選ばれるアミノ酸を含有するペプチドを含む、精製ＨＴ_m4、組み換えＨＴ_m4、天然又は合成ＨＴ_m4ペプチドに対して免疫されたマウス由来の脾臓細胞との融合により生成される。マウスを免疫するためには、種々の異なる常法に従えば良い。例えば、マウスに、ＨＴ_m4の一次及び追加免疫を与えることができる。本発明のキメラ抗体の抗原結合部位をコードするヌクレオチド配列に寄与する細胞である抗体生産細胞も、霊長類の動物等の非ヒト細胞、又はヒト細胞の形質転換により生産することもできる。例えば、エプスタイン−バーウイルス等のウイルスを用いて、抗ＨＴ_m4抗体を生産するＢリンパ球への感染及びそれの形質転換を行うことができ、不死化抗ＨＴ_m4生産細胞を得る（コズボーら、Immunol．T oday 4:72-29(1983)）。あるいは、本分野で周知の通りの、形質転換する遺伝子産物を与えることにより、Ｂリンパ球の形質転換を行うことができる。例えば、後述の後述のオースベル、後述のハーロー、及び後述のコリガンを参照すること。ハイブリドーマを用いる抗体生産免疫学の分野における当業者が周知の標準的な手法により、細胞融合を行う。融合相手細胞系、並びにハイブリドーマの融合方法及び選択方法、及びmAbのスクリーニング方法は、本分野で周知である。例えば、後述の後述のオースベル、後述のハーロー、及び後述のコリガンを参照すること。抗体を分泌するハイブリドーマ又はトランスフェクトされた細胞をマウス腹膜腔内に注入し、適当な時間の後、高力価のmAbを含有する腹水を回収し、次いでそこからmAbを単離することにより、本発明のＨＴ_m4特異的ネズミ又はキメラmAb を大量に生産することができる。非ネズミハイブリドーマ（ラット又はヒト等）を用いての、かかるmAbのインビボ生産については、被照射又は無胸腺ヌードマウス中でハイブリドーマ細胞を培養することが好ましい。又は、ハイブリドーマ又はトランスフェクトされた細胞をインビトロで培養し、細胞培養培地から分泌されたmAbを単離することにより、又は真核細胞又は原核細胞中で組み換え的に抗体を生産することができる。断片としては、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）及びＦｖが挙げられる。これらの断片はインタクトの抗体のＦｃ断片を欠いており、より急激に循環から除かれ、そしてインタクトの抗体よりも非特異的な組織への結合が少ない（ワールら、J．Nucl．Med．24:316-325(1983)）。これらの断片は、本分野で周知の方法、例えば、（Ｆａｂ断片を生産する）パパイン又は（Ｆ（ａｂ’）断片を生産する）ペプシン等の酵素を用いてのタンパク質分解によりインタクトの抗体から生産される。治療方法本発明は、個体にＨＴ_m4のアンタゴニストを投与することを含む、個体におけるアトピー、腫瘍等のＨＴ_m4介在疾患の治療方法にも関する。アンタゴニストは、例えば、細胞ＤＮＡ複製又は増殖を阻害することにより、ＨＴ_m4遺伝子又はタンパク質の活性を阻害することができる。本明細書においては、腫瘍細胞ＤＮＡ複製の阻害には、ＤＮＡ複製の完全な抑制だけではなく、ＤＮＡ複製の頻度の低下をも含む。また、本明細書で規定されるように、主題である腫瘍成長の阻害には、腫瘍の成長を停止させること及び腫瘍の大きさを小さくすることが含まれる。ＨＴ_m4アンタゴニストには、ＨＴ_m4の、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３又はＫＡＰへの結合を抑制すること、転写、翻訳又は翻訳後修飾、細胞表面上の発現、ＨＴ_m4の分泌又は会合等の細胞内プロセシングによるＨＴ_m4生産を阻害すること等の、ＨＴ_m4の生物学的活性の少なくとも一つを阻害する化合物が含まれる。また、ＨＴ_m4アンタゴニストは、核酸及びタンパク質濃度の両者でのＨＴ_m4生産の増加又は低減制御を含むもの等の、代謝経路の制御を誘導又は増加することにより作用し得る。また、ＨＴ_m4アンタゴニストは、ＨＴ_m4に対する細胞の感受性を低減させることにより、そのような感受性を調節することができる。ＨＴ_m4アンタゴニストには、インビトロで、インサイチュで又はインビボでＨＴ_m4活性を中和する抗体又はその断片若しくは一部、ペプチド、ペプチド模倣化合物又は有機的模倣化合物が含まれる。ＨＴ_m4アンタゴニストの活性を中和又は阻害するＴＮＦを決定するために使用され得るスクリーニング方法としては、インビトロ又はインビボアッセイが含まれ得る。従って、本発明による方法においては、適当ないかなるＨＴ_m4アンタゴニストをも使用することができる。かかるＨＴ_m4アンタゴニストの例としては、ＨＴ_m4 のエピトープに特異的な抗体又はその一部、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、ＫＡＰ又はＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３、ＨＴ_m4に結合するＨＴ_m4ペプチドの非活性化リガンド、ＨＴ_m4を阻害するペプチド模倣化合物及び有機的模倣化合物が挙げられる。