JP2000506373A

JP2000506373A - ＴＧＦβシグナル伝達たんぱく質、遺伝子およびその用途

Info

Publication number: JP2000506373A
Application number: JP9523086A
Authority: JP
Inventors: エムグラフ，ジョナサン; エムウールフ，トッド; ジン，ピン; エイメルトン，ダグラス
Original assignee: Harvard College
Current assignee: Harvard College
Priority date: 1995-12-20
Filing date: 1996-12-20
Publication date: 2000-05-30
Also published as: EP0868513A1; US6428977B1; AU726918B2; AU1520497A; DE868513T1; CA2239126A1; NZ326596A; KR20000064501A; US20070117098A1; IL124860A0; WO1997022697A1; US20020146773A1; US7034114B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、シグナリン関連遺伝子と称する一群の脊椎動物遺伝子によってコードされるタンパク質が、ＴＧＦβ上位群のメンバーによって誘導されるシグナル伝達に関与していることを見出したことに基づく。本発明は、例えば、いろいろな脊椎動物をインビトロまたはインビボで形成および／または維持するのに用いることができる組成物および方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】ＴＧＦβシグナル伝達たんぱく質、遺伝子およびその用途発明の背景パターン形成は、胚細胞が分化組織から成る規則的な空間配置を形成する活動である。細胞内因性系譜（リネージ）と細胞外因性シグナル伝達（シグナリング）の相互作用により胚形成中に高等生物の身体的複雑性が生じる。初期の身体設計図の確立から組織系のパターニング、または組織分化中に生じる多様な細胞型の形成に到る脊椎動物の発生における胚パターニングには誘導相互作用が必須である(Davidson，E.，（1990）Development 108：365-389；Gurdon．J．B.，（19 92）Cell 68：185-199；Jessell，T．M．他、（1992） Cell 68：257-270)。発生における細胞相互作用の影響は多様である。典型的には、反応細胞は、該反応細胞の非誘導および誘導状態のいずれとも異なる細胞を誘導することにより、ある経路（ルート）の細胞分化から別の経路へと迂回させられる（誘導）。細胞が近傍の細胞を誘導してあたかも自分自身のように分化させる場合もある（同質誘導）；また、細胞が近傍の細胞を自分自身のように分化しないようにする場合もある。発生初期においては細胞相互作用は逐次的であるため、２つの細胞型間の初期誘導が多様性を漸進的に拡大させることができる。さらに、誘導相互作用は胚のみならず成体細胞においても起こり、そして、形態形成パターンを樹立し維持するとともに分化を誘導するよう機能することができる(J．B．Gurdon(1992) ，Cell 68：185-199)。幾つかのクラスの分泌ポリペプチドが、発生における組織の運命を決定する細胞間シグナリング（シグナル伝達）を仲介することが知られている。このようなシグナル伝達タンパク質の重要なグループの一つは、ＴＧＦβ上位群(superfami ly)として知られる分子であり、多くの異なる種において広範な機能を果たす。この群の分子は、当初、アミノ末端シグナル配列を有し且ついろいろな大きさのプロドメインを有する大きな前駆体分子として合成される(Kingsley，D．M．（1 994）Genes Dev.，8：133-146)。次に該前駆体が切断されて、110〜140個のアミノ酸から成るカルボキシ末端成熟セグメントが得られる。活性なシグナル伝達部分は、カルボキシ末端のヘテロダイマーまたはホモダイマーから構成される(M assague，J．（1990）Annu．Rev．CellBiol.，6：597-641)。かくして、該分子の活性型がそのレセプターと相互作用するが、ここで、この群の分子については該レセプターは、タイプＩおよびタイプIIと呼ばれる特定の位置関係にある２種類のセリン／スレオニンキナーゼから構成されている（Massague，J．他、（199 2）Cell 69：1067-1070；Miyazono，K．A．他、EMBO J．10：1091-1101）。ＴＧＦβはタイプIIレセプターに直接結合し、次にタイプＩレセプターを補充しリン酸化によりそれを変性する。かくしてタイプＩレセプターが下流の構成成分にシグナルを伝達するが、その詳細は未だ不明である(Wrana他、（1994）Nature 370 ：341-347)。ＴＧＦβ群に属する幾つかのメンバーは、脊椎動物の発生において顕著な役割を果たすことが明らかにされている。発生過程のニワトリ神経管の背側にはドーサリン(dorsalin)が優先的に発現される(Basler他、（1993）Cell 73：687-702) これはインビトロで神経冠の増殖を促進し、運動ニューロンの形成を抑制し、このことから、背腹軸に沿った神経パターニングにおいて重要な役割を果たしていることが判る。ある種の骨形成蛋白質（ＢＭＰ）は、皮膚下または筋肉内に移植されると異所性骨および軟骨の形成を誘導することができる(Wozney，J．M.他(1 988) Science 242：1528-1534)。マウスにおいてはＢＭＰ５の変異は多くの骨格要素に影響を与え、成体において外耳サイズの減少や骨折の修復能の減少などを生じることが見出されている(Kingsley（1994）Genes Dev，8：133-146)。このような骨組織に対する影響に加えて、ＢＭＰは、正常な発生の過程中に他の役割も果たしている。例えば、ＢＭＰは非骨格組織においても発現され(Lyons他、（ 1990）Development 109：833-844)、また、発生過程のアフリカツメガエルの胚にＢＭＰ４を注入すると腹面／後方部の中胚葉の形成が促進される(Dale他(1992 )Development 115：573-585)。さらに、ＢＭＰ５が変異したマウスにおいては、上述した骨格異常に加えて、各種の軟組織の異常の頻度が高くなっている(Green ，M．C．(1958)J．Exp．Zool．137：75-88)。アクチビン亜群(subfamily)に属するものは、アフリカツメガエルの発生過程における中胚葉誘導に重要であることが見出され（GreenおよびSmith（1990）Na ture47：391-394；Thomsen 他(1990)Coll 63：485-493）、また、インヒビン類は、当初、下垂体細胞からの濾胞刺激ホルモンの性腺インヒビターとされていた。さらに、このシグナル伝達経路のアンタゴニストを用いて、胚組織を外胚葉に転化することができる（ＴＧＦβ仲介シグナルの不存在下における発生の欠陥経路）。ＢＭＰ４およびアクチビンは、中和の有効なインヒビターであることが見出されている(Wilson，P．A．およびHemmati-Brivanlou，A（1995）Natur e 376：331-333)。ＴＧＦβ群に属するものが初期の脊椎動物発生において重要であることは、マウスのノーダル(nodal)遺伝子にレトロウイルスを挿入することによっても明らかである。この挿入により、初期胚形成において原条の形成ができなくなり、中軸中胚葉が欠失し、そして、外胚葉および胚体外外胚葉が過剰産生される（Conl on他(1991) Development 111：969-981；Iannaccone他(1991)Dev．Dynamics 194 ：198-208）。予測されたnodal遺伝子産物は、以前の研究と一致しており、noda lがアクチビンおよびＢＭＰに関連していることを示している(Zhou他、（1993） Nature 361：543-547)。ＴＧＦβ群に属するものが生殖器官の発生に果たす役割についても研究されている。すなわち、脊椎動物の雄性発生過程においてはミュラー管抑制物質が機能して、卵管および子宮を形成する胚管系の退行を起こす(L eeおよびDonahoe（1993）Endocrinol．Rev．14：152-164)。シグナル伝達（シグナリング）分子のうちＴＧＦβ群に属するものは、さらに、発生後も機能を継続する。ＴＧＦβは、上皮細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、胎児肝細胞、骨髄様細胞、赤血球様細胞、リンパ球様細胞などの多くの細胞型に対して非増殖効果を奏する。ＴＧＦβ１を産生することができない動物は、見かけ上の形態学的異常を伴うことなく誕生まで生存することが見出されてる（Shull 他(1992）Nature 359：693-699；Kulkarni他(1993)Proc．Natl．Acac．Sci．90 ：770-774）。しかしながら、該動物は、多くの器官に大量の免疫浸潤が生じるために離乳齢頃に死亡してしまう。このようなデータは、リンパ球増殖に対してＴＧＦβが抑制効果を有するということと一致している(Tada他(1991)J．Immuno l 146：1077-1082)。他の別の系においては、マウスの乳組織内でＴＧＦβトランスジーンが発現することにより、生的成熟および妊娠中の乳組織の発達および分泌機能が抑制されることが示されている(Jhappan，C．他(1993)ＥＭＢＯ J.12 ：1835-1845；Pierce，D．F.他(1993)Genes Dev．7：2308-2317)。このような抑制効果に加えて、ＴＧＦβは他の細胞型の増殖を促進することもでき、このことは、血管新生や結合組織細胞の増殖における役割から明らかである。これらの活性に因り、創傷の治癒において重要な役割を果たす（Kovacs，E．J．（19 91）Immunol．Today 12：17-23）。発明の概要本発明は、脊椎動物内で発現される新規な一群(family)の遺伝子および遺伝子産物を発見したことに基づくものであり、該遺伝子を以後「シグナリン(signali n)」遺伝子群と呼び、また、その産物（生成物）を「シグナリン」タンパク質と呼ぶ。シグナリン遺伝子は、リガンドのうち形質転換性成長因子β（Transformi ng Growth Factorβ：ＴＧＦβ）上位群(superfamily)の下流に作用する細胞内タンパク質をコードする。シグナリン遺伝子の生成物は、脊椎動物において中胚葉誘導、腫瘍抑制ならびに分化組織から成る秩序のある空間配置の形成および維持に広く関与しており、そして、インビトロおよびインビボのいずれにおいても各種の脊椎動物組織を生成および／または維持するのに使用したり操作することができる。総括すれば、本発明の特徴は、単離されたシグナリンポリペプチド、好ましくは、本シグナリンポリペプチドの１種またはそれ以上から成る実質的に純粋な調製物（製剤）を提供することにある。本発明は、さらに、組換えによって産生されるシグナリンポリペプチドも提供する。好ましい態様として、該ポリペプチドは以下のような生物学的活性を有するものである：背面中胚葉から誘導される組織のような中胚葉由来組織の増殖、生存および／または分化を調節する能力；神経管、神経冠、または頭間葉から誘導される組織のような外胚葉由来の増殖、生存および／または分化を調節する能力；原腸から誘導される組織のような内胚葉由来組織の増殖、生存および／または分化を調節する能力。さらに、好ましい態様においては、本発明のシグナリンタンパク質は、ＴＧＦβ群に属する分子に対するレセプターによって仲介される分子内シグナル伝達経路を調節する能力を有する。１つの態様として、該ポリペプチドは、シグナリンタンパク質と同一または相同性のものである。シグナリンタンパク質の例は、配列番号：14(SEQ ID NO．１ 4)、配列番号：15（SEQ ID NO：15）、配列番号：16(SEQ ID NO．16)、配列番号：17(SEQ ID NO．17)、配列番号：18(SEQ ID NO．18)、配列番号：19(SEQ ID NO ．19)、配列番号：20(SEQ ID NO．21)、配列番号：22(SEQ ID NO．22)、配列番号：23(SEQ ID NO．23)、配列番号：24(SEQ ID NO．24)、配列番号：25(SEQ ID NO．25)、配列番号：26(SEQ ID NO．26)、で表されるものである。脊椎動物シグナリン群に類似するものも本発明に包含されるものとする。例えば、配列番号： 14〜16のいずれかで表されるポリペプチドに対して少なくとも60％の相同性のあるアミノ酸配列を有するシグナリンペプチドも包含され、さらに、それよりも配列相同性の高いポリペプチド、例えば、相同性が70％、80％、90％またはそれ以上であるようなものも包含されるものとする。該シグナリンポリペプチドは全長タンパク質から構成されていてもよい（例えば、配列表に掲記しているもの）が、さらに、特定のモチーフ／ドメインまたは任意のサイズに対応するフラグメント、例えば、少なくともその長さが５、10、25、50、100、150または200個のアミノ酸から構成されるものであってもよい。好ましい態様として、該ポリペプチドまたはそのフラグメントは、アゴニストまたはアンタゴニストとして作用することにより、形質転換性成長因子β（ＴＧＦβ）に対するレセプターのシグナル伝達活性を特異的に調節するものである。好ましい態様の１つとして、本発明は、40kdから70kdの範囲の分子量を有する精製されたまたは組換えによるポリペプチドに関する。例えば、αおよびβ亜群（サブファミリー）（後述）に属する好ましいシグナリンポリペプチド鎖は、45 kdから約55kdの範囲、特に好ましくは50〜55kdの範囲の分子量を有する。別の例としては、γ亜群（サブファミリー）に属する好ましいシグナリンポリペプチド鎖は、60kdから約70kdの範囲、特に好ましくは63〜68kdの範囲の分子量を有する。他の態様として、シグナリンポリペプチドは、配列番号：28（SEQ ID N0:28）で示される一般式で表されるシグナリンモチーフを含む。好ましい態様においては、該シグナリンモチーフは、配列番号14〜26のいずれかで表されるシグナリンモチーフに対応する。別の態様として、本発明のシグナリンポリペプチドは、配列番号：27（SEQ ID NO:27）の一般式で表されるνドメインを含む。好ましい態様においては、該ν領域は、配列番号：14〜26の１つで示されるνドメインに対応する。別の好ましい態様として、本発明のシグナリンポリペプチドは、配列番号：29（SEQ ID NO:29）の一般式で表されるχドメインを含む。好ましい態様においては、該χ領域は、配列番号14〜26の１つで示されるχドメインに対応する。他の好ましい態様として、本発明のシグナリンポリペプチドは、刺激または拮抗作用により、ＴＧＦβに対するレセプターによって仲介される細胞内経路を調節することができるものである。さらに別の好ましい態様として、該ポリペプチドは以下の一般式で表されるアミノ酸配列を有するものである：LDGRLQVSHRKGLP HVIYCRVWRWPDLQSHHELKPXECCEXPFXSKQKXV。さらに別の態様においては、本発明のシグナリンポリペプチドは以下の一般式で表されるアミノ酸配列を有する：LDGR LQVAGRKGFPHVIYARLWXWPDLHKNELKHVKFCQXAFDLKYDXV。さらに別の態様として、本発明のシグナリンポリペプチドは、以下の一般式で表されるアミノ酸配列を有するものである：LDGRLQVXHRKGLPHVIYCRLWRWPDLHSHHELKAIENCEYAFNLKKDEV。別の好ましい態様として、本発明は、シグナリンタンパク質由来の精製された、または組換えによるポリペプチドフラグメントであって、該ポリペプチドが野性型のシグナリンタンパク質の活性を調節する（例えば、模倣または拮抗する）能力を有するようなポリペプチドフラグメントに関する。好ましくは、該ポリペプチドフラグメントはシグナリンモチーフを含む。さらに、後述するように、本発明に従う好ましいシグナリンポリペプチドは、天然に存在する形態のタンパク質の生物学的活性のアゴニスト（例えば、模擬体 (mimics)）、あるいはアンタゴニストのいずれかになり得るものであり、例えば、該ポリペプチドは、天然のシグナリンタンパク質に応答する細胞の分化および／または増殖および／または生存を調節することができるものである。本発明のシグナリンタンパク質のホモログ（相同体）としては、該タンパク質の変形であって、例えば、修飾部位（チロシン、スレオニン、セリンまたはアスパラギン残基など）を変化させる変異により翻訳後修飾（変性）に抵抗性のあるもの、または該タンパク質に関連する酵素活性を不活性化するものが挙げられる。本タンパク質は、さらに、キメラ分子、例えば、融合タンパク質の形態で提供することもできる。例えば、シグナリンポリペプチドとは無関係（異質）のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドから成る第２のポリペプチド部分を含む組換え融合タンパク質として本発明のシグナリンタンパク質を提供することができ、ここで、該第２のポリペプチド部分は、例えば、グルタチオン−ｓ−トランスフェラーゼ、アルカリホスファターゼのような酵素活性部分、エピトープタッグである。好ましい態様において本発明のシグナリンポリペプチドは、ＴＧＦβレセプターからのシグナル伝達を調節する。例えば、本発明のシグナリンポリペプチドには、ｄｐｐ群に属するもの、例えば、ｄｐｐ、ＢＭＰ２またはＢＭＰ４用のＴＧＦβレセプターの伝達を調節し得るものがある。別の好ましい態様として、本発明のシグナリンポリペプチドは、ｄｐｐ群に属するもの以外のＴＧＦβのシグナル伝達（シグナリング）を調節する。例えば、該シグナリンポリペプチドには、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８、６０Ａ、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６、ＧＤＦ７、ＧＤＦ１、Ｖｇ１、ドーサリン（dorsalin）、ＢＭＰ３、ＧＤＦ１０、ノーダル(nodal)、インヒビン、アクチビンＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、ＴＧＦβ３、ＭＩＳ、ＧＤＦ９またはＧＤＮＥの１種またはそれ以上からのシグナル伝達に関与しているものもある。さらに別の態様として本発明は、シグナリンポリペプチド、またはそれと相同性のあるポリペプチドであって、野性型のシグナリンポリペプチドの活性の少なくとも一部分を調節する（例えば模擬したり拮抗する）能力を有するポリペプチドをコードする核酸に関与する。ここで、シグナリンポリペプチドの例としては、配列番号14:(SEQ ID NO:14)、配列番号15:(SEQ ID NO:15)、配列番号16:(SEQ ID NO:16)、配列番号17:(SEQ ID NO:17)、配列番号18:(SEQ ID NO:18)、配列番号19:(SEQ ID NO:19)、配列番号20:(SEQ ID NO:20)、配列番号21：(SEQ ID NO:2 1)、配列番号22:(SEQ ID NO:22)、配列番号23:(SEQ ID NO:23)、配列番号24:(SE Q ID NO:24)、配列番号25:(SEQ ID NO:25)、配列番号26:（SEQ ID NO:26)、で表されるものが挙げられる。他の態様として、本発明の核酸は、配列番号：１〜13 の核酸の１種またはそれ以上にストリンジェントコントロール（緊縮調節）下にハイブリダイズする。好ましい態様において該核酸は、ＴＧＦβに対するレセプターのシグナル伝達活性をアゴニストまたはアンタゴニストとして作用することにより特異的に調節するポリペプチドをコードする。他の態様として、本発明の核酸は、配列番号：28（SEQ ID NO:28）で示される一般式で表されるシグナリンモチーフを含む。好ましい態様において該シグナリンモチーフは、配列番号：14〜26のいずれかで表されるシグナリンモチーフに対応する。他の態様として本発明の核酸は、配列番号：27（SEQ ID NO:27）の一般式で表されるνドメインを含むアミノ酸配列をコードするものである。好ましい態様においては該コードされたν領域は配列番号：14〜26のいずれかで表される νドメインに対応する。他の態様として本発明の核酸は、配列番号：29（SEQ ID NO:29）の一般式で表されるχドメインを含む本発明のシグナリンポリペプチドをコードするものである。好ましい態様においては該コードされたχ領域は、配列番号：14〜26のいずれかによって表されるχドメインに対応する。さらに別の態様として本発明の核酸配列は、次の一般式で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする：LDGRLQVSHRKGLPHVIYCRVWRWPDLQSHHELKPXECCEXPFXSKQK XV。他の態様として本発明の核酸は、次の一般式で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする：LDGRLQVAGRKGFPHVIYARLWXWPDLHKNELKHVKFCQXAFDL KYDXV。さらに別の態様として本発明の核酸は、次の一般式で表されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする：LDGRLQVXHRKGLPHVIYCRLWRWPDLHSHHELK AIENCEYAFNLKKDEV。本発明は、別の態様として、シグナリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有する単離された核酸を提供する。好ましい態様において、このコードされたポリペプチドは、野性型のシグナリンタンパク質によって仲介される誘導現象を特異的に模擬しまたは拮抗する。該核酸のコード配列は、配列番号：１〜 13のいずれかに表されるコード配列に同一の配列を含むものであるか、または、それらの配列の１種以上と相同性を有するにすぎないものでもよい。さらに、好ましい態様の１つとして、本発明のシグナリン核酸は、転写の調節配列（例えば、転写プロモータまたは転写エンハンサー配列）であって、シグナリン遺伝子配列に作動的に連結している配列を含む。そのような調節配列を使用することにより、シグナリン遺伝子配列を発現ベクターとして使用するのに好適であるようにすることができる。本発明は、さらに、該発現ベクターによってトランスフェクションされた細胞（原核または真核のいずれも）を包含し、さらに、該発現ベクターを用いてシグナリンタンパク質を産生させる方法も包含する。さらに別の態様として本発明の核酸は、ストリンジェントコントロール下に、配列番号：１〜13の１種またはそれ以上のセンス配列またはアンチセンス配列の少なくとも12個の連続したヌクレオチド、好ましくは少なくとも25個の連続したヌクレオチド、さらに好ましくは少なくとも40個、50個または75個の連続したヌクレオチドに相応する核酸にハイブリダイズする。さらに別の態様として、本発明は、免疫原生製剤（調製物）におけるシグナリンポリペプチドから成る免疫原に関し、ここで、該免疫原は、シグナリンポリペプチドに対して特異的な免疫応答（例えば、体液性応答、抗体応答、細胞性応答）を引き起こすことができるものである。好ましい態様において該免疫原は、配列番号：14〜26のいずれかによって表されるタンパク質由来の抗原決定基（例えば、特有の決定基）を含むものである。さらに、別の態様として本発明は、シグナリン免疫原のエピトープに特異的に反応する抗体または抗体製剤（調製物）にも関する。本発明は、さらに、トランスジーンを有する非ヒトトランスジェニック動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ニワトリ、カエルまたはブタ）、例えば、本明細書で説明しているシグナリン遺伝子を異種形態で含む（好ましくは発現する）ような動物、もしくは内因性のシグナリン遺伝子を誤発現するような動物、本発明のシグナリンタンパク質の１種またはそれ以上の発現が破壊されるような動物に関する。このようなトランスジェニック動物は、変異したまたは誤発現されたシグナリンアレルを含む細胞障害（疾患）または組織障害（疾患）を研究したり薬剤のスクリーニング用の動物モデルとして使用することができる。本発明は、さらに、実質的に純粋なオリゴヌクレオチドであって、ストリンジェントコンディション下に、配列番号：１〜13または天然に存在するその変異体のセンス配列またはアンチセンス配列から成る少なくとも12個の連続したヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド配列の一領域を含むオリゴヌクレオチドから成るプローブ／プライマーを提供する。各群の脊椎動物シグナリンタンパク質に特異的な核酸プローブ、例えば、αシグナリン、βシグナリンまたはγシグナリンを区別し得るプローブは本発明に包含されるものとする。好ましい態様において該プローブ／プライマーは、さらに、それらに結合され検出され得るようになったラベル（標識）を含有する。該ラベルは、例えば、ラジオアイソトープ、蛍光性化合物、酵素および酵素コファクターから成る群より選ぶことができる。本発明のプローブは、あるシグナリンタンパク質の誤発現に関連する機能障害を同定するための診断テストキットの一部として使用することができ、例えば、患者の血清サンプル中のシグナリンタンパク質をコードする核酸のレベルを検出したり、細胞中のシグナリンｍＲＮＡのレベルを測定したり、または、ゲノムのシグナリン遺伝子が変異したり欠失したりしたかを調べることができる。本発明に従うこれらの所謂「プローブ／プライマー」は、さらに、「アンチセンス」療法、すなわち、当該シグナリンタンパク質の１種またはそれ以上をコードする細胞ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡと細胞条件下で特異的にハイブリダイズ（例えば結合）するオリゴヌクレオチドプローブまたはそれらの誘導体を投与したりインサイチュー生成させることにより該タンパク質の発現を抑制（例えば、転写および／または翻訳を抑制することにより）する治療の一部として使用することもできる。好ましくは、該オリゴヌクレオチドは、少なくとも12個のヌクレオチドから成る長さのものであり、20個、40個、50個、または70個のようなヌクレオチドから成る長さのプライマーも可能である。さらに別の態様として本発明は、シグナリンタンパク質とシグナリン結合性タンパク質または核酸配列との間の相互作用の抑制剤、または促進剤としての試験化合物をスクリーニングする分析法（アッセイ）を提供する。例えば、その方法は、（i）シグナリンポリペプチドまたはそのフラグメント、シグナリン結合性成分、および試験化合物を、例えば、該試験化合物がなければ、該シグナリンタンパク質と該結合性成分が相互作用し得るような条件下に、混合する工程；および(ii)該シグナリンタンパク質と該結合性成分とを含むコンプレックスの形成を、該コンプレックスを直接定量するか、または、該シグナリンタンパク質の誘導効果を測定することにより検出する工程を含む。試験化合物の存在下に（該試験化合物の不存在下の場合に比べて）コンプレックスの形成に統計学的に有意の変化（例えば減少）があれば、シグナリンタンパク質とその結合性成分との間の相互作用の調節（例えば抑制）があることを示唆することになる。本発明は、さらに別の態様として、シグナリン誘導に応答する哺乳動物細胞の成長、分化または生存の一種以上を調節する方法に関する。概括すれば、該方法は、インビボ、インビトロまたはインサイチューで実施されるか否かを問わず、該細胞を有効量のシグナリンポリペプチドで処理して、シグナリン処理を行わない場合に比べて、細胞の(i)成長速度、(ii)分化、または(iii)生存のうちの少なくとも１つを変化させることから成る。すなわち、本発明の方法は、該細胞に対し天然に存在するシグナリンタンパク質と同様の効果を与えるポリペプチドを用いて、さらに、該細胞に対し天然に存在するシグナリンタンパク質が与える効果を拮抗するようなポリペプチドを用いて実施することができる。好ましい態様においては、本発明の方法において用いられる該シグナリンポリペプチドは、脊椎動物源から得られるもの、例えば脊椎動物シグナリンポリペプチドである。例えば、好ましいポリペプチドとして、配列番号：14(SEQ ID NO:14)、配列番号： 15(SEQ ID NO:15)、配列番号：16(SEQ ID NO:16)、配列番号：17(SEQ ID NO:17) 、配列番号：18(SEQ ID NO:18)、配列番号：19(SEQ ID NO:19)、配列番号：20(S EQ ID NO:20)、配列番号：21(SEQ ID NO:21)、配列番号：22(SEQ ID NO:22)、配列番号：23(SEQ ID NO:23)、配列番号：24(SEQ ID NO:24)、配列番号：25(SEQ I D NO:25)、配列番号：26(SEQ ID NO:26)、のいずれかで表されるアミノ酸配列（生物活性のあるそのフラグメントを含む）と同一または相同性のあるアミノ酸配列を有するものが挙げられる。さらに、本発明は、シグナリンポリペプチドの他の後生動物（例えば、無脊椎動物）ホモログ（相同体）または生物活性のあるそのフラグメント（本発明の脊椎動物由来のフラグメントと等価なもの）を使用することにも関する。１つの態様として本発明の方法は、精巣細胞を処理して、精子生成を調節することを含む。別の態様として本発明の方法は、シグナリンポリペプチドで骨形成細胞を処理することにより骨形成を調節するのに用いられる。同様に、被処理細胞が軟骨形成細胞である場合には、本発明の方法は軟骨形成を調節するのに用いられる。さらに別の態様として、シグナリンポリペプチドを用いて神経細胞の分化を調節することもでき、例えば、本発明の方法を用いて、ニューロン細胞の分化を引き起こし、ニューロン細胞を或る分化状態に維持し、および／またはニューロン細胞の生存を増進させることにより、例えば、アポプトシスその他の細胞死を防止することができる。例えば、本発明の方法を用いて、運動ニューロン、コリン作動性ニューロン、ドープ作動性ニューロン、セロテン作動性ニューロン、ペプチド作動性ニューロンのようなニューロン細胞の分化を変化させることができる。本発明の方法は、例えば、神経細胞やその他の細胞であって、その生存状態または分化状態がシグナリンの機能に依存する細胞の培養におけるような細胞培養技術に適用することができる。さらに、シグナリンアゴニストおよびシグナリンアンタゴニストを用いて治療手術を行うことができ、例えば、中枢神経系および末梢神経系の双方においてニューロンやその他の神経細胞の生存や維持を増進させることができ、また、他の外胚葉パターニングとともに中胚葉および中胚葉分化過程のような脊椎動物の器官発生経路に影響を与えることができる。１つの態様として、例えば、本発明の方法を実施して、動物における細胞成長、細胞分化または細胞生存を調節するが、このために、該方法は、治療上有効量のシグナリンポリペプチドを投与して、シグナリン処理を行わない場合に比べて、該動物中の１種またはそれ以上の細胞型の(i)成長速度、(ii)分化または(iii)生存のうちの少なくとも１つを変化させることから成る。本発明は、別の態様として、被検体、例えばヒトの患者が望ましくない細胞増殖または異常な分化制御に起因する障害（疾患）の危険性があるか否かを判定する方法を提供する。該方法は、被検体の組織において(i)シグナリンタンパク質、例えば配列番号：14〜26のいずれかで表されるシグナリンタンパク質またはそのホモログをコードする遺伝子の変異；または(ii)シグナリン遺伝子の誤発現のうちの少なくとも１つによって特徴づけられる遺伝子障害（損傷）の存否を検出することを含む。好ましい態様においては遺伝子障害の検出は以下の少なくとも１つが存在することを確認することによって行われる：シグナリン遺伝子からの１個以上のヌクレオチドの欠失；該遺伝子への１個以上のヌクレオチドの追加；該遺伝子の１個以上のヌクレオチドの置換；該遺伝子の全体的な染色体の再配置；該遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写レベルの変化；該遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写の非野性型スプライシングパターンの存在；またはタンパク質の非野性型レベル。例えば、遺伝子障害を検出するには、（i）シグナリン遺伝子、例えば配列番号：１〜13のいずれかで表される核酸、または天然に存在するその変異体、または該シグナリン遺伝子に結合した天然の５’または３’フランギング配列のセンスまたはアンチセンス配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列の領域を含有するオリゴヌクレオチドを含むプローブ／プライマーを提供し；(ii)該プローブ／プライマーを組織の核酸と接触させ；さらに(iii)該プローブ／プライマーと該核酸のハイブリダイゼーションにより遺伝子障害の有無を検出し；例えば、該プローブ／プライマーを利用してシグナリン遺伝子のヌクレオチド配列、また、必要に応じて、フランキング核酸配列のヌクレオチド配列を測定することにより該障害を検出する。例えば、該プローブ／プライマーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）またはライゲーション連鎖反応（ＬＣＲ）において用いることができる。別の態様においては、シグナリンタンパク質に特異的に免疫応答性のある抗体を用いるイムノアッセイによりシグナリンタンパク質のレベルを検出する。本発明を実施するには、特にことわらない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、および免疫学において慣用され当該分野で知られた技術を用いる。そのような技術は文献に詳述されている。例えば、参照すべきものとして以下のものが挙げられる：Molecula r Cloning A Laboratory Manual，2nd Ed.，Sambrook，FritschおよびManiatis 編(Cold Spring Harbor Laboratory Press：1989)；DNA Cloning,Volumes I and II（D．N．Glover ed.，1985）；Oligonucleotide Synthesis（M．J．Gaited. ，1984）；Mullis他、米国特許第4,683,195号；Nucleic Acid Hybridization（B ．D．Hames&S．J．Higgins eds．1984）；Transcription And Translation（B． D．Hames&S．J．Higgins eds．1984）；Culture Of Animal Cells（R.I．Freshn ey，Alan R．Liss，Inc.，1987）；Immobilized Cells And Enzymes（IRL Press ，1986）；B．Perbal，A Practical Guide To Molecular Cloning（1984）；論文Methods In Enzymology（Academic Press，Inc.，N．Y.）；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells（J．H．Miller and M．P．Calos eds.,1987，Col d Spring Harbor Laboratory）；Methods In Enzymology，Vols．154and 155 (W u et al．eds.)，Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology（Ma yerおよびWalker編、Academic Press，London，1987）；Handbook Of Experimen tal Immunology，Volumes I-IV（D．M．Weir and C．C．Blackwell，eds.，1986 ）；Manipulating the Mouse Embryo，（Cold Spring Harbor Laboratory Press ，Cold Spring Harbor，N．Y.，1986）。本発明のその他の特徴および効果は、以下の詳細な説明および請求の範囲から明らかであろう。図面の簡単な説明図１は、本明細書において記述するシグナリンタンパク質の生物学的活性を試験するのに用いたモデル系を図示するものである。図２は、対照用胚、シグナリン１またはシグナリン２を注入した胚由来のアニマルキャップ外植片の形態を示す。図３は、対照用胚、シグナリン１を注入した胚、シグナリン２を注入した胚由来のアニマルキャップ外植片の組織学的観察結果を示す。図４は、ＰＣＲにより検出された、注入胚中の各種マーカーＲＮＡの発現の様子を示すオートラジオグラムである。ブラキュリ(Brachyury)は一般的な中胚葉マーカーである。グースコイド(goosecoid)は背面中胚葉マーカーである。Xwnt- 8は、腹面−側部中胚葉のマーカーである。アクチンは背面中胚葉のマーカーである。ＮＣＡＭは神経組織のマーカーである。ＥＦ−１αは遍在的に発現され、そして、各反応に含まれるＲＮＡの量に対する対照（コントロール）として機能する。「Ｅ」と表示したレーンは、全胚からハーベストした総ＲＮＡ（全ＲＮＡ）を含有し、陽性対照（コントロール）である。「−ＲＴ」と表示したレーンは、該陽性対照レーンと同一であるが、逆転写酵素が含まれておらず、陰性対照（コントロール）として機能する。「Ｓ１」および「Ｓ２」と表示したレーンは、それぞれ、xe−シグナリン１およびxe−シグナリン２が注入された胚由来のサンプルに対応する。図５は、シグナリン群（family）が少なくとも３つの異なる亜群(sub-familie s)に分類され得ることを示すマトリックスである。黒く斜線を施した枠は、シグナリンモチーフについて＞10のミスマッチがあることを表している。図６は、各種のヒトシグナリンタンパク質（hu−シグナリン１〜７；配列番号（SEQ ID NO）：18〜24）およびアフリカツメガエルシグナリンタンパク質（xe −シグナリン１〜４；(SEQ ID NO)：14〜17）のアミノ酸配列を比較するためのアラインメント（並置表）である。図７Ａ〜図７Ｃは、Xeシグナリンによる中胚葉の投与量依存性誘導を示すオートラジオグラムである。図７Ａは、Xeシグナリン２を注入し、原腸胚期11（初期）またはオタマジャクシ期38（後期）のいずれかまで培養した動物極における各種のマーカーＲＮＡの発現を示すオートラジオグラムである。