JP2000500386A

JP2000500386A - 試料マトリクスからの化合物抽出のための方法

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Publication number: JP2000500386A
Application number: JP9518337A
Authority: JP
Inventors: トンデュアー，イヴス・ジー; アルブロ，フィリップ・ダブリュー; チュー，マイケル・ディー
Original assignee: トライアングル・ラボラトリーズ・インコーポレーテッド
Priority date: 1995-11-08
Filing date: 1996-11-08
Publication date: 2000-01-18
Also published as: EP0859949A4; AU7695496A; EP0859949A1; WO1997017601A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、予め定められた化学化合物、例えばダイオキシン誘導体を、試料マトリクス、例えば血清から抽出及び精製する方法を提供する。本発明は、試料マトリクス中の潜在的に干渉性の成分を化学的に分解して、ダイオキシン誘導体の蒸気蒸留を可能にする。

Description

【発明の詳細な説明】試料マトリクスからの化合物抽出のための方法発明の分野本発明は、例えば血液などの生物学的流体である試料マトリクスからの化合物の抽出のための方法に関する。本方法は、生物学的流体から「ダイオキシンのような」化合物を含む化合物を抽出するために利用してもよい。本発明は、有利なことに、従来方法よりも短時間で高い収率を達成する方法を提供する。背景多価塩素化ジベンゾ−ｐ−ダイオキシン、多価塩素化ジベンゾフラン類及び多価塩素化ビフェニル類は、不注意に基づいて（inadvertently）発生する環境汚染物質として一般的に「ダイオキシンのような」化合物と言われる一連の化合物の中でも最も毒性が高いものであると考えられている。これらの化合物について疑われている及び／又は知られている健康に対する影響は非常に大きいため、ヒト血液血清中の該化合物の定量のための分析方法はｐｐｑ（１０^-15）レベル（血清１ミリリットル当たりのフェムトグラム）に達することを必要とする。現在利用されている方法は、妥当な収率で少量のダイオキシン化合物を抽出する困難性及び対象となる化合物以外の、分析を妨害する物質の除去に用いる方法の冗長さによって、遅く、かつ費用がかかるものである。従来技術では、血液血清からの２，３，７，８−テトラクロロジベンゾ−ｐ− ダイオキシン（ＴＣＤＤ）の抽出及び妨害する混合物の除去は、一般に別のステップにより行われており、典型的には完了までに数時間から数日間要する。生物学的流体からのＴＣＤＤの抽出と精製を同時に行う従来の試みは、他の生物学的化合物及び混合物の同時抽出のため、さらなる冗長な精製を必要としないＴＣＤＤ前駆体を提供することはできなかった。発明の概略本発明は、水性試料マトリクスからの化合物の抽出及び精製のための方法を提供する。好ましい水性試料マトリクスは、血液や尿などの生物学的流体であり、さらに好ましくは血液血清である。本発明の方法は、有利なことに、生物学的流体試料から毒性化合物を抽出、精製して、試料中の該化合物の濃度を定量することに利用してもよい。特に、本発明の方法は生物学的流体試料からのダイオキシン化合物の抽出、精製に利用してもよい。ここにおいて、ダイオキシン化合物とは、ヒト血液／血漿中のＴＥＱ値（毒性等量）（toxic equivalency）に影響すると知られている多価塩素化ジベンゾ− ｐ−ダイオキシン、多価塩素化ジベンゾフラン類及び多価塩素化ビフェニル類及び同様の化合物などの塩素化芳香族化合物を含む。本発明の方法を利用して抽出、精製されるダイオキシン化合物は以下のものを含むが、これに限定されない：２，３，７，８−テトラクロロジベンゾ−ｐ−ダイオキシン（ＴＣＤＤ）２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−ｐ−ダイオキシン（ＰｅＣＤＤ）１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン（ＰｅＣＤＦ）２，３，４，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン（ＰｅＣＤＦ）３，３’，４，４’，５−ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ１２６）。本発明の方法は、血液血清のような試料マトリクス中に存在する潜在的に妨害する成分を化学的に破壊する手段を提供することにより、ダイオキシン化合物抽出のための従来技術による方法の問題を克服する。化学的破壊は抽出方法の全体のうち一部で生じるので、化学的破壊は所要時間を増加させることはない。本発明の方法の好ましい態様において、化合物の回収のための自動校正を用いた回収の定量化は、回収を少なくすることがないように内部標準（対照化合物）を導入することにより提供される。本発明の方法に従うと、気／液交換方法を通じて、水性試料マトリクス中にある抽出すべき化合物の大半が小容積の有機溶媒に移行する。交換及び移行が生じている間、水性試料マトリクス中にある潜在的な妨害物質は、一般的な加水分解触媒との反応を通じて妨害しない物質に転化する。好ましい態様において、血清中への対照標準の導入は、血清成分には影響されずに測定されるべき化合物の移行を促進するような方法で行われる。本発明の方法により、血清試料から抽出した、妨害物質のなくなった（interf erence-depleted）ダイオキシン化合物を１時間以内に得ることができる。同時に複数の配列において多くの試料を処理することができるので、作業中のいかなる時においてもひとりの人間が分析的な定量のための試料を複数準備することができる。本発明の方法は、有利なことに、従前に通常利用されている方法よりも、水性試料からのダイオキシン化合物の回収が高い。本発明の方法は、有利なことに、少量の試料からのダイオキシン化合物の迅速な同時抽出・精製のために利用してもよい。本発明の方法の他の有利な点は、簡単で経済的であることである。本発明の方法のさらに有利な点は、その高い収率により、後の分析測定の感度が最大値になることである。本発明の方法の他の有利な点は、試料調製が短時間で完結することである。本発明の方法の詳細及び有利な点は以下の発明の詳細な説明から明らかになるであろう。図面の簡単な説明図１は、本発明の方法の態様を図式化したものである。図２は、実施例に説明する方法で調製された試料の選択的イオンモニタリングマスクロマトグラムである。上のグラフはＴＣＤＤに応答する検出を示したものであり、下のグラフは対照（内部）標準に対する応答を示したものである。発明の詳細な説明本発明によると、水性試料マトリクスからの予め定められた化合物又は複数の化合物の抽出のための方法は、以下の工程：水性試料マトリクスを希釈剤で希釈し；希釈された水性試料マトリクスを化学的に活性な物質と反応し；得られた水性試料マトリクスを沸騰させて蒸気を生成し；該蒸気を凝縮して濃縮物を形成し；該濃縮物を該濃縮物と実質的に混和しないような、予め定められた化合物又は複数の化合物のための抽出用溶媒に接触させ、予め定められた化合物又は複数の化合物を抽出し、予め定められた化合物又は複数の化合物を含む抽出相と予め定められた化合物又は複数の化合物のなくなった濃縮相を含む抽出相を生成し；及び該抽出相を該濃縮相から分離するを含む。予め定められた化合物又は複数の化合物の充填された抽出相中の予め定められた化合物又は複数の化合物のレベル（濃度）は、標準の分析方法により定量される。本発明の方法により抽出されてもよい予め定められた化合物又は複数の化合物は上記のダイオキシン化合物を含む。本発明の方法のうち、希釈及び反応工程は、化学的に活性な物質を希釈剤に添加して、添加されて水性試料マトリクスと反応する希釈組成物を生成することにより、一緒に行ってもよい。本発明の方法の態様によると、水性試料マトリクスからの予め定められた化合物又は複数の化合物の抽出のための方法は、以下の工程：水性試料マトリクスを、希釈剤及び水性試料マトリクスと反応する化学的に活性な物質を含む希釈組成物により希釈し；得られた水性試料マトリクスを沸騰させて蒸気を生成し；該蒸気を凝縮して濃縮物を形成し；該濃縮物を該濃縮物と実質的に混和しないような、予め定められた化合物又は複数の化合物のための抽出用溶媒に接触させ、予め定められた化合物又は複数の化合物を抽出し、予め定められた化合物又は複数の化合物を含む抽出相と予め定められた化合物又は複数の化合物のなくなった濃縮相を含む抽出相を生成し；及び該抽出相を該濃縮相から分離するを含む。本発明の好ましい態様において、内部対照標準は、初期の水性試料中の予め定められた化合物又は複数の化合物の量をより正確に定量できるように利用される。好ましい態様によると、水性試料マトリクスからの予め定められた化合物又は複数の化合物の抽出のための方法は、以下の工程：該水性試料マトリクスに内部対照標準溶液を添加し；得られた該内部対照標準を含む水性試料マトリクスを希釈剤で希釈し；希釈された水性試料マトリクスを化学的に活性な物質と反応し；得られた水性試料マトリクスを沸騰させて蒸気を生成し；該蒸気を凝縮して濃縮物を形成し；該濃縮物を該濃縮物と実質的に混和しないような、予め定められた化合物又は複数の化合物のための抽出用溶媒に接触させ、該濃縮物から予め定められた化合物又は複数の化合物及び内部対照標準を抽出し、予め定められた化合物又は複数の化合物及び内部対照標準を含む抽出相と予め定められた化合物又は複数の化合物及び内部対照標準のなくなった濃縮相を含む抽出相を生成し；及び該抽出相を該濃縮相から分離するを含む。