ITMI20121963A1 - Composizione per prevenire e ridurre lo stress ossidativo cellulare e ritardare l'invecchiamento dell'organismo - Google Patents

Description

Descrizione dell’invenzione industriale dal titolo:

COMPOSIZIONE PER PREVENIRE E RIDURRE LO STRESS OSSIDATIVO CELLULARE E RITARDARE L’INVECCHIAMENTO DELL’ORGANISMO

CAMPO DELL’INVENZIONE

La presente invenzione concerne una composizione per prevenire e trattare lo stress ossidativo cellulare e ritardare l’invecchiamento dell’organismo.

La presente invenzione origina nel settore dei prodotti farmaceutici, dietetici o degli integratori alimentari.

STATO DELLA TECNICA

L'invecchiamento è un processo degenerativo progressivo con accumulo graduale di danni che comporta il malfunzionamento e l’indebolimento generale dell'o , rendendolo vulnerabile agli agenti patogeni e favorendo l'instaurarsi di patologie.

Un terzo circa dei fattori che portano all’invecchiamento è di origine genetica mentre i restanti due terzi originano da fattori esterni, principalmente l’interazione con l’ambiente e la nutrizione. Altri fattori esterni che influiscono sono l’attività fisica, l’assunzione di farmaci, i comportamenti voluttuari, e lo sviluppo do malattie. All’invecchiamento dell’organismo concorrono quindi una serie di fenomeni alla cui origine sono previste quattro principali ipotesi:

- l’ipotesi genetica

- ipotesi dei telomeri

- ipotesi immunitaria/infiammatoria

- ipotesi dei radicali liberi.

L’ipotesi genetica si basa sull'assunto che l’invecchiamento sia programmato a livello genetico per necessità evolutive. Nella fase di invecchiamento di un individuo si attivano almeno 35 geni e proteine prima silenti. Nel 1995 alcuni scienziati della Rockefeller University, annunciarono l'identificazione di due geni correlati con la longevità, appartenenti alla categoria detta di "manutenzione". Questi geni sono presenti in tutti gli individui tuttavia alcuni di essi sono meno efficienti di altri. I soggetti che riescono ad esprimere la versione più efficiente hanno una maggiore probabilità di vivere più a lungo. Uno di questi geni è quello che codifica per la Apolipoproteina E (Apo), una eteroproteina anfipatica con un gruppo prostetico lipidico di cui esistono 3 versioni. Di particolare importanza la versione E2 che conferisce protezione nei confronti delle malattie cardiovascolari.

L’ipotesi dei telomeri si basa sulla determinazione della lunghezza dei telomeri, la regione terminale del cromosoma composta di DNA altamente ripetuto e che non codifica per alcun prodotto proteico. Questa regione si riduce gradualmente con l'avanzare dell'età, inibendo progressivamente la proliferazione cellulare.

Esiste poi un’ipotesi immunitaria/infiammatoria o inflammaging. Questa si basa sul declino del sistema immunitario e sull’instaurarsi di processi infiammatori, più o meno silenti, dovuti all’usura dell’organismo, alla sua maggiore vulnerabilità ed alla minore capacità di neutralizzare l’eccesso di radicali liberi.

Una delle ipotesi attualmente più accreditata sulle cause dell’invecchiamento è quella del danno cellulare o stress ossidativo. Lo stress ossidativo, in un organismo vivente, rappresenta la rottura dell'equilibrio fisiologico fra la produzione e l'eliminazione di specie chimiche ossidanti o specie reattive dell'ossigeno (ROS), da parte dei sistemi di difesa antiossidanti.

Le specie reattive dell'ossigeno (ROS), sono intermedi altamente instabili dell’ossigeno, generalmente suddivisi in due categorie: i) i radicali liberi dell’ossigeno quali il radicale idrossile OH" e l’anione superossido O2", che contengono un elettrone spaiato e ii) le specie non radicaliche quali ad esempio il perossido di idrogeno H2O2·

Questi radicali svolgono importanti funzioni fisiologiche ma possono anche causare gravi danni alle principali componenti cellulari agendo su vari bersagli, come la membrana cellulare, i mitocondri, il nucleo, il DNA, le proteine e gli enzimi vari, e determinando finanche la morte cellulare.

Il nostro organismo introduce con la dieta, la respirazione e produce continuamente una grande quantità di radicali liberi. In condizioni fisiologiche l'organismo umano è provvisto di molecole antiossidanti e di mezzi di smaltimento quali meccanismi enzimatici antiossidanti per lo smaltimento di queste molecole nocive. Si parla di stress ossidativo quando nell’organismo si formano o accumulano più radicali liberi di quanto si riesce a smaltirne. Questo fenomeno è stato associato ad un invecchiamento precoce dell’organismo ed anche ad una serie di patologie umane come malattie cardiovascolari, diabete, cancro e malattie neurodegenerative [Halliwell and Cross (1994); Bray (1999); Forsberg et al.

(2001)].

Il danno da stress ossidativo è stato poi dimostrato nel caso di riperfusione del muscolo cardiaco dopo infarto miocardico. L'endotelio dei vasi sanguigni produce radicali liberi per controllare la contrazione dei vasi stessi: ad esempio l'ossido nitrico (NO) è essenziale per mantenere dilatati al punto giusto i vasi sanguigni e quindi permettere una corretta circolazione del sangue. I globuli rossi li producono per poter utilizzare correttamente l'ossigeno.

Notoriamente i radicali liberi sono prodotti anche da alcune cellule del sistema immunitario per favorire l’eliminazione dei microrganismi patogeni. Appare, dunque, evidente che i radicali liberi non costituiscono di per sé un problema ma lo diventano quando si rompe l'equilibrio tra le molecole prodotte e quelle eliminate, rendendo l'organismo inefficiente nel neutralizzare l’eccesso di radicali liberi. Questo può accadere quando altri fattori esterni contribuiscono alla produzione di radicali liberi quali l'inquinamento atmosferico, la presenza di prodotti chimici dannosi nei cibi, il fumo di sigaretta, le radiazioni, comprese quelle solari, lo stress fisico o emotivo, l’uso di alcuni farmaci, tra cui la pillola anticoncezionale, ecc.. Si è inoltre osservato che nel corso delle infezioni dell'organismo, i neutrofili ed i macrofagi, generano un eccesso di radicali liberi e di specie reattive dell'ossigeno, provocando un danno diffuso alle cellule ed una reazione infiammatoria cronica. L'organismo dispone di vari mezzi per prevenire e riparare i danni molecolari causati dai radicali liberi, ma la loro azione, nel complesso, non è sempre adeguata e la loro efficacia declina con l'avanzare dell'età.

