JP2000166597A - Quantitative analysis of homocysteine - Google Patents
Quantitative analysis of homocysteineInfo
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、ホモシステインを
含む試料に、チオール化合物共存下で、ホモシステイン
に反応するアミノ酸合成酵素を作用させ、生成された硫
化水素又はチオール化合物置換ホモシステインを測定す
ることを特徴とする簡便で正確なホモシステインの定量
法に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for reacting a homocysteine-containing amino acid synthase with a sample containing homocysteine in the presence of a thiol compound, and measuring the generated hydrogen sulfide or homocysteine substituted with a thiol compound. A simple and accurate method for quantifying homocysteine.
【０００２】[0002]
【従来の技術】生体中の蛋白質を構成する硫黄含有アミ
ノ酸としては、メチオニン、システイン、シスチンが知
られており、生体内では、それぞれが一連の代謝サイク
ルの中で恒常性を維持している。食物中の蛋白質から由
来するメチオニンは、通常上記代謝サイクルにより生体
内でシステインに代謝される。しかし、代謝酵素自身や
その関連因子等の異常により上記代謝サイクルに支障を
きたすと、メチオニンはホモシステインに代謝される。2. Description of the Related Art Methionine, cysteine and cystine are known as sulfur-containing amino acids constituting proteins in living organisms, and each of them maintains homeostasis in a series of metabolic cycles in living organisms. Methionine derived from proteins in food is usually metabolized to cysteine in vivo by the above metabolic cycle. However, if the metabolic cycle itself is disturbed by abnormalities in the metabolic enzymes themselves or related factors, methionine is metabolized to homocysteine.
【０００３】ホモシステインは、正常時にはほとんど存
在しない中間代謝物であり、その血液中濃度が高値とな
ると、冠動脈疾患や脳卒中の発生率が高くなるという報
告がなされている。ホモシステインの生体内動態は、関
連酵素及びその補酵素であるビタミンＢ１２や葉酸の存
在と関連付けられ注目されており、心筋梗塞や脳梗塞な
どの血栓塞栓症あるいは動脈硬化症において、独立した
リスクファクターとして確立されつつある。[0003] It has been reported that homocysteine is an intermediate metabolite that hardly exists during normal times, and that the higher the blood concentration, the higher the incidence of coronary artery disease and stroke. The in vivo kinetics of homocysteine has been attracting attention because it is associated with the presence of related enzymes and their coenzymes, vitamin B12 and folic acid. It is being established as.
【０００４】ホモシステインの酵素的定量法において、
使用される酵素としては、脱硫及び脱アミノ反応を触媒
するＬ−メチオニンγ−リアーゼやホモシステインデス
ルフハイドラーゼなどが知られている。In the enzymatic quantification of homocysteine,
Known enzymes include L-methionine γ-lyase and homocysteine desulfhydrase that catalyze desulfurization and deamination reactions.
【０００５】Ｌ−メチオニンγ−リアーゼ（ＥＣ４．
４．１．１１）は、ホモシステインとチオール化合物の
存在下でγ置換反応を触媒し、硫化水素並びにチオール
化合物置換ホモシステインを生成する作用を有すると共
に、チオール化合物非存在下では脱離反応（脱硫及び脱
アミノ）を触媒する作用も有する２面性を持った酵素
で、一部の細菌（シュードモナス属及びクロストリジウ
ム属）で産生が認められるのみであった。[0005] L-methionine γ-lyase (EC4.
4.1.11) has the action of catalyzing the γ-substitution reaction in the presence of homocysteine and a thiol compound to produce hydrogen sulfide and thiol compound-substituted homocysteine, and the elimination reaction in the absence of the thiol compound ( (Desulfurization and deamination), and it is a dual-sided enzyme that also has the action of catalyzing (desulfurization and deamination), and production was only observed in some bacteria (Pseudomonas and Clostridium).
【０００６】更に、ホモシステインデスルフハイドラー
ゼ（ＥＣ４，４，１，２）に関しても、真菌類（トリコ
モナス属）にその存在が確認されているのみであった。[0006] Furthermore, the presence of homocysteine desulfhydrase (EC4, 4, 1, 2) has only been confirmed in fungi (Trichomonas sp.).