ＲＮＡの発現はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって検出した。マーカーとレーンについては図４に示したとおりであるが、陰性対照にはマイナス符号（−）を付けている。図７Ｂは、Xeシグナリン１を注入し、オタマジャクシ期38まで培養した動物極における各種のマーカーＲＮＡの発現を示すオートラジオグラムである。いろいろな濃度のXeシグナリン１を発現するアニマルポールから総ＲＮＡをハーベストしてＰＣＲにより検出した。Xeシグナリン１は腹面中胚葉の発現のみを誘導し、背面中胚葉の発現は誘導しない。注目すべきは、高投与量においても筋肉アクチンの発現（背面中胚葉）が存在しないということである。図７Ｃは、Xeシグナリン１（Xmad １と記すこともある）およびXeシグナリン２（Xmad 2と記すこともある）の同時発現後の動物極における各種のマーカーＲＮＡの発現を示すオートラジオグラムである。図８は、アフリカツメガエルの発生過程中のXeシグナリン１（Xmad 1）および２（Xmad 2）のＲＮＡ発現を示すオートラジオグラムのパネルである。上部は、Xeシグナリン転写体が初期アフリカツメガエル胚内で均一に発現されていることを示すオートラジオグラムである。第８期の胞胚をほぼ３分の１ずつ切開してアニマル（Ａ）、マージナル（Ｍ）、またはベジタル（Ｖ）とし、そして、総ＲＮＡをハーベストした。第10期に、背面（Ｄ）および腹面（Ｖ）周辺（マージナル）領域を外植し、総ＲＮＡをハーベストした。ＲＴ−ＰＣＲによりＲＮＡを分析して、Xeシグナリン１、Xeシグナリン２およびＥＦ−１α転写体の存在を調べた。その他の対照レーンは図４に記述しているとおりである。下部は、Xeシグナリンの発現が中胚葉誘導によって影響されないことを示すオートラジオグラムである。胞胚期動物極キャップ（アニマルキャップ）を切開し、対照用緩衝液（Ｃ）、130MのＢＭＰ−４タンパク質（Ｂ）、または2.3ｎＭのアクチビオンタンパク質（Ａ）中で培養した。40分間隔でＲＮＡをハーベストし（最終時点は初期原腸胚期10.5に等しい）、ＲＴ−ＰＣＲにより分析してXeシグナリン１（Ｍ１）、Xeシグナリン２（Ｍ２）、brachyury（Ｂｕ）およびＥＦ− １α（ＥＦ）転写体の存在を調べた。他の対照のレーンは図４に記載したとおりであるが、陰性対照にはマイナスの符号（−）を付けている。図９Ａ〜図９Ｄは、Xeシグナリンがレセプターの下流で機能することを示すものである。図９Ａは、ドミナントネガティブＢＭＰレセプター（ｔＢＲ）（２ｎｇ）を注入し、さらにXeシグナリン１（Ｍ１）ｍＲＮＡ（２ｎｇ）を注入しまたは注入しない胚由来の第39期アニマルキャップの形態（左欄）および組織学的図（右側）を示す写真である。小胞（Ｖ）、間葉および中皮（Ｍｅ）の存在によって示されるように、該ドミナントネガティブＢＭＰレセプターは、腹面中胚葉のXeシグナリン１誘導をブロック（阻止）しない。図９Ｂは、ドミナントネガティブＢＭＰレセプターを注入した動物極における各種マーカーＲＮＡの発現を示すオートラジオグラムである。ｔＢＲ（２ｎｇ）、Xeシグナリン１（Xmad 1；2ｎｇ）、またはXeシグナリン１（Ｍ１）とｔＢＲ（２ｎｇ）を混合したものを胚に注入し培養して、図４に示すように第39期アニマルキャップＲＮＡを分析した。図９Ｃは、Xeシグナリン１（Xmad１）が、切端レセプターの影響を逆転することを示すオートラジオグラムである。ドミナントネガティブＢＭＰレセプター（ｔＢＲ）（４ｎｇ）をXmad 1（Ｍ１）ｍＲＮＡ（２ｎｇ）とともにもしくはそれを用いず、または、ドミナントネガティブアクチビンレセプター（ｔＡＲ）（２ｎｇ）をXmad１（Ｍ１）ｍＲＮＡ（２ｎｇ）とともにもしくはそれを用いず、胚に注入した。該切端レセプターは、ＴＧＦ−βシグナルをブロックすることにより、Ｎ−ＣＡＭを発現させる。Xeシグナリン１（Xmad 1）が同時に発現すると、この効果が逆転する。図９Ｄは、ドミナントネガティブアクチビンレセプター（ｔＡＲ）は、背面中胚葉のXeシグナリン２（Xmad 2）誘導をブロック（阻止）しないことを示すオートラジオグラフのパネルである。ドミナントネガティブアクチビンレセプター（ｔＡＲ（２ｎｇ）、Xeソクナリン２（２ｎｇ）、またはXeシグナリン２（Ｍ２）をｔＡＲ（２ｎｇ）と混合したものを胚に注入し、原腸胚期（初期）またはオタマジャクシ期（後期）までアニマルキャップを培養した。図10は、Xeシグナリンタンパク質が核およびサイトゾルに存在していることを示すオートラジオグラムである。発明の詳細な説明脊椎動物の組織の発生および維持において特に重要であるのは、誘導と呼ばれ、隣接する細胞層や組織間で生じる細胞外コミュニケーション（伝達）である(Sax en他(1989)Int．J．Dev．Biol．33：21-48；Gurdon他(1987)Development 99：28 5-306)。誘導性相互作用においては、１つの細胞集団から分泌された化学的シグナル（信号）が、第２の細胞集団の発生上の運命に影響を与える。一般的には、誘導性シグナルに応答した細胞は運命が変えられ、シグナル伝達する細胞の運命と同じではない。誘導性シグナルは、発生の過程で組織のパターニング（パターン形成）を決定するように機能する重要な調節タンパク質によって伝達される。例えば、ＴＧＦβ亜群によって仲介されるシグナルは、脊椎動物の組織誘導に関与することをはじめとして多種の役割を果たしていることが示されている。本発明は、本明細書において「シグナリン(Signalins)」と称する一群の脊椎動物遺伝子であって、ＴＧＦβ亜群に属するものによって開始される細胞間シグナル伝達経路において機能し、組織の運命や維持を決定するのに役割を果たす遺伝子を発見したことに基づくものである。例えば、下記の結果から示されるように、脊椎動物シグナリン遺伝子によってコードされるタンパク質は各種の胚組織および成体組織の発生および維持の調節に寄与することができる。例えば、胚誘導中に、特定のシグナリンは、背面中胚葉および腹面中胚葉のいずれの分化およびパターニグ（パターン形成）に関与している。本発明によって提供される脊椎動物シグナリン遺伝子群または遺伝子産物（生成物）群は、少なくとも７種のものから成ると考えられ、それらは、シグナリン群（family）に属する少なくとも３種類の異なる亜群に分類することができる。この脊椎動物シグナリンは、配列および機能のいずれにおいても、キイロショウジョウバエ(drosophila)およびC ．elegansＭＡＤ遺伝子に類似しているようである（Sekelsky他(1995) Genetics 139：1347）。脊椎動物シグナリンに相応するｃＤＮＡを、当初、アフリカツメガエルからクローニングして、Xe−シグナリン１〜４と命名した。実施例に記述するように、このアフリカツメガエルシグナリンのクローニング由来の縮重プライマーを用いてこの遺伝子群のヒトホモログ（相同体）をクローニングした。その結果、少なくとも７種類の異なるヒトシグナリン転写体を同定したので、これをHu−シグナリン１〜７と命名した。下記の表１に各シグナリンクローンについてのヌクレオチド配列とアミノ酸配列に対する配列番号（SEQ ID）の一覧を示す。表１配列表に示すシグナリン配列の一覧見かけの分子量から、脊椎動物シグナリンタンパク質群のサイズは、非修飾ポリペプチド鎖について、約45kdから70kdの範囲にあると考えられる。例えば、Xe −シグナリン１および３は約52.2kdの見かけの分子量を有し、Xe−シグナリン２は約52.4ｋｄの見かけの分子量を有し、また、Xe−シグナリン４は約64.9ｋｄの見かけの分子量を有する。該脊椎動物シグナリンの配列を分析すると、これまで同定されているドメインまたはモチーフと明らかな類似性は示されなかった。しかしながら、各全長クローンがシグナル配列を欠いているという事実、およびシグナリンタンパク質が核および細胞質の両方において検出され得るという観察結果から、該脊椎動物シグナリン遺伝子は分子内タンパク質をコードするものであることが分かる。叙上のことにも拘わらず、それらをクローンを注意深く調べると、少なくとも２種類の新規なドメインが示唆されており、その一方または両方が脊椎動物シグナリン群に特徴的なものであるかも知れない。該シグナリン群のうち保存されていると考えられる第１の構成要素（エレメント）は、該分子のＮ−末端部分に存在しており、「νドメイン」と命名することにする。Xe−シグナリン−１に関しては、該νドメインはアミノ酸残基Ｌｅｕ37〜Ｖａｌ30に対応している。複数の脊椎動物シグナリンクローンをアラインメントさせると、このエレメントは以下の共通配列で表される：LVKKLK-X(1)-CVTI-X(2)-RXLDGRLQVXXRKGXPHVIYXRWXWPDL X(3)-VCXNPYHYXRV（配列番号：27、SEQ ID NO.27）。ここで、Ｘ（１）は約17〜 25の残基を表し、Ｘ（２）は約１〜35の残基を表し、Ｘ（３）は約20〜25の残基を表し、そして、その他のＸは任意のアミノ酸を表すが、好ましくは、添付した配列表の対応する脊椎動物シグナリン配列に示すアミノ酸を表す。該νドメイン内に、脊椎動物シグナリン間においてのみならず、それに類似しているキイロショウジョウバエ（drosophila）およびC ．elegans MADポリペプチド間においても高度に保存されているモチーフが存在する。すなわち、このモチーフ（本明細書においては「シグナリン−モチーフ(signalin-motif)」と称する）は以下の共通配列を含む：LDGRLQVXXRKGXPHVIYXRWXWPDL（配列番号：28、(SEQ ID NO.28)。ここでも、各Ｘはそれぞれ独立して任意の単一のアミノ酸配列を表すが、好ましくは、添付した配列表の対応する脊椎動物シグナリン配列に示されるアミノ酸残基を表す。もう１つのモチーフはシグナリン群のＣ−末端部分に存在する。本明細書で「 χモチーフ(χmotif)と称するこのモチーフは、Xe−シグナリン−１のアミノ酸残基Leu405〜Leu450に対応する。ここでも配列分析を行った脊椎動物クローンをアラインメントさせることにより、該χモチーフは次の共通配列によって表すことができる：LXXXCXXRXSFVKGWGXXXXRQXXXXTPCWIEXHLXXXLQXLDXVL（配列番号：29 、(SEQ ID NO.29)。ここで、各Ｘは、それぞれ独立して任意の単一のアミノ酸を表すが、好ましくは、添付した配列表の対応する脊椎動物シグナリン配列に示されるアミノ酸を表す。特定の理論に拘泥する意図はないが、保存型と思われるモチーフ（シグナリンモチーフ）の１つを分析すると、該シグナリンタンパク質群は少なくとも３種類の異なる亜群（sub-families）に分類することができる。図５および図６に示されるように、Xe−シグナリン１および３ならびにhu−シグナリン１、３および７が、シグナリンの１亜群（「α−亜群（α−サブファミリー）」または「α−シグナリン」）を構成していると考えられる。同様に、Xe−シグナリン４ならびに hu−シグナリン４および２が第２の亜群（「β−亜群（β−サブファミリー）」または「β−シグナリン」）を構成し、そして、Xe−シグナリン２ならびにhu− シグナリン５および６が第３の亜群（「γ−亜群（γ−サブファミリー）」または「γ−シグナリン」）を構成する。α−亜群に属するものの間でシグナリンモチーフ近傍のアミノ酸配列を比較することにより、LDGRLQVSHRKGLPHVIYCRVWRWPD LQSHHELKPXECCEXPFXSKQKXV（配列番号：30、SEQ ID NO.30）で表されるシグナリンモチーフの共通配列が明らかである。同様に、β亜群およびγ亜群は、それぞれ、シグナリンモチーフ共通配列LDGRLQVAGRKGFPHVIYARLWXWPDLHKNELKHVKFCQXAF DLKYDXV（配列番号：31、SEQ ID N0.31）およびLDGRLQVXHRKGLPHVIYCRLWRWPDLHS HH-ELKAIENCEYAFNLKKDEV（配列番号：32、SEQ ID NO.32）によって特徴づけられる。さらに、後に記述するように、上記の構成要素の１種以上の保存に基づく発現配列タッグ（ＥＳＴ）ライブラリーにヒトシグナリン遺伝子の一部が確認された。これらの構成要素の分析に基づき、適当なＥＳＴフラグメントを連結し且つ該ＥＳＴ配列中のエラー（例えば、フレームシフトエラー）を修正することにより、連続するヒトシグナリンＤＮＡ配列を明らかにした。すなわち、該ＥＳＴ配列の特定部分からヒトｃＤＮＡのＮ−末端フラグメントを組み立て、クローニングしたヒト配列hu−シグナリン１のシグナリンモチーフを導入した。得られた170個の残基から成るフラグメント（配列番号：12(SEQ ID NO.12)（ヌクレオチド）および配列番号：25(SEQ ID NO.25)（アミノ酸）によって表される）は、α亜群に属し、該シグナリンモチーフの外側でもα亜群に属する他のメンバーと実質的な相同性を有する。同様の手法により、アフリカツメガエルシグナリンクローンに基づくＥＳＴ配列からヒトシグナリンクローンの121個の残基から成るＣ−末端部を組み立てた。得られたフラグメントのヌクレオチド配列（配列番号：13、SEQ ID NO.13）およびアミノ酸配列（配列番号：26、SEQ ID NO.26）を分析することにより、Xe− シグナリン２に最も類似しており、したがって、γ亜群に属する転写体の一部と考えられることが明らかになった。鋳型としてＥＳＴ配列を用いてヒトの推定配列を求めた後、全長ヒトシグナリンクローンを単離した。この全長配列は、配列番号：５（SEQ ID NO.５）（ヌクレオチド）および配列番号：18（SEQ ID NO.18）（アミノ酸）に示す。さらに、本実験の結果から、該シグナリン群は、上記の６種類のアフリカツメガエルクローンおよび７種類のヒトクローンよりも有意に大きいことが示されている。したがって、他の亜群における場合と同様に、上記のように命名した３種類の亜群のそれぞれに属するものが実在すると考えられる。また、異なる脊椎動物種間に実質的な相同性（ホモロジー）が存在するという事実は、本発明によって提供されるシグナリン配列が、他の脊椎動物（魚、鳥類、ならびに他の両生類および哺乳類など）からシグナリンホモログ（相同体）をクローニングするのに使用し得ることを示している。実験事実は、シグナリン類が、ＴＧＦβ上位群のメンバーによって仲介されるシグナル伝達において機能的役割を果たすことを示している。後に詳述するように、単細胞胚中での異所(ectopic)発現により幾つかのシグナリンの機能を調ベた。例えば、胞胚期においてアニマルキャップを外植し、同胞コントロール胚が第11期（胞胚期、初期）または第38期（オタマジャクシ期、後期）のいずれかに到達するまで培養した。培養後、外植片の形態、組織および分子マーカーを調べた。実施例において詳述するように、Xe−シグナリン１をコードするｍＲＮＡは外胚葉を腹面中胚葉に変化させ、これは、背面マーカー、筋肉アクチンまたはＮＣＡＭを発現しないが、腹面マーカー（グロビン）を発現する。これらのデータから、ＢＭＰのシグナル伝達カスケードにおけるXe−シグナリン１の重要性が明らかである。同様の方法を用いてXe−シグナリン２の役割を調べた。後の実施例に示すように、Xe−シグナリン２も動物極の運命を変化させて外胚葉から中胚葉にする。但し、Xe−シグナリン１とは対照的に、Xe−シグナリン２で誘導された中胚葉は背面であるという特徴がある。Xe−シグナリン２は分子マーカー（brac hyury、Xwnt-8、goosecoidおよびアクチン）の発現を誘導し、このことも背面中胚葉の存在を示唆している。この事実から、ＴＧＦβ、Ｖｇ１およびアクチンのシグナル伝達カスケードにおけるXe−シグナリン２の重要性が分かる。これらのデータに基づき発生過程の脊椎動物胚における成長とパターニングを総合的に理解することができ、例えば、中胚葉および／または外胚葉由来の組織に生じる疾患の治療に関して重要な示唆を得ることができる。後述するその他の一連の実験によれば、シグナリンの少なくとも幾つかは翻訳後に修飾（変性）を受ける。例えば、リン酸化された該タンパク質が検出されている。さらに、核局在型のシグナリンタンパク質が分子量を若干変化させサイトゾル型に修飾されたと考えられることもある。そのような修飾は、例えば、リン酸化、ユビキチン化、アシル化等の形態で起こる。シグナリンの翻訳後修飾は、局在化をもたらし、また、タンパク質−タンパク質相互作用および／またはタンパク質−ＤＮＡ相互作用にも寄与すると考えられ、あるいは、シグナリンの本来的な酵素活性の変化または該タンパク質の安定性（例えば、その半減期）の変化を生じさせる。さらに、脊椎動物シグナリン遺伝子産物（生成物は各種の組織内で特異的（選択的）に発現されるようである。略述すれば、シグナリンモチーフ由来の縮合プライマーを用いて、各種の組織からヒトｃＤＮＡを増殖させた。腎臓、肝臓、胚、乳腺、すい臓、脾臓、精巣および胸腺のそれぞれについてのＰＣＲ反応において、シグナリンＰＣＲ生成物に正確に対応するサイズのところで強い主要バンドが見られた。このデータの重要なところは、多様な範囲の成体組織にわたってシグナリン遺伝子生成物が発現されるということである。後述の「A-tract」配列分析により、各組織において多くの異なるシグナリン転写体が発現され得ること、そして、発現のパターンは組織のタイプ毎に異なることが示されており、これらのことは、ＴＧＦβ上位群(superfamily)に属する個々のメンバーに対する組織特異的応答は、各種の組織間におけるシグナリンの特異的発現により少なくとも一部は制御され得るという考えを支持する。このデータが強く示唆するように、シグナリン群が多様であることは、ＴＧＦβ群の各メンバーに対する応答性が多様であるという点から重要である。すなわち、或る１つの細胞が或る特定のＴＧＦβに対して応答する能力、および成長因子による誘導に際して該細胞が与える応答のタイプは、少なくとも部分的には、該細胞内でどのシグナリン遺伝子生成物が発現され、および／または特定のＴＧＦβ因子から伝達されたシグナルによりどのシグナリン遺伝子生成物が拘束された（あるいは変性された）かということに依存し得る。例えば、ＴＧＦβ群のメンバーによる分化シグナル伝達に対しては、特定のシグナリンタンパク質の関与またはその化学量論が重要であると考えられる。ＴＧＦβ亜群、アクチビン亜群、ＤＶＲ亜群（さらに特定すれば60Ａ亜群）、総分子因子１（ＧＤＦ−１）、ＧＤＦ− ３／ＶＧＲ−２、ドーサリン(dorsalin)、ノーダル(nodal)、ミュラー管抑制物質（ＭＩＳ）、あるいはグリア由来好中性成長因子（ＧＤＮＦ）によるシグナル伝達において特定のシグナリンタンパク質が特異的に関与すると考えられる。かくして、本発明は、脊椎動物シグナリンをコードする核酸、シグナリンタンパク質自体、シグナリンタンパク質に免疫応答性のある抗体、およびそれらの物質の調製に関する。さらに、本発明は、例えば脊椎動物シグナリンホモログの異常発現（またはその喪失）のような障害（疾患）を検出し治療するための診断法、治療法および試薬を提供するものである。さらに、シグナリンタンパク質の生物学的機能を調節し得る薬剤を見つけ出すための薬剤探索法を提供し、そのために、例えば、ＴＧＦβシグナル伝達経路の下流または上流成分に対する脊椎動物シグナリンの結合製（ＴＧＦβレセプターとの相互作用など）を変化させる。そのような薬剤は細胞の成長および／または分化を変化させて治療を行うのに有用である。本発明のその他の特徴は以下に記述している。便宜上、本明細書（実施例および請求の範囲を含むにおいて用いている幾つかの用語についてここで説明する。ここで用いている「核酸」という語は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）および、該当する場合には、リボ核酸（ＲＮＡ）のようポリヌクレオチドを指称する。さらに、この語は、等価なものとして、ヌクレオチドアナログから得られるＲＮＡまたはＤＮＡのアナログを包含するものとし、また、例示している態様に該当する場合には、一本鎖（センスまたはアンチセンス）ポリヌクレオチドおよび二本鎖ポリヌクレオチドを包含するものとする。ここで用いている「遺伝子」または「組換え遺伝子」という語は、本発明の脊椎動物シグナリンポリペプチド〔エクソン配列および（必要に応じ）イントロン配列を含む〕の１つをコードするオープンリーディングフレームを含む核酸を指称する。「組換え遺伝子」とは、脊椎動物シグナリンポリペプチドをコードし且つ脊椎動物シグナリンをコードするエクソン配列を含む核酸を指称するが、染色体脊椎動物シグナリン遺伝子由来または非関連染色体遺伝子由来のイントロン配列を含むこともある。本発明の脊椎動物シグナリンポリペプチドをコードする組換え遺伝子の例は添付した配列表に示されている。「イントロン」という語は、所与の脊椎動物シグナリン遺伝子に存在するＤＮＡ配列であって、タンパク質に翻訳されず一般的にはエクソン間に見出されるものを指称する。ここで用いている「トランスフェクション」という語は、核酸を媒体とする遺伝子移行により受容細胞に核酸（例えば発現ベクター）を導入することを意味する。「形質転換」とは、細胞が外因性のＤＮＡまたはＲＮＡを取り込むことにより細胞の遺伝子型が変化させられる過程を指称し、例えば、形質転換細胞は組み換え型の脊椎動物シグナリンポリペプチドを発現し、あるいは、形質転換された遺伝子からアンチセンス発現が生じると天然型のシグナリンタンパク質の発現は起こらなくなる。ここで用いている「特異的にハイブリダイズする」という語は、本発明のプローブ／プライマーが、少なくとも15個の連続したヌクレオチドから成る脊椎動物シグナリン遺伝子、例えば、配列番号：１〜13のいずれに示されるシグナリン配列、またはそれに相補的な配列、または天然に存在するその変異体にハイブリダイズする結果、シグナリンタンパク質以外のタンパク質をコードする細胞核酸（例えば、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡ）に対して15％以下、好ましくは10％以下特に好ましくは５％以下のバックグランドハイブリザイゼーションを有するようにする能力を指称する。好ましい態様においては、オリゴヌクレオチドプローブは、本発明のシグナリンパラログの１種のみを特異的に検出し、例えば、他のシグナリンホモログにハイブリダイズすることはしない。ここで用いている「ベクター」という語は、連結されていた他の核酸を移行する能力のある核酸分子を指称する。好ましいベクターの１つの種類はエピソーム、すなわち、染色体外複製能のある核酸である。好ましいベクターは、該ベクターが連結されている核酸の自己複製および／または発現を行うことのできるものである。作動的に連結された遺伝子の発現を誘導することのできるベクターをここでは「発現ベクター」と指称する。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、「プラスミド」の形態をとるものが多く、ここで、プラスミドとは一般に環状二本鎖ＤＮＡを指称し、ベクター形態をとる場合には染色体に結合されていない。プラスミドが最も一般的に用いられる形態のベクターであるので本明細書においては、「プラスミド」と「ベクター」という語を相互交換的に用いている。但し、本発明は、同様の機能を果たし、当該分野で知られているような他の形態の発現ベクターも包含されるものとする。「転写調節配列」とは、開始シグナル、エンハンサーおよびプロモーターのようなＤＮＡ配列であって、それらが作動的に連結されているタンパク質コード配列の転写を誘導または制御するＤＮＡ配列を指称する一般名称として用いている。好ましい態様においては発現を行おうとする細胞内で組換え遺伝子の発現を制御するプロモーター配列（または他の転写調節配列）下に、組換え脊椎動物シグナリン遺伝子の転写が行われる。そのような組換え遺伝子は、天然型のシグナリンタンパク質を制御するような配列と同一または別異の転写調節配列の制御下に置くことができる。ここで用いる「組織特異的プロモーター」という語は、プロモーターとして機能、すなわち、該プロモーターに作動連結された或る選択されたＤＮＡ配列の発現を調節し、そして、組織の特定の細胞（例えば、肝臓またはすい臓由来の細胞、ニューロン細胞）内における該選択ＤＮＡの発現に影響を与えるようなＤＮＡ配列を意味する。さらに、この語は、主として１つの組織内で或る選択されたＤＮＡの発現を調節するが他の組織における発現も起こすような所謂「リーキー(l eaky)」プロモーターも包含するものとする。ここで用いている「トランスジェニック動物」とは、好ましくは非ヒト哺乳類、鳥または両生類である動物であって、該動物の１つ以上の細胞が人間の介在、例えば当該分野で周知のトランスジェニック技術により導入された異種核酸を含有している動物である。該核酸は、慎重な遺伝子操作（例えば、マイクロインジェクションまたは組換えウイルスを感染させること）により細胞の前駆体中に導入することにより、直接的にまたは間接的に細胞に導入される。ここでの遺伝子操作とは、古典的な交雑育種またはインビトロ受精を包含するものではなく、組換えＤＮＡ分子の導入に関するものである。該分子は染色体内に組み込まれるか、あるいは染色体外複製ＤＮＡになり得る。本明細書で記述する典型的なトランスジェニック動物においては、導入遺伝子（トランスジーン）が細胞に組換え型の脊椎動物シグナリンタンパク質の発現（例えば、アゴニストまたはアンタゴニストとして）を起こさせる。但し、組換えシグナリン遺伝子がサイレントであるトランスジェニック動物（例えば後述するＦＬＰまたはＣＲＥリコンビナーゼ依存性構造体）も包含されるものとする。さらに、「トランスジェニック動物」とは、人間の介在（組換え技術およびアンチセンス技術の両方を含む）により１種またはそれ以上のシグナリン遺伝子の分解（破壊）が起こされているような組換え動物も包含する。本発明における「非ヒト動物」とは、げっ歯類、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、は虫類等の脊椎動物を含む。好ましい非ヒト動物は、ラットおよびマウスを含むげっ歯科から選ばれ、特に好ましいのはマウスであるが、トランスジェニック両生類（例えばアフリカツメガエル属のもの）やトランスジェニックニワトリも、例えば胚形成や組織形成に影響を与える作用物質を理解し明らかにするための重要なツールとなり得る。また、「組織特異的キメラ動物」とは、ある種の組織中では、組換え脊椎動物シグナリン遺伝子の１種が存在しおよび／または発現もしくは破壊されるが、別の組織ではそのようなことが起こらないことを示す。本明細書で用いる「導入遺伝子（トランスジーン）」という語は、核酸配列（例えば脊椎動物シグナリンポリペプチドの１種コードし、あるいはそれに対するアンチセンス転写体を有するもの）であって、該遺伝子が導入されるトランスジェニック動物または細胞に対して部分的または全体的に異種、すなわち、外来性である核酸配列、または、該遺伝子が導入されるトランスジェニック動物または細胞の内因性遺伝子と相同的であるが、該動物のゲノム内に挿入されるように意図されまたは挿入されることにより（例えば、天然の遺伝子の場所とは異なる場所に挿入されたり、挿入によってノックアウトが生じるようにする）挿入後の細胞ゲノムを変性するようにした核酸配列を意味する。選択された核酸の最適な発現に必要とされるような１種以上の転写調節配列およびその他の核酸配列を含み得る。よく知られているように、ある特定のポリペプチドに対する遺伝子は、個体のゲノム内で単一または多数のコピーとして存在し得る。そのような複製遺伝子は、互いに同一のものであるか、または一定の変性（ヌクレオチドの置換、付加または削除など）を受けたが実質的に同じ活性を有するポリペプチドをコードしているものである。かくして、「脊椎動物シグナリンポリペプチドをコードするＤＮＡ配列」とは、特定の個体内における１種以上の遺伝子を指称し得るものとする。さらに、個々生物間にアレルと呼ばれるヌクレオチド配列の相違が存在することもある。そのようなアレルに属する相違は、コードされているポリペプチドのアミノ酸配列の違いを生じながら同じ生物学的活性のタンパク質をコードしていることもある。「ホモロジー（相同性）」とは、２つのペプチド間または２つの核酸分子間における配列の類似性を指称する。ホモロジーは、比較の目的のためにアラインメントさせた（整合させた）各配列における位置を比較することによって決定することができる。被比較配列における或る位置が同一の塩基またはアミノ酸で占められている場合には、それらの分子は該位置において相同である。配列間のホモロジー（相同性）の程度は、それらの配列によって共有されるマッチングすなわち相同（的）な位置の数の関数である。「非関連（非類似）」または「非相同（的）」配列とは、本発明の脊椎動物シグナリン配列のどれかに関する場合、40パーセントより少ない同一部分、好ましくは25％以下の同一部分を共有するものである。「細胞」、「宿主（ホスト）細胞」または「組換え宿主（ホスト）細胞」という語は、同じことを意味するものとして相互変換的に用いている。それらの語は、特定の細胞のみならず、該細胞の子（孫）細胞（後代細胞）または子（孫）細胞（後代細胞）となり得るものも指称するものとする。突然変異または環境の影響により後続の世代においては、変性が起こり得るので、そのような子細胞は実際には親細胞と同一でないこともあり得るが、本明細書で用いる当該用語の範囲に包含されるものとする。「キメラタンパク質」または「融合タンパク質」とは、本脊椎動物シグナリンポリペプチドの１つをコードする第１のアミノ酸配列が、該脊椎動物シグナリンペプチドの１つのいずれのドメインとも異種（外来性）であり実質的に相同性でないドメイン（例えばポリペプチド部分）を定める第２のアミノ酸配列に融合していることである。キメラタンパク質は、第１のタンパク質を発現する生物に見出される異種（外来）ドメインを提供することができ、あるいは、異なる種類の生物によって発現されたタンパク質構造からなる「種間」、「遺伝子間」等の融合体である。一般に融合タンパク質は一般式「Ｘ−シグナリン−Ｙ」によって表すことができ、ここで、「シグナリン」は脊椎動物シグナリンタンパク質の１つから得られるタンパク質の一部分を表し、そして「Ｘ」および「Ｙ」は、それぞれ独立して、或る生物内で該脊椎動物シグナリン配列の１つと関係しないアミノ酸配列を表す。本明細書で用いている「形質転換性成長因子−ベータ」および「ＴＧＦβ」という語は、脊椎動物に遍在し、そして、大多数の後生動物成長因子、分化因子および形態形成因子の典型となる一群の構造的に関連するポリペプチドを表す（総説については、Massaque他、(1990) Ann Rev Cell Biol６：597-641；Massaque 他、（1994）Trends Cell Biol．４：172-178；Kingsley（1994）Gene Dev．８：133-146；およびSpom他、（1992）J．Cell Biol 119：1017-1021を参照）。上述のKingsleyの文献に記述されているように、このＴＧＦβの上位群(superfami ly)は少なくとも25のメンバーを有し、配列の相関性の高さに応じて幾つかの亜群(sub-families)に分類することができる。最も明らかな亜群としては以下のものが挙げられる：ＴＧＦβ亜群、これは、ＴＧＦβ上位群の他のものよりもＴＧＦβ−１にきわめて類似している少なくとも４種類の遺伝子から成る；アクチビン亜群、これは、ホモダイマーまたはヘテロダイマーすなわち２つのサブユニット（インヒビンβ−Ａおよびインヒビンβ−Ｂ）から成る；decapentaplegic亜群、これは皮膚下や筋肉内に移入されると骨逸所や軟骨の形成を引き起こし得る哺乳因子ＢＭＰ２およびＢＭＰ４を含む；60Ａ亜群、これは、骨誘導活性を有する多数の哺乳動物ホモログが含まれる（例えば、ＢＭＰ５−８）。ＴＧＦβ上位群に属する他のメンバーとしては、総分化因子１（ＧＤＦ−１）、ＧＤＦ−３／ＶＧＲ−２、ドーサリン、ノーダル、ミュラー管抑制因子（ＭＩＳ）、グリア由来好中性成長因子（ＧＤＮＦ）が挙げられる。ＤＰＰ亜群および60Ａ亜群は、ＴＧＦβ上位群の他のメンバー同志よりも互いに最も類似した関係にあり、ともに、ＤＶＲ（ｄｐｐおよびｖｇ１ｒｅｌａｔｅｄ）と呼ばれる分子集団の一部として分類されることが多い。文脈から明らかでない限り、本明細書を通して用いるＴＧＦβという語は、一般にＴＧＦβ上位群に属するメンバーを指称するものとする。ＴＧＦβ亜群に属するもの（メンバー）を指称するのは、明示しているかＴＧＦβという語を用いている文脈から明らかな場合とする。核酸（例えばＤＮＡまたはＲＮＡ）に関連して用いる「単離された」という語は、巨大分子（マクロ分子）から成る天然源に存在する他のＤＮＡまたはＲＮＡから分離された分子を指称する。例えば、本発明の脊椎動物シグナリンポリペプチドの１つをコードする単離された核酸とは、好ましくは、ゲノムＤＮＡ中で該脊椎動物シグナリン遺伝子を挟んで〔フランキングして〕天然に存在する10キロベース（ｋｂ）以下の核酸を含むものであり、さらに好ましくは、そのような天然に存在するフランキング配列の５ｋｂ以下を含み、最も好ましくは、そのような天然に存在するフランキング配列の1.5ｋｂ以下を含むものである。さらに、ここで用いていてる「単離された」という語は、組換えＤＮＡ技術による場合には細胞由来の物質、ウイルス由来の物質または培地が実質的に存在せず、また、化学合成による場合には化学的前駆体やその他の化学物質が実質的に存在しない核酸またはペプチドを指称する。また、「単離された核酸」とは、フラグメントとして天然に存在せず、天然型では見出されないと考えられる核酸配列を含むものとする。後述するように、本発明はその１つの態様として、脊椎動物シグナリンポリペプチドをコードする核酸配列を含む単離された核酸、および／またはそのような核酸の等価物に関する。ここで、核酸という語は、等価物としてそのフラグメント（断片）を含むものとする。等価物という語は、機能的に等しいシグナリンポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、あるいは、本明細書に記述している脊椎動物シグナリンタンパク質の１つの活性を有するような機能的に等しいペプチドを含むものとする。等価なヌクレオチド配列とは、１ヶ以上のヌクレオチドの置換、付加または欠失により相違する配列（例えばアレル変異体）を含み、したがって、遺伝子コードの縮重により、配列番号：１〜13のいずれかに示される脊椎動物シグナリンｃＤＮＡ配列のヌクレオチド配列と相違する配列を含む。等価物は、さらに、ストリンジェントコンディション（すなわち、約１Ｍの塩中で形成されるＤＮＡ二本鎖の融合（Ｔｍ）よりも約20〜27℃低い温度に相応する）下に配列番号：１〜13のいずれかで表される配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列も含む。１つの態様として、等価物は、配列番号：１〜13のいずれかに示されるヌクレオチド配列から誘導され、進化上それに関連している核酸配列も含む。さらに、特定の状況下では、本発明のシグナリンポリペプチドの１種のホモログであって、限られた性能でシグナリンアゴニスト(模倣体：mimetic)またはシグナリンアンタゴニストとして機能し、天然型の該タンパク質の生物学的活性の一部を促進または抑制するようなホモログを提供するのが有利なことがある。すなわち、限られた機能を有するホモログを用いる治療により特定の生物学的効果が引き起こされ、そして、天然型のシグナリンタンパク質の生物学的活性全てに対するアゴニストまたはアンタゴニストを用いる治療に比べて副作用も少ない。本シグナリンタンパク質は突然変異法、例えば、点突然法や切端法(truncatio n)により調製することができる。例えば、突然変異法により、元のシグナリンポリペプチドの生物学的と実質的と同じ活性または単にその一部を保持するホモログが得られる。また、アンタゴニスト型のタンパク質を形成することもでき、これは、例えば、シグナリンタンパク質を含むシグナル伝達カスケードの下流または上流のメンバーに競合的に結合することにより天然型のタンパク質の機能を抑制することができる。さらに、構成上活性なアゴニスト型のタンパク質を生成させることもできる。このように、本発明によって提供される脊椎動物シグナリンタンパク質またはそのホモログは、ＴＧＦβ類によるシグナル伝達の陽性（正の）調節剤または陰性（負の）調節剤のいずれにもなり得る。一般的に、本明細書において活性（例えば、「生理活性(bioactive)」）を有するものとして言及されているポリペプチドは、配列番号：14〜26の１種以上に示される脊椎動物シグナリンタンパク質のアミノ酸配列の全てまたは一部に対応する（例えば、同一であるか、または相同（的）である）アミノ酸配列を含む、そして、天然に存在するシグナリンタンパク質の生物学的／生化学的活性の全てまたは一部分を模擬し(mimic)または拮抗するポリペプチドと定義される。そのような生物学的活性の例としては、発生過程の脊椎動物胚の中胚葉または外胚葉組織の形成および分化を誘導する（または調節する）能力が挙げられる。したがって、本ポリペプチドは、幹細胞または生殖細胞（脊索中胚葉、背面中胚葉、中間中胚葉、側方中胚葉、頭間葉由来の細胞、上皮細胞、神経管または神経冠由来の細胞等）の分化または生存を誘導しおよび／または維持する能力によって特徴づけることができる。さらに、本発明のシグナリンタンパク質は、器官形成を調節する能力（例えば、骨格形成能により肢体のパターニングに影響を与える能力を介して）のような生物学的活性を有し得る。さらに、シグナリンを特徴づけるものとして、繊維芽細胞のような細胞および免疫系の細胞の増殖を誘導または抑制する能力を挙げることもできる。シグナリンのその他の効果は、組織の維持および発生後修復（例えば、骨修復または創傷治癒）に見ることができる。本発明のシグナリンタンパク質に関連する生物学的活性としては、性的成熟または生殖を調節する能力（ミュラー管の回帰における機能、乳汁分または卵胞刺激ホルモンの生成および精子形成の調節など）を挙げることができる。本シグナリンタンパク質の生理活性としては、さらに、遺伝子の転写速度を変化させる能力が挙げられ、これは、例えば、ホモオリゴマーまたはヘテロオリゴマーの組成を有する転写複合体に関係する（活性化したり、または抑制する）ことによったり、あるいは、転写複合体を構成するタンパク質の性能や適応性を変えることにより該複合体の組成を変えることによる。さらに、シグナリン遺伝子の生成物（産物）は、他の細胞タンパク質の翻訳後の修飾（変性）にも関与しており、これは、例えば、固有の酵素活性の作用によったり、あるいは、酵素複合体の調節サブユニットとして、および／またはシャペロンとして機能することによる。本シグナリンタンパク質の更に別の生理活性としては、ＴＧＦβレセプター、またはそのサブユニット、特にリガンドの結合したレセプターコンプレックスと相互作用する能力がある。本明細書には、本シグナリンタンパク質の他の生物学的活性も記述しているが、当業者には明らかであろう。本発明に従えば、或るペプチドが、天然型の脊椎動物シグナリンタンパク質の特異的アゴニストまたはアンタゴニストである場合には該ペプチドは生物活性を有している。