Questi mezzi si avvalgono dell’uso di sostanze antiossidanti, come la Superossidodismutasi, il Glutatione, la Perossidasi, la Catalasi e l'acido urico; la ceruloplasmina; i sistemi di riparazione delle proteine come le proteinasi, le proteasi e le peptidasi; i sistemi di riparazione dei lipidi come le fosfolipasi, le acetiltrasferasi e la transferasi; i sistemi di riparazione del DNA come la eso e la endonucleasi, la glicosilasi, la polimerasi e la ligasi.

Esistono poi sostanze antiossidanti che necessitano di apporto esterno come le vitamine C, E, B1, B3, B6, paba e colina, i carotenoidi quali la luteina, l'alfacarotene, il betacarotene, il licopene, la zeaxantina e la betacriptoxantina.i bioflavonoidi, tra cui, la quercetina, ecc.. Altri bioflavonoidi che intervengono nei processi anti-ossidativi cellulari sono le proantocianidine, le procianidine, il resveratrolo, le antocianine, ecc..

Poiché i radicali liberi svolgono anche un ruolo fisiologico all'interno deH’organismo, risulta poi importante poter intervenire sui sistemi di difesa per potenziarli e renderli maggiormente efficaci nel neutralizzare l’eccesso di radicali che possono compromettere la funzionalità e l’efficienza delle cellule causandone un precoce invecchiamento.

Allo stato attuale si sente quindi l’esigenza di disporre di nuove sostanze o di associazioni di principi attivi che nel loro insieme svolgano un’efficace azione antiossidante a livello cellulare e consentano di ritardare il fisiologico processo di invecchiamento dell’organismo.

Uno degli scopi della presente invenzione consiste quindi nel combinare alcune selezionate sostanze in maniera da ottenere un effetto antiossidante cellulare sinergico.

Un altro scopo dell’invenzione consiste nel fornire un integratore alimentare o dietetico la cui assunzione riduca lo stress ossidativo cellulare contribuendo a ritardare l’invecchiamento fisiologico dell’organismo umano.

Ancora un ulteriore scopo dell’invenzione consiste nel fornire una composizione a base di un’associazione di principi attivi che potenzia i sistemi naturali di difesa dell’organismo umano riducendo o prevenendo il danno o lo stress ossidativo. SOMMARIO

Gli inventori della presente hanno individuato che l’associazione o combinazione di catechine con quattro selezionati principi attivi determina a livello cellulare, un effetto antiossidante sinergico che riduce lo stress ossidativo a livello cellulare. In particolare si è trovato che è possibile prevenire o ridurre in maniera sostanziale lo stress ossidativo cellulare somministrando una miscela di selezionati agenti antiossidanti a base di catechine, pterostilbene, quercetina, selenio, proantocianidine e caffeina.

In vista degli scopi precedentemente esposti, la presente invenzione concerne, in un primo aspetto, una composizione per prevenire e/o ridurre lo stress ossidativo cellulare e/o ritardare l'invecchiamento fisiologico del'organismo comprendente una combinazione di catechine con pterostilbene, selenio, quercetina e caffeina, ed un veicolo edibile.

In accordo ad alcune forme di realizzazioni le catechine sono contenute in un estratto di uva.

In accordo ad alcune forme di realizzazione la composizione dell’invenzione comprende proantocianidine in particolare da estratto di uva.

La composizione dell’invenzione può essere in una qualsiasi forma idonea per la somministrazione attraverso la via orale, sistemica o topica.

Tipicamente le composizione dell’invenzione contiene catechine, pterostilbene, quercetina, selenio e caffeina in miscela.

La composizione dell’invenzione trova specifica indicazione di utilizzo nella prevenzione e/o nel trattamento dello stress ossidativo cellulare ed nelle condizioni dell’organismo che trovano giovamento da una riduzione o ribilanciamento fisiologico dello stress cellulare. Tipicamente, queste condizioni comprendono l’invecchiamento precoce dell’organismo, la neurodegenerazione, riduzione dell’efficienza cardiaca, del tono vascolare, della densità ossea, o della risposta immunitaria dell’organismo.

In accordo ad un secondo aspetto la presente invenzione concerne l’uso di una composizione comprendente una combinazione di catechine con pterostilbene, selenio, quercetina e caffeina come principi attivi provvisti di attività antiossidante cellulare ed un veicolo edibile per prevenire o ridurre lo stress ossidativo o le specie reattive dell'ossigeno in una cellula o tessuto di un mammifero.

In accordo ad terzo aspetto dell’invenzione viene fornito l’uso di una composizione comprendente una combinazione di catechine con pterostilbene, selenio, quercetina e caffeina come principi attivi antiossidanti ed un veicolo edibile per ritardare l’invecchiamento dell’organismo di un individuo, in particolare un essere umano.

In accordo ad alcune forme di realizzazione la composizione dell'invenzione è in forma di una composizione farmaceutica comprendente un veicolo farmaceuticamente accettabile.

In accordo a certe forme di realizzazione la composizione dell’invenzione è in forma di un alimento funzionale, prodotto nutraceutico, prodotto o integratore dietetico o alimentare comprendente un veicolo edibile.

In accordo ad un altro aspetto la presente invenzione riguarda un metodo per ridurre o prevenire lo stresso ossidativo attraverso la somministrazione simultanea, separata o sequenziale di catechina, pterostilbene, quercetina, selenio e caffeina in un quantitativo attivo. In alcune forme di realizzazione preferite la somministrazione della composizione avviene mediante la via orale.

BREVE DESCRIZIONE DEI DISEGNI

La figura 1 illustra in maniera schematica i principali danni ed effetti causati dallo stress ossidativo sulle cellule dell'organismo di un individuo,

La figura 2 illustra un grafico a blocchi che evidenzia la riduzione della sintesi e del rilascio della citochina pro-infiammatoria TNFalpha in tre miscele di cui la N. 3 secondo l’invenzione, rispetto al controllo;

La figura 3 illustra un grafico a blocchi che evidenzia la riduzione significativa della sintesi e rilascio della citochina anti-infiammatoria IL-4 a seguito di trattamento con tre miscele antiossidanti in particolare della miscela 3 secondo l’invenzione, La figura 4 illustra un grafico a blocchi che evidenzia la variazione% media delle attività degli enzimi antiossidanti SOD in colture di fibroblasti trattate con MISCELA 1, MISCELA 2 e MISCELA 3 (dell’invenzione) rispetto a colture non trattate,

La figura 5 illustra un grafico a blocchi che evidenzia la variazione percentuale media delle attività degli enzimi antiossidanti CAT in colture di fibroblasti trattate con MISCELA 1, MISCELA 2 e MISCELA 3 (dell'invenzione) rispetto a colture non trattate,

La figura 6 illustra un grafico a blocchi che evidenzia la variazione percentuale media delle attività degli enzimi antiossidanti GPx in colture di fibroblasti trattate con MISCELA 1, MISCELA 2 e MISCELA 3 (dell’invenzione) rispetto a colture non trattate,

la figura 7 illustra un grafico a blocchi che evidenzia la variazione percentuale media dell’espressione dell'enzima SOD in colture di fibroblasti trattate con MISCELA 1, MISCELA 2 e MISCELA 3 (dell’invenzione) rispetto a colture non trattate.

DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL’INVENZIONE

In accordo ad alcuni aspetti dell’invenzione, la richiedente ha trovato che somministrando ad un soggetto una composizione contenente una combinazione di catechine con pterostilbene, selenio, quercetina e caffeina in un veicolo edibile si ottiene un effetto antiossidante sinergico che riduce una eccessiva attività ossidativa cellulare preservando la vitalità e/o la funzionalità della cellula.

Conseguentemente la presente invenzione fornisce, in un primo aspetto, una composizione comprendente catechine, pterostilbene, selenio, quercetina e caffeina in un quantitativo efficace nel ridurre i fenomeni ossidativi cellulare ed un veicolo edibile.

Le catechine sono metaboliti polifenolici antiossidanti tipicamente di origine vegetale e specificatamente detti flavan-3-oli.

Le catechine possiedono due anelli di benzene (datti anello A- e B) ed un eterociclo di diidropirano (l’anello a C) con un gruppo OH sul carbonio 3. Tipicamente esistono due centri chirali sulla molecola sui carboni 2 e 3. Pertanto le cathine hanno 4 diastereoisomeri. Due degli isomeri sono in configurazione trans e sono detti catechine mentre gli altri due sono in configurazione cis e sono detti epicatechine.

Nell’ambito dell’invenzione trovano specifica applicazione sia le catechine non-epi come catechina, gallocatechina, catechina gallato e gallocatechina gallato che le epi-catechine come epicatechina, epigallocatechina, epicatechina gallato, epigallocatechina gallato e loro miscele.

In alcune forme di realizzazione le catechine comprendono epi- e non-epicatechine polimeriche o proantocianidine. Questi sono composti o bioflavonoidi oligomeri comprendenti unità di catechine o epi-catechine. Tipicamente le proantocianidine riscaldate in ambiente acido, idrolizzano fornendo antocianidine. In certe forme di realizzazione gli oligomeri comprendono da 2 a 10, preferibilmente da 2 a 4 unità flavaniche o monomeri di catechina e/o epicatechina.

In certe forme dì realizzazione idonee proantocianidine o oligomeri di catechine hanno un peso molecolare che varia da 500 a 3000 Dalton.

Secondo alcune forme di realizzazione la composizione dell'invenzione comprende un estratto naturale, tipicamente di origine vegetale, che contiene catechine e/o proantocianidine in particolare del tipo precedentemente descritto. In alcune forme di realizzazione, l'estratto vegetale che contiene catechina/e è da uva (vitis vinifera).

Un idoneo estratto da uva ha un titolo in proantocianidine oligomeriche pari al 95%. I metodi usati per la determinazione quantitativa impiegata possono essere diversi e comprendono la HPLC e la Spettrometria di massa.

I polimeri veri e propri sono denominati invece tannini o composti tannici. Le proantocianidine oligomeriche possono essere anche esterificate parzialmente con acido gallico.

A titoli di esempio una composizione percentuale tipica dell'estratto di uva rossa (semi) comprende:

- da 0,01 a 2% monomeri (catechina e epicatechina)

-15% dimeri (proantocianidina B1, B2, B3 e B4)

-20% dimeri e tetrameri

-60% oligomeri da 5 a 7 unità.

In accordo ad alcune forme di realizzazione l’estratto di uva presenta un quantitativo di acido Gallico > 1%, un rapporto in peso catechine/epicatechine >20% e un quantiattivo di proantocianidine in particolare dimere (B1-B4) >4%. Questi 3 parametri sono determinati mediante HPLC.

L’estratto di uva può essere ottenuto mediante tecniche convenzionali come ad esempio l’estrazione mediante centrifuga. Un estratto di uva può essere concentrato e quindi utilizzato come componente della composizione dell'invenzione.

Secondo alcune forme di realizzazione il quantitativo di estratto vegetale che contiene catechine e/o proantocianidine nella composizione dell'invenzione varia da 10 a 2000mg, preferibilmente da 50 a 1000 mg, più preferibilmente da 200 a 700 mg.

In accordo ad alcune forme di realizzazione, la quantità di catechine e/o proantocianidine varia da 0,01% a 20%, più preferibilmente dal 0,1 al 5%, ancor più preferibilmente dallo 0,05 al 3% in peso, rispetto al peso totale della composizione.

Uno dei componenti della composizione dell’invenzione è pterostilbene, 4-[(E)-2-(3,5-Dimethoxyphenyl)ethenyl]phenol, uno stilbenoide chimicamente correlato (doppia metilazione) al resveratrolo che presenta una più elevata biodisponibilità poiché è più facilmente trasportato nelle cellule ed è più resistente alla degradazione.

In accordo ad alcune forme di realizzazione lo pterostilbene è di origine naturale. Secondo alcune forme di realizzazione la composizione dell’invenzione comprende un estratto naturale, tipicamente di origine vegetale, che contiene pterostilbene. In alcune forme di realizzazione, l’estratto vegetale che contiene pterostilbene è da Pterocarpus marsupium. Una idonea forma di estratto di Pterocarpus marsupium contiene un titolo al 5% in pterostilbene.

Secondo alcune forme di realizzazione il quantitativo di estratto vegetale che contiene pterostilbene nella composizione dell’invenzione varia da 10 a 2000mg, preferibilmente da 50 a 1000 mg, più preferibilmente da 200 a 700 mg.

In accordo ad alcune forme di realizzazione, la quantità di pterostilbene varia da 0,01% a 85%, più preferibilmente dal 10 al 65%, ancor più preferibilmente dal 60 al 65% in peso rispetto al peso totale della composizione.

Il selenio presente nella composizione dell’invenzione è un oligoelemento. In alcune forme di realizzazione il selenio presente nella composizione dell’invenzione è in forma di seleniometionina (acido 2-amino-4-metilselanilbutanoico)un aminoacido che contiene selenio naturalmente.

