【発明の詳細な説明】
５−ＨＴ２受容体、特に５−ＨＴ２Ａ受容体のモデュレーターに対する
個体の応答の評価
本発明は５−ＨＴ2受容体、とりわけ５−ＨＴ2A受容体と相互作用する治療薬
、特にクロザピンのごとき神経弛緩薬に対する個体の応答を評価する方法に関す
る。
精神分裂病は、その原因の理解およびその徴候の調節がなされつつあるが、現
在のところ治療法のない、手のつけられない精神病である。一般に、罹患の年齢
は青年期後期であり、予測性に欠ける一生涯の病である。分裂病を患う対象は正
の徴候、例えば妄想および幻覚、および／または最終的に社会的衰退および自殺
に至る、引きこもり、孤独および意気沮喪のごとき消極的症状を呈する。英国で
は一時約６０００００人の分裂病患者がおり、その医療予算全体の約１．６％を
占めると報告されている。これらの費用のほとんどは薬物ではなく、共同体およ
び病院にかかる費用である。従って、効果的な薬物治療をさらに進めることで、
かなり経済的に節約できる可能性がある。(British Journal of Psychiatry,165
(補25):18-21(1994))。
1950年代以来、抗神経薬（神経弛緩薬）が利用でき、程度の差はあるが、精神
分裂病の正の徴候を治療するのに用いられている。しかしながら、これらの薬物
(「典型的な」神経弛緩薬)の大部分は精神分裂病の負の徴候にはほとんど効果が
なく、さらには多くの副作用があり、その最大の問題が錐体外路副作用（ｅｐｓ
）として公知の運動障害である。典型的な神経弛緩薬の例としてはハロペリドー
ル（haloperidol）およびスルピリド（sulpride）が挙げられる。英国では９０
％以上の患者がかかる伝統的な抗精神病薬の治療を受けているが、患者の３０％
は応答しない。典型的な抗精神病薬の治療上の効果は主にドーパミンＤ2受容体
の遮断により発揮されると考えられる：しかしながらこのメカニズムは錐体外路
副作用にも寄与すると考えられる。
さらに最近、効果が増強されたが、副作用は少ない第二世代の抗精神病薬、い
わゆる「異型的な」神経弛緩薬が開発された。これらの化合物は典型的な神経弛
緩薬
よりもＤ2受容体に対する親和性が低いようであるが、これらはまた別の受容体
、例えばドーパミンＤ4受容体およびセロトニン受容体、特にセロトニン５−Ｈ
Ｔ2Aおよび５−ＨＴ2C受容体と相互作用する。異型的な神経弛緩薬は精神分裂病
の正の徴候および負の徴候の両方を改善し、実質的にｅｐｓを引き起こさないと
いう利点がある。この型の薬物の一例としてはクロザピン（clozapine）が挙げ
られる。しかしながら、これは好中球減少症を生み出す傾向があり、費用がかか
るという点で論議をよび、その使用は非常に限定されている；従って、その他の
精神弛緩薬に応答しない対象の精神分裂病の治療に制限されている。加えて、ク
ロザピンを用いる治療にさえ抵抗する一定割合の患者もいる。従って、最も効果
的であろうと思われるこれらの患者を予測する助けとなる試験は、臨床上の決定
を下す手段として価値がある。
「異型的な」神経弛緩薬のさらなる例として、リスペリドン(risperidone)、
オランザピン(olanzapine)、セロクエル(seroquel)、セルチンドール(sertindol
e)およびジプラシドン（ziprasidone）が挙げられる；これらは全てドーパミン
Ｄ2および５−ＨＴ2A受容体の両方のアンタゴニストである。
一旦精神分裂病と診断されると、できるだけ速やかに最適な治療を選別して受
けるのが望ましいことは明らかである。現在、神経弛緩薬を用いる治療では患者
が薬物治療に応答するかどうかを決定する優れた方法はないので殆どが試行錯誤
である。従って患者は種々の抗精神薬に応答しないことが明確になるまで、種々
の抗精神薬を用いていくつかの治療法を行うことになる。これらの薬物の副作用
を鑑みれば、治療に全く応答しない患者（非応答者）にその薬物を投与するのを
避けるというのは非常に利のあることである；クロザピンの場合、その周知の毒
性に鑑みて、このことは特に重要である。さらに、疾患の長期治療の成果は、患
者が一つまたはそれ以上の不適当な薬物を投与された後よりむしろ、発病時に最
も効果的な薬物治療を受けた場合に改善されることが一般にわかっている。従っ
て薬物治療により応答しそうな患者を見出す手段が有利であろう。
最近、５−ＨＴ2A受容体をコードするヒトセロトニン受容体遺伝子が２個の対
立遺伝子、Ｈｉｓ４５２およびＴｙｒ４５２を有してなるコーディング突然変異
体Ｈ
ｉｓ４５２Ｔｙｒを呈することがわかり、これは一般集団で各々９１％および９
％の頻度で発生し、１６．４％の異型接合性が観察されることがわかった。これ
らの対立遺伝子は３種の異なる遺伝子型、Ｈｉｓ４５２／Ｈｉｓ４５２；Ｈｉｓ
４５２／Ｔｙｒ４５２およびＴｙｒ４５２／Ｔｙｒ４５２を生じる(Lancet,346(
8979)：908-909（1995年９月30日）)。しかしながら、これらの変種と一群の精
神分裂病患者の中でのクロザピンに対する応答との関連性については報告されて
いない。
この度、意外にも、精神分裂病と診断されてクロザピン治療を受けた患者の集
団において、クロザピン治療に応答する患者（以下、「応答者」という）とかか
る治療に応答しない患者（以下、「非応答者」という）の間の対立遺伝子Ｈｉｓ
４５２およびＴｙｒ４５２の分布は、一般集団における分布とは有意に異なるこ
とが見出された。とりわけＴｙｒ４５２対立遺伝子に関して同型接合体と見出さ
れた非応答者の割合は、一般的な集団におけるこの遺伝子型の頻度から予期され
るものよりも高かった。しかしながら、Ｈｉｓ４５２に関して同型接合体である
とわかっている患者または異型接合体の患者の中でも、応答者および非応答者間
の割合には有意な差はなかった。このようにＴｙｒ４５２対立遺伝子に関する同
型接合体およびクロザピン治療に応答しなかった患者との間に相関性があった。
従って、この対立遺伝子変異は、どの患者がクロザピンを用いる治療にほとんど
応答しそうにないかを予想するのに利用できる。
従って、本発明は、対象がクロザピン治療に応答しないかどうかの可能性を該
対象において評価するのに用いる方法であって、該対象において５−ＨＴ2A遺伝
子のＴｙｒ４５２対立遺伝子および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝子をコードす
るＤＮＡの存在を検出することからなる方法を提供する。
本発明はまた、より一般には、対象が５−ＨＴ2受容体、とりわけ５−ＨＴ2A
受容体で作用する治療薬に応答しそうかまたはそうでないかを評価するのに用い
ることができる。これらの受容体で作用する化合物を、以下、５−ＨＴ2および
５−ＨＴ2Aモデュレーターという。かかる化合物は典型的および異型的の両方の
神経弛緩薬を包含する。
従って本発明は、対象が５−ＨＴ2モデュレーターを用いる治療に応答するか
ま
たは応答しないかを評価するのに用いる方法であって、該対象において５−ＨＴ2A