好ましい核酸は、例えば、配列番号：14、16、18、20および24から成る群より選ばれるようなヒトまたはアフリカツメガエルのα−シグナリンのアミノ酸配列と少なくとも60％の相同性、好ましくは70％の相同性、そして最も好ましくは80 ％の相同性を有するアミノ酸配列を含む脊椎動物α−シグナリンポリペプチドをコードするものである。配列番号：14、16、18、20および24のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約90％、より好ましくは少なくとも約95％、そして最も好ましくは約98〜98％の相同性を有するポリペプチドをコードする核酸も、勿論、本発明の範囲にある。１つの態様においては該核酸は、本脊椎動物シグナリンペプチドの少なくとも１つの活性を有するペプチドをコードするｃＤＮＡである。好ましくは、該核酸は、配列番号：１、３、５、７または11のコード領域に対応するヌクレオチド配列の全部または一部を含むものである。好ましい態様として、本発明は、45ｋｄから70ｋｄの範囲の分子量を有する精製されたまたは組換えによるポリペプチドを提供する。例えば、α亜群およびβ 亜群の好ましいシグナリンポリペプチド鎖は、45ｋｄから約55ｋｄの範囲、さらに好ましくは50〜55ｋｄの範囲の分子量を有する。他の例として、γ亜群の好ましいシグナリンポリペプチド鎖は、60ｋｄから約70ｋｄの範囲、さらに好ましくは63〜68ｋｄの範囲の分子量を有する。ある種の翻訳後修飾（例えば、リン酸化等）は、シグナリンタンパク質のみかけの分子量を非修飾ポリペプチド鎖に比べて増大させ得る。他の態様において好ましい核酸は、ヒトまたはアフリカツメガエルのβ−またはγ−シグナリンのアミノ酸配列、例えば、配列番号：15、17、19、21、22および23から成る群より選ばれるものに少なくとも50％の相同性、好ましくは60％の相同性、より好ましくは70％の相同性、最も好ましくは80％の相同性を有するアミノ酸配列を有する脊椎動物β−またはγ−シグナリンの生理活性フラグメントをコードする。配列番号：15、17、19、21、22および23のいずれかに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約90％、より好ましくは少なくとも約95％、そして最も好ましくは約98〜99％の相同性を有するか、または、それと同一のポリペプチドをコードする核酸も本発明の範囲に属する。本発明に従う別の好ましい核酸は、配列番号：14のアミノ酸残基225〜300または配列番号：15のアミノ酸残基230〜301の全部または一部（例えばそれらの部分の少なくとも５、10、25または50ヶのアミノ酸残基）に対応するポリペプチドを含むα−シグナリンポリペプチドをコードするものである。同様に、γ−シグナリンポリペプチドをコードする好ましい核酸は、配列番号：15のアミノ酸残基18 6〜304の全部または一部に対応するポリペプチド配列の配列を含む。さらに好ましい核酸は、配列番号：15の残基262〜304由来のポリペプチド配列の全部または一部に対応するアミノ酸配列を含むγ−シグナリンポリペプチドをコードする。他の好ましい態様においてはシグナリン核酸は、配列番号：17のアミノ酸残基17 9〜332の全部または一部に対応するポリペプチド配列を含むβ−シグナリンポリペプチド配列をコードする。さらに好ましい核酸は、配列番号：17のアミノ酸残基260〜332由来のポリペプチド配列の全部または一部に対応するアミノ酸配列を含むβ−シグナリンポリペプチドをコードするものである。本発明は、別の態様として、配列番号：１〜13のいずれかで表される核酸に高または低ストリンジェンシィコンディション下にハイブリダイズする核酸を提供する。ＤＮＡハイブリダイゼーションを促進する好適なストリンジェンシィコンディション（緊縮条件）、例えば、6.0×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）（約45℃）の後、2.0×ＳＳＣ（50℃）で洗浄することなどは、当業者には知られており、あるいは「Current Protocols in Molecular Biology，米国ニューヨーク州John Wiley & Sons社発行(1989)、6.3.1-6.3.6.」に見出すことができる。例えば、洗浄工程の塩濃度は、低ストリンジェンシィである約2.0 ×ＳＳＣ（50℃）から高ストリンジェンシィである約0.2×ＳＳＣ（50℃）の範囲から選択することができる。さらに、洗浄工程における温度は、低ストリンジェンシィコンディションである室温から、高ストリンジェンシィコンディションである約60℃に上昇させることもできる。遺伝子コードの縮重に因り配列番号：１〜13のいずれかに示されるヌクレオチド配列と異なる配列を有する核酸も本発明に包含される。そのような核酸は、機能上は等価のペプチド（すなわち、脊椎動物シグナリンポリペプチドの生物学的活性を有するペプチド）をコードするが、遺伝子コードの縮重により配列表に示されてる配列とは異なる配列を有する。例えば、多くのアミノ酸が複数のトリプレットで表される。同一のアミノ酸を特定するコドン、すなわち同義コドン（例えば、ＣＡＵおよびＣＡＣはいずれもヒスチジンをコードする）は、或る脊椎動物ポリペプチドのアミノ酸配列に影響しない「サイレント」変異を引き起こし得る。しかしながら、本シグナリンポリペプチドのアミノ酸配列の変化をもたらすようにＤＮＡ配列の多型性が脊椎動物の間に存在することが予期される。所与の種の個体間においては自然のアレル変異に因り、或る脊椎動物シグナリンポリペプチドの或る活性を有するポリペプチドをコードする核酸に１ヶまたはそれ以上のヌクレオチド変化（ヌクレオチドの３〜５％位まで）が生じていることは当業者であれば理解するであろう。本明細書において用いているシグナリン遺伝子フラグメントとは、成熟型の脊椎動物シグナリンタンパク質全体をコードするヌクレオチド配列よりも少ない数のヌクレオチドを有するが、全長タンパク質の或る生物学的活性を保持するポリペプチドを（好ましくは）コードしているような核酸を指称する。本発明において意図しているフラグメントのサイズは、例えば、５、10、20、50、70、100または200個のアミノ酸から成る長さを有するものである。後述の実施例に示すように、シグナリンタンパク質をコードする核酸は、多くの真核細胞のいずれかに存在するｍＲＮＡから入手することができる。また、成体または胚由来のゲノムＤＮＡから、本発明の脊椎動物シグナリンポリペプチドをコードする核酸を得ることもできる。例えば、本明細書に記述しているようなプロトコールに従い、あるいは当業者に一般的に知られているような手法にしたがって、ｃＤＮＡまたはゲノムライブラリーから、シグナリンタンパク質をコードする遺伝子をクローニングすることができる。シグナリンタンパク質をコードするｃＤＮＡは、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞。胚細胞も含む）のような細胞から全ｍＲＮＡを単離することによって得ることができる。次に、この全ｍＲＮＡから二本鎖ｃＤＮＡを調製した後、多くの既知の手法を用いて適当なプラスミドまたはバクテリアファージに挿入する。また、脊椎動物シグナリンタンパク質をコードする遺伝子は、本発明によって提供されたヌクレオチド配列情報に従い、よく知られたポリメラーゼ連鎖反応を用いてクローニングすることもできる。本発明の核酸はＤＮＡであってもよくＲＮＡであってもよい。好ましい核酸の１つは、配列番号：１〜13から成る群より選ばれる配列によって表されるｃＤＮＡである。さらに本発明は、「アンチセンス」療法において単離された核酸を使用することにも関する。ここで用いている「アンチセンス」療法とは、本脊椎シグナリンタンパク質の１種またはそれ以上をコードする細胞ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡ、細胞条件下に特異的にハイブリダイズ（例えば結合）して、該タンパク質の発現を抑制する（例えば、転写および／または翻訳を抑制することによる）ようなオリゴヌクレオチドプローブまたはそれらの誘導体を投与しまたはインサイチュ形成させることを指称する。結合は、よく知られた塩基対の相補性によったり、あるいは、例えば、ＤＮＡ二本鎖に結合する場合には、二重らせんの主要空隙における特異的相互作用を介して行われる。一般に「アンチセンス」療法とは、当該分野で一般的に採用されている全範囲の技術を指称するものとし、オリゴヌクレオチドに対する特異的結合に基づく全ての治療法を含むものとする。アンチセンス構造体は、例えば、発現プラスミドとして提供され、これは、細胞内で転写されると、脊椎動物シグナリンタンパク質をコードする細胞ｍＲＮＡの少なくとも特性部分に相補的なＲＮＡを産生する。別の方法として、アンチセンス構造体を半ビボ(ex vivo)形成したオリゴヌクレオチドプローブとし、細胞内に導入されたときに脊椎動物シグナリン遺伝子のｍＲＮＡおよび／またはゲノム配列にハイブリダイズすることにより発現の抑制をもたらすようにする。そのようなオリゴヌクレオチドは、好ましくは、内生ヌクレアーゼ（例えばエンドヌクレアーゼ）および／またはエキソヌクレアーゼに抵抗性があり、従って、インビボで安定な修飾オリゴヌクレオチドが好ましい。アンチセンスオリゴヌクレオチドとして使用される核酸分子の配列は、ＤＮＡのホスホルアミデート、ホスホチオエートおよびメチルホスホネートアナログである（米国特許第5,176,996号、第5,264,564号および第5,256,775号も参照されたい）。また、アンチセンス療法に有用なオリゴマーを構築する一般的方法については、例えば「Van der Kro 他(1988)Biotechniques 6:958-976」および「Stein他(1988)Cancer Res 48:2659 -2668」において総説されている。かくして、本発明の修飾（変性）オリゴマーは、治療、診断および研究目的に有用である。治療用途においては、一般的なアンチセンス療法に適するような方式で用いられる。そのような治療用には、本発明のオリゴマーを各種の投与形態（例えば、全身投与または局所投与）に適するように調製され得る。一般的な技術や調剤法については「RemmingtonのPharmaceutical Sciences,米国ペンシルバニア州EastonのMeade Publixhing Co.発行」に見出される。全身投与の場合は、注射が好ましく、例えば筋肉内注射、静脈（内）注射、腹腔内注射および皮下注射などがある。注射用には本発明のオリゴマーは液体状、好ましくはHank液やRi nger液のような生理学的に受け入れられる緩衝液に溶かした溶液として調剤される。さらに、本発明のオリゴマーは固体状に調製しておき、使用直前に再溶解または懸濁させることもできる。さらに、凍結形態も含まれる。全身投与は、経粘膜的手段または経皮膚的手段によって行うこともでき、あるいは、該化合物を経口投与することもできる。経粘膜または経皮投与用には、浸透すべき障壁に適した浸透剤を調剤に際して用いる。そのような浸透剤は当該分野で一般的に知られており、例えば、経粘膜投与用には胆汁塩やフジシン酸誘導体が挙げられる。さらに、洗剤を用いて浸透を促進することもできる。経粘膜投与は、経鼻スプレーにより、あるいは坐剤を用いて行うことができる。経口投与用には、従来より知られた経口形態、例えばカプセル、錠剤、トニックにオリゴマーが調剤される。局所投与用には本発明のオリゴマーは当該分野で一般的に知られているような軟膏、ゲルまたはクリームなどに調製される。治療用途の他に、本発明のオリゴマーは、標的ＤＮＡまたはＲＮＡに特異的に結合してそれらの有無を検出する診断試薬としても使用することができる。そのような診断テストについては後に詳述する。同様に、本発明のアンチセンス構造体は、シグナリンタンパク質の１種の通常の生物学的活性を拮抗することにより、インビボおよび半ビボの組織培養のいずれにおいても組織を操作する（例えば、組織の分化）のに使用することができる。さらに、アンチセンス技術（例えば、アンチセンス分子のマイクロインジェクション、あるいは、シグナリンｍＲＮＡまたは遺伝子配列に対して転写体がアンチセンスであるようなプラスミドを用いるトランスフェクション）を用いて、発生過程のシグナリンの役割、さらには、成体組織の平常な細胞の機能を研究することができる。そのような手法は細胞培養に利用できるが、トランスジェニック動物の創製に使用することもできる。本発明は、さらに、少なくとも１つの転写調節配列に作動的に結合された脊椎動物シグナリンポリペプチドをコードする核酸を含有する発現ベクターを提供する。作動的に結合されたとは、ヌクレオチド配列が調節配列に連結されて該ヌクレオチド配列の発現が可能になっていることを意味する。調節配列は当該技術分野で認められており、本脊椎動物シグナリンタンパク質の発現が導かれるように選択される。したがって、転写調節配列とは、プロモーター、エンハンサーおよびその他の発現制御配列を含む。そのような調節配列については「Goeddel著；G ene Expression Technology：Methods in Enzymology 185，米国カルフォルニア州San DiegoのAcademic Press社発行(1990)」に記述されている。例えば、ＤＮＡに作動的に連結されると該ＤＮＡの発現を制御し得る広範囲の発現制御配列のいずれかをベクターに使用して、本発明の脊椎動物シグナリンポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を発現されることができる。そのような有用な発現制御配列としては、例えば、ウイルスＬＴＲ（例えば、Moloneyマウス白血病ウイルスのＬＴＲ）、ＳＶ40の初期および後期プロモーター、アデノウイルスまたはサイトメガロウイルスの即初期プロモーター、lac系、trp系、ＴＡＣまたはＴＲＣ系、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼにより発現が誘導されるＴ７プロモーター、ファージ１(phage 1)の主要オペレーターおよびプロモーター領域、ｆｄコートタンパク質の制御領域、３−ホスホグリセレートキナーゼまたはその他の解糖酵素のプロモーター、酸ホスファターゼのプロモーター(例えばPho 5)、酵母交配因子のプロモーター、バキュロウイルス系のポリヘドロンプロモーター、および原核細胞もしくは真核細胞またはそれらのウイルスの遺伝子の発現を制御するものとして知られたその他の配列、ならびにこれらを組み合わせたものが挙げられる。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択および／または発現させようとしているタンパク質の種類のような因子に依存する。さらに、ベクターのコピー数、該コピー数やベクターによってコードされるその他のタンパク質（例えば抗生物質マーカー）の発現を制御する能力も考慮しなければならない。１つの態様として、該発現ベクターは、脊椎動物シグナリンポリペプチドのアゴニスト活性を有するペプチドをコードするか、あるいは、該シグナリンポリペプチドのアンタゴニストであるペプチドをコードする組換え遺伝子を含む。そのようなベクターを用いて細胞をトランスフェクションすることにより、本明細書に記述しているような核酸によってコードされているポリペプチド（融合タンパク質を含む）を産生させることができる。さらに、本発明の遺伝子構造体は、遺伝子治療の一部として使用され、本脊椎動物シグナリンタンパク質のアゴニストまたはアンタゴニストをコードする核酸を供給することができる。すなわち、本発明は、別の態様として、特定の細胞内において脊椎動物シグナリンポリペプチドのインビボまたはインビトロのトランスフェクションおよび発現を行うための発現ベクターであって、天然型の該タンパク質が誤発現される組織においてシグナリン誘導シグナル伝達（シグナリング）の機能を再構成するか、もしくは該機能を排除したり；または、組織の分化を変化させたり、もしくは細胞形質転換を抑制するような形態タンパク質を供給するような発現ベクターに関する。本発明の脊椎動物シグナリンポリペプチドまたはその変異体の発現構造体は、生物学的に有効な任意の形態で投与することができ、例えば、該組換え遺伝子をインビボで細胞内に効果的に供給し得るような製剤または組成で投与することができる。具体的な方法に際しては、該遺伝子をウイルス性ベクター（組換えレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、単純ヘルペスウイルス１など）またはバクテリアプラスミドもしくは真核生物プラスミドに挿入する。ウイルス性ベクターは細胞を直接トランスフェクションする。プラスミドＤＮＡの供給は、例えばカチオン性リポソーム（リポフェクチン）または誘導体化（例えば抗体結合した）ポリリシン複合体、グラマシジンＳ、人工的なウイルスエンベロープまたはその他の細胞間キャリアの助けにより行うことができ、さらに、遺伝子構造体を直接注入したり、インビボでＣａＰＯ₄沈析を実施することもできる。標的細胞の形質導入（トランスダクション）は遺伝子治療における重要な最初の工程であるので、どの遺伝子供給システムを選ぶかということは、意図している標的の表現型や投与経路（例えば、局所投与か全身投与か）というような因子に依存する。さらに、シグナリン発現のインビボトランスダクション用に提供された遺伝子構造体は、細胞のインビトロトランスダクション用（例えば、後述する半ビボ組織培養に用いられるような場合）にも有用である。細胞内に核酸をインビボ導入するのに好ましい方法は、所望する特定のシグナリンポリペプチドをコードする核酸（例えばｃＤＮＡ）を含有するウイルスベクターを使用することである。細胞にウイルスベクターを感染させる利点は、大量の標的細胞が該核酸を受容することである。さらに、該ウイルスベクター内にコードされている分子（例えば、ウイルスベクターに含有されているｃＤＮＡによる）が、ウイルスベクターの核酸を取り込んだ細胞内で効率的に発現される。レトロウイルスベクターおよびアデノ関連ウイルスベクターは、外来性遺伝子をインビボで移入する（特にヒト内に）組換え遺伝子供給システムとして一般に考えられている。これらのベクターは細胞内に遺伝子を効率的に供給し、そして、移入された核酸は宿主の染色体ＤＮＡ内に安定して組み込まれる。レトロウイルスを使用する場合の最も必要なことは、その使用の安全性、特に野性型のウイルスが細胞集団に拡がる可能性を確認しておくことである。複製欠損したレトロウイルスのみを産生するような特性化された細胞系（「パッケージング細胞」と称する）の開発により遺伝子治療におけるレトロウイルスの有用性が増大しており、そして、遺伝子治療における遺伝子移入に使用される欠損レトロウイルスについて充分な特性分析がなされている(総説については、Miller，A．D．(1990)Blood 76:271)。かくして、レトロウイルスをコードする配列(gag，pol，env)の一部が本発明タンパク質の１つをコードする核酸によって置換されて該レトロウイルスの複製が欠損しているような組換えレトロウイルスを構築することができる。複製欠損性の該レトロウイルスは次にビリオン内にパッケージされて、標準的な手法に従いヘルパーウイルスを使用することにより標的細胞を感染させることができる。組換えレトロウイルスを構築し、そのようなウイルスで細胞をインビトロまたはインビボ感染させるための方法は「Current Protocols in Molecular B iology，Ausubel，F．M．他編、Greene Publishing Associates，(1989)．Secti ons 9.10-9.14」および他の標準的な実験マニュアルに見出される。好適なレトロウイルスの例としては、当業者によく知られているｐＬＪ，ｐＺＩＰ，ｐＷＥおよびｐＥＭが挙げられる。レトロウイルスシステムを調製するための好適なパッケージングウイルス系の例としては、ΨＣｒｉｐ、ΨＣｒｅ、Ψ２およびΨＡｍが挙げられる。レトロウイルスは、多くの異なる細胞（ニューロン細胞を含む）にインビトロおよび／またはインビボで各種の遺伝子を導入するのに用いられてきた（例えば、Eglitis他(1985)Science 230:1395-1398；Danos およびMulli gan（1988）Proc．Natl．Acad．Sci．USA 85:6460-6464；Wilson他(1988) Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 85:3014-3018；Armentano他(1990)Proc．Natl．Acad． Sci．USA 87:6141-6145；Huber他(1991)Proc．Natl Acad．Sci USA 88:8039-804 3；Ferry他(1991)Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:8377-8381；Chowdhury他(199 1) Science 254:1802-1805；van Beusechem他(1992)Proc．Natl．Acad．Sci．US A 89:7640-7644；Kay他(1992)Human Gene Therapy 3:641-647:Dal他(1992)Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 89:10892-10895；Hwu他(1993)J．Immunol．150:4104-4 115；米国特許第4,868,116号;米国特許第4,980,286号;PCT出願WO 89/07136；PCT 出願WO 89/02468;PCT出願WO 89/05345；ならびにPCT出願WO 92/07573参照）。さらに、ウイルス粒子表面のウイルスパッケージングタンパク質を変性させることにより、レトロウイルス感染範囲、したがってレトロウイルス系ベクターの感染範囲に制限を与えることもできることが示されている（例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ93/25234およびＷＯ94/06920参照）。例えば、レトロウイルス系ベクターの感染範囲を変性する手段としては次のものが挙げられる：細胞表面抗原に特異的な抗体をウイルスのｅｎｖタンパク質にカップリング（結合）させる(Roux他(19 89)PNAS 86:9079-9083；Julan他(1992)J．Gen Virol 73:3251-3255；Gound他（1 983）Virology 163:251-254);または、細胞表面レセプターリガンドをウイルスのｅｎｖタンパク質にカップリングさせる（Neda他(1991)J Biol Chem 266:1414 3-14146）。カップリングは、タンパク質との架橋またはその他の態様（例えば、ラクトースはｅｎｖタンパク質をアシアロ糖タンパク質に変える）で行われ、さらに、融合タンパク質（例えば一本鎖抗体／ｅｎｖ融合タンパク質）を生成することにもよる。これらの技術は、特定の種類の組織に対する感染を制限し、あるいは該感染を導くのに有用なものであるが、エコトロピックなベクターをアンホトロピックなベクターに変えるのにも使用できる。さらに、レトロウイルスベクターのシグナリン遺伝子の発現を制御するような組織特異的または細胞特異的な転写調節配列を使用することによりレトロウイルス遺伝子供給システムの有用性をさらに向上させることができる。本発明において有用な他のウイルス系遺伝子供給システムはアデノウイルス由来ベクターを利用するものである。アデノウイルスのゲノムを操作して、目的としている遺伝子生成物をコードし発現はするが、通常のウイルスの溶解ライフサイクル内で複製する能力に関しては不活性されるようにすることができる。例えば、Berkner他(1988) Biotechniques 6:616；Rosenfeld他(1991)Science 252:43 1-434；およびRosenfeld他(1992) Cell 68:143-155を参照。アデノウイルス菌株Ａｄタイプ５ｄｌ３２４やその他のアデノウイルス株（例えば、Ａｄ２、Ａｄ３、Ａｄ７等）由来の好適なアデノウイルスベクターが当業者には知られている。組換えアデノウイルスは、いろいろな種類の細胞、例えば、気道上皮細胞（Ro senfeld他(1992)上で引用）、内皮細胞(Lemarchand他(1992)Proc．Natl．Acad． Sci．USA 89:6482-6486)、肝細胞(Herz and Gerard（1993）Proc．Natl.Acad．S ci．USA 90:2812-2816)および筋肉細胞(Quantin他(1992)Proc．Natl．Acad．Sci ．USA 89:2581-2584)を感染させるのに使用できる点において一定の状況下では有利である。さらに、このウイルスの粒子は比較的安定であり、精製や濃縮を受けやすく、そして、上述したように感染度を変化させるように変性させることができる。さらに、導入されたアデノウイルスＤＮＡ（およびその中に含有されている外来ＤＮＡ）は、宿主細胞に取り込まれずエピソープとして保持され、したがって、導入ＤＮＡが宿主ゲノムに取り込まれた場合（例えば、レトロウイルスＤＮＡ）の挿入突然変異によって招来される可能性のある問題を回避することができる。また、外来ＤＮＡに対するアデノウイルスゲノムの保持能力（最大８キロ塩基対）は、他の遺伝子供給ベクターに比べて比較的大きい(Berkner 他、上述;Haj-AhmandおよびGraham（1986）J．Virol．57:267)。現在使用されており、したがって、本発明に好ましい多くの複製欠損性アデノウイルスベクターは、ウイルスのＥ１およびＥ３遺伝子の全部または一部が欠損しているがアデノウイルスの遺伝子情報の80％は保持されている（例えば、Jones他、(1979)Cell 16:683；Berkner 他、上述；およびCraham他によるMethods in Molecular Biol ogy，E．J．Murray，Ed．(Humana，Clifton，NJ，1991)vol．7．pp.109-127参照）。挿入されたシグナリン遺伝子の発現は、例えば、Ｅ１Ａプロモーター、主要後期プロモーター（ＭＬＰ）および関連するリーダー配列、Ｅ３プロモーター、または外来性の付加プロモーター配列の制御下に行うことができる。本発明の脊椎動物シグナリン遺伝子を供給するのに有用な他のウイルスベクター系は、アデノ関連ウイルス(AAV：adeno-associated virus)である。アデノ関連ウイルスは、効率的な複製および生産ライフサイクルのためにヘルパーウイルスとして他のウイルス（例えば、アデノウイルスまたはヘルペスウイルス）を必要とする天然に存在する欠損ウイルスである（総説については「Muzyczka他、Cu rr．Topics in Micro．and Immunol．(1992)158:97-129参照）。さらに、ＤＮＡを非分裂細胞内に組み込むことがあり、そして安定な組込みが高頻度で起こる数少ないウイルスの１つである（総説については、例えば、Flotte他(1992)Am．J ．Respir．Cell．Mol．Biol．7:349-356；Samulski他、(1989)J．Virol．63:382 2-3828;およびMcLaughlin他、(1989)J．Virol．62:1963-1973を参照）。300塩基対というような少量のＡＡＶをパッケージし組み込むことができる。外来ＤＮＡのスペースは約4.5kbに限られている。「Tratschin他、(1985)Mol．Cell．Biol ．5:3251-3261」に記載されているようなベクターを用いて細胞内にＤＮＡを導入することができる。ＡＡＶベクターを用いて各種の核酸がいろいろなタイプの細胞内に導入されている（例えば、Hermonat他、(1984)Proc．Natl．A cad．Sci．USA 81:6466-6470；Tratschin H他(1985)Mol．Cell．Biol．4:2072-2 081；Wondisford他(1988)Mol．Endocrinol.2:32-39；Tratschin他(1984)J．Viro l．51:611-619;およびFlotte他(1993)J．Biol．Chem．268:3781-3790参照）。上述したようなウイルスを用いる移入方法の他に、非ウイルス系方法を用いて動物組織内で本シグナリンポリペプチドを発現させることもできる。遺伝子を移入するための非ウイルス系方法の多くは、巨大分子を取込み移送する哺乳動物細胞の通常のメカニズムに依存している。好ましい態様においては、本発明の非ウイルス系遺伝子供給システムは、標的細胞により本シグナリンポリペプチドが取り込まれる細胞内経路に依存する。臨床においては、治療用の該遺伝子供給系は、当該技術分野で周知の多数の方法のいずれかを用いて患者内に導入することができる。例えば、この遺伝子供給系から成る薬剤を全身に導入（例えば、静脈注射による）することができ、主として、該遺伝子供給媒体（ビヒクル）によって与えられる形質導入特異性から、標的細胞内へのタンパク質の特異的な形質導入が起こり、転写調節配列による細胞型または組織型発現がレセプター遺伝子の発現やその組合せを制御する。他の態様においては、動物への導入を局在化することにより組換え遺伝子の当所の供給は制限される。例えば、カテーテル（米国特許第5,328,470号）やステレオタクチック注入（例えば、Chen他(1994)PANS 91:3054-3057）により、遺伝子供給媒体（ビヒクル）を導入することができる。脊椎動物遺伝子（例えば、配列番号：１〜13から成る群に現れるクローンのいずれか）は、例えば、「Dev他による（1994）Cancer Treat Rev．20:105-115」に記載の手法に従うエレクトロポーレーションにより遺伝子治療構造体として供給することができる。遺伝子治療構造体から成る薬剤は、許容できる稀釈剤に遺伝子供給系を入れて構成され、あるいは、緩慢な放出マトリック中に遺伝子供給媒体（ビヒクル）を埋設して構成される。別のやり方として、組換え細胞（例えば、レトロウイルスベクター）からインタクトの状態で完全な遺伝子供給系を得ることができる場合には、該遺伝子供給系を産生する１種またはそれ以上の細胞から該薬剤を構成することができる。本発明は、また、組換え形態のシグナリンタンパク質にも関する。組換えポリペプチド（天然のシグナリンタンパク質に加えて、本発明によって提供されるもの）は、配列番号：14〜26のいずれかで表されるアミノ酸配列に少なくとも60％の相同性、好ましくは70％の相同性、そして最も好ましくは80％の相同性を有するものである。シグナリンタンパク質の活性（すなわち、アゴニスト活性またはアンタゴニスト活性）を保有し、そして、配列番号：14〜26から成る群より選ばれる配列に、少なくとも90％、好ましくは95％、そして最も好ましくは約98〜99 ％の相同性を有するポリペプチドも本発明の範囲に包含される。「組換えタンパク質」という語は、組換えＤＮＡ技術により産生された本発明のポリペプチドであって、一般的には、脊椎動物シグナリンペプチドが適当な発現ベクター内に挿入され、該ベクターが宿主細胞を形質転換して該異種タンパク質を産生するようになっているものを指称する。また、組換えシグナリン遺伝子に関して「〜から誘導された（〜由来の）」という表現は、「組換えタンパク質」を意味する場合、天然（自生）のシグナリンタンパク質のアミノ酸配列、またはそれに類似し天然型のタンパク質の変異（置換および削除（切端を含む）など）により生成したアミノ酸配列を有するタンパク質を含むものとする。さらに本発明は、脊椎動物、特に哺乳動物（例えばヒト）由来の遺伝子によってコードされ、そして、配列番号：14〜26に表されるシグナリンタンパク質に進化的に関係するアミノ酸配列を有するシグナリンポリペプチドの組換え形態に関する。そのようなシグナリンポリペプチドは、好ましくは、アゴニストまたはアンタゴニストとして、添付した配列表の野性型（「真性」）シグナリンタンパク質の少なくとも１種の生物学的活性を発揮することができるものである。脊椎動物シグナリンタンパク質に関して「進化的に関係する」という語は、天然由来のアミノ酸配列を有するポリペプチド、および、例えば組換え突然変異により誘導された脊椎動物シグナリンポリペプチドの変異体の両方を指称する。本発明において好ましいそのように進化的に関係するシグナリンタンパク質ポリペプチドは、配列番号：14〜26から成る群より選ばれるアミノ酸配列に、少なくとも50％の相同性、好ましくは60％の相同性、さらに、好ましくは70％の相同性、そして最も好ましくは80％の相同性を有するものである。配列番号：14〜26から成る群より選ばれる配列に、少なくとも約90％、好ましくは約95％、そして最も好ましくは約98〜99％の相同性を有するポリペプチドも本発明に包含される。本発明は、さらに、シグナリンポリペプチドを製造する方法にも関する。例えば、本ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を導く核酸ベクターでトランスフェクションされた宿主細胞を適当な条件下で培養することにより該ペプチドの発現を起こすようにすることができる。該細胞をハーベストし、溶解させ、タンパク質を単離することができる。細胞培養物は、宿主細胞、培地、および他の副生物を含む。細胞培養用に好適な培地は当該分野でよく知られている。組換えシグナリンポリペプチドは細胞培地、宿主細胞またはそれらの両方から、当該分野で知られたタンパク質精製法、例えば、イオン交換クロマトグラフィ、ゲル濾過、超遠心、電気泳動、およびそのようなペプチドに特異的な抗体を用いる免疫アフィニティ精製を用いて単離することができる。好ましい態様においては、該組換えシグナリンポリペプチドは、その精製を容易にするドメインを含有する融合タンパク質（例えば、ＧＳＴ融合タンパク質またはポリ（Ｈｉｓ）融合タンパク質）である。さらに本発明は、組換え型のシグナリンポリペプチドを発現するようにトランスフェクションされた宿主細胞に関する。該宿主細胞は任意の原核または真核細胞であることができる。すなわち、全長の該タンパク質の全てまたは選択された一部をコードする脊椎動物シグナリンタンパク質のクローニングで得られたヌクレオチド配列を用いて、微生物または真核細胞過程を介して組換え形態の脊椎動物シグナリンポリペプチドを産生させることができる。ポリヌクレオチドを遺伝子構造体（例えば発現ベクター）に連結し、そして宿主〔真核（酵母、トリ、昆虫または哺乳動物細胞）または原核（バクテリア細胞）のいずれか〕内に形質導入またはトランスフェクションすることは、他の周知のタンパク質、例えば、ＭＡＰキナーゼ、ｐ53、ＷＩ１、ＰＴＰホスホターゼ、ＳＲＣ等を製造するのに用いられている標準的方法である。それらに類似の方法またはそれらの改変法を用いて、本発明に従う微生学的手段または組織培養技術により組換えシグナリンポリペプチドを調製することができる。原核細胞もしくは真核細胞またはそれらの両方における発現用の適当なベクター内に、シグナリンタンパク質またはその一部をコードする核酸を連結することにより、組換えシグナリン遺伝子を産生させることができる。組換え型のシグナリンポリペプチドを産生させるための発現ベクターとしてはプラスミドおよびその他のベクターが挙げられる。例えばシグナリンポリペプチドの発現用に好適なベクターとして次のタイプのプラスミドが挙げられる：大腸菌のような原核細胞内発現用のｐＢＲ３２２由来のプラスミド、ｐＥＭＢＬ由来のプラスミド、ｐＥＸ由来のプラスミド、ｐＢＴａｃ由来のプラスミドおよびｐＵＣ由来のプラスミド。酵母内での組換えタンパク質の発現用として多くのベクターが存在する。例えば、ＹＥＰ２４、ＹＩＰ５、ＹＥＰ５１、ＹＥＰ５２、ｐＹＥＳ２およびＹＲＰ１７は、S ．cerevisiae（サッカロミセス・セレビシエ）内に遺伝子構造体を導入するのに有用なクローニングおよび発現媒体である（例えば、Broach他(1983) による「Experimental Manipulation of Gene Expression，M．Inouye編、Acade mic Press社発行、p．83」を参照）。これらのベクターは、大腸菌内ではｐＢＲ３２２ｏｒｉの存在により、また、S．cerevisiae内ではイースト２ミクロンプラスミドの複製開始点により、複製を行うことができる。さらに、アンピシリンのような薬剤耐性マーカーを用いることもできる。１つの具体例として、配列番号：１〜13で表されるシグナリン遺伝子のいずれかのコード配列をサブクローニングすることにより構築された発現ベクターを用いてシグナリンポリペプチドを組換え法により調製する。好ましい哺乳動物発現ベクターは、バクテリア（細菌）内で該ベクターの増殖を促進するための原核配列と、真核細胞内で発現される１種またはそれ以上の真核転写ユニットとの両者を含有するものである。ｐｃＤＮＡＩ／ａｍｐ，ｐｃＤＮＡＩ／ｎｅｏ，ｐＲｃ／ＣＭＶ，ｐＳＶ２ｇｐｔ，ｐＳＶ２ｎｅｏ，ｐＳＶ２ −ｄｈｆｒ，ｐＴｋ２，ｐＲＳＶｎｅｏ，ｐＭＳＧ，ｐＳＶＴ７，ｐｋｏ−ｎｅｏおよびｐＨｙｇが、真核細胞のトランスフェクション用に好適な哺乳動物発現ベクターの例である。これらのベクターのいくつかは、バクテリアプラスミド由来の配列を（例えば、ｐＢＲ３２２）を変化させて原核細胞および真核細胞の両方において複製および薬剤耐性選択性を促進させる。別の方法として、ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ−１）、エプスタインバールウイルス（ｐＨＥＢｏ，ｐＲＥＰ由来およびｐ２０５）のようなウイルスの誘導体を用いて真核細胞内でタンパク質を過渡発現させることもできる。プラスミドの調製や宿主生物の形質転換に用いられる各種の方法は当該分野でよく知られている。原核細胞および真核細胞用の他の好適な発現系や一般的な組換え技術については、「Molecular Clon ing A Laboratory Manual，2nd Ed.，Sambrook編Fritsch and Maniatis(Cold Sp ring Harbor Laboratory Press：1989)16章および17章」を参照されたい。バキュロウイルス発現系を用いて組換えシグナリンポリペプチドを発現させることが所望される場合もある。そのようなバキュロウイスル発現系の例としては、ｐＶＬ由来のベクター（例えば、ｐＶＬ１３９２、ｐＶＬ１３９３およびｐＶＬ９４１）、ｐＡｃＵＷ由来のベクター（例えば、ｐＡｃＵＷ１）、およびｐＢｌｕｅＢａｃ由来のベクター（例えば、β−ｇａｌ含有ｐＢｌｕｅＢａｃIII）などが挙げられる。シグナリンタンパク質の一部（例えば、Ｎ−末端の一部が欠失したもの、すなわち、シグナルペプチドの欠失した切端変異体）のみを発現させることを所望する場合には、発現させるべき所望の配列を含有するオリゴヌクレオチド配列に対して開始コドン（ＡＴＧ）を付加するのが必要とされることがある。当該分野でよく知られているように、Ｎ−末端位のメチオニンは、酵素メチオニンアミノペプチダーゼ（ＭＡＰ）を用いることにより切除される。ＭＡＰは、大腸菌(Ben-B assat他(1987)J．