本発明は、特に限定されないが、ガン、アテローム性動脈硬化性血管障害、医薬による又は外科的な再灌流法後の血管(vacular)再狭窄、乾癬、炎症性関節炎及び他の炎症性疾患、自己免疫疾患、エプスタイン−バーウイルス及び移植組織の拒絶反応を含む疾患における細胞増殖を阻害する、新しい方法及び産物に関する。従って、本発明は、ＨＴ_m4のアンタゴニストを、適切な細胞に入り、そこで増殖を阻害するのが望ましいような方法で個体に投与すること含む、個体における望ましくない細胞増殖を阻害する方法を提供する。ＨＴ_m4アンタゴニストはＨＴ_m4 の活性を抑制又は低下させ、それにより細胞ＤＮＡの複製を抑制する。他の態様においては、ＨＴ_m4アンタゴニストは遺伝性アトピーの症状を介在するＨＴ_m4 の活性を抑制又は低下させる。また、特に限定されないが、外傷性負傷、心筋梗塞、心筋症、腎不全、肝不全及び発作を含む個体中の生組織の喪失に関連する健康状態の治療のためにＤＮＡ複製を開始させるＨＴ_m4の能力を利用して細胞増殖を高めることができる。例えば、本発明は、ＨＴ_m4又はＨＴ_m4アゴニストを、個体中に細胞に入れようとするような個体に投与することを含む、個体における生組織の喪失に関連する健康状態の治療のために細胞増殖を高める方法を提供する。本明細書で用いられるＨＴ_m4「アゴニスト」という用語は、ＨＴ_m4の機能又は活性を模倣又は高める、又はＤＮＡ又はＲＮＡ（核酸）及びタンパク質（アミノ酸）両者のレベルについてのＨＴ_m4発現の低減制御又は低減を防止又は阻害する分子又は組成物を意味する。例えば、ＨＴ_m4アゴニストには、キナーゼ及び抗ＫＡＰ抗体、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、又はそのリガンドの機能を模倣する分子を含む。ＨＴ_m4又はＨＴ_m4アゴニストの活性により、細胞中のＤＮＡ複製や細胞の有糸分裂が開始される。ＨＴ_m4又はＨＴ_m4アゴニストの投与は、ＨＴ_m4の自然に発生するレベルを補うか、高めるか又は取り替え、そして細胞増殖を高めることができる。本発明のＨＴ_m4、ＨＴ_m4アゴニスト及びアンタゴニストは、個別の治療剤として、又は他の治療剤との組成物として投与することができる。これらは単独で投与できるが、一般的に、選ばれた投与経路及び標準的な薬学実務に基づいて選択される、生理学的に影響を与えない薬剤担体との組成物として投与される。本明細書の内容において、ＨＴ_m4タンパク質配列に基づいて設計されヒトに使用するように意図された薬剤は、例えば、ＨＴ_m4に関連した又は内因性ＨＴ_m4の機能を改変するために設計された非ペプチド性小分子、ペプチド又はタンパク質、若しくはＨＴ_m4に関連したタンパク質又はペプチドをコードするＤＮＡ又はＲＮＡ配列を含む。投与量については、当然のことながら、特定の薬剤の薬力学的特性、その投与方法及び投与経路、レシピエントの年齢、健康状態及び体重、症状の性質及び程度、同時に行う治療の種類、治療の頻度並びに所望の効果等の、公知の因子に依存して変更される。特定の生理学的な媒体は、特に限定されないが、例えば水、塩類緩衝液、ポリオール類（グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）及びデキストロース溶液等を含んでいても良い。選択された媒体中の有効成分の至適濃度は、医学分野での化学者にとって周知の手法に従って、経験的に決定することができ、所望の最終的な調剤に依存する。治療部位への薬剤の導入方法は限定されないが、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下内、口腔内、鼻腔内、及び遺伝子療法が挙げられる。他の好適な方法は、生分解性デバイスや徐放性デバイスを含み又は使用する。経口で投与するときはタンパク質は消化に付されるため、非経口投与、例えば、静脈内、皮下内、筋内投与は通常、吸収が最適になるように行われる。非経口投与では、ＨＴ_m4アゴニスト又はＨＴ_m4アンタゴニストは、溶液、懸濁液、エマルション又は凍結乾燥粉体として、薬理学的に許容できる非経口賦形剤とともに調剤することができる。かかる賦形剤の例としては、水、塩溶液、リンゲル液、デキストロース溶液及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。リポソーム及び固定油等の非水性賦形剤も使用することができる。賦形剤又は凍結乾燥粉体には、等張性（塩化ナトリウム、マンニトール等）や化学的な安定性（緩衝剤、保存剤等）を維持する添加剤が含まれていても良い。調剤は、常法により滅菌される。好適な薬理学的担体は、本分野の標準的な参考文献であるレミントンのファーマシューティカルサイエンシーズ、エー．オーソルの最新版に記載されている。一の好適態様は、本発明によれば、強いインビボＨＴ_m4阻害及び／又は中和活性を有しうるＨＴ_m4アンタゴニストを含有する組成物であり、それはＨＴ_m4誘導性細胞成長又は増殖或いは転写因子のＨＴ_m4誘導性活性化を阻害する。他の好適な使用は、ＨＴ_m4又はＨＴ_m4アゴニストを含有する組成物であり、それは細胞成長又は細胞増殖を誘導し得るか、又はＮＦ−κＢ等の転写因子を活性化し得る。