JP2000093184A

JP2000093184A - 新規酵素及び該酵素をコードするポリヌクレオチド

Info

Publication number: JP2000093184A
Application number: JP10286082A
Authority: JP
Inventors: Keiichi Hiramatsu; 啓一平松; Teruyo Itou; 輝代伊藤; Yuki Katayama; 由紀片山
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1998-09-22
Filing date: 1998-09-22
Publication date: 2000-04-04

Abstract

(57)【要約】【課題】メチシリン耐性に関与する遺伝子を含むSCCm
ecの伝達に関与するポリペプチド及びそれをコードする
遺伝子を提供すること。【解決手段】共同してメチシリン耐性に関与する遺伝
子を含むSCCmecを染色体から部位特異的に切り出し、か
つ部位特異的に挿入する機能を有する酵素 cassette ch
romosome recombinase A（CcrA）及び酵素 cassette ch
romosome recombinase B（CcrB）及びそれをコードする
遺伝子。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規な酵素及び該酵
素をコードするポリヌクレオチドに関する。更に詳しく
は、メチシリン耐性の伝達に関与する酵素及び該酵素を
コードするポリヌクレオチドに関する。

【０００２】

【従来の技術】スタフィロコッカス属は医学上重要な属
である。なかでも、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（me
thicillin resistant Staphyrococcus aureus、以下Ｍ
ＲＳＡ）及びメチシリン耐性コアグラーゼ陰性黄色ブド
ウ球菌（methicillin resistant coagulase-negative S
taphyrococci、以下ＭＲＣ−ＮＳ）は、世界各国の病院
における院内感染の主要な病原菌である。ＭＲＳＡ及び
ＭＲＣ−ＮＳに関しては有効な抗菌薬が限られているた
め、大きな医療問題となっている。ＭＲＳＡの急速な伝
播、及びＭＲＳＡとＭＲＣ−ＮＳに共通したメチシリン
耐性遺伝子が存在することは、ブドウ球菌属の間を伝播
したものであることを示している。メチシリン耐性の伝
搬機構については未だ、解明されていない。したがっ
て、その伝搬機構を早急に解明することが強く望まれて
いる。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
はメチシリン耐性の伝達に関与するポリペプチドを提供
することである。本発明の他の目的は、このようなポリ
ペプチドを組み換え技術により提供することである。本
発明の更に他の目的はこのようなポリペプチドをコード
するポリヌクレオチドを提供することである。本発明の
更に他の目的は前記ポリヌクレオチドを組み込んだベク
ター、該ベクターにより形質転換された宿主を提供する
ことである。本発明の更に他の目的は前記ポリペプチド
に対する抗体を提供することである。本発明の更に他の
目的は前記ポリペプチドの活性を阻害するアンタゴニス
トを提供することである。本発明の他の目的は前記ポリ
ヌクレオチドを利用した診断方法を提供することであ
る。本発明の更に他の目的は前記ベクターを利用する遺
伝子治療を提供することである。本発明の更に他の目的
は以下の記載から明らかになるだろう。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明により、共同して
メチシリン耐性に関与する遺伝子を含むSCCmecを染色体
から部位特異的に切り出し、かつ部位特異的に挿入する
機能を有する酵素 cassette chromosome recombinase A
（以下、CcrA）及び酵素 cassette chromosomerecombin
ase B（以下、CcrB）が提供される。また、本発明によ
り下記(a)〜(c)のいずれかのポリペプチドが提供され
る。 (a)配列番号４〜１０のいずれかのアミノ酸配列を有し
てなるポリペプチド。 (b)ポリペプチド(a)のアミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ
酸配列からなり、かつポリペプチド(a)が有する活性を
有するポリペプチド。 (c)ポリペプチド(a)のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％同一であるアミノ酸配列を有してなるポリペプチ
ド。

【０００５】更に、本発明により下記(d)〜(l)をコード
するポリヌクレオチドが提供される。 (d)配列番号４、配列番号７又は配列番号８のアミノ酸
配列、又は配列番号４及び配列番号７若しくは配列番号
８のアミノ酸配列を有して成るポリペプチド。 (e)ポリペプチド(d)のアミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ
酸配列からなり、かつポリペプチド(d)が有する活性を
有するポリペプチド。 (f)ポリペプチド(d)のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％同一であるアミノ酸配列を有してなるポリペプチ
ド。 (g)配列番号５のアミノ酸配列及び／又は配列番号９の
アミノ酸配列を有して成るポリペプチド。 (h)ポリペプチド(g)のアミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ
酸配列からなり、かつポリペプチド(g)が有する活性を
有するポリペプチド。 (i)ポリペプチド(g)のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％同一であるアミノ酸配列を有してなるポリペプチ
ド。 (j)配列番号６のアミノ酸配列及び／又は配列番号１０
のアミノ酸配列を有して成るポリペプチド。 (k)ポリペプチド(j)のアミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ
酸配列からなり、かつポリペプチド(j)が有する活性を
有するポリペプチド。 (l)ポリペプチド(l)のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％同一であるアミノ酸配列を有してなるポリペプチ
ド。

【０００６】

【発明の実施の形態】以下に本発明を詳細に説明する。
CcrA及びCcrBをコードする遺伝子ｃcrA及びccrBは、Ｍ
ＲＳＡ及びＭＳＣ−ＮＳにおいてメチシリン感受性であ
るＭＳＳＡ及びＭＳＣ−ＮＳには存在しない特有の領域
（Staphylococcal cassette chromosome、以下SCCmec）
上に存在する。ccrA及びccrB遺伝子の産物CcrA及びCcrB
は共同して、SCCmecを染色体から部位特異的に切り出
す。また、CcrA及びCcrBは共同して、SCCmecを染色体上
に部位特異的に挿入する。従って、CcrA及びCcrBはメチ
シリン耐性の伝搬に関与している。

【０００７】本発明者は、日本のＭＲＳＡ臨床分離
（株）Ｎ３１５に特異的に存在する領域のクローニング
を行い、ＭＳＳＡ株ＮＣＴＣ８３２５の塩基配列と比較
することにより、SCCmecの全領域を特定した。なお、SC
Cmecは従来mecDNAとよばれていたもので、今回新たにSC
Cmecと命名した（図１参照）。

【０００８】本発明者はさらにSCCmecの全塩基配列を決
定した。決定した塩基配列の中で、２００塩基以上の塩
基より構成される open reading fame（以下、orf）は
１１２存在した。これらの orf から推定されるアミノ
酸配列を用いて、データベースの検索を行った。その結
果、Ｎ３１５のSCCmec上には、耐性に関与する遺伝子と
してmecA、及びその制御遺伝子群mecI、mecRIに加え
て、マクロライド、リンコスアミド、ストレプトグラミ
ン耐性をコードするブドウ球菌属のトランスポゾンTn55
4がmecAの上流に、mecAの下流にはカナマイシン、トブ
ラマイシン、プレオマイシン耐性をコードするプラスミ
ドpUB110が挿入されていることが明らかになった。転移
に関与する酵素に関しては、トランスポゾンTn554上に
存在するトランポゼースＡ、Ｂ、Ｃ、挿入配列IS431/25
7上のトランポゼースをコードする遺伝子が完全な形で
見いだされた。これに加えてSCCmecのほぼ中央にinvert
ase/resolvase familyに属するsite specific recombin
aseと高いホモロジーを示す二つの蛋白をコードする遺
伝子が見いだされた（図２参照）。本発明者はこれらの
遺伝子をそれぞれcassette chromosome recombinase A
（ccrA）及びcassettechromosome recombinase B（ccr
B）と命名した。

【０００９】SCCmecには少なくとも３つのタイプが存在
することが公知である（Hiramatsu,K., N.Kondo, T.It
o: Genetic basis for molecular epidemiology of MRS
A. J. Infect Chemother. 2 (1996) 117-129）。前記N3
15はタイプ２のSCCmecを有する。そこで、タイプ１SCCm
ecを持つNCTC10442株とタイプ３SCCmecを持つ85/3907株
のSCCmecの塩基配列を部分的に決定し、それぞれのSCCm
ec上に同様にinvertase/resolvase familyに属するsite
specific recombinaseと高いホモロジーを示す二つの
蛋白をコードする遺伝子が存在することを見いだした。
これら３つのタイプのSCCmec上に見いだされた遺伝子に
コードされる蛋白は互いに高い相同性を示している（図
３参照）。そこでタイプ１SCCmecのCcrAはCcrA1、CcrB
はCcrb1、タイプ2SCCmecのCcrAはCcrA2、CcrBはCcrB2、
タイプ3SCCmecのCcrAはCcrA3、CcrBはCcrB3と命名し
た。これらの蛋白質の配列は下記のように配列番号４〜
７、９〜１０に示されている。CcrB2及びCcrB3は５４２
アミノ酸からなるが、Ccrb1の場合は３８３アミノ酸で
あった。配列番号１に記載されている塩基配列のccrB遺
伝子領域に１塩基挿入すると配列番号１５に記載されて
いる塩基配列となる。これは配列番号８に挙げるアミノ
酸から構成され、CcrB2及びCcrB3と高い相同性を示すの
で、これを暫定的にNCTC10442の本来のCcrBとしてCcrB1
とよび、先の３８３アミノ酸からなるものをCcrb1とよ
ぶ。 CcrA1：配列番号４ Ccrb1：配列番号７ CcrB1：配列番号８ CcrA2：配列番号５ CcrB2：配列番号９ CcrA3：配列番号６ CcrB3：配列番号１０

【００１０】配列番号１はNCTC10442、配列番号２はN31
5、配列番号３は85/3907におけるそれぞれのccrA及びcc
rBが存在する領域の塩基配列である。これらの中の各cc
rA及びccrBの配列は次のとおりである。なお、配列番号
１５は配列番号１４に１塩基付加したもので、CcrB1に
対応する。 ccrA1：配列番号１１ ccrb1：配列番号１４ ccrB1：配列番号１５ ccrA2：配列番号１２ ccrB2：配列番号１６ ccrA3：配列番号１３ ccrB3：配列番号１７

【００１１】ccrA及びccrBはＭＲＣ−ＮＳにも存在す
る。これらは配列番号１〜３の塩基配列上に作製したプ
ライマーを用いたＰＣＲ、及びプローブを用いたドット
ブロットハイブリダイゼーション法にて確認することが
できる。

【００１２】本発明のCcrA及びCcrB がＤＮＡの組み換
えをおこす働きのある新規な酵素であることは例えば次
のようなことから明らかである。ＤＮＡの組み換えをお
こす働きのある酵素には、これまでintegrase familyに
属するものとinvertase/resolvase familyに属するもの
が知られている。配列番号４〜１０に示したアミノ酸配
列のＮ末端はinvertase/resolvase familyに属するもの
のＮ末端と高い相同性を示す。Invertaseのアミノ酸数
は１９０前後であり、配列番号４〜１０のアミノ酸配列
はそれに比べて大きい。Resolvaseのアミノ酸数も１９
０前後であり、やはり配列番号４〜１０のアミノ酸配列
はそれに比べて大きい。配列番号４〜９で表されるポリ
ペプチドはLactococcus lactisのバクテリオファージTP
901-1のintegrase（４８６アミノ酸）、B.subtilisの芽
胞形成時に働く酵素spoIVCA（５００アミノ酸）と高い
相同性を示す。

【００１３】ラムダファージなどのバクテリオファージ
及びconjugative transposonの染色体への挿入にはinte
graseとexcisionaseが関与している。これと比較した場
合、CcrA及びCcrBともにintegraseとexcisionaseともア
ミノ酸の相同性は少ない。二つの蛋白が必要であるとい
う点では同じであっても、excisionaseの分子量は６５
〜１１６と小さく、CcrAの大きさとは大きく異なる。ト
ランスポゾンの中でTn3に類似したグループはその転移
に際して、transposaseとresolvaseが関与している。Tr
ansposaseはintegrase familyに属し、ファージのinteg
raseとも相同性を示すが、CcrA及びCcrBとは相同性が少
ない。CcrA及びCcrBはresolvaseと相同性を示すが、res
olvaseのアミノ酸数は１９０前後のものが殆どであり、
その分子量には大きな違いがある。

【００１４】B.cereusのバクテリオファージTP901-1のi
ntegraseはファージ染色体への挿入に働く酵素である
が、この酵素単独でファージの挿入をおこす。spoIVCA
は枯草菌の芽胞形成時に働き、４２ｋｂの領域を脱落さ
せるが、その働きは単独で起こる。SCCmecの挿入及び脱
落にはCcrA及びCcrBの二つの酵素が必要である点でこれ
らの場合と異なっている。以上のように、CcrA及びCcrB
はＤＮＡの組み換えをおこす働きのある酵素としてこれ
まで知られているものとは構造、機能とも全く異なるも
のである。