遺伝子のＴｙｒ４５２対立遺伝子および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝子につ
いて試験し、その対立遺伝子を有してなるＤＮＡの有無を検出することからなる
方法を提供する。
好ましくは、この方法を５−ＨＴ2Aモデュレーターに応答するかまたはしない
かの可能性を評価するのに用いる。５−ＨＴ2および５−ＨＴ2Aモデュレーター
はこれらの受容体でのアゴニストおよびアンタゴニストを包含する。かかる化合
物は種々の治療上の効果を発揮する。かくして、例えば、５−ＨＴ2Aアンタゴニ
ストは精神分裂病、うつ病、躁うつ病、強迫障害、パニック障害、心的外傷後ス
トレス障害、広汎性不安障害、食欲不振および病的飢餓のごとき食事障害、快感
消失症、性的機能不全、月経前症候群、片頭痛、癲癇、アルツハイマー病、睡眠
障害、コカイン、エタノール、ニコチンおよびベンゾジアゼピン類のごとき薬物
乱用による禁断症状、薬物例えばコカイン渇望、ならびに水頭症のごとき脊髄外
傷および／または頭部損傷に関連する障害のごときＣＮＳ障害の治療において使
用できる可能性がある。
とりわけ好ましい態様において、本発明は精神分裂病を患っていると診断され
た対象において、該対象が神経弛緩薬に対して応答するかしないかの可能性を評
価するのに用いる方法であって、該対象において５−ＨＴ2A遺伝子のＴｙｒ４５
２対立遺伝子および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝子について試験し、その対立
遺伝子を有してなるＤＮＡの有無を検出することからなる方法を提供する。神経
弛緩薬は５−ＨＴ2受容体モデュレーター、とりわけ５−ＨＴ2A受容体モデュレ
ーターであるのが好ましい。神経弛緩薬はクロザピン、リスペリドン、オランザ
ピン、セロクエル、セルチンドールまたはジプラシドンのごとき「異型的」神経
弛緩薬であるのが都合よい。最も好ましくは神経弛緩薬はクロザピンである。好
ましくは、この方法を用い、応答しない可能性を評価する。クロザピンの場合、
５−ＨＴ2AＴｙｒ４５２単独での存在は、すなわち対象がＴｙｒ４５２対立遺伝
子に関して同型接合体である場合、対象がこの薬物を用いる治療にあまり応答し
そうにない（すなわち応答する可能性が低い）ことを示している。本明細書にお
いて「確率が低い」とは応答の可能性が「通常」の応答率、すなわち精神分裂病
の患者の無作為の群で観察さ
れる応答率よりも低いことを意味する。
前記したような症状、とりわけ精神分裂病の治療において、本発明の方法は応
答者および非応答者の正確なまたは絶対的な同定ができるわけではないが、応答
の程度または可能性が示され、本発明を医者が臨床判断を下す助けおよび指標に
用いることができることはもちろん当業者に理解されよう。
精神分裂病治療の分野において、本明細書において使用する「応答者」および
「非応答者」なる用語が当業界で周知であることも当業者には理解されよう。臨
床においてクロザピンのごとき神経弛緩薬に対する応答の程度は、G1obal Asses
sment Scale（ＧＡＳ）またはBrief Psychiatric Rating Scale（ＢＰＲＳ）の
ごとき十分に確立された評価尺度に準じて通常評価される。
さらなる態様において、本発明は、５−ＨＴ2モデュレーターで治療できる症
状を患っている対象が５−ＨＴ2モデュレーターを用いる治療に応答するかしな
いかを評価する方法であって：
(ｉ)該対象から得たＤＮＡを含有するサンプルにおいて５−ＨＴ2A遺伝子のＴ
ｙｒ４５２および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝子をコードするＤＮＡの有無に
ついて試験し；および
（ｉｉ）その結果を、Ｔｙｒ４５２および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝子の
分布と該症状を患っている対象の集団から得た該５−ＨＴ2モデュレーターに対
する応答との所定の相関性と比較する；
ことからなる方法を提供する。
工程（ｉｉ）で用いる所定の相関性については以下の一連の工程：
特定の症状を患うと診断された対象の集団またはコホートを選別すること；
該コホートを特定の５−ＨＴ2（例えば５−ＨＴ2A）モデュレーターで治療す
ること；
該治療の成果をモニター観察し、該治療に対する応答者および非応答者を同定
すること；
ＤＮＡを含有する生物学的サンプルを該コホートから採取し、５−ＨＴ2A遺伝
子のＴｙｒ４５２および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝子の存在または不存在に
関し
てこのサンプルを試験すること；
応答者および非応答者間の対立遺伝子の分布を分析すること；
該症状を患っていない対象の一群の対照における対立遺伝子の分布と比較する
こと；
統計分析を行い、Ｔｙｒ４５２および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝子の存在
または不存在と治療に対する応答との間に統計的に有意な関係があるかどうかを
決定すること
から得ることができる。
本発明は、このようにまた、５−ＨＴ2（例えば５−ＨＴ2A）モデュレーター
で治療できる症状を患っている対象が特定の５−ＨＴ2モデュレーターを用いる
治療に応答するか応答しないかを評価する方法であって、
（ｉ）５−ＨＴ2モデュレーターでの治療を必要とする特定の症状を患ってい
る対象の集団における５−ＨＴ2AＴｙｒ４５２および５−ＨＴ2AＨｉｓ４５２対
立遺伝子の分布と観察された該モデュレーターに対する臨床上の応答とを相関さ
せ；
(ｉｉ)該対象から得たＤＮＡを含有するサンプル中の５−ＨＴ2A遺伝子のＴｙ
ｒ４５２および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝子をコードするＤＮＡの有無につ
いて試験し；および
（ｉｉｉ）（ｉｉ）で得られた結果をＴｙｒ４５２および／またはＨｉｓ４５
２対立遺伝子の分布と（ｉ）で得られた該５−ＨＴ2モデュレーターに対する応
答との相関性と比較する；
ことからなる方法を提供する。
工程（ｉ）自体はＤＮＡを含有する生物学的サンプルを対象から採取すること
、および対立遺伝子の存在または不存在に関してサンプルを試験することからな
る。例えばクロザピンの場合のように、（ｉ）の相関性が周知であるとき、その
方法は工程（ｉｉ）および（ｉｉｉ）だけからなる。
もう一つ別の態様において、本発明は、対象が５−ＨＴ2（例えば５−ＨＴ2A
）モデュレーターを用いる治療に応答しそうか応答しそうにないかを評価するた
めの
モデルを作る方法であって、
（ｉ）５−ＨＴ2モデュレーター（例えばクロザピン）で治療できる特定の症
状（例えば精神分裂病）を患っていると診断された患者のコホートを該５−ＨＴ2
モデュレーターで治療し；
（ｉｉ）治療の成果を評価し、所定の診断基準に従って応答者および非応答者
