JP2000500500A

JP2000500500A - 光学的に純粋な（−）−フォテムスチンを用いる新生物を治療するための方法および組成物

Info

Publication number: JP2000500500A
Application number: JP9519898A
Authority: JP
Inventors: エム．グレーナンシー
Original assignee: セプラコール，インク．
Priority date: 1995-11-20
Filing date: 1996-11-19
Publication date: 2000-01-18
Also published as: EP0866712A4; AU1057797A; CA2237695A1; EP0866712A1; WO1997018819A1

Abstract

(57)【要約】種々の悪性疾患を治療する一方、フォテムスチン（fotemustine）のラセミ混合物と関連する害作用の同時負担を実質的に減少させるため、光学的に純粋な（−）−フォテムスチンを利用する方法並びにそれを利用する組成物が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】光学的に純粋な（−）−フォテムスチンを用いる新生物を治療するための方法および組成物発明の分野本発明は（−）−フォテムスチンを含む薬学的組成物に関する。別の側面では、本発明はリンパ腫、黒色腫、神経膠腫および他の脳腫瘍、肺癌、肝臓転移および血液および胃腸管の悪性疾患などの悪性疾患の治療に関する。発明の背景ケミカル・アブストラクトの標準的命名法では、フォテムスチンは〔１−〔〔〔（２−クロロエチル）−ニトロソアミノ〕カルボニル〕アミノ〕エチルホスホン酸ジエチルエステルである。フォテムスチンは１−〔Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ−ニトロソウレイド〕エチルホスホン酸ジエチルエステルとしておよびジエチル−１−〔３−（２−クロロエチル）−３−ニトロソウレイド〕エチルホスホネートとしても知られている。初期の文献はフォテムスチンをＳ１００３６と呼んでいる。フォテムスチンのラセミ体の調製は米国特許第４，５６７，１６９号に記述されている。この特許は「この発明はこの化合物の光学異性体にも関する、、、、」と述べているが、そのような異性体は開示されていない。フォテムスチンのラセミ体は悪性疾患の黒色腫、一次脳腫瘍や転移脳腫瘍、結腸直腸癌、軟部組織や骨の肉腫および血液学的悪性疾患を治療するために臨床的に使用されてきた。〔カセットら，J．Nat'l Cancer Inst．80，1407-1408(1988 )、カセットら，Cancer Res．47，6782-6785(1987)、ジャクイラットら，Proc． Am．Assoc．Cancer Res. 30, A1088（1989）、ルージャーら，Eur．J．Cancer 2 9A(2)，288-9（1993）、カーブラットら，Eur．J．Cancer 29A(1)，143-144（19 93）を参照]。これらの臨床研究により、フォテムスチンラセミ体はこれらの癌を治療するのに臨床的に有用であるが、その使用には骨髄における遅延性の、蓄積性の毒性が伴うことが明らかにされている。投与量を制限するこの毒性は通常好中球減少症、白血球減少症および血小板減少症に至る骨髄抑制である。腎臓、肺臓および肝臓の毒性が観察される頻度はより少ない。フォテムスチンラセミ体は突然変異原性であると信じられてもいる〔アシュビら，Mutation Res．286, 1 01-109（1993）を参照］。一部のケースでは吐き気が問題である。フォテムスチンラセミ体の長所を持つが上に列挙した副作用を示さない化合物を発見することが特に望まれている。発明の概要いまや、フォテムスチンの光学的に純粋な（−）異性体が悪性疾患の治療に有効な薬剤であることが発見された。フォテムスチンの光学的に純粋な（−）異性体はこの有効な治療を提供する一方、フォテムスチンラセミ体の投与に関連する一つ以上の害作用を実質的に減少させる。これらの害作用には好中球減少症、白血球減少症および血小板減少症、腎毒性、肺毒性および肝毒性、突然変異原性、並びに吐き気などが含まれるがこれらに限定されない。一つの側面では、本発明は悪性疾患を患う哺乳類にその（＋）立体異性体を実質的に含まない（−）−フォテムスチンの治療上有効量を投与することを含む、悪性疾患治療法に関する。