JP2000513708A

JP2000513708A - 細胞増殖阻止のためのカルシウム流入ブロッカーを含む組成物

Info

Publication number: JP2000513708A
Application number: JP09524697A
Authority: JP
Inventors: ベルガー，スチュアート，アラン; ゴマーマン，ジェニファー，リン
Original assignee: ザウエルズリーホスピタルファウンデイション
Priority date: 1996-01-11
Filing date: 1997-01-13
Publication date: 2000-10-17
Also published as: CN1213315A; EP0873137A1; CA2242866A1; BR9710942A; CN1099296C; WO1997025063A1; DE69723670D1; EP0873137B1; AU732012B2; PL327921A1; IL125297A0; KR19990077183A; TR199801359T2; AU1362897A; ATE245448T1

Abstract

(57)【要約】本発明の一般的特徴は、Ｃａ²⁺流入ブロッカーによって、刺激された細胞の死を誘導することである。本発明はその種々の面において、或る組成物を哺乳動物、例えばヒトに治療目的で投与すること；組成物類、例えばＣａ²⁺流入ブロッカーと、細胞死を誘導すべき細胞を普通は刺激する作用物質とを含む組成物など；組成物キット、例えばＣａ²⁺流入ブロッカーと、細胞死を誘導すべき細胞を正常には刺激する作用物質とを含む組成物キット；このような組成物または組成物キットの抗炎症剤および／または抗増殖剤としての使用；および細胞死誘導のために用いる医薬品の製造におけるＣａ²⁺流入ブロッカーの使用またはＣａ²⁺流入ブロッカーと作用物質との使用を含む。本発明はＣａ²⁺流入ブロッカーまたはＣａ²⁺流入ブロッカーと、正常には細胞を刺激する作用物質との組み合わせによる、細胞死を誘導する治療に対する疾患動物の感受性を診断する方法を含める。本発明はＣａ²⁺流入ブロッカーとしても潜在的化合物をスクリーニングする方法を含める。

Description

【発明の詳細な説明】細胞増殖阻止のためのカルシウム流入ブロッカーを含む組成物発明の分野本発明はＣａ²⁺流入ブロッカーを使用して、刺激された細胞の死を誘導することを特徴とし、増殖性疾患の治療法を含める。発明の背景大部分の癌治療は、正常細胞はそのままとして、癌細胞の増殖を阻止またはコントロールすることを目的としている。そこでガン細胞と正常細胞とを区別する特徴を確認し、特殊な治療薬を用いてこれらの差を標的とすることに多くの注目が集まっている。細胞の規則正しい増殖および発達は、大部分、可溶性分泌リガンドと刺激された細胞表面上の特殊な受容体との相互作用によってコントロールされている（Ce ll、６１巻、２０３−１２ページ［１９９０］）。細胞増殖のコントロールにおけるそれらの重要な役割を考慮すれば、多数の成長因子またはそれらの受容体が、正常−および異常増殖刺激間の密接な関連性の基礎になる公知の癌原遺伝子、例えばｎｅｕ、ＥＧＦ^R（ｖ−ｅｒｂ−ｂ）、ｃ−ｆｍｓ（ＣＳＦ−１^R）、およびｃ−ｋｉｔなど、であることは驚くに当たらない。成長因子またはそれらの受容体はしばしば腫瘍細胞の発生および／または維持に関係するから、これらの分子は、それらの刺激活性を相殺または中和することを目的とする特殊な治療の真の標的と考えることができる。ｃ−ｋｉｔ受容体は不適当な発現または突然変異が多数の腫瘍と関連する例である。骨髄性白血病にはｃ−ｋｉｔが共通的に発現するのに加えて（シトネン（ Siittonen）ら、１９９４）、ｃ−ｋｉｔは小細胞性肺癌（ヒダ(Hida)ら、１９９４）、女性生殖管腫瘍（イノウエら、１９９４）および乳癌（ハイネス（Hine s）ら、１９９５）にも高い割合で見いだされている。これらの場合の多くでは、腫瘍細胞はｃ−ｋｉｔおよびＳＬＦの両方を発現し、それらの腫瘍原性に貢献するオートクリンを刺激する結果となる。同様に、ｃ−ｋｉｔの共通の優性活性化突然変異がヒト、マウスおよびラット由来の肥満細胞腫にも確認されている（ツジムラら、１９９４；ツジムラら、１９９５；カナクラら、１９９４；キタヤマら、１９９５）。優性トランスフォーミング癌遺伝子、並びに腫瘍サプレッサー機能喪失が多くの型の癌で強く示唆される。例えば、若干の研究は、原発性乳癌細胞において、成長因子受容体の突然変異、不適当な発現、過剰発現、およびオートクリン刺激を証明した（ルプ(Lupu)ら、１９９４；エシール(Ethier) 、１９９５；ルジョーネ(LeJeune)ら、１９９３）。したがって、多くの研究者はこれらの分子を特異的に標的とする革新的なアプローチを推し進めている（コプレスキー(Kopreski)ら、１９９６；フライ(Fry)ら、１９９５；レヴィツキ(Le vitzki)ら、１９９５）。腫瘍サプレッサー機能の喪失が、もはや生理的細胞死メカニズムに支配されない細胞の発生という形で、癌細胞形成に貢献し得ることも明らかである。腫瘍サプレッサー機能の喪失は乳癌でも広く証明されている（ホラク（Horak）ら、１９９１;トール(Thor)ら、１９９２；ワング(Wang)ら、１９９３；バーグ(Bargou)ら、１９９５；クラジェウスキー(Krajewski)ら、１９９５；リー(Lee)、１９９５）。腫瘍サプレッサー機能の喪失の重要な結果は、一般的種類の抗癌治療に対する抵抗性である（ル(Lu)ら、１９９６；コースマイヤー(Korsmeyer)、１９９５）。多くの抗増殖剤が現在癌治療に用いられている。大抵の場合、それらは速やかに分割する細胞に特異的に作用するように設計されている。しかし、細胞分割は多くの体細胞型に通常起こるものであるから、正常組織への毒性がしばしば認められ、これらの薬の有用性および有効性を制限する。同様に、異常−または過度細胞活性化および増殖は多くの炎症状態の特徴でもある。例えば、自己免疫病は、免疫系の細胞がその患者に存在する自己抗原を識別し、それに反応する状態である。現在の治療は免疫細胞反応を非特異的方法で弱める傾向にあり、その結果感染症およびその他の不都合な病気にかかり易くなる。アレルギー性疾患は不適当な活性化シグナルが重大な疾患をおこすもう一つの状態である。したがって、これらのおよびその他の状態において、特殊な増殖または活性化シグナルに反応する細胞に向けられるより大きい特異性を有する治療が必要である。細胞内貯蔵からのＣａ²⁺動員と、その後の細胞外Ｃａ²⁺のStore-Operated Cha nnels（ｌ_cracチャンネルとも呼ばれる）を介する流入（ホス(Hoth)ら、１９９２；ホスら１９９３；ペナー(Penner)ら、１９９３）は、多くの成長因子、抗原、Ｆｃ、およびＧ−蛋白質結合受容体によって開始する一般的シグナル化事象である。このシグナルはホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）の種々のアイソホームの活性化の結果であり、第二のメッセンジャーＩＰ₃およびジアシルグリセロール（Rhe e、１９９１）の発生に導く。細胞内Ｃａ²⁺のこの急速な増加と、その後の緩徐な減少が、有糸分裂発生、活性化およ細胞移動を含める多くの細胞プロセスに関連づけられてきた（リュイス(Lewis)ら、１９９５）。Ｃａ²⁺流人は多数の細胞型のアポプトーシスのコントロール、またはプログラムされた細胞死と関連づけられるとはいえ、アポプトーシスにおけるＣａ²⁺の正確な役割は理解されていない（クレナス(Crrenius)ら、１９９２;ニコテラ(Nico tera)ら、１９９４；ダウド(Dowd)、１９９５）。Ｃａ²⁺イオノフォアによって誘起されるような細胞内過剰Ｃａ²⁺濃度が多数の実験系においてアポプトーシスを起こすことが示された（キザキら、１９８９；タダクマら、１９９０）。脾細胞のアポプトーシスはＣａ²⁺依存性エンドヌクレアーゼに関係するように見え（リベイロ(Ribeiro)ら、１９９３）、細胞内Ｃａ²⁺増加は活性化Ｔ細胞ハイブリドーマ（マーセプ(Mercep)ら、１９８９）および未成熟胸腺細胞（マッコンキー (McConkey)ら、１９８９）両方のアポプトーシスに関連づけられている。最近タカタら（１９９５）は、Ｂ細胞の表面−ＩｇＭ−仲介性アポプトーシスがＰＬＣ −ｙの存在しない場合に減少することを示し、この型のアポプトーシスをＣａ²⁺ 動員と関係づけた。これらの観察とは異なり、若干の細胞はＣａ²⁺流入によってアポプトーシスから防御されるようにみえる。例えば、ＩＬ−３依存性肥満細胞および細胞系は、Ｃａ²⁺イオノフォアの添加により、成長因子離脱仲介性アポプトーシスから防御され（ロドリゲツ−タルダキー(Rodriguez-Tarduchy)ら、１９９２）、そしてプログラムされた神経死も細胞内Ｃａ²⁺の増加によって抑制される（ランピート(Lampeet)ら、１９９５）。アポプトーシスに対する正および負の効果を両方共仲介する２、３の蛋白質が確認されている。Ｂｃ１−２は線虫(C.elegans)ｃｅｄ−９が原型である関連蛋白質ファミリーのメンバーである（リード(Reed)、１９９４）。ファミリーメンバーの１クラス（Ｂｃ１−２を含む）はアポプトーシスシグナルから細胞を守り、他のクラス（このファミリーのpro-apoputicメンバーであるｂａｘを含む）はアポプトーシスを促進する。これら２クラス間のバランスが、細胞がアポプトーシスによって死ぬか、または生き延びるかを決めると考えられる（オルトヴァイ (Oltvai)ら、１９９３）。Ｂｃ１−２蛋白質の過剰発現は種々の作用物質、例えば照射、化学療法剤、酸化剤およびステロイドなどによって誘起されるアポプトーシスの防御に通ずる（コースマイヤー、１９９５）。しかしその他のアポプトーシスシグナルは、Ｂｃ１−２には不感受性であるようにみえる。これらは、ＴＮＦ、Ｆａｓ活性化、活性化誘導性細胞死、ＷＥＨＩ−２３１細胞の抗ＩｇＭ処理およびスーパー抗原仲介性クローン欠失を含める（アシュエル(Ashwell)ら、１９８７；スミス(Smith) ら、１９８９；ジョーンズ(Jones)ら、１９９０；セントマン(Sentman)ら、１９９１；ブラウン(Brown)ら、１９９２；クエンド(Cuende)ら、１９９３；メモン( Memon)ら、１９９５；ミウラら、１９９５）。或る場合には、これらのアポプトーシスシグナルが、プロテアーゼのインターロイキンー１β変換酵素（ＩＣＥ）ファミリーのインヒビターによって中和されることが証明され、アポプトーシスにこれらの酵素が関係していることが示唆された（エナリ(Enari)ら、１９９５；チナイヤン(Chinnaiyan)ら、１９９６）。公知のＣａ²⁺流入ブロッカーであるケトチフェンは高濃度で肥満細胞活性化および単核細胞増殖を抑制することが報告された（グシュキン(Gushchin)ら、１９８５）。ケトチフェンを用いて、神経線維腫の肥満細胞関連性症状をコントロールすることができることも示された（リッカルディ(Riccardi)ら、１９８７；リッカルディら、１９９３）。ケトチフェンは全身性肥満細胞腫の症状の抑制に有効であることも示された（ポヴォア(Povoa)ら、１９９１）。ケトチフェンは抗原に対するＴ細胞反応を阻止するがＰＨＡまたは破傷風トキソイドに対するＴ細胞反応は阻止しないことが示された（コンド(Kondo)ら、１９９４）。ケトチフェンは分裂促進剤刺激によるリンパ球増殖を阻止し得ることが報告された（ペトラッシュ（Petrasch）ら、１９９３）。高濃度ケトチフェンはリンパ球およびＵ９３７ヒト単球前駆細胞系においてそれぞれＴ−リンパ球マイトジェン刺激−およびアデノシン三燐酸刺激−細胞内Ｃａ²⁺増加も阻止した。しかし in vivo実験では、健康な志願者に１ｍｇケトチフェンを１日２回７日間投与しても循環リンパ球のサブセット組成の数は変化しなかった。もう一つのＣａ²⁺流入ブロッカーであるエコナゾールは、１μｇ／ｍｌでＮＳＩ／Ａｇ４骨髄腫細胞の細胞生育性および細胞数を減少させることが判明した（デナイヤー(Denyer)ら、１９８５）。Ｃａ²⁺流入阻止特性を有する化合物ＣＡＩは腫瘍細胞の増殖、およびＦＧＦに反応したＨＵＶＥＣの増殖を抑制することが報告された（コーン(Kohn)ら、１９９２；コーンら、１９９４；コーンら、１９９４ｂ）。カルシウムチャンネルブロッカー化合物による腫瘍増殖および転移阻止が米国特許第４，６９０，９３５号（テイラー(Taylor)ら、１９８７）に記載されている。カルシウムチャンネルブロッカー化合物および白金配位化合物を投与して腫瘍の増殖および転移を阻止することが米国特許第４９０６６４６号（ホン(H onn)ら、１９９０）に記載されている。クロトリマゾールは、in vitro細胞増殖を抑制する濃度で、３Ｔ３細胞の細胞内貯蔵庫からＣａ²⁺を放出することが示された。クロトリマゾールのＣａ²⁺プールに与える影響は可逆的であることが見いだされた。クロトリマゾールはＳＣＩＤマウスにヒトメラノーマ細胞によって作った実験的肺転移の数を抑制する効果を有することも判明した（ベンザケン(Benzaquen)ら、１９９５）。発明の概要本発明の一般的特徴は、刺激された細胞のＣａ²⁺流入ブロッカーによる死の誘導である。本発明は種々の面において、細胞死を誘導する組成物の投与、例えばヒトなどの哺乳動物の治療目的での組成物の投与、組成物、例えばＣａ²⁺流入ブロッカーと、細胞死に導きたい細胞を正常では刺激する作用物質とを含む組成物；組成物のキット、例えばＣａ²⁺流入ブロッカーと、細胞死に導きたい細胞を正常では刺激する作用物質とを含むキットなど；このような組成物または組成物キットの、抗炎症剤および／または抗増殖剤としての使用；そして細胞死の誘導に使用するための医薬品の製造におけるＣａ²⁺流入ブロッカーの使用、またはＣａ²⁺流入ブロッカーと作用物質との使用を含む。本発明は疾患動物のＣａ²⁺流入ブロッカー投与に対する、またはＣａ²⁺流入ブロッカーと、細胞を正常では刺激して細胞死を誘導し、投与すると細胞死を引き起こし得る作用物質との組み合わせ投与に対する感受性を診断する方法を含める。本発明はＣａ²⁺流入ブロッカーのような潜在的化合物をスクリーニングする方法を含める。本発明の範囲において、細胞または細胞受容体を普通は刺激する作用物質または因子またはリガンドまたはその他のアゴニストとは、細胞または受容体を刺激するものである。このような刺激は、概して細胞の増殖、生存および／または活性化を促進する。言い換えれば、本発明により、細胞死は、刺激された細胞に実際に誘導される。特別の実施例（その詳細は以下に述べる）によると、ＳＬＦの存在下で培養したとき正常では刺激される肥満細胞では、ＳＬＦおよびＣａ²⁺流入ブロッカーとの組み合わせの存在下で培養したとき死が誘発される。概してこのような正常な刺激は細胞内へのＣａ²⁺流入を伴う。好適Ｃａ²⁺流入ブロッカーはnon-voltage-gated流入ブロッカーである。治療の好適対象はヒトである。本発明の好適方法は、細胞死を必要とする哺乳動物に細胞死を誘導する方法であり、その際細胞は或る因子によって刺激され、その後Ｃａ²⁺流入を伴うという方法であって、哺乳動物に有効量のＣａ²⁺流入ブロッカーと有効量のその種の因子とを投与することを含んでなる。