JP2000166596A - Reagent for measuring urea nitrogen and measurement of urea nitrogen - Google Patents
Reagent for measuring urea nitrogen and measurement of urea nitrogenInfo
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、試料中の尿素窒素
を測定する測定試薬及び測定方法に関するものであり、
イソクエン酸脱水素酵素（ＩＣＤＨ）による共役反応の
停止剤としてトランス−１，２−ジアミノシクロヘキサ
ン−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）又はその
塩を使用するものである。本発明は、特に、化学、生命
科学、及び臨床検査等の分野において有用なものであ
る。本明細書においては、次の略語を使用することもあ
る。 α−ＫＧ ：α−ケトグルタル酸 ＮＡＤＨ ：還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド ＮＡＤＰＨ ：還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸 ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨを示す ＮＡＤ（Ｐ）+ ：ＮＡＤ+又はＮＡＤＰ+を示す ＮＡＤ+ ：酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド ＮＡＤＰ+ ：酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a reagent and a method for measuring urea nitrogen in a sample.
Trans-1,2-diaminocyclohexane-N, N, N ', N'-tetraacetic acid (CyDTA) or a salt thereof is used as a terminator for a conjugation reaction by isocitrate dehydrogenase (ICDH). The invention is particularly useful in fields such as chemistry, life sciences, and clinical testing. The following abbreviations may be used herein. α-KG: α-ketoglutarate NADH: reduced nicotinamide adenine dinucleotide NADPH: reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate NAD (P) H: indicates NADH or NADPH NAD (P) + : NAD + or NADP + NAD + : Oxidized nicotinamide adenine dinucleotide NADP + : Oxidized nicotinamide adenine dinucleotide phosphate
【０００２】[0002]
【従来の技術】試料中の尿素窒素を測定する方法として
一般的に行われている方法は、尿素にウレアーゼを作用
させてアンモニアを生成させ、α−ケトグルタル酸とＮ
ＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの存在下でグルタミン酸脱水素酵
素（ＧＬＤＨ）によってＮＡＤ（Ｐ）ＨからＮＡＤ
（Ｐ）+への変化量を測定するというものである。2. Description of the Related Art A commonly used method for measuring urea nitrogen in a sample is to react urease with urea to produce ammonia, and to produce α-ketoglutaric acid and N
Glutamate dehydrogenase (GLDH) converts NAD (P) H to NAD in the presence of ADH or NADPH.
(P) The amount of change to + is measured.
【０００３】[0003]
【化１】 Embedded image
【０００４】しかしながら、上記式（１）及び（２）に
示されるように、ウレアーゼ反応によりアンモニアを発
生させて尿素窒素を測定しようとするとき、試料中にあ
らかじめアンモニアが存在する場合には、このアンモニ
アが測定値に正誤差を与えるため、尿素窒素を正確に測
定することが出来なかった。そこで、以下の式（３）、
（４）及び（５）に示されるように、尿素にウレアーゼ
反応を行う前に、ＧＬＤＨ反応によって、試料中にあら
かじめ存在するアンモニアをグルタミン酸に分解して消
去する方法が一般的に行われてきた。However, as shown in the above formulas (1) and (2), when ammonia is generated by the urease reaction to measure urea nitrogen, if ammonia is present in the sample beforehand, Urea nitrogen could not be measured accurately because ammonia gives a positive error to the measured values. Therefore, the following equation (3),
As shown in (4) and (5), a method has been generally employed in which, before performing a urease reaction with urea, ammonia previously present in a sample is decomposed into glutamic acid and eliminated by a GLDH reaction. .
