ITMI960681A1 - PROCESS FOR OBTAINING POLYSACCHARIDES FROM YEASTS. - Google Patents
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
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Description
DESCRIZIONE DESCRIPTION
La presente invenzione si riferisce, in generale, al settore tecnico dei polisaccaridi impiegati nell’industria alimentare e dei prodotti dietetici. The present invention refers, in general, to the technical sector of polysaccharides used in the food industry and dietary products.
In particolare, l’invenzione riguarda un processo per l’ottenimento di polisaccaridi da lieviti di fermentazione alcolica o fermentatori d1 lattosio. In particular, the invention relates to a process for obtaining polysaccharides from alcoholic fermentation yeasts or lactose fermenters.
Più precisamente l’invenzione riguarda un processo per l’ottenimento di glucani e mannani da pareti cellulari di lieviti di fermentazione alcolica o fermentatori di lattosio. More precisely, the invention relates to a process for obtaining glucans and mannans from the cell walls of alcoholic fermentation yeasts or lactose fermenters.
I polisaccaridi della classe dei glucani e mannani sono notoriamente indigeribili e quindi non costituiscono fonti di glucidi semplici per l 'alimentazione umana, ma ciononostante sono molecole di grande utilità nell’industria alimentare e dietetica, in virtù di alcune loro peculiari proprietà chimico-fisiche. The polysaccharides of the class of glucans and mannans are notoriously indigestible and therefore do not constitute sources of simple carbohydrates for human nutrition, but nevertheless they are molecules of great utility in the food and dietary industry, by virtue of some of their peculiar chemical-physical properties.
La più importante di tali proprietà è quella di assorbire e trattenere ingenti quantità di liquidi acquosi. E’ in virtù di questa proprietà che polisaccaridi ottenuti da fonti naturali quali ad esempio guar, carragenina, xantani e simili, vengono impiegati quali integratori dietetici allo scopo di migliorare la funzionalità gastrointestinale. The most important of these properties is that of absorbing and retaining large quantities of aqueous liquids. It is by virtue of this property that polysaccharides obtained from natural sources such as guar, carrageenan, xanthans and the like, are used as dietary supplements in order to improve gastrointestinal function.
I polisaccaridi sopra menzionati sono inoltre largamente impiegati in campo alimentare per le loro proprietà addensanti e stabilizzanti in quantità normalmente dell’ordine di 0,1-1,0%. Esempi di alimenti a cui essi vengono aggiunti sono i formaggi cremosi, le salse, i gelati, i salumi, le gelatine, i dessert cremosi ecc. The polysaccharides mentioned above are also widely used in the food industry for their thickening and stabilizing properties in quantities normally of the order of 0.1-1.0%. Examples of foods to which they are added are creamy cheeses, sauces, ice creams, cured meats, jellies, creamy desserts, etc.
Anche il loro impiego quali additivi per biscotti e simili prodotti da forno comporta una serie di vantaggi connessi da un latoal benefico effetto sulla funzionalità gastrointesinale degli alimenti così preparati, e dall’altro alle migliorate caratteristiche di conservabilità dell’alimento stesso. Their use as additives for biscuits and similar baked goods also entails a series of advantages connected on the one hand to the beneficial effect on the gastrointestinal function of the food thus prepared, and on the other to the improved shelf life of the food itself.
Infatti, grazie all’effetto bioassorbente esplicato dai suddetti polisaccaridi nel confronti dell’acqua, quest’ultima viene trattenuta a lungo e contemporaneamente resa indisponibile per la crescita massiva di microrganismi e per la crescita di piccole popolazioni microbiche che portano ad una alterazione delle proprietà organolettiche del prodotto. In fact, thanks to the bioabsorbent effect of the aforementioned polysaccharides on water, the latter is retained for a long time and at the same time made unavailable for the massive growth of microorganisms and for the growth of small microbial populations that lead to an alteration of the organoleptic properties of the product.
Il prolungato trattenimento dell’acqua all’interno dei prodotti da forno rallenta sensibilmente il processo di raffermamento di questi ultimi, allungandone la"shelf-life". The prolonged retention of water inside the baked products significantly slows down the process of staling of the latter, extending their "shelf-life".