また別の好適実施態様により、前記細胞の受容体のリガンドによる、（または）作用物質による刺激を受け、同時にＣａ²⁺流入を伴う細胞を有する哺乳動物において、本発明は、哺乳動物に有効量のＣａ²⁺流入ブロッカーと有効量のその種リガンドとを投与することを含んでなる、細胞死を誘導する方法である。また別の好適実施態様によると、本発明は細胞死を必要とする哺乳動物に細胞死をおこす方法であり、その際このような細胞は、“或る作用物質と結合すると、細胞内へのＣａ²⁺流入およびホスホリパーゼＣの活性化がおきるという受容体”を有する；そして本発明は哺乳動物に有効量のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび有効量のその種作用物質を投与することを含んでなる。もう一つの実施態様によると、本発明は細胞死を必要とする哺乳動物に細胞死をおこす方法であって、其の際細胞は因子による刺激を受けることができ、それに伴うＣａ²⁺流入がおこり、さらに本方法は哺乳動物に有効量のnon-voltage ga ted Ｃａ²⁺流入ブロッカーおよび有効量のこの種の因子を投与することを含んでなる。その因子または作用物質、またはその他は、例えば細胞の受容体に対するアゴニスティック抗体、または細胞受容体の天然リガンドであってもよい。前記細胞は肥満細胞、単球、マクロファージ、線維芽細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、好塩基球または癌細胞である。哺乳動物は増殖性疾患の治療を必要とすることがある、例えばそれは癌、特に乳癌にかかっているヒトであり、または患者はアレルギーまたは自己免疫疾患にかかっているかも知れない。死を誘導すべき細胞（または細胞群）は、例えば、ｃ−ｋｉｔ受容体また突然変異ｃ−ｋｉｔ受容体、Ｔ細胞受容体、ＣＤ３、ＦｃｙＲＩＩ、ＦｃｙＲＩＩＩ、ＦｃｙＲＩ、Ｇ−蛋白質結合受容体、ボンベシン受容体、ガストリン放出ペプチド受容体、ブラジキニン受容体、カルバコル受容体、ムスカイン分子受容体、ＣＣＫ−８受容体、バソプレッシン受容体、ニューロキニン受容体、サブスタンスＰ受容体、プリン作動性分子受容体、ＴＧＦ−α受容体、ＥＧＦ受容体、ヘレグリン受容体、ｅｒｂＢ１受容体、ｅｒｂＢ２受容体、ｅｒｂＢ３受容体、ｅｒｂＢ４受容体、ＰＤＧＦ受容体、ＳＬＦ受容体、ＦＬＴ−３リガンド受容体、塩基性ＦＧＦ受容体、酸性ＦＧＦ受容体、エノテリン受容体、ＮＧＦ受容体、ＶＥＧＦ受容体、およびＨＧＦ受容体からなる群から選択される表面受容体をもつことができる。前記細胞に投与すべき作用物質または因子はＳＬＦ、ＴＧＦ−α、ＥＧＦ、ヘレグリン、ｅｒｂＢ１に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ２に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ３に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ４に対するアゴニスト、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＦＬＴ−３リガンド、塩基性ＦＧＦ、酸性ＦＧＦ、エノテリン、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＣＲに対するアゴニスト、ＣＤ３受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｅＲＩ受容体に対するアゴニスト、Ｇ蛋白結合受容体に対するアゴニスト、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコル、ムスカイン受容体アゴニスト、ＣＣＫ−８、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、プリン作動性受容体アゴニスト、ＡＴＰ、アデノシン、および１、２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃、およびそれらの組み合わせから選択できる。その細胞は例えば高活性免疫細胞で、方法は抗体を含み、因子はその抗体に対する抗原であってもよい。細胞はＩｇＥが結合する高活性免疫細胞で、因子はその受容体に対する抗体であってもよい。細胞は好塩基性または肥満細胞でもよい。Ｃａ²⁺流入ブロッカーと因子、リガンドなどとは別々に投与することができる。好適実施態様によると、Ｃａ²⁺流入ブロッカーは作用物質の前に投与する。他の好適実施態様では、作用物質／因子などとＣａ²⁺流入ブロッカーとが単一段階で投与される。好適には、Ｃａ²⁺流入ブロッカーの存在しない場合のこのような作用物質による細胞刺激は、正常では細胞の増殖、生存性および／または活性を促進する。特殊の実施態様において、細胞はｃ−ｋｉｔ受容体を発現し、その際本発明の方法は有効量のｃ−ｋｉｔリガンドを哺乳動物に投与することを含む。患者は白血病、腫瘍増殖または肺癌にかかることがある。本発明の因子は細胞の受容体に結合する増殖因子であり、その結合は正常では細胞増殖をおこす。患者は癌または過形成にかかっているかも知れない。因子は蛋白質でもよい。因子は前記細胞の受容体に結合する生存因子であり、その結合は、前記Ｃａ²⁺ 流入ブロッカーが存在しない場合は、普通は細胞の寿命を高める。特殊の実施態様によると、細胞は造血前駆細胞である。因子は前記細胞の受容体に結合する活性化因子であり、その結合は、前記Ｃａ²⁺ 流入ブロッカーが存在しない場合は細胞を活性化するのが普通である。Ｃａ²⁺流入ブロッカーはＮｉ²⁺、ケトチフェン、エコナゾール、テニダップ、ＣＡＩ、Ｃｄ²⁺、Ｃｏ²⁺、Ｌａ³⁺、Ｍｎ²⁺、ＳＫＦ−９６３６５およびクロモリン、またはそれらの組み合わせのいずれかの１つ以上である。特殊の実施態様によると、本発明は細胞死を必要とする哺乳動物の構造的に活性化された細胞の死を誘発する方法であり、有効量のＣａ²⁺流入ブロッカーを哺乳動物に投与することを含んでなる。好適には前記活性化は、不活性状態の前記細胞中のＣａ²⁺濃度より高められたＣａ²⁺濃度をもたらす。構造的活性化は突然変異ｃ−ｋｉｔ受容体の存在の結果である。患者は肥満細胞腫にかかっているかも知れない。また別の実施態様によると、本発明は細胞がオートクリン刺激にさらされており、細胞死を必要とする哺乳動物の細胞死を誘導する方法であって、有効量のＣａ²⁺流入ブロッカーを哺乳動物に投与することを含んでなる。Ｃａ²⁺流入ブロッカーはＮｉ²⁺でもよい。また別の実施態様によると、本発明は、哺乳動物に抗増殖剤として投与して細胞増殖を抑制する薬物組成物であって、Ｃａ²⁺流入ブロッカーと、正常には前記細胞の受容体に結合してＣａ²⁺の細胞内流入をおこす因子とを含んでなる。その組成物は、そのような因子と受容体との結合が正常にはホスホリパーゼＣの活性化をおこすような組成物である。その組成物は、non-voltage-gatedＣａ² ⁺ 流入ブロッカーであるＣａ²⁺流入ブロッカーを含むことができる。前記因子はその受容体に対するアゴニスティック抗体である。前記因子はＳＬＦ、ＴＧＦ− α、ＥＧＦ、ヘレグリン、ｅｒｂＢ１に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ２に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ３に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ４に対するアゴニスト、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＦＬＴ−３リガンド、塩基性ＦＧＦ、酸性ＦＧＦ、エノテリン、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＣＲに対するアゴニスト、ＣＤ３受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩ受容体に対するアゴニスト、Ｇ蛋白結合受容体に対するアゴニスト、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコル、ムスカリン受容体アゴニスト、ＣＣＫ−８、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、プリン作動性受容体アゴニスト、ＡＴＰ、アデノシン、および１、２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃およびこれらの組み合わせの群から選択することができる。組成物は免疫細胞の表面抗体の抗原を含むことができる。前記組成物はＩｇＥに対するアゴニストである因子を含むことができる。前記組成物は、因子と受容体との結合が、前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーが存在しない場合は、正常には前記細胞の増殖、寿命および／または活性化を促進するような因子を含むことができる。また別の面によると、本発明は哺乳動物の細胞増殖を阻止するために用いる薬物組成物のキットであり、そのキットはＣａ²⁺流入ブロッカーと、正常には前記細胞の受容体に結合してＣａ²⁺細胞内流入をおこす因子とを含んでなる。前記因子は、その因子と受容体との結合が正常にははホスホリパーゼＣの活性化をおこすような因子である。Ｃａ²⁺流入ブロッカーはnon-voltage-gated Ｃａ²⁺流入ブロッカーである。組成物の１因子は受容体に対するアゴニスティック抗体である。前記因子は受容体の天然リガンドである。前記因子はＳＬＦ、ＴＧＦ−α、ＥＧＦ、ヘレグリン、ｅｒｂＢ１に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ２に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ３に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ４に対するアゴニスト、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＦＬＴ−３リガンド、塩基性ＦＧＦ、酸性ＦＧＦ、エノテリン、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＣＲに対するアゴニスト、ＣＤ３受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩ受容体に対するアゴニスト、Ｇ蛋白結合受容体に対するアゴニスト、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコル、ムスカリン受容体アゴニスト、ＣＣＫ−８、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、プリン作動性受容体アゴニスト、ＡＴＰ、アデノシン、および１、２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃、およびこれらの組み合わせの群から選択することができる。因子がＳＬＦであるのが特に好ましい。前記因子は免疫細胞の表面抗体の抗原である場合もある。前記因子はＩｇＥに対するアゴニストである場合もある。前記因子は、その因子と受容体との結合が、前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーの存在しない場合は正常には前記細胞の増殖、生存および／または活性化を促進するような因子である。別の実施態様において、本発明は、本発明の薬物学的組成物を抗増殖剤として、または抗炎症薬として使用することを含む。それに応じて、本発明の薬物学的組成物のキットを抗増殖剤、または抗炎症薬として用いることができる。本発明は、前記細胞の増殖を阻止する薬剤として使用するための医薬品の製造において、Ｃａ²⁺流入ブロッカーと正常には細胞の受容体に結合してＣａ²⁺の細胞内流入をおこす因子とを使用することを含む。本発明は前記細胞の増殖を阻止する作用物質として使用するための医薬品の製造において、Ｃａ²⁺流入ブロッカーと本発明の因子とを使用することを含み、その際前記因子と受容体との結合が正常にはホスホリパーゼＣの活性化をおこす。本発明は、前記細胞の増殖を抑制する作用物質として使用するための医薬品の製造においてＣａ²⁺流入ブロッカーおよび本発明の因子を使用することを含み、前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーはnon-voltage-gated Ｃａ²⁺流入ブロッカーである。特殊の実施態様によると、本発明は前記細胞の増殖を抑制する作用物質として使用するための医薬品の製造にＣａ²⁺流入ブロッカーおよび本発明の因子を使用することを含み、前記因子は受容体のアゴニスティック抗体である。或る特殊の実施態様は、前記細胞の増殖を抑制する作用物質として使用するための医薬品の製造にＣａ²⁺流入ブロッカーおよび本発明の因子を使用することを含み、前記因子は前記受容体の天然リガンドである。特殊の実施態様は前記細胞の増殖を抑制する作用物質として使用するための医薬品の製造にＣａ²⁺流入ブロッカーおよび本発明の因子を使用することを含み、前記因子はＳＬＦ、ＴＧＦ−α、ＥＧＦ、ヘレグリン、ｅｒｂＢ１に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ２に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ３に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ４に対するアゴニスト、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＦＬＴ−３リガンド、塩基性ＦＧＦ、酸性ＦＧＦ、エノテリン、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＣＲに対するアゴニスト、ＣＤ３受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩ受容体に対するアゴニスト、Ｇ蛋白結合受容体に対するアゴニスト、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコル、ムスカリン受容体アゴニスト、ＣＣＫ−８、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、プリン作動性受容体アゴニスト、ＡＴＰ、アデノシン、および１、２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃、およびこれらの組み合わせの群から選択される。前記因子は特にＳＬＦである。好適実施態様は、前記細胞の増殖を抑制する作用物質として使用するための医薬品の製造においてＣａ²⁺流入ブロッカーと本発明の因子とを使用することを含み、前記因子は免疫細胞の表面抗体の抗原である。好適実施態様は前記細胞の増殖を抑制する作用物質として使用するための医薬品の製造においてＣａ²⁺流入ブロッカーと本発明の因子とを使用することを含み、前記因子はＩｇＥに対するアゴニストである。