【０００５】[0005]
【化２】 Embedded image
【０００６】しかし、この方法も、尿のようにアンモニ
アが高濃度に含まれる試料を測定する際には、このアン
モニアが測定値に正誤差を与える場合がある。このた
め、イソクエン酸脱水素酵素（ＩＣＤＨ）を、マグネシ
ウムイオンやマンガンイオン等の金属イオンの存在下で
作用させることにより、アンモニア消去時にＮＡＤ
（Ｐ）Ｈから変換されたＮＡＤ（Ｐ）+をＮＡＤ（Ｐ）
Ｈへ再生することで、アンモニアの消去能を増加させた
方法が行われている。この反応系は、次の式（６）、
（７）、（８）及び（９）で示される。However, in this method, when measuring a sample containing a high concentration of ammonia such as urine, the ammonia sometimes gives a positive error to the measured value. Therefore, isocitrate dehydrogenase (ICDH) is allowed to act in the presence of a metal ion such as a magnesium ion or a manganese ion so that NAD can be eliminated when ammonia is eliminated.
(P) NAD (P) + converted from H is converted to NAD (P)
A method of increasing the erasing ability of ammonia by regenerating H has been performed. This reaction system has the following formula (6):
(7), (8) and (9).
【０００７】[0007]
【化３】 Embedded image
【０００８】式（６）及び（９）で示されるように、試
料中にあらかじめ存在するアンモニアの消去と尿素を分
解して得たアンモニアの測定は同じ共役反応によって行
われる。すなわち、尿素を分解して得たアンモニアを正
確に測定するためには、試料中のアンモニアの消去が完
了した後に、ＮＡＤ（Ｐ）+をＮＡＤ（Ｐ）Ｈへ再生す
る反応を完了させ、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの量を変換される前
の値にまで回復させた後、この再生反応を完全に停止さ
せることが必要となる。As shown by the equations (6) and (9), the elimination of the ammonia present in the sample and the measurement of the ammonia obtained by decomposing the urea are performed by the same conjugate reaction. That is, in order to accurately measure the ammonia obtained by decomposing urea, after the elimination of ammonia in the sample is completed, the reaction of regenerating NAD (P) + into NAD (P) H is completed, and the NAD After restoring the amount of (P) H to the value before conversion, it is necessary to completely stop the regeneration reaction.
【０００９】このＩＣＤＨによる共役反応を停止させる
方法として、ＩＣＤＨの反応に関与するマグネシウムイ
オンやマンガンイオン等の金属イオンを、金属キレート
剤を添加することによってマスキングする方法が広く知
られている。また、この金属キレート剤としては、一般
的にＥＤＴＡが使用されている。しかしながら、このＥ
ＤＴＡはマグネシウムイオンやマンガンイオン等の金属
イオンを完全にマスキングすることが出来ないため、Ｉ
ＣＤＨによる共役反応を完全に停止させるものではな
い。As a method of stopping the conjugation reaction by ICDH, a method of masking a metal ion such as a magnesium ion or a manganese ion involved in the reaction of ICDH by adding a metal chelating agent is widely known. EDTA is generally used as the metal chelating agent. However, this E
DTA cannot completely mask metal ions such as magnesium ions and manganese ions.
It does not completely stop the conjugation reaction by CDH.