L’indisponibilità dell’acqua, testimoniatadal basso valore di Aw dei prodotti da forno addizionati dei suddetti polisaccaridi, impedisce o comunque ostacola la crescita di batteri ed altri microorganismi, conservando inalterate per lungo tempo le caratteristiche di purezza microbiologica del prodotto nonché le sue proprietà organolettiche. The unavailability of water, evidenced by the low Aw value of baked products with the addition of the aforementioned polysaccharides, prevents or otherwise hinders the growth of bacteria and other microorganisms, keeping the microbiological purity characteristics of the product as well as its organoleptic properties unaltered for a long time. .
I polisaccaridi cui si è fatto riferimento finora costituiscono tuttavia ingredienti estranei a quella che è la composizione tradizionale ed accettata dalle legislazioni vigenti in materia di pane, la quale comprende essenzialmente farina, acqua, lievito da pane ("bakers’yeast" ) ed eventualmente sale e grassi od oli naturali. However, the polysaccharides referred to so far are ingredients that are foreign to the traditional composition accepted by the laws in force on bread, which essentially includes flour, water, bread yeast ("bakers'yeast") and possibly salt. and natural fats or oils.
Esiste pertanto il problema di avere a disposizione polisaccaridi naturali dotati delle desiderate proprietà bioadsorbenti , provenienti da fonti di sicura affidabilità dal punto di vista alimentare-sanitario e caratterizzati da un costo contenuto. There is therefore the problem of having available natural polysaccharides endowed with the desired bioadsorbent properties, coming from sources of sure reliability from the food-sanitary point of view and characterized by a low cost.
L’idea di soluzione del suddetto problema è stata quella di utilizzare quale fonte dei suddetti polisaccaridi lieviti di consolidata e storica tradizione alimentare, quali i lieviti di fermentazione alcolica, ed in particolare il lievito di birra, ed i lieviti fermentatori di lattosio. The idea of solving the aforementioned problem was to use as a source of the aforementioned polysaccharides yeasts with a consolidated and historical food tradition, such as alcoholic fermentation yeasts, and in particular brewer's yeast, and lactose fermenting yeasts.
Tali lieviti possiedono una parete cellulare che rappresenta il 15-20% in peso secco della cellula e che è costituita per l ' 80— 90% in peso da glucani e mannani. I rimanenti componenti della parete cellulare sono rappresentati da amminoacidi, proteine enzimatiche ed altri polipeptidi e lipidi. These yeasts possess a cell wall which represents 15-20% by dry weight of the cell and which is constituted by 80- 90% by weight of glucans and mannans. The remaining components of the cell wall are represented by amino acids, enzymatic proteins and other polypeptides and lipids.
In accordo con la suddetta idea, il problema che sta alla base della presente invenzione è risolto dalla messa a disposizione di un processo per l’ottenimento di polisaccaridi della classe comprendente glucani e mannanl a partire da lieviti di fermentazione alcolica o fermentatori di lattosio, detto processo comprendendo le fasi di preparare una sospensione di detti lieviti in una soluzione acquosa a pH fra 2,0 e 5,0, a temperatura ambiente, con un contenuto in peso secco di lieviti dell’8%-20% p/p, sottoporre detta sospensione ad omogeneizzazione ad una temperatura di 80-100°C e separare mediante centrifugazione la componente solida della sospensione, la quale è costituita essenzialmente da detti polisaccaridi. In accordance with the aforementioned idea, the problem underlying the present invention is solved by the provision of a process for obtaining polysaccharides of the class comprising glucans and mannanl starting from alcoholic fermentation yeasts or lactose fermenters, called process comprising the steps of preparing a suspension of said yeasts in an aqueous solution at pH between 2.0 and 5.0, at room temperature, with a dry weight content of yeasts of 8% -20% w / w, subjecting said suspension with homogenization at a temperature of 80-100 ° C and separating by centrifugation the solid component of the suspension, which essentially consists of said polysaccharides.
Preferibilmente la suddetta omogeneizzazione è condotta ad una pressione di 500-800 bar, vantaggiosamente a 600 bar. Preferably the aforesaid homogenization is carried out at a pressure of 500-800 bar, advantageously at 600 bar.