もう一つの実施態様は、抗増殖剤として使用するための医薬品の製造においてＣａ²⁺流入ブロッカーと本発明の因子とを使用することを含み、前記因子と受容体との結合は、前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーの存在しない場合は前記細胞の増殖、生存および／または活性化を促進するのが普通である。もう一つの実施態様によると、本発明は治療に対する疾患哺乳動物細胞の感受性をＣａ²⁺流入ブロッカーで、またはブロッカーと細胞の受容体をさらに活性化する因子とで診断する方法であって、正常組織と比較することを含んでなり、その際、活性化ＰＬＣの濃度上昇は、細胞が前記治療に感じ易くなっていることを示唆する。このような方法は疾患組織のサンプル採取を含むことができる。さらにこの方法は、あらかじめ決めた量の前記組織から得られるＰＬＣの存在下で反応するＰＬＣ基質量のモニターを含むアッセイ段階を含める。この方法はあらかじめ決めた量の前記組織から、ＥＬＩＳＡ法によってＰＬＣを分離することを含める。ＰＬＣ基質は[³Ｈ]−ＰＩＰ₂である。もう一つの実施態様において、本発明はＣａ²⁺流入ブロッカーとしての作用物質をスクリーニングする方法であって、上記方法は次の諸段階を含む：前記作用物質の存在下で第１細胞群を培養し、その際細胞は、Ｃａ²⁺の細胞内流入を促進する活性化受容体を有し；前記作用物質の存在下で第２細胞群を培養し、その際第２群の細胞には第２群の細胞内へのＣａ²⁺流入を促進する活性化受容体が存在せず；第１細胞群の増殖が、作用物質の存在しない場合の第１群の細胞増殖に対応する第１のあらかじめ決めたレベルより少ないかどうかを確かめ；そして第２細胞群の増殖が、作用物質の存在しない場合の第２群の細胞増殖に対応する第２のあらかじめ決めたレベルと実質上同じであるかどうかを確かめ；その際、第１のあらかじめ決めたレベル以下である第１細胞群の増殖および第２のあらかじめ決めたレベルと実質上同じである第２細胞群の増殖は、前記作用物質がＣａ²⁺ブロッカーであることを示唆する。第１群の細胞の受容体は構造的に活性化することができ、または第１群の細胞の受容体はオートクリン刺激にさらされ、または第１群細胞受容体を外因性作用物質によって活性化される。作用物質は第１群細胞の受容体の天然リガンドである。第１群細胞の受容体および第２群細胞の受容体は同じ受容体であってもよい。特殊の実施態様において、受容体はｃ−ｋｉｔ受容体、ＥＧＦ受容体およびＦＧＦ受容体の群から選択される。好適には第１群の細胞および第２群の細胞はヒト細胞である。好適には第１群の細胞は肥満細胞であり、第２群の細胞は肥満細胞であり、受容体はｃ−ｋｉｔ受容体であり、第１群の細胞はＳＬＦの存在下で培養される。特殊の実施態様によると第１群の細胞に第１群の細胞の前記受容体がトランスフェクトされる。図の簡単な説明図１Ａから図１Ｆまでは増殖-または活性化シグナルとＣａ²⁺流入ブロッカーとの組み合わせによるＢＭＭＣの死の誘導を示す。細胞毒性アッセイは材料および方法の部に記載するように行った。図１Ａないし図１Ｃでは、ＢＭＭＣをＳＬＦ（すべての場合に５００ｎｇ／ｍｌ）（丸）またはＩＬ−３（すべての場合に２５％ＷＥＨ１−３で条件づけたメジウム）（四角）のどちらかと、指示量のケトチフェン（図１）、エコナゾール（図１Ｂ）またはＮｉ²⁺（図１Ｃ）と共にインキュベートした。図１ＥではＢＭＭＣをＩｇＥ抗ＤＮＰモノクローナルＳＰＥ −７で被覆し、その後ＩＬ−３プラス指示量のＤＮＰ−ＨＳＡ（Ａｇ）と共に、５μＭエコナゾールの存在下で（丸）またはエコナゾール欠如下で（四角）インキュベートした。図１Ｆでは、ＢＭＭＣをＩＬ−３プラス指示量のサブスタンスＰと共に、５マイクロＭエコナゾールの存在下で（丸）またはエコナゾール欠如下で（四角）インキュベートした。すべての場合に、培養２４時間後にトリパンブルーを排除できた、または排除できなかった細胞を数えることによって死んだ細胞の割合を確認した。誤差棒は３回の測定から決定した標準誤差を示す。図２Ａおよび図２Ｂは、ＳＬＦプラスＣａ²⁺流入ブロッカーによる３２Ｄ−ｋｉｔまたはｐ８１５細胞における細胞死の誘導を示す。３２Ｄ−ｋｉｔ（図２Ａ）またはｐ８１５細胞を、ＳＬＦ（充実棒）またはＩＬ−３（斜線棒）のどちらかと指示濃度のＣａ²⁺流入ブロッカーと共にインキュベートした。培養１８時間後のトリパンブルー排除によって細胞死を決定した。図３Ａから図３Ｅは、種々の因子およびＣａ²⁺流入ブロッカーと共にインキュベートした３２Ｄ−ｋｉｔ細胞の形態を示す。３２Ｄ−ｋｉｔ細胞をＳＬＦのみと（図３Ａ）、ＩＬ−３のみと（図３Ｂ）、５μＭエコナゾールとＳＬＦと（図３Ｃ）、または５μＭエコナゾールとＩＬ−３と共に１８時間（図３Ｄ）インキュベートした。図３Ｅでは細胞を付加因子なしにインキュベートした。細胞を位相差顕微鏡で４００×倍率で写真にとった。図４は、細胞ＤＮＡ含量の関数としての３２Ｄ−ｋｉｔの相対的細胞数をプロットしたものである。３２Ｄ−ｋｉｔ細胞をＳＬＦのみ（図４Ａ）、ＩＬ−３のみ（図４Ｂ）と共に、８μＭエコナゾールとＳＬＦ中で（図４Ｃ）、または８μ ＭエコナゾールおよびＩＬ−３中で（図４Ｄ）１８時間インキュベートした。図４Ｅでは、付加因子なしで細胞をインキュベートした。細胞を材料および方法の部に記したようにヨウ化プロピジウムで染色し、その後フローサイトメトリーによってＤＮＡ含量を測定した。図５はＳＬＦとＣａ²⁺流入ブロッカーによって誘導される３２Ｄ−ｋｉｔ細胞のアポプトーシスをオレイン酸が防御することを示す。３２Ｄ−ｋｉｔ細胞をＳＬＦおよび５μＭエコナゾールおよびオレイン酸と共に（充実棒）、またはＳＬＦと５μＭエコナゾールとエライジン酸（斜線棒）と共に、またはＩＬ−３と５ μＭエコナゾールとオレイン酸（斑点棒）と共に１８時間インキュベートした。死んだ細胞の比率をトリパンブルー排除によって決定した。図６Ａおよび図６Ｂは、ＳＬＦとＣａ²⁺流入ブロッカーによって誘導されるアポプトーシスに対するイオノマイシンの影響を示す。図６Ａでは３２Ｄ−ｋｉｔ細胞を５μＭエコナゾールおよび指示量のイオノマイシンと共にＳＬＦ（丸）またはＩＬ−３（四角）の存在下で１８時間インキュベートした。死んだ細胞の比率はトリパンブルー排除によって決定した。図７Ａは３２Ｄ−ｋｉｔ（レーン１）または３２Ｄ−ｋｉｔ−Ｂｃ１−２（レーン２）細胞からの細胞溶解物のウエスターンブロットを示す。細胞を材料および方法の部に記したように溶解し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、ニトロセルロースに移し、抗Ｂｃ１−２抗体で検査した。図７Ｂは、ＳＬＦプラスＣａ²⁺流入ブロッカーによって誘導したアポプトーシスに与えるＢｃ１−２過剰発現の影響を示す。３２Ｄ−ｋｉｔ（充実棒）または３２Ｄ−ｋｉｔ−Ｂｃ１−２（斜線棒）細胞をＳＬＦまたはＩＬ−３プラス２．５、５または１０μＭエコナゾールと共に１８時間インキュベートし、死んだ細胞の比率をトリパンブルー排除によって決定した。付加的培養において、ＩＬ− ３のみを加えるかまたは因子を全く加えずに、細胞生育性を同様に試験した。付加した２５または２５０μＭＹＶＡＤ−ＣＨＯの細胞生育性に与える影響も、付加的因子を加えなかった別の培養基で評価した。図８は、ＳＬＦとＣａ²⁺流入ブロッカーによって誘導されるアポプトーシスに対するＹＶＡＤ−ＣＨＯの影響を示す。３２Ｄ−ｋｉｔ細胞をＹＶＡＤ−ＣＨＯ欠如下でＳＬＦと共にインキュベートするか（丸）、２５μＭＹＶＡＤ−ＣＨＯ（三角）またはＩＬ−３（四角）の存在下でＳＬＦと共に、指示量のエコナゾールと共にインキュベートした。１８時間培養後、死んだ細胞の割合をトリパンブルー排除によって評価した。図９Ａは、連続的に活性化した受容体を有する癌細胞にＣａ²⁺流入ブロッカーによって誘導したアポプトーシスを示す。２．５×１０4ＳＫ−ＢＲ３細胞（ＡＴＣＣカタログ番号＃ＨＴＢ−３０）を９６ウェルプレートのウェル中、０．１ｍｌＲＰＭＩプラス０．５％ＦＢＳ中で、１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦ（上皮成長因子）を加えて（丸）または加えずに（四角）、そして指示濃度のエコナゾールと共に１８時間インキュベートした。１８時間培養後、死んだ細胞の割合をトリパンブルー排除によって評価した。図９Ｂは、種々の条件下のオートクリン刺激ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞におけるＣａ²⁺ブロッカーによって誘導されるアポプトーシスを示す。棒１：対照；棒２：２０μＭエコナゾール；棒３：２０μＭエコナゾールと１０μＭＹＶＡＤ−ＣＨＯ（ＩＣＥインヒビター）；棒４：２０μＭエコナゾールと１００μＭＹＶＡＤ−ＣＨＯ；棒５：２０μＭエコナゾールと０．１μＭイオノマイシン（カルシウムイオノフォア）；棒６：２０μＭエコナゾールと１０ｎＭイオノマイシン；棒７：２０μＭエコナゾールと１μＭイオノマイシン；棒８；２０ μＭエコナゾールと１０μＭオレイン酸（ＰＬＣ活性化インヒビター）；そして棒９：２０μＭエコナゾールと１００μＭオレイン酸。図１０は、ヒト乳癌由来細胞におけるＥＧＦおよびＣａ²⁺流入ブロッカーにより誘導されるアポプトーシスを示す。２．５×１０4 ＭＣＦ−７細胞を９６ウェルプレートのウェル中、０．１ｍｌＤＭＥＭプラス０．５％ＦＢＳ中で、１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦを加えて（丸）または加えずに（四角）、指示されたエコナゾール濃度で１８時間インキュベートした。培養１８時間後、死んだ細胞の割合をトリパンブルー排除によって評価した。図１１ＡはＳＬＦを静脈注射したマウスの白血病細胞に与えるＣａ²⁺流入ブロッカーおよび活性化因子の影響を示す。マウスの静脈内に１×１０7Ｇ４１８耐性３２Ｄ−ｋｉｔ細胞を接種した。接種後３ないし５週間に（実験１＆３；５週間、実験２；３週間）、マウスに１５μｇＳＬＦを静脈注射した。２時間後、マウスにさらに１００ｍｇ／ｋｇケトチフェンを経口投与した。翌日脾臓を摘出し、白血病細胞の存在を試験した；そのためには細胞を２０％ＷＥＨ１−３条件づけ培地と、１ｍｇ／ｍｌＧ４１８を含む増殖培地（０．３％寒天を含む）にプレートし、検出をＧ４１８耐性白血病細胞に制限した。７日後、コロニーを数えた。図１１Ｂは図１１Ａと同様であったが、この場合は脾臓細胞についてＩＬ−３に反応して寒天中にコロニーを形成できるすべての細胞、すなわち白血病細胞も正常細胞も含めた細胞の存在を試験した。図１２は、ＳＬＦを皮下投与したマウス白血病細胞に与えるＣａ²⁺流入ブロッカーおよび活性化因子の影響を示す。マウスには１×１０7 ３２Ｄ−ｋｉｔ細胞を静脈内に接種した。インキュベーションの３週間後にマウスに１００ｍｇ／ｋｇを経口胃管法によって１００ｍｇ／ｋｇケトチフェンを投与した。ケトチフェン投与４時間後、マウスに１５μｇＳＬＦを皮下注射した。注射２時間後、マウスにさらに１００ｍｇ／ｋｇケトチフェンを経口投与した。翌日、脾臓を摘出し白血病細胞の存在を試験した；そのためには細胞を２０％ＷＥＨ１−３条件づけ培地と、１ｍｇ／ｍｌＧ４１８を含む０．３％寒天含有増殖培地にプレートし、検出をＧ４１８耐性白血病細胞に制限した。７日後、コロニーを数えた。好適実施態様の説明材料および方法細胞．骨髄由来肥満細胞（ＢＭＭＣ）を既述のように生成した（バーガー(Ber ger)ら、１９９４）。それらを１０％熱不活性化ＦＢＳおよびＩＬ−３のソースとしての２％ＷＥＨ１−３上澄液を補充したＯＰＴＩ−ＭＥＭ(Gibco,Burlingto n，ＯＮ）に培養した。３２Ｄ−ｋｉｔ細胞（オンタリオ癌研究所のDr.Mark Min den博士からの贈り物）はｃ−ｋｉｔを発現するＩＬ−３依存性骨髄単球性細胞系である（フ(Hu)ら、１９９５）。３２Ｄ−ｋｉｔ細胞を１０％加熱不活性化ＦＢＳ、２％ＷＥＨ１−３、および１ｍｇ／ｍｌＧ４１８(Gibco)を補充したＲＰＭＩ(Gibco)で増殖させた。ｐ８１５細胞系はネズミ肥満細胞系である。ｐ８１５細胞を１０％熱不活性化ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ中で増殖させた。Ｂｃ１− ２ｇｐ＋ｅＮＩＨ３Ｔ３パッケイジング細胞をダルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ−Gibco）で増殖させ、１０％ＦＢＳおよび２μｇ／ｍｌプロマイシン（シグマ社、St.Louis、Mo）を補充した。すべての細胞培養培地は５５μＭβ− メルカプトエタノールおよび抗生物質（両方共シグマ社）も含んでいた。ＳＫ− ＢＲ３、ＭＤＡ−ＭＢ２３１およびＭＣＦ−７細胞はＡＴＣＣから入手した。ＳＫ−ＢＲ３およびＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞は１０％熱不活性化ウシ胎児血清および１０μｇ／ｍｌヒトインスリン（シグマ）を補充したＤＭＥＭ培地に培養した。Ｂｃ１−２過発現３２Ｄ−ｋｉｔ細胞の生成。ｇｐ＋ｅｂｃ１−２レトロウィルス生産細胞はデイビッド(Y.Ben-David)博士（トロント）からの贈り物であり、プロマイシン耐性およびネズミｂｃ１−２両方の遺伝子を発現するＬＸＳＮ −ベース−レトロウィルスベクターを含む。感染のために、ｇｐ＋ｅパッケイジング細胞の融合層を２４時間、３２Ｄ−ｋｉｔ細胞と共培養した。非付着性３２Ｄ−ｋｉｔ細胞をその後取り出し、４８時間培養し、その後２μｇ／ｍｌプロマイシンの存在下でｂｃ１−２過発現細胞を選択した。組換えＳＬＦの生成。組換えネズミスチール因子（ＳＬＦ）を大腸菌(E.col i)中で、ｐＦＬＡＧ．ＡＴＳ、ＩＰＴＧ−誘導性分泌発現ベクターを用いて可溶性型に作成した（インターサイエンス(InterScience)、マークハム、ＯＮ）。このベクターは８個のアミノ酸Ｎ−末端ＦＬＡＧエピトープを含む（インターサイエンス）。ｐＦＬＡＧ．ＡＴＳ．ＳＬＦプラスミドを含む大腸菌をルリア(Luria)ブロス(Gibco)中で１００μｇ／ｍｌアンピシリン（シグマ）と共に３７℃で一晩インキュベートした。この培養物を２０倍に希釈し、ＯＤ₈₀₀が０．４−０．５になるまで増殖させ、その後３３ｍｇ／ＬＩＰＴＧ(Gibco)で誘導した。その後培養物を３７℃で一晩インキュベートし、細胞を１０，０００ｒｐｍで２０分間ペレット化した。細菌性上澄液を０．２２ミクロンフィルターを通過させ、１ｍＭＣａＣｌ₂および１００μＭＰＭＳＦと共に−８０℃で保存した。ＦＬＡＧ−ＳＬＦを、アガロースゲル（インターサイエンス）に共有結合した抗ＦＬＡＧＭ１マウスモノクローナル抗体のカラムで親和性カラム精製した。このモノクローナルはＦＬＡＧエピトープにＣａ²⁺依存性に結合し、過剰のＣａ²⁺はＥＤＴＡとキレート化することによって溶出が可能となる。カラムはまず最初に３０ｍｌＰＢＳ＋１ｍＭＣａＣｌ₂で平衡化し、細菌性上澄液を３回カラムを通過させる。そのカラムをＰＢＳ＋１ｍＭＣａＣｌ₂でよく洗った、そしてＦＬＡＧ−ＳＬＦ融合蛋白質を１ｍＭＰＢＳ＋２ｍＭＥＤＴＡで６回溶出した。これらを集め、濃縮し、ＰＢＳに対して透析し、銀染色によって純度を検査した。その他の試薬類。モノクローナルネズミジニトロフェニル（ＤＮＰ）特異的ＩｇＥ、クローンＳＰＥ−７並びにアルブミン−ヒトＤＮＰ−ＨＳＡ抗原はシグマ社から入手した。サブスタンスＰ、すべてのＣａ²⁺チャンネルブロッカー、イオノマイシン、オレイン酸およびエライジン酸ＥＧＦ、およびｂＥＧＦもシグマ社から入手した。イオノマイシンは１ｍＭ溶液としてＤＭＳＯ中に−２０℃ で保存した。