【発明の詳細な説明】ＤＮＡの分析 発明の分野
この発明は、例として法医学、集団調査、家系調査および病気の診断に役立つ
、特に遺伝標識形質を検査するためのＤＮＡの分析に関する。発明の背景
ヒトのゲノムには、異なる個体において種々の繰返し数で生じ得る単純なヌク
レオチド配列があり、それは、ある範囲で異なる長さの異なる対立遺伝子または
変異型を生じさせており、これを遺伝標識形質として用いて個体のＤＮＡを類型
化できることがわかっている。
脊椎動物のＤＮＡにおける縦列反復ミニサテライトおよびマイクロサテライト
領域は、反復単位数において高レベルの対立遺伝子の変異性を示すことが多い。
こうした情報量の非常に多い遺伝標識形質は、集団遺伝学、法科学、医学および
その他の自然科学の研究において応用範囲が広いことがわかってきた。たとえば
、このような標識を、遺伝的連関の分析、父系の血縁関係の確定、および移民論
争、ならびに法医学における身元確認に使用することができる。ミニサテライト
システムでは、コアＤＮＡ配列単位は通常１５以上の塩基対である。今までは、
このようなシステムのほとんどの研究および応用は、少なくとも５０ｎｇの相対
的に減成していないＤＮＡを必要とする、対立遺伝子長のサザンブロット評価に
頼ってきた。血液および精液のしみなどの多くの法的試料からこのような大量の
ＤＮＡを抽出するのは非常に困難なことが多い。
他方、マイクロサテライトは、最も一般的には（ｄＣ−ｄＡ）ｎなどのジヌク
レオチド反復の形式の、短くタンデムに繰返される（ＳＴＲ）多形性ＤＮＡ配列
であるが、トリヌクレオチドおよびテトラヌクレオチド反復の場合もあり得る。
詳細については、Pena,S.D.J.、Chakraborty，R．（１９９４）、Paternity
testing in DNA era、Trends in Genetics、Vol．１０、２０４−２０９を参照
されたい。マイクロサテライトをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて増幅
させることができ、生成するアンプリコンは通常長さが８０−８００塩基対（ｂ
ｐ
ｓ）にわたり、そのため、現在遺伝子の調査および分類のために広範囲にわたっ
て用いられている自動配列決定装置における処理に非常に適している。（Reed，
P.W.他、（１９９４）、Chromosome-specific microsatellite sets for
fluorescence based,semiautomatic genome mapping）No．ture Genet.、７,３
９０−３９５参照。）今まではほとんどのマイクロサテライト多形性はジヌクレ
オチド反復に基づいてきた。隣接する対立遺伝子間のサイズの相違は非常に小さ
いため、結果の中には解釈が困難なものもあり得る。トリおよびテトラヌクレオ
チド反復は使用するのがより簡単であるが、ヒトのゲノムにおいて生じることは
少ない。トリヌクレオチド反復配列の拡大は、ハンチントン病、脆弱Ｘ染色体症
候群および筋強直性ジストロフィーを含むいくつかの遺伝病に関係している。
この発明は、ペンタヌクレオチド反復（ＣＣＴＴＴ／ＧＧＡＡＡ）ｎのヒトの
誘導酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）遺伝子における発見に基づいている。この
反復は１７ｑ１１．１−ｑ１１．２上のｉＮＯＳ遺伝子の上流プロモータ領域の
５’末端およそ２．８ｋｂに位置する。研究により、このペンタヌクレオチド反
復（便宜上Ｘｕ−１と呼ぶ）は、個体によってその数が大幅に異なることが見出
され、今までに、７から１８の間の隣接するＸｕ−１反復を有する、１２の異な
る変異型または対立遺伝子が発見された。異なる対立遺伝子はＡ７、Ａ８・・・Ａ
１８と呼ばれる。Ｘｕ−１反復はヒトの集団では高度に多形性であるため、この
反復は、たとえば法医学、集団調査、家系調査および病気の診断に有効なマイク
ロサテライト標識として用いられる。発明の概要
この発明は１つの局面で、ＤＮＡの試料を分析してｉＮＯＳ遺伝子における配
列（ＣＣＴＴＴ／ＧＧＡＡＡ）の隣接する反復の数を測定する方法を提供する。
反復の数は典型的には７から１８の範囲にある。
このようにしてＤＮＡを分析することにより、１つまたは複数のどの対立遺伝