別の側面では、本発明はその（＋）立体異性体を実質的に含まない（−）−フォテムスチン、および薬学的に許容され得る担体を含んで成る薬学的組成物に関する。発明の詳細な説明本発明の組成物および方法に使用される活性な化合物はフォテムスチンの左旋性または（−）の光学的異性体である。この（−）異性体の絶対立体化学は現在知られていない。式Ｉは絶対立体化学が確定されていない１個の鏡像異性体を示し、ここに提示するものを恣意的にＳ^*とする。鏡像異性体として純粋なフォテムスチンのグラフ的な表示はメール J．Chem． Ed．62，114-120(1985)に記載されている。このように、くさび形外観および破線を含む表示は、不確定な絶対立体配置を持つが鏡像異性体的に純粋な化合物であることを示す。本発明はその（＋）立体異性体を実質的に含まない（−）−フォテムスチンの治療上有効な量の投与を含んで成る悪性疾患を治療する方法を包含する。本明細書で使用されるとき、「（＋）立体異性体を実質的に含まない」という用語は、組成物が少なくとも９０重量％の（−）−フォテムスチンを含みそして１０重量％またはそれ以下の（＋）フォテムスチンを含むことを意味する。より好ましい態様では、「（＋）異性体を実質的に含まない」という用語は、組成物が少なくとも９９重量％の（−）−フォテムスチンを含みそして１重量％またはそれ以下の（＋）フォテムスチンを含むことを意味する。最も好ましい態様では、「（＋）立体異性体を実質的に含まない」という用語は、本明細書で使用されるとき、組成物が９９重量％より多くの（−）−フォテムスチンを含むことを意味する。これらのパーセンテージは組成物中のフォテムスチンの総量に基づいている。「フォテムスチンの実質的に光学的に純粋な（−）異性体」または「実質的に光学的に純粋な（−）−フォテムスチン」および「フォテムスチンの光学的に純粋な（−）異性体」および「光学的に純粋な（−）−フォテムスチン」という用語も上述の量により包含される。本明細書で使用するとき、「悪性疾患を治療する」という用語はこのような状態を治療し、緩和し、または一時的に和らげ、癌組織の成長を抑制し、そしてこのようにして生存時間を増加させることを意味する。「治療上有効な量」という用語は、悪性疾患を治療するのに十分な（−）−フォテムスチンの量を指す。（−）−フォテムスチンが活性な悪性疾患には、リンパ腫、黒色腫、神経膠腫および他の脳腫瘍、肺癌、肝転移および血液や胃腸管の悪性疾患が含まれる。本発明の方法はフォテムスチンラセミ体の投与と関連する害作用の同時負担を減少させる。「害作用(adverse effects)」という用語には、好中球減少症、白血球減少症および血小板減少症、腎毒性、肺毒性および肝毒性、突然変異原性、および吐き気などが含まれるが、これらに限定されない。本発明の方法では、治療上有効な量を１回で投与することも、また治療上有効な量の一部、すなわち、幾つかに分けた投与量の一つを投与することもできる。同様に、本発明の薬学的組成物は（−）−フォテムスチンの治療上有効量を含むことも、あるいは治療の有効性を確保するため個々の組成物の幾つかを投与することが必要であることもある。治療上有効な量を構成する（−）−フォテムスチンの量は治療対象である状態の重篤度およびその性質によりそして投与経路により変動する。投与サイズおよび投与頻度は患者個体の年齢、体重および反応によっても変動することがある。一般に、本明細書に記載された状態に対する（−）−フォテムスチンの１回投与の投与量範囲は、静脈内または動脈内注入により約２０ｍｇ／ｋｇから約１５０ｍｇ／ｋｇである。１回投与量範囲は約２０ｍｇ／ｍ²から約８０ｍｇ／ｍ²であることが好ましい。一般に、投与は数週間の期間（例えば、約２から約８週間）周期的に（例えば、毎週）行われる。患者を管理する場合に、治療は低投与量で、おそらく約２０ｍｇ／ｍ²から約４０ｍｇ／ｍ²で開始し、そして患者の全体的反応に依存して約４０ｍｇ／ｍ²までまたはそれよりも高くまで増加させる。６５歳を越えた患者および腎機能や肝機能に障害を持つ患者は低投与量で投与を開始しそして個々の反応および血液レベルに基づいて滴定されることがさらに推奨される。当分野で熟練した者には明らかであるように、ケースによっては、これらの範囲を越えた投与量を用いることが必要になることもある。さらに、臨床医や治療医は個々の患者の反応と関連させて治療を如何にして何時中断し、調節し、または終了すべきかを知っている。「癌を抑制するのに十分であるが該害作用を惹起するには不十分な量」という用語は上述の投与量および投与頻度計画により包含される。（−）−フォテムスチンの有効投与量を患者に与えるために適当な投与経路が採用されるが、非経口（特に静脈内および動脈内）の投与法が好ましい。