オレインおよびエライジン酸は脱気したエタノール性溶液にそれぞれ１Ｍおよび１００ｍＭ濃度で保存し、窒素ガスソース下でシールし、−２０℃ で保存した。ＹＶＡＤ−ＣＨＯＩＣＥプロテアーゼインヒビターペプチドはアマーシャム(Amersham)(Arlington Heights、IL)から入手し、ＤＭＳＯ中１ｍＭ溶液として−２０℃で保存した。細胞死アッセイ。２．５×１０⁴ＢＭＭＣｓ、３２Ｄ−ｋｉｔまたはＰ８１５細胞を９６ウェル平底プレートに、０．５％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ０．１ｍｌ中に入れた。細胞にはＳＬＦ、サブスタンスＰまたはＩＬ３プラスＣａ²⁺チャンネルブロッカーを追加した。ＩｇＥを加える場合、細胞を１０μｇ／ｍｌＳＰＥ− ７と共に４℃で４５分インキュベートし、その後ＲＰＭＩ、０．５％ＦＢＳで３回洗い、その後９６ウェルプレートに接種し、１００ｎｇ／ｍｌＤＮＰ−ＨＳＡを加えた。死んでいる細胞の割合は、培養１８または２４時間後にトリパンブルーを排除できる、またはできない細胞を数えることによって測定した。ＤＮＡ含量の分析。１．２５×１０⁶細胞を上記のように１８または２４時間インキュベートした。細胞を遠心分離して沈殿させ、下記の成分からなるヴィンデロヴ試薬に再懸濁した：３．４ｍＭトリス−ｐＨ８．７５μＭヨウ化プロピジウム（シグマ社から入手）、０．１％ＮＰ−４０、７００ｕ／ｌＲＮＡｓｅ（シグマ社）および１０ｍＭＮａＣｌ。細胞をその後フローサイトメトリーによって分析した。ウエスターンブロッティング。１×１０⁶３２Ｄ−ｋｉｔおよび３２Ｄ−ｋｉｔ−ｂｃ１２細胞をＰＢＳで洗い、ＴＢＳ中１％ＮＰ−４０、１０％グリセロールと下記のインヒビター類とを含む溶解緩衝液に再懸濁した：５００μＭオルトバナジン酸ナトリウム、１０μｇ／ｍｌアプロチニン、１０μｇ／ｍｌロイペプチンおよび１ｍＭＰＭＳＦ（すべてシグマ社）。そして４℃で２０分間インキュベートした。溶解物を１２，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄液を、β２−メルカプトエタノールを含むサンプル緩衝液の等量に加えた。サンプルを１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、ニトロセルロースに移した。そのブロットをＰＢＳ中５％スキムミルクパウダー、０．１％ツイーン２０（ＩＣＮ、Aurora ＯＨ）でブロックし、抗−ｂｃ１−２抗体(U.B.I.、Lake Pacid，NY) で検査した。ウエスターンブロットを化学ルミネッセンス試薬（アマーシャム）で発現させた。マウス。in vivo ３２Ｄ−ｋｉｔ実験のためのマウスは齢６ないし８週の雄Ｃ３Ｈ／ｈｅマウスで、チャールズリバー研究所、ボストン、マサチュセッツ、から入手した。マウスに１×１０⁷白血病細胞を静脈内接種した。接種後３および５週間の間にマウスに０．４ｍｌ容量の水中１００ｍｇ／ｋｇケトチフェン（シグマ）を経口胃管法によて投与した。最初のケトチフェン投与後にマウスにＰＢＳ中１５μｇＳＬＦを静脈内または皮下注射した。ＳＬＦ投与後、第２のケトチフェンを投与した。実験１：Ｃａ²⁺チャンネルブロッカーは活性化シグナルを死のシグナルに変える。肥満細胞は、ｃ−ｋｉｔ受容体トリプシンキナーゼのためのリガンドであるＳＬＦによって刺激されて増殖する。しかし、図１Ａ−Ｃに示すように、もしもこれらの細胞をケトチフェン、エコナゾールまたはＮｉ²⁺のようなＣａ²⁺流入ブロッカーと共にインキュベートするならば、この増殖シグナルは死のシグナルに変わる。これとは異なり、肥満細胞をＣａ²⁺流入ブロッカーおよびＩＬ−３と共にインキュベートした場合は死は認められない。肥満細胞をＳＬＦ、Ｃａ²⁺流入ブロッカー、およびＩＬ−３と共に刺激的インキュベートした場合、やはり細胞死が起き（図４Ｄ）、ＩＬ−３がこの特殊の死のシグナルを防御しないことを示唆した。Ｃａ²⁺流入ブロッカーそれ自体は、増殖−または生存因子を投与しなければ肥満細胞死を促進しない（示されず）。ＳＬＦプラスＣａ²⁺流入ブロッカーによる細胞死の誘導はＳＬＦの濃度増加と共に高まる。これは、ブロッカーと関連するこの型の細胞死を引き起こすために必要な、ＳＬＦと関係する（だがＩＬ− ３とは関係しない）シグナル化特性があることを示すものである。Ｃａ²⁺流入ブロッカーの効果は単にＳＬＦの刺激特性を相殺または中和するものではない。むしろブロッカーはＳＬＦが発生する重要なシグナルと結合し、活性化経路を細胞死の経路に変える。ＳＬＦもＩＬ−３も両方共、肥満細胞分裂を促進するとはいえ、ＳＬＦのみがＣａ²⁺流入を引き起こす（コロンボ(Columbo)ら、１９９４；ラド(Rad)ら、１９９４）。そこで肥満細胞においてＣａ²⁺を動員することが知られている２つの他のシグナルの細胞生育性に与える影響が研究された。ＩｇＥの親和性受容体と抗原との架橋は、ＰＬＣ−ｙ活性化およびＣａ²⁺動員など、肥満細胞分解をおこす一連のシグナル化事象を開始する（ジュヴィン(Jouvin)ら、１９９５）。Ｃａ²⁺ 流入ブロッカーの存在下でのＡｇプラスＩｇＥによる肥満細胞刺激が細胞生育性に与える影響を図１Ｅに示す。細胞死は、肥満細胞がエコナゾールの存在下でＩｇＥプラス抗原で刺激されるときに起こり、抗原刺激のみまたはエコナゾールのみは細胞生育性に影響がないことがわかる。Ｎｉ²⁺およびケトチフェンも架橋ＩｇＥ受容体と一緒になって細胞死を引き起こす（示されず）。肥満細胞はサブスタンスＰのような両性カチオン性ペプチドにも応答する（ブエブ(Bueb)ら、１９９０；マウスリ(Mousli)ら、１９９０）。これらの分子は直接ヘテロトリマーＧ-蛋白質を刺激し、ＰＬＣ−β活性化、Ｃａ²⁺動員、および、最適以下の濃度の抗原プラスＩｇＥの存在のもとで、肥満細胞分解をおこす。図１Ｆに示すように、肥満細胞をエコナゾールの存在下でサブスタンスＰで刺激したときにも細胞死は起きる。ＳＬＦの場合のように、Ｃａ²⁺流入ブロッカーの存在下における細胞死の程度はＡｇまたはサブスタンスＰの濃度増加と共に増加する。これらの３シグナル（ＩＬ−３ではない）はすべてＣａ²⁺を動員してＣａ²⁺ 流入をおこすから、Ｃａ²⁺流入ブロッカーと併用して細胞死を誘導するためにはＣａ²⁺動員が必要なシグナルであるらしい。肥満細胞以外の細胞における活性化シグナルおよびＣａ²⁺流入ブロッカーの組み合わせによる細胞死の誘導も試験した。３２Ｄ細胞はｃ−ｋｉｔ陰性、ＩＬ− ３依存性骨髄単球であり、因子を除去すると自滅的に(apoptotically)死ぬ（バフィー(Baffy)ら、１９９３）。これらの細胞にｃ−ｋｉｔを転移および発現させると、それらはin vitroでＳＬＦに反応するようになり、in vivoではそれらを腫瘍原性にする（フ(Hu)ら、１９９５）。図２Ａに示すように、ｃ−ｋｉｔの発現はこれらの細胞をＳＬＦおよびＣａ²⁺流入ブロッカーによる細胞死の誘導に対して敏感にする。増殖因子受容体の構造的活性化またはオートクリン刺激によりトランスフォームされる因子非依存性腫瘍が多数報告されている。因子非依存性腫瘍の一例は肥満細胞腫ｐ８１５である、それは付加因子が存在しなくても、突然変異した、構造的活性化ｃ−ｋｉｔ受容体の存在により増殖する（ツジムラら、１９９４）。図２Ｂに示すように、Ｃａ²⁺流入ブロッカーのみで、付加ＳＬＦ刺激がなくてもｐ８１５細胞に細胞死を十分引き起こす。これは多分、ｐ８１５ｃ−ｋｉｔ受容体によるシグナル化のリガンド非依存性を反映し、したがってそれがＣａ²⁺流入ブロッカーと一緒になって細胞死を誘導することができることを反映する。これらの結果は、ＳＬＦおよびＣａ²⁺流入ブロッカーによる細胞死の誘導が肥満細胞に限られず、その他の細胞型にも、特に高度に活性化された受容体を有するそれらにも認め得ることを示す。実験２：ＢＭＭＣおよび３２Ｄ−ｋｉｔ誘導性死はアポプトーシスである。ＳＬＦおよびＣａ²⁺流入ブロッカーで処理した後の肥満細胞および３２Ｄ−ｋｉｔ細胞の目による検査は、核濃縮および膜ブレブを含めるアポプトーシスの特徴を明らかにした（図３Ｃ）。アポプトーシス中に特徴的に断片化し、減少するＤＮＡ含量も測定された。図４Ａおよび図４Ｂに示し、表１にまとめるように、３２Ｄ−ｋｉｔ細胞をＳＬＦまたはＩＬ−３単独で１８時間処理したところ、su bdiploid（２倍体以下の）ＤＮＡ量を有する細胞集団は生成しなかったが、エコナゾールプラスＳＬＦ（ＩＬ−３では生成せず）はsubdiploid ＤＮＡを有する細胞の大集団を生成した（図４Ｃおよび４Ｄ）。３２Ｄ−ｋｉｔ細胞は、増殖因子が欠如するとアポプトーシスを受けることが知られている。増殖因子除去１８時間後に３２Ｄ−ｋｉｔ細胞はsub-diploid ＤＮＡを含む細胞を適度な比率で示した。この集団は因子除去の２４時間後に実質上増加する（データは示されず）。こうしてＣａ²⁺流入ブロッカープラスＳＬＦによって誘導されるアポプトーシスプロセスは因子除去によって認められるアポプトーシスより速い。肥満細胞もＳＬＦプラスＣａ²⁺流入ブロッカーで処理した後sub-diploid ＤＮＡ含量を示す（表１）；これはアポプトーシスメカニズムによる細胞死の誘導と一致する。（１）ＢＭＭＣを８μＭエコナゾールプラスＩＬ−３（２５％ＷＥＨＩでコンディショニングした培地）、ＳＬＦ（５００ｎｇ／ｍ）と共に、または因子なしで２４時間インキュベートし、ヨウ化プロピジウムで染色し、ＤＮＡ含量を分析した。（２）３２Ｄ-ｋｉｔ細胞を分析前に１８時間同様にインキュベーとした。ｎ．ｄ．：確認されず実験３：細胞をオレイン酸により、ＳＬＦ−Ｃａ²⁺流入ブロッカー誘起性アポプトーシスから防御Ｃａ²⁺動員シグナルはＣａ²⁺流入ブロッカーと一緒になってアポプトーシスを誘導するという観察は、この効果がホスホリパーゼＣの活性化によって仲介されることを示唆する。ＰＬＣ活性化が細胞死にとって重要であるかどうかを確認するために、上皮成長因子（ＥＧＦ）刺激に反応してＰＬＣ活性化を阻止することがわかっている（カサビエル(Casabiell)ら、１９９３）オレイン酸のアポプトーシス誘発に与える効果を調べた。ＥＧＦ結合またはＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ活性化は変化させないこの阻止効果は、ｃｉｓ−９−オクタデセン酸（オレイン酸）でのみ認められ、ｔｒａｎｓ−９−オクタデセン酸（エライジン酸）では認められない（カサビエルら、１９９１）。３２Ｄ−ｋｉｔ細胞をオレイン酸またはエライジン酸の存在下でエコナゾールおよびＳＬＦまたはＩＬ−３と共にインキュベートした。図５に示すように、ＳＬＦおよびＣａ²⁺チャンネルブロッカーで処理した３２Ｄ−ｋｉｔ細胞はオレイン酸によって細胞死から救助されたが、エライジン酸によっては救助されなかった。オレイン酸の有効範囲は１−１００μＭであり、これはＰＬＣ阻止に必要な濃度に一致する（カサビエル、ツガザ(Zugaza)、１９９３）。この考察はＣａ²⁺流入ブロッカーと組み合わせてアポプトーシスを誘導する際にホスホリパーゼＣの活性化が必要であることと矛盾しない。実験４：細胞をイオノマイシンにより、ＳＬＦ−Ｃａ²⁺流入ブロッカー誘起性アポプトーシスから防御。受容体活性化後のＣａ²⁺流入は貯蔵作動性Ｃａ²⁺チャンネル（Ｉｃｒａｃとも呼ばれる）の開口によって仲介される（ペナー(Penner)ら、１９９３）。Ｉｃｒａｃチャンネルは阻止のための標的であるらしい、なぜならば３化合物、ケトチフェン、エコナゾールおよびＮｉ²⁺、がＳＬＦと共力して細胞死を誘起する効率は、それらのＩｃｒａｃ阻止能力と相関しているからである（フランチウス(Fra nzius)ら、１９９４）。Voltage gated Ｃａ²⁺チャンネルブロッカーであるベラパミルおよびニフェジピンが、ＳＬＦと組み合わせ使用したとき、細胞死の誘導に無効であることも観察されている。この結果はＳＬＦとの共力による細胞死の誘導はnon-voltage gated Ｃａ²⁺流入ブロッカーに特異的であることを示唆する。その他の非特異的効果がエコナゾールおよびケトチフェン両方に報告されている（フランチウス、ホス(Hoth)、１９９４）。Ｃａ²⁺流入のブロックが細胞死の誘導に重要であるかどうかを確認するために、カルシウムイオノフォアイオノマイシンのアポプトーシス誘導に対する効果を調べた。図６Ａに示すように、イオノマイシンは、３２Ｄ−ｋｉｔ細胞をＳＬＦプラスＣａ²⁺流入ブロッカー誘導性死から濃度依存的に保護し、１０ｎＭで最大保護を示した。イオノマイシンがＣａ²⁺に特異性を有するとして（リウ（Liu）ら、１９７８）、これらの結果は、活性化シグナルと共力してアポプトーシスを誘導するために必要なのはＣａ²⁺ 流入の特異的ブロックであることを示唆する。細胞内Ｃａ²⁺の過剰濃度を作り出すより高濃度のイオノマイシンは細胞死を再び起こした。これは、細胞活性化の範囲では、Ｃａ²⁺流入の両極端が細胞死を誘導し得ることを示すものである。実験５：３２Ｄ−ｋｉｔ細胞においてＳＬＦおよびプラスＣａ²⁺流入ブロッカーによって誘起されるアポプトーシスに対するＢｃ１−２の影響。蛋白質のＢｃ１−２ファミリーは、種々の作用物質によって誘導されるアポプトーシスからの細胞保護と強く関連づけられている。Ｂｃ１−２の発現は増殖しつつある細胞と関連づけられ（ホッケンベリー(Hockenbery)ら、１９９１；ヴェイス(Veis)ら、１９９３）、腫瘍サプレッサーｐ５３によって負の調節を受け（ミヤシタら、１９９４）、Ｂｃ１−２の過剰発現は３２Ｄ−ｋｉｔ細胞を因子除去後のアポプトーシス死から守る（ヌネツ(Nunez)ら、１９９０；バフィー、ミヤシタら、１９９３）。そこでＢｃ１−２蛋白質の過剰発現がＳＬＦおよびＣａ²⁺ 流入物質によるアポプトーシス誘発に与える効果を調べた。３２Ｄ−ｋｉｔ細胞に、Ｂｃ１−２遺伝子を含むレトロウィルスベクター（シュワルツ、１９９５）を感染させ、Ｂｃ１−２過剰発現細胞系を生成した（図７）。それら細胞のアポプトーシス感受性を調べ、Ｂｃ１−２過剰発現が３２Ｄ−ｋｉｔ細胞を因子除去により誘発するアポプトーシスから守ることが見いだされた（図７Ｂ）。しかし、図７Ｂに示すように、３２Ｄ−ｋｉｔ細胞におけるＢｃ１−２の過剰発現はこれらの細胞をＳＬＦとエコナゾールによるアポプトーシス誘発から保護することはできない。これらの考察は、ＳＬＦプラスブロッカーによる細胞死の誘発はＢｃ１−２非依存性様式で起きるとの結論に導いた。３２Ｄｋｉｔ−Ｂｃ１−２細胞は低濃度イオノマイシンによって、ＳＬＦプラスブロッカーによるアポプトーシスから同様に保護されたが（図６Ｂ）、３２Ｄｋｉｔ細胞とは異なり、それらはより高濃度イオノマイシンで顕著な細胞死を示さなかった。そこでこれらの結果は、活性化された細胞では、Ｃａ²⁺ブロックによって誘起する死と、過剰レベルＣａ²⁺流入により誘起する死とは、少なくともＢｃ１−２感受性レベルにおいて、異なることを示す。実験６：ＩＣＥプロテアーゼインヒビターの、Ｃａ²⁺流入ブロッカーおよびＳＬＦ誘導性細胞死および因子除去により誘導される細胞死に与える影響。ＴＮＦ−αおよびＦａｓは、Ｂｃ１−２過剰発現が防御することができないアポプトーシス誘起性シグナルの２つの例である（メモン(Memon)ら、１９９５；ストラッサー(Strasser)）ら、１９９５）。これらの場合に、アポプトーシスはプロテアーゼのインターロイキン−１β変換酵素ファミリーの膜によって仲介されることがわかっている。