Secondo una modalità di realizzazione dell’invenzione, l’omogeneizzazione alla temperatura di 80-100‘C viene effettuata preriscaldando la sospensione (a circa 70-90‘C) e sottoponendola poi ad omogeneizzazione. According to a method of carrying out the invention, homogenization at a temperature of 80-100'C is carried out by preheating the suspension (at about 70-90'C) and then subjecting it to homogenization.
Secondo una modalità alternativa, l'omogeneizzazione a 80-100’C viene reailizzata sottoponendo la sospensione Iniziale a temperatura ambiente a ripetute fasi di omogeneizzazione, fino a che la suddetta temperatura di 80-100°C viene raggiunta in conseguenza del calore sviluppatosi per effetto dell’intenso trattamento meccanico subito dalla sospensione. According to an alternative method, the homogenization at 80-100 ° C is reacilized by subjecting the Initial suspension at room temperature to repeated homogenization steps, until the aforementioned temperature of 80-100 ° C is reached as a result of the heat developed by the effect of the intense mechanical treatment suffered by the suspension.
Il pH della sospensione è preferibilmente compreso fra 4 e 4,5 ed è vantaggiósamente determinato dalla presenza di un acido debole nella sospensione. The pH of the suspension is preferably between 4 and 4.5 and is advantageously determined by the presence of a weak acid in the suspension.
Acidi deboli particolarmente adatti ai fini del processo secondo l’invenzione sono scelti dal gruppo comprendente acido acetico, acido tricloroacetico, acido lattico e acido citrico. Weak acids particularly suitable for the purposes of the process according to the invention are selected from the group comprising acetic acid, trichloroacetic acid, lactic acid and citric acid.
Fra i lieviti utilizzabili nel processo secondo l’invenzione sono preferiti quelli scelti dal gruppo comprendente Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces Carlsbergensis, Kluyveromyces marxianus e suoi sinonimi, quali Kluyveromyces lactis e Kluyveromyces fragilis. Among the yeasts that can be used in the process according to the invention, those selected from the group including Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces Carlsbergensis, Kluyveromyces marxianus and its synonyms, such as Kluyveromyces lactis and Kluyveromyces fragilis, are preferred.
Particolarmente preferito è il Saccharomyces cerevisiae. Il prodotto ottenuto con il processo secondo l’invenzione è costituito, come già detto, essenzialmente da polisaccaridi e può contenere tracce di componenti polipeptidiche completamente denaturate e pertanto non disponibili quali fonti di carbonio sottofementative. Saccharomyces cerevisiae is particularly preferred. The product obtained with the process according to the invention consists, as already mentioned, essentially of polysaccharides and may contain traces of completely denatured polypeptide components and therefore not available as sub-fermentative carbon sources.
Qualora si desideri ottenere polisaccaridi costituiti essenzialmente da mannani, è possibile far seguire al processo sopra descritto un’ulteriore fase consistente nel trattamento di detta componente solida con una β-1,3-glucano-idrolasi o con un estratto naturale che la contiene. If it is desired to obtain polysaccharides consisting essentially of mannans, it is possible to follow the process described above with a further step consisting in the treatment of said solid component with a β-1,3-glucan-hydrolase or with a natural extract that contains it.
Un estratto naturale utile al suddetto scopo è il mosto di malto (definito con termine anglosassone "wort"). A natural extract useful for the above purpose is wort (defined with the Anglo-Saxon term "wort").
Il trattamento della suddetta componente solida con la (3-1,3-glucano-idrolasi o con il "wort" viene effettuato sospendendo la componente solida in una soluzione acquosa contenente 15-50 U/ml di β-1,3-glucano-idrolasi o "wort" in quantità tale da fornire la stessa concentrazione di β-1,3-glucano-idrolasi, ad un pH di 4-6 e ad una temperatura di 25-35’C, per 15 minuti. The treatment of the aforementioned solid component with (3-1,3-glucan-hydrolase or with the "wort" is carried out by suspending the solid component in an aqueous solution containing 15-50 U / ml of β-1,3-glucan- hydrolase or "wort" in an amount such as to provide the same concentration of β-1,3-glucan-hydrolase, at a pH of 4-6 and at a temperature of 25-35 ° C, for 15 minutes.