【００１５】本発明のCcrは以下のような特徴を有す
る。Ccrはinvertase/resolvase familyのsite-specific
recombinaseと同様にｐＩがおのおの10.33、10.17と非
常に塩基性である．多くのsite-specific recombinase
があるなかで、CcrA及びCcrBともにもっとも高いホモロ
ジーを示すものはLactococcus lactisのバクテリオファ
ージTP901-1の持つsite-specific integraseである。si
te-specific recombinaseにはintegrase familyに属す
るものとinvertase/resolvase familyに属するものとが
あるが、TP901-1の持つsite-specificintegraseもinver
tase/resolvase familyに属している。CcrBはまたグラ
ム陽性菌の蛋白、B.subtilisの芽胞形成時に働くsite-s
pecific recombinase、SpoIVCA、Batillus cereusのバ
クテリオファージTp21 ply21のintegrase、Clostridium
perfringensのトランスポゼースと高いホモロジーを示
す。これらのrecombinaseはすべてinvertase/resolvase
familyに共通するＮ末端ドメインの特徴的な構造をも
っている。invertase/resolvase familyに属するsite-s
pecific recombinaseのC末端ドメインは40−60アミノ酸
で構成されが、ＤＮＡbinding siteと見なされるhelix-
turn-helixモチーフを持っている。しかし、CcrA、CcrB
およびこれらと近縁な分子量の大きいsite-specific re
combinaseの場合には、これらの酵素に相当するＣ末端d
omeinの構造はない。そのかわりこの場合にはもっとお
おきなＣ末端ドメイン（300アミノ酸以上）が存在す
る。系統樹を作製するとCcrA、CcrBは最近分離されたsi
te-specific recombinaseとともに、新しいsite-specif
icrecombinaseのsubfamilyを形成していることがわか
る。

【００１６】CcrA及びCcrBをコードするＤＮＡはクロー
ニングしたＤＮＡ断片、及びCcrA及びCcrBをコードする
遺伝子の上流及び下流側に制限酵素の切断部位を含むプ
ライマーを作製してＰＣＲにて増幅して得られる。ベク
ターとしては、シャトルベクター（pYT3，pRIT5など）
が最も一般的であるが、宿主域がせまいもの、あるいは
宿主のなかでは増殖しないベクターであっても、その目
的によっては有効である。また各種発現ベクターに組み
込むことにより、CcrA及びCcrBを多量に、かつ、容易に
生成することが可能となる。作製した組み換えプラスミ
ドはelectroporationにより宿主に挿入する。phageによ
る形質導入（trasduction）、及びcompetent cell作製
後の形質転換（transformation）も使用可能である。本
酵素による遺伝子の挿入は、染色体へ１コピー挿入でき
るため、毒性の高い遺伝子の挿入にも適している。

【００１７】本発明においてはCcrA及びCcrBの抗体を含
む。抗体を製造するには例えば次のようにして行う。抗
原としては上記の方法によりccrA及びccrBを各種発現ベ
クターに組み込み発現させたもの、ブドウ球菌から精製
した蛋白、アミノ酸配列より合成したポリペプチド、及
び該ポリペプチドをキャリアに結合したもの等を用いる
ことができる。ポリクロナール抗体はウサギ、ウマ、ヤ
ギ、ヒツジ等を上記抗原で感作して作成する。またモノ
クローナル抗体の調製にあたっては、まず上記抗原で感
作したマウスの脾臓よりリンパ腺をとりだし、ミエロー
マ細胞（P3U1など）と融合させ、Ccrに対するモノクロ
ーナル抗体を産生するハイブリドーマを調製する。モノ
クローナル抗体は作製したハイブリドーマの培養上清及
び作製したハイブリドーマをマウス腹腔内に投与した腹
水より多量に得ることができる。また、本発明はCcrA及
びCcrBの活性を阻害するアンタゴニストも含む。

【００１８】本発明のccrA及びccrB遺伝子及びその産物
である蛋白CcrA及びCcrBは例えば以下のような用途に有
用である。ccrA(1−3）及びccrB(1-3)に共通した部分の
塩基配列上に作製したプライマーを使用したＰＣＲによ
り、ccr自体の検出が可能となる。またccrA(1−3）及び
ccrB(1-3)それぞれに特異的な部分を認識するプライマ
ーを使用したＰＣＲにより、ccrの型別が可能となる。
またＲＮＡ及びＤＮＡを抽出し、ccr上に作製したプロ
ーブを用いてのハイブリタイゼーションによる検出や型
別も行うことができる。これはＭＲＳＡ、及びＭＲＣ−
ＮＳの検出や疫学の手法として有用である。上記の方法
をもちいれば、ccrがＭＲＳＡ、及びＭＲＣ−ＮＳばか
りではなく、メチシリン感受性のブドウ球菌属、および
他菌種に存在するかを検索することができる。

【００１９】Cccrを媒介とした遺伝子の挿入は一コピー
を染色体上の特定の部位に挿入できるという点で、ある
遺伝子の産物が多量に存在すると細胞にとって有害であ
るような場合には特に有効である。SCCmecの挿入部位は
ブドウ球菌属には広く存在するので、ブドウ球菌属の場
合は、そのままで、各種遺伝子の挿入が可能である。ま
たSCCmecCの挿入部位を持たない菌に関しては、さきに
染色体上にSCCmecの挿入部位を挿入しておけば、その
後、種々の遺伝子をccrを媒介として挿入することが可
能となる。ヒト及び動物の細胞においても同じで、さき
に細胞がSCCmecの挿入部位を保持する状態にしておけ
ば、あとで必要な遺伝子を挿入することによる遺伝子治
療が可能となる。

【００２０】CcrAおよびCcrBは共同してSCCmec染色体か
らの脱落と染色体への挿入をおこす。これらの役割は現
時点では明らかでない。しかしこれらを単独で精製
し、その役割が明らかになれば、特定の塩基配列を切断
制限酵素として用いるとか、あるいは、in vitroでの組
み換え等、遺伝子工学への応用も可能と考えられる。

【００２１】

【実施例】以下、実施例で本発明を説明する。実施例１［CcrA及びCcrBが新規組み換え酵素であることの検証（１）ccr遺伝子により媒介される薬剤耐性の欠損 ccrA2の上流側、ccrB2の下流側に両端にBamH1の切断部
位をもつプライマーを作製し、N315染色体ＤＮＡを鋳型
としてＰＣＲにてccrA及びccrBを含むＤＮＡ断片を増幅
した。このＤＮＡ断片を温度感受性の複製開始点を持つ
シャトルベクターpYT3（３０℃では１４コピー、３７℃
では１コピー、４２℃では複製できない）にクローニン
グし、プラスミドpSRを作製した。同時に、ccrAが一部
欠損したプラスミドpSRA^*、ccrBが一部欠損したプラス
ミドpSRB^*を作成した（図４）。作成したプラスミドをe
lectroporationにより、N315に挿入し、ccrA及びccrB遺
伝子の発現により、SCCmecがN315の染色体から脱落する
かをテストした。SCCmec上にはＤＮＡの複製に関与する
orfは存在していなかっので、切り出されたSCCmecを複
製できないものと考えられた。そこでトブラマイシン耐
性をマーカーとして、耐性を失ったものをSCCmecが脱落
したものと考えることとして以下の実験を行った。

【００２２】細胞内にpYT3、pSR、pSRA^*、及びpSRB^*の
いずれかのプラスミドをもつN315の一つのクローンをテ
トラサイクリン（以下ＴＣ）１０μg/ml及びトブラマイ
シン（以下ＴＯＢ）１０μg/ml含有ブレインハートイン
フュージョンブイヨン（以下BHI-broth））１０mlにて
３０℃で一夜培養する。このときにＴＯＢを加えたの
は、SCCmecの脱落を防ぐためである。翌日これを同じ培
地で１００倍希釈し３０℃にて540nmの吸光度が0.3にな
るまで培養する。つぎにこれを洗浄し、ＴＣ１０μg/ml
含有BHI-brothにて３０℃でさらに２０時間培養した
後、培養液を希釈し、ＴＣ１０μg/ml含有BHI寒天と、
ＴＣ１０μg/ml及びＴＯＢ１０μg/ml含有BHI寒天培地
に塗布し、ＴＯＢ感受性菌の出現頻度を比較した。N31
5、N315(pYT3）、N315(pSRA^*）、N315(pSRB^*）の場合は
ＴＯＢ感受性菌の出現頻度は殆どみられなかった。他
方、N315（pSR）の場合は、数多くのトプラマイシン感
受性菌の割合は全体のpopulationの62.5％となった。

【００２３】またＴＣ１０μg/ml含有BHI寒天に生育し
たコロニーをＴＯＢを含む平板にレプリカし、トブラマ
イシンに対して感受性になったクローンN315ex(pSR）を
得た。次にTCを含まない培地で43℃（プラスミドが複製
できない温度）で培養をしプラスミドを脱落させN315ex
を得た。N315及びN315exの各種薬剤に対する感受性をＮ
ＣＣＬＳの方法に基づいて測定した。最小発育阻止濃度
（minimal growth inhibitory concentration）の値を
比較した場合、オキサシリン、セフチゾキシム、ＴＯ
Ｂ、カナマイシン、ブレオマイシンのＭＩＣはN315の場
合が、それぞれ64、64、256、256、512μg/mlであるの
に対して、N315exの場合は2、4、0.5、2、16μg/mlとな
り、エリスロマイシンの耐性以外はSCCmecの脱落にとも
なって、同時に失われていることが判明した。

【００２４】（２）ccr遺伝子によって媒介されるSCCme
cの脱落のＰＣＲによる確認 N315(pYT3）、N315(pSR）、N315(pSRA^*）、N315(pSR
B^*）及びN315、N315exよりＤＮＡを抽出した。各々の組
み換えプラスミドをN315にeletroporationした後、１６
時間後に平板上に生育してきた単クローンをＴＣ１０μ
g/ml含有BHI-brothに植え、ＤＮＡの抽出に先立ち１６
時間培養する。したがってこの場合にはＴＯＢと接触す
ることなく、３２時間培養したことになる。CL1とcR2
（ＭＳＳＡの染色体上に存在する0.5kbのattB領域（染
色体上のSCCmecの挿入部位を含む領域）を増幅する。SC
Cmecの脱落に伴っても形成される）のプライマーの組み
合わせを使用した時、N315(pYT3）、N315(pSRA^*）、N31
5(pSRB^*）及びN315の場合には、ＤＮＡ断片の増幅は見
られなかった。しかしN315(pSR）の場合にはN315exと同
じＤＮＡ断片の増幅は見られた。

【００２５】N315(pSR）及びN315exの増幅された0.5kの
ＤＮＡ断片の塩基配列を決定し、ＭＳＳＡのものと比較
してみた場合、まったく同じであった。もしもN315(pS
R）におけるSCCmecの脱落が、一定の場所でおこるので
なかったとしたら、ＰＣＲで増幅されるＤＮＡ断片は多
様のものとなり、塩基配列の決定ができる状態にはなら
なかったと思われる。したがって、SCCmecの染色体から
の切り出しは部位特異的におこり、この切り出しにはcc
rA及びccrBの遺伝子が関与していることが示唆された。

【００２６】（３）ccr遺伝子によって媒介されるSCCme
cの環状中間体の形成部位特異的な切り出しによって切り出されたSCCmecは次
に挿入されるまで、環状の中間体を形成すると考えられ
た。この可能性を検討するためにSCCmecの両端に作成し
たプライマー（mR8及びmLl）を用いて、鋳型としてN315
(pYT3）、N315(pSR）、N315(pSRA^*）、N315(pSRB^*）及
びN315、N315exより抽出したＤＮＡを用いＰＣＲをおこ
なった。この二つのプライマーを用いた場合にN315(pS
R）の場合にのみＤＮＡ断片が増幅した。増幅されたＤ
ＮＡ断片の塩基配列を決定すると、SCCmecの右端末端と
左端末端とが組み合わされた形になっており、attSCC(a
ttachment site Staphyrococcal cassette chromosome)
と命名した新しいattachmentsiteが形成されていること
が判明した。この結果はSCCmecが染色体より切り出され
た結果中間体を形成したことをしめしている。

【００２７】（４）ccr遺伝子によって媒介されるプラ
スミドの染色体への挿入 SCCmecが切り出されて形成される中間体はまたSCCmecの
染色体への挿入を媒介している。これはccr遺伝子とatt
SCCを併せ持つプラスミドの使用により実験的に証明さ
れた。このプラスミドはさきに作製したccr遺伝子をも
つプラスミドにattSCCを含むＤＮＡ断片を挿入して作成
した。attSCCを含むＤＮＡ断片は両端にSal1siteを持つ
二つのプライマーmR7及びmL2を用いてN315(pSR）より抽
出されたＤＮＡを鋳型として増幅した。増幅したＤＮＡ
をSal1にて切断し、その結果得られた933bpの断片をプ
ラスミドpYT3に挿入した。つぎにこのSal1断片をpYT3か
ら切り出し、pSR、pSRA^*、pSRB^*に挿入して、pSRatt、p
SRA^*att、pSRB^*att、及びpSRtta、pSRA^*tta、pSRB^*tta
を得た（図５）。pSRttaはpSRattと同じであるが、attS
CCの方向性のみが異なっている。これらの組み替えプラ
スミドをN315exにelectroporationにより挿入し、ＴＣ
１０μg/ml含有BHI寒天平枚にて一夜培養した。