アゴニスト及びアンタゴニストのスクリーング方法本発明はさらに、モジュレーター、例えば、ＨＴ_m4のアゴニスト及びアンタゴニストのスクリーニング方法に関する。この方法は、スクリーニングされる化合物の存在下で、（ネイティブＨＴ_m4、その活性断片又は改変体を含む）ＨＴ_m4と（ＫＡＰ、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３及びネイティブタンパク質、その活性断片又は改変体を含むネイティブリガンドを含む）ＨＴ_m4と結合するリガンド又は化合物等の結合相手とを接触させることを含む方法である。該方法は、さらに結合の有無の検出を含む。本発明の方法で検出されるアゴニスト及びアンタゴニストは、例えば、インビトロで又は上記の治療方法に使用することができる。一の態様においては、この方法は、スクリーニングされる化合物の存在下でＨＴ_m4と、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２又はＴＲＡＦ−３とを接触させ、そして結合の有無を検出することを含む、ＨＴ_m4のインヒビター又はアンタゴニストをスクリーニングすることを含む。この化合物は化学ライブラリーに設置することができる。結合阻害は多くの方法によって検出され得る。例えば、本分野で公知のとおり、ＨＴ_m4、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２又はＴＲＡＦ−３のいずれかをラベルして、その他のものを、直接（放射ラベルの場合のように）固定化された基質上でラベルの検出を用いるか、結合アッセイで固定化することができる。他の態様においては、ネイティブリガンド、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２又はＴＲＡＦ−３活性の非存在又は阻害、例えば、ＮＦ−κＢ活性の非存在を観測することによって阻害を検出することができる。さらに他の態様においては、細胞増殖の低下を観測することによって阻害を決定することができる。さらに他の態様においては、ＨＴ_m4のインヒビター又はアンタゴニストをスクリーングする方法は、ＨＴ_m4とＫＡＰを接触させ、結合の存在又はＫＡＰの脱リン酸化活性を検出することを含む。上記の方法と同様に、当該技術分野に公知のようにＨＴ_m4又はＫＡＰのいずれかをラベルして、その他のものを、直接（放射ラベルの場合のように）固定化された基質上でラベルの検出を用いるか、結合アッセイで固定化することができる。他の態様においては、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２又はＴＲＡＦ−３活性の非存在又は阻害、例えば、ＮＦ−κＢ活性の非存在を観測することによって阻害を検出することができる。さらに他の態様においては、細胞増殖の低下を観測することによって阻害を決定することができる。また、リン酸塩又はＡＴＰを観測して脱リン酸の存在を示すことができる。リン酸塩又はＡＴＰの存在を検出するための鋭敏なアッセイは、本分野で極めてよく知られており、ルシフェリン／ルシフェラーゼ結合アッセイが挙げられる。さらに、ＨＴ_m4とＨＴ_m4のネイティブリガンドを接触させ、結合しないことを検出することにより、ＨＴ_m4アンタゴニストをスクリーニングすることができる。放射ラベルと固定化のための基質の使用、又は細胞増殖若しくはＮＦ−κＢ転写活性化の観測を含む上記の同様のやり方で、この態様における結合を検出することができる。アゴニストの検出については、上記のように、ＨＴ_m4とＫＡＰ、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３又はＨＴ_m4のネイティブリガンドとを接触させることができる。アゴニストは、ＮＦ−κＢ遺伝子転写、細胞増殖又はＴＲＡＦ− １、ＴＲＡＦ−２若しくはＴＲＡＦ−３活性を増加し、あるいはＫＡＰ脱リン酸化活性を低下する一以上の特性を有し得る。上記のアンタゴニストについてのものと同様のやり方で、これらの特性の一以上の検出を決定することができる。本明細書において、ＨＴ_m4アンタゴニストは、ＨＴ_m4の一以上の生物学的活性を低下又は阻害（競争阻害を含む）する分子又はタンパク質と定義される。本明細書において、ＨＴ_m4アゴニストは、ＨＴ_m4の一以上の生物学的活性を上昇又は活性化する分子又はタンパク質と定義される。ＨＴ_m4の生物学的特性又は活性には、例えば、細胞増殖及びＴＲＡＦ−２活性化が含まれる。アゴニスト及びアンタゴニストは共にモジュレーターと考えられる。（抗原結合部位に依存する）アンタゴニスト又はアゴニストとなり得る化合物の例としては、ＨＴ_m4、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、ＫＡＰ、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２及びＴＲＡＦ−３と結合する抗体が挙げられる。他の例としては、ＨＴ_m4、ＫＡＰ、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３及びＨＴ_m4のネイティブリガンドの断片又は改変体が挙げられる。本発明の特に好ましい態様としては、ＨＴ_m4及びＨＴ_m4断片及び改変体が挙げられる。