ITMI20142097A1 - Anello dentale, in particolare per la rigenerazione superficiale delle ossa con contemporanea introduzione di impianti dentali. - Google Patents

Description

ANELLO DENTALE, IN PARTICOLARE PER LA RIGENERAZIONE DELLA SUPERFI-CIE OSSEA CON L?INTRODUZIONE SIMULTANEA DI IMPIANTI DENTALI

L'invenzione si riferisce al materiale osteoinduttivo e/o osteogenico, utile nella chirurgia orale e maxillofacciale in caso di carenza superficiale ossea per l'induzione di impianti dentali endossei.

Stato della tecnica

La ricostruzione della perdita ossea con un innesto osseo autogeno ? oggi considerato come un mezzo preferenziale tra le procedure di rigenerazione di ossa dure nella chirurgia maxillo-facciale e dentale.

Il materiale osseo deriva dalla zona donatrice sotto forma di frammenti ossei ottenuti con raschietti, per ossa pi? spesso dal nodulo mascellare o gap retromolare o da frammenti di ossa pi? grandi macinato in mulini. Successivamente, materiale osseo viene trasferito e condensato in una zona ricevente e viene fissato /immobilizzato con una pellicola di copertura di collagene o una pellicola di politetrafluoroetilene (pellicola PTFE) insieme con spilli.

Innestare un osso autogeno viene fatto anche sotto forma di blocchi ossei. Tali blocchi sono fissati con un risultato di perdita ossea o sono stabilizzati da perni e/o viti riassorbibili o non riassorbibili. Questi ultimi devono essere rimossi dopo il periodo di attecchimento del trapianto.

Un metodo per l?introduzione simultanea di impianti dentali che passano centralmente attraverso un innesto osseo autogeno ottenuto dalla zona del mento e sagomata in forma di anello ? noto. Il metodo, a causa delle limitazioni della zona donatrice, ? limitato a un massimo di quattro innesti. In caso di una guarigione dell'innesto con successo, l'impianto dentale rimane nel sito di inserimento e costituisce una base per la ricostruzione protesica.

Perdite ossee vengono anche riempite di materiale allogenico, xenogenico o eterogenico. Un'applicazione di tali metodi di rigenerazione ? analogo, nella sua forma, ai metodi di trapianto autogeno.

La mancanza di dati disponibili sulle modalit? di introduzione simultanea dell'innesto dentale con osso in sostituzione del blocco in modo tale che il blocco sia contemporaneamente un impianto dentale ? un?unica eccezione. Neppure materiali per la sostituzione e rigenerazione ossea che sono di forma tale da consentire l'introduzione e il fissaggio contemporanei all'interno di un sito accettore per impianto dentale non sono disponibili sul mercato.

In particolare, i blocchi preparati da materiali di sostituzione ossea nella forma di un anello non sono disponibili. Inoltre, tali impalcature tridimensionali seminate con cellule osteogeniche non sono stati segnalati.

Un mezzo preferito nel campo della rigenerazione delle perdite ossee verticali e orizzontali ? un uso di innesti ossei autogeni. Tale tecnica assume la derivazione di un osso da siti donatori dello stesso paziente la cui superficie ossea viene ricostruita. Un osso pu? essere ottenuto da un sito donatore, sotto forma di frammenti ossei con raschiatori. Tale modulo richiede, in un sito accettore, una specifica sagomatura del materiale e il suo consolidamento mediante film barriera riassorbibili e non riassorbibili. Il tessuto osseo pu? essere derivato anche sotto forma di blocchi asportati con trapani, scalpelli, trapani rotanti e dispositivi di tipo piezoelettrico. Cos?, si ottengono frammenti ossei sagomati che vengono poi fissati alla perdita ossea con perni o viti. Dopo una ricostruzione riuscita, il material osseo viene integrato con la superficie ricevente ed elementi di fissaggio dell'innesto possono essere rimossi dall?impianto, per la stabilizzazione di rimozione di elementi ? solitamente utilizzata anche una procedura per introdurre innesti dentali utilizzando tessuto osseo neoformato per la stabilizzazione. Dopo il periodo di guarigione dell'impianto, possono essere sottoposti alla ricostruzione protesica.

Una modifica essenziale della soluzione descritta ? quella di utilizzare innesti di tessuto osseo conformati in un sito donatore in forma di un anello. Tale anello ? asportato con due trapani rotondi con diversi diametri, collegati a un trapano chirurgico. Entrambi i trapani sono caratterizzati in questa procedura dello stesso perno centrale. Il diametro del trapano piccolo ? uguale o una parte di millimetro inferiore al diametro esterno dell?impianto dentale che dovrebbe essere impiantato in un sito accettore. Il diametro del trapano grande ? circa due millimetri maggiore del diametro esterno del trapano piccolo, definendo cos? lo spessore dell'anello osseo. L'altezza dell'anello dipende dalla dimensione verticale del difetto di tessuto osseo che viene rigenerato e si suppone che siano uguali. Tale anello ottenuto viene trasferito nel sito accettore e fissato con un impianto dentale installato contemporaneamente. Questo impianto viene introdotto attraverso la parte centrale dell'anello e la sua estremit? viene fissata sulla superficie precedentemente preparata all'interno dell'area del sito accettore. Tale procedimento garantisce la stabilizzazione primaria dell'impianto, nonch? la fissazione del blocco osseo innestato precedentemente, modellato in forma di un anello.

Problema tecnico

Un vantaggio della tecnica dell?introduzione degli anelli ossei ? una riduzione di una rigenerazione ossea completa e della procedura di impianto dentale in un intervento chirurgico. Tuttavia, l'uso di anelli ossei non ha eliminato i problemi fondamentali in materia di innesti di ossa autogeni comprendente: a) necessit? di eseguire un intervento chirurgico traumatico in un sito donatore (pi? spesso la mandibola, ma anche altre ossa vengono impiegate);

b) quantit? limitata di materiale disponibile per l?escissione in un sito donatore - in alcuni casi insufficienti per un complemento completo della perdita in un sito accettore (l?osso mandibolare di norma assicura materiale per non pi? di 4 escissioni di materiale osseo per il trapianto);

c) quantit? significativa di una frazione di osso corticale che viene impoverito di cellule e fattori di crescita rispetto allo scarso contenuto di osso spugnoso in un materiale trapiantato;

d) qualit? non standardizzata del materiale trapiantato, a seconda di un sistema corpo donatore, nonch? di un sito anatomico da cui il materiale ? derivato;

e) tempo incerto di riassorbimento del trapianto, generalmente troppo rapida per quanto riguarda necessit? cliniche che si traducono in una rapida perdita di una dimensione orizzontale e verticale dell'osso circostante impianti trapiantati, la loro esposizione, infezione e dopo perdita prematura.