In accordo ad alcune forme di realizzazione si usa l’enantiomero-L della selenometionina, noto anche come Se-Met e SEM.

In alcune forme di realizzazione il quantitativo di selenio all’interno della composizione varia da 5 a 250 mcg, preferibilmente da 10 a 70 mcg, più preferibilmente da 27,5 a 55 mcg, intervallo che corrisponde a ca. il 50-100% dell’RDA giornaliero di questo oligoelemento.

In alcune forme di realizzazione il selenio varia dallo 0,0001 al 1%, preferibilmente dallo 0,001 allo 0,5% in peso rispetto il peso della composizione.

La quercetina (3,3',4',5,7-pentaidrossiflavone) presente nella composizione dell’invenzione appartiene al gruppo di flavonoli ed è la componente aglicone di vari glicosidi, tra cui la rutina e la quercitrina.

In alcune forme di realizzazione il quantitativo di quercetina presente nella composizione varia da 10 a 1000 mg, preferibilmente da 10 a 300 mg, più preferibilmente da 30 a 70 mg.

In accordo ad alcune forme di realizzazione la quercetina è di origine naturale. Secondo alcune forme di realizzazione la composizione dell’invenzione comprende un estratto naturale, tipicamente di origine vegetale, che contiene quercetina.

In alcune forme di realizzazione la quercetina varia dallo 1 al 25%, preferibilmente dallo 0,5 al 15% in peso rispetto il peso della composizione.

La caffeina (1 ,3,7-trimetil-1 H-purin-2,6(3H,7H)-dione-3,7-diidro-1 ,3,7-trimetil-1 H-purin-2,6-dione) presente nella composizione dell’invenzione è un alcaloide naturale presente in numero specie vegetali.

In alcune forme di realizzazione il quantitativo di caffeina presente nella composizione varia da 30 a 300 mg, preferibilmente da 50 a 150 mg, più preferibilmente da 80 a 120 mg.

In accordo ad alcune forme di realizzazione la composizione dell’invenzione comprende uno o più di altri agenti antiossidanti non enzimatici in particolare scelti tra vitamine, quali vitamina C, vitamina E, vitamina A, vitamina D, vitamina K, vitamina del gruppo B; minerali quali zinco, manganese, rame, antiossidanti di origine vegetale quali licopene, glucosinolati, antacianosidi; coenzima Q10 e lipidi poiinsaturi come gli acidi omega 3 e loro miscele.

In accordo ad alcune forme di realizzazione la composizione comprende almeno un altro estratto vegetale scelto tra Boswella serrata, Anice stellato, Bacopa moniera.

Alcune forme di realizzazione della composizione contengono ulteriormente equolo, o un estratto di soia fermentata titolata in agliconi totali. In queste forme di realizzazione, il quantitativo di equolo previsto nella composizione può variare ad esempio da 5 a 10 mg. Le forme di realizzazione della composizione contenenti equolo sono particolarmente indicate ad essere somministrate a soggetti di genere femminile.

In alcune forme di realizzazione la composizione contiene ulteriormente una frazione di fieno greco titolata in fenusidi. In queste forme di realizzazione, il quantitativo di fieno greco previsto nella composizione può variare ad esempio da 100 a 400 mg. Le forme di realizzazione della composizione contenenti fieno greco sono particolarmente indicate ad essere somministrate a soggetti di genere maschile.

Secondo alcune forme di realizzazione la composizione contiene ulteriormente uno o più sostanze in grado di aumentare la biodisponibilità degli ingredienti attivi in essa contenuti, come ad esempio un estratto di pepe nero ad esempio titolato al 95% in piperina.

In accordo ad alcuni aspetti dell'invenzione vien fornito l’uso di una composizione secondo una qualsiasi delle forme di realizzazione precedentemente descritte per ritardare l'invecchiamento generale dell’organismo di un individuo.

In accordo a certi alcuni aspetti dell’invenzione vien fornito l’uso di una composizione secondo una qualsiasi delle forme di realizzazione precedentemente descritte per ridurre la generazione di ROS.

alcuni aspetti dell’invenzione vien fornito una composizione secondo una qualsiasi delle forme di realizzazione precedentemente descritte per l’uso nel trattamento o prevenzione di malattie, condizioni o sintomi connessi con uno stress ossidativo cellulare o con una generazione di ROS superiore ai livelli fisiologici.

Tipicamente i livelli di ROS possono essere determinati mediante mezzi e metodi noti come ad esempio analisi della perossidazione lipidica (LPO), electron spin resonance (ESR), e microscopia in fluorescenza a base di analisi ad immagine usando coloranti fluorescenti specifici per ROS o mediante la metodica descritta in “Detection of reactive oxygen species by flow cytometry after spinai cord injury" Jian Luo in Journal of Neuroscience Methods 120 (2002) 105_/112, il cui contenuto è qui incorporato per riferimento.

In accordo ad alcuni aspetti dell’invenzione vien fornito l’uso di una composizione secondo una qualsiasi delle forme di realizzazione precedentemente descritte per ritardare l’invecchiamento cutaneo.

In accordo ad alcuni aspetti dell’invenzione vien fornito l’uso di una composizione secondo una qualsiasi delle forme di realizzazione precedentemente descritte per ritardare l’invecchiamento cerebrale.

In accordo ad alcuni aspetti dell’invenzione vien fornito l’uso di una composizione secondo una qualsiasi delle forme di realizzazione precedentemente descritte per ritardare l’invecchiamento articolare.

In accordo ad alcuni aspetti dell’invenzione vien fornito l’uso di una composizione secondo una qualsiasi delle forme di realizzazione precedentemente descritte per migliorare la risposta immunitaria dell’organismo.

La composizione dell’invenzione comprende qualsiasi composizione o formulazione ottenuta miscelando l’associazione o combinazione di principi attivi secondo una qualsiasi forma di realizzazione dell’invenzione precedentemente descritta ed un veicolo edibile o farmaceuticamente accettabile. Tali composizioni sono idonee per l’uso farmaceutico, nutrizionale o dietetico in un essere umano o in un animale.