を決定し；
（ｉｉｉ）（ｉ）における患者のコホートからＤＮＡサンプルを得；
（ｉｖ）該症状を患っていないと診断された対象の一群の対照からＤＮＡサン
プルを得；
（ｖ）（ｉｉｉ）および（ｉｖ）で得たサンプルを分析してこれらが５−ＨＴ2A
遺伝子のＴｙｒ４５２対立遺伝子もしくはＨｉｓ４５２対立遺伝子またはその
両方の対立遺伝子をコードするかどうかを同定し；
（ｖｉ）（ｉｉｉ）で得た応答者および非応答者のサンプル中のＴｙｒ４５２
およびＨｉｓ４５２対立遺伝子の分布を算出し；
（ｖｉｉ）（ｖｉ）で得たサンプル中のＴｙｒ４５２およびＨｉｓ４５２対立
遺伝子の分布を算出し；
（ｖｉｉｉ）（ｖｉ）および（ｖｉｉ）で得た分布を比較し；
（ｉｘ）（ｖｉ）で得た分布を応答者および非応答者の間で比較し；
（ｘ）（ｖｉｉｉ）および（ｉｘ）の結果に関して統訃的に分析し、対象がＴ
ｙｒ４５２および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝子を有するかどうかに基づいて
、該５−ＨＴ2モデュレーターを用いた治療に対して応答する可能性を評価する
ためのモデルを作る；
ことからなる方法を提供する。
本発明はまた５−ＨＴ2（例えば５−ＨＴ2c）モデュレーターで治療できる症
状を患っている対象が特定の５−ＨＴ2モデュレーターを用いる治療に対して応
答するか応答しないかを評価する方法であって、該対象の遺伝子型を前記のモデ
ルと比較することからなる方法を提供する。
前記のいずれの方法も一つまたはそれ以上の工程をコンピューター制御システ
ム
により行うことができることは明らかであろう。従って、例えば一旦生物学的サ
ンプルを得ればコンピューター制御自動装置システムにより遺伝子型決定を行う
ことができる。コンピューター制御システムは評価される対象と所定の相関性ま
たはモデルとを比較するように構築することもできる。コンピューター制御シス
テムはまた比較の結果に応じて正または負のいずれかの読み取りも得られるよう
に構築することもできる。従って本発明は、かかるコンピューター制御システム
またはコンピューター実行方法にまで及ぶものである。
Ｔｙｒ４５２および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝子について試験し、その対
立遺伝子をコードするＤＮＡの存在を検出する工程は、当業者に周知の技術のご
とき適当な任意の手段により直接的または間接的に実施できる。好ましくはエク
ソビボで実施する。すべての工程は通常対象からＤＮＡを含有する生物学的素材
のサンプルを回収し、次いでそのサンプルから対象がどの対立遺伝子を有するか
を検出する工程を包含する。例えば、検出工程は対象からＤＮＡを含有する生物
学的サンプルを回収し、次いで生物学的サンプル中のＴｙｒ４５２および／また
はＨｉｓ４５２対立遺伝子を有してなるＤＮＡの存在を決定することにより実施
できる。組織サンプルおよび血液サンプルを含め、その対象のＤＮＡを含有する
いずれの生物学的サンプルを用いることができる。血液細胞がとりわけ都合の良
い供給源である。Ｔｙｒ４５２および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝子を有して
なるＤＮＡの存在の決定は、適当な検出可能な基で標識したオリゴヌクレオチド
プローブを用いて；ポリメラーゼ連鎖反応またはリガーゼ連鎖反応（増幅産物を
次いで標識オリゴヌクレオチドプローブにより検出できる増幅応答）のごとき増
幅応答により、または制限酵素断片長多型（ＲＬＦＰ）を検出する制限ヌクレア
ーゼ消化および電気泳動分離により決定できる。さらには、検出工程は対象がＴ
ｙｒ４５２またはＨｉｓ４５２対立遺伝子をコードする遺伝子について異型接合
的であるかまたは同型接合的であるかを検出する工程を有していてもよい。多く
の異なるオリゴヌクレオチドプローブアッセイフォーマットが周知であり、これ
を本発明を実施するために用いることができる。
検出工程を直接的または間接的に実施できることは容易に理解されよう。従っ
て、
例えば、前記したいずれの技術もＴｙｒ４５２対立遺伝子またはＨｉｓ４５２対
立遺伝子のどちらかを検出するために用いることができる。対象中にＴｙｒ４５
２対立遺伝子のみが検出される場合、対象は対立遺伝子Ｔｙｒ４５２について同
型接合的であると決定される；しかし対象中にＨｉｓ４５２対立遺伝子が単独で
かまたは対立遺伝子Ｔｙｒ４５２に加えて検出される場合、対象はＨｉｓ４５２
について同型接合的であるかまたは異型接合的のどちらかであると決定される。
本発明は精神分裂病を患っている患者の臨床上の管理を改善できる点で有用で
ある。治療に先立ってクロザピンのごとき神経弛緩薬に応答しそうにない対象を
同定することにより、関連する副作用および経費を伴うかかる薬物の不必要で利
益のない投与を避けることができ、代わりに適当な治療形態を選択できる。従っ
て本発明は治療過程においてできるだけ早く最適な治療法を提示するという点で
患者に直接的な利益を提供し、健全な経済という点でより広範な利益を提供する
。
従って、さらなる具体例において、本発明は５−ＨＴ2モデュレーターでの治
療を要する症状の治療方法であって、
(ｉ)該症状を患っている対象から得たＤＮＡを含有する生物学的材料のサンプ
ル中の対立遺伝子Ｔｙｒ４５２および／またはＨｉｓ４５２を有してなるＤＮＡ
について試験し；および
（ｉｉ）Ｈｉｓ４５２対立遺伝子を単独でまたはＴｙｒ４５２対立遺伝子の存
在下で有してなるＤＮＡがサンプル中に存在する場合、該対象を５−ＨＴ2モデ
ュュレーターで治療する；
ことからなる方法を提供する。
症状は精神分裂病であることが好ましい。５−ＨＴ2モデュレーターはクロザ
ピンのごとき神経弛緩薬であるのが好ましい。
加えて本発明は神経弛緩薬のごとき５−ＨＴ2モデュレーターを用いる臨床試
験を効果的で効率よく設計できるようにする点で有用である。従って２種または
それ以上の神経弛緩薬を用いる比較試験において、いずれかまたは全ての薬物に
応答しそうにない患者を排除することができる。
Ｔｙｅ４５２対立遺伝子の存在が、精神分裂病が発病する確率または危険性が
高
くなることに関連すると考えられる。このように、かかる対立遺伝子の存在は、
所定の対象が精神分裂病を発病する可能性を評価するのに予後的に用いることが
できる。従って本発明はまた対象の精神分裂病が発病しそうかどうかを評価する
のに用いる方法であって、該対象において５−ＨＴ2A遺伝子のＴｙｒ４５２対立
遺伝子および／またはＨｉｓ４５２対立遺伝予について試験し、その対立遺伝子
を有してなるＤＮＡの有無を検出することからなる方法を提供する。
さらなる態様において、本発明は本発明の方法に用いるのに適したアッセイで
あって、生物学的サンプル中の対立遺伝子Ｔｙｒ４５２および／または対立遺伝
子Ｈｉｓ４５２をコードするＤＮＡの存在を検出する手段からなるアッセイを提
供する。
本発明はまた、本発明の方法に用いるのに適したキットであって、
