JP2001070306A - 血漿量及び／又は血液量を測定するための試薬並びにその使用及び製造方法 - Google Patents
血漿量及び／又は血液量を測定するための試薬並びにその使用及び製造方法Info
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- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
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Abstract
(57)【要約】
【課題】日常的な臨床検査において、低価格でかつ迅速
に血漿量及び／又は血液量を測定することができる方法
並びに試薬及びその製造方法を提供する。 【解決手段】少なくとも６４ｋDaの分子量を有する色素
タンパク質であるヘモグロビン誘導体、又は少なくとも
一部に一酸化炭素を配位子として結合したヘモグロビン
誘導体を含有する試薬により上記課題を解決し、併せ
て、その使用方法や製造方法も提供する。これらのヘモ
グロビン誘導体の所定量を患者に投与し、患者の血液と
ヘモグロビン誘導体が混合されるのを待って、少なくと
も一つの試料を患者より採取し、試料中のヘモグロビン
誘導体含量、又はヘモグロビン誘導体に結合した配位子
の含量を測定し、血漿量及び／又は血液量を決定するこ
とができる。
に血漿量及び／又は血液量を測定することができる方法
並びに試薬及びその製造方法を提供する。 【解決手段】少なくとも６４ｋDaの分子量を有する色素
タンパク質であるヘモグロビン誘導体、又は少なくとも
一部に一酸化炭素を配位子として結合したヘモグロビン
誘導体を含有する試薬により上記課題を解決し、併せ
て、その使用方法や製造方法も提供する。これらのヘモ
グロビン誘導体の所定量を患者に投与し、患者の血液と
ヘモグロビン誘導体が混合されるのを待って、少なくと
も一つの試料を患者より採取し、試料中のヘモグロビン
誘導体含量、又はヘモグロビン誘導体に結合した配位子
の含量を測定し、血漿量及び／又は血液量を決定するこ
とができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は血漿量及び／又は血
液量を測定するための新規試薬及び測定方法、並びにそ
のための特定のヘモグロビン誘導体の使用、一酸化炭素
を配位子として結合したヘモグロビン誘導体を含有する
血漿量及び／又は血液量を測定するための組成物並びに
その製造方法等に関する。
液量を測定するための新規試薬及び測定方法、並びにそ
のための特定のヘモグロビン誘導体の使用、一酸化炭素
を配位子として結合したヘモグロビン誘導体を含有する
血漿量及び／又は血液量を測定するための組成物並びに
その製造方法等に関する。
【０００２】
【従来の技術】血液量(blood volume)とは、血漿量及び
赤血球量からなる循環血液の全量をいう。組織への十分
な血流は全ての組織の機能を維持する上で必要である。
血液及び体液の欠損は、生命機能を維持するための血液
量の分布を不均一にする。このような場合には、いくつ
かの組織には血流が十分でないため、結果としてこれら
の組織に障害が生じるおそれがある。心臓血管系の充足
状態や血液や体液を欠損した患者の十分な血流を決定す
るための尺度としての血漿量は、このように日常的な臨
床検査や研究にとって大変重要である。
赤血球量からなる循環血液の全量をいう。組織への十分
な血流は全ての組織の機能を維持する上で必要である。
血液及び体液の欠損は、生命機能を維持するための血液
量の分布を不均一にする。このような場合には、いくつ
かの組織には血流が十分でないため、結果としてこれら
の組織に障害が生じるおそれがある。心臓血管系の充足
状態や血液や体液を欠損した患者の十分な血流を決定す
るための尺度としての血漿量は、このように日常的な臨
床検査や研究にとって大変重要である。
【０００３】従って、従来から、血漿量及び／又は血液
量を測定するための多くの方法が開発されてきた。
量を測定するための多くの方法が開発されてきた。
【０００４】放射性同位元素による標識を用いることに
よって赤血球量や血漿量を測定する標準的な方法は、１
９７３年にすでに、International Society for Hemato
logyにおいて報告されている(British Journal of Hema
tology, vol.25 (1973), 801-814)。赤血球量を測定す
るためには、患者の赤血球を51Crを含む溶液と混合し、
混合液を１５分間保温し、最後に赤血球を回収し、洗浄
する方法が推奨されている。放射活性標識された赤血球
は再び患者に注入される。注入後１０分及び２０分後
に、５〜１０mLの血液試料を患者から採取し、赤血球を
溶解してその容量を放射活性を測定することによって決
定する。
よって赤血球量や血漿量を測定する標準的な方法は、１
９７３年にすでに、International Society for Hemato
logyにおいて報告されている(British Journal of Hema
tology, vol.25 (1973), 801-814)。赤血球量を測定す
るためには、患者の赤血球を51Crを含む溶液と混合し、
混合液を１５分間保温し、最後に赤血球を回収し、洗浄
する方法が推奨されている。放射活性標識された赤血球
は再び患者に注入される。注入後１０分及び２０分後
に、５〜１０mLの血液試料を患者から採取し、赤血球を
溶解してその容量を放射活性を測定することによって決
定する。
【０００５】血漿量を測定するための対応する方法にお
いては、放射活性を有するヨウ素で標識されたヒト血清
アルブミンが患者の血漿に加えられる。試料の採取とそ
の評価は、赤血球量を測定する方法と本質的に同様であ
る。
いては、放射活性を有するヨウ素で標識されたヒト血清
アルブミンが患者の血漿に加えられる。試料の採取とそ
の評価は、赤血球量を測定する方法と本質的に同様であ
る。
【０００６】放射能の負荷を考慮すると、日常的な注
射、特に度重なる放射性同位元素の投与は、完全に日常
的な検臨床査から排除される。従って、これらの標準的
な方法は科学的な目的又は例えば真性多血球血症のよう
な特殊な病態について用いられるのみである。
射、特に度重なる放射性同位元素の投与は、完全に日常
的な検臨床査から排除される。従って、これらの標準的
な方法は科学的な目的又は例えば真性多血球血症のよう
な特殊な病態について用いられるのみである。
【０００７】さらに、従来技術においては、血漿量を測
定するために、色素化合物を患者の血液に分析物として
導入する方法が開発されている。この方法では、例え
ば、エバンスブルー(Evans Blue)又はインドシアニング
リーン(Indocyanin green : ICG)を静脈注射し、血漿と
混合し、試料を採取した後に、色素濃度を分光測定的に
又は濃度測定的に決定する(Haller et al, Anaesthetis
t, Vol.41 (1992), 115-120; 及び Gehring et al., In