【００１０】[0010]
【発明が解決しようとする課題】前記のように、ＩＣＤ
Ｈによる共役反応を用いて、試料中の尿素窒素を測定す
る場合、試料中にあらかじめ存在するアンモニアの消去
と尿素を分解して得たアンモニアの測定が同じ共役反応
によって行われるため、尿素を分解して得たアンモニア
を正確に測定することが必要となる。このためには、Ｉ
ＣＤＨの反応に関与するマグネシウムイオンやマンガン
イオン等の金属イオンをマスキングすることにより、Ｎ
ＡＤ（Ｐ）Ｈから変換されたＮＡＤ（Ｐ）+をＮＡＤ
（Ｐ）Ｈへ再生する反応を完全に停止させることが必要
となる。すなわち、尿素を分解して得たアンモニアを正
確に測定するためには、試料中のアンモニアの消去が完
了した後に、ＮＡＤ（Ｐ）+をＮＡＤ（Ｐ）Ｈへ再生す
る反応を完了させ、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの量を変換される前
の値にまで回復させた後、この再生反応を完全に停止さ
せることが必要となる。本発明は、アンモニアによる測
定値への正誤差が生じるのを防ぎ、かつＩＣＤＨによる
共役反応を完全に停止させることによって、試料中の尿
素窒素を正確に測定することが出来る測定試薬及び測定
方法の提供を目的とする。As described above, the ICD
When urea nitrogen in a sample is measured using a conjugation reaction with H, the elimination of ammonia present in the sample and the measurement of ammonia obtained by decomposing urea are performed by the same conjugation reaction. It is necessary to accurately measure the ammonia obtained. For this, I
By masking metal ions such as magnesium ions and manganese ions involved in the reaction of CDH, N
NAD (P) + converted from AD (P) H is converted to NAD
(P) It is necessary to completely stop the reaction for regeneration to H. That is, in order to accurately measure the ammonia obtained by decomposing urea, after the elimination of ammonia in the sample is completed, the reaction of regenerating NAD (P) + into NAD (P) H is completed, and the NAD After restoring the amount of (P) H to the value before conversion, it is necessary to completely stop the regeneration reaction. The present invention relates to a measuring reagent and a measuring method capable of accurately measuring urea nitrogen in a sample by preventing the occurrence of a correct error in the measurement value due to ammonia and completely stopping the conjugation reaction by ICDH. For the purpose of providing.
【００１１】[0011]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
を達成するために、鋭意検討を行った結果、イソクエン
酸脱水素酵素（ＩＣＤＨ）による共役反応の停止剤とし
てトランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ，
Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）又はその塩を使用
することにより、ＩＣＤＨによる共役反応を完全に停止
させることを確認して、本発明を完成するに至った。Means for Solving the Problems The present inventors have conducted intensive studies in order to achieve the above object, and as a result, trans-1,2 has been used as a terminator for a conjugation reaction by isocitrate dehydrogenase (ICDH). -Diaminocyclohexane-N,
By using N, N ', N'-tetraacetic acid (CyDTA) or a salt thereof, it was confirmed that the conjugation reaction by ICDH was completely stopped, and the present invention was completed.
【００１２】従って、本発明は、ＩＣＤＨによる共役反
応の停止剤としてＣｙＤＴＡ又はその塩を使用すること
を特徴とする尿素窒素の測定試薬及び測定方法である。Accordingly, the present invention is a reagent and a method for measuring urea nitrogen, wherein CyDTA or a salt thereof is used as a terminator for a conjugation reaction by ICDH.
【００１３】[0013]
【発明の実施の形態】本発明による尿素窒素の測定試薬
及び測定方法は、イソクエン酸脱水素酵素（ＩＣＤＨ）
による共役反応の停止剤としてトランス−１，２−ジア
ミノシクロヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−四酢酸（Ｃｙ
ＤＴＡ）又はその塩を使用することを特徴とするもので
ある。すなわち、試料中にあらかじめ存在するアンモニ
アの消去が完了した後に、反応系にＣｙＤＴＡ又はその
塩を添加し、ＩＣＤＨの反応に関与するマグネシウムイ
オンやマンガンイオン等の金属イオンを、ＣｙＤＴＡ又
はその塩によってマスキングすることにより、ＮＡＤ
（Ｐ）Ｈから変換されたＮＡＤ（Ｐ）+をＮＡＤ（Ｐ）
Ｈへ再生する反応を完全に停止させ、その後、試料中の
尿素窒素の正確な測定を行うものである。この反応系
は、次の式（１０）、（１１）、（１２）、（１３）及
び（１４）で示される。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The reagent and method for measuring urea nitrogen according to the present invention comprise isocitrate dehydrogenase (ICDH).