（ａ）ヒトＤＮＡサンプル中の対立遺伝子Ｔｙｒ４５２および／またはＨｉｓ
４５２をコードするＤＮＡの有無について試験する手段と；
（ｂ）検出方法いおいて用いる試薬と；
からなるキットを提供する。
試験手段は標識プローブまたは制限酵素を包含するのが好ましい。試薬は例え
ば希釈剤、洗浄液および調節溶液を包含する。
さらなる態様において本発明はヒト５−ＨＴ2AＴｙｒ４５２および／またはＨ
ｉｓ４５２対立遺伝子をコードするＤＮＡを発現するセルラインを提供する。好
ましくは、セルラインはヒト５−ＨＴ2AＴｙｒ４５２対立遺伝子をコードするＤ
ＮＡを発現する。かかるセルラインは周知の組換え技術および方法を用いて得る
ことができる。
なおさらなる態様において、本発明はまたＴｙｒ４５２対立遺伝子を含有する
ヒト５−ＨＴ2A遺伝子を発現するトランスジェニック動物、とりわけマウスのご
ときトランスジェニック哺乳動物をも提供する。かかるトランスジェニック動物
を用いてクロザピンのごとき現在使用されている神経弛緩薬に応答しない患者に
有効であるかもしれない新規抗精神薬をスクリーニングし、同定することができ
る。遺伝子操作の分野において標準的な方法を用いてｈ５−ＨＴ2A遺伝子のＴｙ
ｒ４５２対立遺伝子変異に関して同型接合体であるトランスジェニック動物を得
ることができる。実施例 方法
精神分裂病（ＤＳＭ ＩＩＩ）を患っていると診断され、クロザピン治療を受
けている個体から得た血液サンプルを用いて、Ｈｉｓ４５２Ｔｙｒ多型に関する
遺伝子型決定を行った。またクロザピン治療に対する応答に関して個体をまた別
に評価した；６週間の治療の後、ＧＡＳにおいて＜２０点、またはＢＰＲＳにお
いて＜２０％の低下をみたものを応答しないと定義する。結果は以下の表に示す
ように相関した。Ｈｉｓ４５２Ｔｙｒ多型の検出
Eddmanらに記載される方法（Human Genetics，ref 97(5):614-619(1996)）を
以下のようなＰＣＲ条件に変更した：
ゲノムＤＮＡ１００ｎｇ、各プライマー１０ピコモル、５０ｍＭ ＫＣｌ、１０
ｎＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、２．０ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．０１％ゼラチン、２００
μＭ ｄＮＴＰおよび１Ｕ Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼを含有する２５μｌの容
量で標準的なＰＣＲを実施した。
プライマー：
５’−ＣＡＡＡＧＣＡＡＧＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡ−３’
５’−ＧＧＣＡＴＡＣＡＧＡＴＡＴＧＡＴＣＧＴＴＧＧ−３’
ＰＣＲプログラム：
９５℃で１分、続いて９５℃で４５秒の３５サイクル、５８℃で４５秒、７２℃
で４５秒、最後に７２℃で１０分の延長工程。
対立遺伝子検出：
ＰＣＲ産生物を３７℃で最低２時間、Ｂｂｖｌで消化し（ＰＣＲ産生物１５μｌ
、１ＯＸ ＲＥ緩衝液２μｌ、Ｈ2Ｏ２μl、ＢｂｖＩ １μｌ（１０単位））、
消化産物を７０ｖで３時間、３％アガロースゲルを走らせた。
ＰＣＲ産生物：２４８塩基対
対立遺伝子Ｈｉｓ４５２：１８０塩基対および６８塩基対の２個のフラグメント
に消化した
対立遺伝子Ｔｙｒ４５２：切断しない（２４８塩基対）。結果 Ｈｉｓ４５２Ｔｙｒ多型の５−ＨＴ２ａ受容体遺伝子およびクロザピン分析 遺伝子型頻度：ｘ2＝２．８４ ｐ＝０．２４
対立遺伝子頻度：ｘ2＝１．９２ ｐ＝０．１６DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
For 5-HT2 receptors, especially modulators of 5-HT2A receptors
Evaluate individual response
The present invention relates to 5-HTTwoReceptors, especially 5-HT2ATherapeutic agents that interact with the receptor
In particular, methods for assessing an individual's response to neuroleptic drugs such as clozapine.
You.
Schizophrenia is being understood about its causes and its signs are being regulated,
An unreachable mental illness with no cure at present. Generally, the age of illness
Is late adolescence and is a life-long disease with poor predictability. Subjects with schizophrenia are positive
Signs of delusions and hallucinations, and / or eventually social decline and suicide
With negative symptoms such as withdrawal, loneliness and dementation leading to In the UK
Has about 600,000 schizophrenia patients at one time, accounting for about 1.6% of its total healthcare budget.
It is reported to occupy. Most of these costs are not drugs but community and community
And hospital costs. Therefore, by further promoting effective drug treatment,
There is potential for significant economic savings. (British Journal of Psychiatry, 165
(Supplement 25): 18-21 (1994)).
Since the 1950s, anti-neural drugs (neuroleptics) have been available and, to varying degrees, mental
It has been used to treat the positive signs of schizophrenia. However, these drugs
Most of the 'typical' neuroleptics have little effect on the negative signs of schizophrenia