子（通常はＡ７からＡ１８のうち１つ以上）が存在するか、特定のＤＮＡ試料に
おけるＸｕ−１反復の数を測定できる。
この試料はたとえば、血液、精液、唾液、頬の細胞または何らかのその他の適
当な生物学的材料の試料とすることができる。
Ｘｕ−１反復はペンタヌクレオチド反復であるため、より小さな反復単位の場
合よりも簡単に、単にサイズをもとにして隣接する対立遺伝子が識別される。実
験により、個体が異なると、２つの対立遺伝子（各染色体につき１つずつ）にお
いて変化がかなりあることが示される。ヘテロ接合性は０．８４１として計算さ
れている。Ｘｕ−１反復はしたがって、高度に多形性であり、そのために、使用
が簡単な遺伝標識（Ｘｕ−１標識）として非常に有効である。
好都合には、試料はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて分析され、これ
は、この発明の方法が少量の試料について実施できるようにする。１対のＰＣＲ
プライマがこの目的のためにデザインされ、サイズの範囲が約１７０から２２５
塩基対（ｂｐ）の生成物をもたらす。フォワードプライマは５’−ＡＣＣＣＣＴ
ＧＧＡＡＧＣＣＴＡＣＡＡＣＴＧＣＡＴ−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ Ｎｏ．１）であ
る。リバースプライマは、５’−ＧＣＣＡＣＴＧＣＡＣＣＣＴＡＧＣＣＴＧＴＣ
ＴＣＡ−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ Ｎｏ．２）である。
生成物を配列決定して、Ｘｕ−１反復の数を測定してもよい。その代わりとし
て、フラグメント長を、たとえば電気泳動ゲルを流してＸｕ−１反復の数の計算
ができるようにし、簡単に測定できる。
Ｘｕ−１標識を別の遺伝標識形質と共に用いることにより、ヘテロ接合性を大
幅に高めることができる。たとえば、反復の数が５から１３にわたるニューロン
の酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ１）遺伝子にある多形性トリヌクレオチド反復（
ＡＴＴ／ＴＡＡ）に基づく既知のマイクロサテライト標識と共にＸｕ−１標識を
用いて、よい結果が得られている。ＰＣＲプライマは、ＮＯＳ１標識と共に用い
て、１１０から１３８ｂｐの範囲のもの（すなわちＸｕ−１標識物とサイズが異
なる）を生成させることができるようにデザインされ、Ｘｕ−１プライマと同じ
ＰＣＲ条件下で使用できる。フォワードプライマは、５’−ＧＡＡＡＴＴＧＧＴ
ＣＡＴＡＧＴＧＧＧＡＡＴＧ−３’（Ｓｅｑ．ＩＤ Ｎｏ．３）である。リバー
スプライマは、５’−ＧＴＧＴＴＧＧＴＧＡＡＣＣＡＡＣＣＣＴＣＣＴＡＡ−３
’（Ｓｅｑ．ＩＤ Ｎｏ．４）である。
このようにして２つの標識に対するＰＣＲ反応をともに行なうことができ、プ
ライマに対し異なるラベル（たとえばグリーンおよびブルー）を用いることによ
り、ＰＣＲ生成物を同じゲル上で同時に検出できる。これら２つの標識をともに
用いることにより、ヘテロ接合性は約９９％まで増大する。
実験により、民族のグループが異なるとＸｕ−１反復の数が異なる対立遺伝子
の分布に顕著な差が現われることがわかった。したがってＸｕ−１標識は、集団
調査、移民論争、父系の確定、および法医学研究において有用性がある。
さらに、Ｘｕ−１標識は、アルツハイマー病、高血圧、糖尿病、および癌など
のヒトに共通するいくつかの病気に関係している、ヒトのｉＮＯＳ遺伝子の５’
末端に位置しているため、この標識を上記の病気についての対立遺伝子結合の研
究および突然変異分析に使用することができる。たとえば、反復数と、アルツハ
イマー病の全症例の約４分の１に相当する、アルツハイマー病の老人性痴呆Lewy
body（ＳＤＬＴ）変異型との間に強い対立遺伝子結合があることが早くも検出
された。大腸癌のいくつかの症例においては、フランキング配列における突然変
異も検出された。ｉＮＯＳ遺伝子はまた組織移植に関係づけられる。この発明に
おいて述べられる多形性標識は、組織移植のための遺伝子型の分類にも使用でき
る。
この発明はさらに、以下の例において添付の図面を参照することにより例示と
して説明される。
図１Ａは、Ｘｕ−１反復領域を含む、ヒトの誘導酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯ
Ｓ）遺伝子の５’末端上流領域の制限地図である。
図１Ｂは、図１に含まれる３８３塩基対Ｐｓｔ１フラグメント（その上の鎖は
Ｓｅｑ．ＩＤ Ｎｏ．５である）の配列を示し、Ｐｓｔ１部位は下線が付され、
４１１の隣接するＸｕ−１反復は枠で囲まれている。
図２は、異なる個体からの、異なるＸｕ−１対立遺伝子を示す電気泳動ゲルを
示す。
図３は、家系樹、および異なる家族構成員からの異なるＸｕ−１対立遺伝子を
示す電気泳動ゲルを示す。
図４は、種々の家系樹をＸｕ−１対立遺伝子データとともに示す。
図５は、異なるＸｕ−１対立遺伝子を示す電気泳動ゲルで、異なる個体に対す
る別のマイクロサテライト標識と組合せたものを示す。
図６は、正常な個体、アルツハイマー病の老人性痴呆症Lewy body（ＳＤＬＴ
）変異体であった患者の剖検および非Lewy body型アルツハイマーの患者（ＡＤ
）の幾らかについて、異なるＸｕ−１対立遺伝子の分布（Ａ８からＡ１５）を示
すグラフであり、ｘ軸は染色体の％を示し、ｙ軸は対立遺伝子の数を示す。
図７は、図６と同様のグラフであり、カフカス人、黒人、中国人およびグジャ
ラート系アジア人の集団における異なるＸｕ−１対立遺伝子の分布（Ａ８からＡ
１８）を示す。実施例１
本発明の基礎をなす新規なペンタヌクレオチド反復（ＣＣＴＴＴ/ＧＧＡＡＡ
）ｎは、コスミドクローンｐＣＯＳ４から同定されたものであり（ヒトの誘導お
よび内皮酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ２およびＮＯＳ３）をコードする遺伝子を
それぞれ染色体１７および染色体７の中心周囲領域に対してマッピングした際に
、Xu，W.，Charles，I.，Moncada,S．，Gorman，P.，Sheer,D.，Liu,L.,およびE
mson，P.C.（199４）によって記載され説明された。Genomics 21,419-422）、こ
れは３５ｋｂのヒトゲノム挿入物を含んでおり、さらには、ヒトの誘導酸化窒素
シンターゼ（ｉＮＯＳ）遺伝子コード領域およびそのプロモーター領域を含むこ
とが示された。この遺伝子の５’上流末端の制限地図を図ＩＡに示す。誘導酸化
窒素シンターゼ遺伝子のヒトプロモーター領域をクローン化するために、Ｐｓｔ
ｌおよびＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素を用いて、コスミドをpBluescripI-SKベクター
にショットガンクローニングした。次いで、Ｍ１３ユニバーサルおよびリバース
プライマーを伴うＡＢＩ自動シークエンサーを用いてサブクローンを配列決定し
た。配列決定研究により、ＰｓｔＩサブクローンの１つであるクローン番号５１
２が、ヒト誘導酸化窒素シンターゼ遺伝子の主要な転写開始部位の５’末端の２
．８ｋｂに位置する、ヒトゲノムの５５塩基対の伸長物である、１１の完全な隣
接するペンタヌクレオチド反復（ＣＣＴＴＴ／ＧＧＡＡＡ）１１を含むことが示
された。この３８３塩基対フラグメントの配列（Ｓｅｑ．ＩＤ Ｎｏ．５）を、
図１Ｂにおいて、１１のペンタヌクレオチド配列が箱の中に示された状態で示す
。これらの反復およびフランキング領域は１本鎖のポリプリンを構成するこ
とがわかり、ポリピリミジンは１３０の塩基対にわたる他の鎖であり、このこと
は、そのような配列の不安定さから、マイクロサテライトにおいては非常に稀な
ことである。実施例２
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を直接用いて、ある範囲のヒトのＤＮＡ試料
からのゲノムＤＮＡから多形性ペンタヌクレオチド反復を増幅するために、特定
のオリゴヌクレオチドプライマーの対を設計した。
ＤＮＡは、血液、頬の細胞、唾液、または核を含む他の任意の生物学的な源の
いずれかから分離され得る。ＤＮＡ抽出物は、標準的なＳＤＳ−プロテイテーゼ
Ｋ−フェノール法を用いて、すべての例において行ない得る。(Sambrook，J.，
Fritsch，E.F．& Maniatis，Ｔ(1989)．Molecular cloning．Laboratory
manual Cold Spring Harbor Laboratory Press,NewYork.)