Un tentativo noto per risolvere i suddetti problemi ? quello di impiegare anelli di osso spugnoso allogenico. Tuttavia, ci? non permette di superare tutti i suddetti problemi da c) a e). Nonostante la struttura spugnosa, l?osso allogenico utilizzato per formare anelli ? privo di cellule viventi e di fattori della crescita attivi. Inoltre, eseguendo un innesto derivato da un donatore estraneo comporta ulteriori problemi, per esempio, pu? provocare il rischio di trasmissione di malattie infettive.

Un altro problema tecnico che richiede una soluzione ? di ottenere una migliore ricostruzione di un osso accettore, soprattutto nella dimensione verticale. La rigenerazione delle perdite ossee poliedriche ? un problema importante in chirurgia orale e maxillofacciale. Nel caso di modalit? di un trapianto di impianti dentali, numerose tecniche chirurgiche sono focalizzate, in particolare, sull'aumento della dimensione verticale dell'osso di un osso alveolare di mandibola o sul processo mascellare alveolare. Trapianti di osso autogeno o procedure per una rigenerazione ossea controllata utilizzando un osso xenogeno non garantisce risultati favorevoli ripetitivi. Solitamente in letteratura, l'efficacia di tali tecniche durante la rigenerazione di una perdita ossea da 4 mm viene stimato come inferiore al 50%. Tali tecniche disabilitano un'introduzione simultanea di impianti dentali, quindi, costringono un paziente a sottoporsi a procedure chirurgiche almeno due volte per ripristinare la dentatura.

Un altro problema importante con la rigenerazione ossea controllata, in particolare con la ricostruzione dell?osso mascellare entro l'alveolo per consentire il trapianto di un impianto dentale, ? il controllo dei tessuti molli. I tessuti molli delle gengive devono coprire il volume osseo neoformato, ottenuto come risultato del procedimento di rigenerazione. La quantit? di tessuto molle nel sito del difetto osseo ? insufficiente e la copertura completa del tessuto osseo ricostruito ? problematica. Lobi formati e preparati, nonch? innesti di tessuti molli di solito sono insufficienti ad assicurare una copertura completa delle dimensioni ingrandite di una superficie ossea. Una necessit? di cucire tessuti sotto tensione spesso provoca la mancanza di tenuta nel posto di un punto. L'estensione dei lobi utilizzati e il loro spostamento lontano spesso sfociano in significative interruzioni emodinamiche all'interno del lobo, diminuendo il suo potenziale biologico per la guarigione. I suddetti due fattori causano spesso la deiscenza dei bordi della ferita e l'esposizione del materiale osseo. Tale complicanza ? causa frequente della non riuscita di una procedura di innesto di un impianto dentale o l'incidenza di gravi complicanze, come l'esposizione dell'osso mandibolare dopo l?innesto dell'impianto.

Un altro problema tecnico in un aumento verticale in una perdita ossea con blocchi ossei, in particolare all'interno di un alveolo, ? il loro riassorbimento prematuro. Il primo sintomo clinico di una diminuzione del volume di tessuto osseo trapiantato si osserva qualche settimana dopo la procedura. In primo luogo, si verifica la formazione a volta del bordo del blocco osseo innestato quindi le sue dimensioni verticale e orizzontale diminuiscono. In casi estremi, pu? anche portare alla quasi totale scomparsa di un autotrapianto. Ci? conduce ad una esposizione di impianti in titanio immersi in essa, perdita di estetica, funzione e persino infezione dei tessuti e la perdita dell'innesto.

La soluzione ai problemi sopra menzionati ? fornito dalla presente invenzione.

Oggetto dell'invenzione

Un oggetto dell'invenzione ? un anello e un kit che lo comprende, definiti dalle rivendicazioni allegate. Come "materiale citocompatibile", soprattutto per quanto riguarda le cellule osteogeniche, secondo la presente invenzione, si intende che qualsiasi materiale che soddisfi contemporaneamente i criteri sotto elencati:

a) che la vitalit? delle cellule coltivate direttamente sulla superficie del materiale sia almeno del 70% rispetto al risultato ottenuto nelle stesse condizioni sperimentali in una coltura di cellule identiche, fatte crescere su una superficie di un materiale di controllo;

b) tutte le cellule che hanno aderito alla superficie, 24 h dopo la semina sono appiattite e fibrose nella loro forma (cio? la loro morfologia ? tipica delle cellule osteogeniche);

c) l?adesione cellulare al materiale si verifica entro le prime 3 a 5 ore dopo la semina;

d) la velocit? di proliferazione delle cellule ? da 25 a 30 ore in condizioni di coltura standard.

Le caratteristiche di un materiale atto a fornire l'anello secondo l'invenzione sono determinate nell'introduzione all?esempio 6.

Effetto tecnico inatteso

Sorprendentemente, la presente invenzione ha fornito una soluzione ai problemi tecnici sopra citati.

L'uso di anelli dei materiali preparati da un essere umano, seminate o non seminati con cellule destinatarie diminuiscono significativamente un trauma associato con una procedura di impianto. In tali casi, si ottiene la ricostruzione ripetitiva fino a 5 mm delle dimensioni verticali del tessuto osseo.

In una particolare forma di realizzazione relativa a un?applicazione dell'anello secondo l'invenzione seminato con cellule osteogeniche vitali del ricevente, un significativo miglioramento delle condizioni dei tessuti molli viene raggiunto, manifestano, in particolare, dalla guarigione accelerata e dal potenziale biologico aumentato dei lobi di tessuto. A causa dell?espressione di VEGF nelle cellule osteogeniche all'interno di un anello secondo l'invenzione, una fornitura di sangue in un sito accettore, cio? nel sito di impianto, ? stimolata a causa della attivit? delle cellule trapiantate. Questo, a sua volta, si tradurr? in una migliore rigenerazione dei tessuti molli che era impossibile da raggiungere con gli attuali metodi di trattamento medico. Tale effetto ? presentato in Fig. 1 e Fig. 2.