Trans-1,2-diaminocyclohexane-N, N, N ', N'-tetraacetic acid (Cy
DTA) or a salt thereof. That is, after elimination of ammonia present in the sample is completed, CyDTA or a salt thereof is added to the reaction system, and metal ions such as magnesium ions and manganese ions involved in the reaction of ICDH are masked by CyDTA or a salt thereof. By doing, NAD
(P) NAD (P) + converted from H is converted to NAD (P)
The reaction to regenerate H is completely stopped, and thereafter, the accurate measurement of urea nitrogen in the sample is performed. This reaction system is represented by the following formulas (10), (11), (12), (13) and (14).
【００１４】[0014]
【化４】 Embedded image
【００１５】本発明における、ＣｙＤＴＡの塩として
は、例えば、ナトリウム、カリウム、若しくはリチウム
などのアルカリ金属との塩等を挙げることが出来る。In the present invention, examples of the salt of CyDTA include a salt with an alkali metal such as sodium, potassium or lithium.
【００１６】本発明における、ＩＣＤＨの反応に関与す
る金属イオンとしては、例えば、マグネシウムイオン、
マンガンイオン、鉄イオン、銅イオン、亜鉛イオン、錫
イオン、カルシウムイオン等が挙げられる。In the present invention, the metal ion involved in the reaction of ICDH includes, for example, magnesium ion,
Manganese ions, iron ions, copper ions, zinc ions, tin ions, calcium ions and the like can be mentioned.
【００１７】また、反応系に対するＣｙＤＴＡ又はその
塩の添加量は、測定試薬又は測定反応系に含有される金
属イオンの濃度に対応させるものなので、一概にはいえ
ないものの、ＣｙＤＴＡ又はその塩を金属イオンと等モ
ル濃度以上含有させるのが望ましい。好ましくは、金属
イオン濃度の１０倍以上が望ましい。Although the amount of CyDTA or its salt added to the reaction system corresponds to the concentration of the metal ion contained in the measuring reagent or the measuring reaction system, it cannot be said unconditionally. It is desirable to contain it in an equimolar concentration or more with ions. Preferably, the concentration is at least 10 times the metal ion concentration.
【００１８】本発明において、試料中にあらかじめ存在
するアンモニアとは、内因性アンモニア、測定器具や測
定装置に付着しているアンモニア、或いは他の試薬から
混入したアンモニア等も含めるものとする。In the present invention, the ammonia which is present in the sample in advance includes endogenous ammonia, ammonia adhering to a measuring instrument or a measuring device, or ammonia mixed from another reagent.
【００１９】また、本発明において、試料としては、尿
素窒素を含むものであれば特に限定しない。例えば、ヒ
ト又は動物の血液、血清、血漿、髄液、尿等の体液；ヒ
ト若しくは動物の肝臓、腎臓等の臓器、毛髪等の抽出液
等が挙げられる。In the present invention, the sample is not particularly limited as long as it contains urea nitrogen. Examples thereof include body fluids such as human or animal blood, serum, plasma, cerebrospinal fluid, and urine; and extracts of human or animal organs such as liver and kidney, hair and the like.
【００２０】[0020]
【実施例】以下、実施例により本発明をより具体的に詳
述するが、本発明はこの実施例により限定されるもので
はない。 ［実施例］ （尿素窒素測定試薬におけるＩＣＤＨ反応停止効果の実
証）尿素窒素測定試薬にて、複数濃度のマグネシウムを
含有した試料中の尿素窒素濃度を測定して、ＩＣＤＨ反
応停止効果を確かめた。EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples. [Example] (Demonstration of ICDH reaction termination effect in urea nitrogen measurement reagent) The urea nitrogen concentration in a sample containing a plurality of concentrations of magnesium was measured with a urea nitrogen measurement reagent to confirm the ICDH reaction termination effect.