ＩＣＥファミリーのプロテアーゼがＳＬＦとＣａ²⁺流入ブロッカーとによるアポプトーシス誘導に関係しているかどうかを確認するために、細胞をテトラペプチド−アルデヒドＩＣＥインヒビターＹＶＡＤ−ＣＨＯ（マシマら、１９９５；ヴァシラコス(Vasilakos)ら、１９９５）と共にインキュベーとした。我々は、ＹＶＡＤ−ＣＨＯが３２Ｄ−ｋｉｔ細胞をトポイソメラーゼインヒビターエトポシドによって誘起されるアポプトーシスから守ることを見いだした（示されず）。ＹＶＡＤ−ＣＨＯがＳＬＦプラスエコナゾールによって誘起するアポプトーシスに対する耐性をもたらすが（図８）、因子除去によって誘起するアポプトーシスからは３２Ｄ−ｋｉｔ細胞を保護できない（図７Ｂ）ことも見いだした。したがって、増殖または活性化シグナルとＣａ²⁺流入ブロッカーとの組み合わせによって起きるアポプトーシスはＩＣＥ様プロテアーゼによって仲介されるらしい。実験７：ヒト癌細胞に与えるＣａ²⁺ブロッカーおよびＥＧＦの影響諸研究は、増殖因子受容体が乳癌に関係することを証明した。例えば、乳癌の４５％以上がＥＧＦ^R陽性であることが見いだされた（フォックス(Fox)ら、１９９４；フランチウス(Franzius)ら、１９９４）。ＥＧ^Rに密接に関係する増殖因子受容体であるｅｂＢ２は全乳癌の３０−４０％に過剰発現する（スラモン(Sla mon)ら、１９８９）。細胞死をこれらの細胞にＣａ²⁺流入ブロッカーと活性化シグナルとで誘導できるかどうかを確認するために、ＳＫ−ＢＲ３細胞をエコナゾール存在下で、ＥＧＦと共にまたはＥＧＦ欠如下でインキュベートした。ＳＫ− ＢＲ３細胞（ＡＴＣＣ cat．＃ＨＴＢ−３０）をヒト乳癌（腺癌）から引き出す。それらはヌードマウスに腫瘍を発生する。これらの細胞は突然変異ｐ５３遺伝子を含み（エルストナー(Elstner)ら、１９９５）、エストロジェン受容体陰性で、多量のｅｂＢ２分子を発現し（リー（Li）ら、１９９３）その結果この受容体を連続的に活性化する。図９に示されるように、エコナゾールはＥＧＦ存在下でも欠如下でもＳＫ−ＢＲ３細胞に等しい水準の死を引き起こす。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞系は非常にに退形成性(anaplastic)の乳癌である。それもヌードマウスに腫瘍を発生させるが、極く低レベルのｅｂＢ２を発現するに過ぎない。しかしそれはＦＧＦ^R陽性で、ＦＧＦによってオートクリン形式で刺激される（ヤチジ(el Yazidi)ら、１９９５）。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞のＣａ²⁺流入ブロッカーに対する感受性、およびブロッカーによる細胞死の誘導に与えるオレイン酸、イオノマイシン、およびＹＶＡＤ−ＣＨＯの影響を調べるために実験が行われた。その結果をまとめて図９Ｂに示す。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞はＣａ²⁺流入ブロッカーエコナゾール被曝に反応してアアポプトーシスを受けることがわかる。さらに、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１のＣａ²⁺流入ブロッカー誘起性アアポプトーシスのメカニズムは、３２Ｄ−ｋｉｔ細胞のそれと同じ特徴を有するようにみえる。イオノマイシン、オレイン酸およびＹＶＡＤ−ＣＨＯはＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をＣａ²⁺流入ブロッカーにより誘導される死から防御することができる。ＭＣＦ−７細胞（ATCC cat．＃ＨＴＢ−２２）はヒト乳癌から誘導される。それらはヌードマウスにおいて腫瘍原性であり、マウスをエストロジェンで処理したとき（ベンツ(Benz)）ら、１９９３）またはそれら細胞をマトリゲルに封入した場合に（ノエル(Noel)ら、１９９５）特にそうである。これらの細胞はＥＧＦによって刺激されると報告されている（ゴドン(Godden)ら、１９９２）。これらの細胞のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび活性化シグナルによる細胞死に対する感受性を調べるために、ＭＣＦ−７細胞を種々濃度のエコナゾールの存在下で１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦと共に、またはＥＧＦ欠如下で１８時間インキュベーションした。図１０からわかるように、ＭＣＦ−７は１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦの存在下において、その欠如下と比較してエコナゾールによる細胞死により大きい感受性を示す。図９Ａ、図９Ｂおよび図１０に示す実験をまとめて考察すると、若干の乳癌細胞はＥＧＦなどのような活性化因子の存在下において高められたブロッカー感受性を示す。実験８：Ｃａ²⁺流入ブロッカーとＳＬＦとがin vivoで３２Ｄ−ｋｉｔ白血病細胞に与える影響。Ｃａ²⁺流入ブロッカーと活性化シグナルとのin vivo組み合わせの効率を調べるために、因子依存性、Ｇ４１８−抵抗性３２Ｄ−ｋｉｔ白血病細胞を接種したマウスにケトチフェンとＳＬＦとの組み合わせを投与した。１組の実験では脾細胞を取り、白血病細胞の存在を次のようにして調べた：２０％ＷＥＨＩ−３条件づけ培地と１ｍｇ／ｍｌＧ４１８を含む寒天増殖培地に細胞を接種し、Ｇ４１８耐性白血病細胞だけが検出されるようにした。他の組の実験では、脾臓において、ＩＬ−３に反応する、寒天中でコロニーを形成し得る全細胞、白血病細胞も正常細胞も含める全細胞の存在を測定試験した。図１１Ａに示されるように、各実験において、Ｇ４１８耐性コロニー形成細胞を接種動物に検出することができる。接種動物の脾臓に見いだされるレベルは動物間で変動するが、大部分の動物は３０ないし１，０００のＧ４１８耐性コロニーを含む。接種し、治療しない動物のコロニー数の算術平均値は６９９３８であるが、１匹の動物は非常に高水準の白血病細胞を含んでいた。もしこの動物が含まれなければ、算術平均値は３９１である。この群の幾何学的平均は８１３コロニー／脾臓である。ＳＬＦのみを注射した動物で検出されたＧ４１８−耐性コロニーの数はその因子を投与しなかった動物に比較して高い傾向があった；すなわち６５および３１，０００の間に変動し、算術平均値は７，３９９で、幾何学的平均は１５４５コロニー／脾臓であった。この検出可能コロニー数の増加はＳＬＦによる白血病細胞の刺激に帰せられるかも知れない。ケトチフェンのみを投与したマウスでは、検出可能コロニー数は１１４から２７，６４５までの間に変動し、算術平均は５，５０２で幾何学平均は８４９である。ケトチフェンとＳＬＦを投与した動物では、検出可能コロニー数は８から５３７までの間に変動し、算術平均値は１３１、幾何学平均は６１Ｇ４１８耐性コロニー／脾臓である。このデータを片側対スチュデントｔ検定（対数変換後）を用いて分析すると、非投与および投与群が互いに異ならない確率は６．２％に過ぎない。もしも非常に高レベルの白血病細胞を含む非投与群中１匹の動物がこの分析に含まれなければ、非投与群と投与群とが互いに異ならない確率は８．９％である。ケトチフェンのみを投与した動物群と、ケトチフェンプラスＳＬＦを投与した群とを同様にして比較すると、これらの群が異ならない確率は０．８％となり、非常に有意である。この結果はケトチフェンのみではin vivo白血病細胞にほとんど活性をもたないが、ケトチフェンとＳＬＦとの組み合わせは白血病細胞数を有意に減少させることを示す。（１）図１１Ａからのデータの対数を片側スチュデントｔ検定を用いて互いに比較した。比較２群が互いに異ならない％確率が示される。カッコ内の数字は非投与群の非常に高レベルの白血病細胞をもつ１匹の動物を分析に含めない場合の同上の確率である。これらのマウスの脾臓のコロニー形成細胞の総数について同様な分析を行い、そのデータを図１１Ｂに示す。白血病細胞を接種したマウスの算術平均コロニー数は８５７であり、幾何学平均は６６９である。接種したが非投与の動物の算術平均コロニー数は８４，０７３であるが、非常に高レベルの白血病細胞を含む１匹の動物が含まれていた。この動物を含めないと、算術平均コロニー数は３，４４８である。この群の幾何学平均は４，５７３コロニー／脾臓である。ＳＬＦのみを注射した動物で検出されたＩＬ−３依存性コロニー数はこの因子を投与しなかった動物のそれらより高い傾向があり、算術平均は１８，２１２で、幾何学平均は５，１７１コロニー／脾臓である。この検出可能コロニー数の増加はＳＬＦによる白血病細胞の刺激に帰せられるかも知れない。ケトチフェンのみを投与したマウスでは、算術平均は７，７１５で幾何学平均は２３２０、ケトチフェンとＳＬＦで治療された動物では、算術平均は７９３で、幾何学平均は６６ＩＬ− ３依存性コロニー／脾臓であった。これらのデータを片側対スチュデントｔ検定（対数変換後）を用いて分析すると、非投与群と投与群とが互いに異ならない確率は２％であることが示される。もしも非常に高レベルの白血病細胞を含む１匹の動物をこの分析に含めないと、非投与群と投与群とが互いに異ならない確率は５．１％である。同様に、ＳＬＦのみを投与した群またはケトチフェンのみを投与した群を、ケトチフェンプラスＳＬＦを投与した群と比較した場合、これらの群が異ならない確率は２％または１．６％である。（１）図１１Ａからのデータの対数を片側スチュデントｔ検定を用いて互いに比較した。比較２群が互いに異ならない％確率が示される。カッコ内の数字は非投与群の非常に高レベルの白血病細胞をもつ１匹の動物を分析に含めない場合の同上の確率である。３２Ｄ−ｋｉｔ細胞を接種したマウスにケトチフェンを経口投与し、ＳＬＦを皮下投与する別の実験を行った。図１２に示すように、このやり方ではＳＬＦとケトチフェンとの組み合わせは投与マウスの脾臓の白血病細胞数に有意な影響を与えるようにはみえなかった。この実験は、活性化因子のデリバリー経路および多分、２物質の相対的投与タイミングが、特殊の治療法の効果に影響するらしいことを示している。上記実験の結果は、アポプトーシスを誘発する新規の方法を説明する。この方法は細胞（その受容体は正常な状態で活性化されたときにＣａ²⁺流入をおこす）内へのＣａ²⁺流入の遮断と、その受容体を活性化する因子との組み合わせを含める。特別な実施態様において、ホスホリパーゼＣの活性化はＣａ²⁺流入と関係している。例えば、ＳＬＦ、サブスタンスＰ、およびＩｇＥおよび抗原は(non-voltage-g ated)Ｃａ²⁺流入ブロッカーと一緒になって肥満細胞のアポプトーシスを誘起することができる（ただしＩＬ−３はこれをすることはできない）。この形のアポプトーシスは必ずしも増殖シグナルを必要としない、というのはＳＬＦもＩＬ− ３も増殖性であり、一方サブスタンスＰおよび抗原−ＩｇＥはごく弱い増殖性を有するからである。増加するシグナルはアポプトーシス増加に導くから、この形の細胞死は、Ｃａ²⁺流入ブロッカーが高度に活性化された受容体と組み合ったときに最も有効である。この考察を支持するものとして、構造的に活性化されたｃ −ｋｉｔ受容体を有するｐ８１５肥満細胞腫はＣａ²⁺流入ブロッカーのみに対して感受性である（図２Ｂ）。ＳＫ−ＢＲ３およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞もＣａ²⁺流入ブロッカーのみに対して感受性である。これも、同様な突然変異を有する（またはオートクリン刺激を受けている）細胞はこの群の薬によるアポプトーシスを受け易いことを示唆する。オレイン酸がＳＬＦプラスブロッカーによるアポプトーシスを逆転することができるという考察は、少なくとも若干の実施態様ではホスホリパーゼＣの活性化をおこす活性化シグナルが必要であることを示す。イオノマイシンもＳＬＦプラスブロッカー誘起性細胞死から細胞を守ることができる；これはＣａ²⁺流入の特異的遮断がアポプトーシス誘発に必要であることを示すものである。ＳＬＦプラスブロッカーにより誘発するアポプトーシスはＢｃ１−２の過剰発現には非感受性であるが、ＩＣＥプロテアーゼインヒビターによって逆転させることができる。これは少なくとも若干の実施態様において、このアポプトーシスメカニズムにはＩＣＥ、またはＩＣＥファミリーのプロテアーゼのメンバーが役割を有することを示唆する。ある種の増殖細胞は高度に活性化された受容体を有し（図９Ａ）、ＰＬＣの活性化をおこすから、本発明はこのような細胞のＣａ²⁺流入ブロッカー治療、またはブロッカーと、細胞受容体をさらに活性化する因子との組み合わせ治療に対する感受性を診断する方法を含める。このような方法は：疾患組織サンプルを採取し；その組織が正常組織に比較して高められたレベルのＰＬＣを含むかどうかを決定し；もしもその組織が高められたレベルのＰＬＣを含むならば、そのＰＬＣが活性化されているかどうかを調べる段階を含む。もしもこのような高められたレベルの活性化ＰＬＣが組織に見いだされるならば、その細胞は治療できそうである、すなわちそれらの細胞をＣａ²⁺流入ブロッカー、またはＣａ²⁺流入ブロッカーと、活性化ＰＬＣのレベル上昇に導くシグナルを産生する受容体をさらに活性化する因子との組み合わせにさらすことによって、それら細胞は死に、増殖は減少する。抗ＰＬＣ特異的抗血清を用いて、乳癌が正常対照に比較して高レベルの酵素を有することが示された。抗ホスホチロシン抗体による免疫沈殿とその後の抗ＰＬＣ抗体によるウエスターンブロッティングを用いて活性化ＰＬＣレベルを測定することができる、なぜならばチロシン燐酸化されたＰＬＣは活性化されているらしいからである（アルテガ(Arteaga)ら、１９９１）。ＰＬＣ酵素活性は直接測定できる（フアング(Huang)ら、１９９５）。つまり、測定すべき細胞を溶解し(lyse)、ＰＬＣ特異的抗血清（例えばアップステートバイオテクノロジー社(Upstate Biotechnology Inc.) Lake Placid、ＮＹ、から市販される）を用いてＰＬＣを免疫沈殿し、その酵素の力価を、リポソーム中基質（９０％ＤＭＰＭ、１０％ＰＩＰ₂）として[³Ｈ]−ＰＩＰ₂（ニューイングランドニュークリア(New England Nuclear)、ボストン、マサチュセッツから入手）を用いて、５０ｍＭトリス（ｐＨ８）、０．１ｍＭＣａＣｌ₂中０．３ｍＭ総脂質を含む緩衝液中で測定した。反応を１ＭＨＣｌ中０．２ＭＣａＣｌ₂ の添加によって停止した。沈殿した小胞をフィルタープレート（ミリポア９６ウェル疎水性マルチスクリーンＤＰプレートなど）上に集め、フロースルー中に存在するイノシトール燐酸反応産物をシンチレーションカウンティングによって定量する。イオノマイシンが細胞死を防御もし、または誘起することもできるという観察は、Ｃａ²⁺流入の両極端がアポプトーシスに導くことを示している。しかしどちらの場合も細胞の活性化は必要であるようにみえる、なぜならばＳＬＦの欠如下では最小の細胞死が認められたに過ぎないからである。Ｂｃ１−２過剰発現は、細胞を高濃度イオノマイシンによって誘起される死からのみ守り、細胞死の基礎にあるメカニズムはＣａ²⁺流入の２極端では同じでなく、少なくともＢｃ１−２感受性レベルが異なることを示唆する。例えば高濃度のイオノマイシンでは、細胞は或る型の“Ｃａ²⁺過負荷”にさらされ、この型の毒性にさらされた或る種の細胞はＢｃ１−２によって保護されることが知られている（シュトラッセルら、１９９１；リード(Reed)、１９９４）。