Al termine del suddetto trattamento si esegue un'ulterieor centrifugazione per separare una componente solida costituita essenzialmente da mannani. At the end of the aforesaid treatment, a further centrifugation is carried out to separate a solid component essentially consisting of mannans.
Mediante il processo secondo l’invenzione si ottiene un prodotto che è costituito essenzialmente da polisaccaridi, salvo tracce di polipeptidi, 1 quali sono comunque privi di qualunque attività enzimatica, essendo stati completamente denaturati durante il trattamento a caldo subito, e non sono pertanto in grado di determinare alcuna degradazione dei polisaccaridi. By means of the process according to the invention, a product is obtained which is essentially constituted by polysaccharides, except for traces of polypeptides, which are in any case devoid of any enzymatic activity, having been completely denatured during the heat treatment immediately, and are therefore unable to cause any degradation of the polysaccharides.
Gli altri componenti della parete cellulare dei lieviti, ovvero gli amminoàcidi ed i lipidi, non sono presenti neanche a livello di tracce nel prodotto finale del processo secondo l’invenzione, in quanto sono stati completamente solubilizzati o comunque trasferiti nella componente liquida separata al termine della centrifugazione. The other components of the cell wall of yeasts, that is the aminoacids and lipids, are not present even at the level of traces in the final product of the process according to the invention, as they have been completely solubilized or in any case transferred to the separate liquid component at the end of the centrifugation.
I polisaccaridi ottenuti con il processo secondo la presente invenzione presentano un contenuto di umidità intorno al 30%. In funzione di particolari esigenze produttive o distributive, 1 suddetti polisaccaridi possono essere eventualmente essiccati con qualunque metodo convenzionalmente impiegato nell’industria alimentare e poi mantenuti al riparo dal contatto con l’umidità atmosferica (confezioni a chiusura ermetica). The polysaccharides obtained with the process according to the present invention have a moisture content of around 30%. Depending on particular production or distribution needs, the aforementioned polysaccharides can possibly be dried with any method conventionally used in the food industry and then kept away from contact with atmospheric humidity (airtight packaging).
I polisaccaridi ottenuti secondo il processo della presente invenzione presentano una serie di vantaggi rispetto ai polisaccaridi attualmente utilizzati nell’industria alimentare e dietetica. The polysaccharides obtained according to the process of the present invention have a number of advantages over the polysaccharides currently used in the food and dietary industry.
Innanzitutto essi hanno la capacità di adsorbire una quantità d’acqua pari a fino 200 volte il proprio peso; inoltre provengono da una fonte naturale di massima affidabilità, in quanto i lieviti di fermentazione alcolica o fermentatori di lattosio sono impiegati da secoli nella preparazione di bevande ed alimenti e sono assolutamente sicuri dal punto di vista igienicosanitario. First of all, they have the ability to adsorb a quantity of water equal to up to 200 times their own weight; moreover, they come from a natural source of maximum reliability, as alcoholic fermentation yeasts or lactose fermenters have been used for centuries in the preparation of beverages and foods and are absolutely safe from a health and hygiene point of view.
Di conseguenza, l ’assunzione di tali polisaccaridi a scopo dietetico e l ’aggiunta di essi ad alimenti al fine di sfruttarne le proprietà stabilizzanti nel confronti degli alimenti devono essere considerate altrettanto sicure, anche perché il processo utilizzato per la loro estrazione dai lieviti non comporta l ’ impiego di sostanze tossiche o nocive. Consequently, the intake of these polysaccharides for dietary purposes and the addition of them to foods in order to exploit their stabilizing properties towards foods must be considered equally safe, also because the process used for their extraction from yeasts does not involve the use of toxic or harmful substances.
Inoltre il costo dei polisaccaridi ottenuti con il processo secondo l ’ invenzione è decisamente contenuto, grazie al possibile utilizzo di lieviti costituenti residuo di lavorazioni alimentari . Ad esempio, una fonte di lieviti adatti agli scopi del presente processo è costituita dalla biomassa di lievito di birra sedimentata nelle vasche di fermentazione della birra, al termine della fermentazione stessa. Furthermore, the cost of the polysaccharides obtained with the process according to the invention is decidedly low, thanks to the possible use of yeasts which are residual constituents of food processing. For example, a source of yeasts suitable for the purposes of the present process is constituted by the biomass of brewer's yeast sedimented in the beer fermentation tanks, at the end of the fermentation itself.