fusion therapy and Transfusion medicine, Vol. 23
(1996), 86-91)。血漿によってこれらの色素が希釈され
ることから、血漿量を求めることは可能である。しかし
ながら、これらの方法は患者に対して、いくつかの危険
を含んでいるという事実が明らかになった。エバンスブ
ルー(EvansBlue)という色素は変異原性を持っているこ
とが疑われ、従って、ヒトの血漿量の測定には不適当で
ある。インドシアニングリーン(ICG)の導入は、中枢静
脈や中枢動脈になされるべきであり試料は動脈から採取
される。従って、測定を行うためには、中枢静脈及び／
又は動脈カテーテルが必要となる。カテーテルの適用や
挿入は患者にとって危険性が無いことはなく、また大変
費用がかかる。その上、血漿タンパク質と結合するICG
は、酸素飽和度を測定するための非侵襲的方法として、
臨床的、日常的に用いられているパルス酸素測定を妨害
し（Scheller et al., Anesthesiology, Vol.65 (198
6), 550-552）、3.2分の血漿半減期しかない。この色素
は専ら肝臓によって排泄される（Haller et al, 既述文
献）。例えば、やけどの後のアルブミンの滲出などの血
漿タンパク質の欠損に伴い、ICGが血漿タンパク質に結
合するため、あまりに高い血漿量が測定されることがあ
る。
定するために、色素化合物を患者の血液に分析物として
導入する方法が開発されている。この方法では、例え
ば、エバンスブルー(Evans Blue)又はインドシアニング
リーン(Indocyanin green : ICG)を静脈注射し、血漿と
混合し、試料を採取した後に、色素濃度を分光測定的に
又は濃度測定的に決定する(Haller et al, Anaesthetis
t, Vol.41 (1992), 115-120; 及び Gehring et al., In
fusion therapy and Transfusion medicine, Vol. 23
(1996), 86-91)。血漿によってこれらの色素が希釈され
ることから、血漿量を求めることは可能である。しかし
ながら、これらの方法は患者に対して、いくつかの危険
を含んでいるという事実が明らかになった。エバンスブ
ルー(EvansBlue)という色素は変異原性を持っているこ
とが疑われ、従って、ヒトの血漿量の測定には不適当で
ある。インドシアニングリーン(ICG)の導入は、中枢静
脈や中枢動脈になされるべきであり試料は動脈から採取
される。従って、測定を行うためには、中枢静脈及び／
又は動脈カテーテルが必要となる。カテーテルの適用や
挿入は患者にとって危険性が無いことはなく、また大変
費用がかかる。その上、血漿タンパク質と結合するICG
は、酸素飽和度を測定するための非侵襲的方法として、
臨床的、日常的に用いられているパルス酸素測定を妨害
し（Scheller et al., Anesthesiology, Vol.65 (198
6), 550-552）、3.2分の血漿半減期しかない。この色素
は専ら肝臓によって排泄される（Haller et al, 既述文
献）。例えば、やけどの後のアルブミンの滲出などの血
漿タンパク質の欠損に伴い、ICGが血漿タンパク質に結
合するため、あまりに高い血漿量が測定されることがあ
る。
【０００８】ICGを用いて血漿量を測定する方法は３０
年以上も前の従来技術として知られているが（Bradley,
E.C. and Barr J.W., Life Sci., Vol.7 (1968), 1001-
1007）、上述したような問題があるため、この方法を臨
床的な日常検査として実行するのは困難であった。
年以上も前の従来技術として知られているが（Bradley,
E.C. and Barr J.W., Life Sci., Vol.7 (1968), 1001-
1007）、上述したような問題があるため、この方法を臨
床的な日常検査として実行するのは困難であった。
【０００９】フルオレセイン色素で標識することによる
赤血球量の測定は、すでに従来技術において実施されて
いる（Ohrt et al., Ansth. Analog., Vol. 87 (1998),
1234-1238）。この方法は、患者の赤血球をフルオレセ
インで標識し、これらを患者に再注射して使用される。
血液と混合した後、試料を採取し、フルオレセイン含量
がフローサイトメトリー(flow cytometry)によって分析
される。赤血球の標識とそれに続く分析が1時間以上も
続くという事実のために、この方法の適用は、赤血球量
の迅速な測定がそれほど重要でない課題範囲に限定され
る。
赤血球量の測定は、すでに従来技術において実施されて
いる（Ohrt et al., Ansth. Analog., Vol. 87 (1998),
1234-1238）。この方法は、患者の赤血球をフルオレセ
インで標識し、これらを患者に再注射して使用される。
血液と混合した後、試料を採取し、フルオレセイン含量
がフローサイトメトリー(flow cytometry)によって分析
される。赤血球の標識とそれに続く分析が1時間以上も
続くという事実のために、この方法の適用は、赤血球量
の迅速な測定がそれほど重要でない課題範囲に限定され
る。
【００１０】最後に、所定量の一酸化炭素を呼吸換気(b
reath-ventilation)されている患者に与え，最終的に血
液の一酸化炭素による飽和を測定するという血液量測定
方法が開発された（Christensen et al., Anaesthesio
l. Scand., Vol. 730, (1993), 622-627; 及び Poulsen
et al., Eur.J.Appl.Physiol., Vol. 77 (1998), 457-
461）。所定量の一酸化炭素の適用は、大変高価であ
り、人工的に換気されている患者に限定される。
reath-ventilation)されている患者に与え，最終的に血
液の一酸化炭素による飽和を測定するという血液量測定
方法が開発された（Christensen et al., Anaesthesio
l. Scand., Vol. 730, (1993), 622-627; 及び Poulsen
et al., Eur.J.Appl.Physiol., Vol. 77 (1998), 457-
461）。所定量の一酸化炭素の適用は、大変高価であ
り、人工的に換気されている患者に限定される。
【００１１】この方法の別の形態によれば、患者から血
液が採取され、一酸化炭素処理される。一酸化炭素と結
合したヘモグロビンを含む赤血球は再注射され、完全な
混合及び試料の採取の後、血液中の一酸化炭素濃度が測
定される（Obata et al., British Journal of Anaesth
esia, Vol. 81 (1998), 940-944）。しかしながら、こ
の方法は、結合した一酸化炭素によって、患者血液の一
部の酸素の吸着が阻害されるため、血液の酸素運搬能力
が減少する。従って、これらの方法は、酸素保持能力の
低い患者には適用できない。