【０００７】一方、アミノ酸合成酵素であるＯ−アセチ
ルホモセリン−リアーゼ（Ｏ−アセチルホモセリン−ス
ルフハイドリラーゼあるいはメチオニン合成酵素、ＥＣ
４．２．９９．１０）が、Ｏ−アセチルホモセリンとメ
タンチオールからメチオニンと酢酸、又はＯ−アセチル
ホモセリンと硫化水素からホモシステインと酢酸を生成
することは知られており、「酵素ハンドブック」（丸尾
ら監修、朝倉書店、１９８２年）にも記載されている。On the other hand, the amino acid synthase O-acetylhomoserine-lyase (O-acetylhomoserine-sulfhydrylase or methionine synthase, EC
4.2.99.10) is known to produce methionine and acetic acid from O-acetylhomoserine and methanethiol, or homocysteine and acetic acid from O-acetylhomoserine and hydrogen sulfide. Supervision of Maruo et al., Asakura Shoten, 1982).
【０００８】しかしながら、上記アミノ酸合成酵素が、
ホモシステインとチオール化合物の存在下でγ置換反応
を触媒し、硫化水素ならびにチオール化合物置換ホモシ
ステインを生成する作用を有することは知られていなか
った。However, the amino acid synthase described above
It has not been known that the compound has the effect of catalyzing a γ-substitution reaction in the presence of homocysteine and a thiol compound to produce hydrogen sulfide and thiol compound-substituted homocysteine.
【０００９】[0009]
【発明が解決しようとする課題】このように、上述した
Ｌ−メチオニンγ−リアーゼとホモシステインデスルフ
ハイドラーゼ以外で、ホモシステインに対して分解作用
を有する酵素の存在は知られていないのが現状であっ
た。As described above, it is known that there is no known enzyme other than the above-mentioned L-methionine γ-lyase and homocysteine desulfhydrase which has a decomposing action on homocysteine. It was the current situation.
【００１０】したがって、本発明の目的は、ホモシステ
インに作用する新規な酵素反応を利用した簡便で正確な
ホモシステインの定量法を提供することにある。Accordingly, it is an object of the present invention to provide a simple and accurate method for quantifying homocysteine utilizing a novel enzyme reaction acting on homocysteine.
【００１１】[0011]
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するた
め、本発明者らは、ホモシステインの分析に利用可能な
酵素の探索を行った結果、アミノ酸合成酵素であるＯ−
アセチルホモセリン−リアーゼを種々のチオール化合物
存在下においてホモシステインに作用させると、特異性
よくホモシステインを分解することを見出した。更に、
上記アミノ酸合成酵素による反応は、Ｌ−メチオニンγ
−リアーゼと同様に、ホモシステインと種々のチオール
化合物のγ置換反応によるものであるが、脱離反応が認
められないことから、Ｌ−メチオニンγ−リアーゼとは
異なる機構でホモシステインに作用することが確認され
た。Means for Solving the Problems In order to achieve the above object, the present inventors have searched for an enzyme that can be used for homocysteine analysis, and as a result, have found that O-
When acetylhomoserine-lyase was allowed to act on homocysteine in the presence of various thiol compounds, it was found that homocysteine was degraded with high specificity. Furthermore,
The reaction by the amino acid synthase is L-methionine γ
-As in the case of lyase, it is due to the γ-substitution reaction between homocysteine and various thiol compounds, but since no elimination reaction is observed, it acts on homocysteine by a different mechanism from L-methionine γ-lyase. Was confirmed.
【００１２】本発明は、上記知見に基づいて完成された
ものであり、ホモシステインを含む試料に、チオール化
合物の存在下、ホモシステインに反応するアミノ酸合成
酵素を作用させ、生成された硫化水素又はチオール化合
物置換ホモシステインを測定することを特徴とするホモ
システインの定量法を提供するものである。The present invention has been completed on the basis of the above-mentioned findings, and the method comprises reacting a sample containing homocysteine with an amino acid synthase that reacts with homocysteine in the presence of a thiol compound to produce hydrogen sulfide or It is intended to provide a method for quantifying homocysteine, which comprises measuring thiol compound-substituted homocysteine.
【００１３】なお、本発明においては、ホモシステイン
に反応するアミノ酸合成酵素が、酵素番号ＥＣクラス
４．２．９９に属するＯ−アセチルホモセリン−リアー
ゼであることが好ましい。In the present invention, the amino acid synthase that reacts with homocysteine is preferably O-acetylhomoserine-lyase belonging to enzyme class EC class 4.2.99.