予め定められた化合物又は複数の化合物とともに充填された抽出相中の予め定められた化合物又は複数の化合物及び内部対照標準のレベル（濃度）は、標準の分析方法（例えば同位体希釈アッセイ（ＨＲＥＣ／ＨＲＤＤ））により定量されてもよい。水性試料マトリクス中の予め定められた化合物又は複数の化合物の初期濃度は、水性試料マトリクスから抽出された（単数又は複数の）内部対照標準を用いて計算されてもよい。本発明の好ましい態様における希釈及び反応工程は、希釈剤に化学的に活性な物質を添加して、添加されて水性試料マトリクスと反応する希釈組成物を生成することにより、一緒に行ってもよい。本発明の方法の本態様において、水性試料マトリクスからの予め定められた化合物又は複数の化合物の抽出のための方法は、以下の工程：該水性試料マトリクスに（単数又は複数の）内部対照標準溶液を添加し；該内部対照標準を含む水性試料マトリクスを、希釈剤及び水性試料マトリクスと反応する化学的に活性な物質を含む希釈組成物で希釈し；得られた水性使用マトリクスを沸騰させて蒸気を生成し；該蒸気を凝縮して濃縮物を形成し；該濃縮物を該濃縮物と実質的に混和しないような、予め定められた化合物又は複数の化合物のための抽出用溶媒に接触させ、該濃縮物から予め定められた化合物又は複数の化合物及び（単数又は複数の）内部対照標準を抽出し、予め定められた化合物又は複数の化合物及び（単数又は複数の）内部対照標準を含む抽出相と予め定められた化合物又は複数の化合物及び内部対照標準のなくなった濃縮相を含む抽出相を生成し；及び該抽出相を該濃縮相から分離するを含む。好ましい水性試料マトリクスは血液であり、より好ましくは血液血清である（以後血清という）。血清はヒトあるいは他の動物由来のものでもいい。一般的に初期の水性試料マトリクスの量は１〜１０ミリリットルの範囲であり、より典型的には、２〜４ミリリットルの範囲であろう。本発明の方法に用いられる適当な希釈剤は、非限定的に水及び水ベースの溶液である。本発明方法において使用される化学的活性物質は、好ましくはサンプルマトリックス成分の分解に役立つものであり、これがなければ、沸騰中に１又は２以上の特定化合物を蒸気相中に放出すること、及び／又は凝縮液からの１又は２以上の特定化合物を抽出することが妨げられる。この化学的活性物質は、好ましくは少なくとも０．５Ｎ水酸化ナトリウムに匹敵する濃度で、しかしながら、加水分解を塩基触媒化能を保持しかつ２Ｎ水酸化ナトリウムより高くない濃度に、水性サンプルマトリックス中の水酸イオン濃度を増加する（塩基性を与える）ものであることが好ましい。好適な化学的活性物質は、それらに限定されるものではないが、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化セシウム又は水酸化リチウム等の水酸化アルカリである。好ましい化学的活性物質は１Ｎの水酸化カリウムである。化学的活性物質は、水性サンプルマトリックスに添加して希釈剤組成物を生成する前に希釈剤に添加できる。この希釈剤組成物は水性サンプルマトリックスを希釈し、これと反応させるために使用される。本発明方法で使用される希釈剤組成物の量は、水性サンプルマトリックスから１又は２以上の特定化合物を抽出するのに十分な量でなければならない。一般に、１ｍｌの水性サンプルマトリックス当たり、１００〜２５０ｍｌの希釈剤組成物が使用される。別法として、希釈剤及び化学的活性物質は、水性サンプルマトリックスに逐次的に添加できる。この場合、希釈剤と化学的活性物質との合計量は、水性サンプルマトリックス１ｍｌ当たり、１００〜２５０ｍｌに相当するであろう。内部参照標準溶液は、下記のように構成される：１又は２以上の特定化合物のための内部参照標準を、サンプルマトリックス１ｍｌ当たり、０．１〜１００ピコグラム（ｐｇ）、好ましくは１〜１５ｐｇ、さらに好ましくは約１０ｐｇ；及び１００マイクロリッター（μｌ）以下、好ましくは１〜１５μｌ、さらに好ましくは約１０μｌの水混和性、水素結合性溶剤（１又は２以上の特定化合物のための内部参照標準はこの溶剤に可溶性である）。好適な内部参照標準は、それらに限定されるものではないが、１又は２以上の特定化合物の同位元素標識類似体である。１又は２以上の特定化合物の好適な内部参照標準は、それらに限定されないが、特定化合物の同位元素で標識した類似体であり、例えば¹³Ｃ₁₂−２，３，７，８−ＴＣＤＤ；³⁷Ｃ₁₄−２，３，７，８ −ＴＣＤＤ；¹³Ｃ₆−２，３，７，８−ＴＣＤＤ；¹³Ｃ₁₂−２，３，７，８−ＰｅＣＤＦ；¹³Ｃ₁₂−２，３，７，８−ＴＣＤＦ；¹³Ｃ₁₂−１，２，３，７，８− ＰｅＣＤＤ；¹³Ｃ₁₂−１，２，３，７，８−ＰｅＣＤＦ；¹³Ｃ₁₂−３，３'，４，４'，５−ＰＣＢである。好適な水混和性、水素結合性溶剤は、メタノール、ＤＭＳＯ、アセトン、エタノール等であるが、これらに限定されない。上述のように、１又は２以上の特定化合物についての内部参照標準は、水性サンプルマトリックスの希釈前に水性サンプルマトリックスに添加できる。ある場合には、１又は２以上の特定化合物についての内部参照標準は、水性サンプルマトリックスに予め存在させておくことができ、それによって、添加する必要もなくなる。１又は２以上の特定化合物についての内部参照標準を水性サンプルマトリックスに添加すること、水性サンプルマトリックスの希釈、及び水性サンプルマトリックスと化学的活性物質との反応は、標準的な実験装置及び実験技術を使用することにより実施できる。必要であれば、これらの工程は、水性サンプルマトリックスを撹拌しながら、実施できる。本発明方法の好ましい態様では、内部参照標準を含有する水性サンプルマトリックスを、得られる水性サンプルマトリックスを沸騰するのに用いるフラスコ又は容器内で、化学的活性物質を含有する希釈剤組成物と一緒にする。蒸気を得るための、得られた水性サンプルマトリックスの沸騰は、標準的実験装置及び実験技術を使用して達成できる。一般に、得られる水性サンプルマトリックスは、ホットプレート又はその他の加熱装置を使用してフラスコ又は容器内で加熱して蒸気（蒸気相）を発生せしめる。通常、沸騰石又は沸騰チップとして知られている好ましい沸騰促進材料を、添加して蒸気の発生を促進できる。そのような沸騰石、沸騰チップは、それに限定されないが陶磁器、カーボランダム又はガラス等を含む、その目的の為に広く使用されているどのタイプのものでも良い。蒸気相（蒸気）の凝縮は、蒸気を補足し、それを冷却して凝縮液を生成することによって達成できる。本発明方法では、凝縮液を、１又は２以上の特定化合物のための抽出剤を接触させるた後、使用済み凝縮液を沸騰している水性サンプルマトリックス中に再循環することができる。本発明方法で使用される１又は２以上の特定化合物についての抽出剤は、実質上水と非混和性であり、かつ１又は２以上の特定化合物を含む水溶液から当該特定化合物を抽出して、特定化合物含有抽出剤相を得ることができる抽出剤である。特定化合物のための抽出剤は、内部参照標準が使用される工程において、内部参照標準を抽出でき、かつ内部参照標準をその抽出剤相中の保持できるものでなければならない。１又は２以上の特定化合物のための抽出剤は一般的に９０℃以上、好ましくは１００℃以上の沸点を有するもので、工程が実施される温度で抽出剤沸騰しないものでなくてはならない。この基準に合致するどのような抽出剤も、一般的に本発明方法での使用に好適である。特定化合物の種類によるが、好適な抽出剤としては、９個の炭素を含有する溶剤（例えば、ノナン）、イソオクタン、トルエン及びトリデカンであっても良い。本発明方法の抽出工程は、コンデンサー及び市販されている水蒸気蒸留装置を含む、市販されている標準的な実験装置を使用して実施できる。上述のように、本発明方法において抽出される１又は２以上の特定化合物は下記のようにダイオキシン様化合物を含むことができる。２，３，７，８−テトラクロロジベンゾーｐ−ダイオキシン（ＴＣＤＤ）２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾーｐ−ダイオキシン（ＰｅＣＤＤ）１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン（ＰｅＣＤＦ）２，３，４，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン（ＰｅＣＤＦ）３，３'，４，４'，５−ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ１２６）これらの各化合物は、上述の本発明方法の態様を用いて抽出できる。これら各化合物の抽出についての本発明方法の態様は以下に説明する。２，３，７，８−テトラクロロジベンゾーｐ−ダイオキシン（ＴＣＤＤ）本発明による、水性サンプルマトリックスからの２，３，７，８−テトラクロロジベンゾーｐ−ダイオキシン（ＴＣＤＤ）の抽出法は下記の工程から成る。水性サンプルマトリックスを希釈剤で希釈し；希釈された水性サンプルマトリックスを化学的活性物質と反応させ；生じた水性サンプルマトリックスを沸騰して蒸気を生成し；その蒸気を凝縮して凝縮液を生成し；その凝縮液をＴＣＤＤ用抽出剤と接触させ（当該抽出剤は、水と実質上非混和性である）、ＴＣＤＤを抽出して、ＴＣＤＤを含有する抽出相を生成し、該凝縮相からＴＣＤＤを抽出し尽くしており；そして凝縮相から抽出剤相を分離する、各工程から成る。ＴＣＤＤ含有抽出相中のＴＣＤＤレベル（濃度）は標準的な分析技術によって決定できる。本発明方法の希釈及び反応工程は、化学的活性物質を希釈剤に添加して希釈剤組成物を作り、これを水性サンプルマトリックスに添加、反応させることにより、一緒にできる。本発明のこの態様による、水性サンプルマトリックスからの２，３，７，８−テトラクロロジベンゾーｐ−ダイオキシン（ＴＣＤＤ）の抽出は、下記の工程から成る。