Un vantaggio significativo fornito con l'impiego della presente invenzione ? la capacit? di influenzare il tempo di riassorbimento di materiale osteogenico trapiantato, che, in caso di innesti ossei autogeni, ? completamente fuori controllo. L'invenzione, quando venga utilizzata, fornisce una soluzione a tale problema. L'anello secondo l'invenzione ? caratterizzato dal tempo prolungato del riassorbimento. Questo effetto ? presentato in Fig. 3 e Fig. 4. Inoltre, in particolari forme di realizzazione, la composizione del materiale di cui un vettore ? formato pu? essere regolata in modo tale che il tempo di riassorbimento dopo l?inserto nel corpo ospitante, a seconda delle esigenze biologiche di un sito accettore nonch? del risultato clinico previsto pu? essere controllato intenzionalmente.

Descrizione dettagliata dell'invenzione

L'oggetto dell'invenzione ? relativo all'applicazione di biomateriali tridimensionali di forma specifica, prodotti di origine umano-sintetica o naturale, seminata o non seminato con cellule nella ricostruzione derivante da perdite ossee o in una produzione di un osso nel sito di una carenza di quantit? di ossa nel sistema corporeo di un destinatario.

Impalcature, secondo l'invenzione, realizzate da esso sono sagomate nella forma di un anello. ? accettabile formare un'impalcatura di qualsiasi altra forma geometrica, a seconda delle esigenze cliniche, secondo i principi descritti nella presente invenzione in appresso.

L'altezza dell'anello dipende dall'effetto quantitativo previsto dell'osso ricostruito o generato e rimane nella gamma di 3 mm a 6 mm. In taluni casi, ? accettabile produrre l'anello di una diversa altezza desiderata rispetto al potenziale biologico di un sito accettore.

Nella parte centrale di un anello vi ? un'apertura che consente l'inserimento di un impianto dentale attraverso di essa, accettabile anche un'apertura creata non centralmente per l'inserimento dell'impianto. Pertanto, il diametro dell'apertura varia a seconda del diametro dell'impianto dentale utilizzato ed ? uguale o leggermente pi? piccolo, per fornire una stabilizzazione dell'impianto adeguata entro un anello. La regolazione del rapporto di diametro di un'apertura in un anello di rispetto al diametro dell'impianto dipende alla fine dalla flessibilit? del materiale da cui l'anello ? formato, per impedirne la sua fessurazione.

Lo spessore dell'anello ? maggiore quanto pi? la vite implantare aggressiva ? utilizzata per fissare un anello (? accettabile utilizzare un implanto liscio senza filo) e maggiore ? il grado di rigenerazione ossea o formatura previsto. Un potenziale rigenerativo del sito accettore, cos? come le propriet? mimetiche di un materiale utilizzato per la produzione di un anello rimangono il limite per l'estensione dello spessore dell'anello. Lo spessore minimo possibile di un anello da applicare, infine, dipende dalle propriet? biomeccaniche del materiale utilizzato per produrre un anello.

L'anello secondo l'invenzione ? stabilmente fissato alla superficie dell'osso atrofizzato con impianti dentali inseriti attraverso l'apertura sviluppata all'interno di un anello.

Una metodologia comprende un accesso chirurgico alla superficie di un osso ricostruito o costruito, ottenuta nel modo tipico per un sito anatomico. Dopo il distacco del periostio, si esegue lo sviluppo di una base per un trapianto dentale programmato, in base a tutti i principi obbligatori per l'impianto dentale, con l'eccezione della profondit? di sviluppo di assestamento. Tale profondit? dovrebbe rimanere inferiore alla lunghezza dell'impianto pianificato. La differenza di profondit? delle basi sviluppate per un impianto e la lunghezza di un impianto ? ancora all'altezza dell'anello utilizzato nella procedura. ? accettabile utilizzare anelli che sono superiori nonch? inferiori a una differenza tra una lunghezza dell'impianto e una profondit? di una base ossea, sviluppata mantenendo la stabilit? dell'intero sistema.

La base ossea pu? comprendere un osso compatto, cos? come un osso spugnoso o una sola di tali forme di tessuto.

Dopo lo sviluppo della base, l'anello precedentemente preparato ? attaccato in modo tale che l'apertura disposta al suo interno e la parte centrale della base sviluppate si sovrappongano. Quindi, attraverso l'anello fissato da un operatore, l'impianto dentale ? introdotto in modo tale che la sua parte inferiore sia collocata nella base ossea preparata del sito accettore, raggiungendo la profondit? e la stabilit? desiderate. ? accettabile modificare la sequenza dell'inserimento dei componenti del sistema.

Dopo averlo inserito, l'impianto dentale deve essere accecato da un anello cicatrizzante, anello di guarigione o altro elemento tradizionale. Poi, la ferita ? chiusa a strati, ermeticamente, secondo i principi obbligatori nella tecnica del campo chirurgico. E? accettabile un singolo strato di cucitura.

All'area trattata in questo modo ? permesso di guarire. Il tempo di guarigione dipende dalle caratteristiche del materiale di cui l'anello ? fatto e dalla capacit? biologica del sistema corporeo ricevente. Di solito, questa tempo ? tra i 6 e i 9 mesi. ? accettabile ridurre o estendere il tempo di guarigione in casi giustificati. Dopo il tempo di guarigione, l'impianto dentale pu? essere esposto. Quindi, pu? essere utilizzato per formare una sovrastruttura protesica o come un altro elemento di ritegno. In casi giustificati, il carico immediato di un impianto inserito con il metodo descritto o la sua guarigione aperta sono entrambi accettabili.

L'innovazione della metodologia descritta fornisce l?inserimento contemporaneo di un impianto dentale, insieme con l'impalcatura tridimensionale fissata da essa, vale a dire, un anello secondo l'invenzione. Per il momento, le impalcature tridimensionali trapiantate sono state fissate per mezzo di impatto, da perni o con viti di fissaggio, cucite o immobilizzate da vari tipi di adesivi tessutali. Tuttavia, gli innesti dentali inseriti attraverso un'apertura compatibile sviluppata all'interno di un?impalcatura non sono stati impiegati. L'applicazione di tale metodo in casi selezionati pu? risparmiare al paziente un ulteriore intervento chirurgico previsto per rimuovere gli elementi di ritenzione per impalcature precedentemente applicate, nonch? di innestare impianti dentali dopo che i tessuti del ricevente crescevano sopra l?impalcatura.