【００２８】これらのtransformantの単コロニーをＴＣ
１０μg/ml含有BHI-brothに540nmのODが0.3になるよう
に浮遊し１０倍段階希釈してBHI寒天平板及びＴＣ１０
μg/ml含有寒天平板に塗布し、プラスミドが保持される
30℃及びプラスミドができない43℃で培養した。すなわ
ち43℃でTC含有平板に生育する場合は、その染色体上に
組み換えプラスミドが挿入されたものと判断できると考
えた。実験は繰り返して３回行い、同様の結果が得られ
ている。その結果、薬剤無添加の場合には３０℃と４３
℃の間で生育してきたコロニー数に差は見られなかっ
た。他方、ＴＣ含有平板の場合、４３℃ではN315ex(pSR
att)、N315ex(pSRtta)の場合以外は集落の形成は観られ
なかった。N315ex(pSRatt)、N315ex(pSRtta)の場合は30
℃での集落と比較してそれぞれ17.7％、21.2％と高い割
合で集落が形成された。この結果はattSCCとccrA及びcc
rB遺伝子が完全な形で存在した場合に染色体への挿入が
おこることを示している。

【００２９】実施例２［ccr遺伝子によって媒介されるプラスミドの染色体へ
の挿入の部位特異性］ccrにより媒介されるプラスミド
の染色体への挿入は特定の部位であり、かつ、その挿入
方向も特異的である。これはN315ex(pSRatt）、N315ex
(pSRtta）及びN315ex(pYT3att）を培養し、そこから抽
出したＤＮＡを用いたＰＣＲにより証明された。プライ
マーとしては以下のプライマーを使用した。染色体上の
SCCmecの挿入部位（attB）上に存在する二つのプライマ
ーL(cL1）及びR(cR2）及びプラスミド上のプライマーα
（pUC119上のRV）及びβ（ccrB上のプライマー）であ
る。プラスミドpSRattが染色体上に挿入されるとプラス
ミドと染色体の接合部位が新たに生じこれらのＬとα、
Ｌとβ、Ｒとα、Ｒとβの組み合わせによりＤＮＡ断片
が増幅されるはずである。しかし、実際にはN315ex(pSR
att）のＤＮＡを鋳型として用いた場合にはＬとβ及び
Ｒとαを使用したＰＣＲの場合のみが検出される。他
方、pSRttaが挿入された場合には、Ｌとα、Ｒとβの組
み合わせのみが検出される。すなわちこれらのプラスミ
ドが染色体上に逆方向に挿入されたものはＰＣＲでは検
出されなかった。このＰＣＲの感度は一万分の１コピー
でも検出できるので、逆方向での挿入はそれ以下の割合
でおこったと考えられる。N315ex(pSR）を鋳型として用
いてＰＣＲにて増幅されたＤＮＡ断片の塩基配列を決定
してみると、プラスミドと染色体の左側及び右側の接合
部位の塩基配列はSCCmec挿入された染色体部分の塩基配
列と同じであった。この事により挿入部位とその方向性
が特異的であるattSCCを介しての、ccr遺伝子により媒
介される挿入が示された。

【００３０】またN315ex(pYT3）、N315ex(pSRA^*att）、
N315ex(pSRB^*att）及びN315ex(pSR）のＤＮＡを用いた
場合には、さきに述べたプライマーの組み合わせ（Ｌと
α、Ｌとβ、Ｒとα、Ｒとβ）では全くＤＮＡ断片の増
幅は見られなかった。このことは、ccr遺伝子に媒介さ
れたプラスミドの染色体への挿入にはccrA及びccrB遺伝
子が完全な形で存在し、かつSCCmec上のattachment sit
e（attSCC）が必要であることを示している。

【００３１】ccr遺伝子よって媒介されるプラスミドの
染色体への挿入の部位特異性は43℃でＴＣ耐性となった
菌を調べた場合にも確認される。electroporation後の
平板に生育した24の個々の独立したコロニーから菌をと
りＴＣ含有平板に塗布して43℃で培養した。さらにこれ
らの平板上の集落からＴＣを含むBHI-brothに１コロニ
ーづつとって４３℃で培養した。ＤＮＡを抽出し、ＰＣ
Ｒを行った場合、SCCmecもattSCCも検出されなかった。
増幅されたのはＬとβ、Ｒとαの組み合わせの場合のみ
であった。この結果より温度感受性を喪失し、テトラサ
イクリン耐性になった株のほとんどはpSRattが挿入部位
に特異的に挿入された結果であると判断された。

【００３２】

【発明の効果】本発明によりメチシリン耐性の伝搬に関
与する新規な蛋白ccrA及びccrB、該蛋白をコードする遺
伝子が提供された。これにより、メチシリン耐性の伝搬
機構が明らかになるとともに、これを利用した診断法
方、遺伝子を染色体に挿入する方法、遺伝子治療に対す
る応用等が可能となる。

【００３３】

【配列表】ＳＥＱＵＥＮＣＥＬＩＳＴＩＮＧ <110> Hiramatsu Keiichi <110> Ito Teruyo <120> A novel enzyme and polynucleotide coding said enzyme <130> 98PJT124 <160> 17 <210> 1 <211> 3020 <212> DNA <213> Staphylococcus aureus <400> 1 gaggaaatac gatgaaacaa gcaataggtt acttacgaca gagcactaca aagcaacaat 60 ccttagcagc acaaaaacaa accatcgagg cattagccaa aaaacataat attcaataca 120 ttacctttta tagcgataag caatcaggac gcactgataa gcggaacggt taccaacaaa 180 ttactgaact gattcaacaa ggacaatgtg atgtattatg ttgttacaga ttaaaccgac 240 ttcatcgcaa tcttaaaaat gcattaaaac tcatgaaatt gtgtcaaaaa taccatgtcc 300 atatcttaag cgttcatgat ggctattttg atatggataa agcattcgat cggctcaaac 360 tcaatatttt catcagcttg gccgaactag aatctgataa tataggcgaa caagtcaaaa 420 atggaatcaa agaaaaagcg aaacaaggta aaatgattac aacacatgca ccctttgggt 480 atcactatca taatggtact ttcacgatag acacagtaaa agcaccaaca gtaaaagctg 540 tgttcaatta ttaccttcaa ggttatggtt ataaaaaaat tgcgcaatac ttagaagctg 600 atgataaatt cattaatcgt aagccctatc aagtgcgtaa tattatcctt aaccctaatt 660 actgtggccg tgttatcaat caatacggac aatatgaaaa catgttccca gctattgtca 720 gtacaacgat atacgaagaa gctcaagtta cccgaactca gaaaccagta aaacgtaagc 780 cgtcagaaaa ccaactcaaa caaaaaatca aatgtcctta ttgtgattca acactaacta 840 atatgaccat tagaaaaaag caccatacat tacgttatta tgtttgtcct caaaatatga 900 atgcatctcg ttttgtctgt gaattcaaag ggatcaacgc acaagaatta gaaacaagtg 960 ttttagcgac ttgtcaggac ttctttcaaa atcaacagct ctattcaaaa ataaaccata 1020 ctattcaaca acgactcaaa agacaaagag atatagaaac taaaactaca ctcaatcacg 1080 agcagctgat agaaaaatta gcccaagaca aaattgatgc agaaacgttc agagaacaaa 1140 cgcaatcatt acgtcagcaa tcaaaaccta tatcatcaat cagtacgtat caaattcgaa 1200 aagctttcca aaacatcatt caacaacgtt tcacgctaaa catgttgtac ccctatattg 1260 atgaaattaa tatttctaaa aataaaagcc tcgctggcat ctatttcaaa aatgaaccac 1320 tgaatattgt aaagcagact atggaattat caattgtata attaaagaaa ggatggatta 1380 taatggataa aatgaagaaa aagcttgtag gaggctacat tcgtgtgtcc acagagagac 1440 aagtagaagg ttatagcata gagggacaaa ttacacaaat agagcaatat tgccaattta 1500 acggctatga acttgttgat atatatgcag atcggggtat atcaggaaaa tctatgaacc 1560 gtcctgaatt acagcgcatg ttaaatgatg ctaaaaatgg aaaattagac tgtgttatgg 1620 tttataaaac aaatcgtttg gcacgtaata cttccgattt acttacaata gtcgaagaac 1680 ttcatcgcca aaatgttgaa ttttttagct tgtctgaacg tatggaagtc aaaaattcaa 1740 caggcaagtt aatgctccag atacttgcaa gtttttccga attcgaaaga aatacaattt 1800 tagagaatat ttacaccgga caacgtcaaa gagctttaga gggctattat caaggcaatc 1860 ttccattagg atataataac atacctgata ataaaaaaga attaatgatt aatcaacatg 1920 aagctaacat cgttaaatat atctttgaat cttatgccaa aggtcatggt tatcgtaaaa 1980 tagccaatgc attcaatcac aaaggctatg tgactaaaaa aggcaatcca tttagtattt 2040 cagctgttac ttatattctc tcaaacccat tctatattgg taaaattcaa ttcgcgaaat 2100 acaaagattg gaatgataaa cgacgtaaag gattaaacga taagccagta atcgctgaag 2160 gtaaacacac gcctattatt agtcaatcat tatgggataa agtgcaagca cgtaagaaac 2220 aagtaagtga aaaaccacaa gtccatggta aaggaaccaa tattttaact ggaataattt 2280 cgtgtcccca atgttctgca cctatggctg cgagtaacac cacaaacaca cttaaagatg 2340 gcactaaaaa cgtattcgtt actattcgtg tagtaatttt cgaaataaag gctcaaaggt 2400 atgttctgcg aatagtgtta gagccgatgt cattgaaaaa tatgttatgg accaaatact 2460 tgaaattgtc aaaagtgata aagttctcaa acaagttgtc gaacgtgtca atcaagagaa 2520 tcaagtcgat gtagctgcac ttaaccatga tattgcttat aaacaacaac aatttgatga 2580 aattagcact aaacttaaaa atctaattca aaccatcgaa gacaatccag acttaacatc 2640 tgcactcaaa ccaaccattc atcaatatga aacacaactg aatgatatca caaaccaaat 2700 taatcaactc aagcaccaac aaaatcaaga gaaaccattt tatgatacta aacaaatcgc 2760 tgctttatta caacgaatat ttcaaaatat agaatccatg gataaatcac agctcaaagc 2820 tttgtaccta acggttattg accgtattga cattcgtaaa gatgagaatc ataaaaagca 2880 attctttgtt acactaaaac ttaataatga aattattaaa caacttttca ataataataa 2940 tctagacgaa gtgcttctca gcacttcgtc tttgtttttg cctcaaacac tctactttca 3000 aatataatat ctatgtactg 3020