水性サンプルマトリックスを、希釈剤と化学的活性物質（水性サンプルマトリックスと反応する）とを含有する希釈剤組成物で希釈し；得られた水性サンプルマトリックスを沸騰して蒸気を生成し；その蒸気を凝縮して凝縮液を生成し；その凝縮液をＴＣＤＤ用抽出剤と接触させ（当該抽出剤は、水と実質上非混和性である）、ＴＣＤＤを抽出して、ＴＣＤＤを含有する抽出相を生成し、該凝縮相からＴＣＤＤを抽出し尽くしており；そして凝縮相から抽出剤相を分離する、各工程から成る。本発明方法の好ましい態様によれば、内部参照標準を使用して、最初の水性サンプル中のＴＣＤＤの量をより正確に決定できる。この好適な態様によれば、水性サンプルマトリックスからの２，３，７，８−テトラクロロジベンゾーｐ−ダイオキシン（ＴＣＤＤ）の抽出は、下記の工程から成る。内部参照標準溶液を水性サンプルマトリックスに添加し；当該内部参照標準を含有する水性サンプルマトリックスを希釈剤で希釈し；希釈された水性サンプルマトリックスを化学的活性物質と反応させ；得られた水性サンプルマトリックスを沸騰して蒸気を生成し；その蒸気を凝縮して凝縮液を生成し；その凝縮液をＴＣＤＤ用抽出剤と接触させ（当該抽出剤は、水と実質上非混和性である）、ＴＣＤＤ及び内部参照標準を抽出して、ＴＣＤＤ及び内部参照標準を含有する抽出相を生成し、該凝縮相からＴＣＤＤ及び内部参照標準を抽出し尽くしており；そして凝縮相から抽出剤相を分離する、各工程から成る。ＴＣＤＤ含有抽出相中のＴＣＤＤ及び内部参照標準の量（濃度）は標準的な分析技術、例えば、同位元素希釈法で決定できる。水性サンプルマトリックス中のＴＣＤＤの初期濃度は、水性サンプルマトリックスから抽出された内部参照標準を用いて計算できる。本発明方法のこの好ましい態様による希釈及び反応工程は、化学的活性物質を希釈剤に添加して希釈剤組成物を作り、これを水性サンプルマトリックスに添加、反応させることにより、一緒にできる。この態様による、水性サンプルマトリックスからの２，３，７，８−テトラクロロジベンゾーｐ−ダイオキシン（ＴＣＤＤ）の抽出は、下記の工程から成る。内部参照標準溶液を水性サンプルマトリックスに添加し；当該内部参照標準を含有する水性サンプルマトリックスを、希釈剤と化学的活性物質（水性サンプルマトリックスと反応する）とを含有する希釈剤組成物で希釈し；得られた水性サンプルマトリックスを沸騰して蒸気を生成し；その蒸気を凝縮して凝縮液を生成し；その凝縮液をＴＣＤＤ用抽出剤と接触させ（当該抽出剤は、水と実質上非混和性である）、ＴＣＤＤ及び内部参照標準を抽出して、ＴＣＤＤ及び内部参照標準を含有する抽出相を生成し、該凝縮相からＴＣＤＤ及び内部参照標準を抽出し尽くしており；そして凝縮相から抽出剤相を分離する、各工程から成る。２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）本発明による、水性サンプルマトリックスからの２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）の抽出法は下記の工程から成る。水性サンプルマトリックスを希釈剤で希釈し；希釈された水性サンプルマトリックスを化学的活性物質と反応させ；生じた水性サンプルマトリックスを沸騰して蒸気を生成し；その蒸気を凝縮して凝縮液を生成し；その凝縮液をＴＣＤＦ用抽出剤と接触させ（当該抽出剤は、水と実質上非混和性である）、ＴＣＤＦを抽出して、ＴＣＤＦを含有する抽出相を生成し、該凝縮相からＴＣＤＦを抽出し尽くしており；そして凝縮相から抽出剤相を分離する、各工程から成る。ＴＣＤＦ含有抽出相中のＴＣＤＦの濃度は、標準的な分析技術で決定できる。本発明方法の希釈及び反応工程は、化学的活性物質を希釈剤に添加して希釈剤組成物を作り、これを水性サンプルマトリックスに添加、反応させることにより、一緒にできる。本発明のこの態様による、水性サンプルマトリックスからの２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）の抽出は、下記の工程から成る。水性サンプルマトリックスを、希釈剤と化学的活性物質（水性サンプルマトリックスと反応する）とを含有する希釈剤組成物で希釈し；得られた水性サンプルマトリックスを沸騰して蒸気を生成し；その蒸気を凝縮して凝縮液を生成し；その凝縮液をＴＣＤＦ用抽出剤と接触させ（当該抽出剤は、水と実質上非混和性である）、ＴＣＤＦを抽出して、ＴＣＤＦを含有する抽出相を生成し、該凝縮相からＴＣＤＦを抽出し尽くしており；そして凝縮相から抽出剤相を分離する、各工程から成る。本発明の方法の好ましい態様においては、内部参照標準を用いて、最初の水性試料中のＴＣＤＦの量をより正確に決定することができる。この好ましい態様に従えば、２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）を水性試料マトリックスから抽出する方法は、以下の工程を含む：内部参照標準溶液を前記水性試料マトリックスに加え；得られる前記内部参照標準を含む水性試料マトリックスを希釈剤で希釈し；希釈した水性試料マトリックスを化学的に活性な物質と反応させ；得られる水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成し；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を形成し；前記凝縮液をＴＣＤＦ用抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に非混和性であり、ＴＣＤＦおよび内部参照標準を前記凝縮液から抽出し、ＴＣＤＦおよび内部参照標準を含む抽出剤相、およびＴＣＤＦおよび内部参照標準が減少した凝縮液相を生成し；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する。ＴＣＤＦが負荷された抽出剤相中のＴＣＤＦおよび内部参照標準のレベル（濃度）は、標準的な分析技術、例えば同位体希釈アッセイにより決定することができる。次に、水性試料マトリックスから抽出された内部参照標準を用いて、水性試料マトリックス中のＴＣＤＦの初期濃度を計算することができる。本発明の方法のこの好ましい態様の希釈工程および反応工程は、化学的に活性な物質を希釈剤に加えて、水性試料マトリックスに添加されてこれと反応する希釈剤組成物を製造することにより組み合わせることができる。本発明の方法のこの態様においては、２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）を水性試料マトリックスから抽出する方法は、以下の工程を含む：内部参照標準溶液を前記水性試料マトリックスに加え；前記内部参照標準を含む水性試料マトリックスを、希釈剤および水性試料マトリックスと反応するであろう化学的に活性な物質を含む希釈組成物で希釈し；得られる水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成し；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を形成し；前記凝縮液をＴＣＤF用抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に非混和性であり、ＴＣＤＦおよび内部参照標準を前記凝縮液から抽出し、ＴＣＤＦおよび内部参照標準を含む抽出剤相、およびTＣＤＦおよび内部参照標準が減少した凝縮液相を生成し；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する。１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＰｅＣＤＤ）本発明にしたがえば、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＰｅＣＤＤ）を水性試料マトリックスから抽出する方法は、以下の工程を含む：水性試料マトリックスを希釈剤で希釈し；希釈した水性試料マトリックスを化学的に活性な物質と反応させ；得られる水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成し；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を形成し；前記凝縮液をＰｅＣＤＤ用抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に非混和性であり、ＰｅＣＤＤを抽出し、ＰｅＣＤＤを含む抽出剤相およびＰｅＣＤＤが減少した凝縮液相を生成し；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する。ＰｅＣＤＤが負荷された抽出剤相中のＰｅＣＤＤのレベル（濃度）は、標準的な分析技術により決定することができる。本発明の方法の希釈工程および反応工程は、化学的に活性な物質を希釈剤に加えて、水性試料マトリックスに添加されてこれと反応する希釈剤組成物を製造することにより、組み合わせることができる。本発明の方法のこの態様に従えば、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＰｅＣＤＤ）を水性試料マトリックスから抽出する方法は、以下の工程を含む：水性試料マトリックスを、希釈剤および水性試料マトリックスと反応するであろう化学的に活性な物質を含む希釈組成物で希釈し；得られる水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成し；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を形成し；前記凝縮液をＰｅＣＤＤ用抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に非混和性であり、ＰｅＣＤＤを抽出し、ＰｅＣＤＤを含む抽出剤相、およびＰｅＣＤＤが減少した凝縮液相を生成し；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する。