La biomassa di lievito di birra sopra menzionata costituisce un materiale di basso costo, in quanto trova attualmente impiego soltanto come ingrediente di mangimi per l ’ industria zootecnica o come materia prima per ricavare estratto di lievito, The aforementioned brewer's yeast biomass is a low-cost material, as it is currently used only as an ingredient in feed for the livestock industry or as a raw material to obtain yeast extract,
E’ Inoltre da segnalare che la componente liquida separata al termine della fase di centrifugazione della sospensione sottoposta ad omogeneizzazione secondo il presente processo costituisce un interessante sottoprodotto utile come materia prima per la preparazione di un estratto di lievito, che si caratterizza per un rapporto fra contenuto di amminoacidi e contenuto di glucidi semplici superiore rispetto a quello presentato dagli estratti di lievito tradizionali ottenuti per idrolisi alcalina, con evidenti vantàggi dal punto di vista nutrizionale. It should also be noted that the liquid component separated at the end of the centrifugation phase of the suspension subjected to homogenization according to this process constitutes an interesting by-product useful as a raw material for the preparation of a yeast extract, which is characterized by a ratio of of amino acids and content of simple carbohydrates higher than that presented by traditional yeast extracts obtained by alkaline hydrolysis, with obvious advantages from a nutritional point of view.
E’ da notare inoltre che il processo secondo l’invenzione non comporta la produzione di alcuno scarto da avviare ad uno smaltimento, in quanto entrambe le componenti separate al termine del processo trovano un impiego in campo alimentare o zootecnico. It should also be noted that the process according to the invention does not involve the production of any waste to be sent for disposal, as both separate components at the end of the process are used in the food or zootechnical field.
Da ciò si desume chiaramente che il presente processo è caratterizzato da una notevole economicità di gestione e da un basso, se non nullo, impatto ambientale. From this it is clear that the present process is characterized by a considerable cost-effectiveness of management and by a low, if not zero, environmental impact.
Infine desideriamo rammentare che fra le molteplici possibilità di applicazione presentate dai polisaccaridi ottenuti con il processo secondo l’invenzione, le quali sono state esemplificate più sopra con riferimento ai polisaccaridi della tecnica nota, un’applicazione particolarmente interessante è quella nel campo dei prodotti da forno ed in particolare del pane. Finally, we wish to recall that among the many application possibilities presented by the polysaccharides obtained with the process according to the invention, which have been exemplified above with reference to the polysaccharides of the known art, a particularly interesting application is that in the field of bakery products. and in particular bread.
E’ noto che il pane cosiddetto "bianco" ha proprietà organolettiche generalmente preferite a quelle del pane preparito con farina integrale o con l’aggiunta di una certa quantità di fibra alimentare, ovvero crusca. It is known that the so-called "white" bread has organoleptic properties generally preferred to those of bread prepared with wholemeal flour or with the addition of a certain amount of dietary fiber, or bran.
E’ altrettanto noto che il pane bianco tende a diventare raffermo molto più rapidamente del pane integrale, proprio perché, non contenendo crusca, non può giovarsi dell’effetto di trattenimento esercitato da quest 'ultima nei confronti dell’acqua e del conseguente effetto ritardante sul processo di raffermamento del pane. It is also known that white bread tends to become stale much more quickly than wholemeal bread, precisely because, since it does not contain bran, it cannot benefit from the retention effect exerted by the latter on water and the consequent retarding effect on the bread stalking process.
L’aggiunta di un’opportuna quantità dei polisaccaridi ottenuti con il processo secondo l’invenzione all’impasto con cui viene preparato il pane bianco consente di conseguire lo stesso effetto ritardante (anzi , un effetto ancor migliore) fornito dalla crusca, senza avere alcun peggioramento delle caratteristiche organolettiche del pane bianco finale. The addition of an appropriate quantity of the polysaccharides obtained with the process according to the invention to the dough with which the white bread is prepared allows to achieve the same retarding effect (indeed, an even better effect) provided by the bran, without having any worsening of the organoleptic characteristics of the final white bread.