関連性のあるＨＴ_m4の結合部位と実質的に同一の配列を有するが、タンパク質の他の活性又は結合部位は有していないＨＴ_m4の断片及び改変体は、有用なモジュレーターの例である。ＨＴ_m4と結合相手（例えば、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、ＫＡＰ、ＴＲＡＦ −１、ＴＲＡＦ−２及びＴＲＡＦ−３）との結合に適した公知の条件下で、スクリーニング方法を達成することができる。一般的に、細胞内ｐＨを含む生理学的条件を使用することができる。本分野で知られているように、緩衝剤を存在させることにより、反応媒体のｐＨを効果的に制御することができる。反応温度は一般的に、タンパク質の実質的な変性が生じないのであればいかなる温度であっても良い。一般的に室温が好適に採用される。細胞系内でこのアッセイをすることは特に有利となり得る。かかる態様においては、ＨＴ_m4、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、ＫＡＰ及び／又はＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２及びＴＲＡＦ−３を発現する一又は複数の細胞（造血細胞又はこれらのタンパク質をコードするＤＮＡを有する組み換え構築物を有する細胞を含む）とスクリーニングされる化合物とを接触する。一の態様においては、その方法の一又はそれ以上の工程の間、細胞は完全な又は溶解されて生存可能又は生存不可能である。さらにβ−ガラクトシダーゼ遺伝子等のレセプター遺伝子を有する細胞を、ＮＦ−κＢプロモーター、これはＨＴ_m4で活性化される、の制御下で用いることは、特に有利となり得る。この方法においては、ＨＴ_m4の阻害剤及び活性化剤を、レセプター伝子の発現を観測することによって決定することができる。アッセイが、細胞内細胞質においてＨＴ_m4活性の調節を決定する所では、細胞質へ誘導又は輸送され得るスクリーニング用化合物を選択することが一般的に望まれる。細胞質への輸送を促進するためには、細胞膜を経ての移送を可能とする、リポソーム等の賦形剤中の反応媒体にその化合物又は剤を添加すれば良い。タンパク質もベクターを介してその膜内の細胞質へ輸送することができ、それは、形質転換の際にタンパク質の発現を引き起こす。以下の実施例により本発明を説明するが、かかる実施例は何らの制限を意図するものでもない。実施例１材料と方法細胞系と初代細胞：この研究に使用される造血細胞系は、リンパ性骨髄球（ＤＵ５２８）、赤白血球（Ｋ５６２、ＯＣＩＲ）、前骨髄球（ＨＬ６０）、骨髄芽球（ＫＧ−１）、単芽球（Ｕ９３７）、Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＭＯＬＴ−４、Ｌｙ１７、Ｌｙ１３）および骨髄腫（ＯＣＩ−Ｍｙ５）系を含んでいた。用いた非造血細胞系は、骨髄支質（ＢＳ−１）、肝癌（ＨｅｐＧ２）、メラノーマ（ＨＳ２９４）、骨格筋（ＨｕＳＫ）、神経芽細胞腫（ＳＫＮＳＨ）、子宮頸癌（ＨｅＬａ）および肺癌（Ｃａｌｕ−１）細胞を含んでいた。ウシ血清をウマ血清に置換したＤＵ５２８を除くすべての細胞系を、１０％ウシ胎仔血清および１ｍＭＬ−グルタミンを補足したイスコフの改変ダルベッコの培地で維持した。ヒト肥満細胞系ＨＭＣ−１（Butterfield，J．H.ら、Leuk．Res．12:345-355（1988) )およびヒト因子依存性巨核球系、ＭＯ７ｅ由来の全ＲＮＡは、サイトームド(Cy tomed）インコーポレーテッド、ケンブリッジ、マサチューセッツのカールノッカ(Karl Nocka)博士により供与された。正常の骨髄細胞は、骨髄移植後のトランスフュージョンフィルターから回収した。９０％を越える芽球を有する初代白血球細胞は、Ｍ４急性骨髄性白血病患者の末梢血から回収した。正常の個体由来の好中球および好酸球ならびに過好酸球増加症候群の患者由来の好酸球の全ＲＮＡは、ハーバードメディカルスクールのペーターウエラー博士およびカイザーリム博士により供与された。ディファレンシャルスクリーニング用のサブトラクティブｃＤＮＡライブラリー由来のプローブの調製：ＰＴ３Ｔ７１９Ｕマルチファージミドベクター(Pharmac ia）を用いる３つのヒト造血細胞系（ＤＵ５２８、Ｋ５６２およびＫＧ−１）および１つの非ヒト造血細胞系（ＢＳ−１）由来の４つのサブトラクティブｃＤＮＡライブラリー（ＤＵ５２８／ＢＳ−１、Ｋ５６２／ＢＳ−１、ＫＧ−１／ＢＳ −１およびＢＳ−１／ＢＳ−１）の構築は、以前に記載された（Lelias，J．M. ら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA90:1479-1483(1993))。２つの造血系（ＤＵ５２８／ＢＳ−１およびＫＧ−１／ＢＳ−１）および非造血系（ＢＳ−１／ＢＳ− １）サブトラクティブライブラリーから取り出されたｃＤＮＡ挿入物を精製し、³² Ｐで標識し、Ｋ５６２／ＢＳ−１ライブラリーをスクリーニングするためのプローブとして使用した(Sambrook，J．ら、Molecular Cloning:ALaboratoryMannu al,第２版(Cold Spring Harbor Lab.,Cold Spring Harbor，NY(1989))。