ヒトの血液のゲノムＤＮＡからそのゲノムＤＮＡを増幅するよう設計されるフ
ランキングＰＣＲプライマーの対は以下のとおりである：フォワードプライマー
は５’ −ＡＣＣＣＣＴＧＧＡＡＧＣＣＴＡＣＡＡＣＴＧＣＡ’Γ−３’ （Ｓ
ｅｑ．ＩＤ Ｎｏ．１）である。リバースプライマーは５’−ＧＣＣＡＣＴＧＣ
ＡＣＣＣＴＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＡ−３’ （Ｓｅｑ．ＩＤ Ｎｏ．２）である
。これらのプライマーは図ＩＢにおいて二重下線で示されている。フォワードプ
ライマーは、蛍光染料６−カルボキシフルオレイセン（６−Ｆａｍ）（Oswel DN
A1 ＤＮＡService，University ofS outhampton，Southampton SO16 7PX）ま
たはＸｅｘホスホルアミダイト（Applied Biosystems)を用いて５’末端標識さ
れる。プライマーは、標準的な方法を用いて、合成され、標識され、ＨＰＬＣで
精製された
（Oswel DNA Service，Southampton）
ＰＣＲプロトコルは以下のとおりである：
i ） 試薬混合物
標識された０．５ｍｌの二重スナップキャップマイクロ遠心チューブにおいて
、以下の試薬を混合した：試薬 量
テンプレート 1μ150-200ngゲノムDNA
10xPCR緩衝液II（Cerus,N808-0010，E8064） 5μl
dNTP Mix（各2.5mM，Pharmacia，27-2035-01） 5μl
25mM MgCl2(Cerus,N808-0010，EO843) 3μl
フォワードプライマー（200μg/ml．６Fam標識） 1μl
リバースプライマー（200μg/ml） 1μl
ｄＨ2Ｏ（蒸留または脱イオン水） 33.5μl
AmpliTaq DNAポリメラーゼ（Cerus，N801-0060） 0.5μl（2.5単位）
最終反応容積 50μl
（AmpliTaqはRoche Molecular System，Incの商標である）
（ｄＮＴＰ＝デオキシヌクレオチドトリホスフェート。Ｔａｑ ＤＮＡポリメ
ラーゼ＝サーマス・アクアチクス（Thermus aquaticus）から分離されたＤＮＡ
ポリメラーゼ）
この反応混合物上に１滴の鉱油（Sigma No.M5904）（約４０μl分）が落され
た。
ii ） ＰＣＲ反応
Perkin Elmer Cetus Model 480（またはそれに均等な装置）を用いて以下のよ
うにＰＣＲを行なう。
１．チューブを熱サイクラーに置く。
２．チューブを熱サイクラーに置いた直後に、熱サイクルを以下のように開始す
る：
ａ） ９６℃に予備加熱
ｂ） ９０℃で３０秒間
ｃ） 次を３０回：９４℃で１分間、アニールを５０℃で１分間、および重合
化を７２℃で１分間
ｄ） ７２℃で１０分間
３．４℃まで急速熱ランプして保持
ＰＣＲ生成物のサイズはペンタヌクレオチド反復単位の数に依って、約１７０
ｂｐ〜２２５ｂｐの範囲である。
iii ） 電気泳動
次に、６％尿素ポリアクリルアミドゲルを用いて、これらＰＣＲ生成物を
Applied Biosystems Model 373A DNA Sequencerに直接かける。泳動条件は、２
０００Ｖ、２６ワットで４〜１２時間である。Genescanオプションを用いてゲル
の泳動を開始させる（GenescanはApplied Biosystems,Inc.の商標である）。
以下のようにして、試料を調製しＤＮＡシークエンサーにかけた：
１．以下の試薬の混合物を調製する：
脱イオンホルムアミド５μｌ
Ｒｏｘ標識ＤＮＡマーカー（GENESCAN-2500）０．５μｌ
２．この混合物４μｌを各チューブに加えて激しく攪拌する。その溶液を軽く遠
心分離する。
３．ゲルをＤＮＡシークエンサーにかける準備ができると、試料を９０℃で２分
間加熱して変性させ、次いでそれらを即座に氷の上に移す。
４．ユーザマニュアルの指示に従って、試料をApplied Biosystems Model 373A
DNA Sequencerにかける。
iv ） 遺伝子スキャンおよび分析
GENESCAN672ソフトウェアを用いてデータを自動的に収集し分析する。このソ
フトウェアは、２４または３６のレーンすべてにわたる電気泳動データを収集す
るのみならず、異なるレーンのフラグメントを正確に同定し認識するのにも用い
ることができる。内部標準Rox-GENESCAN 2500は、正確かつ精密な塩基同定およ