L’assenza di qualunque effetto deleterio sulle proprietà organolettiche del pane (e di qualunque altro alimento) è garantita dal trattamento ad alta temperatura contemplato dal presente processo, che consente di eliminare tutti i componenti bassobollenti suscettibili di impartire particolari sapori od odori ai polisaccaridi finali. The absence of any deleterious effect on the organoleptic properties of bread (and any other food) is guaranteed by the high temperature treatment contemplated by this process, which allows to eliminate all the low-boiling components likely to impart particular flavors or odors to the final polysaccharides.
Tutto quanto sopra esposto viene conseguito mediante l’aggiunta di un additivo, che non solo è di origine assolutamente naturale, ma è addirittura ricavato da uno degli ingredienti tipici del pane, e cioè il lievito di birra. All of the above is achieved by adding an additive, which is not only of absolutely natural origin, but is even obtained from one of the typical ingredients of bread, namely brewer's yeast.
I polisaccaridi ottenuti con il presente metodo possono essere aggiunti ai tradizionali impasti per o simili The polysaccharides obtained with the present method can be added to traditional mixtures for or the like
da forno in quantità tali da costituire lo 0, 5-2,0% in peso del prodotto cotto al forno. in quantities such as to constitute 0, 5-2.0% by weight of the product cooked in the oven.
Ulteriori vantaggi del processo secondo l ’ invenzione e dei prodotti da esso ottenuti risulteranno evidenti dagli esempi riportati qui di seguito a titolo illustrativo e non limitativo. Further advantages of the process according to the invention and of the products obtained from it will be evident from the examples given below for illustrative and non-limiting purposes.
ESEMPIO 1 EXAMPLE 1
Quale materiale di partenza venne utilizzato lievito di birra (Saccharomyces cerevislae) proveniente dal la fermentazione di un mosto per la produzione di birra, fornito sotto forma di biomassa compressa con un contenuto di sostanza secca del 20% p/p circa. Brewer's yeast (Saccharomyces cerevislae) from the fermentation of a wort for beer production was used as starting material, supplied in the form of compressed biomass with a dry matter content of about 20% w / w.
10 kg della suddetta biomassa vennero sospesi in 10 litri di soluzione di acido acetico al 20% p/v a temperatura ambiente. 10 kg of the above biomass were suspended in 10 liters of acetic acid solution at 20% w / v at room temperature.
La sospensione così ottenuta venne riscaldata ad una temperatura di 80 °C per 10 minuti e successivamente alimentata in un omogeneizzatore monostadio modello M21/B1 della ditta con una portata di 2,5 litri al minuto. The suspension thus obtained was heated to a temperature of 80 ° C for 10 minutes and subsequently fed into a single-stage homogenizer model M21 / B1 of the company with a flow rate of 2.5 liters per minute.
L’omogeneizzatore era regolato per lavorare ad una pressione di 700 bar. The homogenizer was set to work at a pressure of 700 bar.
La temperatura della sospensione in uscita dall’omogeneizzatore era di circa 94‘C. The temperature of the suspension leaving the homogenizer was about 94'C.
Terminata la fase di omogeneizzazione, si procedette ad un controllo del titolo vitale, per verificare l ’avvenuta rottura delle cellule di lievito. At the end of the homogenization phase, a check of the vital titer was carried out, to verify the breakdown of the yeast cells.
Il controllo del titolo vitale venne eseguito sia con la metodica del blu di metilene sia per diluizione e successivo piastramento. The control of the vital titer was performed both with the methylene blue method and by dilution and subsequent plating.
In accordo con la prima metodica, 5 ml della sospensione sottoposta ad omogeneizzazione furono diluiti con acqua fino al volume di 1 litro sotto agitazione. According to the first method, 5 ml of the suspension subjected to homogenization were diluted with water up to the volume of 1 liter under stirring.