【００３４】 <210> 2 <211> 3510 <212> DNA <213> Staphylococcus aureus <400> 2 ttaaatccgc taatgagggg ataggccctt caggagttca cgaagatttc tgattgtctt 60 tatcatacaa ccgtgaagca tcaaactgaa taatcgacgt attgaagata gaacaaataa 120 cggagtgaaa aacatggatg aacttatcga gatattagcc gatttggtaa ttgaagaaat 180 caatcaaatg aatgactaat atgaacgccc aacatcttat tgatgttggg cttatatatc 240 aattcatcca taaatatata ttattactgt gaaaggagga gccgatatga aacaagtcat 300 aggctattta cgtcaaagta cgatgaaaca acaatctctt gcagcacaga aacaggctat 360 cgaagcaata gccgaaaaac atcatattca acatatcaac ttttatagcg acaaacaatc 420 aggacgcaaa gataatcgta gtgggtatcg acaaatgacg caattaattc aacaagggca 480 atgtgacata ttatgttgtt atcgtcttaa tagattacat cgtaatctga aaaatgcatt 540 aaaactcatc aaattatgtc aaacatacca tgttcatatc ttaagcgtac acgatggtta 600 ctttgatatg gatcaagctt tcgaccgatt caagcttaat atttttatca gcttggccga 660 acttgaatca gataacattg gagaacaagt cagaaatggg cttcaagaaa aagcaaagca 720 aggtcgattg attacaaccc atgcgccctt tggttacgaa tatcacaacg gagcattcat 780 catcaatcaa aatgagtcac caacggtaaa ggctgtattc aattattaca ttaaaggtca 840 tggttataag aaaattgcac agttattaga agaagataac acgtatatca atcgacaacc 900 ctatcaagtt cgtaacatta tcatcaatcc taattattgt ggtcgtgtca acaatcaata 960 tggccaattc gacaatatgt ttccttctat tgtttccaca agtatatatg agcaagcgca 1020 gagacttcga tcgcaaaaac aaatcaaaca gacatcttcg gataaccaac taaaacaaaa 1080 aatcaaatgc ccatgttgta atacaacact tacgaatatg accgttagaa aaaagaatca 1140 tacattacgt tactacgtct gtcctaaaaa catgaatgct tctcgctttg tctgtgattt 1200 taaaggcatc aatgcacaaa cacttgaaga taaagtatta gaagtgtgca aagactttta 1260 tcaaaatcaa cgcatctaca caaaaattaa aggtgcgatt gacaaacgca tcaaaagaca 1320 aagaaacata gaaaaacatc acacattgac tcaagaacaa ctgatagaaa agttggcaca 1380 aggcatcatc gatgcagaaa cgttcagaga acaaacgcaa tcattacgtc aacaaccgca 1440 acgcactaca tctatcaatg gacatcaaat acaacacacc attcaaaata ttattcaaaa 1500 acgtttcacg ttaaacatat tgtaccccta tattgaaacc attcacatta cgaaagataa 1560 aaatcttata ggaatctatt tcaaaaatga accactcaat atcgtcaatc aaaccatgca 1620 atcatcgatt gcataaacga agaaaggatg aaacataatg caacaactta aaacaaaacg 1680 tgtcggtatc tatgtacgtg tatcaacaga aatgcaaagc acagaaggtt atagtatcga 1740 cggacaaatc aatcaaatca aagaatactg tgacttccat cattttgaag ttaaagatat 1800 atacgctgac cgtggtattt caggtaaatc tatgaatcga cctgagctcc aacgtatatt 1860 gaaggatgcg aaagaaggct atatcgactg tgttatggtc tacaaaacaa accgattagc 1920 tcgtaataca tctgatcttc tcaaaattgt cgaagattta cacaaacaaa atgtcgaatt 1980 tttcagttta tcagagcgta tggaagtcaa tacttcatcg ggtaagctca tgttacaaat 2040 acttgcgagt ttctcagaat tcgaacgtaa taacattgtc gagaatgtat ttatgggtca 2100 aacgagacgt gcccaagaag gctattatca aggcaatttg ccgctgggct atgacaaaat 2160 acctaatagt aaacatgaac tgatgattaa tcaacatgaa gctaatattg tgaaatatat 2220 attcgagtcc tatgccaaag gccatggcta tcgtaaaata gccaatgcat taaatcacaa 2280 aggctatgtc actaaaaagg gtaaaccttt tagtattagt tctatcacat atatattagc 2340 taacccattc tatatcggca aaattcaatt tgcgaaatac aaagattgga gtgaaaaacg 2400 tcgtaaaggg cttaatgata aaccagtgat agctgaaggt aagcattccc ccattattaa 2460 tcaagattta tgggataaag tacaaatgcg taaaaaacaa gtcagtcaaa aaccccaagt 2520 ccatggcaaa ggaacgaatc tgcttacagg cattattcac tgtccccaat gtggcgcacc 2580 tatggcagca agcaatacca cgaatacact taaagacggg actaagaaac gtattcgtta 2640 ctattcatgt agtaattttc ggaacaaggg ttccaaagta tgttcggcaa acagtgtaag 2700 agctgatgtg attgaagatt atgtgatgaa gcaaatactt gaaatagtca aaagtgataa 2760 agtcattcaa cgcgtagtaa cacacgtcaa tcaagaaaat caagttgatg gcgctgcact 2820 tcatcacgat attgcttata agcaacaaca atatgatgaa gtacaaatca aactaaataa 2880 cttgattaaa accatcgagg ataatccgga cttaacatca gtaatcagac caagtattca 2940 aaaatatgaa aagcaactca atgacattac gaatcaaatc aaccaactca aaaatcaaca 3000 aaatgaagat aagcctttat ttgatgccaa agaaatcagt aaactattac aacacatctt 3060 tcatgatatt aagcacatag aaaaatctcg actcaaagca ttgtatctat cagtgattga 3120 tcgcattgat attaaaaaag atggtaatca taaaaaacaa ttctatgtca cactcaaact 3180 taataacgaa atcataaaac aacttttcaa taataaacaa ctcgacgaag tgcatctcag 3240 cacttcgtct ttgtttttgc cccaaacact atatcttact atttagctaa tagaatcatt 3300 gttataacaa taattttcat tatattcttt catttatttt atctaaccat ttttaaaatt 3360 ctctttatca atttcaataa cacttatcta atgaaacagt cattgtcgta atttttttca 3420 taactacacg atgcttatat tgaaattgct aaagaacatc ccacaatgat tttttatcgg 3480 gaaatgattg ggatttgcag attcgaagaa 3510

【００３５】 <210> 3 <211> 3383 <212> DNA <213> Staphylococcus aureus <400> 3 attagccgat ctggttattg aagaaatcaa tcacgctgat gactaataat accgcccaac 60 acccgactgg tgttgggctt atctataatt tcgttcataa atatatatta tctctttgaa 120 aggaggaaat actatgaaac gagccattgg ttatttgcgc caaagtacaa cgaaacaaca 180 atcactccca gctcaaaagc aagcaataga attattagct ccaaagcaca atattcaaaa 240 tatccaatac attagtgata agcaatcagg cagaacagat aatcgaacag gctatcaaca 300 agtcaccgaa cgcatccaac aaagacaatg tgacgtatta tgttgttatc gcttgaatcg 360 acttcatcgc aacttgaaaa atgcattaaa actcatgaaa ctctgtcaaa aatatcatgt 420 tcatattcta agtgttcatg atggctattt tgatatggat aaagcgtttg atcgcctaaa 480 actcaatata ttcatgagtc tggctgaact tgaatccgat aatattggag aacaagtcaa 540 aaatggactt agagaaaagg caaaacaagg taaactcata acgacccatg cgcctttcgg 600 ttatcactat caaaatggta ctttcatcat taataatgat gaatcaccta ccgtcaaagc 660 tgtattcaat tattatcttc aaggatatgg ctacaagaag attgcacaat atttagaaga 720 cgataataaa cttattaccc gcaagcctta tcaggtacga aatataatta tgaacccaaa 780 ttattgtggt cgtgtcatca atcaatatgg tcaatataac aatatggtac cacctattgt 840 ttcggcaacg aaatatgaac atgctcaagc aatccgtaat aagaagcaac ttcactgtat 900 accttcagag aatcagctga aacaaaagat caaatgtcct tgttgtgact caacactgac 960 aaatatgaca ataagaaaaa aacatacatt gcgatattat atttgtccta aaaatatgaa 1020 tgaatctcgc tttgtctgtt cattcaaagg aataaatgca caaaaattag aagttcaagt 1080 cttagctaca tgtcagaact tctttcaaaa ccaacagctc tattcaaaaa ttaataatgc 1140 aattcatcaa cgcctcaaaa aacaaagagt gatagaagct aaaagtacgc taactcaaga 1200 acaactgata gataaacttg ccaaaggtat gattgatgct gaatcattca gaaaacagac 1260 tcatttgatg aatcaaaagc acaaaaccat atcctccata agtgataatc agttacaaac 1320 atcactacaa aaggttatac agaaaagttt cacgttaaac atgctgcatc cctatattga 1380 tgaaattcgc attacaaaaa ataaagccct tgttgggatc tatttcaaaa atgaaccatt 1440 gaacattgtg aaccaaacct cgcaatcatc gattgcttaa tcagaaagga tgaaaaaatc 1500 atgcaacaac tcaaacaaaa acgtgtcggt atctatgttc gtgtatcaac ggaaatccaa 1560 agtactgaag gctatagtat cgatggacaa atcaatcaaa ttcgagaata ttgtgatttc 1620 aataactttg ttgttgtaga tgtatacgcg gatagaggta tctctggaaa atctatgaac 1680 cgaccagaac tacaacgttt gttaaaagat gcgaacgaag gtcagattga ttctgttatg 1740 gtctacaaaa caaaccgact agcacgtaac acttctgact tactcaaaat tgttgaagac 1800 cttcatcgtc aaaatgtcga attcttcagc ttatctgagc gtatggaagt caatacaagc 1860 agtggtaaat tgatgctaca aattctagcg agtttttcag aatttgaaag aaataatatt 1920 gtcgaaaatg tattcatggg tcaaacccga cgcgctcaag aaggctatta tcaaggcaat 1980 ttgccgctgg gctatgacaa aataccggat agcaagcatg aactcatgat aaaccaacat 2040 gaagcgaata ttgtcaaata tatatttgag tcatatgcta aaggccacgg atatcgtaaa 2100 attgcgaatg cactcaatca caaaggatac gtgactaaaa aaggaaagcc tttcagtatt 2160 ggttcagtga cctatatctt atctaatcca ttctatgttg gtaaaattca attcgcaaag 2220 tacaaagatt ggaatgaaaa gcgtcgtaaa gggctgaatg ataaaccaat aatagctgaa 2280 ggtaagcatt cccctattat tattcaagac ttatgggata aagtccaatt acgtaaaaaa 2340 caagtcagtc aaaaacctca agtccacggt aaaggaacta atctattaac aggtatcgtt 2400 cattgtccac aatgtggtgc accaatggca gctagtaaca caacgaacac attgaaagat 2460 ggtaccaaga agcgaatacg ttattattct tgcagtaact tccgaaacaa aggctcaaaa 2520 gtatgttctg cgaatagcgt tagagctgat gtgattgaga aatacgtcat ggatcaaata 2580 ctcgaaattg tcaaaagtga taaagtcatt aaccaagtct tagaacgtgt caatcaagaa 2640 aataaagtcg atattggtgc attgaaccac gatatcgctt ataaacaaca acaatacgat 2700 gaagtcagcg ggaaactcca taatttagtt aaaaccattg aagataatcc ggacctaaca 2760 tctgcattga aagcaactat tcatcaatat gaaacacaac tcaatgacat tacaaatcaa 2820 atgaatcaac tcaaacagca acaaaatcaa gagaaactat cttatgatac gaaacaaatc 2880 gctgccctat tacaacgaat atttcaaaat atagaatcaa tggataaagc acaactcaaa 2940 gcattatatc ttacagtcat tgaccgtatt gatattcgta aagacggtaa tcataaaaaa 3000 cagttctacg ttacactaaa actcaataat gaaattatta aacaactttt caataatccc 3060 cctctcgacg aagtgctcct cagcacttcg tctttatttt tgcctcaaac gctctttctt 3120 caaatctaat atctatgtac tgtcctttcg tcattcaata acacccatct aacgaatctt 3180 ttcaacatac taacaagtca caactcaatg tgaagcttat attgtatgac gaaagaacat 3240 cccaaaataa aatatgaacg ggatagcaat gggatttgat aaatacatgt aggataagga 3300 ttacgcaagc gtaatcccga aatcccatta ttatttataa ataaataata taaaaagaaa 3360 aagtaagtcg tactgacacc accaaatc 3388