Il veicolo può assumere un’ampia varietà di forme in funzione della forma dì preparazione idonea alla somministrazione orale ad esempio compresse, capsule, polveri. Nella preparazione delle composizioni per la forma di somministrazione orale possono essere impiegati uno o più degli usuali mezzi farmaceutici o nutrizionali. Nel caso di preparazioni in forma solida come ad esempio compresse, capsule, polveri etc., possono essere impiegati veicoli come amidi, zuccheri, cellulosa microcristallina, diluenti, agenti di granulazione, lubrificanti, leganti, disgreganti e simili, le preparazioni in forma solida essendo comunque preferite rispetto a quelle in forma liquida. Nel caso di preparazioni liquide come ad esempio sospensioni, soluzioni, elixir, possono essere utilizzati acqua, glicoli, oli, alcoli, agenti aromatizzanti, conservanti, coloranti, e simili.

Secondo alcune forme di realizzazione, i composti della presente invenzione possono essere combinati come principio attivo in miscela intima con un idoneo veicolo edibile e/o eccipiente in accordo alle tecniche farmaceutiche o alimentari convenzionali o delle tecniche di lavorazione dei prodotti dietetici/nutrizionali.

Una via di somministrazione preferita della composizione dell’invenzione è la via orale. Le composizioni convenientemente possono essere presentate in una forma di dosaggio unitaria e preparate in accordo a uno qualsiasi dei metodi ben noti nella tecnica farmaceutica o della lavorazione dei prodotti alimentari.

Le composizioni farmaceutiche possono essere in forma di compresse, pillole, capsule, soluzioni, sospensioni emulsioni, sospensioni polveri ed in idonee forme di dosaggio controllato.

Se si desidera, le compresse possono essere coperte mediante tecniche standard in fase a acquosa o non. In alcune forme di realizzazione tali composizioni e preparazioni possono contenere almeno lo 0,1 % di ciascuno dei principi attivi. La percentuali di principi attivi in queste composizioni può variare ad esempio dall’1 al 60% in peso del peso deH’unità.

Tipicamente, le compresse, capsule, pillole e simili possono anche contenere un agente legante come gomma adragante, acacia, amido di mais, o gelatina; eccipienti come dicalcio fosfato; un agente disgregante come amido di patata, amido di mais, acido alginicio; un agente lubrificante come magnesio stearato; un agente dolcificante come saccarosio, lattosio o saccarina. Quando la forma dell’unità di dosaggio è quella in capsula, essa può contenere, in aggiunta ai materiali del tipo precedentemente descritto, un veicolo liquido come un olio grasso.

In accordo ad alcune forme di realizzazione la composizione dell’invenzione comprende ulteriormente uno o più componenti addizionali, come additivi, riempitivi, cariche, stabilizzanti, emulsionanti, plasticizzanti, agenti filmanti, agenti umidificanti, addensanti, strutturanti.

Diversi altri materiali possono essere presenti come rivestimenti o materiali idonei a modificare la forma fisica dell’unità di dosaggio.

Ad esempio le compresse possono essere rivestire con gomma lacca zucchero o entrambi. Nei casi di preparazioni come sciroppi o elixir, oltre alla associazione di principi attivi, possono essere presenti saccarosio, come agente dolcificante, metil e propil-parabeni come conservati, uno o più coloranti e/o aromatizzanti come aromi di fragola, ciliegia etc.

Secondo alcune forme di realizzazione la composizione può essere una formulazione con rivestimento enterico al fine di prevenire la rottura durante il transito nella porzione superiore del tratto gastrointestinale.

Secondo alcune forme di realizzazione, nella composizione dell’invenzione, la combinazione di principi attivi viene formulata in unità di dosaggio. L'unità di dosaggio può contenere da 0.1 a 1000 mg di ciascuno dei principi attivi per unità di dosaggio per la somministrazione giornaliera.

Il quantitativo di ingredienti attivi in dette composizioni è tale da ottenere un effetto profilattico, terapeutico o dietetico secondo l'invenzione.

In alcune forme di realizzazione i quantitativi efficaci per formulazione dipenderanno dalla gravità della malattia, affezione o patologia dallo stato di salute individuale e dalla risposta terapeutica alla associazione di principi attivi.

In alcune forme di realizzazione la dose da somministrare varia da 0,001% in peso a ca. il 60% in peso della formulazione.

In accordo ad alcune forme di realizzazione la composizione dell’invenzione è un alimento funzionale, una composizione nutraceutica, un prodotto dietetico, un complemento o prodotto nutrizionale.

Terminologia

Nell’ambito della presente invenzione i termini riportati in descrizione posseggono i seguenti significati.

Il termine “veicolo” si riferisce ad un eccipiente, veicolo, diluente o coadiuvante che può o possono essere presenti nella composizione dell’invenzione. Qualsiasi veicolo e/o eccipiente idoneo per la forma di preparazione desiderata per la somministrazione viene contemplata negli utilizzi dei composti o principi attivi quivi descritti.

Con il termine “edibile” si intende una sostanza assimilabile ad un alimento il cui uso nel settore farmaceutico, dietetico o alimentare sia stata approvato dalle Autorità Regolatone.

Con il termine di “sinergismo o di attività sinergica” si intende un’attività che è maggiore della somma delle attività del principio attivo quando preso da solo.

Tipicamente, il sinergismo tra principi attivi, farmaci o integratori si verifica quando due ingredienti attivi interagiscono in maniera o con modalità che aumentano o evidenziano uno o più dei loro effetti.

Il termine antiossidante si riferisce ad un agente enzimatico o non enzimatico che riduce o impedisce l’ossidazione di altre sostanze. Un ossidante può proteggere le cellule dell’organismo dall’effetto delle specie reattive dell’ossigeno (ROS).

Il termine stress ossidativo significa uno sbilanciamento tra la produzione di specie reattive dell’ossigeno da una parte e, dall’altra, la detossificazione degli intermedi reattivi e/o la riparazione dei danni risultanti.

Alimento funzionale significa un qualsiasi alimento o ingrediente alimentare modificato che può fornire un beneficio o protezione contro un inconveniente o una affezione fisiologica, oltre ai nutrienti tradizionali che esso contiene.

Prodotto nutraceutico significa un prodotto isolato o purificato da sostanze commestibili. Un nutraceutico è tale quando si dimostra che possiede un beneficio fisiologico o che fornisce protezione contro un inconveniente o disordine fisiologico.

Integratore dietetico o alimentare significa un prodotto che contiene una vitamina, minerale, estratto vegetale, aminoacido, metabolita, estratto, concentrato o miscele di questi ingredienti.

Il termine associazione si riferisce ad una combinazione di prodotti, principi attivi o ad almeno due prodotti che sono somministrati o ingeriti da un soggetto in maniera sequenziale, separata o simultanea al fine di fornire un effetto combinato. Il termine individuo, soggetto si riferisce ad un animale, preferibilmente un mammifero, tipicamente un essere umano che riceve la composizione dell’invenzione.