液が採取され、一酸化炭素処理される。一酸化炭素と結
合したヘモグロビンを含む赤血球は再注射され、完全な
混合及び試料の採取の後、血液中の一酸化炭素濃度が測
定される（Obata et al., British Journal of Anaesth
esia, Vol. 81 (1998), 940-944）。しかしながら、こ
の方法は、結合した一酸化炭素によって、患者血液の一
部の酸素の吸着が阻害されるため、血液の酸素運搬能力
が減少する。従って、これらの方法は、酸素保持能力の
低い患者には適用できない。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】血漿量及び／又は血液
量の即時の測定方法に関する従来技術におけるこのよう
な課題を考慮すると、これらの方法は画一的、日常的な
臨床検査には適用できない。今日では、患者の血漿量及
び／又は血液量の状態は、間接的に、血圧、心拍、肺動
脈圧及び心臓ペース容量(heart pace volumes)のような
血行力学的な循環パラメーターを通じて決定されてい
る。しかしながら、これらの測定方法では、全身及び末
梢の血液量及び血漿量についての如何なる情報も提供さ
れない。
量の即時の測定方法に関する従来技術におけるこのよう
な課題を考慮すると、これらの方法は画一的、日常的な
臨床検査には適用できない。今日では、患者の血漿量及
び／又は血液量の状態は、間接的に、血圧、心拍、肺動
脈圧及び心臓ペース容量(heart pace volumes)のような
血行力学的な循環パラメーターを通じて決定されてい
る。しかしながら、これらの測定方法では、全身及び末
梢の血液量及び血漿量についての如何なる情報も提供さ
れない。
【００１３】従って、日常的な臨床検査において、血液
量と血漿量を測定するために使用することができる方法
及びそのための試薬を得ることが、本発明が解決しよう
とする課題である。
量と血漿量を測定するために使用することができる方法
及びそのための試薬を得ることが、本発明が解決しよう
とする課題である。
【００１４】
【課題を解決するための手段】本課題は、血漿量及び血
液量を測定するためのヘモグロビン誘導体を使用するこ
と、すなわち、血漿量及び血液量を測定するためのヘモ
グロビン誘導体を含有する試薬によって解決される。こ
こで使用されるヘモグロビン誘導体は、少なくとも６４
ｋDaの分子量を有する安定な色素タンパク質である。
液量を測定するためのヘモグロビン誘導体を使用するこ
と、すなわち、血漿量及び血液量を測定するためのヘモ
グロビン誘導体を含有する試薬によって解決される。こ
こで使用されるヘモグロビン誘導体は、少なくとも６４
ｋDaの分子量を有する安定な色素タンパク質である。
【００１５】本発明において、驚くべきことに、これら
のヘモグロビン誘導体は、ヘモグロビン誘導体及び／又
はこれらに結合する配位子が低濃度において測定可能で
あるため、特に血漿量の測定に適していることが示され
る。これはヘモグロビンの投与が血漿量の変動又は他の
血液成分の変化を引きおこすことのないような量で可能
であることを意味する。
のヘモグロビン誘導体は、ヘモグロビン誘導体及び／又
はこれらに結合する配位子が低濃度において測定可能で
あるため、特に血漿量の測定に適していることが示され
る。これはヘモグロビンの投与が血漿量の変動又は他の
血液成分の変化を引きおこすことのないような量で可能
であることを意味する。
【００１６】さらに、本発明は、血漿量及び／又は血液
量を測定する診断方法に使用できるヘモグロビン誘導体
の使用、すなわち、これらのヘモグロビン誘導体を含有
し、血漿量及び／又は血液量を測定することができる診
断用試薬に関する。本発明によれば、所定量の対応する
ヘモグロビン誘導体を患者に与え、患者血液とヘモグロ
ビン誘導体が混合されるのを待って、少なくとも一つの
試料を患者より採取し、試料中のヘモグロビン誘導体含
量、又はヘモグロビン誘導体に結合した配位子の含量を
測定し、血漿量及び／又は血液量を決定することができ
る。
量を測定する診断方法に使用できるヘモグロビン誘導体
の使用、すなわち、これらのヘモグロビン誘導体を含有
し、血漿量及び／又は血液量を測定することができる診
断用試薬に関する。本発明によれば、所定量の対応する
ヘモグロビン誘導体を患者に与え、患者血液とヘモグロ
ビン誘導体が混合されるのを待って、少なくとも一つの
試料を患者より採取し、試料中のヘモグロビン誘導体含
量、又はヘモグロビン誘導体に結合した配位子の含量を
測定し、血漿量及び／又は血液量を決定することができ
る。
【００１７】投与されたヘモグロビン誘導体は希釈さ
れ、続いて、血液又は血漿中のヘモグロビン濃度が測定
され、及び／又は配位子の結合したヘモグロビン誘導体
の濃度が測定されることとなる。
れ、続いて、血液又は血漿中のヘモグロビン濃度が測定
され、及び／又は配位子の結合したヘモグロビン誘導体
の濃度が測定されることとなる。
【００１８】本発明の別の形態は、少なくともその一部
に一酸化炭素を配位子として結合するヘモグロビン誘導
体を含む、血漿量及び／又は血液量を測定するための組
成物（製剤）である。好ましい形態においては、ヘモグ
ロビン誘導体は完全に一酸化炭素によって飽和されてい
る。
に一酸化炭素を配位子として結合するヘモグロビン誘導
体を含む、血漿量及び／又は血液量を測定するための組
成物（製剤）である。好ましい形態においては、ヘモグ
ロビン誘導体は完全に一酸化炭素によって飽和されてい
る。
【００１９】本発明において、ヘモグロビン誘導体の使
用によって、日常的な臨床検査に適用するための全ての
条件を満足する単純、迅速及び安全な方法による血漿量
及び／又は血液量を測定する可能性が初めて明らかとな
った。
用によって、日常的な臨床検査に適用するための全ての
条件を満足する単純、迅速及び安全な方法による血漿量
及び／又は血液量を測定する可能性が初めて明らかとな
った。
【００２０】
【発明の実施の形態】ヘモグロビンは６４キロダルトン
(ｋDa)の分子量を有する色素タンパク質である。このタ
ンパク質は２つのα−及びβ−グロビン鎖から構成され
ており、それぞれ補欠因子としてのヘムと結合してい
る。単離されたヘモグロビン分子は不安定であり、急速
に、より安定な分子量３２ｋDaのα−及びβ−ダイマー
に分解する。
(ｋDa)の分子量を有する色素タンパク質である。このタ
ンパク質は２つのα−及びβ−グロビン鎖から構成され
ており、それぞれ補欠因子としてのヘムと結合してい
る。単離されたヘモグロビン分子は不安定であり、急速
に、より安定な分子量３２ｋDaのα−及びβ−ダイマー
に分解する。
【００２１】本発明において、少なくとも６４ｋDaの分
子量を有する安定な色素タンパク質を得るために、分子
内で結合された 及び／又は グロビン鎖を含有する分子を「ヘモグロビン誘導体」と
称する。当該ヘモグロビン誘導体は2つの グロビン鎖及び2つの グロビン鎖からなることが好ましい。
子量を有する安定な色素タンパク質を得るために、分子
内で結合された 及び／又は グロビン鎖を含有する分子を「ヘモグロビン誘導体」と
称する。当該ヘモグロビン誘導体は2つの グロビン鎖及び2つの グロビン鎖からなることが好ましい。