【００２１】（１）試薬の調製 尿素窒素測定用第１試薬の調製 下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水
に溶解し、ｐＨ７．２（２０℃）に調整したものを調製
した。 測定試薬成分 濃 度 グッド緩衝液 ３０ｍＭ α−ケトグルタル酸 １０ｍＭ イソクエン酸 １０ｍＭ ＮＡＤＰＨ ０．３２ｍＭ ＧＬＤＨ ５，０００単位／Ｌ ＩＣＤＨ １，０００単位／Ｌ(1) Preparation of Reagent Preparation of First Reagent for Urea Nitrogen Measurement The following reagent components were dissolved in pure water so as to have the respective concentrations described, and adjusted to pH 7.2 (20 ° C.). did. Measurement reagent components Concentration Good buffer 30 mM α-ketoglutarate 10 mM Isocitrate 10 mM NADPH 0.32 mM GLDH 5,000 units / L ICDH 1,000 units / L
【００２２】本発明・尿素窒素測定用第２試薬の調製 下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水
に溶解し、ｐＨ７．５（２０℃）に調整したものを調製
した。 測定試薬成分 濃 度 グッド緩衝液 ３５０ｍＭ α−ケトグルタル酸 １０ｍＭ ウレアーゼ ８，１００単位／Ｌ ＣｙＤＴＡ １００ｍＭPreparation of Second Reagent for Measuring Urea Nitrogen of the Present Invention The following reagent components were dissolved in pure water so as to have the respective concentrations described below, and adjusted to pH 7.5 (20 ° C.). Measuring reagent components Concentration Good buffer 350 mM α-Ketoglutaric acid 10 mM Urease 8,100 units / L CyDTA 100 mM
【００２３】対照・尿素窒素測定用第２試薬の調製 下記の試薬成分をそれぞれ記載の濃度になるように純水
に溶解し、ｐＨ７．５（２０℃）に調整したものを調製
した。 測定試薬成分 濃 度 グッド緩衝液 ３５０ｍＭ α−ケトグルタル酸 １０ｍＭ ウレアーゼ ８，１００単位／Ｌ ＥＤＴＡ １５０ｍＭPreparation of Control / Preparation of Second Reagent for Urea Nitrogen Measurement The following reagent components were dissolved in pure water so as to have the concentrations described, respectively, and adjusted to pH 7.5 (20 ° C.). Measurement reagent components Concentration Good buffer 350 mM α-Ketoglutaric acid 10 mM Urease 8,100 units / L EDTA 150 mM
【００２４】（３）尿素窒素の測定 日立製作所製７１７０形自動分析装置にて尿素窒素の測
定を行った。試料には、尿素窒素濃度５００ｍｇ／ｄＬ
の水溶液にマグネシウムを各々４１ｍＭ、８２ｍＭ、１
２３ｍＭ、１６５ｍＭ、２０６ｍＭずつ添加した５種類
のものを用いた。この試料２μＬに各々第１試薬として
尿素窒素測定用第１試薬を２６０μＬ加え３７℃で５分
間反応させた後、第２試薬として尿素窒素測定用第２試
薬を６５μＬ添加し混合液（最終反応液）とした。この
ときの最終反応液中のマグネシウム濃度は、各々０．２
５ｍＭ、０．５０ｍＭ、０．７５ｍＭ、１．０１ｍＭ、
１．２６ｍＭであった。第２試薬添加後３７℃で反応を
行わせ、主波長３４０ｎｍ及び副波長４０５ｎｍにおけ
る第２試薬添加１分３６秒目（２２ポイント）と、第２
試薬添加３分２０秒目（２８ポイント）の吸光度の増加
分より、既知濃度の尿素窒素標準液を測定した時の吸光
度との比例計算によって尿素窒素濃度を求めた。(3) Measurement of Urea Nitrogen Urea nitrogen was measured by a Hitachi 7170 type automatic analyzer. The sample contains a urea nitrogen concentration of 500 mg / dL.