高Ｃａ²⁺死の可能な仲介物質はＣａ²⁺依存性ホスファターゼ、カルシニューリン、であるかも知れない；この物質はＴ細胞（シバサキら、１９９５）およびＢ細胞（ボネフォイ(Bonnefoy)ら、１９９４）のアポプトーシスを強化することが示されている。ここに記載した結果（図７Ｂおよび図８）は、Ｂｃ１−２およびＩＣＥが異なるアポプトーシスメカニズムの調節に関係することを示している。細胞は、因子除去に起因するアポプトーシスからＢｃ１−２によって保護される（だがＩＣＥインヒビターによっては保護されない）一方、ＩＣＥインヒビターはＣａ²⁺流入ブロッカーとＳＬＦとの組み合わせに対して防御する（Ｂｃ１−２は防御しない）。その他のアポプトーシス誘起性シグナルに関する実験もこれらの観察と一致する。（クエンド(Cuende)ら、１９９３；メモンら、１９９５；シュトラッセルら、１９９５；ヴァシラコス（Vasilakos）ら、１９９５；パリジュ(Parijs)ら、１９９６）。Ｆａｓ活性化が、内部貯蔵所からのＣａ²⁺放出には影響を与えることなく、Ｔ細胞の抗−ＣＤ３−依存性Ｃａ²⁺流入を阻止することも最近証明された（コヴァクス(Kovacs)）ら、１９９５）。ケトチフェンは、ヒスタミンＨ１受容体拮抗性およびＣａ²⁺流入阻止を両方共あらわす公知の抗アレルギーおよび抗喘息薬である（マーチン（Martin）ら、１９７８；グラント(Grant)ら、１９９０）。肥満細胞の破壊にＣａ²⁺流入が関係しているとするならば、このプロセスの阻害は、その抗炎症効果の容認されるメカニズムの一つである。こうしてここに記載の結果は、Ｃａ²⁺流入ブロッカー、特にケトチフェン、を適切な活性化シグナルと共に投与して、アレルギー症状を治療することができることを示唆する。Ｃａ²⁺流入ブロッカーは抗増殖薬として提案されている（リッカルディ(Riccardi)、１９８７；フェルダー(Felder)ら、１９９１；コーン(Kohn)ら、１９９２；エスタシオン(Estacion)ら、１９９３；ペトラッシュ(Petrasch)ら、１９９３；コンドーら、１９９４；バックレー(Buc kley)ら、１９９５；デヴリス(De Vries)ら、１９９５）。ここに記載の結果から、これらの化合物は、強力な増殖−または活性化シグナルと一緒になったときに、より効果的であることが示唆される。そこで、Ｃａ²⁺流入ブロッカーと増殖 −または活性化シグナルとの組み合わせは、強力だが特異的な抗増殖−または抗炎症性特性を有するらしい。発明者は、細胞内へのＣａ²⁺流入が起きる正確なメカニズムを説明するいかなる理論によっても束縛されたくない。しかし、ここに示す結果は、Ｃａ²⁺流入ブロッカーと、細胞の受容体に結合して正常条件下でその受容体を活性化してＣａ²⁺ 流入を誘起する因子との組み合わせのその細胞への投与と、その細胞死の誘発との関連性を確立するものである。このような因子はその受容体の天然リガンド、すなわち本来その受容体に作用するリガンド、アゴニスティック抗体などである。少なくとも若干の場合には、流入はＰＬＣの活性化に関係する。多くの場合には、活性化は細胞の刺激を含み、“刺激”とは増殖、活性化および／または細胞生存を含める。図９Ａに示す結果は、構造的に活性化された細胞の場合−そこではその受容体はリガンドで、その後Ｃａ²⁺流入によって活性化されるのが正常である−Ｃａ²⁺流入ブロッカーの投与のみで細胞死を誘起することができる。こうして、ここに開示される本発明は、Ｃａ²⁺流入ブロッカーを投与して、構造的に活性化された受容体（その受容体の活性化はＣａ²⁺の細胞内流入を促進する）を有する細胞の死を誘起することも含める。細胞そのものによって産生される因子に反応して活性化される受容体を有する細胞でも、Ｃａ²⁺ブロッカーで処理して細胞死を引き起こすことが可能である。特定の公知の因子、例えばＳＬＦに関して言えば、ＳＬＦの変形物、ｃ−ｋｉｔ受容体リガンドも細胞死を引き起こすのに有効である。例えば、ｃ−ｋｉｔ受容体に対するアゴニスティック抗体類は熟練せる当業者に公知の方法によって作り出すことができる。その他の、受容体を架橋してＣａ²⁺流入を誘導することができる小分子も有効であるかも知れない。ＳＬＦそのものを突然変異によって改質し、分子を安定させ、それによって哺乳動物体内におけるその半減期を延ばすことができるかも知れない。或いは、または付加的に、ＳＬＦをポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と結合させて改質し、その使用寿命を延ばすことができる。肥満細胞の場合、ＩｇＥとその抗原の代わりに、例えば細胞ＩｇＥ受容体そのものに対する抗体を用いることができる。ＩｇＥ受容体を架橋できる抗体は十中八、九、Ｃａ²⁺流入を生起するらしい。アレルギーにかかっている人の場合、ＩｇＥクラスのアレルゲンに特異的な免疫グロブリンが、アレルゲン特異的Ｔ細胞によって刺激されてこの特定のアイソタイプを産生するＢ細胞によって生成する。ＩｇＥ抗体はＢ細胞から細胞外腔に分泌され、そこでそれらは肥満細胞または好塩基球の表面に見いだされるＦｃＲＩと呼ばれる特異的受容体に結合できる。これらの肥満細胞または好塩基球が、それらの表面に結合したＩｇＥによって識別される多価アレルゲンに遭遇すると、そのＩｇＥ／受容体は架橋され、活性化されて、あらかじめ形成された仲介物質の１種類以上、例えばヒスタミンなど、の放出をおこし、場合によってはその他の炎症性分子、例えばロイコトリエン類、ポストグランジン類およびサイトカイン類の合成および放出をおこす。したがってこの複雑な反応は多数の異なる細胞型および分子に関係し、それらのすべてがアレルギー反応の調節において標的となり得る。これはアレルゲン特異的ＩｇＥを産生するＢ細胞、そのアレルゲンに特異的なＴ細胞受容体を発現するＴ細胞、およびアレルゲン特異的ＩｇＥをその表面に有する肥満細胞および好塩基球を含める。これらの受容体によって伝達されるシグナルはすべてＣａ²⁺を動員するから、それらは、肥満細胞でＩｇＥプラス抗原で示されたように、Ｃａ²⁺流入ブロッカーと一緒になって細胞死を誘起することができる。膜ＩｇＥを発現するＢ細胞では、特異的抗ＩｇＥ化合物がこれらの分子を架橋し、シグナル伝達をおこす。このような化合物は、例えばチャング(Chang)の米国特許第５，４２２，２５８号および第５，４２８，１３３号またはルップ(Rupp)らの米国特許第４，９４０，７８２号に記載されているような抗体でもよい。その他に、これらの抗体の断片、例えば（Ｆａｂ）₂試薬またはＢ細胞の表面ＩｇＥを識別し、架橋するその他の化合物を用いてもよい。Ｂ細胞が特異的標的化される場合、肥満細胞または好塩基球に結合しているＩｇＥではなく、Ｂ細胞表面のＩｇＥを優先的に識別する試薬を用いるのが望ましい。特定の抗原を識別する抗体を産生するＢ細胞を特異的に排除したい場合、その抗原そのものが−もしも多価であり、十分量が与えられるならば−Ｃａ²⁺流入ブロッカーと一緒になって、その抗体を産生するＢ細胞を殺すのに十分なシグナルを提供する。或いは、Ｂ細胞によって産生された抗体の可変領域を識別する抗イディオタイプ抗体も用いることができる。このような治療の考えられる標的は自己抗原に対する抗体を産生し、自己免疫病をおこすＢ細胞を含める。もちろん、受容体担持細胞内へのＣａ²⁺流入をおこすその他の細胞受容体リガンド結合がある。本発明の範囲内の増殖因子受容体アゴニストは、ＴＧＦ−α（トランスフォーミング成長因子）、ＥＧＦ、ヘレグリン、およびその他のｅｒｂＢ１、２、３＆４のアゴニスト、ＰＤＧＦＡおよびＢ（血小板由来増殖因子）、ＳＬＦ、ＦＬＴ−３（ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−３）リガンド、塩基性および酸性ＦＧＦｓ（線維芽細胞増殖因子）（関連増殖因子ファミリー）、エノテリン、ＮＧＦ（神経成長栄養因子）、ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）、ＨＧＦ（ＳＦ）（肝増殖因子；散乱因子）を含める。多重鎖免疫認識受容体に対するアゴニストは、Ｂ細胞上抗原受容体に対するアゴニスト（すなわちＢ細胞によって認識される特異抗原）、例えば表面免疫グロブリンを架橋する抗体など、Ｔ細胞受容体アゴニスト、例えば特定ＴＧＲｓを識別する抗体、抗ＣＤ３抗体またはその他のアゴニスティック凝集抗体、およびＦｃｙＲＩＩおよびＦｃｙＲＩＩＩを活性化するその他の試薬類など、そして肥満細胞および好塩基球上のＦｃＲＩ受容体に対するアゴニストを含める。Ｇ蛋白−結合受容体のアゴニストも本発明の技術の範囲内である：ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコルおよびその他のムスカリン受容体アゴニスト、ＣＣＫ −９、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、ＡＴＰおよびアデノシンを含むプリン作動性受容体アゴニスト、１、２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ 。Ｃａ²⁺流入を刺激する多くの神経伝達物質もある。細胞死はこのような細胞にＣａ²⁺流入ブロッカーおよびリガンドの投与の結果として起きることを、ここに開示されているものに類似の実験を用いて証明することができる。このようなリガンド類およびアゴニスティック受容体抗体類の変形物も開発使用することができ、このような変形物とＣａ²⁺流入ブロッカーとの組み合わせ投与に反応した細胞死を測定する上記の実験に類似の実験を用いて試験することができる。カルシウム流入ブロッカーは、好適実施態様に関連して記載したものの他にはテニダップ、ＣＡＩ、Ｃｄ²⁺、Ｃｏ²⁺、Ｌａ³⁺、Ｍｎ²⁺、ＳＫＦ−９６３６５およびクロモリンがある、ただし熟練せる当業者に公知のこれら以外にも多くのものがある（リュイスら、１９９５）。特殊の場合に、１種類以上のＣａ²⁺流入ブロッカーと受容体結合作用物質との組み合わせ投与は所望細胞反応を引き出すのに最も有効であることがわかる。本明細書に開示された実験によって示されるように、細胞死が受容体リガンド（またはその他のアゴニスティック作用物質）とＣａ²⁺流入ブロッカーとの投与によって誘起され得るかどうかを決定するために重要なのは、その受容体、および適切な受容体結合で発生するシグナルに対する細胞の正常反応である。それでもなお、ここに開示された実験に用いられるもの以外の細胞型が、少なくともそれらの寿命サイクル中の或る時点−−ここに開示する発明の使用のために必要な正常細胞反応をもたらす時点−−ではこのような受容体を発現させることは公知である。ｃ−ｋｉｔ受容体を発現し、ＳＬＦに反応するその他の細胞型の例は、造血前駆細胞、メラニン形成細胞および生殖細胞である。その他のリガンドに結合する受容体を発現する受容体であって、その結合が正常では必須の反応をおこすという受容体を発現し得る細胞型の例としては、ＥＧＦおよびＦＧＦ受容体を発現する乳癌細胞およびＰＤＧＦ受容体を発現する結腸癌細胞がある。腫瘍原性、過形成性または高度に活性な状態をあらわすこのような細胞を本発明により適切な結合因子とＣａ²⁺流入ブロッカーとの投与によって治療することができる。こうして本発明による治療を施し、例えば癌、肥満細胞腫、自己免疫炎症性疾患またはアレルギーにかかっている人を治療することができる。ｃ−ｋｉｔ受容体は白血病細胞に過剰発現し(ムロイ(Muroi)ら、１９９５)、小細胞肺癌（ヒダら、１９９４）、女性性器腫瘍（イノウエら、１９９４）のかなり高い割合に見いだされることがわかった、そして神経芽細胞腫の肥満細胞侵潤に関係しているらしい（ヒロタら、１９９３）。そのためこのような部位は本発明による治療の主要候補である。本発明の標的となる細胞が構造的に活性化されている場合は（図９Ａ）、受容体結合によって発生するシグナルを刺激する作用物質を含める必要がないかも知れない、というのはシグナルがすでに発生しているからである。そのような場合、Ｃａ²⁺流入ブロッカーの投与は、受容体刺激物質を同時投与せずに行うことができる。或る種の腫瘍細胞はそのような活性をもつことが知られており、したがってこの方法によって治療できる。ｃ−ｋｉｔ活性化突然変異がヒトおよび齧歯類由来の肥満細胞腫に見いだされた（カナクラら、１９９４；キタヤマら、１９９５）。適切な因子をＣａ²⁺ブロッカーと共に投与することによってシグナルを増強することは或る状態では好ましくないというわけではない。特定細胞型が本発明による治療に感受性をもつかどうかを確認する出発段階は、細胞膜に発現する受容体のリガンド結合が細胞内Ｃａ²⁺濃度の増加をおこすかどうかを確認することである。種々濃度のリガンド、およびＣａ²⁺流人ブロッカー細胞培養物の投与を、本明細書に開示された実施態様の細胞について記載された実験と同様に行い、細胞死が誘起される濃度を決定することができた。特定の適応症では、適量は例えばホスト、投与法および治療すべき症状の性質および重症度によって変動する。満足すべき結果は、受容体結合作用物質では１日量約０．１ｍｇ／ｋｇ動物体重ないし約１ｍｇ／ｋｇ体重で得られることが示されている、ただしこれは特定作用物質または治療すべき対象および症状によって変動する。さらに、１日量を２、３、４回またはそれ以上に分割して投与することも好都合である。もしも作用物質が増殖因子のようなポリペプチドである場合は、例えば皮内、筋肉内または静脈注射によって投与することができる。本発明の受容体結合化合物を含む薬物学的組成物は少なくとも１つの薬物学的に容認される担体または希釈剤、賦形剤、滑剤、緩衝剤、抗菌剤、増量剤、抗酸化剤などを含み、その組成物は一般的方法で、薬物学的に容認される担体または希釈剤などと混合することによって作られる。公知のＣａ²⁺流入ブロッカーは、その作用物質が所望通り標的細胞に達する限り、公知の方法によって製造および投与することができる。特異的細胞、例えば、特定のＩｇＥを産生するＢ細胞を標的とするために、そのＩｇＥの表面部分に対するアゴニスティック抗体を生成することができた。適切なＣａ²⁺流入ブロッカー（１種類または複数種類）を抗体に適切に結合させ、抗体と表面ＩｇＥとの結合によってブロッカーを、その作用が望ましい特定細胞と接触させる。参考文献上記の参考文献の特別のものを以下記す。以下に列挙する文献はすべて本明細書に参考として組み入れられる。アルテガ、ジョンソン、トッダラド、コフィー、カーペンター、ページ（１９９１）ヒト原発乳癌におけるチロシンキナーゼ基質ホスホリパーゼＣ−ガンマ１の含量増加。Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A．，８８巻１０４３５−９ページ。アシュウェル、カンニガン、ノグチ、ヘマンデ（１９８７）抗原による活性化でＴ細胞ハイブリドーマの細胞増殖サイクル遮断。J.Exp.Med.１６５巻、１７３ 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───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ゴマーマン，ジェニファー，リンカナダエム５エス１シー９オンタリオ州トロントウィルコックスストリート 89

Claims