Bacteriol．169:751-755)およびSalmonella typhimuriumからクローニングされ、そのインビトロ活性は組換えタンパク質について示されている（Miller他(1987)PNAS 84:1718-1722）。したがって、Ｎ−末端の除去が所望される場合には、ＭＡＰを産生する宿主(例えば、大腸菌またはＣＭ８９またはS ．cerevisiae )内でシグナリン由来のポリペプチドを発現させるインビボ、または精製したＭＡＰを用いるインビトロ（例えば、上述のMiller他の手法）で行うことができる。他のやり方として、当該ポリペプチドのコード配列を、別異のポリペプチドをコードするヌクレオチドも含む融合遺伝子の一部として導入しておくこともできる。このタイプの発現系は、シグナリンタンパク質から成る免疫原生フラグメントを調製することが所望される条件下に有用である。例えば、ロタウイルスのＶＰカプシドタンパク質をシグナリンポリペプチドの一部の免疫学的キャリアタンパク質として用いる（モノマー形態またはウイルス粒子形態のいずれかで）ことができる。抗体が誘発されるべきシグナリンタンパク質部分に対応する核酸は、後期ワクシニアウイルス構造タンパク質のコード配列を含む融合遺伝子構造体に組み入れられて、シグナリンエピトープをビリオンの一部として含む融合タンパク質を発現する一組の組換えウイルスを構築する。Ｂ型肝炎表面抗原を用いる免疫原生融合タンパク質の使用に関し、組換えＢ型肝炎ビリオンも本目的に利用できることが示されている。同様に、シグナリンタンパク質の一部とポリオウイルスカプシドタンパク質とを含有する融合タンパク質をコードするキメラ構造体を創製して、該ポリペプチド抗原セットの免疫原生を高めることもできる（例えば、EP公報No：0259149；ならびにEvans他(1989)Nature 339:385；Huang他(1988)J ．Virol．62:3855およびSchlienger他(1992)J．Virol．66:2参照）。ペプチドに基づく免疫化を行うための多抗原ペプチド(Multiple Antigen Pept ide)系を用いて免疫原を発生させることもでき、この場合は、シグナリンポリペプチドの所望の一部分は、オリゴマー性の分枝リジンコアへのペプチドの有機科学合成から直接的に得られる（例えば、Posnett他(1988)JBC 263:1719およびNar delli他(1992)J．Immunol．148:914参照）。シグナリンの抗原決定基は、バクテリア（細菌）細胞によって発現され供給されることもできる。融合タンパク質の利用が免疫原性の高めることに加えて、融合タンパク質はタンパク質の発現も容易にし、したがって、本発明の脊椎動物の発現にも容易にし、したがって、本発明の脊椎動物の発現にも使用され得る。例えば、シグナリンポリペプチドは、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ−融合）タンパク質として産生させることもできる。そのようなＧＳＴ−融合タンパク質にすると、例えば、グルタチオン誘導体化マトリックスを用いることによりシグナリンポリペプチドの精製が容易となる（例えば、Current Protocois in Molecular Biology，Ausubel他編(N．Y．：John Wiley & Sons発行、1991参照））。別の態様として、精製用のリーダ配列、例えば、組換えタンパク質の所望部分のＮ−末端におけるポリ−（Ｈｉｓ）／エンテロキナーゼ切断部位配列をコードする融合タンパク質を用いると、Ｎｉ²⁺金属樹脂を用いるアフィニティクロマトグラフィにより発現融合タンパク質の精製を行うことができる。次いで、エンテロキナーゼを用いる処理により精製用リーダー配列を取り除くことにより精製タンパク質が得られる（例えば、Hachuli他(1987)J．Chromatography 411:177；およびJanknecht他、PNAS 88:8972参照）。融合遺伝子を作製する技術は当業者には知られている。慣用的手法に従い異なるポリペプチド配列をコードする各種のＤＮＡフラグメントを結合するには、連結のための平滑末端またはスタガード末端を利用し、制限酵素分解により適当な端部を形成し、付着端を適当に満たし、アルカリホスファターゼ処理して望ましくない結合を回避し、そして酵素連結を行う。他の態様として、自動化ＤＮＡ合成装置のような慣用手段を用いて融合遺伝子を合成することもできる。別のやり方として、２種類の連続する遺伝子フラグメント間に相補的なオーバハングを与えるアンカープライマーを用いる遺伝子フラグメントＰＣＲ増幅を実施し、後にアニーリングを行いキメラ遺伝子配列を得ることもできる（例えば、「Current Protocols in Molecular Biology，Ausubel他編、John Wiley & Sons社発行:199 2」参照）。グルコシル基、脂質、リン酸、アセチル基等の他の化学的部位（モイエティ）と共有結合ないしは集合複合体を形成させることにより、シグナリンポリペプチドを化学修飾（変性）してシグナリン誘導体を創製することもできる。シグナリンタンパク質の共有結合誘導体は、タンパク質のアミノ酸側鎖またはポリペプチドのＮ−末端またはＣ−末端にある官能基に当該化学的部位を連結させることにより調製することができる。本発明は、さらに、単離されたシグナリンポリペプチドであって、他の細胞タンパク質、特に、一般にシグナリンポリペプチドに関連していると考えられるシグナル伝達因子および／または転写因子から単離され、あるいは、それらを実質的に含まないシグナリンポリペプチドの入手を可能にしたものである。「他の細胞タンパク質（「混入タンパク質」と称することもある）を実質的に含まない」または「実質的に純粋なまたは精製された調製物（製剤）」という語は、20％（乾重量による）以下の混入タンパク質、好ましくは５％以下の混入タンパク質を有するシグナリンポリペプチド調製物（製剤）を包含するものとする。本明細書に記述するクローニング遺伝子を用いることにより、精製された調製物として始めて機能型の本ポリペプチドを得ることができる。「精製された」とは、ＤＮＡまたはＲＮＡについて言及する場合、当該分子が、他の生物学的巨大分子（マクロ分子、例えば他のタンパク質）の実質的な不存在下に存在していることを意味する。本明細書で用いている「精製された」という語は、好ましくは乾重量で少なくとも80％、より好ましくは重量で95〜90％の範囲、そして最も好ましくは重量で少なくとも99.8％の同一種のマクロ分子が存在していることを意味する〔但し、水、緩衝液、および他の少分子、（特に5000以下の分子量を有する分子）は存在し得る〕。ここで用いる「純粋な」という語は、好ましくは、上述の「精製された」と同じ数値限定を有するのが好ましい。「単離された」または「精製された」とは、自生状態の天然物質、または構成成分内に分離された（例えば、アクリルアミドゲル中に）が純粋な物質または溶液（例えば、混入タンパク質が無い、または変性剤のようなクロマトグラフィ試薬およびアクリルアミドやアガロースのようなポリマー）として得られていない天然物質を包含しない。好ましい態様においては、精製されたシグナリン調製物（製剤）は、該シグナリンを産生する同じ動物由来の混入タンパク質を含まず、このことは、例えば非ヒト細胞内でヒトシグナリンタンパク質を組換え発現させることにより達成することができる。組換えポリペプチドに関して上述したように、単離されたシグナリンポリペプチドの例は、以下の配列もしくはそれら相同な配列の１種またはそれ以上で表されるシグナリンポリペプチドに対応するアミノ酸配列の全部または一部を含むものである：配列番号：14(SEQ ID No:14)、配列番号：15(SEQ ID No:15)、配列番号：16(SEQ ID No:16)、配列番号：17(SEQ ID No:17)、配列番号：18(SEQ ID No :18)、配列番号：19(SEQ ID No:19)、配列番号：20(SEQ ID No:20)、配列番号： 21(SEQ ID No:21)、配列番号：22(SEQ ID No:22)、配列番号：23(SEQ ID No:23) 、配列番号：24(SEQ ID No:24)、配列番号：25(SEQ ID No:25)、配列番号：26(S EQ ID No:26）。シグナリンタンパク質の単離されたペプチジル部分は、ペプチドをコードする核酸の対応するフラグメントから組換えにより産生されたペプチドをスクリーニングすることにより得ることができる。さらに、当該分野で知られた技術、例えば、Merrifield固相f-Mocまたはt-Bocケミストリーのような技術を用いてフラグメントを化学的に合成することができる。例えば、本発明に属する或る１種のシグナリンポリペプチドを所望の長さの幾つかのフラグメントに分割してフラグメントのオーバーラップが無いようにすることもできるが、好ましくは、或る所望の長さのオーバーラッピングする幾つかのフラグメントに分割する。フラグメントは（組換えにより、または化学合成により）調製され、そして、野性型（例えば「真性」の）シグナリンタンパク質のアゴニストまたはアンタゴニストとして機能し得るペプチジルフラグメントであるかを明らかにするためにテストすることができる。本発明の組換えシグナリンポリペプチドは、真性のシグナリンタンパク質のホモログ、例えば、ユビキチン化または該タンパク質が関連するその他の酵素標的反応を変化させる突然変異に因り、酵素分解切断に抵抗性のあるようなタンパク質改変体も含むものとする。本発明の脊椎動物シグナリンポリペプチドの構造改変は、治療または予防効果や安定性（例えば、半ビボ保存寿命やインビボでの酵素分解変化に対する抵抗性）を高めたり、翻訳後修飾（例えば、タンパク質のリン酸化パターンを変化させるため）のような目的で行われ得る。そのような変性ペプチドは、天然型のタンパク質の少なくとも１種の活性を保持するように、あるいは、その特定のアンタゴニストを調製するように設計されたときは、本明細書で詳述しているシグナリンポリペプチドに機能的に等価物である。そのような変性（修飾）ペプチドは、例えば、アミノ酸の置換、削除または付加によって得ることができる。例えば、ロイシンをイソロイシンまたはバリンで置換し、アスパラギン酸をグルタミン酸で、スレオニンをセリンで、あるいは、アミノ酸を構造的に関連するアミノ酸（すなわち、イソステリックおよび／または等電的変異体）で同様に置換しても、得られる分子の生物学的活性に大きな影響を与えないだろうと予期することは合理的である。保存型置換は、側鎖において類似するアミノ酸群の間で起こる置換である。遺伝子によってコードされるアミノ酸は、４つの群に分けることができる：（１）酸性＝アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性＝リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性＝アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性＝グリシン、アスパラギン、グルタミン、システィン、セリン、ヌレオニン、チロシン。フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンはまとめて芳香族アミノ酸として分類されることもある。同様に、アミノ酸レパートリーは、以下のように分類することもできる：（１）酸性＝アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性＝リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）脂肪族＝グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン（セリンおよびスレオニンは、別に芳香族−ヒドロキシルと分類されてもよい）；（４）芳香族＝フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン；（５）アミド＝アスパラギン、グルタミン；（６）含イオウ＝システィンおよびメチオニン（例えば、「Biochemistry，2nd ed.，L．Stryer編、WH Freeman and Co．発行、1981」参照）。本発明は、さらに、本脊動物シグナリンタンパク質の組換え変異体、ならびに切端変異体を形成する方法を提供するものであり、特に、ＴＧＦβレセプターからのシグナル伝達を調節するのに機能すると考えられる変異体配列（例えばホモログ）を明らかにするのに有用である。そのような組換えライブラリーをスクリーニングする目的は、例えば、アゴニストまたはアンタゴニスのいずれかとして機能する、あるいは、新規な活性を保有するような新規なシグナリンホモログを得ることにある。具体的には、本発明の方法によってシグナリンホモログを処理してＴＧＦβ誘導経路の選択的、構成性の活性を与えることにより、該シグナリンホモログがＴＧＦβに応答することのできる細胞内で発現されたときにＴＧＦ βによる誘導を模擬(mimic)するようになる。かくして、組換え由来のホモログを得れば、天然型の該タンパク質に比べて性能を増大させることができる。同様に、本発明の組換え法に従い、ＴＧＦβによる誘導を選択的に抑制する（拮抗する）シグナリンホモログを得ることができる。例えば、突然変異法により、他のシグナル経路タンパク質（またはＤＮＡ）に結合はするが、該シグナルの伝播を防ぐことのできるようなシグナリンホモログを提供することができ、例えば該ホモログがドミナントネガティブな変異体であるようにすることができる。好ましい優性負性の変異体は、充分なＣ−末端フラグメントを含んでＴＧＦβシグナルにアンタゴニスト作用する。さらに、本発明の方法に従いシグナリンの特定ドメインを操作することにより、融合タンパク質に使用されるのに好適なドメインを得ることができる。本発明の一つの態様として、シグナリンホモログ群またはその他の関連タンパク質群のアラインメントを行い、可能な限り高いホモロジーが得られるようにする。そのような変異体集団は、例えば、単一または複数の種由来のシグナリンホモログを含むようにしてもよい。アラインメントさせた配列の各位置に示されるアミノ酸を選択して、組換え遺伝子の縮重セットを創製する。好ましい態様においては、核酸レベルでの組換え突然変異によりシグナリン変異体から成る広範囲のライブラリーが作成される。例えば、合成オリゴヌクレオチドの混合物を遺伝子配列内に酵素を用いて連結させることにより、シグナリン配列の縮重セットが、個々のポリペプチドとして、または、該シグナリン配列のセットを含有する大きな融合タンパク質セット（例えば、ファージディスプレイ）として発現され得るようにする。図６に示されるように、一群の変異体の配列を分析するには、対象とするアミノ酸配列についてアラインメントを行いホモロジー（相同性）を比較する。或る特定の変異体のアライメントした配列からのアミノ酸の有無は、参照配列（実際の配列もあれば人工的な配列もある）の選択した共通長さに対して相対的である。配列のアラインメントに際して最大のホモロジーを保持するためには、参照配列に対して或る変異体の配列において欠損がある場合には、アミノ酸空隙（^*）によって表すことができ、一方、参照配列に対して変異体において挿入的な変異があるときは、アラインメントしたときに無視し該変異体から除くようにする。例えば、図６は、脊椎動物シグナリン遺伝子生成物の幾つかのシグナリンモチーフをアラインメントしたものである。シグナリンクローン由来のこのモチーフのアラインメントを分析することにより、可能なシグナリン配列を含むポリペプチドの縮重ライブラリーを構築することができる。具体例として、アフリカツメガエルクローンおよびヒトクローンのシグナリンモチーフをアラインメントすることにより、以下の一般式で表されるシグナリンモチーフを含むシグナリンポリペプチドの縮重セットを得ることができる。Ｖ−Ｘ(1)−Ｘ(2)−Ｒ−Ｋ−Ｇ−Ｘ(3)−Ｐ−Ｈ−Ｖ−Ｉ−Ｙ−Ｘ(4)−Ｒ−Ｘ(5 )−Ｗ−Ｒ−Ｗ−Ｐ−Ｄ−Ｌ−Ｘ(6)−Ｘ(7)−Ｘ(8)−Ｘ(9)−Ｘ(10)−Ｌ−Ｋ− Ｘ(11)−Ｘ(12)−Ｘ(13)−Ｘ(14)−Ｃ−Ｘ(15)−Ｘ(16)−Ｘ(17)−Ｆ−Ｘ(18)− Ｘ(19)−Ｋ−Ｘ(20)−Ｘ(21)−Ｘ(22)−Ｖ、上式において、各縮重位置「Ｘ」は、ヒトまたはアフリカツメガエルクローンの１種において該位置に存在するアミノ酸である。例えば、Xaa(1)はSer，Pro，またはAlaを表し;Xaa(2)はHisまたはGlyを表し;Xaa(3)はLeu,またはPheを表し;X aa(4)はCysまたはAlaを表し;Xaa(5)はValまたはLeuを表し;Xaa(6)はHisまたはGl nを表し;Xaa(7)はSerまたはアミノ酸空隙を表し;Xaa(8)はHi sまたはLysを表し;Xaa(9)はHisまたはAsnを表し;Xaa(10)はGluまたはGlyを表し; Xaa(11)はPro，AlaまたはHisを表し;Xaa(12)はLeu,Ile,ValまたはMetを表し;Xaa (13)はLysまたはGluを表し;Xaa(14)はCys，AsnまたはPheを表し;Xaa(15)はGluまたはGlnを表し;Xaa(16)はTyr,PheまたはLeuを表し;Xaa(17)はProまたはAlaを表し;Xaa(18)はGlu,Asn,ValまたはAspを表し;Xaa(19)はSerまたはLeuを表し;Xaa(2 0)はGln,LysまたはTyrを表し;Xaa(21)はLysまたはAspを表し;Xaa(22)はGluまたはAspを表す。もっと広いライブラリーにおいては、各縮重位置Ｘは、アフリカツメガエルクローンおよびヒトクローンにおいて存在するアミノ酸残基と保存型置換している（例えば、等電的に保存されたり、極性によって保存された）任意のアミノ酸から選ばれ得る。さらに広いライブラリーにおいては各Ｘは任意のアミノ酸から選ばれ得る。縮重オリゴヌクレオチドから、可能なシグナリンホモログのライブラリーを構築することのできる多数の方法がある。縮重遺伝子配列の合成は自動化ＤＮＡ合成装置で行うことができ、次に、適当な発現ベクター内に合成遺伝子を連結させる。遺伝子の縮重セットの目的は、１つの混合物中に、可能なシグナリン配列の所望のセットをコードする配列の全てを提供することにある。縮重オリゴヌクレオチドの合成は当該分野でよく知られている（例えば、Narang，SA（1983）Tetr ahedron 39:3；Itakura他(1981)Recombinant DNA，Proc 3rd Cleveland Sympos ．Macromolecules，ed．AG Walton，Amsterdam：Elsevier pp273-289；Itakura 他(1983)Annu．Rev．Biochem．53:323；Itakura他(1984)Science 198:1056；Ike 他(1983)Nucleic Acid Res．11:477参照）。そのような手法は、他のタンパク質の生成にも用いられている（例えば、Scott他(1990)Science 249:386-390：Robe rts他(1992)PNAS 89:2429-2433；Devlin他(1990)Science 249:404-406；Cwirla 他(1990)PNAS 87:6378-6382;米国特許第5,223,409号、5,198,346号および5,096, 815号参照）。同様に、或る１つのシグナリンクローンについてコード配列フラグメントのライブラリーを提供して、生理活性のあるフラグメントのスクリーニングおよびその後の選択用のシグナリンフラグメントの多様な集団を構築することもできる。そのようなライブラリーを構築するためには各種の手法が当該分野で知られており、それには化学合成も含まれる。１つの態様として、コード配列フラグメントのライブラリーを作製するには、例えば、（ｉ）シグナリンをコードする配列の二本鎖ＰＣＲフラグメントを、ニッキングが１分子当たり約１回だけ起こるような条件下のヌクレアーゼで処理し；(ii)該二本鎖ＤＮＡを変性し；(iii)該ＤＮＡを復元させて、異なるニック処理生成物由来のセンス／アンチセンス対を含む二本鎖ＤＮＡを形成し；(iv)Ｓ１ヌクレアーゼ処理することにより、改変二重らせんから一本鎖部分を除去し；そして（ｖ）得られたフラグメントライブラリーを発現ベクターに連結する。この例示方法によれば、いろいろなサイズのＮ−末端フラグメント、Ｃ−末端フラグメントおよび中間フラグメントをコードする発現ライブラリーが得られる。点突然変異法または切端法（truncation）によって作製された組換えライブラリーの遺伝子産物についてスクリーニングを行い、さらに、或る特定の性質を有する遺伝子生成物を得るためにｃＤＮＡライブラリーについてスクリーニングを行うためには、広範囲の手法が当該分野で知られている。大きな遺伝子ライブラリーについてスクリーニングを行うために最も広く用いられている手法は、一般に、該遺伝子ライブラリーを複製性発現ベクター内にクローニングし、得られたベクターライブラリーで適当な細胞を形質転換し、そして、所望の活性を検出することにより、生成物が検出された遺伝子をコードするベクターの単離が容易になるような条件下で、組換え遺伝子を発現させることを含む。以下に記述する具体的なアッセイ（検定法）は、組換え突然変異法によって得られた多数の縮重シグナリン配列のククリーニングを行うのに必要とされているような大量分析にも対処できるものである。本シグナリンタンパク質のフラグメント（例えば、結合ドメイン）を精製するのに使用できる更に別の手法は、「Roman他(1994)Eur．J．Biochem．222：65-73 」に記載されている。Roman他は、大分子のタンパク質由来の短くてオーバラップしているペプチドを用いる競合結合アッセイについて記述している。このRoma n等の手法は、本シグナリンタンパク質と同様の適当なサイズ範囲のタンパク質における結合ドメインを明らかにするのに適用されている。１つの態様においては、胚幹細胞（ＥＳ）を利用して多様なシグナリンライブラリーを分析することもできる。例えば、特定のＴＧＦβに普通に応答性のあるＥＳ細胞系に発現ベクターのライブラリーをトランスフェクションする。次に、トランスフェクションされた細胞をＴＧＦβに接触させ、そして、表現型マーカーの誘導に対するシグナリン変異体の影響を、例えば、ＦＡＣＳにより検出することができる。次にプラスミドＤＮＡを細胞から回収して抑制を評価し、あるいは、ＴＧＦβ誘導を評価し、そして、個々のクローンの特性を更に調べる。ＥＳ細胞の代わりに、他の細胞系を用いることもでき、より原始的なアニマルキャップ細胞のような細胞から、胚がん腫細胞、あるいは成熟した分化組織由来の細胞（例えば、軟骨細胞や骨細胞）に至る細胞を用いることができる。組換え突然変異法(combinatorial mutagenesis)によれば、変異体タンパク質の非常に大きなライブラリー（例えば１０²⁶分子のオーダー）を作製できる。この大きさの組換えライブラリーは、高負荷のスクリーニング法においては技術的に難しい。この問題を克服するためＲＥＭ（recrusive ensemble mutagenesls）と呼ばれる新しい突然変異法が最近開発され、これによれば、ランダムライブラリーにおいて非常に多量の非機能性タンパク質を回避して機能性タンパク質の頻度のみを高めることができ、配列スペースの有用なサンプリングを行うのに要する複雑さが減少する。ＲＥＭは、適当な選択法またはスクリーニング法を用いれば、ライブラリーにおける機能性変異体の頻度を高めるアルゴリズムであ(Arkin およびYourvan，1992，PNAS USA 89:7811-7815；Youvan他、1992，Parallel Pro blem Solving fromNature，2.， InMaennerおよびManderick編、Elsevir Publi shing Co.発行、Amsterdam．pp．401-410；Delgrabe他、1993、Protein Enginee ring 6(3):327-331)。本発明は、さらに、本発明の脊椎動物シグナリンポリペプチドの結合を破壊することができるようなミメチック（模擬体：mimetics）（例えば、ペプチド性または非ペプチド性作用物質）を調製することに関する。かくして、上述したような突然変異法は、例えば、シグナリンポリペプチドの上流において機能するタンパク質（活性のアクチベーターまたはリプレッサー）または上流で機能するタンパク質または核酸と本脊椎動物シグナリンポリペプチドの結合に関与するタンパク質−タンパク質相互反応に寄与するシグナリンタンパク質のデターミナントヲマッピングするのにも有用である。具体的には、上流または下流のシグナリン成分の分子認識に関与するシグナリンポリペプチドの重要なアミノ酸残基を決定し、真性（天然）のシグナリンタンパク質の結合を競争的に抑制するシグナリン由来ペプチドメチックを構築するのに用いる。例えばスキャンニング突然変異法を用いて、他の細胞外タンパク質との結合に関与する各シグナリンタンパク質のアミノ酸残基をマッピングすることにより、該相互作用を促進するようなシグナリンタンパク質の残基に模擬するペプチドミメチック化合物を得ることができる。そのようなミメチックは、シグナリンタンパク質の通常の機能を妨害するのに使用できる。例えば、次にようなものを用いて、該アミノ酸残基の非加水分解性のペプチドアナログを得ることができる：ベンゾジアゼピン(例えば、Freidinger他によるPeptides：Chemistry and Biology，G．R．Marshall編、ESCOM Publisher 発行:Leiden，オランダ1988)、アゼピン(例えばHuffman他によるPeptides：Chem istry and Biology，G．R．Marshall編ESCOM Publisher発行:Leiden．オランダ 1988)、置換されたガンマラクタム環(Garvey他によるPeptides：Chemistry and Biology，G．R．Marshall編、ESCOM Publisher発行:Leiden，オランダ1988)、ケトメチレンプシュードペプチド(Ewenson他(1986)J Med Chem 29:295;およびEwen son他によるPept1des：Structure and Function（Proceedings of the 9th Amer ican Peptide Symposium）Pierce Chemical Co発行、Rockland，米国イリノイ州 1985)、β−らせんジペプチドコア(Nagai他(1985)Tetrahedrom Lett 26:647；およびSato他(1986)J Chem Soc Perkin Trans 1:1231)、ならびにβ−アミノアルコール(Gordon他(1985) Biochem Biophys Res Commun126:419；およびDann他(19 86) Biochem Biophys Res Commun 134:71)。本発明は、さらに、脊椎動物シグナリンタンパク質に対して特異的反応性を有する抗体に関する。例えば、シグナリンタンパク質由来の抗原を用いることにより（例えば、ｃＤＮＡ配列に基づく）、標準的な方法に従い抗タンパク質／抗ペプチドの抗血清またはモノクローナル抗体を作製することができる（例えば、An tibodies：A Laboratory Manual，HarlowおよびLane編(Cold Spring Harbor Pre ss発行:1988)参照）。マウス、ハムスターまたはウサギのような啼乳動物を、免疫原性形態のペプチド（例えば、脊椎動物シグナリンポリペプチド、または抗体応答を引き起こす能力のある抗原フラグメント）で免疫化することができる。タンパク質またはペプチドに免疫原性を付与するには、キャリアに結合したり当該分野で周知の他の技術が含まれている。シグナリンタンパク質の免疫原性のある部分はアジュバントの存在下に投与され得る。血漿または血清中の抗体価を検出することにより免疫化の進行をモニターする。標準的なＥＬＩＳＡまたはその他のイムノアッセイにおいて、抗原として免疫原を用いて抗体レベルを評価することができる。好ましい態様において本発明の抗体は、脊椎動物（例えば哺乳動物）のシグナリンタンパク質の抗原決定基、例えば、配列番号：14〜26によって表されるタンパク質またはそれに近似するホモログ（例えば、少なくとも85 ％相同、好ましくは少なくとも90％相同、そしてさらに好ましくは少なくとも95 ％相同であるもの）の抗原決定基に対して免疫特異的である。本発明の更に好ましい態様においては、例えば、シグナリンホモログ（例えばhu−シグナリン１またはhu−シグナリン２）に対して免疫選択性のある抗体を得るために、抗シグナリンポリペプチド抗体は、選択されたシグナリンに対して、例えば、85％、90％または95％以下の相同性を有するようなタンパク質と実質的に交差反応しない（すなわち、特異的に反応しない）ようにする。「実質的に交差反応しない」とは、非相同タンパク質に対する当該抗体の結合親和性が、目的とするシグナリンに対する該抗体の結合親和性よりも、少なくとも１桁、好ましくは少なくとも２桁、そして、更に好ましくは少なくとも３桁小さいことを意味する。シグナリンポリペプチドから成る抗原性調製物で動物を免疫化した後、抗シグナリン抗血清が得られ、所望に応じて該血清からポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を単離することができる。モノクローナル抗体を得るには、免疫化した動物から抗体産生細胞（リンパ球）をハーベストし、ミエローマ細胞のような不死化用細胞を用いる標準的な体細胞融合法に従い融合を行うことによりハイブリドーマ細胞を得ることができる。そのような技術は当該分野においては周知であり、例えば、ハイブリドーマ技術KohlerおよびMilsteinにより開発、(197 5)Nature，256:495-497）、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術(Kozbar他、(1983)Im munology Today，4:72)、およびヒトモノクローナル抗体を産生させるＥＢＶ− ハイブリドーマ技術(Cole他、(1985) Monoclonal Antibodies and Cancer Thera py，Alan R．Liss，Inc．pp．77-96)を参照されたい。免疫化学的方法によりハイブリドーマ細胞のスクリーニングを行うことにより、本発明の脊椎動物シグナリンポリペプチドに特異的に反応する抗体を得ることができ、そのようなハイブリドーマ細胞を含む培養物からモノクローナル抗体を単離することができる。本明細書において用いる抗体という語は、そのフラグメントであって、やはり本脊椎動物シグナリンポリペプチドの１種に対して特異的な反応性を有するものも包含されるものとする。抗体のフラグメント化は慣用的手法を用いて行うことができ、そして、全抗体について上述したのと同じ方法により該フラグメントの有用性についてスクリーニングを行う。例えば、Ｆ（ａｂ）₂フラグメントは、ペプシンで抗体を処理することにより形成される。得られたＦ（ａｂ）₂フラグメントを処理してジスルフィド結合を還元することによりＦａｂフラグメントが得られる。さらに、本発明の抗体は、抗体の少なくとも１つのＣＤＲ領域によって与えられるシグナリンタンパク質親和性を有するような二重特異性のキメラ分子も含むものとする。真性のシグナリンポリペプチドまたはシグナリン変異体に対するモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体（Ａｂ）、およびＦａｂやＦ（ａｂ）₂のような抗体フラグメントを用いて、１種またはそれ以上のシグナリンタンパク質の作用をブロックし、そして、例えば胚形成および／または分化組織の維持におけるこれらのタンパク質の役割を研究することができる。例えば、精製されたモノクローナルＡｂ（抗体）をニワトリの肢芽やマウス胚に直接注入する。同様の手法により、シグナリンの作用をブロックしようとする部位の近傍または該領域に、抗シグナリンモノクローナルＡｂを産生するハイブリドーマ、または、抗シグナリンＡｂが懸濁された生分解性ゲルを移植する。この種の実験により、肢部パターニングおよび組織形成に関与すると考えられる該因子およびその他の因子の役割を理解することができる。シグナリンエピトープに特異的に結合する抗体は、組織サンプルの免疫組織化学的染色に使用して、各シグナリンポリペプチドの発現の量およびパターンを評価することもできる。免疫沈降法および免疫ブロティング法による診断に抗シグナリン抗体を使用して、臨床テストの一部として組織内のシグナリンタンパク質のレベル（量）を検知し、評価することができる。例えば、そのような測定は、骨格形成疾患の発生や進行を予知評価するのに有用である。また、或る個人におけるシグナリンタンパク質のレベルがモニターできることにより、そのような疾患に苦しむ該患者に対する所与の治療法に対する効果を判定することができる。シグナリンポリペプチドのレベルは、体液中の細胞（例えば、脳脊髄液または羊膜液サンプル）から測定することができ、または組織（例えばバイオプシーで得られたもの）中の測定を行うことができる。抗シグナリン抗体を用いる診断法としては、例えば、退行性疾患（特に新生時に顕著なもの）の初期診断を助けるためのイムノアッセイがある。抗シグナリンポリペプチド抗体を用いる診断法としては、さらに、腫瘍性または過形成性疾患の初期診断および観察を助けるためのイムノアッセイも含まれる。本発明の抗シグナリン抗体の他の用途は、λｇｔ11、λｇｔ18−23、λＺＡＰおよびλＯＲＦ８のような発現ベクター内に構築されたｃＤＮＡライブラリーの免疫学的スクリーニングである。コード配列が正しいリーディングフレーム内に正しい方向で挿入されたこの種のメッセンジャーライブラリーは融合タンパク質を生成することができる。例えば、λｇｔ11は、アミノ酸末端がβ−ガラクトシダーゼアミノ酸配列から成りカルボキシ末端が外来ポリペプチドから成る融合タンパク質を生成する。シグナリンタンパク質の抗原エピトープ（例えば、特定のシグナリンタンパク質の他のオルソログまたは同一種由来の他のパラログ）は、例えば、抗シグナリン抗体を感作したプレートから取り除いたニトロセルロースフィルターのような抗体を用いて検出される。次に、このアッセイにより検出された陽性ファージは感作プレートから単離される。このようにして、他の動物由来のシグナリンホモログの存在を検出しクローニングすることができ、ヒト由来のイソ体（スプライシング変異体を含む）の代わりにすることができる。さらに、脊椎動物由来のシグナリン遺伝子のクローニングによりヌクレオチド配列を明らかにすることにより、他の種類の細胞（例えば、他の組織由来の細胞）におけるシグナリンホモログおよび他の脊椎動物由来のシグナリンホモログを同定しおよび／またはクローニングするのに用いるプローブおよびプライマーを構築することができる。例えば、本発明は、実質的に精製されたオリゴヌクレオチドから成るプローブ／プライマーを提供するが、ここで、該オリゴヌクレオチドは、配列番号：１(SEQ ID NO:1)、配列番号：２(SEQ ID NO:2)、配列番号：３ (SEQ ID NO:3)、配列番号：４(SEQ ID NO:4)、配列番号：５(SEQ ID NO:5)、配列番号：６(SEQ ID NO:6)、配列番号：７(SEQ ID NO:7)、配列番号：８（SEQ ID NO:8)、配列番号：９(SEQ ID NO:9)、配列番号：10(SEQ ID NO:10)、配列番号：11(SEQ ID NO:11)、配列番号：12(SEQ IDNO:12)、配列番号：13(SEQ ID NO:13 )、または天然に存在するそれらの変異体から成る群より選ばれるセンスまたはアンチセンス配列の少なくとも10ヶの連続した配列にストリンジェントコンディション下にハイブリダイズするヌクレオチド配列の一部を含むものである。例えば、配列番号１〜13で表される核酸配列に基づくプライマーは、シグナリンホモログをクローニングするためのＰＣＲ反応に使用することができる。同様に、本シグナリン配列に基づくプローブは、同一または相同性のタンパク質をコードする転写体またはゲノム配列を検出するのに用いることができる。好ましい態様においては該プローブはラベル（標識）が結合されて検出され得るようになっており、ラベルは、ラジオアイソトープ、蛍光性化合物、酵素および酵素補助因子（コファクター）から選ばれる。そのようなプローブは、シグナリンタンパク質を誤発現する細胞または組織を同定（判定）するための診断キットの一部として使用することもでき、例えば、患者の細胞サンプル中のシグナリンコード核酸のレベルを測定したり、シグナリンｍＲＮＡレベルを検出したり、あるいは或るゲノムシグナリン遺伝子が変異したり欠損しているかを判定する。具体例として、インタクトの（生の）組織および組織サンプルの組織的スクリーニングを行い、シグナリンをコードする転写体の存在（または不存在）を調べるためのシグナリン遺伝子由来ヌクレオチドプローブを作製することができる。抗シグナリン抗体を診断に用いる場合と同様に、シグナリンメッセージ用またはゲノムシグナリン配列用のプローブを使用することにより、例えば腫瘍形成性または過形成性障害（望ましくない細胞増殖など）または組織の異常分化において見られることのあるアレル変異を予防目的および治療目的の両方から調べることができる。上述のイムノアッセイにおいて用いられる場合と同様に、このオリゴヌクレオチドプローブにより、シグナリンタンパク質の発現（またはその欠如）に関連する幾つかの異常に関与する発生上の障害を分子レベルで判定できるようになる。かくして、本発明の方法は、異常な細胞増殖および／または分化を特徴とするような障害に患者が冒されているか否かを判定する方法を提供する。好ましい態様において該方法は、一般に、患者の細胞サンプルから、（ｉ）シグナリンタンパク質をコードする遺伝子の完全性に影響する変化、または（ii）該シグナリン遺伝子の誤発現のうち少なくともいずれかを特徴とするような遺伝子障害の有無を検出することを含むことを特徴としている。具体的には、そのような遺伝子障害は、（ｉ）シグナリン遺伝子から１個またはそれ以上のヌクレオチドの欠失、（ii）シグナリン遺伝子への１個またはそれ以上の遺伝子の付加、(iii)シグナリン遺伝子の１個またはそれ以上のヌクレオチドの置換、（iv）シグナリン遺伝子の全体的な染色体再配置、（ｖ）シグナリン遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写体のレベル（量）の全体的な変化、(vii)シグナリン遺伝子の異常変性（例えば、ゲノムＤＮＡのメチル化パターンの異常）、(Vii)メッセンジャーＲＮＡ転写体の非野性型スプライシングパターンの存在、(Viii)シグナリンタンパク質の非野性型レベル、(ix)シグナリン遺伝子のアレル喪失、および（ｘ）シグナリンタンパク質の不適当な翻訳後修飾の少なくとも１種の存在を確認することにより検出することができる。