Magnesium in the aqueous solution of 41 mM, 82 mM, 1
Five types were used, each of which was added at 23 mM, 165 mM, and 206 mM. After adding 260 μL of the first reagent for measuring urea nitrogen as the first reagent to each 2 μL of the sample and reacting at 37 ° C. for 5 minutes, 65 μL of the second reagent for measuring urea nitrogen was added as the second reagent, and the mixed solution (final reaction solution) was added. ). At this time, the magnesium concentration in the final reaction solution was 0.2
5 mM, 0.50 mM, 0.75 mM, 1.01 mM,
1.26 mM. After the addition of the second reagent, the reaction was allowed to proceed at 37 ° C.
From the increase in absorbance at 3 minutes and 20 seconds (28 points) at 3 minutes after the addition of the reagent, the urea nitrogen concentration was determined by proportional calculation with the absorbance when a urea nitrogen standard solution of known concentration was measured.
【００２５】（４）測定結果 尿素窒素測定用第１試薬及び、本発明・尿素窒素測定用
第２試薬並びに対照・尿素窒素測定用第２試薬を用い
て、試料中の尿素窒素を測定した時の測定結果を図１に
示した。この図において、横軸は最終反応液中のマグネ
シウム濃度を表し、縦軸は本発明及び対照試薬による尿
素窒素濃度を表す。(4) Measurement Results When urea nitrogen in a sample was measured using the first reagent for measuring urea nitrogen, the second reagent for measuring urea nitrogen and the second reagent for measuring urea nitrogen according to the present invention. FIG. 1 shows the measurement results. In this figure, the horizontal axis represents the magnesium concentration in the final reaction solution, and the vertical axis represents the urea nitrogen concentration according to the present invention and the control reagent.
【００２６】[0026]
【図１】FIG.
【００２７】この図より、対照試薬の場合は、最終反応
液中のマグネシウム濃度が０．５０ｍＭで尿素窒素濃度
に７％の負誤差を示し、マグネシウム濃度が増加する毎
に尿素窒素濃度の負誤差も増加していることが分かる。
これに対して、本発明測定試薬及び測定方法の場合は、
反応液中のマグネシウム濃度が１．２６ｍＭでも、尿素
窒素濃度にはほとんど誤差を生じていないことが分か
る。From this figure, in the case of the control reagent, when the magnesium concentration in the final reaction solution was 0.50 mM, a negative error of 7% was shown in the urea nitrogen concentration. Is also increasing.
In contrast, in the case of the measurement reagent and the measurement method of the present invention,
It can be seen that even if the magnesium concentration in the reaction solution was 1.26 mM, there was almost no error in the urea nitrogen concentration.
【００２８】このことより、本発明測定試薬及び測定方
法においては第１試薬中に添加したＣｙＤＴＡが、マグ
ネシウムをマスキングすることによりＩＣＤＨの活性を
完全に停止させ、正確な尿素窒素濃度を得られることが
確かめられた。From the above, according to the measuring reagent and the measuring method of the present invention, CyDTA added to the first reagent completely stops the activity of ICDH by masking magnesium, thereby obtaining an accurate urea nitrogen concentration. Was confirmed.