La presente invenzione verrà ora descritta facendo riferimento ai seguenti esempi che vengono forniti a meri fini illustrativi e non devono essere intesi in senso limitativo della presente invenzione.

ESEMPIO 1

Composizione per ridurre lo stress ossidativo e ritardare l’invecchiamento dell’organismo in forma di compressa avente la seguente formula

Ingrediente P.A. titolo della mg/un. g/100 g materia prima

Agente di carica: cellulosa 207.000 31.364 microcristallina

Estratto di Uva (Vitis vinifera) 95% Polifenoli 400.000 estratto di Pterocarpus 5% Pterostilbene 160.000 marsupium

Agente di carica: dicalcio fosfato 150.000 22.727

Caffeina anidra 100.000

Quercetina 50.000

Antioagglomerante: 16.000 2.424 carbossimetilcellulosa sodica

reticolata

Agente di rivestimento: 13.000 1. 970 idrossipropilmetil cellulosa

Antiagglomerante: beenato di 12.000 1. 818 glicerolo

Stabilizzante: polivinilpirrolidone 10.000 1.515

Antiagglomerante: magnesio 10.000 1.515 stearato vegetale

Antiagglomerante: biossido di 10.000 1.515 silicio

Selenio metionina 8.000

Colorante: biossido di titanio 3.000 0.455

Agente di rivestimento: cellulosa 2.000 0.303 microcristallina

Agente di rivestimento: acido 2.000 0.303 stearico

Totale 100.000

ESEMPIO 2

Sono state preparate tre miscele/composizioni in forma di compressa, di queste la composizione 3 presentava una formulazione in accordo alla presente invenzione Compressa 1 (comparativa):

- Pterocarpus marsupium estratto secco 480 mg

- Selenio metionina 8 mg - Caffeina 100 mg

- Quercetina 50 mg Compressa 2 (comparativa):

- Vitis vinifera estratto secco contenente catechine 400 mg

- Selenio metionina 8 mg - Caffeina 100 mg

- Guercetina 50 mg Compressa 3 (dell'invenzione):

- Vitis vinifera estratto secco a base di catechine 400 mg - Pterocarpus marsupium estratto secco 160 mg

- Selenio metionina 8 mg - Caffeina 100 mg

- Quercetina 50 mg Preparazione dei tre tipi di compressa

Gli ingredienti precedentemente menzionati sono stati miscelati e setacciati su rete 1.0 mm. Tutti i componenti ad eccezione del Magnesio stearato sono stati trasferiti nel mescolatore e miscelati per 10 minuti. Successivamente è stato trasferito nel mescolatore il magnesio stearato e miscelato per 5 minuti.

La miscela è stata compressa al peso teorico di 1500 mg/cpr (formato 17.5 x 8.8 mm senza tacca di prerottura).

Le compresse sono state così rivestite con la dispersione degli agenti di rivestimento indicati nella tabella dell'Esempio 1.

Nella seguente Tabella si riportano i dati sperimentali delle 3 miscele o composizioni:

MISCELA 1 MISCELA 2 MISCELA 3 Conc. Conc. più Conc. più Conc. Conc. Conc. più più alta (0,126 bassa più alta più bassa alta bassa mg/ml) (0,0558 (0,1116 (0,0718 (0,1436 (0,063 mg/ml) mg/ml) mg/ml) mg/ml) mg/ml)

TNF-alfa Riduce ma Riduce e citochina non normalizza proinfiam normalizza il il rilascio di matoria rilascio TNF-alfa

TNF-alfa

IL-4 0 4% 3,80% 6,60% citochina

antinfiam

matoria

Sintesi 3,70 % 5,41% 0 5% 2,82% 6,50% SOD

Attività 3,4% 14,3% 35% 59,5% SOD

Attività 2,2% 5,8% 10% 36% GSH-Px

Attività 7,4% 20,6% 14,3% 25,4% cat

La miscela in forma di compressa 3 contenente la combinazione sinergica di

principi attivi dell'invenzione è risultata considerevolmente più attiva delle altre due

composizioni comparative.

La composizione/miscela 3 ha dimostrato le seguenti attività:

Induzione di una maggiore quantità di superossido dismutasi (SOD), Miglioramento dell’attività enzimatica di SOD, catalasi e glutatione perossidasi, Protezioni delle cellule dall’insulto ossidativo causato da un agente proinfiammatorio.

ESEMPIO 3

Studio di efficacia in vitro

E’ stato effettuato uno studio dell’attività biologica delle tre miscele di ingredienti dell’Esempio 2 in un modello sperimentale in vitro.

Scopo dello studio

Lo studio descritto in questa relazione ha avuto lo scopo di valutare in un sistema in vitro la capacità delle 3 miscele di ingredienti di

Modulare l’espressione delle citochine in uno stato infiammatorio artificialmente indotto; le citochine monitorate nello studio sono state la citochina proinfiammatoria TNF-alpha e la citochina antinfiammatoria IL-4.

Modulare l’attività degli enzimi antiossidanti Superossido Dismutasi (SOD) , Catalasi (CAT) e Glutatione Perossidasi (GPx)

Modulare l’espressione dell’enzima Superossido dismutasi (SOD)

Il modello sperimentale utilizzato in questo studio è rappresentato da fibroblasti umani (ATCC-CRL-2703) esposti a trattamento con le miscele a 2 differenti concentrazioni, tali da mimare

Assorbimento completo e veicolazione in un circolo sistemico di 5L (pari al volume ematico medio in circolo in un uomo adulto di 70 kg)

Assorbimento parziale (50%) e veicolazione in un circolo sistemico di 5L (pari al volume ematico medio in circolo in un uomo adulto di 70 kg).

Campioni sottoposti a test

I campioni sottoposti a test sono:

MISCELA 1

MISCELA 2

MISCELA 3 SINERGICA DELL’INVENZIONE

Di seguito la composizione delle miscele sottoposte a test:

MISCELA 1 MISCELA 2 MISCELA 3

(Composizione dell’invenzione) Pterocarpus

marsupium 480 mg/cpr 160 mg/cpr estratto secco

Vitis vinifera

400 mg/cpr 400 mg/cpr estratto secco

Selenio metionina 8 mg/cpr 8 mg/cpr 8 mg/cpr Caffeina 100 mg/cpr 100 mg/cpr 100 mg/cpr Quercetina 50 mg/cpr 50 mg/cpr 50 mg/cpr

Le miscele sono state diluite in terreno di coltura.