La soluzione simile di fissare il materiale dentale trapiantabile con impianti ? stata descritta solo per innesti di osso autogeno. In questo metodo, anelli di osso autogeno sono stati ottenuti dal frammento geniale della mandibola. Il metodo proposto, secondo l'invenzione, per una formazione di anello assume l?applicazione diversa dai materiali trapiantabili autogeni. Ci? riduce significativamente il trauma di un paziente, che evita un intervento chirurgico in un sito donatore. Inoltre, nel metodo descritto nella presente domanda non esistono limitazioni quantitative, tranne il potenziale biologico di un sito accettore, che in caso di tecniche con osso autogeno applicabili, rimane una differenza significativa a causa delle limitazioni di un sito donatore.

Per una migliore comprensione della materia della presente invenzione si aggiunge una descrizione dettagliata delle forme di realizzazione esemplificative comprendenti - profilo sequenziamento anche aggiunto e figure in cui:

Fig 1. mostra il rilascio di VEGF dalle cellule osteogeniche umane in coltura (O) - valori valutati mediante test ELISA in giorni 1 e 4 di una coltura cellulare. Per un confronto, sono mostrati i valori analoghi ottenuti in coltura cellulare endoteliale umana (S), effettuata in condizioni identiche.

Fig 2. mostra l?espressione di VEGF mRNA in cellule osteogeniche umane (O) in giorni 1, 4, e 7 di una coltura cellulare, determinata mediante una tecnica di PCR in tempo reale. GAPDH ? stato usato come gene di riferimento; i risultati sono stati normalizzati al valore ottenuto per una coltura cellulare osteogenica in giorno 1. Per un confronto, sono indicati i valori analoghi ottenuti in cellule endoteliali umane in cultura (S), svolta in condizioni identiche.

Fig 3. mostra i risultati di una tomografia computerizzata eseguita per un campione di controllo asportato da un animale sperimentale. Un campione ? un anello preparato da un osso autogeno che ? stato introdotto in un sito accettore (in mandibola) e stabilizzato da impianto in titanio conico. Le osservazioni sono state condotte per 6 settimane.

Fig 4. mostra i risultati di una tomografia computerizzata, eseguita per un anello preparato secondo l'invenzione e asportato da un animale sperimentale dopo 6 settimane di impianto. Un anello preparato secondo la descrizione dell'esempio 1 ? stato introdotto in un sito accettore (in mandibola) e stabilizzato con un impianto in titanio conico.

Fig 5. mostra uno schema di un anello secondo l'invenzione dove: x- diametro interno di un anello, y- diametro esterno di un anello, z- spessore di parete dell'anello, H altezza di un anello.

Fig 6. mostra il risultato di un test XTT, eseguito dopo 7 giorni di coltura cellulare effettuata su impalcature preparate da materiali Maxresorb?. I risultati sono espressi come valore medio per 6 misurazioni, come percentuale del controllo (valore normalizzato al risultato ottenuto in una popolazione di controllo, cio? cellule coltivate su una coltura normale media espresso in%).

Fig 7. mostra cellule (colorate con verde fluoresceina) vive, seminate e coltivate per 7 giorni in condizioni in vitro su un?impalcatura in materiale Maxresorb?. La fluorescenza corrisponde alla presenza di cellule viventi sul materiale.

Fig 8. mostra l'immagine di un vetrino istologico preso dopo la decalcificazione del campione e la rimozione dell?impianto in titanio. Paraffina campione inclusa ? stata preparata sezionando parallelamente all'asse lungo dell'impianto di titanio. Campioni macchiati di ematossilina/eosina raffigurano un'intera sezione trasversale di un?impalcatura ceramica, insieme al tessuto del destinatario che circonda l'anello. La figura ? stata preparata da un assemblaggio automatico delle fotografie scattate con un obiettivo 4X. Si ? mostrato in figura che la forma di un?impalcatura innestata ? stata mantenuta, nessun segno di riassorbimento ? evidente. Fig 9. mostra l'immagine di una vetrino istologico, preso dopo la decalcificazione del campione e la rimozione dell?impainto di titanio. Un campione incluso in paraffina ? stato preparato sezionando parallelamente all'asse lungo dell'impianto di titanio. Un campione macchiato di ematossilina/ eosina raffigura che tutti i pori dell'anello innestato, preparato secondo l'invenzione, sono riempiti con tessuto connettivo e tessuto osseo.

Fig 10. mostra l'immagine di un vetrino istologico, preso dopo la decalcificazione del campione e la rimozione dell?impainto di titanio. Un campione annegato in paraffina ? stato preparato sezionando in verticale all'asse lungo dell'impianto titanio. Un campione macchiato di ematossilina/eosina raffigura che tutti i pori dell'anello innestato, preparato secondo l'invenzione, sono riempiti con tessuto connettivo e tessuto osseo e una buona integrazione di questo anello con il tessuto del destinatario.

Fig 11. mostra l'immagine di un vetrino istologico, preso dopo la decalcificazione del campione e la rimozione dell?impainto di titanio. L'immagine di un campione macchiato con ematossilina / eosina presa con un forte ingrandimento raffigura anche il riempimento di pori dall?impalcatura con un nuovo tessuto destinatario, la penetrazione di un tessuto attraverso singoli pori di un?impalcatura, che conferma le dimensioni ottimali delle connessioni tra pori.

Fig 12. mostra l'immagine di un vetrino istologico, scattata dopo la decalcificazione. Un campione colorato con macchia tricromica di Goldner- Mason. Nella foto, la vascolarizzazione creata tra frammenti di nuovo tessuto osseo creato all'interno dei pori del materiale di un anello secondo l'invenzione da cui viene preparato ? mostrato (esempio 1).

Fig 13. mostra i risultati del test XTT eseguita in vari punti di tempo di una coltura cellulare effettuata in mezzo calcite.

Fig 14. mostra nuclei cellulari colorati con colorazione Hoechst. Un?immagine conferma una distribuzione uniforme delle cellule su una base di calcite porosa.

Fig 15. mostra cellule seminate su un?impalcatura di calcite e coltivate per 7 giorni. Le cellule viventi sono colorate in verde (colorazione falloidina), le cellule morte sono colorate in rosso (propidio ioduro).

Fig 16. mostra un anello formato da CaCO3 attorcigliato su un impianto dentale in titanio.

Fig 17. mostra anelli di chitosano (A) la mancanza di porosit? si vede sull'immagine; (B) un impianto in titanio avvitato in anello di chitosano.

Fig 18. mostra la porosit? degli anelli di chitosano e di chitosano modificato. Fig 19. mostra il disegno interno degli anelli di chitosano (A) e degli anelli modificati (B, C).

Fig 20. mostra anelli di PLLA modificato: a) campione iniziale, b) c) d) - anelli dopo coltura in successivi momenti.