【００２２】カップリングは、例えば、グロビン鎖の共
有結合や、又はグロビン鎖をコードする遺伝子の融合に
よって起こすことができる。「結合試薬(coupling agen
t)」によって結合された ヘモグロビン鎖からなるこれらの結合生成物はすでに従
来技術において記載されている（EP 402 300, EP 700 9
97 US 5,884,090又は Kerwin et al., J.of Pharmaceut
ical Science, Vol. 88:1, (1999) 79）。
有結合や、又はグロビン鎖をコードする遺伝子の融合に
よって起こすことができる。「結合試薬(coupling agen
t)」によって結合された ヘモグロビン鎖からなるこれらの結合生成物はすでに従
来技術において記載されている（EP 402 300, EP 700 9
97 US 5,884,090又は Kerwin et al., J.of Pharmaceut
ical Science, Vol. 88:1, (1999) 79）。
【００２３】ヘモグロビン誘導体という用語は、本発明
に必須である誘導体の性質（少なくとも６４ｋDaの分子
量を有する色素タンパク質であること）が本質的に損な
われない限り、その一次構造がアミノ酸の置換、欠失又
は付加によって変化したヘモグロビン分子をも含むのは
もちろんである。ヘモグロビンの対立遺伝子の変異体に
相当するものは自然に生成するか、又は遺伝子組換えに
よって製造することができる。例えば、ケルウィンら(K
erwin et al.既述文献)は酸素に対する親和性が減少し
たヘモグロビン誘導体を製造するために、公知のヘモグ
ロビン変異体を使用している。WO 98/50430には、溶解
性を向上する効果を持った又は分子の窒素結合力を減少
させたヘモグロビンの一次構造における変更について記
載されている。
に必須である誘導体の性質（少なくとも６４ｋDaの分子
量を有する色素タンパク質であること）が本質的に損な
われない限り、その一次構造がアミノ酸の置換、欠失又
は付加によって変化したヘモグロビン分子をも含むのは
もちろんである。ヘモグロビンの対立遺伝子の変異体に
相当するものは自然に生成するか、又は遺伝子組換えに
よって製造することができる。例えば、ケルウィンら(K
erwin et al.既述文献)は酸素に対する親和性が減少し
たヘモグロビン誘導体を製造するために、公知のヘモグ
ロビン変異体を使用している。WO 98/50430には、溶解
性を向上する効果を持った又は分子の窒素結合力を減少
させたヘモグロビンの一次構造における変更について記
載されている。
【００２４】ヘモグロビン誘導体という用語には、さら
に、ヘモグロビン重合体を形成するために分子間で結合
した、又は、例えばポリエチレングリコール(PEG; US
5,478,806参照)若しくはヒドロキシエチルスターチ(HE
S; WO 98/01158参照)等の配位子、及び／又は他のポリ
マーに結合したヘモグロビン分子を含む。分子間結合
は、分子内結合が起こる前に、それと同時に、又はその
後で起こりうる。配位子と結合する場合は、分子内結合
が、グロビン鎖が配位子と結合した反応に続いて起こ
る。
に、ヘモグロビン重合体を形成するために分子間で結合
した、又は、例えばポリエチレングリコール(PEG; US
5,478,806参照)若しくはヒドロキシエチルスターチ(HE
S; WO 98/01158参照)等の配位子、及び／又は他のポリ
マーに結合したヘモグロビン分子を含む。分子間結合
は、分子内結合が起こる前に、それと同時に、又はその
後で起こりうる。配位子と結合する場合は、分子内結合
が、グロビン鎖が配位子と結合した反応に続いて起こ
る。
【００２５】誘導体の製造に用いられるヘモグロビン
は、ヒト、動物又は組換え体に由来するものが考えられ
る。文献には、組換えヘモグロビンの製造のための種々
の方法（細菌、酵母又は動物細胞並びにトランスジェニ
ック植物又はトランスジェニック動物による発現）が記
載されている。
は、ヒト、動物又は組換え体に由来するものが考えられ
る。文献には、組換えヘモグロビンの製造のための種々
の方法（細菌、酵母又は動物細胞並びにトランスジェニ
ック植物又はトランスジェニック動物による発現）が記
載されている。
【００２６】「ヘモグロビンを基礎とした酸素運搬体」
(HBOCs)を得るための、このようなヘモグロビン誘導体
の製造については、従来技術に包括的に記載されている
（Benesch, Meth. Enzymol., Vol.231 (1994), 267-27
4; Keipert et al, Transfusion, Vol.29 (1989), 767-
773; Snyder et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vo
l. 84 (1987), 7280-7284; Rogers et al., Biochim. e
t Biophys. Acta, Vol.1248 (1995), 135-142; Hai et
al., Art. Cells, Blood Subs. And Immob. Biotech.,
Vol. 22(3)(1994), 923-931; DE 26 07 706, DE 26 16
086; EP 646 130; EP 290 252; EP 277 289; WO 98/011
5; US 4,911,929; US 4,861,867; US 4,857,636; U.S.
4,777,244; U.S. 4,698,387; U.S.4,600, 531; U.S. 4,
526,715;U.S. 4,473,494; 及び U.S. 4,301,144）。本
発明においては、如何なるヘモグロビン誘導体でも使用
可能であり、これらの誘導体が酸素と可逆的に結合でき
ることは要求されない。
(HBOCs)を得るための、このようなヘモグロビン誘導体
の製造については、従来技術に包括的に記載されている
（Benesch, Meth. Enzymol., Vol.231 (1994), 267-27
4; Keipert et al, Transfusion, Vol.29 (1989), 767-
773; Snyder et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vo
l. 84 (1987), 7280-7284; Rogers et al., Biochim. e
t Biophys. Acta, Vol.1248 (1995), 135-142; Hai et
al., Art. Cells, Blood Subs. And Immob. Biotech.,
Vol. 22(3)(1994), 923-931; DE 26 07 706, DE 26 16
086; EP 646 130; EP 290 252; EP 277 289; WO 98/011
5; US 4,911,929; US 4,861,867; US 4,857,636; U.S.