【特許請求の範囲】１．細胞死を必要とする哺乳動物において細胞死を誘導する方法であって、その方法において細胞をＣａ²⁺流入を伴う因子によて刺激することができ、その方法は哺乳動物に有効量のＣａ²⁺流入ブロッカーと有効量の前記因子とを投与することを含む前記方法。２．前記細胞の受容体のリガンドによる刺激、Ｃａ²⁺流入を伴う作用物質による刺激にさらされた細胞を有する哺乳動物において、前記哺乳動物に有効量のＣａ²⁺ 流入ブロッカーと有効量の前記リガンドを投与することを含んでなる細胞死誘導法。３．細胞死を必要とする哺乳動物に細胞死を誘導する方法であって、前記細胞は、作用物質と結合すると、その細胞内へのカルシウム流入およびホスホリパーゼＣの活性化をおこす受容体を有し、前記方法は哺乳動物に有効量のＣａ²⁺流入ブロッカーと有効量の前記作用物質とを投与することを含む方法。４．細胞死を必要とする哺乳動物に細胞死を誘導する方法であって、前記細胞はＣａ²⁺流入を伴う因子によって刺激され、哺乳動物に有効量のノンボルテージゲーテッド(non-voltage gated)のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび有効量の前記因子を投与することを含んでなる方法。５．因子が前記細胞の受容体に対するアゴニスティック抗体である請求項１または請求項４に記載の方法。６．因子が前記細胞の受容体の天然リガンドである請求項１または請求項４に記載の方法。７．リガンドが受容体の天然リガンドである請求項２または請求項に記載の方法。８．作用物質が受容体のアゴニスティック抗体である請求項３に記載の方法。９．作用物質が受容体のリガンドである請求項３に記載の方法。１０．リガンドが受容体の天然リガンドである請求項９に記載の方法。１１．細胞が肥満細胞、単球、マクロファージ、線維芽細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、好塩基球または癌細胞である請求項１、請求項２、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項７、請求項８、請求項９、または請求項１０に記載の方法。１２．哺乳動物が増殖性疾患にかかっている請求項１、請求項２、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項７、請求項８、請求項９、または請求項１０に記載の方法。１３．哺乳動物が癌にかかっている請求項１、請求項２、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項７、請求項８、請求項９、または請求項１０に記載の方法。１４．哺乳動物が乳癌にかかっている請求項１３に記載の方法。１５．哺乳動物がアレルギーにかかっている請求項１、請求項２、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項７、請求項８、請求項９、または請求項１０に記載の方法。１６．哺乳動物が自己免疫病にかかっている請求項１、請求項２、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、請求項７、請求項８、請求項９、または請求項１０に記載の方法。１７．前記細胞が、ｃ−ｋｉｔ受容体または突然変異ｃ−ｋｉｔ受容体、Ｔ細胞受容体、ＣＤ３、ＦｃｙＲＩＩ、ＦｃｙＲＩＩＩ、ＦｃｙＲＩ、Ｇ−蛋白質結合受容体、ボンベシンの受容体、ガストリン放出ペプチド受容体、ブラジキニン受容体、カルバコル受容体、ムスカリン分子受容体、ＣＣＫ−８受容体、バソプレッシン受容体、ニューロキニン受容体、サブスタンスＰ受容体、プリン作動性分子受容体、ＴＧＦ−α受容体、ＥＧＦ受容体、ヘレグリン受容体、ｅｒｂＢ１受容体、ｅｒｂＢ２受容体、ｅｒｂＢ３受容体、ｅｒｂＢ４受容体、ＰＤＧＦ受容体、ＳＬＦ受容体、ＦＬＴ−３リガンド受容体、塩基性ＦＧＦ受容体、酸性ＦＧＦ受容体、エノテリン受容体、ＮＧＦ受容体、ＶＥＧＦ受容体、およびＨＧＦ受容体の群から選択される表面受容体を有する請求項１、請求項４、請求項５または請求項６に記載の方法。１８．前記受容体がｃ−ｋｉｔ受容体または突然変異ｃ−ｋｉｔ受容体、Ｔ細胞受容体、ＣＤ３、ＦｃｙＲＩＩ、ＦｃｙＲＩＩＩ、ＦｃεＲＩ、Ｇ蛋白結合受容体、ボンベシン受容体、ガストリン放出ペプチド受容体、ブラジキニン受容体、カルバコル受容体、ムスカリン分子受容体、ＣＣＫ−８受容体、バソプレッシン受容体、ニューロキニン受容体、サブスタンスＰ受容体、プリン作動性分子受容体、ＴＧＦ−α受容体、ＥＧＦ受容体、ヘレグリン受容体、ｅｒｂＢ１受容体、ｅｒｂＢ２受容体、ｅｒｂＢ３受容体、ｅｒｂＢ４受容体、ＰＤＧＦ受容体、ＳＬＦ受容体、ＦＬＴ−３リガンド受容体、塩基性ＦＧＦ受容体、酸性ＦＧＦ受容体、エノテリン受容体、ＮＧＦ受容体、ＶＥＧＦ受容体、およびＨＧＦ受容体の群から選択される請求項２、請求項３、請求項７、請求項８または請求項９に記載の方法。１９．前記因子がＳＬＦ、ＴＧＦ−α、ＥＧＦ、ヘレグリン、ｅｒｂＢ１に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ２に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ３に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ４に対するアゴニスト、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＦＬＴ− ３リガンド、塩基性ＦＧＦ、酸性ＦＧＦ、エノテリン、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＣＲに対するアゴニスト、ＣＤ３受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩ受容体に対するアゴニスト、Ｇ蛋白結合受容体のアゴニスト、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコル、ムスカリン受容体アゴニスト、ＣＣＫ−８、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、プリン作動性受容体アゴニスト、ＡＴＰ、アデノシン、および１、２５ −ジヒドロビタミンＤ、およびそれらの組み合わせの群から選択される請求項１または請求項４に記載の方法。２０．前記因子がＳＬＦ、ＴＧＦ−α、ＥＧＦ、ヘレグリン、ｅｒｂＢ１に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ２に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ３に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ４に対するアゴニスト、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＦＬＴ−３リガンド、塩基性ＦＧＦ、酸性ＦＧＦ、エノテリン、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＣＲに対するアゴニスト、ＣＤ３受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩ受容体に対するアゴニスト、Ｇ蛋白結合受容体のアゴニスト、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコル、ムスカリン受容体アゴニスト、ＣＣＫ−８、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、プリン作動性受容体アゴニスト、ＡＴＰ、アデノシン、および１、２５−ジヒドロビタミンＤ₃およびそれらの組み合わせの群から選択される請求項２に記載の方法。２１．前記リガンドがＳＬＦ、ＴＧＦ−α、ＥＧＦ、ヘレグリン、ｅｒｂＢ１に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ２に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ３に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ４に対するアゴニスト、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＦＬＴ− ３リガンド、塩基性ＦＧＦ、酸性ＦＧＦ、エノテリン、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＣＲに対するアゴニスト、ＣＤ３受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩ受容体に対するアゴニスト、Ｇ蛋白結合受容体のアゴニスト、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコル、ムスカリン受容体アゴニスト、ＣＣＫ−８、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、プリン作動性受容体アゴニスト、ＡＴＰ、アデノシン、および１、２５−ジヒドロビタミンＤ₃およびそれらの組み合わせの群から選択される請求項２に記載の方法。２２．前記作用物質がＳＬＦ、ＴＧＦ−α、ＥＧＦ、ヘレグリン、ｅｒｂＢ１に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ２に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ３に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ４に対するアゴニスト、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＦＬＴ− ３リガンド、塩基性ＦＧＦ、酸性ＦＧＦ、エノテリン、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＣＲに対するアゴニスト、ＣＤ３受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩ受容体に対するアゴニスト、Ｇ蛋白結合受容体のアゴニスト、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコル、ムスカリン受容体アゴニスト、ＣＣＫ−８、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、プリン作動性受容体アゴニスト、ＡＴＰ、アデノシン、および１、２５ −ジヒドロビタミンＤ₃およびそれらの組み合わせの群から選択される請求項３に記載の方法。２３．前記細胞が高活性免疫細胞であり、抗体を含み、因子がその抗体に対する抗原である請求項１または請求項４に記載の方法。２４．前記細胞が高活性免疫細胞であり、ＩｇＥが前記免疫細胞に結合し、前記因子がＩｇＥに対するアゴニストである請求項１または請求項４に記載の方法。２５．前記細胞が高活性免疫細胞で、抗体を含み、リガンドがその抗体に対する抗原である請求項２４に記載の方法。２６．前記細胞が高活性免疫細胞で、抗体を含み、リガンドがその抗体に対する抗原である請求項２に記載の方法。２７．前記細胞が高活性免疫細胞で、ＩｇＥが前記免疫細胞に結合し、前記リガンドがＩｇＥに対するアゴニストである請求項２に記載の方法。２８．前記細胞がＩｇＥ受容体を含み、リガンドが受容体に対する抗体である請求項２７に記載の方法。２９．前記細胞が高活性免疫細胞で、抗体を含み、作用物質がその抗体に対する抗原である請求項３に記載の方法。３０．前記細胞が高活性免疫細胞で、ＩｇＥが前記免疫細胞に結合し、前記作用物質がＩｇＥに対するアゴニストである請求項３に記載の方法。３１．前記細胞がＩｇＥ受容体を含み、作用物質がその受容体に対する抗体である請求項３０に記載の方法。３２．前記細胞が好塩基球である請求項２４、請求項２７または請求項３０に記載の方法。３３．前記細胞が肥満細胞である請求項２４、請求項２７または請求項３０に記載の方法。３４．Ｃａ²⁺流入ブロッカーおよび因子が別々に投与される請求項１、請求項４、請求項５、請求項６、請求項１７、請求項２３、請求項２４、または請求項２５に記載の方法。３５．Ｃａ²⁺流入ブロッカーおよびリガンドが別々に投与される請求項２、請求項７、請求項１８、請求項２０、請求項２１、請求項２６、または請求項２７に記載の方法。３６．Ｃａ²⁺流入ブロッカーおよびリガンドが別々に投与される請求項３、請求項８、請求項９、請求項２２、請求項２９、または請求項３０に記載の方法。３７．Ｃａ²⁺流入ブロッカーが因子に先立って投与される請求項１、請求項４、請求項５、請求項６、請求項１７、請求項２３、請求項２４、または請求項２５に記載の方法。３８．Ｃａ²⁺流入ブロッカーがリガンドに先立って投与される請求項２、請求項７、請求項１８、請求項２０、請求項２１、請求項２６、または請求項２７に記載の方法。３９．Ｃａ²⁺流入ブロッカーが作用物質に先立って投与される請求項３、請求項８、請求項９、請求項２２、請求項２９、または請求項３０に記載の方法。４０．Ｃａ²⁺流入ブロッカーおよび因子が単一段階で投与される請求項１、請求項４、請求項５、請求項６、請求項１７、請求項２３、請求項２４、または請求項２５に記載の方法。４１．Ｃａ²⁺流入ブロッカーおよびリガンドが単一段階で投与される請求項２、請求項７、請求項１８、請求項２０、請求項２１、請求項２６、または請求項２７に記載の方法。４２．Ｃａ²⁺流入ブロッカーおよび作用物質が単一段階で投与される請求項３、請求項８、請求項９、請求項２２、請求項２９、または請求項３０に記載の方法。４３．前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーの欠如下における因子による細胞刺激が、普通は前記細胞の増殖、生存および／または活性化を促進する請求項１または請求項４に記載の方法。４４．Ｃａ²⁺流入ブロッカーの欠如下におけるリガンドと受容体との結合が普通は前記細胞の増殖、生存および／または活性化を促進する請求項３に記載の方法。４５．Ｃａ²⁺流入ブロッカーの欠如下における前記作用物質の結合が普通は前記細胞の増殖、生存および／または活性化を促進する請求項３に記載の方法。４６．細胞がｃ−ｋｉｔ受容体を発現し、その際前記方法は有効量のｃ−ｋｉｔリガンドを哺乳動物に投与することを含む請求項１、請求項２、請求項３、または請求項４に記載の方法。４７．哺乳動物が白血病、腫瘍増殖または肺癌にかかっているヒトである請求項１、請求項２、請求項３、請求項４または請求項４６に記載の方法。４８．前記因子が、前記細胞の受容体に結合した増殖因子であり、その結合が普通は細胞増殖を誘起する請求項３に記載の方法。４９．哺乳動物が癌または過形成に侵されている請求項４８に記載の方法。５０．前記因子が蛋白質である請求項３に記載の方法。５１．前記因子が、前記細胞の受容体に結合する生存因子であり、その結合が普通は細胞増殖を誘起する請求項３に記載の方法。５２．前記細胞が造血前駆細胞である請求項５１に記載の方法。５３．前記因子が、前記細胞の受容体に結合する活性化因子であり、その結合がＣａ²⁺流入ブロッカーの欠如下で普通は細胞の活性化をおこす請求項３記載の方法。５４．前記哺乳動物がヒトである先行請求項のいずれかの項に記載の方法。５５．前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーがＮｉ²⁺、ケトチフェン、エコナゾール、テニダップ、ＣＡ１、Ｃｄ²⁺、Ｃｏ²⁺、Ｌａ³⁺、Ｍｎ²⁺、ＳＫＦ−９６３６５およびクロモリン、またはそれらの組み合わせの群から選択される先行請求項のいずれかの項に記載の方法。