【００１４】また、ホモシステインに反応するアミノ酸
合成酵素を作用させる時、共存させるチオール化合物
が、メタンチオール、２−メルカプトエタノール、ジチ
オスレイトール、チオグリセロール、システアミンから
選ばれた１つであることが好ましい。Further, when the amino acid synthase reacting with homocysteine is allowed to act, the coexisting thiol compound may be one selected from methanethiol, 2-mercaptoethanol, dithiothreitol, thioglycerol and cysteamine. preferable.
【００１５】本発明によれば、ホモシステインを含む試
料に、チオール化合物の存在下で、ホモシステインに反
応するアミノ酸合成酵素を作用させることにより、ホモ
システインとチオール化合物のγ置換反応によって、ホ
モシステインが特異性よく分解され、硫化水素及びチオ
ール化合物置換ホモシステインが生成される。したがっ
て、生成された硫化水素又はチオール化合物置換ホモシ
ステインを測定することにより、試料中のホモシステイ
ン含量を、正確にかつ簡便に定量することができる。According to the present invention, a sample containing homocysteine is reacted with an amino acid synthase that reacts with homocysteine in the presence of a thiol compound, whereby the homocysteine and the thiol compound are subjected to a γ-substitution reaction. Is decomposed with high specificity, and hydrogen sulfide and thiol compound-substituted homocysteine are produced. Therefore, by measuring the generated hydrogen sulfide or thiol compound-substituted homocysteine, the homocysteine content in the sample can be accurately and simply quantified.
【００１６】[0016]
【発明の実施の形態】本発明で用いられるアミノ酸合成
酵素としては、ホモシステインに反応するものであれば
特に限定されないが、例えばＯ−アセチルホモセリン−
リアーゼが好ましく採用される。Ｏ−アセチルホモセリ
ン−リアーゼは、それを産生する微生物から得ることが
できる。その微生物としては、細菌ではバチルス属等、
酵母ではサッカロミセス属、真菌ではニューロスポラ属
（Ｊ．Ｂ．Ｃ．，２４６，９５−１０２，１９７１）が
知られている。例えば、山縣らの方法（Ｊ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．，８０，７７７−７８５，１９７６）によって、
サッカロミセスセルビシエよりＯ−アセチルホモセリン
−リアーゼを精製することができる。また、Ｏ−アセチ
ルホモセリン−リアーゼは、市販されているものもあ
り、例えばユニチカ株式会社等から入手できる。ユニチ
カ株式会社製のバチルス属由来のＯ−アセチルホモセリ
ン−リアーゼの理化学的性質は次の通りである。なお、
下記理化学的性質のうち、分子量以外の項目は、本発明
者らにより求めたものである。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The amino acid synthase used in the present invention is not particularly limited as long as it reacts with homocysteine.
Lyase is preferably employed. O-acetylhomoserine-lyase can be obtained from the microorganism that produces it. The microorganisms include bacteria such as Bacillus,
For yeast, the genus Saccharomyces is known, and for fungi, the genus Neurospora is known (JBC, 246, 95-102, 1971). For example, the method of Yamagata et al. (J. Bioch)
em. , 80, 777-785, 1976).
O-acetylhomoserine-lyase can be purified from Saccharomyces cerevisiae. Also, O-acetylhomoserine-lyase is commercially available, and can be obtained, for example, from Unitika Ltd. The physicochemical properties of Bacillus-derived O-acetylhomoserine-lyase manufactured by Unitika Ltd. are as follows. In addition,
Among the following physicochemical properties, the items other than the molecular weight were determined by the present inventors.