4,777,244; U.S. 4,698,387; U.S.4,600, 531; U.S. 4,
526,715;U.S. 4,473,494; 及び U.S. 4,301,144）。本
発明においては、如何なるヘモグロビン誘導体でも使用
可能であり、これらの誘導体が酸素と可逆的に結合でき
ることは要求されない。
【００２７】分子内結合したヘモグロビンは少なくとも
６４kDaの分子量を有し、一方、少なくとも１２８kDaの
分子量を有する、連結したヘモグロビン誘導体又はコン
ジュゲートは特に好ましい。この大きさの分子は、特
に、血管内のスペースをほんのわずかに広げるだけであ
るという利点を有する。分析物の血管外への遊出によっ
て、あまりにも高い血漿量及び／又は血液量の測定値と
なることが、この場合には避けられる。好ましくは、ヘ
モグロビン誘導体は、本発明に係る試薬として使用する
ためには７００kDaの上限を超えるべきではなく、より
好ましくは分子量５００ｋDa以下である。
６４kDaの分子量を有し、一方、少なくとも１２８kDaの
分子量を有する、連結したヘモグロビン誘導体又はコン
ジュゲートは特に好ましい。この大きさの分子は、特
に、血管内のスペースをほんのわずかに広げるだけであ
るという利点を有する。分析物の血管外への遊出によっ
て、あまりにも高い血漿量及び／又は血液量の測定値と
なることが、この場合には避けられる。好ましくは、ヘ
モグロビン誘導体は、本発明に係る試薬として使用する
ためには７００kDaの上限を超えるべきではなく、より
好ましくは分子量５００ｋDa以下である。
【００２８】血漿量及び血液量を測定するための本発明
の組成物の製造方法は、当該ヘモグロビン誘導体と生理
的溶液との混合、又は必要に応じて、適切な補助化合物
又は担体化合物との混合を含むことができる。ここで、
従来技術において知られている如何なる担体化合物及び
／又は補助化合物も用いることができる（例えば、リン
ガーのラクテート(Ringer's lactate)、塩化ナトリウ
ム、リン酸ナトリウム、ポリソルベート(polysorbate)
及び／又はEDTAである。；概説として、Kerwinらの既述
文献を参照）。
の組成物の製造方法は、当該ヘモグロビン誘導体と生理
的溶液との混合、又は必要に応じて、適切な補助化合物
又は担体化合物との混合を含むことができる。ここで、
従来技術において知られている如何なる担体化合物及び
／又は補助化合物も用いることができる（例えば、リン
ガーのラクテート(Ringer's lactate)、塩化ナトリウ
ム、リン酸ナトリウム、ポリソルベート(polysorbate)
及び／又はEDTAである。；概説として、Kerwinらの既述
文献を参照）。
【００２９】従来技術には、ヘモグロビン誘導体が配位
子とは独立に、安定な状態で保存できる多くの条件（例
えば、温度や時間）が記載されている。これらの条件
は、本発明においても用いることができる。保存中にヘ
モグロビンがメトヘモグロビンに酸化されることを防ぐ
ために、例えば、還元剤又は安定化剤を添加することが
できる。アスコルビン酸、N-アセチルトリプトファン、
又はN-アセチルシステインを安定化剤として使用するこ
とが好ましい。
子とは独立に、安定な状態で保存できる多くの条件（例
えば、温度や時間）が記載されている。これらの条件
は、本発明においても用いることができる。保存中にヘ
モグロビンがメトヘモグロビンに酸化されることを防ぐ
ために、例えば、還元剤又は安定化剤を添加することが
できる。アスコルビン酸、N-アセチルトリプトファン、
又はN-アセチルシステインを安定化剤として使用するこ
とが好ましい。
【００３０】ヘモグロビン誘導体の容器は、従来技術に
記載された如何なる包装容器でも可能である。本発明の
一つの形態によれば、ガラス又はプラスチック容器が用
いられ、酸素非透過性の容器がヘモグロビン誘導体の容
器として好ましい。本発明の特に好ましい一つの形態に
おいては、酸素化された、又は脱酸素化された形の、す
なわち、配位子を持たない、又は酸素を配位子として有
するヘモグロビン誘導体は、酸素非透過性容器に保存さ
れる。
記載された如何なる包装容器でも可能である。本発明の
一つの形態によれば、ガラス又はプラスチック容器が用
いられ、酸素非透過性の容器がヘモグロビン誘導体の容
器として好ましい。本発明の特に好ましい一つの形態に
おいては、酸素化された、又は脱酸素化された形の、す
なわち、配位子を持たない、又は酸素を配位子として有
するヘモグロビン誘導体は、酸素非透過性容器に保存さ
れる。
【００３１】さらに、エチル−ビニル酢酸エステル(EV
A)、ポリエチレン(PE)、ポリアミド(PA)、ポリオレフィ
ン類、ポリ塩化ビニル(PVC)の中から選ばれた包装又は
例えばPE/PAから構成される組合せ包装を使用すること
ができる。その他の容器としては、ヘモグロビン誘導体
をそのままシリンジに導入することができる包装形態と
することもできる。
A)、ポリエチレン(PE)、ポリアミド(PA)、ポリオレフィ
ン類、ポリ塩化ビニル(PVC)の中から選ばれた包装又は
例えばPE/PAから構成される組合せ包装を使用すること
ができる。その他の容器としては、ヘモグロビン誘導体
をそのままシリンジに導入することができる包装形態と
することもできる。
【００３２】包装中又は包装後に酸素含有率をさらに減
少させる方法も従来技術として知られており( Kerwin e
t al, 1999, 既述文献参照)、本発明の中で用いること
ができる。酸素透過性の包装材料の上に、酸素吸収剤、
例えばエージレス(Ageless)を含んで酸素非透過性のカ
バーで包むこともできる。
少させる方法も従来技術として知られており( Kerwin e
t al, 1999, 既述文献参照)、本発明の中で用いること
ができる。酸素透過性の包装材料の上に、酸素吸収剤、
例えばエージレス(Ageless)を含んで酸素非透過性のカ
バーで包むこともできる。
【００３３】血漿量及び／又は血液量を測定するための
ヘモグロビン誘導体含有試薬の使用においては、一定量
のヘモグロビン誘導体を患者に投与し、患者の血液とヘ
モグロビン誘導体が混合されるのを待って、少なくとも
一つの試料を患者より採取し、試料中のヘモグロビン誘
導体含量、又はヘモグロビン誘導体が結合した配位子の
含量を測定し、それによって血漿量及び／又は血液量を
決定する工程を含むことができる。
ヘモグロビン誘導体含有試薬の使用においては、一定量
のヘモグロビン誘導体を患者に投与し、患者の血液とヘ
モグロビン誘導体が混合されるのを待って、少なくとも
一つの試料を患者より採取し、試料中のヘモグロビン誘
導体含量、又はヘモグロビン誘導体が結合した配位子の
含量を測定し、それによって血漿量及び／又は血液量を
決定する工程を含むことができる。
【００３４】別の態様によれば、血漿量及び／又は血液
量を測定するためのヘモグロビン誘導体に係る本発明の
試薬を使用する場合には、血液を欠損した患者に、同時
に酸素の担体としても働くヘモグロビン誘導体を投与す
ることができ、血漿量及び／又は血液量を測定するため
にも使用できる。
量を測定するためのヘモグロビン誘導体に係る本発明の
試薬を使用する場合には、血液を欠損した患者に、同時
に酸素の担体としても働くヘモグロビン誘導体を投与す
ることができ、血漿量及び／又は血液量を測定するため
にも使用できる。
【００３５】本発明に係る血漿量及び／又は血液量を測