びフラグメントの正確なサイズ決定を可能にする。自動ＤＮＡシークエンサが利
用可能でない場合には、放射性標識の使用など、他の方法を代わりに用いてＰＣ
Ｒ生成物を検出することもできる。
ｖ） 配列分析
ＰＣＲ生成物は、さらに、Ｔ−ベクタークローニングシステム（Stratagene，
Cambridge,英国）を用いてBluescripts pKSベクターにクローン化し、ユニバー
サルプライマーおよびリバースプライマーを用いてApplied Biosystems Model
373A DNA SequencerでTagDyeDeoxyターミネーターサイクル配列決定法により配
列決定することができる。生成物は、OiegenからのＰＣＲ ＤＮＡゲル精製シス
テムを用い、製造者の説明書に従い、プライマーＡまたはＢの３ピコモルを用い
て直接配列決定することもできる。実施例３
実施例２に記載されたプライマーおよび方法を用いて、３６の関係のない個体
のＤＮＡを検査した。選られた電気泳動ゲルを図２に示す。図の左側に示される
ように、一連の（赤い）バンド（図では見えない）は内部ＤＮＡサイズマーカー
（Genescan2500,Rox）を示す。ゲルの中間にわたるより明るい（青い）バンドは
６−Ｆａｍ蛍光標識されたプライマーＡによって生成されたものであり、これら
は、異なる反復長の存在を示し、多形性を明らかにしている。実施例４
同様の態様にて、カフカス人（ＣＥＰＨ（Centre Etude Polymorpisme
Humain）/Amish）家系（血統８８４）の３世代からデータを得た。この結果を、
図３において、家系樹およびＸｕ−１対立遺伝子データを示すゲルデータの形式
で示す。これらの結果は、十分に整合性があり、メンデルの共優性遺伝を示す。
他の家系群も同様に分析され、すべてがこの遺伝子座の同じメンデル共優性遺伝
の態様を示す。たとえば、図４は４つの大きなＣＥＰＨファミリーの遺伝子型を
示す（血統８８４，１４２４，１３４１および１３４９）。実施例５
別の遺伝マーカーに対するプローブと共にＸｕ-１反復に対するプローブを用
いることにより、より詳細な特定の遺伝情報を個体について得ることができ、す
なわち、より詳細な「遺伝的フィンガープリント」を得ることができ、それによ
り、ヘテロ接合性は増加し、したがってそれらの結果の有用性も増す。５〜１３
の範囲にある反復数のニューロン酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ１）遺伝子に存在
する公知のトリヌクレオチド反復（ＡＴＴ/ＴＡＡ）に対するプローブと共に、
上述のようにＸｕ-１反復に対するプローブを用いて実験を行なった。このＮＯ
Ｓ１反復は、Am．J．Hum．Genet.58,363-370の、乳児幽門狭窄症に対する感染性
としてのニューロン酸化窒素シンターゼ遺伝子に対する遺伝的証拠（genetic ev
idence for the nenronal nitric oxide synthade gene as a susceptibility f
or infantile pyloric stenosis）においてChung，E.，Curtis D.，Chen，G.，M
arsden P.A.，Twells，R.，Xu，W.およびGardener M．（1996）により記載され
ている。
この目的のために、１１０〜１３８ｂｐの範囲にある生成物をもたらすよう、
ＮＯＳ１標識とともに用いるためのＰＣＲプライマーを設計し、5-Xedyeで緑色
に蛍光標識した。フォワードプライマーは５’−ＧＡＡＡＴＴＧＧＴＣＡＴＡＧ
ＴＧＧＧＡＡＴＧ−３’（Ｓｕｑ．ＩＤ Ｎｏ．３）である。リバースプライマ
ーは、５’−ＧＴＧＴＴＧＧＴＧＡＡＣＣＡＡＣＣＣＴＣＣＴＡ−３ｄ’（Ｓｕ
ｑ．ＩＤ Ｎｏ．４）である。このプライマーの対は、Famdyeで標識されるＸｕ
−１反復に対するプライマーと全く同じＰＣＲ条件下で用いることができ、した
がって２つのＰＣＲ反応を同じ時間で行なうことができる。
図５はこの方法で得られたGenescanゲルを示し、上側（青色）バンドはＸｕ−
１反復を示し、下側（緑色）バンドはＮＯＳ１反復を示し、結果はサンプルごと
に配列されている。組合されたヘテロ接合性は約９９％である。実施例６
この発明のＸｕ−１反復は、アルツハイマー病を含む所定の病気に関係するヒ
トｉＮＯＳ遺伝子の５’末端に位置しているため、アルツハイマー病の老人性痴
呆症Lewy body（ＳＤＬＴ）変異型（２２人の患者）および非Lewy body型（ＡＤ