And there are many side effects, the biggest problem of which is extrapyramidal side effects (eps
). Haloperido is an example of a typical neuroleptic
Haloperidol and sulpride. 90 in the UK
Over 30% of patients are receiving such traditional antipsychotic treatment, but 30%
Does not respond. The therapeutic effects of typical antipsychotics are mainly dopamine DTwoReceptor
Is thought to be exerted by blocking
It is thought to contribute to side effects.
More recently, a second-generation antipsychotic with enhanced efficacy but fewer side effects
So-called "atypical" neuroleptics have been developed. These compounds have typical neuroleptic properties.
Palliative
D thanTwoIt appears that the affinity for the receptor is low, but these are
For example, dopamine DFourReceptors and serotonin receptors, especially serotonin 5-H
T2AAnd 5-HT2CInteracts with receptors. Atypical neuroleptics are schizophrenia
Ameliorates both positive and negative signs of and does not substantially cause eps
There are advantages. One example of this type of drug is clozapine
Can be However, this tends to produce neutropenia and is costly.
Is controversial, and its use is very limited;
Limited to treatment of schizophrenia in subjects who do not respond to psychotropics. In addition,
A certain percentage of patients even resist treatment with Rosapine. Therefore, the most effective
Trials to help predict these likely likely patients are clinical decisions
It is valuable as a means of making
Further examples of "atypical" neuroleptics include risperidone,
Olanzapine, seroquel, sertindol
e) and ziprasidone; these are all dopamine
DTwoAnd 5-HT2ABoth antagonists of the receptor.
Once schizophrenia is diagnosed, the best treatment is selected and received as soon as possible.
Obviously, it is desirable to do so. Currently, patients with neuroleptic treatment
Most are trial and error as there is no good way to determine if a patient responds to drug treatment
It is. Therefore, until the patient is clearly not responding to various antipsychotics,
You will be doing some treatment with antipsychotics. Side effects of these drugs
In view of the above, it is important to administer the drug to patients who do not respond to the treatment at all (non-responders).
Avoiding is very beneficial; in the case of clozapine, its well-known poison
This is particularly important in view of gender. In addition, the outcome of long-term treatment of
At the onset of illness rather than after the individual has been given one or more inappropriate drugs.
Have also been found to improve when treated with effective medications. Follow
A means to find patients who are more likely to respond to drug treatment would be advantageous.
Recently, 5-HT2AThe human serotonin receptor gene encoding the receptor
Coding mutation comprising a progenitor, His452 and Tyr452
Body H
is452Tyr, which is 91% and 9% in the general population, respectively.
%, And 16.4% heterozygosity was observed. this
These alleles have three different genotypes, His452 / His452; His.