定するためのヘモグロビン誘導体を含有する試薬は、ヒ
ト及びその他の動物の両方について使用することができ
る。
定するためのヘモグロビン誘導体を含有する試薬は、ヒ
ト及びその他の動物の両方について使用することができ
る。
【００３６】本発明の一つの好ましい形態によれば、ヘ
モグロビン誘導体の投与は、中枢又は末梢の静脈を通じ
て注入することができる。基本的には、投与されるヘモ
グロビン誘導体の量は、後続の分析における当該誘導体
の検出レベルから最小量を決定することによって、でき
るだけ低く抑えるべきである。当該誘導体の検出レベル
自体もまた、それぞれの場合において用いられる分析方
法に依存する。
モグロビン誘導体の投与は、中枢又は末梢の静脈を通じ
て注入することができる。基本的には、投与されるヘモ
グロビン誘導体の量は、後続の分析における当該誘導体
の検出レベルから最小量を決定することによって、でき
るだけ低く抑えるべきである。当該誘導体の検出レベル
自体もまた、それぞれの場合において用いられる分析方
法に依存する。
【００３７】投与すべきヘモグロビン誘導体の量は、特
に指定された因子とは独立して、それぞれの場合につい
て当該技術分野の専門家によって簡単に決定することが
できる。好ましくは、体重1 kg当り0.05から0.3 gが投
与される。
に指定された因子とは独立して、それぞれの場合につい
て当該技術分野の専門家によって簡単に決定することが
できる。好ましくは、体重1 kg当り0.05から0.3 gが投
与される。
【００３８】ヘモグロビン誘導体は、投与後、数分以内
に患者血液によって完全に混合される。ここでの分配速
度は投与の仕方や患者の臨床状態に依存する。
に患者血液によって完全に混合される。ここでの分配速
度は投与の仕方や患者の臨床状態に依存する。
【００３９】最後に、少なくとも一つの血液試料を患者
から採取するが、２又は３の試料を採取することが好ま
しい。試料は、例えば動脈内又は静脈内から採取するこ
とができる。
から採取するが、２又は３の試料を採取することが好ま
しい。試料は、例えば動脈内又は静脈内から採取するこ
とができる。
【００４０】試料の量については、試料中のヘモグロビ
ン誘導体及び／又はこの誘導体の結合配位子の濃度分析
が可能な程度に選択することができる。本発明の好まし
い形態によれば多くとも２〜３mLの血液が採取される。
ン誘導体及び／又はこの誘導体の結合配位子の濃度分析
が可能な程度に選択することができる。本発明の好まし
い形態によれば多くとも２〜３mLの血液が採取される。
【００４１】試料中のヘモグロビン濃度の測定は、従来
技術において知られた方法によって行うことができる。
例えば、ドラブキンス(Drabkins)の方法を使用すること
ができる(International committee for Standardizati
on in Hematology in J. Clin. Path., Vol. 18 (196
5), 71-75; 及びBr. J. Hematology., Vol. 13 (1997),
71-75)。この他の方法として、ヘモグロビン濃度は、ド
ラブキンスの方法の変法により実施するaca(登録商標)
Dupont Discrete clinical analyzerを使用して測定す
ることができる（製造業者の説明書「方法９１」参照）。
両法ともに、光学的な測定原理を使用している。最後
に、ヘモグロビン濃度は、日立の分析機による溶血性指
標（hemolytic index）によっても測定することができ
る。
技術において知られた方法によって行うことができる。
例えば、ドラブキンス(Drabkins)の方法を使用すること
ができる(International committee for Standardizati
on in Hematology in J. Clin. Path., Vol. 18 (196
5), 71-75; 及びBr. J. Hematology., Vol. 13 (1997),
71-75)。この他の方法として、ヘモグロビン濃度は、ド
ラブキンスの方法の変法により実施するaca(登録商標)
Dupont Discrete clinical analyzerを使用して測定す
ることができる（製造業者の説明書「方法９１」参照）。
両法ともに、光学的な測定原理を使用している。最後
に、ヘモグロビン濃度は、日立の分析機による溶血性指
標（hemolytic index）によっても測定することができ
る。
【００４２】分析物の濃度はヘモグロビン誘導体の実測
された吸光度又は消衰度から検量線に基いて算定するこ
とができる。検量線は，例えば、少なくとも２つの既知
濃度のヘモグロビン誘導体の吸光度又は消衰度を測定す
ることによって作成できる。しかしながら、少なくとも
４種類の濃度のヘモグロビン誘導体を用いて検量線を作
成することが好ましい。
された吸光度又は消衰度から検量線に基いて算定するこ
とができる。検量線は，例えば、少なくとも２つの既知
濃度のヘモグロビン誘導体の吸光度又は消衰度を測定す
ることによって作成できる。しかしながら、少なくとも
４種類の濃度のヘモグロビン誘導体を用いて検量線を作
成することが好ましい。
【００４３】ヘモグロビン誘導体を投与する前の患者か
ら試料を採取することが、血漿量及び／又は血液量を測
定するために有利である。これによってヘモグロビン誘
導体を注射する前の血漿ヘモグロビンの濃度を測定する
こと（基準値の測定）ができる。
ら試料を採取することが、血漿量及び／又は血液量を測
定するために有利である。これによってヘモグロビン誘
導体を注射する前の血漿ヘモグロビンの濃度を測定する
こと（基準値の測定）ができる。
【００４４】本発明に係る試薬の使用に関する特に好ま
しい形態によれば、血漿量及び／又は血液量を測定する
ためのヘモグロビン誘導体を注射した後、患者から複数
の試料が採取され、これによって、実際に注射した時間
(actual time t0)における血漿ヘモグロビン濃度、すな
わち、投与時及びそれと同時に完全な混合が行われた時
に存在する理論的なヘモグロビン誘導体の濃度を測定す
ることができる。この目的のために、例えば、被検者は
２〜３種類の試料を採取され、これらの測定値による回
帰線(regression line)を外挿することによって実際に
注射した時間(actual time t0)の濃度を決定することが
できる。
しい形態によれば、血漿量及び／又は血液量を測定する
ためのヘモグロビン誘導体を注射した後、患者から複数
の試料が採取され、これによって、実際に注射した時間
(actual time t0)における血漿ヘモグロビン濃度、すな
わち、投与時及びそれと同時に完全な混合が行われた時
に存在する理論的なヘモグロビン誘導体の濃度を測定す
ることができる。この目的のために、例えば、被検者は
２〜３種類の試料を採取され、これらの測定値による回
帰線(regression line)を外挿することによって実際に
注射した時間(actual time t0)の濃度を決定することが
できる。
【００４５】患者の血漿量はこれらの測定値から計算さ
れる。本発明の好ましい形態によれば、血漿量は以下の
式によって計算される。 ＰＶ＝Ｄ／Ｃ0Plasma ここで、式中、ＰＶは血漿量(mL)を示し、Ｄはヘモグロ
ビン誘導体の投与量(mg)を示し、Ｃ0Plasmaは実際に注
射した時間の血漿中のヘモグロビン濃度であって、回帰
線によって求めた血漿ヘモグロビン誘導体濃度から当該