【００３６】 <210> 4 <211> 449 <212> PRT <213> Staphylococcus aureus <400> 4 Met Lys Gln Ala Ile Gly Tyr Leu Arg Gln Ser Thr Thr Lys Gln Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ala Ala Gln Lys Gln Thr Ile Glu Ala Leu Ala Lys Lys His 20 25 30 Asn Ile Gln Tyr Ile Thr Phe Tyr Ser Asp Lys Gln Ser Gly Arg Thr 35 40 45 Asp Lys Arg Asn Gly Tyr Gln Gln Ile Thr Glu Leu Ile Gln Gln Gly 50 55 60 Gln Cys Asp Val Leu Cys Cys Tyr Arg Leu Asn Arg Leu His Arg Asn 65 70 75 80 Leu Lys Asn Ala Leu Lys Leu MET Lys Leu Cys Gln Lys Tyr His Val 85 90 95 His Ile Leu Ser Val His Asp Gly Tyr Phe Asp MET Asp Lys Ala Phe 100 105 110 Asp Arg Leu Lys Leu Asn Ile Phe Ile Ser Leu Ala Glu Leu Glu Ser 115 120 125 Asp Asn Ile Gly Glu Gln Val Lys Asn Gly Ile Lys Glu Lys Ala Lys 130 135 140 Gln Gly Lys MET Ile Thr Thr His Ala Pro Phe Gly Tyr His Tyr His 145 150 155 160 Asn Gly Thr Phe Thr Ile Asp Thr Val Lys Ala Pro Thr Val Lys Ala 165 170 175 Val Phe Asn Tyr Tyr Leu Gln Gly Tyr Gly Tyr Lys Lys Ile Ala Gln 180 185 190 Tyr Leu Glu Ala Asp Asp Lys Phe Ile Asn Arg Lys Pro Tyr Gln Val 195 200 205 Arg Asn Ile Ile Leu Asn Pro Asn Tyr Cys Gly Arg Val Ile Asn Gln 210 215 220 Tyr Gly Gln Tyr Glu Asn Met Phe Pro Ala Ile Val Ser Thr Thr Ile 225 230 235 240 Tyr Glu Glu Ala Gln Val Thr Arg Thr Gln Lys Pro Val Lys Arg Lys 245 250 255 Pro Ser Glu Asn Gln Leu Lys Gln Lys Ile Lys Cys Pro Tyr Cys Asp 260 265 270 Ser Thr Leu Thr Asn Met Thr Ile Arg Lys Lys His His Thr Leu Arg 275 280 285 Tyr Tyr Val Cys Pro Gln Asn Met Asn Ala Ser Arg Phe Val Cys Glu 290 295 300 Phe Lys Gly Ile Asn Ala Gln Glu Leu Glu Thr Ser Val Leu Ala Thr 305 310 315 320 Cys Gln Asp Phe Phe Gln Asn Gln Gln Leu Tyr Ser Lys Ile Asn His 325 330 335 Thr Ile Gln Gln Arg Leu Lys Arg Gln Arg Asp Ile Glu Thr Lys Thr 340 345 350 Thr Leu Asn His Glu Gln Leu Ile Glu Lys Leu Ala Gln Asp Lys Ile 355 360 365 Asp Ala Glu Thr Phe Arg Glu Gln Thr Gln Ser Leu Arg Gln Gln Ser 370 375 380 Lys Pro Ile Ser Ser Ile Ser Thr Tyr Gln Ile Arg Lys Ala Phe Gln 385 390 395 400 Asn Ile Ile Gln Gln Arg Phe Thr Leu Asn Met Leu Tyr Pro Tyr Ile 405 410 415 Asp Glu Ile Asn Ile Ser Lys Asn Lys Ser Leu Ala Gly Ile Tyr Phe 420 425 430 Lys Asn Glu Pro Leu Asn Ile Val Lys Gln Thr Met Glu Leu Ser Ile 435 440 445 Val

【００３７】 <210> 5 <211> 449 <212> PRT <213> Staphylococcus aureus <400> 5 Met Lys Gln Val Ile Gly Tyr Leu Arg Gln Ser Thr Met Lys Gln Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ala Ala Gln Lys Gln Ala Ile Glu Ala Ile Ala Glu Lys His 20 25 30 His Ile Gln His Ile Asn Phe Tyr Ser Asp Lys Gln Ser Gly Arg Lys 35 40 45 Asp Asn Arg Ser Gly Tyr Arg Gln Met Thr Gln Leu Ile Gln Gln Gly 50 55 60 Gln Cys Asp Ile Leu Cys Cys Tyr Arg Leu Asn Arg Leu His Arg Asn 65 70 75 80 Leu Lys Asn Ala Leu Lys Leu Ile Lys Leu Cys Gln Thr Tyr His Val 85 90 95 His Ile Leu Ser Val His Asp Gly Tyr Phe Asp Met Asp Gln Ala Phe 100 105 110 Asp Arg Phe Lys Leu Asn Ile Phe Ile Ser Leu Ala Glu Leu Glu Ser 115 120 125 Asp Asn Ile Gly Glu Gln Val Arg Asn Gly Leu Gln Glu Lys Ala Lys 130 135 140 Gln Gly Arg Leu Ile Thr Thr His Ala Pro Phe Gly Tyr Glu Tyr His 145 150 155 160 Asn Gly Ala Phe Ile Ile Asn Gln Asn Glu Ser Pro Thr Val Lys Ala 165 170 175 Val Phe Asn Tyr Tyr Ile Lys Gly His Gly Tyr Lys Lys Ile Ala Gln 180 185 190 Leu Leu Glu Glu Asp Asn Thr Tyr Ile Asn Arg Gln Pro Tyr Gln Val 195 200 205 Arg Asn Ile Ile Ile Asn Pro Asn Tyr Cys Gly Arg Val Asn Asn Gln 210 215 220 Tyr Gly Gln Phe Asp Asn Met Phe Pro Ser Ile Val Ser Thr Ser Ile 225 230 235 240 Tyr Glu Gln Ala Gln Arg Leu Arg Ser Gln Lys Gln Ile Lys Gln Thr 245 250 255 Ser Ser Asp Asn Gln Leu Lys Gln Lys Ile Lys Cys Pro Cys Cys Asn 260 265 270 Thr Thr Leu Thr Asn Met Thr Val Arg Lys Lys Asn His Thr Leu Arg 275 280 285 Tyr Tyr Val Cys Pro Lys Asn Met Asn Ala Ser Arg Phe Val Cys Asp 290 295 300 Phe Lys Gly Ile Asn Ala Gln Thr Leu Glu Asp Lys Val Leu Glu Val 305 310 315 320 Cys Lys Asp Phe Tyr Gln Asn Gln Arg Ile Tyr Thr Lys Ile Lys Gly 325 330 335 Ala Ile Asp Lys Arg Ile Lys Arg Gln Arg Asn Ile Glu Lys His His 340 345 350 Thr Leu Thr Gln Glu Gln Leu Ile Glu Lys Leu Ala Gln Gly Ile Ile 355 360 365 Asp Ala Glu Thr Phe Arg Glu Gln Thr Gln Ser Leu Arg Gln Gln Pro 370 375 380 Gln Arg Thr Thr Ser Ile Asn Gly His Gln Ile Gln His Thr Ile Gln 385 390 395 400 Asn Ile Ile Gln Lys Arg Phe Thr Leu Asn Ile Leu Tyr Pro Tyr Ile 405 410 415 Glu Thr Ile His Ile Thr Lys Asp Lys Asn Leu Ile Gly Ile Tyr Phe 420 425 430 Lys Asn Glu Pro Leu Asn Ile Val Asn Gln Thr Met Gln Ser Ser Ile 435 440 445 Ala

【００３８】 <210> 6 <211> 448 <212> PRT <213> Staphylococcus aureus <400> 6 Met Lys Arg Ala Ile Gly Tyr Leu Arg Gln Ser Thr Thr Lys Gln Gln 1 5 10 15 Ser Leu Pro Ala Gln Lys Gln Ala Ile Glu Leu Leu Ala Pro Lys His 20 25 30 Asn Ile Gln Asn Ile Gln Tyr Ile Ser Asp Lys Gln Ser Gly Arg Thr 35 40 45 Asp Asn Arg Thr Gly Tyr Gln Gln Val Thr Glu Arg Ile Gln Gln Arg 50 55 60 Gln Cys Asp Val Leu Cys Cys Tyr Arg Leu Asn Arg Leu His Arg Asn 65 70 75 80 Leu Lys Asn Ala Leu Lys Leu Met Lys Leu Cys Gln Lys Tyr His Val 85 90 95 His Ile Leu Ser Val His Asp Gly Tyr Phe Asp Met Asp Lys Ala Phe 100 105 110 Asp Arg Leu Lys Leu Asn Ile Phe Met Ser Leu Ala Glu Leu Glu Ser 115 120 125 Asp Asn Ile Gly Glu Gln Val Lys Asn Gly Leu Arg Glu Lys Ala Lys 130 135 140 Gln Gly Lys Leu Ile Thr Thr His Ala Pro Phe Gly Tyr His Tyr Gln 145 150 155 160 Asn Gly Thr Phe Ile Ile Asn Asn Asp Glu Ser Pro Thr Val Lys Ala 165 170 175 Val Phe Asn Tyr Tyr Leu Gln Gly Tyr Gly Tyr Lys Lys Ile Ala Gln 180 185 190 Tyr Leu Glu Asp Asp Asn Lys Leu Ile Thr Arg Lys Pro Tyr Gln Val 195 200 205 Arg Asn Ile Ile Met Asn Pro Asn Tyr Cys Gly Arg Val Ile Asn Gln 210 215 220 Tyr Gly Gln Tyr Asn Asn Met Val Pro Pro Ile Val Ser Ala Thr Lys 225 230 235 240 Tyr Glu His Ala Gln Ala Ile Arg Asn Lys Lys Gln Leu His Cys Ile 245 250 255 Pro Ser Glu Asn Gln Leu Lys Gln Lys Ile Lys Cys Pro Cys Cys Asp 260 265 270 Ser Thr Leu Thr Asn Met Thr Ile Arg Lys Lys His Thr Leu Arg Tyr 275 280 285 Tyr Ile Cys Pro Lys Asn Met Asn Glu Ser Arg Phe Val Cys Ser Phe 290 295 300 Lys Gly Ile Asn Ala Gln Lys Leu Glu Val Gln Val Leu Ala Thr Cys 305 310 315 320 Gln Asn Phe Phe Gln Asn Gln Gln Leu Tyr Ser Lys Ile Asn Asn Ala 325 330 335 Ile His Gln Arg Leu Lys Lys Gln Arg Val Ile Glu Ala Lys Ser Thr 340 345 350 Leu Thr Gln Glu Gln Leu Ile Asp Lys Leu Ala Lys Gly Met Ile Asp 355 360 365 Ala Glu Ser Phe Arg Lys Gln Thr His Leu Met Asn Gln Lys His Lys 370 375 380 Thr Ile Ser Ser Ile Ser Asp Asn Gln Leu Gln Thr Ser Leu Gln Lys 385 390 395 400 Val Ile Gln Lys Ser Phe Thr Leu Asn Met Leu His Pro Tyr Ile Asp 405 410 415 Glu Ile Arg Ile Thr Lys Asn Lys Ala Leu Val Gly Ile Tyr Phe Lys 420 425 430 Asn Glu Pro Leu Asn Ile Val Asn Gln Thr Ser Gln Ser Ser Ile Ala 435 440 445

【００３９】 <210> 7 <211> 383 <212> PRT <213> Staphylococcus aureus <400> 7 Met Asp Lys Met Lys Lys Lys Leu Val Gly Gly Tyr Ile Arg Val Ser 1 5 10 15 Thr Glu Arg Gln Val Glu Gly Tyr Ser Ile Glu Gly Gln Ile Thr Gln 20 25 30 Ile Glu Gln Tyr Cys Gln Phe Asn Gly Tyr Glu Leu Val Asp Ile Tyr 35 40 45 Ala Asp Arg Gly Ile Ser Gly Lys Ser Met Asn Arg Pro Glu Leu Gln 50 55 60 Arg Met Leu Asn Asp Ala Lys Asn Gly Lys Leu Asp Cys Val Met Val 65 70 75 80 Tyr Lys Thr Asn Arg Leu Ala Arg Asn Thr Ser Asp Leu Leu Thr Ile 85 90 95 Val Glu Glu Leu His Arg Gln Asn Val Glu Phe Phe Ser Leu Ser Glu 100 105 110 Arg Met Glu Val Lys Asn Ser Thr Gly Lys Leu Met Leu Gln Ile Leu 115 120 125 Ala Ser Phe Ser Glu Phe Glu Arg Asn Thr Ile Leu Glu Asn Ile Tyr 130 135 140 Thr Gly Gln Arg Gln Arg Ala Leu Glu Gly Tyr Tyr Gln Gly Asn Leu 145 150 155 160 Pro Leu Gly Tyr Asn Asn Ile Pro Asp Asn Lys Lys Glu Leu Met Ile 165 170 175 Asn Gln His Glu Ala Asn Ile Val Lys Tyr Ile Phe Glu Ser Tyr Ala 180 185 190 Lys Gly His Gly Tyr Arg Lys Ile Ala Asn Ala Phe Asn His Lys Gly 195 200 205 Tyr Val Thr Lys Lys Gly Asn Pro Phe Ser Ile Ser Ala Val Thr Tyr 210 215 220 Ile Leu Ser Asn Pro Phe Tyr Ile Gly Lys Ile Gln Phe Ala Lys Tyr 225 230 235 240 Lys Asp Trp Asn Asp Lys Arg Arg Lys Gly Leu Asn Asp Lys Pro Val 245 250 255 Ile Ala Glu Gly Lys His Thr Pro Ile Ile Ser Gln Ser Leu Trp Asp 260 265 270 Lys Val Gln Ala Arg Lys Lys Gln Val Ser Glu Lys Pro Gln Val His 275 280 285 Gly Lys Gly Thr Asn Ile Leu Thr Gly Ile Ile Ser Cys Pro Gln Cys 290 295 300 Ser Ala Pro Met Ala Ala Ser Asn Thr Thr Asn Thr Leu Lys Asp Gly 305 310 315 320 Thr Lys Asn Val Phe Val Thr Ile Arg Val Val Ile Phe Glu Ile Lys 325 330 335 Ala Gln Arg Tyr Val Leu Arg Ile Val Leu Glu Pro Met Ser Leu Lys 340 345 350 Asn Met Leu Trp Thr Lys Tyr Leu Lys Leu Ser Lys Val Ile Lys Phe 355 360 365 Ser Asn Lys Leu Ser Asn Val Ser Ile Lys Arg Ile Lys Ser Met 370 375 380