本発明の方法の好ましい態様においては、内部参照標準を用いて、最初の水性試料中のＰｅＣＤＤの量をより正確に決定することができる。この好ましい態様に従えば、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＰｅＣＤＤ）を水性試料マトリックスから抽出する方法は、以下の工程を含む：内部参照標準溶液を前記水性試料マトリックスに加え；得られる前記内部参照標準を含む水性試料マトリックスを希釈剤で希釈し；希釈した水性試料マトリックスを化学的に活性な物質と反応させ；得られる水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成し；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を形成し；前記凝縮液をＰｅＣＤＤ用抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に非混和性であり、ＰｅＣＤＤおよび内部参照標準を前記凝縮液から抽出し、ＰｅＣＤＤおよび内部参照標準を含む抽出剤相、およびＰｅＣＤＤおよび内部参照標準が減少した凝縮液相を生成し；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する。ＰｅＣＤＤが負荷された抽出剤相中のＰｅＣＤＤおよび内部参照標準のレベル（濃度）は、標準的な分析技術、例えば同位体希釈アッセイにより決定することができる。次に、水性試料マトリックスから抽出された内部参照標準を用いて、水性試料マトリックス中のＰｅＣＤＤの初期濃度を計算することができる。本発明の方法のこの好ましい態様の希釈工程および反応工程は、化学的に活性な物質を希釈剤に加えて、水性試料マトリックスに添加されてこれと反応する希釈剤組成物を製造することにより組み合わせることができる。本発明の方法のこの態様においては、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＰｅＣＤＤ）を水性試料マトリックスから抽出する方法は、以下の工程を含む：内部参照標準溶液を前記水性試料マトリックスに加え；前記内部参照標準を含む水性試料マトリックスを、希釈剤および水性試料マトリックスと反応するであろう化学的に活性な物質を含む希釈組成物で希釈し；得られる水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成し；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を形成し；前記凝縮液をＰｅＣＤＤ用抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に非混和性であり、ＰｅＣＤＤおよび内部参照標準を前記凝縮液から抽出し、ＰｅＣＤＤおよび内部参照標準を含む抽出剤相、およびＰｅＣＤＤおよび内部参照標準が減少した凝縮液相を生成し；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する。１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン本発明にしたがえば、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランを水性試料マトリックスから抽出する方法は、以下の工程を含む：水性試料マトリックスを希釈剤で希釈し；希釈した水性試料マトリックスを化学的に活性な物質と反応させ；得られる水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成し；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を形成し；前記凝縮液を１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン用抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に非混和性であり、１，２，３，７，８ −ペンタクロロジベンゾフランを抽出し、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランを含む抽出剤相および１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランが減少した凝縮液相を生成し；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する。１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランが負荷された抽出剤相中の１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランのレベル（濃度）は、標準的な分析技術により決定することができる。本発明の方法の希釈工程および反応工程は、化学的に活性な物質を希釈剤に加えて、水性試料マトリックスに添加されてこれと反応する希釈剤組成物を製造することにより、組み合わせることができる。本発明の方法のこの態様に従えば、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランを水性試料マトリックスから抽出する方法は、以下の工程を含む：水性試料マトリックスを、希釈剤および水性試料マトリックスと反応するであろう化学的に活性な物質を含む希釈組成物で希釈し；得られる水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成し；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を形成し；前記凝縮液を１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン用抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に非混和性であり、１，２，３，７，８ −ペンタクロロジベンゾフランを抽出し、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランを含む抽出剤相、および１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランが減少した凝縮液相を生成し；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する。本発明の方法の好ましい態様においては、内部参照標準を用いて、最初の水性試料中の１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランの量をより正確に決定することができる。この好ましい態様に従えば、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランを水性試料マトリックスから抽出する方法は、以下の工程を含む：内部参照標準溶液を前記水性試料マトリックスに加え；得られる前記内部参照標準を含む水性試料マトリックスを希釈剤で希釈し；希釈した水性試料マトリックスを化学的に活性な物質と反応させ；得られる水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成し；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を形成し；前記凝縮液を１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン用抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に非混和性であり、１，２，３，７，８ −ペンタクロロジベンゾフランおよび内部参照標準を前記凝縮液から抽出し、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランおよび内部参照標準を含む抽出剤相、および１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランおよび内部参照標準が減少した凝縮液相を生成し；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する。１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランが負荷された抽出剤相中の１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランおよび内部参照標準のレベル（濃度）は、標準的な分析技術、例えば同位体希釈アッセイにより決定することができる。次に、水性試料マトリックスから抽出された内部参照標準を用いて、水性試料マトリックス中の１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランの初期濃度を計算することができる。本発明の方法のこの好ましい態様の希釈工程および反応工程は、化学的に活性な物質を希釈剤に加えて、水性試料マトリックスに添加されてこれと反応する希釈剤組成物を製造することにより組み合わせることができる。