５６．細胞死を必要とする哺乳動物の、構造的に活性化された細胞の死を誘導する方法であって、有効量のＣａ²⁺流入ブロッカーを前記哺乳動物に投与することを含む方法。５７．前記活性化が、前記細胞の不活性化状態にあるときの濃度以上に高められたＣａ²⁺濃度をもたらす請求項５６に記載の方法。５８．前記構造的活性化が突然変異ｃ−ｋｉｔ受容体の存在の結果である請求項５６に記載の方法。５９．前記哺乳動物が肥満細胞腫にかかっているヒトである請求項５８に記載の方法。６０．細胞死を必要とする哺乳動物の細胞をオートクリン刺激にかけて細胞死を誘導する方法であって、有効量のＣａ²⁺流入ブロッカーを哺乳動物に投与することを含む方法。６１．前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーがＮｉ²⁺である請求項５６、請求項５７、請求項５８、請求項５９または請求項６０に記載の方法。６２．細胞増殖を阻止する抗増殖剤として哺乳動物に投与する薬物学的組成物であって、Ｃａ²⁺流入ブロッカーと、普通は前記細胞の受容体に結合してＣａ²⁺の細胞内流入をおこす因子とを含む薬物学的組成物。６３．前記因子と受容体との結合が普通はホスホリパーゼＣの活性化をおこす請求項６２に記載の組成物。６４．前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーがノンボルテージゲーテッドのＣａ²⁺流入ブロッカーである請求項６２または請求項６３に記載の組成物。６５．前記因子が受容体に対するアゴニスティック抗体である請求項６２、請求項６３、または請求項６４に記載の組成物。６６．前記因子が受容体の天然リガンドである請求項６２、請求項６３、または請求項６４に記載の組成物。６７．前記因子がＳＬＦ、ＴＧＦ−α、ＥＧＦ、ヘレグリン、ｅｒｂＢ１に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ２に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ３に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ４に対するアゴニスト、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＦＬＴ−３リガンド、塩基性ＦＧＦ、酸性ＦＧＦ、エノテリン、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＣＲに対するアゴニスト、ＣＤ３受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃεＲＩ受容体に対するアゴニスト、Ｇ蛋白結合受容体のアゴニスト、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコル、ムスカリン受容体アゴニスト、ＣＣＫ−８、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、プリン作動性受容体アゴニスト、ＡＴＰ、アデノシン、および１、２５−ジヒドロビタミンＤ₃およびそれらの組み合わせの群から選択される請求項６２、請求項６３、または請求項６４に記載の組成物。６８．前記因子がＳＬＦである請求項６７に記載の組成物。６９．前記因子が免疫細胞の表面抗体の抗原である請求項６２に記載の組成物。７０．前記因子がＩｇＥに対するアゴニストである請求項６２に記載の組成物。７１．前記因子と受容体との結合が、前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーの欠如下では普通、前記細胞の増殖、生存および／または活性化を促進する請求項６２に記載の組成物。７２．哺乳動物の細胞増殖を阻止するために使用する薬物学的組成物のキットであって、Ｃａ²⁺流入ブロッカーと、正常には前記細胞の受容体に結合してＣａ²⁺ の細胞内流入をおこす因子とを含むキット。７３．前記因子と受容体との結合が正常にはホスホリパーゼＣの活性化をおこす請求項７２に記載の組成物。７４．前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーがノンボルテージゲーテッドのＣａ²⁺流入ブロッカーである請求項７２または請求項７３に記載の組成物。７５．前記因子が受容体に対するアゴニスティック抗体である請求項７２、請求項７３または請求項７４に記載の組成物。７６．前記因子が受容体の天然リガンドである請求項７２、請求項７３、または請求項７４に記載の組成物。７７．前記因子がＳＬＦ、ＴＧＦ−α、ＥＧＦ、ヘレグリン、ｅｒｂＢ１に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ２に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ３に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ４に対するアゴニスト、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＦＬＴ−３リガンド、塩基性ＦＧＦ、酸性ＦＧＦ、エノテリン、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＣＲに対するアゴニスト、ＣＤ３受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃεＲＩ受容体に対するアゴニスト、Ｇ蛋白結合受容体のアゴニスト、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコル、ムスカリン受容体アゴニスト、ＣＣＫ−８、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、プリン作動性受容体アゴニスト、ＡＴＰ、アデノシン、および１、２５−ジヒドロビタミンＤ₃およびそれらの組み合わせの群から選択される請求項７２、請求項７３、または請求項７４に記載の組成物。７８．前記因子がＳＬＦである請求項７７に記載の組成物。７９．前記因子が免疫細胞の表面抗体の抗原である請求項７２に記載の組成物。８０．前記因子がＩｇＥに対するアゴニストである請求項７２に記載の組成物。８１．前記因子と受容体との結合が、前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーの欠如下で、正常には前記細胞の増殖、生存および／または活性化を促進する請求項７２に記載の組成物。８２．抗増殖薬として請求項６２、請求項６３、請求項６４、請求項６５、請求項６６、請求項６７、請求項６８または請求項７１に記載の薬物学的組成物の使用。８３．抗炎症剤として請求項６２、請求項６３、請求項６４、請求項６５、請求項６６、請求項６７、請求項６８、請求項６９、請求項７０または請求項７１に記載の薬物学的組成物の使用。８４．抗増殖薬として請求項７２、請求項７３、請求項７４、請求項７５、請求項７６、請求項７７、請求項７８、または請求項８１に記載のキットの諸成分の使用。８５．抗炎症剤として請求項７２、請求項７３、請求項７４、請求項７５、請求項７６、請求項７７、請求項７８、請求項７９、請求項８０、または請求項８１に記載のキットの諸成分の使用。８６．前記細胞の増殖を阻止する作用物質として使用するための医薬品の製造においてＣａ²⁺流入ブロッカーおよび、正常には細胞の受容体に結合してＣａ²⁺の細胞内流入をおこす因子の使用。８７．前記細胞の増殖を阻止する作用物質として使用するための医薬品の製造における請求項８６に記載のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび因子の使用であって、前記因子と受容体との結合が正常にはホスホリパーゼＣの活性化をおこす前記使用。８８．前記細胞の増殖を阻止する作用物質として使用するための医薬品の製造における請求項８６または請求項８７に記載のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび因子の使用であって、前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーがノンボルテージゲーテッドのＣａ²⁺ 流入ブロッカーである前記使用。８９．前記細胞の増殖を阻止する作用物質として使用するための医薬品の製造における請求項８６、請求項８７または請求項８８に記載のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび因子の使用であって、前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーが受容体に対するアゴニスティック抗体である前記使用。９０．前記細胞の増殖を阻止する作用物質として使用するための医薬品の製造における請求項８６、請求項８７または請求項８８に記載のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび因子の使用であって、前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーが受容体の天然リガンドである前記使用。９１．前記細胞の増殖を阻止する作用物質として使用するための医薬品の製造における請求項８６、請求項８７または請求項８８に記載のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび因子の使用であって、前記因子がＳＬＦ、ＴＧＦ−α、ＥＧＦ、ヘレグリン、ｅｒｂＢ１に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ２に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ３に対するアゴニスト、ｅｒｂＢ４に対するアゴニスト、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＦＬＴ−３リガンド、塩基性ＦＧＦ、酸性ＦＧＦ、エノテリン、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＣＲに対するアゴニスト、ＣＤ３受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃｙＲＩＩＩ受容体に対するアゴニスト、ＦｃεＲＩ受容体に対するアゴニスト、Ｇ蛋白結合受容体のアゴニスト、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、ブラジキニン、カルバコル、ムスカリン受容体アゴニスト、ＣＣＫ−８、バソプレッシン、ニューロキニン、サブスタンスＰ、プリン作動性受容体アゴニスト、ＡＴＰ、アデノシン、および１、２５−ジヒドロビタミンＤ₃およびそれらの組み合わせの群から選択される前記使用。９２．前記細胞の増殖を阻止する作用物質として使用するための医薬品の製造における請求項９１に記載のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび因子の使用であって、前記因子がＳＬＦである前記使用。９３．前記細胞の増殖を阻止する作用物質として使用するための医薬品の製造における請求項８６に記載のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび因子の使用であって、前記因子が免疫細胞の表面抗体の抗原である前記使用。９４．前記細胞の増殖を阻止する作用物質として使用するための医薬品の製造における請求項８６に記載のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび因子の使用であって、前記因子がＩｇＥに対するアゴニストである前記使用。９５．前記細胞の増殖を阻止する作用物質として使用するための医薬品の製造における請求項８６に記載のＣａ²⁺流入ブロッカーおよび因子の使用であって、前記因子と受容体との結合が正常には、前記Ｃａ²⁺流入ブロッカーの欠如下で、前記細胞の増殖、生存および／または活性化を促進する前記使用。９６．疾病哺乳動物細胞の、Ｃａ²⁺流入ブロッカー治療、またはブロッカーと前記細胞の受容体をさらに活性化する因子とによる治療に対する感受性を診断する方法であって、組織サンプルが正常組織に比較して高められたＰＬＣ活性レベルを含むかどうかを試験し；その際、活性化ＰＬＣのレベル上昇は、細胞が前記治療に対して感受性であるらしいことを示唆する前記方法。９７．疾病組織のサンプルを得ることをさらに含む請求項９６に記載の方法。９８．サンプルを試験する段階が、前記組織のあらかじめ決めた量から得たＰＬＣの存在下で反応するＰＬＣ基質量をモニターすることを含む請求項９６または請求項９７に記載の方法。９９．あらかじめ決めた量の前記組織からＥＬＩＳＡアッセイによってＰＬＣを分離することをさらに含む請求項９８に記載の方法。１００．前記ＰＬＣ基質が[³Ｈ]−ＰＩＰ₂である請求項９８または請求項９９に記載の方法。１０１．Ｃａ²⁺流入ブロッカーとしての作用物質をスクリーニングする方法であって、前記作用物質の存在下で第１群の細胞を培養し、その際細胞はＣａ²⁺の細胞内への流入を促進する活性化された受容体を有し；前記作用物質の存在下で第２群の細胞を培養し、その際第２群の細胞には第２群の細胞へのＣａ²⁺流入を促進する活性化された受容体が欠如しており；第１群の細胞の増殖が前記作用物質が欠如しているときの第１群の細胞増殖に一致する第１のあらかじめ決められたレベルより低いかどうかを確かめ；第２群の細胞の増殖が前記作用物質が欠如しているときの第２群の細胞増殖に一致する第２のあらかじめ決められたレベルと実質上同じかどうかを確かめ；第１のあらかじめ決められたレベルより低い第１群細胞の増殖および第２のあらかじめ決められたレベルと実質上同じである第２群細胞の増殖は前記作用物質がＣａ²⁺ブロッカーであることを示す諸段階を含んでなる方法。１０２．第１群細胞の受容体が構造的に活性化される請求項１０１に記載の方法。１０３．第１群細胞の受容体がオートクリン刺激を受ける請求項１０１に記載の方法。１０４．第１群細胞の受容体が外因性作用物質によって活性化される請求項１０１に記載の方法。１０５．作用物質が第１群細胞の受容体の天然リガンドである請求項１０４に記載の方法。１０６．第１群細胞の受容体と第２群細胞の受容体とが同じ受容体である請求項１０１、請求項１０４または請求項１０５に記載の方法。１０７．受容体がｃ−ｋｉｔ受容体、ＥＧＦ受容体およびＦＧＦ受容体の群から選択される請求項１０１、請求項１０４、請求項１０５または請求項１０６に記載の方法。１０８．第１群の細胞と第２群の細胞がヒト細胞である請求項１０１、請求項１０２、請求項１０３、請求項１０４、請求項１０５、請求項１０６または請求項１０７に記載の方法。１０９．第１群の細胞が肥満細胞であり、第２群の細胞が肥満細胞であり、受容体がｃ−ｋｉｔ受容体で、第１群の細胞がＳＬＦの存在下で培養される請求項１１０、請求項１０２、請求項１０３、請求項１０４、請求項１０５、請求項１０６または請求項１０８に記載の方法。１１０．第１群細胞に第１群細胞の上記受容体をトランスフェクトする請求項１０１に記載の方法。