後述するように、本発明は、シグナリン遺伝子の障害を検出するための多くのアッセイ（分析）法を提供し、そして、重要なことは、シグナリン依存性の異常な細胞成長、増殖および／または分化の原因となるいろいろな分子上の原因を識別できるということである。１例として、シグナリン遺伝子、例えば、配列番号：１〜13のいずれかで表されるもの、もしくは天然に存在するそれらの変異体、または天然においてシグナリン遺伝子に連結している５'または３'のフランキング配列またはイントロン配列もしくは天然に存在するそれらの変異体のセンスまたはアンチセンス配列にハイブリダイズすることのできるヌクレオチド配列の一部を含む（精製された）オリゴヌクレオチドプローブから成る核酸組成物が提供される。或る細胞の核酸をハイブリダイゼーションが受けられるようにし、サンプルの核酸をプローブと接触させ、該サンプルの核酸に対するプローブのハイブリダイゼーションを検出する。そのような手法により、ゲノムレベルまたはｍＲＮＡレベルでの障害（欠損、置換等を含む）を検出することができるとともに、ｍＲＮＡ転写体のレベルも測定することができる。態様に応じて障害の検出にはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（例えば、米国特許第4,683,195号および第4,683,202号参照）においてプローブ／プライマー、例えば、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥＰＣＲを利用し、あるいは、連結（ライゲーション）連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Landegran他、(1988) Science 24 1:1077-1080；およびNakazawa他、(1944)PNAS 91:360-364参照）においてプローブ／プライマーを利用することを含み、後者は、シグナリン遺伝子の点突然変異を検出するのに特に有用である。単なる例示ではあるが、該方法は、（ｉ）患者から細胞サンプルを集め、（ii）該サンプル細胞から核酸（例えば、ゲノム核酸、ｍＲＮＡ、またはその両方）を単離し、(iii)該核酸サンプルを、シグナリン遺伝子に特異的にハイブリダイズする１種またはそれ以上のプローブと接触させて、特定の条件下でシグナリン遺伝子（存在すれば）のハイブリダイゼーションおよび増殖が起こるように、さらに(iv)増殖生成物の有無を検出し、または増殖生成物の大きさを検出し、および対照サンプルに対する長さを比較する各工程を含む。上述したように、本発明はその一態様として、患者から単離した細胞から、１種またはそれ以上のシグナリンの変異が起こっているか否かを判定する診断法に関する。該方法は、異常な細胞増殖および／または分化に起因する障害に冒されているか否かを判定する方法を提供する。好ましい態様として、該方法は、一般に、患者の細胞サンプルから、シグナリンをコードする遺伝子の完全性に影響するような変化に起因する遺伝子障害の有無を検出することを特徴とする。具体的には、そのような遺伝子障害は、（ｉ）シグナリン遺伝子から１個またはそれ以上のヌクレオチドの欠失、(ii)シグナリン遺伝子への１個またはそれ以上のヌクレオチドの付加、(iii)シグナリン遺伝子の１個またはそれ以上のヌクレオチドの置換、および(iv)シグナリン遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写体の非野性型スプライシングパターンのうち少なくとも１つが存在することを確認することにより検出することができる。後述するように、本発明は、シグナリン遺伝子の障害を検出するための多数の分析法を提供し、そして、重要なことは、シグナリン依存性の異常な細胞成長、増殖および／または分化の原因となるいろいろな分子上の原因を識別できるということである。態様に応じて障害の検出にはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（例えば、米国特許第4,683,195号および第4,683,202号参照）においてプローブ／プライマー、例えば、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥＰＣＲを利用し、あるいは、連結連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Landegran他、(1988)Science 241:1077-1080；および Nakazawa他、(1944)PNAS 91:360-364参照）においてプローブ／プライマーを利用することを含み、後者は、シグナリン遺伝子の点突然変異を検出するのに特に有用である(Abravay他(1995)Nuc Acid Res 23:675-682参照)。単なる例示ではあるが、該方法は、（ｉ）患者から細胞サンプルを集め、(ii)該サンプル細胞から核酸（例えば、ゲノム核酸、ｍＲＮＡ、またはその両方）を単離し、(iii) 該核酸サンプルを、シグナリン遺伝子に特異的にハイブリダイズする１種またはそれ以上のプライマーと接触させて、特定の条件下でシグナリン遺伝子（存在すれば）のハイブリダイゼーションおよび増殖が起こるように、さらに(iv)増殖生成物の有無を検出し、または増殖生成物の大きさを検出し、および対照サンプルに対する長さを比較する各工程を含む。ＰＣＲおよび／またはＬＣＲは、本明細書に記述する変異検出に使用する手法のいずれにおいても予備的な増殖工程として使用するのが望ましい。本発明方法の好ましい態様において、サンプル細胞のシグナリン遺伝子の変異は、制限酵素切断パターの変化により明らかにされる。例えば、サンプルおよび対照用のＤＮＡを単離し、（必要に応じて）増幅し、１種またはそれ以上の制限エンドヌクレアーゼを用いて分解し、ゲル電気泳動法によりフラグメントの長さを測定する。さらに、配列特異的なリボザイムを用いて（例えば、米国特許第5, 498,531号参照）、リボザイム切断部位の出現または喪失により特異的な変異の存在を調べることができる。当該分野で知られている各種の配列決定反応の任意のものを用いて、シグナリン遺伝子の配列を直接分析し、あるいは、サンプルシグナリンの配列を対応する野性型配列（対照配列）と比較することにより変異を検出することができる。配列決定反応の例としては、MaximおよびGilbert(Proc Natl Acad Sci USA（1977 ）74:560)またはSanger（Sanger他(1977)Proc Natl．Acad Sci 74:5463）によって開発された手法に基づくものが挙げられる。さらに、本発明の分析法を実施するに当たっては、各種の自動化配列分析法を利用することかでき(Biotechniques （1995）19:448)、これには質量分析による配列決定も含まれる(例えば、PCT公報WO 94/16101：Cohen他(1996)Adv Chromatogr 36:127-162;およびGriffin他(19 93) Appl Biochem Biotechnol 38:147-159参照)。態様によっては配列決定において僅か１個、２個または３個の核酸塩基の存在を測定すればよいことは当業者には明らかであろう。例えば、１個の核酸のみを検出するような場合はA-tract を実施すればよい。更なる態様として、切断試薬（例えば、ヌクレアーゼ、ヒドロキシルアミン、またはオスミウムテトラオキシド、およびピペリジン）からの防御を利用して、ＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡヘテロ二本鎖内のミスマッチ塩基を検出することもできる（Myers他(1985)Science 230:1242f）。一般に「ミスマッチ切断 (mismatch cleavage)」技術においては、先ず、野性型シグナリン配列を含有する（ラベル化した）ＲＮＡまたはＤＮＡを、組織サンプル由来で変異体の可能性のあるＲＮＡまたはＤＮＡとハイブリダイズさせることによりヘテロ二本鎖を形成させる。二本鎖を、該二本鎖のうちの一本鎖部分（例えば、対照鎖とサンプル鎖との間の塩基対ミスマッチで生じてる）を切断する試薬（作用物質）で処理する。例えば、ＲＮＡ／ＤＮＡ二本鎖は、ＲＮａｓｅで処理し、また、ＤＮＡ／ＤＮＡハイブリッドはＳ１ヌクレアーゼで処理して、ミスマッチ領域を酵素分解することができる。他の態様においてはＤＮＡ／ＤＮＡ二本鎖またはＲＮＡ／ＤＮＡ二本鎖をヒドロキシアミンまたはオスミウムテトラオキシドで処理し、さらにピペリジン処理することによりミスマッチ領域を酵素分解することができる。ミスマッチ領域を酵素分解した後、変性用ポリアクリルアミドゲルでサイズに応じた分離を行い変異部位を判定する。例えば、「cotton他(1988)Proc．Natl Acad Sci USA 85:4397；Saleeba他(1992)Methods Enzymod．217:286-295」参照。好ましい態様においては対照用ＤＮＡまたはＲＮＡに検出用の標識（ラベル）を施す。さらに別の態様として、ミスマッチ切断反応において、二本鎖ＤＮＡのミスマッチ塩基対を認識するタンパク質（所謂「ＤＮＡミスマッチ修復」酵素）の１種以上を用い、細胞サンプル由来のシグナリンｃＤＮＡの点突然変異を検出しマッピングする。例えば、大腸菌のｍｕｔＹ酵素はＧ／ＡミスマッチにおけるＡを切断し、また、ＨｅＬａ細胞由来のチミジンＤＮＡグリコシラーゼはＧ／ＴミスマッチにおけるＴを切断する（Hsu他(1994) Carcinogenesis 15:1657-1662）。１例として、シグナリン配列（例えば、野性型シグナリン配列）に基づくプローブを、テスト細胞由来のｃＤＮＡまたは他のＤＮＡ生成物にハイブリダイズさせる。ＤＮＡミスマッチ修復酵素で二本鎖を処理し、そして、（存在すれば）切断生成物は電気泳動法等により検出することができる。例えば、米国特許第5,459,03 9号を参照。他の態様においては、電気泳動移動度の変化を利用してシグナリン遺伝子の変異を同定する。例えば、一本鎖コンホメーション多形性（sscp：single strand conformation polymorphism）を用いて、変異体核酸と野性型核酸との間の電気泳動移動度の差を検出する（Orita他(1989)Proc Natl．Acad．Sci USA 86:2766；Cotton（1993）Mutat Res 285:125-144；およびHayashi（1992）Genet Anal Tech Appl 9:73-79参照）。サンプルおよび対照のシグナリン核酸の一本鎖ＤＮＡフラグメントは変性され、そして復元され得るようになる。一本鎖核酸の二次構造は配列に従って変化し、その結果生じる電気泳動の変化は単一の塩基の変化の検出も可能にする。ＤＮＡフラグメントは標識化（ラベル）するか、または標識化プローブで検出できる。分析感度は、（ＤＮＡよりも）、配列の変化に対して二次構造の感度が高いＲＮＡを用いることにより高めることができる。好ましい態様においては、本方法をヘテロ二本鎖分析に利用して電気泳動移動度の変化に基づきヘテロ二本鎖分子の分離を行う(Keen他(1991)Trends Gene 7:5) 。さらに別の態様においては、変性勾配ゲル電気泳動法（ＤＧＧＥ）(Myers他(1 985)Nature 313:495)を用いて、勾配のある変性剤を含有するポリアクリルアミドゲル中での変異フラグメントまたは野性型フラグメントの移動を分析した。分析手段としてＤＧＧＥを用いると、ＤＮＡが完全には変性しないように修飾される（例えば、ＰＣＲにより、約40ｂｐの高融点ＧＣの多いＤＮＡから成るＧＣクランプを添加することによる）。別の態様においては変性剤に勾配をつける代わりに、温度勾配を用いて対照ＤＮＡおよびサンプルＤＮＡの移動度の相違を明らかにする(RosenbaumおよびReissner (1987) Biophys Chem 265:12753)。点突然変異を検出する他の手法の例としては、選択的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、選択的増幅、または選択的プライマー伸長が挙げられるが、これらに限定されるものではない。例えば、オリゴヌクレオチドを調製して、既知の変異が中央に位置するようにし、完全なマッチングが存在したときにのみハイブリダイゼーションが起こり得るような条件下に標的ＤＮＡにハイブリダイズされるようにする(Saiki他、(1986)Nature 324:163；Saiki他(1987)Proc．Nat l．Acad．Sci．USA 86:6320)。そのようなアレル特異的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション法を用いて、オリゴヌクレオチドがＰＣＲ増幅標的ＤＮＡにハイブリダイズされる場合には１反応当たり単一の変異を調べ、あるいは、オロゴヌクレオチドがハイブリダイズ用膜に結合され、ラベル化標的ＤＮＡでハイブリダイズされる場合は多数の異なる変異を調べるようにすることができる。選択的ＰＣＲ増幅に依存するアレル特異的増幅法を本発明に用いることもできる。特異的増幅のプライマーとして用いるオリゴヌクレオチドは、興味対象の変異を分子の中央に運び（その結果、増幅が差次的ハイブリダイゼーションに依存する）(Gibbs他(1989)Nucleic Acids Res．17:2437-2448)、あるいは、１つのプライマーの３’末端にあるようにし、適当な条件下ではミスマッチが防止され、またはポリメラーゼ伸長が減少する(Prossner（1993）Tibtech 11:238)。さらに、変異領域に新しい制限部位を導入して、制限部位切断に基づく検出ができるように所望されることもある(Gasparini他(1992)Mol．Cell Probes 6:1)。態様によっては、Ｔａｑリガーゼを用いて増幅を行うこともある(Baraby（1991）Proc．Nat l．Acad．Sci．USA 88:189)。そのような場合は、５’配列の３’端に完全なマッチングがある場合のみ連結が起こるので、増幅の有無を調べることにより特定部位における既知の変異の存在を検出することが可能となる。本発明は、別の態様として、シグナリン遺伝子、もしくは天然に存在するその変異体、または天然において該シグナリン遺伝子に結合している５’もしくは天然に存在するその変異体のセンスまたはアンチセンス配列にハイブリダイズすることのできるヌクレオチド配列の一部を含む（精製された）オリゴヌクレオリドから成る核酸組成物を提供する。或る細胞の核酸をハイブリダイゼーションが受けられるようにし、サンプルの核酸をプローブと接触させ、該サンプルの核酸に対するプローブのハイブリダイゼーションを検出する。そのような手法により、ゲノムレベルまたはｍＲＮＡレベルでの障害（欠損、置換等を含む）を検出することができるとともに、ｍＲＮＡ転写体のレベルも測定することができる。そのようなオリゴヌクレオチドプローブは、例えば、腫瘍形成性または過形成性障害（例えば異常細胞成長）に見られるアレル変異を予防目的および治療目的の両方から調べるのに使用することができる。更に別の態様としてイムノアッセイによりシグナリンタンパク質のレベル（量）を検出することができる。例えば、バイオプシーサンプルの細胞を溶解し、該細胞に存在するシグナリンタンパク質のレベルを標準的なイムノアッセイ法により定量する。他の態様として、メチル化に感受性がありシグナリン遺伝子（フランキング配列およびイントロン配列を含む）中に認識部位が存在するようなエンドヌクレアーゼの１種以上を用いて、患者由来のゲノムＤＮＡを分解することにより、シグナリン遺伝子の異常メチル化パターンを検出することにより、シグナリン遺伝子の異常メチル化パターンを検出することができる。例えば、「Buitin g他(1994)Human Mol Genet 3:893-895」参照。酵素分解されたＤＮＡを電気泳動法により分離し、例えばゲノム配列またはｃＤＮＡ配列由来のプローブでハイブリダイズする。シグナリン遺伝子のメチル化状態の判定は、サンプルＤＮＡの制限パターンを既知のメチル化から成る標準の制限パターンと比較することにより行うことができる。本発明の更に別の態様においては、本シグナリンポリペプチドを「ツーハイブリッド(two hybrid)」アッセイまたは「相互作用トラップ(interaction trap)」アッセイを構築するのに使用し（例えば、米国特許第5,283,317号、Zervos他(19 93) Cell 72:223-232；Madura他(1993)J．Biol．Chem．268:12046-12504； Bartel他(1993) Biotechniques 14:920-924；Iwabuchi他(1993)Oncogene 8:1693 -1696；およびBrent WO94/10300参照）、シグナリンに結合している他の細胞性タンパク質（「シグナリン結合性タンパク質または「シグナリン−ｂｐ」）をコードする配列を単離することができる。そのようなシグナリン結合性タンパク質は、例えば、シグナリング（シグナル伝達）経路の上流または下流成分として、あるいはシグナル生理活性の二次的レギュレーターとして、シグナリンタンパク質によるＴＧＦβシグナルの伝播に関与していると考えられる。簡単にいえば、相互作用トラップは、２種類の別々の融合タンパク質からインビボで機能性転写アクチベータータンパク質を再構成することに依存する。特に、この方法は、ハイブリッドタンパク質を発現するキメラ遺伝子に使用できる。具体的には、第１のハイブリッド遺伝子は、シグナリンポリペプチドをコードする配列にフレーム内で融合している転写アクチベーターのＤＮＡ結合性ドメインをコードする遺伝子から成る。第２のハイブリッドタンパク質は、ｃＤＮＡライブラリー由来のサンプル遺伝子にフレーム内で融合している転写アクチベーションドメインをコードしている。ベイト（対象）ハイブリッドタンパク質とサンプルハイブリッドタンパク質とサンプルハイブリッドタンパク質が相互作用して、例えばシグナリン依存性複合体（コンプレックス）を形成することができる場合には、それらは転写アクチベーターの２種類のドメインに近接させられる。この近接はレポーター遺伝子（これは転写アクチベーターに応答する転写調節部位に作動的に連結されている）の転写を起こすのに充分であり、そして、レポーター遺伝子の発現を検出し、シグナリンタンパク質とサンプルタンパク質の相互作用を調べるのに使用することができる。さらに、精製され組換えによるシグナリンポリペプチドを入手できるようにしたことにより本発明は、シグナリンポリペプチドの通常の細胞機能、あるいは、細胞分化および／または増殖ならびにそれらの関連する疾病の病原における該ポリペプチドの役割のアゴニストまたはアンタゴニストである薬剤（シグナリンホモログを含む）のスクリーニングに利用できるアッセイ（検定法）の開発を促進する。一つの態様においては、該アッセイにより、シグナリンポリペプチドと、ＴＧＦβシグナリング（シグナル伝達）経路においてシグナリンポリペプチドの上流または下流で該シグナリンポリペプチドに相互作用する分子（タンパク質またはＤＮＡのいずれでも）との間の結合を調節する化合物の能力を調べる。例えば、該アッセイを用いて、シグナリンポリペプチドとＴＧＦβレセプターコンプレックスまたはそのサブユニットとの相互作用を抑制しまたは促進する化合物を同定することができる。各種の分析フォーマットが可能であるが、本発明を考慮すれば、それらは当業者には明らかであろう。いろいろな化合物および天然抽出物のライブラリーをテストする薬剤のスクリーニングプログラムの多くの場合、所与の期間内で調査する化合物の数を下級的に多くするため大量アッセイが望まれる。無細胞系（例えば精製されたまたは半精製されたタンパク質について行われるような場合）で実施されるアッセイ（検定法）は、「一次(primary)」スクリーンと呼ばれることが多く、被検化合物によって仲介される分子標的の変更を迅速に開発し比較的簡単に検出できるようにする。さらに、被検化合物の細胞毒性および／または生体適合性の影響は該インビトロ系では一般に無視され、アッセイの焦点は（上流または下流成分との結合親和性の変化に示されるような）分子標的に対する薬剤の影響を見ることにある。したがって、本発明のスクリーニングアッセイの１例においては、検討中の化合物を、シグナリンポリペプチドの上流で機能する（該活性のアクチベーターおよびリプレッサーの両方を含む）ようなタンパク質、または、シグナリンポリペプチドの下流で機能するようなタンパク質または核酸と接触させる（ここで該タンパク質等は正調節される場合と、負調節される場合とがある）。シグナリンと上流成分または下流成分とのコンプレックス（複合体）を検出し、定量することにより、シグナリンとシグナリン結合性成分とのコンプレックス形成を抑制する（または促進する）化合物の効能が判定されることになる。化合物の効能は、被検化合物の濃度を変えながら用量反応曲線を作成することによって評価することができる。さらに、対照（コントロール）アッセイも行うことにより比較用の基準線が得られる。対照アッセイにおいては、シグナリン結合性成分を含有する組成物に単離され精製されたポリペプチドを添加し、被検化合物の不存在下にコンプレックスの形成を定量する。シグナリンポリペプチドとシグナリン結合性成分との間のコンプレックス形成は、各種の手法で検出することができる。コンプレックス形成が調節されていることは、例えば、検出可能なようにラベル（標識化）されたタンパク質（放射標識、蛍光標識または酵素標識されたシグナリンポリペプチド）、イムノアッセイまたはクロマトグラフィによる検出を採用することにより定量することができる。一般的には、シグナリンまたはその結合性タンパク質のいずれかを固定化することにより、それらのタンパク質の一方または両方の非コンプレックス形態からコンプレックスが容易に分離されるようにするとともに、アッセイの自動化が行えるようにすることが望まれる。候補となる薬剤（作用物質）の存在下または非存在下における上流成分または下流成分とのシグナリンの結合は、それらの反応物を含有し得る任意の適当な容器内で行われ得る。例としては、マイクロタイタープレート（微量定量プレート）、試験管、およびマイクロ遠心管が挙げられる。１つの態様として、融合タンパク質に該タンパク質がマトリックスに結合され得るようにしたドメインを付加する。例えば、グルタシチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ／シグナリン（ＧＳＴ／シグナリン）融合タンパク質をグルタチオンセファロースビード（米国ミズリー州セントルイスのSigma Chemical製）またはグルタチオン誘導体化マイクロタイタープレートに吸着させ、次に、細胞ライゼート（溶解液）（例えば、³⁵Ｓラベルしたもの）および被検化合物と混合し、得られた混合物をコンプレックス形成を起こすような条件下（例えば、塩分およびｐＨに関し生理条件下。但し、幾分高いストリンジェント条件が好ましいこともある）にインキュベートする。インキュベーション後、該ビードを洗浄して非結合ラベルを取り除き、マトリックスを固定化し放射ラベルを直接測定し（例えば、ビードをシンチラントに入れる）、あるいはコンプレックスが分解した後上澄液を測定する。別のやり方として、マトリックスからコンプレックスを分離し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、後述の実施例に記すような標準的な電気泳動法を用いて、ビード画分に存在するシグナリン結合性タンパク質のレベルをゲルから定量する。本アッセイでは他の手法を用いてマトリックスにタンパク質を固定化することもできる。例えば、ビオチンおよびストレプトアビジンの結合能を利用して、シグナリンまたはそれと同起源の結合性タンパク質を固定化することもできる。当該分野で周知の手法を用いて（例えば、米国イリノイ州RockfordのPierce Chemi cals社製のビオチン化キット）、ビオチン−ＮＨＳＣＮ−ヒドロキシ−サクシンイミド）からビオチン化シグナリン分子を調製し、ストレプトアビジンがコードされた96ウエルプレート（Pierce Chemicals社製）のウエル内で固定化することもできる。別の方法として、シグナリンに反応性であるが上流成分または下流成分の結合を妨害しないような抗体をプレートのウエルに導入し、抗体結合によりウエル内にシグナリンをトラップすることもできる。上述の場合のように、シグナリン−ＢＰと被検化合物から成る調製物をシグナリン含有プレート内でインキュベートし、ウエル内にトラップされたコンプレックスの量を定量することができる。このようにしてコンプレックスを検出する方法、およびＧＳＴ−固定化コンプレックスに関して上述した方法は、シグナリン結合性成分に反応性のある抗体、または、シグナリンタンパク質に反応性であるがその結合性成分と競争する抗体を用いてコンプレックスを免疫学的に検出することを含み、あるいは、酵素結合アッセイ、すなわち、該結合性成分に関係する酵素活性（内因性の活性または外因性の活性）を検出することに基づくアッセイにより、そのような検出を行うことを含む。後者の場合、酵素をシグナリン−ＢＰと化学的に結合させ、またはシグナリンＢＰとの融合タンパク質として供給することができる。具体例として、シグナリン−ＢＰをセイヨウワサビペルオキシダーゼと化学的に架橋させるか、または該ペルオキシダーゼと遺伝子工学的手法により融合させ、コンプレックス内にトラップされたポリペプチドの量を該酵素の発色性基質（例えば、３，３’−ジアミノ−ベンズアジンテトラハイドロクロリドまたは４−クロロ−１− ナフトールを用いて評価することができる。また、該ポリペプチドおよびグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼから成る融合タンパク質を調製し、１−クロロ −２，４−ジニトロベンゼンを用いてＧＳＴ活性を検出することによりコンプレックスの形成を定量することもできる(Habig他(1974)J Biol Chem 249:7130)。コンプレックスにトラップされたタンパク質の１種を免疫学的検出により定量する方法においては、該タンパク質に対する抗体（例えば、抗シグナリン抗体）を用いることができる。別の手法として、コンプレックス中の被検出タンパク質を融合タンパク質の形態で「エピトープ標識化(epitope tagged)」する、すなわち、シグナリン配列に加えて、抗体が容易に入手できる（例えば、市販されている）ような第２のポリペプチドを含むようにすることもできる。例えば、上述のＧＳＴ融合タンパク質を用いれば、ＧＳＴ部位に対する抗体を使用することにより結合の定量を行うことができる。他の有用なエピトープとしては、ｍｙｃエヒトープがあり（例えば、Ellison他(1991)J Biol Chem 266:21150-21157）、これはｃ−ｍｙｃ由来の10ヶのアミノ酸残基を含むものである。この他に、ｐＦＬＡＧ系（International Biotechnologies社製）やｐＥＺＺ−プロテインＡ系（米国ニュージャージ州Pharamacia製）が挙げられる。上述したような無細胞系に加えて、本発明に従い脊椎動物シグナリンタンパク質が容易に入手できるようになったことにより、小分子のアゴニスト／アンタゴニスト等を同定する細胞系アッセイの構築も可能になった。ＴＧＦβによるシグナリン仲介型誘導に感受性のある細胞を用いて、興味対照の被検薬剤（作用物質）の存在下または非存在下にシグナリンを過剰発現(overexpress)させ、該被検作用物質によって仲介された標的細胞によるシグナリン誘導性応答における調節の度合いを分析する。無細胞系の場合と同様に、シグナリン依存性誘導についての統計学に有意な変化（抑制または促進）を引き起こす作用物質を同定（判定）することができる。具体例として、胚細胞またはＥＳ細胞を用いてシグナリンポリペプチドを異所発現させ、組織のパターン誘導に対する被検化合物の影響を測定する。例えば、実施例に記述するように、胚細胞内でシグナリンの過剰発現させることにより、いろいろなＴＧＦβ因子によって仲介される誘導と見かけ上同様に、分化の構成性誘導が起こすことができる。したがって、そのような組換え細胞を用い、シグナリンタンパク質の下流におけるシグナル伝達現象を抑制する化合物の能力から、特定のＴＧＦβ因子に対する抑制剤（インヒビター）を同定することができる。具体例として、実施例２の組換えXe−シグナリン１アニマルキャップを被検化合物に接触させ、外胚葉細胞から腹面中胚葉への変化を抑制する能力（例えば、表現型マーカーを用いることによって検出できる）によってインヒビターを評価する。別のテストとして、腹面中胚葉誘導に統計学的に有意な減少を起こす化合物も選択することができる。このアッセイは、シグナリン依存性のシグナルカスケードに応答して、遺伝子発現が上方調節または下方調節される状況を調べることにより簡単に実施することができる。好ましい態様として、そのような遺伝子の調節領域（例えば、５’フランキングプロモータ領域およびエンハンサー領域）は、容易に検出され得る遺伝子生成物をコードする検知性マーカー（例えば、ルシフェラーゼ）に作動的に連結されている。薬剤スクリーニングの他の態様としてシグナリンおよびシグナリン結合性タンパク質を用いるツーハイブリッドアッセイを構築し、薬剤依存性の相互作用の抑制および促進を評価することもできる。シグナリンタンパク質自身が（または他のタンパク質とコンプレックスの形態で）ＤＮＡに結合し遺伝子の転写を変性する能力がある場合には、例えば、検出可能なマーカー遺伝子に作動的に連結した調節配列に応答性のあるシグナリンを用いる転写型のアッセイも可能である。さらに、上述した各アッセイは、「差次(differential)」フォーマット（様式）で構築することもできる。すなわち、特異性に関する情報とともに、効能（有効性）に関する情報が得られるようなフォーマットのアッセイにする。例えば、いろいろなシグナリンに対する或る１種の被検化合物の効果を並置比較することにより選択性に関する情報が得られ、或る一群のシグナリンのみの生理活性を選択的に調節するような化合物を明らかにすることができる。本発明は、さらに、ＴＧＦβ因子に応答性のある細胞の分化組織を誘導しおよび／もしくは維持し、生存を促進し、ならびに／または増殖を促進（もしくは抑制）する方法であって、該成長因子によるシグナリン依存性シグナリング（シグナル伝達）を調節する作用物質（薬剤）に該細胞を接触させることによる方法に関する。例えば、本発明に従い脊椎動物において分化した組織から秩序のある空間配置が形成されるに際してシグナリンタンパク質が広く関与していると考えられるということを見出したことに基づき、本発明の方法は、インビトロおよびインビボのいずれにおいても一連の異なる脊椎動物組織を形成および／または維持するのに用いることができる。「シグナリン治療剤」とは、ＴＧＦ−βによるシグナリング（シグナル伝達）に関し誘導性であるものまたは非誘導性であるものを問わず、前述の調製物（製剤）の全てのものを指称し、例えば、本明細書に記述する薬剤アッセイで確認された単離ポリペプチド、遺伝子治療用構造体、アンチセンス分子、ペプチドミメチックまたは作用物質を含むものとする。さらに、キイロショウジョウバエ中で脊椎動物シグナリンタンパク質が活性を有するという知見に基づき、治療および診断の目的で用いられる場合、シグナリン治療剤とはDrosophilaおよびC．elegansのＭＡＤタンパク質およびそのホモログも含むものとする。本発明のシグナリン治療剤が治療に用いられ得る広範囲の病理学的な細胞増殖状態が存在する。例えば、異常な細胞増殖を抑制しようとする場合に該作用物質は治療効果がある。この治療法が効果的である疾病としては、各種の癌や白血病、乾癬、骨疾病、繊維増殖症（例えば結合組織が関与するもの）、アテローム性動脈硬化症およびその他の平滑筋増殖症があり、さらに、慢性の炎症が挙げられるが、それらに限定されない。特に、本シグナリン遺伝子の両アレルが変異したり欠損すると異常増殖が起こり、したがってシグナリンは腫瘍抑制遺伝子として機能するものと思われる。この点に関し、ヒトのすい臓癌腫の約90％に染色体18 ｑにおけるアレル喪失が見出されている（Hahn他(1996)Science 271:350）。ＤＰＣ４（Ｍａｄならびにｓｍａ−２、ｓｍａ−３およびｓｍａ−４に相同な遺伝子）は、調べたすい臓癌腫の約30％においてホモ接合体として欠損していることが見出されている。本発明に従えば、増殖性疾患の他に、分化疾患、すなわち、例えば、有糸分裂への不全再入を伴うことがある組織の脱分化（例えばアポトーシス）に起因する分化疾患の治療にシグナリン治療剤を使用する。そのような退化性疾患としては、神経系の慢性的な神経変性疾患、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症等が挙げられ、さらに脊椎小脳変性も含まれる。他の分化疾患としては、例えば、結合組織に関連する疾患（例えば軟骨細胞や骨細胞の脱分化に起因して起こるもの）が挙げられ、さらに、内皮組織細胞および平滑筋細胞の脱分化が関与する血管疾患、腺細胞の退化変性を特徴とする胃潰瘍、および分化欠落を特徴とする腎臓障害（例えばウイルム腫瘍）が挙げられる。さらに、シグナリン経路の調節剤を一時的に使用することにより、例えば、器官の発生や維持における組織のインビボ修復を行うことができる。本発明の遺伝子構造体は、いろいろな細胞の増殖能や分化能を制御することにより、損傷を受けた組織を修復し、あるいは、移植された組織の接合や形態を改変するのに使用することができる。例えば、シグナリンアゴニストまたはシグナリンアンタゴニストを差次的に用いて、物理的、化学的または病理学的障害を受けた後のいろいろな段階の器官修復を調節することができる。例えば、軟骨の治療、骨密度の増化、部分的な肝臓切除後の肝臓修復、あるいは肺気腫治療における肺組織再生の促進にそのような方法を用いることができる。例えば、本発明の方法は細胞培養技術に応用することができる。インビトロのニューロン培養系は、神経発生の研究、さらには栄養および成長因子、例えば神経成長因子（ＮＧＦ）、睫毛栄養因子（ＣＮＴＦ）、および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）の同定に必要な基本的且つ必須のツール（手段）であることが証明されている。ニューロン細胞は最終分化してしまうと、一般的には他の最終分化細胞タイプには変化しない。しかしながら、ニューロン細胞は簡単にその分化状態を喪失してしまう。これが一般的に観察されるのは、該細胞が成体組織由来の培地で成長させられている場合、および再生中に芽体を形成する場合である。本方法は、いろいろな分化段階におけるニューロン細胞を維持するための適当な制限的環境を確保する手段を提供し、例えば、他の成長因子の特定の活性をテストするよう設計された細胞に用いることができる。本方法のそのような態様においては、ＴＧＦ−β因子アクチビンによって誘導されるシグナリン仲介型シグナルを抑制する作用物質に培養細胞を接触させ、ニューロンの分化（例えば幹細胞の）を誘導し、あるいは、分化の喪失を防止することにより最終分化したニューロン細胞培養物を壊れないように維持することができる。MeltonおよびHemmati-Br ivanlouによるＰＣＴ公報ＰＣＴ／ＵＳ94／11745に記載されているように、外胚葉組織の運命は、中胚葉および／または外皮ではなくニューロンである。特に、アクチビンによるシグナリングを防止または拮抗させることによりニューロン運命性経路(neuronal-fated)に従った分化が起こることが見出された。１つの例示態様として、本方法において例えば幹細胞の培養におけるシグナリン治療剤の役割は、非拘束幹細胞の分化を引き起こすことにより拘束幹細胞を生成すること、あるいは、幹細胞の発生運命の限定を引き起こして終端分化したニューロン細胞になるようにすることにある。例えば、本発明の方法はインビトロで神経冠細胞の分化を誘導および／または維持して、グリア細胞、シュワン細胞、クロム親和細胞、コリン作動性交感または副交感細胞にし、さらにはペプチド作動性ニューロンおよびセロトニン作動性ニューロンにするのに用いることができる。このシグナリン治療剤は単独で使用することができ、あるいは、ニューロン幹細胞の特定の分化運命を特に高めるように作用する他の神経栄養因子と組み合わせて使用することもできる。後者の場合、シグナリン治療剤により、処理された細胞が特定の表現型状態に達する結果、該細胞は特定の発生経路に沿うようにバランスが保たれて、第２の神経栄養と接触したときに適切に誘導されるものと考えられる。同様にして、比較的未分化の幹細胞または原始神経芽細胞を培養に際し維持して、シグナリン治療剤による処理により分化が引き起こされるようにすることもできる。原始細胞培養物の例としては、肺（充分な分化が起こる前でもよい）の神経板または神経管からハーベストされた細胞から成るものが挙げられる。本発明の更に別の態様は、ニューロン性分化（例えば、中胚葉および外胚葉分化過程におけるＴＧＦ−βによるもの）のみならず、その他の脊椎動物器官形成経路に関与する形態形成シグナルの調節にシグナリン治療剤を適用することに関する。すなわち、本発明に従えば、非ニューロン系組織の形成および維持に関連する細胞培養および治療法にもシグナリン治療剤を含む組成物を利用することができる。１つの態様において本発明は、シグナリンタンパク質が消化管、肝臓、肺臓およびその他の原腸由来の器官の発生および形成の制御に関与していると考えられることを見出したことに基づく。後の実施例に記述しているように、シグナリンタンパク質は、ＴＧＦ−β誘導シグナルに応答する細胞活性に関与していると推測される。したがって、平常な肝臓の多くの代謝機能を有し得る人工肝臓の開発および維持にシグナリンアゴニストおよび／またはアンタゴニストを用いることができる。１例として、シグナリン治療剤を用いて、消化管幹細胞の分化を誘導および／または維持して肝細胞培養物を調製し、これを細胞外マトリックスに導入したり、あるいは、生体適合性ポリマー内に封入して、移植性の生体外人工肝臓を形成することができる。他の態様として、そのような人工肝臓、さらには胚性肝臓構造体の移植にシグナリン治療剤組成物を用いて、腹腔内移植、血管形成、および移植肝臓組織のインビボ分化と維持を促進させるようにすることができる。同様にして、すい臓培養物ならびにすい臓組織および器官の形成および維持にシグナリン治療剤を用いることもできる。別の態様においてはインビトロの細胞培養物を用いて、シグナリン仲介シグナル伝達の破壊に応答して発現され、したがって、組織の発生および／または維持に関与していると考えられる遺伝子および遺伝子生成物（産物）の同定、単離および研究を行うことができる。これらの遺伝子は、シグナリン遺伝子生成物の「下流」であろう。例えば、シグナリン仲介性誘導を起こすために新しい転写が必要とされる場合には、対照（コントロール）細胞を用いて調製した減性ｃＤＮＡライブラリーおよびシグナリン遺伝子を過剰発現する細胞を用いて、この過程により始動または停止させられる遺伝子を単離することができる。本発明に従いそのような遺伝子を単離するのに有用な方法の１例は、WangおよびBrownにより記述されたＰＣＲ法を用いる協力減性ライブラリー法である（Wang他(1991)Proc． Natl．