Un test di citotossicità è stato eseguito al fine di definire la compatibilità delle miscele con il modello sperimentale e verificare che le concentrazioni di ogni miscela scelte per l’esecuzione degli studi non fossero citotossiche.

Di seguito le concentrazioni testate per ognuna delle miscele:

MISCELA I MISCELA 2 Miscela 3

Concentrazione 1

assorbimento 0.1276 mg/ml 0.1116 mg/ml 0.1436 mg/ml completo

Concentrazione 2

assorbimento 0.0638 mg/ml 0.0558 mg/ml 0.0718 mg/ml parziale

Studio dell’attività antinfiammatoria

Le colture cellulari sono state trattate per 24 ore con un agente pro-infiammatorio; nello specifico è stato utilizzato uno standard di Sodio Dodecil Solfato (SDS) che alla concentrazione di 0.05mg/ml è in grado di mimare un evento infiammatorio acuto, con incremento significativo dei marker di infiammazione.

L’induzione dell'infiammazione nelle colture cellulari è avvenuta in presenza ed in assenza delle miscele sottoposte a test, alle concentrazioni definite.

Al termine delle 24 ore di trattamento i terreni di coltura sono stati prelevati per il dosaggio della citochina pro-infiammatoria TNFalpha e della citochina antinfiammatoria IL-4.

I dosaggi sono stati effettuati rispetto ad una coltura di controllo negativo (non trattata in alcun modo, che esprime i livelli basali delle due citochine monitorate) e ad una coltura di controllo positivo (trattata esclusivamente con SDS (che esprime livelli significativamente alterati delle citochine monitorate).

Il dosaggio delle citochine è stato effettuato con metodo ELISA, sfruttando il legame specifico antigene-anticorpo. I complessi immuni sono stati evidenziati con anticorpo secondario coniugato ad un enzima in grado di catalizzare la reazione su specifico substrato producendo un cromoforo stabile.

Lo studio è stato condotto in triplo.

Studio del potenziale antiossidante e dosaggio dell’attività degli enzimi SOD, CAT e GPx

E’ stata misurata la capacità antiossidante di tipo enzimatico delle colture cellulari trattate con le miscele sottoposte a test ed in particolare l’attività degli enzimi antiossidanti superossido dismutasi (SOD), catalasi (CAT) e glutatione perossidasi (GPx).

Questi enzimi lavorano insieme ed in sinergia tra di loro per neutralizzare i radicali liberi e gli agenti ossidanti in generale: semplificando il meccanismo d'azione, l’enzima SOD dismuta l’anione superossido producendo perossido di idrogeno, il quale viene neutralizzato dagli enzimi GPx e CAT in acqua; i due enzimi hanno sensibilità e tempistiche di azione diverse: GPx interviene già a basse concentrazioni di perossido di idrogeno, mentre l’enzima CAT si attiva su concentrazioni di perossido di idrogeno più elevate.

Le colture cellulari sono state trattate per 24 ore con le miscele sottoposte a test, alle concentrazioni definite.

Al termine delle 24 ore di trattamento le cellule sono state prelevate e omogenate per poter ottenere la componente citosolica; l’omogenato ottenuto è stato utilizzato per il dosaggio delle attività degli enzimi.

I dosaggi sono stati effettuati rispetto ad una coltura di controllo negativo (non trattata in alcun modo, che esprime i livelli di attività basale degli enzimi monitorati). Lo studio è stato condotto in triplo.

L’attività dell’enzima SOD è stata valutata secondo la metodica di Flohè e Otting (1984): è stata misurata la capacità dell’enzima di inibire la riduzione del citocromo C (picco di assorbimento a 550 nm) in presenza di un sistema di generazione di superossidi (xantina/xantina ossidasi).

L'attività dell’enzima CAT è stata valutata secondo la metodica di Aebi (1984): è stata monitorata allo spettrofotometro la decomposizione del perossido di idrogeno (picco di assorbimento a 340 nm) ad opera dell’enzima.

L’attività dell’enzima GPx è stata valutata secondo la metodica di Flohè e Gunzler (1984): è stata monitorata la seguente reazione accoppiata:

Studio dell'espressione deH'enzima SOD

Le colture cellulari sono state trattate per 24 ore con le miscele sottoposte a test, alle concentrazioni definite.

Al termine delle 24 ore di trattamento le cellule sono state prelevate e omogenate per poter ottenere la componente citosolica; l’omogenato ottenuto è stato utilizzato per il dosaggio dell’enzima SOD sintetizzato dalle cellule..

I dosaggi sono stati effettuati rispetto ad una coltura di controllo negativo (non trattata in alcun modo, che esprime i livelli basali di sintesi dell’enzima)

II dosaggio della proteina enzimatica SOD è stato effettuato con metodo ELISA, sfruttando il legame specifico antigene-anticorpo. I complessi immuni sono stati evidenziati con anticorpo secondario coniugato ad un enzima in grado di catalizzare la reazione su specifico substrato producendo un cromoforo stabile. Lo studio è stato condotto in triplo.

Analisi statistica

I risultati ottenuti sono stati sottoposti ad analisi statistica mediante test di Student. Le variazioni rispetto ai controlli sono considerate significative per p<0.05.

RISULTATI

Studio dell’attività antinfiammatoria

La seguente Tabella 1 riporta la variazione% media (± deviazione standard) dell’espressione delle citochine TNFalpha e IL-4 in colture di fibroblasti trattate con MISCELA 1, MISCELA 2 e MISCELA 3 (dell’invenzione) rispetto a colture non trattate.

TNFalpha IL-4

variazione % vs variazione % vs CTR- CTR-(media ± dev. St) (media ± dev. St)

CTR+ 44.5 ± 8.4 2.3 ± 0.1

0.1276 mg/ml -28.2 ± 0.30 1.5 ± 0.3 MISCELA 1

0.0638 mg/ml -23.0 ± 6.4 1.1 ± 0.1 0.1116 mg/ml -24.6 ± 4.4 4.2 ± 0.1 MISCELA 2

0.0558 mg/ml 19.6 ± 3.1 1.0 ± 0.4 0.1436 mg/ml -26.6 ± 2.8 6.6 ± 0.2 MISCELA 3

0.0718 mg/ml -23.9 ± 3.6 3.8 ± 0.9

Il trattamento delle colture cellulari di fibroblasti con MISCELA 1, MISCELA 2 e la MISCELA 3 secondo l’invenzione ha prodotto una modulazione forte e significativa della sintesi e rilascio della citochina pro-infiammatoria TNFalpha; in tutte le condizioni sperimentali monitorate infatti si registra una riduzione significativa dell’espressione della citochina rispetto al controllo positivo (°p<0.05) e talvolta addirittura rispetto al controllo negativo (*p<0.05).