Fig 21. mostra la vitalit? delle cellule osteogeniche sulla superficie di materiali ceramici con differente composizione di fase in una cultura su campioni piatti al 3 ? giorno di coltura (a) e in campioni porosi tridimensionali (struttura analoga a un anello) nella 3 ? settimana di cultura (b). I simboli di materiale hanno il seguente significato: K- controllo, cio? superficie di coltura standard in una forma di piastre di coltura in polistirene, 1-materiale ceramico a due fasi comprendente il 60% di idrossiapatite (composizione di fase come nel materiale Maxresorb?), 2- materiale ceramico due fasi comprendente> 99% di idrossiapatite, 3- materiale ceramico, bifasico comprendente <18% di idrossiapatite. Quando la sopravvivenza delle cellule in una cultura piatta rimane sul livello che ? non inferiore nel controllo, una sopravvivenza delle cellule coltivate in una struttura tridimensionale analogo all'anello ? alta - materiale "1". Quando la sopravvivenza in una cultura piatta rimane sul livello che ? statisticamente significativamente inferiore rispetto al controllo (* - P <0,001), le cellule sopravvivono in una struttura tridimensionale analoga all'anello in misura molto bassa. Come effetto, si ? rivelato che materiali "2" e "3" sono una superficie di cultura che non abbastanza adeguata alla coltura di cellule osteogeniche e non ha fornito una sopravvivenza adatta di tali cellule in una struttura tridimensionale di un anello. ;;Esempio 1. Un anello preparato dal 60% di idrossiapatite (HA) e dal 40% di beta fosfato tricalcico (?-TCP) (anello secco) ;;Materiale ceramico sintetico disponibile in commercio sotto forma di blocchi porosi ? sagomato in una forma di anello di una forma desiderata: ;Sequenza dei passaggi della procedura: ;1. da un blocco disponibile con dimensioni di 20x10x10 mm in materiale maxresorb? vengono formati tre blocchi con dimensioni di 10x10x5 mm; da ciascuno di essi vengono sviluppati cilindri con un'altezza di 5 mm e un diametro di 10 mm, utilizzando piezochirurgia SURGYSONIC II, prodotto da Esacromdevice e dotato di una punta di diamante ES 002 con un diametro di 150 micron e una potenza di 25 W e ampiezza di vibrazioni di 160 micron; ;2. nel cilindro preparato, un'apertura interna con diametro di 3,2 mm viene estratta, utilizzando piezochirurgia SURGYSONIC II prodotto da Esacromdevice attrezzata con punta di diamante ES 002 con un diametro di 150 micron e una potenza di 20 W e vibrazioni di ampiezza di 100 micron; ;3. un anello sagomato viene imballato e sterilizzato mediante radiazioni di 25 kGy. ;4. un anello sterile, ? pronto per un impianto nel sito accettore e per la fissazione con un impianto dentale. ;Per preparare gli anelli, si us? materiale commerciale disponibile col marchio di Maxresorb?. Si tratta di un materiale sintetico con un riassorbimento controllato. Il materiale ? costituito dal 60% di idrossiapatite (HA) e dal 40% di beta fosfato tricalcico (?-TCP) (anello secco) ? stato preparato sulla matrice dei pori collegati tra loro che forma un materiale con una porosit? di circa l?80% e pori con dimensioni di da 200 a 800 micron. ;;Esempio 2. Un anello saturo di terreno di coltura cellulare (anello bagnato) ;;Un materiale ceramico sintetico commercialmente disponibile sul mercato in una forma di blocchi porosi ? specificamente sagomato per la forma di un anello con la forma dimensionale desiderata (diametro esterno - 10 mm, diametro interno - 3,2 mm, altezza - 5 mm). L'anello preparato viene sterilizzato mediante radiazioni in una dose di 25 kGy - preparazione di anello secondo la descrizione dell'esempio 1. ;L'anello sterile ? posto in un terreno di coltura e con una pompa a vuoto viene sfiatato sotto vuoto. Per sfiatare un anello, ? stata applicata una pressione di circa 0,5 a 0,6 bar. ;Mentre l'anello viene sfiatato, un mezzo standard per coltura cellulare viene trasferito nei suoi pori. Composizione del mezzo di coltura: DMEM (Life Technologies) arricchito con siero bovino fetale inattivato (FBS) in una concentrazione del 10%, cui ? addizionato antibiotico in una forma di un preparato antibiotico-antimicotico (prodotto di Life Technologies, contenente 10000 unit? di penicillina - in forma di sale sodico, cio? la penicillina G, 10.000 mg streptomycin- in una forma di solfato di streptomicina), L-glutammina in una concentrazione di 2 mM (Life Technologies). Dopo aver sfiatato, gli anelli vengono trasferiti singolarmente in pozzetti di piastra da 24- pozzetti (il diametro di un pozzo ? 15 mm) e da 1,5 ml a 2 ml di terreno di coltura di una composizione come descritto sopra viene aggiunto. Tutte le fasi della procedura sono eseguite in un armadio con flusso laminare, garantendo condizioni di lavoro asettiche e i campioni rimangono nel terreno di coltura per un periodo di tempo da 12 do 24 ore per lavare il materiale residuo creato mentre il materiale ? stato sviluppato tecnologicamente, se necessario. Dopo questo tempo, l'anello viene lavato almeno 3x per 5 minuti in un mezzo di coltura senza FBS. Tale anello sterile preparato ? pronto per l'impianto in un sito accettore e per la fissazione con un impianto dentale. ;;Esempio 3. Un anello seminato con cellule ;;Le cellule sono isolate da frammenti di tessuto adiposo del destinatario. Per cellule di isolamento ? necessario un frammento di tessuto di un volume di almeno 20 ml a 40 ml. Il tessuto viene purificato meccanicamente per rimuovere tutti i tipi di tessuti diversi da quello adiposo e viene macinato in frammenti da 2 mm. Frammenti di tessuto vengono quindi lavati almeno 3x in soluzione di PBS (prodotto di Life Technologies) e vengono poi digeriti enzimaticamente in una soluzione di collagenasi (prodotto di Life Technologies) in una concentrazione di 400 U / ml = 0,15%. Il rapporto in volume della quantit? di tessuto adiposo rispetto alla collagenasi dovrebbe rimanere 1: 1. Tale soluzione preparata deve essere incubato a 37 ? C per 4h con l?applicazione di uno scuotimento costante di circa 200 rpm. Durante questo period, il tessuto adiposo viene disciolto in collagenasi. Avendo ottenuto una sospensione possibilmente omogenea, essa viene poi centrifugata a 1500 rpm per 10 min poi, il surnatante risultante viene rimosso e il granulo rimanente viene lavato in un mezzo di coltura di una composizione descritta nell'esempio II e centrifugato di nuovo a 1500 rpm per 5 min. Ancora una volta, il surnatante risultante viene rimosso e un granulo ? sospeso in un mezzo di coltura. Tale miscela ottenuta deve essere filtrata attraverso il filtro di nylon di una densit? di 100 micron. Un filtrato comprendente cellule isolate ? mescolato con terreno di coltura della composizione descritta nell'esempio II e vengono seminate in palloni di coltura (del volume di circa 15 ml) nel numero di 1 milione di cellule / 1 pallone. Sono utilizzati palloni di coltura sterili prodotte da NUNC con la superficie di cultura di 75 cm2. La coltura cellulare ? condotta in un incubatore, garantendo condizioni costanti di coltura, cio? umidit? superiore al 95%, temperatura di 37 ? C e la presenza del 5% di anidride carbonica. Il mezzo di coltura viene sostituito con uno nuovo ogni 3-4 giorni. La coltura cellulare ? continuata fino a confluenza - preferibilmente 70- 80% di confluenza. ;Poi, le cellule vengono staccate dal fondo dei palloni, mediante tripsinizzazione e, successivamente, vengono centrifugati a 1500 rpm per 10 min e contate in un emocitometro e vengono risospese nel volume adeguato di un terreno di coltura. ;Impalcature in forma di anelli, pronte all'uso, sterili (sterilizzate mediante radiazioni nella dose di 25 kGy), preparate secondo la descrizione compresa nell'Esempio I