【００４０】 <210> 8 <211> 541 <212> PRT <213> Staphylococcus aureus <400> 8 Met Asp Lys Met Lys Lys Lys Leu Val Gly Gly Tyr Ile Arg Val Ser 1 5 10 15 Thr Glu Arg Gln Val Glu Gly Tyr Ser Ile Glu Gly Gln Ile Thr Gln 20 25 30 Ile Glu Gln Tyr Cys Gln Phe Asn Gly Tyr Glu Leu Val Asp Ile Tyr 35 40 45 Ala Asp Arg Gly Ile Ser Gly Lys Ser Met Asn Arg Pro Glu Leu Gln 50 55 60 Arg Met Leu Asn Asp Ala Lys Asn Gly Lys Leu Asp Cys Val Met Val 65 70 75 80 Tyr Lys Thr Asn Arg Leu Ala Arg Asn Thr Ser Asp Leu Leu Thr Ile 85 90 95 Val Glu Glu Leu His Arg Gln Asn Val Glu Phe Phe Ser Leu Ser Glu 100 105 110 Arg Met Glu Val Lys Asn Ser Thr Gly Lys Leu Met Leu Gln Ile Leu 115 120 125 Ala Ser Phe Ser Glu Phe Glu Arg Asn Thr Ile Leu Glu Asn Ile Tyr 130 135 140 Thr Gly Gln Arg Gln Arg Ala Leu Glu Gly Tyr Tyr Gln Gly Asn Leu 145 150 155 160 Pro Leu Gly Tyr Asn Asn Ile Pro Asp Asn Lys Lys Glu Leu Met Ile 165 170 175 Asn Gln His Glu Ala Asn Ile Val Lys Tyr Ile Phe Glu Ser Tyr Ala 180 185 190 Lys Gly His Gly Tyr Arg Lys Ile Ala Asn Ala Phe Asn His Lys Gly 195 200 205 Tyr Val Thr Lys Lys Gly Asn Pro Phe Ser Ile Ser Ala Val Thr Tyr 210 215 220 Ile Leu Ser Asn Pro Phe Tyr Ile Gly Lys Ile Gln Phe Ala Lys Tyr 225 230 235 240 Lys Asp Trp Asn Asp Lys Arg Arg Lys Gly Leu Asn Asp Lys Pro Val 245 250 255 Ile Ala Glu Gly Lys His Thr Pro Ile Ile Ser Gln Ser Leu Trp Asp 260 265 270 Lys Val Gln Ala Arg Lys Lys Gln Val Ser Glu Lys Pro Gln Val His 275 280 285 Gly Lys Gly Thr Asn Ile Leu Thr Gly Ile Ile Ser Cys Pro Gln Cys 290 295 300 Ser Ala Pro Met Ala Ala Ser Asn Thr Thr Asn Thr Leu Lys Asp Gly 305 310 315 320 Thr Lys Lys Arg Ile Arg Tyr Tyr Ser Cys Ser Asn Phe Arg Asn Lys 325 330 335 Gly Ser Lys Val Cys Ser Ala Asn Ser Val Arg Ala Asp Val Ile Glu 340 345 350 Lys Tyr Val Met Asp Gln Ile Leu Glu Ile Val Lys Ser Asp Lys Val 355 360 365 Leu Lys Gln Val Val Glu Arg Val Asn Gln Glu Asn Gln Val Asp Val 370 375 380 Ala Ala Leu Asn His Asp Ile Ala Tyr Lys Gln Gln Gln Phe Asp Glu 385 390 395 400 Ile Ser Thr Lys Leu Lys Asn Leu Ile Gln Thr Ile Glu Asp Asn Pro 405 410 415 Asp Leu Thr Ser Ala Leu Lys Pro Thr Ile His Gln Tyr Glu Thr Gln 420 425 430 Leu Asn Asp Ile Thr Asn Gln Ile Asn Gln Leu Lys His Gln Gln Asn 435 440 445 Gln Glu Lys Pro Phe Tyr Asp Thr Lys Gln Ile Ala Ala Leu Leu Gln 450 455 460 Arg Ile Phe Gln Asn Ile Glu Ser Met Asp Lys Ser Gln Leu Lys Ala 465 470 475 480 Leu Tyr Leu Thr Val Ile Asp Arg Ile Asp Ile Arg Lys Asp Glu Asn 485 490 495 His Lys Lys Gln Phe Phe Val Thr Leu Lys Leu Asn Asn Glu Ile Ile 500 505 510 Lys Gln Leu Phe Asn Asn Asn Asn Leu Asp Glu Val Leu Leu Ser Thr 515 520 525 Ser Ser Leu Phe Leu Pro Gln Thr Leu Tyr Phe Gln Ile 530 535 540

【００４１】 <210> 9 <211> 542 <212> PRT <213> Staphylococcus aureus <400> 9 Met Gln Gln Leu Lys Thr Lys Arg Val Gly Ile Tyr Val Arg Val Ser 1 5 10 15 Thr Glu Met Gln Ser Thr Glu Gly Tyr Ser Ile Asp Gly Gln Ile Asn 20 25 30 Gln Ile Lys Glu Tyr Cys Asp Phe His His Phe Glu Val Lys Asp Ile 35 40 45 Tyr Ala Asp Arg Gly Ile Ser Gly Lys Ser Met Asn Arg Pro Glu Leu 50 55 60 Gln Arg Ile Leu Lys Asp Ala Lys Glu Gly Tyr Ile Asp Cys Val Met 65 70 75 80 Val Tyr Lys Thr Asn Arg Leu Ala Arg Asn Thr Ser Asp Leu Leu Lys 85 90 95 Ile Val Glu Asp Leu His Lys Gln Asn Val Glu Phe Phe Ser Leu Ser 100 105 110 Glu Arg Met Glu Val Asn Thr Ser Ser Gly Lys Leu Met Leu Gln Ile 115 120 125 Leu Ala Ser Phe Ser Glu Phe Glu Arg Asn Asn Ile Val Glu Asn Val 130 135 140 Phe Met Gly Gln Thr Arg Arg Ala Gln Glu Gly Tyr Tyr Gln Gly Asn 145 150 155 160 Leu Pro Leu Gly Tyr Asp Lys Ile Pro Asn Ser Lys His Glu Leu Met 165 170 175 Ile Asn Gln His Glu Ala Asn Ile Val Lys Tyr Ile Phe Glu Ser Tyr 180 185 190 Ala Lys Gly His Gly Tyr Arg Lys Ile Ala Asn Ala Leu Asn His Lys 195 200 205 Gly Tyr Val Thr Lys Lys Gly Lys Pro Phe Ser Ile Ser Ser Ile Thr 210 215 220 Tyr Ile Leu Ala Asn Pro Phe Tyr Ile Gly Lys Ile Gln Phe Ala Lys 225 230 235 240 Tyr Lys Asp Trp Ser Glu Lys Arg Arg Lys Gly Leu Asn Asp Lys Pro 245 250 255 Val Ile Ala Glu Gly Lys His Ser Pro Ile Ile Asn Gln Asp Leu Trp 260 265 270 Asp Lys Val Gln Met Arg Lys Lys Gln Val Ser Gln Lys Pro Gln Val 275 280 285 His Gly Lys Gly Thr Asn Leu Leu Thr Gly Ile Ile His Cys Pro Gln 290 295 300 Cys Gly Ala Pro Met Ala Ala Ser Asn Thr Thr Asn Thr Leu Lys Asp 305 310 315 320 Gly Thr Lys Lys Arg Ile Arg Tyr Tyr Ser Cys Ser Asn Phe Arg Asn 325 330 335 Lys Gly Ser Lys Val Cys Ser Ala Asn Ser Val Arg Ala Asp Val Ile 340 345 350 Glu Asp Tyr Val Met Lys Gln Ile Leu Glu Ile Val Lys Ser Asp Lys 355 360 365 Val Ile Gln Arg Val Val Thr His Val Asn Gln Glu Asn Gln Val Asp 370 375 380 Gly Ala Ala Leu His His Asp Ile Ala Tyr Lys Gln Gln Gln Tyr Asp 385 390 395 400 Glu Val Gln Ile Lys Leu Asn Asn Leu Ile Lys Thr Ile Glu Asp Asn 405 410 415 Pro Asp Leu Thr Ser Val Ile Arg Pro Ser Ile Gln Lys Tyr Glu Lys 420 425 430 Gln Leu Asn Asp Ile Thr Asn Gln Ile Asn Gln Leu Lys Asn Gln Gln 435 440 445 Asn Glu Asp Lys Pro Leu Phe Asp Ala Lys Glu Ile Ser Lys Leu Leu 450 455 460 Gln His Ile Phe His Asp Ile Lys His Ile Glu Lys Ser Arg Leu Lys 465 470 475 480 Ala Leu Tyr Leu Ser Val Ile Asp Arg Ile Asp Ile Lys Lys Asp Gly 485 490 495 Asn His Lys Lys Gln Phe Tyr Val Thr Leu Lys Leu Asn Asn Glu Ile 500 505 510 Ile Lys Gln Leu Phe Asn Asn Lys Gln Leu Asp Glu Val His Leu Ser 515 520 525 Thr Ser Ser Leu Phe Leu Pro Gln Thr Leu Tyr Leu Thr Ile 530 535 540

【００４２】 <210> 10 <211> 542 <212> PRT <213> Staphylococcus aureus <400> 10 Met Gln Gln Leu Lys Gln Lys Arg Val Gly Ile Tyr Val Arg Val Ser 1 5 10 15 Thr Glu Ile Gln Ser Thr Glu Gly Tyr Ser Ile Asp Gly Gln Ile Asn 20 25 30 Gln Ile Arg Glu Tyr Cys Asp Phe Asn Asn Phe Val Val Val Asp Val 35 40 45 Tyr Ala Asp Arg Gly Ile Ser Gly Lys Ser Met Asn Arg Pro Glu Leu 50 55 60 Gln Arg Leu Leu Lys Asp Ala Asn Glu Gly Gln Ile Asp Ser Val Met 65 70 75 80 Val Tyr Lys Thr Asn Arg Leu Ala Arg Asn Thr Ser Asp Leu Leu Lys 85 90 95 Ile Val Glu Asp Leu His Arg Gln Asn Val Glu Phe Phe Ser Leu Ser 100 105 110 Glu Arg Met Glu Val Asn Thr Ser Ser Gly Lys Leu Met Leu Gln Ile 115 120 125 Leu Ala Ser Phe Ser Glu Phe Glu Arg Asn Asn Ile Val Glu Asn Val 130 135 140 Phe Met Gly Gln Thr Arg Arg Ala Gln Glu Gly Tyr Tyr Gln Gly Asn 145 150 155 160 Leu Pro Leu Gly Tyr Asp Lys Ile Pro Asp Ser Lys His Glu Leu Met 165 170 175 Ile Asn Gln His Glu Ala Asn Ile Val Lys Tyr Ile Phe Glu Ser Tyr 180 185 190 Ala Lys Gly His Gly Tyr Arg Lys Ile Ala Asn Ala Leu Asn His Lys 195 200 205 Gly Tyr Val Thr Lys Lys Gly Lys Pro Phe Ser Ile Gly Ser Val Thr 210 215 220 Tyr Ile Leu Ser Asn Pro Phe Tyr Val Gly Lys Ile Gln Phe Ala Lys 225 230 235 240 Tyr Lys Asp Trp Asn Glu Lys Arg Arg Lys Gly Leu Asn Asp Lys Pro 245 250 255 Ile Ile Ala Glu Gly Lys His Ser Pro Ile Ile Ile Gln Asp Leu Trp 260 265 270 Asp Lys Val Gln Leu Arg Lys Lys Gln Val Ser Gln Lys Pro Gln Val 275 280 285 His Gly Lys Gly Thr Asn Leu Leu Thr Gly Ile Val His Cys Pro Gln 290 295 300 Cys Gly Ala Pro Met Ala Ala Ser Asn Thr Thr Asn Thr Leu Lys Asp 305 310 315 320 Gly Thr Lys Lys Arg Ile Arg Tyr Tyr Ser Cys Ser Asn Phe Arg Asn 325 330 335 Lys Gly Ser Lys Val Cys Ser Ala Asn Ser Val Arg Ala Asp Val Ile 340 345 350 Glu Lys Tyr Val Met Asp Gln Ile Leu Glu Ile Val Lys Ser Asp Lys 355 360 365 Val Ile Asn Gln Val Leu Glu Arg Val Asn Gln Glu Asn Lys Val Asp 370 375 380 Ile Gly Ala Leu Asn His Asp Ile Ala Tyr Lys Gln Gln Gln Tyr Asp 385 390 395 400 Glu Val Ser Gly Lys Leu His Asn Leu Val Lys Thr Ile Glu Asp Asn 405 410 415 Pro Asp Leu Thr Ser Ala Leu Lys Ala Thr Ile His Gln Tyr Glu Thr 420 425 430 Gln Leu Asn Asp Ile Thr Asn Gln Met Asn Gln Leu Lys Gln Gln Gln 435 440 445 Asn Gln Glu Lys Leu Ser Tyr Asp Thr Lys Gln Ile Ala Ala Leu Leu 450 455 460 Gln Arg Ile Phe Gln Asn Ile Glu Ser Met Asp Lys Ala Gln Leu Lys 465 470 475 480 Ala Leu Tyr Leu Thr Val Ile Asp Arg Ile Asp Ile Arg Lys Asp Gly 485 490 495 Asn His Lys Lys Gln Phe Tyr Val Thr Leu Lys Leu Asn Asn Glu Ile 500 505 510 Ile Lys Gln Leu Phe Asn Asn Pro Pro Leu Asp Glu Val Leu Leu Ser 515 520 525 Thr Ser Ser Leu Phe Leu Pro Gln Thr Leu Phe Leu Gln Ile 530 535 540