Ｕ９３７細胞系の誘導：Ｕ９３７細胞系は、１ｍｌ当たり５ｘ１０細胞の濃度まで生育させ、５０ｎＭホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ；シグマ）で分化を誘導した。ＨＴ_m4遺伝子の染色体の位置：ＨＴ_m4遺伝子の染色体の位置を、以前に記載された蛍光インサイチュ・ハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）により決定した（コバヤシ(Kobayashi)ら、Blood，81:3027-3033(1993))。ヒト中期を、フィトヘマグルチニン刺激した末梢血リンパ球から調製した。ＨＴ_m4ｃＤＮＡを、ビオチン −１１−ＵＴＰを用いるニックトランスレーションにより標識した（Enzo Diagn ostics，Syosset，NY)。ビオチン標識プローブを、中期細胞にハイブリダイズし、フルオレッセイン結合アビジン(Vector Lab，Burlingame，CA)で検出した。スライドは、使用したプローブを知らない２人の別々の観察者により調べた。逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）：逆転写反応は、第１鎖ｃＤＮＡを得るために種々の細胞型に対して濃縮した細胞系または細胞由来のＲＮＡを用いて、（Sanger，F.ら、Proc.Natl.Acad．Sci．USA74:5463-5467（1977))記載のように行なった。ｃＤＮＡを、３８８ヌクレオチドの予想ＰＣＲ産物を与えるＨＴ_m4のヌクレオチド７２１〜１０８７をまたぐプライマーを用いて、（Wulf ，G．M．ら、EMBO J．12: 5065-5074(1993)）記載のようにＰＣＲ増幅反応に供した。使用したセンスプライマーは、５’−ＴＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＴＴＣＴＧＴＧＴＡＡＴＣＡＡＧＡ−３’（配列番号：１）であり、アンチセンスプライマーは、５’−ＧＡＴＴＡＴＡＣＣＧＣＣＴＴＣＧＴＴＣＣＴＴＡＡＡＣＣ−３’ （配列番号：２）であった。ＰＣＲ反応は、１００ｎＭのプライマーを用いて、変性（９４℃で１分）、アニーリング（５４℃で１分）および伸長（７２℃で２分）の３０サイクルで行なった。一般的な方法：ＲＮＡは、ＲＮＡゾル法（Biotecx Laboratories，Houston，TX ）を用いて単離した。ＤＮＡシーケンスは、適切なＤＮＡ断片をＭ１３にサブクローニングした後、ジデオキシヌクレオチド・チェーン−ターミネーション技術（Sanger，F.ら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA74:5463-5467(1977))により行なった。結果クローンＨＴ_m4の単離：２つの造血系ライブラリー（造血系ｃＤＮＡに対して濃縮された）由来のｃＤＮＡプローブおよび非造血系ＢＳ−１ライブラリー由来のｃＤＮＡプローブを用いるＫ５６２造血系ライブラリーのディファレンシャルスクリーニングにより、造血系プローブにのみ陽性にハイブリダイズしたクローンが単離された。これらのうちのクローンＨＴ_m4と称される１つをプローブとして用いて、種々の造血細胞系および非造血細胞系由来の全ＲＮＡからなるノーザンブロットパネルをスクリーニングした。ＨＴ_m4の発現パターン：ノザンブロットおよびＲＴ−ＰＣＲ解析の組み合わせを用いて、組織と遺伝子の系統発現のスペクトラムを決定した。クローンＨＴ_m4のｃＤＮＡ挿入物は、骨髄および赤血球系譜を含む５つの造血細胞株中の約１．７ｋｂの転写物や正常ヒト骨髄細胞にハイブリダイズした。ＨＴ_m4およびｍＲＮＡは、Ｔ及び顆粒球分化潜在性（ＤＵ５２８）を用いたＴ細胞リンパ球系（Ｌｙ１７）およびリンフォ骨髄白血球系中では検出できなかった。肺、頸、脳、骨格筋、メラノーマ、ヘパトーマ、および骨髄間質細胞を含む、７つの非造血細胞株すべてにおいて、ハイブリダイスしていないｍＲＮＡを検出することができた。これらの非造血細胞株は、外胚葉、内胚葉および中胚葉起源の細胞を含んでいた。ｍＲＮＡは、Ｍ４急性骨髄白血病（ＡＭＬ）に罹っていると診断された患者の初代芽細胞にもなかった。ＲＮＡ試料、特にノザンブロット分析に限らず、多くの細胞由来のもののスクリーニングを容易にするために、我々はＲＴ−ＰＣＲにより発現を試みた。逆転写後に得られたｃＤＮＡの第一の鎖の質は、ハウスキーピング遺伝子であるＨＰＲＴ用のプライマーを用いて評価されたものと同様に、満足なものだった。ＨＴ_m4 ＣＤＮＡのヌクレオチド配列に基づき、オリゴヌクレオチドを合成し、ＰＣＲ増幅用の特定のプライマーとして用いた。３８８ヌクレオチド長ＤＮＡの予想されるＰＣＲ産物を正常骨髄細胞およびＨＬ６０細胞株で得られたが、ＨｅＬａおよびＬｙ１７細胞株では得られず、ノザンブロット分析を確かめた。ヒト肥満細胞（ＨＭＣ−１）および巨核球株（ＭＯ７ｅ）由来のＲＮＡは、ＨＴｍＲＮＡに対して陽性であった。正常な好酸球または好中球、および高好酸球症候群（ＨＥＳ）に罹った患者由来の好酸球由来のＲＮＡも予想されるＰＣＲ産物を生産した。