投与剤形としては、分散剤、懸濁液、溶液、および同種のものが挙げられる。本発明の薬学的組成物は、活性成分として（−）−フォテムスチンを含み、そして薬学的に許容され得る担体、および必要に応じて他のアジュバント、賦形剤、または治療用の成分を含む。非経口投与に適する組成物は必要に応じ通常のアジュバントおよび賦形剤を含む水溶液として提供される。このような組成物は薬学の分野で熟練した者に良く知られた方法で調製される。すべての方法は一つ以上の必要な成分から成る活性成分と担体とを混せ合わせる工程を含んでいる。フォテムスチンのラセミ混合物の化学的合成は、上に引用した米国特許第４，５６７，１６９号に記載されている。次いで、フォテムスチンの（−）異性体をキラル媒体上のクロマトグラフィーにより分割することができる。また、（−） −フォテムスチンはキラル酸のジアステレオマーエステルの分割結晶化またはクロマトグラフィーを用いるフォテムスチンのアミン前駆体の鏡像異性体の分割により得ることもできる。当分野で熟練した者に知られた分割の他の標準的方法も使用することができる。（例えば、E．L．エリール，炭素化合物の立体化学，マックグローヒル（１９６２）、およびウイルソンおよびロッホミュラー，「分割剤の表」、Journal of Chromatography 113, 283-302（1975）を参照）。光学的に純粋なフォテムスチンとフォテムスチンラセミ体の抗新生物剤としての比活性、比効力および比特異性はイン・ビトロおよびイン・ビボで薬学的研究により決定することができる。これらの化合物は国立癌研究所（U.S.A.）により確立されそしてR.I.ゲランら (Cancer Chemotherapy Reports，第III，3(2)巻，1-87(1972))により出版されたプロトコールに従って腹膜腔内または筋肉内経路で接種された腫瘍細胞を持つマウスの寿命を増加させるこれらの能力についてテストする。造血毒性は、本発明の化合物の１回投与または数回投与で治療された動物について、末梢血細胞、骨髄、および骨髄中に含まれる幹細胞の計測により評価する (ティルおよびマックロッホ，Radiation Res. 14, 213(1961))。最低の細胞濃度は治療の開始後３日で記録される。この減少の程度を参照として使用するＮ−Ｎ ’−ビス（２−クロロエチル）−Ｎ−ニトロソウレア（「ＢＣＮＵ」）の１回投与で処置した後に測定し〔タングおよびアイゼンブラント，Arch．Pharm. 314， 910(1981)］、そしてフォテムスチンラセミ体と（＋）フォテムスチン投与後の細胞計測と比較する。肝毒性はロブリュースキーの方法に従って評価する。この方法はフォテムスチンのラセミ体、（＋）フォテムスチンおよび（−）フォテムスチンの投与量の腹膜腔内注射で治療したロング・エバンスラットから得た血清中のピルビン酸グルタミン酸トランスアミナーゼ活性を測定することにより行う。突然変異原性はタピエロら（Anticancer Research 9, 1617-1622(1989)]の方法に従い下記のように評価する。ヒト肺癌Ａ４２７およびＡ５４９と結腸癌ＢＥおよびＨＴ２９はコーンらにより記述されたように入手し維持する[（Cancer Chemother．Pharmacol．19，291- 295(1987)およびCancer Res．48，3622-3625(1988)]。ネズミ白血病細胞株Ｐ３８８はＮＣＩから入手する。細胞は１０％ウシ胎児血清、１０^-5Ｍの２−メルカプトエタノールおよび標準的抗生物質で補強したＲＰＭＩ１６４０培地中で生育し維持する。すべての培養は５％ＣＯ₂の加湿雰囲気下で３８°で生育させる。細胞の成長阻害研究は薬物の継続的存在下における指数培養について行う。得られる細胞数をクールター・カウンター・モデルＺＢＩ（クールター・エレクトロニクス、ハイアリーア、ＦＬ）で測定する。フォテムスチンのラセミ体、（＋）フォテムスチンおよび（−）フォテムスチンは個々に使用直前にエタノールに溶解する。便利な標準的貯蔵溶液は３５ｍＭである。放射性同位元素標識化およびＸ線照射のために、２．５×１０⁵Ｐ３８８細胞／ｍｌを０．０５μＣｉ／ｍｌの（¹⁴Ｃ）−チミジンか０．５μＣｉ／ｍｌの（³Ｈ）−チミジンを含む培地中で生育させる。２０時間標識化した後、培地を除去し、細胞を冷ＰＢＳで洗浄する。１０μＭの非放射活性チミジンを用いて４時間標準的チェイス処理を行う。トリチル化細胞を氷上で内部標準として３００ラドのＸ線照射に曝す。