5 ml della sospensione cosi diluita furono miscelati con 5 ml di una soluzione acquosa di blu di metilene tamponata a pH circa 4,6, a sua volta preparata miscelando una soluzione allo 0,02% peso/volume di blu di metilene in acqua con un uguale volume di una soluzione ottenuta mescolando 99,75 ml di soluzione acquosa al 2,72% p/v di con 0,25 ml di una soluzione acquosa al 3,56% p/v di 5 ml of the suspension thus diluted were mixed with 5 ml of an aqueous solution of methylene blue buffered at pH about 4.6, in turn prepared by mixing a 0.02% weight / volume solution of methylene blue in water with a equal volume of a solution obtained by mixing 99.75 ml of aqueous solution at 2.72% w / v of with 0.25 ml of an aqueous solution at 3.56% w / v of
Dopo aver lasciato il campione diluito con la soluzione di blu di metilene in incubazione a 35°C per 10 minuti , si procedette al conteggio delle cel lule colorate e del numero totale di cellule mediante microscopio ed emocitometro di Burker o camera di conteggio di Thoma. After leaving the sample diluted with the methylene blue solution in incubation at 35 ° C for 10 minutes, the stained cells and the total number of cells were counted by means of a microscope and a Burker hemocytometer or a Thoma counting chamber.
La percentuale di cellule morte venne calcolata in base alla formula seguente: The percentage of dead cells was calculated according to the following formula:
numero di cellule colorate x 100 number of stained cells x 100
numero di cellule colorate numero di cellule non colorate Entrambe le metodiche dimostrarono che il numero di cellule vitali al termine dell ’omogeneizzazione era inferiore all’1%. number of stained cells number of unstained cells Both methods showed that the number of viable cells at the end of homogenization was less than 1%.
La sospensione omogeneizzata venne quindi sottoposta a centrifugazione a 1500 x g a temperatura ambiente per 10 minuti al fine di separare la componente solida da quel la liquida. The homogenized suspension was then subjected to centrifugation at 1500 x g at room temperature for 10 minutes in order to separate the solid component from the liquid one.
La componente solida raccolta al termine del la centrifugazione era in forma di polvere bianca, risultava costituita essenzialmente da polisaccaridi , in particolare glucani e mannani , pesava 590 g ed aveva un contenuto in sostanza secca del 70%. The solid component collected at the end of the centrifugation was in the form of a white powder, essentially consisting of polysaccharides, in particular glucans and mannans, weighed 590 g and had a dry substance content of 70%.
ESEMPIO 2 EXAMPLE 2
10 kg dellastessa biomassa di lievito di birra utilizzata nell’esempio precedente vennero sospesi in 10 litri di soluzione di acido tricloroacetico al 20% p/v a temperatura ambiente. 10 kg of the same biomass of brewer's yeast used in the previous example were suspended in 10 liters of 20% w / v trichloroacetic acid solution at room temperature.
La sospensione così ottenuta venne alimentata nello stesso omogeneizzatore impiegato nell’esempio 1 con una portata di 2,5 litri al minuto. The suspension thus obtained was fed into the same homogenizer used in example 1 with a flow rate of 2.5 liters per minute.
L’omogeneizzatore era regolato per lavorare ad una pressione di 600 bar. The homogenizer was set to work at a pressure of 600 bar.
La temperatura della sospensione in uscita dall 'omogeneizzatore risultò di circa 35 °C. The temperature of the suspension leaving the homogenizer was about 35 ° C.
La sospensione venne quindi sottoposta ad un secondo e ad un terzo passaggio nell’omogeneizzatore alla stessa pressione e con la stessa portata. The suspension was then subjected to a second and third passage in the homogenizer at the same pressure and with the same flow rate.
Al termine del secondo e del terzo passaggio la temperatura della sospensione risultò rispettivamente pari a 63°C e 93°C. At the end of the second and third passages, the suspension temperature was respectively 63 ° C and 93 ° C.
Una determinazione del titolo vitale secondo le metodiche citate nell’esempio eseguita dopo ciascun passaggio nell‘omogeneizzatore, diede valori di 92% (dopo il primo passaggio) , 37% (dopo il secondo passaggio) e <1% (dopo il terzo passaggio) . A determination of the vital titer according to the methods cited in the example carried out after each passage in the homogenizer, gave values of 92% (after the first passage), 37% (after the second passage) and <1% (after the third passage) .