e ventilate secondo il procedimento descritto nell'esempio II, vennero seminate con cellule isolate dal tessuto adiposo e diffuso durante la coltura in vitro. Il processo di semina delle impalcature con le cellule ? effettuata sotto vuoto per assicurare una distribuzione uniforme delle cellule in tutta la superficie disponibile di un anello. ;Metodo di semina: impalcatura ventilata, sotto forma di un anello in ceramica, preparati secondo le modalit? descritta negli esempi I e II, viene trasferita in una siringa sterile da 10 centimetri. Le cellule staccate dalla superficie di coltura sono sospese nel mezzo di cultura DMEM (Life Technologies), arricchito con siero fetale bovino inattivato (FBS) in concentrazione del 10%, integrato con un antibiotico sotto forma di preparazione Antibiotico-antimicotica, L- glutammina della concentrazione di 2 mM (Life Technologies) e vitamina C sotto forma di acido L-fosfo-ascorbico alla concentrazione di 100?M (SIGMA) in una quantit? di 700.000 cellule / 2 ml mezzo. Soluzione di cellule preparata viene prelevata con una siringa contenente l'anello interno. L'aria contenuta in una siringa viene rimossa, poi, dopo la chiusura di una siringa si crea un vuoto all'interno mediante un delicato trascinamento e allentamento di un pistone. Tale attivit? si ripete 3 a 5 volte. L?impalcatura seminata in tal modo ? collocata all'interno di un pozzo di una piastra da 24- pozzetti e ricoperta con un volume di sospensione di cellule che rimaneva nella siringa. Tali impalcature preparate vengono trasferite in un incubatore garantendo condizioni di coltura costanti, cio? umidit? superiore al 95%, temperatura di 37 ? C e la presenza del 5% di anidride carbonica. Dopo 24 ore, il mezzo di coltura viene sostituito con la porzione fresca di un terreno di coltura della stessa composizione, per rimuovere le cellule che non aderiscono all?impalcatura e un?impalcatura stessa viene trasferita in un nuovo pozzo, all'interno della piastra di coltura. La coltura cellulare su tale impalcatura preparata avviene per altri 7 giorni in condizioni standard di coltura, in un incubatore con umidit? costante superiore al 95%, temperatura di 37 ? C e in presenza del 5% di anidride carbonica. Dopo tale tempo, l?impalcatura viene lavata almeno 3x per 5 minuti in un mezzo di coltura senza FBS. Tale impalcatura preparata / anello ? pronta per un impianto in un sito accettore e per la fissazione con un impianto dentale. ;Al fine di garantire il controllo di qualit? del trapianto preparato, ogni volta 2 ulteriori impalcature/ anelli seminati con cellule sono preparati. Queste impalcature sono utilizzate per valutare la vitalit? delle cellule coltivate nelle condizioni applicate. Contemporaneamente, viene valutata la citocompatibilit? del materiale utilizzato per preparare un anello. Per valutare la vitalit? delle cellule, il test XTT (prodotto di SIGMA) ? che misura l'attivit? della deidrogenasi cellulari mitocondriale e la colorazione dei tipi vivo/morto fluorescenza con fluoresceina e propidio ioduro reagenti (prodotti di Life Technologies) sono eseguite consentendo la ricostruzione e il confronto della quantit? delle cellule vive e morte fissato all?impalcatura al momento dell'impianto. La biocompatibilit? del materiale / anello ? stato dichiarato se la vitalit? delle cellule in coltura di esso quantificate con il test XTT era min. 70% rispetto alle cellule di controllo. I controlli sono le cellule coltivate sul fondo di una piastra di coltura nelle stesse condizioni come cellule coltivate su ponteggi. ;;Esempio 4. Verifica delle prestazioni dei prodotti descritti negli esempi II e III, effettuata mediante un'osservazione dopo l'impianto in tessuti animali sperimentali. ;;Gli anelli seminati con cellule e coltivate in condizioni in vitro sono stati osservati nei tessuti degli animali da esperimento (la descrizione del metodo di preparazione degli anelli ? compreso nell'esempio II e III). Gli anelli sono state trapiantati nella mandibola di una piccola cavia G?ttingen. Ciascun impianto ? stato effettuato in un sistema autogeno. Due anelli sono stati trapiantati in ciascun animale: uno seminato con cellule secondo la descrizione compresa nell'esempio III e il secondo non seminato e preparato secondo quanto descritto compreso nell'esempio II. Anelli individuali sono stati impiantati sul lato destro e sinistro di una mandibola, in parallelo. L'osservazione in condizioni in vivo ? stata condotta per 6 settimane. Dopo questo periodo di tempo, gli animali sono stati incisi e gli anelli impiantati con un nuovo tessuto circostante e una porzione di mandibola venne asportata. ;Macroscopicamente non ? stata notata nessuna differenza tra gli anelli seminati e non seminati. Tutti gli anelli sono stati fatti crescere e crescere eccessivamente con il tessuto e stabilmente inseriti in un osso mandibolare (la stabilit? dell'impianto media ? stata di circa 70 ISQ). Dopo cultura in vivo, n? capsula di tessuto connettivo intorno anelli n? segni di infiammazione macroscopici sono stati osservati. Gli anelli escissi sono stati trasferiti in formalina tamponata al 10% (prodotto di SIGMA). Le sezioni istologiche preparate del prodotto testato dopo l'osservazione in vivo rivelano la presenza di tessuto connettivo osso ben vascolarizzato e organizzato (colorazione HE) che riempiono i pori di entrambi i materiali di tipo (Fig. 8 a 12). Le fibre di collagene che sono luminescenti in una luce polarizzata sono state visualizzate con Sirius rosso. Le osservazioni effettuate al microscopio ottico confermano che gli anelli secondo l'invenzione forma la loro funzione e possono essere utilizzati per ricostruire perdite ossee verticali. ;;Esempio 5. Un anello preparato da carbonato di calcio. ;;Da un materiale ceramico costituito da carbonato di calcio (CaCO3), caratterizzato con il tipo calcite sono state preparate impalcature di struttura cristallina a forma di anelli con le dimensioni di: diametro interno 10 mm, diametro esterno 3,2 mm, altezza a 5 mm. Gli anelli sono stati caratterizzati dalla porosit? aperta del 70-80% e la dimensione dei pori 200-500 micron; la resistenza a compressione dei campioni testati ? di circa 0,7 MPa. La forma e i parametri tecnici dei campioni preparati suggerivano che gli anelli di calcite potrebbero essere utilizzati per la ricostruzione protesica. In ulteriori esperimenti gli anelli sono stati esposti al mezzo di coltura avente la seguente composizione: DMEM (Life Technologies), arricchito con siero fetale bovino inattivato (FBS) alla concentrazione del 10%, cui era addizionato antibiotico in forma di una preparazione antibiotico-antimicotico (prodotto di Life Technologies, contenente 10000 unit? di penicillina in forma di sale sodico, ossia penicillina G, 10.000 ug streptomycina- sotto forma di solfato di streptomicina), L-glutammina in concentrazione di 2 mM (Life Technologies). Gli anelli sono stati trasferiti in un mezzo e incubati nelle condizioni standard di coltura, cio? umidit? superiore al 95%, temperatura di 37 ? C e in presenza del 5% di anidride carbonica. Dopo incubazione della durata fino a 35 giorni nessun cambiamento nella struttura del materiale fu osservato ? la sua integrit? era mantenuta, le dimensioni esterne e interne non sono state alterate. In ulteriori esperimenti, cellule osteogeniche umane sono state seminate su anelli di calcite (la risposta della linea cellulare MG-63 disponibile commercialmente (ATTC) ? stata studiata anche in esperimenti separati) per effettuare una cultura in un contatto con anelli ceramici. Le colture sono state mantenute in condizioni dinamiche per il periodo di 7 a 35 giorni. Trascorso questo