452 / Tyr452 and Tyr452 / Tyr452 (Lancet, 346 (
8979): 908-909 (September 30, 1995)). However, these variants and a group of
Reported association with response to clozapine in schizophrenic patients
Not in.
This time, surprisingly, a collection of patients diagnosed with schizophrenia and treated with clozapine was received.
Group responding to clozapine treatment (hereinafter referred to as "responders")
Alleles among patients who do not respond to treatment (hereinafter referred to as "non-responders")
The distribution of 452 and Tyr452 is significantly different from the distribution in the general population.
Was found. Homozygous found especially for the Tyr452 allele
Of responders were expected from the frequency of this genotype in the general population.
It was higher than the one. However, it is homozygous for His452
Between responders and non-responders in known or heterozygous patients
Did not differ significantly. Thus, the same applies to the Tyr452 allele.
There was a correlation between type conjugates and patients who did not respond to clozapine treatment.
Therefore, this allelic variation is most likely to occur in patients who are treated with clozapine.
Can be used to predict if it is unlikely to respond.
Thus, the present invention raises the possibility that a subject will not respond to clozapine treatment.
A method for evaluating in a subject, the method comprising the steps of:2AHeredity
Encodes a Tyr452 and / or His452 allele of the offspring
A method comprising detecting the presence of DNA.
The invention also relates more generally to the method wherein the subject is 5-HTTwoReceptors, especially 5-HT2A
Used to assess whether or not it is likely to respond to a therapeutic agent acting at the receptor
Can be Compounds acting on these receptors are hereinafter referred to as 5-HTTwoand
5-HT2AIt is called a modulator. Such compounds are both typical and atypical.
Includes neuroleptics.
Therefore, the present invention relates to a method wherein 5-HTTwoResponding to Modulator Treatment
Ma
Or non-response, wherein 5-HT is used in the subject.2A
Tyr452 allele and / or His452 allele of the gene
And testing for the presence or absence of DNA comprising the allele.
Provide a way.
Preferably, the method comprises 5-HT2ARespond or not to the modulator
It is used to evaluate the possibility. 5-HTTwoAnd 5-HT2AModulator
Include agonists and antagonists at these receptors. Such a compound
Objects exert a variety of therapeutic effects. Thus, for example, 5-HT2AAntagoni
Strikes include schizophrenia, depression, manic depression, obsessive-compulsive disorder, panic disorder, post-traumatic strike.
Eating disorders such as tress disorder, pervasive anxiety disorder, anorexia and morbid hunger, pleasure
Annihilation, sexual dysfunction, premenstrual syndrome, migraine, epilepsy, Alzheimer's disease, sleep
Disorders, drugs such as cocaine, ethanol, nicotine and benzodiazepines
Abstinence from abuse, drugs such as cocaine craving, and extraspinal cord such as hydrocephalus
Used in the treatment of CNS disorders, such as those associated with wounds and / or head injuries
Could be used.
In a particularly preferred embodiment, the invention is diagnosed as suffering from schizophrenia.
Of subjects who responded or did not respond to neuroleptics
Using 5-HT in the subject.2ATyr45 of the gene
Tested for two alleles and / or His452 alleles,
Provided is a method comprising detecting the presence or absence of DNA having a gene. Nerve
Relaxant is 5-HTTwoReceptor modulator, especially 5-HT2AReceptor module
Is preferred. Neuroleptic clozapine, risperidone, olanza
"Atypical" nerves such as pin, seroquel, sertindole or ziprasidone
Conveniently a relaxant. Most preferably the neuroleptic is clozapine. Good
Preferably, this method is used to evaluate the possibility of not responding. For clozapine,
5-HT2AThe presence of Tyr452 alone indicates that the subject has a Tyr452 allele.
If the subject is homozygous for the offspring, the subject will respond poorly to treatment with this drug
Otherwise (ie, unlikely to respond). In this specification
"Low probability" means that the probability of response is "normal" response rate, that is, schizophrenia
Observed in a random group of patients
Means lower than the response rate.
In the treatment of the aforementioned conditions, in particular schizophrenia, the method of the present invention is useful.
Although accurate or absolute identification of respondents and non-responders is not possible, respondents
The present invention may be used to help physicians make clinical decisions and indicators.
It will of course be appreciated by those skilled in the art that they can be used.
In the field of schizophrenia treatment, as used herein, "responders" and
One skilled in the art will also understand that the term "non-responder" is well known in the art. Coming
The degree of response to neuroleptic drugs such as clozapine on the floor was determined by the G1obal Asses
sment Scale (GAS) or Brief Psychiatric Rating Scale (BPRS)
It is usually evaluated according to a well-established evaluation scale.
In a further aspect, the present invention provides 5-HTTwoDiseases that can be treated with a modulator
The subject suffering from the condition is 5-HTTwoDo you respond to treatment with a modulator?
How to evaluate squid:
(i) 5-HT in a sample containing DNA obtained from the subject2AGene T
presence or absence of DNA encoding yr452 and / or His452 allele
Testing; and
(Ii) determining the results of the Tyr452 and / or His452 alleles
Distribution and the 5-HT obtained from a population of subjects suffering from the conditionTwoAgainst the modulator
To a predetermined correlation with the response to
Providing a method comprising:
For the predetermined correlation used in step (ii), the following series of steps:
Selecting a population or cohort of subjects diagnosed with a particular condition;
The cohort was identified as a specific 5-HTTwo(For example, 5-HT2A) Treat with a modulator
That;
Monitor the outcome of the treatment and identify responders and non-responders to the treatment
To do;
A biological sample containing DNA was taken from the cohort and the 5-HT2AHeredity
In the presence or absence of the Tyr452 and / or His452 allele of the offspring
Relation
Testing the leverage sample;
Analyzing the distribution of alleles between responders and non-responders;
Compare allele distribution in a group of controls without the condition
thing;
Statistical analysis is performed to determine the presence of Tyr452 and / or His452 alleles.