La sospensione proveniente dal terzo passaggio nell ’omogeneizzatore venne quindi sottoposta a centrifugazione a 1500 x g a temperatura ambiente per 10 minuti al fine di separare la componente solida da quella liquida. The suspension coming from the third passage in the homogenizer was then subjected to centrifugation at 1500 x g at room temperature for 10 minutes in order to separate the solid component from the liquid one.
La componente solida raccolta al termine della centrifugazione (polvere bianca) risultava costituita essenzialmente da polisaccaridi , in particolare glucani e mannani , pesava 610 g ed aveva un contenuto in sostanza secca del 70%. The solid component collected at the end of centrifugation (white powder) was essentially made up of polysaccharides, in particular glucans and mannans, weighed 610 g and had a dry substance content of 70%.
ESEMPIO 3 EXAMPLE 3
500 g della componente solida raccolta al termine della centrifugazione nell’esempio 1 vennero sospesi in 4 litri di un mosto di malto impiegato nella produzione di birra, acidificato a pH 4,5 con acido acetico e contenente β-1 ,3-glucano-idrolasi in concentrazione pari a ci rca 40 U/ml , ad una temperatura di 35°C. 500 g of the solid component collected at the end of centrifugation in example 1 were suspended in 4 liters of a wort used in the production of beer, acidified to pH 4.5 with acetic acid and containing β-1, 3-glucan-hydrolase in a concentration of approximately 40 U / ml, at a temperature of 35 ° C.
La sospensione venne tenuta in agitazione per 4 ore, dopodiché venne centrifugata a 1500 x g per 10 minuti a temperatura ambiente. The suspension was stirred for 4 hours, after which it was centrifuged at 1500 x g for 10 minutes at room temperature.
La componente solida separata mediante centrifugazione (150 g di polvere bianca con un contenuto in sostanza secca del 70%) risultò essere costituita essenzialmente da mannani . The solid component separated by centrifugation (150 g of white powder with a dry matter content of 70%) was found to consist essentially of mannans.
ESEMPIO 4 EXAMPLE 4
Ad un impasto per pane comprendente farina di frumento di tipo 00, acqua, sale e lievito per pane ("baker’s yeast") nelle consuete proporzioni venne addizionata una quantità di polisaccaridi preparati secondo l’esempio 1 pari all’1% del peso totale dell’impasto. A quantity of polysaccharides prepared according to example 1 equal to 1% of the total weight of the 'dough.
L’impasto venne quindi suddiviso e modellato in maniera tale da ottenere, dopo cottura in forno a circa 200”C, panini del peso di circa 70-80 g. The dough was then divided and shaped in such a way as to obtain, after baking in the oven at about 200 "C, sandwiches weighing about 70-80 g.
I panini così ottenuti furono sottoposti ad una prova di conservatiliità a temperatura ambiente in confronto con panini preparati con un impasto avente la stessa composizione ma non addizionato dei polisaccaridi secondo l’invenzione. The sandwiches thus obtained were subjected to a preservation test at room temperature in comparison with sandwiches prepared with a dough having the same composition but not added with the polysaccharides according to the invention.
Il tempo di raffermamento dei panini contenenti i polisaccaridi secondo l’invenzione e di quelli di confronto fu valutato mediante test organolettico eseguito tramite "panels” di assaggiatori . The stiffening time of the sandwiches containing the polysaccharides according to the invention and of the comparative ones was evaluated by organoleptic tests performed through "panels" of tasters.
I panini contenenti i polisaccaridi secondo l’Invenzione dimostrarono un tempo di raffermamento circa 5 volte superiore a quello dei panini di confronto. The sandwiches containing the polysaccharides according to the invention showed a stopping time about 5 times higher than that of the comparative sandwiches.
Claims (19)
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| IT96MI000681A IT1283582B1 (en) | 1996-04-10 | 1996-04-10 | PROCESS FOR OBTAINING POLYSACCHARIDES FROM YEASTS. |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| IT96MI000681A IT1283582B1 (en) | 1996-04-10 | 1996-04-10 | PROCESS FOR OBTAINING POLYSACCHARIDES FROM YEASTS. |
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Family Applications (1)
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Also Published As
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