【００４３】 <210> 11 <211> 1350 <212> DNA <213> Staphylococcus aureus <400> 11 atgaaacaag caataggtta cttacgacag agcactacaa agcaacaatc cttagcagca 60 caaaaacaaa ccatcgaggc attagccaaa aaacataata ttcaatacat taccttttat 120 agcgataagc aatcaggacg cactgataag cggaacggtt accaacaaat tactgaactg 180 attcaacaag gacaatgtga tgtattatgt tgttacagat taaaccgact tcatcgcaat 240 cttaaaaatg cattaaaact catgaaattg tgtcaaaaat accatgtcca tatcttaagc 300 gttcatgatg gctattttga tatggataaa gcattcgatc ggctcaaact caatattttc 360 atcagcttgg ccgaactaga atctgataat ataggcgaac aagtcaaaaa tggaatcaaa 420 gaaaaagcga aacaaggtaa aatgattaca acacatgcac cctttgggta tcactatcat 480 aatggtactt tcacgataga cacagtaaaa gcaccaacag taaaagctgt gttcaattat 540 taccttcaag gttatggtta taaaaaaatt gcgcaatact tagaagctga tgataaattc 600 attaatcgta agccctatca agtgcgtaat attatcctta accctaatta ctgtggccgt 660 gttatcaatc aatacggaca atatgaaaac atgttcccag ctattgtcag tacaacgata 720 tacgaagaag ctcaagttac ccgaactcag aaaccagtaa aacgtaagcc gtcagaaaac 780 caactcaaac aaaaaatcaa atgtccttat tgtgattcaa cactaactaa tatgaccatt 840 agaaaaaagc accatacatt acgttattat gtttgtcctc aaaatatgaa tgcatctcgt 900 tttgtctgtg aattcaaagg gatcaacgca caagaattag aaacaagtgt tttagcgact 960 tgtcaggact tctttcaaaa tcaacagctc tattcaaaaa taaaccatac tattcaacaa 1020 cgactcaaaa gacaaagaga tatagaaact aaaactacac tcaatcacga gcagctgata 1080 gaaaaattag cccaagacaa aattgatgca gaaacgttca gagaacaaac gcaatcatta 1140 cgtcagcaat caaaacctat atcatcaatc agtacgtatc aaattcgaaa agctttccaa 1200 aacatcattc aacaacgttt cacgctaaac atgttgtacc cctatattga tgaaattaat 1260 atttctaaaa ataaaagcct cgctggcatc tatttcaaaa atgaaccact gaatattgta 1320 aagcagacta tggaattatc aattgtataa 1350

【００４４】 <210> 12 <211> 1349 <212> DNA <213> Staphylococcus aureus <400> 12 atgaaacaag tcataggcta tttacgtcaa agtacgatga aacaacaatc tcttgcagca 60 cagaaacagg ctatcgaagc aatagccgaa aaacatcata ttcaacatat caacttttat 120 agcgacaaac aatcaggacg caaagataat cgtagtgggt atcgacaaat gacgcaatta 180 attcaacaag ggcaatgtga catattatgt tgttatcgtc ttaatagatt acatcgtaat 240 ctgaaaaatg cattaaaact catcaaatta tgtcaaacat accatgttca tatcttaagc 300 gtacacgatg gttactttga tatggatcaa gctttcgacc gattcaagct taatattttt 360 atcagcttgg ccgaacttga atcagataac attggagaac aagtcagaaa tgggcttcaa 420 gaaaaagcaa agcaaggtcg attgattaca acccatgcgc cctttggtta cgaatatcac 480 aacggagcat tcatcatcaa tcaaaatgag tcaccaacgg taaaggctgt attcaattat 540 tacattaaag gtcatggtta taagaaaatt gcacagttat tagaagaaga taacacgtat 600 atcaatcgac aaccctatca agttcgtaac attatcatca atcctaatta ttgtggtcgt 660 gtcaacaatc aatatggcca attcgacaat atgtttcctt ctattgtttc cacaagtata 720 tatgagcaag cgcagagact tcgatcgcaa aaacaaatca aacagacatc ttcggataac 780 caactaaaac aaaaaatcaa atgcccatgt tgtaatacaa cacttacgaa tatgaccgtt 840 agaaaaaaga atcatacatt acgttactac gtctgtccta aaaacatgaa tgcttctcgc 900 tttgtctgtg attttaaagg catcaatgca caaacacttg aagataaagt attagaagtg 960 tgcaaagact ttatcaaaat caacgcatct acacaaaaat taaaggtgcg attgacaaac 1020 gcatcaaaag acaaagaaac atagaaaaac atcacacatt gactcaagaa caactgatag 1080 aaaagttggc acaaggcatc atcgatgcag aaacgttcag agaacaaacg caatcattac 1140 gtcaacaacc gcaacgcact acatctatca atggacatca aatacaacac accattcaaa 1200 atattattca aaaacgtttc acgttaaaca tattgtaccc ctatattgaa accattcaca 1260 ttacgaaaga taaaaatctt ataggaatct atttcaaaaa tgaaccactc aatatcgtca 1320 atcaaaccat gcaatcatcg attgcataa 1349

【００４５】 <210> 13 <211> 1347 <212> DNA <213> Staphylococcus aureus <400> 13 atgaaacgag ccattggtta tttgcgccaa agtacaacga aacaacaatc actcccagct 60 caaaagcaag caatagaatt attagctcca aagcacaata ttcaaaatat ccaatacatt 120 agtgataagc aatcaggcag aacagataat cgaacaggct atcaacaagt caccgaacgc 180 atccaacaaa gacaatgtga cgtattatgt tgttatcgct tgaatcgact tcatcgcaac 240 ttgaaaaatg cattaaaact catgaaactc tgtcaaaaat atcatgttca tattctaagt 300 gttcatgatg gctattttga tatggataaa gcgtttgatc gcctaaaact caatatattc 360 atgagtctgg ctgaacttga atccgataat attggagaac aagtcaaaaa tggacttaga 420 gaaaaggcaa aacaaggtaa actcataacg acccatgcgc ctttcggtta tcactatcaa 480 aatggtactt tcatcattaa taatgatgaa tcacctaccg tcaaagctgt attcaattat 540 tatcttcaag gatatggcta caagaagatt gcacaatatt tagaagacga taataaactt 600 attacccgca agccttatca ggtacgaaat ataattatga acccaaatta ttgtggtcgt 660 gtcatcaatc aatatggtca atataacaat atggtaccac ctattgtttc ggcaacgaaa 720 tatgaacatg ctcaagcaat ccgtaataag aagcaacttc actgtatacc ttcagagaat 780 cagctgaaac aaaagatcaa atgtccttgt tgtgactcaa cactgacaaa tatgacaata 840 agaaaaaaac atacattgcg atattatatt tgtcctaaaa atatgaatga atctcgcttt 900 gtctgttcat tcaaaggaat aaatgcacaa aaattagaag ttcaagtctt agctacatgt 960 cagaacttct ttcaaaacca acagctctat tcaaaaatta ataatgcaat tcatcaacgc 1020 ctcaaaaaac aaagagtgat agaagctaaa agtacgctaa ctcaagaaca actgatagat 1080 aaacttgcca aaggtatgat tgatgctgaa tcattcagaa aacagactca tttgatgaat 1140 caaaagcaca aaaccatatc ctccataagt gataatcagt tacaaacatc actacaaaag 1200 gttatacaga aaagtttcac gttaaacatg ctgcatccct atattgatga aattcgcatt 1260 acaaaaaata aagcccttgt tgggatctat ttcaaaaatg aaccattgaa cattgtgaac 1320 caaacctcgc aatcatcgat tgcttaa 1347

【００４６】 <210> 14 <211> DNA <212> 1152 <213> Staphylococcus aureus <400> 14 atggataaaa tgaagaaaaa gcttgtagga ggctacattc gtgtgtccac agagagacaa 60 gtagaaggtt atagcataga gggacaaatt acacaaatag agcaatattg ccaatttaac 120 ggctatgaac ttgttgatat atatgcagat cggggtatat caggaaaatc tatgaaccgt 180 cctgaattac agcgcatgtt aaatgatgct aaaaatggaa aattagactg tgttatggtt 240 tataaaacaa atcgtttggc acgtaatact tccgatttac ttacaatagt cgaagaactt 300 catcgccaaa atgttgaatt ttttagcttg tctgaacgta tggaagtcaa aaattcaaca 360 ggcaagttaa tgctccagat acttgcaagt ttttccgaat tcgaaagaaa tacaatttta 420 gagaatattt acaccggaca acgtcaaaga gctttagagg gctattatca aggcaatctt 480 ccattaggat ataataacat acctgataat aaaaaagaat taatgattaa tcaacatgaa 540 gctaacatcg ttaaatatat ctttgaatct tatgccaaag gtcatggtta tcgtaaaata 600 gccaatgcat tcaatcacaa aggctatgtg actaaaaaag gcaatccatt tagtatttca 660 gctgttactt atattctctc aaacccattc tatattggta aaattcaatt cgcgaaatac 720 aaagattgga atgataaacg acgtaaagga ttaaacgata agccagtaat cgctgaaggt 780 aaacacacgc ctattattag tcaatcatta tgggataaag tgcaagcacg taagaaacaa 840 gtaagtgaaa aaccacaagt ccatggtaaa ggaaccaata ttttaactgg aataatttcg 900 tgtccccaat gttctgcacc tatggctgcg agtaacacca caaacacact taaagatggc 960 actaaaaacg tattcgttac tattcgtgta gtaattttcg aaataaaggc tcaaaggtat 1020 gttctgcgaa tagtgttaga gccgatgtca ttgaaaaata tgttatggac caaatacttg 1080 aaattgtcaa aagtgataaa gttctcaaac aagttgtcga acgtgtcaat caagagaatc 1140 aagtcgatgt ag 1152

【００４７】 <210> 15 <211> 1626 <212> DNA <213> Staphylococcus aureus <400> 15 atggataaaa tgaagaaaaa gcttgtagga ggctacattc gtgtgtccac agagagacaa 60 gtagaaggtt atagcataga gggacaaatt acacaaatag agcaatattg ccaatttaac 120 ggctatgaac ttgttgatat atatgcagat cggggtatat caggaaaatc tatgaaccgt 180 cctgaattac agcgcatgtt aaatgatgct aaaaatggaa aattagactg tgttatggtt 240 tataaaacaa atcgtttggc acgtaatact tccgatttac ttacaatagt cgaagaactt 300 catcgccaaa atgttgaatt ttttagcttg tctgaacgta tggaagtcaa aaattcaaca 360 ggcaagttaa tgctccagat acttgcaagt ttttccgaat tcgaaagaaa tacaatttta 420 gagaatattt acaccggaca acgtcaaaga gctttagagg gctattatca aggcaatctt 480 ccattaggat ataataacat acctgataat aaaaaagaat taatgattaa tcaacatgaa 540 gctaacatcg ttaaatatat ctttgaatct tatgccaaag gtcatggtta tcgtaaaata 600 gccaatgcat tcaatcacaa aggctatgtg actaaaaaag gcaatccatt tagtatttca 660 gctgttactt atattctctc aaacccattc tatattggta aaattcaatt cgcgaaatac 720 aaagattgga atgataaacg acgtaaagga ttaaacgata agccagtaat cgctgaaggt 780 aaacacacgc ctattattag tcaatcatta tgggataaag tgcaagcacg taagaaacaa 840 gtaagtgaaa aaccacaagt ccatggtaaa ggaaccaata ttttaactgg aataatttcg 900 tgtccccaat gttctgcacc tatggctgcg agtaacacca caaacacact taaagatggc 960 actaaaaaac gtattcgtta ctattcgtgt agtaattttc gaaataaagg ctcaaaggta 1020 tgttctgcga atagtgttag agccgatgtc attgaaaaat atgttatgga ccaaatactt 1080 gaaattgtca aaagtgataa agttctcaaa caagttgtcg aacgtgtcaa tcaagagaat 1140 caagtcgatg tagctgcact taaccatgat attgcttata aacaacaaca atttgatgaa 1200 attagcacta aacttaaaaa tctaattcaa accatcgaag acaatccaga cttaacatct 1260 gcactcaaac caaccattca tcaatatgaa acacaactga atgatatcac aaaccaaatt 1320 aatcaactca agcaccaaca aaatcaagag aaaccatttt atgatactaa acaaatcgct 1380 gctttattac aacgaatatt tcaaaatata gaatccatgg ataaatcaca gctcaaagct 1440 ttgtacctaa cggttattga ccgtattgac attcgtaaag atgagaatca taaaaagcaa 1500 ttctttgtta cactaaaact taataatgaa attattaaac aacttttcaa taataataat 1560 ctagacgaag tgcttctcag cacttcgtct ttgtttttgc ctcaaacact ctactttcaa 1620 atataa 1626