Or whether there is a statistically significant relationship between absence and response to treatment
To decide
Can be obtained from
The present invention thus also provides 5-HTTwo(For example, 5-HT2A) Modulator
The subject suffering from a condition that can be treated with a specific 5-HTTwoUsing a modulator
A method of assessing whether or not to respond to treatment,
(I) 5-HTTwoSuffering from certain conditions that require treatment with a modulator
-HT in a population of subjects2ATyr452 and 5-HT2AHis452 pair
Correlate the distribution of progenitors with the observed clinical response to the modulator
Let;
(ii) 5-HT in a sample containing DNA obtained from the subject2ATy of the gene
presence or absence of DNA encoding r452 and / or His452 allele
And test; and
(Iii) converting the results obtained in (ii) to Tyr452 and / or His45
Distribution of the biallele and the 5-HT obtained in (i)TwoResponse to Modulator
Compare with the correlation with the answer;
Providing a method comprising:
Step (i) itself involves collecting a biological sample containing DNA from the subject.
And testing samples for the presence or absence of alleles.
You. When the correlation of (i) is known, for example, in the case of clozapine,
The method consists only of steps (ii) and (iii).
In another embodiment, the present invention provides a method wherein the subject comprises 5-HTTwo(For example, 5-HT2A
) To assess whether or not to respond to treatment with a modulator
For
How to make a model,
(I) 5-HTTwoCertain conditions that can be treated with a modulator (eg clozapine)
A cohort of patients diagnosed as suffering from a condition (eg, schizophrenia)Two
Treated with a modulator;
(Ii) responders and non-responders assessing the outcome of treatment and according to predetermined diagnostic criteria
Is determined;
(Iii) obtaining a DNA sample from the cohort of patients in (i);
(Iv) DNA samples from a group of controls diagnosed as not suffering from the condition.
Get a pull;
(V) analyzing the samples obtained in (iii) and (iv) and finding that they are 5-HT2A
A Tyr452 allele or a His452 allele of a gene or
Identifying whether they encode both alleles;
(Vi) Tyr452 in responder and non-responder samples obtained in (iii)
And distribution of His452 alleles were calculated;
(Vii) Tyr452 and His452 allele in sample obtained in (vi)
Calculating the gene distribution;
(Viii) comparing the distributions obtained in (vi) and (vii);
(Ix) comparing the distribution obtained in (vi) between responders and non-responders;
(X) Analyzing the results of (viii) and (ix) in a mortal fashion,
based on having the yr452 and / or His452 allele
, The 5-HTTwoAssess the likelihood of responding to treatment with a modulator
Make a model for
Providing a method comprising:
The present invention also provides 5-HTTwo(For example, 5-HT2c) Diseases that can be treated with a modulator
The subject suffering from the condition is a specific 5-HTTwoModulator treatment
A method of assessing whether a subject responds or does not respond, wherein the genotype of the subject is
Provide a method consisting of comparing
All of the above methods involve one or more steps in a computer controlled system.
M
It will be clear that this can be done by: Therefore, for example, once biological
Once the sample is obtained, the genotype is determined by the computer-controlled automatic system.
be able to. The computer control system must have a certain correlation with the object to be evaluated.
Or it can be constructed to compare with a model. Computer control system
The system also obtains either a positive or negative reading depending on the result of the comparison.
Can also be built. Accordingly, the present invention relates to such a computer controlled system.
Or even computer-implemented methods.
Tested for Tyr452 and / or His452 alleles,
The step of detecting the presence of the DNA encoding the prostate gene can be performed using techniques well known to those skilled in the art.
It can sometimes be implemented directly or indirectly by any suitable means. Preferably
Conducted in Sobibo. All processes are usually biological materials containing DNA from the subject
Of samples, and then determine which alleles the subject has from that sample
The step of detecting For example, the detection step may include organisms containing DNA from the subject.
Biological sample is collected, and then Tyr452 and / or
Performed by determining the presence of DNA comprising the His452 allele
it can. Contains the DNA of interest, including tissue and blood samples
Any biological sample can be used. Blood cells are especially convenient
Source. Having Tyr452 and / or His452 alleles
Determination of the presence of the DNA can be performed by oligonucleotide labeled with a suitable detectable group.
Using probes; polymerase chain reaction or ligase chain reaction (amplification product
The amplification response can then be detected by labeled oligonucleotide probes).
Restriction nucleus to detect restriction fragment length polymorphism (RLFP) by width response
Can be determined by enzyme digestion and electrophoretic separation. Furthermore, in the detection step, the target is T
Heterozygous for the gene encoding the yr452 or His452 allele
Or a step of detecting whether the target is homozygous or homozygous. Many
Different oligonucleotide probe assay formats are well known,
Can be used to carry out the present invention.
It will be readily appreciated that the detection step can be performed directly or indirectly. Follow
hand,
For example, any of the techniques described above can be used for Tyr452 alleles or His452 pairs.
It can be used to detect either progeny. Tyr45 in the target
If only two alleles are detected, the subject is identical for allele Tyr452.
Determined to be homozygous; but the His452 allele alone in the subject
If detected in addition to or in addition to the allele Tyr452, the subject is His452
Are determined to be either homozygous or heterozygous for
The present invention is useful in improving the clinical management of patients with schizophrenia.
is there. Subjects who are unlikely to respond to neuroleptic drugs such as clozapine prior to treatment
Identification allows the unnecessary and beneficial use of such drugs with associated side effects and costs.
Unfavorable administration can be avoided, and an appropriate form of treatment can be selected instead. Follow
Thus, the present invention provides an optimal treatment method as quickly as possible in the course of treatment.
Provide direct benefits to patients and broader benefits in terms of a healthy economy
.