【００１７】＜理化学的性質＞ １）作用：Ｌ−ホモシステインとチオール化合物のγ置
換反応を触媒し、硫化水素及びチオール化合物置換ホモ
システインを生成する。また、Ｌ−メチオニンとチオー
ル化合物の置換反応を触媒し、メタンチオール及びチオ
ール化合物置換ホモシステインを生成する。 ２）基質特異性：Ｌ−ホモシステイン、Ｌ−メチオニン
に作用する。また、Ｌ−システインにはβ置換反応とし
て若干反応する。 ３）分子量：１８０，０００（ゲル濾過法） ４）至適ｐＨ：８．５〜９．０ ５）Ｋｍ：０．９ｍＭ（Ｌ−ホモシステイン）<Physicochemical Properties> 1) Action: Catalyzes a γ-substitution reaction between L-homocysteine and a thiol compound to generate hydrogen sulfide and thiol compound-substituted homocysteine. In addition, it catalyzes a substitution reaction between L-methionine and a thiol compound to produce methanethiol and a thiol compound-substituted homocysteine. 2) Substrate specificity: acts on L-homocysteine and L-methionine. Further, it reacts slightly with L-cysteine as a β-substitution reaction. 3) Molecular weight: 180,000 (gel filtration method) 4) Optimum pH: 8.5 to 9.0 5) Km: 0.9 mM (L-homocysteine)
【００１８】本発明で用いられるチオール化合物は、メ
タンチオール、２−メルカプトエタノール、ジチオスレ
イトール、チオグリセロール、システアミンなど、置換
反応が行えるものであれば特に制限なく、好適なものと
しては、２−メルカプトエタノールやシステアミンが挙
げられる。The thiol compound used in the present invention is not particularly limited as long as it can perform a substitution reaction, such as methanethiol, 2-mercaptoethanol, dithiothreitol, thioglycerol, and cysteamine. Examples include mercaptoethanol and cysteamine.
【００１９】本発明のホモシステインの定量法は、反応
過程あるいは、反応生成物を利用して測定する方法であ
り、次にその内容を説明する。The method for quantifying homocysteine according to the present invention is a method for measuring using a reaction process or a reaction product, and its content will be described below.
【００２０】（１）硫化水素を利用する方法 本酵素をチオール化合物共存下で、ホモシステインに作
用させると硫化水素が発生する。その硫化水素を定量す
る方法は、公知の方法を使用することができ、硫化水素
を直接定量する方法のみならず、硫化水素に起因する硫
化物イオンを定量する方法であってもよい。例えば、
酸性条件下で酢酸鉛紙の黒変を検出する方法、亜鉛を
用いて、生成する硫化亜鉛の沈殿を検出する方法、さら
に発色検出として、ニトロプルシッドナトリウムとの
反応では、アルカリ条件下、イオウイオンとして紫色に
発色させる方法、強酸性下で、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｐ
−フェニレンジアミンと塩化第二鉄を用いてメチレンブ
ルーを生成させ青色発色を検出する方法などがある。(1) Method Using Hydrogen Sulfide When this enzyme is allowed to act on homocysteine in the presence of a thiol compound, hydrogen sulfide is generated. As a method for quantifying the hydrogen sulfide, a known method can be used, and not only a method for directly quantifying hydrogen sulfide but also a method for quantifying sulfide ions caused by hydrogen sulfide may be used. For example,
A method for detecting blackening of lead acetate paper under acidic conditions, a method for detecting the precipitation of generated zinc sulfide using zinc, and a method for detecting color development, in a reaction with sodium nitroprusside, under alkaline conditions, sulfur A method of coloring purple as an ion, under strong acidity, N, N-dimethyl-p
A method of generating methylene blue using phenylenediamine and ferric chloride to detect blue coloration, and the like.
【００２１】（２）チオール化合物置換ホモシステイン
を利用する方法 本酵素をチオール化合物共存下で、ホモシステインに作
用させるとチオール化合物置換ホモシステインが生成す
る。生成したチオール化合物置換ホモシステインは、後
述するようにＨＰＬＣ分析を行い、そのピーク面積を数
量化することにより定量できる。(2) Method using thiol compound-substituted homocysteine When this enzyme is allowed to act on homocysteine in the presence of a thiol compound, thiol compound-substituted homocysteine is produced. The generated thiol compound-substituted homocysteine can be quantified by performing HPLC analysis as described below and quantifying the peak area.
【００２２】また、より高感度に検出する場合は、ラジ
オアイソトープなどで標識を行ったチオール化合物を用
いて標識チオール化合物置換ホモシステインのピークを
同様にして検出することで可能となる。In addition, detection with higher sensitivity can be achieved by using a thiol compound labeled with a radioisotope or the like and detecting the peak of the labeled thiol compound-substituted homocysteine in the same manner.