誘導体の注射前の血漿ヘモグロビン濃度（基準値：nil-
value）を差し引いたものを示す。
れる。本発明の好ましい形態によれば、血漿量は以下の
式によって計算される。 ＰＶ＝Ｄ／Ｃ0Plasma ここで、式中、ＰＶは血漿量(mL)を示し、Ｄはヘモグロ
ビン誘導体の投与量(mg)を示し、Ｃ0Plasmaは実際に注
射した時間の血漿中のヘモグロビン濃度であって、回帰
線によって求めた血漿ヘモグロビン誘導体濃度から当該
誘導体の注射前の血漿ヘモグロビン濃度（基準値：nil-
value）を差し引いたものを示す。
【００４６】本発明の別の形態によれば、血液量は血漿
量から以下の式によって計算することができる。 ＢＶ＝ＰＶ・１００/(１００−Hematokrit) ここで、ＢＶは血液量を示し、Hematokritはヘマトクリ
ット値（血液中で血球胞成分の占める割合）を示す。
量から以下の式によって計算することができる。 ＢＶ＝ＰＶ・１００/(１００−Hematokrit) ここで、ＢＶは血液量を示し、Hematokritはヘマトクリ
ット値（血液中で血球胞成分の占める割合）を示す。
【００４７】本発明の他の形態によれば、血漿量及び血
液量は、ヘモグロビン誘導体が結合した配位子の濃度に
よって測定することができる。
液量は、ヘモグロビン誘導体が結合した配位子の濃度に
よって測定することができる。
【００４８】自明のように、ヘモグロビン誘導体濃度と
これに結合した配位子濃度の測定は、同じ試料を用い
て、それぞれ異なる分析方法により行うことができる。
これに結合した配位子濃度の測定は、同じ試料を用い
て、それぞれ異なる分析方法により行うことができる。
【００４９】ヘモグロビンが結合した配位子の濃度を測
定する場合に、本発明によって、少なくとも一部に一酸
化炭素が配位子として結合したヘモグロビン誘導体を用
いることが特に好ましい。
定する場合に、本発明によって、少なくとも一部に一酸
化炭素が配位子として結合したヘモグロビン誘導体を用
いることが特に好ましい。
【００５０】ヒトの血液中の一酸化炭素濃度は、呼吸す
る空気の一酸化炭素含量に比例して、通常0から0.8容量
％である(Manual of clinical chemistry and pathobio
chemistry, 3rd edn., tab. 6.4-6)が、例外的に2.3%ま
で測定される。喫煙者の場合には、その値は5％まで上
昇する。このことから、ヘモグロビン誘導体に結合した
一酸化炭素を投与することは患者にとって危険ではな
く、というのは一酸化炭素は血液中に自然に存在し、患
者自身の血液の酸素運搬能力を害するものではないから
である。
る空気の一酸化炭素含量に比例して、通常0から0.8容量
％である(Manual of clinical chemistry and pathobio
chemistry, 3rd edn., tab. 6.4-6)が、例外的に2.3%ま
で測定される。喫煙者の場合には、その値は5％まで上
昇する。このことから、ヘモグロビン誘導体に結合した
一酸化炭素を投与することは患者にとって危険ではな
く、というのは一酸化炭素は血液中に自然に存在し、患
者自身の血液の酸素運搬能力を害するものではないから
である。
【００５１】血漿量及び／又は血液量の測定は、血液中
の一酸化炭素含量を測定することによる以下のような形
態を示すことができる。本方法は、通常の血液中の一酸
化炭素含量の測定が、特に少量の試料で、しかもきわめ
て短時間に行うことができるという利点を有する。本方
法のさらなる利点は、測定の高い正確さである。
の一酸化炭素含量を測定することによる以下のような形
態を示すことができる。本方法は、通常の血液中の一酸
化炭素含量の測定が、特に少量の試料で、しかもきわめ
て短時間に行うことができるという利点を有する。本方
法のさらなる利点は、測定の高い正確さである。
【００５２】本発明のこの形態によれば、ヘモグロビン
誘導体に結合した一酸化炭素の投入前に患者から少なく
とも一つの試料を採取することも有利である。これによ
って追加的な一酸化炭素の投与の前に患者の血液中の一
酸化炭素濃度を測定する（基準値の決定）ことができ
る。
誘導体に結合した一酸化炭素の投入前に患者から少なく
とも一つの試料を採取することも有利である。これによ
って追加的な一酸化炭素の投与の前に患者の血液中の一
酸化炭素濃度を測定する（基準値の決定）ことができ
る。
【００５３】ヘモグロビン誘導体の投与は、すでに上述
したように、中枢又は末梢静脈を通して注射することが
できる。例えば、５〜２０重量／容量％のヘモグロビン
誘導体溶液の２０〜１００mLを患者に２〜１５分間で注
射することができ、この場合には血液中の一酸化炭素濃
度の上昇は、約2.8%である。個々の場合には、血液中の
一酸化炭素濃度の上昇は患者のヘモグロビン含量に依存
する。
したように、中枢又は末梢静脈を通して注射することが
できる。例えば、５〜２０重量／容量％のヘモグロビン
誘導体溶液の２０〜１００mLを患者に２〜１５分間で注
射することができ、この場合には血液中の一酸化炭素濃
度の上昇は、約2.8%である。個々の場合には、血液中の
一酸化炭素濃度の上昇は患者のヘモグロビン含量に依存
する。
【００５４】試料の採取は、上述したとおりである。本
工程においても、回帰線を外挿することによって実際に
注射した時間の血液中の一酸化炭素濃度を決定するた
め、複数の試料を採取することが有利である。
工程においても、回帰線を外挿することによって実際に
注射した時間の血液中の一酸化炭素濃度を決定するた
め、複数の試料を採取することが有利である。
【００５５】本発明において、血液中の一酸化炭素含量
を測定するための光学的測定原理をもった血液ガス分析
機又はＣＯ−オキシメトリー(CO-oxymetry)を利用する
ことが好ましい。ここでは、535, 560 及び／又は577 n
mでの測定が特に好ましい。これらの測定に必要な試料
の容量は、試料当り35μLを超えないことが望ましい。
この分析はきわめて迅速であり、2.5分で行うことがで
きる。
を測定するための光学的測定原理をもった血液ガス分析
機又はＣＯ−オキシメトリー(CO-oxymetry)を利用する
ことが好ましい。ここでは、535, 560 及び／又は577 n
mでの測定が特に好ましい。これらの測定に必要な試料
の容量は、試料当り35μLを超えないことが望ましい。
この分析はきわめて迅速であり、2.5分で行うことがで
きる。
【００５６】血漿ヘモグロビン濃度は、測定後以下の式
から算定後に決定されうる。 ｎＨｂ＝ｎＦＣＯ−ＨＢ／ｄＣＯ−Ｈｂ ここで、ｎＨｂは、循環している全てのヘモグロビン量
をmmolで示し、ｎＦＣＯ−Ｈｂは、導入された一酸化炭
素の量をmmolで示し、ｄＣＯ−Ｈｂは、一酸化炭素の投
与後の血液中の一酸化炭素濃度の増加（一酸化炭素の投
与前後の分析値の差に対応する。）を示す。
から算定後に決定されうる。 ｎＨｂ＝ｎＦＣＯ−ＨＢ／ｄＣＯ−Ｈｂ ここで、ｎＨｂは、循環している全てのヘモグロビン量
をmmolで示し、ｎＦＣＯ−Ｈｂは、導入された一酸化炭
素の量をmmolで示し、ｄＣＯ−Ｈｂは、一酸化炭素の投
与後の血液中の一酸化炭素濃度の増加（一酸化炭素の投
与前後の分析値の差に対応する。）を示す。
【００５７】本発明の他の形態によれば、血液量は、以
下の式により計算することができる。 ＢＶ＝ｎＨｂ／ｃＨｂ ここで、ｃＨｂは、ヘモグロビン濃度をmmol/Lで示すも