本発明の方法のこの態様においては、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランを水性試料マトリックスから抽出する方法は、以下の工程を含む：内部参照標準溶液を前記水性試料マトリックスに加え；前記内部参照標準を含む水性試料マトリックスを、希釈剤および水性試料マトリックスと反応するであろう化学的に活性な物質を含む希釈組成物で希釈し；得られる水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成し；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を形成し；前記凝縮液を１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン用抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に非混和性であり、１，２，３，７，８ −ペンタクロロジベンゾフランおよび内部参照標準を前記凝縮液から抽出し、１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランおよび内部参照標準を含む抽出剤相、および１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフランおよび内部参照標準が減少した凝縮液相を生成し；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する。2,3,4,7,8- ペンタクロロジベンゾフラン本発明によれば、水性試料マトリックスから2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランを抽出するプロセスは、水性試料マトリックスを希釈剤で希釈し；希釈した水性試料マトリックスを化学的に活性な物質と反応させ；得られた水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成させ；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を生成させ；前記凝縮液を2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランの抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に不混和性であり、それによって2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランを抽出して2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランを含む抽出剤相および2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランが減少した凝縮液相を生成させ；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する；以上の工程を含む。 2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランを含有する抽出剤相中の2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランの水準（濃度）は、標準的な分析法によって決定される。本発明のプロセスにおける希釈工程と反応工程は、化学的に活性な物質を希釈剤に添加して希釈剤組成物を生成させ、この希釈剤組成物を水性試料マトリックスに添加してこれと反応させることによって組合わされても良い。本発明のプロセスのこの実施態様によれば、水性試料マトリックスから2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランを抽出するプロセスは、水性試料マトリックスを、希釈剤と、水性試料マトリックスと反応する化学的に活性な物質とを含む希釈剤組成物で希釈し；得られた水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成させ；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を生成させ；前記凝縮液を2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランの抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に不混和性であり、それによって2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランを抽出して2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランを含む抽出剤相および2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランが減少した凝縮液相を生成させ；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する；以上の工程を含む。本発明のプロセスの好ましい実施態様においては、最初の水性試料中の2,3,4, 7,8-ペンタクロロジベンゾフランの量をより正確に測定することを可能にするために、内部参照標準が用いられる。この好ましい実施態様によれば、水性試料マトリックスから2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランを抽出するプロセスは、前記水性試料マトリックスに内部参照標準溶液を添加し；前記内部参照標準を含む得られた水性試料マトリックスを希釈剤で希釈し；希釈した水性試料マトリックスを化学的に活性な物質と反応させ；得られた水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成させ；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を生成させ；前記凝縮液を2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランの抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に不混和性であり、それによって前記凝縮液から 2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランと内部参照標準を抽出して2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランと内部参照標準を含む抽出剤相および2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランと内部参照標準が減少した凝縮液相を生成させ；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する；以上の工程を含む。 2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランを含有する抽出剤相中の2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランと内部参照標準の水準（濃度）は、例えばイオソトープ希釈分析（iosotope dilution assay）のような標準的な分析法によって決定される。次いで、水性試料マトリックス中の2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランの最初の濃度は、水性試料マトリックスから抽出された内部参照標準を用いて計算することができる。本発明のプロセスのこの好ましい実施態様の希釈工程と反応工程は、化学的に活性な物質を希釈剤に添加して希釈剤組成物を生成させ、この希釈剤組成物を水性試料マトリックスに添加してこれと反応させることによって組合わされても良い。本発明のプロセスのこの実施態様において、水性試料マトリックスから2,3, 4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランを抽出するプロセスは、前記水性試料マトリックスに内部参照標準溶液を添加し；前記内部参照標準を含む水性試料マトリックスを、希釈剤と、水性試料マトリックスと反応する化学的に活性な物質とを含む希釈剤組成物で希釈し；得られた水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成させ；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を生成させ；前記凝縮液を2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランの抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に不混和性であり、それによって前記凝縮液から 2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランと内部参照標準を抽出して2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランと内部参照標準を含む抽出剤相および2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフランと内部参照標準が減少した凝縮液相を生成させ；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する；以上の工程を含む。