【発明の効果】本発明の尿素窒素測定試薬及び測定方法
は、イソクエン酸脱水素酵素（ＩＣＤＨ）による共役反
応の停止剤としてトランス−１，２−ジアミノシクロヘ
キサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）又は
その塩を使用することにより、ＥＤＴＡ等のキレート剤
では完全に停止させることが出来ないＩＣＤＨによる共
役反応を完全に停止させることが出来るものである。従
って、本発明によれば、ＩＣＤＨによる共役反応を用い
て、試料中の尿素窒素を測定する場合、反応系に添加し
たＣｙＤＴＡ又はその塩が、ＩＣＤＨの反応に関与する
マグネシウムイオンやマンガンイオン等の金属イオンを
マスキングすることにより、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈから変換さ
れたＮＡＤ（Ｐ）+をＮＡＤ（Ｐ）Ｈへ再生する反応を
完全に停止させることが出来る。すなわち、試料中のア
ンモニアの消去が完了した後に、ＮＡＤ（Ｐ）+をＮＡ
Ｄ（Ｐ）Ｈへ再生する反応を完了させ、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ
の量を変換される前の値にまで回復させた後、この再生
反応を完全に停止させることが出来る。このため、尿素
を分解して得たアンモニアを正確に測定することが出
来、試料中の尿素窒素の正確な測定を行うことが出来る
ものである。Industrial Applicability The reagent and method for measuring urea nitrogen according to the present invention are used as a terminator for trans-1,2-diaminocyclohexane-N, N, N ', N' as a conjugation reaction by isocitrate dehydrogenase (ICDH). -By using tetraacetic acid (CyDTA) or a salt thereof, a conjugation reaction by ICDH, which cannot be completely stopped by a chelating agent such as EDTA, can be completely stopped. Therefore, according to the present invention, when urea nitrogen in a sample is measured using a conjugation reaction by ICDH, CyDTA or a salt thereof added to the reaction system contains magnesium ions and manganese ions involved in the reaction of ICDH. By masking the metal ions, the reaction of regenerating NAD (P) + converted from NAD (P) H to NAD (P) H can be completely stopped. That is, after the elimination of ammonia in the sample is completed, NAD (P) +
The reaction for regeneration to D (P) H is completed, and NAD (P) H
The regeneration reaction can be completely stopped after restoring the amount of to the value before conversion. Therefore, it is possible to accurately measure ammonia obtained by decomposing urea, and to accurately measure urea nitrogen in a sample.
【図１】尿素窒素測定用第１試薬及び、本発明・尿素窒
素測定用第２試薬並びに対照・尿素窒素測定用第２試薬
を用いて、試料中の尿素窒素を測定した時の測定結果を
示す図面。FIG. 1 shows the measurement results when urea nitrogen in a sample was measured using a first reagent for measuring urea nitrogen, a second reagent for measuring urea nitrogen and a second reagent for measuring urea nitrogen according to the present invention. Drawings shown.
Claims (2)
の停止剤としてトランス−１，２−ジアミノシクロヘキ
サン−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−四酢酸又はその塩を含有する
ことを特徴とする試料中の尿素窒素の測定試薬。1. A sample containing trans-1,2-diaminocyclohexane-N, N, N ', N'-tetraacetic acid or a salt thereof as a terminator for a conjugation reaction by isocitrate dehydrogenase. For measuring urea nitrogen in water.
の停止剤としてトランス−１，２−ジアミノシクロヘキ
サン−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−四酢酸又はその塩を使用する
ことを特徴とする試料中の尿素窒素の測定方法。2. A sample using trans-1,2-diaminocyclohexane-N, N, N ', N'-tetraacetic acid or a salt thereof as a terminator for a conjugation reaction by isocitrate dehydrogenase. For measuring urea nitrogen in air.
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10374988A JP2000166596A (en) | 1998-12-10 | 1998-12-10 | Reagent for measuring urea nitrogen and measurement of urea nitrogen |
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|---|---|---|---|
| JP10374988A JP2000166596A (en) | 1998-12-10 | 1998-12-10 | Reagent for measuring urea nitrogen and measurement of urea nitrogen |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000166596A true JP2000166596A (en) | 2000-06-20 |
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| JP10374988A Withdrawn JP2000166596A (en) | 1998-12-10 | 1998-12-10 | Reagent for measuring urea nitrogen and measurement of urea nitrogen |
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|---|---|
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Cited By (2)
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| US7449305B2 (en) | 2001-10-11 | 2008-11-11 | Arkray, Inc. | Method of pre-treating sample for measuring saccharified amine and method of measuring saccharified amine |
| USRE45074E1 (en) | 2001-10-11 | 2014-08-12 | Arkray, Inc. | Method of pre-treating sample for measuring saccharified amine and method of measuring saccharified amine |
-
1998
- 1998-12-10 JP JP10374988A patent/JP2000166596A/en not_active Withdrawn
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