のであり、他の記号は上述したとおりである。
下の式により計算することができる。 ＢＶ＝ｎＨｂ／ｃＨｂ ここで、ｃＨｂは、ヘモグロビン濃度をmmol/Lで示すも
のであり、他の記号は上述したとおりである。
【００５８】本発明は、さらに、少なくとも一部に一酸
化炭素を配位子として有するヘモグロビン誘導体を含む
血漿量及び血液量の測定のための組成物（製剤）に関す
る。
化炭素を配位子として有するヘモグロビン誘導体を含む
血漿量及び血液量の測定のための組成物（製剤）に関す
る。
【００５９】本発明のこの形態においても、ヘモグロビ
ン誘導体は少なくとも128ｋDaの分子量を有することが
好ましい。
ン誘導体は少なくとも128ｋDaの分子量を有することが
好ましい。
【００６０】血液量の診断のための組成物(製剤)は、さ
らに適切な許容される担体，補助剤及び還元剤を含むこ
とができ、すでに述べた化合物が好ましい。
らに適切な許容される担体，補助剤及び還元剤を含むこ
とができ、すでに述べた化合物が好ましい。
【００６１】
【発明の効果】本発明によるヘモグロビン誘導体の使用
における顕著な有用性は、このように、患者の血漿量及
び／又は血液量が日常的な臨床検査において安価にかつ
迅速に測定できるという事実にある。繰り返し検査も可
能である。試料の測定値を決定するために、従来技術に
おける慣用的な分析機器（分光光度計、濃度計、血液ガ
ス分析器／酸素分析計）を使用することも可能であり、
これは試料の自動処理と自動分析を可能にする。測定値
から血漿量及び／又は血液量を決定するためにコンピュ
ータを使用することができる。これによって試料の完全
な自動評価を確実にし、医者は単に血漿量及び／又は血
液量の測定値を読み取りさえすればよいこととなる。
における顕著な有用性は、このように、患者の血漿量及
び／又は血液量が日常的な臨床検査において安価にかつ
迅速に測定できるという事実にある。繰り返し検査も可
能である。試料の測定値を決定するために、従来技術に
おける慣用的な分析機器（分光光度計、濃度計、血液ガ
ス分析器／酸素分析計）を使用することも可能であり、
これは試料の自動処理と自動分析を可能にする。測定値
から血漿量及び／又は血液量を決定するためにコンピュ
ータを使用することができる。これによって試料の完全
な自動評価を確実にし、医者は単に血漿量及び／又は血
液量の測定値を読み取りさえすればよいこととなる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ヴォルフラム アイヒナー ドイツ連邦共和国 35510 ブッツバッハ リヒャルト ヴァークナー シュトラー セ 12 (72)発明者 イエンス オピッツ ドイツ連邦共和国 60437 フランクフル ト ツム ベルクヴェルク 11 (72)発明者 クラオス ゾンマーマイヤー ドイツ連邦共和国 61191 ロスバッハ ファウ．デー．ハー． イン デア ラオ バッハ 26
Claims (24)
- 【請求項１】血漿量及び／又は血液量を測定するための
ヘモグロビン誘導体を含有する試薬であって、当該ヘモ
グロビン誘導体が少なくとも６４kDaの分子量を有する
安定な色素タンパク質であることを特徴とする試薬。 - 【請求項２】ヘモグロビン誘導体がα−及び／又はβ−
グロビン鎖又はそれらの対立遺伝子変異体を含む請求項
１記載の試薬。 - 【請求項３】ヘモグロビン誘導体が少なくとも１２８ｋ
Daの分子量を有する請求項１又は２記載の試薬。 - 【請求項４】ヘモグロビン誘導体が担体化合物及び／又
は補助化合物と共に用いられる請求項１〜３いずれか記
載の試薬。 - 【請求項５】担体化合物及び／又は補助化合物として生
理的溶液が用いられる請求項４記載の試薬。 - 【請求項６】生理的溶液がリンガーのラクテート、塩化
ナトリウム、リン酸ナトリウム、ポリソルベート及び／
又はEDTAを含む請求項５記載の試薬。 - 【請求項７】ヘモグロビン誘導体が還元剤又は安定化剤
と共に用いられる請求項１〜６いずれか一記載の試薬。 - 【請求項８】アスコルビン酸、N-アセチルトリプトファ
ン又はN-アセチルシステインが安定化剤として使用され
る請求項７記載の試薬。 - 【請求項９】ヘモグロビン誘導体が以下の方法に使用す
ることができる試薬である請求項１〜８いずれか一記載
の試薬： （ａ）所定量のヘモグロビン誘導体を患者に投与し、
（ｂ）患者の血液とヘモグロビン誘導体が混合されるの
を待って、（ｃ）少なくとも一つの試料を患者より採取
し、（ｄ）試料中のヘモグロビン誘導体含量、及び／又
は配位子の結合したヘモグロビン誘導体含量を測定し、
並びに（ｅ）それによって血漿量及び／又は血液量を決
定する。 - 【請求項１０】ヘモグロビン誘導体が少なくとも一部に
一酸化炭素を配位子として含む請求項１〜９いずれか一
記載の試薬。 - 【請求項１１】患者の試料中の一酸化炭素含量を測定す
る請求項１０記載の試薬。 - 【請求項１２】血漿量及び／又は血液量を測定するため
のヘモグロビン誘導体を含有する組成物であって、当該
ヘモグロビン誘導体が少なくとも６４kDaの分子量を有
する安定な色素タンパク質であり、少なくとも一部に一
酸化炭素を配位子として有することを特徴とする組成
物。 - 【請求項１３】ヘモグロビン誘導体が少なくとも１２８
ｋDaの分子量を示す請求項１２記載の組成物。 - 【請求項１４】薬理的に許容される担体化合物及び／又
は補助化合物をさらに含む請求項１２又は１３記載の組
成物。 - 【請求項１５】担体化合物及び／又は補助化合物として
生理的溶液が用いられる請求項１４記載の組成物。 - 【請求項１６】生理的溶液がリンガーのラクテート、塩
化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ポリソルベート及び
／又はEDTAを含む請求項１５記載の組成物。 - 【請求項１７】付加的に安定化剤を含む請求項１２〜１
６のいずれか一記載の組成物。 - 【請求項１８】アスコルビン酸、N-アセチルトリプトフ
ァン又はN-アセチルシステインが安定化剤として使用さ
れる請求項１７記載の組成物。 - 【請求項１９】ヘモグロビン誘導体と生理的溶液とを混
合することによる請求項１２〜１８いずれか記載の組成
物の製造方法であって、当該ヘモグロビン誘導体が少な
くとも６４kDaの分子量を有する安定な色素タンパク質
であり、少なくとも一部に一酸化炭素を配位子として有
することを特徴とする製造方法。 - 【請求項２０】さらに補助化合物又は担体化合物が添加
される請求項１９記載の方法。 - 【請求項２１】補助化合物又は担体化合物としてリンガ
ーのラクテート、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、
ポリソルベート及び／又はEDTAを含む溶液が用いられる
請求項２０記載の方法。 - 【請求項２２】付加的に安定化剤が添加される請求項１
９〜２１いずれか記載の方法。 - 【請求項２３】アスコルビン酸、N-アセチルトリプトフ
ァン又はN-アセチルシステインが安定化剤として使用さ
れる請求項２２記載の方法。 - 【請求項２４】血漿量及び／又は血液量を測定するため
のヘモグロビン誘導体の使用であって、当該ヘモグロビ
ン誘導体が少なくとも６４kDaの分子量を有する安定な
色素タンパク質であることを特徴とするヘモグロビン誘
導体の使用。
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