3,3,'4,4',5- ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ 126）本発明によれば、水性試料マトリックスから3,3,'4,4',5-ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ126）を抽出するプロセスは、水性試料マトリックスを希釈剤で希釈し；希釈した水性試料マトリックスを化学的に活性な物質と反応させ；得られた水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成させ；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を生成させ；前記凝縮液をＰＣＢ126の抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に不混和性であり、それによってＰＣＢ126を抽出してＰＣＢ126を含む抽出剤相およびＰＣＢ126が減少した凝縮液相を生成させ；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する；以上の工程を含む。ＰＣＢ126を含有する抽出剤相中のＰＣＢ126の水準（濃度）は、標準的な分析法によって決定される。本発明のプロセスにおける希釈工程と反応工程は、化学的に活性な物質を希釈剤に添加して希釈剤組成物を生成させ、この希釈剤組成物を水性試料マトリックスに添加してこれと反応させることによって組合わされても良い。本発明のプロセスのこの実施態様によれば、水性試料マトリックスから3,3,'4,4',5-ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ126）を抽出するプロセスは、水性試料マトリックスを、希釈剤と、水性試料マトリックスと反応する化学的に活性な物質とを含む希釈剤組成物で希釈し；得られた水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成させ；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を生成させ；前記凝縮液をＰＣＢ126の抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に不混和性であり、それによってＰＣＢ126を抽出してＰＣＢ126を含む抽出剤相およびＰＣＢ126が減少した凝縮液相を生成させ；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する；以上の工程を含む。本発明のプロセスの好ましい実施態様においては、最初の水性試料中のＰＣＢ 126の量をより正確に測定することを可能にするために、内部参照標準が用いられる。この好ましい実施態様によれば、水性試料マトリックスから3,3,'4,4',5- ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ126）を抽出するプロセスは、前記水性試料マトリックスに内部参照標準溶液を添加し；前記内部参照標準を含む得られた水性試料マトリックスを希釈剤で希釈し；希釈した水性試料マトリックスを化学的に活性な物質と反応させ；得られた水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成させ；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を生成させ；前記凝縮液をＰＣＢ126の抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に不混和性であり、それによって前記凝縮液からＰＣＢ126と内部参照標準を抽出してＰＣＢ126と内部参照標準を含む抽出剤相およびＰＣＢ126と内部参照標準が減少した凝縮液相を生成させ；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する；以上の工程を含む。ＰＣＢ126を含有する抽出剤相中のＰＣＢ126と内部参照標準の水準（濃度）は、例えばイオソトープ希釈分析のような標準的な分析法によって決定される。次いで、水性試料マトリックス中のＰＣＢ126の最初の濃度は、水性試料マトリックスから抽出された内部参照標準を用いて計算することができる。本発明のプロセスのこの好ましい実施態様の希釈工程と反応工程は、化学的に活性な物質を希釈剤に添加して希釈剤組成物を生成させ、この希釈剤組成物を水性試料マトリックスに添加してこれと反応させることによって組合わされても良い。本発明のプロセスのこの実施態様において、水性試料マトリックスから3,3, '4,4',5-ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ126）を抽出するプロセスは、前記水性試料マトリックスに内部参照標準溶液を添加し；前記内部参照標準を含む水性試料マトリックスを、希釈剤と、水性試料マトリックスと反応する化学的に活性な物質とを含む希釈剤組成物で希釈し；得られた水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成させ；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を生成させ；前記凝縮液をＰＣＢ126の抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に不混和性であり、それによって前記凝縮液からＰＣＢ126と内部参照標準を抽出してＰＣＢ126と内部参照標準を含む抽出剤相およびＰＣＢ126と内部参照標準が減少した凝縮液相を生成させ；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する；以上の工程を含む。前述の部分で個々に示したダイオキシン類似化合物の抽出に加えて、本発明のプロセスは液体試料からダイオキシン類似化合物の組み合わせを実質的に同時に抽出するのに用いることもできる。本発明によれば、2,3,7,8-テトラクロロジベンゾ-ｐ-ダイオキシン（ＴＣＤＤ）；2,3,7,8-テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）；1,2,3,7,8-ペンタクロロジベンゾ-ｐ-ダイオキシン（ＰｅＣＤＤ）；1,2,3,7,8-ペンタクロロジベンゾフラン；2,3,4,7,8-ペンタクロロジベンゾフラン；3,3,'4,4',5-ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ126）および／またはこれらの混合物を含む所定の化合物を水性試料マトリックスから抽出するプロセスは、水性試料マトリックスを希釈剤で希釈し；希釈した水性試料マトリックスを化学的に活性な物質と反応させ；得られた水性試料マトリックスを沸騰させて蒸気を生成させ；前記蒸気を凝縮させて凝縮液を生成させ；前記凝縮液を所定の化合物の抽出剤と接触させ、前記抽出剤は前記凝縮液と実質的に不混和性であり、それによって所定の化合物を抽出して所定の化合物を含む抽出剤相および所定の化合物が減少した凝縮液相を生成させ；そして前記抽出剤相を前記凝縮液相から分離する；以上の工程を含む。所定の化合物を含有する抽出剤相中の所定の化合物の水準（濃度）は、標準的な分析法によって決定される。化学活性物質を希釈剤に加えて、水性サンプルマトリックスに加えられて反応する希釈組成物を生じさせることにより、本発明の方法における希釈工程と反応工程を組み合わせてよい。本発明の方法のこの態様によれば、２，３，７，８− テトラクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＴＣＤＤ）；２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）；１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＰｅＣＤＤ）；１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン；２，３，４，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン；３，３’，４，４’，５−ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ１２６）および／またはそれらの混合物からなる予め決定された化学化合物を、水性サンプルマトリックスから抽出するための方法は、希釈剤および水性サンプルマトリックスと反応する化学活性物質からなる希釈剤組成物により水性サンプルマトリックスを希釈し；その結果得られる水性サンプルマトリックスを沸騰させて蒸気を生じさせ；蒸気を濃縮して濃縮物を生じさせ；濃縮物を、予め決定された化学化合物のための抽出剤であって上記濃縮物とは実質的に不混和性の上記抽出剤に接触させることにより、予め決定された化学化合物を抽出し、そして予め決定された化学化合物を含む抽出剤相と予め決定された化学化合物を除かれた濃縮物相を生じさせ；そして抽出剤相を濃縮物相から分離することからなる。本発明の方法の好ましい態様においては、内部対照標準を利用することにより、最初の水性サンプル中の予め決定された化学化合物の量をより正確に決定することが可能になる。