Il trattamento delle colture cellulari di fibroblasti con MISCELA 2 e MISCELA 3 ha generalmente prodotto una modulazione significativa della sintesi e rilascio della citochina anti-infiammatoria IL-4; nel trattamento con MISCELA 2 alla concentrazione di 0.1116 mg/ml e in particolare con MISCELA 3 si registra un incremento significativo dell’espressione della citochina rispetto al controllo positivo (°p<0.05) e rispetto al controllo negativo (*p<0.05). Nessuna modulazione significativa si registra nel trattamento con MISCELA 1.

STUDIO DEL POTENZIALE ANTIOSSIDANTE

La seguente Tabella 2 riporta la variazione% media (± deviazione standard) delle attività degli enzimi antiossidanti SOD, CAT e GPx in colture di fibroblasti trattate con MISCELA 1, MISCELA 2 e MISCELA 3 rispetto a colture non trattate.

Tabella 2

Attività Attività Attività

SOD CAT GPx variazione % vs variazione % vs variazione % vs CTR- CTR- CTR-(media ± dev. (media ± dev. St) (media ± dev. St) St)

0.1276 27.6 ± 4.2 22.0 ± 2.8 32.8 ± 4.2 MISCELA mg/ml

1 0.0638 15.3 ± 0.5 2.1 ± 2.6 10.5 ± 2.1

mg/ml

0.1116 14.3 ± 2.7 20.6 ± 1.0 5.8 ± 1.2 MISCELA mg/ml

2 0.0558 3.4 ± 2.0 7.4 ± 3.1 2.2 ± 1.3

mg/ml

0.1436 59.5 ± 3.8 25.4 ± 3.6 36.0 ± 4.2 MISCELA mg/ml

3 0.0718 35.0 ± 3.2 14.3 ± 2.6 10.0 ± 0.5

mg/ml

Il trattamento delle colture cellulari di fibroblasti con MISCELA 1, MISCELA 2 e MISCELA 3 ha prodotto una modulazione significativa (*p<0.05) dell’attività degli enzimi antiossidanti, agendo positivamente e in maniera dose-dipendente sull’efficienza del sistema antiossidante; gli enzimi che sembrano più sensibili ai trattamenti eseguiti risultano SOD e GSH-Px, ovvero i primi due enzimi che intervengono nella risposta allo stress ossidativo.

La MISCELA 3 dell’invenzione risulta essere la composizione maggiormente attiva nel rinforzare la risposta antiossidante nel sistema sperimentale considerato.

STUDIO DELL’ESPRESSIONE DELL’ENZIMA SOD.

La seguente Tabella 3 riporta la variazione % media (± deviazione standard) dell’ espressione dell’enzima SOD in colture di fibroblasti trattate con MISCELA 1, MISCELA 2 e MISCELA 3 rispetto a colture non trattate.

Tabella 3

Espressione

SOD

variazione % vs

CTR-(media ± dev. St)

0.1276 5.4 ± 0.6

mg/ml

MISCELA 1

0.0638 3.7 ± 0.6

mg/ml

0.1116 5.0 ± 0.2

mg/ml

MISCELA 2

0.0558 0.2 ± 0.2

mg/ml

0.1436 6.5 ± 0.4

mg/ml

MISCELA 3

0.0718 2.8 ± 0.7

mg/ml

Il trattamento delle colture cellulari di fibroblasti con MISCELA 1, MISCELA 2 e MISCELA 3 ha generalmente prodotto una modulazione moderata ma significativa dell’espressione dell’enzima SOD; come abbiamo potuto valutare nella tabella precedente, ad un moderato incremento dell’espressione dell’enzima corrisponde però un più importante aumento dell’attività dell’enzima in seguito ai trattamenti, soprattutto con la MISCELA 3.

Considerati i risultati ottenuti e riportati in questa relazione è possibile affermare che:

- il trattamento di colture cellulari di fibroblasti con le miscele sottoposte a test è in grado di modulare gli eventi infiammatori acuti, agendo soprattutto sul rilascio della citochina pro-infiammatoria TNFalpha;

- il trattamento di colture cellulari di fibroblasti con le miscele sottoposte a test è in grado di potenziare i sistemi antiossidanti enzimatici, agendo soprattutto sulle attività degli enzimi superossido dismutasi e glutatione perossidasi e rinforzando così la prima barriera di difesa dallo stress ossidativo;

- La MISCELA 3 dell’invenzione mostra uno spettro di azione più ampio ed efficace di MISCELA 1 e MISCELA 2.

Claims (11)

1. RIVENDICAZIONI 1. Composizione per prevenire e/o ridurre lo stress ossidativo cellulare e/o ritardare l'invecchiamento fisiologico dell’organismo comprendente catechina in combinazione con pterostilbene, selenio, quercetina e caffeina, ed un veicolo edibile.
2. 2. Composizione secondo la rivendicazione 1 in cui le catechine comprendono non-epi catechine scelte tra gallocatechina, catechina gallato e gallocatechina gallato e/o epi-catechine scelte tra epicatechina, epigallocatechina, epicatechina gallato, epigallocatechina gallato e loro miscele.
3. 3. Composizione secondo la rivendicazione 1 o 2 in cui le catechine sono in forma di oligomeri comprendenti da 2 a 10 unità di catechina e/o epicatechina.
4. 4. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-3 in cui detti oligomeri hanno un peso molecolare che varia da 500 a 3000 Dalton.
5. 5. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-4 in cui dette catechine sono contenute in un estratto di uva.
6. 6. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-5 in cui detto pterostilbene è contenuto in un estratto di Pterocarpus marsupium.
7. 7. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-6 caratterizzata dal fatto di comprendere ulteriormente uno o più componenti scelti tra vitamine, minerali, micronutrienti e loro miscele ed opzionalmente equolo o una frazione di fieno greco titolata in fenusidi.
8. 8. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-7 caratterizzata dal fatto di essere in forma solida di compressa o capsula.
9. 9. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-8 caratterizzata dal fatto di essere un prodotto nutraceutico, un alimento funzionale, un integratore dietetico o alimentare.
10. 10. Uso di una composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-9 per prevenire o ridurre lo stress ossidativo o le specie reattive dell'ossigeno in una cellula o tessuto di un mammifero.
11. 11.Uso di una composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-9 per ritardare l’invecchiamento dell’organismo di un individuo.