【００４８】 <210> 16 <211> 1629 <212> DNA <213> Staphylococcus aureus <400> 16 atgcaacaac ttaaaacaaa acgtgtcggt atctatgtac gtgtatcaac agaaatgcaa 60 agcacagaag gttatagtat cgacggacaa atcaatcaaa tcaaagaata ctgtgacttc 120 catcattttg aagttaaaga tatatacgct gaccgtggta tttcaggtaa atctatgaat 180 cgacctgagc tccaacgtat attgaaggat gcgaaagaag gctatatcga ctgtgttatg 240 gtctacaaaa caaaccgatt agctcgtaat acatctgatc ttctcaaaat tgtcgaagat 300 ttacacaaac aaaatgtcga atttttcagt ttatcagagc gtatggaagt caatacttca 360 tcgggtaagc tcatgttaca aatacttgcg agtttctcag aattcgaacg taataacatt 420 gtcgagaatg tatttatggg tcaaacgaga cgtgcccaag aaggctatta tcaaggcaat 480 ttgccgctgg gctatgacaa aatacctaat agtaaacatg aactgatgat taatcaacat 540 gaagctaata ttgtgaaata tatattcgag tcctatgcca aaggccatgg ctatcgtaaa 600 atagccaatg cattaaatca caaaggctat gtcactaaaa agggtaaacc ttttagtatt 660 agttctatca catatatatt agctaaccca ttctatatcg gcaaaattca atttgcgaaa 720 tacaaagatt ggagtgaaaa acgtcgtaaa gggcttaatg ataaaccagt gatagctgaa 780 ggtaagcatt cccccattat taatcaagat ttatgggata aagtacaaat gcgtaaaaaa 840 caagtcagtc aaaaacccca agtccatggc aaaggaacga atctgcttac aggcattatt 900 cactgtcccc aatgtggcgc acctatggca gcaagcaata ccacgaatac acttaaagac 960 gggactaaga aacgtattcg ttactattca tgtagtaatt ttcggaacaa gggttccaaa 1020 gtatgttcgg caaacagtgt aagagctgat gtgattgaag attatgtgat gaagcaaata 1080 cttgaaatag tcaaaagtga taaagtcatt caacgcgtag taacacacgt caatcaagaa 1140 aatcaagttg atggcgctgc acttcatcac gatattgctt ataagcaaca acaatatgat 1200 gaagtacaaa tcaaactaaa taacttgatt aaaaccatcg aggataatcc ggacttaaca 1260 tcagtaatca gaccaagtat tcaaaaatat gaaaagcaac tcaatgacat tacgaatcaa 1320 atcaaccaac tcaaaaatca acaaaatgaa gataagcctt tatttgatgc caaagaaatc 1380 agtaaactat tacaacacat ctttcatgat attaagcaca tagaaaaatc tcgactcaaa 1440 gcattgtatc tatcagtgat tgatcgcatt gatattaaaa aagatggtaa tcataaaaaa 1500 caattctatg tcacactcaa acttaataac gaaatcataa aacaactttt caataataaa 1560 caactcgacg aagtgcatct cagcacttcg tctttgtttt tgccccaaac actatatctt 1620 actatttag 1629

【００４９】 <210> 17 <211> 1629 <212> DNA <213> Staphylococcus aureus <400> 17 atgcaacaac tcaaacaaaa acgtgtcggt atctatgttc gtgtatcaac ggaaatccaa 60 agtactgaag gctatagtat cgatggacaa atcaatcaaa ttcgagaata ttgtgatttc 120 aataactttg ttgttgtaga tgtatacgcg gatagaggta tctctggaaa atctatgaac 180 cgaccagaac tacaacgttt gttaaaagat gcgaacgaag gtcagattga ttctgttatg 240 gtctacaaaa caaaccgact agcacgtaac acttctgact tactcaaaat tgttgaagac 300 cttcatcgtc aaaatgtcga attcttcagc ttatctgagc gtatggaagt caatacaagc 360 agtggtaaat tgatgctaca aattctagcg agtttttcag aatttgaaag aaataatatt 420 gtcgaaaatg tattcatggg tcaaacccga cgcgctcaag aaggctatta tcaaggcaat 480 ttgccgctgg gctatgacaa aataccggat agcaagcatg aactcatgat aaaccaacat 540 gaagcgaata ttgtcaaata tatatttgag tcatatgcta aaggccacgg atatcgtaaa 600 attgcgaatg cactcaatca caaaggatac gtgactaaaa aaggaaagcc tttcagtatt 660 ggttcagtga cctatatctt atctaatcca ttctatgttg gtaaaattca attcgcaaag 720 tacaaagatt ggaatgaaaa gcgtcgtaaa gggctgaatg ataaaccaat aatagctgaa 780 ggtaagcatt cccctattat tattcaagac ttatgggata aagtccaatt acgtaaaaaa 840 caagtcagtc aaaaacctca agtccacggt aaaggaacta atctattaac aggtatcgtt 900 cattgtccac aatgtggtgc accaatggca gctagtaaca caacgaacac attgaaagat 960 ggtaccaaga agcgaatacg ttattattct tgcagtaact tccgaaacaa aggctcaaaa 1020 gtatgttctg cgaatagcgt tagagctgat gtgattgaga aatacgtcat ggatcaaata 1080 ctcgaaattg tcaaaagtga taaagtcatt aaccaagtct tagaacgtgt caatcaagaa 1140 aataaagtcg atattggtgc attgaaccac gatatcgctt ataaacaaca acaatacgat 1200 gaagtcagcg ggaaactcca taatttagtt aaaaccattg aagataatcc ggacctaaca 1260 tctgcattga aagcaactat tcatcaatat gaaacacaac tcaatgacat tacaaatcaa 1320 atgaatcaac tcaaacagca acaaaatcaa gagaaactat cttatgatac gaaacaaatc 1380 gctgccctat tacaacgaat atttcaaaat atagaatcaa tggataaag cacaactcaaa 1440 gcattatatc ttacagtcat tgaccgtatt gatattcgta aagacggta atcataaaaaa 1500 cagttctacg ttacactaaa actcaataat gaaattatta aacaactttt caataatccc 1560 cctctcgacg aagtgctcct cagcacttcg tctttatttt tgcctcaaacg ctctttctt 1620 caaatctaa 1629

【図面の簡単な説明】

【図１】SCCmecの全領域を特定した図である。

【図２】SCCmec上のccrA及びccrBの位置を表した図であ
る。

【図３】各CcrA及びCcrBの相同性を表した図である。

【図４】プラスミドpSR及びccrAが一部欠損したプラス
ミドpSRA^*、ccrBが一部欠損したプラスミドpSRB^*を表し
た図である

【図５】pSRatt、pSRA^*att、pSRB^*attを表した図であ
る。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考） // Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/08 ４Ｃ０８５Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ４Ｈ０４５ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:445） (72)発明者平松啓一東京都港区高輪２−14−７ドルフ高輪 1007 (72)発明者伊藤輝代埼玉県川口市中青木４丁目14−25 (72)発明者片山由紀東京都港区海岸１−６−１イトーピア浜離宮412 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 AA20 BA07 BA41 BA61 CA03 CA09 CA11 CA20 DA05 DA20 EA04 FA10 FA15 GA11 GA14 HA01 HA17 4B050 CC01 DD02 LL01 LL03 LL10 4B064 AG01 AG26 AG27 CA02 CA19 CC24 DA01 DA13 DA20 4B065 AA53X AA53Y AB01 AC14 AC20 BA03 BA25 CA24 CA27 CA44 CA46 CA60 4C084 AA07 AA13 AA17 BA01 BA22 BA44 DA39 DC01 ZB092 ZB352 4C085 AA03 AA13 AA14 BA13 BB22 DD62 DD63 DD88 4H045 AA10 AA11 BA10 CA11 DA89 EA52 FA72 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】共同してメチシリン耐性に関与する遺伝
子を含むSCCmecを染色体から部位特異的に切り出し、か
つ部位特異的に挿入する機能を有する酵素cassette chr
omosome recombinase A（CcrA）及び酵素cassette chro
mosome recombinase B（CcrB）。
【請求項２】酵素CcrBと共同してメチシリン耐性に関
与する遺伝子を含むSCCmecを染色体から部位特異的に切
り出し、かつ部位特異的に挿入する機能を有する酵素Cc
rA。
【請求項３】酵素CcrAと共同してメチシリン耐性に関
与する遺伝子を含むSCCmecを染色体から部位特異的に切
り出し、かつ部位特異的に挿入する機能を有する酵素Cc
rB。
【請求項４】下記(a)〜(c)のいずれかのポリペプチ
ド。 (a)配列番号４〜１０のいずれかのアミノ酸配列を有し
てなるポリペプチド。 (b)ポリペプチド(a)のアミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ
酸配列からなり、かつポリペプチド(a)が有する活性を
有するポリペプチド。 (c)ポリペプチド(a)のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％同一であるアミノ酸配列を有してなるポリペプチ
ド。
【請求項５】以下の(d)〜(f)のいずれかのポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチド。 (d)配列番号４、配列番号７又は配列番号８のアミノ酸
配列、又は配列番号４及び配列番号７若しくは配列番号
８のアミノ酸配列を有して成るポリペプチド。 (e)ポリペプチド(d)のアミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ
酸配列からなり、かつポリペプチド(d)が有する活性を
有するポリペプチド。 (f)ポリペプチド(d)のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％同一であるアミノ酸配列を有してなるポリペプチ
ド。
【請求項６】以下の(g)〜(i)のいずれかのポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチド。 (g)配列番号５のアミノ酸配列及び／又は配列番号９の
アミノ酸配列を有して成るポリペプチド。 (h)ポリペプチド(g)のアミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ
酸配列からなり、かつポリペプチド(g)が有する活性を
有するポリペプチド。 (i)ポリペプチド(g)のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％同一であるアミノ酸配列を有してなるポリペプチ
ド。
【請求項７】以下の(j)〜(l)のいずれかのポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチド。 (j)配列番号６のアミノ酸配列及び／又は配列番号１０
のアミノ酸配列を有して成るポリペプチド。 (k)ポリペプチド(j)のアミノ酸配列において１若しくは
数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ
酸配列からなり、かつポリペプチド(j)が有する活性を
有するポリペプチド。 (l)ポリペプチド(l)のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％同一であるアミノ酸配列を有してなるポリペプチ
ド。
【請求項８】ポリヌクレオチドがＤＮＡである請求項
５〜７のいずれかのポリヌクレオチド。
【請求項９】ポリヌクレオチドがＲＮＡである請求項
５〜７のいずれかのポリヌクレオチド。
【請求項１０】下記の塩基配列のいずれかを有するポ
リヌクレオチド。（ｍ）配列番号１１、配列番号１４または配列番号１
５、または配列番号１１及び配列番号１４若しくは配列
番号１５。（ｎ）配列番号１２及び／又は配列番号１６。（ｏ）配列番号１３及び／又は配列番号１７。
【請求項１１】請求項８又は請求項１０のＤＮＡの１
種又は２種以上を有してなる組み換えベクター。
【請求項１２】請求項１１のベクターを有してなる宿
主細胞。
【請求項１３】請求項１２の宿主細胞を用いて発現さ
せることにより、請求項４のポリペプチドを製造する方
法。
【請求項１４】請求項４のポリペプチドに対する抗
体。
【請求項１５】請求項４のポリペプチドの活性を阻害
するアンタゴニスト。
【請求項１６】請求項８又は請求項１０のポリヌクレ
オチドの塩基配列上に作製したプライマー又はプローブ
を利用してSCCmecのタイプを同定する方法。
【請求項１７】請求項１１のベクターを使用して遺伝
子を染色体に挿入する方法。
【請求項１８】細胞を請求項１１のベクターで形質転
換又はトランスフェクションすることによる遺伝子治療
への利用。