アルカリ溶出手順はコーンら〔「アルカリ溶出による鎖切断および架橋の測定」、フリーベルグおよびハナウオルト編、「ＤＮＡ補修：研究手順の実験室マニュアル、ニューヨーク、デッカー、１：１９８１、３７９−４０１頁〕により記述されている。完全生育培地中の薬物の前インキュベーションと細胞毒活性の喪失との関係を決定するため、薬物を１０％ウシ胎児血清を含む培地中に再懸濁しそして１〜５００分間３７°でインキュベートする。Ｐ３８８細胞は適当な薬物濃度に達するまで希釈した培地中に再懸濁する。５％ＣＯ₂で３日インキュベーションした後、細胞を計測する。フォテムスチンのラセミ体、（＋）フォテムスチンおよび（−）フォテムスチンに接触させられたＰ３８８細胞中での一本鎖切断の誘発を比較する。（¹⁴Ｃ） −チミジンで２０時間標識化された細胞（５×１０⁵）を種々の濃度のフォテムスチンで２時間処理し、そして同数の（³Ｈ）−チミジン標識化参照細胞と混合する。これらの細胞を２．０μｍ穴サイズのポリカーボネートフィルター上で集め、プロテイナーゼＫの存在下に２％ＳＤＳ／０．０２５ＭのＮａ₄ＥＤＴＡ（ｐＨ９．７）の５ｍｌで溶解する。溶出はコーンにより記述されたようにｐＨ１２．１で暗所で行う。ＤＮＡ一本鎖切断の頻度は一次溶出動力学に基づいて計算される。ＤＮＡ−タンパク架橋の誘発は、フォテムスチンのラセミ体、（＋）フォテムスチンまたは（−）フォテムスチンの存在下に種々の時間処理されたＰ３８８細胞中で検討する。（¹⁴Ｃ）−チミジン−標識化薬物で処理された細胞を６００ラドのＸ線で照射し、（³Ｈ）−チミジン標識化参照細胞を３００ラドのＸ線で照射する。これらの細胞を２．０μｍ穴サイズのポリカーボネートフィルター上で集め、プロテイナーゼＫの非存在下にｐＨ９．７で溶解する。溶出は上記と同様である。等価のＤＮＡ損傷を惹起するフォテムスチンラセミ体およびその鏡像異性体の濃度に接触させた後種々の時間にＰ３８８細胞中のＤＮＡ−本鎖切断の除去も検討することができる。最初に２時間の薬物処理に曝された（¹⁴Ｃ）−チミジン− 標識化細胞を洗浄しそして薬物を含まない培地に再懸濁する。３７°で時間を換えてインキュベートした後、これらの細胞を同数の（³Ｈ）−チミジン標識化参照細胞と混ぜ、ポリカーボネートフィルターの上で集めそしてアルカリ性溶出により分析する。前記のテストは比活性、比効力および比選択性の評価を与えてくれる。白イタチにおける嘔吐。実験は成熟雄白イタチで行う。この動物をまずステンレス−スチール・ケーブル、このケーブルは今度はケージの上部の真鍮製の回り継ぎ手に結合している、に連結したナイロンジャケットを着るのに適応させる。馬具−つなぎ輪（tether-harness）に馴れさせた後、各動物のその右側の頸静脈に外科的にカテーテルを埋め込む。このカテーテルは毎日ヘパリン化食塩水で洗い流す。薬物研究はこの外科手順の１週間後に行う。くさりに繋がれた動物はそれぞれ別の部屋に入れる。テスト化合物のそれぞれの投与量を評価するために８から１１頭の動物が用いられる。個々の動物の重量を毎週測定しそし４８時間よりも大きな間隔で、フォテムスチンラセミ体、（＋）−フォテムスチンまたは（−）−フォテムスチンの静注または経口の１回投与を無差別に行う。少なくとも３投与レベルで各テスト化合物の評価を行う。テスト物質の投与後３０分間、個々の動物を観察する。排除、吐き出しおよび脱糞のすべてについてその頻度および潜伏を記録する。用量−反応曲線から得られるデータをχ−二乗分析により統計的有意性をテストする。ＥＤ₅₀値を各化合物に対して決定する。このテストは吐き気(nausea and vomiting)に対する相対的負担の評価を与える。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．悪性疾患を治療する方法であって、該悪性疾患を患っている哺乳類にその（＋）立体異性体を実質的に含まない（−）−フォテムスチンの治療上有効量を投与することを含んで成る方法。２．該悪性疾患がリンパ腫、黒色腫、神経膠腫および他の脳腫瘍、肺癌、肝転移および血液および胃腸管の悪性疾患より成る群から選択されるものである、請求項１記載の方法。３．（−）−フォテムスチンが静脈内または動脈内に投与されるものである、請求項１記載の方法。４．投与される（−）−フォテムスチンの量が約２０ｍｇ／ｍ²から約１５０ｍｇ／ｍ²である請求項３記載の方法。５．（−）−フォテムスチンの量がフォテムスチン総重量の約９０重量％よりも大きいものである請求項１記載の方法。６．その（＋）立体異性体を実質的に含まない（−）−フォテムスチンおよび薬学的に許容され得る担体を含んで成る薬学的組成物。７．非経口的送達に適応させた請求項６記載の組成物。