tempo, un test di valutazione della vitalit? cellulare ? stato eseguito il test MTT valutando l'attivit? di deidrogenasi cellulare mitocondriale. I risultati indicano elevata tollerabilit? delle celle del biomateriale utilizzato (Fig. 13). Inoltre, la possibilit? di una distribuzione uniforme delle cellule viventi sull'intera superficie disponibile cultura biomateriale di calcite ? stata confermata (Fig. 14 e 15). ;;Esempio 6 comparativo. ;;Introduzione. Scelta del materiale adatto per una preparazione di anello. ;;Durante il lavoro di ricerca, un certo numero di tipi di materiali citocompatibili sono stati testati contro le cellule osteogeniche, tali materiali potenzialmente potrebbero essere utilizzati per preparare un anello destinato a rigenerare perdite all'interno di mandibola o mascellare. ;Come risultato degli esperimenti del condotto in vitro e in vivo, ? stato riconosciuto che per preparare anelli secondo l'invenzione l?unico materiale citocompatibile che pu? essere utilizzato con la porosit? aperta del 70 al 80%, dimensioni dei pori nell?intervallo da 200 micron a 800 micron, preferibilmente da 200 micron a 500 micron e la dimensione delle giunzioni tra pori non inferiore a 100 micron. ;Inoltre, preferibilmente, la sua resistenza alla compressione ? paragonabile alla resistenza alla compressione di un osso spugnoso umano secco, vale a dire da 0,2 a 0,7 MPa, preferibilmente, dovrebbe essere di circa 0,7 MPa. ;E 'anche desiderabile che il materiale utilizzato per preparare l'anello secondo l'invenzione sia biodegradabile, tuttavia, la sua degradazione non deve avvenire troppo rapidamente e i parametri meccanici suddetti devono essere mantenuti almeno per il periodo di 30 giorni dal giorno del trapianto dell?anello. ;Inoltre, si desidera che il materiale dell'anello sia idrofilo. Questa caratteristica assicura un migliore assorbimento delle sostanze attive dal sangue, cio? migliora la guarigione dell?anello e la ricostruzione del tessuto osseo e facilita la semina cellulare. ;Inoltre, si desidera che l'anello sia caratterizzato dalla microporosit? e dalla granulosit? di una superficie. ;L'anello dovrebbe essere caratterizzato dalla facilit? di convenienza chirurgica che dovrebbe essere inteso in modo tale che, nonostante la sua fragilit?, tipica per i materiali ceramici, esso conserva la sua forma e non si schiaccia durante la manipolazione durante la fase di preparazione di un impianto e nell?l'impianto stesso. ;Nel caso dell'anello designato per essere seminato con cellule osteogeniche (come nell'Esempio 3), il materiale di cui l'anello ? fatto deve essere una superficie di coltura adatta per le cellule osteogeniche in coltura. Secondo l'invenzione, un materiale soddisfa tali criteri se la sopravvivenza delle cellule sulla superficie in materiale identico in termini di composizione chimica, in una forma che consente alle cellule di coltura in condizioni paragonabili ad una coltura cellulare di routine sulle piastre di coltura standard (polistirene ) non ? statisticamente significativamente inferiore che in una tale cultura di routine. Durante il lavoro per ottenere l'invenzione, si ? sorprendentemente trovato che la sopravvivenza statisticamente significativamente pi? bassa nelle condizioni di coltura in piastra ? correlata con la sopravvivenza sulla struttura ad anello tridimensionale, e l'influenza svantaggiosa di un materiale che si osserva in una coltura in piastra ? sorprendentemente potenziato nella struttura tridimensionale. Questo effetto ? presentato in Fig. 21. ;Alcuni esempi selezionati che descrivono realizzazioni senza successo di un anello preparato da materiali che non soddisfano i criteri dell'invenzione sono presentati qui di seguito. ;Anelli di chitosano ;;Durante gli studi preliminari effettuati e un'identificazione del biomateriale adatto per ricostruire le perdite ossee esistenti in una mascella o della mandibola sono stati preparati anelli di chitosano. Il chitosano ? un polimero di origine naturale. Una unit? elementare di una catena polimerica ? ? (1-4) 2-ammino-2-desossi-D-glucosio (o D-glucosammina). ? un materiale appartenente al gruppo di polimeri riassorbibili che viene utilizzata in una produzione di vari prodotti medici. Di conseguenza, impalcature porose di chitosano di forma ad anello e dimensioni interne ed esterne selezionate sono stati preparati. Impalcature sono formate per estrusione di granuli di chitosano precedentemente preparati, effettuati in forma adeguata. Il vantaggio delle impalcature ottenute ? la loro elevata resistenza alla compressione e alta biocompatibilit?. Si sospettava che tali propriet? di un materiale garantissero una costruzione adatta di supporto per le cellule e una futura ricostruzione del tessuto osseo dopo l'impianto del campione in un sito accettore. Le cellule sono state seminate sulle impalcature preparate e sottoposte a coltura in condizioni sperimentali standard. Ulteriori studi sulle caratteristiche delle impalcature sono stati eseguiti in parallelo. Sulla base dei risultati ottenuti, ? stato stabilito che anelli preparati con il metodo descritto sono stati caratterizzati da una porosit? bassa e da un piccolo diametro delle giunzioni tra i pori (Fig. 17, 18 e 19). I risultati delle osservazioni delle cellule hanno confermato anche che l'architettura dell?impalcatura disabilita anche la distribuzione cellulare sulla superficie del campione. Di conseguenza, tali impalcature non possono essere utilizzate in clinica perch? la dimensione dei pori impedisce ai vasi sanguigni di invadere l'impalcatura e quindi la nutrizione dei tessuti. ;Da ulteriori esperimenti tentativi per la modifica del preparato per gli anelli di chitosano sono state intraprese, tuttavia, tali tentativi non hanno portato un significativo miglioramento dell'architettura delle impalcature. ;Anello poroso ottenuto da copolimero di acido lattico e glicolico ;;Gli anelli sono stati preparati nella maniera seguente: la miscela di polimeri PDLLA-PLGA e PLLA viene disciolta in 1,4-diossano e viene aggiunto porogeno (NaCl) con la granulometria di 250- 500 micron nella quantit? di 270 mg per campione. Poi, la miscela viene congelata in azoto liquido e liofilizzata per un minimo di 10 giorni. Dopo la liofilizzazione, i campioni vengono pressati in forme sotto vuoto. Poi NaCl viene lavato via dai campioni e i campioni di impalcature vengono essiccati in aria per 24 ore dopo, seguiti da essiccazione sotto vuoto. A causa di tale procedura, ? stato ottenuto il materiale di una porosit? e dimensione dei pori desiderate. ;Dopo la semina con cellule, anelli sono mantenuti in condizioni di coltura cellulare, ossia nel mezzo di coltura analogo al mezzo, in un esempio presentato nella presente domanda. Le cellule tollerano bene il materiale di superficie di cultura e si dividono intensamente nella cultura ci? che dimostra la citocompatibilit? di tale biomateriale. ;In una coltura continua si verifica macroscopicamente e microscopicamente il degrado del materiale visibile, in modo che alla fine in condizioni in vitro (ancora fuori del sistema corporeo, prima dell'impianto nei tessuti) si ottiene un prodotto con completa disintegrazione dell?impalcatura. Si ? mostrato in Figura 20. ;Tale prodotto disintegrato non soddisfa i criteri che sono indicati per gli anelli per l'aumento, nonostante il fatto che sono stati rispettati i criteri relativi alla porosit? dell?impalcatura e alla citocompatibilit? del materiale. Pertanto, secondo l'invenzione, si richiede che il materiale di cui un anello ? realizzato sia stato caratterizzato dalla stabilit? in ambiente acquoso e biologicamente attivo, della durata di almeno 30 giorni. *