この好ましい態様によれば、２，３，７，８−テトラクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＴＣＤＤ）；２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）；１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＰｅＣＤＤ）；１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン；２，３，４，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン；３，３’，４，４’，５−ペンタクロロビフエニル（ＰＣＢ１２６）および／またはそれらの混合物からなる予め決定された化学化合物を、水性サンプルマトリックスから抽出するための方法は、内部対照標準溶液を上記水性サンプルマトリックスに加え；その結果得られる内部対照標準含有水性サンプルマトリックスを希釈剤により希釈し；希釈された水性サンプルマトリックスと化学活性物質を反応させ；その結果得られる水性サンプルマトリックスを沸騰させて蒸気を生じさせ；蒸気を濃縮して濃縮物を生じさせ；濃縮物を、予め決定された化学化合物のための抽出剤であって上記濃縮物とは実質的に不混和性の上記抽出剤に接触させることにより、予め決定された化学化合物および内部対照標準を上記濃縮物から抽出し、そして予め決定された化学化合物および内部対照標準を含む抽出剤相と予め決定された化学化合物および内部対照標準を除かれた濃縮物相を生じさせ；そして抽出剤相を濃縮物相から分離することからなる。予め決定された化学化合物を含む抽出剤相中の予め決定された化学化合物並びに内部対照標準のレベル（濃度）は、標準分析技術、例えばアイソトープ希釈アッセイにより測定してよい。水性サンプルマトリックス中の予め決定された化学化合物の初期濃度は、次に、水性サンプルマトリックスから抽出された内部対照標準を用いて計算してよい。本発明の方法のこの好ましい態様の希釈工程と反応工程は、化学活性物質を希釈剤に加えて、水性サンプルマトリックスに加えられて反応する希釈組成物を生じさせることにより、組み合わせてよい。本発明の方法のこの態様によれば、２，３，７，８−テトラクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＴＣＤＤ）；２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）；１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＰｅＣＤＤ）；１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン；２，３，４，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン；３，３’，４，４’，５−ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ１２６）および／またはそれらの混合物からなる予め決定された化学化合物を、水性サンプルマトリックスから抽出するための方法は、内部対照標準溶液を水性サンプルマトリックスに加え；その結果得られる内部対照標準含有水性サンプルマトリックスを、希釈剤並びに水性サンプルマトリックスと反応する化学活性物質からなる希釈剤組成物により希釈し；その結果得られる水性サンプルマトリックスを沸騰させて蒸気を生じさせ；蒸気を濃縮して濃縮物を生じさせ；濃縮物を、予め決定された化学化合物のための抽出剤であって上記濃縮物とは実質的に不混和性の上記抽出剤に接触させることにより、予め決定された化学化合物および内部対照標準を上記濃縮物から抽出し、そして予め決定された化学化合物および内部対照標準を含む抽出剤相と予め決定された化学化合物および内部対照標準を除かれた濃縮物相を生じさせ；そして抽出剤相を濃縮物相から分離することからなる。ＴＣＤＤを抽出するための本発明の方法の一態様は図１に模式的に描写される。図１を参照すると、本発明の方法の一態様においては、溶液中のＴＣＤＤ用の内部対照標準を血液血清サンプルに加える。血清サンプルを含む内部対照標準、並びに化学活性物質としてＮａＯＨを含む希釈組成物を沸騰容器中で混合する。適当な数の「沸騰チップス」または「沸騰石」を加えるが、その数は特定されず、しかし沸騰容器に対する蒸留の単純な術を一般的に経験した人には共通に使われる数である。沸騰容器は、沸騰容器中の溶液が沸騰させられることにより蒸気を生成させる装置、例えば市販の装置に接続される。生じた蒸気はＴＣＤＤおよび内部対照標準を含み、そして回収されて濃縮されることにより濃縮物を形成する。濃縮物は、濃縮物とは不混和性のＴＣＤＤ用有機抽出剤に通す。有機抽出剤はＴＣＤＤ及び内部対照標準を溶解して濃縮物から抽出することにより、ＴＣＤＤおよび内部対照標準を含む抽出相、およびＴＣＤＤ（および内部対照標準）を除かれた濃縮物を生成する。除かれた濃縮物は沸騰容器へ再循環される。選択された有機抽出剤は、沸騰容器への加熱の適用の間、装置から蒸発しないものである。さらに、有機抽出剤は、沸騰が生ずる容器には入らない。除去工程を実施するための適当な装置は実験室のガラス器具類の供給者から広く入手でき、そしてスチーム蒸留の当業者には知られたものを含む。本発明の方法によれば、内部対照標準および化学活性物質を含む希釈された血清溶液の沸騰は、操作者に受容可能な程度ＴＣＤＤが有機抽出剤に移行するまで続ける。迅速なサンプル加工のために、この時間は１時間を超えるべきではなく、主として加熱が収納容器に適用される速度により決定される。典型的な沸騰時間は４５分である。沸騰期間の最後においては、加熱はもはや沸騰容器に適用されない。有機抽出剤を装置から取り除き、そして蒸発により、いかなる分析測定法も選択されるような利用に適切な量に濃縮する。ＴＣＤＤを含む有機溶剤の濃度は、限定されないがエバポレーター、スチームバス等を含むあらゆる慣用手段により達成してよい。記載された方法に由来する有機溶剤中のＴＣＤＤの分析測定は、十分な感度および特異性を提供するあらゆる手段により実施してよい。同様の加工工程を利用することにより、他のジオキシン様化合物例えば前に掲載された化合物を抽出および精製してよい。本発明の方法の特徴および利点は以下の実施例によりさらに例示される。実施例本発明の方法の一つの態様は、ミリリットルあたり５００フェムトグラムのＴＣＤＤの既知濃度のＴＣＤＤを有する２ｍＬのヒト血液血清サンプルからのＴＣＤＤの有利な回収を例示するために実施された。ＴＣＤＤの内部対照標準は、本実施例においてはメタノール中２ピコグラムの¹³ Ｃ₁₂−２，３，７，８−ＴＣＤＤの２ｍＬ溶液であり、２ｍＬの血清サンプルに加えられた。還流または蒸留の条件に適当な１リットル沸騰容器中において、ＮａＯＨを化学活性物質として含む５００ｍＬの１．０ＮＮａＯＨ希釈溶液を、内部対照標準含有血清サンプルと混合した。６から８のカーボランダムの「沸騰チップス」も沸騰容器に加えた。混合された溶液を含む沸騰容器は溶液を沸騰させる市販のミクロスチーム蒸留装置に接続し、そこからの蒸気が濃縮されて液体状態に戻って濃縮物を形成するような条件下においた。濃縮された液体は、１ｍＬのイソオクタン（ＴＣＤＤを溶解できるが実質的に濃縮物と不混和性である有機抽出剤）に通して、ＴＣＤＤおよび内部対照標準を抽出してＴＣＤＤおよび内部対照標準を含む抽出剤相を形成させた。ＴＣＤＤを除かれた濃縮物の液体は、その後沸騰容器に戻した。沸騰は４５分間続けた。沸騰期間の最後においては、もはや加熱を沸騰容器に適用しなかった。ＴＣＤＤおよび内部対照標準を含む抽出剤相を装置から取り出して真空遠心分離機内で濃縮した。ガスクロマトグラフィーと質量分析法の組み合わせを利用して、図２に示すグラフを生じた。これらの結果は、本発明の方法が十分な回収および自由度をもって、百万兆あたり０．５部の初期濃度においてＴＣＤＤの測定に関する干渉物からＴＣＤＤを抽出した（血清グラムあたり０．５ピコグラムのＴＣＤＤ）。上記並びに実施態様に示されるとおり、本発明の方法は、以下の利点：さらなるＴＣＤＤの精製を必要としない１時間未満での血清から有機溶剤へのＴＣＤＤの移行；血清中に典型的に見いだされる物質の化学変換であって、他の方法でＴＣＤＤと共に同時にスチーム蒸留されるかまたはスチーム蒸留される能力を減じられた物質からそのような特性を持たない物質への変換；およびＴＣＤＤの有機溶剤溶液から分析用測定（定量）に適した形態への手軽な修飾を提供する。即ち、上記記載から明白になされるもののうち、記載された利点は、本発明の方法により十分に得られることは認識されよう。特定の変更は本発明の精神および範囲から逸脱することなく本発明の方法の上記態様を実施することによりなされてよいため、上記記載に含まれる全ての事項は例示として解釈され、限定の意味で解釈されるべきではないことを意図する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１０月２２日（１９９７．１０．２２）【補正内容】１．水性試料マトリクスから予め定められた化学化合物又は複数の化合物を抽出する方法であって、以下の工程：水性試料マトリクスを希釈剤で希釈して、希釈された水性試料マトリクスを形成し；希釈された水性試料マトリクスを、化学的に活性な物質と反応させて、得られる水性試料マトリクスを形成し；得られた水性試料マトリクスを沸騰させて蒸気を生成させ；該蒸気を凝縮して凝縮液を形成し；該凝縮液を、予め定められた化学化合物又は複数の化合物に対する抽出剤であって、該凝縮液と実質的に非混和性である抽出剤と接触させて、予め定められた化学化合物又は複数の化合物を抽出し、且つ、予め定められた化学化合物又は複数の化合物を含む抽出剤相及び予め定められた化学化合物又は複数の化合物が枯渇した凝縮液相を形成し；該抽出剤相を該凝縮液相から分離する；工程を含むことを特徴とする方法。２．希釈及び反応工程が、合わせられて、水性試料マトリクスを、希釈剤及び化学的に活性な物質を含む希釈剤組成物で希釈する工程を含み、該希釈剤組成物が該水性試料マトリクスと反応する請求項１に記載の方法。３．