２つの白血球Ｔ細胞株（Ｌｙ１３およびＭＯＬＴ４）および骨髄種細胞株（ＯＣＩ−Ｍｙ５）もＨＴ_m4に対して陽性であることがわかった。ＰＣＲ由来のＤＮＡはすべて、続くサザン分析で放射能ラベルしたＨＴ_m4明確にハイブリダイズした。ＨＴ_m4ヒトｃＤＮＡの分子分析：ＨＴ_m4ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および予想されるアミノ酸配列を図１Ａおよび１Ｂに示す。１６７２ヌクレオチド長ｃＤＮＡは、９７位のヌクレオチドから始まり、２５ｋＤａの計算された分子質量を有する２１４アミノ酸の蛋白質をコードする長いオープンリーディングフレームを含む。カイトードゥリットル(Kyte-Doolittle)アルゴリズムを用いた親水性分析（カイト(Kyte，J.)とドゥリットル(Doolittle，R.F.)J．Mol．Biol．157:105-1 32(1982)）は、ＨＴ_m4が２０〜２１アミノ酸の４つの疎水性ドメインを含むことを示している。第一の疎水性ドメインの始まり前のアミノ末端領域は、４つのプロリンを含む。膜貫通部分の間の各親水性領域は、１つのプロリンを含む。セリン／スレオニンのカゼインキナーゼ２リン酸化用のいくつかの基質（ピナ(Pina ，L.a.）Biochim．Biophys．Acta 1054:267-284(1990))は、残基２４（ＴＧＰＥ）、１５５（ＳＳＳＥ）、１８１（ＴＬＬＥ）、および２０３（ＳＲＥＥ）で見つかっており、プロテインキナーゼＣリン酸化用のものは残基１４９（ＳＬＲ）で見つかっている。該配列は、２つの小さなループを細胞外に突出し、細胞質にアミノ末端部分とカルボキシ末端部分を保持している、膜を４回貫通するポリペプチド鎖と一致している。細胞株Ｕ９３７の分化中のＨＴ_m4の発現：ＨＴ_m4 ｍＲＮＡの発現が細胞分化の段階により変化するかどうかを確かめるために、我々は単芽球細胞株Ｕ９３７において誘導された分化の結果を考察した。細胞をＰＭＡに曝露すると、最終的に分化したマクロファージに対するマーカーであるＣＤ１１ｂをモニターすることにより、形態学的および分子的に確認されるように、マクロファージへの分化を急速に誘導した（アーノート(Arnout，M.A.)Immunol．Rev．114:145-180（1990) )。４８時間の期間を超えるＨＴ_m4ｍＲＮＡの発現は、初め増加し、続いてダウンレギュレーションを示し、そのため３日目までＨＴ_m4転写物が非常に低いレベルで検出できた。ＨＴ_m4は染色体１１ｑ１２−１３に位置する：３０種の中期から４１個の染色体をポジティブ染色体バンドで得た。バンド１１ｑ１２を１８個の染色体１１ホモログで標識し、バンド１１ｑ１３．１を２１個の染色体１１ホモログで標識し、バンド１１ｑ１３．２を２個の染色体１１ホモログで標識した。これらの細胞では、他の染色体についてシグナルを検出しなかった。同様の結果が、このプローブを用いた追加の実験で得られた。従って、ＨＴ_m4は染色体１１ｑ１２−１３．１に位置する。実施例ＩＩＨＴ_m4と相互作用する標的タンパク質を検索するために、二重のハイブリッド酵母クローニングシステムを利用した。フィールズ、エス．およびソング、オー．、Nature 34:245を参照すること、この教示は引用によりそのまま本明細書に取り込まれる。ＬｅｘＡＤＮＡ結合ドメインを、ＨＴ_m4のカルボキシル末端の最後の７５アミノ酸に融合して、融合タンパク質、ベクター、ＬｅｘＡ−７５ＨＴｍ４を構築した。ＬｅｘＡ結合ドメインはＧＡＬ４−活性化ドメイン（ＧＡＤ）に結合し、ＧＡＬ４結合ドメインの代替物として頻繁に使用されている。ＬｅＸＡ−ＨＴ_m4 構築物の配列を決定して、ＨＴ_m4断片が、ミューテーションを受けずに正しくインフレームであることを確認した。ＨＴ_m4の部分は、第四の親水性膜貫通ドメインと細胞質親水性カルボキシル末端とを含んでいた。１３日目のラット胎児ＧＡＤ−ｃＤＮＡライブラリーＤＮＡ体と共に、ＬｅＸＡ−７５ＨＴ_m4ＤＮＡでＨＩＳ３／ＬａｃＺ酵母株を形質転換した。ヒスチジンによる選択を行わずに、約１５００万個の形質転換体を得た。このことは、トランスフェクションの効率が非常に高いことを示している。ヒスチジンによる選択を行ったところ、約２０のヒスチジン非要求性酵母クローンを得た。ヒスチジンを除いたプレートにおけるこれらのクローンの生存は、ＨＴ_m4と相互作用し、宿主の酵母株中のヒスチジン遺伝子を活性化させる、共形質転換されたクローン由来のタンパク質の存在を示すものである。これらのクローンについてのβ−ガラクトシダーゼ活性をテストしたところ、コロニーの９０％が、非常に濃い青（７０％）から淡い青に至る陽性の青色反応を示した。約１０％のみが陰性であったことから、ヒスチジンによって非常に効率的な前選択が行われたことが示された。予備的な分析において、１５の濃い青を示す酵母株からのプラスミドＤＮＡを細菌に形質転換し、ロイシンプレートでｃＤＮＡを選択して各酵母クローンから４〜５のコロニーをピックアップした。次いで、ＬｅＸＡ−ＨＴ_m4ＤＮＡと共に、各プラスミドからのＤＮＡで個別に酵母を形質転換し、どのクローンがβ−ガラクトシダーゼ活性の原因となっているかについて調べた。