Claims (8)

1. RIVENDICAZIONI 1. Anello dentale, in particolare per una rigenerazione di una superficie ossea con la possibilit? di una introduzione simultanea di impianti dentali endossei in cui le dimensioni dell'anello sono: altezza (h) da 3 mm a 6 mm, diametro esterno (y) da 6,8 a 12 mm, diametro interno (x) da 2,8 a 6,0 mm e lo spessore di una parete (z) da 2 mm a 4 millimetri ed ? preparato da un materiale poroso citocompatibile con porosit? aperta dal 70 all?85%, dimensioni dei pori nell?intervallo da 200 ?m a 800 ?m, preferibilmente da 200 ?m a 500 ?m e con dimensioni delle giunzioni fra pori non minori di 100 ?m.
2. 2. Anello dentale secondo la rivendicazione 1, in cui la resistenza alla compressione ? da 0,2 a 0,7 MPa, preferibilmente circa 0,7 MPa.
3. 3. Anello dentale secondo la rivendicazione 1, in cui esso ? stato inoltre saturato con un mezzo di coltura, in particolare un mezzo per cellule staminali isolate dai tessuti di un donatore adulto.
4. 4. Anello dentale secondo la rivendicazione 1, in cui esso ? stato inoltre seminato con cellule, in particolare cellule staminali isolate da tessuti di un donatore adulto, preferibilmente in un sistema autogeno.
5. 5. Anello dentale secondo la rivendicazione 1, in cui esso ? stato preparato da un materiale che ? una superficie adatta per cellule osteogeniche in una cultura.
6. 6. Anello dentale secondo la rivendicazione 1, in cui esso ? stato preparato dal materiale poroso costituito dal 60% di idrossiapatite e dal 40% di beta fosfato tricalcico.
7. 7. Anello dentale secondo la rivendicazione 1, in cui esso ? stato preparato dal materiale poroso costituito da carbonato di calcio nella struttura cristallina di tipo calcite.
8. 8. Kit dentale in cui esso ? composto dall'anello come descritto nelle rivendicazioni 1-7 e dall?l'impianto dentale adattato.