【００２３】[0023]
【実施例】以下、試験例及び実施例を挙げて、本発明を
更に詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるもの
ではない。以下の試験例及び実施例では、Ｏ−アセチル
ホモセリン−リアーゼとして、バチルス属由来のＯ−ア
セチルホモセリン−リアーゼ（ユニチカ株式会社製）を
用いた。以下の説明では、上記Ｏ−アセチルホモセリン
−リアーゼを「本酵素」として説明する。EXAMPLES The present invention will be described in more detail with reference to Test Examples and Examples below, but the present invention is not limited to these. In the following Test Examples and Examples, O-acetylhomoserine-lyase derived from Bacillus (manufactured by Unitika Ltd.) was used as O-acetylhomoserine-lyase. In the following description, the O-acetylhomoserine-lyase will be described as “the present enzyme”.
【００２４】試験例１ ２０ｍＭ２−メルカプトエタノール及び１０ｍＭＤＬ−
ホモシステイン（アルドリッチ社）を含有する１００ｍ
Ｍトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に本酵素を添加
し、３７℃で反応させ、経時的に反応液中の生成物と反
応のモルバランスを、表１に示す条件でＨＰＬＣにて分
析した。Test Example 1 20 mM 2-mercaptoethanol and 10 mM DL-
100m containing homocysteine (Aldrich)
This enzyme was added to M Tris / hydrochloric acid buffer (pH 8.5) and reacted at 37 ° C., and the molar balance between the product in the reaction solution and the reaction was analyzed by HPLC under the conditions shown in Table 1 over time. did.
【００２５】[0025]
【表１】 [Table 1]
【００２６】その結果、反応の進行と共にリテンション
タイム６．７分のＤＬ−ホモシステインのピークが減少
し、新たにリテンションタイム７．８分の位置に反応生
成物のピークが現れた。この反応のモルバランスは一致
していた。As a result, as the reaction proceeded, the peak of DL-homocysteine at a retention time of 6.7 minutes decreased, and a peak of a reaction product newly appeared at a position at a retention time of 7.8 minutes. The molar balance of this reaction was consistent.
【００２７】試験例２ ＤＬ−ホモシステインをＬ−メチオニンに換え、試験例
１と同様の条件で反応させた。また、本酵素と同様の作
用を有すると考えられるＬ−メチオニンγ−リアーゼ
（和光純薬株式会社製）を本酵素に換えて添加し、同様
の条件で反応させ、ＨＰＬＣで分析を行った。Test Example 2 DL-homocysteine was replaced with L-methionine and reacted under the same conditions as in Test Example 1. In addition, L-methionine γ-lyase (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), which is considered to have the same action as the present enzyme, was added in place of the present enzyme, reacted under the same conditions, and analyzed by HPLC.
【００２８】その結果、いずれの場合もリテンションタ
イム７．８分の位置に反応生成物のピークが現れた。As a result, in each case, a peak of a reaction product appeared at a position where the retention time was 7.8 minutes.
【００２９】試験例１及び２の結果において、本酵素を
ＤＬ−ホモシステイン及びＬ−メチオニンに作用させた
場合の反応生成物のリテンションタイムが共に一致して
いること、更にＬ−メチオニンγ−リアーゼを作用させ
た場合の反応生成物のリテンションタイムもすべて一致
していることから、本酵素の作用は、下記化学式１及び
化学式２に示す通り、含硫アミノ酸とチオール化合物の
置換反応であることがわかった。In the results of Test Examples 1 and 2, the retention times of the reaction products obtained when the present enzyme was allowed to act on DL-homocysteine and L-methionine were the same, and L-methionine γ-lyase was also observed. Since the retention times of the reaction products in the case of reacting all also match, the action of this enzyme may be a substitution reaction between a sulfur-containing amino acid and a thiol compound as shown in the following chemical formulas 1 and 2. all right.