ＨＴ_m4に特異的に相互作用する二つのクラスのタンパク質が同定された。ＫＡＰＨＴ４ＢＰ−１と名づけられた、単離された最初のクローンは、基質 −特異性を有するホスファターゼであるＫＡＰ（ＣＤＫ２関連タンパク質）と呼ばれるヒトｃＤＮＡと８５％が同一の、３１１塩基対の部分ｃＤＮＡを含んでいた。ＨＴ４ＢＰ−１は、ＫＡＰタンパク質のカルボキシル末端に対応する１０３アミノ酸の長いオープンリーディングフレームを含んでいる。この領域内に、プロテインチロシンホスファターゼの触媒中心の特徴的なモチーフＨＣＸＸＸＸＧＲがあることは重要である。ＨＴ４ＢＰ−１／ＫＡＰとＨＴ_m4との間の相互作用の特異性を調べるために、ＨＴ４ＢＰ−１をＬｅｘＡ−ＬａｍｉｎとＬｅｘＡ− ＭＥＫ（キナーゼタンパク質）で形質転換した。ＬＴＨプレート上ではコロニーは得られなかった。対照的に、ＨＴ４ＢＰ−１をＬｅＸＡ−７５ＨＴ_m4で共形質転換を行ったところ、多数のコロニーを得ることができた。これらのコロニーの個々について、かき取ってβ−ガラクトシダーゼ活性を調べたところ、これら全てが強い陽性の青色反応を示した。ＬｅＸＡ−７５ＨＴ_m4を自己形質転換又はＧＡＤ−ｂｙｒ、ＧＡＤ−ＭＥＫ、ＧＡＳ−ｒａｓおよびＧＡＤ−ｒａｃで形質転換しても、いかなるコロニーをも生じなかった。これらの結果から、ＨＴ_m4とＫＡＰとの間の結合は非常に特異的であることが示された。ＬｅＸＡ−７５−ＨＴ_m4中のＫＡＰ結合ドメインについて調べるために、ＬｅｘＡ−ＨＴ_m4擬似物でデリーションを作製した。ＬｅｘＡ−ＨＴ_m4の尾部を切断して膜貫通４ドメインを除去し、親水性細胞質尾部の最後の２５アミノ酸だけからなるＬｅＸＡ−２５ＨＴ_m4擬似物を得た。ＬｅＸＡ−２５ＨＴ_m4はそれ単独ではコロニーを生じさせなかったが、ＨＴ４ＢＰ−１／ＫＡＰと一緒であれば、全てがβ−ｇａ１活性が陽性である多数のコロニーを生じさせた。このことから、二元のハイブリッドアッセイ（two-hybrid assay）において、ＨＴ_m4の親水性尾部だけで、ＫＡＰタンパク質への結合性を与えるに十分であることが明らかになった。ＴＲＡＦ−２ＨＴ４ＢＰ−３は、ＴＲＡＦ−２と８７％の同一性を示す３３６塩基対のｃＤＮＡである。このｃＤＮＡクローンは１０９アミノ酸の長いオープンリーディングフレームを含む。この領域は、ＴＲＡＦモチーフが存するアミノ酸残基におけるＴＲＡＦ−２タンパク質のカルボキシ末端における領域に対応する。ＨＴ４ＢＰ−３と同じ重複ｃＤＮＡを有する、第二のｃＤＮＡクローンであるＨＴ４ＢＰ−２は、別の青色酵母コロニーから単離された。ＬｅｘＡ−７５ＨＴ_m4で形質転換されたクローンＨＴ４ＢＰ−２／ＴＲＡＦ−２は、極めて多数のコロニーを生じさせ、その全てのコロニーを、β−ｇａｌ活性の強い青色陽性について試験した。ＬｅｘＡ−Ｌａｍｉｎ又はＬｅｘＡ−ＭＥＫで共形質転換したＨＴ４ＢＰ−３／ＴＲＡＦ−２は、ＨＴ_m4で形質転換したものよりも明らかにコロニー生育が遅れていた。これらの結果は、ＴＲＡＦ−２とＨＴ_m4のカルボキシ末端の間に優先的な結合性があることを明らかに示すものであった。ＨＴ_m4が２つの他のＴＲＡＦ様蛋白質、ＴＲＡＦ−１およびＴＲＡＦ−３にも結合するかどうかを試験するために、ＴＲＡＦ−１をＴＲＡＦ−２と同時に単離し、２つのＴＲＡＦは、ＴＮＦレセプターテールとの複合体としてともに結合するように考えられた。ＴＲＡＦ−３を、ＥＢＶトランスフォーミング蛋白質である後期膜蛋白質（ＬＭＰ−２）の細胞質テールに結合する蛋白質として単離した。前記ソングとフィールドに記載されたプロトコールを、ＧＡＤベクターを用いて繰り返した。ＧＡＤ−ＴＲＡＦ１およびＧＡＤ−ＴＲＡＦ３ベクターは、ハーバードのジョージモシアロス博士およびエリオットキーフ博士により供与された。驚くべきことに、ＬｅＸＡ−７５ＨＴ_m4は、ＴＲＡＦ−２に結合するが、ＴＲＡＦ−１またはＴＲＡＦ−３のいずれとも相互作用しない。しかしながら、切断テールマイナス膜貫通４ドメインであるＬｅＸＡ−２５ＨＴ_m4は、ＴＲＡＦ−１およびＴＲＡＦ−３と非常によく結合する。均等物当業者であれば、単なる日常的実験手法により、本明細書に記載された発明の具体的態様に対する多くの均等物を認識し、あるいは確認することができるであろう。これらのおよび他のすべての均等物は、下記請求の範囲に含まれることを意図されている。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１０年４月１０日（１９９８．４．１０）【補正内容】２４．該結合相手が、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、ＫＡＰ、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、又はＴＲＡＦ−３である請求項２３の方法。２５．該ＨＴ_m4及び該結合相手が細胞中で共発現される請求項２３の方法。２６．該ＨＴ_m4及び該結合相手が細胞外で接触する請求項２３の方法。２７．該検出工程が細胞増殖を観測する請求項２３の方法。２８．該検出工程がレセプター遺伝子の遺伝子転写を観測する請求項２３の方法。２９．該レセプター遺伝子がＮＦ−κＢによる転写制御下にある請求項２８の方法。