希釈前に、予め定められた化学化合物に対する内部参照標準試料溶液を該水性試料マトリクスに加える工程を更に含み、予め定められた化学化合物に対する該希釈剤によって、更に該内部参照標準試料溶液が抽出されて、予め定められた化学化合物及び該内部参照標準試料溶液を含む抽出剤相が形成され、該凝縮液相は、予め定められた化学化合物又は複数の化合物及び該内部参照標準試料溶液が枯渇している請求項１に記載の方法。４．希釈前に、内部参照標準試料溶液を該水性試料マトリクスに加える工程を更に含み、予め定められた化学化合物に対する該希釈剤によって、更に該内部参照標準試料溶液が抽出されて、予め定められた化学化合物及び該内部参照標準試料溶液を更に含む抽出剤相が形成され、該凝縮液相は、予め定められた化学化合物及び該内部参照標準試料溶液が枯渇している請求項２に記載の方法。５．化学的に活性な物質が、アルカリ金属水酸化物によって引き起こされる上昇と同等の量で水酸化物イオン濃度を上昇させて、塩基触媒加水分解を促進させるのに有効な物質である請求項４に記載の方法。６．予め定められた化学化合物に対する抽出剤が、予め定められた化学化合物を溶解することのできる有機溶媒を含む請求項４に記載の方法。７．該凝縮液から該抽出剤相を分離した後に、該抽出剤相の一部を蒸発させて、蒸発した予め定められた化学化合物を含んだ有機相を形成する工程を更に含む請求項４に記載の方法。８．蒸発した予め定められた化学化合物を含んだ有機相を、予め定められた化学化合物の濃度レベルに関して分析する工程を更に含む請求項７に記載の方法。９．化学化合物が、血漿のＴＥＱに影響を与える化合物を含む請求項１、２、３、４、５、６、７又は８に記載の方法。１０．予め定められた化学化合物がダイオキシン類化合物を含む請求項９に記載の方法。１１．予め定められた化学化合物が、２，３，７，８−テトラクロロジベンゾ −ｐ−ダイオキシン（ＴＣＤＤ）；２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）；１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−ｐ−ダイオキシン（ＰｅＣＤＤ）；１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン（ＰｅＣＤＦ）；２，３，４，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン（ＰｅＣＤＦ）；３，３’，４，４’，５−ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ１２６）；又はこれらの混合物を含む請求項１０に記載の方法。１２．水性試料マトリクスが血清を含む請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１１に記載の方法。１３．血清が、予め定められた化学化合物に対する内部参照標準試料で予め処理されている請求項１２に記載の方法。１４．血清と化学的に活性な物質との反応から形成される水性マトリクスに、沸騰促進材料を加える工程を更に含む請求項１１に記載の方法。１５．内部参照標準試料が１３Ｃ１２−２，３，７，８−ＴＣＤＤを含む請求項１３に記載の方法。１６．希釈剤が水を含み、化学的に活性な物質が１Ｎ−水酸化カリウムを含む請求項１５に記載の方法。１７．予め定められた化学化合物に対する抽出剤が、９炭素含有炭化水素溶媒を含む請求項１６に記載の方法。１８．水性試料マトリクスから予め定められた化学化合物又は複数の化合物を抽出する方法であって、以下の工程：該水性試料マトリクスに内部参照標準試料溶液を加え；水性試料マトリクスを、希釈剤及び化学的に活性な物質を含む希釈剤組成物で希釈し、ここで、該希釈剤組成物は、水性試料マトリクスと反応して、得られる水性試料マトリクスを形成し、該化学的に活性な物質は、アルカリ金属水酸化物によって引き起こされる上昇と同等の量で水酸化物イオン濃度を上昇させて、塩基触媒加水分解を促進させるのに有効な物質を含み；得られた水性試料マトリクスを沸騰させて蒸気を生成させ；該蒸気を凝縮して凝縮液を形成し；該凝縮液を、予め定められた化学化合物又は複数の化合物に対する抽出剤であって、該凝縮液と実質的に非混和性である抽出剤と接触させ、ここで、予め定められた化学化合物又は複数の化合物に対する該抽出剤によって、内部参照標準試料溶液が更に抽出されて、予め定められた化学化合物又は複数の化合物及び該内部参照標準試料溶液を含む抽出剤相及び予め定められた化学化合物又は複数の化合物及び該内部参照標準試料溶液が枯渇した凝縮液相を形成し；該抽出剤相を該凝縮液相から分離する；工程を含むことを特徴とする方法。１９．血清から予め定められた化学化合物又は複数の化合物を抽出する方法であって、以下の工程：¹³Ｃ₁₂−２，３，７，８−ＴＣＤＤを含む予め定められた化学化合物に対する内部参照標準試料で、該血清を予め処理し；血清を水で希釈して、希釈された血清を得；希釈された血清を、１Ｎ水酸化カリウムと反応させて、得られた血清を形成し；得られた血清を沸騰して蒸気を生成し；該蒸気を凝縮して凝縮液を形成し；該凝縮液を、該凝縮液と実質的に非混和性である、予め定められた化合物に対する抽出剤と接触させて、予め定められた化学化合物を抽出し、且つ、予め定められた化学化合物を含む抽出剤相及び予め定められた化学化合物が枯渇した凝縮液相を形成し；該抽出剤相を該凝縮液相から分離する；工程を含むことを特徴とする方法。２０．予め定められた化学化合物に対する抽出剤が、８炭素含有炭化水素溶媒を含む請求項１９に記載の方法。２１．血清と化学的に活性な物質との反応から形成された得られた血清に、沸騰促進材料を加える工程を更に含む請求項２０に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者アルブロ，フィリップ・ダブリューアメリカ合衆国ノース・カロライナ州 27511，キャリー，グリフィス・ストリート 808 (72)発明者チュー，マイケル・ディーアメリカ合衆国ノース・カロライナ州 27707，ダーラム，ラシーン・ストリート 3508

Claims

【特許請求の範囲】１．水性試料マトリクスから予め定められた化学化合物又は複数の化合物を抽出する方法であって、以下の工程：水性試料マトリクスを希釈剤で希釈し；希釈された水性試料マトリクスを、化学的に活性な物質と反応させ；得られた水性試料マトリクスを沸騰させて蒸気を生成させ；該蒸気を凝縮して凝縮液を形成し；該凝縮液を、予め定められた化学化合物又は複数の化合物に対する抽出剤であって、該凝縮液と実質的に非混和性である抽出剤と接触させて、予め定められた化学化合物又は複数の化合物を抽出し、且つ、予め定められた化学化合物又は複数の化合物を含む抽出剤相及び予め定められた化学化合物又は複数の化合物が枯渇した凝縮液相を形成し；該抽出剤相を該凝縮液相から分離する；工程を含むことを特徴とする方法。２．希釈及び反応工程が、合わせられて、水性試料マトリクスを、希釈剤及び水性試料マトリクスと反応する化学的に活性な物質を含む希釈剤組成物で希釈する工程を含む請求項１に記載の方法。３．希釈前に、予め定められた化学化合物に対する内部参照標準試料溶液を該水性試料マトリクスに加える工程を更に含み、予め定められた化学化合物に対する該希釈剤によって、更に該内部参照標準試料が抽出されて、予め定められた化学化合物及び該内部参照標準試料を含む抽出剤相及び予め定められた化学化合物及び該内部参照標準試料が枯渇した凝縮液相を形成する請求項１に記載の方法。４．希釈前に、内部参照標準試料溶液を該水性試料マトリクスに加える工程を更に含み、予め定められた化学化合物に対する該希釈剤によって、更に該内部参照標準試料が抽出されて、予め定められた化学化合物及び該内部参照標準試料を含む抽出剤相及び予め定められた化学化合物及び該内部参照標準試料が枯渇した凝縮液相を形成する請求項２に記載の方法。５．化学的に活性な物質が、アルカリ金属水酸化物と同等の量で塩基触媒加水分解を促進させるのに化学的に有効な物質である請求項４に記載の方法。６．予め定められた化学化合物に対する抽出剤が、予め定められた化学化合物を溶解することのできる有機溶媒を含む請求項４に記載の方法。７．該凝縮液から該抽出剤相を分離した後に、該抽出剤相の一部を蒸発させる工程を更に含む請求項４に記載の方法。８．蒸発した予め定められた化学化合物を含んだ有機相を、予め定められた化学化合物の濃度レベルに関して分析する工程を更に含む請求項７に記載の方法。９．化学化合物が、血漿のＴＥＱに影響を与える化合物を含む請求項１、２、３、４、５、６、７又は８に記載の方法。１０．予め定められた化学化合物がダイオキシン類化合物を含む請求項９に記載の方法。１１．予め定められた化学化合物が、２，３，７，８−テトラクロロジベンゾ −ｐ−ダイオキシン（ＴＣＤＤ）；２，３，７，８−テトラクロロジベンゾフラン（ＴＣＤＦ）；１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾ−ｐ−ダイオキシン（ＰｅＣＤＤ）；１，２，３，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン（ＰｅＣＤＦ）；２，３，４，７，８−ペンタクロロジベンゾフラン（ＰｅＣＤＦ）；３，３’，４，４’，５−ペンタクロロビフェニル（ＰＣＢ１２６）；又はこれらの混合物を含む請求項１０に記載の方法。１２．水性試料マトリクスが血清を含む請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１１に記載の方法。１３．血清が、予め定められた化学化合物に対する内部参照標準試料で予め処理されている請求項１２に記載の方法。１４．血清と化学的に活性な物質との反応から形成される水性マトリクスに、沸騰促進材料を加える工程を更に含む請求項１１に記載の方法。