Acad．Sci．USA 88:11505-11509）。例えば、この方法を用いれば、アフリカツメガエルにおいて甲状腺ホルモンによる処理により（または該処理なしに）尾部吸収に関与する16種類以上の遺伝子の単離に成功している。対照細胞および処理細胞を用い、非誘導プールから誘導プールを減じることにより、始動させられる遺伝子を単離することができ、また、誘導プールから非誘導プールを減じることにより、停止させられる遺伝子を単離することができる。このようなスクリーニングから、２種類のｍＲＮＡを同定することができる。クラスＩのＲＮＡは、非処理細胞内で発現され誘導細胞内では減じられまたは排除されたＲＮＡ、すなわち、下方調節されたＲＮＡ集団である。クラスIIのＲＮＡは、誘導に応答して調節されない、したがって、非処理細胞内よりは処理細胞中に多いＲＮＡを含む。処理細胞から抽出されたＲＮＡと非処理細胞から抽出されたＲＮＡとを調べることにより、該ライブラリーから単離されたクローンを分類する一次テストとなる。各クラスのクローンの特性は配列分析によりさらに明らかにされ、それらの胚中の時空分布は、インサイチューでの全量およびノーザンブロット分析により決定される。さらに別の態様においてはシグナリン治療剤を用いて、物理的、化学的または病理学的傷害を受けたような器官を調節することができる。例えば、部分的な肝切除後の肝臓修復にシグナリン治療剤を含む治療用組成物を利用することができる。同様に、シグナリン治療剤を含有する治療用組成物を用いて、肝気腫治療後の肝臓組織の再生を促進することもできる。本発明の更に別の態様として、骨格組織（例えば骨格形成幹細胞由来のもの）のインビトロ形成、さらには骨格組織不全症のインビボ治療に、シグナリン治療剤を含む組成物を用いることができる。特に本発明は、骨形態形成性タンパク質（ＢＭＰ）またはＴＧＦ−βの誘導性活性を高めるように調節または模擬するようなシグナリン治療剤を用いて、例えば、軟骨形成および／または骨形成を有効に制御し得るようにすることに関する。「骨格組織不全症」とは、骨または結合組織の回復が所望されている全ての部位における不全症を意味し、ＴＧＦ−β誘導性応答の調節が必要とされる限り該不全症の発生原因には関係せず、例えば、外科的介入、腫瘍の除去、潰瘍、移植、骨折、またはその他の外傷性または変質性状態に由来するか否かを問わないものとする。例えば、本発明に従えば、結合組織に対する軟骨機能を回復させるのに有効な治療法およびシグナリン治療剤組成物が得られる。該方法は、例えば、変質性衰弱に起因する軟骨組織の欠損や損傷（例えば、関節炎）、さらに、組織に対する外傷によって引き起こされるようなその他の物理的障害（例えば、裂傷半月板組織の偏位、関節半月摘除、裂傷靭帯による関節の弛緩、関節の悪化、骨折、さらには遺伝病によるもの）の修復に有用である。本発明の修復法は、例えばプラスチックまたは再成形外科手術さらには歯周手術において軟骨マトリックスを再形成するのにも有用である。本発明の方法は、さらに、以前の修復治療の改善、例えば、半月、靭帯または軟骨の外科的修復後の改善にも適用できる。さらに、外傷後、充分に早期に適用すれば、変質性疾病の発病や悪化を防ぐこともできる。一つの態様として、本発明の方法は、障害のある結合組織を治療上充分量のシグナリン治療剤で処理し、該組織に埋設されている軟骨細胞の分化および／または増殖を刺激することにより結合組織内に軟骨修復応答を発生させることから成る。シグナリン治療剤の処理により軟骨細胞が誘導されると、処理された細胞による新しい軟骨マトリックスの合成が起こる。関節軟骨、関節内軟骨（半月板）、肋骨軟骨（真肋骨と胸骨を連結している）、靭帯、および腱のような結合組織は、本発明の方法による再構築性および／または再生性の治療における処理に特に敏感である。ここで再生性治療とは、組織の損傷が一目瞭然であるようなところまで進行した退化（退行）状態の治療とともに、退化が初期状態にあるかまたは切迫しているような組織の予防的治療を含む。本発明の方法は、さらに、新しい軟骨の定常的な産を維持することにより、繊維性組織への無機化の拡がりを防止するのに使用することもできる。１つの例示態様として、本方法は、全動関節（例えば、膝、踝、肘、股関節、手もしくは足の指関節、下顎骨関節）の治療に使用することができる。この治療は、関節の半月、関節の軟骨、またはそれらの両方に対して実施される。さらに、本発明の方法は、膝の変性障害、例えば、外傷（スポーツによる傷害や過度の疲労）や骨関節に起因する障害を治療するのに用いることもできる。シグナリン治療剤を例えば関節鏡針を用いて関節に注入することにより障害軟骨を治療することができる。場合によっては、注入薬剤をヒドロゲルまたは上述したような他の遅延放出型ビヒクルの形態にして、該薬剤と被治療組織との接触が大きく且つ規則的になるようにすることもできる。本発明に従えば、軟骨移植および補綴装置治療の分野に本発明の方法を用いる。現在のところ、自家組織または同種異系軟骨の移植による軟骨の成長は成功していない。問題は、例えば、軟骨および繊維軟骨の特性は、異なる組織間で変化することに起因する。例えば、関節間軟骨、靭帯および腱の間、同一の靭帯または腱の両端部の間、あるいは組織の表面部と深部の間で変化する。これらの組織の空間的に配置されていることは物理的性質が少しずつ変化していることであり、同じ条件で分化を受けなかった移植が適当な対応能力を有しないと機能不全が起こる。例えば、半月軟骨を用いて腹側十字靭帯を修復しようとすると、該組織は化生を受けて純粋な繊維組織になる。本発明の方法は軟骨形成を促進することによりこの問題を解決しようとするものであり、移植された細胞の新しい環境に対する適応性を高め、該組織の以前の発生段階の軟骨細胞に効果的に類似させるものである。すなわち、本発明によって付与される移植組織の軟骨形成作用、および積極的に修復しようとしている組織に対する物理的な力が共働作用して、付与されるべき新しい機能に適合するよう移植組織が改良される。同様にして、本発明の方法は、補綴軟骨装置の製作およびその移植を促進するのに応用することができる。治療向上の必要性から、コラーゲン−グリコースアミノグリカン鋳型(Stone他(1990)Clin Orthop Relat Red 252:129)、単離した軟骨細胞(Grande他(1989)J Orthop Res 7:208；およびTakigawa他(1987)Bone Mine r 2:449)および天然または合成ポリマーに結合された軟骨細胞(Walitani他(1989 )J Bone Jt Surg 71B:74；Vacanti他(1991)Plast Reconstr Surg 88:753；von S chroeder他(1991)J Biomed Mater Res 25:329；Freed他(1993)J Biomed Mater R es 27:11およびVacanti他、米国特許第5,041,138号)に基づく新しい軟骨の創製を目的とする研究が進められている。例えば、軟骨細胞は、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、アガロースゲル、またはその他の経時分解するポリマー（ポリマー骨格の加水分解作用により無害なモノマーとなる）のようなポリマーから形成された生分解性で生体適合性高多孔質骨格上の培地内で成長させることができる。該マトリックスは、接合が起こるようになるまで細胞に適当な栄養分およびガス交換が行われるように設計されている。移植に適する細胞体積と密度が得られるまで細胞をインビトロ培養することができる。そのようなマトリックスの１つの利点は、個人毎に所望の形状に成形することができるので、最終製品が患者自身の（例えば）耳や鼻に近似するということ、あるいは、可撓性のマトリックスを用いることにより移植時の操作が可能となる（例えば、関節の場合）ということである。本発明の方法の１つの態様として、インプラント（移植組織）を培養過程中にシグナリン治療剤と接触させ、培養物内で分化された軟骨細胞を誘導および／または維持させることによりインプラント内での軟骨マトリックス生成をさらに刺激する。このような方法により、培養細胞は、軟骨形成細胞（すなわち、肥大性細胞）に典型的な表現型を維持し、したがって、該マトリックスの密度および軟骨組織の生成を持続する。別の態様においては移植（インプラント）した装置をシグナリン治療剤で処理して、移植されたマトリックスを積極的に改変し、意図した機能に適するようにする。組織移植に関連して上述したように、人工的な移植物も、該マトリックスが移植される実際の物理的環境に匹敵する環境由来のものではないという欠点がある。本発明の方法に従いマトリックス内の軟骨を活性化することにより、インプラントは交換しようとする組織に類似する特性を取得することができる。更に別の態様として、補綴装置の取付けを向上させるのに本方法を用いる。具体的には、歯周補綴装置の移植に本方法を用い、周囲の結合組織の処理により該補綴装置の周りの歯周靭帯の形成が刺激されるとともに、補綴装置近傍の繊維組織の形成が抑制されるようにする。更に別の態様においては、動物において骨格組織が不全な部位での骨形成を起こすのに本発明の方法を用いることもできる。ＴＧＦ−β、特にＢＭＰは、最終的に骨芽細胞に置換される肥大性軟骨、および骨細胞による骨マトリックスの生成と関連している。したがって、患者の骨喪失を治療する方法の一部としてシグナリン治療剤の投与を行い、例えば、骨粗鬆症およびその他の骨疾患を防止しおよび／または後退させるとともに、骨の成長および変異を調節することができる。例えば、シグナリンアゴニストを含む調製物（製剤）を用いて、例えば、ＢＭＰの活性を模擬しまたは促進することにより軟骨内骨化作用を誘発し、軟骨組織前駆体の形成を少なくとも促進して骨化作用の「モデル」を形成させることができる。シグナリンアゴニストから成る治療組成物は、必要に応じて、骨成長因子（例えば、骨形態形成因子ＢＭＰ−２およびＢＭＰ−４、さらにはアクチビンのようなＴＧＦ−β因子）のような他の骨誘導因子で補強することもでき、また、骨吸収インヒビター（例えば、エストロゲン、ビスホスホネート、フッ化ナトリウム、カルシトニンもしくはタモキシフェン、またはそれらの類似化合物）を含むこともあり、またはそれらと組み合わせて投与してもよい。特定の細胞型（タイプ）、特に上皮細胞および造血細胞においては、平常な細胞増殖の特徴は、ＴＧＦβ群に属するもののような成長因子に対して応答することにある。これは一般に有糸分裂後表現型への細胞分化を伴う。しかしながら、これらの細胞型に由来するヒトの癌のかなりのパーセントにおいて、ＴＧＦβのような成長調節剤に対する応答性が減少していることが観察されている。例えば、結腸直腸、肝上皮および表皮由来の腫瘍の中には、平常な場合に比べてＴＧＦβ の成長抑制効果に対する感度と抵抗性の減少を示すものがある。この点に関し、それらの幾つかの形質転換細胞の注目すべき特徴は、検出性のＴＧＦβレセプターが無いということである。それらの腫瘍をシグナリン治療剤で処理することにより、ＴＧＦβ仲介性抑制の有効作用を模擬できる機会が得られる。本発明の方法の別の用途として、グリオームの治療にシグナリン治療剤を使用することができる。グリオームは全年齢において頭蓋内腫瘍の40〜50％を占めると言われる。悪性グリオームの手術後の放射線治療、化学療法、時には免疫療法が広く行われるようになったにも拘わらず、死亡率および罹病率は実質的によくなっていない。しかしながら、かなりの数のグリオームにおいてＴＧＦβ応答性の欠失が増殖制御の喪失の重要な事象であるという実験的および臨床的証拠が増えている。レセプターの欠失または他のＴＧＦβシグナル伝達タンパク質の欠失による応答性減少の原因がシグナリンの上流にある場合には、シグナリン治療剤を用いる治療により細胞増殖を有効に抑制することができる。本発明のシグナリン治療剤は、過増殖性管疾患、例えば、平滑筋過形成（アテローム性動脈硬化症など）の治療、さらには、繊維症を特徴とする他の疾患、例えば、リウマチ性関節炎、インシュリン依存性糖尿病メリタス、糸状体腎炎、硬変症および強皮症、特に自己分泌または傍分泌ＴＧＦβシグナリングの欠失が示唆されるような増殖性疾患の治療に使用することができる。例えば、各種の物理的および薬学的手当を行ってもrestinosisは冠状血管形成の効能を継続的に制限する。平滑筋細胞の脈管内膜増殖の平常な制御に関与する重要な機構は、平滑筋細胞におけるＴＧＦβ抑制ループの誘導と考えられる。(S cott-Burden他(1994)TexHeart Ist J 21:91-97；Graiger他(1993) Cardiovas Re s 27:2238-2247；およびGrainger他(1993)Biochem J．294:109-112)。ＴＧＦβ に対する感受性欠失、またはＰＤＧＦ自己刺激などによるこの抑制性刺激に対する無応答が、restinosisにおける異常な平滑筋増殖に寄与していることは考える。したがって、ＴＧＦβによる誘導を模擬する本発明の遺伝子構造体を用いる遺伝子治療により、restinosisを治療または予防することは可能であろう。該遺伝子構造体は、例えば、ウイルス系またはリポソーム系供給組成物を用いる外皮透内腔遺伝子移入により供給することができる(Mazur他(1994)Tex Heart Inst J．21:104-111)。心臓または血管の平滑筋を治療するためのアデノウイルスを媒体とする手法と組成物の例がＰＣＴ公報ＷＯ94/11506に記述されている。ＴＧＦβは、ヒトの腎臓の発生と疾病における糸球体および間質部位においても重要な役割を果たしている。したがって、本方法は、糸球体症およびその他の腎臓の増殖性障害を治療または抑制する方法を提供するものであり、本発明のシグナリン治療剤をインビボ供給することから成る。本発明は、さらに、中枢神経系および末梢神経系の両方において、ニューロンおよびその他の神経細胞の生存を促進するためにシグナリン治療剤を適用することに関する。神経系の発生過程および成体におけるＴＧＦ−β因子のニューロン分化調節能が示唆しているように、ある種のシグナリンタンパク質が成体ニューロンの制御に関与していると考えられ、平常細胞の維持、機能実行およびエイジング；化学的または物理的に損傷を受けた細胞の修復および再生過程；およびある種の症状における分化欠失に起因する退化や未成熟死亡の防止に関係していると考えられる。これらのことを考慮して、本発明は、以下のことに由来する神経学的病状の治療（予防および／または病状の軽減）に本方法を適用する：（ｉ）神経系に対する急性、亜急性または慢性の障害、例えば、外傷、化学的損傷、血管の障害および不全（卒中による虚血など）、(ii)神経系のエイジング（加齢）、例えばアルツハイマー症、(iii)神経系の慢性的な退化疾患、例えば、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症等、さらには脊椎小脳変性；(iv)神経系または神経系に影響する慢性的な免疫疾病、例えば多硬化症。多くの神経疾患は、個々の神経要素群の変性（退化）に関連しており、シグナリン治療剤を含む療法により治療可能である。例えば、アルツハイマー病は、幾つかの神経伝達系（新皮質に延びるもの、および皮質と併存するもののいずれも）における不全と関係している。例えば、アルツハイマー疾患者の核基底は、同じ年齢の対照者に比べてかなりの欠失（75％）が見出されている。アルツハイマー病は最も一般的な痴呆形態であるが、他の幾つかの障害も痴呆を生み出し得る。これらの幾つかは、中枢神経系のいろいろな部所（特に大脳皮質）におけるニューロンの死亡を特徴とする退化性疾病である。しかしながら、幾つかの痴呆は、視床、すなわち大脳皮質内にある白色物質の変性に関係している。この場合は、遠心性神経および求心性神経の退化（変性）による皮質領域の分離に起因して認識機能の不全が生じる。ハンチントン舞踏病は、皮質のコリン作動性ニューロンおよびGABAergicニューロンの変性を含む。ピック病は、前部側頭葉の新皮質の深刻なニューロン変性によるものであり、線条体のニューロンの死を伴うことがある。このような退化性疾患の患者を治療するためにシグナリン治療剤を適用し、ニューロンの欠失を起こすような分化およびアポトーシスを制御する（例えば、残存しているニューロンの生存を高める）とともに、患部の幹細胞による分化と再生を促進することができる。退化誘導性痴呆の他に、本発明のシグナリン治療剤の１種またはそれ以上から成る薬剤を用いて、振戦や不随意運動のような兆候をもつ神経退化性疾患を適切に治療することもできる。例えば、パーキンソン病は、主として皮質下構造に影響を与え、そして、黒質線状体経路、縫線核、青斑核、および迷走神経の運動核の退化を特徴とする。バリスムは、一般に、視床下部核の損傷（急性の導管事故に因ることが多い）に関係する。さらに、末梢神経系の体分裂に影響を与え、神経筋障害として現れる神経形成および筋疾患も対象とする。具体例として、本発明の方法は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療に用いられる。ＡＬＳは、上部および下部の運動ニューロンを含む一連の障害に与えられている名称である。患者は、進行性の脊髄萎縮、進行性球延髄、原発性側索硬化、またはこれらを組み合わせた症状を呈する。主要な病理学的異常の特徴は、脊髄の下部運動ニューロンおよび大脳皮質の上部運動ニューロンの選択的且つ進行性の退化が起こることである。シグナリン治療剤から成る製剤は、単独使用することができ、あるいは、ＣＮＴＦ、ＢＤＮＦまたはＮＧＦのような神経栄養因子と組み合わせて使用することもでき、ＡＬＳ患者の運動ニューロンの退化を防止および／または後退させる。シグナリン治療剤は、末梢神経系の自律疾患、例えば平滑筋および内分泌組織（例えば腺組織）の神経分布に影響を与える疾患の治療に用いることもできる。例えば、本方法を用いて、心臓の横斑筋に分布している神経の退化に由来するような頻脈や心房不整脈を治療することもできる。他の態様として、本発明の方法は、中枢神経系に起こるような腫瘍性または髄形成性転化の治療に用いることができる。例えば、ＴＧＦ−βに対する応答性を変化させることによるニューロン細胞の分化を含むシグナリン治療剤を用いて、そのような転化細胞を有糸分裂後状態またはアポトーシス状態にすることができる。シグナリン治療剤を用いる治療により、幾つかのニューロン性腫瘍の腫瘍性転化に関連すると考えられる自己分泌ループ（例えばＴＧＦ−β自己刺激ループ）の破壊が促進されるのであろう。したがって、シグナリン治療剤は、例えば、悪性グリオーム、骨髄芽腫、外胚葉腫瘍、および上衣脳室腫などの治療に用いることができる。同様にして、本発明は、別の態様として、Ｔ細胞の活性化を抑制することを含む。ＴＧＦβはＴ細胞の増殖を抑制することが知られており、そして、本発明に従うシグナリンは、慢性の炎症が関与する疾病を直すのに使用することができる。さらに、ＴＧＦβはある種のトレランスに関係しており(Chen他(1995)Nature 376:177-180)、そして、本発明を用いて、同種または異種間の移植に先立ち、またはアレルギーもしくは自己免疫疾患においてＴ細胞トレランスを誘導することができる。更に別の態様として、精子形成を抑制するのにシグナリン依存性経路を調製することができる。精子形成は、二倍体乾細胞の有糸分裂複製が起こった後、半数体細胞が減数分裂および最終分化して形態学的および機能的に分極した精子となる過程である。この過程は、時間的且つ空間的な調節を示すとともに、胚と体細胞との間の相互作用を示す。ＴＧＦβ上位群（特にアクチビン）によって仲介されるシグナルは、そのような細胞外刺激を伝達して精子形成に際して起こる有糸分裂や減数裂の調節を図るのに重要な役割を果たすことは以前に明らかにされている(Klaij他(1994)J．Endocrinol．141:131-141)。同様に、ＴＧＦβ群のメンバーは、女性の生殖器官の調節において重要である（Wu，T．C．他(1994)Mol．Reprod．Dev．38:9-15）。したがって、本発明の方法によって得られたシグナリンアンタゴニストのようなＴＧＦβインヒビターは、避妊用調剤の一部として卵母細胞の成熟を防止するのに有用である。他の態様として、シグナリン治療剤を用いて減少分裂の誘導を調節することにより卵母細胞をインビトロ受精に適するようにすることもできる。そのような方法を用いれば、健康度や生存力が高く、切断、受精、および胚盤胞期に分化し易い均質の高い卵母細胞集団を得ることができる。更に、シグナリン治療剤を用いて、不妊症をもたらすような女性の生殖系の他の疾患（多のう胞卵巣症候群など）を治療することもできる。本発明は、さらに別の態様として、本発明の異種シグナリン遺伝子を発現するトランスジェニック非ヒト動物、または、該動物の少なくとも１種の組織または細胞型中で１種またはそれ以上のゲノムシグナリン遺伝子が破壊されたトランスジェニック非ヒト動物に関する。すなわち、本発明は、発生に関連する疾病の動物モデルに関し、該動物は誤発現されるシグナリンアレルを有する。例えば、１種またはそれ以上のアレルが欠損されているか、不活性されたマウス生育する。次に、そのようなマウスモデルを用いて、誤発現されたシグナリン遺伝子に由来する疾患を研究し、さらに、それらの疾患の治療法を評価することができる。さらに本発明は、トランスジェニック動物、すなわち、本発明のトランスジーン（導入遺伝子）を含有する（該動物の）細胞から構成され、そして好ましくは（随意的であるが）該動物の１種またはそれ以上の細胞内で外来シグナリンタンパク質を発現する動物に関する。シグナリントランスジーンは、野性型の該タンパク質またはそのホモログ（アゴニストとして機能するもの、またはアンタゴニストとして機能するもののいずれも含まれる）、さらにはアンチセンス構造体をコードする。好ましい態様においては、トランスジーンの発現は、特定の細胞群、組織群または発生段階に限られ、このために、例えば、所望のパターンで発現を制御するシス作用配列を利用する。本発明においては、多くの由来分析を行うのにシグナリンタンパク質をそのようなモザイク発現させることが重要であり、これは、例えば、胚内の組織の小区分内で発生に変化を与える可能性のあるシグナリン発現の欠失の効果を調べる手段にもなる。組織特異的調節配列および条件付き調節配列を用いることにより、特定の空間パターン内でトランスジーンの発現を制御することができる。さらに、例えば、条件付き組換えシステムあるいは原核生物由来転写調節配列により、発現の時間的パターンを得ることもできる。インビボの部位特異的遺伝子操作によりトランスジーン（導入遺伝子）の発現することのできる遺伝子技術は当業者には既知である。例えば、標的細胞の遺伝子組換えを触媒するリコンビナーゼ（組み換え用酵素）の調節発現を可能にする遺伝子系が利用できる。ここで用いる「標的配列」とは、リコンビナーゼにより遺伝子組換えされるヌクレオチド配列を指称する。標的配列は、リコンビナーゼ認識配列のそばにあり、一般に、リコンビナーゼ活性を発現する細胞内に切除導入または逆位導入されている。リコンビナーゼを触媒とする組換えは、標的配列の組換えにより、シグナリンタンパク質の１種の発現の活性化または抑制をもたらすように設計する。例えば、組換えシグナリン遺伝子の発現を妨げる標的配列（例えば、アンタゴニストとして機能するホモログまたはアンチセンス転写体をコードするようなもの）を切除して該遺伝子の発現を活性化するように設計する。該タンパク質の発現に対するこの妨害作用は各種の機構に由来し得るものであり、例えば、該シグナリン遺伝子がプロモーター成分や内部の停止コドンから離れている場合に起こる。さらに、トランスジーンの調製に当たっては、該遺伝子のコード配列がリコンビナーゼ認識配列に挟まれている（フランキングされている）ようにし、また、当初の細胞内へのトランスフェクションにおいてプロモーター成分に対して３’から５’の方向になるようにする。このような場合には、標的配列が逆転して該遺伝子を再配向させる、すなわち、該コード配列を、プロモーター成分に対し該プロモーターによって誘導された転写活性が起こるような方向に配置する。本発明のトランジェニック動物は全て、その複数の細胞内に本発明のトランスジーン（導入遺伝子）を含んでおり、該トランスジーンは、細胞の成長、死および／または分化の調節に関し「宿主（ホスト）細胞」の表現型を変化させる。本明細書に記述するトランスジーン構造体の１種またはそれ以上を用いて本発明のトランスジェニック生物を作製することができるので、一般に外来性（外因性）遺伝子材料に沿ってトランスジェニック生物の作製に関する一般的な記述を行うことにする。当業者であればこの一般的な記述に基づき下記の方法や材料を利用して特定のトランスジーン配列を生物に導入することができるであろう。例示態様として、バクテリオファージＰＩから成るｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼシステム（Lakso他（1992）PNAS 89:6232-6236；Orban他(1992)PNAS 89:6 861-6865）、またはSacchromyces cerevisiaeから成るＥＬＰリコンビナーゼシステム(O'Gorman他(1991)Science 251:1351-1355；PCT公報WO 92/15694)を用いて、インビボの部位特異的組換えシステムを構築することができる。Ｃｒｅリコンビナーゼは、ｌｏｘＰ配列間に介在する標的配列の部位特異的組換えを触媒する。ｌｏｘＰ配列は、34塩基対のヌクレオチド反復配列であり（これにＣｒｅコンビナーゼが結合する）、Ｃｒｅリコンビナーゼ仲介性の遺伝子組換えには必要とされる。Ｃｒｅリコンビナーゼが存在する場合、ｌｏｘＰ配列の方法がその間に介在する標的配列が切除されるかまたは逆転するかということを決定し (Abremski他(1984)J．Biol．Chem．259:@1509-1514）、Ｃｒｅリコンビナーゼは、該ｌｏｘＰ配列が直接反復配列（リピート）として配向されている場合には標的配列の切除を触媒し、ｌｏｘＰ配列が逆転リピートとして配向されている場合には標的配列の逆転を触媒する。したがって、標的配列の遺伝子組換えはＣｒｅリコンビナーゼの発現に依存する。リコンビナーゼの発現はプロモータ成分によって調節され、プロモーター成分は調節制御を受け、例えば、組織特異的、発生段階特異的、または外部添加作用物質により誘導性になったり抑制性になったりする。このようにプロモーターの制御が調節されることにより、リコンビナーゼ発現が該プロモーター成分によって仲介されている細胞内においてのみ標的配列の遺伝子組換えが起こるようになる。かくして、組換えシグナリンタンパク質の発現の活性化は、リコンビナーゼ発現の制御を通じて調節することができる。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼシステムを用いて組換えシグナリンタンパク質の発現を調節するには、Ｃｒｅリコンビナーゼおよび該シグナリンタンパク質の両方をコードするトランスジーン（導入遺伝子）を含有するトランスジェニック動物の構築が必要である。Ｃｒｅリコンビナーゼおよび組換えシグナリン遺伝子の両方を含有する動物は、「ダブル」トランスジェニック動物を構築することによって得られる。そのような動物を得るための便利な方法は、それぞれがトランスジーン（例えばシグナリン遺伝子とリコンビナーゼ遺伝子）を含有する２匹のトランスジェニック動物を交配させることである。リコンビナーゼの介在により発現できるような様式でシグナリントランスジーンを含有する動物を最初に構築する１つの利点は、当該タンパク質（アゴニストまたはアンタゴニストのいずれの場合でも）がトランスジェニック動物内で発現されたときに有害になるという可能性があることに由来する。そのような場合には、該トランスジーンがすべての組織内でサイレントであるような始祖集団を繁殖させ維持する。この始祖集団の個々の動物を、例えば１種もしくはそれ以上の組織内でおよび／または所望の時間的パターンでリコンビナーゼを発現する動物と交雑させる。このようにして、例えばアンタゴニスト作用のあるシグナリンのトランスジーンがサイレントであるような始祖集団を形成することにより、該集団由来の子孫であって、特定の組織内または特定の発生段階におけるシグナリン仲介性誘導の破壊が例えば致命的表現型をもたらすような子孫を研究することができる。原核生物由来プロモーター配列を用いても同様の条件付きトランスジーン（導入遺伝子）を得ることができ、この場合は、シグナリントランスジーンの発現を促進するために、同時に発現される原核生物タンパク質を必要とする。プロモーターの例およびそれに対応するトランス活性化原核生物タンパク質は米国特許第 4,833,080号に与えられている。さらに、条件付きトランスジーンの発現は遺伝治療的な方法によって誘導することもでき、この場合は、トランス−活性化タンパク質（例えば、リコンビナーゼまたは原核生物タンパク質）をコードする遺伝子を組織に供給して、例えば、細胞特異的に発現させる。この方法によれば、シグナリントランスジーンは、トランス−アクチベーターの導入により「始動させられる(turned on)」まで、サイレントを保持され成人期に到ることができる。例示態様として、本発明の「トランスジェニック非ヒト動物」は、非ヒト動物の生殖細胞系にトランスジーンを導入することにより作製することができる。いろいろな発生段階における胚性標的細胞を用いて、トランスジーンを導入することができる。胚性標的細胞の発生における段階に応じていろいろな方法が用いられる。本発明を実施するのに用いる動物の系統は、全体的に健康であること、胚産生量の良好であること、胚中で前核がはっきり見えること、および生殖機能が良好であることによって選択する。更に、ハプロタイプが重要な因子である。例えば、トランスジェニックを作製しようとする場合は、Ｃ57BL/6またはＦＶＢ（米国メイン州Bar HarborのJackson Laboratory）のような系統を用いることが多い。好ましい系統はＨ−２^b、Ｈ−２^d、またはＨ−２^qハプロタイプ（例えばＣ５７ＢＬ／６またはＤＢＡ／１）である。本発明の実施に用いられる系統は、それ自身が形質転換動物（トランスジェニック）、および／またはノックアウト（すなわち、部分的または完全に抑圧された１種以上の遺伝子を有する動物から入手したもの）であることもある。１つの態様として、単一期の胚にトランスジーン構造体を導入する。接合子（接合体）はマイクロインジェクションに最適の標的である。マウスにおいてはオスの前核は直径約20マイクロメーターの大きさに達するので１〜２ｐｌのＤＮＡを再現性よく注入することができる。遺伝子移入の標的に接合子を用いることの大きな利点は、多くの場合において最初の分割の前に注入ＤＮＡが宿主遺伝子内に組み入れられるということである（Brinster他(1985)PNAS 82:4438-4442）。この結果、トランスジェニック動物の全ての細胞が導入されたトランスジーンを保有している。このことは、始祖から子孫にトランスジーンが効率的に伝達され、生殖細胞の50％がトランスジーンに保持されていることにも反映されている。一般に、前核が現れるまで受精胚を適当な培地内で培養する。この段階近くで、上述するようにトランスジーンを含むヌクレオチド配列をメスまたはオスの前核に導入する。マウスのような種においては、オスの前核の方が好ましい。最も好ましいのは、卵核または接合子雌性前核によって処理される前に接合子の雄性ＤＮＡ補体に外来性遺伝子材料を添加することである。卵核または雌性前核は雄性ＤＮＡ補体に影響を与える分子を放出しているものと考えられ、これは、おそらく、雄性ＤＮＡのプロタミンをヒストンに置換することにより、雌性と雄性のＤＮＡ補体の結合を促進して二倍体接合子を形成することによるのであろう。このように、外来性遺伝子材料をＤＮＡの雄性補体またはＤＮＡのその他の補体に添加するのは、雌性前核によって処理される前が好ましい。例えば、雄性前核が形成された後のできるだけ早期に、すなわち、雄性前核と雌性前核が充分にされており且つそれらが細膜近くに位置しているときに、外来性遺伝子材料を初期の雄性前核に添加する。別のやり方として、精子が脱濃縮を受けるように誘導された後に、精子の核に外来遺伝子材料を添加することもできる。次に、外来性遺伝子材料を含有する精子を卵子に添加するか、または脱濃縮した精子を卵子に添加し、その後、できるだけ早めにトランスジーン構造体を添加してもよい。胚にトランスジーンヌクレオチド配列を導入するには当該分野で知られた任意の手段を実施すればよく、例えば、マイクロインジェクション、エレクトロポーレーション、またはリポフェクションなどがある。胚内にトランスジーンヌクレオチド配列を導入した後、胚を時間を変えながらインビトロ培養するか、または、代理ホスト（宿主）に再移植し、あるいはそれらの両方を行うことができる。成熟までインビトロ培養（インキュベーション）することは本発明の範囲に属する。一般的な方法として約１〜７日間インビトロで胚を培養した後、代理宿主に再移植する。本発明の目的のためには、接合子は本質的に、完全な生物に発展することができる二倍体細胞を形成するためのものである。一般的に、接合子は、単数または複数の配偶子由来の２ヶの半数体核の融合により、自然にまたは人工的に形成された核を含有する卵から成る。このように、配偶子核は、自然に適合性のあるもの、すなわち、分化を受ける能力があり、機能性生物に発展する能力のある生存力のある接合子を生み出すものでなければならない。一般的には、正倍数体が好ましい。異数体が得られる場合には、いずれかの配偶子が由来する生物の正倍数体の数と比較して、染色体の数は１よりも多く異なってはならない。同様の生物学的検討事項に加えて、物理的事項も、接合子核または接合子核の一部を形成する遺伝子材料に添加できる外来性遺伝子材料の量（例えば、体積）を支配する。遺伝子材料が全く除去されない場合には、添加することのできる外来遺伝子材料の量は、物理的な破壊を伴わずに吸収される量によって制限される。一般的に、挿入される外来遺伝子材料の体積は約10ピコリッターを超えない。添加の物理的影響によって、接合子の生存力が物理的に破壊されないようにしなければならない。ＤＮＡ配列の数と種類の生物学的限界は、接合子のタイプおよび外来遺伝子材料の機能に応じて変化するが、当業者には明らかであろう。得られる接合子の遺伝子材料（外来遺伝子材料を含む）は、分化を開始し維持し、接合子を機能生物に発達させることができるような生物学的能力を有していなければならないからである。接合子に添加されるトランスジーン（導入遺伝子）構造体のコピー数は、添加れる外来（性）遺伝子の全量に依存し、遺伝子形質転換を起こすことができるような量である。理論的には１ヶのコピーのみがあればよいことになるが、挿入された外来ＤＮＡ配列の各々について１ヶより多くのコピーを有する方が、該外来ＤＡＮ配列の表現型発現を増大させる点から有利であることが多い。核の遺伝子材料の中に外来遺伝子の添加を可能とする手法であれば、細胞、核膜またはその他の存在している細胞構造体または遺伝子構造体を破壊しない限り任意の手法を用いることができる。外来遺伝子材料は、マイクロインジェクションにより核の遺伝子材料内に優先的に挿入される。細胞および細胞構造物のマイクロインジェクションは当該分野で知られ使用されているものである。再移植（reimplantation）は標準的な方法を用いて実施される。一般に代理宿主に麻酔をかけ、卵管に胚を挿入する。ある特定の宿主に移植する胚の数は種によって変わるが、一般に、該種が自然に生み出す子孫の数に匹敵する。適当な方法により、代理宿主のトランスジェニック子孫のスクリーニングを行いトランスジーン（導入遺伝子）の存在および／または発現を調べる。スクリーニングは、該トランスジーンの少なくとも一部に相補的なプローブを用い、サザンブロットまたはノーザンブロット分析により行われることが多い。該トランスジーンによってコードされるタンパク質に対する抗体を用いるウエスタンブロット分析を実施して、トランスジーン生成物の存在をスクリーニングする代替または追加の方法としてもよい。典型的には、尾組織からＤＮＡを調製し、サザン分析またはＰＣＲによりトランスジーンの分析を行う。別のやり方として、最も高レベルで発現すると考えられる組織または細胞についてサザン分析またはＰＣＲによりトランスジーンの存在および発現を調べるが、この分析にはいずれの組織や細胞型を使用してもよい。トランスジーンの存在を調べる代替法または追加の方法としては、適当な生化学的アッセイ、例えば、酵素および／または免疫学的アッセイ、特定のマーカーまたは酵素活性についての組織学的染色、フローサイトメトリー分析などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。血液の分析も有用であり、血液中のトランスジーン生成物の存在を調べるとともに、各種の型の血液細胞や他の血液構成成分のレベル（量）に対するトランスジーンの影響を調べることができる。トランスジェニック動物の子孫は、該トランスジェニック動物を適当なパートナーと交配させることにより、または、該トランスジェニック動物から入手した卵子および／または精子のインビトロ受精により得ることができる。パートナーとの交配を実施する場合は、該パートナーがトランスジェニックおよび／またはノックアウトであるときもあればそうでないときもある；トランスジェニックの場合は、同一のもしくは異なるトランスジーン、またはそれらの両方を含有する。別のやり方として、パートナーを親系としてもよい。インビトロ受精を採用する場合、受精させた胚を代理宿主に移植するか、もしくはインビトロ培養を行い、またはその両方を行う。いずれの方法を用いる場合でも、上述の方法または他の適当な方法により、子孫についてトランスジーンの存在を調べる。本発明に従って作製されたトランスジェニック動物は、外来（性）遺伝子材料（遺伝子物質）を含有している。上述したように、該外来遺伝子は、実施態様に応じて、シグナリンタンパク質（アゴニストまたはアンタゴニストとして）、アンチセンス転写体、またはシグナリン変異体の産生をもたらすようなＤＮＡ配列である。さらに、そのような態様においては、該配列は転写制御成分、例えば、プロモーターに連結されて、特定の型の細胞内でトランスジーンの発現が行われ得るようにするのが好ましい。レトロウイルス感染を用いて非ヒト動物にトランスジーンを導入することもできる。発生段階にある非ヒトの胚を胚盤胞期までインビトロ培養する。この期間中は、割球をレトロウイルス感染の標的とすることができる（Jaenich，R．(197 6)PNAS 73:1260-1264）。酵素処理して透明帯を取り除くことにより割球を効率的に感染させることができる（Manipulating the Mouse Embryo．Hogan編(Cold Spring Harbor Laboratory Press発行、Cold Spring Harbor，1986）。トランスジーンを導入するのに使用するウイルスベクターシステムはトランスジーンを運ぶ複製欠損レトロウイルスである（Jahner他(1985)PNAS 82:6027-6931；Van der Putten他(1985)PNAS 82:6148-6152）。