３０．該検出工程がＨＴ_m4のＫＡＰ脱リン酸化を観測する請求項２３の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 1/16 Ａ６１Ｐ 13/12 9/10 29/00 13/12 31/22 29/00 35/00 31/22 37/06 35/00 43/00 １０５ 37/06 Ｃ０７Ｋ 14/705 43/00 １０５ 16/28 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ａ６１Ｋ 37/02 16/28 37/52 (72)発明者アドラ，チェイカー，エヌ. アメリカ合衆国マサチューセッツ 02109 ボストン，デヴォンシアプレイス１，アパートメント 3601 (72)発明者レリアス，ジーン―ミッシェルアメリカ合衆国オハイオ 43215 コロンブス，イーストフルトンストリート 330ビー

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳動物のＨＴ_m4タンパク質をコードする、組み換えＤＮＡ分子。２．配列番号：３のヌクレオチド配列で特徴づけられる請求項１のＤＮＡ分子。３．配列番号：３の６７３〜７３８のヌクレオチド配列で特徴づけられる請求項１のＤＮＡ分子。４．ＨＴ_m4に結合する抗体。５．ＨＴ_m4の細胞質カルボキシル末端ドメインに結合する請求項４の抗体。６．ＨＴ_m4のネイティブリガンドに特異的なＨＴ_m4のエピトープに結合する請求項４の抗体。７．ＫＡＰに特異的なエピトープでのＨＴ_m4の細胞質カルボキシル末端ドメインのリン酸化部位に結合する請求項４の抗体。８．ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２及びＴＲＡＦ−３からなる群より選ばれるＴＮＦレセプター関連因子に特異的なＨＴ_m4のエピトープに結合する請求項４の抗体。９．ＨＴ_m4活性を活性化又は阻害するのに十分な量のＨＴ_m4のアゴニスト又はアンタゴニストを哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物のＨＴ_m4介在細胞増殖の病状を治療する方法。１０．アンタゴニストが、抗ＴＲＡＦ−２抗体、抗ＨＴ_m4抗体及びＫＡＰからなる群より選ばれる請求項９の方法。１１．細胞増殖の病状が腫瘍である請求項９の方法。１２．細胞増殖の病状が、アテローム性動脈硬化性血管障害、血管再狭窄、乾癬、炎症性関節炎、自己免疫疾患、エプスタイン−バーウイルス、炎症及び移植組織の拒絶反応からなる群より選ばれる疾患に関連する請求項９の方法。１３．アンタゴニストが、抗ＴＲＡＦ−１抗体、抗ＴＲＡＦ−３抗体及びＨＴ_m4 のネイティブリガンドに対する抗体からなる群より選ばれる請求項９の方法。１４．有効量のＨＴ_m4又は有効量のＨＴ_m4のアゴニストを投与することを含む、哺乳動物における治療のために細胞増殖を高める方法。１５．アゴニストがＨＴ_m4のネイティブリガンド、キナーゼ又は抗ＫＡＰ抗体である請求項１４の方法。１６．哺乳動物が外傷性負傷、心筋梗塞、心筋症、腎不全、肝不全及び発作からなる群より選ばれる症状を有する請求項１４の方法。１７．抗ＫＡＰ抗体を哺乳動物に投与して、ＫＡＰのＨＴ_m4タンパク質のカルボキシル末端への結合を阻害することを含む、哺乳動物中の生きている組織の喪失に関連する症状の治療のために細胞増殖を高める方法。１８．症状が、外傷性負傷、心筋梗塞、心筋症、腎不全、肝不全及び発作からなる群より選ばれる請求項１７の方法。１９．該ＨＴ_m4とＨＴ_m4のアンタゴニストとを接触させることを含む、ＨＴ_m4 のリガンド／抗リガンド結合を阻害する方法。２０．アンタゴニストが、抗ＴＲＡＦ−１抗体、抗ＴＲＡＦ−２抗体、抗ＴＲＡＦ−３抗体、抗ＨＴ_m4抗体、ＨＴ_m4のネイティブリガンドに対する抗体及びＫＡＰからなる群より選ばれる請求項１９の方法。２１．該ＨＴ_m4が配列番号：４の１９３〜２１４のアミノ酸を含む請求項１９の方法。２２．抗ＨＴ_m4抗体、ＨＴ_m4のネイティブリガンドに対する抗体及びＫＡＰからなる群より選ばれるＨＴ_m4のアンタゴニストの有効量を投与することを含む、哺乳動物における遺伝性アトピーを治療する方法。２３．モジュレーターの存在下で、ＨＴ_m4とＨＴ_m4の結合相手とを接触させ、該ＨＴ_m4の該結合相手への結合を検出することを含む、ＨＴ_m4活性を調節するための化合物をスクリーニングする方法。２４．該結合相手が、ＨＴ_m4のネイティブリガンド、ＫＡＰ、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、又はＴＲＡＦ−３である請求項１の方法。２５．該ＨＴ_m4及び該結合相手が細胞中で共発現される請求項２の方法。２６．該ＨＴ_m4及び該結合相手が細胞外で接触する請求項２の方法。２７．該検出工程が細胞増殖を観測する請求項２の方法。２８．該検出工程がレセプター遺伝子の遺伝子転写を観測する請求項２の方法。２９．該レセプター遺伝子がＮＦ−κＢによる転写制御下にある請求項６の方法。３０．該検出工程がＨＴ_m4のＫＡＰ脱リン酸化を観測する請求項２の方法。