）（９０人の患者）の両者の、アルツハイマー病であると剖検により診断された
１１２人の死亡した痴呆患者について実験を行なった。比較のため、１０１人の
正常なカフカス人それぞれからの結果も得た。全被験者のＤＮＡはCambridge Br
ain Bankから得、地元の倫理委員会に承認された。実験はほぼ実施例２で説明し
たように行なった。
この結果を図６にグラフで示す。この結果は、ほとんどの対立遺伝子が、アル
ツハイマー病の患者においても痴呆ではない対照においても同様の頻度を有する
ことを示している。しかし、ＳＤＬＴの患者からの試料においては、２つのより
小さい対立遺伝子（それぞれ８ペンタヌクレオチド反復および９ペンタヌクレオ
チド反復を有する）Ａ８およびＡ９が過剰に示され（通常の３％およびＡＤの４
％と比較して１６％）かつＡ１１対立遺伝子は過小に示された（通常の１９％と
比較して２％）。Linkage Utilityの計数プログラムを使用して、p値は０．０１
５１（自由度６）と計算されるが、これは必要とされる値０．０５（５％）より
もはるかに低い。この結果は、ｉＮＯＳ遺伝子プロモータ内のＸｕ−１ペンタヌ
クレオチド反復変異型の所定の組合せ、すなわち高度のＡ１１対立遺伝子および
／または低度のＡ８およびＡ９対立遺伝子が、ＳＤＬＴの進行に関係し得ること
を示唆する。この情報は、診断においてまたは予見において価値があるであ
ろう。
実施例７
類似した態様でカフカス人、黒人（アフリカ系カリブ人およびアフリカ系アメ
リカ人）、中国人およびグジャラート系アジア人の民族的起源を有する２７１人
（すなわち５４２染色体）について実験を行ない、かつ、民族集団ごとに異なっ
た数のＸｕ−１反復の分布を分析した。その結果を表１および表２に、および図
７にグラフで示す。多形性の度合は、２つの指標によって特徴付けられる。すな
わちヘテロ接合性（Heter）および多形性情報内容（ＰＩＣ）である。式および
説明については、ボトスタイン（Botstein）,Ｄ、ホワイト（White），Ｒ．Ｌ．
，スコルニック（Skolnick），Ｍ．およびディビス（Davis），Ｒ．Ｗ．の『制
限フラグメント長の多形性を使用したヒトにおける遺伝的系統地図の構築
（Construction of a genetic linkage map in man using restriction
fragment length polymorphisms）』（Am．J．Hum．Genet．32:314-331
（1980））を参照されたい。全体のヘテロ接合性は０．８４１であった。
異なった民族集団間で明らかな、対立遺伝子の分布頻度における顕著な差が存
在する。したがってこれらの結果は法的に価値があるであろう。麦１ ＊フランキング配列および泳動条件により、サイズは２bp程度変わる。表２
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ
Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ
，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，
ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ
Ｄ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ
，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ
，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，
ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ
Ｂ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ
，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，
ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ
Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ
，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，
ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