ウイルス産生性細胞の単層上で割球を培養することにより、感染を容易且つ効率的に行うことができる（Van der Putten ,上述；Stewart他(1987)EMBO J．6:383-388）。別のやり方として、もっと後期の段階で感染を行うこともできる。すなわち、胞胚腔内にウイルスまたはウイルス産生性細胞を注入する(Jahner他(1982)Nature 298:623-628)。トランスジェニック非ヒト動物を形成した一群の細胞のみに導入が起こるので、始祖動物の多くはトランスジーンに関してモザイクである。さらに、始祖動物は、ゲノムのいろいろな位置においてトランスジーンの各種のレトロウイルス挿入体を含有していることがある（一般に、子孫動物内で分離する）。また、妊娠中の胚にレトロウイルスを子宮内感染させることにより生殖系にトランスジーンを導入することもできる（Jahner他(1982)上述）。トランスジーン導入用の第３のタイプの標的細胞は、胚性幹細胞（ＥＳ）である。ＥＳ細胞はインビトロ培養され胚と融合された予備移植胚から得られる(Eva ns他(1981) Nature 292:154-156；Bradley他(1984) Nature 309:255-258；Go ssler他(1986)PNAS 83:9065-9069；およびRobertson他(1986)Nature 322:445-44 8)。ＤＮＡトランスフェクションまたはレトロウイルスを媒体とするトランスダクション（形質導入）により、トランスジーンはＥＳ細胞内に効率的に導入することができる。次に、そのような形質転換後のＥＳ細胞を非ヒト動物由来の胚盤胞と混合する。その後、該ＥＳ細胞は胚をコロナイズし、得られるキメタ動物の生殖系に寄与する。総説については「Jaenisch，R．(1988)Science 240:1468-14 74」参照。一つの態様として、相同的組換えを利用して動物のゲノムを変性する方法である遺伝子ターゲッティング（遺伝子標的法）を用いて、培養されたＥＳ細胞の変化を引き起こすことができる。ＥＳ細胞内で対象のシグナリン遺伝子にターゲットを行うことにより、キメラを作り出す動物の生殖系にそのような変化が導入される。遺伝子ターゲッティングを行うには、標的とするシグナリン遺伝子座に相同的なセグメントを含み、さらには、該シグナリンのゲノム配列に対する意図する配列変化（例えば、挿入、削除、点変異）を含むＤＮＡターゲッティング構造体を組織培養細胞に導入する。次に、処理後の細胞について正確なターゲッティングを調べるためにスクリーニングを行い、適切にターゲットされた細胞を同定し単離する。本発明においては、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）内での遺伝子ターゲッティングをシグナリン遺伝子の機能を破壊する手段としており、このために、１種またはそれ以上のシグナリンゲノム配列と相同的な組換えを受けるように設計されたターゲッティングトランスジーン構造体を用いている。該ターゲッティング構造体は、シグナリン遺伝子の構成成分（エレメント）との組換えに当たり、ターゲットとしているシグナリン遺伝子のコード配列内にポジティブ（陽性）のマーカーが挿入（または置換）されているように配置する。挿入された配列は、シグナリン遺伝子の機能を破壊するとともに陽性の選択マークを与える。シグナリンターゲッティング構造体の例は、後に詳述する。一般的に、ノックアウト動物を作製するのに用いて胚性幹細胞（ＥＳ細胞）は、作製しようとしているノックアウト動物と同一の種由来のものである。このようにして、例えば、ノックアウトマウスを得るには、マウスの胚性幹細胞が一般に用いられる。胚性幹細胞は、「Doetschmann他(1985)J．Embryol．Exp．Morphol．87:27-45 」に記述されているような当業者に周知の方法を用いて調製し維持される。いずれの細胞系のＥＳ細胞も使用可能であるが、一般的には、発生過程中の胚の生殖系に組み込まれその一部となり、ノックアウト構造体の生殖系伝達を作り出し得る能力に従って細胞系を選択する。すなわち、このような能力を有すると考えられるものであれば、いずれのＥＳ細胞も使用するのに適している。ＥＳ細胞を調製するのに一般的に使用されているマウス系の１つは、１２９Ｊ系である。他のＥＳ細胞系としては、ネズミ細胞系Ｄ３（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＫＬ１９３４）である。別の好ましいＥＳ細胞系はＷＷ６細胞系である(Ioffe他(1995)PNAS 92:7357-7361)。以下の文献に記述されているような当業者に周知の方法を用いて、該細胞を培養し、ノックアウト構造体が挿入できるよう調製する（Robertso n：Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells：A Practical Approach，E．J ．Robertson編、IRL Press，Washington．D．C．(1987)：Bradley他(1986)Curre nt Toplcs in Devel．Biol．20:357-371）；Hogan他、Manipulating the Mouse Embryo：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，COld S pring Harbor，NY(1986))。ＥＳ細胞内にノックアウト構造体を挿入するには当該分野で周知の方法を用いることができ、例えば、エレクトロポーレーション、マイクロインジェクション、およびリン酸カルシウム処理などが挙げられる。好ましい挿入法はエレクトロポーレーションである。ＥＳ細胞内に挿入する各ノックアウト構造体は、当初は、線状でなければならない。かくして、該ノックアウト構造体がベクター（後述）内に挿入されると、ベクター配列内では切断するがノックアウト構造体配列内では切断しないように選ばれた適当な制限エンドヌクレアーゼによりＤＮＡが分解されて線形化が行われている。ＥＳ細胞内へのノックアウト構造体の添加は、当業者で知られているように、選択した挿入方法に適した条件下で行われる。ＥＳ細胞内に複数の構造体を導入する場合には、各ノックアウト構造体を同時に導入することもできる。ＥＳ細胞にエレクトロポーレーションを施す場合には、エレクトロポーレーション装置を用い、メーカーの使用ガイドラインに従い、ＥＳ細胞とノックアウトＤＮＡ構造体を電気パルスにかける。エレクトロポーレーション後、一般的には、適当なインキュベーション条件下においてＥＳ細胞が回収され得るようにする。各種の方法を用いてスクリーニングを行うことができる。例えばマーカー遺伝子が抗生物質耐性遺伝子の場合、致死濃度の構成物質の存在下にＥＳ細胞を培養する。生き残ったＥＳ細胞がノックアウト構造体を組み込んだものと推測される。マーカー遺伝子が構成物質性遺伝子ではない場合は、マーカー配列にのみハイブリダイズするように設計したＤＮＡ配列を用いて、ＥＳ細胞ゲノムＤＮＡのサザンブロットをプローブすることもできる。別の方法としてＰＣＲを用いることもできる。最後に、マーカー遺伝子が、活性が検出され得る酵素（例えば、β− ガラクトシダーゼ）をコードする遺伝子の場合は、適当な条件下で細胞に酵素基質を添加し、酵素活性を分析することができる。当業者であれば、その他の有用なマーカーおよび所与の細胞内でその存在を検出手段を熟知しているであろう。そのようなマーカーも全て本発明の開示に包含されるものとする。ノックアウト構造体は、ＥＳ細胞ゲノム内の幾つかの位置に組み込まれ、また、各ＥＳ細胞ゲノム内では異なる位置に組み込まれる（無秩序挿入現象に因る）と考えられる。望ましい挿入位置は、ノックアウトされるべきＤＮＡ配列（例えば、シグナリンのコード配列、転写調節配列など）に相補的な位置である。一般的には、ノックアウト構造体を取り入れたＥＳ細胞の約１〜５％以下が、所望の位置にノックアウト構造体を取り込むであろう。ノックアウト構造体を適切に取り込んだＥＳ細胞を同定するためには、標準的な方法を用いてＥＳ細胞から全ＤＮＡを抽出する。次に、該ＤＮＡを、特定の制限酵素（単数または複数）を用いて分解したゲノムＤＮＡに特定のパターンでハイブリダイズするように設計したプローブ（単数または複数）を用いてサザンブロット上で探査する。別の方法として、または、上記の方法に加えて、特定のサイズと配列のＤＮＡフラグメントを増殖するように設計されたプローブを用いるＰＣＲによりゲノムＤＮＡを増幅することもできる（適切な位置にノックアウト構造体を含有する細胞のみが、適切なサイズのＤＮＡフラグメントを形成する）。ノックアウト構造体を適切な位置に含有する正しいＥＳ細胞を同定した後、該細胞を胚内に挿入する。この挿入は、当業者に知られた各種の方法で行うことができるが、好ましい方法はマイクロインジェクションによるものである。マイクロインジェクション用に約10〜30ヶの細胞を集めてマイクピペットに入れ、適切な発生段階の胚内に注入して、ノックアウト構造体を含有する外来ＥＳ細胞が発生過程の胚内に組み込まれるようにする。例えば、形質転換後のＥＳ細胞を胚盤胞にマイクロインジェクションする。ＥＳ細胞の挿入に用いる胚に関して適切な発生段階とは、種に依存することが非常に大きいが、マウスの場合は約3.5日目である。妊娠しているメスの子宮を灌流することにより胚が得られる。これを行う好適な方法は当業者には明らかであり、例えば、「Bradley他、上述」に記述されている。適切な発生段階にあればどの胚を使用してもよいが好ましい胚は、雄性のものである。マウスにおいては、好ましい胚は、ＥＳ細胞遺伝子によってコードされている毛色とは異なる毛色をコードする遺伝子を含有するものである。このようにして、子孫動物をスクリーニングして、モザイク毛色を探すことによりノックアウト構造体の存在（ＥＳ細胞が発生過程の胚内に組み込まれたことを示唆する）を簡単に調べることができる。例えば、ＥＳ細胞系が白色の毛の遺伝子を保有している場合は、黒色または茶色の毛の遺伝子を保有するような胚を選択する。胚内にＥＳ細胞が導入された後、偽妊娠した養育動物（foster）の子宮内に胚を移植して妊娠させる。養育母親動物としては、任意の動物が使用できるが、繁殖や生殖の能力が良好であること、および子動物を世話する能力によって選択される。そのような養育母親動物は、同一の種の輸精管切除されたオスと交配させることにより作製されるのが一般的である。偽妊娠させた養育母親動物がどの段階にあるかということは移植を成功させるのに重要であり、種に依存する。マウスの場合、この段階は偽妊娠から約２〜３日後である。養育母親動物(foster mother)から生まれた子孫動物についてスクリーニングを行い、（上述したような）毛色選択方式に従い、先ずモザイク状の毛色について調べる。これに追加して、あるいはこの方法に代わるものとして、子孫動物の尾組織由来のＤＮＡのスクリーニングを行い、上述したようにサザンブロットおよび／またはＰＣＲを用いてノックアウト構造が存在するか否かを調べた。次に、モザイクが現れた子孫動物がその生殖系にノックアウト構造体を保有していると考えられる場合には、それらを互いに交雑して、ホモ接合動物を作りだす。ホモ接合体の同定は、この交雑によって生み出されたマウス、さらには、既知のヘテロ接合体で野性型のマウスのゲノムＤＮＡの当量をサザンブロットすることにより行うことができる。ノックアウト子孫動物を同定し、特性を明らかにするため他の手段を利用することもできる。例えば、ノーザンブロットを用いてｍＲＮＡのプロービングを行い、ノックアウトされた遺伝子、マーカー遺伝子、またはそれらの両方の有無を調べることもできる。ウエスタンブロットを用いて、特定のシグナリンタンパク質に対する抗体、またはマーカー遺伝子の生産物に対する抗体によりウエスタンブロットを探査することにより、子孫動物のいろいろな組織内でノックアウトされたシグナリン遺伝子の発現レベルを調べることもできる。最後に、適当な抗体を用いて、子孫動物由来のいろいろな組織のインサイチュー分析（例えば、細胞を固定化し、抗体でラベルする）および／またはＦＡＣＳ（fluorescent activa ted cell sorting:蛍光染色細胞選別）分析を行い、ノックアウト構造遺伝子の生成物の有無を調べることもできる。ノックアウトないしは遺伝子破壊トランスジェニック動物を作製する他の方法も一般に知られている。例えば、「Manipulating the Mouse Embryo．(Cold Spr ing Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N．Y．1986)」参照。リコンビナーゼ依存性ノックアウト動物を作製することもでき、例えば、相同的組換えにより標的配列を挿入して、シグナリン遺伝子の活性の組織特異的および／または時間的制御がリコンビナーゼ配列によってなされ得るようにする（後述）。幾つかの方法に従って、複数のオックアウト構造体および／または複数のトランスジーン発現構造体を含有する動物が作製される。そのような調製における好ましい方式は、一連の哺乳動物を作成し、各々が所望のトランスジーン表現型の１種を含有するようにすることである。一連の交雑、戻し交雑および選択により、それらの動物を一緒に飼育し、最終的には、所望のノックアウト構造体および／または発現構造体の全てを含有する単一の動物（この動物は、ノックアウト構造体および／またはトランスジーンが存在することを除けば野性型とコンジェニック（遺伝的に同一）である）を作製する。一般に、交雑および戻し交雑は、同胞種同志または親系を子孫と交配させることにより行われ、育種のどの特定の過程を目的としているかに依存する。場合によっては、多数の子孫を作製して、適切な染色体位置にノックアウト構造体および／またはトランスジーンの各々を含有する単一の子孫を作り出すのが必要なことがある。例えば、シグナリンをコードする遺伝子およびその他のＴＧＦβ様遺伝子（例えば、骨の形態形成タンパク質、アクチビン、ノーダル等）、他の腫瘍抑制遺伝子（例えば、ｐ５３、ＤＣＣ、ｐ２１^cip1、ｐ２７^kip1、Ｒｂおよび／またはＥ２Ｆ）、または発生に関与する遺伝子（例えば、hedgehog、ドーサリン、神経栄養遺伝子）を破壊するのが望まれることもある。かくして、シグナリンおよび他の遺伝子の両方がノックアウトされたマウスを構築するには、本質的に２つの実際上の選択肢がある。第一は、単一のＥＳ細胞にシグナリンおよび他の遺伝子の両方のノックアウト構造体を注入し、両方の構造体が同じＥＳ細胞の同じ染色体に組み込まれた形質転換細胞を同じ染色体に組み込まれた形質転換細胞をスクリーニングする。第２の方法では（より好ましい態様として）、２種類のノックアウト動物を作製し、一方はシグナリンノックアウト構造体を含有し、もう一方は他の遺伝子のノックアウト構造体を含有しているようにする。これらの動物を一緒に飼育し、連続して交配させ、そしてスクリーニングを行い、同じ染色体上に両ノックアウト構造体を含有する子孫動物を得る（マウスにおいては、シグナリンをコードする遺伝子と他の遺伝子は同じ染色体上にあるので、シグナリン遺伝子と他の遺伝子の間にクロスオーバーが起こるとこの結果が得られる）。本発明のトランスジェニック動物を用いて得ることのできるトランスジェニック交雑の例としては、その子孫動物を第２のトランスジェニック動物と交配させることが挙げられ、ここで第２のトランスジェニック動物においては、別の腫瘍抑制因子が機能的に破壊されているか、あるいは、発ガン遺伝子が過剰発現されるか、または負性調節を欠失している（機能的に過剰発現する）。例えば、本発明に従うシグナリン破壊動物を別のトランスジェニック動物（同じ種の）であって、腫瘍抑制遺伝子（例えば、ｐ５３、ＤＤＣ、ｐ１６^ink4、ｐ２１^cip1、Ｒｂおよび／またはＥ２Ｆ）の少なくとも１つの遺伝子座が破壊されているトランスジェニック動物と交雑させることができる。別の例示態様においては、本発明のシグナリン破壊動物をトランスジェニック動物、すなわち、少なくとも１種の発ガン遺伝子を過剰発現するか、または以下のようなものに関して発現および／または生理活性が調節されないようになっている動物と交雑させる：少なくとも１種の発ガン遺伝子（例えば、ｒａｓ、ｍｙｃ、ｃｄｃ２５ＡまたはＢ）、Ｂｃｌ −２、Ｂｃｌ−６、形質転換性成長因子（例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβなど）、ｎｅｕ、ｉｎｔ−３、ポリオーマウイルス・ミドルＴ抗原、ＳＶ４０のラージＴ抗原、パピローマウイルスのＥ６およびＥ７抗原の一方または両方、ＣＤＫ４、またはサイクリンＤ１。更に別の態様においては、第２のトランスジェニック動物として、ＴＧＦβ（例えば、ＢＭＰおよびその類似物）、hedgehog、ドーサリン、神経栄養因子などのような分化因子の破壊または過剰発現、あるいは神経栄養因子レセプター、パッチＴＧＦβレセプター（例えばアクチビンレセプター）、ＷＴ−１等のような分化の誘導に関与するレセプターまたはシグナル伝達タンパク質の機能破壊または過剰発現によって発生に関与するシグナルが変化しているようなトランスジェニック動物とすることができる。下記から理解されるように、Ｆ１×Ｆ１交雑による品種は、トランスジーン自体の効果とともに、トランスジーン構造体によって与えられる調節および欠失パターンに由来する。例えば、ホモ接合またはヘテロ接合トランスジェニック動物と第２のトランスジェニック動物（これもホモ接合またはヘテロ接合動物である）との間で交雑を行う。この交雑育種において使用する本トランスジェニック動物のシグナリン欠陥を組織特異的、発生段階特異的、または遍在性にし、交配させた第２のトランスジェニック動物のトランスジーン欠陥についても同じようにする。例えば、転写調節配列の制御下では、トランスジーンを組織特異的または遍在性にすることができる。同様に、調節成分により構成性発現または誘導性発現が得られるようにすることができる。具体例として、実施例に示すシグナリン破壊動物を、Ｗｈｅｙ酸性タンパク質（ＷＡＰ）プロモーターによって駆動される活性化ｒａｓ発ガン遺伝子を含むトランスジェニック動物と交雑させる。シグナリン欠陥は汎発性になるが、ｒａｓ発ガン遺伝子の組換え発現は、得られる交雑種の主として乳房上皮に限定される。このような動物は、例えば、乳ガンのモデルとして使用できる。別の方法として、ＷＡＰ−ｒａｓトランスジーンの代わりに、シグナリン破壊動物を、チロシナーゼプロモータ／エンハンサー成分の転写制御下に発ガン遺伝子を発現するトランスジェニック動物と交配させる。例えば、交配後のトランスジェニック動物は、チロシナーゼプロモーターの転写調節下にある発ガン遺伝子（例えば、活性化ｒａｓ、サイクリンＤ１、またはＣＤＫ４Ｒ２４Ｃ変異体）を含む。本発明のシグナリントランスジェニック動物との遺伝的交雑種の他の例としては次のものが挙げられる。ζ−グロビン／ｖ−Ｈａ−ｒａｓトランスジェニックとの交雑種：このトランスジェニックは、ジーターグロビンプロモーターの制御下にｖ−Ｈａ−ｒａｓを発現する。「Leder他、(1990)PNAS 87:9178-9182」によって開発され特性が明らかにされたものであり、Charles River Laboratoryから市販されている。このトランスジェニック系統は、ホルボールエステル（成長因子の１つ）により皮膚が処理されると皮膚乳頭腫および鱗状細胞カルシノーマが進行し易い。ＭＭＴＶ／ｃ−ｍｙｃトランスジェニックとの交雑種：このトランスジェニックは、ＭＭＴＣＶ（mouse mammary tumor virus：マウス乳腫瘍ウイルス）プロモーターの制御下にｃ−ｍｙｃを発現するものであり、「Stewart他(1984)Cell 38:627-637；Sinn他(1987) Cell 49:465-475により開発され特性が明らかにされた。Charles River Laboratoryから市販されている。このトランスジーン系統は、自生的な乳腺カルシノーマおよびその他の腫瘍を進行させる。Ｅμ−ｍｙｃトランスジェニックとの交雑種：このトランスジェニックはＥμ エンハンサープロモーター（リンパ球細胞内で特に発現される免疫グロブリンプロモーター）の制御下にｃ−ｍｙｃを発現させる。このトランスジェニックはＢ細胞リンパ腫を進行させる。ｍＴＲトランスジェニックとの交雑種：テロメラーゼリボヌクレオタンパク質のＲＮＡ成分をコードするマウス遺伝子をクローニング（Blasio他(1995)Scienc e 269:1267-1270）。ＭＴＲを過剰発現するか、あるいはＭＴＲ発現が破壊されているマウスを本シグナリントランスジェニック動物と交配させた。このような遺伝的交雑種により有用な情報と疾病モデルが得られる。例えば、該動物を用いて、腫瘍の進行に対するシグナリン不全の影響を判定することができる（腫瘍は早期に現れるか、または早期の悪性且つ侵入性段階にまで進行する）。シグナリンの欠損は、腫瘍の種類とその位置に影響するので、特定のヒト悪性腫瘍に対する新しいモデルを構成する。また、これらの動物は、シグナリンとシグナリン− 腫瘍表現型との直接比較を可能にするので、化学療法を評価する良好な動物モデルを構成することにもなる。実施例本発明の実施例を以下に示すが、これらは本発明の特定の態様や例を示すためのものであり、本発明を限定しようとするものではない。実施例１シグナリンｃＤＮＡのＲＴ−ＰＣＲクローニングこの実施例は、シグナル伝達分子のうちのシグナリン群に属するメンバーをコードするｃＤＮＡを得るのに使用する方法について記述するものである。それぞれ５’および３’がＢａｍＨＩまたはＥｃｏＲＩリンカーで挟まれている（フランキングされている）プライマーを調製し、アフリカツメガエルｃＤＮＡを増幅するのに使用した。用いた上流プライマーの配列は以下のとおりである：CGGGAT CCTIGA(T/C)GGI(A/C)GI(T/C)TICA(A/G)(A/G)T。また、用いた下流プライマーの配列は以下のとおりである：CGGAATTCTA(A/G)TG(A/G)TAIGG(A/G)TT(T/G/A)AT(A/ G)CA。これらの実験で用いたｃＤＮＡ鋳型は、第２期、第11期および第40期におけるアフリカツメガエル胚由来のものである。ＰＣＲの実施条件は以下のとおりとした：93℃、３分で１サイクル；42℃、1.5分；72℃、１分；93℃、１分で４サイクル；42℃、1.5分；72℃、１分；その後、93℃、１分で30サイクル；55℃ 、1.5分；72℃、１分；最後に72℃、５分で１サイクル。このＰＣＲフラグメントをpBluescriptＫＳＩＩにサブクローニングした。該ＰＣＲフラグメントは配列分析を行い、アフリカツメガエル卵母細胞ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングに使用した。該ライブラリーから幾つかのクローンを単離し、さらに、pBluescriptＫＳＩＩ内にサブクローニングし、次に、両鎖について配列分析した。実施例２アフリカツメガエルのシグナリンタンパク質は、ＴＧＦβ上位群に関し、明らかなサブセットのシグナルを伝達。（ｉ）実験方法マイクロインジェクション用合成ｍＲＮＡの調製シグナリンタンパク質をコードする合成ｍＲＮＡを調製するため、全シグナリンｃＤＮＡを含有しｐＳＰ６４−Ｔ由来のプラスミドをＸｂａＩを用いて直鎖状にし、文献の記述に従って転写させた(KriegおよびMelton，1987 Methods in En zymology 155.397-415)。得られたクローンをｐＳＰ６４ＴＮＥ−Xe−シグナリン１（ｐＳＰ６４ＴＮＥ−５４５−１とすることもある）およびｐＳＰ６４ＴＮＥ−Xe−シグナリン２（ｐＳＰ６４ＴＮＥ−５４５−４とすることもある）とした。切端した(truncated)タイプＩＢＭＰレセプター（ｔＢＲ）（Graff他(199 4)Cell 79:169-179）および切端タイプＩＩアクチビンレセプター（ｔＡＲ）(He mmati-BrivanlouおよびMelton，1992 Nature 359,609-614)をコードするｍＲＮＡについては別のところで記述している。２ｎｇのXeシグナリン１またはXeシグナリン２のｍＲＮＡを注入しないか（対照）または注入した。注入ｍＲＮＡの用量が少ない場合も中胚葉を誘導し、例えば、６０ｐｇのXeシグナリン２は中胚葉マーカーを誘導した（示さず）。発生学的方法文献の記述に従って(ThomsenおよびMelton，1993 Cell 74:433-441；Graff他( 1994)Cell 79:169-179)、胚を入手し、マイクロインジェクションし、培養し、アニマルキャップを解剖した。パラフィン埋入サンプルから組織学的断片を切り出し、geimsaで染色して写真にとった（Graff他、上述参照）。全ての胚段階は、NieuwkoopおよびFaber 1967 Normal Table of Xenopus laevis（Daudin）(Ams terdam，North Holland Publishing Company)に従った。中胚葉誘導性タンパク質を、0.5×ＭＭＲおよび0.5％ウシ血清アルブミンから成る緩衝液に添加した。アクチビンはGenentech社のMather博士からいただいたものである。ＢＭＰ−４はGenetics InstituteのCeleste博士からいただいた。ＲＴ−ＰＣＲによるＲＮＡの分析プロテアーゼＫによる酵素分解、ＲＮＡ抽出およびＲＴ−ＰＣＲ分析については既に記述されている（Graff他(1994)Cell 79,169-179；WilsonおよびMelton． 1994 Current Biology 4,676-686）。ＲＴ−ＰＣＲにより増幅された放射性バンドの強さが、ｍＲＮＡの量を反映しており（Graff他1994 Cell 79,169-179；Wil sonおよびMelton，1994 Current Biology 4,676-686）、本実験においてはｃＤＮＡ鋳型の量を変え、バンドの強さがｍＲＮＡの量に対応していることを確認することによりこのことを明らかにした（データは示さず）。各実験において（図４、図７Ａ〜Ｃ、および図８）、各レーンにおけるＰＣＲ増幅生成物は、アニマルキャップのプールから単離したＲＮＡの分率（フラクション：約50分の１）を表している。ＲＮＡ転写体をＰＣＲ検出するための条件およひ多くのプライマーの配列については、brachyury、goosecoid、筋肉アクチン、ＮＣＡＭ、ＥＦ１αおよびグロビンに関して以前に記述されている（Graff他1994 Cell 79,169-179；Hemmati-B rivanlouおよびMelton，1992 Nature 359,609-614；Wilson，P．A．およびMelto n．D．A．1994 Current Biology 4,676-686）。以前に記述されていなかったプライマー配列を以下に５’から３’方向で示す。いずれのプライマーセットも25 サイクル使用した。 Xeシグナリン１上流：ACA GCA GCA TTT TTG TTC AG 下流：GAG ACC GAG GAG ATG GGA TT Xeシグナリン２上流：TCC CCT TCA GTC CGC TGC 下流：CCA ACA AGG TGC TTT TCG 卵母細胞注入およびタンパク質分画第VI期の卵母細胞を単離し、30ｎｇのXeシグナリンｍＲＮＡを注入し、以前の記述に従い(Smith，L.,他1991 Cell6 7,79-87；KesslerおよびMelton，1995 Dev elopment 121,2155-216)、新しく翻訳されたタンパク質を標識化（ラベル）するため³⁵Ｓ−アミノ酸を含有する培地内で培養した。略述すると、卵母細胞は手で分離し、コラゲナーゼを用いて卵胞を取り除いた。次に、該卵母細胞にシグナリンをコードするｍＲＮＡを30ｎｇ注入した。注入後、新しく翻訳されたタンパク質を標識するための³⁵Ｓ−システインおよび³⁵Ｓ−メチオニンを含有する倍地内で該卵母細胞を培養した。分泌タンパク質を含有する培地を分離した。20ヶの卵母細胞を氷上で400μｌの４℃緩衝液94Ａ＋〔0.25Ｍシュクロース、20ｍＭのHep es ｐＨ7.4、50mＭのＫＣｌ、0.5ｍＭのＭｇＣｌ₂、１ｍＭのＫ−ＥＧＴＡｐＨ7.4、１ｍＭのＰＭＳＦ、１ｕｇ／ｍｌロイペプチン〕内でホモジナイズした。この画分の名称は図６に示す。1000×ｇで５分間、４℃における低速遠心により卵黄を除去した後、膜画分およびサイトゾル画分を100,00ｇ、45分間、４℃での遠心により分離した（EvansおよびKay，1991，Methods in Cell Biology 36， 133-148）。手動切開により核を単離した(EvansおよびKay1991、Me thods in Cell Biology 36，133-148)。還元剤ジチオスレイトールの存在下に10 ％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、各区画につき卵母細胞１ケに相当する分を分析した。分泌タンパク質を含有する培地を分離した(Smith．L.他、1991 Cell 67，79-8 7：KesslerおよびMelton、1995 Development 121，2155-216)。 (ii)Xeシグナリンは遺伝子の１群である。縮重ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プライマーを用いてアフリカツメガエル卵母細胞ライブラリーのスクリーニングを行い、４種類の異なるシグナリンｃＤＮＡをクローニングし（図６）、ここでは、そのうちの２つについて特性分析を行った。Xeシグナリン１およびXeシグナリン２の配列は図６に示す。Xeシグナリン１は、Ｍａｄに76％一致しており、また、Xeシグナリン２に62％一致している。このように高割合の配列保存があることは、XeシグナリンがキイロショウジョウバエのＭａｄ遺伝子の脊椎動物ホモログであることを示している。さらに、脊椎動物Xeシグナリンは、Ｍａｄに類似する３種類のC．elegansの配列であって、 C．elegansゲノム解析プロジェクトで同定され、C．elegans Ｍａｓ（ＣＥＭ− １、ＣＥＭ−２およびＣＥＭ−３）と呼ばれるものにも相同性である(Sekelsky 他、1995 Genetics 139，1347-1358；Savage他、1996 Proc．Nat．Acad．Sci．9 3，790-794)。Xe−シグナリン２は、ＣＥＭ−３におけるのと同じ位置に存在していると考えられるスプライスされたエクソンを含有している（Sekelsky他、19 95 Genetics 139，1347-1358）。カエル、マウスおよびヒトのｃＤＮＡまたは遺伝子のクローニングにより、現在までのところ、６種類の異なるXeシグナリンが同定されており、それらは、脊椎動物において確認されている配列（ＪＧおよびＤＡＭによる未発表データ）に対応する４つのクラスに分類されると考えられる。オープンリーディングフレームから予測されるタンパク質は、分子量が50,000 から55,000ダルトンの間にあり、シグナル配列、トランスメンブレンドメイン、または既知のタンパク質配列モチーフに対する明らかなホモロジーは含有していない。 (iii)シグナリンは中胚葉の形成を誘導する。アフリカツメガエル・ラエビスの動物極（アニマルポール）外植片は一般に外胚葉（繊毛表皮）になるが、誘導剤としてどのＴＧＦ−β上位群のリガンドが使用されるかということに応じて、背面中胚葉または腹面中胚葉に転化し得る。アクチビン、Ｖｇｌ、ＴＧＦ−βおよびノーダルは、いずれも背面中胚葉を誘導し( Rosa他、1988 Science 239，783-785；Thomsen他、1990 Cell 63，485-493；Gre en他、1990 Development 108，173-183；Dale他、1993 EMBO J．12，4471-4480 ；ThomsenおよびMelton、1993 Cell 74，433-441；Jones他、1995 Development 121，3651-3662)、一方、ＢＭＰは腹面中胚葉を誘導する(Koster他、1991 Mecha nisms of Development 33，191-200；Dale他、1992 Development 115，573-585 ；Jones他、1992 Development 115，639-647；Hemmati-Brivanlou およびThomse n、1995 Developmental Genetics 17，78-89)。これらの２つの種類の中胚葉（背面または腹面）は、形態、組織、および分子マーカーによって簡単に区別される。Xeシグナリンの直接発現が中胚葉を誘導する（ＴＧＦ−βのようなシグナルを送る）かどうかを調べるために、Xeシグナリンタンパク質をコードする合成ｍＲＮＡを有精卵の動物極に注入し、アニマルキャップを取り除き、培養し、次に中胚葉誘導を分析した（図１）。Xeシグナリンが動物極の外植片内で発現される場合には、腹面中胚葉が形成され、このことは、間葉および漿膜腔壁を含有する（図３）液が満たされた小胞から明らかである（図２）。Xeシグナリン１が注入されたアニマルキャップは、背面中胚葉マーカーであるgoosecoid、筋肉アクチンまたは神経マーカーであるＮＣＡＭを発現しないが、腹面中胚葉の明確なマーカーであるグロビンは発現する（図４）。予期しないことであったが、Xe−シグナリン１による腹面中胚葉の形成は、中胚葉の初期マーカー(例えばbrachyury) の発現の不存在下に起こる（図４）。Xe brachyury発現の欠失は、初期の時点で必ず見られる。結論として、これらのデータは、Xeシグナリン１が同じタイプの中胚葉（腹面中胚葉）を誘導し、これはアニマルキャップがＢＭＰ−２やＢＭＰ −４によって誘導されるときに見られるものである(Koster他、Mechanisms of D evelopment 33，191-200，1991；Dale他、1992 Development 115，573-585；Jon es他、1992Development 115，639-647；Hemmati-BrivanlouおよびThomsen,、199 5 Developmental Genetics 17，78-89)。以上のこととは対照的に、Xeシグナリン２は動物極内で発現され、その組織は背面中胚葉に特徴的な様式に従い長く延びており（図２）、また組織学的分析は、筋肉および脊索の存在を示している（図３）。このことは、筋肉に特異的なモノクローナル抗体（12/101）、および脊索に特異的な抗体（Ｔまたは70.1）を用いる免疫組織化学により確認される（データは示さず）。分子分析が示すところによれば、Xeシグナリン２によって誘導された中胚葉は、腹面マーカーであるグロビンを発現しないが、背面マーカー（goosecoidおよび筋肉アクチン）は発現する（図４）。したがって、Xeシグナリン２は、アクチビン、Ｖｇｌ、ＴＧＦ−β 、およびノーダルと同様に背面中胚葉を誘導する。このように、Xeシグナリン１および２は、２種類の別個の容易に区別される生物学的応答を生み出す。すなわち、Xeシグナリン１は腹面中胚葉を産生し、Xeシグナリン２は波面中胚葉を産生する。 Xeシグナリン１とXeシグナリン２について見られる別個の応答が定性的な相違であり濃度依存性のものではないことを更に示すために、この２種類のXeシグナリンを15ｐｇから２ｎｇの範囲の濃度において分析した（図７Ａ〜図７Ｃ）。Xe シグナリン２は、〜125ｐｇから２ｎｇに至る広い濃度範囲にわたり中胚葉を誘導し（図７Ａ）、そして、6Oｎｇという用量（投与量）で中胚葉誘導を起こすことができる（データ示さず）。図７Ａにおいて、ＲＮＡの分析はＲＴ−ＰＣＲによって行い図示している転写体の存在を調べた。Xeシグナリン２は、２ｎｇから 15.6ｐｇまで２倍稀釈しながら発現されたXeシグナリン２は異なる分子マーカーの発現を誘導するが、約125ｐｇ（ＲＮＡ）の濃度から始まり、濃度依存性である。Xeシグナリン２の濃度が高くなるとgoosecoid(多くの背面中胚葉のマーカーである)の発現を誘導する。Xeシグナリンの濃度が低くなると、goosecoidは発現されないが背側面マーカーであるＸｗｎｔ−８が発現される。重要なことは、如何なる濃度のXeシグナリン２も腹面マーカーであるグロビンの発現を導かないことである。これらの結果は、背面中胚葉を誘導するアクチビン、Ｖｇｌ、ＴＧＦ −βの用量を変えて得られた濃度効果を再現するものである(Green他、1990 Dev elopment 108，173-183；Green他、1992 Cell 71，731-739；WilsonおよびMelto n、1994 Current Biology 4，676-686；KesslerおよびMelton 1995 Development 121，2155-216)。 Xeシグナリン１について得られた結果は、Xeシグナリン２について得られた結果とは対照的である（図７Ｂ）。どの用量（投与量）においてもXeシグナリン１は、背面マーカー、すなわち、goosecoid、アクチンまたはＮＣＡＭのいずれも誘導しないが、Xeシグナリン１は、ＢＭＰ−２およびＢＭＰ−４を模擬するグロビンの発現は誘導する。さらに、Xeシグナリン１は、Xeシグナリン２よりも性能がかなり低く、中胚葉を誘導するためにはナノグラム量のｍＲＮＡを必要とすると思われる。このようにＢＭＰのようなリガンドについて得られる効果に非常に似ており、アクチビンまたはＶｇｌよりもかなり性能が低い(Thomsen他、1990 C ell 63，485-493；ThomsenおよびMelton、1993 Cell 74，433-441；Hemmati-Bri vanlouおよびThomsen、995 Developmental Genetis 17，78-89)。 Xeシグナリン１および２をコードするｍＲＮＡを同時注入すると腹面および背面中胚葉が形成される。図７Ｃにおいて、Xeシグナリン１（２ｎｇ）、Xeシグナリン２（２ｎｇ）、またはXeシグナリン２（Ｍ１＋Ｍ２、それぞれ２ｎｇ）を発現するアニマルキャップをオタマジャクシ第38期まで培養し、全ＲＮＡをハーベストした。Xeシグナリン１は腹面マーカーであるグロビンの発現を誘導し、Xeシグナリン２は背面マーカーであるアクチンの発現を誘導し、それらを組み合わせたものは両マーカーの発現をもたらす。これらのデータが示すように、Xeシグナリン１は、ＢＭＰ−２およびＢＭＰ− ４の作用を模擬して腹面中胚葉を誘導し、他方、Xeシグナリン２は、アクチビンおよびＶｇｌのような背面を含むリガンドの作用を模擬して背面中胚葉を誘導する。このように、これらのXeシグナリンタンパク質は中胚葉誘導に際し性質の異なる活性を有している。 (iv)シグナリンタンパク質のリン酸化アフリカツメガエルシグナリンをコードする配列を発現ベクターにサブクローニングして、ｍｙｃエピトープがフレーム内で、シグナリンをコードする配列に融合するようにした。次に、この融合タンパク質をＣＯＳ細胞内で発現させた。