Thus, in a further embodiment, the present invention relates to 5-HTTwoModulator cure
A method of treating a condition that requires treatment,
(i) a sample of biological material containing DNA obtained from a subject suffering from the condition
Comprising the alleles Tyr452 and / or His452 in the DNA
Test for; and
(Ii) the presence of the His452 allele alone or the presence of the Tyr452 allele;
If the DNA present in the presence is present in the sample, the subject is treated with 5-HTTwoModel
Treating with a turbulator;
Providing a method comprising:
Preferably, the condition is schizophrenia. 5-HTTwoModulator is Cloza
It is preferably a neuroleptic, such as a pin.
In addition, the present invention relates to 5-HT such as neuroleptics.TwoClinical trial using a modulator
It is useful in allowing experiments to be designed effectively and efficiently. So two or
In comparative studies using more neuroleptic drugs, any or all
Patients who are unlikely to respond can be excluded.
The presence of the Tye452 allele indicates the probability or risk of developing schizophrenia.
High
It is thought that it is related to becoming. Thus, the presence of such an allele is
Prognostically used to assess the likelihood that a given subject will develop schizophrenia
it can. Thus, the present invention also assesses whether a subject is likely to develop schizophrenia
Wherein 5-HT is used in the subject.2ATyr452 allele of the gene
Tested for the gene and / or His452 allele,
A method comprising detecting the presence or absence of DNA comprising
In a further aspect, the invention relates to an assay suitable for use in the method of the invention.
Allele Tyr452 and / or alleles in a biological sample
An assay comprising means for detecting the presence of DNA encoding the offspring His452.
Offer.
The present invention also provides a kit suitable for use in the method of the present invention,
(A) Alleles Tyr452 and / or His in human DNA sample
Means for testing for the presence or absence of DNA encoding 452;
(B) reagents used in the detection method;
A kit consisting of:
Preferably, the test means includes a labeled probe or a restriction enzyme. Reagents
And diluents, washing solutions and conditioning solutions.
In a further aspect, the invention relates to human 5-HT2ATyr452 and / or H
A cell line expressing DNA encoding the is452 allele is provided. Good
Preferably, the cell line is human 5-HT2AD encoding the Tyr452 allele
Express NA. Such cell lines are obtained using well-known recombinant techniques and methods.
be able to.
In a still further aspect, the present invention also contains a Tyr452 allele.
Human 5-HT2ATransgenic animals expressing the gene, especially mice
Sometimes a transgenic mammal is also provided. Such transgenic animals
For patients who do not respond to currently used neuroleptic drugs such as clozapine
Screen and identify new antipsychotics that may be effective
You. H5-HT using standard methods in the field of genetic engineering2ATy of the gene
Obtaining transgenic animals that are homozygous for the r452 allelic variation
Can beExample Method
Diagnosed as having schizophrenia (DSM III) and received clozapine treatment
Using a blood sample obtained from an individual who has been infected with the His452Tyr polymorphism.
Genotyping was performed. Separate individuals for response to clozapine treatment
<20 on GAS or BPRS after 6 weeks of treatment
And a response of <20% is defined as no response. The results are shown in the table below
So correlated.Detection of His452Tyr polymorphism
The method described in Eddman et al. (Human Genetics, ref 97 (5): 614-619 (1996))
The PCR conditions were changed as follows:
100 ng of genomic DNA, 10 pmol of each primer, 50 mM KCl, 10
nM Tris-HCl, 2.0 mM MgClTwo, 0.01% gelatin, 200
25 μl volume containing μM dNTPs and 1 U Taq DNA polymerase
Standard PCR was performed on the volumes.
Primer:
5'-CAAAGCAAGATGCCCAAGACA-3 '
5'-GGCATACAGATATGATCGTTGG-3 '
PCR program:
35 cycles of 95 ° C for 1 minute followed by 95 ° C for 45 seconds, 58 ° C for 45 seconds, 72 ° C
For 45 seconds and finally at 72 ° C. for 10 minutes.
Allele detection:
The PCR product was digested with Bbvl for a minimum of 2 hours at 37 ° C (15 μl of PCR product).
OX RE buffer 2 μl, HTwoO2 μl, BbvI 1 μl (10 units)),
The digest was run on a 3% agarose gel at 70v for 3 hours.
PCR product: 248 base pairs
Allele His452: two fragments of 180 base pairs and 68 base pairs
Digested
Allele Tyr452: does not cut (248 base pairs).result 5-HT2a receptor gene of His452Tyr polymorphism and clozapine analysis Genotype frequency: xTwo= 2.84 p = 0.24
Allele frequency: xTwo= 1.92 p = 0.16
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フロントページの続き
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ
Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ
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ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ
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，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，
ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ
(72)発明者 コリアー，デイビッド
イギリス、エスイー５・８エイエフ、ロン
ドン、デンマーク・ヒル、デ・クレスピグ
ニー・パーク、ザ・モードスリー・インス
ティテュート・オブ・サイカイアトリー、
インスティテュート・オブ・サイカイアト
リー
(72)発明者 ロバーツ，ギャレス・ウィン
イギリス、シーエム19・５エイダブリュ
ー、エセックス、ハーロウ、サード・アベ
ニュー、ニュー・フロンティアーズ・サイ
エンス・パーク・サウス、スミスクライ
ン・ビーチャム・ファーマシューティカル
ズ────────────────────────────────────────────────── ───
Continuation of front page
(81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE,
DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, L
U, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF)
, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE,
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D, SZ, UG), UA (AM, AZ, BY, KG, KZ
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CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, G
B, GE, GH, HU, IL, IS, JP, KE, KG
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LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, N
O, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG
, SI, SK, TJ, TM, TR, TT, UA, UG,
US, UZ, VN, YU
(72) Inventor Collier, David
UK, 5.8 EF, Ron
Don, Denmark Hill, De Kresping
Knee Park, The Mode Three Inns
The tit of psychiatry,
Institute of Saikaiato
Lee
(72) Roberts, Gareth Winn, inventor
UK, CM 19.5 ADB
ー, Essex, Harlow, Third Abe
New, New Frontiers Sai
Enns Park South, Smith Cry
N Beecham Pharmaceutical
Z