【００３０】[0030]
【化１】 Embedded image
【００３１】[0031]
【化２】 Embedded image
【００３２】実施例１（ホモシステインの定量） ２００ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）０．２５ｍ
ｌに、２０ｍＭ２−メルカプトエタノールを０．１ｍｌ
加え、さらに各種濃度（０〜１００μＭ）のＬ−ホモシ
スチン（シグマ社製）溶液を０．１ｍｌ加えた後、３７
℃で５分間加温した。その液に、Ｏ−アセチルホモセリ
ン−リアーゼ酵素液（２０ｕ／ｍｌ）を０．０５ｍｌ加
え、３７℃で１０分間反応させた後、３％ＮａＯＨ液を
０．１ｍｌ、１６ｍＭ Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｐ−フェニ
レンジアミン・硫酸塩溶液０．３２５ｍｌ及び１０ｍＭ
塩化第二鉄塩酸溶液０．０７５ｍｌを順次添加し、室温
で１５分放置後、６７０ｎｍの吸光度を測定して検量線
を作成した。その結果を図１に示した。Example 1 (Quantification of homocysteine) 0.25 m of 200 mM Tris-HCl buffer (pH 8.5)
0.1 ml of 20 mM 2-mercaptoethanol
In addition, 0.1 ml of L-homocystin (manufactured by Sigma) solutions of various concentrations (0 to 100 μM) were added, and
Warm at 5 ° C. for 5 minutes. After adding 0.05 ml of an O-acetylhomoserine-lyase enzyme solution (20 u / ml) to the solution and reacting at 37 ° C. for 10 minutes, 0.1 ml of 3% NaOH solution and 16 mM N, N-dimethyl-p were added. -0.325 ml of phenylenediamine / sulfate solution and 10 mM
0.075 ml of a ferric chloride / hydrochloric acid solution was sequentially added, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 15 minutes. Then, the absorbance at 670 nm was measured to prepare a calibration curve. The result is shown in FIG.
【００３３】図１に示されるように、この検量線は、０
〜２００μＭ（Ｌ−ホモシステイン換算）まで直線とな
り、本酵素が触媒する置換反応を利用してホモシステイ
ンの定量が可能であることが分かった。As shown in FIG. 1, this calibration curve is 0
It became a straight line up to ２００200 μM (in terms of L-homocysteine), indicating that homocysteine can be quantified using a substitution reaction catalyzed by the present enzyme.
【００３４】[0034]
【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
ホモシステインを含む試料に、チオール化合物の存在下
で、ホモシステインに反応するアミノ酸合成酵素を作用
させることにより、ホモシステインとチオール化合物の
γ置換反応によって、ホモシステインが特異的に分解さ
れ、硫化水素及びチオール化合物置換ホモシステインが
生成されるので、生成された硫化水素又はチオール化合
物置換ホモシステインを測定することにより、試料中の
ホモシステイン含量を正確にかつ簡便に定量することが
できる。As described above, according to the present invention,
In the presence of a thiol compound, homocysteine is specifically degraded by a γ-substitution reaction between the homocysteine and the thiol compound by allowing an amino acid synthase that reacts with the homocysteine to act on the sample containing the homocysteine. And the thiol compound-substituted homocysteine are generated. By measuring the generated hydrogen sulfide or the thiol compound-substituted homocysteine, the homocysteine content in the sample can be accurately and simply quantified.
【図１】 本発明の方法によりホモシステインを反応さ
せて得た検量線を示す図表である。FIG. 1 is a chart showing a calibration curve obtained by reacting homocysteine according to the method of the present invention.
Claims (3)
化合物の存在下、ホモシステインに反応するアミノ酸合
成酵素を作用させ、生成された硫化水素又はチオール化
合物置換ホモシステインを測定することを特徴とするホ
モシステインの定量法。1. A homozygous method comprising reacting a homocysteine-containing sample with an amino acid synthase that reacts with homocysteine in the presence of a thiol compound, and measuring the generated hydrogen sulfide or thiol compound-substituted homocysteine. Cysteine assay.
酵素が、酵素番号ＥＣクラス４．２．９９に属するＯ−
アセチルホモセリン−リアーゼである請求項１記載のホ
モシステインの定量法。2. The amino acid synthase which reacts with homocysteine is an O-amino acid belonging to enzyme class EC class 4.2.99.
The method for quantifying homocysteine according to claim 1, which is acetylhomoserine-lyase.
酵素を作用させる時、共存させるチオール化合物が、メ
タンチオール、２−メルカプトエタノール、ジチオスレ
イトール、チオグリセロール、システアミンから選ばれ
た１つである請求項１及び２記載のホモシステインの定
量法。3. The method according to claim 1, wherein the thiol compound coexisting with the amino acid synthase reacting with homocysteine is one selected from methanethiol, 2-mercaptoethanol, dithiothreitol, thioglycerol and cysteamine. 3. The method for quantifying homocysteine according to 1 or 2.
Priority Applications (9)
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|---|---|---|---|
| JP34700398A JP4233160B2 (en) | 1998-12-07 | 1998-12-07 | Determination of homocysteine |
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