略述すれば、トランスフェクションされたＣＯＳ細胞をγ−〔³²ｐ〕−ＡＴＰでラベル（標識）し、インキュベーション後、ホモジナイズし、ｍｙｃ−ｔａｇに対する抗体を用いて免疫沈降させた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィーにより沈殿内の³²ｐ標識化タンパク質を検出した。重要なことは、上述のアニマルキャップアッセイによりｍｙｃ標識化タンパク質も活性であることが示されたことである。（ｖ）シグナリンはＴＧＦ−βレセプター下流で機能。ＴＧＦ−βシグナル伝達カスケードにおけるXeシグナリンの位置を検討するため、ドミナントネガティブなレセプターとして機能する切端化(truncated)レセプターを使用した。このドミナントネガティブ型のレセプターを用いることにより、該レセプターの上流で機能するシグナルは切端化レセプターによりブロックされ、一方、レセプターの下流で作用するシグナルは影響されないと考えられる（Herskowitz、1987 Nature 329，219-222；Amaya他、1995 Cell．66，257-270 ；Hemmati-BrivanlouおよびMelton、1992 Nature 359,609-614；Graff他、1994 Cell 79，169-179；Suzuki他、1994 Proc．Natl．Acad．Sci．91，10255-10259 ；Umbhauer他、1995 Nature 376，58-62）。Xeシグナリン１は、ＢＭＰ特異的経路に位置するものと考えられ、切端化ＢＭＰレセプターは腹面中胚葉のシグナリン依存性の形態学的または組織学的誘導に影響を与えず、このことは、Xeシグナリン１がドミナントネガティブなＢＭＰレセプターと同時発現されると、小胞、間葉および漿膜腔壁が残っているという事実から明らかである（図９Ａ）。小胞、間葉の形成は、Xeシグナリン１の発現（およびＢＭＰシグナル伝達）の初期の、そしておそらく直接的な影響であり、一方、グロビンの発現は、多くの工程を必要とすると推測される後期の効果であり、そして切端ＢＭＰレセプターはXeシグナリン１の機能自体をブロックすることなく後の工程を変えるのであろう。グロビン発現がブロックされることは、アニマルキャップに存在する内因性のＢＭＰシグナリング（シグナル伝達）を抑制する切端化ＢＭＰレセプターによっても説明できると思われる（Graff他、1994 Cell 79，169-179；Suzuki他、1994 Pro c．Natl．Acad．Sci．91，10255-10259；Hawley他、1995 GenesおよびDevelopme nt 9、29232935；Sasai他、1995 Nature 376，333-336；Schmidt他、1995 Devel opmental Biology 169，37-50；WilsonおよびHemmati-Brivanlou、1995 Nature 376，331-333）。Xeシグナリン１の異所的発現が、グロビンを誘導する内因性のＢＭＰ活性を必要とする場合は、内因性のＢＭＰシグナリングをブロックすることにより、切端ＢＭＰレセプターがグロビンの発現を排除すると考えられる。この考えを裏付けるものとして、ＢＭＰ−４およびXeシグナリン１のｍＲＮＡの同時発現（それら自身には影響を与えない量で）させると、グロビンが誘導された（データ示さず）。 Xeシグナリン１がレセプターの下流に関与しているか否かを判定する別の方法は、Xeシグナリン１が切端されたドミナントネガティブなレセプターの表現型効果を逆転するかということを調べることである。ＢＭＰシグナリングをブロックする切端化ＢＭＰレセプターは、Ｎ−ＣＡＭの誘導によって示されるように神経組織の弱い誘導をもたらす（図９Ｃ）。（Sasai他、1995 Nature 376，333-336 ；Hawley他、1995 GenesおよびDevelopment 9，2923-2935）。ＢＭＰは神経組織を誘導し、その効能は切端化ＢＭＰレセプターよりも大きい（図９Ｃ）(Hemmati -BrivanlouおよびMelton、1992、Nature 359，609-614；Schulte-Merker他、199 4、EMBO Journal 13，3533-3541；KesslerおよびMelton、1995 Development 121 ，2155-216、Hemmati-BrivanlouおよびThomsen、1995 Developmental Genetics 17，78-89)。Xeシグナリン１は、切端化レセプターのいずれかにより、Ｎ−ＣＡＭの誘導を完全に逆転させ、このことはXeシグナリン１がレセプターの下流で機能することを示唆している。このＮ−ＣＡＭ発現の逆転は、ＢＭＰ−４が切端化ＢＭＰレセプターと同時発現される場合には見られない（Sasai他、1995 Nature 376，333-336）。 Xeシグナリン２はアクチビン／Ｖｇｌのような背面経路において機能すると考えられるので、ドミナントネガティブなアクチビンレセプターがXeシグナリン２の機能をブロックするか否かということを判定するのは重要である。切端化アクチビンレセプターはアクチビンおよびＶｇｌの機能をブロックし、さらに、全ての背面中胚葉の形成をブロックする(Hemmati-BrivanlouおよびMelton、1992 Nat ure 359，609-614；Schulte-Merker他、1994 EMBO Journal 13，3533-3541；Kes slerおよびMelton、1995 Development 121，2155-216)。切端化アクチビンレセプターをマイクロインジェクションするとＮＣＡＭが発現され、このことはドミナントネガティブなアクチビンレセプターが活性であることを示している（図９Ｄ）（Hemmati-BrivanlouおよびMelton他、1992 Nature 359，609-614）。ドミナントネガティブなアクチビンレセプターをXeシグナリン２と同時発現させると、Xeシグナリン２により誘導された形態伸長はブロックされない（データ示さず）。さらに、ドミナントネガティブなアクチビンレセプターは、Xeシグナリン２により形成される中胚葉に影響を与えず、このことは、分子マーカーであるbrac huryおよび筋肉アクチンに対する影響がないことから分かる（図９Ｄ）。これらの結果はXeシグナリンがレセプターの下流で機能することを裏付ける。 (vi)Xeシグナリンは胚発生過程中均一に発現される。個々のXeシグナリンは腹面中胚葉または背面中胚葉のいずれかを誘導するが両方は誘導しないので、それらの位置または差次的な活性化により中胚葉が当初どのように樹立されパターン形成されるかということが説明できるであろう。逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）により、発生過程の胚のいろいろな領域におけるXeシグナリン転写体の空間分布を調べた。ｃＤＮＡは卵母細胞ライブラリーから回収されたので、XeシグナリンＲＮＡは母系発現される。該ＲＮＡは胞胚期に存在し、Xeシグナリン１および２のｍＲＮＡはいずれも全ての胞胚領域に存在し、ほぼ等しいレベル（量）である（図８）。同様に初期の原腸胚形成期にXeシグナリン１のｍＲＮＡおよびXeシグナリン２のｍＲＮＡは、腹面および背面周辺域にほぼ同じように分布しているようである（図８）。Xeシグナリン１およびXeシグナリン２経時的発現が示すところによれば、ＲＮＡは２細胞期からオタマジャクシ期までほぼ一定のレベルで存在している（データ示さず）。背面−腹面中胚葉パターンの形成中、空間的且つ時間的に一定であることは、別異のＴＧＦ−βシグナルが、胚の異なる側にある異なるXeシグナリンタンパク質を活性化していることを示唆している。ＴＧＦ−β上位群に属するリガンドによる中胚葉誘導がXeシグナリン遺伝子の転写に影響を与えるか否かを調べるために外胚葉外植片にＢＭＰ−４またはアクチビンタンパク質を添加し、中胚葉が誘導されるまで40分間隔でXeシグナリンのｍＲＮＡのレベル（量）を分布した。予期されたように、ＢＭＰ−４およびアクチビンの両方とも中胚葉を誘導した。ここで、分析は160分におけるbrachyuryＲＮＡの発現により行った（図８）。Xeシグナリン１およびXeシグナリン２のｍＲＮＡのレベルは、４時点のいずれにおいても影響されず（図８）、中胚葉誘導によりXeシグナリン１およびシグナリン２の転写が有意に影響されることはないことを示している。これらのデータは、初期の発生においてXeシグナリン１および Xeシグナリン２のｍＲＮＡがほぼ均一且つ定常的な量で存在していることを示している。（vii）サイトゾルおよび核へのシグナリンタンパク質の局在化。 Xeシグナリンタンパク質の細胞下の位置を調べるために、第VI期卵母細胞に30 ｎｇのXeシグナリンｍＲＮＡをマイクロインジェクションし、³⁵Ｓ−アミノ酸を含有する培地内で培養した。卵母細胞を分断し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、全タンパク質、分泌タンパク質、膜結合タンパク質、核タンパク質、サイトゾルタンパク質を分析した。図10は、Xeシグナリン２について得られた結果を示すものであり、同じ結果がXeシグナリン１を用いた場合についても得られた。卵母細胞培地由来の新たに合成されたタンパク質（分泌タンパク質を含有）を分析し、手で核を単離し、生化学的方法により膜（メンブレン）および細胞質を分画した。新たに合成されたタンパク質のゲル分画が示すように（図10）、Xeシグナリンは核および細胞質のいずれにも存在するが、膜画分には存在せず培地に分泌もされない。核および細胞質のレーンをよく見ると、核のXeシグナリンタンパク質の方が僅かに大きいようである。この再現性のある結果は、核タンパク質が翻訳後変性（修飾）を受けることを示唆している。Xeシグナリンが核またはサイトゾルに局在化しているが過剰発現に因るという可能性を排除するために、Xeシグナリンを低濃度で発現させ、ウエスタンブロットにより細胞内の位置を調べた。抗体の検出限界レベル（図10で使用した場合よりも20〜100倍少ない量のｍＲＮＡ）でXe シグナリンを発現させた場合、該タンパク質は依然としてサイトゾルおよび核の両方に見出された。ここに記述する結果は、Xeシグナリンが脊椎動物ＴＧＦ−βシグナリング（シグナル伝達）経路の構成成分であることを示している。個々のXeシグナリンタンパク質の発現は、背面または腹面中胚葉を産生することにより、アフリカツメガエルの中胚葉誘導における特定群のＴＧＦ−βシグナルの効果を模擬している。さらに、切端化レセプターがXeシグナリンシグナル伝達をブロックしないことを示す実験、さらには、細胞内でシグナリンがＤＰＰに応答するための遺伝学的必要条件を示す優勢テストから、Xeシグナリンがリガンドの下流成分でありＴＧＦ −βシグナル伝達カスケードにおけるレセプターであることが裏づけられる。この考えは、キイロショウジョウバエのＭａｄタンパク質に関する免疫組織化学的研究（Newfeld他、1996）および（上述した）アフリカツメガエル卵母細胞の分画実験と一致しており、Xeシグナリンタンパク質が細胞内タンパク質であることを示している。図９Ａ〜Ｃに与えるデータは、アフリカツメガエルのXeシグナリンタンパク質の核型と細胞質型との間には相違があり得るということを示唆している。他のシグナル伝達カスケードが先行すると、リガンド依存性の変化によりXeシグナリンタンパク質が１つの区画から別の区画に変位することが起こり得る(Verma他、1995 Genes and Development 9，2723-2735)。Xeシグナリンはセリン−スレオニンキナーゼレセプターにより開始されるシグナル伝達カスケードの一部であるので、核型とサイトゾル型との間にサイズが相違するのはリン酸化に因ることは考えられる。事実、予備的実験はXeシグナリンがホスホタンパク質であることを示唆している。 Xeシグナリン１は、ＢＭＰのシグナルセットを伝達して腹面中胚葉誘導を起こすと考えられ、一方、Xeシグナリン２はアクチビン／Ｖｇｌ／ノーダルＶＴＧ− βのシグナルを伝達して背面中胚葉を形成する。アフリカツメガエルには、他に少なくとも２種のXeシグナリンが存在する（Xeシグナリン３、４）が、これらはＴＧＦ−βと機能的関係は明らかにされていない。アフリカツメガエルの中胚葉誘導に関し、本発明によって提供される結果が示すように、母系ないしは接合体生XeシグナリンｍＲＮＡの分布には相違がなく、また、それらに対応するタンパク質は将来の体軸に沿って均一に分布していると推測される。換言すれば、初期胚の周辺域にある全ての細胞は、Xeシグナリン１およびXeシグナリン２のｍＲＮＡを有することにより、背面または腹面中胚葉誘導性のシグナルに応答する能力を基本的に有している。かくして、ＢＭＰシグナルは胚の腹面側でXeシグナリン１を活性化し、他方、背面誘導性シグナル（おそらく、Ｖｇｌまたはアクチビン）は将来背面となる側でXeシグナリン２を活性化する。予期されなかったことは、Xeシグナリン１による腹面中胚葉の形成がbrachyur y発現の非存在下で起こることである。Xeシグナリン１は、腹面中胚葉の分化を直接的に活性化し、Ｘｂｒａの発現を必要としないのであろう。事実、Ｘｂｒａは胚体中胚葉の一般的なマーカーと考えられているが、全ての中胚葉形成がＸｂｒａ発現を必要そするということを示す実験は存しない。類似する実施例の１つと言えるが、遺伝子ｎｅｕｒｏＤは、アフリカツメガエルにおける神経形成を妨げる初期抑制効果をバイパスさせアニマルキャップを直接ニューロンに変化させるようである(Lee他、1995 Science 268，836-844)。本実施例で報告する注入は全て、野性型をコードするｍＲＮＡを用いて行い、（突然）変異体または構成的に活性型のXeシグナリンタンパク質ではない。野性型のXeシグナリンｍＲＮＡ（これは胚中に既に存在している）を注入するとなぜ中胚葉の形成が起こるかということを説明するのに幾つかの機構が考えられ得る。明らかに、XeシグナリンｍＲＮＡの注入は活性なXeシグナリンの生成をもたらし、そしてこれは多くの機構により起こり得るであろう。アンマルキャップ細胞は内因性のＢＭＰおよびアクチビンのｍＲＮＡを有しており、そして、おそらく（中胚葉を誘導するには不充分なレベルであるが）低レベルのＢＭＰおよびアクチビンシグナル伝達経路にさらされているであろう(Hemmati-BrivanlouおよびMe lton、1992 Nature 359，609-614；Graff他、1994 Cell 79，169-179；Hawley他、1995 GenesおよびDevelopment 9，2923-2935；Sasai他、1995 Nature 376，33 3-336；Schmidt他、1995 Developmental Biology 169，37-50；WilsonおよびHem mati-Brivanlou、1995 Nature 376，331-333)。Xeシグナリンの異所的発現は、これらの構成性経路と組合せされることにより、シグナル伝達（Xeシグナリン１についてはＢＭＰ、Xeシグナリン２についてはアクチビン／Ｖｇｌ／ノーダル）のレベルを高め、中胚葉の誘導をもたらすと考えられる。別の可能性は、Xeシグナリンが負の（ネガティブ）調節下にあり、過剰のXeシグナリンを供給することによりこの制御に打ち勝つというものである。Xeシグナリンを用いた結果に類似するが、Ｗｎｔシグナル伝達の幾つかの成分（例えば、グリコーゲン・シンサーゼ・キナーゼ−３）のｍＲＮＡを注入するとＷｎｔシグナルの活性化が引き起こされる(He他、1995 Nature 374，617-622；PierceおよびKimelman,1995 Develop ment 121，755-765；Solol他、1995Development 121，1637-1647)。上述したように、Xeシグナリンは、各XeシグナリンがＴＧＦ−β群からの入力を伝送して情報を統合する場所にある。Xeシグナリンが情報のと統合、すなわち或る１ヶの細胞が受けとるシグナルの量を測ることに関与する別の意味もある。アフリカツメガエルの胞胚細胞が、いろいろな濃度のアクチビンに接触すると、いろいろな種類の背面中胚葉が生み出される(Green他、1990 Developmento 108 ，173-183；Green他、1992 Cell 71，731-739；WilsonおよびMelton、1994 Curr ent Biology 4，676-686)。例えば、高濃度では脊索が形成され、低濃度では筋肉が形成される。同様にして、Xeシグナリン２の量が異なる（Xeシグナリンの活性量が異なると推測される）と、異なるタイプの中胚葉マーカーが発現される（図７Ａ〜Ｃ）。したがって、Xeシグナリンは、細胞に用いられてリガンドの濃度を測定するための手段となることができる。例えば、リン酸のような翻訳後の変性（修飾）は、Xeシグナリンの核酸／細胞質比を変えることによって制御することができる。別の例として、個々のXeシグナリンの活性はリン酸化されたアミノ酸残基の数によって測定することができ、該残基は該リガンドの濃度を反映していることになる。このような生化学的メカニズムのどれがXeシグナリンの活性を調節しているかを検討することにより、発生過程において形態形成シグナルがどのように細胞の運命を支配しているかということを理解できる。実施例３ヒトシグナリンｃＤＮＡのＲＴ−ＰＣＲクローニング。実施例１および２に記述したのと同じＰＣＲプライマーを利用して、幾つかのシグナリンクローンを単離した。略述すれば、実施例１および２の縮重ＰＣＲプライマーを用いて、次のＰＣＲ条件に従いヒトｃＤＮＡサンプルを増幅した：Ｔａｑポリメラーゼを標準緩衝液（124μｌ当たり25ｍＭのＭｇＣｌ）９μｌに入れて行った。温度サイクルは、95℃で３分、次に95℃25秒で４サイクル、42℃で 15秒、次に72℃で10秒、その後、95℃で25秒、55℃で10秒、72℃で10秒、および 73℃で10秒。得られたｃＤＮＡを標準的なプロトコールに従い配列決定した。実施例４ヒト組織内でのシグナリン遺伝子生成物の発現。シグナリン用縮重プライマーを用い、実施例２に記載したクローニング条件に従い、各種の組織からヒトｃＤＮＡサンプルを増幅した。腎臓、肝臓、肺臓、乳腺、すい臓、脾臓、精巣および胸腺から、シグナリン転写体フラグメントの該当するサイズに現れた強い主要バンドを31サイクルで増幅した。この実施例から、これらの成体組織のそれぞれにおいて少なくとも１種のシグナリンが発現されることが示された。「Ａ」−tract配列決定（例えば、Ａ停止のみを読む）のデータの示すところによれば、シグナリン遺伝子生成物は全体としては遍在的に発現されるが、シグナリンによっては上記の組織毎に特異的に発現される。シグナリン転写体（同定済み）の存在量比較は以下のとおりである。ヒトのシグナリンのタイプ消化管由来の２つの器官、すなわち肝臓とすい臓は優勢成分としてHu−シグナリン３を有していることが認められる。また、腎臓および脾臓においては少なくとも４〜５種類の異なる型（現在まで知られている限り）が発現されている。このデータは、ＴＧＦシグナル伝達経路は組織特異的に破壊され得ることを示唆している。最後にＡ−tractデータは更に別のシグナリン転写体が存在することを示しており、例えば、ヒトシグナリン群について本明細書に示している７つの配列が全群を包含するものでないことを示唆している。実施例５発現された配列標識(EST：expressed sequence tag)配列からのヒトシグナリンの同定。 BLAST（Baslc Local Alignment Search Tool；National Center for Biotechn ology Information）プログラムを利用して、クローニングされたシグナリン配列の幾つかを標準データベースと比較し、クローニングしたシグナリン配列と類似性が認められる配列について調べた。特に、多数のヒトＥＳＴ配列(Boguski（ 1995）Trends Biochemical Science 20:295-296参照)が、クローニングされたシグナリンの一部に類似することが確認された。クローニングしたシグナリンを亜群(sub-family)に分類する基準に従い、ＥＳＴ配列の各部分を継ぎ合わせ、配列エラー（特にフレームシフトエラー）を修正して幾つかのヒトシグナリンクローンについてより完全なコード配列を得ることができた。具体的には、ヒトｃＤＮＡのＮ−末端フラグメントはＥＳＴ配列から組み立て、そして、クローニングしたヒト配列（hu−シグナリン１）のシグナリンモチーフを含ませた。170個のアミノ酸残基から成るフラグメント［配列番号：12（ヌクレオチド）および配列番号：25（アミノ酸）で表される］はα−亜群に属するメンバーの１つであり、シグナリンモチーフの外側においても該亜群のメンバーと高い相同性を有する。同様にして、ヒトシグナリンクローンの121残基から成るＣ−末端部分は、アフリカツメガエルのシグナリンクローンについての配列に基づきＥＳＴ配列から組み立てた。得られたフラグメントのヌクレオチド配列（配列番号：13）およびアミノ酸配列（配列番号：26）を分析したところ、xe−シグナリン２に最も類似しており、したがってγ−亜群に属するメンバーの転写体の一部と考えられることが示された。実施例６本出願の優先日以降、多数の全長ヒトシグナリン（ＤＯＴｓ、ｄｐｃ−４およびＭＡＤ様タンパク質と指称されることもある）が文献に記述されている。その例としては、GenBankの受理番号としてU76622，U59913，U59911，U68019，U6501 9，U68018，U68019，1438077，U59913およびU59912が挙げられる。例外なく、各クローンは、シグナリンモチーフ（本明細書ではνドメインとも称する）（配列番号：27の一般式で表される）、および配列番号：29の一般式で表されるχドメインを含む。上述の全ての文献および刊行物は参考のために本明細書に導入されるものである。均等物当業者であれば単なる慣用的実験により、本明細書中に記述した特定のポリペプチド、核酸、方法、アッセイ、および試薬の均等物を理解し確認することができるであろう。そのような均等物も本発明の範囲内にあり請求の範囲に包含されるものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/48 ＭＧ０１Ｎ 33/48 33/50 Ｔ 33/50 ＰＡ６１Ｋ 31/00 ６４３ // Ａ６１Ｐ 43/00 45/00 Ａ６１Ｋ 45/00 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者グラフ，ジョナサンエムアメリカ合衆国マサチューセッツ州 02167 ニュートンバーウィックロード 35 (72)発明者ウールフ，トッドエムアメリカ合衆国マサチューセッツ州 01760 ネイティックバーチロード 21 (72)発明者ジン，ピンアメリカ合衆国マサチューセッツ州 02115 ボストンナンバー４ウエストランドアヴェニュー８ (72)発明者メルトン，ダグラスエイアメリカ合衆国マサチューセッツ州 02172 レキンシントンスローカムロード 22

Claims

【特許請求の範囲】１．脊椎動物の単離されたまたは組換えシグナリンポリペプチド。２．前記脊椎動物が両生類である請求の範囲第１項のポリペプチド。３．前記脊椎動物が哺乳類である請求の範囲第１項のポリペプチド。４．前記哺乳類がヒトである請求の範囲第３項のポリペプチド。５．配列番号：28の一般式で表されるシグナリンモチーフを含むアミノ酸配列から構成される第１項のポリペプチド。６．ＴＧＦβレセプターにより仲介される細胞内シグナル伝達経路を刺激する請求の範囲第１項のポリペプチド。７．ＴＧＦβレセプターにより仲介される細胞内シグナル伝達経路を拮抗する請求の範囲第１項のポリペプチド。８．配列番号：14〜26の１つで表されるアミノ酸配列を含む請求の範囲第５項のポリペプチド。９．40〜70Ｋｄの範囲の分子量を有する請求の範囲第１項のポリペプチド。１０．単離されたおよび／または組換えによるシグナリンポリペプチドであって、配列番号：14〜26の１種またはそれ以上で表されるアミノ酸配列に対して少なくとも70パーセントの相同性を有するシグナリンアミノ酸配列を含み、前記ポリペプチドが、形質転換性成長因子β（ＴＧＦβ）に対するレセプターのシグナル伝達活性を特徴的に調節するシグナリンポリペプチド。１１．少なくとも80％の相同性を有する請求の範囲第10項のポリペプチド。１２．45〜30Ｋｄの範囲の分子量を有する請求の範囲第10項のポリペプチド。１３．少なくとも25アミノ酸残基の長さを有する請求の範囲第10項のポリペプチド。１４ＴＧＦβレセプターにより仲介される細胞内シグナル伝達経路を刺激する請求の範囲第10項のポリペプチド。１５．ＴＧＦβレセプターにより仲介される細胞内シグナル伝達経路を拮抗する請求の範囲第10項のポリペプチド。１６．ＴＧＦβレセプターがｄｐｐ亜群のタンパク質のレセプター以外である請求の範囲第10項のポリペプチド。１７．前記アミノ酸配列が配列番号：28の一般式で表されるシグナリンモチーフを含む請求の範囲第10項のポリペプチド。１８．前記シグナリンモチーフが配列番号：14〜26の１つで表されるシグナリンモチーフに対応する請求の範囲第17項のポリペプチド。１９．前記シグナリンアミノ酸配列が、配列番号：27の一般式で表されるνドメインを含む請求の範囲第10項のポリペプチド。２０．前記νドメインが配列番号：14〜26の１つで表される請求の範囲第19項のポリペプチド。２１．前記シグナリンアミノ酸配列が、配列番号：29の一般式で表されるχドメインを含む請求の範囲第10項のポリペプチド。２２．前記シグナリンアミノ酸配列が、配列番号：14〜26の１つで表されるχドメインを含む請求の範囲第21項のポリペプチド。２３．シグナリンモチーフを含む精製されたまたは組換えによるシグナリンポリペプチド。２４．前記シグナリンポリペプチドが、ＴＧＦβレセプターにより仲介される細胞内シグナル伝達経路を調節する請求の範囲第23項のシグナリンポリペプチド。２５．前記シグナリンモチーフが配列番号：28の一般式で表される請求の範囲第 23項のシグナリンポリペプチド。２６．前記シグナリンモチーフが配列番号：14〜26の１つで表されるシグナリンモチーフに対応する請求の範囲第23項のシグナリンポリペプチド。２７．前記ポリペプチドが以下の一般式で表されるアミノ酸配列を含む請求の範囲第25項のシグナリンポリペプチド：LDGRLQVSHRKGLPHVIYCRVWRWPDLQSHHELKPX XXCEXPFXSKQKXV ２８．前記ポリペプチドが以下の一般式で表されるアミノ酸配列を含む請求の範囲第23項のシグナリンポリペプチド：LDGRLQVAGRKGFPHVIYARLWXWPDLHKNELKHVK FCQXAFDLKYDXV ２９．前記ポリペプチドが以下の一般式で表されるアミノ酸配列を含む請求の範囲第23項のシグナリンポリペプチド：LDGRLQVXHRKGLPHVIYCRLWRWPDLHSHHELKAI ENCEYAFNLKKDEV ３０．前記ポリペプチドが、配列番号：14のアミノ酸225-300または配列番号： 16のアミノ酸230-301に対応するポリペプチド配列から成るフラグメントを少なくとも含む請求の範囲第23項のシグナリンポリペプチド。３１．前記ポリペプチドが、配列番号：15のアミノ酸186-304に対応するポリペプチド配列から成るフラグメントを少なくとも含む請求の範囲第23項のシグナリンポリペプチド。３２．前記ポリペプチドが、配列番号：17のアミノ酸170-332に対応するポリペプチド配列から成るフラグメントを少なくとも含む請求の範囲第23項のシグナリンポリペプチド。３３．前記ポリペプチドが、配列番号：27の一般式で表されるνドメインを含む請求の範囲第23項のシグナリンポリペプチド。３４．前記νドメインが配列番号：14〜26の１つに表されているνドメインに対応する請求の範囲第33項のシグナリンポリペプチド。３５．前記ポリペプチドが、配列番号：29の一般式に表されるシグナリンχドメインを更に含む請求の範囲第23項のシグナリンポリペプチド。３６．前記χドメインが、配列番号：14〜26の１つに表されるχドメインに対応する請求の範囲第35項のシグナリンポリペプチド。３７．前記ポリペプチドが融合タンパク質であり、前記シグナリンモチーフに加えて、シグナリンポリペプチド配列に無関係のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド配列を更に含む請求の範囲第23項のシグナリンポリペプチド。３８．前記融合タンパク質が、第２のポリペプチド配列として、該融合タンパク質の存在を検出するための検知可能な標識として、または、該融合タンパク質を固定化するためのマトリックス結合性ドメインとして機能するポリペプチドを含む請求の範囲第37項のシグナリンポリペプチド。３９．配列番号：14〜26の１つにより表されるシグナリンポリペプチドをコードする核酸。４０．ストリンジェントコンディション下に配列番号：１〜13の１つまたはそれ以上により表されるヌクレオチドにハイブリダイズする核酸によりコードされる精製されたまたは組換えによるシグナリンポリペプチド。４１．シグナリンモチーフを含むポリペプチドであって、形質転換性成長因子β （ＴＧＦβ）に対するレセプターのシグナル伝達活性を特異的に調節するポリペプチドをコードする単離された核酸。４２．前記シグナリンモチーフが配列番号：28の一般式で表される請求の範囲第 41項の核酸。４３．前記シグナリンモチーフが配列番号：14〜26の１つで表されるシグナリンモチーフに対応する請求の範囲42項の核酸。４４．前記ポリペプチドが以下の一般式で表されるアミノ酸配列を含む請求の範囲第42項の核酸：LDGRLQVSHRKGLPHVIYCRVWRWPDLQSHHELKPXECCEXPFXSKQKXV. ４５．前記ポリペプチドが以下の一般式で表されるアミノ酸配列を含む請求の範囲第42項の核酸：LDGRLQVAGRKGFPHVIYARLWXWPDLHKNELKHVKFCQXAFDLKYDXV. ４６．前記ポリペプチドが以下の一般式で表されるアミノ酸配列を含む請求の範囲第42項の核酸：LDGRLQVXHRKGLPHVIYCRLWRWPDLHSHHELKAIENCEYAFNLKKDEV. ４７．前記ポリペプチドが、配列番号：14のアミノ酸225-300または配列番号： 16のアミノ酸230-301に対応するポリペプチド配列から成るフラグメントを少なくとも含む請求の範囲第42項の核酸。４８．前記ポリペプチドが、配列番号：15のアミノ酸186-304に対応するポリペプチド配列から成るフラグメントを少なくとも含む請求の範囲第42項の核酸。４９．前記ポリペプチドが、配列番号：17のアミノ酸170-332に対応するポリペプチド配列から成るフラグメントを少なくとも含む請求の範囲第42項の核酸。５０．前記ポリペプチドが、配列番号：31の一般式で表されるνドメインを含む請求の範囲第42項の核酸。５１．前記νドメインが配列番号：14〜26の１つに表されているνドメインに対応する請求の範囲第50項の核酸。５２．前記ポリペプチドが、配列番号：29の一般式に表されるシグナリンχドメインを更に含む請求の範囲第42項の核酸。５３．前記χドメインが、配列番号：14〜26の１つに表されるχドメインに対応する請求の範囲第52項の核酸。５４．前記ポリペプチドが融合タンパク質であり、前記シグナリンモチーフに加えて、シグナリンポリペプチド配列に無関係のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド配列を更に含む請求の範囲第42項の核酸。５５．前記融合タンパク質が、第２のポリペプチド配列として、該融合タンパク質の存在を検出するための検知可能な標識として、または、該融合タンパク質を固定化するためのマトリックス結合性ドメインとして機能するポリペプチドを含む請求の範囲第54項の核酸。５６．前記ポリペプチドが、ＴＧＦβレセプターにより仲介される細胞内シグナル伝達経路を刺激する請求の範囲第42項の核酸。５７．前記ポリペプチドが、ＴＧＦβレセプターにより仲介される細胞内シグナル伝達経路を拮抗する請求の範囲第42項の核酸。５８．配列番号：１〜13の１種以上のセンスまたはアンチセンスである少なくとも60個の連続したヌクレオチドにより表される配列を有する核酸プローブに、ストリンジェントコンディション下にハイブリダイズする請求の範囲第42項の核酸。５９．前記ヌクレオチド配列に作動的に結合した転写調節配列を含むことにより発現ベクターとして使用されるのに適するようになっている請求の範囲第42項の核酸。６０．請求の範囲第42項の核酸を含み、原核細胞および真核細胞の少なくとも１つの中で複製することができる発現ベクター。６１．請求の範囲第60項の発現ベクターによりトランスフェクションされ前記組換えポリペプチドを発現する宿主細胞。６２．組換えシグナリンポリペプチドを製造する方法であって、細胞培地内で請求の範囲第61項の細胞を培養して前記組換えポリペプチドを発現させ、前記細胞培地から組み換えポリペプチドを単離することを含む方法。６３．シグナリンポリペプチドをコードするトランスジーンを保有し、脊椎動物であるトランスジェニック動物。６４．シグナリンに対する遺伝子が破壊されている細胞を有し、脊椎動物であるトランスジェニック動物。６５．組換えトランスフェクションシステムであって、（ｉ）請求の範囲第54項の核酸を含み、転写調節配列に作動的に結合されて真核細胞内でシグナリンポリペプチドを発現させるようにした遺伝子構造体、および（ii）前記遺伝子構造体を細胞に供給し、該遺伝子構造体により該細胞がトランスフェクションされるようにする遺伝子供給組成物を含むシステム。６７．実質的に精製されたオリゴヌクレオチドを含む核酸組成物であって、該オリゴヌクレオチドが、脊椎動物シグナリン遺伝子のセンスまたはアンチセンス配列から成る少なくとも25個の連続的なヌクレオチドにストリンジェントコンディション下にハイブリダイズするヌクレオチド配列の領域を含んでいる核酸組成物。６８．オリゴヌクレオチドが、脊椎動物のセンスまたはアンチセンス配列の少なくとも50個の連続したヌクレオチドにストリンジェントコンディション下にハイブリダイズする請求の範囲第67項の核酸組成物。６９．前記オリゴヌクレオチドが、それに結合され検出可能なラベルを含む請求の範囲第67項の核酸組成物。７０．前記オリゴヌクレオチドが、２つの隣接するサブユニット間に少なくとも１つの非加水分解性結合を有する請求の範囲第67項の核酸組成物。７１．シグナリンｍＲＮＡ転写体を含有する細胞を検出するためのテストキットであって、細胞サンプル中のシグナリンタンパク質をコードする核酸のレベルを測定するための請求の範囲第67項の核酸組成物を含むテストキット。７２．シグナリン仲介性誘導に応答する哺乳動物細胞の成長、分化または生存の１種またはそれ以上を調節する方法であって、シグナリンポリペプチドのシグナル伝達活性を調節する作用物質の有効量を用いて該細胞を処理することにより、該作用物質の非存在下の細胞に比べて（ｉ）成長速度または（ｉｉ）細胞の生存のうちの少なくとも１つを変化させることを含む方法。７３．前記作用物質が、天然に存在するシグナリンタンパク質の前記細胞に対する効果を模擬する請求の範囲第72項の方法。７４．前記作用物質が、天然に存在するシグナリンタンパク質の前記細胞に対する効果を拮抗する請求の範囲第72項の方法。７５．細胞が精巣細胞であり、作用物質が精子形成を調節する請求の範囲第72項の方法。７６．細胞が骨形成細胞であり、作用物質が骨形成を調節する請求の範囲第72項の方法。７７．細胞が軟骨形成細胞であり、作用物質が軟骨形成を調節する請求の範囲第 72項の方法。７８．作用物質がニューロン細胞の分化を調節する請求の範囲第72項の方法。７９．シグナリンポリペプチドに対する抗体。８０．モノクローナルである請求の範囲第79項の抗体。８１．ｄｐｐ亜群のメンバーに対するＴＧＦβレセプター以外のＴＧＦβレセプターのシグナル伝達活性を特異的に調節するシグナリンポリペプチド。８２前記レセプターがＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７、ＢＭＰ８、または６０Ａのレセプターである請求の範囲第81項のポリペプチド。８３．前記レセプターがＧＤＦ５、ＧＤＦ６、ＧＤＦ７、ＧＤＦ１、ＧＤＦ３、Ｖｇｌ、またはドーサリン（Dorsalln）のレセプターである請求の範囲第81項のポリペプチド。８４．前記レセプターがＢＭＰ３、ＧＤＦ１０、またはノーダル(nodal)のレセプターである請求の範囲第81項のポリペプチド。８５．前記レセプターがInh bAまたはInh bBのレセプターである請求の範囲第81 項のポリペプチド。８６．前記レセプターがＴＧＦβ１、ＴＧＦβ５、ＴＧＦβ２またはＴＧＦβ３のレセプターである請求の範囲第81項のポリペプチド。８７．前記レセプターがＭＩＳ、ＧＤＦ９、インヒビンまたはＧＤＮＦのレセプターである請求の範囲第81項のポリペプチド。８８．ＴＧＦβレセプターのシグナル伝達活性を特異的に調節するシグナリンポリペプチドであって、配列番号：15または配列番号：17に少なくとも50パーセントの相同性を有するポリペプチド。８９．望ましくない細胞増殖または分化を特徴とする疾患に冒されている細胞を同定するための診断法であって、（ｉ）シグナリンタンパク質をコードする遺伝子の異常変性または変異、および（ｉｉ）前記遺伝子の誤発現のうちの少なくとも１つを特徴とする細胞サンプル中の遺伝子損傷の有無を検出し；ここで、前記遺伝子の野性型が、ＴＧＦβレセプターのシグナル伝達活性を調節する能力を特徴とするシグナリンタンパク質をコードしている方法。９０．前記損傷を検出するため、ｉ．前記遺伝子、もしくは天然に存在するその変異体、または前記遺伝子に天然で結合している５’もしくは３’フランキング配列のセンスまたはアンチセンス配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列領域を含む核酸から成る診断用プローブを提供し； ii．前記プローブを前記細胞サンプルの核酸と混合し；さらに iii.前記細胞核酸に前記プローブがハイブリダイゼーションすることにより、前記遺伝子からの１個またはそれ以上のヌクレオチドの欠失、前記遺伝子への１個またはそれ以上のヌクレオチドの追加、前記遺伝子の１個またはそれ以上のヌクレオチドの置換、前記遺伝子の全部または一部の全体的な染色体再配置、前記遺伝子のｍＲＮＡ転写体レベルの全体的な変化、または、前記遺伝子転写体の野性型スプライシングパターンのうちの少なくとも１つを検出する、ことを行う請求の範囲第89項の診断法。９１．前記プローブのハイブリダイゼーションが、該プローブと細胞核酸をポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に供し、増幅された生成物中の異常を検出することを含む請求の範囲第90項の診断法。９２．前記プローブのハイブリダイゼーションが、該プローブと細胞核酸をライゲーション連鎖反応（ＬＣＲ）に供し、増幅された生成物中の異常を検出することを含む請求の範囲第90項の診断法。９３．前記プローブがストリンジェントコンディション下に、配列番号：１〜13 の１種またはそれ以上で表される核酸にハイブリダイズする請求の範囲第90項の診断法。